+ All Categories
Home > Documents > CURS 8 - Enzime

CURS 8 - Enzime

Date post: 08-Dec-2014
Category:
Upload: andymiha
View: 93 times
Download: 0 times
Share this document with a friend
26
CURS 8 Enzime cu importanţă Enzime cu importanţă în în industria alimentară industria alimentară
Transcript
Page 1: CURS 8 - Enzime

CURS 8

Enzime cu importanţăEnzime cu importanţă în în

industria alimentară industria alimentară

Page 2: CURS 8 - Enzime

Oxidoreductazele Numeroase oxidoreductaze intervin în procesele metabolice, atât

anaerobe cât şi aerobe: glicoliza, fermentaţii, ciclul acizilor tricarboxilici, catena de respiraţie celulară etc., care se desfăşoară în diversele materii prime alimentare şi în procesele fermentative de obţinere a unor produse alimentare.

Oxidoreductazele catalizează reacţiile de oxidoreducere prin diferite mecanisme:

Transfer de hidrogen (transhidrogenaze, dehidrogenaze);Transfer de electroni (transelectronaze);Combinarea directă a unui substrat cu oxigenul molecular (oxidaze).

•Activitatea catalitică a acestor enzime este exercitată prin intermediul unor coenzime, care se comportă ca acceptori intermediari între substratul donor şi cel acceptor, care pot fi:

Nicotin-adenindinucleotidice NAD, NADP+; Nucleotide flavinice :

• flavinmononucleotidul FMN sau flavinadenindinucleotidul FAD.

Page 3: CURS 8 - Enzime

Oxidoreductaze FAD- dependente (flavinenzime sau dehidogenaze aerobe)

• Au drept coenzime FAD sau FMN, derivaţi ai riboflavinei, vitamina B2. Unele flavinenzime conţin în molecula lor şi ioni metalici (ca, de exemplu, Fe), care le conferă uneori şi funcţia de transportori electroni.

Denumite şi flavinenzime sau dehidrogenaze aerobe, au ca reprezentant glucozoxidaza obţinută din Aspergillus niger şi Penicillium vitale.

Aplicaţii. Glucozoxidaza se utilizează în reacţia de oxidare a glucozei la acid gluconic, în tehnologia de obţinere a albuşului de ou (praf). In acest produs nu trebuie să existe glucoza liberă, care ar participa, cu aminoacizii liberi la procesul de îmbrunare Maillard.

Page 4: CURS 8 - Enzime

Oxidoreductaze NAD - dependente (dehidogenaze anaerobe)

Catalizează procesele reversibile de oxidoreducere caracterizate prin transfer de hidrogen de pe un substrat donor pe altul acceptor şi au un caracter anaerob, deoarece acceptorul de hidrogen este altul decât oxigenul: dehidrogenaze, transhidrogenaze şi dehidraze.

Intervin în numeroase procese catabolice oxidative ale alcoolilor, aldehidelor, aminoacizilor.

Catalizează mai ales procese anabolice reductive. Ele sunt in diverse organe şi ţesuturi animale şi vegetale, precum şi în diferite microorganisme.

Page 5: CURS 8 - Enzime

Oxidoreductaze NAD+ sau NADP+ dependente

Cei mai importanţi reprezentanţi şi aplicaţiile acestora sunt prezentaţi în cele ce urmează:

• Alcooldehidrogenaza catalizează transformarea alcoolului etilic în acetaldehidă (care apoi este transformată cu ajutorul acetaldehiddehidrogenazei în acid acetic). Reacţie importantă în fenomenul de fermentaţie acetică, realizat de bacteriile acetice în biotehnologia obţinerii oţetului de vin (Acetaldehiddehidrogenaza catalizează oxidarea aldehidei acetice în acid acetic, în procesul de oţetire).

Lactatdehidrogenaza catalizează (în condiţii anaerobe) reducerea acidului piruvic cu formare de acid lactic. Acidul lactic reprezintă etapa finală a fermentaţiei lactice.

