-
MONOLISA HCV Ag-Ab ULTRA
1 placă – 96 teste 72556 5 plăci – 480 teste 72558
TRUSĂ IMUNOENZIMATICĂ PENTRU DETECŢIA INFECŢIEI CU HCV (VIRUSUL
HEPATITEI C) ÎN SER SAU PLASMĂ UMANE
Controlul de calitate al fabricantului
Toţi reactivii fabricaţi şi comercializaţi de Bio-Rad sunt
supuşi sistemului complet de asigurare a calităţii, începând de la
recepţia materiilor prime şi până la comercializarea produsului
finit. Calitatea fiecărui lot este atent controlată, iar acesta
este eliberat pe piaţă numai atunci când corespunde criteriilor de
acceptare. Informaţiile referitoare la producţia şi controlul
fiecărui lot sunt proprietatea companiei noastre.
sophieImage importée
-
2
CUPRINS
1 - APLICAŢII CLINICE 2 - PRINCIPIUL TESTĂRII 3 - COMPOZIŢIA
TRUSEI 4 - MATERIALE NECESARE NEFURNIZATE 5 - INSTRUCŢIUNI PRIVIND
IGIENA ŞI PROTECŢIA MUNCII 6 - PRECAUŢII 7 - RECOLTAREA PROBELOR 8
- RECONSTITUIREA REACTIVILOR - VALABILITATE - STABILITATE 9 -
PROCEDEUL DE TESTARE 10-ADAPTĂRI LA SISTEME AUTOMATE 11-CALCULUL ŞI
INTERPRETAREA REZULTATELOR 12-VERIFICAREA SPECTROFOTOMETRICĂ A
PIPETĂRII PROBELOR ŞI
A REACTIVILOR
13-PERFORMANŢELE ACESTUI TEST 14-LIMITELE METODEI
15-BIBLIOGRAFIE
-
3
1. APLICAŢIILE CLINICE
MONOLISA HCV Ag-Ab ULTRA este o metodă de detecţie
imunoenzimatică pentru evidenţierea infecţiei cu HCV, care se
bazează pe detecţia anticorpilor şi a antigenului capsidar asociate
unei infecţii cu virusul hepatitei C, în serul sau plasm
bolnavilor.
2. PRINCIPIUL TESTĂRII
Microplaca (faza solidă) MONOLISA HCV Ag-Ab ULTRA este
sensibilizată cu :
• anticorpi monoclonali specifici de proteina capsidara a
virusului HCV
• 2 proteine recombinate produse in E.coli, caracteristice
regiunii NS3: genotip 1 şi 3a
• Un antigen recombinat caracteristic regiunii non-structurale
NS4
• O peptidă capsidară mutantă din regiunea structurală a
genomului virusului HCV.
Conjugatele folosite sunt:
• Conjugat 1 (R6): anticorpi monoclonali de şoarece,
biotinilaţi, dirijati împotriva capsidei virale C. Aceşti
monoclonali nu reacţionează cu peptida capsidară C mutantă cu care
este sensibilizată placa.
• Conjugat 2 (R7): anticorpi de şoarece marcaţi cu peroxidază,
specifici de IgG umane, şi streptavidină marcată cu peroxidază.
Realizarea testului se bazează pe următoarele etape de
reacţie:
1) Conjugatul 1, probele de testat şi serurile de control se
pipetează în godeurile microplăcii. Dacă anticorpii anti-HCV sunt
prezenţi, aceştia se vor lega la antigenele fixate la faza solidă,
iar dacă antigenul capsidar C este prezent, acesta se va lega atât
la anticorpii monoclonali cu care s-a sensbilizat placa, cât şi la
anticorpii monoclonali biotinilaţi specifici de antigenul capsidar
C (conjugat 1)
2) După incubarea la 37°C timp de 90 minute şi o etapă de
spălare, se adaugă anticorpii anti-IgG umane marcaţi cu peroxidază
şi streptavidina marcată cu peroxidază (Conjugat 2). Conjugatul
streptavidină-peroxidază reacţionează cu anticorpii monoclonali
biotinilaţi specifici de antigenul capsidar C, dacă sunt prezenţi.
În acelaşi timp, conjugatul anti-IgG umane marcat cu peroxidază
reacţionează cu anticorpii anti-HCV, dacă sunt prezenţi.
3) După 30 minute de incubare la 37°C, conjugatul enzimatic
nelegat este îndepărtat printr-o etapă de spălare, iar complexul
antigen-anticorpi format este evidenţiat prin adăugarea
substratului.
4) Reactia se stopează după 30 de minute, apoi se citeşte
absorbţia (sau densitate optică, DO) cu ajutorul unui
spectrofotometru la 450/620-700 nm. Absorbţia măsurată a probei
permite detectarea prezenţei sau absenţei anticorpilor anti-HCV
sau/şi a antigenului capsidar viral HCV. Intensitatea culorii este
proporţională cu cantitatea de anticorpi anti-HCV şi/sau de antigen
capsidar de HCV, legate la faza solidă.
-
4
3. COMPOZIŢIA TRUSEI
PREZENTARE MARCAJ NATURA REACTIVILOR
1 placă 5 plăci
R1
MICROPLACĂ 12 barete sensibilizate cu anticorpi monoclonali
anti-capsidă de HCV şi antigene recombinate purificate (NS3, NS4)
şi un peptid capsidar mutant, specifice de HCV
1 5
R2 SOLUŢIE DE SPĂLARE CONCENTRATĂ (20x) Tampon Tris NaCl pH =
7,4 Conservant: Proclin™ 300 (0,1%)
1 flacon 70 ml
1 flacon 235 ml
R3 CONTROL NEGATIV Tampon Tris HCl suplimentat cu Albumina
Serică Bovină (ASB). Conservant: Proclin ™300 ( 0,1%)
1 flacon 1 ml
1 flacon 1 ml
R4
ANTICORP POZITIV CONTROL Ser uman ce conţine anticorpi anti-HCV,
testat negativ pentru AgHBs, anti-HIV1 şi anti-HIV2, diluat în
tampon Tris HCl suplimentat cu ASB, inactivat fotochimic.
Conservant: Proclin™ 300 ( 0,1%)
1 flacon 1,5 ml
1 flacon 3 ml
R5a ANTIGEN POZITIV DE CONTROL Antigen pozitiv sintetic de
control, ce conţine un liofilizat de peptid capsidar.
