CURS 03 - Popula_iile limfocitare ºi markerii lor de suprafa_a

7/30/2019 CURS 03 - Popula_iile limfocitare i markerii lor de suprafa_a

1/12

CURS 3 Populaiile limfocitare i markerii lor de suprafa

Populaiile limfocitare i markerii lor de suprafa

- din totalul celulelor seriei albe, limfocitele reprezint cam 25-40%, ceea ce corespunde uneivalori absolute de 1500-4000 de limfocite pe mm3

- din punct de vedere morfologic, se mpart n:1. Limfocite mici

- aproximativ 80-85% din totalul limfocitelor periferice- diametru 6-9 m- raport nucleu/citoplasma supraunitar- subvarieti:

a. limfocite Tb. limfocite B

2. Limfocite mari- 10-15% din totalul limfocitelor periferice- diametru 10-16m

- prezint citoplasm foarte abundent ce nconjoar de jur mprejur nucleul- n citoplasm sunt prezente din abunden granulaii azurofile uor de evideniat n microscopiaoptic

- se numesc LGL (Large Granular Limphocytes)- ea include celulele NK implicate n imunitatea natural i RIC

1. Limfocitele mici- difereneierea LT/LB NU poate fi fcut niciodat pe baza unor criterii morfologice- diferene din punct de vedere electronomicroscopic- diferenierea se face rapid i eficient pe baza unui test funcional: testul Rozetrii (foarte vechi,

const n punerea n contact a limfocitelor raportate anterior prin tehnici de gradient cu eritrocitede oaie; singurele care angajeaz legturi cu acestea i formeaz conglomerate celulare sunt LT)

- LBNU sunt celule rozetante- LT prezint pe suprafaa lor un receptor tipic de adeziune intercelular (CD2). ElNU exist pe

suprafaa LB- LTNU reprezint o populaie celular omogen, ci este foarte heterogen din punct de vedere

funcional- avem 4 subvarieti de LT:

Laura & Daniel 1


2/12


a. THb. TCc. TSd. TCS (contrasupresoare)

- diferenierea dintre eleNU poate fi fcut pe baza criteriilor morfologice i nici pe baza testului

rozetrii pentru c toate rozeteaz la fel- diferenierea dintre ele se face prin evidenierea markerilor de suprafa- pe TH se afl un marker diferit de TC, TS, TCS- se bazeaz pe utilizarea Ac monoclonali (artificiali, cu nalt specificitate, marcai fluorescent i

recunosc tipicNUMAI 1 marker)- conteaz de fapt markerii de suprafa, NU forma limfocitelor

Limfocitele TI. Caractere generale

- reprezint populaia limfocitar majoritar prezent n sngele periferic (68-80% din totalullimfocitelor periferice)

- sunt celule cu durat de via lung sau foarte lung (ani, yeci de ani, ct o via de om)

- celule intens recirculante (ele patruleaz continuu n ntreg organismul n cutarea Ag pentrucare sunt programate genetic)

II. Receptorii de suprafa ai LT- expun pe suprafaa lor 3 categorii de receptori:

1. Receptori de recunoatere Ag

a. Complexul TCR-CD3 - rol n recunoaterea Ag (epitopilor)b. Coreceptori: CD4 sau CD8 (recunoaterea moleculelor prezentatoare aleepitopilor CD4 MHC IICD8 MHC I

Din a. i b. => recunosc simultan att Ag prezentat ct i moleculele prezentatoare ale acestora =recunoaterea Ag asociativ (reprezint i principala cale de activare metabolic a LT)

2. Receptori cu rol accesor n activarea LT:o CD28o CD45

3. Receptori de adeziune intercelular- permite stabilirea de contacte LT alte tipuri de celule

o CD2o LFA1 (CD11A/CD18)

- CD = titulatura de catalog a receptorilor prezeni la suprafaa limfocitelor. CD urmat de unnumr = un singur receptor prezent la suprafaa LT. s-a recurs la aceast titulatur, pentru a senlocui titulaturile mai vechi, descriptive. Unele se mai pstreaz (LFA1 antigen asociatfunciei leucocitare; VLA antigen cu apariie foarte trzie, el apare dupa ce LT au fost activate,deci apar foarte trziu; ICAM molecule de adeziune intercelulara)

