CITOMETRIA DE FLUX
CE ESTE CITOMETRIA DE FLUX?Metod de msurare a caracteristicilor fizice i/sau biochimice ale particulelor (celule, nuclei, organite celulare):MrimeaGranularitateaCantitatea de ADNAntigene de suprafa
Metod de sortare a celulelor
ETAPEPrepararea suspensiei de celule
Marcarea celulelor
Achiziia datelor
Stocarea datelor
Interpretarea datelor
PRODUCEREA ANTICORPILOR MONOCLONALIPlasmocite producatoare de AcAntigenFuzionarea celulelor HIBRIDOMMielomAnticorpii monoclonali sunt purificatiClonele dorite se cultiva sau se congeleazaTestarea clonelorHibridoamele se separa si se cultivaCultivarea hibridoamelorMentinerea hibridoamelor in soareci
FLUOROCROMIIAcM sunt conjugai cu fluorocromiSpectru de absorbie (excitaie)Spectru de emisiePentru 2 parametri 2 AcM cuplai cu 2 fluorocromi cu spectre de emisie diferite:Izotiocianat de fluorescein (FITC)Phycoeritrin (PE)
IMUNOFLUORESCENA101104103102Intensitatea fluoresceneiNumar de evenimente
COMPONENTELE CITOMETRULUI DE FLUXSistem fluidic
Sistem optic
Sistem electronic
SISTEMUL FLUIDICCelule aflate n suspensie:SngeLichid sinovialLCRGanglioni limfaticiTumori solideLichid de nveli Curent intern unicelular ir indianIntersectare cu un fascicul de lumin
SISTEMUL FLUIDICLichid denveliCamer descurgereFluxlaminar
SISTEMUL OPTIC DE EXCITAIESursa laser (Ar =488 nm)Fascicul luminos dispersie i stimularea fluorocromilorDispersia luminii:=0 Forward Scatter (FS) dimensiunea=90 Side Scatter (SS) granularitateaEmisia luminii fluorescente:~ cantitatea de fluorocromi info calitative i cantitativeElemente optice de focalizare (lentile)
FS I SS
SISTEMUL OPTIC DE COLECTAREConversie semnal optic semnal electronic
Detectori pentru:Lumina dispersat: n fa, lateralEmisia de fluorescenFiltre optice
CITOMETRUL DE FLUX
SISTEMUL ELECTRONICRecepionarea impulsurilor detectorilorPrelucrarea semnaluluiPrezentarea rezultatelor: Histograme 1 parametruGrafice 2 parametri: 1 punct = 1 particul (dot-plot)
ELEMENTE FIGURATE
GRAFIC DOT-PLOT PENTRUFITC I PEFITC FLPE FLFITC- / PE-FITC+PE+FITC+ / PE+
FITC / PE
SORTAREA CELULELORSepararea unei (sub)populaii celulare dintr-un amestec:MrimeGranularitateAntigene de suprafa
SORTAREA CELULELOR - ETAPEIdentificarea criteriuluiMarcarea cu AcM+fluorocromiIdentificarea celulei e de interes?ncrcare cu sarcini pozitive/negative/frCmp magnetic deflectare spre tuburi colectoareCentrifugare
SORTAREA CELULELORLASER 488 nm-Plci ncrcatemagneticTuburi de colectareSenzor FSDetector de fluorescen+--
APLICAIIAnaliza subpopulaiilor limfocitareDiagnosticul hemopatiilor maligneBiologie celularIdentificarea unor molecule HLADeterminarea unor autoanticorpiStudiul ciclului i al funciilor celulareDiagnosticul, evoluia, prognosticul tumorilor maligne solideMicrobiologie
ANALIZA ADNG2MG0G1s0 200 400 600 8001000sCantitatea de ADNEvenimente
ANALIZA ADN0 200 400 600 8001000Fluorescen PE2N4NEvenimente
ANALIZA ADN0 200 400 600 8001000Fluorescen PEPeak aneuploidEvenimente