ANALIZA ANALIZA TOXICOLOGICĂ A TOXICOLOGICĂ A

DROGURILORDROGURILOR

OPIOIDEOPIOIDE CCompuşi relevanţi pentru ompuşi relevanţi pentru

evidenţierea consumului:evidenţierea consumului:– HeroinaHeroina– MorfinaMorfina– 6-monoacetilmorfina6-monoacetilmorfina– CodeinaCodeina– AcetilcodeinaAcetilcodeina– Morfin-O-glucuronidele (M-3-G, M-6-Morfin-O-glucuronidele (M-3-G, M-6-

G, morfin-3,6-O-diglucuronida)G, morfin-3,6-O-diglucuronida)

MORFINAMORFINA

Doza medie terapeutică: 5-10 Doza medie terapeutică: 5-10 mg/70 kg (s.c. sau i.m.)mg/70 kg (s.c. sau i.m.)

Doza medie utilizată ilicit: 10-20 Doza medie utilizată ilicit: 10-20 mgmg

Biodisponibilitatea: 15-64% - Biodisponibilitatea: 15-64% - efect intens al primului pasaj efect intens al primului pasaj hepatichepatic

MORFINA: căi metaboliceMORFINA: căi metabolice

O

N

OH

CH3

O

N

OHHO

CH3

O

N

HO

CH3

O

N

HO

CH3

O

N

OHHO

Morfina

OGluc

O

H

O

Gluc

Morfin-3-glucuronida Normorfina

O

N

OH

CH3Morfinona Morfin-6-glucuronida

Morfin-3-sulfatHO3SO

(5%)efect neurotoxic

efect toxic

Codeina

MORFINA: eliminareMORFINA: eliminare

10% morfină liberă – timp de 72 ore10% morfină liberă – timp de 72 ore 75%: M-3-G75%: M-3-G Cantităţi mici de alţi metaboliţi Cantităţi mici de alţi metaboliţi

conjugaţiconjugaţi Consum de alimente ce conţin Consum de alimente ce conţin

seminţe de mac seminţe de mac concentraţii în concentraţii în ser: 0,1 mg/l morfină şi 0,007 mg/l ser: 0,1 mg/l morfină şi 0,007 mg/l codeinăcodeină

concentraţii în urină: 4,5 concentraţii în urină: 4,5 mg/l morfină şi 0,2 mg/l codeinămg/l morfină şi 0,2 mg/l codeină

HEROINAHEROINA

Doze la toxicomanii toleranţi: Doze la toxicomanii toleranţi: până la 250 mg/zi i.v. sau prizarepână la 250 mg/zi i.v. sau prizare

T ½ sânge = T ½ sânge = 20 minute 20 minute

HEROINA: căi metaboliceHEROINA: căi metabolice

O

N

CH3

O

N

HO

CH3

O

N

OHHO

CH3

CH3COO OCOCH3

OCOCH3

Heroina (diacetilmorfina)

6-monoacetilmorfina

Morfina

esteraze sanguinet 1/2 = 9 min

t 1/2 = 38 minFicat

conjugare 90% la glucuronide

HEROINA: eliminareHEROINA: eliminare

Urină: 20-40 ore de la administrare Urină: 20-40 ore de la administrare – M-3-G: 38,2% din dozăM-3-G: 38,2% din doză– Morfină liberă: 4,2% din dozăMorfină liberă: 4,2% din doză– 6-monoacetil morfină (MAM): 1,3% 6-monoacetil morfină (MAM): 1,3% – Heroină nemodificată: 0,1% din dozăHeroină nemodificată: 0,1% din doză– Metaboliţi minori: alte glucuronide ale Metaboliţi minori: alte glucuronide ale

morfinei, normorfinamorfinei, normorfina– Codeină Codeină deacetilarea acetilcodeinei deacetilarea acetilcodeinei

(impuritate în heroina ilicită)(impuritate în heroina ilicită)