Page 6: CURS 8 - Enzime

Oxidoreductaze: OxidazeOxidazele catalizează reacţiile diferitelor substraturi cu oxigenul

molecular sau cu peroxizii, fiind caracterizate prin transfer de hidrogen de pe un donator pe un acceptor care este oxigenul molecular. Ca produs de reacţie se formează H2O2 sau H2O.

Oxidazele, în funcţie de mecanismul de acţiune, se clasifică:•-oxigenaze (monooxigenaze şi dioxigenaze),•-oxidaze transportoare de electroni (citocromoxidaza, cupruoxidazele etc),•-hidroxiperoxidaze (catalaze şi peroxidaze).•Lipoxigenaza (carotenoxidază), catalizează oxidarea acizilor graşi polinesaturaţi cu ajutorul O2. Sunt oxidate şi gliceridele şi metilesterii acizilor graşi menţionaţi formându-se peroxizii respectivi.• Se găseşte în soia, mazăre, fasole, arahide, cartofi, ridichi. Temperaturile scăzute nu inhibă activitatea enzimei, care este responsabilă de producerea mirosurilor nedorite din produsele vegetale. Lipoxigenaza din soia se utilizează la albirea fainii de grâu, prin distrugerea carotenilor.

Page 7: CURS 8 - Enzime

Oxidoreductaze: Oxidaze• Peroxidazele catalizează reacţiile de oxidoreducere în

prezenţa peroxizilor (de hidrogen sau alt peroxid organic). PeroxidazelePeroxidazele sunt larg distribuite în microorganisme (bacterii, drojdii), în plante (napi, gulii, cartofi, smochine) şi diferite alte legume şi fructe, în ţesuturi şi lichide biologice animale ca, de exemplu, ficat, lapte, salivă, în leucocite etc.

• Dintre peroxidaze, cea mai bine studiată şi caracterizată este peroxidaza din hrean.peroxidaza din hrean. Proprietăţi asemănătoare s-au găsit şi în cazul altor peroxidaze ca, de exemplu, peroxidaza din ficat, lactoperoxidaza din lapte etc. Datorită termostabilităţii lor, determinarea activităţii peroxidazice din diferite legume şi fructe este folosită ca un indice al eficienţei tratamentelor termice aplicate în procesele de sterilizare. • Determinarea activităţii lactoperoxidazei este folosită la urmărirea eficienţei

pasteurizării în industria laptelui.

• Diferitele peroxidaze intervin în degradarea fructelor şi legumelor, fiind implicate în modificarea mirosului şi gustului (mai ales la mazăre, fasole etc.) în procesele de îmbrunare enzimatică.

Page 8: CURS 8 - Enzime

Oxidoreductaze: Oxidaze• CatalazăCatalază reprezintă o peroxidaza specială care oxidează

o moleculă de H2O2 la oxigen, cu reducerea simultană a celei de a doua molecule la H2O.

catalaza

2H2O2 2H20+l/202

Surse comerciale de catalază sunt ficatul de bovine, Aspergillus niger, Micrococcus lysodeikticus (enzima este eliberată prin liza peretelui bacterian).

• Aplicaţii:Aplicaţii: catalază este utilizată la descompunerea apei oxigenate reziduale, când este folosită pentru sterilizarea la rece a laptelui la fermă sau dacă laptele este utilizat la fabricarea brânzeturilor.

Page 9: CURS 8 - Enzime

Evidenţierea enzimeEvidenţierea enzimelorlor bacterienebacteriene

Testul catalazei Testul catalazei - eevidenţierea catalazeividenţierea catalazeicatalaza descompune apa oxigenată în apă şi oxigenoxigenul eliberat se evidenţiază prin formarea bulelor de gazmetoda: cultura de cercetat se suspendă pe o lamă într-o pic. de H2O2

Pe o lama de microscop se depune 1-2 picaturi de H2O2 , peste picatura de reactiv se adauga coloniile testate.

