21.09.2010

CLASIFICAREA SPIROCHETELOR

MICROBIOLOGIA I DIAGNOSTICUL DE LABORATOR AL SPIROCHETOZELOR

Spirochetele bacterii helicoidale, flexibile i mobile (fibrile interne), rspndite n natur, comensale ale mucoaselor umane. Familii : Spirochaetaceae, Leptospiraceae

MICROBIOLOGIA I DIAGNOSTICUL DE LABORATOR AL SIFILISULUI Familia Spirochaetaceae Genul Treponema Specii : - T.pallidum (patogen) subspecii (variante): T.pallidum pallidum (agentul sifilisului) T.pallidum endemicum (agentul bejelului, sifilis endemic nevenerian leziuni cutanate) T.pallidum carateum (agentul pintei/carate, nevenerian, America Central i de Sud)

T. pertenue (agentul pianului, maladie cutanat, nevenerian, zone tropicale i subtropicale) -

CARACTERE MORFOLOGICE I TINCTORIALE

Treponeme comensale: Orale (T.denticola, T.orale, etc) Genitale (T.phagedenis, T.refringens, etc)

T.pallidum bacterie fin, helicoidal, cu 8-14 spire regulate i capetele ascuite, mobil cu micri de flexie, nurubare i translaie. Gram -. Evidenierea : - preparate native (microscopul cu fond negru, contrast de faz) - Nu se coloreaz dup Gram - Romanovsky-Giemsa roz-pal - Impregnare cu sruri de argint (filamente negrebrune pe fondul galben) - Frotiuri Burri necolorate pe fondul negru

1

21.09.2010

CARACTERE DE CULTUR Cultivarea T.pallidum in vitro imposibil Pasaje succesive n testicule de iepure (tulpina Nichols de T.pallidum). Suspensii de astfel de treponeme supravieuiesc 72 ore n mediul MayerNelson (la 25 grade n anaerobioz).

STRUCTURA ANTIGENIC

Haptene lipidice (antigen cardiolipinic / cardiolipin, Ag nespecific) fosfolipid prezent la treponeme patogene i esuturi ale mamiferelor (extras din cord bovin) Antigen proteic, de grup, comun treponemelor patogene i nepatogene (obinut din tulpina Reiter a T. phagedenis) Peptide i glicopeptide din membrana extern, specifice T.pallidum (obinute din tulpina Nichols a T.pallidum)

2

21.09.2010

FACTORI DE PATOGENITATE

Factori de adeziune Factori de invazie (hialuronidaza) Factori de sensibilizare Endotoxina Supresia rspunsului imun celular n stadiile iniiale ale bolii

In 11 luni ale anuluiu 2009 au fost nregistrate 2164 cazuri de sifilis, inclusiv 87 cazuri la copii, comparativ cu 2201 cazuri, inclusiv 89 cazuri la copii n anul 2008. n 2 luni ale anului 2010 s-au nregistrat 394 cazuri de sifilis (2 luni 2009 400 cazuri) i 238 cazuri de gonoree acut i cronic (2 luni 2009 300 cazuri), inclusiv 11 i respectiv 10 cazuri la copii pn la 17 ani.

PATOGENEZA SIFILISULUI 1. 2.

3.

Sursa de infecie omul bolnav Cile de transmitere: Contact direct (sexual, srut) Contact indirect (obiecte, instrumente chirurgicale recent contaminate, transfuzii de snge, etc.) Transplacentar (vertical)

Poarta de intrare tegumentul lezat, mucoasa genital, bucal, anal Perioada de incubaie 2-6 sptmni (3) Evoluia sifilisului Sifilisul primar (4-6 sptmni) la poarta de intrare apare ancrul sifilitic: ulceraie cu baza indurat, nedureros, bogat n treponeme (99% localizare genital i anal, 1% - bucal). - Adenopatie satelit - Vindecare spontan a ancrului (imunitatea local)

3

21.09.2010

Sifilisul secundar (urmare a diseminrii sangvine) dup 6-8 spt. de evoluie - Manifestri cutanate (rozeole, sifilide erozive,etc) - Manifestri mucoase (plci mucoase) - Poliadenopatie - Leziuni ale organelor interne (hepatite, nefrite, periostite, meningite, etc) - Rspunsul imun poate duce la dispariia leziunilor n 1-3 luni

-

Sifilisul latent (treponemele persist n ganglioni limfatici i splin) Lipsa semnelor clinice Necontagios Posibile recidive Sifilisul teriar (dup 4-30 ani de la contaminare) Afeciuni cardio-vasculare (aortite, anevrisme) Afeciuni neurologice (tabes, paralizie general) Afeciuni osoase i cutanate (gome) Deces posibil

4

21.09.2010

-

-

-

Sifilisul congenital n timpul graviditii moartea ftului prin afeciuni poliviscerale La finele graviditii sau la natere leziuni tardive (dentare, osoase, oculare) Imunitatea (nesteril) Umoral Celular (protectoare, deprimat n sifilisul primar i secundar)