HEROINA: indicatori ai HEROINA: indicatori ai consumuluiconsumului

Determinarea morfinei în urină Determinarea morfinei în urină – Cazuri fatale Cazuri fatale nivele de 86 nivele de 86 μμg/mlg/ml

Determinarea MAM (t ½ 0,6 ore) în Determinarea MAM (t ½ 0,6 ore) în urină: timp de detecţie de 2-8 oreurină: timp de detecţie de 2-8 ore– Se poate determina şi în alte matrici: Se poate determina şi în alte matrici:

păr, sudoare, păr, sudoare, salivă salivă (apare după (apare după câteva min de la adm i.v. în conc. câteva min de la adm i.v. în conc. >> plasmă)plasmă)

– MAM/morfină MAM/morfină >> 1 în salivă – indică 1 în salivă – indică utilizarea heroinei în ultima oră utilizarea heroinei în ultima oră înainte de colectarea probeiînainte de colectarea probei

CODEINACODEINA

Doze orale zilnice între 60 şi 240 Doze orale zilnice între 60 şi 240 mgmg

CODEINA: căi metaboliceCODEINA: căi metabolice

O

N

OH

CH3

O

N

OH

O

N

CH3

O

N

OHHO

CH3

H

CH3O CH3O

CH3O O

Gluc

Codeina Norcodeina

Morfina Codein-6-glucuronida

CODEINA: eliminareCODEINA: eliminare Codeină liberă în urina de 24 ore: Codeină liberă în urina de 24 ore:

10% din doză10% din doză Codeină glucuronoconjugată: 32-Codeină glucuronoconjugată: 32-

46% din doză46% din doză Morfină conjugată în urina din 24 Morfină conjugată în urina din 24

ore: 5-13% din dozăore: 5-13% din doză Norcodeină conjugată: 10-21% din Norcodeină conjugată: 10-21% din

dozădoză Urme: morfină şi norcodeină libereUrme: morfină şi norcodeină libere

CODEINA: nivele CODEINA: nivele plasmaticeplasmatice

După 60 mg codeină fosfat După 60 mg codeină fosfat 0,135 mg/l codeină (1 h) şi 0,007 0,135 mg/l codeină (1 h) şi 0,007 mg/l morfină (1,5 h)mg/l morfină (1,5 h)

Intoxicaţii letale: conc. plasmatice Intoxicaţii letale: conc. plasmatice 1-9 mg/l codeină (48 mg/l)1-9 mg/l codeină (48 mg/l)

În cazul identificării morfinei în În cazul identificării morfinei în urină sau sânge, trebuie exclusă urină sau sânge, trebuie exclusă ingestia codeineiingestia codeinei

OPIACEE: interpretare OPIACEE: interpretare analizeanalize Pot fi detectate în urină până la 3 zilePot fi detectate în urină până la 3 zile Concentraţiile urinare depind de: Concentraţiile urinare depind de:

metabolism, starea fizică, aportul de metabolism, starea fizică, aportul de fluide, modul de administrarefluide, modul de administrare

Prezenţa morfinei în urină nu indică Prezenţa morfinei în urină nu indică opiaceul consumatopiaceul consumat

În caz de dubii, determinarea În caz de dubii, determinarea compusului părinte sau a altor compusului părinte sau a altor metaboliţi majori pot da informaţii metaboliţi majori pot da informaţii preţioase (ex. MAM)preţioase (ex. MAM)

Codeina totală/morfina totală Codeina totală/morfina totală 0,5 şi 0,5 şi conc. morfină conc. morfină >> 200 ng/ml 200 ng/ml codeina codeina poate fi exclusă ca sursă a morfineipoate fi exclusă ca sursă a morfinei

HEROINHEROINĂ: pregătirea Ă: pregătirea probelorprobelor

Preătirea pentru metodele Preătirea pentru metodele imunochimiceimunochimice: eventual ajustarea : eventual ajustarea pH-ului şi centrifugarea urineipH-ului şi centrifugarea urinei