Se urmăreşte: producerea de catalază de către bacterii (staphylococi, streptococi). Interpretare: test pozitiv test pozitiv - eliberare de oxigen (efervescenţă) în prezenţa apei oxigenate test negativ test negativ - lipsa efervescenţei

stânga - bacterii catalazo-negativedreapta - bacterii catalazo-pozitive bacterii catalazo-pozitive

Page 10: CURS 8 - Enzime

HIDROLAZELE  Aceste enzime scindează hidrolitic substraturile, acţionând asupra legăturilor C-O, C-N, C-S, C-C etc. Principalele hidrolaze de interes pentru biotehnologiile alimentare sunt:

Lipazele, esterazele şi fosfolipazele;Lipazele, esterazele şi fosfolipazele;Amilazele;Amilazele;Celulazele şi hemicelulazeleCelulazele şi hemicelulazeleEnzimele pectoliticeEnzimele pectoliticePeptidhidrolazelePeptidhidrolazele

Page 11: CURS 8 - Enzime

HIDROLAZELE - Lipazele, esterazele şi fosfolipazele  Lipazele, esterazele şi fosfolipazele (Enzimele lipolitice) – sunt importante în metabolismul şi degradarea lipidelor.

Lipazele sunt utilizate în industria alimentară, în diferite etape tehnologice, cum ar fi:

Hidroliza controlată a lipidelor din unele alimente (brânzeturi, salamuri crude), în faza de finisare (maturare), când acizii graşi rezultaţi pot participa la aroma produsului;

Unele preparate enzimatice se utilizează la maturarea brânzeturilor:Lipaza gastrică; Lipaza pancreatică; Esteraze pregastrice;Esteraze obţinute din unele mucegaiuri: Penicillium caseicolum,

Aspergillus niger, Aspergillus oryzae, Mucor miehei;Esteraze bacteriene produse de Pseudomonas fluorescens şi

Pseudomonas fragilis.

Page 12: CURS 8 - Enzime

Hidrolaze - Lipazele, esterazele şi fosfolipazele

Mecanisme de acţiune:Lipazele acţionează asupra trigliceridelor, având afinitate pentru acizii graşi cu catenă lungă;Esterazele acţionează faţă de gliceridele ce conţin acizi graşi cu catenă scurtă;Fosfolipazele (lecitinazele) sunt de mai multe tipuri, în funcţie de legătura asupra căreia acţionează din cadrul moleculei de fosfolipide. Fosfolipazele sunt activate de Ca2+ şi de sărurile care menţin lipidele în stare de emulsie.

Degradarea necontrolată a lipidelor din unele alimente cu conţinut ridicat în grăsimi, conduce la acumularea de acizi graşi liberi, ceea ce determină creşterea acidităţii produsului şi apariţia gustului de rânced.

Pentru a diminua lipoliza necontrolată, se recomandă: reducerea conţinutului de apă liberă a materiei prime,reducerea conţinutului de apă liberă a materiei prime, reducerea timpului de conservare,reducerea timpului de conservare,asigurarea unei temperaturi scăzute pe parcursul depozitării materiei prime şi a asigurarea unei temperaturi scăzute pe parcursul depozitării materiei prime şi a

produselor.produselor.

Page 13: CURS 8 - Enzime

Hidrolaze: enzime oligozidazice

Importante pentru industria alimentară sunt β-glucozidaza, β-D-galactozidaza, α-D-galacto zidaza şi α-D-fructofuranozidaza.

β-Glucozidazaβ-Glucozidaza denumită şi emulsină - scindează legătura -glucozidică din -glucozii răspândiţi în plante cum ar fi amigdalina, prunazina, naringina, dar şi din celobioză şi genţiobioză.•Această enzimă este produsă şi de unele microorganisme: Alcaligenes faecalis, Botryodiplodia theobromae, Aspergillus niger, Saccharomyces lactis etc. •Aplicaţii: este utilizată pentru îndepărtarea gustului amar al sucului de grapefruit.

