UNIVERSITATEA DE MEDICINĂ ŞI FARMACIE
ldquoGRIGORE T POPArdquo IAŞI
FACULTATEA DE MEDICINĂ
REZUMAT
TEZĂ DE DOCTORAT
ROLUL RECEPTORILOR ACTIVAŢI DE INDUCTORII
PROLIFERĂRII PEROXIZOMILOR - ALPHA
IcircN SINDROMUL METABOLIC
Conducător ştiinţific
Prof Univ Dr RODICA PETROVANU
Doctorand
ELENA HATNEANU (POPA)
Iaşi - 2014
Cuprins
PARTEA GENERALĂ 1
CAPITOLUL I SINDROMUL METABOLIC 1
I1Introducere 1
I2 Criterii de diagnostic al sindromului metabolic 1
I3 Epidemiologia sindromului metabolic 3
I4 Patogenia sindromului metabolic 4
CAPITOLUL II RECEPTORII ACTIVAŢI DE INDUCTORII PROLIFERĂRII
PEROXIZOMILOR - ALPHA 11
II1 Generalităţi 11
II2 Istoric 12
II3 Structura PPAR 12
II4 Mecanismul acțiunii PPAR 13
II5 Clasificarea receptorilor PPAR 13
II6 Liganzii PPARα 15
II7 Reglarea expresiei PPARα 15
II8 Rolul receptorilor activaţi de inductorii proliferării peroxizomilor alpha ndashPeroxisome
Proliferator-Activated Receptor-Alpha ( PPARα) icircn organismul uman 16
II81 Rolul PPARα in reglarea homeostaziei energetice a organismului uman 16
II82 Rolul PPARα icircn reglarea metabolismului lipidic 17
II83 Rolul PPARα icircn modularea inflamaţiei 18
II9 Concluzii 39
PARTEA PERSONALĂ 41
CAPITOLUL III SCOPUL ŞI MOTIVAŢIA STUDIULUI CONSIDERAŢII ETICE 41
III1 Motivația cercetării 41
III2 Scopul studiului 42
III3 Considerații etice 42
CAPITOLUL IV STUDIUL SINDROMULUI METABOLIC IcircN POPULAŢIA
SELECTATĂ 43
IV1 Obiectivele studiului sindromului metabolic 43
IV2 Etapele studiului sindromului metabolic 43
IV3 Studiul epidemiologic icircn populaţia selectată 43
IV31Scopul studiului 43
IV32 Obiectivele studiului 43
IV33 Lotul de studiu 43
IV34 Protocolul studiului epidemiologic al sindromului metabolic 44
IV35 Metode utilizate icircn cercetare 45
IV36 Analiza statistică 46
IV37 Rezultate 46
IV38 Discuţii 62
IV39 Concluzii 64
IV4 Studiul sindromlui inflamator cronic icircn cadrul sindromului metabolic 65
IV41 Scopul studiului 65
IV42 Obiectivele studiului 65
IV43Material şi metodă 65
IV44 Analiza statistică 65
IV45 Rezultate 66
IV46Discuţii 79
IV47 Concluzii 80
Capitolul V STUDIUL RECEPTORILOR ACTIVAŢI DE INDUCTORII PROLIFERĂRII
PEROXIZOMILOR-ALPHA IcircN LEUCOCITELE CIRCULANTE 81
V1 Ipoteza de lucru 81
V2 Material și metodă 82
V3 Analiza statistică 87
V4 Rezultate 87
V41 Analiza loturilor studiate 87
V42 Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα 91
V43 Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor CD36 106
V44 Studiul corelaţiilor icircn cele două loturi 111
V5 Discuţii 118
V6 Concluzii 128
VI LIMITE ȘI DIFICULTĂȚI IcircN CERCETARE 129
VII ORIGINALITATEA ȘI CONTRIBUȚIILE INOVATIVE ALE TEZEI DE
DOCTORAT PERSPECTIVE DE CERCETARE 130
VIII CONCLUZII FINALE 131
IX BIBLIOGRAFIE 133
X ANEXE 148
Fişa electronică de studiu Consimţămacircntul informat al pacientului Recoltarea probelor de sacircnge venos pentru studiul PPARα
Protocol marcare CD14 - CD36
Imagini PPARα - citometrie icircn flux
Imagini CD36 Lista lucrări publicate
LISTA ABREVIERI
CA - Circumferinţa abdominalăcm - CentimetriCRP - Proteina C reactivăCol - Colesteroldl - DecilitruEo - EozinofileHDL - High density lipoprotein (lipoproteine cu densitate icircnaltă)IDF - Federaţia Internaţională de DiabetIgE - ImunoglobulinăIMC- Indice de masă corporalăLy - LimfociteLDL- Low density lipoprotein (lipoproteine cu densitate joasă)mg - MiligramMo- MonociteNCEP-ATP III - Naţional Cholesterol Education Program Adult Treatment Panel IIIPPAR - Receptorii Activaţi de Inductorii Proliferarii Peroxizomilor (peroxizome proliferator -activated receptor)PMN - PolimorfonucleareSM - Sindrom metabolicTA - Tensiunea arterialăTAS - Tensiune arterială sistolicăTAD - Tensiune arterială diastolicăTG - Trigliceride
Teza cuprinde un număr de 118 de figuri 41 de tabele și 280 referințe bibliograficeNumerotarea tabelelor şi figurilor este identică cu cea din teză
SCOPUL ŞI MOTIVAŢIA STUDIULUI
Motivația cercetării
La nivel mondial sindromul metabolic (SM) reprezintă o importantă problemă de
sănătate publică reunind asocierea dintre obezitate abdominală şi factori de risc majori
cardiovasculari (hiperglicemia dislipidemia hipertensiunea arterială) (12) Se estimează că
SM afectează peste 25 din populaţia generală iar aproximativ două treimi din pacienţii cu
SM sunt predispuşi la un eveniment cardiovascular major (3) Icircn prezent se acţionează pe
două căi pentru controlul factorilor de risc cardiometabolici incluşi icircn SM managementul
stilului de viaţă (scăderea greutăţii corporale prin combaterea sedentarismului şi adoptarea
unei diete antiaterogene şi hipocalorice) şi administrarea terapiei medicamentoase Deşi atacirct
modificarea stilului de viață cacirct și terapia medicamentoasă vizează controlul factorilor de risc
cardiometabolici conform ghidurilor medicale adoptate atingerea ţintelor terapeutice este
greu de realizat (1011) Icircn aceste condiţii introducerea unor noi metode diagnostice şi
terapeutice bazate pe etiopatogenia SM ar putea icircmbunătăţi calitatea vieţii bolnavilor şi SM şi
ar conduce pe termen lung la creşterea speranţei medii de viaţă Cercetările actuale sunt
orientate spre descifrarea modului icircn care modificările metabolismului incluzacircnd rezistenţa la
insulină dislipidemia obezitatea abdominală pot accelera ateroscleroza privită ca o
complicaţie metabolică și indusă de inflamație (12) Icircn contextul studiului SM receptorii
nucleari activaţi de inductorii proliferării peroxizomilor-alpha-α (PPARα) atrag atenţia
datorită rolului deţinut icircn reglarea oxidării acizilor graşi metabolismul lipidelor şi
lipoproteinelor inflamaţie cronică şi aterogeneză (131415) Aceștia reprezintă astfel veriga
lipsă patogenică care leagă modificările metabolice de procesul inflamator cronic
autoicircntreținut care duce la disfuncția endotelială și aterogeneză Acţionacircnd ca factori de
transcripţie activarea PPARα determină scăderea nivelului seric al trigliceridelor şi HDL-col
şi protejează față de profilul lipidic aterogenetic prin modularea status-ului proinflamator şi
diminuarea insulinorezistenţei (1617) Rolul PPARα icircn reglarea metabolismului lipidic
balanţei energetice şi icircn diminuarea răspunsului proinflamator fac din aceşti receptori o
potenţială ţinta icircn tratamentul afecţiunilor icircn care rolul inflamaţiei cronice este bine cunoscut
Se descrie astfel o nouă posibilitate de icircmbunătăţire a prognosticului afecţiunilor cronice cu
impact major asupra sănătăţii publice incluzacircnd ateroscleroza diabetul zaharat boala cronică
obstructivă pulmonară maladia Parkinson demența Alzheimer şi nu icircn ultimul racircnd
neoplaziile (18)
Scopul studiului
Icircn cadrul Tezei de Doctorat mi-am propus realizarea unei cercetări referitoare la
rolul Receptorilor Activaţi de Inhibitorii Proliferării Peroxizomilor- alpha icircn contextul
sindromului metabolic alături de completarea datelor epidemiologice existente cu privire la
prevalenţa acestui sindrom icircn populaţia aflată icircn evidenţa unui Cabinet de Medicină de
Familie din oraşul Iaşi Ca urmare cercetarea efectuată a urmărit două aspecte1 studiul
epidemiologic al SM icircn populaţia unui Cabinet de Medicină de Familie urmată de
investigarea markerilor inflamatori prezenţi icircn SM 2 investigarea prezenţei și a nivelului de
expresie relativă a receptorilor PPARα icircn leucocitele circulante recoltate din sacircngele
subiecţilor studiaţi celule care exprimă aceşti receptori şi a căror rol icircn inflamaţie şi
aterogeneză este bine cunoscut
Considerații etice Studiul a primit avizul Comisiei de Etică a Universităţii de Medicină
şi Farmacierdquo Gr T Popardquo Iaşi Studiul a fost condus icircn conformitate cu Declaraţia de la
Helsinki actualizată
STUDIUL SINDROMULUI METABOLIC IcircN POPULAŢIA SELECTATĂ
Obiectivele studiului sindromului metabolic
a evaluarea din punct de vedere clinic şi biologic a sindromului metabolic
b identificarea tipului de SM icircn raport cu numărul de componente
c stabilirea prevalenţei sindromului metabolic icircn populaţia studiată
d studiul markerilor inflamatori prezenţi icircn SM
Studiul epidemiologic icircn populaţia selectată
Am efectuat un studiu epidemiologic transversal care şi-a propus stabilirea prevalenţei
sindromului metabolic şi a componentelor sale icircn populaţia icircnscrisă pe lista unui cabinet de
medicină de familie Studiul s-a desfăşurat pe parcursul a 12 luni icircn perioada 01012013ndash
31122013 icircn cadrul Cabinetului de Medicină de Familie CMI Popa Elena situat icircn strada
Ion Creanga nr 73 din Iaşi
Obiectivele studiului - evaluarea din punct de vedere clinic şi biologic a sindromului metabolic
- identificarea tipului de SM icircn raport cu numărul de componente
- stabilirea prevalenţei sindromului metabolic icircn populaţia studiată
Lotul de studiu a fost constituit din populaţia de ambele sexe cu vacircrsta cuprinsă icircntre
18 şi 91 ani icircnscrisă pe lista medicului de familie Subiecţii au fost invitaţi să participe la
studiu icircn luna naşterii realizacircnd astfel o programare a vizitelor pe parcursul a 12 luni
Criteriile de includere icircn lotul de studiu vacircrsta peste 18 ani capacitate de decizie
domiciliul stabil icircn Romacircnia participare pe baza consimţămacircntului liber informat Criteriile
de excludere vacircrstă sub 18 ani femei gravide sau care alăptează bolnavi icircn faza terminală
subiecţi care refuză semnarea consimţămacircntului informat Nu s-au formulat criterii care să
aducă discriminări legate de sex etnie sau rasă
Protocolul studiului epidemiologic al sindromului metabolic
Icircn cadrul studiului epidemiologic s-au realizat cacircte două vizite pentru fiecare participant La
prima vizită subiecţii au fost informaţi asupra studiului icircn cadrul cercetării doctorale şi au
semnat Consimţămacircntul liber informat Pentru fiecare participant s-a completat fişa de studiu
computerizată incluzacircnd date anamnestice şi clinice (talie greutate corporală perimetru
abdominal) La a doua vizită s-au recoltat probe biologice (sacircnge venos) de către o asistentă
specializată pentru următoarele determinări biochimice (glicemie colesterol total HDL-
colesterol LDL-colesterol trigliceride acid uric creatinină fibrinogen proteină C reactivă)
şi hematologice (hemoleucograma VSH) Pentru diagnosticarea SM am utilizat criteriile
de diagnostic Harmonised I (tabel VI) Am comparat prevalenţa SM conform criteriilor
Harmonised I cu prevalenţa obţinută prin aplicarea criteriilor IDF respectiv ATP III
Analiza statistică Pentru analiza parametrilor studiaţi icircn SM am realizat icircmpreună cu
firma Arhilog Soft un program icircn care sunt incluşi parametrii de diagnostic ai SM şi care
permite icircncadrarea pacienţilor funcţie de componentele SM icircn SM3 SM4 SM5 De
asemenea programul permite editarea şi arhivarea unei fişe de observaţie pentru fiecare
participant la studiu precum şi crearea unei baze de date compatibile cu programul Microsoft
Office Excel 97-2003
Menţionăm că acest program poate stoca
şi alţi parametri clinici şi paraclinici utilizaţi icircn evaluarea complexă a SM putacircnd fi ulterior
introdus ca un program de monitorizare a evoluţiei pacienţilor Pentru prelucrarea statistică a
parametrilor s-au folosit programele Microsoft Office Excel 97-2003 SPSS-10 (Statistical
Package for Social Sciences) şi aplicaţia Medcalc Statistical Software ndash 1333 Valoarea lui p
Figura 41 Program de
analiză a parametrilor SM
mai mică de 005 a fost considerată semnificativ statistic
Rezultate Analiza lotului de studiu s-a efectuat icircn funcţie de mediul de provenienţă sex vacircrstă şi
vacircrsta medie Caracteristicile clinice şi biochimice ale lotului studiat sunt reprezentate icircn
tabelul VIII
Tabel VIII Caracteristicile lotului studiat Media 95 CI SD Minimum Maximum
Vacircrsta (ani) 4751 4661 - 4841 1798 1800 9100
CA (cm) 8830 8764 - 8896 1316 5600 13400
IMC (kgm2) 2603 2578 - 2628 497 1900 4500
TAD (mmHg) 7529 74883 - 7571 827 6000 11500
TAS (mmHg) 11730 11650 - 11810 1590 9000 19000
Glicemie (mgdl) 9435 9328 - 9542 2138 7200 40000
HDL- col(mgdl) 4498 4427 - 4570 1422 2100 9200
TG(mgdl) 12269 11887 - 12651 7157 4800 87900
Determinarea scorului SM
Am aplicat criteriile de diagnostic şi am calculat scorul de SM pentru fiecare subiect (0-
absenţa criteriului 2- prezenţa criteriului) (fig44)
Figura 44 Frecvenţa scorului SM icircn
populaţia studiată conform criteriilor
SM Harmonised (A) IDF (B) ATP III
(C) Se observă că distribuţia scorurilor
SM conform criteriilor de diagnostic este
identică icircn cazul aplicării criteriilor
Harmonized I şi IDF
Scorul de SM a avut valori pare
cuprinse icircntre intervalul 0 - 10 pacienţii
cu SM avacircnd un scor mai mare sau egal
cu 6
Icircn lotul studiat am analizat prezenţa simultană a criteriilor Harmonised I de diagnostic şi
am constatat prezenţa SM la 389 subiecţi (204 femei şi 185 bărbaţi) reprezentacircnd 2542
(95CI 2296-2808) din totalul populaţiei studiate Raportul prevalenţelor specifice pe sexe
bărbaţifemei a fost de 103 (95 CI084 -126)Icircn concordanţă cu criteriile IDF am
identificat un număr de 325 pacienţi cu SM (175 femei şi 150 bărbaţi) iar prevalenţa SM icircn
populaţia studiată conform IDF a fost de 2124 (95 CI 1899ndash 2368) Raportul
prevalenţelor specifice la bărbaţi versus femei a fost de 0977 (95 CI 078 ndash122) Utilizacircnd
definiţia ATP III au fost identificaţi un număr de 229 subiecţi cu SM Prevalenţa SM a fost
C
0
100
200
300
400
500
600
700
Scor SM ATP III
Număr pacienţi
0 2 4 6 8 10
ATP III SM5 SM4 SM3 non SM
B
0 50
100 150 200 250 300 350 400 450
Scor SM IDF
Număr pacienţi
0 2 4 6 8 10
IDF SM5 SM4 SM3 non SM
A
0
50
100
150
200
250
300
350
400
450
Scor SM Harmonised I
Număr pacienţi
0 2 4 6 8 10
HARMONIZED I SM5 SM4 SM3 non SM
de 1497 (95CI 1309 ndash 1704) icircn populaţia studiată Au fost calculate prevalenţele pe
sexe şi au fost găsite valorile de 1343 (95CI 010 ndash 164) la bărbaţi respectiv 1632
(95 CI 1366 ndash 1934) la femei raportul dintre acestea fiind de 082 (95CI 062 ndash 107)
Pentru fiecare asociere dintre componentele SM diagnosticat conform criteriilor
Harmonised I am calculat prevalenţele icircn cadrul SM(tabel XVI)
Tabel XVI Prevalenţa asocierilor dintre componentele SM Număr
pacienţi
Ponderea icircn cadrul
pacienţilor cu SM
(95 CI)
Prevalenţa icircn
populaţia studiată
(95 CI)
SM cu trei componente (SM3)
241 6195 (5438ndash7029) 1575 (1383-
1787)
Obezitate centrală + hipertensiune arterială +
hipertrigliceridemie
45 1154 (844ndash1548) 294 (214-393)
Obezitate centrală + hipertensiune arterială + hipo-
HDLcolesterolemie
38 979 (691ndash1340) 248 (175-340)
Obezitate centrală + hipertrigliceridemie +
hipoHDL-colesterolemie
34
874 (605ndash1221) 222 (153-310)
Obezitate centrală + modificări ale metabolismului
glucidic + hipertensiune arterială
31 796 (541ndash1131) 202 (137-287)
Hipertensiune arterială + hiper-trigliceridemie +
hipoHDL- colesterolemie
26 668 (436 ndash979) 169 (111-249)
Modificări ale metabolismului glucidic +
hipertensiune arterială + hiper-trigliceridemie
21 539 (334-825) 137 (085-209)
Obezitate centrală + modificări ale metabolismului
glucidic + hipertrigliceridemie
15 385 (215-636) 098 (054-116)
Modificări ale metabolismului glucidic
hipertrigliceridemie + hipoHDL-colesterolemie
12 308 (159-538) 078 (040-137)
Modificări ale metabolismului glucidic +
hipertensiune arterială + hipoHDLcolesterolemie
10 257 (123ndash472) 065 (031-120)
Obezitate centrală + modificări ale metabolismului
glucidic + hipo-HDL-col
9 231 (105ndash439) 058 (026-111)
SM cu patru componente (SM4) 104 2674 (2184-239) 679 (555-823)
Obezitate centrală + modificări ale metabolismului
glucidic + hipertensiune arterială + hipoHDL-
colesterolemie
32 822 (562-1116) 209 (143-
295)
Obezitate centrală + hipertensiune arterială +
hipertrigliceridemie + hipoHDL-col
25 642 (415- 948) 163 (105-241)
Obezitate centrală + modificări ale metabolismului
glucidic + hipertri-gliceridemie + hipoHDL-
colesterolemie
12 308 (159-538) 078 (040-137)
Modificări ale metabolismului glucidic +
hipertensiune arterială + hipertri-gliceridemie +
hipoHDL-colesterolemie
6 154 (056- 335) 039 (014-085)
SM cu cinci componente (SM5) 44 1131 (822-1518) 287 (209-386)
Total (SM3 + SM4 + SM5) 389 100 2542(2296-
2808)
Analizacircnd componentele SM la cei 389 pacienţi diagnosticaţi cu SM conform criteriilor
Harmonised I am constatat că obezitatea centrală este cea mai bine reprezentată icircn SM dintre
aceste componente (8072 95CI 7644 - 8452) urmată de HTA (7892 95CI 7453
- 8287) hiperTG (6915 95 CI 6430-7371) hipo-HDL-col (6375 95 CI 5876-
6854) şi hiperglicemie (5681 95 CI5173- 6179)
Standardizarea prevalenţelor funcţie de vacircrstă şi sex Analiza statistică a relevat faptul
că prevalenţa SM creşte cu icircnaintarea icircn vacircrstă Dacă pentru vacircrsta cuprinsă icircntre 35-54 ani
prevalenţa la bărbaţi este semnificativ mai mare comparativ cu femeile (raport calculat B F -
183 P=0003) pentru celelalte grupe de vacircrsta nu s-au observat diferenţe semnificative icircntre
sexul feminin şi cel masculin Am observat că după instalarea menopauzei la femei
prevalenţa SM (corespunzătoare Harmonised I) la femei depăşeşte 50 iar la bărbaţi atinge
42 Utilizacircnd European Standard Population (175) am efectuat standardizarea funcţie de
vacircrstă şi sex a prevalenţelor bdquocruderdquo (brute) obţinute icircn populaţia studiată şi am calculat o
prevalenţă standardizată a SM de 2732 (95 CI 2460-3003) La sexul masculin
prevalenţa standardizată a SM a fost de 2760 (95 CI 2362 - 3157) iar la sexul feminin
am obţinut valoarea de 2854 (95 CI 2462 - 3245)
Discuţii
Studiul desfăşurat de noi a investigat prezenţa SM icircn populaţia unui Cabinet de Medicină
de Familie Icircn Europa prevalenţa SM este de aproximativ 25-30 Statele Unite Ale Americii
au raportat o prevalenţă a sindromului metabolic de 22 icircn populaţia cu vacircrsta peste 20 ani
pe cacircnd la vacircrstă mai mare de 60 ani s-a observat o prevalenţă de 44 (1419) Icircn studiul
efectuat am observat o prevalenţă standardizată de 2732 (95 CI 2460-3003) care este
icircn concordanţă cu prevalenţele raportate icircn Europa precum şi o creştere a ponderii SM icircn
populaţie icircn raport cu vacircrsta Am preferat utilizarea definiţiei Harmonised I pentru SM
deoarece cuprinde criterii adaptate pentru o abordare unitară a SM mărind astfel numărul
pacienţilor diagnosticaţi şi care vor urma tratament conform Ghidurilor de Practică Medicală
Limitările acestui studiu sunt legate de faptul că este concentrat doar pe populaţia asigurată şi
neasigurată aflată pe lista unui medic de familie din mediul urban Se pot efectua studii la
nivelul Cabinetelor Medicale de Medicină de Familie dar trebuie să se aplice pe un lot
reprezentativ urbanrural care să reprezinte populația acelei regiuni Utilizarea structurilor
populaționale atașate cabinetului de MF este utilă atacirct pentru cele clinice cacirct și pentru cele
epidemiologice deoarece surprinde populația studiată icircn mediul de viață cotidian Prevalenţa
mare a SM icircn populaţia studiată necesită aplicarea unei politici eficiente de sănătate publică
deoarece riscul producerii evenimentelor cardiovasculare majore poate fi redus semnificativ
printr-un control adecvat al componentelor SM (obezitate dislipidemii hipertensiune
arterială şi hiperglicemie
Studiul sindromului inflamator cronic icircn cadrul sindromului metabolic
Obiectivele studiului
- studierea markerilor inflamaţiei cronice şi aterogenezei la subiecţii cu şi fără SM
- evaluarea importanţei markerilor studiaţi ai inflamaţiei cronice icircn diagnosticul de
ambulator al sindromului metabolic
Material şi metodă
Icircn cercetarea inflamaţiei cronice din SM au fost incluşi 1530 subiecţi de ambele sexe cu
vacircrsta cuprinsă icircntre 18-91 ani icircnscrişi pe lista CMI Popa Elena Studiul s-a desfăşurat icircn
perioada 01012013ndash 31122013 Populaţia ţintă a fost identică cu cea din studiul
epidemiologic şi s-a desfăşurat concomitent cu studiul prevalentei SM Subiecţii au fost
icircmpărţiţi icircn două loturi lotul cu SM (Lot SM) şi lotul de control (fără SM)
Lot SM a) criterii de includerevacircrsta peste 18 ani recrutarea pe baza semnării
Consimţămacircntului liber informat SM diagnosticat pe baza criteriilor Harmonised I (14) b)
criterii de excluderevacircrstă sub 18 anirefuzul semnării Consimţămacircntului liber informat
femei icircn perioada de graviditate sau de lactaţie
Lot Control (fără SM) a) criterii de includerevacircrsta peste 18 anirecrutarea pe baza
semnării Consimţămacircntului liber informat absenţa sindromului metabolic b) criterii de
excluderevacircrstă sub 18 ani refuzul semnării Consimţămacircntului liber informatfemei icircn
perioada de graviditate sau de lactaţie
Rezultate
Lotul cu SM (Lot SM) a fost format din cei 389 pacienţi diagnosticaţi cu SM conform
criteriilor Harmonised I Lotul SM a fost alcătuit din 185 bărbaţi şi 204 femei raportul
bărbaţifemei fiind de 090 (95 CI073-112) Lotul de control (fără SM) a fost alcătuit
din cei 1141 participanţi care nu au icircntrunit criteriile de diagnostic ale sindromului metabolic
Din cei 1141 de subiecţi 530 au fost de sex masculin iar 611 de sex feminin raportul
bărbaţifemei fiind 087 (95 CI 077-097) Vacircrsta subiecţilor a fost semnificativ mai mare
icircn lotul pacienţilor cu SM (5976plusmn1322 ani) comparativ cu lotul martor (4333plusmn 1748 ani) (t-
Test Plt00001) Aşa cum ne-am aşteptat valorile medii ale componentelor clinice ale SM
(circumferinţa abdominală tensiunea arterială sistolică şi diastolică) au fost mai mari icircn lotul
pacienţilor cu SM (t-Test Plt0001 pentru fiecare dintre componente) Studiind parametrii
biochimici incluşi icircn diagnosticul SM valorile medii ale glicemiei şi TG au fost semnificativ
mai crescute icircn lotul SM (t-Test Plt00001 pentru ambele constante) Icircn acelaşi timp
valoarea medie determinată a HDL-col a fost semnificativ mai mare la subiecţii din lotul
martor ( t-Test Plt00001) SM se caracterizează printr-o dislipidemie aterogenă
caracterizată de creşterea TG scăderea HDL-col concomitent cu creşterea LDL-col creşterea
Non-HDL-col şi a raportului de aterogenitate (Col totalHDL-col) (185) Comparacircnd cele
două loturi am observat că valoarea medie a LDL-colesterolului determinată icircn lotul
pacienţilor cu SM a fost semnificativ mai mare faţă de subiecţii din lotul martor (t-Test P =
00002) Măsurarea Non-HDL-colesterolului a arătat prezenţa unei diferenţe semnificative
icircntre cele două loturi (figura 420 B) Astfel icircn concordanţă cu prezenţa dislipidemiei
aterogene valoarea medie a Non-HDL-col a fost semnificativ mai mare (t-Test Plt 00001) icircn
lotul cu SM comparativ cu lotul de control Icircn contextul inflamației cronice şi aterogenezei
din sindromul metabolic am evaluat sensibilitatea şi specificitatea Non-HDL-colesterolului
ca test diagnostic al SM Valoarea Non-HDL-colesterolului care prezice cu cea mai mare
acurateţe prezenţa SM a fost de 151 mgdl (punctul de ldquocut-offrdquo) pentru care am calculat o
sensibilitate de 64 27 şi o specificitate de 5872 Calculul ariei AUC a furnizat valoarea
de 0605 şi deci determinarea concentraţiei serice a parametrului Non-HDL-colesterolului are
valoarea unui marker cu acurateţe redusă Am studiat valorile raportului Col totalHDL-col icircn
cele două loturi şi am constatat că la pacienţii cu SM valoarea media a raportului de
aterogenitate este semnificativ mai mare faţă de valoarea raportului determinată icircn lotul
martor (t-Test Plt 00001) Pentru raportul de aterogenitate studiat analiza curbei ROC a
arătat că valorile mai mari decacirct punctul de ldquocut-offrdquo de 431 prezic prezenţa SM cu cea mai
mare sensibilitate (6381 ) şi specificitate (6582)Valoarea AUC pentru indicele de
aterogenitate a fost de 0667 şi icircn studiul SM acest indice poate fi considerat un marker cu
acurateţe redusă Valoarea medie determinată a acidului uric la subiecţii fără SM a fost
semnificativ mai mică decacirct icircn lotul SM (t-Test Plt 00001) Curba ROC a arătat că valorile
acidului mai mari de 43 mgdl prezic diagnosticul de SM cu cea mai mare sensibilitate
(8107) şi specificitate (5328) Pentru acidul uric AUC a avut valoarea de 0655 şi
icircncadrează determinarea acidului uric seric icircn racircndul testelor cu acurateţe redusă (187)
Comparacircnd populaţiile de leucocite (tabel XXI) valoarea medie determinată a
numărului de Eo a fost semnificativ mai mare icircn lotul cu SM comparativ cu lotul martor (t-
Test Plt0001) Analizacircnd curba ROC trasată pentru valorile numărului de Eo am observat
că valorile ldquocut-offrdquo mai mari de 200 Eomm3
pot prezice prezenta SM cu cea mai mare
specificitate (7705) şi sensibilitate (3978) Pentru diagnosticul SM calculul ariei AUC a
arătat faptul că determinarea numărului de Eo are valoarea unui test diagnostic cu acurateţe
redusă (AUC = 0 589) Comparacircnd valorile medii ale fibrinogenului am calculat o diferenţă
statistic semnificativă icircntre cele două loturi valoarea medie a fibrinogenului fiind mai mare icircn
lotul SM ((t-Test P lt 00001) Cu ajutorul curbei ROC am observat că valorile fibrinogenului
mai mari de 306 mgdl prezic sindromul metabolic cu o sensibilitate de 7511 şi specificitate
de 6056 Fibrinogenul a fost icircncadrat icircn categoria markerilor inflamatori cu acurateţe
redusă AUC avacircnd valoarea de 0690 Icircn loturile de studiu am calculat AUC corespunzătoare
criteriilor de diagnostic ale SM Am observat că icircn cazul scorului Harmonised I
sensibilitatea şi specificitatea sunt de 100 iar AUC este egală cu 1000 Pentru cele cinci
criterii de diagnostic AUC a avut valori icircntre 0636 (pentru variabila HDL-col) şi 0804
(pentru variabila CA) (figura 431)
AUC ES 95 CI
Scor SM Harmonised I 1000 00000 0997 - 1000
CA (cm) 0804 00133 0781 - 0825
TAD (mmHg) 0666 00169 0639 - 0692
TAS (mmHg) 0757 00148 0732 - 0780
Glicemie (mgdl) 0742 00160 0717 - 0766
Trigliceride (mgdl) 0756 00175 0732 - 0780
HDL- colesterol 0636 00183 0609 - 0662
Figura 431 Analiza AUC criterii de diagnostic ale SM
Studiind figura 432 se observă că valoarea AUC pentru markerii studiaţi este cuprinsă
icircntre 0589 (icircn cazul variabilei Eo) şi 0690 (icircn cazul fibrinogenului) Icircn contextul SM
acurateţea acestor markeri ai inflamaţiei cronice şi disfuncţiei endoteliale poate fi considerată
redusă deoarece AUClt07 pentru toţi markerii investigaţi (figura 431) Totuşi valorile ariilor
parametrilor reprezentaţi icircn figura 431 sunt apropiate de valorile AUC ale variabilelor TAD
şi HDL-col (figura 432) şi deci pot fi utilizaţi pentru completarea diagnosticului de SM
AUC ES 95 CI
Non-HDL-colesterol 0605 00171 0580 - 0630
Col totalHDL-col 0607 00163 0642 - 0691
Acid uric 0655 00161 0630 - 0679
Fibrinogen 0690 00206 0658 - 0720
Eozinofile 0589 00176 0564 - 0615
Figura 432 AUC markeri ai SM inflamaţiei cronice şi aterogenezei
Discuţii
Status-ul proinflamator din SM asociat cu insulinorezistenţa şi disfuncţia endotelială
constituie o verigă de legătură dintre inflamaţie şi procesele metabolice complexe icircnsoţindu-
se de deteriorarea funcţiilor vasculare şi creşterea riscului de evenimente cardiovasculare
majore (2858) Studiul efectuat a arătat o diferenţă icircntre vacircrstele subiecţilor din cele două
loturi vacircrsta pacienţilor cu SM fiind semnificativ mai mare (Plt0001) comparativ cu subiecţii
normali confirmacircnd faptul menţionat că vacircrsta reprezintă unul din stimulii care agravează
inflamaţia cronică Am arătat că valorile fibrinogenului sunt mai mari icircn SM comparativ cu
Scor Harmonised I
0 20 40 60 80 100
0
20
40
60
80
100
100-Specificitate
Sen
sib
ilit
ate
Criterii diagnostic SM
0 20 40 60 80 100
0
20
40
60
80
100
100-Specificitate
Sens
ibili
tate
CA
TAD
TAS
Glicemie
Trigliceride
HDL-C
0 20 40 60 80 100
0
20
40
60
80
100
100-Specificitate
Sensi
bilita
te
Non-HDL-C
Col T HDL-C
Acid uric
Fibrinogen
Eozinofile
lotul martor atacirct la bărbaţi cacirct şi la femei icircn concordanţă cu studiile anterioare Evaluarea
fibrinogenului este importantă nu numai icircn SM pentru definirea contextului proinflamator şi
protrombotic ci şi icircn predicţia cardiovasculară la subiecţii normali Studiind populaţiile
leucocitare am obţinut diferenţe semnificative icircn cazul Eo valoarea medie a acestora fiind
semnificativ mai mare icircn lotul cu SM comparativ cu lotul martor (P lt 0001 figura 425B)
Implicarea Eo icircn SM s-a conturat icircn ultimul deceniu aceste celule fiind implicate icircn recrutarea
macrofagelor din ţesutul adipos Experimental s-a constatat că o creştere a Eo apărută ca
urmare a infectării cu helminţi sau stimulare cu IL-5 este urmată de icircmbunătăţirea toleranţei la
glucoză (199) Controlul pe care icircl exercită Eo asupra activării macrofagelor ar putea fi cheia
intervenţiei asupra obezităţii icircn viitorul apropiat(165199) Hiperuricemia asociata frecvent cu
SM este cunoscut ca un factor independent de risc cardiovascular (192 202) In concordanţă
cu aceasta afirmaţie in studiul nostru am constatat ca nivelul seric al acidului uric a fost mai
crescut in lotul cu SM diferenţa semnificativă din punct de vedere statistic (P lt 00001)
Dislipidemia aterogenă din sindromul metabolic şi diabetul zaharat se caracterizează prin
creşterea trigliceridelor şi a Non-HDL-col scăderea HDL-col creşterea numărului de
particule LDL modificate (185190) La pacienţii cu SM am descris un profil aterogenetic
cu risc crescut de evenimente cardiovasculare majore
STUDIUL RECEPTORILOR ACTIVAŢI DE INDUCTORII PROLIFERĂRII
PEROXIZOMILOR-ALPHA IcircN LEUCOCITELE CIRCULANTE
Ipoteza de lucru
Studii experimentale efectuate au arătat că rolul PPARα icircn ateroscleroză derivă din
implicarea acestor receptori icircn limitarea inflamaţiei Plecacircnd de la acest fundament ne-am
propus evidenţierea receptorilor nucleari activaţi de inductorii proliferării peroxizomilor-
alpha (PPARα) prin citometrie de flux icircn leucocitele din sacircngele periferic alături de
evaluarea acestei metode icircn cuantificarea expresiei relative a PPARα ca test diagnostic
precoce al modificărilor metabolice SM Studiul expresiei relative a receptorilor PPARα a
plecat de la premisa că dacă SM se caracterizează printr-un status inflamator cronic nivelul
de expresie a PPARα icircn leucocitele circulante este mai scăzut la pacienţii cu SM comparativ
cu subiecţii normali Referitor la studiul receptorului CD36 am plecat de la presupunerea că
nivelul de expresie al acestui receptor icircn SM este crescut dat fiind importanţa acestui receptor
icircn inflamaţia aterosclerotică Avacircnd icircn vedere efectele receptorilor amintiţi icircn
insulinorezistenţă şi aterogeneză am considerat necesară evaluarea prezenţei receptorului
nuclear PPARα icircn paralel cu studiul receptorului bdquoscavengerrdquo CD-36 prin metoda citometriei
icircn flux Astfel icircn studiul efectuat mi-am propus şi investigarea existenţei unei legături icircntre
nivelul de expresie al receptorilor PPARα şi cel al receptorului CD-36 De asemenea ne-am
icircndreptat atenţia spre stabilirea unor asocieri icircntre componentele clinice şi biochimice ale
sindromului metabolic şi nivelul intensităţilor de fluorescenţă ale PPARα şi CD-36 ca măsură
a expresiei relative a acestor receptori
Material și metodă
Studiul receptorilor PPARα icircn contextul sindromului metabolic s-a desfăşurat icircn
perioada 1012014 -28022014 pe baza metodologiei studiilor de tip caz-martor Am urmărit
identificarea unor diferenţe icircntre expresia receptorilor PPARα la pacienţii cu SM comparativ
cu subiecţii sănătoşi diferenţe care ar putea fi utile icircn diagnosticul precoce al SMRecrutarea
pacienţilor s-a efectuat din pacienţii prezentaţi pentru consultaţie la Cabinetul Individual
ldquoCMI Dr Popa Elenardquo situat icircn strada Ion Creanga din Iaşi Pentru studiul receptorilor
PPARα icircn sindromul metabolic au fost selecţionaţi un număr de 57 de subiecţi 26 de subiecţi
cu SM (constituind lotul SM) şi 31 subiecţi fără SM constituind lotul de control (Lot Non-
SM) Pentru studiul SM pacienţii au fost recrutaţi din masa de populaţie arondată cabinetului
de MF fără istoric de SM diabet zaharat boală cardio-vasculară aflați la primul diagnostic
de SM evaluarea completă a acestora fiind urmată de includerea icircn programul de
management cardiovascular şi metabolic conform Ghidurilor Terapeutice aflate icircn vigoare
Lot SM a) criterii de includerevacircrsta peste 18 ani recrutarea pe baza semnării
Consimţămacircntului liber informatSM nou-diagnosticat pe baza prezenţei a minim trei criterii
de diagnostic pentru SM conform Harmonised I b) criterii de excluderevacircrstă sub 18 ani
refuzul semnării Consimţămacircntului liber informat femei icircn perioada de graviditate sau de
lactaţie SM anterior diagnosticat istoric de diabet zaharat boală cardiovasculară constituită
tratament cu agonişti PPARα (ie fibraţi etc)
Lot martor (Non-SM) a) criterii de includerevacircrsta peste 18 ani recrutarea pe baza
semnării Consimţămacircntului liber informat absenţa diagnosticului de SM b) criterii de
excludere vacircrstă sub 18 ani refuzul semnării Consimţămacircntului liber informat femei icircn
perioada de graviditate sau de lactaţie
Studiul receptorilor PPARα a inclus două subetape
A Studiul componentelor sindromului metabolic conform criteriilor Harmonised I
Evaluarea clinică a participanţilor s-a desfăşurat icircn cadrul Cabinetului de Medicină de
Familie iar determinările hematologice şi biochimice s-au efectuat icircn Laboratorul
Ambulatorului Clinic de Specialitate al Spitalului Clinic de Urgenţă bdquoSf Spiridonrdquo Iaşi
B Evaluarea icircn citometrie de flux a nivelului relativ de expresie a PPARα şi CD36
Studiul receptorilor PPARα s-a desfăşurat icircn Laboratorul de Biologie Moleculară al
Institutului Regional de Oncologie Iaşi prin metoda citometriei icircn flux (19) Nivelul relativ de
expresie al receptorilor nucleari PPARα a fost determinat icircn diferite tipuri de leucocite
circulante polimorfonucleare (PMN) limfocite (Ly) Mo(Mo) şi eozinofile(Eo) Am utilizat o
metodă de citometrie icircn flux optimizată ldquoin houserdquo elaborată icircn cadrul Laboratorului de
Biologie Moleculară al IRO Iaşi Icircn cursul procesului de optimizare am testat mai multe
concentraţii ale anticorpului anti-PPARα 1100 1500 11500 14500 iar icircn urma
determinărilor efectuate şi a analizei statistice concentraţia 1500 a fost considerată optimă
pentru desfăşurarea studiului (tabel XXIII figura 51)
Tabel XXIII Optimizarea concentraţiilor Ac anti-PPARα Diferenţa
mediilor
valorilor
medii
PMN
Diferenţa
mediilor
mediane-
lor
PMN
Diferenţa
mediilor
valorilor
medii
Ly
Diferenţa
mediilor
mediane-
lor
Ly
Diferenţa
mediilor
valorilor
medii
Mo
Diferenţa
mediilor
mediane-
lor
Mo
Diferenţă 0 1300 1600 100 100 700 750
normal - 1100 650 1050 1050 1350 450 900
patologic 1500 2850 2750 3800 3600 2850 2400
11500 -1050 800 3500 3300 2250 1800
14500 2200 2150 1300 1100 2950 2850
AOptimizare
BRepetabilitate
Figura 51 Optimizarea concentraţiei anticorpului anti-PPARα
Icircn concordanţă cu literatura de specialitate icircn cercetarea efectuată intensitatea medie
de fluorescenţă (MFI) a fost utilizată ca măsură pentru evaluarea expresiei celulare a
receptorilor PPARα (212) Un exemplu de analiză a probelor este reprezentat icircn figura 52
Figura 52 Exemplu de analiză flowcitometrică pentru receptorul nuclear PPARα Graficul din stacircnga reprezintă distribuţia leucocitelor iar cel din dreapta ilustrează distribuţia
intensităţii de fluorescenţă pentru populaţiile de celule selectate
Intensitatea Medie a Fluorescenţei (MFI) a CD36 ca o măsură a nivelului relativ de
expresie a acestor receptori la nivelul membranei Mo a fost detectată printr-o metodă
convenţională pentru marcare de suprafaţă şi evaluare pe bază de citometrie icircn flux folosind
aceleaşi probe de sacircnge cu EDTA cu focalizare pe Mo şi utilizacircnd CD14 ca marker specific
pentru Mo (figura 53)
Figura 53Analiza
flowcitometrică
pentru marcajul
CD14 - CD36
Rezultate
Icircn cele două loturi au fost incluşi icircn studiu un număr de 57 de participanţi care au fost
investigaţi din punct clinic şi paraclinic Vacircrsta subiecţilor incluşi icircn studiu a fost cuprinsă
icircntre 18 şi 79 ani iar vacircrsta medie calculată a avut valoarea de 4805 plusmn 1587 ani Pentru sexul
masculin vacircrsta medie este de 4925plusmn1617 ani iar pentru sexul feminin 4689 plusmn1 5ani
diferenţa obţinută icircntre vacircrstele pacienţilor fiind statistic nesemnificativă (P = 085)
Analizacircnd vacircrstele subiecţilor din cele două loturi am observat că vacircrsta medie a pacienţilor
cu SM (5476 plusmn 1183 ani) a fost semnificativ mai mare (t-test P = 0003) decacirct icircn lotul
martor (4258 plusmn 169 ani) Pentru diagnosticul sindromului metabolic am calculat scorul de
SM bazacircndu-ne pe criteriile Harmonised I Conform criteriilor diagnostice din cei 57 de
subiecţi investigaţi un număr de 26 participanţi (46) au fost incluşi icircn lotul cu SM (Lot
SM) iar 31 de subiecţi(54) nu au prezentat acest sindrom constituind lotul martor (Lot
Non-SM) Din punct de vedere al repartiţiei pe sexe nu au existat diferenţe statistic
semnificative raportul bărbaţifemei fiind de 0961 Din totalul celor 28 de bărbaţi incluşi icircn
studiu 4285 (12 bărbaţi) au icircntrunit cel puţin trei criterii diagnostice pentru SM fiind
incluşi icircn lotul SM Icircn acelaşi timp 14 femei reprezentacircnd 4827 din subiecţii de sex
feminin au icircntrunit condiţiile pentru includerea icircn lotul pacienţilor cu SM Valoarea medie
determinată pentru scorul de SM a arătat prezenţa unor valori semnificativ statistic mai mari
din punct (t-test P lt 00001) icircn lotul SM (769plusmn176) comparativ cu lotul martor (174 plusmn
184) Am studiat comparativ media valorilor măsurate ale criteriilor componentelor SM
Analiza statistică a arătat valori semnificativ statistic mai mari pentru CA TG glicemie TAS
şi TAD (plt0001) icircn lotul SM comparativ cu lotul normal Concomitent calculul statistica
evidenţiat o scăderea semnificativă a HDL-colesterolului icircn lotul cu SM comparativ cu
subiecţii din lotul martor (Non-SM) Aplicacircnd testul z am comparat ponderea pacienţilor
diagnosticaţi cu HTA dislipidemie şi tulburări ale metabolismului glucidic icircn lotul SM versus
lot Non-SM şi am constatat prezenţa acestor afecţiuni icircntr-un procent mai mare semnificativ
statistic icircn lotul SM ((plt0001)
Utilizacircnd testul t Student am calculat diferenţele statistice şi icircntre alți parametri
studiaţi care sunt factori de risc cardio-vascular dar care nu sunt componente ale SM Icircn lotul
cu SM valorile acidului uric fibrinogenului Col total Non-HDL-col şi LDL-col au fost
semnificativ mai mari comparativ cu lotul martor (tabel XXVI) Analizacircnd valorile medii ale
populaţiilor de leucocite am identificat doar pentru populaţia de Eo diferenţe statistice icircntre
cele două loturi numărul Eo icircn lotul SM fiind semnificativ mai mare decacirct icircn lotul martorTot
pentru caracterizarea celor două loturi am analizat prezenţa antecedentelor
heredocolaterale (AHC) de diabet zaharat boala cardiovasculară şi dislipidemie pentru toţi
subiecţii investigaţi Astfel existenţa AHC de HTA a fost declarată de 2580 din subiecţii
incluşi icircn lotul martor respectiv de 5384 din numărul pacienţilor cu SM Antecedentele
heredocolaterale de dislipidemie au fost prezente la 3461 din pacienţii cu SM icircn timp ce icircn
lotul martor anamneza a evidenţiat aceste antecedente la 3548 din subiecţi
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα
Icircn cercetarea desfăşurată am utilizat intensitatea medie de fluorescenţă (MFI) ca
măsură a nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn leucocitele studiate Pentru
populaţiile de leucocite analiza computerizată a probelor luate icircn studiu a furnizat valori
pentru MFI a receptorilor PPARα icircn funcţie de cantitatea de anticorpi anti-PPARα marcaţi cu
fluorocrom care se leagă de aceste celule şi apoi sunt captaţi de citometru (figura 59)
A Lot Non - SM
B Lot SM
Figura 59 Analiza flowcitometrică pentru receptorii PPARα icircn leucocite A lot normal B lot SM
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Mo
Analiza probelor efectuată conform protocolului de lucru descris a arătat prezenţa
PPARα icircn Mo recoltate din sacircngele tuturor subiecţilor incluşi icircn această cercetare Pentru toţi
participanţii investigaţi analiza MFI a Ac anti - PPARα icircn populaţia de Mo (Mo) a arătat un
interval de variaţie icircntre [786 395] Valoarea medie a nivelului de expresie relativă a PPARα
calculată pentru Mo a fost de 23210 plusmn7860 Pentru ambele loturi de studiu pacienţilor cu
SM testul Testul Shapiro-Wilk a arătat distribuţia normală a valorilor obţinute pentru nivelul
de expresie al PPARα icircn Mo
Tabel XXVIII Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn Mo
Lot SM Lot Non-SM
N 26 31
Media 22819 23538
SD 5819 7717
Mediana 22400 22600
Minimum 12800 78600
Maximum 35800 37900
Percentila 25 18300 18300
Percentila 75 26200 30350
Pentru pacienţii din lotul SM valoarea medie a MFI icircn Mo a fost de 22819 plusmn 5880 iar
pentru lotul martor s-a calculat o valoare medie a MFI a Ac anti-PPARα de 23538 plusmn 7717
Distribuţia statistică a frecvenţei valorilor MFI obţinute pentru nivelul de expresie a PPARα
icircn Mo subiecţilor din cele două loturi a fost reprezentată icircn figura 511
Figura 511 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti-PPARα icircn Mo
Sub forma unei diagrame de control Shewhart am reprezentat variaţia intensităţii medii de
fluorescenţă pentru anticorpii anti-PPARα icircn MoVariaţia nivelului de expresie relativă a
receptorilor PPARα icircn Mo subiecţilor studiaţi este ilustrată icircn fig 512 513
Figura 512 Lot SM Variaţia
expresiei relative a PPARα icircn Mo
Număr pacienţi
26
Minim 128
Maxim 358
Media 22819
DS 5819
25 din 26 valori ale MFI s-au icircncadrat
icircn intervalul Media plusmn 2DS
Figura 513 Lot Non-SM Variaţia
expresiei relative a PPARα icircn Mo
Număr pacienţi 31
Minimum 786
Maximum 379
Media 23538
DS 7717
Cu excepţia unei singure
determinări valorile calculate s-au
icircncadrat icircn Media plusmn 2DS
Utilizacircnd testul parametric t-Student pentru variabilele cu distribuţie normală am
comparat valoarea medie a intensităţii de fluorescenţă a Ac anti-PPARα icircn lotul cu SM versus
subiecţi fără SM (Lot Non-SM) Analiza statistică efectuată nu a identificat diferenţe icircntre
50 100 150 200 250 300 350 400 450
0
5
10
15
20
25
30
35
MFI anti-PPAR a
Frecv
enta
relati
va (
)
Lot SM
0 50 100 150 200 250 300 350 400 450 500
0
5
10
15
20
25
30
35
MFI anti-PPAR a
Frecv
enta
relati
va (
)
Lot martor
1 6 11 16 21 26 31
0
50
100
150
200
250
300
350
400
450
MFI
anti-
PPAR
a
2282
1106
3458
518
4046
Media
LCI
LCI
1 6 11 16 21 26 31 36
-100
0
100
200
300
400
500
MFI a
nti-PP
AR
a
2354
810
3897
39
4669LCS
LCI
Media
cele două loturi icircn ceea ce priveşte expresia PPARα la nivelul Mo circulante (t- Test P=
069)
Studiul receptorilor PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de AHC şi dislipidemie
Nivelul de expresie al receptorilor PPARα α icircn Mo tinde să fie mai scăzut la subiecţii
cu AHC de HTA comparativ subiecţii care nu au declarat AHC de HTA (P= 006 fig 515)
AHC HTA
Număr 22
Mediana 19950
Percentila 25 17800
Percentila 75 22700
AHC HTA absente
Număr 35
Mediana 24800
Percentila 25 19025
Percentila 75 31700
Figura 515 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Mo funcţie de AHC de HTA
Nu s-au calculat diferenţe semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor
PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de dislipidemie atunci cacircnd aceştia au fost comparaţi cu
subiecţii fără AHC de tulburări ale metabolismului lipidic (t- Test P= 020)
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn limfocite
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn populaţia de Ly a
demonstrat prezenţa receptorilor PPARα icircn Ly tuturor subiecţilor studiaţi Pentru toţi
participanţii investigaţi analiza MFI a Ac anti - PPARα icircn populaţia de Ly a relevat un
interval de variaţie icircntre [748 314] iar valoarea medie a MFI a fost de 18058 plusmn 5600
Pentru ambele loturi aplicarea testului Shapiro-Wilk a evidenţiat distribuţia normală a
valorilor determinate pentru nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Ly Pentru
pacienţii cu SM valoarea medie a MFI determinată pentru expresia PPARα icircn populaţia de
Ly a fost de 18178 plusmn 61 16 iar pentru lotul martor a fost de 16800 plusmn 5229
Tabel XXX Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn limfocite
Lot SM Lot Non-SM
N 26 31
Media 181781 179574
SD 611694 522907
Mediana 165000 168000
Minimum 81300 74800
Maximum 314000 301000
Percentila 25 13400 - 145750
Percentila 75 21800 21700
Distribuţia frecvenţei valorilor MFI a Ac anti-PPARα icircn Ly este redată icircn figura 518
Figura 518 Distribuţia frecvenţelor relative a MFI a Ac anti-PPARα icircn Ly
94 din determinările efectuate pentru determinarea nivelului de expresie relativă al
MFI
ant
iPPA
R
a_Mo
190
200
210
220
230
240
250
260
270
280
DA NU
AHC HTA
P=006
50 89 128 167 206 244 283 322 361 400
0
5
10
15
20
25
30
35
MFI anti-PPAR a
Frecv
enta
relati
va (
)
Lot SM
0 50 100 150 200 250 300 350
0
5
10
15
20
25
30
35
40
MFI anti-PPAR a
Frec
venta
relat
iva (
)
Lot Non-SM
receptorilor PPARα icircn limfocitele subiecţilor cu SM s-au icircncadrat icircn intervalul Media plusmn 2DS
Figura 5 19 Lot SM Variaţia expresiei
relative a PPARα icircn Ly
Număr pacienţi 26
Minimum 813
Maximum 31400
Media 18178
Deviaţia Standard 6116
25 valori s-au icircncadrat icircn Media plusmn 2DS
Pentru lotul Non-SM diagrama de control (figura 520) a arătat toate valorile
determinate pentru lotul Non-SM se icircncadrează icircntre LCS şi LCI
Figura 520 Lot Non -SM Variaţia
expresiei relative a PPARα icircn Ly
Număr pacienţi 31
Minimum 748
Maximum 30100
Media 179574
Deviaţia Standard 5229
96 din valori icircncadrate icircn Media plusmn 2DS
Aplicarea testului t-Student pentru valorile medii ale intensităţii de fluorescenţă ale
PPARα icircn Ly nu a arătat existenţa unei diferenţe statistic semnificative icircntre lotul cu SM şi
lotul martor(t- Test P= 088)
Analiza receptorilor PPARα icircn Ly subiecţilor cu AHC de HTA şi dislipidemie
Studiind populaţiile de Ly la subiecţii care au prezentat AHC de hipertensiune
arterială analiza flowcitometrică a relevat existenţa unor valori mai mici pentru MFI la aceşti
subiecţi comparativ cu cei fără AHC de HTA (fig 522) deşi scăderea observată nu a
icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică (t- Test P = 009)
AHC HTA
Număr 22
Mediana 16000
Percentila 25 12700
Percentila 75 17100
AHC HTA absenţe
Număr 35
Mediana 18700
Percentila 25 14900
Percentila 75 23175
Figura 522 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Ly funcţie de AHC de HTA
Nu am calculat diferenţe statistic semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor
PPARα icircn populaţiile de Ly ale subiecţilor la care am identificat AHC de dislipidemie
comparativ cu cei care nu au declarat antecedente familiale de dislipidemie (t- Test P= 051)
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn neutrofile (PMN)
Analiza flowcitometrică a evidenţiat prezenţa PPARα icircn PMN recoltate din sacircngele
venos al tuturor participanţilor la studiu Pentru toţi subiecţii investigaţi analiza MFI a Ac -
PPARα icircn populaţia de PMN a relevat un interval de variaţie de [163419] iar valoarea medie
a MFI pentru Ac anti-PPARα a fost de 26392 plusmn 7064 Testul Shapiro-Wilk a arătat o
distribuţie normală a valorilor intensităţii medii de fluorescenţă a anticorpilor anti-PPARα atacirct
icircn lotul pacienţilor cu SM cacirct şi icircn lotul martor
1 6 11 16 21 26 31
-50
0
50
100
150
200
250
300
350
400
MFI
anti-
PPAR
a
1818
595
3041
-17
3653
Media+2DS
Media- 2DS
1 6 11 16 21 26 31 36
0
50
100
150
200
250
300
350
MFI
ant
i-PPA
R
a
1796
750
2841
227
3364
Media+2DS
Media
Media- 2DS
MFI
anti-
PPAR
a Ly
130
140
150
160
170
180
190
200
210
DA NU
AHC HTA
P=009
Tabel XXXII Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn PMN
Lot SM Lot Non-SM
N 26 31
Media 26273 26480
SD 6915 7088
Mediana 25900 25500
Minimum 17200 16300
Maximum 39500 41900
Percentila 25 19800 19600
Percentila 75 30500 31500
Icircn cele două loturi distribuţia frecvenţei valorilor nivelului relativ de expresie a
receptorilor PPARα icircn PMN a fost reprezentată sub formă de histograme (fig 525)
Figura 525 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti-PPARα icircn PMN
Pentru cei 26 de pacienţi din lotul cu SM a valoarea medie a nivelului de expresie
relativă a receptorilor PPARα icircn PMN a fost de 26273 plusmn 6915 Studiind diagrama Shewhart
din figura 526 se observă că toate valorile obţinute pentru nivelul de expresie relativă
PPARα icircn PMN investigate se icircncadrează icircntre limitele definite de valorile medii plusmn 2DS
Figura 526 Lot SM
Variaţia expresiei relative a PPARα icircn
PMN
Număr pacienţi 26
Minimum 17200
Maximum 39500
Media 26273
Deviaţia Standard 6915
Valorile MFI icircncadrate icircn Media plusmn 2DS
Pentru lotul martor valoarea medie calculată a MFI a anticorpilor anti-PPARα a fost de
26480 plusmn 7088 peste 95 din valorile MFI fiind cuprinse icircn Media plusmn 2DS (figura 527)
Figura 527 Lot Non-SM Variaţia expresiei
relative a PPARα icircn PMN
Număr pacienţi 31
Minimum 16300
Maximum 41900
Media 26480
Deviaţia Standard 7088
30 valoriicircn Media plusmn 2DS
Pentru PMN analiza statistica nu a arătat existenţa unei diferenţe statistic semnificative icircntre
nivelul de expresie relativă a PPARα la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii din lotul
Non-SM (t- Test P= 090) Studiind populaţiile de PMN la subiecţii care au prezentat AHC
de HTA nu am calculat o diferenţă statistic semnificativă icircntre expresia receptorilor PPARα
la subiecţii cu istoric familial de hipertensiune arterială comparativ cu cei pentru care nu s-au
notat AHC de HTA (t- Test P= 013)De asemenea am identificat diferenţe icircntre nivelul de
expresie al PPARα icircn PMN subiecţilor care prezentau AHC de dislipidemie comparativ cu
cei fără AHC de dislipidemie (t- Test P= 017)
50 100 150 200 250 300 350 400 450 500
0
5
10
15
20
25
30
35
MFI anti-PPAR a
Frecve
nta rel
ativa (
)
Lot SM
50 100 150 200 250 300 350 400 450 500
0
5
10
15
20
25
30
MFI anti-PPAR a
Frecv
enta
relati
va (
)
Lot Non-SM
1 6 11 16 21 26 31
0
50
100
150
200
250
300
350
400
450
500
MFI
anti-
PPA
R
a
2627
1244
4010
553
4702
Media + 2DS
Media - 2 DS
Media
1 6 11 16 21 26 31 36
0
50
100
150
200
250
300
350
400
450
500
MFI
anti-
PPAR
a
2648
1230
4066