Pregătirea pentru cromatografie:Pregătirea pentru cromatografie: – Hidroliza: acidă, enzimaticăHidroliza: acidă, enzimatică

Atenţie:Atenţie: pot dezacetila MAM la morfină pot dezacetila MAM la morfină– Extracţia: L-L (pH = 8,5-9), EFS (C18)Extracţia: L-L (pH = 8,5-9), EFS (C18)

HEROINHEROINĂ: analiza Ă: analiza toxicologicătoxicologică Screening:Screening:

– Metode imunochimiceMetode imunochimice– CSSCSS

Confirmare:Confirmare:– GC – derivatizare cu BSTFA, BSAGC – derivatizare cu BSTFA, BSA– GC-MS GC-MS – HPLC: detecţie UV (218 nm)m HPLC: detecţie UV (218 nm)m

fluorescenţă, electrochimicăfluorescenţă, electrochimică– MAM: analiză GC-MSMAM: analiză GC-MS

COCAINACOCAINA Doze medii utilizate:Doze medii utilizate:

– 10-35 mg/linie - prizare10-35 mg/linie - prizare– 10-20 mg – injectare10-20 mg – injectare– 50-200 mg inhalare crack50-200 mg inhalare crack

Compuşi de referinţă pentru Compuşi de referinţă pentru analiză:analiză:– CocainaCocaina– BenzoilecgoninaBenzoilecgonina– Esterul metilic al ecgonineiEsterul metilic al ecgoninei– ecgoninaecgonina

COCAINA: căi metaboliceCOCAINA: căi metabolice

N

CH3

COOCH3

OCOC6H5

N

COOCH3

OCOC6H5

N

CH3O

COC6H5

N

CH3

COOCH3

N

CH3

H

COOH

COOH

OHOH

Norcocaina

Cocaina

Esterul metilic al ecgoninei

Benzoilecgonina

Ecgonina

Norcocain-N-oxidhepatotoxic

(40%)

(30-50%)

hidroliza neenzimatica

hidroliza enzimatica

COCAINA: eliminareCOCAINA: eliminare T ½ = 4-5 oreT ½ = 4-5 ore In urină In urină

– Cocaina nemodificată: 1-9% din dozăCocaina nemodificată: 1-9% din doză– BenzoilecgoninaBenzoilecgonina: 35-54% din doză: 35-54% din doză– Esterul metilic al ecgonineiEsterul metilic al ecgoninei: 32-49%: 32-49%

Timp de detecţie:Timp de detecţie:– Doză unică: 24 ore cocaina, 48 ore Doză unică: 24 ore cocaina, 48 ore

metaboliţiimetaboliţii– Administrare cronică: 5 zile sau mai Administrare cronică: 5 zile sau mai

multmult

Alte probe: părul, salivaAlte probe: părul, saliva

COCAINA: COCAINA: biodisponibilitatebiodisponibilitate

Crack: BD = 70%Crack: BD = 70%– Stare de “high” mai accentuată Stare de “high” mai accentuată

comparativ cu i.v. (bolus cocaină)comparativ cu i.v. (bolus cocaină) Prizare: BD = 94%Prizare: BD = 94%

– Pic concentraţii scăzut faţă de calea Pic concentraţii scăzut faţă de calea inhalatorie sau i.v.inhalatorie sau i.v.

– conc,. plasmatice ale benzoilecgoninei conc,. plasmatice ale benzoilecgoninei >> comparativ cu calea inhalatorie comparativ cu calea inhalatorie

COCAINA: concentraţiiCOCAINA: concentraţii

Doze terapeutice: conc. Doze terapeutice: conc. plasmatice de 0,5 plasmatice de 0,5 μμg/ml pentru g/ml pentru cocaină şi 0,1 cocaină şi 0,1 μμg/ml pentru g/ml pentru benzoilecgoninăbenzoilecgonină

