Home >Documents >Elementele Figurate Ale Sangelui Si Hematopoeza

Elementele Figurate Ale Sangelui Si Hematopoeza

Date post:19-Jan-2016
Category:
View:54 times
Download:31 times
Share this document with a friend
Transcript:

1

Histologie Medical - Partea GeneralLucrri practice

Elementele Figurate ale Sngelui_____________________________________________________________

ELEMENTELE FIGURATE ALE SNGELUI

I. Hematiile ( globulele roii )II. Leucocitele ( globulele albe )III. Trombocitele ( plcuele sanguine )Frotiul sanguinSe ia o pictur de snge obinut prin puncionarea unei vene sau a unui capilar ( nu conine anticoagulant EDTA ) sau din snge amestecat cu anticoagulant EDTA i se pune pe o lam de sticl anterior degresat cu alcool-eter. Cu marginea unei lame lefuite se va ntinde pictura de snge. Micarea de alunecare uniform se realizeaz la un unghi de 25-30. Se imprim apoi lamei lefuite o micare de translaie uoar, ceea ce permite sngelui s se ntind ntr-un strat subire. Frotiul sanguin satisfctor trebuie s ndeplineasc urmtoarele condiii: S fie subire

S fie omogen

Marginile s fie drepte

S prezinte franjuri la captul lamei

Imediat dup ntinderea frotiului, lama se agit pentru uscarea rapid la aer. Frotiul trebuie colorat ct mai curnd ntruct, n lamele nefixate i necolorate, celulele se altereaz, pierzndu-i afinitatea tinctorial.

Metode de colorare a frotiurilor:

I. METODA MAY-GRNWALD-GIEMSA - rmne cea mai ieftin i accesibil metod n majoritatea laboratoarelor de la noi din ar.

Aceast metod folosete dou soluii colorante:

- soluia May-Grnmwald care este eozinat de albastru de metilen dizolvat n metanol absolut,

- soluia Giemsa care este un amestec de doi colorani (un colorant bazic Azur II i un colorant neutru Azur II eozin) dizolvai n metanol absolut i glicerin.

Exist mai multe variante de colorare prin aceast metod:

a. Metoda 1:

fixare n alcool metilic - 15 minute

uscare n aer - 15 minute

colorare cu soluia May-Grunwald buffer (soluie tamponat) timp de 5 minute,

splare n soluie tamponat - 2 minute,

colorare cu soluia Giemsa tamponat - 25 minute

splare sub jet de ap de robinet - 5 minute

uscare.

Reactivi:

- alcool metilic;

- soluie "Sorenszen" tamponat:

soluie A - 9,078g KH2P04 / 1 l;

soluie B - 11,876g NO2HP042H2O /11;

- soluie May-Grunwald modificat pentru microscopie (soluie de eozinat de albastru de metilen );

- soluie Giemsa pentru microscopie (soluie de azur eozin i albastru de metilen).

Soluiile de lucru se prepar astfel:

- soluia tamponat pentru lucru: 20 ml soluie A + 21 ml soluie B + 960 ml ap distilat se aduce la un ph de 7 - soluie tamponat May-Grunwald: 50 ml soluie May-Grunwald + 50 ml soluie tamponat (se prepar sptmnal).

- soluie Giemsa tamponat: 10 ml soluie Giemsa + 90 ml soluie tamponat (se prepar zilnic).

b. Metod de colorare May-Grunwald Giemsa modificat utilizeaz soluii concentrate (soluii stoc). Astfel, n acest caz se folosesc urmtoarele soluii:

- reactiv May-Grunwald (stoc) - amestec de Eozin- Albastru de metilen (0,5 g) i metanol 1OOg ( se schimb la 2 sptmni ),

- soluie Giemsa ( stoc ) ( se schimb zilnic ):

Azur II eozin - 0, 6 g

Azur II - 0,16 g

Glicerin - 50 g

Metanol - 100 g

Din aceste dou soluii stoc se prepar soluiile de lucru:

- May-Grunwald - 2/3 soluie stoc May-Grunwald + 1/3 metanol Giemsa

- Giemsa - 1/10 soluie stoc Giemsa + 9/10 ap distilat.

Pentru colorare sunt necesare 5 etape:

colorare cu soluie de lucru May-Grunwald - 5 minute (dup fixarea prealabil a frotiurilor prin uscare n aer urmat de postfixare n metanol,

splare n ap de robinet,

colorare cu soluie Giemsa de lucru - 15 minute,

splare abundent n ap de robinet,

uscare n aer.

Rezultatul coloraiei: nuclei violet, citoplasmele cu nuane de albastru sau rou n funcie de tipul de celul.

Cu ct o celul este mai tnr, cu att citoplasma ei este mai bazofil, dat fiind concentraia mare de acid ribonucleic. Pe msura maturrii, celula devine tot mai acidofil, deoarece scade concentraia n acid ribonucleic, ex: evoluia eritroblatilor. Limfocitele conin o cantitate mic de acid ribonucleic n citoplasm, pe cnd plasmocitele au o cantitate mare.

Diagnostic:

Pe lam se evideniaz numeroase celule colorate foarte diferit (panoptic). Predomin elementele celulare anucleate, reprezentate de hematii. Elementele celulare nucleate ( granulocitele ) prezint n citoplasm granulaii diferit colorate i repartizate.Se studiaz: frotiul din snge uman colorat panoptic.

Numai cu obiectivul de imersie vom recunoate i vom studia fiecare element figurat n parte, urmrind forma celulelor, aspectul nucleilor i forma, mrimea i modul de repartizare al granulaiilor.