522
4774
Media+ 2DS
Media - 2DS
Media
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile Tabel XXXIV Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn Eo
Lot SM Lot Non-SM
N 26 31
Mediaplusmn SD 141057 plusmn 47604 172209 plusmn 37565
Mediana 142450 171300
Minimum 35000 68500
Maximum 233700 250600
Percentila 25 119300 153225
Percentila 75 169700 199550
Am studiat nivelul relativ de expresie a receptorilor PPARα icircn Eo iar rezultatele au
fost figurate sub forma de histograme (figura 532)
Figura 532 Distribuţia frecventelor relative ale valorilor MFI anti- PPARα icircn Eo
Din diagrama Shewhart (figura 533) se observă că toate valorile determinate pentru
nivelul de expresie relativă a PPARα icircn Eo pentru lotul SM s-au icircncadrat icircn [Media plusmn 3 DS]
peste 90 din determinări fiind cuprinse icircn [Media plusmn 2 DS] iar icircn [Media plusmn 1 DS] sunt
incluse peste 65 din valorile MFI
Figura 533 Lot SM
Variaţia expresiei relative a PPARα icircn Eo
Număr pacienţi 26
Minimum 35000
Maximum 233700
Media 141057
Deviaţia Standard 47604
24 valori icircncadrat eicircn [Media plusmn 2DS]
Pentru subiecţii incluşi icircn lotul martor analiza diagramei (figura 534) a arătat că
toate cele 31 de valori ale MFI pentru PPARα icircn Eo se icircncadrează icircn [Media plusmn 3DS] iar 30
dintre acestea se icircncadrează icircn [ Media plusmn 2 DS]
Figura 534 Lot Non -SM
Variaţia expresiei relative a PPARα icircn Eo
Număr pacienţi 31
Minimum 685
Maximum 2506
Media 172209
Deviaţia Standard 375 65
30 valori icircncadrate icircn [Media plusmn 2DS]
Comparacircnd subiecţii cu SM cu cei din lotul martor am observat o scădere
semnificativă statistic a MFI a Ac anti - PPARα icircn Eo pentru pacienţiir cu SM ( figura 535)
PPARα Eo Lot Non-SM
Număr 31
Mediana 171300
Percentila 25 152325
Percentila 75 199550
PPARα Eo Lot SM
Număr 26
Mediana 142450
Percentila 25 119300
Percentila 75 169700
Figura 5 35 Comparaţie icircntre nivelul de expresie a PPARα icircn Eo
0 500 1000 1500 2000 2500 3000
0
10
20
30
40
50
MFI anti-PPAR a
Frecvent
a relativa
()
Lot SM
400 800 1200 1600 2000 2400 2800
0
5
10
15
20
25
30
35
40
45
MFI anti-PPAR a
Frecenta
relativa
()
Lot Non-SM
1 6 11 16 21 26 31
-500
0
500
1000
1500
2000
2500
3000
MFI a
nti-PP
AR
a
14106
4765
23447
94
28117
Media + 2DS
Media- 2DS
LCI
LCS
1 6 11 16 21 26 31 36
500
1000
1500
2000
2500
3000
MFI an
ti-PPA
R a
17221
9708
24734
5951
28490
LCI
Media-2DS
Media
Media +2 DS
LCS
1200
1300
1400
1500
1600
1700
1800
1900
Lot SM Lot Non-SM
P=00072
Cu ajutorul curbei ROC am evaluat posibilitatea utilizării MFI a Ac anti - PPARα icircn
Eo ca marker pentru diagnosticul SM Valoarea MFI a Ac anti - PPARα icircn Eo care prezice cu
cea mai mare acurateţe prezenţa SM a fost de 1533 (punctul de ldquocut-offrdquo) pentru care am
calculat o sensibilitate de 5652 şi o specificitate de 7778 Calculul ariei AUC a furnizat
valoarea de 0663 şi deci determinarea parametrului MFI anti- PPARα icircn Eo are valoarea
unui test cu acurateţe redusatilde icircn diagnosticul SM Studiind expresia PPARα icircn Eo la subiecţii
care au prezentat AHC de HTA am observat o scădere semnificativă statistic (P = 00023) a
expresiei PPARα la subiecţii cu istoric familial de HTA comparativ cu subiecţii fatilderatilde AHC de
HTA (figura 537)
AHC HTA
Număr 22
Mediana 148800
Percentila 25 116425
Percentila 75 170750
AHC HTA absente
Număr 35
Mediana 170850
Percentila 25 143700
Percentila 75 195000
Figura 537 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Eo funcţie de AHC de HTA
Studiind subiecţii cu AHC declarate de dislipidemie nu am identificat diferenţe icircntre
nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Eo subiecţilor cu AHC de dislipidemie
comparativ cu cei care nu au declarat prezenţa AHC de dislipidemie (t - Test P = 067)
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor CD36
Am studiat expresia receptorilor CD36 icircn Mo subiecţilor incluşi icircn studiu
Lot Non - SM
BLot SM
Figura 539 Analiza flowcitometrica pentru receptorii CD36 icircn Mo
Pentru toţi participanţii la studiu valorile MFI au variat icircn intervalul [817 6933] iar
valoarea medie a MFI a Ac anti-CD36 a fost de 397133 plusmn 120902 Tabel XXXVII Statistică descriptivă pentru a CD36 icircn Mo
Lot SM Lot Non-SM
Media 429034 370377
Deviatia Standard 109051 125514
Mediana 411000 362800
Minimum 266400 81700
Maximum 693300 616800
Percentila 25 346200 273750
Percentila 75 469000 453300
Distribuţia frecvenţelor relative a MFI au fost prezentate sub formă histogramelor
Figura 541 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti - CD36 icircn Mo
MFI
ant
i-PPA
R a Eo
1000
1100
1200
1300
1400
1500
1600
1700
1800
1900
DA NU
AHC HTA
P=00023
1000 2000 3000 4000 5000 6000 7000 8000
0
5
10
15
20
25
MFI anti-CD36
Frecve
nta rela
tiva (
)
Lot SM
0 1778 3556 5333 7111
0
5
10
15
20
25
30
35
MFI anti-CD36
Frecve
nta rel
ativa (
)
Lot Non - SM
Referitor la lotul SM 92 din valorile MFI a Ac anti- CD36 s-au icircncadrat icircn
intervalul Media plusmn 2 DS (figura 542) iar pentru lotul martor peste 90 dintre acestea icircn
Media plusmn 2 DS (figura 543)
Figura 542 Lot SM
Variaţia MFI anti-CD36 icircn Mo
Număr pacienţi 26
Minimum 2664
Maximum 6933
Media 429034
Deviaţia Standard 109051
Figura 543 Lot Non -SM
Variaţia MFI anti- CD36 icircn Mo
Număr 31
Minimum 81700
Maximum 616800
Media 370377
Deviaţia Standard 125514
Comparacircnd subiecţii cu SM cu cei din lotul normal am constatat o tendinţă de creştere
a expresiei CD36 icircn lotul cu SM((t - Test P= 0067)
MFI anti - CD36 Lot Non-SM
Număr 31
Mediana 3628
Percentila 25 2737
Percentila 75 4533
MFI anti - CD36 Lot SM
Număr 26
Mediana 4110
Percentila 25 3462
Percentila 75 4690
Figura 544 Comparaţie icircntre cel două loturi privind MFI anti - CD36 icircn Mo
Referindu-ne la subiecţii cu AHC de HTA am observat o tendinţă de creştere a
valorilor MFI anti-CD36 comparativ cu cei care nu au avut AHC de HTA (t - Test P = 0 08)
AHC HTA
Număr 22
Mediana 442800
Percentila 25 355275
Percentila 75 519475
AHC HTA absenţe
Număr 35
Mediana 377400
Percentila 25 316900
Percentila 75 443400
Figura 545 Comparaţie icircntre expresia CD36 icircn Mo funcţie de AHC de HTA
Nu s-au calculat diferenţe semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor
PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de dislipidemie atunci cacircnd aceştia au fost comparaţi cu
subiecţii fără AHC de dislipidemie (t - Test P=031)
Corelaţii icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα si CD36
Studiind valorile intensităţii medii de fluorescenţă a Ac anti-PPARα icircn Mo Ly şi
PMN am observat că nivelul de expresie celularatilde a PPARα icircn Mo Ly şi PMN sunt corelate
puternic pozitiv atacirct icircn lotul SM cacirct şi icircn lotul martor(fig547 548)
1 6 11 16 21 26 31
0
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
Pacienti
MFI a
nti-CD
36
42903
21093
64714
10188
75619
LCI
Media
LCS1 6 11 16 21 26 31 36
-1000
0
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
MFI a
nti- C
D36
37038
11935
62141
-616
74692Media + 2 DS
Media
Media - 2 DS
3200
3400
3600
3800
4000
4200
4400
4600
4800
Lot SM Lot Non-SM
P = 00676
MFI
anti-
CD36
3400
3600
3800
4000
4200
4400
4600
4800
5000
DA NU
AHC HTA
P = 008
Figura 547 Studiul relatiilor dintre
receptorii PPARα icircn SM A Mo vs PMN B Mo vs Ly
C PMN vs Ly Graficul ilustrează coeficienţii r P dreapta de
regresie (linia centrala) intervalul de icircncredere
95 şi intervalul de predicţie 95
Figura 548 Corelaţii icircntre receptorii PPARα icircn lotul
martor
A Mo vs PMN
B Mo vs Ly
C PMN vs Ly
Tot pentru lotul SM cacircnd am evaluat relaţia dintre nivelul de expresie relativă a
receptorilor PPARα icircn Eo şi nivelul de expresie relativa a receptorilor CD 36 am obţinut o
corelaţie negativă (r = - 05 P = 001) (fig 549 A)
50 100 150 200 250 300 350 50
100
150
200
250
300
350
400
450
500
PPARα Ly
PPARα PMN
y = 56641 + 1159 x r = 086 P lt 0001
C
50 100 150 200 250 300 350 400 0
50
100
150
200
250
300
350
PPARα Mo
PPARα Ly
y = 36665 + 0607 x r = 090 P lt 0001
B
150 200 250 300 350 400 450 0
50 100 150 200 250 300 350 400 450 500
PPARα PMN
PPARα Mo
y = 2505 + 0879 x r = 081 P lt 0001
A
50 100 150 200 250 300 350
50 100 150 200 250 300 350 400 450 500
PPARα Ly
PPARα PMN
y = 95668 + 0919 x r = 081 P lt 0001
C
100 150 200 250 300 350 400
0
50
100
150
200
250
300
350
400
PPARα Mo
PPARα Ly
y = -7503 + 0829 x r = 079 P lt 0001
B
100 150 200 250 300 350 400
50
100
150
200
250
300
350
400
450
500
PPARα Mo
PPARα PMN
y = 61384 + 0882 r = 074 P lt 0001
A
Figura 549 Corelaţii icircntre expresia PPARα icircn Eo şi alte tipuri de receptori investigaţi A PPARα Eo şi CD 36 (Lot SM) B PPARα Eo şi PPARα Mo( Lot Non-SM)
Icircn lotul martor am identificat o asociere moderată pozitivă (r = 038 P = 0033) icircntre
nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Eo şi Mo (figura 549B) corelaţie absentă icircn
lotul pacienţilor cu SM
Corelaţii dintre receptorii studiaţi şi componentele sindromului metabolic
Icircn lotul de control analiza statistică a relevat faptul că icircntre circumferinţa
abdominală (CA ) şi nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Mo Ly şi PMN există o
corelaţie inversă adică scăderea expresiei PPARα la nivelul acestor populatii celulare ar fi
icircnsoţită de creşterea CA (figura 550
Figura 550Corelaţii dintre receptorii
PPARα si CA A Mo B Ly C PMN
La pacienţii cu SM am notat o corelatie moderată negativă statistic semnificativă
icircntre TG şi valorile MFI a Ac anti- PPARα icircn Mo şi Ly( fig 551)
150 200 250 300 350 400 450 50
60
70
80
90
100
110
PPARα PMN
CA r = - 040 P = 0024
C
50 100 150 200 250 300 350 50
60
70
80
90
100
110
PPARα Ly
CA r = - 046 P = 0009
B
50 100 150 200 250 300 350 400 50
60
70
80
90
100
110
PPARα Mo
CA r = - 042 P = 0017
A
50 100 150 200 250 300 350 400 500
1000
1500
2000
2500
3000
PPARα Mo
PPARα Eo
r = 038 P = 0033
B
0 500 1000 1500 2000 2500 1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
PPARα Eo
CD36
r = 050 P = 0010
A
Figura 551 Lot SM Corelaţie icircntre expresia PPARα şi TG (A Mo B Ly)
Analizand corelatia dintre receptorii CD36 si valorile TA la pacientii cu SM am observat
o asociere pozitivă asteptată intre TAD si nivelul de expresie al receptorilor CD36 (fig 552)
Figura 552 Lot SM Corelaţii icircntre expresia
receptorilor CD36 şi valorile tensiunii arteriale
diastolice
Studiind corelaţiile dintre receptorii PPARα şi HDL-col la subiecţii din lotul martor am
notat o asociere pozitivă icircntre expresia PPARα icircn Mo şi Ly cu HDL-col (fig 553)
Figura 553 Lot martor Corelaţii icircntre HDL-col şi expresia PPARα icircn Mo(A) Ly(B)
Icircn lotul normal am evidenţiat corelaţii pozitive moderate dar semnificative statistic icircntre
CA şi valorile TAS (r = 062 P lt 0001) respectiv TAD (r = 050 P=0004) precum şi icircntre
CA şi glicemia subiecţilor normali (r = 052 P = 0003) Aceste date icircmpreună cu relaţia
invers proporţională identificată icircntre HDL-col şi CA (r = 050 P = 001) susţin validitatea
acestui studiu Icircn lotul subiecţilor cu SM am observat o corelaţie moderat pozitivă icircntre
expresia PPARα icircn populaţiiile de Mo şi Eo şi concentraţia a HDL-col (fig 554)
B
100 150 200 250 300 350 20
30
40
50
60
70
80
90
100
PPARα Ly
HDL-col-(mgdl)
r = 036 P = 0046
A
150 200 250 300 350 400 20
30
40
50
60
70
80
90
100
PPARα Mo
HDL-col-(mgd)l
r = 035 P = 005
70 75 80 85 90 95 100 1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
TAD (mmHg)
CD36
r = 048 P = 0013
B
50 100 150 200 250 300 350 -100
0
100
200
300
400
500
PPARα Ly
TG(mgdl)
r = - 042 P = 003
A
50 100 150 200 250 300 350 400 -100
0
100
200
300
400
500
PPARα Mo
TG ( mgdl) r =- 0 43 P = 0027
Figura 554 Corelaţii icircn SM icircntre HDL-col şi expresia PPARα icircn Mo (A) şi Eo(B)
Corelaţii icircntre nivelul de expresie relativă a PPARα şi markeri ai disfuncţiei
endoteliale şi inflamaţiei cronice
Deşi nu a icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică am reţinut corelaţia invers
proporţională (r = - 0331 P = 006) dintre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα
icircn PMN şi concentraţia serică a Non-HDL-colesterolului
Studiind relaţiile dintre parametri icircn lotul de pacienţi cu SM am observat o corelaţie
moderată invers proporţională icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Eo şi
acidul uric seric (figura 555 A) corelaţie absentă la subiecţii fără SM
Figura 555 Lot SM corelaţia dintre expresia PPARα icircn Eo şi acidul uric (A) respectiv
PPARα şi fibrinogen (B)
Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P=008) am notat pentru
pacienţii cu SM corelaţia invers proporţională dintre expresia PPARα icircn Eo şi concentraţia
serică a fibrinogenului ( figura 555B)
V5 Discuţii
Icircn cadrul lucrării de doctorat am studiat nivelul de expresie relativă a PPARα icircn
leucocitele pacienţilor cu SM comparativ cu cea a subiecţilor normali Expresia PPARα a fost
studiată icircn paralel cu cea a CD36 glicoproteină exprimată pe suprafaţa a numeroase celule
din organismul uman inclusiv pe cea a Mo şi macrofagelor Prin funcţia sa de receptor pentru
particulele oxidate de LDL CD36 cunoscut ca bdquoscavenger receptorrdquo de clasa B sau
bdquotrombospodin receptorrdquo contribuie la dezvoltarea inflamaţiei de la nivel endotelial şi
formarea plăcii de ateroscleroză Referitor la studiul PPARα icircn Eo icircn sindromul metabolic
menţionăm că studiul nostru este primul care arată că nivelul de expresie a proteinei PPARα
icircn Eo măsurat prin citometrie icircn flux este semnificativ mai redus la pacienţii care sunt
diagnosticaţi cu acest sindrom De asemenea icircn lotul cu SM cercetat icircn cadrul studiului
receptorilor PPARα numărul Eo circulante a fost semnificativ mai crescut la pacienţii cu SM
B
0 500 1000 1500 2000 2500 200
250
300
350
400
450
PPARα Eo o
Fibrinogen mgdl
r =- 036 P = 008
0 500 1000 1500 2000 2500 1 2 3 4 5 6 7 8 9
10 11
PPARα Eo_
Acid uric(mgdl) r = 048 P = 0014 A
0 500 1000 1500 2000 2500 10
20
30
40
50
60
70
80
PPARα Eo
HDL(mgdl)
r = 044 P = 0024
B
100 150 200 250 300 350 400 10
20
30
40
50
60
70
80
PPARα Mo
HDL( mgdl)
r = 046 P = 0019
A
(P = 003) Aceste constatări conduc la ipoteza că Eo joacă un rol special icircn mecanismele
patogenice declanşate icircn sindromul metabolic şi că receptorii PPARα sunt importanţi icircn
implicarea Eo icircn obezitate şi insulinorezistenţă Creşterea numărului de Eo circulante este
urmată de eliberarea mediatorilor proinflamatori iar reducerea expresiei PPARα icircn Eo
determină perturbarea mecanismelor de control al inflamaţiei cu exacerbarea cascadei
proinflamatorii Consecutiv se agravează disfuncţia endotelială şi se accelerează progresia
leziunilor de ateroscleroză Extrapolacircnd aceste ipoteze putem spune că asocierea raportată
dintre boala ischemică coronariană şi Eo poate fi şi consecinţa exacerbării cascadei
proinflamatorii de la nivel vascular produsă datorită scăderii expresiei PPARα icircn Eo iar
creşterea numărului de Eo circulante poate reprezenta o adaptare a organismului uman care
icircncearcă să suplinească deficitul de receptori PPARα Analizacircnd curba ROC pentru
intensităţile medii de fluorescenţă determinate pentru anticorpii anti- PPARα icircn Eo am
obţinut pentru acest biomarker o sensibilitate a testului de 565 şi o specificitate de 778
pentru un punct de cut-off de 1533 ( figura 536 ) Deşi aria AUC (Aria under the curve) egală
cu 0663 icircncadrează acest test ca avacircnd o acurateţe redusă observăm că că această valoare
este apropiată de determinările AUC pentru alţi factori (fibrinogen raport de aterogenitate
acid uric non- HDL-colesterol) cunoscuţi ca fiind implicaţi icircn aterogeneză şi inflamaţia
cronică (figura 431) Aceste remarci alături de faptul că icircn studiul receptorilor PPARα icircn
leucocite am inclus subiecţi la primul diagnostic de SM creează premisa integrării
determinării expresiei relative a receptorilor PPARα icircn diagnosticul complex al sindromului
metabolic Putem spune că icircn final studiul expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofilele
circulante se dovedește a fi util icircn diagnosticul precoce la nivel molecular al SM permiţacircnd
identificarea timpurie a unor indivizi cu risc cardiometabolic crescut Astfel intervenţia
precoce asupra subiecţilor cu deficit de PPARα icircn Eo contribuie la managementul eficient al
afecţiunilor degenerative icircn care inflamaţia cronică icircndeplineşte un rol primordial Referitor
la populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările efectuate prin citometrie de flux nu au
arătat existenţa unor diferenţe statistice icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα
la subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali Rezultatele noastre pot fi
consecinţa caracteristicilor loturilor studiate (icircn studiul nostru au fost incluşi subiecţi recrutaţi
la primul diagnostic de SM şi icircn absenţa stimulării receptorilor PPARα cu droguri agoniste
PPARα) dar icircn acelaşi timp pot apare diferenţe datorită metodei utilizate (231 232 233)
Făcacircnd o paralelă cu un studiu publicat icircn 2013 icircn Europa (231) care a arătat creşterea
nivelului de expresie al PPARα icircn Ly şi Mo observăm că deşi numărul de subiecţi a fost
aproximativ egal (57 participanţi icircn studiul nostru 60 icircn studiul DAmore) subiecţii icircn studiul
amintit au fost recrutaţi dintr-o clinică cu profil medical la primul diagnostic de SM icircn timp
ce metoda utilizată a fost PCR (Polymerase Chain Reaction) mult mai fidelă decacirct citometria
icircn flux icircn studiul receptorilor nucleari De asemenea DAmore nu investighează expresia
PPARα icircn Eo şi PMN icircn cercetare fiind incluse doar celulele CD14+ (predominant Mo) şi
CD14- (predominant Ly) Deşi nu am obţinut diferenţe statistic semnificative icircntre cele două
loturi referitoare la nivelul de expresie relativă a PPARα icircn Mo Ly şi PMN am observat
corelaţii puternice semnificative statistic icircntre expresia receptorilor PPARα icircn aceste tipuri
celulare Rezultatele obţinute sugerează existenţa unui mecanism diferit molecular de control
icircn eozinofile care reglează cantitatea de proteină PPARα icircn eozinofile versus alte tipuri de
leucocite (la pacienţii cu SM) şi acest lucru este icircn concordanţă cu cercetările care descriu
expresia PPARα mRNA icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale
bronşice keratinocite) Studiind prin citometrie de flux nivelul de expresie relativă a
receptorului CD36 la nivelul Mo am arătat prezenţa acestuia icircn Mo tuturor subiecţilor
investigaţi Analizacircnd valorile intensităţii medii de fluorescenţă a CD36 icircn loturile studiate
am observat o tendinţă de creştere la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali
confirmacircnd implicarea receptorului CD36 icircn patogeneza acestuia Referitor la expresia
receptorului CD36 rezultatele obţinute sunt icircn consens cu studii anterioare care au arătat
creşterea expresiei CD36 la pacienţii cu SM şi diabet zaharat Astfel pe lacircngă diferenţa icircn
expresia CD36 s-au raportat şi corelaţii inverse icircntre expresia proteinei CD36 şi nivelul
adiponectinei Acelaşi studiu a evidenţiat o corelaţie pozitivă intre expresia CD36 cu expresia
receptorilor PPAR gamma relaţia cu PPARα nefiind investigată
Analiza de subgrup a relaţiilor dintre componentele SM și elementele moleculare
proinflamatorii studiate a relevat prezenţa unor asocieri semnificativ statistice icircntre acestea
Se argumentează astfel că veridicitatea studiului este susţinută de interdependenţele statistice
ale componentelor SM Determinarea coeficientului de corelaţie Icircn studiul nostru nivelul de
expresie relativă a PPARα s-a corelat moderat negativ (figura 550) cu CA a subiecţilor din
lotul normal pentru populaţiile celulare de Mo (r = - 0420 P = 001) Ly (r = - 046 P =
0009) şi PMN (r = - 040 P = 0024) date care sunt icircn concordanţă cu studiile care arată
rolul PPARα icircn furnizarea energiei prin beta-oxidarea acizilor graşi Icircn acelaşi timp icircn lotul
pacienţilor cu SM nu am identificat prezenţa unei asocieri icircntre nivelul de expresie relativă a
PPARα şi valoarea măsurată a CA Asocierea dintre expresia relativă a PPARα cu obezitatea
de tip central completează datele existente referitoare la reglarea homeostaziei energetice
conturacircnd un mecanism de control deficitar al aportului caloric al SM Icircn condiţiile icircn care
rezultatele obţinute prin metoda citometriei icircn flux nu au arătat existenţa unei corelaţii intre
expresia PPARα şi CA la pacienţii cu SM considerăm că ar fi necesar studiul
polimorfismului genei PPARA care ar putea aduce informaţii importante cu privire la
implicarea acestor receptori icircn apariţia obezităţii de tip central Subliniem acest lucru deoarece
obezitatea este o boală plurifactorială icircn care pe lacircngă factorii ereditari sunt implicaţi factori
de mediu psihologici şi sociali (245) Existenţa unei componente genetice a aterosclerozei
este legată şi de prezenţa unor variante ale genei PPARA asociate cu creşterea incidenţei bolii
cardiovasculare (82) şi a SM (249) Icircn studiul nostru am constatat o scădere statistic
semnificativă a nivelului expresiei relative a receptorilor PPARα icircn Eo la subiecţii cu
antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială comparativ cu subiecţii fără istoric
familial de hipertensiune (figura 537) Deşi diferenţele calculate icircntre loturile studiate nu au
icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică la subiecţii care au declarat prezenţa
antecedentelor familiale de hipertensiune arterială remarcăm o tendinţă de scădere a
intensităţii medii de fluorescenţă pentru Ac anti-PPARα la nivelul Mo (figura 515 P = 006
) icircn timp ce expresia relativă a CD36 icircnregistrează o creştere la acesti subiecţi (figura 545 P
= 008) Icircn contextul riscului cardiovascular foarte icircnalt al pacienţilor cu SM amintim şi
existenţa corelaţiei pozitive dintre valorile tensiunii arteriale diastolice şi expresia relativă a
receptorului CD36 (r = 0483 P = 0013) Această constatare este icircn consens cu studiile care
au arătat că forma solubilă circulantă a CD36 este asociată cu factorii de risc cardiovasculari
fiind propusă ca un marker precoce al aterosclerozei Activarea PPARα este asociată cu
modularea metabolismului lipidic iar agoniştii PPARα sunt utilizaţi icircn mod curent pentru
tratamentul dislipidemiei Sub acţiunea agoniştilor PPARα se obţine o icircmbunătăţire a funcţiei
endoteliale şi a parametrilor reologici funcţiile pleiotropice ale agoniştilor PPARα fiind
dovedite icircn trialuri clinice controlate Icircn populaţiile de Mo şi Ly la pacienţii cu SM
cercetarea noastră a evidenţiat o asociere negativă icircntre nivelul de expresie relativă a
receptorilor PPARα şi concentraţia TG serice (figura 551) Astfel scăderea expresiei
receptorilor PPARα este asociată cu creşterea nivelului TG serice contribuind la profilul
lipidic aterogen din SM Icircn conformitate cu literatura de specialitate icircn studiul efectuat prin
metoda citometriei icircn flux am găsit prezenţa asocierii icircntre nivelul de expresie al PPARα şi
HDL-colesterol Corelaţia pozitivă dintre nivelul de expresie relativă PPARα şi concentraţia
HDL-colesterolului a fost observată icircn lotul martor icircn populaţiile de Mo (r = 035 P = 005)
şi Ly ( r = 036 P = 004) (figura 553) susţinacircnd faptul că stimularea receptorilor PPARα
este legată de creşterea nivelului seric al lipoproteinelor cu densitate crescută La pacienţii cu
SM corelaţia dintre expresia PPARα şi HDL-colesterol a fost evidenţiată icircn populaţiile de Mo
(r = 046 P = 0019) şi eozinofile (r = 044 P = 0024) Se desprinde concluzia că icircn
sindromul metabolic scăderea concentraţiei HDL-colesterol este legată de diminuarea
nivelului de expresie relativă a receptorilor nucleari PPARα icircntărind afirmaţiile legate de
rolul acestor receptori icircn progresia bolilor cardiovasculare Studiind reactanţii de fază acută
analiza statistică a relevat o diferenţă semnificativă din punct de vedere statistic icircntre valorile
fibrinogenului la pacienţii cu SM atunci cacircnd au fost comparaţi cu subiecţii fără SM
(Capitolul IV4 P lt0 001 figura 427A) De asemenea icircn Capitolul V dedicat studiul
expresiei relative a receptorilor PPARα studiul valorilor fibrinogenului a arătat creşterea
acestui reactant de faza acută icircn lotul cu SM comparativ cu lotul martor (P lt0 0001) Icircn
studiul nostru am calculat o corelaţie invers proporţionala (r = - -036 fig 555B) icircntre
nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile şi concentraţia serică a
fibrinogenului Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P = 008) am reţinut
această asociere deoarece am demonstrat că nivelul de expresie relativă al receptorilor
PPARα icircn eozinofile este mai scăzut icircn sindromul metabolic iar sindromul metabolic este
caracterizat printr-un status inflamator cronic status caracterizat şi de creşterea concentraţiei
serice a fibrinogenului De asemenea notam ca această corelaţie negativă se află icircn
concordanţă cu studiile care arata că tratamentul cu agonişti PPARα (fibraţi) determina
scăderea nivelului seric al fibrinogenului contribuind la diminuarea inflamaţiei cronice din
sindromul metabolic şi icircn consecinţă amelioracircnd insulinorezistenţa
LIMITE ȘI DIFICULTĂȚI IcircN CERCETARE
Icircn cadrul Tezei de Doctorat am desfăşurat o cercetare care şi-a propus studierea
expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Recrutarea anamneza şi examinarea
clinică a subiecţilor au fost realizate icircn cadrul Cabinetului de Medicină de Familie CMI Popa
Elena din Iaşi iar determinările hematologice şi biochimice s-au efectuat icircn cadrul
Laboratorului Ambulatorului de Specialitate al Spitalului Universitar ldquoSfacircntul Spiridon din
Iaşi Icircn studiul epidemiologic şi al markerilor inflamatori al sindromului metabolic desfăşurat
au fost incluşi un număr de 1530 de participanţi pe baza liberului consimţămacircnt examinaţi icircn
perioada 01012013 - 31122013 Icircn continuare icircn perioada 1012014 - 28022014 pe baza
criteriilor de includere şi excludere icircn cele două loturi de studiu am investigat un număr de 57
de subiecţi prezentaţi la consultaţie icircn această perioadă şi care au icircndeplinit criteriile de
includere icircn cele două loturi (Lot SM şi Lot Control) constituite pentru evaluarea nivelului de
expresie a receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Explorarea nivelului de expresie
relativă a receptorilor PPARα s-a desfăşurat icircn cadrul Laboratorului de Biologie Moleculară
de pe platforma Institutului Regional de Oncologie Datorită resurselor proprii financiare
limitate trebuie să subliniez că aceasta cercetare nu ar fi fost posibilă fără contribuţia unor
cercetători din domeniul medical care m-au sprijinit necondiţionat atacirct icircn elaborarea
protocolului de lucru cacirct şi icircn efectuarea propriu-zisă a studiului Icircn acest sens menţionăm şi
faptul că pentru studiul receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic am utilizat aparatura
Laboratorului de Biologie Moleculară (care deserveşte icircntreaga Regiune a Moldovei) Pe
această cale mulţumesc personalului Laboratorului de Biologie Moleculară pentru ajutorul
acordat icircn desfăşurarea cercetării doctorale icircn condiţiile icircn care se observa creşterea
numărului de pacienţi care se adresează acestei platforme de cercetare Mulţumesc de
asemenea şi Doamnei Doctor Elena Butoi din cadrul Institutului de Biologie şi Patologie
Moleculară ldquoNicolae Simionescurdquo Bucureşti) pentru donaţia anticorpului secundar anti-
FITC Icircn consecinţă pentru recrutarea unui număr mai mare de participanţi ar fi fost necesară
icircn primul racircnd obţinerea unor resurse financiare suplimentare pentru achiziţia de aparatură şi
reactivi Totuşi numărul subiecţilor recrutaţi este apropiat de numărul subiecţilor raportaţi icircn
cadrul unor granturi de cercetare care aveau ca ţinta studiul expresiei receptorilor PPARα
(212 227 228 231) Rezultatele obţinute continua seria lucrărilor care arata importanta
studiului mecanismelor etiopatogenice ale sindromului metabolic patologie care se afla icircntr-o
continuă creştere La pacienţii cu SM pe lacircngă diminuarea nivelului de expresie a receptorilor
PPARα icircn eozinofile ne aşteptam şi la evidenţierea unor modificări icircn expresia PPARα şi icircn
populaţiile de Ly Mo şi PMN Acest fapt poate fi explicat de utilizarea unor celule provenite
de la pacienţi fără afectare cardiovasculară fără diabet zaharat şi necesită continuarea
studiului pe culturi celulare icircn condiţii de stimulare cu agonişti PPARα deziderat care
impune continuarea investigării expresiei PPARα printr-un grant de cercetare
ORIGINALITATEA ȘI CONTRIBUȚIILE INOVATIVE ALE TEZEI DE
DOCTORAT PERSPECTIVE DE CERCETARE
Evaluarea nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn leucocitele circulante
aduce noi perspective icircn studiul obezităţii şi sindromului metabolic Importanta studiului
expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic derivă din prevalenta crescută a
sindromului metabolic icircn populaţia cercetată la care se adaugă riscul cardiovascular foarte
icircnalt al acestor pacienţi cu implicaţii majore icircn sănătatea publică Rolul receptorilor PPARα
icircn inflamaţie şi aterogeneza este binecunoscut dar studiul nostru este primul care a arătat că
nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα este semnificativ mai scăzut in populatiile
de eozinofile la pacienţii cu SM Această concluzie coroborata cu existenţa unei stracircnse
asocieri intre expresia receptorilor PPARα la nivelul Mo limfocitelor şi PMNlor creeaza
ipoteza existenţei unui mecanism de control diferit al expresiei PPARα la nivelul
eozinofilelor Această cercetare aduce informaţii importante referitoare la mecanismele
proinflamatorii care stau la baza insulinorezistenţei şi riscului cardiometabolic şi impune
continuarea studiului acestor receptori nucleari prin citometrie icircn flux metodă care poate fi
aplicată şi la scara mai largă dacă sunt asigurate resursele materiale necesare cercetării
Cercetarea prin citometrie icircn flux poate fi completată de studiul polimorfismului genei
PPARA şi astfel se pot identifica timpuriu indivizii cu potenţial risc cardiometabolic crescut
Studiul receptorilor PPARα a stabilit conexiuni cu factori proinflamatori şi aterogenetici iar
continuarea cercetării poate aduce şi elemente noi de diagnostic precoce icircn sindromul
metabolic contribuind la icircmbunătăţirea prognosticului acestor pacienţi
CONCLUZII FINALE
1 Aplicarea scorului de SM alături de implementarea algoritmului electronic de diagnostic
contribuie la o prelucrare rapidă eficientă și standardizată a informaţiilor la nivelul
medicinei primare
2 Prevalenţa SM calculată astfel icircn cadrul studiului este crescută (2732) icircn concordanţă
cu datele raportate
3 Controlul factorilor de risc cardiometabolici incluşi icircn SM se poate realiza prin
managementul stilului de viaţă (scăderea greutăţii corporale prin combaterea
sedentarismului şi adoptarea unei diete antiaterogene şi hipocalorice) şi administrarea
terapiei medicamentoase
4 Este necesară adoptarea unei politici de sănătate publică pentru prevenirea creşterii icircn
populaţie a prevalenţei obezităţii şi a diabetului zaharat
5 Noi metode de cercetare icircn domeniul SM axate pe diagnosticarea precoce şi cuantificarea
eficientă a acestuia duce la diminuarea incidenței evenimentelor cardiovasculare majore
6 Sindromul metabolic se caracterizează printr-un status inflamator cronic
7 Valorile Non-HDL-colesterolului şi a raportului de aterogenitate sunt semnificativ mai
mari la pacienţii cu SM
8 Dintre reactanţii de faza acută am observat că valoarea medie a fibrinogenului este mai
crescută icircn lotul cu SM
9 Valorile eozinofilelor sunt crescute icircn sindromul metabolic iar explorarea relaţiei dintre
eozinofile şi obezitate constituie una din direcţiile de studiu actuale ale sindromului
metabolic
10 Evaluarea markerilor inflamatori icircn contextul sindromului metabolic este utilă icircn
evaluarea complexă a a factorilor de risc cardiometabolici
11 Prin metoda citometriei icircn flux am demonstrat prezenta Receptorilor Activaţi de
Inductorii Proliferării Peroxizomilor ndash Alpha (PPARα) icircn toate populaţiile de leucocite
studiate (Mo limfocite PMN eozinofile) atacirct icircn lotul pacienţilor cu SM cacirct şi icircn lotul
martor
12 Utilizacircnd intensitatea medie de fluorescenţă a anticorpilor anti- PPARα am arătat că
nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile este semnificativ mai redus
la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali
13 Acest studiu este primul care a demonstrat existenţa unei scăderi statistic semnificative a
nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofilele pacienţilor cu SM
confirmacircnd cercetările recente care au evidenţiat rolul eozinofilelor şi al receptorilor
PPARα icircn obezitate reglarea inflamaţiei cronice şi aterogeneza
14 Contrar aşteptărilor noastre icircn populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările
efectuate icircn cele două loturi de studiu (cu şi fără sindom metabolic) nu am evidenţiat
diferenţe statistic seminificative icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα la
subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali
15 Icircn populaţiile de Mo limfocite şi polimorfonucleare am observat corelaţii puternice
semnificativ statistic icircntre expresia PPARα icircn aceste tipuri celulare sugeracircnd existenţa
unui mecanism unic de control al inflamaţiei cronice la nivelul acestor celule probabil
diferit de cel din eozinofile
16 La subiecţii cu SM expresia relativă a PPARα icircn Eo este invers asociată cu expresia
receptorului CD36 (receptor al particulelor de ox - LDL şi propus ca un marker precoce al
aterosclerozei) dovedind rolul antiinflamator al receptorilor PPARα la nivel endotelial
17 La pacienţii cu antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială nivelul de
expresie al receptorilor PPARα icircn eozinofile şi Mo este diminuat comparativ cu subiecţii
fără antecedente familiale de hipertensiune arterială Putem spune că studiul efectuat de
noi aduce informaţii importante legate de geneză aterosclerozei şi hipertensiunii arteriale
18 Prin studiul asocierilor dintre receptorii PPARα şi componentele clinice ale sindromului
metabolic am arătat rolul acestor receptori icircn determinismul obezităţii de tip central
nivelul expresiei relative a receptorilor PPARα fiind invers proporţional cu circumferinţa
abdominală
19 Icircn acelaşi timp nivelul de expresie a PPARα icircn sindromul metabolic este asociat pozitiv
cu concentraţia serică a HDL-colesterolului şi invers asociat cu nivelul trigliceridelor
serice dovedind rolul acestor receptori icircn diminuarea procesului inflamator cronic de la
nivel vascular
20 La pacienţii cu SM scăderea expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofile este corelată cu
creşterea unor markeri ai sindromului inflamator cronic cardiometabolic (acid uric
fibrinogen) ilustracircnd importanta receptorilor icircn reglarea status-ului inflamator cronic din
sindromul metabolic
21 Utilizarea metodei flowcitometrice pentru studiul expresiei relative a receptorilor PPARα
icircn leucocite a adus informaţii importante cu privire la mecanismele moleculare de control
implicate icircn patogenia bolilor cardiometabolice icircn concordanţă cu cercetările care descriu
expresia PPAR icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale bronşice
keratinocite)
BIBLIOGRAFIE SELECTIVA
1 Kahn R Metabolic syndrome- what is the clinical usefulness Lancet 2008371(9628)1892-3
2 Reaven GM The metabolic syndrome is this diagnosis necessary Am J Clin Nutr 2006 83(6)1237-7
3 Grundy SM Pre-Diabetes Metabolic Syndrome and Cardiovascular Risk J Am Coll Cardiol 201259(7)
635-43
4 International Diabetes Federation IDF Diabetes Atlas 6th edn International Diabetes Federation Belgium
Brussels 20131-155
5 World Health Organization Global Status Report on Noncommunicable Diseases 2010 World Health
Organization Geneva Switzerland 20111-176
6 Coman AE Petrovanu R Sindromul metabolic in practica de ambulator Editura Pim Iaşi 2009 1-103
7 Grundy SM Becker D Clark LT et alThird Report of the National Cholesterol Education Program (NCEP)
Expert Panel on Detection Evaluation and Treatment of High Blood Cholesterol in Adults (Adult
Treatment Panel III) Final Report Circulation 2002106(25)3143-90
8 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J Metabolic syndrome- a new worldwide definition A Consensus Statement
from the International Diabetes Federation Diabet Med 2006 23(5)469-80
9 KG Alberti KG Eckel RH Grundy SM etal International Diabetes Federation task force on epidemiology
and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart Association World Heart
Federation International Atherosclerosis Society International Association for the study of obesity
Harmonizing the metabolic syndrome a joint interim statement of the International Diabetes Federation task
force on epidemiology and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart
Association World Heart Federation International Atherosclerosis society and International Association
for the study of obesity Circulation 2009120(16)1640-5
10 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J IDF Epidemiology Task Force The metabolic syndrome new
worldwide definition Lancet 2005 366 1059 - 62
11 Oleszczyk M Svab I Seifert B et al Primary healthcare in the developing part of Europe changes and
development in the former Eastern Bloc countries that joined the European Union following 2004 Med Sci
Monit 2009(15)78ndash84
12 Jung U J Choi M S Obesity and Its Metabolic Complications The Role of Adipokines and the
Relationship between Obesity Inflammation Insulin Resistance Dyslipidemia and Nonalcoholic Fatty
Liver Disease Int J Mol Sci 2014rsquo15(4) 6184-223
13 Vanden Heuvel JP Peters JM Peroxisome Proliferators In Ramos K (ed) Cellular and Molecular
Toxicology (Second Edition) Volume 2 New York Elsevier Science Inc 2010 145 - 67
14 Yessoufou A Wahli W Multifaceted roles of peroxisome proliferator-activated receptors (PPARs) at the
cellular and whole organism levels Swiss Med Wkl 2010140w13071 doi104414smw201013071
15 Azhar S Peroxisome proliferator-activated receptors metabolic syndrome and cardiovascular disease
Future Cardiology 20106(5)657-91
16 Andries G Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity
Diabetes and Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(Suppl)24-32
17 Zandbergen F Plutzky J PPARalpha in atherosclerosis and inflammation Biochim Biophys Acta
20071771(8)972-82
18 Straus DS Glass CK Anti-inflammatory actions of PPAR ligands new insights on cellular and molecular
mechanisms Trends Immunol 200728(12)551-8
19 Zlei M Zugun- Eloae F Carasevici E Citometrie icircn flux - Bază şi clinică Icircn Hinescu ME (ed) Citometrie icircn
flux - principii şi aplicaţii clinice Bucureşti Editura Viaţa Medicală Romacircnească 20111-128
20 Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity Diabetes and
Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(9)24-32
21 Woerly G Honda K Loyens M et al Peroxisome proliferator-activated receptors alpha and gamma down-
regulate allergic inflammation and eosinophil activation J Exp Med 2003198(3)411-21
22 Salle-Saumont D Brenuchon C Kanda A et al Peroxisome proliferator-activated receptor alpha regulates
skin inflammation and humoral response in atopic dermatitis J Clin Allergy Immunology 2008 21(4)962-8
23 Schote A Turner J Schiltz J et al Nuclear receptors in human immune cells expression and correlations
Mol Immunolog 200744(6)1436-45
24 DAmore S Vacca M Graziano G et al Nuclear receptors expression chart icircn peripheral blood
mononuclear cells identifies patients with Metabolic Syndrome Biochim Biophys Acta
20131832(12)2289-301
25 Uthurralt J Gordish-Dressman H Bradbury M T et al PPARalpha L162V underlies variation in serum
triglycerides and subcutaneous fat volume in young males BMC Med Genet 2007855
26 Hiukka A Leinonen ES Jauhiainen M et al Long-term effects of fenofibrate on VLDL and HDL
subspecies icircn participants with type 2 diabetes mellitus Diabetologia 2007 50(10)2067-75
27 Robins SJ Rubins HB Faas FH et alInsulin resistance and cardiovascular events with low HDL
cholesterol The Veterans Affairs HDL Intervention Trial (VA-HIT) Diabetes Care 2003 26(5)1513-7
28 Devaraj S Siegel D Jialal I Statin Therapy in Metabolic Syndrome and Hypertension Post-JUPITER
What is the Value of CRP Curr Atheroscler Rep 2011 13(1) 31ndash42
29 Imperatore G Riccardi G Iovino C et al Plasma Fibrinogen A New Factor of the Metabolic Syndrome A
population-based study Diabetes Care 19982 1(4)649-54
30 Krysiak R Gdula-Dymek A Bachowski R Okopien B Pleiotropic effects of atorvastatin and fenofibrate
in metabolic syndrome and different types of pre-diabete Diabetes Care 201033(10)2266-70
31 Hermans MP Impact of Fenofibrate on Type 2 Diabetes Patients with Features of the Metabolic Syndrome
Subgroup Analysis From FIELD Curr Cardiol Rev 20106(2)112-8
32 Silverstein R Inflammation atherosclerosis and arterial thrombosis Role of the scavenger receptor CD36
Cleveland Clinic Journal of Medicine 200976(Suppl 2)S27-S30
33 Hăncu N Obezitatea In Vereşiu IA (ed) Diabetul zaharat nutritia si bolile metabolice Volume 2 Editura
Echinox Cluj- Napoca 2010 1-15
Lista lucrări publicate
1 Elena Popa Maria Maidaniuc Agnes Bacusca Alamir Diaa Rodica Petrovanu Adorata Elena
Coman Disfuncţia endotelială ndash de la mecanisme moleculare la cuantifi care şi tratament icircn practica
medicală Practica Medicală 20149(3) 109-14
2 Elena Popa Agnes Bacusca Alamir Diaa Maria Maidaniuc Rodica Petrovanu Adorata Elena Coman
The function of insulin receptor (IRF) in evolution of obesity correlation with adipocytes diameters
Archives of the Balkan Medical Union 201449(3) 275-9
3 Elena Popa Florin Zugun-Eloae Mihaela Zlei Daniela Jitaru Oana Maria Pintilie Adorata Elena
Coman Maria Traian Didona Anca Ungureanu Eugen Carasevici - acceptata pentru numarul 42014
Flow cytometry analysis of PPAR-alpha receptors in metabolic syndrome) Revista Romană de
Medicină de Laborator(RRLM-D-14-00034R1- adeverinţa ataşată
Cuprins
PARTEA GENERALĂ 1
CAPITOLUL I SINDROMUL METABOLIC 1
I1Introducere 1
I2 Criterii de diagnostic al sindromului metabolic 1
I3 Epidemiologia sindromului metabolic 3
I4 Patogenia sindromului metabolic 4
CAPITOLUL II RECEPTORII ACTIVAŢI DE INDUCTORII PROLIFERĂRII
PEROXIZOMILOR - ALPHA 11
II1 Generalităţi 11
II2 Istoric 12
II3 Structura PPAR 12
II4 Mecanismul acțiunii PPAR 13
II5 Clasificarea receptorilor PPAR 13
II6 Liganzii PPARα 15
II7 Reglarea expresiei PPARα 15
II8 Rolul receptorilor activaţi de inductorii proliferării peroxizomilor alpha ndashPeroxisome
Proliferator-Activated Receptor-Alpha ( PPARα) icircn organismul uman 16
II81 Rolul PPARα in reglarea homeostaziei energetice a organismului uman 16
II82 Rolul PPARα icircn reglarea metabolismului lipidic 17
II83 Rolul PPARα icircn modularea inflamaţiei 18
II9 Concluzii 39
PARTEA PERSONALĂ 41
CAPITOLUL III SCOPUL ŞI MOTIVAŢIA STUDIULUI CONSIDERAŢII ETICE 41
III1 Motivația cercetării 41
III2 Scopul studiului 42
III3 Considerații etice 42
CAPITOLUL IV STUDIUL SINDROMULUI METABOLIC IcircN POPULAŢIA
SELECTATĂ 43
IV1 Obiectivele studiului sindromului metabolic 43
IV2 Etapele studiului sindromului metabolic 43
IV3 Studiul epidemiologic icircn populaţia selectată 43
IV31Scopul studiului 43
IV32 Obiectivele studiului 43
IV33 Lotul de studiu 43
IV34 Protocolul studiului epidemiologic al sindromului metabolic 44
IV35 Metode utilizate icircn cercetare 45
IV36 Analiza statistică 46
IV37 Rezultate 46
IV38 Discuţii 62
IV39 Concluzii 64
IV4 Studiul sindromlui inflamator cronic icircn cadrul sindromului metabolic 65
IV41 Scopul studiului 65
IV42 Obiectivele studiului 65
IV43Material şi metodă 65
IV44 Analiza statistică 65
IV45 Rezultate 66
IV46Discuţii 79
IV47 Concluzii 80
Capitolul V STUDIUL RECEPTORILOR ACTIVAŢI DE INDUCTORII PROLIFERĂRII
PEROXIZOMILOR-ALPHA IcircN LEUCOCITELE CIRCULANTE 81
V1 Ipoteza de lucru 81
V2 Material și metodă 82
V3 Analiza statistică 87
V4 Rezultate 87
V41 Analiza loturilor studiate 87
V42 Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα 91
V43 Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor CD36 106
V44 Studiul corelaţiilor icircn cele două loturi 111
V5 Discuţii 118
V6 Concluzii 128
VI LIMITE ȘI DIFICULTĂȚI IcircN CERCETARE 129
VII ORIGINALITATEA ȘI CONTRIBUȚIILE INOVATIVE ALE TEZEI DE
DOCTORAT PERSPECTIVE DE CERCETARE 130
VIII CONCLUZII FINALE 131
IX BIBLIOGRAFIE 133
X ANEXE 148
Fişa electronică de studiu Consimţămacircntul informat al pacientului Recoltarea probelor de sacircnge venos pentru studiul PPARα
Protocol marcare CD14 - CD36
Imagini PPARα - citometrie icircn flux
Imagini CD36 Lista lucrări publicate
LISTA ABREVIERI
CA - Circumferinţa abdominalăcm - CentimetriCRP - Proteina C reactivăCol - Colesteroldl - DecilitruEo - EozinofileHDL - High density lipoprotein (lipoproteine cu densitate icircnaltă)IDF - Federaţia Internaţională de DiabetIgE - ImunoglobulinăIMC- Indice de masă corporalăLy - LimfociteLDL- Low density lipoprotein (lipoproteine cu densitate joasă)mg - MiligramMo- MonociteNCEP-ATP III - Naţional Cholesterol Education Program Adult Treatment Panel IIIPPAR - Receptorii Activaţi de Inductorii Proliferarii Peroxizomilor (peroxizome proliferator -activated receptor)PMN - PolimorfonucleareSM - Sindrom metabolicTA - Tensiunea arterialăTAS - Tensiune arterială sistolicăTAD - Tensiune arterială diastolicăTG - Trigliceride
Teza cuprinde un număr de 118 de figuri 41 de tabele și 280 referințe bibliograficeNumerotarea tabelelor şi figurilor este identică cu cea din teză
SCOPUL ŞI MOTIVAŢIA STUDIULUI
Motivația cercetării
La nivel mondial sindromul metabolic (SM) reprezintă o importantă problemă de
sănătate publică reunind asocierea dintre obezitate abdominală şi factori de risc majori
cardiovasculari (hiperglicemia dislipidemia hipertensiunea arterială) (12) Se estimează că
SM afectează peste 25 din populaţia generală iar aproximativ două treimi din pacienţii cu
SM sunt predispuşi la un eveniment cardiovascular major (3) Icircn prezent se acţionează pe
două căi pentru controlul factorilor de risc cardiometabolici incluşi icircn SM managementul
stilului de viaţă (scăderea greutăţii corporale prin combaterea sedentarismului şi adoptarea
unei diete antiaterogene şi hipocalorice) şi administrarea terapiei medicamentoase Deşi atacirct
modificarea stilului de viață cacirct și terapia medicamentoasă vizează controlul factorilor de risc
cardiometabolici conform ghidurilor medicale adoptate atingerea ţintelor terapeutice este
greu de realizat (1011) Icircn aceste condiţii introducerea unor noi metode diagnostice şi
terapeutice bazate pe etiopatogenia SM ar putea icircmbunătăţi calitatea vieţii bolnavilor şi SM şi
ar conduce pe termen lung la creşterea speranţei medii de viaţă Cercetările actuale sunt
orientate spre descifrarea modului icircn care modificările metabolismului incluzacircnd rezistenţa la
insulină dislipidemia obezitatea abdominală pot accelera ateroscleroza privită ca o
complicaţie metabolică și indusă de inflamație (12) Icircn contextul studiului SM receptorii
nucleari activaţi de inductorii proliferării peroxizomilor-alpha-α (PPARα) atrag atenţia
datorită rolului deţinut icircn reglarea oxidării acizilor graşi metabolismul lipidelor şi
lipoproteinelor inflamaţie cronică şi aterogeneză (131415) Aceștia reprezintă astfel veriga
lipsă patogenică care leagă modificările metabolice de procesul inflamator cronic
autoicircntreținut care duce la disfuncția endotelială și aterogeneză Acţionacircnd ca factori de
transcripţie activarea PPARα determină scăderea nivelului seric al trigliceridelor şi HDL-col
şi protejează față de profilul lipidic aterogenetic prin modularea status-ului proinflamator şi
diminuarea insulinorezistenţei (1617) Rolul PPARα icircn reglarea metabolismului lipidic
balanţei energetice şi icircn diminuarea răspunsului proinflamator fac din aceşti receptori o
potenţială ţinta icircn tratamentul afecţiunilor icircn care rolul inflamaţiei cronice este bine cunoscut
Se descrie astfel o nouă posibilitate de icircmbunătăţire a prognosticului afecţiunilor cronice cu
impact major asupra sănătăţii publice incluzacircnd ateroscleroza diabetul zaharat boala cronică
obstructivă pulmonară maladia Parkinson demența Alzheimer şi nu icircn ultimul racircnd
neoplaziile (18)
Scopul studiului
Icircn cadrul Tezei de Doctorat mi-am propus realizarea unei cercetări referitoare la
rolul Receptorilor Activaţi de Inhibitorii Proliferării Peroxizomilor- alpha icircn contextul
sindromului metabolic alături de completarea datelor epidemiologice existente cu privire la
prevalenţa acestui sindrom icircn populaţia aflată icircn evidenţa unui Cabinet de Medicină de
Familie din oraşul Iaşi Ca urmare cercetarea efectuată a urmărit două aspecte1 studiul
epidemiologic al SM icircn populaţia unui Cabinet de Medicină de Familie urmată de
investigarea markerilor inflamatori prezenţi icircn SM 2 investigarea prezenţei și a nivelului de
expresie relativă a receptorilor PPARα icircn leucocitele circulante recoltate din sacircngele
subiecţilor studiaţi celule care exprimă aceşti receptori şi a căror rol icircn inflamaţie şi
aterogeneză este bine cunoscut
Considerații etice Studiul a primit avizul Comisiei de Etică a Universităţii de Medicină
şi Farmacierdquo Gr T Popardquo Iaşi Studiul a fost condus icircn conformitate cu Declaraţia de la
Helsinki actualizată
STUDIUL SINDROMULUI METABOLIC IcircN POPULAŢIA SELECTATĂ
Obiectivele studiului sindromului metabolic
a evaluarea din punct de vedere clinic şi biologic a sindromului metabolic
b identificarea tipului de SM icircn raport cu numărul de componente
c stabilirea prevalenţei sindromului metabolic icircn populaţia studiată
d studiul markerilor inflamatori prezenţi icircn SM
Studiul epidemiologic icircn populaţia selectată
Am efectuat un studiu epidemiologic transversal care şi-a propus stabilirea prevalenţei
sindromului metabolic şi a componentelor sale icircn populaţia icircnscrisă pe lista unui cabinet de
medicină de familie Studiul s-a desfăşurat pe parcursul a 12 luni icircn perioada 01012013ndash
31122013 icircn cadrul Cabinetului de Medicină de Familie CMI Popa Elena situat icircn strada
Ion Creanga nr 73 din Iaşi
Obiectivele studiului - evaluarea din punct de vedere clinic şi biologic a sindromului metabolic