1 flacon pentru 1 ml
1 flacon pentru 1 ml
R5b DILUANT PENTRU ANTIGENUL DE CONTROL Diluant pentru R5a. Apă
cu conservant : Proclin™ 300 ( 0,5%)
1 flacon 1 ml
1 flacon 1 ml
R6
CONJUGAT 1 Anticorpi monoclonali de şoarece, biotinilaţi,
specifici de capsida HCV. De culoare violet. Conservanţi: Azidă de
sodiu (< 0,1%) şi Cosmocil 0,025%
1 flacon 15 ml
2 flacoane 2 x 30 ml
R7
CONJUGAT 2 Anticorpi de şoarece anti-IgG umane, marcaţi cu
peroxidază şi streptavidină marcată cu peroxidază. De culoare
verde. Conservant: Proclin™ 300 (0,5%)
1 flacon 15 ml
2 flacoane 2 x 30 ml
R8 TAMPON SUBSTRAT PENTRU PEROXIDAZĂ: Soluţie de acid citric şi
acetat de sodiu pH=4,0, cu H2O2 (0,015%) şi dimetil sulfoxid 4%
(DMSO)
1 flacon 60 ml
2 flacoane 2 x 60 ml
R9 CROMOGEN Soluţie ce conţine tetrametil benzidină (TMB)
1 flacon 5 ml
2 flacoane 2 x 5 ml
R10 SOLUŢIE DE STOPARE Soluţie de acid sulfuric 1N
1 flacon 28 ml
3 flacoane 3 x 28 ml
4. MATERIALE NECESARE NEINCLUSE ÎN TRUSĂ
• Apă distilată sau complet demineralizată • Hipoclorit de sodiu
(apă de javel) şi bicarbonat de sodiu • Hârtie absorbantă • Mănuşi
de protecţie de unică utilizare • Ochelari de protecţie
-
5
• Eprubete de plastic de unică utilizare • Micropipete automate
sau semiautomate, reglabile sau fixe, ce pot distribui volume de 50
µl,
80 µl, 100 µl, 200 µl şi 1 ml • Cilindri gradaţi cu capacităţi
de 10 ml, 200 ml şi 1000 ml • Agitator tip Vortex • Spălător de
microplăci automat*, semiautomat* sau manual • Baie de apă
termostatată sau incubator* pentru microplăci, reglate la 370C ±
10C. • Container pentru deşeuri contaminate • Cititor pentru
microplăci* (echipat cu filtre de 490, 620, 450/620 - 700 nm).
(*) Informaţii suplimentare privind echipamentele validate le
obţineţi de la departamentul tehnic.
5. INSTRUCŢIUNII PRIVIND IGIENA ŞI PROTECŢIA MUNCII
Toţi reactivii conţinuţi în trusă sunt destinaţi diagnosticului
in vitro. • Purtaţi mănuşi de unică folosinţă în timpul
manipulărilor reactivilor şi probelor şi spălaţi-vă
bine pe mâini după aceste manipulări. • Nu pipetaţi niciodată cu
gura. • Serul de control pozitiv R4 este inactivat fotochimic. •
Materialul de origine umană utilizat la prepararea martorului
pozitiv (R4) a fost testat şi găsit
nereactiv pentru antigenul de suprafaţă al hepatitei B (AgHBs)
şi anticorpii specifici virusurilor imunodeficienţei umane
(anti-HIV-1 şi anti-HIV-2). Deoarece nici o metodă de testare
cunoscută nu garantează absenţa totală a agenţilor infecţiosi,
consideraţi reactivii şi toate probele pacienţilor ca potenţial
infecţioase şi trataţi-le cu precauţiile de rigoare.
• Consideraţi orice material care vine în contact direct cu
probele şi reactivii de origine umană, precum şi soluţiile de
spălare, ca produse contaminate.
• Evitaţi stropirea cu probe sau soluţii care conţin probe. • În
caz de stropire a suprafeţelor de lucru, clătiţi cu hipoclorit de
sodiu diluat la concentraţia
finală de 10%. Dacă lichidul de contaminare este un acid,
neutralizaţi mai întâi cu bicarbonat de sodiu şi apoi curăţaţi cu
hipoclorit de sodiu şi uscaţi cu hârtie absorbantă. Materialul
folosit la curăţenie trebuie aruncat în containerul pentru deşeuri
contaminate.
• Probele, reactivii de origine umană, precum şi materialele şi
produsele contaminate, trebuie decontaminate înainte de a fi
aruncate.
- fie prin imersie timp de 30 de minute în hipoclorit de sodiu
la o concentraţie finală de 5% (1 volum de hipoclorit la 10 volume
de deşeuri lichide contaminate)
- fie prin autoclavare la 1210 C timp de cel puţin 2 ore.
ATENŢIE: nu introduceţi în autoclavă soluţii ce conţin hipoclorit
de sodiu. • Evitaţi orice contact al tamponului substrat,
cromogenului şi al soluţiei de stopare cu pielea
sau mucoasele (risc de intoxicaţie, inflamaţie sau arsuri).
Informaţiile de siguranţă în exploatare şi protecţia mediului
(MSDS) sunt disponibile la cerere.
• Nu omiteţi să neutralizaţi şi/sau să autoclavaţi soluţiile,
lichidele reziduale de spălare sau alte lichide ce conţin probe
biologice, înainte de a le arunca în chiuvetă.
• Mai mulţi reactivi din trusă includ conservantul azidă de
sodiu. Azida de sodiu poate reacţiona cu conductele de plumb sau
cupru din canalizarea de laborator, formând azide metalice
explozive. Pentru a evita acumularea de azide în conducte, lăsaţi
să curgă prin acestea un volum mare de apă curentă după ce aţi
aruncat în chiuvetă soluţii cu azidă.
• Unii reactivi conţin ProClin™ 300 (0,04%, 0,1% şi/sau
0,5%)
XI : PRODUS IRITANT R43 : Poate determina sensibilizare la
contactul cu pielea. S28/37: După contactul cu pielea, spălaţi
imediat cu multă apă şi săpun. Purtaţi mănuşi de protecţie. MSDS
este disponibilă la cerere.
sophieImage importée
-
6
6. PRECAUŢII Calitatea rezultatelor depinde de respectarea şi
aplicarea corectă a următoarelor Bune Practici de Laborator: • Nu
utilizaţi reactivi expiraţi. • Nu amestecaţi şi nu combinaţi în
aceeaşi serie de lucru reactivi din loturi diferite. • Denumirea
testului, ca şi un număr de identificare specific sunt
inscripţionate pe cadrul suport
al fiecărei microplăci. Acelaşi număr de identificare specific
mai apare şi pe fiecare baretă. Monolisa® HCV Ag - Ab ULTRA : Număr
de identificare specific = 55 Verificaţi numărul de identificare
specific înainte de fiecare utilizare. Orice baretă pe care
lipseşte numărul de identificare specific sau diferă de cel
corespunzător testului realizat un trebuie folosită. REMARCĂ: se
pot utiliza alte loturi decât cele din trusă pentru : soluţia de
spălare (R2, etichetă de identificare : 20x, scris cu verde),
tamponul substrat pentru peroxidază (R8, etichetă de identificare :
TMB buf, scris cu albastru), cromogen (R9, etichetă de identificare
: TMB 11x., scris cu violet) şi soluţia de stopare (R10, etichetă
de identificare : 1N, scris cu roşu), sub rezerva folosirii unui
singur şi aceluiaşi lot în cursul unei serii de lucru. Aceşti
reactivi pot fi utilizaţi şi cu alte produse BIO-RAD (R2, etichetă
10x scris cu albastru sau 10x scris cu portocaliu), cu condiţia să
fie reconstituite corect şi să se folosească un singur amestec în
cursul unei testări date. Contactaţi serviciul nostru tehnic pentru
informaţii suplimentare privind compatibilitatea acestor reactivi
generici cu alte truse.
• Înainte de utilizare, aşteptaţi 30 de minute pentru ca
reactivii să ajungă la temperatura camerei.
