7/24/2019 LP2_Microscopul electronic Biocel.pptx

1/23

Microscopia electronica

7/24/2019 LP2_Microscopul electronic Biocel.pptx

2/23

In microscopia electronica, in loculfotonilor, imaginea este formata cuajutorul unui facicul de electroniaccelerati si focalizati asupra tintei.Detallile sunt realizate pornind de lacomportamentul tintei, care poate sa

e electronoopaca sauelectronotransparenta, oarecumsimilar cu comportamentul optic in

microscopia clasica.

7/24/2019 LP2_Microscopul electronic Biocel.pptx

3/23

TEM si SEM

Microscopia electronica de transmisie(TEM utilizeaza un fascicul de electronicare a parcurs specimenul, pentru a forma

imaginea acestuia, prin intermediul unuisistem de focalizare a imaginii (o!iecti",analog celui din M#

Microscopia de !aleiaj formeaza imagineautilizand electronii re$ectati%de"iati detinta, focalizarea prin intermediul lentileio!ieti"

7/24/2019 LP2_Microscopul electronic Biocel.pptx

4/23

Microscopulelectronic detransmise

7/24/2019 LP2_Microscopul electronic Biocel.pptx

5/23

Microscopul electronic cu!aleiaj

7/24/2019 LP2_Microscopul electronic Biocel.pptx

6/23

&rele"are pro!a

'iare ()lutardialde*ida pt. proteine

&ost+are (#s# - genereaza structuri

electronoopace prin legarea #s# lacomponentele *idrofo!e ale lipidelor demem!rana lipide si proteine

Includerea + in rasina epoidica (E/ -

asigura rigiditatea piesei pentru0

sectionare (ultramicrotom, 1+211 nmgrosime

7/24/2019 LP2_Microscopul electronic Biocel.pptx

7/23

&repararea pro!elor

Criofxarea- racirea rapida a pro!ei, de regulala temperatura azotului lic*id. 3ceasta coser"aspecimenul prin racire instantanee in starea sainitiala . Din aceasta procedura au deri"at

procedee de are aplicate si in M#.

Fixare+ este un termen general care descrieproccesul de conser"are care pre"inedeteriorarea ulterioara, astfel incat acesta sa

conser"e cat mai mult din starea initiala. 'iareapentru ME utilizeaza glutardialde*ida pentrureticularea proteinelor, si post+area ci tetraoidde osmiu, prin care se eaza (si coloreaza

lipidele.

7/24/2019 LP2_Microscopul electronic Biocel.pptx

8/23

&repararea pro!elor

Deshidratarea- indepartarea apei din pro!e. Seinlocuieste apa cu sol"enti organici ca etanolul

sau acetona, ca o etapa catre uscarea totala aspecimenelor SEM sau impreg!narea cu rasina

urmata de incorporare, pentru TEM.

Includerea- inltrarea tesutului cu o rasina cumeste araldita sau 45 6*ite, care polimerizeaza,formand un !loc rigidizat pentru a se sectiona.

Sectionarea+ are ca scop realizarea de sectiuniultrane din specimen. Sectiunile tre!uie sa esemitransparente pentru electroni , intre 1 si211 nm. 3ceste sectiuni se realizeaza cu un

iltramirotom, a"and cutite de sticla (mai ieftinesau de diamant.

7/24/2019 LP2_Microscopul electronic Biocel.pptx

9/23

&repararea pro!elor

Colorarea- foloseste metale grele (&! sau 7amplicand in acest fel contrastul structurile!iologice sunt initial transparente pentru electroni, iar prin colorare se o!tine o densitate mai marefata de electroni. Specimenele se pot colora inaintede incorporare sau duppa sectionare, prin epunerela coloranti cu metale grele.

Crioracturarea si crio-decapajul+ o metoda depreparare utila in special pentru eaminarea

mem!ranelor lipidice si a proteinelor de mem!rana.&iesele se eaza rapid prin crioare, apoi suntfracturate prin utilizarea unui ultramicrotom latemperatura azotului lic*id. Suprafetele fracturate

se decapeaza prin riicarea temperaturii la +89

7/24/2019 LP2_Microscopul electronic Biocel.pptx

10/23

&repararea pro!elor Se realizeaza apoi o um!rire prin acoperirea cu

platina "aporizata (la un ung*i de :o. Se aplica unstrat de car!on, care se e"apora perpendicular pesuprafata, marind sta!ilitatea acoperirii. Mascametalizata se degajeaza de resturile de material

!iologic, se depune pe grile si se eamineaza. In cazul SEM, eaminarea poate facuta imediat

dupa crio+fracturare si decapaj.

Acoperirrea prin pulverizare catodica - se

poate depune un strat ultra+n de metal(electroconductor, printr1+un procedeu in "idinaintat. 3ceasta pre"ine incarcarea pro!ei (datorataincarcarii statice, iar la SEM asigura o crestere a

numarului de electroni detecta!ili, crescand astfelraportul semnal%zgomot. 3semenea acoperiri se fac

7/24/2019 LP2_Microscopul electronic Biocel.pptx

11/23

7ltramicrotomul

7/24/2019 LP2_Microscopul electronic Biocel.pptx

12/23

Imagine generala a uneicelule

7/24/2019 LP2_Microscopul electronic Biocel.pptx

13/23

Eucromatina

7/24/2019 LP2_Microscopul electronic Biocel.pptx

14/23

7/24/2019 LP2_Microscopul electronic Biocel.pptx

15/23

/ucleol

7/24/2019 LP2_Microscopul electronic Biocel.pptx

16/23

3n"elopa nucleara

7/24/2019 LP2_Microscopul electronic Biocel.pptx

17/23

&or nuclear

7/24/2019 LP2_Microscopul electronic Biocel.pptx

18/23

5E5

5E5

&lasmocit,uman.

7/24/2019 LP2_Microscopul electronic Biocel.pptx

19/23

5eticul endoplasmic neted

5E5 si 5E/ -

7/24/2019 LP2_Microscopul electronic Biocel.pptx

20/23

Mitocondrii

&lasmocitSo!olan

&lasmocit7man

7/24/2019 LP2_Microscopul electronic Biocel.pptx

21/23

3paratul )olgi

Maimuta

&lasmocituman

7/24/2019 LP2_Microscopul electronic Biocel.pptx

22/23

Spatiul intercelular

Stratum spinosum (omSpatii intercelulare largite

Sinapsa, corte deso!olan,;u "ezicule sinaptice

Spatiul intercelularSu!st. de !aza =colagen4igament, so!olan

7/24/2019 LP2_Microscopul electronic Biocel.pptx

23/23

Tig*t junction(jonctiune stransa(*epatocite, so!olan

>onctiune gap(;o!ai, urec*ea interna

Interdigitatie si desmozom

Duoden de maimuta