Supradozare: conc. plasmatice de Supradozare: conc. plasmatice de 1-20 1-20 μμg/ml pentru cocaină şi 1-10 g/ml pentru cocaină şi 1-10 μμg/ml pentru benzoilecgoninăg/ml pentru benzoilecgonină

COCAINA: pregătirea COCAINA: pregătirea probelorprobelor Precauţii:Precauţii: probele vor fi păstrate la probele vor fi păstrate la

rece şi la întuneric, iar pH-ul ajustat rece şi la întuneric, iar pH-ul ajustat la 5 pt. a evita hidrolizala 5 pt. a evita hidroliza

Pregătirea probelor pentru analiza Pregătirea probelor pentru analiza imunochimică:imunochimică: centrifugare, centrifugare, ajustarea probelor la pH 6,5-8ajustarea probelor la pH 6,5-8

Pregătirea probelor pentru Pregătirea probelor pentru cromatografie: cromatografie: – Extracţia L-L (pH 9)Extracţia L-L (pH 9)– EFS: Extrelut (pământ de diatomee), EFS: Extrelut (pământ de diatomee),

C18, coloane pe bază de ciclodextranC18, coloane pe bază de ciclodextran

COCAINA: analiza COCAINA: analiza toxicologicătoxicologică Screening:Screening:

– Metode imunochimiceMetode imunochimice– CSSCSS

Confirmare:Confirmare:– GC – derivatizare: acilare, sililare GC – derivatizare: acilare, sililare

(MSTFA)(MSTFA)– GC-MSGC-MS– HPLC: detecţie UV, coloană C18HPLC: detecţie UV, coloană C18

AMFETAMINEAMFETAMINE

Doze (oral, prizare): 5-15 mg - Doze (oral, prizare): 5-15 mg - utilizatori ocazionali; 100-2000 utilizatori ocazionali; 100-2000 mg/zi – utilizatori dependenţimg/zi – utilizatori dependenţi

T ½ eliminare: 8-12 oreT ½ eliminare: 8-12 ore Amfetamina şi metamfetamina Amfetamina şi metamfetamina

apar în urină după 20 min de la apar în urină după 20 min de la administrareadministrare

AMFETAMINA: căi AMFETAMINA: căi metabolicemetaboliceOH

NH2

NH2 NH2

NHOH

HO

ON COOH

COOH

H

O

Norefedrina

Amfetamina 4-Hidroxi-amfetamina

Fenilacetona Acid benzoic Acid hipuric

beta-hidroxilare N-oxidare

Glucurono-si sulfo-conjugati

Glucurono-si sulfo-conjugati

p-hidroxilare

dezaminare oxidativa

AMFETAMINA: eliminareAMFETAMINA: eliminare Nemodificat: 20-30% din dozăNemodificat: 20-30% din doză Metaboliţi deaminaţi (acid hipuric, Metaboliţi deaminaţi (acid hipuric,

acid benzoic)acid benzoic) Metaboliţi hidroxilaţi, parţial conjugaţiMetaboliţi hidroxilaţi, parţial conjugaţi Viteza de excreţie şi fracţiunea Viteza de excreţie şi fracţiunea

nemodificată depind de pH urină:nemodificată depind de pH urină:– Urină alcalină: 45% (24h) – 2% Urină alcalină: 45% (24h) – 2%

nemodificatnemodificat– Urină acidă: 78% (24 h) – 68% Urină acidă: 78% (24 h) – 68%

nemodificatnemodificat

METAMFETAMINA: căi METAMFETAMINA: căi metabolicemetabolice

NH

CH3

HO

NH

CH3

NH2

4-Hidroxi-metamfetamina

Metamfetamina

Amfetamina

Hidroxilare aromatica

N-oxidare

METAMFETAMINA: METAMFETAMINA: eliminareeliminare Nemodificată: 44%Nemodificată: 44% Amfetamină: 6-20%Amfetamină: 6-20% 4-hidroxiamfetamină: 10%4-hidroxiamfetamină: 10%