5

21.09.2010

DIAGNOSTICUL DE LABORATOR

1. -

-

Prelevate: serozitatea din leziunile primare sau secundare, puncii din ganglioni limfatici, serul sangvin, LCR Metode de diagnostic Examenul microscopic Microscopia pe fond negru, contrast faz RIF Impregnare argentic, coloraia Giemsa

Examenul serologic (sifilis secundar, teriar) I Reacii nespecifice (cu Ag cardiolipinice) - Reacia VDRL (Veneral Disease Research Laboratory) - reacie de precipitare Ieftin, facil, specificitate redus Reacii fals pozitive: viroze, colagenoze, paludism, ciroze, reumatism, graviditate, etc. - RFC (Wassermann)

-

-

-

-

Reacii specifice (cu Ag treponemice) RFC Wassermann sau Kolmer RHAI (Ag lizat din tulpina Nichols fixat pe hematii) RIFI (Ag suspensie de T.pallidum fixat pe lam) RIT (testul Nelson) (Ag tulpina Nichols a T.pallidum) RIE (ELISA) PCR (detectarea ADN) n LCR, lichidul amniotic, esut

EVOLUIA TITRURILOR DE AC

RIFI se pozitiveaz la apariia ancrului (o lun dup infectare) VDRL dup 6 sptmni RHAI RIT n stadiul secundar, 2 luni dup infectare

Dup tratamentul sifilisului: VDRL se negativeaz prima Alte reacii rmn pozitive

6

21.09.2010

TERAPIA I PROFILAXIA SIFILISULUI

ANTIBIOTERAPIA beta-lactamine, tetracicline, macrolide (rezisten la aminoside) Reacia Herxheimer este posibil (efectul endotoxinei) PROFILAXIA depistarea sistematic activ i tratarea bolnavilor

MICROBIOLOGIA I DIAGNOSTICUL DE LABORATOR AL LEPTOSPIROZELORLeptospirele sunt bacterii care pot infecta numeroase specii de animale (n special vertebrate) i accidental omul. Clasificare Familia Leptospiraceae Genul Leptospira Spp. L.interrogans (patogen pentru om i animale) L.biflexa (saprofit, ape de suprafa) L.parva (saprofit, apa de conduct)

CARACTERE MORFOBIOLOGICECaractere morfologice bacterii fine i spiralate, cu 10-30 spire strnse i regulate, cu capetele ndoite n crlig (aspect de S, C, ?). Realizeaz micri de nurubare, flexie i translaie. Pot fi examinate la microscopul cu fond negru sau cu contrast de faz. Coloraia Giemsa roz-pal

CARACTERE MORFOBIOLOGICE Caractere de cultur Medii lichide cu sruri anorganice tamponate cu fosfai i mbogite cu ser de iepure (mediile Korthof, Stuart), medii semisintetice - Aerobioz - 28-30 grade C Leptospirele se multiplic n 3-10 zile (pn la o lun) fr a tulbura mediul -

7

21.09.2010

CARACTERE MORFOBIOLOGICE Structura antigenic a L.interrogans 1. Antigene cu specificitate de gen, LPZ 2. Antigene majore de grup (peste 20 serogrupuri) Ex.: L.icterohaemorrhagia, grippotyphosa, hebdomadis, canicola, pomona, autumnalis, etc. 3. Antigene minore de tip (peste 200 serotipuri/variante) - proteice

PATOGENEZA LEPTOSPIROZELOR

-

Sursa de infecie: roztoarele slbatice, accidental-roztoarele peridomestice sau animalele domestice (porci, cini, cai, bovine) tubii contori proximali renali Poarta de intrare: tegument i mucoase Cile de transmitere: Alimentar (alimente i apa contaminat) Contact direct cu animalele infectate Contact indirect (cu apa contaminat)

Leptospirele sunt antrenate n circulaia sangvin fr leziuni la poarta de intrare Incubaia 1-2 sptmni (10 zile) Evoluia leptospirozelor: 1. Faza septicemic (generalizat) 7 zile - febr, frison, sindrom meningeal 2. Faza afebril (1-3 zile) 3. Faza organic (febr, sindrom meningeal, sindrom hepato-renal, sindrom cardiovascular-hemoragic, icter) Imunitatea: umoral, specific de tip, durabil

DIAGNOSTICUL DE LABORATOR Prelevate: snge, LCR (prima sptmn), urin (din sptmna II de boal), probe necroptice (seciuni histologice renale, hepatice) Metode de diagnostic - Examenul microscopic (fond negru, contrast de faz, coloraia Giemsa sau impregnaia argentic a seciunilor histologice), RIF

8

21.09.2010

Examenul bacteriologic Probele sunt nsmnate n cte 3-5 tuburi cu mediu de cultur, incubate n aerobioz la 28 grade pn la 1-3 luni. Identificarea n baza caracterelor: - Microscopice - De cultur - De patogenitate - Serologice (RFC, RAL)-