- identificarea tipului de SM icircn raport cu numărul de componente
- stabilirea prevalenţei sindromului metabolic icircn populaţia studiată
Lotul de studiu a fost constituit din populaţia de ambele sexe cu vacircrsta cuprinsă icircntre
18 şi 91 ani icircnscrisă pe lista medicului de familie Subiecţii au fost invitaţi să participe la
studiu icircn luna naşterii realizacircnd astfel o programare a vizitelor pe parcursul a 12 luni
Criteriile de includere icircn lotul de studiu vacircrsta peste 18 ani capacitate de decizie
domiciliul stabil icircn Romacircnia participare pe baza consimţămacircntului liber informat Criteriile
de excludere vacircrstă sub 18 ani femei gravide sau care alăptează bolnavi icircn faza terminală
subiecţi care refuză semnarea consimţămacircntului informat Nu s-au formulat criterii care să
aducă discriminări legate de sex etnie sau rasă
Protocolul studiului epidemiologic al sindromului metabolic
Icircn cadrul studiului epidemiologic s-au realizat cacircte două vizite pentru fiecare participant La
prima vizită subiecţii au fost informaţi asupra studiului icircn cadrul cercetării doctorale şi au
semnat Consimţămacircntul liber informat Pentru fiecare participant s-a completat fişa de studiu
computerizată incluzacircnd date anamnestice şi clinice (talie greutate corporală perimetru
abdominal) La a doua vizită s-au recoltat probe biologice (sacircnge venos) de către o asistentă
specializată pentru următoarele determinări biochimice (glicemie colesterol total HDL-
colesterol LDL-colesterol trigliceride acid uric creatinină fibrinogen proteină C reactivă)
şi hematologice (hemoleucograma VSH) Pentru diagnosticarea SM am utilizat criteriile
de diagnostic Harmonised I (tabel VI) Am comparat prevalenţa SM conform criteriilor
Harmonised I cu prevalenţa obţinută prin aplicarea criteriilor IDF respectiv ATP III
Analiza statistică Pentru analiza parametrilor studiaţi icircn SM am realizat icircmpreună cu
firma Arhilog Soft un program icircn care sunt incluşi parametrii de diagnostic ai SM şi care
permite icircncadrarea pacienţilor funcţie de componentele SM icircn SM3 SM4 SM5 De
asemenea programul permite editarea şi arhivarea unei fişe de observaţie pentru fiecare
participant la studiu precum şi crearea unei baze de date compatibile cu programul Microsoft
Office Excel 97-2003
Menţionăm că acest program poate stoca
şi alţi parametri clinici şi paraclinici utilizaţi icircn evaluarea complexă a SM putacircnd fi ulterior
introdus ca un program de monitorizare a evoluţiei pacienţilor Pentru prelucrarea statistică a
parametrilor s-au folosit programele Microsoft Office Excel 97-2003 SPSS-10 (Statistical
Package for Social Sciences) şi aplicaţia Medcalc Statistical Software ndash 1333 Valoarea lui p
Figura 41 Program de
analiză a parametrilor SM
mai mică de 005 a fost considerată semnificativ statistic
Rezultate Analiza lotului de studiu s-a efectuat icircn funcţie de mediul de provenienţă sex vacircrstă şi
vacircrsta medie Caracteristicile clinice şi biochimice ale lotului studiat sunt reprezentate icircn
tabelul VIII
Tabel VIII Caracteristicile lotului studiat Media 95 CI SD Minimum Maximum
Vacircrsta (ani) 4751 4661 - 4841 1798 1800 9100
CA (cm) 8830 8764 - 8896 1316 5600 13400
IMC (kgm2) 2603 2578 - 2628 497 1900 4500
TAD (mmHg) 7529 74883 - 7571 827 6000 11500
TAS (mmHg) 11730 11650 - 11810 1590 9000 19000
Glicemie (mgdl) 9435 9328 - 9542 2138 7200 40000
HDL- col(mgdl) 4498 4427 - 4570 1422 2100 9200
TG(mgdl) 12269 11887 - 12651 7157 4800 87900
Determinarea scorului SM
Am aplicat criteriile de diagnostic şi am calculat scorul de SM pentru fiecare subiect (0-
absenţa criteriului 2- prezenţa criteriului) (fig44)
Figura 44 Frecvenţa scorului SM icircn
populaţia studiată conform criteriilor
SM Harmonised (A) IDF (B) ATP III
(C) Se observă că distribuţia scorurilor
SM conform criteriilor de diagnostic este
identică icircn cazul aplicării criteriilor
Harmonized I şi IDF
Scorul de SM a avut valori pare
cuprinse icircntre intervalul 0 - 10 pacienţii
cu SM avacircnd un scor mai mare sau egal
cu 6
Icircn lotul studiat am analizat prezenţa simultană a criteriilor Harmonised I de diagnostic şi
am constatat prezenţa SM la 389 subiecţi (204 femei şi 185 bărbaţi) reprezentacircnd 2542
(95CI 2296-2808) din totalul populaţiei studiate Raportul prevalenţelor specifice pe sexe
bărbaţifemei a fost de 103 (95 CI084 -126)Icircn concordanţă cu criteriile IDF am
identificat un număr de 325 pacienţi cu SM (175 femei şi 150 bărbaţi) iar prevalenţa SM icircn
populaţia studiată conform IDF a fost de 2124 (95 CI 1899ndash 2368) Raportul
prevalenţelor specifice la bărbaţi versus femei a fost de 0977 (95 CI 078 ndash122) Utilizacircnd
definiţia ATP III au fost identificaţi un număr de 229 subiecţi cu SM Prevalenţa SM a fost
C
0
100
200
300
400
500
600
700
Scor SM ATP III
Număr pacienţi
0 2 4 6 8 10
ATP III SM5 SM4 SM3 non SM
B
0 50
100 150 200 250 300 350 400 450
Scor SM IDF
Număr pacienţi
0 2 4 6 8 10
IDF SM5 SM4 SM3 non SM
A
0
50
100
150
200
250
300
350
400
450
Scor SM Harmonised I
Număr pacienţi
0 2 4 6 8 10
HARMONIZED I SM5 SM4 SM3 non SM
de 1497 (95CI 1309 ndash 1704) icircn populaţia studiată Au fost calculate prevalenţele pe
sexe şi au fost găsite valorile de 1343 (95CI 010 ndash 164) la bărbaţi respectiv 1632
(95 CI 1366 ndash 1934) la femei raportul dintre acestea fiind de 082 (95CI 062 ndash 107)
Pentru fiecare asociere dintre componentele SM diagnosticat conform criteriilor
Harmonised I am calculat prevalenţele icircn cadrul SM(tabel XVI)
Tabel XVI Prevalenţa asocierilor dintre componentele SM Număr
pacienţi
Ponderea icircn cadrul
pacienţilor cu SM
(95 CI)
Prevalenţa icircn
populaţia studiată
(95 CI)
SM cu trei componente (SM3)
241 6195 (5438ndash7029) 1575 (1383-
1787)
Obezitate centrală + hipertensiune arterială +
hipertrigliceridemie
45 1154 (844ndash1548) 294 (214-393)
Obezitate centrală + hipertensiune arterială + hipo-
HDLcolesterolemie
38 979 (691ndash1340) 248 (175-340)
Obezitate centrală + hipertrigliceridemie +
hipoHDL-colesterolemie
34
874 (605ndash1221) 222 (153-310)
Obezitate centrală + modificări ale metabolismului
glucidic + hipertensiune arterială
31 796 (541ndash1131) 202 (137-287)
Hipertensiune arterială + hiper-trigliceridemie +
hipoHDL- colesterolemie
26 668 (436 ndash979) 169 (111-249)
Modificări ale metabolismului glucidic +
hipertensiune arterială + hiper-trigliceridemie
21 539 (334-825) 137 (085-209)
Obezitate centrală + modificări ale metabolismului
glucidic + hipertrigliceridemie
15 385 (215-636) 098 (054-116)
Modificări ale metabolismului glucidic
hipertrigliceridemie + hipoHDL-colesterolemie
12 308 (159-538) 078 (040-137)
Modificări ale metabolismului glucidic +
hipertensiune arterială + hipoHDLcolesterolemie
10 257 (123ndash472) 065 (031-120)
Obezitate centrală + modificări ale metabolismului
glucidic + hipo-HDL-col
9 231 (105ndash439) 058 (026-111)
SM cu patru componente (SM4) 104 2674 (2184-239) 679 (555-823)
Obezitate centrală + modificări ale metabolismului
glucidic + hipertensiune arterială + hipoHDL-
colesterolemie
32 822 (562-1116) 209 (143-
295)
Obezitate centrală + hipertensiune arterială +
hipertrigliceridemie + hipoHDL-col
25 642 (415- 948) 163 (105-241)
Obezitate centrală + modificări ale metabolismului
glucidic + hipertri-gliceridemie + hipoHDL-
colesterolemie
12 308 (159-538) 078 (040-137)
Modificări ale metabolismului glucidic +
hipertensiune arterială + hipertri-gliceridemie +
hipoHDL-colesterolemie
6 154 (056- 335) 039 (014-085)
SM cu cinci componente (SM5) 44 1131 (822-1518) 287 (209-386)
Total (SM3 + SM4 + SM5) 389 100 2542(2296-
2808)
Analizacircnd componentele SM la cei 389 pacienţi diagnosticaţi cu SM conform criteriilor
Harmonised I am constatat că obezitatea centrală este cea mai bine reprezentată icircn SM dintre
aceste componente (8072 95CI 7644 - 8452) urmată de HTA (7892 95CI 7453
- 8287) hiperTG (6915 95 CI 6430-7371) hipo-HDL-col (6375 95 CI 5876-
6854) şi hiperglicemie (5681 95 CI5173- 6179)
Standardizarea prevalenţelor funcţie de vacircrstă şi sex Analiza statistică a relevat faptul
că prevalenţa SM creşte cu icircnaintarea icircn vacircrstă Dacă pentru vacircrsta cuprinsă icircntre 35-54 ani
prevalenţa la bărbaţi este semnificativ mai mare comparativ cu femeile (raport calculat B F -
183 P=0003) pentru celelalte grupe de vacircrsta nu s-au observat diferenţe semnificative icircntre
sexul feminin şi cel masculin Am observat că după instalarea menopauzei la femei
prevalenţa SM (corespunzătoare Harmonised I) la femei depăşeşte 50 iar la bărbaţi atinge
42 Utilizacircnd European Standard Population (175) am efectuat standardizarea funcţie de
vacircrstă şi sex a prevalenţelor bdquocruderdquo (brute) obţinute icircn populaţia studiată şi am calculat o
prevalenţă standardizată a SM de 2732 (95 CI 2460-3003) La sexul masculin
prevalenţa standardizată a SM a fost de 2760 (95 CI 2362 - 3157) iar la sexul feminin
am obţinut valoarea de 2854 (95 CI 2462 - 3245)
Discuţii
Studiul desfăşurat de noi a investigat prezenţa SM icircn populaţia unui Cabinet de Medicină
de Familie Icircn Europa prevalenţa SM este de aproximativ 25-30 Statele Unite Ale Americii
au raportat o prevalenţă a sindromului metabolic de 22 icircn populaţia cu vacircrsta peste 20 ani
pe cacircnd la vacircrstă mai mare de 60 ani s-a observat o prevalenţă de 44 (1419) Icircn studiul
efectuat am observat o prevalenţă standardizată de 2732 (95 CI 2460-3003) care este
icircn concordanţă cu prevalenţele raportate icircn Europa precum şi o creştere a ponderii SM icircn
populaţie icircn raport cu vacircrsta Am preferat utilizarea definiţiei Harmonised I pentru SM
deoarece cuprinde criterii adaptate pentru o abordare unitară a SM mărind astfel numărul
pacienţilor diagnosticaţi şi care vor urma tratament conform Ghidurilor de Practică Medicală
Limitările acestui studiu sunt legate de faptul că este concentrat doar pe populaţia asigurată şi
neasigurată aflată pe lista unui medic de familie din mediul urban Se pot efectua studii la
nivelul Cabinetelor Medicale de Medicină de Familie dar trebuie să se aplice pe un lot
reprezentativ urbanrural care să reprezinte populația acelei regiuni Utilizarea structurilor
populaționale atașate cabinetului de MF este utilă atacirct pentru cele clinice cacirct și pentru cele
epidemiologice deoarece surprinde populația studiată icircn mediul de viață cotidian Prevalenţa
mare a SM icircn populaţia studiată necesită aplicarea unei politici eficiente de sănătate publică
deoarece riscul producerii evenimentelor cardiovasculare majore poate fi redus semnificativ
printr-un control adecvat al componentelor SM (obezitate dislipidemii hipertensiune
arterială şi hiperglicemie
Studiul sindromului inflamator cronic icircn cadrul sindromului metabolic
Obiectivele studiului
- studierea markerilor inflamaţiei cronice şi aterogenezei la subiecţii cu şi fără SM
- evaluarea importanţei markerilor studiaţi ai inflamaţiei cronice icircn diagnosticul de
ambulator al sindromului metabolic
Material şi metodă
Icircn cercetarea inflamaţiei cronice din SM au fost incluşi 1530 subiecţi de ambele sexe cu
vacircrsta cuprinsă icircntre 18-91 ani icircnscrişi pe lista CMI Popa Elena Studiul s-a desfăşurat icircn
perioada 01012013ndash 31122013 Populaţia ţintă a fost identică cu cea din studiul
epidemiologic şi s-a desfăşurat concomitent cu studiul prevalentei SM Subiecţii au fost
icircmpărţiţi icircn două loturi lotul cu SM (Lot SM) şi lotul de control (fără SM)
Lot SM a) criterii de includerevacircrsta peste 18 ani recrutarea pe baza semnării
Consimţămacircntului liber informat SM diagnosticat pe baza criteriilor Harmonised I (14) b)
criterii de excluderevacircrstă sub 18 anirefuzul semnării Consimţămacircntului liber informat
femei icircn perioada de graviditate sau de lactaţie
Lot Control (fără SM) a) criterii de includerevacircrsta peste 18 anirecrutarea pe baza
semnării Consimţămacircntului liber informat absenţa sindromului metabolic b) criterii de
excluderevacircrstă sub 18 ani refuzul semnării Consimţămacircntului liber informatfemei icircn
perioada de graviditate sau de lactaţie
Rezultate
Lotul cu SM (Lot SM) a fost format din cei 389 pacienţi diagnosticaţi cu SM conform
criteriilor Harmonised I Lotul SM a fost alcătuit din 185 bărbaţi şi 204 femei raportul
bărbaţifemei fiind de 090 (95 CI073-112) Lotul de control (fără SM) a fost alcătuit
din cei 1141 participanţi care nu au icircntrunit criteriile de diagnostic ale sindromului metabolic
Din cei 1141 de subiecţi 530 au fost de sex masculin iar 611 de sex feminin raportul
bărbaţifemei fiind 087 (95 CI 077-097) Vacircrsta subiecţilor a fost semnificativ mai mare
icircn lotul pacienţilor cu SM (5976plusmn1322 ani) comparativ cu lotul martor (4333plusmn 1748 ani) (t-
Test Plt00001) Aşa cum ne-am aşteptat valorile medii ale componentelor clinice ale SM
(circumferinţa abdominală tensiunea arterială sistolică şi diastolică) au fost mai mari icircn lotul
pacienţilor cu SM (t-Test Plt0001 pentru fiecare dintre componente) Studiind parametrii
biochimici incluşi icircn diagnosticul SM valorile medii ale glicemiei şi TG au fost semnificativ
mai crescute icircn lotul SM (t-Test Plt00001 pentru ambele constante) Icircn acelaşi timp
valoarea medie determinată a HDL-col a fost semnificativ mai mare la subiecţii din lotul
martor ( t-Test Plt00001) SM se caracterizează printr-o dislipidemie aterogenă
caracterizată de creşterea TG scăderea HDL-col concomitent cu creşterea LDL-col creşterea
Non-HDL-col şi a raportului de aterogenitate (Col totalHDL-col) (185) Comparacircnd cele
două loturi am observat că valoarea medie a LDL-colesterolului determinată icircn lotul
pacienţilor cu SM a fost semnificativ mai mare faţă de subiecţii din lotul martor (t-Test P =
00002) Măsurarea Non-HDL-colesterolului a arătat prezenţa unei diferenţe semnificative
icircntre cele două loturi (figura 420 B) Astfel icircn concordanţă cu prezenţa dislipidemiei
aterogene valoarea medie a Non-HDL-col a fost semnificativ mai mare (t-Test Plt 00001) icircn
lotul cu SM comparativ cu lotul de control Icircn contextul inflamației cronice şi aterogenezei
din sindromul metabolic am evaluat sensibilitatea şi specificitatea Non-HDL-colesterolului
ca test diagnostic al SM Valoarea Non-HDL-colesterolului care prezice cu cea mai mare
acurateţe prezenţa SM a fost de 151 mgdl (punctul de ldquocut-offrdquo) pentru care am calculat o
sensibilitate de 64 27 şi o specificitate de 5872 Calculul ariei AUC a furnizat valoarea
de 0605 şi deci determinarea concentraţiei serice a parametrului Non-HDL-colesterolului are
valoarea unui marker cu acurateţe redusă Am studiat valorile raportului Col totalHDL-col icircn
cele două loturi şi am constatat că la pacienţii cu SM valoarea media a raportului de
aterogenitate este semnificativ mai mare faţă de valoarea raportului determinată icircn lotul
martor (t-Test Plt 00001) Pentru raportul de aterogenitate studiat analiza curbei ROC a
arătat că valorile mai mari decacirct punctul de ldquocut-offrdquo de 431 prezic prezenţa SM cu cea mai
mare sensibilitate (6381 ) şi specificitate (6582)Valoarea AUC pentru indicele de
aterogenitate a fost de 0667 şi icircn studiul SM acest indice poate fi considerat un marker cu
acurateţe redusă Valoarea medie determinată a acidului uric la subiecţii fără SM a fost
semnificativ mai mică decacirct icircn lotul SM (t-Test Plt 00001) Curba ROC a arătat că valorile
acidului mai mari de 43 mgdl prezic diagnosticul de SM cu cea mai mare sensibilitate
(8107) şi specificitate (5328) Pentru acidul uric AUC a avut valoarea de 0655 şi
icircncadrează determinarea acidului uric seric icircn racircndul testelor cu acurateţe redusă (187)
Comparacircnd populaţiile de leucocite (tabel XXI) valoarea medie determinată a
numărului de Eo a fost semnificativ mai mare icircn lotul cu SM comparativ cu lotul martor (t-
Test Plt0001) Analizacircnd curba ROC trasată pentru valorile numărului de Eo am observat
că valorile ldquocut-offrdquo mai mari de 200 Eomm3
pot prezice prezenta SM cu cea mai mare
specificitate (7705) şi sensibilitate (3978) Pentru diagnosticul SM calculul ariei AUC a
arătat faptul că determinarea numărului de Eo are valoarea unui test diagnostic cu acurateţe
redusă (AUC = 0 589) Comparacircnd valorile medii ale fibrinogenului am calculat o diferenţă
statistic semnificativă icircntre cele două loturi valoarea medie a fibrinogenului fiind mai mare icircn
lotul SM ((t-Test P lt 00001) Cu ajutorul curbei ROC am observat că valorile fibrinogenului
mai mari de 306 mgdl prezic sindromul metabolic cu o sensibilitate de 7511 şi specificitate
de 6056 Fibrinogenul a fost icircncadrat icircn categoria markerilor inflamatori cu acurateţe
redusă AUC avacircnd valoarea de 0690 Icircn loturile de studiu am calculat AUC corespunzătoare
criteriilor de diagnostic ale SM Am observat că icircn cazul scorului Harmonised I
sensibilitatea şi specificitatea sunt de 100 iar AUC este egală cu 1000 Pentru cele cinci
criterii de diagnostic AUC a avut valori icircntre 0636 (pentru variabila HDL-col) şi 0804
(pentru variabila CA) (figura 431)
AUC ES 95 CI
Scor SM Harmonised I 1000 00000 0997 - 1000
CA (cm) 0804 00133 0781 - 0825
TAD (mmHg) 0666 00169 0639 - 0692
TAS (mmHg) 0757 00148 0732 - 0780
Glicemie (mgdl) 0742 00160 0717 - 0766
Trigliceride (mgdl) 0756 00175 0732 - 0780
HDL- colesterol 0636 00183 0609 - 0662
Figura 431 Analiza AUC criterii de diagnostic ale SM
Studiind figura 432 se observă că valoarea AUC pentru markerii studiaţi este cuprinsă
icircntre 0589 (icircn cazul variabilei Eo) şi 0690 (icircn cazul fibrinogenului) Icircn contextul SM
acurateţea acestor markeri ai inflamaţiei cronice şi disfuncţiei endoteliale poate fi considerată
redusă deoarece AUClt07 pentru toţi markerii investigaţi (figura 431) Totuşi valorile ariilor
parametrilor reprezentaţi icircn figura 431 sunt apropiate de valorile AUC ale variabilelor TAD
şi HDL-col (figura 432) şi deci pot fi utilizaţi pentru completarea diagnosticului de SM
AUC ES 95 CI
Non-HDL-colesterol 0605 00171 0580 - 0630
Col totalHDL-col 0607 00163 0642 - 0691
Acid uric 0655 00161 0630 - 0679
Fibrinogen 0690 00206 0658 - 0720
Eozinofile 0589 00176 0564 - 0615
Figura 432 AUC markeri ai SM inflamaţiei cronice şi aterogenezei
Discuţii
Status-ul proinflamator din SM asociat cu insulinorezistenţa şi disfuncţia endotelială
constituie o verigă de legătură dintre inflamaţie şi procesele metabolice complexe icircnsoţindu-
se de deteriorarea funcţiilor vasculare şi creşterea riscului de evenimente cardiovasculare
majore (2858) Studiul efectuat a arătat o diferenţă icircntre vacircrstele subiecţilor din cele două
loturi vacircrsta pacienţilor cu SM fiind semnificativ mai mare (Plt0001) comparativ cu subiecţii
normali confirmacircnd faptul menţionat că vacircrsta reprezintă unul din stimulii care agravează
inflamaţia cronică Am arătat că valorile fibrinogenului sunt mai mari icircn SM comparativ cu
Scor Harmonised I
0 20 40 60 80 100
0
20
40
60
80
100
100-Specificitate
Sen
sib
ilit
ate
Criterii diagnostic SM
0 20 40 60 80 100
0
20
40
60
80
100
100-Specificitate
Sens
ibili
tate
CA
TAD
TAS
Glicemie
Trigliceride
HDL-C
0 20 40 60 80 100
0
20
40
60
80
100
100-Specificitate
Sensi
bilita
te
Non-HDL-C
Col T HDL-C
Acid uric
Fibrinogen
Eozinofile
lotul martor atacirct la bărbaţi cacirct şi la femei icircn concordanţă cu studiile anterioare Evaluarea
fibrinogenului este importantă nu numai icircn SM pentru definirea contextului proinflamator şi
protrombotic ci şi icircn predicţia cardiovasculară la subiecţii normali Studiind populaţiile
leucocitare am obţinut diferenţe semnificative icircn cazul Eo valoarea medie a acestora fiind
semnificativ mai mare icircn lotul cu SM comparativ cu lotul martor (P lt 0001 figura 425B)
Implicarea Eo icircn SM s-a conturat icircn ultimul deceniu aceste celule fiind implicate icircn recrutarea
macrofagelor din ţesutul adipos Experimental s-a constatat că o creştere a Eo apărută ca
urmare a infectării cu helminţi sau stimulare cu IL-5 este urmată de icircmbunătăţirea toleranţei la
glucoză (199) Controlul pe care icircl exercită Eo asupra activării macrofagelor ar putea fi cheia
intervenţiei asupra obezităţii icircn viitorul apropiat(165199) Hiperuricemia asociata frecvent cu
SM este cunoscut ca un factor independent de risc cardiovascular (192 202) In concordanţă
cu aceasta afirmaţie in studiul nostru am constatat ca nivelul seric al acidului uric a fost mai
crescut in lotul cu SM diferenţa semnificativă din punct de vedere statistic (P lt 00001)
Dislipidemia aterogenă din sindromul metabolic şi diabetul zaharat se caracterizează prin
creşterea trigliceridelor şi a Non-HDL-col scăderea HDL-col creşterea numărului de
particule LDL modificate (185190) La pacienţii cu SM am descris un profil aterogenetic
cu risc crescut de evenimente cardiovasculare majore
STUDIUL RECEPTORILOR ACTIVAŢI DE INDUCTORII PROLIFERĂRII
PEROXIZOMILOR-ALPHA IcircN LEUCOCITELE CIRCULANTE
Ipoteza de lucru
Studii experimentale efectuate au arătat că rolul PPARα icircn ateroscleroză derivă din
implicarea acestor receptori icircn limitarea inflamaţiei Plecacircnd de la acest fundament ne-am
propus evidenţierea receptorilor nucleari activaţi de inductorii proliferării peroxizomilor-
alpha (PPARα) prin citometrie de flux icircn leucocitele din sacircngele periferic alături de
evaluarea acestei metode icircn cuantificarea expresiei relative a PPARα ca test diagnostic
precoce al modificărilor metabolice SM Studiul expresiei relative a receptorilor PPARα a
plecat de la premisa că dacă SM se caracterizează printr-un status inflamator cronic nivelul
de expresie a PPARα icircn leucocitele circulante este mai scăzut la pacienţii cu SM comparativ
cu subiecţii normali Referitor la studiul receptorului CD36 am plecat de la presupunerea că
nivelul de expresie al acestui receptor icircn SM este crescut dat fiind importanţa acestui receptor
icircn inflamaţia aterosclerotică Avacircnd icircn vedere efectele receptorilor amintiţi icircn
insulinorezistenţă şi aterogeneză am considerat necesară evaluarea prezenţei receptorului
nuclear PPARα icircn paralel cu studiul receptorului bdquoscavengerrdquo CD-36 prin metoda citometriei
icircn flux Astfel icircn studiul efectuat mi-am propus şi investigarea existenţei unei legături icircntre
nivelul de expresie al receptorilor PPARα şi cel al receptorului CD-36 De asemenea ne-am
icircndreptat atenţia spre stabilirea unor asocieri icircntre componentele clinice şi biochimice ale
sindromului metabolic şi nivelul intensităţilor de fluorescenţă ale PPARα şi CD-36 ca măsură
a expresiei relative a acestor receptori
Material și metodă
Studiul receptorilor PPARα icircn contextul sindromului metabolic s-a desfăşurat icircn
perioada 1012014 -28022014 pe baza metodologiei studiilor de tip caz-martor Am urmărit
identificarea unor diferenţe icircntre expresia receptorilor PPARα la pacienţii cu SM comparativ
cu subiecţii sănătoşi diferenţe care ar putea fi utile icircn diagnosticul precoce al SMRecrutarea
pacienţilor s-a efectuat din pacienţii prezentaţi pentru consultaţie la Cabinetul Individual
ldquoCMI Dr Popa Elenardquo situat icircn strada Ion Creanga din Iaşi Pentru studiul receptorilor
PPARα icircn sindromul metabolic au fost selecţionaţi un număr de 57 de subiecţi 26 de subiecţi
cu SM (constituind lotul SM) şi 31 subiecţi fără SM constituind lotul de control (Lot Non-
SM) Pentru studiul SM pacienţii au fost recrutaţi din masa de populaţie arondată cabinetului
de MF fără istoric de SM diabet zaharat boală cardio-vasculară aflați la primul diagnostic
de SM evaluarea completă a acestora fiind urmată de includerea icircn programul de
management cardiovascular şi metabolic conform Ghidurilor Terapeutice aflate icircn vigoare
Lot SM a) criterii de includerevacircrsta peste 18 ani recrutarea pe baza semnării
Consimţămacircntului liber informatSM nou-diagnosticat pe baza prezenţei a minim trei criterii
de diagnostic pentru SM conform Harmonised I b) criterii de excluderevacircrstă sub 18 ani
refuzul semnării Consimţămacircntului liber informat femei icircn perioada de graviditate sau de
lactaţie SM anterior diagnosticat istoric de diabet zaharat boală cardiovasculară constituită
tratament cu agonişti PPARα (ie fibraţi etc)
Lot martor (Non-SM) a) criterii de includerevacircrsta peste 18 ani recrutarea pe baza
semnării Consimţămacircntului liber informat absenţa diagnosticului de SM b) criterii de
excludere vacircrstă sub 18 ani refuzul semnării Consimţămacircntului liber informat femei icircn
perioada de graviditate sau de lactaţie
Studiul receptorilor PPARα a inclus două subetape
A Studiul componentelor sindromului metabolic conform criteriilor Harmonised I
Evaluarea clinică a participanţilor s-a desfăşurat icircn cadrul Cabinetului de Medicină de
Familie iar determinările hematologice şi biochimice s-au efectuat icircn Laboratorul
Ambulatorului Clinic de Specialitate al Spitalului Clinic de Urgenţă bdquoSf Spiridonrdquo Iaşi
B Evaluarea icircn citometrie de flux a nivelului relativ de expresie a PPARα şi CD36
Studiul receptorilor PPARα s-a desfăşurat icircn Laboratorul de Biologie Moleculară al
Institutului Regional de Oncologie Iaşi prin metoda citometriei icircn flux (19) Nivelul relativ de
expresie al receptorilor nucleari PPARα a fost determinat icircn diferite tipuri de leucocite
circulante polimorfonucleare (PMN) limfocite (Ly) Mo(Mo) şi eozinofile(Eo) Am utilizat o
metodă de citometrie icircn flux optimizată ldquoin houserdquo elaborată icircn cadrul Laboratorului de
Biologie Moleculară al IRO Iaşi Icircn cursul procesului de optimizare am testat mai multe
concentraţii ale anticorpului anti-PPARα 1100 1500 11500 14500 iar icircn urma
determinărilor efectuate şi a analizei statistice concentraţia 1500 a fost considerată optimă
pentru desfăşurarea studiului (tabel XXIII figura 51)
Tabel XXIII Optimizarea concentraţiilor Ac anti-PPARα Diferenţa
mediilor
valorilor
medii
PMN
Diferenţa
mediilor
mediane-
lor
PMN
Diferenţa
mediilor
valorilor
medii
Ly
Diferenţa
mediilor
mediane-
lor
Ly
Diferenţa
mediilor
valorilor
medii
Mo
Diferenţa
mediilor
mediane-
lor
Mo
Diferenţă 0 1300 1600 100 100 700 750
normal - 1100 650 1050 1050 1350 450 900
patologic 1500 2850 2750 3800 3600 2850 2400
11500 -1050 800 3500 3300 2250 1800
14500 2200 2150 1300 1100 2950 2850
AOptimizare
BRepetabilitate
Figura 51 Optimizarea concentraţiei anticorpului anti-PPARα
Icircn concordanţă cu literatura de specialitate icircn cercetarea efectuată intensitatea medie
de fluorescenţă (MFI) a fost utilizată ca măsură pentru evaluarea expresiei celulare a
receptorilor PPARα (212) Un exemplu de analiză a probelor este reprezentat icircn figura 52
Figura 52 Exemplu de analiză flowcitometrică pentru receptorul nuclear PPARα Graficul din stacircnga reprezintă distribuţia leucocitelor iar cel din dreapta ilustrează distribuţia
intensităţii de fluorescenţă pentru populaţiile de celule selectate
Intensitatea Medie a Fluorescenţei (MFI) a CD36 ca o măsură a nivelului relativ de
expresie a acestor receptori la nivelul membranei Mo a fost detectată printr-o metodă
convenţională pentru marcare de suprafaţă şi evaluare pe bază de citometrie icircn flux folosind
aceleaşi probe de sacircnge cu EDTA cu focalizare pe Mo şi utilizacircnd CD14 ca marker specific
pentru Mo (figura 53)
Figura 53Analiza
flowcitometrică
pentru marcajul
CD14 - CD36
Rezultate
Icircn cele două loturi au fost incluşi icircn studiu un număr de 57 de participanţi care au fost
investigaţi din punct clinic şi paraclinic Vacircrsta subiecţilor incluşi icircn studiu a fost cuprinsă
icircntre 18 şi 79 ani iar vacircrsta medie calculată a avut valoarea de 4805 plusmn 1587 ani Pentru sexul
masculin vacircrsta medie este de 4925plusmn1617 ani iar pentru sexul feminin 4689 plusmn1 5ani
diferenţa obţinută icircntre vacircrstele pacienţilor fiind statistic nesemnificativă (P = 085)
Analizacircnd vacircrstele subiecţilor din cele două loturi am observat că vacircrsta medie a pacienţilor
cu SM (5476 plusmn 1183 ani) a fost semnificativ mai mare (t-test P = 0003) decacirct icircn lotul
martor (4258 plusmn 169 ani) Pentru diagnosticul sindromului metabolic am calculat scorul de
SM bazacircndu-ne pe criteriile Harmonised I Conform criteriilor diagnostice din cei 57 de
subiecţi investigaţi un număr de 26 participanţi (46) au fost incluşi icircn lotul cu SM (Lot
SM) iar 31 de subiecţi(54) nu au prezentat acest sindrom constituind lotul martor (Lot
Non-SM) Din punct de vedere al repartiţiei pe sexe nu au existat diferenţe statistic
semnificative raportul bărbaţifemei fiind de 0961 Din totalul celor 28 de bărbaţi incluşi icircn
studiu 4285 (12 bărbaţi) au icircntrunit cel puţin trei criterii diagnostice pentru SM fiind
incluşi icircn lotul SM Icircn acelaşi timp 14 femei reprezentacircnd 4827 din subiecţii de sex
feminin au icircntrunit condiţiile pentru includerea icircn lotul pacienţilor cu SM Valoarea medie
determinată pentru scorul de SM a arătat prezenţa unor valori semnificativ statistic mai mari
din punct (t-test P lt 00001) icircn lotul SM (769plusmn176) comparativ cu lotul martor (174 plusmn
184) Am studiat comparativ media valorilor măsurate ale criteriilor componentelor SM
Analiza statistică a arătat valori semnificativ statistic mai mari pentru CA TG glicemie TAS
şi TAD (plt0001) icircn lotul SM comparativ cu lotul normal Concomitent calculul statistica
evidenţiat o scăderea semnificativă a HDL-colesterolului icircn lotul cu SM comparativ cu
subiecţii din lotul martor (Non-SM) Aplicacircnd testul z am comparat ponderea pacienţilor
diagnosticaţi cu HTA dislipidemie şi tulburări ale metabolismului glucidic icircn lotul SM versus
lot Non-SM şi am constatat prezenţa acestor afecţiuni icircntr-un procent mai mare semnificativ
statistic icircn lotul SM ((plt0001)
Utilizacircnd testul t Student am calculat diferenţele statistice şi icircntre alți parametri
studiaţi care sunt factori de risc cardio-vascular dar care nu sunt componente ale SM Icircn lotul
cu SM valorile acidului uric fibrinogenului Col total Non-HDL-col şi LDL-col au fost
semnificativ mai mari comparativ cu lotul martor (tabel XXVI) Analizacircnd valorile medii ale
populaţiilor de leucocite am identificat doar pentru populaţia de Eo diferenţe statistice icircntre
cele două loturi numărul Eo icircn lotul SM fiind semnificativ mai mare decacirct icircn lotul martorTot
pentru caracterizarea celor două loturi am analizat prezenţa antecedentelor
heredocolaterale (AHC) de diabet zaharat boala cardiovasculară şi dislipidemie pentru toţi
subiecţii investigaţi Astfel existenţa AHC de HTA a fost declarată de 2580 din subiecţii
incluşi icircn lotul martor respectiv de 5384 din numărul pacienţilor cu SM Antecedentele
heredocolaterale de dislipidemie au fost prezente la 3461 din pacienţii cu SM icircn timp ce icircn
lotul martor anamneza a evidenţiat aceste antecedente la 3548 din subiecţi
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα
Icircn cercetarea desfăşurată am utilizat intensitatea medie de fluorescenţă (MFI) ca
măsură a nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn leucocitele studiate Pentru
populaţiile de leucocite analiza computerizată a probelor luate icircn studiu a furnizat valori
pentru MFI a receptorilor PPARα icircn funcţie de cantitatea de anticorpi anti-PPARα marcaţi cu
fluorocrom care se leagă de aceste celule şi apoi sunt captaţi de citometru (figura 59)
A Lot Non - SM
B Lot SM
Figura 59 Analiza flowcitometrică pentru receptorii PPARα icircn leucocite A lot normal B lot SM
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Mo
Analiza probelor efectuată conform protocolului de lucru descris a arătat prezenţa
PPARα icircn Mo recoltate din sacircngele tuturor subiecţilor incluşi icircn această cercetare Pentru toţi
participanţii investigaţi analiza MFI a Ac anti - PPARα icircn populaţia de Mo (Mo) a arătat un
interval de variaţie icircntre [786 395] Valoarea medie a nivelului de expresie relativă a PPARα
calculată pentru Mo a fost de 23210 plusmn7860 Pentru ambele loturi de studiu pacienţilor cu
SM testul Testul Shapiro-Wilk a arătat distribuţia normală a valorilor obţinute pentru nivelul
de expresie al PPARα icircn Mo
Tabel XXVIII Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn Mo
Lot SM Lot Non-SM
N 26 31
Media 22819 23538
SD 5819 7717
Mediana 22400 22600
Minimum 12800 78600
Maximum 35800 37900
Percentila 25 18300 18300
Percentila 75 26200 30350
Pentru pacienţii din lotul SM valoarea medie a MFI icircn Mo a fost de 22819 plusmn 5880 iar
pentru lotul martor s-a calculat o valoare medie a MFI a Ac anti-PPARα de 23538 plusmn 7717
Distribuţia statistică a frecvenţei valorilor MFI obţinute pentru nivelul de expresie a PPARα
icircn Mo subiecţilor din cele două loturi a fost reprezentată icircn figura 511
Figura 511 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti-PPARα icircn Mo
Sub forma unei diagrame de control Shewhart am reprezentat variaţia intensităţii medii de
fluorescenţă pentru anticorpii anti-PPARα icircn MoVariaţia nivelului de expresie relativă a
receptorilor PPARα icircn Mo subiecţilor studiaţi este ilustrată icircn fig 512 513
Figura 512 Lot SM Variaţia
expresiei relative a PPARα icircn Mo
Număr pacienţi
26
Minim 128
Maxim 358
Media 22819
DS 5819
25 din 26 valori ale MFI s-au icircncadrat
icircn intervalul Media plusmn 2DS
Figura 513 Lot Non-SM Variaţia
expresiei relative a PPARα icircn Mo
Număr pacienţi 31
Minimum 786
Maximum 379
Media 23538
DS 7717
Cu excepţia unei singure
determinări valorile calculate s-au
icircncadrat icircn Media plusmn 2DS
Utilizacircnd testul parametric t-Student pentru variabilele cu distribuţie normală am
comparat valoarea medie a intensităţii de fluorescenţă a Ac anti-PPARα icircn lotul cu SM versus
subiecţi fără SM (Lot Non-SM) Analiza statistică efectuată nu a identificat diferenţe icircntre
50 100 150 200 250 300 350 400 450
0
5
10
15
20
25
30
35
MFI anti-PPAR a
Frecv
enta
relati
va (
)
Lot SM
0 50 100 150 200 250 300 350 400 450 500
0
5
10
15
20
25
30
35
MFI anti-PPAR a
Frecv
enta
relati
va (
)
Lot martor
1 6 11 16 21 26 31
0
50
100
150
200
250
300
350
400
450
MFI
anti-
PPAR
a
2282
1106
3458
518
4046
Media
LCI
LCI
1 6 11 16 21 26 31 36
-100
0
100
200
300
400
500
MFI a
nti-PP
AR
a
2354
810
3897
39
4669LCS
LCI
Media
cele două loturi icircn ceea ce priveşte expresia PPARα la nivelul Mo circulante (t- Test P=
069)
Studiul receptorilor PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de AHC şi dislipidemie
Nivelul de expresie al receptorilor PPARα α icircn Mo tinde să fie mai scăzut la subiecţii
cu AHC de HTA comparativ subiecţii care nu au declarat AHC de HTA (P= 006 fig 515)
AHC HTA
Număr 22
Mediana 19950
Percentila 25 17800
Percentila 75 22700
AHC HTA absente
Număr 35
Mediana 24800
Percentila 25 19025
Percentila 75 31700
Figura 515 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Mo funcţie de AHC de HTA
Nu s-au calculat diferenţe semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor
PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de dislipidemie atunci cacircnd aceştia au fost comparaţi cu
subiecţii fără AHC de tulburări ale metabolismului lipidic (t- Test P= 020)
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn limfocite
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn populaţia de Ly a
demonstrat prezenţa receptorilor PPARα icircn Ly tuturor subiecţilor studiaţi Pentru toţi
participanţii investigaţi analiza MFI a Ac anti - PPARα icircn populaţia de Ly a relevat un
interval de variaţie icircntre [748 314] iar valoarea medie a MFI a fost de 18058 plusmn 5600
Pentru ambele loturi aplicarea testului Shapiro-Wilk a evidenţiat distribuţia normală a
valorilor determinate pentru nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Ly Pentru
pacienţii cu SM valoarea medie a MFI determinată pentru expresia PPARα icircn populaţia de
Ly a fost de 18178 plusmn 61 16 iar pentru lotul martor a fost de 16800 plusmn 5229
Tabel XXX Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn limfocite
Lot SM Lot Non-SM
N 26 31
Media 181781 179574
SD 611694 522907
Mediana 165000 168000
Minimum 81300 74800
Maximum 314000 301000
Percentila 25 13400 - 145750
Percentila 75 21800 21700
Distribuţia frecvenţei valorilor MFI a Ac anti-PPARα icircn Ly este redată icircn figura 518
Figura 518 Distribuţia frecvenţelor relative a MFI a Ac anti-PPARα icircn Ly
94 din determinările efectuate pentru determinarea nivelului de expresie relativă al
MFI
ant
iPPA
R
a_Mo
190
200
210
220
230
240
250
260
270
280
DA NU
AHC HTA
P=006
50 89 128 167 206 244 283 322 361 400
0
5
10
15
20
25
30
35
MFI anti-PPAR a
Frecv
enta
relati
va (
)
Lot SM
0 50 100 150 200 250 300 350
0
5
10
15
20
25
30
35
40
MFI anti-PPAR a
Frec
venta
relat
iva (
)
Lot Non-SM
receptorilor PPARα icircn limfocitele subiecţilor cu SM s-au icircncadrat icircn intervalul Media plusmn 2DS
Figura 5 19 Lot SM Variaţia expresiei
relative a PPARα icircn Ly
Număr pacienţi 26
Minimum 813
Maximum 31400
Media 18178
Deviaţia Standard 6116
25 valori s-au icircncadrat icircn Media plusmn 2DS
Pentru lotul Non-SM diagrama de control (figura 520) a arătat toate valorile
determinate pentru lotul Non-SM se icircncadrează icircntre LCS şi LCI
Figura 520 Lot Non -SM Variaţia
expresiei relative a PPARα icircn Ly
Număr pacienţi 31
Minimum 748
Maximum 30100
Media 179574
Deviaţia Standard 5229
96 din valori icircncadrate icircn Media plusmn 2DS
Aplicarea testului t-Student pentru valorile medii ale intensităţii de fluorescenţă ale
PPARα icircn Ly nu a arătat existenţa unei diferenţe statistic semnificative icircntre lotul cu SM şi
lotul martor(t- Test P= 088)
Analiza receptorilor PPARα icircn Ly subiecţilor cu AHC de HTA şi dislipidemie
Studiind populaţiile de Ly la subiecţii care au prezentat AHC de hipertensiune
arterială analiza flowcitometrică a relevat existenţa unor valori mai mici pentru MFI la aceşti
subiecţi comparativ cu cei fără AHC de HTA (fig 522) deşi scăderea observată nu a
icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică (t- Test P = 009)
AHC HTA
Număr 22
Mediana 16000
Percentila 25 12700
Percentila 75 17100
AHC HTA absenţe
Număr 35
Mediana 18700
Percentila 25 14900
Percentila 75 23175
Figura 522 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Ly funcţie de AHC de HTA
Nu am calculat diferenţe statistic semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor
PPARα icircn populaţiile de Ly ale subiecţilor la care am identificat AHC de dislipidemie
comparativ cu cei care nu au declarat antecedente familiale de dislipidemie (t- Test P= 051)
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn neutrofile (PMN)
Analiza flowcitometrică a evidenţiat prezenţa PPARα icircn PMN recoltate din sacircngele
venos al tuturor participanţilor la studiu Pentru toţi subiecţii investigaţi analiza MFI a Ac -
PPARα icircn populaţia de PMN a relevat un interval de variaţie de [163419] iar valoarea medie
a MFI pentru Ac anti-PPARα a fost de 26392 plusmn 7064 Testul Shapiro-Wilk a arătat o
distribuţie normală a valorilor intensităţii medii de fluorescenţă a anticorpilor anti-PPARα atacirct
icircn lotul pacienţilor cu SM cacirct şi icircn lotul martor
1 6 11 16 21 26 31
-50
0
50
100
150
200
250
300
350
400
MFI
anti-
PPAR
a
1818
595
3041
-17
3653
Media+2DS
Media- 2DS
1 6 11 16 21 26 31 36
0
50
100
150
200
250
300
350
MFI
ant
i-PPA
R
a
1796
750
2841
227
3364
Media+2DS
Media
Media- 2DS
MFI
anti-
PPAR
a Ly
130
140
150
160
170
180
190
200
210
DA NU
AHC HTA
P=009
Tabel XXXII Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn PMN
Lot SM Lot Non-SM
N 26 31
Media 26273 26480
SD 6915 7088
Mediana 25900 25500
Minimum 17200 16300
Maximum 39500 41900
Percentila 25 19800 19600
Percentila 75 30500 31500
Icircn cele două loturi distribuţia frecvenţei valorilor nivelului relativ de expresie a
receptorilor PPARα icircn PMN a fost reprezentată sub formă de histograme (fig 525)
Figura 525 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti-PPARα icircn PMN
Pentru cei 26 de pacienţi din lotul cu SM a valoarea medie a nivelului de expresie
relativă a receptorilor PPARα icircn PMN a fost de 26273 plusmn 6915 Studiind diagrama Shewhart
din figura 526 se observă că toate valorile obţinute pentru nivelul de expresie relativă
PPARα icircn PMN investigate se icircncadrează icircntre limitele definite de valorile medii plusmn 2DS
Figura 526 Lot SM
Variaţia expresiei relative a PPARα icircn
PMN
Număr pacienţi 26
Minimum 17200
Maximum 39500
Media 26273
Deviaţia Standard 6915
Valorile MFI icircncadrate icircn Media plusmn 2DS
Pentru lotul martor valoarea medie calculată a MFI a anticorpilor anti-PPARα a fost de
26480 plusmn 7088 peste 95 din valorile MFI fiind cuprinse icircn Media plusmn 2DS (figura 527)
Figura 527 Lot Non-SM Variaţia expresiei
relative a PPARα icircn PMN
Număr pacienţi 31
Minimum 16300
Maximum 41900
Media 26480
Deviaţia Standard 7088
30 valoriicircn Media plusmn 2DS
Pentru PMN analiza statistica nu a arătat existenţa unei diferenţe statistic semnificative icircntre
nivelul de expresie relativă a PPARα la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii din lotul
Non-SM (t- Test P= 090) Studiind populaţiile de PMN la subiecţii care au prezentat AHC
de HTA nu am calculat o diferenţă statistic semnificativă icircntre expresia receptorilor PPARα
la subiecţii cu istoric familial de hipertensiune arterială comparativ cu cei pentru care nu s-au
notat AHC de HTA (t- Test P= 013)De asemenea am identificat diferenţe icircntre nivelul de
expresie al PPARα icircn PMN subiecţilor care prezentau AHC de dislipidemie comparativ cu
cei fără AHC de dislipidemie (t- Test P= 017)
50 100 150 200 250 300 350 400 450 500
0
5
10
15
20
25
30
35
MFI anti-PPAR a
Frecve
nta rel
ativa (
)
Lot SM
50 100 150 200 250 300 350 400 450 500
0
5
10
15
20
25
30
MFI anti-PPAR a
Frecv
enta
relati
va (
)
Lot Non-SM
1 6 11 16 21 26 31
0
50
100
150
200
250
300
350
400
450
500
MFI
anti-
PPA
R
a
2627
1244
4010
553
4702
Media + 2DS
Media - 2 DS
Media
1 6 11 16 21 26 31 36
0
50
100
150
200
250
300
350
400
450
500
MFI
anti-
PPAR
a
2648
1230
4066
522
4774
Media+ 2DS
Media - 2DS
Media
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile Tabel XXXIV Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn Eo
Lot SM Lot Non-SM
N 26 31
Mediaplusmn SD 141057 plusmn 47604 172209 plusmn 37565
Mediana 142450 171300
Minimum 35000 68500
Maximum 233700 250600
Percentila 25 119300 153225
Percentila 75 169700 199550
Am studiat nivelul relativ de expresie a receptorilor PPARα icircn Eo iar rezultatele au
fost figurate sub forma de histograme (figura 532)
Figura 532 Distribuţia frecventelor relative ale valorilor MFI anti- PPARα icircn Eo
Din diagrama Shewhart (figura 533) se observă că toate valorile determinate pentru
nivelul de expresie relativă a PPARα icircn Eo pentru lotul SM s-au icircncadrat icircn [Media plusmn 3 DS]
peste 90 din determinări fiind cuprinse icircn [Media plusmn 2 DS] iar icircn [Media plusmn 1 DS] sunt
incluse peste 65 din valorile MFI
Figura 533 Lot SM
Variaţia expresiei relative a PPARα icircn Eo
Număr pacienţi 26
Minimum 35000
Maximum 233700
Media 141057
Deviaţia Standard 47604
24 valori icircncadrat eicircn [Media plusmn 2DS]
Pentru subiecţii incluşi icircn lotul martor analiza diagramei (figura 534) a arătat că
toate cele 31 de valori ale MFI pentru PPARα icircn Eo se icircncadrează icircn [Media plusmn 3DS] iar 30
dintre acestea se icircncadrează icircn [ Media plusmn 2 DS]
Figura 534 Lot Non -SM
Variaţia expresiei relative a PPARα icircn Eo
Număr pacienţi 31
Minimum 685
Maximum 2506
Media 172209
Deviaţia Standard 375 65
30 valori icircncadrate icircn [Media plusmn 2DS]
Comparacircnd subiecţii cu SM cu cei din lotul martor am observat o scădere
semnificativă statistic a MFI a Ac anti - PPARα icircn Eo pentru pacienţiir cu SM ( figura 535)
PPARα Eo Lot Non-SM
Număr 31
Mediana 171300
Percentila 25 152325
Percentila 75 199550
PPARα Eo Lot SM
Număr 26
Mediana 142450
Percentila 25 119300
Percentila 75 169700
Figura 5 35 Comparaţie icircntre nivelul de expresie a PPARα icircn Eo
0 500 1000 1500 2000 2500 3000
0
10
20
30
40
50
MFI anti-PPAR a
Frecvent
a relativa
()
Lot SM
400 800 1200 1600 2000 2400 2800
0
5
10
15
20
25
30
35
40
45
MFI anti-PPAR a
Frecenta
relativa
()
Lot Non-SM
1 6 11 16 21 26 31
-500
0
500
1000
1500
2000
2500
3000
MFI a
nti-PP
AR
a
14106
4765
23447
94
28117
Media + 2DS
Media- 2DS
LCI
LCS
1 6 11 16 21 26 31 36
500
1000
1500
2000
2500
3000
MFI an
ti-PPA
R a
17221
9708
24734
5951
28490
LCI
Media-2DS
Media
Media +2 DS
LCS
1200
1300
1400
1500
1600
1700
1800
1900
Lot SM Lot Non-SM
P=00072
Cu ajutorul curbei ROC am evaluat posibilitatea utilizării MFI a Ac anti - PPARα icircn
Eo ca marker pentru diagnosticul SM Valoarea MFI a Ac anti - PPARα icircn Eo care prezice cu
cea mai mare acurateţe prezenţa SM a fost de 1533 (punctul de ldquocut-offrdquo) pentru care am
calculat o sensibilitate de 5652 şi o specificitate de 7778 Calculul ariei AUC a furnizat
valoarea de 0663 şi deci determinarea parametrului MFI anti- PPARα icircn Eo are valoarea
unui test cu acurateţe redusatilde icircn diagnosticul SM Studiind expresia PPARα icircn Eo la subiecţii
care au prezentat AHC de HTA am observat o scădere semnificativă statistic (P = 00023) a
expresiei PPARα la subiecţii cu istoric familial de HTA comparativ cu subiecţii fatilderatilde AHC de
HTA (figura 537)
AHC HTA
Număr 22
Mediana 148800
Percentila 25 116425
Percentila 75 170750
AHC HTA absente
Număr 35
Mediana 170850
Percentila 25 143700
Percentila 75 195000
Figura 537 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Eo funcţie de AHC de HTA
Studiind subiecţii cu AHC declarate de dislipidemie nu am identificat diferenţe icircntre
nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Eo subiecţilor cu AHC de dislipidemie
comparativ cu cei care nu au declarat prezenţa AHC de dislipidemie (t - Test P = 067)
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor CD36
Am studiat expresia receptorilor CD36 icircn Mo subiecţilor incluşi icircn studiu
Lot Non - SM
BLot SM
Figura 539 Analiza flowcitometrica pentru receptorii CD36 icircn Mo
Pentru toţi participanţii la studiu valorile MFI au variat icircn intervalul [817 6933] iar
valoarea medie a MFI a Ac anti-CD36 a fost de 397133 plusmn 120902 Tabel XXXVII Statistică descriptivă pentru a CD36 icircn Mo
Lot SM Lot Non-SM
Media 429034 370377
Deviatia Standard 109051 125514
Mediana 411000 362800
Minimum 266400 81700
Maximum 693300 616800
Percentila 25 346200 273750
Percentila 75 469000 453300
Distribuţia frecvenţelor relative a MFI au fost prezentate sub formă histogramelor
Figura 541 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti - CD36 icircn Mo
MFI
ant
i-PPA
R a Eo
1000
1100
1200
1300
1400
1500
1600
1700
1800
1900
DA NU
AHC HTA
P=00023
1000 2000 3000 4000 5000 6000 7000 8000
0
5
10
15
20
25
MFI anti-CD36
Frecve
nta rela
tiva (
)
Lot SM
0 1778 3556 5333 7111
0
5
10
15
20
25
30
35
MFI anti-CD36
Frecve
nta rel
ativa (
)
Lot Non - SM
Referitor la lotul SM 92 din valorile MFI a Ac anti- CD36 s-au icircncadrat icircn
intervalul Media plusmn 2 DS (figura 542) iar pentru lotul martor peste 90 dintre acestea icircn
Media plusmn 2 DS (figura 543)
Figura 542 Lot SM
Variaţia MFI anti-CD36 icircn Mo
Număr pacienţi 26
Minimum 2664
Maximum 6933
Media 429034
Deviaţia Standard 109051
Figura 543 Lot Non -SM
Variaţia MFI anti- CD36 icircn Mo
Număr 31
Minimum 81700
Maximum 616800
Media 370377
Deviaţia Standard 125514
Comparacircnd subiecţii cu SM cu cei din lotul normal am constatat o tendinţă de creştere
a expresiei CD36 icircn lotul cu SM((t - Test P= 0067)
MFI anti - CD36 Lot Non-SM
Număr 31
Mediana 3628
Percentila 25 2737
Percentila 75 4533
MFI anti - CD36 Lot SM
Număr 26
Mediana 4110
Percentila 25 3462
Percentila 75 4690
Figura 544 Comparaţie icircntre cel două loturi privind MFI anti - CD36 icircn Mo
Referindu-ne la subiecţii cu AHC de HTA am observat o tendinţă de creştere a
valorilor MFI anti-CD36 comparativ cu cei care nu au avut AHC de HTA (t - Test P = 0 08)
AHC HTA
Număr 22
Mediana 442800
Percentila 25 355275
Percentila 75 519475
AHC HTA absenţe
Număr 35
Mediana 377400
Percentila 25 316900
Percentila 75 443400
Figura 545 Comparaţie icircntre expresia CD36 icircn Mo funcţie de AHC de HTA
Nu s-au calculat diferenţe semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor
PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de dislipidemie atunci cacircnd aceştia au fost comparaţi cu
subiecţii fără AHC de dislipidemie (t - Test P=031)
Corelaţii icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα si CD36
Studiind valorile intensităţii medii de fluorescenţă a Ac anti-PPARα icircn Mo Ly şi
PMN am observat că nivelul de expresie celularatilde a PPARα icircn Mo Ly şi PMN sunt corelate
puternic pozitiv atacirct icircn lotul SM cacirct şi icircn lotul martor(fig547 548)
1 6 11 16 21 26 31
0
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
Pacienti
MFI a
nti-CD
36
42903
21093
64714
10188
75619
LCI
Media
LCS1 6 11 16 21 26 31 36
-1000
0
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
MFI a
nti- C
D36
37038
11935
62141
-616
74692Media + 2 DS
Media
Media - 2 DS
3200
3400
3600
3800
4000
4200
4400
4600
4800
Lot SM Lot Non-SM
P = 00676
MFI
anti-
CD36
3400
3600
3800
4000
4200
4400
4600
4800
5000
DA NU
AHC HTA
P = 008
Figura 547 Studiul relatiilor dintre
receptorii PPARα icircn SM A Mo vs PMN B Mo vs Ly
C PMN vs Ly Graficul ilustrează coeficienţii r P dreapta de
regresie (linia centrala) intervalul de icircncredere
95 şi intervalul de predicţie 95
Figura 548 Corelaţii icircntre receptorii PPARα icircn lotul
martor
A Mo vs PMN
B Mo vs Ly
C PMN vs Ly
Tot pentru lotul SM cacircnd am evaluat relaţia dintre nivelul de expresie relativă a
receptorilor PPARα icircn Eo şi nivelul de expresie relativa a receptorilor CD 36 am obţinut o
corelaţie negativă (r = - 05 P = 001) (fig 549 A)
50 100 150 200 250 300 350 50
100
150
200
250
300
350
400
450
500
PPARα Ly
PPARα PMN
y = 56641 + 1159 x r = 086 P lt 0001
C
50 100 150 200 250 300 350 400 0
50
100
150
200
250
300
350
PPARα Mo
PPARα Ly
y = 36665 + 0607 x r = 090 P lt 0001
B
150 200 250 300 350 400 450 0
50 100 150 200 250 300 350 400 450 500
PPARα PMN
PPARα Mo
y = 2505 + 0879 x r = 081 P lt 0001
A
50 100 150 200 250 300 350
50 100 150 200 250 300 350 400 450 500
PPARα Ly
PPARα PMN
y = 95668 + 0919 x r = 081 P lt 0001
C
100 150 200 250 300 350 400
0
50
100
150
200
250
300
350
400
PPARα Mo
PPARα Ly
y = -7503 + 0829 x r = 079 P lt 0001
B
100 150 200 250 300 350 400
50
100
150
200
250
300
350
400
450
500
PPARα Mo
PPARα PMN
y = 61384 + 0882 r = 074 P lt 0001
A