Urina acidă creşte viteza de Urina acidă creşte viteza de excreţie şi procentul de substanţă excreţie şi procentul de substanţă nemodificatănemodificată

Şi alte probe biologice: Şi alte probe biologice: sânge, sânge, sudoare, lapte, păr, unghiisudoare, lapte, păr, unghii

AMFETAMINE: AMFETAMINE: interpretareinterpretare

Conc. urinare după administrare Conc. urinare după administrare cronică: 1-90 cronică: 1-90 μμg/ml (amfetamină)g/ml (amfetamină)

25-300 25-300 μμg/ml (metamfetamină)g/ml (metamfetamină) 90% din doza de amfetamină excretată 90% din doza de amfetamină excretată

în 3-4 zileîn 3-4 zile Un test pozitiv pentru amfetamină Un test pozitiv pentru amfetamină

indică utilizarea în ultimele 24-48 oreindică utilizarea în ultimele 24-48 ore

AMFETAMINE: pregătirea AMFETAMINE: pregătirea probelorprobelor

Precauţii: Precauţii: risc de volatilizare a bazelor risc de volatilizare a bazelor libere în timpul evaporării probelorlibere în timpul evaporării probelor

Pregătirea probelor pentru analiza Pregătirea probelor pentru analiza imunochimică: imunochimică: ajustarea pH-ului şi ajustarea pH-ului şi centrifugarea urineicentrifugarea urinei

Pregătirea probelor pentru Pregătirea probelor pentru cromatografie:cromatografie:– Extracţie L-L – pH alcalinExtracţie L-L – pH alcalin– EFS: pământ de diatomee, silicagel substituit EFS: pământ de diatomee, silicagel substituit

(C18), răşini schimbătoare de cationi(C18), răşini schimbătoare de cationi

AMFETAMINE: analiza AMFETAMINE: analiza toxicologicătoxicologică

Screening:Screening:– Metode imunochimiceMetode imunochimice– CSSCSS– Reacţii de culoare (reactiv Simons Reacţii de culoare (reactiv Simons

modificat)modificat) Confirmare:Confirmare:

– GC: derivatizare cu HFBA, TFAA, GC: derivatizare cu HFBA, TFAA, MTBSTFA, fără derivatizareMTBSTFA, fără derivatizare

– GC-MSGC-MS– HPLC: coloană C18, detector UV, HPLC: coloană C18, detector UV,

electrochimicelectrochimic

AMFETAMINE AMFETAMINE SUBSTITUITESUBSTITUITE

Administrare: orală, i.v., inhalareAdministrare: orală, i.v., inhalare Doze uzuale: 80-125 mgDoze uzuale: 80-125 mg Metabolizare insuficient Metabolizare insuficient

cunoscută prin:cunoscută prin:– N-dealchilareN-dealchilare– DeaminareDeaminare– Oxidare la catena lateralăOxidare la catena laterală– Clivaj oxidativ al ciclului metilendioxiClivaj oxidativ al ciclului metilendioxi

AMFETAMINE AMFETAMINE SUBSTITUITESUBSTITUITE

Analiţi ţintă: compuşii părinte în Analiţi ţintă: compuşii părinte în sânge sau urinăsânge sau urină

Concentraţii la decedaţi:Concentraţii la decedaţi:– MDMA: 0,9-2 MDMA: 0,9-2 μμg/ml în sângeg/ml în sânge– MDA: 2,3-26 MDA: 2,3-26 μμg/ml în sânge şi 46-g/ml în sânge şi 46-

175 175 μμg/ml în urinăg/ml în urină

AMFETAMINE SUBSTITUITE: AMFETAMINE SUBSTITUITE: pregătirea probelorpregătirea probelor

Precauţii:Precauţii: risc de pierdere a bazelor risc de pierdere a bazelor libere în timpul evaporării sollibere în timpul evaporării solvventuluientului