• Reconstituiţi cu grijă reactivii pentru a evita orice
contaminare. • Nu realizaţi testul în prezenţa vaporilor reactivi
(acizi, baze, aldehide) sau a prafului deorece
se poate altera activitatea enzimatică a conjugatului. •
Utilizaţi sticlărie bine spălată şi clătită cu apă distilată sau,
de preferinţă, folosiţi vase de unică
întrebuinţare. • Nu lăsaţi microplaca să se usuce între
sfârşitul etapei de spălare şi distribuţia reactivului
următor. • Reacţia enzimatică este foarte sensibilă la orice
metale sau ionii acestora. În consecinţă, nici
un element metalic nu trebuie să vină în contact cu soluţiile ce
conţin conjugatul sau substratul.
• Soluţia de developare (tamponul substrat + cromogen) trebuie
să fie de culoare roz. Modificarea acestei culori la câteva minute
după reconstituire indică faptul că reactivul nu poate fi utilizat
şi trebuie înlocuit. Soluţia de developare trebuie preparată în
recipiente de plastic de unică folosinţă, sau în recipiente din
sticlă prespălate cu soluţie de HCl 1N, clătite bine cu apă
distilată şi apoi uscate. Acest reactiv se pastrează la
întuneric.
• Utilizaţi un con nou de pipetă pentru fiecare ser. • Spălarea
corectă este o etapă critică în realizarea acestui test: respectaţi
numărul
recomandat de cicluri de spălare şi verificaţi dacă godeurile
sunt bine umplute şi apoi golite complet. Spălarea incorectă poate
antrena rezultate eronate.
• Nu utilizaţi niciodată acelaşi container pentru distributia
conjugatului şi a soluţiei de developare.
7. RECOLTAREA PROBELOR
Sângele trebuie recoltat în conformitate cu practicile curente
pentru venopuncţie. Testările se efectuează pe ser sau plasmă
nediluate (recoltate pe anticoagulanţi pe bază cum sunt EDTA,
citrat, ACD). Probele ce conţin agregate trebuie clarificate prin
centrifugare înainte de testare. Particulele sau agregatele de
fibrină în suspensie pot conduce la rezultate fals pozitive.
Probele vor fi stocate la +2/+80 C dacă urmează să fie testate în
decurs de 7 zile, sau vor fi congelate la -200C. Evitaţi
congelările/dezgheţările repetate. Dacă probele trebuie
transportate,
-
7
va trebui să le ambalaţi în conformitate cu reglementările în
vigoare privind transportul agenţilor etiologici, preferabil în
stare congelată. NU UTILIZAŢI SERURI CONTAMINATE BACTERIOLOGIC,
HIPERLIPEMICE SAU INTENS HEMOLIZATE. REMARCĂ: Nu afectează
rezultatele probele ce conţin până la 90 g/l de albumină, 50 µg/ml
de biotină şi 100 mg/l de bilirubină, nici probele lipemice cu până
la 36 g/l de trigliceride şi nici ce hemolizate ce un depăşesc 87
g/l de hemoglobină. S-au testat probe negative şi probe pozitive
pentru anti-HCV sau AgHCV, înainte şi după tratare termică la 56˚C
timp de 30 minute, ca şi după 3 cicluri de congelare/decongelare.
Nici unul din aceste tratamente nu a afectat detecţia anti-HCV.
Totuşi, tratarea termică reduce semnificativ valorile absorbţiilor
înregistrate la detecţia antigenului HCV cu trusa MONOLISA HCV
Ag-Ab ULTRA.
8. PREPARAREA REACTIVILOR - VALABILITATE - STABILITATE Înainte
de utilizarea trusei MONOLISA HCV Ag-Ab ULTRA lăsaţi reactivii să
ajungă la temperatura camerei timp de 30 de minute. 1) Reactivi
gata de utilizare Microplaca (R1) Fiecare cadru suport cu 12 barete
este ambalat într-o pungă cu nervură. Tăiaţi punga cu foarfeca sau
bisturiul la 0,5-1 cm deasupra nervurii. Deschideţi punga şi
scoateţi cadrul. Reţineţi numărul necesar de barete şi apoi
reintroduceţi în pungă baretele pe care nu le veţi utiliza.
Resigilaţi cu grijă ambalajul apăsând la nervură şi păstraţi la
+2/+80 C.
Conjugat 1 gata de utilizare (R6) Omogenizaţi prin răsturnare
înainte de utilizare. Conjugat 2 gata de utilizare (R7) Omogenizaţi
prin răsturnare înainte de utilizare.
2) Reactivi de reconstituit Soluţia de spălare R2 (20x) Diluaţi
soluţia de spălare R2 cu apă distilată în proporţie de 1 :20.
Astfel se obţine soluţia de spălare gata de lucru. Preparaţi 800 ml
pentru o placă cu 12 barete. Soluţia de revelare enzimatică (R8+R9)
Diluaţi 1 : 11 reactivul R9 în reactivul R8 (de exemplu: 1 ml de
reactiv R9 în 10 ml de reactiv R8). Pentru 12 barete sunt necesari
şi suficienţi 10 ml. Omogenizaţi. Antigen pozitiv de control
(R5a+R5b): Soluţie de lucru. Turnaţi întregul conţinut al
diluantului R5b în flaconul R5a. Puneţi la loc dopul flaconului şi
lăsaţi-l timp de 10 minute să se dizolve la temperatura
laboratorului, agitând din timp în timp prin răsturnarea
flaconului. 3) Valabilitate Trusa trebuie păstrată la +2/+80 C.
Fiecare componentă a trusei păstrată la +2/+80 C poate fi folosită
până la data de expirare indicată pe ambalajul trusei (cu excepţia
cazurilor pentru care sunt menţiuni speciale). R1 : După
desigilare, baretele conservate la +2 /+80 C în punga originală
bine închisă se pot folosi timp de 1 lună. R2 : Soluţia de spălare
diluată se poate păstra la +2-300 C tim de 2 săptămâni. Soluţia de
spălare concentrată (R2) se poate păstra la +2-300. R5a+R5b
:Soluţia de lucru de antigen pozitiv de control se poate păstra 1
lună la +2 /+80 C şi 2 luni la -200 C (cu până la 5 cicluri de
congelare/decongelare, după congelare la -200 C). R8 + R9 : După
reconstituire, soluţia de developare enzimatică păstrată la
întuneric este utilizabilă în interval de 6 ore la temperature
ambientală (18-300 C).
sophieR1 1 RO
sophieImage importée
sophieR1 2 RO
sophieImage importée
-
8
9. PROCEDEUL DE TESTARE • Urmaţi în mod strict protocolul
propus.
• Utilizaţi serurile de control negativ şi pozitiv la fiecare
serie de determinări, pentru a valida calitatea testării
• Aplicaţi Bunele Practici de Laborator Metodă: 1) Stabiliţi cu
grijă un plan de distribuire şi identificare a probelor de testat.