Figura 549 Corelaţii icircntre expresia PPARα icircn Eo şi alte tipuri de receptori investigaţi A PPARα Eo şi CD 36 (Lot SM) B PPARα Eo şi PPARα Mo( Lot Non-SM)
Icircn lotul martor am identificat o asociere moderată pozitivă (r = 038 P = 0033) icircntre
nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Eo şi Mo (figura 549B) corelaţie absentă icircn
lotul pacienţilor cu SM
Corelaţii dintre receptorii studiaţi şi componentele sindromului metabolic
Icircn lotul de control analiza statistică a relevat faptul că icircntre circumferinţa
abdominală (CA ) şi nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Mo Ly şi PMN există o
corelaţie inversă adică scăderea expresiei PPARα la nivelul acestor populatii celulare ar fi
icircnsoţită de creşterea CA (figura 550
Figura 550Corelaţii dintre receptorii
PPARα si CA A Mo B Ly C PMN
La pacienţii cu SM am notat o corelatie moderată negativă statistic semnificativă
icircntre TG şi valorile MFI a Ac anti- PPARα icircn Mo şi Ly( fig 551)
150 200 250 300 350 400 450 50
60
70
80
90
100
110
PPARα PMN
CA r = - 040 P = 0024
C
50 100 150 200 250 300 350 50
60
70
80
90
100
110
PPARα Ly
CA r = - 046 P = 0009
B
50 100 150 200 250 300 350 400 50
60
70
80
90
100
110
PPARα Mo
CA r = - 042 P = 0017
A
50 100 150 200 250 300 350 400 500
1000
1500
2000
2500
3000
PPARα Mo
PPARα Eo
r = 038 P = 0033
B
0 500 1000 1500 2000 2500 1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
PPARα Eo
CD36
r = 050 P = 0010
A
Figura 551 Lot SM Corelaţie icircntre expresia PPARα şi TG (A Mo B Ly)
Analizand corelatia dintre receptorii CD36 si valorile TA la pacientii cu SM am observat
o asociere pozitivă asteptată intre TAD si nivelul de expresie al receptorilor CD36 (fig 552)
Figura 552 Lot SM Corelaţii icircntre expresia
receptorilor CD36 şi valorile tensiunii arteriale
diastolice
Studiind corelaţiile dintre receptorii PPARα şi HDL-col la subiecţii din lotul martor am
notat o asociere pozitivă icircntre expresia PPARα icircn Mo şi Ly cu HDL-col (fig 553)
Figura 553 Lot martor Corelaţii icircntre HDL-col şi expresia PPARα icircn Mo(A) Ly(B)
Icircn lotul normal am evidenţiat corelaţii pozitive moderate dar semnificative statistic icircntre
CA şi valorile TAS (r = 062 P lt 0001) respectiv TAD (r = 050 P=0004) precum şi icircntre
CA şi glicemia subiecţilor normali (r = 052 P = 0003) Aceste date icircmpreună cu relaţia
invers proporţională identificată icircntre HDL-col şi CA (r = 050 P = 001) susţin validitatea
acestui studiu Icircn lotul subiecţilor cu SM am observat o corelaţie moderat pozitivă icircntre
expresia PPARα icircn populaţiiile de Mo şi Eo şi concentraţia a HDL-col (fig 554)
B
100 150 200 250 300 350 20
30
40
50
60
70
80
90
100
PPARα Ly
HDL-col-(mgdl)
r = 036 P = 0046
A
150 200 250 300 350 400 20
30
40
50
60
70
80
90
100
PPARα Mo
HDL-col-(mgd)l
r = 035 P = 005
70 75 80 85 90 95 100 1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
TAD (mmHg)
CD36
r = 048 P = 0013
B
50 100 150 200 250 300 350 -100
0
100
200
300
400
500
PPARα Ly
TG(mgdl)
r = - 042 P = 003
A
50 100 150 200 250 300 350 400 -100
0
100
200
300
400
500
PPARα Mo
TG ( mgdl) r =- 0 43 P = 0027
Figura 554 Corelaţii icircn SM icircntre HDL-col şi expresia PPARα icircn Mo (A) şi Eo(B)
Corelaţii icircntre nivelul de expresie relativă a PPARα şi markeri ai disfuncţiei
endoteliale şi inflamaţiei cronice
Deşi nu a icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică am reţinut corelaţia invers
proporţională (r = - 0331 P = 006) dintre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα
icircn PMN şi concentraţia serică a Non-HDL-colesterolului
Studiind relaţiile dintre parametri icircn lotul de pacienţi cu SM am observat o corelaţie
moderată invers proporţională icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Eo şi
acidul uric seric (figura 555 A) corelaţie absentă la subiecţii fără SM
Figura 555 Lot SM corelaţia dintre expresia PPARα icircn Eo şi acidul uric (A) respectiv
PPARα şi fibrinogen (B)
Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P=008) am notat pentru
pacienţii cu SM corelaţia invers proporţională dintre expresia PPARα icircn Eo şi concentraţia
serică a fibrinogenului ( figura 555B)
V5 Discuţii
Icircn cadrul lucrării de doctorat am studiat nivelul de expresie relativă a PPARα icircn
leucocitele pacienţilor cu SM comparativ cu cea a subiecţilor normali Expresia PPARα a fost
studiată icircn paralel cu cea a CD36 glicoproteină exprimată pe suprafaţa a numeroase celule
din organismul uman inclusiv pe cea a Mo şi macrofagelor Prin funcţia sa de receptor pentru
particulele oxidate de LDL CD36 cunoscut ca bdquoscavenger receptorrdquo de clasa B sau
bdquotrombospodin receptorrdquo contribuie la dezvoltarea inflamaţiei de la nivel endotelial şi
formarea plăcii de ateroscleroză Referitor la studiul PPARα icircn Eo icircn sindromul metabolic
menţionăm că studiul nostru este primul care arată că nivelul de expresie a proteinei PPARα
icircn Eo măsurat prin citometrie icircn flux este semnificativ mai redus la pacienţii care sunt
diagnosticaţi cu acest sindrom De asemenea icircn lotul cu SM cercetat icircn cadrul studiului
receptorilor PPARα numărul Eo circulante a fost semnificativ mai crescut la pacienţii cu SM
B
0 500 1000 1500 2000 2500 200
250
300
350
400
450
PPARα Eo o
Fibrinogen mgdl
r =- 036 P = 008
0 500 1000 1500 2000 2500 1 2 3 4 5 6 7 8 9
10 11
PPARα Eo_
Acid uric(mgdl) r = 048 P = 0014 A
0 500 1000 1500 2000 2500 10
20
30
40
50
60
70
80
PPARα Eo
HDL(mgdl)
r = 044 P = 0024
B
100 150 200 250 300 350 400 10
20
30
40
50
60
70
80
PPARα Mo
HDL( mgdl)
r = 046 P = 0019
A
(P = 003) Aceste constatări conduc la ipoteza că Eo joacă un rol special icircn mecanismele
patogenice declanşate icircn sindromul metabolic şi că receptorii PPARα sunt importanţi icircn
implicarea Eo icircn obezitate şi insulinorezistenţă Creşterea numărului de Eo circulante este
urmată de eliberarea mediatorilor proinflamatori iar reducerea expresiei PPARα icircn Eo
determină perturbarea mecanismelor de control al inflamaţiei cu exacerbarea cascadei
proinflamatorii Consecutiv se agravează disfuncţia endotelială şi se accelerează progresia
leziunilor de ateroscleroză Extrapolacircnd aceste ipoteze putem spune că asocierea raportată
dintre boala ischemică coronariană şi Eo poate fi şi consecinţa exacerbării cascadei
proinflamatorii de la nivel vascular produsă datorită scăderii expresiei PPARα icircn Eo iar
creşterea numărului de Eo circulante poate reprezenta o adaptare a organismului uman care
icircncearcă să suplinească deficitul de receptori PPARα Analizacircnd curba ROC pentru
intensităţile medii de fluorescenţă determinate pentru anticorpii anti- PPARα icircn Eo am
obţinut pentru acest biomarker o sensibilitate a testului de 565 şi o specificitate de 778
pentru un punct de cut-off de 1533 ( figura 536 ) Deşi aria AUC (Aria under the curve) egală
cu 0663 icircncadrează acest test ca avacircnd o acurateţe redusă observăm că că această valoare
este apropiată de determinările AUC pentru alţi factori (fibrinogen raport de aterogenitate
acid uric non- HDL-colesterol) cunoscuţi ca fiind implicaţi icircn aterogeneză şi inflamaţia
cronică (figura 431) Aceste remarci alături de faptul că icircn studiul receptorilor PPARα icircn
leucocite am inclus subiecţi la primul diagnostic de SM creează premisa integrării
determinării expresiei relative a receptorilor PPARα icircn diagnosticul complex al sindromului
metabolic Putem spune că icircn final studiul expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofilele
circulante se dovedește a fi util icircn diagnosticul precoce la nivel molecular al SM permiţacircnd
identificarea timpurie a unor indivizi cu risc cardiometabolic crescut Astfel intervenţia
precoce asupra subiecţilor cu deficit de PPARα icircn Eo contribuie la managementul eficient al
afecţiunilor degenerative icircn care inflamaţia cronică icircndeplineşte un rol primordial Referitor
la populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările efectuate prin citometrie de flux nu au
arătat existenţa unor diferenţe statistice icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα
la subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali Rezultatele noastre pot fi
consecinţa caracteristicilor loturilor studiate (icircn studiul nostru au fost incluşi subiecţi recrutaţi
la primul diagnostic de SM şi icircn absenţa stimulării receptorilor PPARα cu droguri agoniste
PPARα) dar icircn acelaşi timp pot apare diferenţe datorită metodei utilizate (231 232 233)
Făcacircnd o paralelă cu un studiu publicat icircn 2013 icircn Europa (231) care a arătat creşterea
nivelului de expresie al PPARα icircn Ly şi Mo observăm că deşi numărul de subiecţi a fost
aproximativ egal (57 participanţi icircn studiul nostru 60 icircn studiul DAmore) subiecţii icircn studiul
amintit au fost recrutaţi dintr-o clinică cu profil medical la primul diagnostic de SM icircn timp
ce metoda utilizată a fost PCR (Polymerase Chain Reaction) mult mai fidelă decacirct citometria
icircn flux icircn studiul receptorilor nucleari De asemenea DAmore nu investighează expresia
PPARα icircn Eo şi PMN icircn cercetare fiind incluse doar celulele CD14+ (predominant Mo) şi
CD14- (predominant Ly) Deşi nu am obţinut diferenţe statistic semnificative icircntre cele două
loturi referitoare la nivelul de expresie relativă a PPARα icircn Mo Ly şi PMN am observat
corelaţii puternice semnificative statistic icircntre expresia receptorilor PPARα icircn aceste tipuri
celulare Rezultatele obţinute sugerează existenţa unui mecanism diferit molecular de control
icircn eozinofile care reglează cantitatea de proteină PPARα icircn eozinofile versus alte tipuri de
leucocite (la pacienţii cu SM) şi acest lucru este icircn concordanţă cu cercetările care descriu
expresia PPARα mRNA icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale
bronşice keratinocite) Studiind prin citometrie de flux nivelul de expresie relativă a
receptorului CD36 la nivelul Mo am arătat prezenţa acestuia icircn Mo tuturor subiecţilor
investigaţi Analizacircnd valorile intensităţii medii de fluorescenţă a CD36 icircn loturile studiate
am observat o tendinţă de creştere la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali
confirmacircnd implicarea receptorului CD36 icircn patogeneza acestuia Referitor la expresia
receptorului CD36 rezultatele obţinute sunt icircn consens cu studii anterioare care au arătat
creşterea expresiei CD36 la pacienţii cu SM şi diabet zaharat Astfel pe lacircngă diferenţa icircn
expresia CD36 s-au raportat şi corelaţii inverse icircntre expresia proteinei CD36 şi nivelul
adiponectinei Acelaşi studiu a evidenţiat o corelaţie pozitivă intre expresia CD36 cu expresia
receptorilor PPAR gamma relaţia cu PPARα nefiind investigată
Analiza de subgrup a relaţiilor dintre componentele SM și elementele moleculare
proinflamatorii studiate a relevat prezenţa unor asocieri semnificativ statistice icircntre acestea
Se argumentează astfel că veridicitatea studiului este susţinută de interdependenţele statistice
ale componentelor SM Determinarea coeficientului de corelaţie Icircn studiul nostru nivelul de
expresie relativă a PPARα s-a corelat moderat negativ (figura 550) cu CA a subiecţilor din
lotul normal pentru populaţiile celulare de Mo (r = - 0420 P = 001) Ly (r = - 046 P =
0009) şi PMN (r = - 040 P = 0024) date care sunt icircn concordanţă cu studiile care arată
rolul PPARα icircn furnizarea energiei prin beta-oxidarea acizilor graşi Icircn acelaşi timp icircn lotul
pacienţilor cu SM nu am identificat prezenţa unei asocieri icircntre nivelul de expresie relativă a
PPARα şi valoarea măsurată a CA Asocierea dintre expresia relativă a PPARα cu obezitatea
de tip central completează datele existente referitoare la reglarea homeostaziei energetice
conturacircnd un mecanism de control deficitar al aportului caloric al SM Icircn condiţiile icircn care
rezultatele obţinute prin metoda citometriei icircn flux nu au arătat existenţa unei corelaţii intre
expresia PPARα şi CA la pacienţii cu SM considerăm că ar fi necesar studiul
polimorfismului genei PPARA care ar putea aduce informaţii importante cu privire la
implicarea acestor receptori icircn apariţia obezităţii de tip central Subliniem acest lucru deoarece
obezitatea este o boală plurifactorială icircn care pe lacircngă factorii ereditari sunt implicaţi factori
de mediu psihologici şi sociali (245) Existenţa unei componente genetice a aterosclerozei
este legată şi de prezenţa unor variante ale genei PPARA asociate cu creşterea incidenţei bolii
cardiovasculare (82) şi a SM (249) Icircn studiul nostru am constatat o scădere statistic
semnificativă a nivelului expresiei relative a receptorilor PPARα icircn Eo la subiecţii cu
antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială comparativ cu subiecţii fără istoric
familial de hipertensiune (figura 537) Deşi diferenţele calculate icircntre loturile studiate nu au
icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică la subiecţii care au declarat prezenţa
antecedentelor familiale de hipertensiune arterială remarcăm o tendinţă de scădere a
intensităţii medii de fluorescenţă pentru Ac anti-PPARα la nivelul Mo (figura 515 P = 006
) icircn timp ce expresia relativă a CD36 icircnregistrează o creştere la acesti subiecţi (figura 545 P
= 008) Icircn contextul riscului cardiovascular foarte icircnalt al pacienţilor cu SM amintim şi
existenţa corelaţiei pozitive dintre valorile tensiunii arteriale diastolice şi expresia relativă a
receptorului CD36 (r = 0483 P = 0013) Această constatare este icircn consens cu studiile care
au arătat că forma solubilă circulantă a CD36 este asociată cu factorii de risc cardiovasculari
fiind propusă ca un marker precoce al aterosclerozei Activarea PPARα este asociată cu
modularea metabolismului lipidic iar agoniştii PPARα sunt utilizaţi icircn mod curent pentru
tratamentul dislipidemiei Sub acţiunea agoniştilor PPARα se obţine o icircmbunătăţire a funcţiei
endoteliale şi a parametrilor reologici funcţiile pleiotropice ale agoniştilor PPARα fiind
dovedite icircn trialuri clinice controlate Icircn populaţiile de Mo şi Ly la pacienţii cu SM
cercetarea noastră a evidenţiat o asociere negativă icircntre nivelul de expresie relativă a
receptorilor PPARα şi concentraţia TG serice (figura 551) Astfel scăderea expresiei
receptorilor PPARα este asociată cu creşterea nivelului TG serice contribuind la profilul
lipidic aterogen din SM Icircn conformitate cu literatura de specialitate icircn studiul efectuat prin
metoda citometriei icircn flux am găsit prezenţa asocierii icircntre nivelul de expresie al PPARα şi
HDL-colesterol Corelaţia pozitivă dintre nivelul de expresie relativă PPARα şi concentraţia
HDL-colesterolului a fost observată icircn lotul martor icircn populaţiile de Mo (r = 035 P = 005)
şi Ly ( r = 036 P = 004) (figura 553) susţinacircnd faptul că stimularea receptorilor PPARα
este legată de creşterea nivelului seric al lipoproteinelor cu densitate crescută La pacienţii cu
SM corelaţia dintre expresia PPARα şi HDL-colesterol a fost evidenţiată icircn populaţiile de Mo
(r = 046 P = 0019) şi eozinofile (r = 044 P = 0024) Se desprinde concluzia că icircn
sindromul metabolic scăderea concentraţiei HDL-colesterol este legată de diminuarea
nivelului de expresie relativă a receptorilor nucleari PPARα icircntărind afirmaţiile legate de
rolul acestor receptori icircn progresia bolilor cardiovasculare Studiind reactanţii de fază acută
analiza statistică a relevat o diferenţă semnificativă din punct de vedere statistic icircntre valorile
fibrinogenului la pacienţii cu SM atunci cacircnd au fost comparaţi cu subiecţii fără SM
(Capitolul IV4 P lt0 001 figura 427A) De asemenea icircn Capitolul V dedicat studiul
expresiei relative a receptorilor PPARα studiul valorilor fibrinogenului a arătat creşterea
acestui reactant de faza acută icircn lotul cu SM comparativ cu lotul martor (P lt0 0001) Icircn
studiul nostru am calculat o corelaţie invers proporţionala (r = - -036 fig 555B) icircntre
nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile şi concentraţia serică a
fibrinogenului Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P = 008) am reţinut
această asociere deoarece am demonstrat că nivelul de expresie relativă al receptorilor
PPARα icircn eozinofile este mai scăzut icircn sindromul metabolic iar sindromul metabolic este
caracterizat printr-un status inflamator cronic status caracterizat şi de creşterea concentraţiei
serice a fibrinogenului De asemenea notam ca această corelaţie negativă se află icircn
concordanţă cu studiile care arata că tratamentul cu agonişti PPARα (fibraţi) determina
scăderea nivelului seric al fibrinogenului contribuind la diminuarea inflamaţiei cronice din
sindromul metabolic şi icircn consecinţă amelioracircnd insulinorezistenţa
LIMITE ȘI DIFICULTĂȚI IcircN CERCETARE
Icircn cadrul Tezei de Doctorat am desfăşurat o cercetare care şi-a propus studierea
expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Recrutarea anamneza şi examinarea
clinică a subiecţilor au fost realizate icircn cadrul Cabinetului de Medicină de Familie CMI Popa
Elena din Iaşi iar determinările hematologice şi biochimice s-au efectuat icircn cadrul
Laboratorului Ambulatorului de Specialitate al Spitalului Universitar ldquoSfacircntul Spiridon din
Iaşi Icircn studiul epidemiologic şi al markerilor inflamatori al sindromului metabolic desfăşurat
au fost incluşi un număr de 1530 de participanţi pe baza liberului consimţămacircnt examinaţi icircn
perioada 01012013 - 31122013 Icircn continuare icircn perioada 1012014 - 28022014 pe baza
criteriilor de includere şi excludere icircn cele două loturi de studiu am investigat un număr de 57
de subiecţi prezentaţi la consultaţie icircn această perioadă şi care au icircndeplinit criteriile de
includere icircn cele două loturi (Lot SM şi Lot Control) constituite pentru evaluarea nivelului de
expresie a receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Explorarea nivelului de expresie
relativă a receptorilor PPARα s-a desfăşurat icircn cadrul Laboratorului de Biologie Moleculară
de pe platforma Institutului Regional de Oncologie Datorită resurselor proprii financiare
limitate trebuie să subliniez că aceasta cercetare nu ar fi fost posibilă fără contribuţia unor
cercetători din domeniul medical care m-au sprijinit necondiţionat atacirct icircn elaborarea
protocolului de lucru cacirct şi icircn efectuarea propriu-zisă a studiului Icircn acest sens menţionăm şi
faptul că pentru studiul receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic am utilizat aparatura
Laboratorului de Biologie Moleculară (care deserveşte icircntreaga Regiune a Moldovei) Pe
această cale mulţumesc personalului Laboratorului de Biologie Moleculară pentru ajutorul
acordat icircn desfăşurarea cercetării doctorale icircn condiţiile icircn care se observa creşterea
numărului de pacienţi care se adresează acestei platforme de cercetare Mulţumesc de
asemenea şi Doamnei Doctor Elena Butoi din cadrul Institutului de Biologie şi Patologie
Moleculară ldquoNicolae Simionescurdquo Bucureşti) pentru donaţia anticorpului secundar anti-
FITC Icircn consecinţă pentru recrutarea unui număr mai mare de participanţi ar fi fost necesară
icircn primul racircnd obţinerea unor resurse financiare suplimentare pentru achiziţia de aparatură şi
reactivi Totuşi numărul subiecţilor recrutaţi este apropiat de numărul subiecţilor raportaţi icircn
cadrul unor granturi de cercetare care aveau ca ţinta studiul expresiei receptorilor PPARα
(212 227 228 231) Rezultatele obţinute continua seria lucrărilor care arata importanta
studiului mecanismelor etiopatogenice ale sindromului metabolic patologie care se afla icircntr-o
continuă creştere La pacienţii cu SM pe lacircngă diminuarea nivelului de expresie a receptorilor
PPARα icircn eozinofile ne aşteptam şi la evidenţierea unor modificări icircn expresia PPARα şi icircn
populaţiile de Ly Mo şi PMN Acest fapt poate fi explicat de utilizarea unor celule provenite
de la pacienţi fără afectare cardiovasculară fără diabet zaharat şi necesită continuarea
studiului pe culturi celulare icircn condiţii de stimulare cu agonişti PPARα deziderat care
impune continuarea investigării expresiei PPARα printr-un grant de cercetare
ORIGINALITATEA ȘI CONTRIBUȚIILE INOVATIVE ALE TEZEI DE
DOCTORAT PERSPECTIVE DE CERCETARE
Evaluarea nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn leucocitele circulante
aduce noi perspective icircn studiul obezităţii şi sindromului metabolic Importanta studiului
expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic derivă din prevalenta crescută a
sindromului metabolic icircn populaţia cercetată la care se adaugă riscul cardiovascular foarte
icircnalt al acestor pacienţi cu implicaţii majore icircn sănătatea publică Rolul receptorilor PPARα
icircn inflamaţie şi aterogeneza este binecunoscut dar studiul nostru este primul care a arătat că
nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα este semnificativ mai scăzut in populatiile
de eozinofile la pacienţii cu SM Această concluzie coroborata cu existenţa unei stracircnse
asocieri intre expresia receptorilor PPARα la nivelul Mo limfocitelor şi PMNlor creeaza
ipoteza existenţei unui mecanism de control diferit al expresiei PPARα la nivelul
eozinofilelor Această cercetare aduce informaţii importante referitoare la mecanismele
proinflamatorii care stau la baza insulinorezistenţei şi riscului cardiometabolic şi impune
continuarea studiului acestor receptori nucleari prin citometrie icircn flux metodă care poate fi
aplicată şi la scara mai largă dacă sunt asigurate resursele materiale necesare cercetării
Cercetarea prin citometrie icircn flux poate fi completată de studiul polimorfismului genei
PPARA şi astfel se pot identifica timpuriu indivizii cu potenţial risc cardiometabolic crescut
Studiul receptorilor PPARα a stabilit conexiuni cu factori proinflamatori şi aterogenetici iar
continuarea cercetării poate aduce şi elemente noi de diagnostic precoce icircn sindromul
metabolic contribuind la icircmbunătăţirea prognosticului acestor pacienţi
CONCLUZII FINALE
1 Aplicarea scorului de SM alături de implementarea algoritmului electronic de diagnostic
contribuie la o prelucrare rapidă eficientă și standardizată a informaţiilor la nivelul
medicinei primare
2 Prevalenţa SM calculată astfel icircn cadrul studiului este crescută (2732) icircn concordanţă
cu datele raportate
3 Controlul factorilor de risc cardiometabolici incluşi icircn SM se poate realiza prin
managementul stilului de viaţă (scăderea greutăţii corporale prin combaterea
sedentarismului şi adoptarea unei diete antiaterogene şi hipocalorice) şi administrarea
terapiei medicamentoase
4 Este necesară adoptarea unei politici de sănătate publică pentru prevenirea creşterii icircn
populaţie a prevalenţei obezităţii şi a diabetului zaharat
5 Noi metode de cercetare icircn domeniul SM axate pe diagnosticarea precoce şi cuantificarea
eficientă a acestuia duce la diminuarea incidenței evenimentelor cardiovasculare majore
6 Sindromul metabolic se caracterizează printr-un status inflamator cronic
7 Valorile Non-HDL-colesterolului şi a raportului de aterogenitate sunt semnificativ mai
mari la pacienţii cu SM
8 Dintre reactanţii de faza acută am observat că valoarea medie a fibrinogenului este mai
crescută icircn lotul cu SM
9 Valorile eozinofilelor sunt crescute icircn sindromul metabolic iar explorarea relaţiei dintre
eozinofile şi obezitate constituie una din direcţiile de studiu actuale ale sindromului
metabolic
10 Evaluarea markerilor inflamatori icircn contextul sindromului metabolic este utilă icircn
evaluarea complexă a a factorilor de risc cardiometabolici
11 Prin metoda citometriei icircn flux am demonstrat prezenta Receptorilor Activaţi de
Inductorii Proliferării Peroxizomilor ndash Alpha (PPARα) icircn toate populaţiile de leucocite
studiate (Mo limfocite PMN eozinofile) atacirct icircn lotul pacienţilor cu SM cacirct şi icircn lotul
martor
12 Utilizacircnd intensitatea medie de fluorescenţă a anticorpilor anti- PPARα am arătat că
nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile este semnificativ mai redus
la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali
13 Acest studiu este primul care a demonstrat existenţa unei scăderi statistic semnificative a
nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofilele pacienţilor cu SM
confirmacircnd cercetările recente care au evidenţiat rolul eozinofilelor şi al receptorilor
PPARα icircn obezitate reglarea inflamaţiei cronice şi aterogeneza
14 Contrar aşteptărilor noastre icircn populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările
efectuate icircn cele două loturi de studiu (cu şi fără sindom metabolic) nu am evidenţiat
diferenţe statistic seminificative icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα la
subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali
15 Icircn populaţiile de Mo limfocite şi polimorfonucleare am observat corelaţii puternice
semnificativ statistic icircntre expresia PPARα icircn aceste tipuri celulare sugeracircnd existenţa
unui mecanism unic de control al inflamaţiei cronice la nivelul acestor celule probabil
diferit de cel din eozinofile
16 La subiecţii cu SM expresia relativă a PPARα icircn Eo este invers asociată cu expresia
receptorului CD36 (receptor al particulelor de ox - LDL şi propus ca un marker precoce al
aterosclerozei) dovedind rolul antiinflamator al receptorilor PPARα la nivel endotelial
17 La pacienţii cu antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială nivelul de
expresie al receptorilor PPARα icircn eozinofile şi Mo este diminuat comparativ cu subiecţii
fără antecedente familiale de hipertensiune arterială Putem spune că studiul efectuat de
noi aduce informaţii importante legate de geneză aterosclerozei şi hipertensiunii arteriale
18 Prin studiul asocierilor dintre receptorii PPARα şi componentele clinice ale sindromului
metabolic am arătat rolul acestor receptori icircn determinismul obezităţii de tip central
nivelul expresiei relative a receptorilor PPARα fiind invers proporţional cu circumferinţa
abdominală
19 Icircn acelaşi timp nivelul de expresie a PPARα icircn sindromul metabolic este asociat pozitiv
cu concentraţia serică a HDL-colesterolului şi invers asociat cu nivelul trigliceridelor
serice dovedind rolul acestor receptori icircn diminuarea procesului inflamator cronic de la
nivel vascular
20 La pacienţii cu SM scăderea expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofile este corelată cu
creşterea unor markeri ai sindromului inflamator cronic cardiometabolic (acid uric
fibrinogen) ilustracircnd importanta receptorilor icircn reglarea status-ului inflamator cronic din
sindromul metabolic
21 Utilizarea metodei flowcitometrice pentru studiul expresiei relative a receptorilor PPARα
icircn leucocite a adus informaţii importante cu privire la mecanismele moleculare de control
implicate icircn patogenia bolilor cardiometabolice icircn concordanţă cu cercetările care descriu
expresia PPAR icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale bronşice
keratinocite)
BIBLIOGRAFIE SELECTIVA
1 Kahn R Metabolic syndrome- what is the clinical usefulness Lancet 2008371(9628)1892-3
2 Reaven GM The metabolic syndrome is this diagnosis necessary Am J Clin Nutr 2006 83(6)1237-7
3 Grundy SM Pre-Diabetes Metabolic Syndrome and Cardiovascular Risk J Am Coll Cardiol 201259(7)
635-43
4 International Diabetes Federation IDF Diabetes Atlas 6th edn International Diabetes Federation Belgium
Brussels 20131-155
5 World Health Organization Global Status Report on Noncommunicable Diseases 2010 World Health
Organization Geneva Switzerland 20111-176
6 Coman AE Petrovanu R Sindromul metabolic in practica de ambulator Editura Pim Iaşi 2009 1-103
7 Grundy SM Becker D Clark LT et alThird Report of the National Cholesterol Education Program (NCEP)
Expert Panel on Detection Evaluation and Treatment of High Blood Cholesterol in Adults (Adult
Treatment Panel III) Final Report Circulation 2002106(25)3143-90
8 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J Metabolic syndrome- a new worldwide definition A Consensus Statement
from the International Diabetes Federation Diabet Med 2006 23(5)469-80
9 KG Alberti KG Eckel RH Grundy SM etal International Diabetes Federation task force on epidemiology
and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart Association World Heart
Federation International Atherosclerosis Society International Association for the study of obesity
Harmonizing the metabolic syndrome a joint interim statement of the International Diabetes Federation task
force on epidemiology and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart
Association World Heart Federation International Atherosclerosis society and International Association
for the study of obesity Circulation 2009120(16)1640-5
10 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J IDF Epidemiology Task Force The metabolic syndrome new
worldwide definition Lancet 2005 366 1059 - 62
11 Oleszczyk M Svab I Seifert B et al Primary healthcare in the developing part of Europe changes and
development in the former Eastern Bloc countries that joined the European Union following 2004 Med Sci
Monit 2009(15)78ndash84
12 Jung U J Choi M S Obesity and Its Metabolic Complications The Role of Adipokines and the
Relationship between Obesity Inflammation Insulin Resistance Dyslipidemia and Nonalcoholic Fatty
Liver Disease Int J Mol Sci 2014rsquo15(4) 6184-223
13 Vanden Heuvel JP Peters JM Peroxisome Proliferators In Ramos K (ed) Cellular and Molecular
Toxicology (Second Edition) Volume 2 New York Elsevier Science Inc 2010 145 - 67
14 Yessoufou A Wahli W Multifaceted roles of peroxisome proliferator-activated receptors (PPARs) at the
cellular and whole organism levels Swiss Med Wkl 2010140w13071 doi104414smw201013071
15 Azhar S Peroxisome proliferator-activated receptors metabolic syndrome and cardiovascular disease
Future Cardiology 20106(5)657-91
16 Andries G Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity
Diabetes and Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(Suppl)24-32
17 Zandbergen F Plutzky J PPARalpha in atherosclerosis and inflammation Biochim Biophys Acta
20071771(8)972-82
18 Straus DS Glass CK Anti-inflammatory actions of PPAR ligands new insights on cellular and molecular
mechanisms Trends Immunol 200728(12)551-8
19 Zlei M Zugun- Eloae F Carasevici E Citometrie icircn flux - Bază şi clinică Icircn Hinescu ME (ed) Citometrie icircn
flux - principii şi aplicaţii clinice Bucureşti Editura Viaţa Medicală Romacircnească 20111-128
20 Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity Diabetes and
Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(9)24-32
21 Woerly G Honda K Loyens M et al Peroxisome proliferator-activated receptors alpha and gamma down-
regulate allergic inflammation and eosinophil activation J Exp Med 2003198(3)411-21
22 Salle-Saumont D Brenuchon C Kanda A et al Peroxisome proliferator-activated receptor alpha regulates
skin inflammation and humoral response in atopic dermatitis J Clin Allergy Immunology 2008 21(4)962-8
23 Schote A Turner J Schiltz J et al Nuclear receptors in human immune cells expression and correlations
Mol Immunolog 200744(6)1436-45
24 DAmore S Vacca M Graziano G et al Nuclear receptors expression chart icircn peripheral blood
mononuclear cells identifies patients with Metabolic Syndrome Biochim Biophys Acta
20131832(12)2289-301
25 Uthurralt J Gordish-Dressman H Bradbury M T et al PPARalpha L162V underlies variation in serum
triglycerides and subcutaneous fat volume in young males BMC Med Genet 2007855
26 Hiukka A Leinonen ES Jauhiainen M et al Long-term effects of fenofibrate on VLDL and HDL
subspecies icircn participants with type 2 diabetes mellitus Diabetologia 2007 50(10)2067-75
27 Robins SJ Rubins HB Faas FH et alInsulin resistance and cardiovascular events with low HDL
cholesterol The Veterans Affairs HDL Intervention Trial (VA-HIT) Diabetes Care 2003 26(5)1513-7
28 Devaraj S Siegel D Jialal I Statin Therapy in Metabolic Syndrome and Hypertension Post-JUPITER
What is the Value of CRP Curr Atheroscler Rep 2011 13(1) 31ndash42
29 Imperatore G Riccardi G Iovino C et al Plasma Fibrinogen A New Factor of the Metabolic Syndrome A
population-based study Diabetes Care 19982 1(4)649-54
30 Krysiak R Gdula-Dymek A Bachowski R Okopien B Pleiotropic effects of atorvastatin and fenofibrate
in metabolic syndrome and different types of pre-diabete Diabetes Care 201033(10)2266-70
31 Hermans MP Impact of Fenofibrate on Type 2 Diabetes Patients with Features of the Metabolic Syndrome
Subgroup Analysis From FIELD Curr Cardiol Rev 20106(2)112-8
32 Silverstein R Inflammation atherosclerosis and arterial thrombosis Role of the scavenger receptor CD36
Cleveland Clinic Journal of Medicine 200976(Suppl 2)S27-S30
33 Hăncu N Obezitatea In Vereşiu IA (ed) Diabetul zaharat nutritia si bolile metabolice Volume 2 Editura
Echinox Cluj- Napoca 2010 1-15
Lista lucrări publicate
1 Elena Popa Maria Maidaniuc Agnes Bacusca Alamir Diaa Rodica Petrovanu Adorata Elena
Coman Disfuncţia endotelială ndash de la mecanisme moleculare la cuantifi care şi tratament icircn practica
medicală Practica Medicală 20149(3) 109-14
2 Elena Popa Agnes Bacusca Alamir Diaa Maria Maidaniuc Rodica Petrovanu Adorata Elena Coman
The function of insulin receptor (IRF) in evolution of obesity correlation with adipocytes diameters
Archives of the Balkan Medical Union 201449(3) 275-9
3 Elena Popa Florin Zugun-Eloae Mihaela Zlei Daniela Jitaru Oana Maria Pintilie Adorata Elena
Coman Maria Traian Didona Anca Ungureanu Eugen Carasevici - acceptata pentru numarul 42014
Flow cytometry analysis of PPAR-alpha receptors in metabolic syndrome) Revista Romană de
Medicină de Laborator(RRLM-D-14-00034R1- adeverinţa ataşată
IV32 Obiectivele studiului 43
IV33 Lotul de studiu 43
IV34 Protocolul studiului epidemiologic al sindromului metabolic 44
IV35 Metode utilizate icircn cercetare 45
IV36 Analiza statistică 46
IV37 Rezultate 46
IV38 Discuţii 62
IV39 Concluzii 64
IV4 Studiul sindromlui inflamator cronic icircn cadrul sindromului metabolic 65
IV41 Scopul studiului 65
IV42 Obiectivele studiului 65
IV43Material şi metodă 65
IV44 Analiza statistică 65
IV45 Rezultate 66
IV46Discuţii 79
IV47 Concluzii 80
Capitolul V STUDIUL RECEPTORILOR ACTIVAŢI DE INDUCTORII PROLIFERĂRII
PEROXIZOMILOR-ALPHA IcircN LEUCOCITELE CIRCULANTE 81
V1 Ipoteza de lucru 81
V2 Material și metodă 82
V3 Analiza statistică 87
V4 Rezultate 87
V41 Analiza loturilor studiate 87
V42 Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα 91
V43 Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor CD36 106
V44 Studiul corelaţiilor icircn cele două loturi 111
V5 Discuţii 118
V6 Concluzii 128
VI LIMITE ȘI DIFICULTĂȚI IcircN CERCETARE 129
VII ORIGINALITATEA ȘI CONTRIBUȚIILE INOVATIVE ALE TEZEI DE
DOCTORAT PERSPECTIVE DE CERCETARE 130
VIII CONCLUZII FINALE 131
IX BIBLIOGRAFIE 133
X ANEXE 148
Fişa electronică de studiu Consimţămacircntul informat al pacientului Recoltarea probelor de sacircnge venos pentru studiul PPARα
Protocol marcare CD14 - CD36
Imagini PPARα - citometrie icircn flux
Imagini CD36 Lista lucrări publicate
LISTA ABREVIERI
CA - Circumferinţa abdominalăcm - CentimetriCRP - Proteina C reactivăCol - Colesteroldl - DecilitruEo - EozinofileHDL - High density lipoprotein (lipoproteine cu densitate icircnaltă)IDF - Federaţia Internaţională de DiabetIgE - ImunoglobulinăIMC- Indice de masă corporalăLy - LimfociteLDL- Low density lipoprotein (lipoproteine cu densitate joasă)mg - MiligramMo- MonociteNCEP-ATP III - Naţional Cholesterol Education Program Adult Treatment Panel IIIPPAR - Receptorii Activaţi de Inductorii Proliferarii Peroxizomilor (peroxizome proliferator -activated receptor)PMN - PolimorfonucleareSM - Sindrom metabolicTA - Tensiunea arterialăTAS - Tensiune arterială sistolicăTAD - Tensiune arterială diastolicăTG - Trigliceride
Teza cuprinde un număr de 118 de figuri 41 de tabele și 280 referințe bibliograficeNumerotarea tabelelor şi figurilor este identică cu cea din teză
SCOPUL ŞI MOTIVAŢIA STUDIULUI
Motivația cercetării
La nivel mondial sindromul metabolic (SM) reprezintă o importantă problemă de
sănătate publică reunind asocierea dintre obezitate abdominală şi factori de risc majori
cardiovasculari (hiperglicemia dislipidemia hipertensiunea arterială) (12) Se estimează că
SM afectează peste 25 din populaţia generală iar aproximativ două treimi din pacienţii cu
SM sunt predispuşi la un eveniment cardiovascular major (3) Icircn prezent se acţionează pe
două căi pentru controlul factorilor de risc cardiometabolici incluşi icircn SM managementul
stilului de viaţă (scăderea greutăţii corporale prin combaterea sedentarismului şi adoptarea
unei diete antiaterogene şi hipocalorice) şi administrarea terapiei medicamentoase Deşi atacirct
modificarea stilului de viață cacirct și terapia medicamentoasă vizează controlul factorilor de risc
cardiometabolici conform ghidurilor medicale adoptate atingerea ţintelor terapeutice este
greu de realizat (1011) Icircn aceste condiţii introducerea unor noi metode diagnostice şi
terapeutice bazate pe etiopatogenia SM ar putea icircmbunătăţi calitatea vieţii bolnavilor şi SM şi
ar conduce pe termen lung la creşterea speranţei medii de viaţă Cercetările actuale sunt
orientate spre descifrarea modului icircn care modificările metabolismului incluzacircnd rezistenţa la
insulină dislipidemia obezitatea abdominală pot accelera ateroscleroza privită ca o
complicaţie metabolică și indusă de inflamație (12) Icircn contextul studiului SM receptorii
nucleari activaţi de inductorii proliferării peroxizomilor-alpha-α (PPARα) atrag atenţia
datorită rolului deţinut icircn reglarea oxidării acizilor graşi metabolismul lipidelor şi
lipoproteinelor inflamaţie cronică şi aterogeneză (131415) Aceștia reprezintă astfel veriga
lipsă patogenică care leagă modificările metabolice de procesul inflamator cronic
autoicircntreținut care duce la disfuncția endotelială și aterogeneză Acţionacircnd ca factori de
transcripţie activarea PPARα determină scăderea nivelului seric al trigliceridelor şi HDL-col
şi protejează față de profilul lipidic aterogenetic prin modularea status-ului proinflamator şi
diminuarea insulinorezistenţei (1617) Rolul PPARα icircn reglarea metabolismului lipidic
balanţei energetice şi icircn diminuarea răspunsului proinflamator fac din aceşti receptori o
potenţială ţinta icircn tratamentul afecţiunilor icircn care rolul inflamaţiei cronice este bine cunoscut
Se descrie astfel o nouă posibilitate de icircmbunătăţire a prognosticului afecţiunilor cronice cu
impact major asupra sănătăţii publice incluzacircnd ateroscleroza diabetul zaharat boala cronică
obstructivă pulmonară maladia Parkinson demența Alzheimer şi nu icircn ultimul racircnd
neoplaziile (18)
Scopul studiului
Icircn cadrul Tezei de Doctorat mi-am propus realizarea unei cercetări referitoare la
rolul Receptorilor Activaţi de Inhibitorii Proliferării Peroxizomilor- alpha icircn contextul
sindromului metabolic alături de completarea datelor epidemiologice existente cu privire la
prevalenţa acestui sindrom icircn populaţia aflată icircn evidenţa unui Cabinet de Medicină de
Familie din oraşul Iaşi Ca urmare cercetarea efectuată a urmărit două aspecte1 studiul
epidemiologic al SM icircn populaţia unui Cabinet de Medicină de Familie urmată de
investigarea markerilor inflamatori prezenţi icircn SM 2 investigarea prezenţei și a nivelului de
expresie relativă a receptorilor PPARα icircn leucocitele circulante recoltate din sacircngele
subiecţilor studiaţi celule care exprimă aceşti receptori şi a căror rol icircn inflamaţie şi
aterogeneză este bine cunoscut
Considerații etice Studiul a primit avizul Comisiei de Etică a Universităţii de Medicină
şi Farmacierdquo Gr T Popardquo Iaşi Studiul a fost condus icircn conformitate cu Declaraţia de la
Helsinki actualizată
STUDIUL SINDROMULUI METABOLIC IcircN POPULAŢIA SELECTATĂ
Obiectivele studiului sindromului metabolic
a evaluarea din punct de vedere clinic şi biologic a sindromului metabolic
b identificarea tipului de SM icircn raport cu numărul de componente
c stabilirea prevalenţei sindromului metabolic icircn populaţia studiată
d studiul markerilor inflamatori prezenţi icircn SM
Studiul epidemiologic icircn populaţia selectată
Am efectuat un studiu epidemiologic transversal care şi-a propus stabilirea prevalenţei
sindromului metabolic şi a componentelor sale icircn populaţia icircnscrisă pe lista unui cabinet de
medicină de familie Studiul s-a desfăşurat pe parcursul a 12 luni icircn perioada 01012013ndash
31122013 icircn cadrul Cabinetului de Medicină de Familie CMI Popa Elena situat icircn strada
Ion Creanga nr 73 din Iaşi
Obiectivele studiului - evaluarea din punct de vedere clinic şi biologic a sindromului metabolic
- identificarea tipului de SM icircn raport cu numărul de componente
- stabilirea prevalenţei sindromului metabolic icircn populaţia studiată
Lotul de studiu a fost constituit din populaţia de ambele sexe cu vacircrsta cuprinsă icircntre
18 şi 91 ani icircnscrisă pe lista medicului de familie Subiecţii au fost invitaţi să participe la
studiu icircn luna naşterii realizacircnd astfel o programare a vizitelor pe parcursul a 12 luni
Criteriile de includere icircn lotul de studiu vacircrsta peste 18 ani capacitate de decizie
domiciliul stabil icircn Romacircnia participare pe baza consimţămacircntului liber informat Criteriile
de excludere vacircrstă sub 18 ani femei gravide sau care alăptează bolnavi icircn faza terminală
subiecţi care refuză semnarea consimţămacircntului informat Nu s-au formulat criterii care să
aducă discriminări legate de sex etnie sau rasă
Protocolul studiului epidemiologic al sindromului metabolic
Icircn cadrul studiului epidemiologic s-au realizat cacircte două vizite pentru fiecare participant La
prima vizită subiecţii au fost informaţi asupra studiului icircn cadrul cercetării doctorale şi au
semnat Consimţămacircntul liber informat Pentru fiecare participant s-a completat fişa de studiu
computerizată incluzacircnd date anamnestice şi clinice (talie greutate corporală perimetru
abdominal) La a doua vizită s-au recoltat probe biologice (sacircnge venos) de către o asistentă
specializată pentru următoarele determinări biochimice (glicemie colesterol total HDL-
colesterol LDL-colesterol trigliceride acid uric creatinină fibrinogen proteină C reactivă)
şi hematologice (hemoleucograma VSH) Pentru diagnosticarea SM am utilizat criteriile
de diagnostic Harmonised I (tabel VI) Am comparat prevalenţa SM conform criteriilor
Harmonised I cu prevalenţa obţinută prin aplicarea criteriilor IDF respectiv ATP III
Analiza statistică Pentru analiza parametrilor studiaţi icircn SM am realizat icircmpreună cu
firma Arhilog Soft un program icircn care sunt incluşi parametrii de diagnostic ai SM şi care
permite icircncadrarea pacienţilor funcţie de componentele SM icircn SM3 SM4 SM5 De
asemenea programul permite editarea şi arhivarea unei fişe de observaţie pentru fiecare
participant la studiu precum şi crearea unei baze de date compatibile cu programul Microsoft
Office Excel 97-2003
Menţionăm că acest program poate stoca
şi alţi parametri clinici şi paraclinici utilizaţi icircn evaluarea complexă a SM putacircnd fi ulterior
introdus ca un program de monitorizare a evoluţiei pacienţilor Pentru prelucrarea statistică a
parametrilor s-au folosit programele Microsoft Office Excel 97-2003 SPSS-10 (Statistical
Package for Social Sciences) şi aplicaţia Medcalc Statistical Software ndash 1333 Valoarea lui p
Figura 41 Program de
analiză a parametrilor SM
mai mică de 005 a fost considerată semnificativ statistic
Rezultate Analiza lotului de studiu s-a efectuat icircn funcţie de mediul de provenienţă sex vacircrstă şi
vacircrsta medie Caracteristicile clinice şi biochimice ale lotului studiat sunt reprezentate icircn
tabelul VIII
Tabel VIII Caracteristicile lotului studiat Media 95 CI SD Minimum Maximum
Vacircrsta (ani) 4751 4661 - 4841 1798 1800 9100
CA (cm) 8830 8764 - 8896 1316 5600 13400
IMC (kgm2) 2603 2578 - 2628 497 1900 4500
TAD (mmHg) 7529 74883 - 7571 827 6000 11500
TAS (mmHg) 11730 11650 - 11810 1590 9000 19000
Glicemie (mgdl) 9435 9328 - 9542 2138 7200 40000
HDL- col(mgdl) 4498 4427 - 4570 1422 2100 9200
TG(mgdl) 12269 11887 - 12651 7157 4800 87900
Determinarea scorului SM
Am aplicat criteriile de diagnostic şi am calculat scorul de SM pentru fiecare subiect (0-
absenţa criteriului 2- prezenţa criteriului) (fig44)
Figura 44 Frecvenţa scorului SM icircn
populaţia studiată conform criteriilor
SM Harmonised (A) IDF (B) ATP III
(C) Se observă că distribuţia scorurilor
SM conform criteriilor de diagnostic este
identică icircn cazul aplicării criteriilor
Harmonized I şi IDF
Scorul de SM a avut valori pare
cuprinse icircntre intervalul 0 - 10 pacienţii
cu SM avacircnd un scor mai mare sau egal
cu 6
Icircn lotul studiat am analizat prezenţa simultană a criteriilor Harmonised I de diagnostic şi
am constatat prezenţa SM la 389 subiecţi (204 femei şi 185 bărbaţi) reprezentacircnd 2542
(95CI 2296-2808) din totalul populaţiei studiate Raportul prevalenţelor specifice pe sexe
bărbaţifemei a fost de 103 (95 CI084 -126)Icircn concordanţă cu criteriile IDF am
identificat un număr de 325 pacienţi cu SM (175 femei şi 150 bărbaţi) iar prevalenţa SM icircn
populaţia studiată conform IDF a fost de 2124 (95 CI 1899ndash 2368) Raportul
prevalenţelor specifice la bărbaţi versus femei a fost de 0977 (95 CI 078 ndash122) Utilizacircnd
definiţia ATP III au fost identificaţi un număr de 229 subiecţi cu SM Prevalenţa SM a fost
C
0
100
200
300
400
500
600
700
Scor SM ATP III
Număr pacienţi
0 2 4 6 8 10
ATP III SM5 SM4 SM3 non SM
B
0 50
100 150 200 250 300 350 400 450
Scor SM IDF
Număr pacienţi
0 2 4 6 8 10
IDF SM5 SM4 SM3 non SM
A
0
50
100
150
200
250
300
350
400
450
Scor SM Harmonised I
Număr pacienţi
0 2 4 6 8 10
HARMONIZED I SM5 SM4 SM3 non SM
de 1497 (95CI 1309 ndash 1704) icircn populaţia studiată Au fost calculate prevalenţele pe
sexe şi au fost găsite valorile de 1343 (95CI 010 ndash 164) la bărbaţi respectiv 1632
(95 CI 1366 ndash 1934) la femei raportul dintre acestea fiind de 082 (95CI 062 ndash 107)
Pentru fiecare asociere dintre componentele SM diagnosticat conform criteriilor
Harmonised I am calculat prevalenţele icircn cadrul SM(tabel XVI)
Tabel XVI Prevalenţa asocierilor dintre componentele SM Număr
pacienţi
Ponderea icircn cadrul
pacienţilor cu SM
(95 CI)
Prevalenţa icircn
populaţia studiată
(95 CI)
SM cu trei componente (SM3)
241 6195 (5438ndash7029) 1575 (1383-
1787)
Obezitate centrală + hipertensiune arterială +
hipertrigliceridemie
45 1154 (844ndash1548) 294 (214-393)
Obezitate centrală + hipertensiune arterială + hipo-
HDLcolesterolemie
38 979 (691ndash1340) 248 (175-340)
Obezitate centrală + hipertrigliceridemie +
hipoHDL-colesterolemie
34
874 (605ndash1221) 222 (153-310)
Obezitate centrală + modificări ale metabolismului
glucidic + hipertensiune arterială
31 796 (541ndash1131) 202 (137-287)
Hipertensiune arterială + hiper-trigliceridemie +
hipoHDL- colesterolemie
26 668 (436 ndash979) 169 (111-249)
Modificări ale metabolismului glucidic +
hipertensiune arterială + hiper-trigliceridemie
21 539 (334-825) 137 (085-209)
Obezitate centrală + modificări ale metabolismului
glucidic + hipertrigliceridemie
15 385 (215-636) 098 (054-116)
Modificări ale metabolismului glucidic
hipertrigliceridemie + hipoHDL-colesterolemie
12 308 (159-538) 078 (040-137)
Modificări ale metabolismului glucidic +
hipertensiune arterială + hipoHDLcolesterolemie
10 257 (123ndash472) 065 (031-120)
Obezitate centrală + modificări ale metabolismului
glucidic + hipo-HDL-col
9 231 (105ndash439) 058 (026-111)
SM cu patru componente (SM4) 104 2674 (2184-239) 679 (555-823)
Obezitate centrală + modificări ale metabolismului
glucidic + hipertensiune arterială + hipoHDL-
colesterolemie
32 822 (562-1116) 209 (143-
295)
Obezitate centrală + hipertensiune arterială +
hipertrigliceridemie + hipoHDL-col
25 642 (415- 948) 163 (105-241)
Obezitate centrală + modificări ale metabolismului
glucidic + hipertri-gliceridemie + hipoHDL-
colesterolemie
12 308 (159-538) 078 (040-137)
Modificări ale metabolismului glucidic +
hipertensiune arterială + hipertri-gliceridemie +
hipoHDL-colesterolemie
6 154 (056- 335) 039 (014-085)
SM cu cinci componente (SM5) 44 1131 (822-1518) 287 (209-386)
Total (SM3 + SM4 + SM5) 389 100 2542(2296-
2808)
Analizacircnd componentele SM la cei 389 pacienţi diagnosticaţi cu SM conform criteriilor
Harmonised I am constatat că obezitatea centrală este cea mai bine reprezentată icircn SM dintre
aceste componente (8072 95CI 7644 - 8452) urmată de HTA (7892 95CI 7453
- 8287) hiperTG (6915 95 CI 6430-7371) hipo-HDL-col (6375 95 CI 5876-
6854) şi hiperglicemie (5681 95 CI5173- 6179)
Standardizarea prevalenţelor funcţie de vacircrstă şi sex Analiza statistică a relevat faptul
că prevalenţa SM creşte cu icircnaintarea icircn vacircrstă Dacă pentru vacircrsta cuprinsă icircntre 35-54 ani
prevalenţa la bărbaţi este semnificativ mai mare comparativ cu femeile (raport calculat B F -
183 P=0003) pentru celelalte grupe de vacircrsta nu s-au observat diferenţe semnificative icircntre
sexul feminin şi cel masculin Am observat că după instalarea menopauzei la femei
prevalenţa SM (corespunzătoare Harmonised I) la femei depăşeşte 50 iar la bărbaţi atinge
42 Utilizacircnd European Standard Population (175) am efectuat standardizarea funcţie de
vacircrstă şi sex a prevalenţelor bdquocruderdquo (brute) obţinute icircn populaţia studiată şi am calculat o
prevalenţă standardizată a SM de 2732 (95 CI 2460-3003) La sexul masculin
prevalenţa standardizată a SM a fost de 2760 (95 CI 2362 - 3157) iar la sexul feminin
am obţinut valoarea de 2854 (95 CI 2462 - 3245)
Discuţii
Studiul desfăşurat de noi a investigat prezenţa SM icircn populaţia unui Cabinet de Medicină
de Familie Icircn Europa prevalenţa SM este de aproximativ 25-30 Statele Unite Ale Americii
au raportat o prevalenţă a sindromului metabolic de 22 icircn populaţia cu vacircrsta peste 20 ani
pe cacircnd la vacircrstă mai mare de 60 ani s-a observat o prevalenţă de 44 (1419) Icircn studiul
efectuat am observat o prevalenţă standardizată de 2732 (95 CI 2460-3003) care este
icircn concordanţă cu prevalenţele raportate icircn Europa precum şi o creştere a ponderii SM icircn
populaţie icircn raport cu vacircrsta Am preferat utilizarea definiţiei Harmonised I pentru SM
deoarece cuprinde criterii adaptate pentru o abordare unitară a SM mărind astfel numărul
pacienţilor diagnosticaţi şi care vor urma tratament conform Ghidurilor de Practică Medicală
