Terapii cu enzime
Enzimele (terapie) - surse
Surse naturale
(tesut animal)
Microorganisme
Enzimele
Industrie/ diagnoza
Terapeutice
Sisteme microbiene
Linii celulare animale
(schimbari postranslationale)
Producerea extracelulara
(filtrare/centrifugare)
Producerea
intracelulara
Ruperea celulelor
Purificare
Enzime intracelularare:
asparaginaza
penicil acilaza
glucoz-izomeraza
Etapele de preparare a enzimelor
Prelevareaculturii celulare
Extractia enzimei
Clarificarea(centrifugarea/
filtrarea)
a. Concentrarea
b. Excipienti
c. Potentarea
Uscarea
-tambur-
spray-ere
Concentrarea
(ultrafiltrarea)
Purificarea partiala
1-2 pasicromatografici
ExcipientiPotentare
Liofilizarea(optional)
Concentrarea
(ultrafiltrarea)
Purificarea totala
3-5 pasicromatografici
ExcipientiPotentare
Liofilizarea(optional)
Enzimele
terapeutice
Enzimele
industriale
Enzimele
Scopuri analitice
Terapii cu enzime
Administrarea enzimelor
scopuri digestive
Utilizarea enzimelor
Insuficienta
pancreatica
orala
parenterala
rectala
pancreatina
tripsina
amilaza
chimotripsina
lipaza
papaina/bromelaina
http://animatedpancreaspatient.com/
Enzime utilizate in terapie
Enzima Aplicatia in terapie
Plasminogen activator Agent trombolitic
Urokinaza Agent trombolitic
Proteina C (activata) Septicemie severa
ADNaze Fibroza cistica
Glucocerebrozidaza Boala Gaucher
-galactozidaza Boala Fabry
Urat oxidaza Hiperuricemie
Asparaginaza Leucemie
Factorul VIIa Hemofilie
Factorul IX Hemofilie
-iduronidaza Mucopolizaharidoza I
Pancreatina/lactaza/-
Amilaza/Proteazele
Suplimente digestive
Hialuronidaza Infarct miocardic, cancer, anestezie
(chirurgie oculara)
SOD Agent antiinflamator
Cresterea performantei enzimelor utilizate in terapie
Enzima Produsul
(Compania)
Aplicatia in
terapie
Modificari Proprietati
Adenozin Deaminaza Adagen (Enzon) SCID PEG-ilata Cresterea t1/2
circulator
L-Asparaginaza Oncaspar (Enzon) Unele
cancere
Enzima
PEG-ilata
Cresterea t1/2
circulator
Reducerea
imunogenitatea
Glucocerebrozidaza Cerezyme
(Genzyme)
Sindrom
Gaucher (I-III)
A495H;
modificarea
continutului de
carbohidrati
Imbunatatirea
preluarii de catre
celulele tinta
Plasminogen
activator din tesuturi
(tPA, 3.4.21.68)
Retavase (Centocor/
Boeringer)
Agent
trombolitic
Indepartarea a 3
din 5 domenii
ale tPA native
Cresterea t1/2
circulator
TPA (3.4.21.68) TNKase
(Genentech/Roche)
Agent
trombolitic
T103A, G299A Cresterea t1/2
circulator si a
specificitatii
Identificarea resturilor de aa cheie implicati
in legarea substratului/activitate catalitica
Obtinere de mutanti/variante cu
Performanta superioara in terapia clinica
Modelare pe calculator a
complexelor PCA-sepine
Cresterea performantei enzimelor utilizate in terapie
Proteina C activata (PCA)
antitrombotica
Serin proteaza
antiiflamatoare
Atenuare coagulare sange
(mecanism feed-back)Xigris (Lilly)
Reducerea mortalitatii
la pacientii cu
septicemie
PCA Serpine
Inhibitorul proteinei C
1-antitripsina
t1/2 mic
Identificarea aminoacizilor cheie
Cresterea performantei enzimelor utilizate in terapie
John H. Griffin et al. Blood 2015;125:2898-2907
Terapii cu enzime
1906 – Extracte enzimatice din pancreas
Utilizarea tripsinei in
tratamentul cancerului
John Beard – embriolog
Beard J. The action of trypsin upon the living
cells of Jensen's mouse tumor. Br Med J 4, 140-
141, 1906.