2) Preparaţi soluţia de spălare diluată R2 ca şi soluţia de lucru
de antigen pozitiv de control
(R5a+R5b). 3) Scoateţi din ambalajul protector cadrul suport şi
numărul necesar de barete (R1). 4) Distribuiţi direct în godeuri în
următoarea ordine, fără prespălarea prealabilă a plăcii:
4.1) 100 µl de conjugat 1 (R6) în fiecare godeu.
4.2) 50 µl de control negativ (R3) în A1,
50 µl de control pozitiv de anticorpi (R4) în B1, C1, D1,
50 µl de soluţie de lucru de antigen pozitiv de control
(R5a+R5b) în E1, 50 µl din prima probă de testat în F1,
50 µl din a doua probă de testat în G1, etc… Omogenizaţi
amestecul prin minim 3 aspiraţii cu pipeta, sau 5 secunde cu un
agitator de microplăci). Dacă pipetarea probelor durează mai mult
de 10 minute, este recomandabil să distribuiţi martorii negativi şi
pozitivi după pipetarea probelor de testat. În funcţie de sistemul
folosit, este posibilă modificarea poziţiei sau a ordinii de
pipetare a controalelor. Notă: După distribuţia probelor, godeurile
ce conţin probe (sau controale) + conjugat 1 îşi schimbă culoarea
de la violet la albastru. Este posibil să se verifice prezenţa
probelor de testat în godeuri prin citire spectrofotometrică la 620
nm (consultaţi capitolul 12: VERIFICAREA SPECTROFOTOMETRICĂ A
PIPETĂRII PROBELOR ŞI A CONJUGATULUI).
5) Acoperiţi microplaca cu folie adezivă şi presaţi bine pe
toată suprafaţa plăcii pentru a asigura etanşeitatea adecvată a
godeurilor.
6) Incubaţi microplaca în baie de apă termostatată sau incubator
uscat timp de 90 ± 5 minute la 370 C ± 10 C.
7) Îndepărtaţi folia adezivă. Aspiraţi conţinutul fiecărui godeu
în containerul pentru deşeuri contaminate (ce conţine hipoclorit de
sodiu) şi adăugaţi cel puţin 0,370 ml de soluţie de spălare în
fiecare godeu. Aspiraţi din nou. Repetaţi spălarea de încă 4 ori
(un total de 5 cicluri de spălare) şi uscaţi microplaca la nevoie
prin răsturnare şi tapotare pe hârtie absorbantă. Volumul rezidual
în godeuri trebuie să fie mai mic de 10 µl.
8) Dacă aveţi la dispoziţie un spălător automat, respectaţi
aceiaşi parametri de spălare.
9) Distribuiţi rapid 100 µl de soluţie de Conjugat 2 (R7) în
toate godeurile. Conjugatul trebuie agitat uşor înainte de
utilizare. Acoperiţi din nou placa cu folie adezivă şi incubaţi 30
±5 minute la 370 C ± 10 C. Notă: Conjugatul este de culoare verde.
Este posibil să se verifice prezenţa conjugatului în godeuri prin
citire spectrofotometrică la 620 nm (consultaţi capitolul 12:
VERIFICAREA SPECTROFOTOMETRICĂ A PIPETĂRII PROBELOR ŞI A
CONJUGATULUI).
10) Îndepărtaţi folia adezivă, goliţi godeurile prin aspirare şi
spălaţi de 5 ori urmând protocolul descris anterior.
11) Preparaţi soluţia de developare enzimatică (ca în capitolul
8, reactivul R8 + R9).
11) Adăugaţi rapid în fiecare godeu câte 80 µµµµl de soluţie de
developare a activităţii enzimatice (R8 +R9), proaspăt preparată.
Incubaţi la întuneric şi la temperatura camerei (18-300 C) timp de
30 ± 5 minute. Nu utilizaţi folie adezivă în timpul acestei
incubări.
-
9
Notă: Soluţia de developare este de culoare roz. Este posibil să
se verifice prezenţa solutiei de developare în godeuri în această
etapă : se observă o diferenţă semnificativă de culoare între un
godeu cu soluţie roz de developare şi un godeu gol (consultaţi
capitolul 12 : VERIFICAREA SPECTROFOTOMETRICĂ A PIPETĂRII PROBELOR
ŞI A REACTIVILOR).
12) Distribuiţi câte 100 µl de soluţie de stopare (R10) în
godeuri, în aceeaşi ordine şi cu aceeaşi viteză ca şi pentru
soluţia de developare. Notă: Puteţi verifica în această etapă
pipetarea în godeuri a soluţiei de stopare incoloră. După adăugarea
acesteia, culoarea substratului, anterior roz, dispare (în
godeurile cu probe negative), sau virează de la albastru la galben
(în godeurile cu probe pozitive).
13) Ştergeţi cu grijă fundul microplăcii, fără a lăsa scame.
Citiţi densitatea optică la cititorul de microplăci la 450/620-700
nm după cel puţin 4 minute de la pipetarea soluţiei de stopare, dar
fără a depăşi intervalul de 30 minute de la stoparea reacţiei.
14) Verificaţi rezultatele înainte de transcriere, pentru a vă
asigura că există o corespondenţă perfectă între citiri şi planul
de distribuire şi identificare al placilor şi al probelor.
10. ADAPTĂRI LA SISTEMELE AUTOMATE
SPĂLAREA : Pentru a obţine performanţele maxime la testare,
respectaţi cu stricteţe protocolul de spălare descris anterior.
Pentru unele instrumente s-ar putea să fie necesar să măriţi
numărul de cicluri de spălare pentru a obţine un fond negativ
acceptabil.
11. CALCULUL ŞI INTERPRETAREA REZULTATELOR
Prezenţa sau absenţa anticorpilor anti-HCV sau/şi a antigenului
capsidar HCV se determină prin compararea absorbţiei măsurate
pentru fiecare probă cu valoarea calculată a pragului (cut-off). 1.
Calculaţi media valorilor absorbţiei măsurate pentru serul de
control pozitiv (DO R4): Exemplu: Control pozitiv (R4)
Martor pozitiv R4 Densitate optică B1 1,636 C1 1,704 D1
1,650
Total 4,990 Densitatea optică totală 4,990
Media DO R4 = ----------------------------------- = -----------
= 1,663 3 3
2. Calculaţi valoarea prag (cut-off, CO)::::
_____ DOR4 CO = ------------ 4
Exemplu: media DO R4 = 1,663
1,663 CO = ----------- = 0,415 4
3. Criteriile de validare sunt următoarele:::: a) Pentru
martorul negativ R3: valorile măsurate ale absorbţiei trebuie să
fie mai mici decât
DOcut-off x 0,6. b) Pentru anticorpul poztiv de control
R4::::
-
10
Valoarea medie a absorbţiei măsurate trebuie să fie mai mare sau
egală cu 0,800 şi mai mică sau egală cu 2,400 Dacă una din valorile
individuale ale martorului pozitiv se abate cu mai mult de 30% de
la valoarea medie calculată, această valoare aberantă se elimină şi
se reface calculul cu cele 2 valori rămase valide.
c) Pentru soluţia de lucru de Antigen pozitiv de control (R5a +
R5b): Valoarea măsurată a absorbţiei trebuie să fie >0,500.