Pregătirea probelor pentru metodele Pregătirea probelor pentru metodele imunochimice:imunochimice: ajustarea pH, ajustarea pH, centrifugarea urineicentrifugarea urinei

Pregătirea probelor pentru metodele Pregătirea probelor pentru metodele cromatograficecromatografice: : – Hidroliza (metaboliţii hidroxilaţi)Hidroliza (metaboliţii hidroxilaţi)– Extracţia: EFS (C18 + schimbători de Extracţia: EFS (C18 + schimbători de

cationi)cationi)

AMFETAMINE SUBSTITUITE: AMFETAMINE SUBSTITUITE: analiza toxicologicăanaliza toxicologică Screening:Screening:

– Metode imunochimice (nespecifice)Metode imunochimice (nespecifice)– CSSCSS

Confirmare:Confirmare:– GC – derivatizare cu HFBA, TFAA, fără GC – derivatizare cu HFBA, TFAA, fără

derivatizarederivatizare– GC-MSGC-MS– HPLC: coloană C18, detector UV, HPLC: coloană C18, detector UV,

electrochimicelectrochimic

CANNABISCANNABIS

Doze fumate: 0,5-1 g material Doze fumate: 0,5-1 g material vegetalvegetal

Compusul activ: THC – Compusul activ: THC – metabolizat în proporţie ridicată metabolizat în proporţie ridicată (( 1% se regăseşte în urină) 1% se regăseşte în urină)

THC: căi metaboliceTHC: căi metabolice

O

OH

OH

H

H

O

OH

H

H

O

OH

H

H

O

H

H

CH2OH

COOH

COO-Glucuronida

O-Glucuronida

9-THC

11-Hidroxi-9-THC

Acid 11-Nor-9-THC-9-Carboxilic

Mono-/Di-glucuronida 9-carboxi THC

THC: eliminareTHC: eliminare

50% din doza se elimină în 72 ore, 50% din doza se elimină în 72 ore, restul reţinut în ţesutul adiposrestul reţinut în ţesutul adipos

Excreţie prin: urină (25%)Excreţie prin: urină (25%)

fecale (65%)fecale (65%) T ½ T ½ >> 20 ore 20 ore Indicator consum = metabolitul Indicator consum = metabolitul

acid major, 9-carboxi-THCacid major, 9-carboxi-THC

THC: indicatori consumTHC: indicatori consum

Utilizatori ocazionali (Utilizatori ocazionali ( 2 2 ori/săptămână): 9-carboxi-THC ori/săptămână): 9-carboxi-THC detectat în urină timp de 1-3 ziledetectat în urină timp de 1-3 zile

Utilizatori cronici: timp de detecţie de Utilizatori cronici: timp de detecţie de o săptămână sau mai multo săptămână sau mai mult

9-CARBOXI-THC: pregătirea 9-CARBOXI-THC: pregătirea probelorprobelor

Precauţii:Precauţii: degradare termică chiar la degradare termică chiar la temperatura camereitemperatura camerei

Pregătirea probelor pentru Pregătirea probelor pentru cromatografie:cromatografie:– Hidroliză alcalinăHidroliză alcalină sau enzimatică sau enzimatică– Extracţia: L-L (pH 2), EFS (C18)Extracţia: L-L (pH 2), EFS (C18)

9-CARBOXI-THC: analiza 9-CARBOXI-THC: analiza toxicologicătoxicologică

Screening:Screening:– Metode imunochimiceMetode imunochimice– CSS (silicagel cu aditiv de fluorescenţă, CSS (silicagel cu aditiv de fluorescenţă,

vizualizare – reactiv Fast Blue B)vizualizare – reactiv Fast Blue B) Confirmare:Confirmare:

– GC – derivatizare cu BSTFA, TMCS, MSTFAGC – derivatizare cu BSTFA, TMCS, MSTFA– GC-MS – derivatizareGC-MS – derivatizare– HPLC (coloană C8, detecţie UV, HPLC (coloană C8, detecţie UV,

electrochimică)electrochimică)