1925 – Scaderea concentratiei
Enzimelor proteolitice din ser
Fraind si Caminer
Pacientii cu cancer
Terapii cu enzime
Defectele genetice pot fi corectate si neutralizate prin utilizarea enzimelor
150 boli sunt datorate modificarilor enzimatice care survin
datorita unor defectele genetice
Organismul produce
enzime mutante
Populatia de culoare
Anemia falciforma
Populatia Japonia
Alcool dehidrogenase
Activarea gresita a unei cascade Consecinte grave
Terapii cu enzime
Proteazele
Venin (sarpe)
Fluidizarea
sangelui
Boli arteriare
periferice
Serin
Proteazele
Activeaza
Plasminogenul
tromboliza
- Tromboza venelor
- Edem pulmonar
- Infract miocardic
Mecanismul de actiune al fosfolipazei A2 din veninul de sarpe
Nanjaraj Urs A N et al., Toxin Reviews 33(3):1-24, 2013
http://snake-facts.weebly.com/
Terapii cu enzime
Proteazele
(streptokinaze)
Indepartarea
straturilor fibrinice
Vindecarea ranilor
(plagi, bube)
Jacquelyn L. Baskin et al. Haematologica 2012;97:641-650
Urokinaza
Serin proteaza
rinichi uman
Streptokinaza
Serin proteaza
Streptococc
beta hemolitic
Controlul fibrinolizei
Payel Bhattacharjee and Debasish Bhattacharyya (2014). An Insight into the
Abnormal Fibrin Clots — Its Pathophysiological Roles, Fibrinolysis and
Thrombolysis, Dr. Krasimir Kolev (Ed.), ISBN: 978-953-51-1265-5, InTech,
DOI: 10.5772/57335.
Enzimele care intervin in procesul de fibrinoliza
FDP produsi de degradare fibrilara
PAI inhibitori ai plasminogenului activator
tPA plasminogen activator.tisular
Controlul fibrinolizei
Activatori bacterieni
streptokinaza
stafilokinaza
quizlet.com
Alteplaza-restabilirea permeabilității
vaselor obstructionate
Tenecplaza-conversia plasminogenului
la plasminawww.hindawi.com
Terapia sistemica cu enzime:
Aplicatii in procesele
anti- inflamatorii sau anti-imbatranire
Inflamatia - caracteristici
dureri; transpiratie; roșeață și febră
Distrugerea substantelor din matricea celulara
Acid hialuronic
Colagen
Poteoglicani
“Ruperea” celulara
Incetinirea unor miscari
Enzime proteolitice
bromelaina
papaina
pancreatina
tripsina
chimotripsina
Rutin (flavonoida)
90 bromelain
48 mg of tripsina
100 mg of rutin
Medicament nesteroidic
anti-inflamator(NSAID)
Tratametul osteoartritei
Terapia sistemica cu enzime:
Aplicatii in procesele
anti- inflamatorii sau anti-imbatranire
www.SystemicEnzymeSupport.org
Proteazele
Activeaza macroglobulina
celulele ucigase naturale
Suporta
sistemul
Imun
umoral
moduleaza
inflamatiile
sistemice
Indepartarea
peptidelor straine
mediatori ai inflamatiei
proteine auto-toxice
http://journals.cambridge.org/
Terapia sistemica parenterala
Streptokinaza infarct miocardic
ocluzie vasculara
Sikri, Heart Inst J. 2007; 34(3): 318–327.
http://www.drugbank.ca/drugs/
DB00013
Urokinaza Produsa de rinichi
Tratarea edemului pulmonar
Biomarkeri ai inflamatiei
Creste rata de sedimentare a eritrocitelor
Creste concentratia proteinei reactive C
Cresc nivelele anticorpilor (IgG, IgE, IgA, IgM)
Creste nivelul imunocomplecsilor (circulatori)
Creste nivelul citokinelor
Activarea fibrinei si fibrozei
Creste producerea si depunerea
plagilor amiloidice
Proteine afectate + resturi celulare
http://noskhe.com/publics/
Biomarkeri ai inflamatiei - anticorpii
Formarea si distrugerea complexelor
imunologice
Formarea si distrugerea complexelor
imunologice
Rolul enzimelor
Distrug si elimina aceste complexe in circuitul sangvin
Stimuleaza mecanismele de aparare si accelereaza
mecanismele inflamatorii
Folosirea terapiei sistemice
Scleroza mutipla - Dr. Solorzano (Programul de Studii de
Medicina Alternativa - Mexic)
Pacient de 40 ani
Alte tratamente nereusite
Terapia sistemica Dupa 1 luna – intarirea musculaturii
Dupa 3 luna – deplasarea usoara
Dupa 6 luni – vindecare
Folosirea terapiei sistemice
Artrita reumatoida - nivele mari ale complexelor imune