Page 14: CURS 8 - Enzime

Hidrolaze: enzime oligozidazice αα-Galactozidaza-Galactozidaza este elaborată de Bacillus stearothermophilus, Penicillium

duponti, Absidia griseola, Mortierella vinaceae, Aspergillus awamori. • mecanism de acţiune: Substratul natural al acestei enzime este rafinoza

(descompune rafinoza în galactoză şi zaharoză).• • Aplicaţii: este utilizată în industria zahărului şi anume pentru extragerea

zahărului din melasă, respectiv pentru hidroliza rafinozei din melasă, în zaharoză şi galactoză.

-Galactozidaza -Galactozidaza cunoscută şi sub numele de lactază hidrolizează lactoza in glucoză şi galactoză. Este găsită în unele plante, microorganisme şi în mucoasa intestinală a

mamiferelor. Este obţinută din tulpini de mucegaiuri (Aspergillus niger, Aspergillus oryzae, Aspergillus foetidis), din drojdii (Kluyveromyces fragilis, Kluyveromices lactis, Candida pseudotropicalis, T orulopsis lactis) şi bacterii (Lactobacillus bulgaricus, Streptcoccus thermophillis, Escherichia coli).

• • Aplicaţii: se utilizează ca preparate enzimatice în industria laptelui, în special la obţinerea laptelui şi a produselor lactate delactozate, destinate copiilor cu intoleranţă la lactoza;

• laptele tratat cu lactază este mai dulce şi pentru obţinerea unor băuturi lactate aromate nu mai necesită să se adauge zahăr.

Page 15: CURS 8 - Enzime

Hidrolaze: amilazeleAmilazele descompun amidonul, care este alcătuit din amiloză

şi amilopectină.

După tipul de legături hidrolizate, amilazele se clasifică astfel:•Enzime care hidrolizează legăturile glucozidice α-1,4 (α - amilaza şi β- amilaza);•Enzime care hidrolizează legăturile glucozidice α-1,6 (pullulanaza şi izoamilaza);•-amilazele-amilazele pot fi de origine animală (amilaza produsă de glanda sali vară şi pancreas), de origine vegetală (cereale încolţite în special malţ) cu importanţă în industria berii, spirtului şi panificaţiei şi de origine microbiană (bacterii, mucegaiuri şi mai puţin drojdii), cele de origine bacteriană fiind mai stabile la căldură decât cele de origine fungică.

Surse importante de -amilază sunt orzul, grâul, secara, cartofii dulci şi soia. Recent s-a dovedit că este produsă şi de unele microorganisme (Bacillus, Streptomyces), având pH-ul optim la 5-6 şi temperatura optimă la 60 °C.

Page 16: CURS 8 - Enzime

Hidrolaze: celulaze

CelulazeleCelulazele sunt folosite pentru hidroliza celulozei de provenienţă vegetală, până la glucoză care, la rândul ei, este folosită ca sursă de carbon pentru procese de biosinteză (de exemplu, acizi organici); producţia de alcool etilic prin fermentaţie; producerea de biomasă cu ajutorul microorganismelor. •Aplicatii: se utilizează şi în industria sucurilor de fructe împreună cu hemicelulazele şi enzimele pectolitice, precum şi în industria berii, împreună cu hemicelulazele, pentru îndepărtarea celulozei.

Page 17: CURS 8 - Enzime

Hidrolaze: enzime pectolitice Enzimele din această grupă hidrolizează

substanţele pectice (acţionează asupra substanţelor pectice) din unele produse vegetale, în special din mere şi citrice. Substanţele pectice au caracter gelifiant şi sunt reprezentate de polimeri ai acidului galacturonic.