Testul nu este valid dacă controlul negativ R3, soluţia de lucru de
Antigen pozitiv de control (R5a + R5b) şi/sau dacă mai mult de un
anticorp pozitiv de control R4 sunt în afara limitelor precizate
anterior.
4. Interpretarea rezultatelor Probele cu o densitate optică mai
mică decât valoarea prag calculată (CO) sunt considerate negative
în testul MONOLISA HCV Ag-Ab ULTRA. Probele a căror densitate
optică se situează imediat sub valoarea prag calculată (CO–10% <
DOprobă < CO) trebuie interpretate cu prudenţă şi retestate în
duplicate, dacă sistemele şi protocoalele de laborator o permit.
Probele cu o densitate optică mai mare sau egală cu valoarea
cut-off CO sunt considerate iniţial reactive şi înainte de
interpretarea finală se vor retesta în duplicat. După retestare,
proba este considerată pozitivă în testul MONOLISA HVC Ag-Ab ULTRA
dacă unul din cele 2 duplicate este pozitiv, adică mai mare sau
egal cu valoarea cut-off. Proba va fi considerată negativă dacă
ambele valori la retestare sunt mai mici decât valoarea
cut-off.
12. VERIFICAREA SPECTROFOTOMETRICĂ A PIPETĂRII PROBEI ŞI A
REACTIVILOR
(OPŢIONALĂ) VERIFICAREA PRIMEI ETAPE : PREZENŢA CONJUGATULUI 1
(R6) ŞI A PROBELOR Prezenţa conjugatului 1 (R6) + probă în godeuri
se poate verifica prin citire automată la 620 nm. Fiecare godeu în
care s-au pipetat conjugatul 1 şi proba de testat trebuie să aibă
DO > 0,800.
REMARCĂ : După adăugarea probelor, culoarea conjugatului 1
virează de la violet la albastru.
VERIFICAREA CELEI DE-A DOUA ETAPE: PREZENŢA CONJUGATULUI 2 (R7)
Conjugatul 2 (R7) este de culoare verde.
Prezenţa conjugatului 2 (R7) în godeuri se controlează prin
citire automată la 620 nm: valoarea DO măsurată în fiecare godeu
trebuie să fie mai mare de 0,300 (o valoare mai mică decât această
normă indică o pipetare necorespunzătoare a conjugatului).
VERIFICAREA PIPETĂRII SOLUŢIEI DE DEVELOPARE Prezenţa în godeuri
a soluţiei de developare de culoare roz poate fi verificată prin
citire automată la 490 nm : un godeu în care s-a pipetat soluţia de
developare trebuie să aibă DO mai mare ca 0,100 (DO mai joasă este
indicativă pentru proasta pipetare a soluţiei de developare). Se
constată modificarea semnificativă de culoare a godeurilor goale,
de la incolor la roz, după pipetarea soluţiei cromogene de
substrat.
13. PERFORMANŢELE ACESTUI TEST A – STUDII DE SPECIFICITATE
Pentru a stabili specificitatea la testare s-au folosit eşantioane
prelevate de la donatori de sânge şi bolnavi, care s-au testat atât
cu trusa MONOLISA HCV Ag-Ab ULTRA, cât şi cu altă trusă folosită în
mod curent în laboratoarele de rutină din diferite laboratoare.
Specificitatea la testarea donatorilor de sânge Studiile au fost
efectuate în 3 locaţii diferite, testându-se eşantioane de ser de
la donatori fidelizaţi sau noi.
-
11
Locaţii Rungis B.B
Franţa
Bordeaux B.B
Franţa
Donatori din Montpellier
Franţa
Total
Nr. probe testate 2410 2503 2248 7161 Nr. probe repetat reactive
5 3 4 12
Din cei 7161 de probe de donatori, 12 probe au fost repetat
reactive la testarea cu trusa MONOLISA HCV Ag-Ab ULTRA în
conformitate cu recomandările de interpretare din prospectul de
lucru, dar ele nu au fost confirmate HCV pozitive prin PCR-HCV sau
imunoblot Deciscan HCV PLUS. Specificitatea determinată la donatori
de sânge este de 99,83% (99,71% - 99,91%, interval de confidenţă de
95%).
Specificitatea la pacienţi internaţi în spital În 2 locaţii s-au
evaluat 469 de seruri recoltate prospectiv de la pacienţii
internaţi. Un număr de 440 de probe au fost testate negative cu
truse de anti-HCV marcate CE şi cu trusa MONOLISA
HCV Ag-Ab ULTRA. Din total, 22 de seruri au fost găsite pozitive
cu MONOLISA HCV Ag-Ab ULTRA şi cu testele de rutină folosite local,
iar 21/22 au fost confirmate pozitive, în timp ce 1/22 a fost găsit
probabil pozitiv cu Deciscan. Pentru 7 probe rezultatele obţinute
cu MONOLISA HCV Ag-Ab ULTRA erau discordante faţă de imunoblotul
Deciscan HCV PLUS şi testarea PCR. Rezultatele următoare se referă
la cele 7 probe discordante: • 2 probe pozitive cu testul de rutină
(negative în PCR-HCV şi imunoblot Deciscan HCV PLUS)
şi negative cu MONOLISA HCV Ag-Ab ULTRA au fost conchise ca fals
pozitive la testarea cu trusele de rutină.
• Pentru 2 probe nu s-a putut trage nici o concluzie întrucât
rezultatul PCR nu a fost interpretabil. Aceste probe au fost
eliminate din calculele ulterioare.
• Una probă a fost gasită pozitivă cu testul de rutină, negativă
cu MONOLISA HCV Ag-Ab ULTRA, indeterminată cu imunoblot Deciscan
HCV PLUS şi negativă în PCR.
• Numai 2 probe pozitive cu MONOLISA HCV Ag-Ab ULTRA (cu
rapoarte de reactivitate scăzute, situate sub 1,7) şi pozitive şi
cu testele de rutină pentru anti-HCV, erau negative PCR şi
indeterminate în imunoblot Deciscan HCV (cu bandă NS4 slab
pozitivă).
Specificitatea calculată pe baza acestui studiu este de 99,5%
(443/445) dacă ultimele 2 probe sunt interpretate ca fals pozitive,
şi de 100% dacă sunt interpretate ca real-pozitive datorită
prezenţei anticorpilor remanenţi consecutiv infecţiei iniţiale
(profil indeterminat în imunoblot).
Specificitatea pe probe cu potenţial de interferenţă S-au
studiat în plus 429 probe cu potenţial de reactivitate încrucişată
la testarea imunoenzimatică. Aceste probe au fost recoltate astfel:
• De la pacienţi cu boli infecţioase cum ar fi hepatitele B şi A,
rubeola, toxoplasmoza,
parotidita, rujeola, CMV, HSV, EBV, VZV, HTLV I, HIV, Chagas,
flaviviroze, sau vaccinaţi antigripal
• De la pacienţi cu Factor Reumatoid pozitiv • De la pacienţi cu
maladii autoimune (LES), mieloame, pozitivi pentru HAMA & ANA •
De la gravide, pacienţi cu ciroză, pacienţi cu insuficienţă renală
cronică şi dializaţi. Din cele 429 de probe, 1 a fost repetat
reactivă cu trusa MONOLISA HCV Ag-Ab ULTRA şi pozitivă HCV cu una
din trusele de anti-HCV marcate CE. Specificitatea reieşită din
testarea acestor probe dificile a fost de 100% (428/428). B –
STUDII DE SENSIBILITATE Sensibilitatea testului a fost evaluată
prin testarea în serie mare de probe pozitive HCV, provenite din
paneluri comerciale de seroconversie, probe Bio-Rad sau din
locaţiile experţilor. Rezultatele cumulate sunt sistematizate în
continuare.