Studii clinice in Germania
worldstemcells.com
Amestecuri de enzime
Saruri de aur
Rezultate similare
Avantajul folosirii enzimelor: mai bine tolerate
efecte secundare minime/nule
Folosirea terapiei sistemice
Inflamatia
Enzimele faciliteaza aparitia inflamatiilor
raspuns al organismului la stimulii toxici
Dr. Solorzano a utilizat enzimele pentru tratarea/prevenirea
accidentarilor sportive
- Pacientilor le-au fost administrate enzime inaintea competitiilor
- Cand organismele au suferit injurii – zonele sau vindecat pana la
de 2x mai repede
Bolile vasculare
Tromboza, flebita, vene varicoase
Enzime: reducerea colesterol, trigliceride
Folosirea terapiei sistemice
Inflamatia
Dr. Indest – 1990 – efectul enzimelor asupra bolilor
vasculare
Reducerea simptomelor (dureri, crampe)
Reducerea umflaturilor
Cancer
John Beard – enzime din sucul pancreatic al
porcilor sau viteilor
Lot de 170 pacienti
O parte din pacienti s-au recuperat total
Folosirea terapiei sistemice
Cancer
Metabolismul celulei normale difera de
metamolismul celulei canceroase
Celulele canceroase necesita
o serie de aminoacizi
Celulele tumorale
necesita L-asparagina
L-asparaginaza agent
anticanceros
Reduce rata de
crestere a celulelor
tumorale
Terapiile noi – degradare enzimatica
Polizaharide membrana celulara
Proteine functionale / structurale
Acizii nucleici
Folosirea terapiei sistemice
Numarul de
complecsi
imunologici
Limite normale
Considerabil
Macrofagele actioneaza si dizolva
complecsii
dizolva
complecsii
partial
Depuneri
Sange
limfa
Scade capacitatea
de aparare
a organismului
Folosirea terapiei sistemice
Boli virale
Jaeger – 1990 – folosirea enzimelor hidrolitice la
tratamentul infectiei cu HIV
Nivele mari de auto-anticorpi
Nivele mari ale complecsi circulatori imuni
Terapia enzimatica - adjuvant
Reducerea sintomelor tipice infectiei
Kleine – 1990 – folosirea enzimelor hidrolitice la
tratamentul pacientilor cu herpes
zoster
Efecte benefice ale terapiei
Folosirea terapiei sistemice
Forma a fibrozei chistica
Pancreas afectat
Pacientii – absorbtie deficitara a nutrientilor
utilizarea pancreatinei
(tripsina, lipaza)Hemofilia
Lipsa factorilor
de coagulare
www.slideshare.net
Injectarea factorilor de coagulare
http://hemophilia.aboutkidshealth.ca/
Hemofilia
Lipsa factorilor de coagulare
Folosirea terapiei sistemice
aceste gene sunt localizate pe cromozomul X
gene care codeaza factorul VIII (hemofilia A)
factorul IX (Hemofilia B)
Grade de severitate a hemofilieihemophilia.aboutkidshealth.ca
Factor de coagulare VIIProteina recombinanta
(tratamentul hemofiliei)
http://www.123rf.com/
HemofiliaFolosirea terapiei sistemice
www.labcy.com
Sindromul Gaucher
Deficienta -glucocerebrozidazei
Folosirea terapiei sistemice
mythrombocytopenia.net
Marirea ficatului, osteoporoza, osteonecroza (pierderea tesutului osos)
Sindromul Hurler (-iduronidaza)
Folosirea terapiei sistemice
Mucopolizaharidoza I
opacizarea corneei
Trasaturi faciale proeminente
Obstructionare cai respiratorii
superioare
Degradarea necorespunzatoare a
dermatan si heparan sulfatului
Boala poate fi tratata prin
transplant de maduva sau celule
din cordonul ombilical
Sindromul Hurler (-iduronidaza)
Folosirea terapiei sistemice
Nobuo Maita et al. PNAS 2013;110:14628-14633
Nature Reviews Drug Discovery 14,183–202 (2015)
Folosirea terapiei sistemice
Folosirea terapiei sistemice
Nature Reviews Drug Discovery 14,183–202 (2015)
Kalikrein (KLK) peptidazele
Folosirea terapiei sistemice
KLK2 proteaze serice
tesuturile prostatei
secretata in lichidul seminal
Activeaza KLK3 (antigen specific prostatei) in clivarea proteinelor coagulante seminale
lichefierea spermei
JBC, 289, 49, pp. 34267–34283, December 5, 2014
Utilizarea tratamentelor cu KLK – rezolvarea infertilitatii
Prassas, I. et al., Nature Reviews Drug Discovery,14, 183–202, 2015