Aplicatii: Aceste enzime sunt utilizate în industria sucurilor de fructe şi legume şi la obţinerea mustului de struguri (optimizarea gradului de extracţie, limpezire etc) - sunt utilizate pentru ameliorarea extracţiei sucului celular din fructe şi legume (prin degradarea pereţilor celulari), pentru macerarea fructelor şi legumelor în vederea obţinerii de nectaruri (prin degradarea substanţelor pectice ale lamelelor mijlocii care asigură legătura dintre celule, fără a se distruge pereţii celulelor parenchima toase) şi pentru limpezirea (clarificarea) diferitelor categorii de sucuri.

Page 18: CURS 8 - Enzime

Hidrolaze: peptidhidrolazele

Aceste hidrolaze (enzime proteolitice) scindează legăturile peptidice din proteine, oligopeptide, având ca rezultat obţinerea de peptide cu masă moleculară mai mică şi aminoacizi. Peptidhidrolazele pot fi de provenienţă:•vegetală,vegetală,•animală,animală,•microbiană.microbiană.

Se subdivid în endo- şi exo-peptidhidrolaze. - Endo-peptidhidrolazele, denumite şi proteinaze hidrolizează legăturile peptidice din interiorul catenelor polipeptidice ale proteidelor şi proteinelor cu masă moleculară mare, producând catene polipeptidice de masă moleculară mai mică, iar exo-peptidhidrolazele, peptidazele sau exopeptidazele catalizează desfacerea hidrolitică a legaturilor peptidice de la extremităţile catenelor polipeptidice sau oligopeptidice, conducând, în general, la eliberarea de aminoacizi.

Page 19: CURS 8 - Enzime

Hidrolaze: peptidhidrolaze vegetale

Peptidhidrolazele de origine vegetală sunt proteinazele alcaline (tiolice), utilizate în special în industria cărnii, la procesul de frăgezire.•Ex: bromelina (obţinută din sucul de ananas),•papaina (din latexul fructelor Caryca Papaia, cu puţin înainte de coacerea acestora) şi•ficina (din latexul fructului de smochin).

Peptidhidrolazele de origine animală sunt: chimozina şi pepsina cu acţiune coagulantă, tripsina cu acţiune proteolitică.•ChimozinaChimozina - cheagul sau labfermentul este obţinută din stomacul glandular de rumegătoare (viţel, miel, ied);

Unele microorganisme sintetizează proteinaze asemănătoare chimozinei: Mucor pusillus, Endothia parasitica, Aspergillus oryzae, Irpex lactis. In legătură cu chimozina menţionăm următoarele:

Page 20: CURS 8 - Enzime

Hidrolaze: de origine animala

• chimozina, pepsina şi tripsina, cărora li se adaugă chimotripsina, elastaza şi carboxipeptidazele, aminopeptidazele şi dipeptidazele, produse de diferite glande digestive. Cu excepţia ultimelor două tipuri de exo-peptidaze, celelalte peptidhidrolaze sunt produse de glandele digestive sub formă de pro enzime (preenzime sau zimogene) inactive, care devin active numai în urma scindării hidrolitice a unor porţiuni din structura lor, ce blochează activi tatea lor enzimatică. Conversia proenzimelor în enzime active se realizează pe cale autocatalitică, care conduc la enzima activă şi fragmente polipeptidice inactive enzimatic.

Page 21: CURS 8 - Enzime

Hidrolaze: de origine animala

ChimozinaChimozina - este elaborată sub formă de prochimozină (forma inactivă), care se transformă în chimozina la pH 2,0 şi pe cale autocatalitică la pH 5,0.- are pH-ul optim de acţiune de aproximativ 5 şi este inactivată în 15 minute, la 50°C;- are acţiune coagulantă asupra laptelui şi proteolitică asemănătoare pepsinei şi este utilizată la prepararea brânzeturilor;- diferite laboratoare au clonat gena care codifică sinteza prochimozinei bovine, la E. coli. Enzimă sintetizată de bacterie are proprietăţi identice cu cea naturală. La investigaţii prin imunodifuzie în gel de agar cele două enzime au fost identice, însă testul ELISA a evidenţiat unele mici deosebiri. Ulterior gena a fost clonată şi la Saccharomyces cerevisiae (Stroh W.H., 1998).