- CD = cluster of designation= class du differention= clas de difereniere

1. Receptori de recunoatere Ag

Laura & Daniel 2


3/12


Caracteristicile recunoaterii Ag realizat de LTi. LT recunosc AgNUMAI dup structura lor primar (secvena de aa). Recunosc n

mod tipic doar Ag hidrofiliii. LT recunoscNUMAI Ag prezentat pe suprafaa APC n complex cu molec MHC

(LT, spre deosebire de LBNU recunosc niciodat Ag solubile)

iii. Recunoaterea realizat de LT e prin definiie o recunoatere asociativ

a. Complexul TCR-CD3- pe suprafaa LT aflate n repaus exist n jur de 60000 de asemenea complexe

TCR (receptorul celulei T pentru Ag)- heterodimer constituit din 2 lanuri transmembranare ( i ) orientate cu capetele N-

terminale afar i cele C-terminale n interiorul LT- lanurile sunt elaborate dup codul unor gene diferite: Cz 14, Cz 7- n segmentul extracelular i se asociaz ntre ele prin puni disulfurice

- membrana LT strbtut de lanuri separ 3 segmente n cele 2 lanuri

a. segmentul extracelular

Laura & Daniel 3


4/12


- lanurile NU sunt liniare, ci adopt o configuraie imunoglobin-like (sunt organizate nbucle sau domenii situate simetric)

- pe cele 2 lanuri exist cte 2 domenii, fiind de principiu formate din 100-110 aa- domeniile N-terminale sunt constituite din secvene de aa variabile/hipervariabile. Ele se

noteaz cu V i V

- V i V se asociaz ntre ele i constituie o cavitate de dimensiuni mici = situscombinativ pentru Ag (SCAg)- celelalte 2 domenii sunt constituite din secvene de aa constante ca structur pe

majoritatea limfocitelor. Se noteaz cu C i C- dintre cele 2 perechi de domenii, cele mai importante din punct de vedere funcional sunt

cele variabile. Ele formeaz SCAg i pentru aceasta ele sunt responsabile derecunoaterea Ag

- dei V i V sunt implicate n recunoaterea Ag, ele NU angajeaz niciodat contacte cuAg prin ntreaga lor secven de aa, ci realizeaz contacte cu Ag care sunt punctiforme,realizate prin intermediul unor mici secvene de aa (8-15) rezultate n urma plicaturriiV i V. Aceste segmente sunt situate n vrful plicaturilor i protruzioneaz adnc n

cavitate, realiznd legturi cu Ag prin potrivire de form sau complementaritate => ele senumesc CDR (regiuni determinante ale complementaritii) domeniile variabile V, V

- circular prin plicaturare- plicaturile exist prin intermediul celor 3 puni disulfurice intradomeniu- secvenele din vrful plicaturilor sunt doar ele responsabile de contactul cu Ag (8-15 aa).

Ele se numesc CDR- pe fiecare domeniu exist 3 CDR. Ele constituie paratopul- restul secvenelor = zona scheletal (FR framework regions)- recunoaterea Ag se face prin stabilirea de contacte difereniate ntre CDR i complexul

MHC epitop

- LT recunosc doar Ag care sunt prezentate pe suprafaa APC- APC expun prin moleculele MHC un epitop- CDR1 CDR2 angajeaz legturiNUMAI cu moleculele MHC, recunoscnd din acestea

doardomeniile polimorfe (MHC I 1,2, MHC II 1, 1)- CDR3 sunt singurele care asigur legturi cu epitopul prezentat e recunoscut att epitopul, ct i prezentatorul acestuia, deci se realizeaz o recunoatere

Ag asociativ intrareceptorial (1 receptor 2 molecule recunoscute) domeniile constante C, C

- poriunea din segmentul extracelular al TCR ntre domeniile intern i membranar = zonabalama

- n aceast poriune (ZB) lanurile i se asociaz ntre ele prin puni disulfurice =>

heterodimerul- ea e poriunea din TCR dotat cu maximum de flexibilitate. n jurul ZB TCR execut nmod continuu micri de baleiere, care favorizeaz recunoaterea Ag (contactul cucomplexul MHC epitop prezentat pe suprafaa APC)

b. segmentul transmembranar- constituit din 22-25 aa

Laura & Daniel 4


5/12


c. segmentul intracitoplasmatic- este extrem de scurt 5-12 aa

Funciile TCR- realizeaz recunoaterea Ag

- genereaz semnale activatoare care apar secundar recunoaterii Ag- NU poate realiza transmisia sau transducia semnalelor ctre sistemele enzimatice dinprofunzime. Ea se realizez prin a doua component a complexului TCR-CD3, adic prinCD3