-
12
Sensibilitatea la testarea probelor confirmate HCV pozitive S-au
testat în total 646 probe HCV pozitive provenite preponderent de la
pacienţi cu infecţii cronice (cu anti-HCV prezenţi), din care 405
erau genotipate HCV. Toate aceste 646 de probe au fost intens
reactive în testul MONOLISA HCV Ag-Ab ULTRA, prin urmare
sensibilitatea obţinută a fost de 100%. Sensibilitatea la testarea
probelor HCV pozitive genotipate Din totalul de 405 probe pozitive
cu genotip cunoscut, 133 au fost genotipate în diferite unităţi,
iar 272 au fost genotipate în laboratoarele clinice. Repartiţia
genotipurilor testate a fost următoarea:
Genotip 1a 1b 1c 1d 1a/b 2 2a 2b 2c 2i 2a/c 3 3a 3b Număr 53 83
2 3 3 31 7 18 4 1 17 25 77 1
Genotip 3a/b 4 4a 4c 4d 4h 4k 4f 4c/d 5a 6a 6d 1b, 2a/2
1a/b, 2a/c
Total
Număr 2 10 21 6 5 2 2 3 1 24 1 1 1 1 405 Toate aceste probe au
fost testate pozitive: sensibilitate de 100%. Probe de la pacienţi
cu infecţie acută Sensibilitatea a fost evaluată pe probe de la
pacienţi aflaţi în fază acută de infecţie cu HCV (faza iniţială a
infecţiei). S-au testat cu MONOLISA HCV Ag-Ab ULTRA 53 de paneluri
de seroconversie corespunzătoare unui total de 421 de probe, şi
s-au comparat rezultatele cu cele obţinute cu trusele de detecţie
anti-HCV marcate CE. Trusa MONOLISA HCV Ag-Ab ULTRA detectează mai
devreme infecţia, practic în toate panelurile: 119 probe detectate
în plus faţă de puterea de detecţie a truselor de anti-HCV marcate
CE cu care s-a realizat comparaţia.
53 paneluri de seroconversie (421 probe)
Trusă anti-HCV MONOLISA HCV Ag-Ab ULTRA
Număr probe pozitive 152 271
Din cele 53 paneluri de seroconversie, 11 pornesc cu o probă
neviremică, permiţând o estimare mai precisă a fazei de fereastră
serologică – fară anticorpi anti-HCV.
Număr de zile până la primul rezultat pozitiv, faţă de prima
recoltare
(în zile)
Panel
Genotip ARN HCV** Trusă anti-HCV Trusa MONOLISA
HCV Ag-Ab ULTRA
Diferenţa între trusa anti-HCV şi
MONOLISA HCV Ag-Ab ULTRA
(în zile)
BCP-6211 1a 140 186 140 46
BCP-6213 1a 11 43 30 13
BCP-6222 1a 17 40 17 23
BCP-6225 1a 45 78 45 33
BCP-6227 1a 42 74 46 28
BCP-9041 1a 24 62 24 38
BBI-PHV919 1a 25 28 28 0
BCP-9054 3a 52 60 52 8
BCP-9055 NG* 31 68 33 35
BCP-6216 NG* 23 23 23 0
NABI-SC90 NG* 10 52 10 42
Media în zile 38,2 64,9 40,7 24,2 * Negenotipat ** Rezultatul la
testarea ARN este cel indicat de furnizorii de paneluri
-
13
În aceste 11 paneluri, trusa MONOLISA HCV Ag-Ab ULTRA detectează
infecţia cu HCV în medie cu 24 de zile mai devreme faţă de trusa
anti-HCV marcată CE. Acest beneficiu se datorează mai ales
detecţiei simultane a antigenului capsidar de HCV realizată de
trusa MONOLISA HCV Ag-Ab ULTRA.
Sensibilitatea la detecţia antigenului Sensibilitatea la
detecţia Ag HCV a fost de asemenea abordată prin studiul unor
paneluri de seroconversie, de exemplu BBI 917. Graficul următor
compară sensibilitatea trusei MONOLISA
HCV Ag-Ab ULTRA cu performanţele unui test EIA de anti-HCV al
competiţiei.
Studiile de reproductibilitate Studiile de reproductibilitate
intra- şi inter-testări au fost efectuate folosind 7 probe : una
nereactivă, 3 reactive anti-HCV şi 3 reactive Ag HCV. Pentru
reproductibilitatea intra-testare, probele au fost lucrate de 30 de
ori în aceeaşi serie de lucru. Reproductibilitatea inter-serii de
lucru a fost evaluată prin testarea de către 2 tehnicieni, timp de
20 de zile (Dupa procedeul NCCLS EP5). Mediile rapoartelor de
reactivitate (R), deviaţiile standard (DS) şi coeficienţii de
variaţie (CV) calculate sunt prezentate în următoarele tabele:
Tabel 1: Reproductibilitatea intra-testare
Probe Medie R DS CV % Negative 0,14 0,01 6,1
Slab pozitive anti-HCV 1,12 0,04 3,65 Pozitive anti-HCV 2,39
0,08 3,39
Intens pozitive anti-HCV 4,88 0,18 3,7 Slab pozitive Ag HCV 1,14
0,03 3,04
Pozitive Ag HCV 1,97 0,06 3,02 Intens pozitive Ag HCV 5,86 0,14
2,38
CV obţinuţi cu cele 6 probe pozitive au valori sub 10%
-
14
Tabel 2: Reproductibilitatea inter-serii de lucru
Probe Medie R DS CV% Negative 0,16 0,02 12,4
Slab pozitive anti-HCV 1,2 0,08 6,65 Pozitive anti-HCV 2,39 0,13
5,38
Intens pozitive anti-HCV 4,77 0,17 3,58 Slab pozitive Ag HCV
1,13 0,09 7,97
Pozitive Ag HCV 2,0 0,15 7,73 Intens pozitive Ag HCV 5,99 0,37
6,2
CV obţinuţi cu cele 6 probe pozitive au valori sub 15%
14. LIMITELE ACESTUI TEST Ţinând cont de diversitatea
răspunsurilor imunologice la pacienţii infectaţi cu virusul
hepatitei C (în special în perioada de seroconversie), pot fi
observate diferenţe de detecţie între teste, funcţie de natura
proteinelor antigenice utilizate. Un rezultat analitic negativ cu
un test de depistare nu exclude posibilitatea unei expuneri sau a
unei infecţii cu virusul hepatitei C. Toate tehnicile ELISA sunt,
într-o măsură oarecare, generatoare de reacţii fals pozitive. Se
recomandă verificarea specificităţii de reacţie pentru oricare
probă găsită repetat reactivă conform criteriilor de interpretare
ale testului MONOLISA HCV Ag-Ab ULTRA, folosind o metodă adecvată:
un test de detecţie anti-HCV de tip ELISA, sau un test de detecţie
anti-HCV de tip imunoblot, pentru a dovedi prezenţa anticorpilor
anti-HCV depistaţi la screening. La nevoie se poate folosi şi un
test de detecţie a genomului viral HCV, sau un test de detecţie
specifică a antigenului HCV urmat de un test de neutralizare.