Examenul biologic (inocularea intraperitoneal la cobai). Peste 1-3 zile leptospirele pot fi depistate n exsudatul din cavitatea abdominal. Tehnici PCR (detectarea ADN) Diagnocticul serologic (din spt. II) 1. Reacii cu specificitate de gen (RFC, RHAI, RIFI, ELISA) 2. Reacii cu specificitate de tip (de referin)-RAL (Reacia de aglutinare-liz) Titrul diagnostic - 1/400 sau cretrea n dinamic de 4 ori-

TRATAMENT I PROFILAXIE

MICROBIOLOGIA I DIAGNOCTICUL DE LABORATOR AL BORRELIOZELOR

Tratament: penicilin, tetraciclin, gama-globulina antileptospiroas Profilaxie: deratizarea, igiena i protecia muncii, supravegherea bazinelor de ap, vaccinarea selectiv (vaccin inactivat, durata imunitii-1 an)

CLASIFICARE: Familia Spirochaetaceae Genul Borrelia Specii: - B.recurrentis (transmis prin pduchi) - B.duttoni, B.hispanica, B.persica, B.burgdorferi, etc (transmise prin cpue)

9

21.09.2010

CARACTERE MORFOBIOLOGICE Morfologia: filamente spiralate cu 5-8 spire neregulate, flexibile i mobile, cu micri de flexie i nurubare. Gram-, colorate n albastru-violet dup Giemsa. Caractere de cultur: bacterii anaerobe, cultiv in vitro pe medii complexe i in vivo (ou embrionat, artropode, animale de laborator)

Structura antigenic: variabilitate pronunat Habitat - Omul bolnav n snge i esuturi infectate - Roztoare - Vectori (pduchi, cpue) n lichidul celomic

FEBRA RECURENT Febra recurent epidemic Agentul cauzal - B.recurrentis Sursa de infecie omul bolnav Vector - Pediculus humanus Contaminare prin lichidul celomic eliberat la zdrobirea pduchilor Poarta de intrare tegumentul lezat, conjunctiva

Febra recurent endemic Agenii cauzali - B.hispanica, B.persica, B.duttoni, etc Sursa de infecie roztoarele slbatice sau peridomestice Vectori cpue din genul Ornithodoros Contaminare prin neptur, prin intermediul lichidului coxal, prin dejecii anale

10

21.09.2010

PATOGENEZA FEBREI RECURENTE

Perioada de incubaie 3-14 zile (borreliile se multiplic n viscere ficat, splin, creier, etc.) Perioada febril debut brutal, cu febr 4041 grade i frison (endotoxina eliberat n snge la distrugerea borreliilor). Algii difuze, stare de tifos, semne meningeale, hepato-splenomegalie, icter. Criza febril dureaz 7 zile. Urmeaz o perioad afebril de o sptmn, succedat de alt criz termic cu durat mai scurt Accesele se repet (2-4-10 recurene)

Sub aciunea anticorpilor bactericizi formai la sfritul acceselor febrile se selecteaz varianta antigenic responsabil de urmtorul acces. Febra recurent endemic are o evoluie mai benign

DIAGNOSTICUL DE LABORATOR AL FEBREI RECURENTEPrelevate: snge, LCR Metode de diagnostic: 1. Examenul microscopic (n perioada febril): - preparate native (fond negru, contrast de faz) - Frotiuri colorate Giemsa - RIF 2. Examenul biologic (infectarea cobailor, obolanilor)

TRATAMENTUL I PROFILAXIA FEBREI RECURENTE

Tratament: peniciline, tetracicline, cloramfenicol Profilaxie: lupta contra vectorilor i protecia individual

11

21.09.2010

BOALA LYME

HABITAT I CONTAMINARE Rezervor de infecie: roztoare, animale domestice (cini, cai, etc), psri. Vectori: cpue din genurile Ixodes i Amblyomma, nari, tuni Contaminare: prin neptura vectorului infectat

Agentul cauzal Borrelia burgdorferi (B.burgdorferi sensu stricto, B.afzelii, B.garinii) Caractere morfoculturale bacterie helicoidal, mobil prin micri de flexie i rotaie. Nu se coloreaz prin metoda Gram. Se cultiv lent (cteva sptmni) numai pe medii speciale

EVOLUIA BOLII LYMEIncubaie 2-4 sptmni I Faza primar (leziune cutanat eritemul cronic migrator). Durata 3-4 sptmni

Faza secundar durata 2-6 sptmni manifestri neurologice, cardiace, cutanate, artralgii Faza teriar dureaz luni, ani afeciuni cronice cutanate (acrodermatit cronic atrofiant), articulare (artrite cronice), neurologice (encefalomielite)

12

21.09.2010

DIAGNOSTICUL DE LABORATOR AL BOLII LYME 1.

2. 3. 4.

Prelevate: biopsii cutanate, snge, LCR, lichid sinovial Metode de diagnostic: Examenul microscopic (preparate native, coloraia special a biopsiilor, impregnare argentic) Examenul bacteriologic Diagnosticul serologic (RIFI, ELISA, Western-blot) PCR

Tratament peniciline, tetracicline Profilaxie informarea populaiei, extragerea cpuelor

13