CD3- complex pentameric, format din 5 lanuri:- 3 lanuri scurte i groase care prezint segmente intracitoplasmatice destul de reduse

(notate , , ). Au GM de aproximativ 21-25kda i sunt elaborate dup gene prezente pecromozomul 11

- la cele 3 lanuri scurte i groase se asociaz 2 lanuri foarte lungi i efilate care cel maifrecvent sunt identice ntre ele (notate , au GM de 16kda, fiind elaborate dup codulunor gene aflate pe cromozomul 1)

- cele 5 lanuri se asociaz ntre ele prin puni disulfurice i se asociaza la TCR complexul heptameric TCR-CD3- CD3 trimite semnalele activatoare ctre lanurile , ele avnd acces la sistemele

enzimatice de profunzime

Laura & Daniel 5


6/12


- CD3 fixeaz localizarea membranar a unor enzime foarte importante pentru activareametabolic a LT. Ea se face la nivelul unor secvene mici de aa prezente n poriuneaintracitoplasmatic a tuturor lanurilor CD3 se numesc ITAM (motive activatorimunoregulatoii tirozinice)

b. Coreceptori

CD4

- coreceptor de recunoatere Ag- GM 60kda- elaborat dup codul unor gene prezente pe Cz 12- distribuia: CD4 e distribuit tipic pe suprafaa TH- el e considerat markerdefinitoriu pentru TH- TH = LT CD4+

- e o glicoprotein transmembranar orientat cu captul N-terminal afar, C-terminalnuntru

- exist 3 segmente:a. segmentul extracelular

organizat n bucle sau domenii

Laura & Daniel 6


7/12


4 bucle diferite ntre ele (D1 D2 D3 D4) E implicat n recunoaterea moleculelor prezentatoare de Ag Contactele se stabilesc cnd LT coopereaz n vederea recunoaterii Ag cu APC,

care expun MHC cu epitop Receptorul recunoateNUMAI moleculele MHC II, contactndu-l prin D1,

NUMAI domeniul monomorf al moleculei MHC II 2b. segmentul transmembranarc. segmentul intracitoplasmatic

este foarte lung prin el contribuie esenial la activarea TH CD4 se afl n contact fizic cu o enzim (proteintirozinkinaz PTK1). Varietatea

tipic pentru TH e PTK p56lck

p56 proteina 56kda lck titulatura protooncogenei responsabil de sinteza acestei proteinkinaze

(kinaz caracteristic leucocitelor)

CD8

- glicoprotein transmembranar heterodimeric: 1 lan i unul - orientat cu capetele N-terminale afar i cele C-terminale la interior- elaborat dup codul unor gene de pe Cz 2- particularitate: n segmentul extracelular prezint cte un domeniu- domeniile sunt poziionate simetric => conformaie Ig-like- segmentele intracitoplasmatice sunt foarte lungi- CD8 e prezent pe suprafaa TC i TS (LT CD8+)

- funcii realizate diferit prin segmentul extracelular i cel intracitoplasmatic- segmentul extracelular: cooperarea ntre TC/TS i APC (cooperarea se face cu ocazie

prezentrii i recunoaterii Ag. n timpul cooperrii CD8 recunoate specificNUMAImoleculele MHC I, angajnd legturiNUMAI cu domeniul monomorf al MHC I 3).Are rol important n activarea TC/TS.

- segmentul intracitoplasmatic: se afl n contact cu aceeai PTK p56lck

-Cei 4 receptori (TCR, CD3, CD4, CD8) realizeaz recunoaterea Ag asociativ.