Limitările acestui studiu sunt legate de faptul că este concentrat doar pe populaţia asigurată şi
neasigurată aflată pe lista unui medic de familie din mediul urban Se pot efectua studii la
nivelul Cabinetelor Medicale de Medicină de Familie dar trebuie să se aplice pe un lot
reprezentativ urbanrural care să reprezinte populația acelei regiuni Utilizarea structurilor
populaționale atașate cabinetului de MF este utilă atacirct pentru cele clinice cacirct și pentru cele
epidemiologice deoarece surprinde populația studiată icircn mediul de viață cotidian Prevalenţa
mare a SM icircn populaţia studiată necesită aplicarea unei politici eficiente de sănătate publică
deoarece riscul producerii evenimentelor cardiovasculare majore poate fi redus semnificativ
printr-un control adecvat al componentelor SM (obezitate dislipidemii hipertensiune
arterială şi hiperglicemie
Studiul sindromului inflamator cronic icircn cadrul sindromului metabolic
Obiectivele studiului
- studierea markerilor inflamaţiei cronice şi aterogenezei la subiecţii cu şi fără SM
- evaluarea importanţei markerilor studiaţi ai inflamaţiei cronice icircn diagnosticul de
ambulator al sindromului metabolic
Material şi metodă
Icircn cercetarea inflamaţiei cronice din SM au fost incluşi 1530 subiecţi de ambele sexe cu
vacircrsta cuprinsă icircntre 18-91 ani icircnscrişi pe lista CMI Popa Elena Studiul s-a desfăşurat icircn
perioada 01012013ndash 31122013 Populaţia ţintă a fost identică cu cea din studiul
epidemiologic şi s-a desfăşurat concomitent cu studiul prevalentei SM Subiecţii au fost
icircmpărţiţi icircn două loturi lotul cu SM (Lot SM) şi lotul de control (fără SM)
Lot SM a) criterii de includerevacircrsta peste 18 ani recrutarea pe baza semnării
Consimţămacircntului liber informat SM diagnosticat pe baza criteriilor Harmonised I (14) b)
criterii de excluderevacircrstă sub 18 anirefuzul semnării Consimţămacircntului liber informat
femei icircn perioada de graviditate sau de lactaţie
Lot Control (fără SM) a) criterii de includerevacircrsta peste 18 anirecrutarea pe baza
semnării Consimţămacircntului liber informat absenţa sindromului metabolic b) criterii de
excluderevacircrstă sub 18 ani refuzul semnării Consimţămacircntului liber informatfemei icircn
perioada de graviditate sau de lactaţie
Rezultate
Lotul cu SM (Lot SM) a fost format din cei 389 pacienţi diagnosticaţi cu SM conform
criteriilor Harmonised I Lotul SM a fost alcătuit din 185 bărbaţi şi 204 femei raportul
bărbaţifemei fiind de 090 (95 CI073-112) Lotul de control (fără SM) a fost alcătuit
din cei 1141 participanţi care nu au icircntrunit criteriile de diagnostic ale sindromului metabolic
Din cei 1141 de subiecţi 530 au fost de sex masculin iar 611 de sex feminin raportul
bărbaţifemei fiind 087 (95 CI 077-097) Vacircrsta subiecţilor a fost semnificativ mai mare
icircn lotul pacienţilor cu SM (5976plusmn1322 ani) comparativ cu lotul martor (4333plusmn 1748 ani) (t-
Test Plt00001) Aşa cum ne-am aşteptat valorile medii ale componentelor clinice ale SM
(circumferinţa abdominală tensiunea arterială sistolică şi diastolică) au fost mai mari icircn lotul
pacienţilor cu SM (t-Test Plt0001 pentru fiecare dintre componente) Studiind parametrii
biochimici incluşi icircn diagnosticul SM valorile medii ale glicemiei şi TG au fost semnificativ
mai crescute icircn lotul SM (t-Test Plt00001 pentru ambele constante) Icircn acelaşi timp
valoarea medie determinată a HDL-col a fost semnificativ mai mare la subiecţii din lotul
martor ( t-Test Plt00001) SM se caracterizează printr-o dislipidemie aterogenă
caracterizată de creşterea TG scăderea HDL-col concomitent cu creşterea LDL-col creşterea
Non-HDL-col şi a raportului de aterogenitate (Col totalHDL-col) (185) Comparacircnd cele
două loturi am observat că valoarea medie a LDL-colesterolului determinată icircn lotul
pacienţilor cu SM a fost semnificativ mai mare faţă de subiecţii din lotul martor (t-Test P =
00002) Măsurarea Non-HDL-colesterolului a arătat prezenţa unei diferenţe semnificative
icircntre cele două loturi (figura 420 B) Astfel icircn concordanţă cu prezenţa dislipidemiei
aterogene valoarea medie a Non-HDL-col a fost semnificativ mai mare (t-Test Plt 00001) icircn
lotul cu SM comparativ cu lotul de control Icircn contextul inflamației cronice şi aterogenezei
din sindromul metabolic am evaluat sensibilitatea şi specificitatea Non-HDL-colesterolului
ca test diagnostic al SM Valoarea Non-HDL-colesterolului care prezice cu cea mai mare
acurateţe prezenţa SM a fost de 151 mgdl (punctul de ldquocut-offrdquo) pentru care am calculat o
sensibilitate de 64 27 şi o specificitate de 5872 Calculul ariei AUC a furnizat valoarea
de 0605 şi deci determinarea concentraţiei serice a parametrului Non-HDL-colesterolului are
valoarea unui marker cu acurateţe redusă Am studiat valorile raportului Col totalHDL-col icircn
cele două loturi şi am constatat că la pacienţii cu SM valoarea media a raportului de
aterogenitate este semnificativ mai mare faţă de valoarea raportului determinată icircn lotul
martor (t-Test Plt 00001) Pentru raportul de aterogenitate studiat analiza curbei ROC a
arătat că valorile mai mari decacirct punctul de ldquocut-offrdquo de 431 prezic prezenţa SM cu cea mai
mare sensibilitate (6381 ) şi specificitate (6582)Valoarea AUC pentru indicele de
aterogenitate a fost de 0667 şi icircn studiul SM acest indice poate fi considerat un marker cu
acurateţe redusă Valoarea medie determinată a acidului uric la subiecţii fără SM a fost
semnificativ mai mică decacirct icircn lotul SM (t-Test Plt 00001) Curba ROC a arătat că valorile
acidului mai mari de 43 mgdl prezic diagnosticul de SM cu cea mai mare sensibilitate
(8107) şi specificitate (5328) Pentru acidul uric AUC a avut valoarea de 0655 şi
icircncadrează determinarea acidului uric seric icircn racircndul testelor cu acurateţe redusă (187)
Comparacircnd populaţiile de leucocite (tabel XXI) valoarea medie determinată a
numărului de Eo a fost semnificativ mai mare icircn lotul cu SM comparativ cu lotul martor (t-
Test Plt0001) Analizacircnd curba ROC trasată pentru valorile numărului de Eo am observat
că valorile ldquocut-offrdquo mai mari de 200 Eomm3
pot prezice prezenta SM cu cea mai mare
specificitate (7705) şi sensibilitate (3978) Pentru diagnosticul SM calculul ariei AUC a
arătat faptul că determinarea numărului de Eo are valoarea unui test diagnostic cu acurateţe
redusă (AUC = 0 589) Comparacircnd valorile medii ale fibrinogenului am calculat o diferenţă
statistic semnificativă icircntre cele două loturi valoarea medie a fibrinogenului fiind mai mare icircn
lotul SM ((t-Test P lt 00001) Cu ajutorul curbei ROC am observat că valorile fibrinogenului
mai mari de 306 mgdl prezic sindromul metabolic cu o sensibilitate de 7511 şi specificitate
de 6056 Fibrinogenul a fost icircncadrat icircn categoria markerilor inflamatori cu acurateţe
redusă AUC avacircnd valoarea de 0690 Icircn loturile de studiu am calculat AUC corespunzătoare
criteriilor de diagnostic ale SM Am observat că icircn cazul scorului Harmonised I
sensibilitatea şi specificitatea sunt de 100 iar AUC este egală cu 1000 Pentru cele cinci
criterii de diagnostic AUC a avut valori icircntre 0636 (pentru variabila HDL-col) şi 0804
(pentru variabila CA) (figura 431)
AUC ES 95 CI
Scor SM Harmonised I 1000 00000 0997 - 1000
CA (cm) 0804 00133 0781 - 0825
TAD (mmHg) 0666 00169 0639 - 0692
TAS (mmHg) 0757 00148 0732 - 0780
Glicemie (mgdl) 0742 00160 0717 - 0766
Trigliceride (mgdl) 0756 00175 0732 - 0780
HDL- colesterol 0636 00183 0609 - 0662
Figura 431 Analiza AUC criterii de diagnostic ale SM
Studiind figura 432 se observă că valoarea AUC pentru markerii studiaţi este cuprinsă
icircntre 0589 (icircn cazul variabilei Eo) şi 0690 (icircn cazul fibrinogenului) Icircn contextul SM
acurateţea acestor markeri ai inflamaţiei cronice şi disfuncţiei endoteliale poate fi considerată
redusă deoarece AUClt07 pentru toţi markerii investigaţi (figura 431) Totuşi valorile ariilor
parametrilor reprezentaţi icircn figura 431 sunt apropiate de valorile AUC ale variabilelor TAD
şi HDL-col (figura 432) şi deci pot fi utilizaţi pentru completarea diagnosticului de SM
AUC ES 95 CI
Non-HDL-colesterol 0605 00171 0580 - 0630
Col totalHDL-col 0607 00163 0642 - 0691
Acid uric 0655 00161 0630 - 0679
Fibrinogen 0690 00206 0658 - 0720
Eozinofile 0589 00176 0564 - 0615
Figura 432 AUC markeri ai SM inflamaţiei cronice şi aterogenezei
Discuţii
Status-ul proinflamator din SM asociat cu insulinorezistenţa şi disfuncţia endotelială
constituie o verigă de legătură dintre inflamaţie şi procesele metabolice complexe icircnsoţindu-
se de deteriorarea funcţiilor vasculare şi creşterea riscului de evenimente cardiovasculare
majore (2858) Studiul efectuat a arătat o diferenţă icircntre vacircrstele subiecţilor din cele două
loturi vacircrsta pacienţilor cu SM fiind semnificativ mai mare (Plt0001) comparativ cu subiecţii
normali confirmacircnd faptul menţionat că vacircrsta reprezintă unul din stimulii care agravează
inflamaţia cronică Am arătat că valorile fibrinogenului sunt mai mari icircn SM comparativ cu
Scor Harmonised I
0 20 40 60 80 100
0
20
40
60
80
100
100-Specificitate
Sen
sib
ilit
ate
Criterii diagnostic SM
0 20 40 60 80 100
0
20
40
60
80
100
100-Specificitate
Sens
ibili
tate
CA
TAD
TAS
Glicemie
Trigliceride
HDL-C
0 20 40 60 80 100
0
20
40
60
80
100
100-Specificitate
Sensi
bilita
te
Non-HDL-C
Col T HDL-C
Acid uric
Fibrinogen
Eozinofile
lotul martor atacirct la bărbaţi cacirct şi la femei icircn concordanţă cu studiile anterioare Evaluarea
fibrinogenului este importantă nu numai icircn SM pentru definirea contextului proinflamator şi
protrombotic ci şi icircn predicţia cardiovasculară la subiecţii normali Studiind populaţiile
leucocitare am obţinut diferenţe semnificative icircn cazul Eo valoarea medie a acestora fiind
semnificativ mai mare icircn lotul cu SM comparativ cu lotul martor (P lt 0001 figura 425B)
Implicarea Eo icircn SM s-a conturat icircn ultimul deceniu aceste celule fiind implicate icircn recrutarea
macrofagelor din ţesutul adipos Experimental s-a constatat că o creştere a Eo apărută ca
urmare a infectării cu helminţi sau stimulare cu IL-5 este urmată de icircmbunătăţirea toleranţei la
glucoză (199) Controlul pe care icircl exercită Eo asupra activării macrofagelor ar putea fi cheia
intervenţiei asupra obezităţii icircn viitorul apropiat(165199) Hiperuricemia asociata frecvent cu
SM este cunoscut ca un factor independent de risc cardiovascular (192 202) In concordanţă
cu aceasta afirmaţie in studiul nostru am constatat ca nivelul seric al acidului uric a fost mai
crescut in lotul cu SM diferenţa semnificativă din punct de vedere statistic (P lt 00001)
Dislipidemia aterogenă din sindromul metabolic şi diabetul zaharat se caracterizează prin
creşterea trigliceridelor şi a Non-HDL-col scăderea HDL-col creşterea numărului de
particule LDL modificate (185190) La pacienţii cu SM am descris un profil aterogenetic
cu risc crescut de evenimente cardiovasculare majore
STUDIUL RECEPTORILOR ACTIVAŢI DE INDUCTORII PROLIFERĂRII
PEROXIZOMILOR-ALPHA IcircN LEUCOCITELE CIRCULANTE
Ipoteza de lucru
Studii experimentale efectuate au arătat că rolul PPARα icircn ateroscleroză derivă din
implicarea acestor receptori icircn limitarea inflamaţiei Plecacircnd de la acest fundament ne-am
propus evidenţierea receptorilor nucleari activaţi de inductorii proliferării peroxizomilor-
alpha (PPARα) prin citometrie de flux icircn leucocitele din sacircngele periferic alături de
evaluarea acestei metode icircn cuantificarea expresiei relative a PPARα ca test diagnostic
precoce al modificărilor metabolice SM Studiul expresiei relative a receptorilor PPARα a
plecat de la premisa că dacă SM se caracterizează printr-un status inflamator cronic nivelul
de expresie a PPARα icircn leucocitele circulante este mai scăzut la pacienţii cu SM comparativ
cu subiecţii normali Referitor la studiul receptorului CD36 am plecat de la presupunerea că
nivelul de expresie al acestui receptor icircn SM este crescut dat fiind importanţa acestui receptor
icircn inflamaţia aterosclerotică Avacircnd icircn vedere efectele receptorilor amintiţi icircn
insulinorezistenţă şi aterogeneză am considerat necesară evaluarea prezenţei receptorului
nuclear PPARα icircn paralel cu studiul receptorului bdquoscavengerrdquo CD-36 prin metoda citometriei
icircn flux Astfel icircn studiul efectuat mi-am propus şi investigarea existenţei unei legături icircntre
nivelul de expresie al receptorilor PPARα şi cel al receptorului CD-36 De asemenea ne-am
icircndreptat atenţia spre stabilirea unor asocieri icircntre componentele clinice şi biochimice ale
sindromului metabolic şi nivelul intensităţilor de fluorescenţă ale PPARα şi CD-36 ca măsură
a expresiei relative a acestor receptori
Material și metodă
Studiul receptorilor PPARα icircn contextul sindromului metabolic s-a desfăşurat icircn
perioada 1012014 -28022014 pe baza metodologiei studiilor de tip caz-martor Am urmărit
identificarea unor diferenţe icircntre expresia receptorilor PPARα la pacienţii cu SM comparativ
cu subiecţii sănătoşi diferenţe care ar putea fi utile icircn diagnosticul precoce al SMRecrutarea
pacienţilor s-a efectuat din pacienţii prezentaţi pentru consultaţie la Cabinetul Individual
ldquoCMI Dr Popa Elenardquo situat icircn strada Ion Creanga din Iaşi Pentru studiul receptorilor
PPARα icircn sindromul metabolic au fost selecţionaţi un număr de 57 de subiecţi 26 de subiecţi
cu SM (constituind lotul SM) şi 31 subiecţi fără SM constituind lotul de control (Lot Non-
SM) Pentru studiul SM pacienţii au fost recrutaţi din masa de populaţie arondată cabinetului
de MF fără istoric de SM diabet zaharat boală cardio-vasculară aflați la primul diagnostic
de SM evaluarea completă a acestora fiind urmată de includerea icircn programul de
management cardiovascular şi metabolic conform Ghidurilor Terapeutice aflate icircn vigoare
Lot SM a) criterii de includerevacircrsta peste 18 ani recrutarea pe baza semnării
Consimţămacircntului liber informatSM nou-diagnosticat pe baza prezenţei a minim trei criterii
de diagnostic pentru SM conform Harmonised I b) criterii de excluderevacircrstă sub 18 ani
refuzul semnării Consimţămacircntului liber informat femei icircn perioada de graviditate sau de
lactaţie SM anterior diagnosticat istoric de diabet zaharat boală cardiovasculară constituită
tratament cu agonişti PPARα (ie fibraţi etc)
Lot martor (Non-SM) a) criterii de includerevacircrsta peste 18 ani recrutarea pe baza
semnării Consimţămacircntului liber informat absenţa diagnosticului de SM b) criterii de
excludere vacircrstă sub 18 ani refuzul semnării Consimţămacircntului liber informat femei icircn
perioada de graviditate sau de lactaţie
Studiul receptorilor PPARα a inclus două subetape
A Studiul componentelor sindromului metabolic conform criteriilor Harmonised I
Evaluarea clinică a participanţilor s-a desfăşurat icircn cadrul Cabinetului de Medicină de
Familie iar determinările hematologice şi biochimice s-au efectuat icircn Laboratorul
Ambulatorului Clinic de Specialitate al Spitalului Clinic de Urgenţă bdquoSf Spiridonrdquo Iaşi
B Evaluarea icircn citometrie de flux a nivelului relativ de expresie a PPARα şi CD36
Studiul receptorilor PPARα s-a desfăşurat icircn Laboratorul de Biologie Moleculară al
Institutului Regional de Oncologie Iaşi prin metoda citometriei icircn flux (19) Nivelul relativ de
expresie al receptorilor nucleari PPARα a fost determinat icircn diferite tipuri de leucocite
circulante polimorfonucleare (PMN) limfocite (Ly) Mo(Mo) şi eozinofile(Eo) Am utilizat o
metodă de citometrie icircn flux optimizată ldquoin houserdquo elaborată icircn cadrul Laboratorului de
Biologie Moleculară al IRO Iaşi Icircn cursul procesului de optimizare am testat mai multe
concentraţii ale anticorpului anti-PPARα 1100 1500 11500 14500 iar icircn urma
determinărilor efectuate şi a analizei statistice concentraţia 1500 a fost considerată optimă
pentru desfăşurarea studiului (tabel XXIII figura 51)
Tabel XXIII Optimizarea concentraţiilor Ac anti-PPARα Diferenţa
mediilor
valorilor
medii
PMN
Diferenţa
mediilor
mediane-
lor
PMN
Diferenţa
mediilor
valorilor
medii
Ly
Diferenţa
mediilor
mediane-
lor
Ly
Diferenţa
mediilor
valorilor
medii
Mo
Diferenţa
mediilor
mediane-
lor
Mo
Diferenţă 0 1300 1600 100 100 700 750
normal - 1100 650 1050 1050 1350 450 900
patologic 1500 2850 2750 3800 3600 2850 2400
11500 -1050 800 3500 3300 2250 1800
14500 2200 2150 1300 1100 2950 2850
AOptimizare
BRepetabilitate
Figura 51 Optimizarea concentraţiei anticorpului anti-PPARα
Icircn concordanţă cu literatura de specialitate icircn cercetarea efectuată intensitatea medie
de fluorescenţă (MFI) a fost utilizată ca măsură pentru evaluarea expresiei celulare a
receptorilor PPARα (212) Un exemplu de analiză a probelor este reprezentat icircn figura 52
Figura 52 Exemplu de analiză flowcitometrică pentru receptorul nuclear PPARα Graficul din stacircnga reprezintă distribuţia leucocitelor iar cel din dreapta ilustrează distribuţia
intensităţii de fluorescenţă pentru populaţiile de celule selectate
Intensitatea Medie a Fluorescenţei (MFI) a CD36 ca o măsură a nivelului relativ de
expresie a acestor receptori la nivelul membranei Mo a fost detectată printr-o metodă
convenţională pentru marcare de suprafaţă şi evaluare pe bază de citometrie icircn flux folosind
aceleaşi probe de sacircnge cu EDTA cu focalizare pe Mo şi utilizacircnd CD14 ca marker specific
pentru Mo (figura 53)
Figura 53Analiza
flowcitometrică
pentru marcajul
CD14 - CD36
Rezultate
Icircn cele două loturi au fost incluşi icircn studiu un număr de 57 de participanţi care au fost
investigaţi din punct clinic şi paraclinic Vacircrsta subiecţilor incluşi icircn studiu a fost cuprinsă
icircntre 18 şi 79 ani iar vacircrsta medie calculată a avut valoarea de 4805 plusmn 1587 ani Pentru sexul
masculin vacircrsta medie este de 4925plusmn1617 ani iar pentru sexul feminin 4689 plusmn1 5ani
diferenţa obţinută icircntre vacircrstele pacienţilor fiind statistic nesemnificativă (P = 085)
Analizacircnd vacircrstele subiecţilor din cele două loturi am observat că vacircrsta medie a pacienţilor
cu SM (5476 plusmn 1183 ani) a fost semnificativ mai mare (t-test P = 0003) decacirct icircn lotul
martor (4258 plusmn 169 ani) Pentru diagnosticul sindromului metabolic am calculat scorul de
SM bazacircndu-ne pe criteriile Harmonised I Conform criteriilor diagnostice din cei 57 de
subiecţi investigaţi un număr de 26 participanţi (46) au fost incluşi icircn lotul cu SM (Lot
SM) iar 31 de subiecţi(54) nu au prezentat acest sindrom constituind lotul martor (Lot
Non-SM) Din punct de vedere al repartiţiei pe sexe nu au existat diferenţe statistic
semnificative raportul bărbaţifemei fiind de 0961 Din totalul celor 28 de bărbaţi incluşi icircn
studiu 4285 (12 bărbaţi) au icircntrunit cel puţin trei criterii diagnostice pentru SM fiind
incluşi icircn lotul SM Icircn acelaşi timp 14 femei reprezentacircnd 4827 din subiecţii de sex
feminin au icircntrunit condiţiile pentru includerea icircn lotul pacienţilor cu SM Valoarea medie
determinată pentru scorul de SM a arătat prezenţa unor valori semnificativ statistic mai mari
din punct (t-test P lt 00001) icircn lotul SM (769plusmn176) comparativ cu lotul martor (174 plusmn
184) Am studiat comparativ media valorilor măsurate ale criteriilor componentelor SM
Analiza statistică a arătat valori semnificativ statistic mai mari pentru CA TG glicemie TAS
şi TAD (plt0001) icircn lotul SM comparativ cu lotul normal Concomitent calculul statistica
evidenţiat o scăderea semnificativă a HDL-colesterolului icircn lotul cu SM comparativ cu
subiecţii din lotul martor (Non-SM) Aplicacircnd testul z am comparat ponderea pacienţilor
diagnosticaţi cu HTA dislipidemie şi tulburări ale metabolismului glucidic icircn lotul SM versus
lot Non-SM şi am constatat prezenţa acestor afecţiuni icircntr-un procent mai mare semnificativ
statistic icircn lotul SM ((plt0001)
Utilizacircnd testul t Student am calculat diferenţele statistice şi icircntre alți parametri
studiaţi care sunt factori de risc cardio-vascular dar care nu sunt componente ale SM Icircn lotul
cu SM valorile acidului uric fibrinogenului Col total Non-HDL-col şi LDL-col au fost
semnificativ mai mari comparativ cu lotul martor (tabel XXVI) Analizacircnd valorile medii ale
populaţiilor de leucocite am identificat doar pentru populaţia de Eo diferenţe statistice icircntre
cele două loturi numărul Eo icircn lotul SM fiind semnificativ mai mare decacirct icircn lotul martorTot
pentru caracterizarea celor două loturi am analizat prezenţa antecedentelor
heredocolaterale (AHC) de diabet zaharat boala cardiovasculară şi dislipidemie pentru toţi
subiecţii investigaţi Astfel existenţa AHC de HTA a fost declarată de 2580 din subiecţii
incluşi icircn lotul martor respectiv de 5384 din numărul pacienţilor cu SM Antecedentele
heredocolaterale de dislipidemie au fost prezente la 3461 din pacienţii cu SM icircn timp ce icircn
lotul martor anamneza a evidenţiat aceste antecedente la 3548 din subiecţi
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα
Icircn cercetarea desfăşurată am utilizat intensitatea medie de fluorescenţă (MFI) ca
măsură a nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn leucocitele studiate Pentru
populaţiile de leucocite analiza computerizată a probelor luate icircn studiu a furnizat valori
pentru MFI a receptorilor PPARα icircn funcţie de cantitatea de anticorpi anti-PPARα marcaţi cu
fluorocrom care se leagă de aceste celule şi apoi sunt captaţi de citometru (figura 59)
A Lot Non - SM
B Lot SM
Figura 59 Analiza flowcitometrică pentru receptorii PPARα icircn leucocite A lot normal B lot SM
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Mo
Analiza probelor efectuată conform protocolului de lucru descris a arătat prezenţa
PPARα icircn Mo recoltate din sacircngele tuturor subiecţilor incluşi icircn această cercetare Pentru toţi
participanţii investigaţi analiza MFI a Ac anti - PPARα icircn populaţia de Mo (Mo) a arătat un
interval de variaţie icircntre [786 395] Valoarea medie a nivelului de expresie relativă a PPARα
calculată pentru Mo a fost de 23210 plusmn7860 Pentru ambele loturi de studiu pacienţilor cu
SM testul Testul Shapiro-Wilk a arătat distribuţia normală a valorilor obţinute pentru nivelul
de expresie al PPARα icircn Mo
Tabel XXVIII Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn Mo
Lot SM Lot Non-SM
N 26 31
Media 22819 23538
SD 5819 7717
Mediana 22400 22600
Minimum 12800 78600
Maximum 35800 37900
Percentila 25 18300 18300
Percentila 75 26200 30350
Pentru pacienţii din lotul SM valoarea medie a MFI icircn Mo a fost de 22819 plusmn 5880 iar
pentru lotul martor s-a calculat o valoare medie a MFI a Ac anti-PPARα de 23538 plusmn 7717
Distribuţia statistică a frecvenţei valorilor MFI obţinute pentru nivelul de expresie a PPARα
icircn Mo subiecţilor din cele două loturi a fost reprezentată icircn figura 511
Figura 511 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti-PPARα icircn Mo
Sub forma unei diagrame de control Shewhart am reprezentat variaţia intensităţii medii de
fluorescenţă pentru anticorpii anti-PPARα icircn MoVariaţia nivelului de expresie relativă a
receptorilor PPARα icircn Mo subiecţilor studiaţi este ilustrată icircn fig 512 513
Figura 512 Lot SM Variaţia
expresiei relative a PPARα icircn Mo
Număr pacienţi
26
Minim 128
Maxim 358
Media 22819
DS 5819
25 din 26 valori ale MFI s-au icircncadrat
icircn intervalul Media plusmn 2DS
Figura 513 Lot Non-SM Variaţia
expresiei relative a PPARα icircn Mo
Număr pacienţi 31
Minimum 786
Maximum 379
Media 23538
DS 7717
Cu excepţia unei singure
determinări valorile calculate s-au
icircncadrat icircn Media plusmn 2DS
Utilizacircnd testul parametric t-Student pentru variabilele cu distribuţie normală am
comparat valoarea medie a intensităţii de fluorescenţă a Ac anti-PPARα icircn lotul cu SM versus
subiecţi fără SM (Lot Non-SM) Analiza statistică efectuată nu a identificat diferenţe icircntre
50 100 150 200 250 300 350 400 450
0
5
10
15
20
25
30
35
MFI anti-PPAR a
Frecv
enta
relati
va (
)
Lot SM
0 50 100 150 200 250 300 350 400 450 500
0
5
10
15
20
25
30
35
MFI anti-PPAR a
Frecv
enta
relati
va (
)
Lot martor
1 6 11 16 21 26 31
0
50
100
150
200
250
300
350
400
450
MFI
anti-
PPAR
a
2282
1106
3458
518
4046
Media
LCI
LCI
1 6 11 16 21 26 31 36
-100
0
100
200
300
400
500
MFI a
nti-PP
AR
a
2354
810
3897
39
4669LCS
LCI
Media
cele două loturi icircn ceea ce priveşte expresia PPARα la nivelul Mo circulante (t- Test P=
069)
Studiul receptorilor PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de AHC şi dislipidemie
Nivelul de expresie al receptorilor PPARα α icircn Mo tinde să fie mai scăzut la subiecţii
cu AHC de HTA comparativ subiecţii care nu au declarat AHC de HTA (P= 006 fig 515)
AHC HTA
Număr 22
Mediana 19950
Percentila 25 17800
Percentila 75 22700
AHC HTA absente
Număr 35
Mediana 24800
Percentila 25 19025
Percentila 75 31700
Figura 515 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Mo funcţie de AHC de HTA
Nu s-au calculat diferenţe semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor
PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de dislipidemie atunci cacircnd aceştia au fost comparaţi cu
subiecţii fără AHC de tulburări ale metabolismului lipidic (t- Test P= 020)
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn limfocite
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn populaţia de Ly a
demonstrat prezenţa receptorilor PPARα icircn Ly tuturor subiecţilor studiaţi Pentru toţi
participanţii investigaţi analiza MFI a Ac anti - PPARα icircn populaţia de Ly a relevat un
interval de variaţie icircntre [748 314] iar valoarea medie a MFI a fost de 18058 plusmn 5600
Pentru ambele loturi aplicarea testului Shapiro-Wilk a evidenţiat distribuţia normală a
valorilor determinate pentru nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Ly Pentru
pacienţii cu SM valoarea medie a MFI determinată pentru expresia PPARα icircn populaţia de
Ly a fost de 18178 plusmn 61 16 iar pentru lotul martor a fost de 16800 plusmn 5229
Tabel XXX Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn limfocite
Lot SM Lot Non-SM
N 26 31
Media 181781 179574
SD 611694 522907
Mediana 165000 168000
Minimum 81300 74800
Maximum 314000 301000
Percentila 25 13400 - 145750
Percentila 75 21800 21700
Distribuţia frecvenţei valorilor MFI a Ac anti-PPARα icircn Ly este redată icircn figura 518
Figura 518 Distribuţia frecvenţelor relative a MFI a Ac anti-PPARα icircn Ly
94 din determinările efectuate pentru determinarea nivelului de expresie relativă al
MFI
ant
iPPA
R
a_Mo
190
200
210
220
230
240
250
260
270
280
DA NU
AHC HTA
P=006
50 89 128 167 206 244 283 322 361 400
0
5
10
15
20
25
30
35
MFI anti-PPAR a
Frecv
enta
relati
va (
)
Lot SM
0 50 100 150 200 250 300 350
0
5
10
15
20
25
30
35
40
MFI anti-PPAR a
Frec
venta
relat
iva (
)
Lot Non-SM
receptorilor PPARα icircn limfocitele subiecţilor cu SM s-au icircncadrat icircn intervalul Media plusmn 2DS
Figura 5 19 Lot SM Variaţia expresiei
relative a PPARα icircn Ly
Număr pacienţi 26
Minimum 813
Maximum 31400
Media 18178
Deviaţia Standard 6116
25 valori s-au icircncadrat icircn Media plusmn 2DS
Pentru lotul Non-SM diagrama de control (figura 520) a arătat toate valorile
determinate pentru lotul Non-SM se icircncadrează icircntre LCS şi LCI
Figura 520 Lot Non -SM Variaţia
expresiei relative a PPARα icircn Ly
Număr pacienţi 31
Minimum 748
Maximum 30100
Media 179574
Deviaţia Standard 5229
96 din valori icircncadrate icircn Media plusmn 2DS
Aplicarea testului t-Student pentru valorile medii ale intensităţii de fluorescenţă ale
PPARα icircn Ly nu a arătat existenţa unei diferenţe statistic semnificative icircntre lotul cu SM şi
lotul martor(t- Test P= 088)
Analiza receptorilor PPARα icircn Ly subiecţilor cu AHC de HTA şi dislipidemie
Studiind populaţiile de Ly la subiecţii care au prezentat AHC de hipertensiune
arterială analiza flowcitometrică a relevat existenţa unor valori mai mici pentru MFI la aceşti
subiecţi comparativ cu cei fără AHC de HTA (fig 522) deşi scăderea observată nu a
icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică (t- Test P = 009)
AHC HTA
Număr 22
Mediana 16000
Percentila 25 12700
Percentila 75 17100
AHC HTA absenţe
Număr 35
Mediana 18700
Percentila 25 14900
Percentila 75 23175
Figura 522 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Ly funcţie de AHC de HTA
Nu am calculat diferenţe statistic semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor
PPARα icircn populaţiile de Ly ale subiecţilor la care am identificat AHC de dislipidemie
comparativ cu cei care nu au declarat antecedente familiale de dislipidemie (t- Test P= 051)
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn neutrofile (PMN)
Analiza flowcitometrică a evidenţiat prezenţa PPARα icircn PMN recoltate din sacircngele
venos al tuturor participanţilor la studiu Pentru toţi subiecţii investigaţi analiza MFI a Ac -
PPARα icircn populaţia de PMN a relevat un interval de variaţie de [163419] iar valoarea medie
a MFI pentru Ac anti-PPARα a fost de 26392 plusmn 7064 Testul Shapiro-Wilk a arătat o
distribuţie normală a valorilor intensităţii medii de fluorescenţă a anticorpilor anti-PPARα atacirct
icircn lotul pacienţilor cu SM cacirct şi icircn lotul martor
1 6 11 16 21 26 31
-50
0
50
100
150
200
250
300
350
400
MFI
anti-
PPAR
a
1818
595
3041
-17
3653
Media+2DS
Media- 2DS
1 6 11 16 21 26 31 36
0
50
100
150
200
250
300
350
MFI
ant
i-PPA
R
a
1796
750
2841
227
3364
Media+2DS
Media
Media- 2DS
MFI
anti-
PPAR
a Ly
130
140
150
160
170
180
190
200
210
DA NU
AHC HTA
P=009
Tabel XXXII Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn PMN
Lot SM Lot Non-SM
N 26 31
Media 26273 26480
SD 6915 7088
Mediana 25900 25500
Minimum 17200 16300
Maximum 39500 41900
Percentila 25 19800 19600
Percentila 75 30500 31500
Icircn cele două loturi distribuţia frecvenţei valorilor nivelului relativ de expresie a
receptorilor PPARα icircn PMN a fost reprezentată sub formă de histograme (fig 525)
Figura 525 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti-PPARα icircn PMN
Pentru cei 26 de pacienţi din lotul cu SM a valoarea medie a nivelului de expresie
relativă a receptorilor PPARα icircn PMN a fost de 26273 plusmn 6915 Studiind diagrama Shewhart
din figura 526 se observă că toate valorile obţinute pentru nivelul de expresie relativă
PPARα icircn PMN investigate se icircncadrează icircntre limitele definite de valorile medii plusmn 2DS
Figura 526 Lot SM
Variaţia expresiei relative a PPARα icircn
PMN
Număr pacienţi 26
Minimum 17200
Maximum 39500
Media 26273
Deviaţia Standard 6915
Valorile MFI icircncadrate icircn Media plusmn 2DS
Pentru lotul martor valoarea medie calculată a MFI a anticorpilor anti-PPARα a fost de
26480 plusmn 7088 peste 95 din valorile MFI fiind cuprinse icircn Media plusmn 2DS (figura 527)
Figura 527 Lot Non-SM Variaţia expresiei
relative a PPARα icircn PMN
Număr pacienţi 31
Minimum 16300
Maximum 41900
Media 26480
Deviaţia Standard 7088
30 valoriicircn Media plusmn 2DS
Pentru PMN analiza statistica nu a arătat existenţa unei diferenţe statistic semnificative icircntre
nivelul de expresie relativă a PPARα la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii din lotul
Non-SM (t- Test P= 090) Studiind populaţiile de PMN la subiecţii care au prezentat AHC
de HTA nu am calculat o diferenţă statistic semnificativă icircntre expresia receptorilor PPARα
la subiecţii cu istoric familial de hipertensiune arterială comparativ cu cei pentru care nu s-au
notat AHC de HTA (t- Test P= 013)De asemenea am identificat diferenţe icircntre nivelul de
expresie al PPARα icircn PMN subiecţilor care prezentau AHC de dislipidemie comparativ cu
cei fără AHC de dislipidemie (t- Test P= 017)
50 100 150 200 250 300 350 400 450 500
0
5
10
15
20
25
30
35
MFI anti-PPAR a
Frecve
nta rel
ativa (
)
Lot SM
50 100 150 200 250 300 350 400 450 500
0
5
10
15
20
25
30
MFI anti-PPAR a
Frecv
enta
relati
va (
)
Lot Non-SM
1 6 11 16 21 26 31
0
50
100
150
200
250
300
350
400
450
500
MFI
anti-
PPA
R
a
2627
1244
4010
553
4702
Media + 2DS
Media - 2 DS
Media
1 6 11 16 21 26 31 36
0
50
100
150
200
250
300
350
400
450
500
MFI
anti-
PPAR
a
2648
1230
4066
522
4774
Media+ 2DS
Media - 2DS
Media
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile Tabel XXXIV Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn Eo
Lot SM Lot Non-SM
N 26 31
Mediaplusmn SD 141057 plusmn 47604 172209 plusmn 37565
Mediana 142450 171300
Minimum 35000 68500
Maximum 233700 250600
Percentila 25 119300 153225
Percentila 75 169700 199550
Am studiat nivelul relativ de expresie a receptorilor PPARα icircn Eo iar rezultatele au
fost figurate sub forma de histograme (figura 532)
Figura 532 Distribuţia frecventelor relative ale valorilor MFI anti- PPARα icircn Eo
Din diagrama Shewhart (figura 533) se observă că toate valorile determinate pentru
nivelul de expresie relativă a PPARα icircn Eo pentru lotul SM s-au icircncadrat icircn [Media plusmn 3 DS]
peste 90 din determinări fiind cuprinse icircn [Media plusmn 2 DS] iar icircn [Media plusmn 1 DS] sunt
incluse peste 65 din valorile MFI
Figura 533 Lot SM
Variaţia expresiei relative a PPARα icircn Eo
Număr pacienţi 26
Minimum 35000
Maximum 233700
Media 141057
Deviaţia Standard 47604
24 valori icircncadrat eicircn [Media plusmn 2DS]
Pentru subiecţii incluşi icircn lotul martor analiza diagramei (figura 534) a arătat că
toate cele 31 de valori ale MFI pentru PPARα icircn Eo se icircncadrează icircn [Media plusmn 3DS] iar 30
dintre acestea se icircncadrează icircn [ Media plusmn 2 DS]
Figura 534 Lot Non -SM
Variaţia expresiei relative a PPARα icircn Eo
Număr pacienţi 31
Minimum 685
Maximum 2506
Media 172209
Deviaţia Standard 375 65
30 valori icircncadrate icircn [Media plusmn 2DS]
Comparacircnd subiecţii cu SM cu cei din lotul martor am observat o scădere
semnificativă statistic a MFI a Ac anti - PPARα icircn Eo pentru pacienţiir cu SM ( figura 535)
PPARα Eo Lot Non-SM
Număr 31
Mediana 171300
Percentila 25 152325
Percentila 75 199550
PPARα Eo Lot SM
Număr 26
Mediana 142450
Percentila 25 119300
Percentila 75 169700
Figura 5 35 Comparaţie icircntre nivelul de expresie a PPARα icircn Eo
0 500 1000 1500 2000 2500 3000
0
10
20
30
40
50
MFI anti-PPAR a
Frecvent
a relativa
()
Lot SM
400 800 1200 1600 2000 2400 2800
0
5
10
15
20
25
30
35
40
45
MFI anti-PPAR a
Frecenta
relativa
()
Lot Non-SM
1 6 11 16 21 26 31
-500
0
500
1000
1500
2000
2500
3000
MFI a
nti-PP
AR
a
14106
4765
23447
94
28117
Media + 2DS
Media- 2DS
LCI
LCS
1 6 11 16 21 26 31 36
500
1000
1500
2000
2500
3000
MFI an
ti-PPA
R a
17221
9708
24734
5951
28490
LCI
Media-2DS
Media
Media +2 DS
LCS
1200
1300
1400
1500
1600
1700
1800
1900
Lot SM Lot Non-SM
P=00072
Cu ajutorul curbei ROC am evaluat posibilitatea utilizării MFI a Ac anti - PPARα icircn
Eo ca marker pentru diagnosticul SM Valoarea MFI a Ac anti - PPARα icircn Eo care prezice cu
cea mai mare acurateţe prezenţa SM a fost de 1533 (punctul de ldquocut-offrdquo) pentru care am
calculat o sensibilitate de 5652 şi o specificitate de 7778 Calculul ariei AUC a furnizat
valoarea de 0663 şi deci determinarea parametrului MFI anti- PPARα icircn Eo are valoarea
unui test cu acurateţe redusatilde icircn diagnosticul SM Studiind expresia PPARα icircn Eo la subiecţii
care au prezentat AHC de HTA am observat o scădere semnificativă statistic (P = 00023) a
expresiei PPARα la subiecţii cu istoric familial de HTA comparativ cu subiecţii fatilderatilde AHC de
HTA (figura 537)
AHC HTA
Număr 22
Mediana 148800
Percentila 25 116425
Percentila 75 170750
AHC HTA absente
Număr 35
Mediana 170850
Percentila 25 143700
Percentila 75 195000
Figura 537 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Eo funcţie de AHC de HTA
Studiind subiecţii cu AHC declarate de dislipidemie nu am identificat diferenţe icircntre
nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Eo subiecţilor cu AHC de dislipidemie
comparativ cu cei care nu au declarat prezenţa AHC de dislipidemie (t - Test P = 067)
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor CD36
Am studiat expresia receptorilor CD36 icircn Mo subiecţilor incluşi icircn studiu
Lot Non - SM
BLot SM
Figura 539 Analiza flowcitometrica pentru receptorii CD36 icircn Mo
Pentru toţi participanţii la studiu valorile MFI au variat icircn intervalul [817 6933] iar
valoarea medie a MFI a Ac anti-CD36 a fost de 397133 plusmn 120902 Tabel XXXVII Statistică descriptivă pentru a CD36 icircn Mo
Lot SM Lot Non-SM
Media 429034 370377
Deviatia Standard 109051 125514
Mediana 411000 362800
Minimum 266400 81700
Maximum 693300 616800
Percentila 25 346200 273750
Percentila 75 469000 453300
Distribuţia frecvenţelor relative a MFI au fost prezentate sub formă histogramelor
Figura 541 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti - CD36 icircn Mo
MFI
ant
i-PPA
R a Eo
1000
1100
1200
1300
1400
1500
1600
1700
1800
1900
DA NU
AHC HTA
P=00023
1000 2000 3000 4000 5000 6000 7000 8000
0
5
10
15
20
25
MFI anti-CD36
Frecve
nta rela
tiva (
)
Lot SM
0 1778 3556 5333 7111
0
5
10
15
20
25
30
35
MFI anti-CD36
Frecve
nta rel
ativa (
)
Lot Non - SM
Referitor la lotul SM 92 din valorile MFI a Ac anti- CD36 s-au icircncadrat icircn
intervalul Media plusmn 2 DS (figura 542) iar pentru lotul martor peste 90 dintre acestea icircn
Media plusmn 2 DS (figura 543)
Figura 542 Lot SM
Variaţia MFI anti-CD36 icircn Mo
Număr pacienţi 26
Minimum 2664
Maximum 6933
Media 429034
Deviaţia Standard 109051
Figura 543 Lot Non -SM
Variaţia MFI anti- CD36 icircn Mo
Număr 31
Minimum 81700
Maximum 616800
Media 370377
Deviaţia Standard 125514
Comparacircnd subiecţii cu SM cu cei din lotul normal am constatat o tendinţă de creştere
a expresiei CD36 icircn lotul cu SM((t - Test P= 0067)
MFI anti - CD36 Lot Non-SM
Număr 31
Mediana 3628
Percentila 25 2737
Percentila 75 4533
MFI anti - CD36 Lot SM
Număr 26
Mediana 4110
Percentila 25 3462
Percentila 75 4690
Figura 544 Comparaţie icircntre cel două loturi privind MFI anti - CD36 icircn Mo
Referindu-ne la subiecţii cu AHC de HTA am observat o tendinţă de creştere a
valorilor MFI anti-CD36 comparativ cu cei care nu au avut AHC de HTA (t - Test P = 0 08)
AHC HTA
Număr 22
Mediana 442800
Percentila 25 355275
Percentila 75 519475
AHC HTA absenţe
Număr 35
Mediana 377400
Percentila 25 316900
Percentila 75 443400
Figura 545 Comparaţie icircntre expresia CD36 icircn Mo funcţie de AHC de HTA
Nu s-au calculat diferenţe semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor
PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de dislipidemie atunci cacircnd aceştia au fost comparaţi cu
subiecţii fără AHC de dislipidemie (t - Test P=031)
Corelaţii icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα si CD36
Studiind valorile intensităţii medii de fluorescenţă a Ac anti-PPARα icircn Mo Ly şi
PMN am observat că nivelul de expresie celularatilde a PPARα icircn Mo Ly şi PMN sunt corelate
puternic pozitiv atacirct icircn lotul SM cacirct şi icircn lotul martor(fig547 548)
1 6 11 16 21 26 31
0
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
Pacienti
MFI a
nti-CD
36
42903
21093
64714
10188
75619
LCI
Media
LCS1 6 11 16 21 26 31 36
-1000
0
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
MFI a
nti- C
D36
37038
11935
62141
-616
74692Media + 2 DS
Media
Media - 2 DS
3200
3400
3600
3800
4000
4200
4400
4600
4800
Lot SM Lot Non-SM
P = 00676
MFI
anti-
CD36
3400
3600
3800
4000
4200
4400
4600
4800
5000
DA NU
AHC HTA
P = 008
Figura 547 Studiul relatiilor dintre
receptorii PPARα icircn SM A Mo vs PMN B Mo vs Ly
C PMN vs Ly Graficul ilustrează coeficienţii r P dreapta de
regresie (linia centrala) intervalul de icircncredere
95 şi intervalul de predicţie 95
Figura 548 Corelaţii icircntre receptorii PPARα icircn lotul
martor
A Mo vs PMN
B Mo vs Ly
C PMN vs Ly
Tot pentru lotul SM cacircnd am evaluat relaţia dintre nivelul de expresie relativă a
receptorilor PPARα icircn Eo şi nivelul de expresie relativa a receptorilor CD 36 am obţinut o
corelaţie negativă (r = - 05 P = 001) (fig 549 A)
50 100 150 200 250 300 350 50
100
150
200
250
300
350
400
450
500
PPARα Ly
PPARα PMN
y = 56641 + 1159 x r = 086 P lt 0001
C
50 100 150 200 250 300 350 400 0
50
100
150
200
250
300
350
PPARα Mo
PPARα Ly
y = 36665 + 0607 x r = 090 P lt 0001
B
150 200 250 300 350 400 450 0
50 100 150 200 250 300 350 400 450 500
PPARα PMN
PPARα Mo
y = 2505 + 0879 x r = 081 P lt 0001
A
50 100 150 200 250 300 350
50 100 150 200 250 300 350 400 450 500
PPARα Ly
PPARα PMN
y = 95668 + 0919 x r = 081 P lt 0001
C
100 150 200 250 300 350 400
0
50
100
150
200
250
300
350
400
PPARα Mo
PPARα Ly
y = -7503 + 0829 x r = 079 P lt 0001
B
100 150 200 250 300 350 400
50
100
150
200
250
300
350
400
450
500
PPARα Mo
PPARα PMN
y = 61384 + 0882 r = 074 P lt 0001
A
Figura 549 Corelaţii icircntre expresia PPARα icircn Eo şi alte tipuri de receptori investigaţi A PPARα Eo şi CD 36 (Lot SM) B PPARα Eo şi PPARα Mo( Lot Non-SM)
Icircn lotul martor am identificat o asociere moderată pozitivă (r = 038 P = 0033) icircntre
nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Eo şi Mo (figura 549B) corelaţie absentă icircn
lotul pacienţilor cu SM
Corelaţii dintre receptorii studiaţi şi componentele sindromului metabolic
Icircn lotul de control analiza statistică a relevat faptul că icircntre circumferinţa
abdominală (CA ) şi nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Mo Ly şi PMN există o
corelaţie inversă adică scăderea expresiei PPARα la nivelul acestor populatii celulare ar fi
icircnsoţită de creşterea CA (figura 550
Figura 550Corelaţii dintre receptorii
PPARα si CA A Mo B Ly C PMN
La pacienţii cu SM am notat o corelatie moderată negativă statistic semnificativă
icircntre TG şi valorile MFI a Ac anti- PPARα icircn Mo şi Ly( fig 551)
150 200 250 300 350 400 450 50
60
70
80
90
100
110
PPARα PMN
CA r = - 040 P = 0024
C
50 100 150 200 250 300 350 50
60
70
80
90
100
110
PPARα Ly
CA r = - 046 P = 0009
B
50 100 150 200 250 300 350 400 50
60
70
80
90
100
110
PPARα Mo
CA r = - 042 P = 0017
A
50 100 150 200 250 300 350 400 500
1000
1500
2000
2500
3000
PPARα Mo
PPARα Eo
r = 038 P = 0033
B
0 500 1000 1500 2000 2500 1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
PPARα Eo
CD36
r = 050 P = 0010
A
Figura 551 Lot SM Corelaţie icircntre expresia PPARα şi TG (A Mo B Ly)
Analizand corelatia dintre receptorii CD36 si valorile TA la pacientii cu SM am observat
o asociere pozitivă asteptată intre TAD si nivelul de expresie al receptorilor CD36 (fig 552)
Figura 552 Lot SM Corelaţii icircntre expresia
receptorilor CD36 şi valorile tensiunii arteriale
diastolice
Studiind corelaţiile dintre receptorii PPARα şi HDL-col la subiecţii din lotul martor am
notat o asociere pozitivă icircntre expresia PPARα icircn Mo şi Ly cu HDL-col (fig 553)
Figura 553 Lot martor Corelaţii icircntre HDL-col şi expresia PPARα icircn Mo(A) Ly(B)
Icircn lotul normal am evidenţiat corelaţii pozitive moderate dar semnificative statistic icircntre
CA şi valorile TAS (r = 062 P lt 0001) respectiv TAD (r = 050 P=0004) precum şi icircntre
CA şi glicemia subiecţilor normali (r = 052 P = 0003) Aceste date icircmpreună cu relaţia
invers proporţională identificată icircntre HDL-col şi CA (r = 050 P = 001) susţin validitatea
acestui studiu Icircn lotul subiecţilor cu SM am observat o corelaţie moderat pozitivă icircntre
expresia PPARα icircn populaţiiile de Mo şi Eo şi concentraţia a HDL-col (fig 554)
B
100 150 200 250 300 350 20
30
40
50
60
70
80
90
100
PPARα Ly
HDL-col-(mgdl)
r = 036 P = 0046
A
150 200 250 300 350 400 20
30
40
50
60
70
80
90
100
PPARα Mo
HDL-col-(mgd)l
r = 035 P = 005
70 75 80 85 90 95 100 1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
TAD (mmHg)
CD36
r = 048 P = 0013
B
50 100 150 200 250 300 350 -100
0
100
200
300
400
500
PPARα Ly
TG(mgdl)
r = - 042 P = 003
A
50 100 150 200 250 300 350 400 -100
0
100
200
300
400
500
PPARα Mo
TG ( mgdl) r =- 0 43 P = 0027
Figura 554 Corelaţii icircn SM icircntre HDL-col şi expresia PPARα icircn Mo (A) şi Eo(B)
Corelaţii icircntre nivelul de expresie relativă a PPARα şi markeri ai disfuncţiei
endoteliale şi inflamaţiei cronice
Deşi nu a icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică am reţinut corelaţia invers
proporţională (r = - 0331 P = 006) dintre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα
icircn PMN şi concentraţia serică a Non-HDL-colesterolului
Studiind relaţiile dintre parametri icircn lotul de pacienţi cu SM am observat o corelaţie
moderată invers proporţională icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Eo şi
acidul uric seric (figura 555 A) corelaţie absentă la subiecţii fără SM
Figura 555 Lot SM corelaţia dintre expresia PPARα icircn Eo şi acidul uric (A) respectiv
PPARα şi fibrinogen (B)
Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P=008) am notat pentru
pacienţii cu SM corelaţia invers proporţională dintre expresia PPARα icircn Eo şi concentraţia
serică a fibrinogenului ( figura 555B)
V5 Discuţii
Icircn cadrul lucrării de doctorat am studiat nivelul de expresie relativă a PPARα icircn
leucocitele pacienţilor cu SM comparativ cu cea a subiecţilor normali Expresia PPARα a fost
studiată icircn paralel cu cea a CD36 glicoproteină exprimată pe suprafaţa a numeroase celule
din organismul uman inclusiv pe cea a Mo şi macrofagelor Prin funcţia sa de receptor pentru
particulele oxidate de LDL CD36 cunoscut ca bdquoscavenger receptorrdquo de clasa B sau
bdquotrombospodin receptorrdquo contribuie la dezvoltarea inflamaţiei de la nivel endotelial şi
formarea plăcii de ateroscleroză Referitor la studiul PPARα icircn Eo icircn sindromul metabolic
menţionăm că studiul nostru este primul care arată că nivelul de expresie a proteinei PPARα
icircn Eo măsurat prin citometrie icircn flux este semnificativ mai redus la pacienţii care sunt
diagnosticaţi cu acest sindrom De asemenea icircn lotul cu SM cercetat icircn cadrul studiului
receptorilor PPARα numărul Eo circulante a fost semnificativ mai crescut la pacienţii cu SM
B
0 500 1000 1500 2000 2500 200
250
300
350
400
450
PPARα Eo o
Fibrinogen mgdl
r =- 036 P = 008
0 500 1000 1500 2000 2500 1 2 3 4 5 6 7 8 9
10 11
PPARα Eo_
Acid uric(mgdl) r = 048 P = 0014 A
0 500 1000 1500 2000 2500 10
20
30
40
50
60
70
80
PPARα Eo
HDL(mgdl)
r = 044 P = 0024
B
100 150 200 250 300 350 400 10
20
30
40
50
60
70
80
PPARα Mo
HDL( mgdl)
r = 046 P = 0019
A
(P = 003) Aceste constatări conduc la ipoteza că Eo joacă un rol special icircn mecanismele
patogenice declanşate icircn sindromul metabolic şi că receptorii PPARα sunt importanţi icircn
implicarea Eo icircn obezitate şi insulinorezistenţă Creşterea numărului de Eo circulante este
urmată de eliberarea mediatorilor proinflamatori iar reducerea expresiei PPARα icircn Eo
determină perturbarea mecanismelor de control al inflamaţiei cu exacerbarea cascadei
proinflamatorii Consecutiv se agravează disfuncţia endotelială şi se accelerează progresia
leziunilor de ateroscleroză Extrapolacircnd aceste ipoteze putem spune că asocierea raportată
dintre boala ischemică coronariană şi Eo poate fi şi consecinţa exacerbării cascadei
proinflamatorii de la nivel vascular produsă datorită scăderii expresiei PPARα icircn Eo iar
creşterea numărului de Eo circulante poate reprezenta o adaptare a organismului uman care
icircncearcă să suplinească deficitul de receptori PPARα Analizacircnd curba ROC pentru
intensităţile medii de fluorescenţă determinate pentru anticorpii anti- PPARα icircn Eo am
obţinut pentru acest biomarker o sensibilitate a testului de 565 şi o specificitate de 778
pentru un punct de cut-off de 1533 ( figura 536 ) Deşi aria AUC (Aria under the curve) egală
cu 0663 icircncadrează acest test ca avacircnd o acurateţe redusă observăm că că această valoare
este apropiată de determinările AUC pentru alţi factori (fibrinogen raport de aterogenitate
acid uric non- HDL-colesterol) cunoscuţi ca fiind implicaţi icircn aterogeneză şi inflamaţia
cronică (figura 431) Aceste remarci alături de faptul că icircn studiul receptorilor PPARα icircn
leucocite am inclus subiecţi la primul diagnostic de SM creează premisa integrării
determinării expresiei relative a receptorilor PPARα icircn diagnosticul complex al sindromului
metabolic Putem spune că icircn final studiul expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofilele
circulante se dovedește a fi util icircn diagnosticul precoce la nivel molecular al SM permiţacircnd
identificarea timpurie a unor indivizi cu risc cardiometabolic crescut Astfel intervenţia
precoce asupra subiecţilor cu deficit de PPARα icircn Eo contribuie la managementul eficient al
afecţiunilor degenerative icircn care inflamaţia cronică icircndeplineşte un rol primordial Referitor
la populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările efectuate prin citometrie de flux nu au
arătat existenţa unor diferenţe statistice icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα
la subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali Rezultatele noastre pot fi
consecinţa caracteristicilor loturilor studiate (icircn studiul nostru au fost incluşi subiecţi recrutaţi
la primul diagnostic de SM şi icircn absenţa stimulării receptorilor PPARα cu droguri agoniste
PPARα) dar icircn acelaşi timp pot apare diferenţe datorită metodei utilizate (231 232 233)
Făcacircnd o paralelă cu un studiu publicat icircn 2013 icircn Europa (231) care a arătat creşterea
nivelului de expresie al PPARα icircn Ly şi Mo observăm că deşi numărul de subiecţi a fost
aproximativ egal (57 participanţi icircn studiul nostru 60 icircn studiul DAmore) subiecţii icircn studiul
amintit au fost recrutaţi dintr-o clinică cu profil medical la primul diagnostic de SM icircn timp
ce metoda utilizată a fost PCR (Polymerase Chain Reaction) mult mai fidelă decacirct citometria
icircn flux icircn studiul receptorilor nucleari De asemenea DAmore nu investighează expresia
PPARα icircn Eo şi PMN icircn cercetare fiind incluse doar celulele CD14+ (predominant Mo) şi
CD14- (predominant Ly) Deşi nu am obţinut diferenţe statistic semnificative icircntre cele două
loturi referitoare la nivelul de expresie relativă a PPARα icircn Mo Ly şi PMN am observat
corelaţii puternice semnificative statistic icircntre expresia receptorilor PPARα icircn aceste tipuri
celulare Rezultatele obţinute sugerează existenţa unui mecanism diferit molecular de control
icircn eozinofile care reglează cantitatea de proteină PPARα icircn eozinofile versus alte tipuri de
leucocite (la pacienţii cu SM) şi acest lucru este icircn concordanţă cu cercetările care descriu
expresia PPARα mRNA icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale
bronşice keratinocite) Studiind prin citometrie de flux nivelul de expresie relativă a