Metoda colorimetrică de verificare a pipetării probelor, a
conjugatului şi a soluţiei de developare, NU permite şi verificarea
preciziei volumelor pipetate. Această metodă confirmă numai
prezenţa probei în godeuri, a conjugatului şi a soluţiei de
developare. Procentul rezultatelor eronate utilizând această metodă
este strâns legat de precizia sistemului utilizat (un coeficient de
variaţie cumulat la pipetare şi citiri, de peste 10%, determină
scăderea semnificativă a calităţii acestei verificări).
15. BIBLIOGRAFIE
A se vedea şi versiunea în limba franceză. ���� Busch MP,
Kleinman SH. Committee report : nucleic acid amplification testing
of blood
donors for transfusion-transmitted infectious diseases. Report
of the Interorganizational Task Force on Nucleic Acid Amplification
Testing on Blood Donors. Transfusion. 2000, 40 : 143-159.
���� Busch MP, Kleinman, SH, Nemo GJ. Current and emerging
infectious risks of blood transfusions. JAMA. 2003, 289 :
959-962.
���� Bouvier-Alias M, Patel K, Dahari H, Beaucourt S, Larderie
P, Blatt L, Hezode C, Picchio G et al. Clinical utility of total
core HCV core antigen quantification : a new indirect marker of HCV
replication. Hepatology. 2002, vol 36 : 211-218.
���� Jackson BR, Busch MP, Stramer SL, AuBuchon JP. The
cost-effectiveness of NAT fot HIV, HCV and HBV in whole–blood
donations. Transfusion. 2003, 43 : 721-729.
���� • Lambert N, Vermet L, Bordier M, Clément A, Costaille M,
Prigent V, Flecheux O, Sanjuan A et al. Performance features of the
new Bio-Rad HCV antigen and antibody assay : Monolisa® HCV Ag-Ab
ULTRA. Vox sanguinis. 2004, 87 (suppl 3) : 61-62.
���� Laperche S, Le Marrve to molecular biology in the diagnosis
of early HCV Infection. Transfusion. 2003, 43 : 958-962.
���� Nübling CM, Unger G, Chudy M, Raia S, Löwer J. Sensitivity
of HCV core antigen and HCV RNA detection in the early infection
phase. Transfusion. 2002. 42 : 1037-1045.Masalova OV, Atanadze SN,
Samokhvalov EI, Petrakova NV, Kalinina TI, Smirnov VD, Khudyakov
YE,
-
15 - BIBLIOGRAFIE• Busch MP, Kleinman SH. Committee report :
nucleic acid amplification testing of blood donors for
transfusion-transmitted infectious diseases. Report of the
Interorganizational Task Force on NucleicAcid Amplification Testing
on Blood Donors. Transfusion. 2000, 40 : 143-159.
• Busch MP, Kleinman, SH, Nemo GJ. Current and emerging
infectious risks of blood transfusions.JAMA. 2003, 289 :
959-962.
• Bouvier-Alias M, Patel K, Dahari H, Beaucourt S, Larderie P,
Blatt L, Hezode C, Picchio G et al.Clinical utility of total core
HCV core antigen quantification : a new indirect marker of HCV
replication.Hepatology. 2002, vol 36 : 211-218.
• Jackson BR, Busch MP, Stramer SL, AuBuchon JP. The
cost-effectiveness of NAT fot HIV, HCV andHBV in whole–blood
donations. Transfusion. 2003, 43 : 721-729.
• Lambert N, Vermet L, Bordier M, Clément A, Costaille M,
Prigent V, Flecheux O, Sanjuan A et al.Performance features of the
new Bio-Rad HCV antigen and antibody assay : Monolisa® HCV
Ag-AbULTRA. Vox sanguinis. 2004, 87 (suppl 3) : 61-62.
• Laperche S, Le Marrec N, Simon N, Bouchardeau F, Defer C,
Maniez-Montreuil M, Levayer T,Zappitelli JP, Lefrère JJ. A new HCV
core antigen assay based on disassociation of immunecomplexes : an
alternative to molecular biology in the diagnosis of early HCV
Infection. Transfusion.2003, 43 : 958-962.
• Nübling CM, Unger G, Chudy M, Raia S, Löwer J. Sensitivity of
HCV core antigen and HCV RNAdetection in the early infection phase.
Transfusion. 2002. 42 : 1037-1045.∑ Masalova OV, AtanadzeSN,
Samokhvalov EI, Petrakova NV, Kalinina TI, Smirnov VD, Khudyakov
YE, Fields HA, Kushch AA.Detection of hepatitis C virus core
protein circulating within different virus particle
populations.Journal of Medical Virology. 1998, 55 : 1-6.
• Pawlotsky JM. Use and interpretation of virological tests for
hepatitis C. Hepatology. 2002, 36 : 565-573.
• Pillonel J, Laperche S, Saura C, Desenclos JC, Couroucé AM et
al.. Trends in residual risk oftransfusion-transmitted viral
infections in France between 1992 and 2000. Transfusion. 2002, 42
:980-988.
• Simmonds P. HCV heterogeneity : the science and the practice.
In Hepatitis C. 1998. YanamouchiEurope BV Ed. p 3-10.
• Strader DB, Wright T, Thomas DL, Seeff LB. Diagnosis,
management and treatment of Hepatitis C.AASLD Practice Guideline.
Hepatology. 2004, 39 : 1147-1171.
• Centers for Disease Control. Guidelines for Laboratory testing
and result reporting of antibody tohepatitis C virus. MMWR 2003, 52
: RR-3.
• EASL International Consensus Conference on Hepatitis C.
Consensus Statement. Journal ofHepatology. 1999, 30 : 956-961.
• NIH Consensus Statement on Management of hepatitis C : 2002.
NIH Consensus and State-of-the-Science Statements. 2002, 19 N°3.
46p.