I. Hematiile ( globulele roii ) sunt elemente figurate anucleate.

au form de disc biconcav cu marginile rotunjite ( acest aspect reprezint o perfect adaptare la funcia respiratorie- au suprafaa cea mai mare la volumul cel mai redus ).

la coloraia panoptic May-Grunwald-Giemsa (MGG) hematiile sunt acidofile (roz-intens), apar mai colorate spre periferie, unde grosimea este maxim i mai slab colorate n centru ( zon numit depresiune central ).

Diametrul lor variaz ntre 7,2-7,5 m.

Numrul de eritrocite pe mm este de 5 400 000 la brbai cu variaii de 800 000 i de 4 800 000 la femei, cu variaii de 600 000. La nou-nscut valorile apar mai ridicate 5 000 000, cu variaii de circa 1 000 000.

Frotiul sanguin normal hematii i trombocite.Coloraie MGG.

II. Leucocitele ( globulele albe ) Sunt singurele elemente figurate nucleate prezente n condiii fiziologice ntr-un frotiu sanguin.

Clasificarea leucocitelor se face n funcie de prezena unor granulaii n citoplasm n: granulocite i agranulocite. Vechea nomenclatur folosea termenul de leucocite polimorfonucleare (PMN) pentru granulocite i termenul de leucocite mononucleare pentru agranulocite.

n funcie de afinitatea tinctorial a granulaiilor din citoplasm, granulocitele (PMN) se clasific n 3 categorii: neutrofile, eozinofile i bazofile;

Leucocitele mononucleare sunt de 2 tipuri: limfocitele i monocitele.

1. Neutrofilele- 50-70%

Au dimensiuni ntre 10-15 m

Nucleul este lobat, format din 2-5 lobi, unii prin filamente de cromatin.(> 5 lobi, neutrofilele sunt hipersegmentate, ex: deficiene de vitamina B 12 sau acid folic ).

Citoplasma este de culoare roz, coninnd un mare numr de granulaii. Granulaiile specifice sunt colorate n violet, mici, punctiforme, egale ntre ele i repartizate n toat citoplasma.

Creterea numrului de neutrofile peste limita maxim ( absolut sau procentual) se numete neutrofilie. Se ntlnete n infeciile i inflamaiile acute.

Scderea numrului de neutrofile se numete neutropenie. Ex: boli infecionse ca febra tifoid i paratifoid, gripa etc.

Frotiu periferic-Neutrofil2. Eozinofilele 2-4%

Sunt elemente leucocitare acidofile, granuloase.

Au dimensiuni ntre 12-16 m.

Nucleul este bazofil, bilobat, avnd aspect caracteristic de nucleu n desag.

Citoplasma este eozinofil, prezentnd granulaii roii-crmizii, mari, egale ntre ele i uniform repartizate n citoplasm-aspect caracteristic de icre de manciuria ( granulaiile respect nucleul ).

Creterea numrului de eozinofile peste limita maxim ( absolut sau procentual) se numete eozinofilie. Dintre cauzele eozinofiliei amintim bolile alergice i parazitare.

Scderea numrului de eozinofile din snge este denumit eozinopenie; prezint importan clinic redus.

Frotiu periferic Eozinofil

3. Bazofilele 0.5-1%.

Au dimensiuni cuprinse ntre 8-10 m.

Nucleul bazofil are aspectul mai puin segmentat, aprnd uor scobit, aspect caracteristic de frunz de trifoi.

Citoplasma este eozinofil.

Granulaiile din citoplasm sunt bazofile ( albastru-indigo ), au dimensiuni i forme variabile, sunt inegal rspndite n citoplasm, dispuse uneori i pe suprafaa nucleului- mascnd aspectul nucleului.

Prin bazofilie se nelege creterea numrului de bazofile din snge. Bazofilia nsoete de obicei niveluri crecute de Ig E, n cursul reaciilor inflamatorii din colite ulcerative, artrite reumatoide, urticarie etc.

Scderea numrului de bazofile nu are nici o semnificaie diagnostic.

Frotiu periferic- Bazofil i limfocit mic.

4. Limfocitele 25-35 %

Au diametrul variabil n snge ntre 10-16 m.

Predomin limfocitele mici cu diametrul ntre 10-12 m, citoplasm redus, bazofil ( albastru deschis ) i nucleu rotund cu cromatina condensat ( nucleu hipercrom ), aspect de pictur de cerneal. Au form rotund.

Limfocitele mari (12-16 m ), care reprezint n general 10% din limfocitele circulante, au citoplasm mai abundent, iar cromatina nuclear este mai puin condensat. Pot fi neregulate ca form.

Limfocitele pot prezenta granulaii azurofile n numr redus, granulaii care conin enzime lizozomale.

Creterea numrului de limfocite se numete limfocitoz i se ntlnete n infeciile virale ca: tusea convulsiv, mononucleoza infecioas. Cifrele maxime ale limfocitozei sunt ntlnite aproape constant n leucemia limfatic cronic.

Limfocitopeniile apar n caz de malnutriie, radiaii, infecia cu HIV.

Frotiu sanguin-Limfocit mare.

5. Monocitele 4-8%

Sunt celulele cele mai mari din sngele periferic cu dimensiuni ntre 12-20 m.

Nucleul este neregulat, are aspectul literei C sau este reniform, iar cromatina nuclear are aspect pieptnat,fr nucleoli; citoplasma este bazofil, albastru-cenuiu, cu granulaii azurofile. Aceste granulaii snt dispersate omogen i pot da ntregii citoplasme o nuan rozat.

Forma celulei este adesea neregulat, iar citoplasma prezint frecvent vacuole.

Reaciile citochimice pot aju

Embed Size (px)
Recommended