receptorului CD36 la nivelul Mo am arătat prezenţa acestuia icircn Mo tuturor subiecţilor
investigaţi Analizacircnd valorile intensităţii medii de fluorescenţă a CD36 icircn loturile studiate
am observat o tendinţă de creştere la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali
confirmacircnd implicarea receptorului CD36 icircn patogeneza acestuia Referitor la expresia
receptorului CD36 rezultatele obţinute sunt icircn consens cu studii anterioare care au arătat
creşterea expresiei CD36 la pacienţii cu SM şi diabet zaharat Astfel pe lacircngă diferenţa icircn
expresia CD36 s-au raportat şi corelaţii inverse icircntre expresia proteinei CD36 şi nivelul
adiponectinei Acelaşi studiu a evidenţiat o corelaţie pozitivă intre expresia CD36 cu expresia
receptorilor PPAR gamma relaţia cu PPARα nefiind investigată
Analiza de subgrup a relaţiilor dintre componentele SM și elementele moleculare
proinflamatorii studiate a relevat prezenţa unor asocieri semnificativ statistice icircntre acestea
Se argumentează astfel că veridicitatea studiului este susţinută de interdependenţele statistice
ale componentelor SM Determinarea coeficientului de corelaţie Icircn studiul nostru nivelul de
expresie relativă a PPARα s-a corelat moderat negativ (figura 550) cu CA a subiecţilor din
lotul normal pentru populaţiile celulare de Mo (r = - 0420 P = 001) Ly (r = - 046 P =
0009) şi PMN (r = - 040 P = 0024) date care sunt icircn concordanţă cu studiile care arată
rolul PPARα icircn furnizarea energiei prin beta-oxidarea acizilor graşi Icircn acelaşi timp icircn lotul
pacienţilor cu SM nu am identificat prezenţa unei asocieri icircntre nivelul de expresie relativă a
PPARα şi valoarea măsurată a CA Asocierea dintre expresia relativă a PPARα cu obezitatea
de tip central completează datele existente referitoare la reglarea homeostaziei energetice
conturacircnd un mecanism de control deficitar al aportului caloric al SM Icircn condiţiile icircn care
rezultatele obţinute prin metoda citometriei icircn flux nu au arătat existenţa unei corelaţii intre
expresia PPARα şi CA la pacienţii cu SM considerăm că ar fi necesar studiul
polimorfismului genei PPARA care ar putea aduce informaţii importante cu privire la
implicarea acestor receptori icircn apariţia obezităţii de tip central Subliniem acest lucru deoarece
obezitatea este o boală plurifactorială icircn care pe lacircngă factorii ereditari sunt implicaţi factori
de mediu psihologici şi sociali (245) Existenţa unei componente genetice a aterosclerozei
este legată şi de prezenţa unor variante ale genei PPARA asociate cu creşterea incidenţei bolii
cardiovasculare (82) şi a SM (249) Icircn studiul nostru am constatat o scădere statistic
semnificativă a nivelului expresiei relative a receptorilor PPARα icircn Eo la subiecţii cu
antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială comparativ cu subiecţii fără istoric
familial de hipertensiune (figura 537) Deşi diferenţele calculate icircntre loturile studiate nu au
icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică la subiecţii care au declarat prezenţa
antecedentelor familiale de hipertensiune arterială remarcăm o tendinţă de scădere a
intensităţii medii de fluorescenţă pentru Ac anti-PPARα la nivelul Mo (figura 515 P = 006
) icircn timp ce expresia relativă a CD36 icircnregistrează o creştere la acesti subiecţi (figura 545 P
= 008) Icircn contextul riscului cardiovascular foarte icircnalt al pacienţilor cu SM amintim şi
existenţa corelaţiei pozitive dintre valorile tensiunii arteriale diastolice şi expresia relativă a
receptorului CD36 (r = 0483 P = 0013) Această constatare este icircn consens cu studiile care
au arătat că forma solubilă circulantă a CD36 este asociată cu factorii de risc cardiovasculari
fiind propusă ca un marker precoce al aterosclerozei Activarea PPARα este asociată cu
modularea metabolismului lipidic iar agoniştii PPARα sunt utilizaţi icircn mod curent pentru
tratamentul dislipidemiei Sub acţiunea agoniştilor PPARα se obţine o icircmbunătăţire a funcţiei
endoteliale şi a parametrilor reologici funcţiile pleiotropice ale agoniştilor PPARα fiind
dovedite icircn trialuri clinice controlate Icircn populaţiile de Mo şi Ly la pacienţii cu SM
cercetarea noastră a evidenţiat o asociere negativă icircntre nivelul de expresie relativă a
receptorilor PPARα şi concentraţia TG serice (figura 551) Astfel scăderea expresiei
receptorilor PPARα este asociată cu creşterea nivelului TG serice contribuind la profilul
lipidic aterogen din SM Icircn conformitate cu literatura de specialitate icircn studiul efectuat prin
metoda citometriei icircn flux am găsit prezenţa asocierii icircntre nivelul de expresie al PPARα şi
HDL-colesterol Corelaţia pozitivă dintre nivelul de expresie relativă PPARα şi concentraţia
HDL-colesterolului a fost observată icircn lotul martor icircn populaţiile de Mo (r = 035 P = 005)
şi Ly ( r = 036 P = 004) (figura 553) susţinacircnd faptul că stimularea receptorilor PPARα
este legată de creşterea nivelului seric al lipoproteinelor cu densitate crescută La pacienţii cu
SM corelaţia dintre expresia PPARα şi HDL-colesterol a fost evidenţiată icircn populaţiile de Mo
(r = 046 P = 0019) şi eozinofile (r = 044 P = 0024) Se desprinde concluzia că icircn
sindromul metabolic scăderea concentraţiei HDL-colesterol este legată de diminuarea
nivelului de expresie relativă a receptorilor nucleari PPARα icircntărind afirmaţiile legate de
rolul acestor receptori icircn progresia bolilor cardiovasculare Studiind reactanţii de fază acută
analiza statistică a relevat o diferenţă semnificativă din punct de vedere statistic icircntre valorile
fibrinogenului la pacienţii cu SM atunci cacircnd au fost comparaţi cu subiecţii fără SM
(Capitolul IV4 P lt0 001 figura 427A) De asemenea icircn Capitolul V dedicat studiul
expresiei relative a receptorilor PPARα studiul valorilor fibrinogenului a arătat creşterea
acestui reactant de faza acută icircn lotul cu SM comparativ cu lotul martor (P lt0 0001) Icircn
studiul nostru am calculat o corelaţie invers proporţionala (r = - -036 fig 555B) icircntre
nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile şi concentraţia serică a
fibrinogenului Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P = 008) am reţinut
această asociere deoarece am demonstrat că nivelul de expresie relativă al receptorilor
PPARα icircn eozinofile este mai scăzut icircn sindromul metabolic iar sindromul metabolic este
caracterizat printr-un status inflamator cronic status caracterizat şi de creşterea concentraţiei
serice a fibrinogenului De asemenea notam ca această corelaţie negativă se află icircn
concordanţă cu studiile care arata că tratamentul cu agonişti PPARα (fibraţi) determina
scăderea nivelului seric al fibrinogenului contribuind la diminuarea inflamaţiei cronice din
sindromul metabolic şi icircn consecinţă amelioracircnd insulinorezistenţa
LIMITE ȘI DIFICULTĂȚI IcircN CERCETARE
Icircn cadrul Tezei de Doctorat am desfăşurat o cercetare care şi-a propus studierea
expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Recrutarea anamneza şi examinarea
clinică a subiecţilor au fost realizate icircn cadrul Cabinetului de Medicină de Familie CMI Popa
Elena din Iaşi iar determinările hematologice şi biochimice s-au efectuat icircn cadrul
Laboratorului Ambulatorului de Specialitate al Spitalului Universitar ldquoSfacircntul Spiridon din
Iaşi Icircn studiul epidemiologic şi al markerilor inflamatori al sindromului metabolic desfăşurat
au fost incluşi un număr de 1530 de participanţi pe baza liberului consimţămacircnt examinaţi icircn
perioada 01012013 - 31122013 Icircn continuare icircn perioada 1012014 - 28022014 pe baza
criteriilor de includere şi excludere icircn cele două loturi de studiu am investigat un număr de 57
de subiecţi prezentaţi la consultaţie icircn această perioadă şi care au icircndeplinit criteriile de
includere icircn cele două loturi (Lot SM şi Lot Control) constituite pentru evaluarea nivelului de
expresie a receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Explorarea nivelului de expresie
relativă a receptorilor PPARα s-a desfăşurat icircn cadrul Laboratorului de Biologie Moleculară
de pe platforma Institutului Regional de Oncologie Datorită resurselor proprii financiare
limitate trebuie să subliniez că aceasta cercetare nu ar fi fost posibilă fără contribuţia unor
cercetători din domeniul medical care m-au sprijinit necondiţionat atacirct icircn elaborarea
protocolului de lucru cacirct şi icircn efectuarea propriu-zisă a studiului Icircn acest sens menţionăm şi
faptul că pentru studiul receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic am utilizat aparatura
Laboratorului de Biologie Moleculară (care deserveşte icircntreaga Regiune a Moldovei) Pe
această cale mulţumesc personalului Laboratorului de Biologie Moleculară pentru ajutorul
acordat icircn desfăşurarea cercetării doctorale icircn condiţiile icircn care se observa creşterea
numărului de pacienţi care se adresează acestei platforme de cercetare Mulţumesc de
asemenea şi Doamnei Doctor Elena Butoi din cadrul Institutului de Biologie şi Patologie
Moleculară ldquoNicolae Simionescurdquo Bucureşti) pentru donaţia anticorpului secundar anti-
FITC Icircn consecinţă pentru recrutarea unui număr mai mare de participanţi ar fi fost necesară
icircn primul racircnd obţinerea unor resurse financiare suplimentare pentru achiziţia de aparatură şi
reactivi Totuşi numărul subiecţilor recrutaţi este apropiat de numărul subiecţilor raportaţi icircn
cadrul unor granturi de cercetare care aveau ca ţinta studiul expresiei receptorilor PPARα
(212 227 228 231) Rezultatele obţinute continua seria lucrărilor care arata importanta
studiului mecanismelor etiopatogenice ale sindromului metabolic patologie care se afla icircntr-o
continuă creştere La pacienţii cu SM pe lacircngă diminuarea nivelului de expresie a receptorilor
PPARα icircn eozinofile ne aşteptam şi la evidenţierea unor modificări icircn expresia PPARα şi icircn
populaţiile de Ly Mo şi PMN Acest fapt poate fi explicat de utilizarea unor celule provenite
de la pacienţi fără afectare cardiovasculară fără diabet zaharat şi necesită continuarea
studiului pe culturi celulare icircn condiţii de stimulare cu agonişti PPARα deziderat care
impune continuarea investigării expresiei PPARα printr-un grant de cercetare
ORIGINALITATEA ȘI CONTRIBUȚIILE INOVATIVE ALE TEZEI DE
DOCTORAT PERSPECTIVE DE CERCETARE
Evaluarea nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn leucocitele circulante
aduce noi perspective icircn studiul obezităţii şi sindromului metabolic Importanta studiului
expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic derivă din prevalenta crescută a
sindromului metabolic icircn populaţia cercetată la care se adaugă riscul cardiovascular foarte
icircnalt al acestor pacienţi cu implicaţii majore icircn sănătatea publică Rolul receptorilor PPARα
icircn inflamaţie şi aterogeneza este binecunoscut dar studiul nostru este primul care a arătat că
nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα este semnificativ mai scăzut in populatiile
de eozinofile la pacienţii cu SM Această concluzie coroborata cu existenţa unei stracircnse
asocieri intre expresia receptorilor PPARα la nivelul Mo limfocitelor şi PMNlor creeaza
ipoteza existenţei unui mecanism de control diferit al expresiei PPARα la nivelul
eozinofilelor Această cercetare aduce informaţii importante referitoare la mecanismele
proinflamatorii care stau la baza insulinorezistenţei şi riscului cardiometabolic şi impune
continuarea studiului acestor receptori nucleari prin citometrie icircn flux metodă care poate fi
aplicată şi la scara mai largă dacă sunt asigurate resursele materiale necesare cercetării
Cercetarea prin citometrie icircn flux poate fi completată de studiul polimorfismului genei
PPARA şi astfel se pot identifica timpuriu indivizii cu potenţial risc cardiometabolic crescut
Studiul receptorilor PPARα a stabilit conexiuni cu factori proinflamatori şi aterogenetici iar
continuarea cercetării poate aduce şi elemente noi de diagnostic precoce icircn sindromul
metabolic contribuind la icircmbunătăţirea prognosticului acestor pacienţi
CONCLUZII FINALE
1 Aplicarea scorului de SM alături de implementarea algoritmului electronic de diagnostic
contribuie la o prelucrare rapidă eficientă și standardizată a informaţiilor la nivelul
medicinei primare
2 Prevalenţa SM calculată astfel icircn cadrul studiului este crescută (2732) icircn concordanţă
cu datele raportate
3 Controlul factorilor de risc cardiometabolici incluşi icircn SM se poate realiza prin
managementul stilului de viaţă (scăderea greutăţii corporale prin combaterea
sedentarismului şi adoptarea unei diete antiaterogene şi hipocalorice) şi administrarea
terapiei medicamentoase
4 Este necesară adoptarea unei politici de sănătate publică pentru prevenirea creşterii icircn
populaţie a prevalenţei obezităţii şi a diabetului zaharat
5 Noi metode de cercetare icircn domeniul SM axate pe diagnosticarea precoce şi cuantificarea
eficientă a acestuia duce la diminuarea incidenței evenimentelor cardiovasculare majore
6 Sindromul metabolic se caracterizează printr-un status inflamator cronic
7 Valorile Non-HDL-colesterolului şi a raportului de aterogenitate sunt semnificativ mai
mari la pacienţii cu SM
8 Dintre reactanţii de faza acută am observat că valoarea medie a fibrinogenului este mai
crescută icircn lotul cu SM
9 Valorile eozinofilelor sunt crescute icircn sindromul metabolic iar explorarea relaţiei dintre
eozinofile şi obezitate constituie una din direcţiile de studiu actuale ale sindromului
metabolic
10 Evaluarea markerilor inflamatori icircn contextul sindromului metabolic este utilă icircn
evaluarea complexă a a factorilor de risc cardiometabolici
11 Prin metoda citometriei icircn flux am demonstrat prezenta Receptorilor Activaţi de
Inductorii Proliferării Peroxizomilor ndash Alpha (PPARα) icircn toate populaţiile de leucocite
studiate (Mo limfocite PMN eozinofile) atacirct icircn lotul pacienţilor cu SM cacirct şi icircn lotul
martor
12 Utilizacircnd intensitatea medie de fluorescenţă a anticorpilor anti- PPARα am arătat că
nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile este semnificativ mai redus
la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali
13 Acest studiu este primul care a demonstrat existenţa unei scăderi statistic semnificative a
nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofilele pacienţilor cu SM
confirmacircnd cercetările recente care au evidenţiat rolul eozinofilelor şi al receptorilor
PPARα icircn obezitate reglarea inflamaţiei cronice şi aterogeneza
14 Contrar aşteptărilor noastre icircn populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările
efectuate icircn cele două loturi de studiu (cu şi fără sindom metabolic) nu am evidenţiat
diferenţe statistic seminificative icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα la
subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali
15 Icircn populaţiile de Mo limfocite şi polimorfonucleare am observat corelaţii puternice
semnificativ statistic icircntre expresia PPARα icircn aceste tipuri celulare sugeracircnd existenţa
unui mecanism unic de control al inflamaţiei cronice la nivelul acestor celule probabil
diferit de cel din eozinofile
16 La subiecţii cu SM expresia relativă a PPARα icircn Eo este invers asociată cu expresia
receptorului CD36 (receptor al particulelor de ox - LDL şi propus ca un marker precoce al
aterosclerozei) dovedind rolul antiinflamator al receptorilor PPARα la nivel endotelial
17 La pacienţii cu antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială nivelul de
expresie al receptorilor PPARα icircn eozinofile şi Mo este diminuat comparativ cu subiecţii
fără antecedente familiale de hipertensiune arterială Putem spune că studiul efectuat de
noi aduce informaţii importante legate de geneză aterosclerozei şi hipertensiunii arteriale
18 Prin studiul asocierilor dintre receptorii PPARα şi componentele clinice ale sindromului
metabolic am arătat rolul acestor receptori icircn determinismul obezităţii de tip central
nivelul expresiei relative a receptorilor PPARα fiind invers proporţional cu circumferinţa
abdominală
19 Icircn acelaşi timp nivelul de expresie a PPARα icircn sindromul metabolic este asociat pozitiv
cu concentraţia serică a HDL-colesterolului şi invers asociat cu nivelul trigliceridelor
serice dovedind rolul acestor receptori icircn diminuarea procesului inflamator cronic de la
nivel vascular
20 La pacienţii cu SM scăderea expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofile este corelată cu
creşterea unor markeri ai sindromului inflamator cronic cardiometabolic (acid uric
fibrinogen) ilustracircnd importanta receptorilor icircn reglarea status-ului inflamator cronic din
sindromul metabolic
21 Utilizarea metodei flowcitometrice pentru studiul expresiei relative a receptorilor PPARα
icircn leucocite a adus informaţii importante cu privire la mecanismele moleculare de control
implicate icircn patogenia bolilor cardiometabolice icircn concordanţă cu cercetările care descriu
expresia PPAR icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale bronşice
keratinocite)
BIBLIOGRAFIE SELECTIVA
1 Kahn R Metabolic syndrome- what is the clinical usefulness Lancet 2008371(9628)1892-3
2 Reaven GM The metabolic syndrome is this diagnosis necessary Am J Clin Nutr 2006 83(6)1237-7
3 Grundy SM Pre-Diabetes Metabolic Syndrome and Cardiovascular Risk J Am Coll Cardiol 201259(7)
635-43
4 International Diabetes Federation IDF Diabetes Atlas 6th edn International Diabetes Federation Belgium
Brussels 20131-155
5 World Health Organization Global Status Report on Noncommunicable Diseases 2010 World Health
Organization Geneva Switzerland 20111-176
6 Coman AE Petrovanu R Sindromul metabolic in practica de ambulator Editura Pim Iaşi 2009 1-103
7 Grundy SM Becker D Clark LT et alThird Report of the National Cholesterol Education Program (NCEP)
Expert Panel on Detection Evaluation and Treatment of High Blood Cholesterol in Adults (Adult
Treatment Panel III) Final Report Circulation 2002106(25)3143-90
8 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J Metabolic syndrome- a new worldwide definition A Consensus Statement
from the International Diabetes Federation Diabet Med 2006 23(5)469-80
9 KG Alberti KG Eckel RH Grundy SM etal International Diabetes Federation task force on epidemiology
and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart Association World Heart
Federation International Atherosclerosis Society International Association for the study of obesity
Harmonizing the metabolic syndrome a joint interim statement of the International Diabetes Federation task
force on epidemiology and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart
Association World Heart Federation International Atherosclerosis society and International Association
for the study of obesity Circulation 2009120(16)1640-5
10 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J IDF Epidemiology Task Force The metabolic syndrome new
worldwide definition Lancet 2005 366 1059 - 62
11 Oleszczyk M Svab I Seifert B et al Primary healthcare in the developing part of Europe changes and
development in the former Eastern Bloc countries that joined the European Union following 2004 Med Sci
Monit 2009(15)78ndash84
12 Jung U J Choi M S Obesity and Its Metabolic Complications The Role of Adipokines and the
Relationship between Obesity Inflammation Insulin Resistance Dyslipidemia and Nonalcoholic Fatty
Liver Disease Int J Mol Sci 2014rsquo15(4) 6184-223
13 Vanden Heuvel JP Peters JM Peroxisome Proliferators In Ramos K (ed) Cellular and Molecular
Toxicology (Second Edition) Volume 2 New York Elsevier Science Inc 2010 145 - 67
14 Yessoufou A Wahli W Multifaceted roles of peroxisome proliferator-activated receptors (PPARs) at the
cellular and whole organism levels Swiss Med Wkl 2010140w13071 doi104414smw201013071
15 Azhar S Peroxisome proliferator-activated receptors metabolic syndrome and cardiovascular disease
Future Cardiology 20106(5)657-91
16 Andries G Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity
Diabetes and Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(Suppl)24-32
17 Zandbergen F Plutzky J PPARalpha in atherosclerosis and inflammation Biochim Biophys Acta
20071771(8)972-82
18 Straus DS Glass CK Anti-inflammatory actions of PPAR ligands new insights on cellular and molecular
mechanisms Trends Immunol 200728(12)551-8
19 Zlei M Zugun- Eloae F Carasevici E Citometrie icircn flux - Bază şi clinică Icircn Hinescu ME (ed) Citometrie icircn
flux - principii şi aplicaţii clinice Bucureşti Editura Viaţa Medicală Romacircnească 20111-128
20 Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity Diabetes and
Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(9)24-32
21 Woerly G Honda K Loyens M et al Peroxisome proliferator-activated receptors alpha and gamma down-
regulate allergic inflammation and eosinophil activation J Exp Med 2003198(3)411-21
22 Salle-Saumont D Brenuchon C Kanda A et al Peroxisome proliferator-activated receptor alpha regulates
skin inflammation and humoral response in atopic dermatitis J Clin Allergy Immunology 2008 21(4)962-8
23 Schote A Turner J Schiltz J et al Nuclear receptors in human immune cells expression and correlations
Mol Immunolog 200744(6)1436-45
24 DAmore S Vacca M Graziano G et al Nuclear receptors expression chart icircn peripheral blood
mononuclear cells identifies patients with Metabolic Syndrome Biochim Biophys Acta
20131832(12)2289-301
25 Uthurralt J Gordish-Dressman H Bradbury M T et al PPARalpha L162V underlies variation in serum
triglycerides and subcutaneous fat volume in young males BMC Med Genet 2007855
26 Hiukka A Leinonen ES Jauhiainen M et al Long-term effects of fenofibrate on VLDL and HDL
subspecies icircn participants with type 2 diabetes mellitus Diabetologia 2007 50(10)2067-75
27 Robins SJ Rubins HB Faas FH et alInsulin resistance and cardiovascular events with low HDL
cholesterol The Veterans Affairs HDL Intervention Trial (VA-HIT) Diabetes Care 2003 26(5)1513-7
28 Devaraj S Siegel D Jialal I Statin Therapy in Metabolic Syndrome and Hypertension Post-JUPITER
What is the Value of CRP Curr Atheroscler Rep 2011 13(1) 31ndash42
29 Imperatore G Riccardi G Iovino C et al Plasma Fibrinogen A New Factor of the Metabolic Syndrome A
population-based study Diabetes Care 19982 1(4)649-54
30 Krysiak R Gdula-Dymek A Bachowski R Okopien B Pleiotropic effects of atorvastatin and fenofibrate
in metabolic syndrome and different types of pre-diabete Diabetes Care 201033(10)2266-70
31 Hermans MP Impact of Fenofibrate on Type 2 Diabetes Patients with Features of the Metabolic Syndrome
Subgroup Analysis From FIELD Curr Cardiol Rev 20106(2)112-8
32 Silverstein R Inflammation atherosclerosis and arterial thrombosis Role of the scavenger receptor CD36
Cleveland Clinic Journal of Medicine 200976(Suppl 2)S27-S30
33 Hăncu N Obezitatea In Vereşiu IA (ed) Diabetul zaharat nutritia si bolile metabolice Volume 2 Editura
Echinox Cluj- Napoca 2010 1-15
Lista lucrări publicate
1 Elena Popa Maria Maidaniuc Agnes Bacusca Alamir Diaa Rodica Petrovanu Adorata Elena
Coman Disfuncţia endotelială ndash de la mecanisme moleculare la cuantifi care şi tratament icircn practica
medicală Practica Medicală 20149(3) 109-14
2 Elena Popa Agnes Bacusca Alamir Diaa Maria Maidaniuc Rodica Petrovanu Adorata Elena Coman
The function of insulin receptor (IRF) in evolution of obesity correlation with adipocytes diameters
Archives of the Balkan Medical Union 201449(3) 275-9
3 Elena Popa Florin Zugun-Eloae Mihaela Zlei Daniela Jitaru Oana Maria Pintilie Adorata Elena
Coman Maria Traian Didona Anca Ungureanu Eugen Carasevici - acceptata pentru numarul 42014
Flow cytometry analysis of PPAR-alpha receptors in metabolic syndrome) Revista Romană de
Medicină de Laborator(RRLM-D-14-00034R1- adeverinţa ataşată
Fişa electronică de studiu Consimţămacircntul informat al pacientului Recoltarea probelor de sacircnge venos pentru studiul PPARα
Protocol marcare CD14 - CD36
Imagini PPARα - citometrie icircn flux
Imagini CD36 Lista lucrări publicate
LISTA ABREVIERI
CA - Circumferinţa abdominalăcm - CentimetriCRP - Proteina C reactivăCol - Colesteroldl - DecilitruEo - EozinofileHDL - High density lipoprotein (lipoproteine cu densitate icircnaltă)IDF - Federaţia Internaţională de DiabetIgE - ImunoglobulinăIMC- Indice de masă corporalăLy - LimfociteLDL- Low density lipoprotein (lipoproteine cu densitate joasă)mg - MiligramMo- MonociteNCEP-ATP III - Naţional Cholesterol Education Program Adult Treatment Panel IIIPPAR - Receptorii Activaţi de Inductorii Proliferarii Peroxizomilor (peroxizome proliferator -activated receptor)PMN - PolimorfonucleareSM - Sindrom metabolicTA - Tensiunea arterialăTAS - Tensiune arterială sistolicăTAD - Tensiune arterială diastolicăTG - Trigliceride
Teza cuprinde un număr de 118 de figuri 41 de tabele și 280 referințe bibliograficeNumerotarea tabelelor şi figurilor este identică cu cea din teză
SCOPUL ŞI MOTIVAŢIA STUDIULUI
Motivația cercetării
La nivel mondial sindromul metabolic (SM) reprezintă o importantă problemă de
sănătate publică reunind asocierea dintre obezitate abdominală şi factori de risc majori
cardiovasculari (hiperglicemia dislipidemia hipertensiunea arterială) (12) Se estimează că
SM afectează peste 25 din populaţia generală iar aproximativ două treimi din pacienţii cu
SM sunt predispuşi la un eveniment cardiovascular major (3) Icircn prezent se acţionează pe
două căi pentru controlul factorilor de risc cardiometabolici incluşi icircn SM managementul
stilului de viaţă (scăderea greutăţii corporale prin combaterea sedentarismului şi adoptarea
unei diete antiaterogene şi hipocalorice) şi administrarea terapiei medicamentoase Deşi atacirct
modificarea stilului de viață cacirct și terapia medicamentoasă vizează controlul factorilor de risc
cardiometabolici conform ghidurilor medicale adoptate atingerea ţintelor terapeutice este
greu de realizat (1011) Icircn aceste condiţii introducerea unor noi metode diagnostice şi
terapeutice bazate pe etiopatogenia SM ar putea icircmbunătăţi calitatea vieţii bolnavilor şi SM şi
ar conduce pe termen lung la creşterea speranţei medii de viaţă Cercetările actuale sunt
orientate spre descifrarea modului icircn care modificările metabolismului incluzacircnd rezistenţa la
insulină dislipidemia obezitatea abdominală pot accelera ateroscleroza privită ca o
complicaţie metabolică și indusă de inflamație (12) Icircn contextul studiului SM receptorii
nucleari activaţi de inductorii proliferării peroxizomilor-alpha-α (PPARα) atrag atenţia
datorită rolului deţinut icircn reglarea oxidării acizilor graşi metabolismul lipidelor şi
lipoproteinelor inflamaţie cronică şi aterogeneză (131415) Aceștia reprezintă astfel veriga
lipsă patogenică care leagă modificările metabolice de procesul inflamator cronic
autoicircntreținut care duce la disfuncția endotelială și aterogeneză Acţionacircnd ca factori de
transcripţie activarea PPARα determină scăderea nivelului seric al trigliceridelor şi HDL-col
şi protejează față de profilul lipidic aterogenetic prin modularea status-ului proinflamator şi
diminuarea insulinorezistenţei (1617) Rolul PPARα icircn reglarea metabolismului lipidic
balanţei energetice şi icircn diminuarea răspunsului proinflamator fac din aceşti receptori o
potenţială ţinta icircn tratamentul afecţiunilor icircn care rolul inflamaţiei cronice este bine cunoscut
Se descrie astfel o nouă posibilitate de icircmbunătăţire a prognosticului afecţiunilor cronice cu
impact major asupra sănătăţii publice incluzacircnd ateroscleroza diabetul zaharat boala cronică
obstructivă pulmonară maladia Parkinson demența Alzheimer şi nu icircn ultimul racircnd
neoplaziile (18)
Scopul studiului
Icircn cadrul Tezei de Doctorat mi-am propus realizarea unei cercetări referitoare la
rolul Receptorilor Activaţi de Inhibitorii Proliferării Peroxizomilor- alpha icircn contextul
sindromului metabolic alături de completarea datelor epidemiologice existente cu privire la
prevalenţa acestui sindrom icircn populaţia aflată icircn evidenţa unui Cabinet de Medicină de
Familie din oraşul Iaşi Ca urmare cercetarea efectuată a urmărit două aspecte1 studiul
epidemiologic al SM icircn populaţia unui Cabinet de Medicină de Familie urmată de
investigarea markerilor inflamatori prezenţi icircn SM 2 investigarea prezenţei și a nivelului de
expresie relativă a receptorilor PPARα icircn leucocitele circulante recoltate din sacircngele
subiecţilor studiaţi celule care exprimă aceşti receptori şi a căror rol icircn inflamaţie şi
aterogeneză este bine cunoscut
Considerații etice Studiul a primit avizul Comisiei de Etică a Universităţii de Medicină
şi Farmacierdquo Gr T Popardquo Iaşi Studiul a fost condus icircn conformitate cu Declaraţia de la
Helsinki actualizată
STUDIUL SINDROMULUI METABOLIC IcircN POPULAŢIA SELECTATĂ
Obiectivele studiului sindromului metabolic
a evaluarea din punct de vedere clinic şi biologic a sindromului metabolic
b identificarea tipului de SM icircn raport cu numărul de componente
c stabilirea prevalenţei sindromului metabolic icircn populaţia studiată
d studiul markerilor inflamatori prezenţi icircn SM
Studiul epidemiologic icircn populaţia selectată
Am efectuat un studiu epidemiologic transversal care şi-a propus stabilirea prevalenţei
sindromului metabolic şi a componentelor sale icircn populaţia icircnscrisă pe lista unui cabinet de
medicină de familie Studiul s-a desfăşurat pe parcursul a 12 luni icircn perioada 01012013ndash
31122013 icircn cadrul Cabinetului de Medicină de Familie CMI Popa Elena situat icircn strada
Ion Creanga nr 73 din Iaşi
Obiectivele studiului - evaluarea din punct de vedere clinic şi biologic a sindromului metabolic
- identificarea tipului de SM icircn raport cu numărul de componente
- stabilirea prevalenţei sindromului metabolic icircn populaţia studiată
Lotul de studiu a fost constituit din populaţia de ambele sexe cu vacircrsta cuprinsă icircntre
18 şi 91 ani icircnscrisă pe lista medicului de familie Subiecţii au fost invitaţi să participe la
studiu icircn luna naşterii realizacircnd astfel o programare a vizitelor pe parcursul a 12 luni
Criteriile de includere icircn lotul de studiu vacircrsta peste 18 ani capacitate de decizie
domiciliul stabil icircn Romacircnia participare pe baza consimţămacircntului liber informat Criteriile
de excludere vacircrstă sub 18 ani femei gravide sau care alăptează bolnavi icircn faza terminală
subiecţi care refuză semnarea consimţămacircntului informat Nu s-au formulat criterii care să
aducă discriminări legate de sex etnie sau rasă
Protocolul studiului epidemiologic al sindromului metabolic
Icircn cadrul studiului epidemiologic s-au realizat cacircte două vizite pentru fiecare participant La
prima vizită subiecţii au fost informaţi asupra studiului icircn cadrul cercetării doctorale şi au
semnat Consimţămacircntul liber informat Pentru fiecare participant s-a completat fişa de studiu
computerizată incluzacircnd date anamnestice şi clinice (talie greutate corporală perimetru
abdominal) La a doua vizită s-au recoltat probe biologice (sacircnge venos) de către o asistentă
specializată pentru următoarele determinări biochimice (glicemie colesterol total HDL-
colesterol LDL-colesterol trigliceride acid uric creatinină fibrinogen proteină C reactivă)
şi hematologice (hemoleucograma VSH) Pentru diagnosticarea SM am utilizat criteriile
de diagnostic Harmonised I (tabel VI) Am comparat prevalenţa SM conform criteriilor
Harmonised I cu prevalenţa obţinută prin aplicarea criteriilor IDF respectiv ATP III
Analiza statistică Pentru analiza parametrilor studiaţi icircn SM am realizat icircmpreună cu
firma Arhilog Soft un program icircn care sunt incluşi parametrii de diagnostic ai SM şi care
permite icircncadrarea pacienţilor funcţie de componentele SM icircn SM3 SM4 SM5 De
asemenea programul permite editarea şi arhivarea unei fişe de observaţie pentru fiecare
participant la studiu precum şi crearea unei baze de date compatibile cu programul Microsoft
Office Excel 97-2003
Menţionăm că acest program poate stoca
şi alţi parametri clinici şi paraclinici utilizaţi icircn evaluarea complexă a SM putacircnd fi ulterior
introdus ca un program de monitorizare a evoluţiei pacienţilor Pentru prelucrarea statistică a
parametrilor s-au folosit programele Microsoft Office Excel 97-2003 SPSS-10 (Statistical
Package for Social Sciences) şi aplicaţia Medcalc Statistical Software ndash 1333 Valoarea lui p
Figura 41 Program de
analiză a parametrilor SM
mai mică de 005 a fost considerată semnificativ statistic
Rezultate Analiza lotului de studiu s-a efectuat icircn funcţie de mediul de provenienţă sex vacircrstă şi
vacircrsta medie Caracteristicile clinice şi biochimice ale lotului studiat sunt reprezentate icircn
tabelul VIII
Tabel VIII Caracteristicile lotului studiat Media 95 CI SD Minimum Maximum
Vacircrsta (ani) 4751 4661 - 4841 1798 1800 9100
CA (cm) 8830 8764 - 8896 1316 5600 13400
IMC (kgm2) 2603 2578 - 2628 497 1900 4500
TAD (mmHg) 7529 74883 - 7571 827 6000 11500
TAS (mmHg) 11730 11650 - 11810 1590 9000 19000
Glicemie (mgdl) 9435 9328 - 9542 2138 7200 40000
HDL- col(mgdl) 4498 4427 - 4570 1422 2100 9200
TG(mgdl) 12269 11887 - 12651 7157 4800 87900
Determinarea scorului SM
Am aplicat criteriile de diagnostic şi am calculat scorul de SM pentru fiecare subiect (0-
absenţa criteriului 2- prezenţa criteriului) (fig44)
Figura 44 Frecvenţa scorului SM icircn
populaţia studiată conform criteriilor
SM Harmonised (A) IDF (B) ATP III
(C) Se observă că distribuţia scorurilor
SM conform criteriilor de diagnostic este
identică icircn cazul aplicării criteriilor
Harmonized I şi IDF
Scorul de SM a avut valori pare
cuprinse icircntre intervalul 0 - 10 pacienţii
cu SM avacircnd un scor mai mare sau egal
cu 6
Icircn lotul studiat am analizat prezenţa simultană a criteriilor Harmonised I de diagnostic şi
am constatat prezenţa SM la 389 subiecţi (204 femei şi 185 bărbaţi) reprezentacircnd 2542
(95CI 2296-2808) din totalul populaţiei studiate Raportul prevalenţelor specifice pe sexe
bărbaţifemei a fost de 103 (95 CI084 -126)Icircn concordanţă cu criteriile IDF am
identificat un număr de 325 pacienţi cu SM (175 femei şi 150 bărbaţi) iar prevalenţa SM icircn
populaţia studiată conform IDF a fost de 2124 (95 CI 1899ndash 2368) Raportul
prevalenţelor specifice la bărbaţi versus femei a fost de 0977 (95 CI 078 ndash122) Utilizacircnd
definiţia ATP III au fost identificaţi un număr de 229 subiecţi cu SM Prevalenţa SM a fost
C
0
100
200
300
400
500
600
700
Scor SM ATP III
Număr pacienţi
0 2 4 6 8 10
ATP III SM5 SM4 SM3 non SM
B
0 50
100 150 200 250 300 350 400 450
Scor SM IDF
Număr pacienţi
0 2 4 6 8 10
IDF SM5 SM4 SM3 non SM
A
0
50
100
150
200
250
300
350
400
450
Scor SM Harmonised I
Număr pacienţi
0 2 4 6 8 10
HARMONIZED I SM5 SM4 SM3 non SM
de 1497 (95CI 1309 ndash 1704) icircn populaţia studiată Au fost calculate prevalenţele pe
sexe şi au fost găsite valorile de 1343 (95CI 010 ndash 164) la bărbaţi respectiv 1632
(95 CI 1366 ndash 1934) la femei raportul dintre acestea fiind de 082 (95CI 062 ndash 107)
Pentru fiecare asociere dintre componentele SM diagnosticat conform criteriilor
Harmonised I am calculat prevalenţele icircn cadrul SM(tabel XVI)
Tabel XVI Prevalenţa asocierilor dintre componentele SM Număr
pacienţi
Ponderea icircn cadrul
pacienţilor cu SM
(95 CI)
Prevalenţa icircn
populaţia studiată
(95 CI)
SM cu trei componente (SM3)
241 6195 (5438ndash7029) 1575 (1383-
1787)
Obezitate centrală + hipertensiune arterială +
hipertrigliceridemie
45 1154 (844ndash1548) 294 (214-393)
Obezitate centrală + hipertensiune arterială + hipo-
HDLcolesterolemie
38 979 (691ndash1340) 248 (175-340)
Obezitate centrală + hipertrigliceridemie +
hipoHDL-colesterolemie
34
874 (605ndash1221) 222 (153-310)
Obezitate centrală + modificări ale metabolismului
glucidic + hipertensiune arterială
31 796 (541ndash1131) 202 (137-287)
Hipertensiune arterială + hiper-trigliceridemie +
hipoHDL- colesterolemie
26 668 (436 ndash979) 169 (111-249)
Modificări ale metabolismului glucidic +
hipertensiune arterială + hiper-trigliceridemie
21 539 (334-825) 137 (085-209)
Obezitate centrală + modificări ale metabolismului
glucidic + hipertrigliceridemie
15 385 (215-636) 098 (054-116)
Modificări ale metabolismului glucidic
hipertrigliceridemie + hipoHDL-colesterolemie
12 308 (159-538) 078 (040-137)
Modificări ale metabolismului glucidic +
hipertensiune arterială + hipoHDLcolesterolemie
10 257 (123ndash472) 065 (031-120)
Obezitate centrală + modificări ale metabolismului
glucidic + hipo-HDL-col
9 231 (105ndash439) 058 (026-111)
SM cu patru componente (SM4) 104 2674 (2184-239) 679 (555-823)
Obezitate centrală + modificări ale metabolismului
glucidic + hipertensiune arterială + hipoHDL-
colesterolemie
32 822 (562-1116) 209 (143-
295)
Obezitate centrală + hipertensiune arterială +
hipertrigliceridemie + hipoHDL-col
25 642 (415- 948) 163 (105-241)
Obezitate centrală + modificări ale metabolismului
glucidic + hipertri-gliceridemie + hipoHDL-
colesterolemie
12 308 (159-538) 078 (040-137)
Modificări ale metabolismului glucidic +
hipertensiune arterială + hipertri-gliceridemie +
hipoHDL-colesterolemie
6 154 (056- 335) 039 (014-085)
SM cu cinci componente (SM5) 44 1131 (822-1518) 287 (209-386)
Total (SM3 + SM4 + SM5) 389 100 2542(2296-
2808)
Analizacircnd componentele SM la cei 389 pacienţi diagnosticaţi cu SM conform criteriilor
Harmonised I am constatat că obezitatea centrală este cea mai bine reprezentată icircn SM dintre
aceste componente (8072 95CI 7644 - 8452) urmată de HTA (7892 95CI 7453
- 8287) hiperTG (6915 95 CI 6430-7371) hipo-HDL-col (6375 95 CI 5876-
6854) şi hiperglicemie (5681 95 CI5173- 6179)
Standardizarea prevalenţelor funcţie de vacircrstă şi sex Analiza statistică a relevat faptul
că prevalenţa SM creşte cu icircnaintarea icircn vacircrstă Dacă pentru vacircrsta cuprinsă icircntre 35-54 ani
prevalenţa la bărbaţi este semnificativ mai mare comparativ cu femeile (raport calculat B F -
183 P=0003) pentru celelalte grupe de vacircrsta nu s-au observat diferenţe semnificative icircntre
sexul feminin şi cel masculin Am observat că după instalarea menopauzei la femei
prevalenţa SM (corespunzătoare Harmonised I) la femei depăşeşte 50 iar la bărbaţi atinge
42 Utilizacircnd European Standard Population (175) am efectuat standardizarea funcţie de
vacircrstă şi sex a prevalenţelor bdquocruderdquo (brute) obţinute icircn populaţia studiată şi am calculat o
prevalenţă standardizată a SM de 2732 (95 CI 2460-3003) La sexul masculin
prevalenţa standardizată a SM a fost de 2760 (95 CI 2362 - 3157) iar la sexul feminin
am obţinut valoarea de 2854 (95 CI 2462 - 3245)
Discuţii
Studiul desfăşurat de noi a investigat prezenţa SM icircn populaţia unui Cabinet de Medicină
de Familie Icircn Europa prevalenţa SM este de aproximativ 25-30 Statele Unite Ale Americii
au raportat o prevalenţă a sindromului metabolic de 22 icircn populaţia cu vacircrsta peste 20 ani
pe cacircnd la vacircrstă mai mare de 60 ani s-a observat o prevalenţă de 44 (1419) Icircn studiul
efectuat am observat o prevalenţă standardizată de 2732 (95 CI 2460-3003) care este
icircn concordanţă cu prevalenţele raportate icircn Europa precum şi o creştere a ponderii SM icircn
populaţie icircn raport cu vacircrsta Am preferat utilizarea definiţiei Harmonised I pentru SM
deoarece cuprinde criterii adaptate pentru o abordare unitară a SM mărind astfel numărul
pacienţilor diagnosticaţi şi care vor urma tratament conform Ghidurilor de Practică Medicală
Limitările acestui studiu sunt legate de faptul că este concentrat doar pe populaţia asigurată şi
neasigurată aflată pe lista unui medic de familie din mediul urban Se pot efectua studii la
nivelul Cabinetelor Medicale de Medicină de Familie dar trebuie să se aplice pe un lot
reprezentativ urbanrural care să reprezinte populația acelei regiuni Utilizarea structurilor
populaționale atașate cabinetului de MF este utilă atacirct pentru cele clinice cacirct și pentru cele
epidemiologice deoarece surprinde populația studiată icircn mediul de viață cotidian Prevalenţa
mare a SM icircn populaţia studiată necesită aplicarea unei politici eficiente de sănătate publică
deoarece riscul producerii evenimentelor cardiovasculare majore poate fi redus semnificativ
printr-un control adecvat al componentelor SM (obezitate dislipidemii hipertensiune
arterială şi hiperglicemie
Studiul sindromului inflamator cronic icircn cadrul sindromului metabolic
Obiectivele studiului
- studierea markerilor inflamaţiei cronice şi aterogenezei la subiecţii cu şi fără SM
- evaluarea importanţei markerilor studiaţi ai inflamaţiei cronice icircn diagnosticul de
ambulator al sindromului metabolic
Material şi metodă
Icircn cercetarea inflamaţiei cronice din SM au fost incluşi 1530 subiecţi de ambele sexe cu
vacircrsta cuprinsă icircntre 18-91 ani icircnscrişi pe lista CMI Popa Elena Studiul s-a desfăşurat icircn
perioada 01012013ndash 31122013 Populaţia ţintă a fost identică cu cea din studiul
epidemiologic şi s-a desfăşurat concomitent cu studiul prevalentei SM Subiecţii au fost
icircmpărţiţi icircn două loturi lotul cu SM (Lot SM) şi lotul de control (fără SM)
Lot SM a) criterii de includerevacircrsta peste 18 ani recrutarea pe baza semnării
Consimţămacircntului liber informat SM diagnosticat pe baza criteriilor Harmonised I (14) b)
criterii de excluderevacircrstă sub 18 anirefuzul semnării Consimţămacircntului liber informat
femei icircn perioada de graviditate sau de lactaţie
Lot Control (fără SM) a) criterii de includerevacircrsta peste 18 anirecrutarea pe baza
semnării Consimţămacircntului liber informat absenţa sindromului metabolic b) criterii de
excluderevacircrstă sub 18 ani refuzul semnării Consimţămacircntului liber informatfemei icircn
perioada de graviditate sau de lactaţie
Rezultate
Lotul cu SM (Lot SM) a fost format din cei 389 pacienţi diagnosticaţi cu SM conform
criteriilor Harmonised I Lotul SM a fost alcătuit din 185 bărbaţi şi 204 femei raportul
bărbaţifemei fiind de 090 (95 CI073-112) Lotul de control (fără SM) a fost alcătuit
din cei 1141 participanţi care nu au icircntrunit criteriile de diagnostic ale sindromului metabolic
Din cei 1141 de subiecţi 530 au fost de sex masculin iar 611 de sex feminin raportul
bărbaţifemei fiind 087 (95 CI 077-097) Vacircrsta subiecţilor a fost semnificativ mai mare
icircn lotul pacienţilor cu SM (5976plusmn1322 ani) comparativ cu lotul martor (4333plusmn 1748 ani) (t-
Test Plt00001) Aşa cum ne-am aşteptat valorile medii ale componentelor clinice ale SM
(circumferinţa abdominală tensiunea arterială sistolică şi diastolică) au fost mai mari icircn lotul
pacienţilor cu SM (t-Test Plt0001 pentru fiecare dintre componente) Studiind parametrii
biochimici incluşi icircn diagnosticul SM valorile medii ale glicemiei şi TG au fost semnificativ
mai crescute icircn lotul SM (t-Test Plt00001 pentru ambele constante) Icircn acelaşi timp
valoarea medie determinată a HDL-col a fost semnificativ mai mare la subiecţii din lotul
martor ( t-Test Plt00001) SM se caracterizează printr-o dislipidemie aterogenă
caracterizată de creşterea TG scăderea HDL-col concomitent cu creşterea LDL-col creşterea
Non-HDL-col şi a raportului de aterogenitate (Col totalHDL-col) (185) Comparacircnd cele
două loturi am observat că valoarea medie a LDL-colesterolului determinată icircn lotul
pacienţilor cu SM a fost semnificativ mai mare faţă de subiecţii din lotul martor (t-Test P =
00002) Măsurarea Non-HDL-colesterolului a arătat prezenţa unei diferenţe semnificative
icircntre cele două loturi (figura 420 B) Astfel icircn concordanţă cu prezenţa dislipidemiei
aterogene valoarea medie a Non-HDL-col a fost semnificativ mai mare (t-Test Plt 00001) icircn
lotul cu SM comparativ cu lotul de control Icircn contextul inflamației cronice şi aterogenezei
din sindromul metabolic am evaluat sensibilitatea şi specificitatea Non-HDL-colesterolului
ca test diagnostic al SM Valoarea Non-HDL-colesterolului care prezice cu cea mai mare
acurateţe prezenţa SM a fost de 151 mgdl (punctul de ldquocut-offrdquo) pentru care am calculat o
sensibilitate de 64 27 şi o specificitate de 5872 Calculul ariei AUC a furnizat valoarea
de 0605 şi deci determinarea concentraţiei serice a parametrului Non-HDL-colesterolului are
valoarea unui marker cu acurateţe redusă Am studiat valorile raportului Col totalHDL-col icircn
cele două loturi şi am constatat că la pacienţii cu SM valoarea media a raportului de
aterogenitate este semnificativ mai mare faţă de valoarea raportului determinată icircn lotul
martor (t-Test Plt 00001) Pentru raportul de aterogenitate studiat analiza curbei ROC a
arătat că valorile mai mari decacirct punctul de ldquocut-offrdquo de 431 prezic prezenţa SM cu cea mai
mare sensibilitate (6381 ) şi specificitate (6582)Valoarea AUC pentru indicele de
aterogenitate a fost de 0667 şi icircn studiul SM acest indice poate fi considerat un marker cu
acurateţe redusă Valoarea medie determinată a acidului uric la subiecţii fără SM a fost
semnificativ mai mică decacirct icircn lotul SM (t-Test Plt 00001) Curba ROC a arătat că valorile
acidului mai mari de 43 mgdl prezic diagnosticul de SM cu cea mai mare sensibilitate
(8107) şi specificitate (5328) Pentru acidul uric AUC a avut valoarea de 0655 şi
icircncadrează determinarea acidului uric seric icircn racircndul testelor cu acurateţe redusă (187)
Comparacircnd populaţiile de leucocite (tabel XXI) valoarea medie determinată a
numărului de Eo a fost semnificativ mai mare icircn lotul cu SM comparativ cu lotul martor (t-
Test Plt0001) Analizacircnd curba ROC trasată pentru valorile numărului de Eo am observat
că valorile ldquocut-offrdquo mai mari de 200 Eomm3
pot prezice prezenta SM cu cea mai mare
specificitate (7705) şi sensibilitate (3978) Pentru diagnosticul SM calculul ariei AUC a
arătat faptul că determinarea numărului de Eo are valoarea unui test diagnostic cu acurateţe
redusă (AUC = 0 589) Comparacircnd valorile medii ale fibrinogenului am calculat o diferenţă
statistic semnificativă icircntre cele două loturi valoarea medie a fibrinogenului fiind mai mare icircn
lotul SM ((t-Test P lt 00001) Cu ajutorul curbei ROC am observat că valorile fibrinogenului
mai mari de 306 mgdl prezic sindromul metabolic cu o sensibilitate de 7511 şi specificitate
de 6056 Fibrinogenul a fost icircncadrat icircn categoria markerilor inflamatori cu acurateţe
redusă AUC avacircnd valoarea de 0690 Icircn loturile de studiu am calculat AUC corespunzătoare
criteriilor de diagnostic ale SM Am observat că icircn cazul scorului Harmonised I
sensibilitatea şi specificitatea sunt de 100 iar AUC este egală cu 1000 Pentru cele cinci
criterii de diagnostic AUC a avut valori icircntre 0636 (pentru variabila HDL-col) şi 0804
(pentru variabila CA) (figura 431)
AUC ES 95 CI
Scor SM Harmonised I 1000 00000 0997 - 1000
CA (cm) 0804 00133 0781 - 0825
TAD (mmHg) 0666 00169 0639 - 0692
TAS (mmHg) 0757 00148 0732 - 0780
Glicemie (mgdl) 0742 00160 0717 - 0766
Trigliceride (mgdl) 0756 00175 0732 - 0780
HDL- colesterol 0636 00183 0609 - 0662
Figura 431 Analiza AUC criterii de diagnostic ale SM
Studiind figura 432 se observă că valoarea AUC pentru markerii studiaţi este cuprinsă
icircntre 0589 (icircn cazul variabilei Eo) şi 0690 (icircn cazul fibrinogenului) Icircn contextul SM
acurateţea acestor markeri ai inflamaţiei cronice şi disfuncţiei endoteliale poate fi considerată
redusă deoarece AUClt07 pentru toţi markerii investigaţi (figura 431) Totuşi valorile ariilor
parametrilor reprezentaţi icircn figura 431 sunt apropiate de valorile AUC ale variabilelor TAD
şi HDL-col (figura 432) şi deci pot fi utilizaţi pentru completarea diagnosticului de SM
AUC ES 95 CI
Non-HDL-colesterol 0605 00171 0580 - 0630
Col totalHDL-col 0607 00163 0642 - 0691
Acid uric 0655 00161 0630 - 0679
Fibrinogen 0690 00206 0658 - 0720
Eozinofile 0589 00176 0564 - 0615
Figura 432 AUC markeri ai SM inflamaţiei cronice şi aterogenezei
Discuţii
Status-ul proinflamator din SM asociat cu insulinorezistenţa şi disfuncţia endotelială
constituie o verigă de legătură dintre inflamaţie şi procesele metabolice complexe icircnsoţindu-
se de deteriorarea funcţiilor vasculare şi creşterea riscului de evenimente cardiovasculare
majore (2858) Studiul efectuat a arătat o diferenţă icircntre vacircrstele subiecţilor din cele două
loturi vacircrsta pacienţilor cu SM fiind semnificativ mai mare (Plt0001) comparativ cu subiecţii
normali confirmacircnd faptul menţionat că vacircrsta reprezintă unul din stimulii care agravează
inflamaţia cronică Am arătat că valorile fibrinogenului sunt mai mari icircn SM comparativ cu
Scor Harmonised I
0 20 40 60 80 100
0
20
40
60
80
100
100-Specificitate
Sen
sib
ilit
ate
Criterii diagnostic SM
0 20 40 60 80 100
0
20
40
60
80
100
100-Specificitate
Sens
ibili
tate
CA
TAD
TAS
Glicemie
Trigliceride
HDL-C
0 20 40 60 80 100
0
20
40
60
80
100
100-Specificitate
Sensi
bilita
te
Non-HDL-C
Col T HDL-C
Acid uric
Fibrinogen
Eozinofile
lotul martor atacirct la bărbaţi cacirct şi la femei icircn concordanţă cu studiile anterioare Evaluarea
fibrinogenului este importantă nu numai icircn SM pentru definirea contextului proinflamator şi
protrombotic ci şi icircn predicţia cardiovasculară la subiecţii normali Studiind populaţiile
leucocitare am obţinut diferenţe semnificative icircn cazul Eo valoarea medie a acestora fiind
semnificativ mai mare icircn lotul cu SM comparativ cu lotul martor (P lt 0001 figura 425B)
Implicarea Eo icircn SM s-a conturat icircn ultimul deceniu aceste celule fiind implicate icircn recrutarea
macrofagelor din ţesutul adipos Experimental s-a constatat că o creştere a Eo apărută ca
urmare a infectării cu helminţi sau stimulare cu IL-5 este urmată de icircmbunătăţirea toleranţei la
glucoză (199) Controlul pe care icircl exercită Eo asupra activării macrofagelor ar putea fi cheia
intervenţiei asupra obezităţii icircn viitorul apropiat(165199) Hiperuricemia asociata frecvent cu
SM este cunoscut ca un factor independent de risc cardiovascular (192 202) In concordanţă
cu aceasta afirmaţie in studiul nostru am constatat ca nivelul seric al acidului uric a fost mai
crescut in lotul cu SM diferenţa semnificativă din punct de vedere statistic (P lt 00001)
Dislipidemia aterogenă din sindromul metabolic şi diabetul zaharat se caracterizează prin
creşterea trigliceridelor şi a Non-HDL-col scăderea HDL-col creşterea numărului de
particule LDL modificate (185190) La pacienţii cu SM am descris un profil aterogenetic