-
(GB) - CE marking (European directive 98/79/CE on in vitro
diagnostic medical devices)(FR) - Marquage CE (Directive européenne
98/79/CE relative aux dispositifs médicaux de diagnostic in
vitro)(ES) - Marcado CE (Directiva europea 98/79/CE sobre productos
sanitarios para diagnóstico in vitro)(IT) - Marchiatura CE
(Direttiva europea 98/79/CE relativa ai dispositivi
medico-diagnostici in vitro)(DE) - CE Konformitätskennzeichnung
(Europäische Richtlinie 98/79/EG über In-vitro-Diagnostika)(PT) -
Marcação CE (Directiva europeia 98/79/CE relativa aos dispositivos
médicos de diagnóstico in vitro)(SE) - CE-märkning (Europeiskt
direktiv 98/79/EG om medicintekniska produkter för in
vitro-diagnostik)(DK) - CE-mærkningen (Europa direktiv 98/79/EF om
medicinsk udstyr til in vitro-diagnostik)(GR) - ����������� CE
(�������� ������ 98/79/CE ��� in vitro ���������� ������� ����)(PL)
- CE oznaczenie (Dyrektywa unijna 98/79/CE dotycząca produktów
medycznych do badań in vitro)(LT) - CE ženklas (Europos sąjungos
direktyva 98/79/CE dėl in vitro diagnostikos medicinos
prietaisų)(HU) - CE jelzés (98/79/CE Európai Irányelv az in vitro
orvosi diagnosztikai eszközökről)(EE) - CE märgistus (Euroopa
direktiiv 98/79/CE in vitro diagnostikameditsiiniseadmete
kohta)(SK) - CE označenie o zhode (Európska direktíva 98/79/CE pre
in vitro diagnostické zdravotnícke postupy)(CZ) - CE značka
(Evropská direktiva 98/79/CE o diagnostických zdravotnických
prostředcích in vitro)(NO) - CE-merking (EU-direktiv 98/79/CE om
medisinsk utstyr til in vitro-diagnostikk)(RO) - Marca CE
(Directiva europeana 98/79/CE pentru dispozitive medicale de
diagnostic in vitro)(BG) - СЕ маркировка (Европейска директива
98/79/CE за ин витро диагностичните медицински изделия)
IVD
(GB) - For in vitro diagnostic use(FR) - Pour diagnostic in
vitro(ES) - Para diagnóstico in vitro(IT) - Per uso diagnostico in
vitro(DE) - In-vitro-Diagnostikum(PT) - Para uso em diagnóstico in
vitro(SE) - In vitro-diagnostik(DK) - In vitro diagnose(GR) - ���
in vitro ���������� ����(PL) - Do stosowania in vitro(LT) - in
vitro diagnostikai(HU) - Csak in vitro diagnosztikai
alkalmazásra(EE) - In vitro diagnostiliseks kasutamiseks(SK) - Na
diagnostiku in vitro(CZ) - Pro diagnostiku in vitro(NO) - Til in
vitro-diagnostikk(RO) - Pentru diagnostic in vitro(BG) - За ин
витро диагностика
(GB) - Catalogue number(FR) - Référence catalogue(ES) - Número
de catálogo(IT) - Numero di catalogo(DE) - Bestellnummer(PT) -
Número de catálogo(SE) - Katalognummer(DK) - Katalognummer(GR) -
������ ���������(PL) - Numer katalogu(LT) - Katalogo numeris(HU) -
Cikkszám(EE) - Katalooginumber(SK) - Katalógové číslo(CZ) -
Katalogové číslo(NO) - Katalognummer(RO) - Număr de catalog(BG) -
Каталожен номер
(GB) - Manufacturer(FR) - Fabricant(ES) - Fabricante(IT) -
Produttore(DE) - Hersteller(PT) - Fabricante(SE) - Tillverkad
av(DK) - Fremstillet af(GR) - ����������(PL) - Producent(LT) -
Gamintojas(HU) - Gyártó(EE) - Tootja(SK) - Výrobca(CZ) -
Výrobce(NO) - Produsent(RO) - Producător(BG) - Производител
(GB) - Authorised Representative(FR) - Représentant agréé(ES) -
Representante autorizado(IT) - Distributore autorizzato(DE) -
Bevollmächtigter(PT) - Representante Autorizado(SE) - Auktoriserad
representant(DK) - Autoriseret repræsentant(GR) - ����������
��� �����������(PL) - Upoważniony Przedstawiciel(LT) -
Įgaliotasis atstovas(HU) - Meghatalmazott Képviselő(EE) - Volitatud
esindaja(SK) - Autorizovaný zástupca(CZ) - Zplnomocněný
zástupce(NO) - Autorisert representant(RO) - Reprezentant
autorizat(BG) - Упълномощен представител
(GB) - Batch code(FR) - Code du lot(ES) - Código de lote(IT) -
Codice del lotto(DE) - Chargen-Bezeichnung(PT) - Código do lote(SE)
- Batchnr(DK) - Batchkoden(GR) - ������� ��������(PL) - Numer
serii(LT) - Serijos numeris(HU) - Gyártási szám(EE) - Partii
kood(SK) - Číslo šarže(CZ) - Číslo šarže(NO) - Partikode(RO) -
Număr de lot(BG) - Партиден номер
(GB) - Expiry date YYYY/MM/DD(FR) - Date de peremption
AAAA/MM/JJ(ES) - Estable hasta AAAA/MM/DD(IT) - Da utilizzare prima
del AAAA/MM/GG(DE) - Verwendbar bis JJJJ/MM/TT(PT) - Data de
expiração AAAA/MM/DD(SE) - Utgångsdatum ÅÅÅÅ/MM/DD(DK) - Anvendes
før ÅÅÅÅ/MM/DD(GR) - �
������ ����� YYYY/MM/DD(PL) - Data ważności YYYY/MM/DD(LT) -
Galioja iki YYYY/MM/DD(HU) - Szavatossági idő ÉÉÉÉ/HH/NN(EE) -
Aegumistähtaeg AAAA/KK/PP(SK) - Použiteľné do RRRR/MM/DD(CZ) -
Datum exspirace RRRR/MM/DD(NO) - Utløpsdato ÅÅÅÅ/MM/DD(RO) - Data
expirarii AAAA/LL/ZZ(BG) - Срок на годност година/месец/ден
-
(GB) - Storage temperature limitation(FR) - Limites de
températures de stockage(ES) - Temperatura límite(IT) - Limiti di
temperatura di conservazione(DE) - Lagertemperatur(PT) - Limites de
temperatura de armazenamento(SE) - Temperaturbegränsning(DK) -
Temperaturbegrænsning(GR) - �������� ��������� ���������(PL) -
Temperatura przechowywania(LT) - Saugojimo temperatūriniai
apribojimai(HU) - Tárolási hőmérsékleti határok(EE) - Piirangud
säilitustemperatuurile(SK) - Skladovacia teplota od do(CZ) -
Teplotní rozmezí od do(NO) - Oppbevaringstemperatur(RO) - Limitele
de temperatură la stocare(BG) - Температурни граници на
съхранение
(GB) - Consult Instruction for use(FR) - Consulter le mode
d'emploi(ES) - Consulte las instrucciones de uso(IT) - Consultare
le istruzioni per uso(DE) - Siehe Gebrauchsanweisung(PT) - Consulte
o folheto informativo(SE) - Se bruksanvisningen(DK) - Se
instruktion før brug(GR) - ���������� ��� ������ �����(PL) -
Sprawdź instrukcję(LT) - Ieškokite informacijos vartojimo
instrukcijoje(HU) - Olvassa el a használati utasítást(EE) -
Kasutamisel vaata instruktsiooni(SK) - Katalógové číslo(CZ) - Viz
návod k použití(NO) - Se bruksanvisninger(RO) - Consultati
prospectul de utilizare(BG) - Виж инструкцията за употреба
-
Bio-Rad3, bd Raymond Poincaré92430 Marnes-la-Coquette -
FranceTél.: +33 1 47 95 60 00 01/2009Fax.: +33 1 47 41 91 33 Code:
883569