Page 22: CURS 8 - Enzime

Hidrolaze: de origine animala

• PepsinaPepsina este o endo-peptidază produsă sub formă de pepsinogen de glandele stomacale ale mamiferelor inclusiv ale omului şi care se găseşte şi în sucul gastric al păsărilor, reptilelor şi peştilor. Se transformă în pepsină activă la pH<5, în prezenţa ionilor de H+ sau autocatalitic (în prezenţa pepsinei formate anterior).

Pepsina se caracterizează prin următoarele:- are acţiune proteolitică, prin scindarea hidrolitică a legăturilor

peptidice, acţionând de preferinţă la nivelul legăturilor peptidice mai ales la nivelul aminoacizilor aromatici (triptofan, tirozină, fenilalanină) şi dicarboxilici (acizii aspartic şi glutamic);

- are pH-ul optim de actiune 1,5 – 2,5. Pepsina este folosită la precipitarea cazeinei, obţinerea de peptone, în unele ţări pentru limpezirea berii la rece, ca adjuvant digestiv şi este inclusă în reţeta de preparare a unor băuturi tonice.

Page 23: CURS 8 - Enzime

Hidrolaze: de origine animalaTripsina este tot o endo-

peptidază, care desface hidrolitic legăturile peptidice în interiorul catenelor polipeptidice, de preferinţă cele constituite între gruparea carboxil a unui aminoacid diaminic (arginina, lizina) şi gruparea aminică a altui rest de aminoacid. Este produsă de pancreas sub formă de tripsinogen, forma inactivă, care se transformă în tripsină activă în intes tinul subţire sub acţiunea enterochinazei (o enzimă intestinală) sau pe cale autocatalitică (în prezenţa tripsinei formate anterior).

Page 24: CURS 8 - Enzime

Hidrolaze: de origine animala

• CatepsineleCatepsinele sunt peptidhidrolaze localizate intracelular, la nivelul lizozomilor, în ţesutul muscular, ficat, splină, rinichi, pulmoni etc. Sunt mai multe tipuri de catepsine (A, B, C, D, E) şi acţionează hidrolitic asupra proteinelor tisulare în procesele autolitice.

Page 25: CURS 8 - Enzime

Hidrolaze: de origine microbiana

Peptidhidrolazele de origine microbiană Peptidhidrolazele de origine microbiană sunt sintetizate de mai multe microorganisme, însă sunt utilizate in Industria alimentară numai tulpinile nepatogene şi netoxigene, aparţinând speciilor: Bacillus subtilis, Bacillus licheniformis, Bacillus megaterium, Aspergillus niger, Aspergillus oryzae, Streptomyces sp., Rhizopus sp., Mucor miehei, Mucor pusillus etc. Proteinazele microbiene sunt asemănătoare celor vegetale sau animale. Dintre aceste amintim: subtilizina, metaloproteinazele microbiene, proteinazele acide microbiene etc.

Page 26: CURS 8 - Enzime

Izomeraze

Reprezintă enzime care catalizează rearanjările intramoleculare, în structurile asupra cărora acţionează. •Exemplu: glucozizomeraza, care determină conversia D-glucozei în D-fructoză şi este folosită în industria amidonului, pentru obţinerea siropului de glucoza cu conţinut ridicat de fructoză.

Pentru producerea industrială de glucozizomeraza se utilizează diferite tulpini microbiene de Streptomyces olivaceus, Streptomyces olivochromogenes, Streptomyces rubiginosus, Bacillus coagulans etc.

In această clasă de enzime mai sunt grupate racemazele şi epimerazele, cis-trans izomerazele, oxidoreductazele intramoleculare, transferazele intramoleculare, liazele intramoleculare etc., care intervin în diferitele procese ale metabolismului glucidelor, lipidelor şi proteidelor din organismele vegetale şi animale.


Recommended