- recunoaterea e dublu asociativ:o recunoatere Ag asociativ intrareceptorial (realizat de TCR)o recunoatere Ag asociativ interreceptorial (recunosc moleculele prezentatoare) stabilirea unui numr mare de contacte intre moleculele prezentatoare i cele prezentateLT leg. cu MHC (5) prin TCR i CD4/CD8

cu Epi (2) prin TCRDAR ele se realizeaz DOAR cnd e recunoscut epitopul

- moleculele MHC de regul sunt molecule prezentateNUMAI pe membranele celulare =>LT recunosc NUMAI Ag membranare

Laura & Daniel 7


8/12


- Ag membranare pot fi de 3 tipuri:1) Ag prezentate2) Ag constitutive3) Ag ataate

- LTNU recunosc niciodat Ag ataate (Ac) i Ag constitutive (Ac/NK)- LT recunosc DOARAg prezentate n complex cu MHC recunoaterea Ag de LT este o recunoatere MHC restrictiv

Laura & Daniel 8


9/12


2. Receptori cu rol accesor n activarea LT CD28

glicoprotein transmembranar homodimeric GM 45kda distribuie: prezent NUMAI pe suprafaa TH/TC i niciodat pe TS segmentul extracelular: cte o bucl pe domeniu segmentul intracitoplasmatic: lung sau foarte lung

funcie: favorizeaz net cooperarea dintre TH/TC i APC n timpul cooperrii se stabilesc legturi ntre CD28 i un contraligand (CD80)

prezentNUMAI pe suprafaa APC profesionale => semnale activatoare care setrimit ctre profunzime, ele contnd enorm pentru maturarea funcional a TH/TC

TH produce diverse tipuri de IL TC produce CK

Laura & Daniel 9


10/12


o CD45 glicoprotein transmembranar GM 100-200kda pe suprafaa tuturor celulelor de origine hematogen (excepie eritrocitele i

trombocitele) pe suprafaa LT e extrem de bine reprezentat (ocup 10% din suprafaa lor

membranar) NU exist ca receptor izolat El se ataeaz prin puni disulfurice la lanul al CD3 => CD45 e activat

ntotdeauna ca urmare a stimulrii Ag Funcie enzimatic, e o fosfataz (PTP) care impreun cu PTK formeaz un cuplu

funcional extrem de important

3. Receptorii de adeziune intercelular- foarte importani printre altele n cooperarea prin contact ntre LT i APC= cooperare cognitiv

Laura & Daniel 1


11/12


o CD2- receptor panT (pe toate LT) i pe suprafaa celulelor NK- glicoprotein transmembranar- are GM 50kda- segmentul extracelular prezint 2 domenii- segmentul intracitoplasmatic este foarte lung- funcii: segmentul extracelular stabilirea de contacte cu un contraligand prezent pe

APC (LFA3[CD58]) contacte prin complementaritatesegmentul intracitoplasmatic pregtirea activrii LT, se afl n contact fizic

cu o enzim PLC (fosfolipaza C)- cnd se stabilesc contacte CD2-LFA3, CD2 sufer modificri conformaionale ce

permit translocarea PLC de la nivelul citoplasmei la nivelul membranei- LT naive = limfocite care n existena lorNU au ntlnit niciodat Ag pentru care aufost programate genetic s l recunoasc

- cuplul de adeziune CD2-LFA3 = cuplul de adeziune de linia nti (primele legturidintre APC i LT se stabilesc prin acest cuplu). Afinitatea reciproc CD2-LFA3 eextrem de mare

LFA1- prezent pe LT, LB, NK

Laura & Daniel 1


12/12


- 2 lanuri (CD11a) i (CD18)- segmentul extracelular 2 domenii (imagine de Ig-like)- segmentul intracitoplasmatic foarte lung- funcie: segmentul extracelular stabilirea de contacte cu un contraligant prezent pe

suprafaa APC (din categoria ICAM)

- prezent pe suprafaa LT, n mod particular pe suprafaa LT cu memorie (au ntlnit denenumrate ori Ag pentru care sunt programate s l recunoasc)- cuplul de adeziune LFA1-ICAM = cuplul de linie a doua (legturile se stabilesc mai

trziu i sunt instabile o perioad de timp)

Rolul receptorilor- stabilirea de contacte APC-LT pe arii ntinse ale membranelor- aceste cupluri de adeziune favorizeaza net prezentarea i recunoaterea Ag pentru c

MHC+Epi i TCR NU sunt poziionate fa n fa. Astfel ele au timp s pluteasc pemembran i s vin n contact unul cu altul

LT CD3 CD4 CD8 CD28TH + + - +TC + - + +TS + - + -

Laura & Daniel 1

Date post:	04-Apr-2018
Category:	Documents
Upload:	anda-madalina-zaharia
View:	222 times
Download:	0 times

CURS 03 - Popula_iile limfocitare ºi markerii lor de suprafa_a

Documents