cu risc crescut de evenimente cardiovasculare majore
STUDIUL RECEPTORILOR ACTIVAŢI DE INDUCTORII PROLIFERĂRII
PEROXIZOMILOR-ALPHA IcircN LEUCOCITELE CIRCULANTE
Ipoteza de lucru
Studii experimentale efectuate au arătat că rolul PPARα icircn ateroscleroză derivă din
implicarea acestor receptori icircn limitarea inflamaţiei Plecacircnd de la acest fundament ne-am
propus evidenţierea receptorilor nucleari activaţi de inductorii proliferării peroxizomilor-
alpha (PPARα) prin citometrie de flux icircn leucocitele din sacircngele periferic alături de
evaluarea acestei metode icircn cuantificarea expresiei relative a PPARα ca test diagnostic
precoce al modificărilor metabolice SM Studiul expresiei relative a receptorilor PPARα a
plecat de la premisa că dacă SM se caracterizează printr-un status inflamator cronic nivelul
de expresie a PPARα icircn leucocitele circulante este mai scăzut la pacienţii cu SM comparativ
cu subiecţii normali Referitor la studiul receptorului CD36 am plecat de la presupunerea că
nivelul de expresie al acestui receptor icircn SM este crescut dat fiind importanţa acestui receptor
icircn inflamaţia aterosclerotică Avacircnd icircn vedere efectele receptorilor amintiţi icircn
insulinorezistenţă şi aterogeneză am considerat necesară evaluarea prezenţei receptorului
nuclear PPARα icircn paralel cu studiul receptorului bdquoscavengerrdquo CD-36 prin metoda citometriei
icircn flux Astfel icircn studiul efectuat mi-am propus şi investigarea existenţei unei legături icircntre
nivelul de expresie al receptorilor PPARα şi cel al receptorului CD-36 De asemenea ne-am
icircndreptat atenţia spre stabilirea unor asocieri icircntre componentele clinice şi biochimice ale
sindromului metabolic şi nivelul intensităţilor de fluorescenţă ale PPARα şi CD-36 ca măsură
a expresiei relative a acestor receptori
Material și metodă
Studiul receptorilor PPARα icircn contextul sindromului metabolic s-a desfăşurat icircn
perioada 1012014 -28022014 pe baza metodologiei studiilor de tip caz-martor Am urmărit
identificarea unor diferenţe icircntre expresia receptorilor PPARα la pacienţii cu SM comparativ
cu subiecţii sănătoşi diferenţe care ar putea fi utile icircn diagnosticul precoce al SMRecrutarea
pacienţilor s-a efectuat din pacienţii prezentaţi pentru consultaţie la Cabinetul Individual
ldquoCMI Dr Popa Elenardquo situat icircn strada Ion Creanga din Iaşi Pentru studiul receptorilor
PPARα icircn sindromul metabolic au fost selecţionaţi un număr de 57 de subiecţi 26 de subiecţi
cu SM (constituind lotul SM) şi 31 subiecţi fără SM constituind lotul de control (Lot Non-
SM) Pentru studiul SM pacienţii au fost recrutaţi din masa de populaţie arondată cabinetului
de MF fără istoric de SM diabet zaharat boală cardio-vasculară aflați la primul diagnostic
de SM evaluarea completă a acestora fiind urmată de includerea icircn programul de
management cardiovascular şi metabolic conform Ghidurilor Terapeutice aflate icircn vigoare
Lot SM a) criterii de includerevacircrsta peste 18 ani recrutarea pe baza semnării
Consimţămacircntului liber informatSM nou-diagnosticat pe baza prezenţei a minim trei criterii
de diagnostic pentru SM conform Harmonised I b) criterii de excluderevacircrstă sub 18 ani
refuzul semnării Consimţămacircntului liber informat femei icircn perioada de graviditate sau de
lactaţie SM anterior diagnosticat istoric de diabet zaharat boală cardiovasculară constituită
tratament cu agonişti PPARα (ie fibraţi etc)
Lot martor (Non-SM) a) criterii de includerevacircrsta peste 18 ani recrutarea pe baza
semnării Consimţămacircntului liber informat absenţa diagnosticului de SM b) criterii de
excludere vacircrstă sub 18 ani refuzul semnării Consimţămacircntului liber informat femei icircn
perioada de graviditate sau de lactaţie
Studiul receptorilor PPARα a inclus două subetape
A Studiul componentelor sindromului metabolic conform criteriilor Harmonised I
Evaluarea clinică a participanţilor s-a desfăşurat icircn cadrul Cabinetului de Medicină de
Familie iar determinările hematologice şi biochimice s-au efectuat icircn Laboratorul
Ambulatorului Clinic de Specialitate al Spitalului Clinic de Urgenţă bdquoSf Spiridonrdquo Iaşi
B Evaluarea icircn citometrie de flux a nivelului relativ de expresie a PPARα şi CD36
Studiul receptorilor PPARα s-a desfăşurat icircn Laboratorul de Biologie Moleculară al
Institutului Regional de Oncologie Iaşi prin metoda citometriei icircn flux (19) Nivelul relativ de
expresie al receptorilor nucleari PPARα a fost determinat icircn diferite tipuri de leucocite
circulante polimorfonucleare (PMN) limfocite (Ly) Mo(Mo) şi eozinofile(Eo) Am utilizat o
metodă de citometrie icircn flux optimizată ldquoin houserdquo elaborată icircn cadrul Laboratorului de
Biologie Moleculară al IRO Iaşi Icircn cursul procesului de optimizare am testat mai multe
concentraţii ale anticorpului anti-PPARα 1100 1500 11500 14500 iar icircn urma
determinărilor efectuate şi a analizei statistice concentraţia 1500 a fost considerată optimă
pentru desfăşurarea studiului (tabel XXIII figura 51)
Tabel XXIII Optimizarea concentraţiilor Ac anti-PPARα Diferenţa
mediilor
valorilor
medii
PMN
Diferenţa
mediilor
mediane-
lor
PMN
Diferenţa
mediilor
valorilor
medii
Ly
Diferenţa
mediilor
mediane-
lor
Ly
Diferenţa
mediilor
valorilor
medii
Mo
Diferenţa
mediilor
mediane-
lor
Mo
Diferenţă 0 1300 1600 100 100 700 750
normal - 1100 650 1050 1050 1350 450 900
patologic 1500 2850 2750 3800 3600 2850 2400
11500 -1050 800 3500 3300 2250 1800
14500 2200 2150 1300 1100 2950 2850
AOptimizare
BRepetabilitate
Figura 51 Optimizarea concentraţiei anticorpului anti-PPARα
Icircn concordanţă cu literatura de specialitate icircn cercetarea efectuată intensitatea medie
de fluorescenţă (MFI) a fost utilizată ca măsură pentru evaluarea expresiei celulare a
receptorilor PPARα (212) Un exemplu de analiză a probelor este reprezentat icircn figura 52
Figura 52 Exemplu de analiză flowcitometrică pentru receptorul nuclear PPARα Graficul din stacircnga reprezintă distribuţia leucocitelor iar cel din dreapta ilustrează distribuţia
intensităţii de fluorescenţă pentru populaţiile de celule selectate
Intensitatea Medie a Fluorescenţei (MFI) a CD36 ca o măsură a nivelului relativ de
expresie a acestor receptori la nivelul membranei Mo a fost detectată printr-o metodă
convenţională pentru marcare de suprafaţă şi evaluare pe bază de citometrie icircn flux folosind
aceleaşi probe de sacircnge cu EDTA cu focalizare pe Mo şi utilizacircnd CD14 ca marker specific
pentru Mo (figura 53)
Figura 53Analiza
flowcitometrică
pentru marcajul
CD14 - CD36
Rezultate
Icircn cele două loturi au fost incluşi icircn studiu un număr de 57 de participanţi care au fost
investigaţi din punct clinic şi paraclinic Vacircrsta subiecţilor incluşi icircn studiu a fost cuprinsă
icircntre 18 şi 79 ani iar vacircrsta medie calculată a avut valoarea de 4805 plusmn 1587 ani Pentru sexul
masculin vacircrsta medie este de 4925plusmn1617 ani iar pentru sexul feminin 4689 plusmn1 5ani
diferenţa obţinută icircntre vacircrstele pacienţilor fiind statistic nesemnificativă (P = 085)
Analizacircnd vacircrstele subiecţilor din cele două loturi am observat că vacircrsta medie a pacienţilor
cu SM (5476 plusmn 1183 ani) a fost semnificativ mai mare (t-test P = 0003) decacirct icircn lotul
martor (4258 plusmn 169 ani) Pentru diagnosticul sindromului metabolic am calculat scorul de
SM bazacircndu-ne pe criteriile Harmonised I Conform criteriilor diagnostice din cei 57 de
subiecţi investigaţi un număr de 26 participanţi (46) au fost incluşi icircn lotul cu SM (Lot
SM) iar 31 de subiecţi(54) nu au prezentat acest sindrom constituind lotul martor (Lot
Non-SM) Din punct de vedere al repartiţiei pe sexe nu au existat diferenţe statistic
semnificative raportul bărbaţifemei fiind de 0961 Din totalul celor 28 de bărbaţi incluşi icircn
studiu 4285 (12 bărbaţi) au icircntrunit cel puţin trei criterii diagnostice pentru SM fiind
incluşi icircn lotul SM Icircn acelaşi timp 14 femei reprezentacircnd 4827 din subiecţii de sex
feminin au icircntrunit condiţiile pentru includerea icircn lotul pacienţilor cu SM Valoarea medie
determinată pentru scorul de SM a arătat prezenţa unor valori semnificativ statistic mai mari
din punct (t-test P lt 00001) icircn lotul SM (769plusmn176) comparativ cu lotul martor (174 plusmn
184) Am studiat comparativ media valorilor măsurate ale criteriilor componentelor SM
Analiza statistică a arătat valori semnificativ statistic mai mari pentru CA TG glicemie TAS
şi TAD (plt0001) icircn lotul SM comparativ cu lotul normal Concomitent calculul statistica
evidenţiat o scăderea semnificativă a HDL-colesterolului icircn lotul cu SM comparativ cu
subiecţii din lotul martor (Non-SM) Aplicacircnd testul z am comparat ponderea pacienţilor
diagnosticaţi cu HTA dislipidemie şi tulburări ale metabolismului glucidic icircn lotul SM versus
lot Non-SM şi am constatat prezenţa acestor afecţiuni icircntr-un procent mai mare semnificativ
statistic icircn lotul SM ((plt0001)
Utilizacircnd testul t Student am calculat diferenţele statistice şi icircntre alți parametri
studiaţi care sunt factori de risc cardio-vascular dar care nu sunt componente ale SM Icircn lotul
cu SM valorile acidului uric fibrinogenului Col total Non-HDL-col şi LDL-col au fost
semnificativ mai mari comparativ cu lotul martor (tabel XXVI) Analizacircnd valorile medii ale
populaţiilor de leucocite am identificat doar pentru populaţia de Eo diferenţe statistice icircntre
cele două loturi numărul Eo icircn lotul SM fiind semnificativ mai mare decacirct icircn lotul martorTot
pentru caracterizarea celor două loturi am analizat prezenţa antecedentelor
heredocolaterale (AHC) de diabet zaharat boala cardiovasculară şi dislipidemie pentru toţi
subiecţii investigaţi Astfel existenţa AHC de HTA a fost declarată de 2580 din subiecţii
incluşi icircn lotul martor respectiv de 5384 din numărul pacienţilor cu SM Antecedentele
heredocolaterale de dislipidemie au fost prezente la 3461 din pacienţii cu SM icircn timp ce icircn
lotul martor anamneza a evidenţiat aceste antecedente la 3548 din subiecţi
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα
Icircn cercetarea desfăşurată am utilizat intensitatea medie de fluorescenţă (MFI) ca
măsură a nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn leucocitele studiate Pentru
populaţiile de leucocite analiza computerizată a probelor luate icircn studiu a furnizat valori
pentru MFI a receptorilor PPARα icircn funcţie de cantitatea de anticorpi anti-PPARα marcaţi cu
fluorocrom care se leagă de aceste celule şi apoi sunt captaţi de citometru (figura 59)
A Lot Non - SM
B Lot SM
Figura 59 Analiza flowcitometrică pentru receptorii PPARα icircn leucocite A lot normal B lot SM
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Mo
Analiza probelor efectuată conform protocolului de lucru descris a arătat prezenţa
PPARα icircn Mo recoltate din sacircngele tuturor subiecţilor incluşi icircn această cercetare Pentru toţi
participanţii investigaţi analiza MFI a Ac anti - PPARα icircn populaţia de Mo (Mo) a arătat un
interval de variaţie icircntre [786 395] Valoarea medie a nivelului de expresie relativă a PPARα
calculată pentru Mo a fost de 23210 plusmn7860 Pentru ambele loturi de studiu pacienţilor cu
SM testul Testul Shapiro-Wilk a arătat distribuţia normală a valorilor obţinute pentru nivelul
de expresie al PPARα icircn Mo
Tabel XXVIII Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn Mo
Lot SM Lot Non-SM
N 26 31
Media 22819 23538
SD 5819 7717
Mediana 22400 22600
Minimum 12800 78600
Maximum 35800 37900
Percentila 25 18300 18300
Percentila 75 26200 30350
Pentru pacienţii din lotul SM valoarea medie a MFI icircn Mo a fost de 22819 plusmn 5880 iar
pentru lotul martor s-a calculat o valoare medie a MFI a Ac anti-PPARα de 23538 plusmn 7717
Distribuţia statistică a frecvenţei valorilor MFI obţinute pentru nivelul de expresie a PPARα
icircn Mo subiecţilor din cele două loturi a fost reprezentată icircn figura 511
Figura 511 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti-PPARα icircn Mo
Sub forma unei diagrame de control Shewhart am reprezentat variaţia intensităţii medii de
fluorescenţă pentru anticorpii anti-PPARα icircn MoVariaţia nivelului de expresie relativă a
receptorilor PPARα icircn Mo subiecţilor studiaţi este ilustrată icircn fig 512 513
Figura 512 Lot SM Variaţia
expresiei relative a PPARα icircn Mo
Număr pacienţi
26
Minim 128
Maxim 358
Media 22819
DS 5819
25 din 26 valori ale MFI s-au icircncadrat
icircn intervalul Media plusmn 2DS
Figura 513 Lot Non-SM Variaţia
expresiei relative a PPARα icircn Mo
Număr pacienţi 31
Minimum 786
Maximum 379
Media 23538
DS 7717
Cu excepţia unei singure
determinări valorile calculate s-au
icircncadrat icircn Media plusmn 2DS
Utilizacircnd testul parametric t-Student pentru variabilele cu distribuţie normală am
comparat valoarea medie a intensităţii de fluorescenţă a Ac anti-PPARα icircn lotul cu SM versus
subiecţi fără SM (Lot Non-SM) Analiza statistică efectuată nu a identificat diferenţe icircntre
50 100 150 200 250 300 350 400 450
0
5
10
15
20
25
30
35
MFI anti-PPAR a
Frecv
enta
relati
va (
)
Lot SM
0 50 100 150 200 250 300 350 400 450 500
0
5
10
15
20
25
30
35
MFI anti-PPAR a
Frecv
enta
relati
va (
)
Lot martor
1 6 11 16 21 26 31
0
50
100
150
200
250
300
350
400
450
MFI
anti-
PPAR
a
2282
1106
3458
518
4046
Media
LCI
LCI
1 6 11 16 21 26 31 36
-100
0
100
200
300
400
500
MFI a
nti-PP
AR
a
2354
810
3897
39
4669LCS
LCI
Media
cele două loturi icircn ceea ce priveşte expresia PPARα la nivelul Mo circulante (t- Test P=
069)
Studiul receptorilor PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de AHC şi dislipidemie
Nivelul de expresie al receptorilor PPARα α icircn Mo tinde să fie mai scăzut la subiecţii
cu AHC de HTA comparativ subiecţii care nu au declarat AHC de HTA (P= 006 fig 515)
AHC HTA
Număr 22
Mediana 19950
Percentila 25 17800
Percentila 75 22700
AHC HTA absente
Număr 35
Mediana 24800
Percentila 25 19025
Percentila 75 31700
Figura 515 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Mo funcţie de AHC de HTA
Nu s-au calculat diferenţe semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor
PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de dislipidemie atunci cacircnd aceştia au fost comparaţi cu
subiecţii fără AHC de tulburări ale metabolismului lipidic (t- Test P= 020)
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn limfocite
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn populaţia de Ly a
demonstrat prezenţa receptorilor PPARα icircn Ly tuturor subiecţilor studiaţi Pentru toţi
participanţii investigaţi analiza MFI a Ac anti - PPARα icircn populaţia de Ly a relevat un
interval de variaţie icircntre [748 314] iar valoarea medie a MFI a fost de 18058 plusmn 5600
Pentru ambele loturi aplicarea testului Shapiro-Wilk a evidenţiat distribuţia normală a
valorilor determinate pentru nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Ly Pentru
pacienţii cu SM valoarea medie a MFI determinată pentru expresia PPARα icircn populaţia de
Ly a fost de 18178 plusmn 61 16 iar pentru lotul martor a fost de 16800 plusmn 5229
Tabel XXX Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn limfocite
Lot SM Lot Non-SM
N 26 31
Media 181781 179574
SD 611694 522907
Mediana 165000 168000
Minimum 81300 74800
Maximum 314000 301000
Percentila 25 13400 - 145750
Percentila 75 21800 21700
Distribuţia frecvenţei valorilor MFI a Ac anti-PPARα icircn Ly este redată icircn figura 518
Figura 518 Distribuţia frecvenţelor relative a MFI a Ac anti-PPARα icircn Ly
94 din determinările efectuate pentru determinarea nivelului de expresie relativă al
MFI
ant
iPPA
R
a_Mo
190
200
210
220
230
240
250
260
270
280
DA NU
AHC HTA
P=006
50 89 128 167 206 244 283 322 361 400
0
5
10
15
20
25
30
35
MFI anti-PPAR a
Frecv
enta
relati
va (
)
Lot SM
0 50 100 150 200 250 300 350
0
5
10
15
20
25
30
35
40
MFI anti-PPAR a
Frec
venta
relat
iva (
)
Lot Non-SM
receptorilor PPARα icircn limfocitele subiecţilor cu SM s-au icircncadrat icircn intervalul Media plusmn 2DS
Figura 5 19 Lot SM Variaţia expresiei
relative a PPARα icircn Ly
Număr pacienţi 26
Minimum 813
Maximum 31400
Media 18178
Deviaţia Standard 6116
25 valori s-au icircncadrat icircn Media plusmn 2DS
Pentru lotul Non-SM diagrama de control (figura 520) a arătat toate valorile
determinate pentru lotul Non-SM se icircncadrează icircntre LCS şi LCI
Figura 520 Lot Non -SM Variaţia
expresiei relative a PPARα icircn Ly
Număr pacienţi 31
Minimum 748
Maximum 30100
Media 179574
Deviaţia Standard 5229
96 din valori icircncadrate icircn Media plusmn 2DS
Aplicarea testului t-Student pentru valorile medii ale intensităţii de fluorescenţă ale
PPARα icircn Ly nu a arătat existenţa unei diferenţe statistic semnificative icircntre lotul cu SM şi
lotul martor(t- Test P= 088)
Analiza receptorilor PPARα icircn Ly subiecţilor cu AHC de HTA şi dislipidemie
Studiind populaţiile de Ly la subiecţii care au prezentat AHC de hipertensiune
arterială analiza flowcitometrică a relevat existenţa unor valori mai mici pentru MFI la aceşti
subiecţi comparativ cu cei fără AHC de HTA (fig 522) deşi scăderea observată nu a
icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică (t- Test P = 009)
AHC HTA
Număr 22
Mediana 16000
Percentila 25 12700
Percentila 75 17100
AHC HTA absenţe
Număr 35
Mediana 18700
Percentila 25 14900
Percentila 75 23175
Figura 522 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Ly funcţie de AHC de HTA
Nu am calculat diferenţe statistic semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor
PPARα icircn populaţiile de Ly ale subiecţilor la care am identificat AHC de dislipidemie
comparativ cu cei care nu au declarat antecedente familiale de dislipidemie (t- Test P= 051)
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn neutrofile (PMN)
Analiza flowcitometrică a evidenţiat prezenţa PPARα icircn PMN recoltate din sacircngele
venos al tuturor participanţilor la studiu Pentru toţi subiecţii investigaţi analiza MFI a Ac -
PPARα icircn populaţia de PMN a relevat un interval de variaţie de [163419] iar valoarea medie
a MFI pentru Ac anti-PPARα a fost de 26392 plusmn 7064 Testul Shapiro-Wilk a arătat o
distribuţie normală a valorilor intensităţii medii de fluorescenţă a anticorpilor anti-PPARα atacirct
icircn lotul pacienţilor cu SM cacirct şi icircn lotul martor
1 6 11 16 21 26 31
-50
0
50
100
150
200
250
300
350
400
MFI
anti-
PPAR
a
1818
595
3041
-17
3653
Media+2DS
Media- 2DS
1 6 11 16 21 26 31 36
0
50
100
150
200
250
300
350
MFI
ant
i-PPA
R
a
1796
750
2841
227
3364
Media+2DS
Media
Media- 2DS
MFI
anti-
PPAR
a Ly
130
140
150
160
170
180
190
200
210
DA NU
AHC HTA
P=009
Tabel XXXII Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn PMN
Lot SM Lot Non-SM
N 26 31
Media 26273 26480
SD 6915 7088
Mediana 25900 25500
Minimum 17200 16300
Maximum 39500 41900
Percentila 25 19800 19600
Percentila 75 30500 31500
Icircn cele două loturi distribuţia frecvenţei valorilor nivelului relativ de expresie a
receptorilor PPARα icircn PMN a fost reprezentată sub formă de histograme (fig 525)
Figura 525 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti-PPARα icircn PMN
Pentru cei 26 de pacienţi din lotul cu SM a valoarea medie a nivelului de expresie
relativă a receptorilor PPARα icircn PMN a fost de 26273 plusmn 6915 Studiind diagrama Shewhart
din figura 526 se observă că toate valorile obţinute pentru nivelul de expresie relativă
PPARα icircn PMN investigate se icircncadrează icircntre limitele definite de valorile medii plusmn 2DS
Figura 526 Lot SM
Variaţia expresiei relative a PPARα icircn
PMN
Număr pacienţi 26
Minimum 17200
Maximum 39500
Media 26273
Deviaţia Standard 6915
Valorile MFI icircncadrate icircn Media plusmn 2DS
Pentru lotul martor valoarea medie calculată a MFI a anticorpilor anti-PPARα a fost de
26480 plusmn 7088 peste 95 din valorile MFI fiind cuprinse icircn Media plusmn 2DS (figura 527)
Figura 527 Lot Non-SM Variaţia expresiei
relative a PPARα icircn PMN
Număr pacienţi 31
Minimum 16300
Maximum 41900
Media 26480
Deviaţia Standard 7088
30 valoriicircn Media plusmn 2DS
Pentru PMN analiza statistica nu a arătat existenţa unei diferenţe statistic semnificative icircntre
nivelul de expresie relativă a PPARα la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii din lotul
Non-SM (t- Test P= 090) Studiind populaţiile de PMN la subiecţii care au prezentat AHC
de HTA nu am calculat o diferenţă statistic semnificativă icircntre expresia receptorilor PPARα
la subiecţii cu istoric familial de hipertensiune arterială comparativ cu cei pentru care nu s-au
notat AHC de HTA (t- Test P= 013)De asemenea am identificat diferenţe icircntre nivelul de
expresie al PPARα icircn PMN subiecţilor care prezentau AHC de dislipidemie comparativ cu
cei fără AHC de dislipidemie (t- Test P= 017)
50 100 150 200 250 300 350 400 450 500
0
5
10
15
20
25
30
35
MFI anti-PPAR a
Frecve
nta rel
ativa (
)
Lot SM
50 100 150 200 250 300 350 400 450 500
0
5
10
15
20
25
30
MFI anti-PPAR a
Frecv
enta
relati
va (
)
Lot Non-SM
1 6 11 16 21 26 31
0
50
100
150
200
250
300
350
400
450
500
MFI
anti-
PPA
R
a
2627
1244
4010
553
4702
Media + 2DS
Media - 2 DS
Media
1 6 11 16 21 26 31 36
0
50
100
150
200
250
300
350
400
450
500
MFI
anti-
PPAR
a
2648
1230
4066
522
4774
Media+ 2DS
Media - 2DS
Media
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile Tabel XXXIV Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn Eo
Lot SM Lot Non-SM
N 26 31
Mediaplusmn SD 141057 plusmn 47604 172209 plusmn 37565
Mediana 142450 171300
Minimum 35000 68500
Maximum 233700 250600
Percentila 25 119300 153225
Percentila 75 169700 199550
Am studiat nivelul relativ de expresie a receptorilor PPARα icircn Eo iar rezultatele au
fost figurate sub forma de histograme (figura 532)
Figura 532 Distribuţia frecventelor relative ale valorilor MFI anti- PPARα icircn Eo
Din diagrama Shewhart (figura 533) se observă că toate valorile determinate pentru
nivelul de expresie relativă a PPARα icircn Eo pentru lotul SM s-au icircncadrat icircn [Media plusmn 3 DS]
peste 90 din determinări fiind cuprinse icircn [Media plusmn 2 DS] iar icircn [Media plusmn 1 DS] sunt
incluse peste 65 din valorile MFI
Figura 533 Lot SM
Variaţia expresiei relative a PPARα icircn Eo
Număr pacienţi 26
Minimum 35000
Maximum 233700
Media 141057
Deviaţia Standard 47604
24 valori icircncadrat eicircn [Media plusmn 2DS]
Pentru subiecţii incluşi icircn lotul martor analiza diagramei (figura 534) a arătat că
toate cele 31 de valori ale MFI pentru PPARα icircn Eo se icircncadrează icircn [Media plusmn 3DS] iar 30
dintre acestea se icircncadrează icircn [ Media plusmn 2 DS]
Figura 534 Lot Non -SM
Variaţia expresiei relative a PPARα icircn Eo
Număr pacienţi 31
Minimum 685
Maximum 2506
Media 172209
Deviaţia Standard 375 65
30 valori icircncadrate icircn [Media plusmn 2DS]
Comparacircnd subiecţii cu SM cu cei din lotul martor am observat o scădere
semnificativă statistic a MFI a Ac anti - PPARα icircn Eo pentru pacienţiir cu SM ( figura 535)
PPARα Eo Lot Non-SM
Număr 31
Mediana 171300
Percentila 25 152325
Percentila 75 199550
PPARα Eo Lot SM
Număr 26
Mediana 142450
Percentila 25 119300
Percentila 75 169700
Figura 5 35 Comparaţie icircntre nivelul de expresie a PPARα icircn Eo
0 500 1000 1500 2000 2500 3000
0
10
20
30
40
50
MFI anti-PPAR a
Frecvent
a relativa
()
Lot SM
400 800 1200 1600 2000 2400 2800
0
5
10
15
20
25
30
35
40
45
MFI anti-PPAR a
Frecenta
relativa
()
Lot Non-SM
1 6 11 16 21 26 31
-500
0
500
1000
1500
2000
2500
3000
MFI a
nti-PP
AR
a
14106
4765
23447
94
28117
Media + 2DS
Media- 2DS
LCI
LCS
1 6 11 16 21 26 31 36
500
1000
1500
2000
2500
3000
MFI an
ti-PPA
R a
17221
9708
24734
5951
28490
LCI
Media-2DS
Media
Media +2 DS
LCS
1200
1300
1400
1500
1600
1700
1800
1900
Lot SM Lot Non-SM
P=00072
Cu ajutorul curbei ROC am evaluat posibilitatea utilizării MFI a Ac anti - PPARα icircn
Eo ca marker pentru diagnosticul SM Valoarea MFI a Ac anti - PPARα icircn Eo care prezice cu
cea mai mare acurateţe prezenţa SM a fost de 1533 (punctul de ldquocut-offrdquo) pentru care am
calculat o sensibilitate de 5652 şi o specificitate de 7778 Calculul ariei AUC a furnizat
valoarea de 0663 şi deci determinarea parametrului MFI anti- PPARα icircn Eo are valoarea
unui test cu acurateţe redusatilde icircn diagnosticul SM Studiind expresia PPARα icircn Eo la subiecţii
care au prezentat AHC de HTA am observat o scădere semnificativă statistic (P = 00023) a
expresiei PPARα la subiecţii cu istoric familial de HTA comparativ cu subiecţii fatilderatilde AHC de
HTA (figura 537)
AHC HTA
Număr 22
Mediana 148800
Percentila 25 116425
Percentila 75 170750
AHC HTA absente
Număr 35
Mediana 170850
Percentila 25 143700
Percentila 75 195000
Figura 537 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Eo funcţie de AHC de HTA
Studiind subiecţii cu AHC declarate de dislipidemie nu am identificat diferenţe icircntre
nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Eo subiecţilor cu AHC de dislipidemie
comparativ cu cei care nu au declarat prezenţa AHC de dislipidemie (t - Test P = 067)
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor CD36
Am studiat expresia receptorilor CD36 icircn Mo subiecţilor incluşi icircn studiu
Lot Non - SM
BLot SM
Figura 539 Analiza flowcitometrica pentru receptorii CD36 icircn Mo
Pentru toţi participanţii la studiu valorile MFI au variat icircn intervalul [817 6933] iar
valoarea medie a MFI a Ac anti-CD36 a fost de 397133 plusmn 120902 Tabel XXXVII Statistică descriptivă pentru a CD36 icircn Mo
Lot SM Lot Non-SM
Media 429034 370377
Deviatia Standard 109051 125514
Mediana 411000 362800
Minimum 266400 81700
Maximum 693300 616800
Percentila 25 346200 273750
Percentila 75 469000 453300
Distribuţia frecvenţelor relative a MFI au fost prezentate sub formă histogramelor
Figura 541 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti - CD36 icircn Mo
MFI
ant
i-PPA
R a Eo
1000
1100
1200
1300
1400
1500
1600
1700
1800
1900
DA NU
AHC HTA
P=00023
1000 2000 3000 4000 5000 6000 7000 8000
0
5
10
15
20
25
MFI anti-CD36
Frecve
nta rela
tiva (
)
Lot SM
0 1778 3556 5333 7111
0
5
10
15
20
25
30
35
MFI anti-CD36
Frecve
nta rel
ativa (
)
Lot Non - SM
Referitor la lotul SM 92 din valorile MFI a Ac anti- CD36 s-au icircncadrat icircn
intervalul Media plusmn 2 DS (figura 542) iar pentru lotul martor peste 90 dintre acestea icircn
Media plusmn 2 DS (figura 543)
Figura 542 Lot SM
Variaţia MFI anti-CD36 icircn Mo
Număr pacienţi 26
Minimum 2664
Maximum 6933
Media 429034
Deviaţia Standard 109051
Figura 543 Lot Non -SM
Variaţia MFI anti- CD36 icircn Mo
Număr 31
Minimum 81700
Maximum 616800
Media 370377
Deviaţia Standard 125514
Comparacircnd subiecţii cu SM cu cei din lotul normal am constatat o tendinţă de creştere
a expresiei CD36 icircn lotul cu SM((t - Test P= 0067)
MFI anti - CD36 Lot Non-SM
Număr 31
Mediana 3628
Percentila 25 2737
Percentila 75 4533
MFI anti - CD36 Lot SM
Număr 26
Mediana 4110
Percentila 25 3462
Percentila 75 4690
Figura 544 Comparaţie icircntre cel două loturi privind MFI anti - CD36 icircn Mo
Referindu-ne la subiecţii cu AHC de HTA am observat o tendinţă de creştere a
valorilor MFI anti-CD36 comparativ cu cei care nu au avut AHC de HTA (t - Test P = 0 08)
AHC HTA
Număr 22
Mediana 442800
Percentila 25 355275
Percentila 75 519475
AHC HTA absenţe
Număr 35
Mediana 377400
Percentila 25 316900
Percentila 75 443400
Figura 545 Comparaţie icircntre expresia CD36 icircn Mo funcţie de AHC de HTA
Nu s-au calculat diferenţe semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor
PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de dislipidemie atunci cacircnd aceştia au fost comparaţi cu
subiecţii fără AHC de dislipidemie (t - Test P=031)
Corelaţii icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα si CD36
Studiind valorile intensităţii medii de fluorescenţă a Ac anti-PPARα icircn Mo Ly şi
PMN am observat că nivelul de expresie celularatilde a PPARα icircn Mo Ly şi PMN sunt corelate
puternic pozitiv atacirct icircn lotul SM cacirct şi icircn lotul martor(fig547 548)
1 6 11 16 21 26 31
0
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
Pacienti
MFI a
nti-CD
36
42903
21093
64714
10188
75619
LCI
Media
LCS1 6 11 16 21 26 31 36
-1000
0
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
MFI a
nti- C
D36
37038
11935
62141
-616
74692Media + 2 DS
Media
Media - 2 DS
3200
3400
3600
3800
4000
4200
4400
4600
4800
Lot SM Lot Non-SM
P = 00676
MFI
anti-
CD36
3400
3600
3800
4000
4200
4400
4600
4800
5000
DA NU
AHC HTA
P = 008
Figura 547 Studiul relatiilor dintre
receptorii PPARα icircn SM A Mo vs PMN B Mo vs Ly
C PMN vs Ly Graficul ilustrează coeficienţii r P dreapta de
regresie (linia centrala) intervalul de icircncredere
95 şi intervalul de predicţie 95
Figura 548 Corelaţii icircntre receptorii PPARα icircn lotul
martor
A Mo vs PMN
B Mo vs Ly
C PMN vs Ly
Tot pentru lotul SM cacircnd am evaluat relaţia dintre nivelul de expresie relativă a
receptorilor PPARα icircn Eo şi nivelul de expresie relativa a receptorilor CD 36 am obţinut o
corelaţie negativă (r = - 05 P = 001) (fig 549 A)
50 100 150 200 250 300 350 50
100
150
200
250
300
350
400
450
500
PPARα Ly
PPARα PMN
y = 56641 + 1159 x r = 086 P lt 0001
C
50 100 150 200 250 300 350 400 0
50
100
150
200
250
300
350
PPARα Mo
PPARα Ly
y = 36665 + 0607 x r = 090 P lt 0001
B
150 200 250 300 350 400 450 0
50 100 150 200 250 300 350 400 450 500
PPARα PMN
PPARα Mo
y = 2505 + 0879 x r = 081 P lt 0001
A
50 100 150 200 250 300 350
50 100 150 200 250 300 350 400 450 500
PPARα Ly
PPARα PMN
y = 95668 + 0919 x r = 081 P lt 0001
C
100 150 200 250 300 350 400
0
50
100
150
200
250
300
350
400
PPARα Mo
PPARα Ly
y = -7503 + 0829 x r = 079 P lt 0001
B
100 150 200 250 300 350 400
50
100
150
200
250
300
350
400
450
500
PPARα Mo
PPARα PMN
y = 61384 + 0882 r = 074 P lt 0001
A
Figura 549 Corelaţii icircntre expresia PPARα icircn Eo şi alte tipuri de receptori investigaţi A PPARα Eo şi CD 36 (Lot SM) B PPARα Eo şi PPARα Mo( Lot Non-SM)
Icircn lotul martor am identificat o asociere moderată pozitivă (r = 038 P = 0033) icircntre
nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Eo şi Mo (figura 549B) corelaţie absentă icircn
lotul pacienţilor cu SM
Corelaţii dintre receptorii studiaţi şi componentele sindromului metabolic
Icircn lotul de control analiza statistică a relevat faptul că icircntre circumferinţa
abdominală (CA ) şi nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Mo Ly şi PMN există o
corelaţie inversă adică scăderea expresiei PPARα la nivelul acestor populatii celulare ar fi
icircnsoţită de creşterea CA (figura 550
Figura 550Corelaţii dintre receptorii
PPARα si CA A Mo B Ly C PMN
La pacienţii cu SM am notat o corelatie moderată negativă statistic semnificativă
icircntre TG şi valorile MFI a Ac anti- PPARα icircn Mo şi Ly( fig 551)
150 200 250 300 350 400 450 50
60
70
80
90
100
110
PPARα PMN
CA r = - 040 P = 0024
C
50 100 150 200 250 300 350 50
60
70
80
90
100
110
PPARα Ly
CA r = - 046 P = 0009
B
50 100 150 200 250 300 350 400 50
60
70
80
90
100
110
PPARα Mo
CA r = - 042 P = 0017
A
50 100 150 200 250 300 350 400 500
1000
1500
2000
2500
3000
PPARα Mo
PPARα Eo
r = 038 P = 0033
B
0 500 1000 1500 2000 2500 1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
PPARα Eo
CD36
r = 050 P = 0010
A
Figura 551 Lot SM Corelaţie icircntre expresia PPARα şi TG (A Mo B Ly)
Analizand corelatia dintre receptorii CD36 si valorile TA la pacientii cu SM am observat
o asociere pozitivă asteptată intre TAD si nivelul de expresie al receptorilor CD36 (fig 552)
Figura 552 Lot SM Corelaţii icircntre expresia
receptorilor CD36 şi valorile tensiunii arteriale
diastolice
Studiind corelaţiile dintre receptorii PPARα şi HDL-col la subiecţii din lotul martor am
notat o asociere pozitivă icircntre expresia PPARα icircn Mo şi Ly cu HDL-col (fig 553)
Figura 553 Lot martor Corelaţii icircntre HDL-col şi expresia PPARα icircn Mo(A) Ly(B)
Icircn lotul normal am evidenţiat corelaţii pozitive moderate dar semnificative statistic icircntre
CA şi valorile TAS (r = 062 P lt 0001) respectiv TAD (r = 050 P=0004) precum şi icircntre
CA şi glicemia subiecţilor normali (r = 052 P = 0003) Aceste date icircmpreună cu relaţia
invers proporţională identificată icircntre HDL-col şi CA (r = 050 P = 001) susţin validitatea
acestui studiu Icircn lotul subiecţilor cu SM am observat o corelaţie moderat pozitivă icircntre
expresia PPARα icircn populaţiiile de Mo şi Eo şi concentraţia a HDL-col (fig 554)
B
100 150 200 250 300 350 20
30
40
50
60
70
80
90
100
PPARα Ly
HDL-col-(mgdl)
r = 036 P = 0046
A
150 200 250 300 350 400 20
30
40
50
60
70
80
90
100
PPARα Mo
HDL-col-(mgd)l
r = 035 P = 005
70 75 80 85 90 95 100 1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
TAD (mmHg)
CD36
r = 048 P = 0013
B
50 100 150 200 250 300 350 -100
0
100
200
300
400
500
PPARα Ly
TG(mgdl)
r = - 042 P = 003
A
50 100 150 200 250 300 350 400 -100
0
100
200
300
400
500
PPARα Mo
TG ( mgdl) r =- 0 43 P = 0027
Figura 554 Corelaţii icircn SM icircntre HDL-col şi expresia PPARα icircn Mo (A) şi Eo(B)
Corelaţii icircntre nivelul de expresie relativă a PPARα şi markeri ai disfuncţiei
endoteliale şi inflamaţiei cronice
Deşi nu a icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică am reţinut corelaţia invers
proporţională (r = - 0331 P = 006) dintre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα
icircn PMN şi concentraţia serică a Non-HDL-colesterolului
Studiind relaţiile dintre parametri icircn lotul de pacienţi cu SM am observat o corelaţie
moderată invers proporţională icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Eo şi
acidul uric seric (figura 555 A) corelaţie absentă la subiecţii fără SM
Figura 555 Lot SM corelaţia dintre expresia PPARα icircn Eo şi acidul uric (A) respectiv
PPARα şi fibrinogen (B)
Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P=008) am notat pentru
pacienţii cu SM corelaţia invers proporţională dintre expresia PPARα icircn Eo şi concentraţia
serică a fibrinogenului ( figura 555B)
V5 Discuţii
Icircn cadrul lucrării de doctorat am studiat nivelul de expresie relativă a PPARα icircn
leucocitele pacienţilor cu SM comparativ cu cea a subiecţilor normali Expresia PPARα a fost
studiată icircn paralel cu cea a CD36 glicoproteină exprimată pe suprafaţa a numeroase celule
din organismul uman inclusiv pe cea a Mo şi macrofagelor Prin funcţia sa de receptor pentru
particulele oxidate de LDL CD36 cunoscut ca bdquoscavenger receptorrdquo de clasa B sau
bdquotrombospodin receptorrdquo contribuie la dezvoltarea inflamaţiei de la nivel endotelial şi
formarea plăcii de ateroscleroză Referitor la studiul PPARα icircn Eo icircn sindromul metabolic
menţionăm că studiul nostru este primul care arată că nivelul de expresie a proteinei PPARα
icircn Eo măsurat prin citometrie icircn flux este semnificativ mai redus la pacienţii care sunt
diagnosticaţi cu acest sindrom De asemenea icircn lotul cu SM cercetat icircn cadrul studiului
receptorilor PPARα numărul Eo circulante a fost semnificativ mai crescut la pacienţii cu SM
B
0 500 1000 1500 2000 2500 200
250
300
350
400
450
PPARα Eo o
Fibrinogen mgdl
r =- 036 P = 008
0 500 1000 1500 2000 2500 1 2 3 4 5 6 7 8 9
10 11
PPARα Eo_
Acid uric(mgdl) r = 048 P = 0014 A
0 500 1000 1500 2000 2500 10
20
30
40
50
60
70
80
PPARα Eo
HDL(mgdl)
r = 044 P = 0024
B
100 150 200 250 300 350 400 10
20
30
40
50
60
70
80
PPARα Mo
HDL( mgdl)
r = 046 P = 0019
A
(P = 003) Aceste constatări conduc la ipoteza că Eo joacă un rol special icircn mecanismele
patogenice declanşate icircn sindromul metabolic şi că receptorii PPARα sunt importanţi icircn
implicarea Eo icircn obezitate şi insulinorezistenţă Creşterea numărului de Eo circulante este
urmată de eliberarea mediatorilor proinflamatori iar reducerea expresiei PPARα icircn Eo
determină perturbarea mecanismelor de control al inflamaţiei cu exacerbarea cascadei
proinflamatorii Consecutiv se agravează disfuncţia endotelială şi se accelerează progresia
leziunilor de ateroscleroză Extrapolacircnd aceste ipoteze putem spune că asocierea raportată
dintre boala ischemică coronariană şi Eo poate fi şi consecinţa exacerbării cascadei
proinflamatorii de la nivel vascular produsă datorită scăderii expresiei PPARα icircn Eo iar
creşterea numărului de Eo circulante poate reprezenta o adaptare a organismului uman care
icircncearcă să suplinească deficitul de receptori PPARα Analizacircnd curba ROC pentru
intensităţile medii de fluorescenţă determinate pentru anticorpii anti- PPARα icircn Eo am
obţinut pentru acest biomarker o sensibilitate a testului de 565 şi o specificitate de 778
pentru un punct de cut-off de 1533 ( figura 536 ) Deşi aria AUC (Aria under the curve) egală
cu 0663 icircncadrează acest test ca avacircnd o acurateţe redusă observăm că că această valoare
este apropiată de determinările AUC pentru alţi factori (fibrinogen raport de aterogenitate
acid uric non- HDL-colesterol) cunoscuţi ca fiind implicaţi icircn aterogeneză şi inflamaţia
cronică (figura 431) Aceste remarci alături de faptul că icircn studiul receptorilor PPARα icircn
leucocite am inclus subiecţi la primul diagnostic de SM creează premisa integrării
determinării expresiei relative a receptorilor PPARα icircn diagnosticul complex al sindromului
metabolic Putem spune că icircn final studiul expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofilele
circulante se dovedește a fi util icircn diagnosticul precoce la nivel molecular al SM permiţacircnd
identificarea timpurie a unor indivizi cu risc cardiometabolic crescut Astfel intervenţia
precoce asupra subiecţilor cu deficit de PPARα icircn Eo contribuie la managementul eficient al
afecţiunilor degenerative icircn care inflamaţia cronică icircndeplineşte un rol primordial Referitor
la populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările efectuate prin citometrie de flux nu au
arătat existenţa unor diferenţe statistice icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα
la subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali Rezultatele noastre pot fi
consecinţa caracteristicilor loturilor studiate (icircn studiul nostru au fost incluşi subiecţi recrutaţi
la primul diagnostic de SM şi icircn absenţa stimulării receptorilor PPARα cu droguri agoniste
PPARα) dar icircn acelaşi timp pot apare diferenţe datorită metodei utilizate (231 232 233)
Făcacircnd o paralelă cu un studiu publicat icircn 2013 icircn Europa (231) care a arătat creşterea
nivelului de expresie al PPARα icircn Ly şi Mo observăm că deşi numărul de subiecţi a fost
aproximativ egal (57 participanţi icircn studiul nostru 60 icircn studiul DAmore) subiecţii icircn studiul
amintit au fost recrutaţi dintr-o clinică cu profil medical la primul diagnostic de SM icircn timp
ce metoda utilizată a fost PCR (Polymerase Chain Reaction) mult mai fidelă decacirct citometria
icircn flux icircn studiul receptorilor nucleari De asemenea DAmore nu investighează expresia
PPARα icircn Eo şi PMN icircn cercetare fiind incluse doar celulele CD14+ (predominant Mo) şi
CD14- (predominant Ly) Deşi nu am obţinut diferenţe statistic semnificative icircntre cele două
loturi referitoare la nivelul de expresie relativă a PPARα icircn Mo Ly şi PMN am observat
corelaţii puternice semnificative statistic icircntre expresia receptorilor PPARα icircn aceste tipuri
celulare Rezultatele obţinute sugerează existenţa unui mecanism diferit molecular de control
icircn eozinofile care reglează cantitatea de proteină PPARα icircn eozinofile versus alte tipuri de
leucocite (la pacienţii cu SM) şi acest lucru este icircn concordanţă cu cercetările care descriu
expresia PPARα mRNA icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale
bronşice keratinocite) Studiind prin citometrie de flux nivelul de expresie relativă a
receptorului CD36 la nivelul Mo am arătat prezenţa acestuia icircn Mo tuturor subiecţilor
investigaţi Analizacircnd valorile intensităţii medii de fluorescenţă a CD36 icircn loturile studiate
am observat o tendinţă de creştere la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali
confirmacircnd implicarea receptorului CD36 icircn patogeneza acestuia Referitor la expresia
receptorului CD36 rezultatele obţinute sunt icircn consens cu studii anterioare care au arătat
creşterea expresiei CD36 la pacienţii cu SM şi diabet zaharat Astfel pe lacircngă diferenţa icircn
expresia CD36 s-au raportat şi corelaţii inverse icircntre expresia proteinei CD36 şi nivelul
adiponectinei Acelaşi studiu a evidenţiat o corelaţie pozitivă intre expresia CD36 cu expresia
receptorilor PPAR gamma relaţia cu PPARα nefiind investigată
Analiza de subgrup a relaţiilor dintre componentele SM și elementele moleculare
proinflamatorii studiate a relevat prezenţa unor asocieri semnificativ statistice icircntre acestea
Se argumentează astfel că veridicitatea studiului este susţinută de interdependenţele statistice
ale componentelor SM Determinarea coeficientului de corelaţie Icircn studiul nostru nivelul de
expresie relativă a PPARα s-a corelat moderat negativ (figura 550) cu CA a subiecţilor din
lotul normal pentru populaţiile celulare de Mo (r = - 0420 P = 001) Ly (r = - 046 P =
0009) şi PMN (r = - 040 P = 0024) date care sunt icircn concordanţă cu studiile care arată
rolul PPARα icircn furnizarea energiei prin beta-oxidarea acizilor graşi Icircn acelaşi timp icircn lotul
pacienţilor cu SM nu am identificat prezenţa unei asocieri icircntre nivelul de expresie relativă a
PPARα şi valoarea măsurată a CA Asocierea dintre expresia relativă a PPARα cu obezitatea
de tip central completează datele existente referitoare la reglarea homeostaziei energetice
conturacircnd un mecanism de control deficitar al aportului caloric al SM Icircn condiţiile icircn care
rezultatele obţinute prin metoda citometriei icircn flux nu au arătat existenţa unei corelaţii intre
expresia PPARα şi CA la pacienţii cu SM considerăm că ar fi necesar studiul
polimorfismului genei PPARA care ar putea aduce informaţii importante cu privire la
implicarea acestor receptori icircn apariţia obezităţii de tip central Subliniem acest lucru deoarece
obezitatea este o boală plurifactorială icircn care pe lacircngă factorii ereditari sunt implicaţi factori
de mediu psihologici şi sociali (245) Existenţa unei componente genetice a aterosclerozei
este legată şi de prezenţa unor variante ale genei PPARA asociate cu creşterea incidenţei bolii
cardiovasculare (82) şi a SM (249) Icircn studiul nostru am constatat o scădere statistic
semnificativă a nivelului expresiei relative a receptorilor PPARα icircn Eo la subiecţii cu
antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială comparativ cu subiecţii fără istoric
familial de hipertensiune (figura 537) Deşi diferenţele calculate icircntre loturile studiate nu au
icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică la subiecţii care au declarat prezenţa
antecedentelor familiale de hipertensiune arterială remarcăm o tendinţă de scădere a
intensităţii medii de fluorescenţă pentru Ac anti-PPARα la nivelul Mo (figura 515 P = 006
) icircn timp ce expresia relativă a CD36 icircnregistrează o creştere la acesti subiecţi (figura 545 P
= 008) Icircn contextul riscului cardiovascular foarte icircnalt al pacienţilor cu SM amintim şi
existenţa corelaţiei pozitive dintre valorile tensiunii arteriale diastolice şi expresia relativă a
receptorului CD36 (r = 0483 P = 0013) Această constatare este icircn consens cu studiile care
au arătat că forma solubilă circulantă a CD36 este asociată cu factorii de risc cardiovasculari
fiind propusă ca un marker precoce al aterosclerozei Activarea PPARα este asociată cu
modularea metabolismului lipidic iar agoniştii PPARα sunt utilizaţi icircn mod curent pentru
tratamentul dislipidemiei Sub acţiunea agoniştilor PPARα se obţine o icircmbunătăţire a funcţiei
endoteliale şi a parametrilor reologici funcţiile pleiotropice ale agoniştilor PPARα fiind
dovedite icircn trialuri clinice controlate Icircn populaţiile de Mo şi Ly la pacienţii cu SM
cercetarea noastră a evidenţiat o asociere negativă icircntre nivelul de expresie relativă a
receptorilor PPARα şi concentraţia TG serice (figura 551) Astfel scăderea expresiei
receptorilor PPARα este asociată cu creşterea nivelului TG serice contribuind la profilul
lipidic aterogen din SM Icircn conformitate cu literatura de specialitate icircn studiul efectuat prin
metoda citometriei icircn flux am găsit prezenţa asocierii icircntre nivelul de expresie al PPARα şi
HDL-colesterol Corelaţia pozitivă dintre nivelul de expresie relativă PPARα şi concentraţia
HDL-colesterolului a fost observată icircn lotul martor icircn populaţiile de Mo (r = 035 P = 005)
şi Ly ( r = 036 P = 004) (figura 553) susţinacircnd faptul că stimularea receptorilor PPARα
este legată de creşterea nivelului seric al lipoproteinelor cu densitate crescută La pacienţii cu
SM corelaţia dintre expresia PPARα şi HDL-colesterol a fost evidenţiată icircn populaţiile de Mo
(r = 046 P = 0019) şi eozinofile (r = 044 P = 0024) Se desprinde concluzia că icircn
sindromul metabolic scăderea concentraţiei HDL-colesterol este legată de diminuarea
nivelului de expresie relativă a receptorilor nucleari PPARα icircntărind afirmaţiile legate de
rolul acestor receptori icircn progresia bolilor cardiovasculare Studiind reactanţii de fază acută
analiza statistică a relevat o diferenţă semnificativă din punct de vedere statistic icircntre valorile
fibrinogenului la pacienţii cu SM atunci cacircnd au fost comparaţi cu subiecţii fără SM
(Capitolul IV4 P lt0 001 figura 427A) De asemenea icircn Capitolul V dedicat studiul
expresiei relative a receptorilor PPARα studiul valorilor fibrinogenului a arătat creşterea
acestui reactant de faza acută icircn lotul cu SM comparativ cu lotul martor (P lt0 0001) Icircn
studiul nostru am calculat o corelaţie invers proporţionala (r = - -036 fig 555B) icircntre
nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile şi concentraţia serică a
fibrinogenului Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P = 008) am reţinut
această asociere deoarece am demonstrat că nivelul de expresie relativă al receptorilor
PPARα icircn eozinofile este mai scăzut icircn sindromul metabolic iar sindromul metabolic este
caracterizat printr-un status inflamator cronic status caracterizat şi de creşterea concentraţiei
serice a fibrinogenului De asemenea notam ca această corelaţie negativă se află icircn
concordanţă cu studiile care arata că tratamentul cu agonişti PPARα (fibraţi) determina
scăderea nivelului seric al fibrinogenului contribuind la diminuarea inflamaţiei cronice din
sindromul metabolic şi icircn consecinţă amelioracircnd insulinorezistenţa
LIMITE ȘI DIFICULTĂȚI IcircN CERCETARE
Icircn cadrul Tezei de Doctorat am desfăşurat o cercetare care şi-a propus studierea
expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Recrutarea anamneza şi examinarea
clinică a subiecţilor au fost realizate icircn cadrul Cabinetului de Medicină de Familie CMI Popa
Elena din Iaşi iar determinările hematologice şi biochimice s-au efectuat icircn cadrul
Laboratorului Ambulatorului de Specialitate al Spitalului Universitar ldquoSfacircntul Spiridon din
Iaşi Icircn studiul epidemiologic şi al markerilor inflamatori al sindromului metabolic desfăşurat
au fost incluşi un număr de 1530 de participanţi pe baza liberului consimţămacircnt examinaţi icircn
perioada 01012013 - 31122013 Icircn continuare icircn perioada 1012014 - 28022014 pe baza
criteriilor de includere şi excludere icircn cele două loturi de studiu am investigat un număr de 57
de subiecţi prezentaţi la consultaţie icircn această perioadă şi care au icircndeplinit criteriile de
includere icircn cele două loturi (Lot SM şi Lot Control) constituite pentru evaluarea nivelului de
expresie a receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Explorarea nivelului de expresie
relativă a receptorilor PPARα s-a desfăşurat icircn cadrul Laboratorului de Biologie Moleculară
de pe platforma Institutului Regional de Oncologie Datorită resurselor proprii financiare
limitate trebuie să subliniez că aceasta cercetare nu ar fi fost posibilă fără contribuţia unor
cercetători din domeniul medical care m-au sprijinit necondiţionat atacirct icircn elaborarea
protocolului de lucru cacirct şi icircn efectuarea propriu-zisă a studiului Icircn acest sens menţionăm şi
faptul că pentru studiul receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic am utilizat aparatura
Laboratorului de Biologie Moleculară (care deserveşte icircntreaga Regiune a Moldovei) Pe
această cale mulţumesc personalului Laboratorului de Biologie Moleculară pentru ajutorul
acordat icircn desfăşurarea cercetării doctorale icircn condiţiile icircn care se observa creşterea
numărului de pacienţi care se adresează acestei platforme de cercetare Mulţumesc de
asemenea şi Doamnei Doctor Elena Butoi din cadrul Institutului de Biologie şi Patologie
Moleculară ldquoNicolae Simionescurdquo Bucureşti) pentru donaţia anticorpului secundar anti-
FITC Icircn consecinţă pentru recrutarea unui număr mai mare de participanţi ar fi fost necesară
icircn primul racircnd obţinerea unor resurse financiare suplimentare pentru achiziţia de aparatură şi
reactivi Totuşi numărul subiecţilor recrutaţi este apropiat de numărul subiecţilor raportaţi icircn
cadrul unor granturi de cercetare care aveau ca ţinta studiul expresiei receptorilor PPARα
(212 227 228 231) Rezultatele obţinute continua seria lucrărilor care arata importanta
studiului mecanismelor etiopatogenice ale sindromului metabolic patologie care se afla icircntr-o
continuă creştere La pacienţii cu SM pe lacircngă diminuarea nivelului de expresie a receptorilor
PPARα icircn eozinofile ne aşteptam şi la evidenţierea unor modificări icircn expresia PPARα şi icircn
populaţiile de Ly Mo şi PMN Acest fapt poate fi explicat de utilizarea unor celule provenite
de la pacienţi fără afectare cardiovasculară fără diabet zaharat şi necesită continuarea
studiului pe culturi celulare icircn condiţii de stimulare cu agonişti PPARα deziderat care
impune continuarea investigării expresiei PPARα printr-un grant de cercetare
ORIGINALITATEA ȘI CONTRIBUȚIILE INOVATIVE ALE TEZEI DE
DOCTORAT PERSPECTIVE DE CERCETARE
Evaluarea nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn leucocitele circulante
aduce noi perspective icircn studiul obezităţii şi sindromului metabolic Importanta studiului
expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic derivă din prevalenta crescută a
sindromului metabolic icircn populaţia cercetată la care se adaugă riscul cardiovascular foarte
icircnalt al acestor pacienţi cu implicaţii majore icircn sănătatea publică Rolul receptorilor PPARα
icircn inflamaţie şi aterogeneza este binecunoscut dar studiul nostru este primul care a arătat că
nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα este semnificativ mai scăzut in populatiile
de eozinofile la pacienţii cu SM Această concluzie coroborata cu existenţa unei stracircnse
asocieri intre expresia receptorilor PPARα la nivelul Mo limfocitelor şi PMNlor creeaza
ipoteza existenţei unui mecanism de control diferit al expresiei PPARα la nivelul
eozinofilelor Această cercetare aduce informaţii importante referitoare la mecanismele
proinflamatorii care stau la baza insulinorezistenţei şi riscului cardiometabolic şi impune
continuarea studiului acestor receptori nucleari prin citometrie icircn flux metodă care poate fi
aplicată şi la scara mai largă dacă sunt asigurate resursele materiale necesare cercetării
Cercetarea prin citometrie icircn flux poate fi completată de studiul polimorfismului genei
PPARA şi astfel se pot identifica timpuriu indivizii cu potenţial risc cardiometabolic crescut
Studiul receptorilor PPARα a stabilit conexiuni cu factori proinflamatori şi aterogenetici iar
continuarea cercetării poate aduce şi elemente noi de diagnostic precoce icircn sindromul
metabolic contribuind la icircmbunătăţirea prognosticului acestor pacienţi
CONCLUZII FINALE
1 Aplicarea scorului de SM alături de implementarea algoritmului electronic de diagnostic
contribuie la o prelucrare rapidă eficientă și standardizată a informaţiilor la nivelul
medicinei primare
2 Prevalenţa SM calculată astfel icircn cadrul studiului este crescută (2732) icircn concordanţă
cu datele raportate
3 Controlul factorilor de risc cardiometabolici incluşi icircn SM se poate realiza prin
managementul stilului de viaţă (scăderea greutăţii corporale prin combaterea
sedentarismului şi adoptarea unei diete antiaterogene şi hipocalorice) şi administrarea
terapiei medicamentoase
4 Este necesară adoptarea unei politici de sănătate publică pentru prevenirea creşterii icircn
populaţie a prevalenţei obezităţii şi a diabetului zaharat
5 Noi metode de cercetare icircn domeniul SM axate pe diagnosticarea precoce şi cuantificarea
eficientă a acestuia duce la diminuarea incidenței evenimentelor cardiovasculare majore
6 Sindromul metabolic se caracterizează printr-un status inflamator cronic
7 Valorile Non-HDL-colesterolului şi a raportului de aterogenitate sunt semnificativ mai
mari la pacienţii cu SM
8 Dintre reactanţii de faza acută am observat că valoarea medie a fibrinogenului este mai
crescută icircn lotul cu SM
9 Valorile eozinofilelor sunt crescute icircn sindromul metabolic iar explorarea relaţiei dintre
eozinofile şi obezitate constituie una din direcţiile de studiu actuale ale sindromului
metabolic
10 Evaluarea markerilor inflamatori icircn contextul sindromului metabolic este utilă icircn
evaluarea complexă a a factorilor de risc cardiometabolici
11 Prin metoda citometriei icircn flux am demonstrat prezenta Receptorilor Activaţi de
Inductorii Proliferării Peroxizomilor ndash Alpha (PPARα) icircn toate populaţiile de leucocite
studiate (Mo limfocite PMN eozinofile) atacirct icircn lotul pacienţilor cu SM cacirct şi icircn lotul
martor
12 Utilizacircnd intensitatea medie de fluorescenţă a anticorpilor anti- PPARα am arătat că
nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile este semnificativ mai redus
la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali
13 Acest studiu este primul care a demonstrat existenţa unei scăderi statistic semnificative a
nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofilele pacienţilor cu SM
confirmacircnd cercetările recente care au evidenţiat rolul eozinofilelor şi al receptorilor
PPARα icircn obezitate reglarea inflamaţiei cronice şi aterogeneza
14 Contrar aşteptărilor noastre icircn populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările
efectuate icircn cele două loturi de studiu (cu şi fără sindom metabolic) nu am evidenţiat
diferenţe statistic seminificative icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα la
subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali
15 Icircn populaţiile de Mo limfocite şi polimorfonucleare am observat corelaţii puternice
semnificativ statistic icircntre expresia PPARα icircn aceste tipuri celulare sugeracircnd existenţa
unui mecanism unic de control al inflamaţiei cronice la nivelul acestor celule probabil
diferit de cel din eozinofile
16 La subiecţii cu SM expresia relativă a PPARα icircn Eo este invers asociată cu expresia
receptorului CD36 (receptor al particulelor de ox - LDL şi propus ca un marker precoce al
aterosclerozei) dovedind rolul antiinflamator al receptorilor PPARα la nivel endotelial
17 La pacienţii cu antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială nivelul de
expresie al receptorilor PPARα icircn eozinofile şi Mo este diminuat comparativ cu subiecţii
fără antecedente familiale de hipertensiune arterială Putem spune că studiul efectuat de
noi aduce informaţii importante legate de geneză aterosclerozei şi hipertensiunii arteriale
18 Prin studiul asocierilor dintre receptorii PPARα şi componentele clinice ale sindromului
metabolic am arătat rolul acestor receptori icircn determinismul obezităţii de tip central
nivelul expresiei relative a receptorilor PPARα fiind invers proporţional cu circumferinţa
abdominală
19 Icircn acelaşi timp nivelul de expresie a PPARα icircn sindromul metabolic este asociat pozitiv
cu concentraţia serică a HDL-colesterolului şi invers asociat cu nivelul trigliceridelor
serice dovedind rolul acestor receptori icircn diminuarea procesului inflamator cronic de la
nivel vascular
20 La pacienţii cu SM scăderea expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofile este corelată cu
creşterea unor markeri ai sindromului inflamator cronic cardiometabolic (acid uric
fibrinogen) ilustracircnd importanta receptorilor icircn reglarea status-ului inflamator cronic din
sindromul metabolic
21 Utilizarea metodei flowcitometrice pentru studiul expresiei relative a receptorilor PPARα
icircn leucocite a adus informaţii importante cu privire la mecanismele moleculare de control
implicate icircn patogenia bolilor cardiometabolice icircn concordanţă cu cercetările care descriu
expresia PPAR icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale bronşice
keratinocite)
BIBLIOGRAFIE SELECTIVA
1 Kahn R Metabolic syndrome- what is the clinical usefulness Lancet 2008371(9628)1892-3
2 Reaven GM The metabolic syndrome is this diagnosis necessary Am J Clin Nutr 2006 83(6)1237-7
3 Grundy SM Pre-Diabetes Metabolic Syndrome and Cardiovascular Risk J Am Coll Cardiol 201259(7)
635-43
4 International Diabetes Federation IDF Diabetes Atlas 6th edn International Diabetes Federation Belgium
Brussels 20131-155
5 World Health Organization Global Status Report on Noncommunicable Diseases 2010 World Health
Organization Geneva Switzerland 20111-176
6 Coman AE Petrovanu R Sindromul metabolic in practica de ambulator Editura Pim Iaşi 2009 1-103
7 Grundy SM Becker D Clark LT et alThird Report of the National Cholesterol Education Program (NCEP)
Expert Panel on Detection Evaluation and Treatment of High Blood Cholesterol in Adults (Adult
Treatment Panel III) Final Report Circulation 2002106(25)3143-90
8 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J Metabolic syndrome- a new worldwide definition A Consensus Statement
from the International Diabetes Federation Diabet Med 2006 23(5)469-80
9 KG Alberti KG Eckel RH Grundy SM etal International Diabetes Federation task force on epidemiology
and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart Association World Heart
Federation International Atherosclerosis Society International Association for the study of obesity
Harmonizing the metabolic syndrome a joint interim statement of the International Diabetes Federation task
force on epidemiology and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart
Association World Heart Federation International Atherosclerosis society and International Association
for the study of obesity Circulation 2009120(16)1640-5
10 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J IDF Epidemiology Task Force The metabolic syndrome new
worldwide definition Lancet 2005 366 1059 - 62
11 Oleszczyk M Svab I Seifert B et al Primary healthcare in the developing part of Europe changes and
development in the former Eastern Bloc countries that joined the European Union following 2004 Med Sci
Monit 2009(15)78ndash84
12 Jung U J Choi M S Obesity and Its Metabolic Complications The Role of Adipokines and the
Relationship between Obesity Inflammation Insulin Resistance Dyslipidemia and Nonalcoholic Fatty
Liver Disease Int J Mol Sci 2014rsquo15(4) 6184-223
13 Vanden Heuvel JP Peters JM Peroxisome Proliferators In Ramos K (ed) Cellular and Molecular
Toxicology (Second Edition) Volume 2 New York Elsevier Science Inc 2010 145 - 67
14 Yessoufou A Wahli W Multifaceted roles of peroxisome proliferator-activated receptors (PPARs) at the
cellular and whole organism levels Swiss Med Wkl 2010140w13071 doi104414smw201013071
15 Azhar S Peroxisome proliferator-activated receptors metabolic syndrome and cardiovascular disease
Future Cardiology 20106(5)657-91
16 Andries G Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity
Diabetes and Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(Suppl)24-32
17 Zandbergen F Plutzky J PPARalpha in atherosclerosis and inflammation Biochim Biophys Acta
20071771(8)972-82
18 Straus DS Glass CK Anti-inflammatory actions of PPAR ligands new insights on cellular and molecular
mechanisms Trends Immunol 200728(12)551-8
19 Zlei M Zugun- Eloae F Carasevici E Citometrie icircn flux - Bază şi clinică Icircn Hinescu ME (ed) Citometrie icircn
flux - principii şi aplicaţii clinice Bucureşti Editura Viaţa Medicală Romacircnească 20111-128
20 Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity Diabetes and
Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(9)24-32
21 Woerly G Honda K Loyens M et al Peroxisome proliferator-activated receptors alpha and gamma down-
regulate allergic inflammation and eosinophil activation J Exp Med 2003198(3)411-21
22 Salle-Saumont D Brenuchon C Kanda A et al Peroxisome proliferator-activated receptor alpha regulates
skin inflammation and humoral response in atopic dermatitis J Clin Allergy Immunology 2008 21(4)962-8
23 Schote A Turner J Schiltz J et al Nuclear receptors in human immune cells expression and correlations
Mol Immunolog 200744(6)1436-45
24 DAmore S Vacca M Graziano G et al Nuclear receptors expression chart icircn peripheral blood
mononuclear cells identifies patients with Metabolic Syndrome Biochim Biophys Acta
20131832(12)2289-301
25 Uthurralt J Gordish-Dressman H Bradbury M T et al PPARalpha L162V underlies variation in serum
triglycerides and subcutaneous fat volume in young males BMC Med Genet 2007855
26 Hiukka A Leinonen ES Jauhiainen M et al Long-term effects of fenofibrate on VLDL and HDL
subspecies icircn participants with type 2 diabetes mellitus Diabetologia 2007 50(10)2067-75
27 Robins SJ Rubins HB Faas FH et alInsulin resistance and cardiovascular events with low HDL
cholesterol The Veterans Affairs HDL Intervention Trial (VA-HIT) Diabetes Care 2003 26(5)1513-7
28 Devaraj S Siegel D Jialal I Statin Therapy in Metabolic Syndrome and Hypertension Post-JUPITER
What is the Value of CRP Curr Atheroscler Rep 2011 13(1) 31ndash42
29 Imperatore G Riccardi G Iovino C et al Plasma Fibrinogen A New Factor of the Metabolic Syndrome A
population-based study Diabetes Care 19982 1(4)649-54
30 Krysiak R Gdula-Dymek A Bachowski R Okopien B Pleiotropic effects of atorvastatin and fenofibrate
in metabolic syndrome and different types of pre-diabete Diabetes Care 201033(10)2266-70
31 Hermans MP Impact of Fenofibrate on Type 2 Diabetes Patients with Features of the Metabolic Syndrome
Subgroup Analysis From FIELD Curr Cardiol Rev 20106(2)112-8
32 Silverstein R Inflammation atherosclerosis and arterial thrombosis Role of the scavenger receptor CD36
Cleveland Clinic Journal of Medicine 200976(Suppl 2)S27-S30
33 Hăncu N Obezitatea In Vereşiu IA (ed) Diabetul zaharat nutritia si bolile metabolice Volume 2 Editura
Echinox Cluj- Napoca 2010 1-15
Lista lucrări publicate
1 Elena Popa Maria Maidaniuc Agnes Bacusca Alamir Diaa Rodica Petrovanu Adorata Elena
Coman Disfuncţia endotelială ndash de la mecanisme moleculare la cuantifi care şi tratament icircn practica
medicală Practica Medicală 20149(3) 109-14
2 Elena Popa Agnes Bacusca Alamir Diaa Maria Maidaniuc Rodica Petrovanu Adorata Elena Coman
The function of insulin receptor (IRF) in evolution of obesity correlation with adipocytes diameters
Archives of the Balkan Medical Union 201449(3) 275-9
3 Elena Popa Florin Zugun-Eloae Mihaela Zlei Daniela Jitaru Oana Maria Pintilie Adorata Elena
Coman Maria Traian Didona Anca Ungureanu Eugen Carasevici - acceptata pentru numarul 42014
Flow cytometry analysis of PPAR-alpha receptors in metabolic syndrome) Revista Romană de
Medicină de Laborator(RRLM-D-14-00034R1- adeverinţa ataşată
SCOPUL ŞI MOTIVAŢIA STUDIULUI
Motivația cercetării
La nivel mondial sindromul metabolic (SM) reprezintă o importantă problemă de
sănătate publică reunind asocierea dintre obezitate abdominală şi factori de risc majori
cardiovasculari (hiperglicemia dislipidemia hipertensiunea arterială) (12) Se estimează că
SM afectează peste 25 din populaţia generală iar aproximativ două treimi din pacienţii cu
SM sunt predispuşi la un eveniment cardiovascular major (3) Icircn prezent se acţionează pe
două căi pentru controlul factorilor de risc cardiometabolici incluşi icircn SM managementul
stilului de viaţă (scăderea greutăţii corporale prin combaterea sedentarismului şi adoptarea
unei diete antiaterogene şi hipocalorice) şi administrarea terapiei medicamentoase Deşi atacirct
modificarea stilului de viață cacirct și terapia medicamentoasă vizează controlul factorilor de risc
cardiometabolici conform ghidurilor medicale adoptate atingerea ţintelor terapeutice este
greu de realizat (1011) Icircn aceste condiţii introducerea unor noi metode diagnostice şi
terapeutice bazate pe etiopatogenia SM ar putea icircmbunătăţi calitatea vieţii bolnavilor şi SM şi
ar conduce pe termen lung la creşterea speranţei medii de viaţă Cercetările actuale sunt
orientate spre descifrarea modului icircn care modificările metabolismului incluzacircnd rezistenţa la
insulină dislipidemia obezitatea abdominală pot accelera ateroscleroza privită ca o
complicaţie metabolică și indusă de inflamație (12) Icircn contextul studiului SM receptorii
nucleari activaţi de inductorii proliferării peroxizomilor-alpha-α (PPARα) atrag atenţia
datorită rolului deţinut icircn reglarea oxidării acizilor graşi metabolismul lipidelor şi
lipoproteinelor inflamaţie cronică şi aterogeneză (131415) Aceștia reprezintă astfel veriga
lipsă patogenică care leagă modificările metabolice de procesul inflamator cronic
autoicircntreținut care duce la disfuncția endotelială și aterogeneză Acţionacircnd ca factori de
transcripţie activarea PPARα determină scăderea nivelului seric al trigliceridelor şi HDL-col
şi protejează față de profilul lipidic aterogenetic prin modularea status-ului proinflamator şi
diminuarea insulinorezistenţei (1617) Rolul PPARα icircn reglarea metabolismului lipidic
balanţei energetice şi icircn diminuarea răspunsului proinflamator fac din aceşti receptori o
potenţială ţinta icircn tratamentul afecţiunilor icircn care rolul inflamaţiei cronice este bine cunoscut
Se descrie astfel o nouă posibilitate de icircmbunătăţire a prognosticului afecţiunilor cronice cu
impact major asupra sănătăţii publice incluzacircnd ateroscleroza diabetul zaharat boala cronică
obstructivă pulmonară maladia Parkinson demența Alzheimer şi nu icircn ultimul racircnd
neoplaziile (18)
Scopul studiului
Icircn cadrul Tezei de Doctorat mi-am propus realizarea unei cercetări referitoare la
rolul Receptorilor Activaţi de Inhibitorii Proliferării Peroxizomilor- alpha icircn contextul
sindromului metabolic alături de completarea datelor epidemiologice existente cu privire la
prevalenţa acestui sindrom icircn populaţia aflată icircn evidenţa unui Cabinet de Medicină de
Familie din oraşul Iaşi Ca urmare cercetarea efectuată a urmărit două aspecte1 studiul
epidemiologic al SM icircn populaţia unui Cabinet de Medicină de Familie urmată de
investigarea markerilor inflamatori prezenţi icircn SM 2 investigarea prezenţei și a nivelului de
expresie relativă a receptorilor PPARα icircn leucocitele circulante recoltate din sacircngele
subiecţilor studiaţi celule care exprimă aceşti receptori şi a căror rol icircn inflamaţie şi
aterogeneză este bine cunoscut
Considerații etice Studiul a primit avizul Comisiei de Etică a Universităţii de Medicină
şi Farmacierdquo Gr T Popardquo Iaşi Studiul a fost condus icircn conformitate cu Declaraţia de la
Helsinki actualizată
STUDIUL SINDROMULUI METABOLIC IcircN POPULAŢIA SELECTATĂ
Obiectivele studiului sindromului metabolic
a evaluarea din punct de vedere clinic şi biologic a sindromului metabolic
b identificarea tipului de SM icircn raport cu numărul de componente
c stabilirea prevalenţei sindromului metabolic icircn populaţia studiată
d studiul markerilor inflamatori prezenţi icircn SM
Studiul epidemiologic icircn populaţia selectată
Am efectuat un studiu epidemiologic transversal care şi-a propus stabilirea prevalenţei
sindromului metabolic şi a componentelor sale icircn populaţia icircnscrisă pe lista unui cabinet de
medicină de familie Studiul s-a desfăşurat pe parcursul a 12 luni icircn perioada 01012013ndash
31122013 icircn cadrul Cabinetului de Medicină de Familie CMI Popa Elena situat icircn strada
Ion Creanga nr 73 din Iaşi
Obiectivele studiului - evaluarea din punct de vedere clinic şi biologic a sindromului metabolic
- identificarea tipului de SM icircn raport cu numărul de componente
- stabilirea prevalenţei sindromului metabolic icircn populaţia studiată
Lotul de studiu a fost constituit din populaţia de ambele sexe cu vacircrsta cuprinsă icircntre
18 şi 91 ani icircnscrisă pe lista medicului de familie Subiecţii au fost invitaţi să participe la
studiu icircn luna naşterii realizacircnd astfel o programare a vizitelor pe parcursul a 12 luni
Criteriile de includere icircn lotul de studiu vacircrsta peste 18 ani capacitate de decizie
domiciliul stabil icircn Romacircnia participare pe baza consimţămacircntului liber informat Criteriile
de excludere vacircrstă sub 18 ani femei gravide sau care alăptează bolnavi icircn faza terminală
subiecţi care refuză semnarea consimţămacircntului informat Nu s-au formulat criterii care să
aducă discriminări legate de sex etnie sau rasă
Protocolul studiului epidemiologic al sindromului metabolic
Icircn cadrul studiului epidemiologic s-au realizat cacircte două vizite pentru fiecare participant La
prima vizită subiecţii au fost informaţi asupra studiului icircn cadrul cercetării doctorale şi au
semnat Consimţămacircntul liber informat Pentru fiecare participant s-a completat fişa de studiu
computerizată incluzacircnd date anamnestice şi clinice (talie greutate corporală perimetru
abdominal) La a doua vizită s-au recoltat probe biologice (sacircnge venos) de către o asistentă
specializată pentru următoarele determinări biochimice (glicemie colesterol total HDL-
colesterol LDL-colesterol trigliceride acid uric creatinină fibrinogen proteină C reactivă)
şi hematologice (hemoleucograma VSH) Pentru diagnosticarea SM am utilizat criteriile
de diagnostic Harmonised I (tabel VI) Am comparat prevalenţa SM conform criteriilor
Harmonised I cu prevalenţa obţinută prin aplicarea criteriilor IDF respectiv ATP III
Analiza statistică Pentru analiza parametrilor studiaţi icircn SM am realizat icircmpreună cu
firma Arhilog Soft un program icircn care sunt incluşi parametrii de diagnostic ai SM şi care
permite icircncadrarea pacienţilor funcţie de componentele SM icircn SM3 SM4 SM5 De
asemenea programul permite editarea şi arhivarea unei fişe de observaţie pentru fiecare
participant la studiu precum şi crearea unei baze de date compatibile cu programul Microsoft
Office Excel 97-2003
Menţionăm că acest program poate stoca
şi alţi parametri clinici şi paraclinici utilizaţi icircn evaluarea complexă a SM putacircnd fi ulterior
introdus ca un program de monitorizare a evoluţiei pacienţilor Pentru prelucrarea statistică a
parametrilor s-au folosit programele Microsoft Office Excel 97-2003 SPSS-10 (Statistical
Package for Social Sciences) şi aplicaţia Medcalc Statistical Software ndash 1333 Valoarea lui p
Figura 41 Program de
analiză a parametrilor SM
mai mică de 005 a fost considerată semnificativ statistic
Rezultate Analiza lotului de studiu s-a efectuat icircn funcţie de mediul de provenienţă sex vacircrstă şi
vacircrsta medie Caracteristicile clinice şi biochimice ale lotului studiat sunt reprezentate icircn
tabelul VIII
Tabel VIII Caracteristicile lotului studiat Media 95 CI SD Minimum Maximum
Vacircrsta (ani) 4751 4661 - 4841 1798 1800 9100
CA (cm) 8830 8764 - 8896 1316 5600 13400
IMC (kgm2) 2603 2578 - 2628 497 1900 4500
TAD (mmHg) 7529 74883 - 7571 827 6000 11500
TAS (mmHg) 11730 11650 - 11810 1590 9000 19000
Glicemie (mgdl) 9435 9328 - 9542 2138 7200 40000
HDL- col(mgdl) 4498 4427 - 4570 1422 2100 9200
TG(mgdl) 12269 11887 - 12651 7157 4800 87900
Determinarea scorului SM
Am aplicat criteriile de diagnostic şi am calculat scorul de SM pentru fiecare subiect (0-
absenţa criteriului 2- prezenţa criteriului) (fig44)
Figura 44 Frecvenţa scorului SM icircn
populaţia studiată conform criteriilor
SM Harmonised (A) IDF (B) ATP III
(C) Se observă că distribuţia scorurilor
SM conform criteriilor de diagnostic este
identică icircn cazul aplicării criteriilor
Harmonized I şi IDF
Scorul de SM a avut valori pare
cuprinse icircntre intervalul 0 - 10 pacienţii
cu SM avacircnd un scor mai mare sau egal
cu 6
Icircn lotul studiat am analizat prezenţa simultană a criteriilor Harmonised I de diagnostic şi
am constatat prezenţa SM la 389 subiecţi (204 femei şi 185 bărbaţi) reprezentacircnd 2542
(95CI 2296-2808) din totalul populaţiei studiate Raportul prevalenţelor specifice pe sexe
bărbaţifemei a fost de 103 (95 CI084 -126)Icircn concordanţă cu criteriile IDF am
identificat un număr de 325 pacienţi cu SM (175 femei şi 150 bărbaţi) iar prevalenţa SM icircn
populaţia studiată conform IDF a fost de 2124 (95 CI 1899ndash 2368) Raportul
prevalenţelor specifice la bărbaţi versus femei a fost de 0977 (95 CI 078 ndash122) Utilizacircnd
definiţia ATP III au fost identificaţi un număr de 229 subiecţi cu SM Prevalenţa SM a fost
C
0
100
200
300
400
500
600
700
Scor SM ATP III
Număr pacienţi
0 2 4 6 8 10
ATP III SM5 SM4 SM3 non SM
B
0 50
100 150 200 250 300 350 400 450
Scor SM IDF
Număr pacienţi
0 2 4 6 8 10
IDF SM5 SM4 SM3 non SM
A
0
50
100
150
200
250
300
350
400
450
Scor SM Harmonised I
Număr pacienţi
0 2 4 6 8 10
HARMONIZED I SM5 SM4 SM3 non SM
de 1497 (95CI 1309 ndash 1704) icircn populaţia studiată Au fost calculate prevalenţele pe
sexe şi au fost găsite valorile de 1343 (95CI 010 ndash 164) la bărbaţi respectiv 1632
(95 CI 1366 ndash 1934) la femei raportul dintre acestea fiind de 082 (95CI 062 ndash 107)
Pentru fiecare asociere dintre componentele SM diagnosticat conform criteriilor
Harmonised I am calculat prevalenţele icircn cadrul SM(tabel XVI)
Tabel XVI Prevalenţa asocierilor dintre componentele SM Număr
pacienţi
Ponderea icircn cadrul
pacienţilor cu SM
(95 CI)
Prevalenţa icircn
populaţia studiată
(95 CI)
SM cu trei componente (SM3)
241 6195 (5438ndash7029) 1575 (1383-
1787)
Obezitate centrală + hipertensiune arterială +
hipertrigliceridemie
45 1154 (844ndash1548) 294 (214-393)
Obezitate centrală + hipertensiune arterială + hipo-
HDLcolesterolemie
38 979 (691ndash1340) 248 (175-340)
Obezitate centrală + hipertrigliceridemie +
hipoHDL-colesterolemie
34
874 (605ndash1221) 222 (153-310)
Obezitate centrală + modificări ale metabolismului
glucidic + hipertensiune arterială
31 796 (541ndash1131) 202 (137-287)
Hipertensiune arterială + hiper-trigliceridemie +
hipoHDL- colesterolemie
26 668 (436 ndash979) 169 (111-249)
Modificări ale metabolismului glucidic +
hipertensiune arterială + hiper-trigliceridemie
21 539 (334-825) 137 (085-209)
Obezitate centrală + modificări ale metabolismului
glucidic + hipertrigliceridemie
15 385 (215-636) 098 (054-116)
Modificări ale metabolismului glucidic
hipertrigliceridemie + hipoHDL-colesterolemie
12 308 (159-538) 078 (040-137)
Modificări ale metabolismului glucidic +
hipertensiune arterială + hipoHDLcolesterolemie
10 257 (123ndash472) 065 (031-120)
Obezitate centrală + modificări ale metabolismului
glucidic + hipo-HDL-col
9 231 (105ndash439) 058 (026-111)
SM cu patru componente (SM4) 104 2674 (2184-239) 679 (555-823)
Obezitate centrală + modificări ale metabolismului
glucidic + hipertensiune arterială + hipoHDL-
colesterolemie
32 822 (562-1116) 209 (143-
295)
Obezitate centrală + hipertensiune arterială +
hipertrigliceridemie + hipoHDL-col
25 642 (415- 948) 163 (105-241)
Obezitate centrală + modificări ale metabolismului
glucidic + hipertri-gliceridemie + hipoHDL-
colesterolemie
12 308 (159-538) 078 (040-137)
Modificări ale metabolismului glucidic +
hipertensiune arterială + hipertri-gliceridemie +
hipoHDL-colesterolemie
6 154 (056- 335) 039 (014-085)
SM cu cinci componente (SM5) 44 1131 (822-1518) 287 (209-386)
Total (SM3 + SM4 + SM5) 389 100 2542(2296-
2808)
Analizacircnd componentele SM la cei 389 pacienţi diagnosticaţi cu SM conform criteriilor
Harmonised I am constatat că obezitatea centrală este cea mai bine reprezentată icircn SM dintre
aceste componente (8072 95CI 7644 - 8452) urmată de HTA (7892 95CI 7453
- 8287) hiperTG (6915 95 CI 6430-7371) hipo-HDL-col (6375 95 CI 5876-
6854) şi hiperglicemie (5681 95 CI5173- 6179)
Standardizarea prevalenţelor funcţie de vacircrstă şi sex Analiza statistică a relevat faptul
că prevalenţa SM creşte cu icircnaintarea icircn vacircrstă Dacă pentru vacircrsta cuprinsă icircntre 35-54 ani
prevalenţa la bărbaţi este semnificativ mai mare comparativ cu femeile (raport calculat B F -
183 P=0003) pentru celelalte grupe de vacircrsta nu s-au observat diferenţe semnificative icircntre
sexul feminin şi cel masculin Am observat că după instalarea menopauzei la femei
prevalenţa SM (corespunzătoare Harmonised I) la femei depăşeşte 50 iar la bărbaţi atinge
42 Utilizacircnd European Standard Population (175) am efectuat standardizarea funcţie de
vacircrstă şi sex a prevalenţelor bdquocruderdquo (brute) obţinute icircn populaţia studiată şi am calculat o
prevalenţă standardizată a SM de 2732 (95 CI 2460-3003) La sexul masculin
prevalenţa standardizată a SM a fost de 2760 (95 CI 2362 - 3157) iar la sexul feminin
am obţinut valoarea de 2854 (95 CI 2462 - 3245)
Discuţii
Studiul desfăşurat de noi a investigat prezenţa SM icircn populaţia unui Cabinet de Medicină
de Familie Icircn Europa prevalenţa SM este de aproximativ 25-30 Statele Unite Ale Americii
au raportat o prevalenţă a sindromului metabolic de 22 icircn populaţia cu vacircrsta peste 20 ani
pe cacircnd la vacircrstă mai mare de 60 ani s-a observat o prevalenţă de 44 (1419) Icircn studiul
efectuat am observat o prevalenţă standardizată de 2732 (95 CI 2460-3003) care este
icircn concordanţă cu prevalenţele raportate icircn Europa precum şi o creştere a ponderii SM icircn
populaţie icircn raport cu vacircrsta Am preferat utilizarea definiţiei Harmonised I pentru SM
deoarece cuprinde criterii adaptate pentru o abordare unitară a SM mărind astfel numărul
pacienţilor diagnosticaţi şi care vor urma tratament conform Ghidurilor de Practică Medicală
Limitările acestui studiu sunt legate de faptul că este concentrat doar pe populaţia asigurată şi
neasigurată aflată pe lista unui medic de familie din mediul urban Se pot efectua studii la
nivelul Cabinetelor Medicale de Medicină de Familie dar trebuie să se aplice pe un lot
reprezentativ urbanrural care să reprezinte populația acelei regiuni Utilizarea structurilor
populaționale atașate cabinetului de MF este utilă atacirct pentru cele clinice cacirct și pentru cele
epidemiologice deoarece surprinde populația studiată icircn mediul de viață cotidian Prevalenţa
mare a SM icircn populaţia studiată necesită aplicarea unei politici eficiente de sănătate publică
deoarece riscul producerii evenimentelor cardiovasculare majore poate fi redus semnificativ
printr-un control adecvat al componentelor SM (obezitate dislipidemii hipertensiune
arterială şi hiperglicemie
Studiul sindromului inflamator cronic icircn cadrul sindromului metabolic
Obiectivele studiului
- studierea markerilor inflamaţiei cronice şi aterogenezei la subiecţii cu şi fără SM
- evaluarea importanţei markerilor studiaţi ai inflamaţiei cronice icircn diagnosticul de
ambulator al sindromului metabolic
Material şi metodă
Icircn cercetarea inflamaţiei cronice din SM au fost incluşi 1530 subiecţi de ambele sexe cu
vacircrsta cuprinsă icircntre 18-91 ani icircnscrişi pe lista CMI Popa Elena Studiul s-a desfăşurat icircn
perioada 01012013ndash 31122013 Populaţia ţintă a fost identică cu cea din studiul
epidemiologic şi s-a desfăşurat concomitent cu studiul prevalentei SM Subiecţii au fost
icircmpărţiţi icircn două loturi lotul cu SM (Lot SM) şi lotul de control (fără SM)
Lot SM a) criterii de includerevacircrsta peste 18 ani recrutarea pe baza semnării
Consimţămacircntului liber informat SM diagnosticat pe baza criteriilor Harmonised I (14) b)
criterii de excluderevacircrstă sub 18 anirefuzul semnării Consimţămacircntului liber informat
femei icircn perioada de graviditate sau de lactaţie
Lot Control (fără SM) a) criterii de includerevacircrsta peste 18 anirecrutarea pe baza
semnării Consimţămacircntului liber informat absenţa sindromului metabolic b) criterii de
excluderevacircrstă sub 18 ani refuzul semnării Consimţămacircntului liber informatfemei icircn
perioada de graviditate sau de lactaţie
Rezultate
Lotul cu SM (Lot SM) a fost format din cei 389 pacienţi diagnosticaţi cu SM conform
criteriilor Harmonised I Lotul SM a fost alcătuit din 185 bărbaţi şi 204 femei raportul
bărbaţifemei fiind de 090 (95 CI073-112) Lotul de control (fără SM) a fost alcătuit
din cei 1141 participanţi care nu au icircntrunit criteriile de diagnostic ale sindromului metabolic
Din cei 1141 de subiecţi 530 au fost de sex masculin iar 611 de sex feminin raportul
bărbaţifemei fiind 087 (95 CI 077-097) Vacircrsta subiecţilor a fost semnificativ mai mare
icircn lotul pacienţilor cu SM (5976plusmn1322 ani) comparativ cu lotul martor (4333plusmn 1748 ani) (t-
Test Plt00001) Aşa cum ne-am aşteptat valorile medii ale componentelor clinice ale SM
(circumferinţa abdominală tensiunea arterială sistolică şi diastolică) au fost mai mari icircn lotul
pacienţilor cu SM (t-Test Plt0001 pentru fiecare dintre componente) Studiind parametrii
biochimici incluşi icircn diagnosticul SM valorile medii ale glicemiei şi TG au fost semnificativ
mai crescute icircn lotul SM (t-Test Plt00001 pentru ambele constante) Icircn acelaşi timp
valoarea medie determinată a HDL-col a fost semnificativ mai mare la subiecţii din lotul
martor ( t-Test Plt00001) SM se caracterizează printr-o dislipidemie aterogenă
caracterizată de creşterea TG scăderea HDL-col concomitent cu creşterea LDL-col creşterea
Non-HDL-col şi a raportului de aterogenitate (Col totalHDL-col) (185) Comparacircnd cele
două loturi am observat că valoarea medie a LDL-colesterolului determinată icircn lotul
pacienţilor cu SM a fost semnificativ mai mare faţă de subiecţii din lotul martor (t-Test P =
00002) Măsurarea Non-HDL-colesterolului a arătat prezenţa unei diferenţe semnificative
icircntre cele două loturi (figura 420 B) Astfel icircn concordanţă cu prezenţa dislipidemiei
aterogene valoarea medie a Non-HDL-col a fost semnificativ mai mare (t-Test Plt 00001) icircn
lotul cu SM comparativ cu lotul de control Icircn contextul inflamației cronice şi aterogenezei
din sindromul metabolic am evaluat sensibilitatea şi specificitatea Non-HDL-colesterolului
ca test diagnostic al SM Valoarea Non-HDL-colesterolului care prezice cu cea mai mare
acurateţe prezenţa SM a fost de 151 mgdl (punctul de ldquocut-offrdquo) pentru care am calculat o
sensibilitate de 64 27 şi o specificitate de 5872 Calculul ariei AUC a furnizat valoarea
de 0605 şi deci determinarea concentraţiei serice a parametrului Non-HDL-colesterolului are
valoarea unui marker cu acurateţe redusă Am studiat valorile raportului Col totalHDL-col icircn
cele două loturi şi am constatat că la pacienţii cu SM valoarea media a raportului de
aterogenitate este semnificativ mai mare faţă de valoarea raportului determinată icircn lotul
martor (t-Test Plt 00001) Pentru raportul de aterogenitate studiat analiza curbei ROC a
arătat că valorile mai mari decacirct punctul de ldquocut-offrdquo de 431 prezic prezenţa SM cu cea mai
mare sensibilitate (6381 ) şi specificitate (6582)Valoarea AUC pentru indicele de
aterogenitate a fost de 0667 şi icircn studiul SM acest indice poate fi considerat un marker cu
acurateţe redusă Valoarea medie determinată a acidului uric la subiecţii fără SM a fost
semnificativ mai mică decacirct icircn lotul SM (t-Test Plt 00001) Curba ROC a arătat că valorile
acidului mai mari de 43 mgdl prezic diagnosticul de SM cu cea mai mare sensibilitate
(8107) şi specificitate (5328) Pentru acidul uric AUC a avut valoarea de 0655 şi
icircncadrează determinarea acidului uric seric icircn racircndul testelor cu acurateţe redusă (187)
Comparacircnd populaţiile de leucocite (tabel XXI) valoarea medie determinată a
numărului de Eo a fost semnificativ mai mare icircn lotul cu SM comparativ cu lotul martor (t-
Test Plt0001) Analizacircnd curba ROC trasată pentru valorile numărului de Eo am observat
că valorile ldquocut-offrdquo mai mari de 200 Eomm3
pot prezice prezenta SM cu cea mai mare
specificitate (7705) şi sensibilitate (3978) Pentru diagnosticul SM calculul ariei AUC a
arătat faptul că determinarea numărului de Eo are valoarea unui test diagnostic cu acurateţe
redusă (AUC = 0 589) Comparacircnd valorile medii ale fibrinogenului am calculat o diferenţă
statistic semnificativă icircntre cele două loturi valoarea medie a fibrinogenului fiind mai mare icircn
lotul SM ((t-Test P lt 00001) Cu ajutorul curbei ROC am observat că valorile fibrinogenului
mai mari de 306 mgdl prezic sindromul metabolic cu o sensibilitate de 7511 şi specificitate
de 6056 Fibrinogenul a fost icircncadrat icircn categoria markerilor inflamatori cu acurateţe
redusă AUC avacircnd valoarea de 0690 Icircn loturile de studiu am calculat AUC corespunzătoare
criteriilor de diagnostic ale SM Am observat că icircn cazul scorului Harmonised I
sensibilitatea şi specificitatea sunt de 100 iar AUC este egală cu 1000 Pentru cele cinci
criterii de diagnostic AUC a avut valori icircntre 0636 (pentru variabila HDL-col) şi 0804
(pentru variabila CA) (figura 431)
AUC ES 95 CI
Scor SM Harmonised I 1000 00000 0997 - 1000
CA (cm) 0804 00133 0781 - 0825
TAD (mmHg) 0666 00169 0639 - 0692
TAS (mmHg) 0757 00148 0732 - 0780
Glicemie (mgdl) 0742 00160 0717 - 0766
Trigliceride (mgdl) 0756 00175 0732 - 0780
HDL- colesterol 0636 00183 0609 - 0662
Figura 431 Analiza AUC criterii de diagnostic ale SM
Studiind figura 432 se observă că valoarea AUC pentru markerii studiaţi este cuprinsă
icircntre 0589 (icircn cazul variabilei Eo) şi 0690 (icircn cazul fibrinogenului) Icircn contextul SM
acurateţea acestor markeri ai inflamaţiei cronice şi disfuncţiei endoteliale poate fi considerată
redusă deoarece AUClt07 pentru toţi markerii investigaţi (figura 431) Totuşi valorile ariilor
parametrilor reprezentaţi icircn figura 431 sunt apropiate de valorile AUC ale variabilelor TAD
şi HDL-col (figura 432) şi deci pot fi utilizaţi pentru completarea diagnosticului de SM
AUC ES 95 CI
Non-HDL-colesterol 0605 00171 0580 - 0630
Col totalHDL-col 0607 00163 0642 - 0691
Acid uric 0655 00161 0630 - 0679
Fibrinogen 0690 00206 0658 - 0720
Eozinofile 0589 00176 0564 - 0615
Figura 432 AUC markeri ai SM inflamaţiei cronice şi aterogenezei
Discuţii
Status-ul proinflamator din SM asociat cu insulinorezistenţa şi disfuncţia endotelială
constituie o verigă de legătură dintre inflamaţie şi procesele metabolice complexe icircnsoţindu-
se de deteriorarea funcţiilor vasculare şi creşterea riscului de evenimente cardiovasculare
majore (2858) Studiul efectuat a arătat o diferenţă icircntre vacircrstele subiecţilor din cele două
loturi vacircrsta pacienţilor cu SM fiind semnificativ mai mare (Plt0001) comparativ cu subiecţii
normali confirmacircnd faptul menţionat că vacircrsta reprezintă unul din stimulii care agravează
inflamaţia cronică Am arătat că valorile fibrinogenului sunt mai mari icircn SM comparativ cu
Scor Harmonised I
0 20 40 60 80 100
0
20
40
60
80
100
100-Specificitate
Sen
sib
ilit
ate
Criterii diagnostic SM
0 20 40 60 80 100
0
20
40
60
80
100
100-Specificitate
Sens
ibili
tate
CA
TAD
TAS
Glicemie
Trigliceride
HDL-C
0 20 40 60 80 100
0
20
40
60
80
100
100-Specificitate
Sensi
bilita
te
Non-HDL-C
Col T HDL-C
Acid uric
Fibrinogen
Eozinofile
lotul martor atacirct la bărbaţi cacirct şi la femei icircn concordanţă cu studiile anterioare Evaluarea
fibrinogenului este importantă nu numai icircn SM pentru definirea contextului proinflamator şi
protrombotic ci şi icircn predicţia cardiovasculară la subiecţii normali Studiind populaţiile
leucocitare am obţinut diferenţe semnificative icircn cazul Eo valoarea medie a acestora fiind
semnificativ mai mare icircn lotul cu SM comparativ cu lotul martor (P lt 0001 figura 425B)
Implicarea Eo icircn SM s-a conturat icircn ultimul deceniu aceste celule fiind implicate icircn recrutarea
macrofagelor din ţesutul adipos Experimental s-a constatat că o creştere a Eo apărută ca
urmare a infectării cu helminţi sau stimulare cu IL-5 este urmată de icircmbunătăţirea toleranţei la
glucoză (199) Controlul pe care icircl exercită Eo asupra activării macrofagelor ar putea fi cheia
intervenţiei asupra obezităţii icircn viitorul apropiat(165199) Hiperuricemia asociata frecvent cu
SM este cunoscut ca un factor independent de risc cardiovascular (192 202) In concordanţă
cu aceasta afirmaţie in studiul nostru am constatat ca nivelul seric al acidului uric a fost mai
crescut in lotul cu SM diferenţa semnificativă din punct de vedere statistic (P lt 00001)
Dislipidemia aterogenă din sindromul metabolic şi diabetul zaharat se caracterizează prin
creşterea trigliceridelor şi a Non-HDL-col scăderea HDL-col creşterea numărului de
particule LDL modificate (185190) La pacienţii cu SM am descris un profil aterogenetic
cu risc crescut de evenimente cardiovasculare majore
STUDIUL RECEPTORILOR ACTIVAŢI DE INDUCTORII PROLIFERĂRII
PEROXIZOMILOR-ALPHA IcircN LEUCOCITELE CIRCULANTE
Ipoteza de lucru
Studii experimentale efectuate au arătat că rolul PPARα icircn ateroscleroză derivă din
implicarea acestor receptori icircn limitarea inflamaţiei Plecacircnd de la acest fundament ne-am
propus evidenţierea receptorilor nucleari activaţi de inductorii proliferării peroxizomilor-
alpha (PPARα) prin citometrie de flux icircn leucocitele din sacircngele periferic alături de
evaluarea acestei metode icircn cuantificarea expresiei relative a PPARα ca test diagnostic
precoce al modificărilor metabolice SM Studiul expresiei relative a receptorilor PPARα a
plecat de la premisa că dacă SM se caracterizează printr-un status inflamator cronic nivelul
de expresie a PPARα icircn leucocitele circulante este mai scăzut la pacienţii cu SM comparativ
cu subiecţii normali Referitor la studiul receptorului CD36 am plecat de la presupunerea că
nivelul de expresie al acestui receptor icircn SM este crescut dat fiind importanţa acestui receptor
icircn inflamaţia aterosclerotică Avacircnd icircn vedere efectele receptorilor amintiţi icircn
insulinorezistenţă şi aterogeneză am considerat necesară evaluarea prezenţei receptorului
nuclear PPARα icircn paralel cu studiul receptorului bdquoscavengerrdquo CD-36 prin metoda citometriei
icircn flux Astfel icircn studiul efectuat mi-am propus şi investigarea existenţei unei legături icircntre
nivelul de expresie al receptorilor PPARα şi cel al receptorului CD-36 De asemenea ne-am
icircndreptat atenţia spre stabilirea unor asocieri icircntre componentele clinice şi biochimice ale
sindromului metabolic şi nivelul intensităţilor de fluorescenţă ale PPARα şi CD-36 ca măsură
a expresiei relative a acestor receptori
Material și metodă
Studiul receptorilor PPARα icircn contextul sindromului metabolic s-a desfăşurat icircn
perioada 1012014 -28022014 pe baza metodologiei studiilor de tip caz-martor Am urmărit
identificarea unor diferenţe icircntre expresia receptorilor PPARα la pacienţii cu SM comparativ
cu subiecţii sănătoşi diferenţe care ar putea fi utile icircn diagnosticul precoce al SMRecrutarea
pacienţilor s-a efectuat din pacienţii prezentaţi pentru consultaţie la Cabinetul Individual
ldquoCMI Dr Popa Elenardquo situat icircn strada Ion Creanga din Iaşi Pentru studiul receptorilor
PPARα icircn sindromul metabolic au fost selecţionaţi un număr de 57 de subiecţi 26 de subiecţi
cu SM (constituind lotul SM) şi 31 subiecţi fără SM constituind lotul de control (Lot Non-
SM) Pentru studiul SM pacienţii au fost recrutaţi din masa de populaţie arondată cabinetului
de MF fără istoric de SM diabet zaharat boală cardio-vasculară aflați la primul diagnostic
de SM evaluarea completă a acestora fiind urmată de includerea icircn programul de
management cardiovascular şi metabolic conform Ghidurilor Terapeutice aflate icircn vigoare
Lot SM a) criterii de includerevacircrsta peste 18 ani recrutarea pe baza semnării
Consimţămacircntului liber informatSM nou-diagnosticat pe baza prezenţei a minim trei criterii
de diagnostic pentru SM conform Harmonised I b) criterii de excluderevacircrstă sub 18 ani
refuzul semnării Consimţămacircntului liber informat femei icircn perioada de graviditate sau de
lactaţie SM anterior diagnosticat istoric de diabet zaharat boală cardiovasculară constituită
tratament cu agonişti PPARα (ie fibraţi etc)
Lot martor (Non-SM) a) criterii de includerevacircrsta peste 18 ani recrutarea pe baza
semnării Consimţămacircntului liber informat absenţa diagnosticului de SM b) criterii de
excludere vacircrstă sub 18 ani refuzul semnării Consimţămacircntului liber informat femei icircn
perioada de graviditate sau de lactaţie
Studiul receptorilor PPARα a inclus două subetape
A Studiul componentelor sindromului metabolic conform criteriilor Harmonised I
Evaluarea clinică a participanţilor s-a desfăşurat icircn cadrul Cabinetului de Medicină de
Familie iar determinările hematologice şi biochimice s-au efectuat icircn Laboratorul
Ambulatorului Clinic de Specialitate al Spitalului Clinic de Urgenţă bdquoSf Spiridonrdquo Iaşi
B Evaluarea icircn citometrie de flux a nivelului relativ de expresie a PPARα şi CD36
Studiul receptorilor PPARα s-a desfăşurat icircn Laboratorul de Biologie Moleculară al
Institutului Regional de Oncologie Iaşi prin metoda citometriei icircn flux (19) Nivelul relativ de
expresie al receptorilor nucleari PPARα a fost determinat icircn diferite tipuri de leucocite
circulante polimorfonucleare (PMN) limfocite (Ly) Mo(Mo) şi eozinofile(Eo) Am utilizat o
metodă de citometrie icircn flux optimizată ldquoin houserdquo elaborată icircn cadrul Laboratorului de
Biologie Moleculară al IRO Iaşi Icircn cursul procesului de optimizare am testat mai multe
concentraţii ale anticorpului anti-PPARα 1100 1500 11500 14500 iar icircn urma
determinărilor efectuate şi a analizei statistice concentraţia 1500 a fost considerată optimă
pentru desfăşurarea studiului (tabel XXIII figura 51)
Tabel XXIII Optimizarea concentraţiilor Ac anti-PPARα Diferenţa
mediilor
valorilor
medii
PMN
Diferenţa
mediilor
mediane-
lor
PMN
Diferenţa
mediilor
valorilor
medii
Ly
Diferenţa
mediilor
mediane-
lor
Ly
Diferenţa
mediilor
valorilor
medii
Mo
Diferenţa
mediilor
mediane-
lor
Mo
Diferenţă 0 1300 1600 100 100 700 750
normal - 1100 650 1050 1050 1350 450 900
patologic 1500 2850 2750 3800 3600 2850 2400
11500 -1050 800 3500 3300 2250 1800
14500 2200 2150 1300 1100 2950 2850
AOptimizare
BRepetabilitate
Figura 51 Optimizarea concentraţiei anticorpului anti-PPARα
Icircn concordanţă cu literatura de specialitate icircn cercetarea efectuată intensitatea medie
de fluorescenţă (MFI) a fost utilizată ca măsură pentru evaluarea expresiei celulare a
receptorilor PPARα (212) Un exemplu de analiză a probelor este reprezentat icircn figura 52
Figura 52 Exemplu de analiză flowcitometrică pentru receptorul nuclear PPARα Graficul din stacircnga reprezintă distribuţia leucocitelor iar cel din dreapta ilustrează distribuţia
intensităţii de fluorescenţă pentru populaţiile de celule selectate
Intensitatea Medie a Fluorescenţei (MFI) a CD36 ca o măsură a nivelului relativ de
expresie a acestor receptori la nivelul membranei Mo a fost detectată printr-o metodă
convenţională pentru marcare de suprafaţă şi evaluare pe bază de citometrie icircn flux folosind
aceleaşi probe de sacircnge cu EDTA cu focalizare pe Mo şi utilizacircnd CD14 ca marker specific
pentru Mo (figura 53)
Figura 53Analiza
flowcitometrică
pentru marcajul
CD14 - CD36
Rezultate
Icircn cele două loturi au fost incluşi icircn studiu un număr de 57 de participanţi care au fost
investigaţi din punct clinic şi paraclinic Vacircrsta subiecţilor incluşi icircn studiu a fost cuprinsă
icircntre 18 şi 79 ani iar vacircrsta medie calculată a avut valoarea de 4805 plusmn 1587 ani Pentru sexul
masculin vacircrsta medie este de 4925plusmn1617 ani iar pentru sexul feminin 4689 plusmn1 5ani
diferenţa obţinută icircntre vacircrstele pacienţilor fiind statistic nesemnificativă (P = 085)
Analizacircnd vacircrstele subiecţilor din cele două loturi am observat că vacircrsta medie a pacienţilor
cu SM (5476 plusmn 1183 ani) a fost semnificativ mai mare (t-test P = 0003) decacirct icircn lotul
martor (4258 plusmn 169 ani) Pentru diagnosticul sindromului metabolic am calculat scorul de
SM bazacircndu-ne pe criteriile Harmonised I Conform criteriilor diagnostice din cei 57 de
subiecţi investigaţi un număr de 26 participanţi (46) au fost incluşi icircn lotul cu SM (Lot
SM) iar 31 de subiecţi(54) nu au prezentat acest sindrom constituind lotul martor (Lot
Non-SM) Din punct de vedere al repartiţiei pe sexe nu au existat diferenţe statistic
semnificative raportul bărbaţifemei fiind de 0961 Din totalul celor 28 de bărbaţi incluşi icircn
studiu 4285 (12 bărbaţi) au icircntrunit cel puţin trei criterii diagnostice pentru SM fiind
incluşi icircn lotul SM Icircn acelaşi timp 14 femei reprezentacircnd 4827 din subiecţii de sex
feminin au icircntrunit condiţiile pentru includerea icircn lotul pacienţilor cu SM Valoarea medie
determinată pentru scorul de SM a arătat prezenţa unor valori semnificativ statistic mai mari
din punct (t-test P lt 00001) icircn lotul SM (769plusmn176) comparativ cu lotul martor (174 plusmn
184) Am studiat comparativ media valorilor măsurate ale criteriilor componentelor SM
Analiza statistică a arătat valori semnificativ statistic mai mari pentru CA TG glicemie TAS
şi TAD (plt0001) icircn lotul SM comparativ cu lotul normal Concomitent calculul statistica
evidenţiat o scăderea semnificativă a HDL-colesterolului icircn lotul cu SM comparativ cu
subiecţii din lotul martor (Non-SM) Aplicacircnd testul z am comparat ponderea pacienţilor
diagnosticaţi cu HTA dislipidemie şi tulburări ale metabolismului glucidic icircn lotul SM versus
lot Non-SM şi am constatat prezenţa acestor afecţiuni icircntr-un procent mai mare semnificativ
statistic icircn lotul SM ((plt0001)
Utilizacircnd testul t Student am calculat diferenţele statistice şi icircntre alți parametri
studiaţi care sunt factori de risc cardio-vascular dar care nu sunt componente ale SM Icircn lotul
cu SM valorile acidului uric fibrinogenului Col total Non-HDL-col şi LDL-col au fost
semnificativ mai mari comparativ cu lotul martor (tabel XXVI) Analizacircnd valorile medii ale
populaţiilor de leucocite am identificat doar pentru populaţia de Eo diferenţe statistice icircntre
cele două loturi numărul Eo icircn lotul SM fiind semnificativ mai mare decacirct icircn lotul martorTot
pentru caracterizarea celor două loturi am analizat prezenţa antecedentelor
heredocolaterale (AHC) de diabet zaharat boala cardiovasculară şi dislipidemie pentru toţi
subiecţii investigaţi Astfel existenţa AHC de HTA a fost declarată de 2580 din subiecţii
incluşi icircn lotul martor respectiv de 5384 din numărul pacienţilor cu SM Antecedentele
heredocolaterale de dislipidemie au fost prezente la 3461 din pacienţii cu SM icircn timp ce icircn
lotul martor anamneza a evidenţiat aceste antecedente la 3548 din subiecţi
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα
Icircn cercetarea desfăşurată am utilizat intensitatea medie de fluorescenţă (MFI) ca
măsură a nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn leucocitele studiate Pentru
populaţiile de leucocite analiza computerizată a probelor luate icircn studiu a furnizat valori
pentru MFI a receptorilor PPARα icircn funcţie de cantitatea de anticorpi anti-PPARα marcaţi cu
fluorocrom care se leagă de aceste celule şi apoi sunt captaţi de citometru (figura 59)
A Lot Non - SM
B Lot SM
Figura 59 Analiza flowcitometrică pentru receptorii PPARα icircn leucocite A lot normal B lot SM
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Mo
Analiza probelor efectuată conform protocolului de lucru descris a arătat prezenţa
PPARα icircn Mo recoltate din sacircngele tuturor subiecţilor incluşi icircn această cercetare Pentru toţi
participanţii investigaţi analiza MFI a Ac anti - PPARα icircn populaţia de Mo (Mo) a arătat un
interval de variaţie icircntre [786 395] Valoarea medie a nivelului de expresie relativă a PPARα
calculată pentru Mo a fost de 23210 plusmn7860 Pentru ambele loturi de studiu pacienţilor cu
SM testul Testul Shapiro-Wilk a arătat distribuţia normală a valorilor obţinute pentru nivelul
de expresie al PPARα icircn Mo
Tabel XXVIII Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn Mo
Lot SM Lot Non-SM
N 26 31
Media 22819 23538
SD 5819 7717
Mediana 22400 22600
Minimum 12800 78600
Maximum 35800 37900
Percentila 25 18300 18300
Percentila 75 26200 30350
Pentru pacienţii din lotul SM valoarea medie a MFI icircn Mo a fost de 22819 plusmn 5880 iar
pentru lotul martor s-a calculat o valoare medie a MFI a Ac anti-PPARα de 23538 plusmn 7717
Distribuţia statistică a frecvenţei valorilor MFI obţinute pentru nivelul de expresie a PPARα
icircn Mo subiecţilor din cele două loturi a fost reprezentată icircn figura 511
Figura 511 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti-PPARα icircn Mo
Sub forma unei diagrame de control Shewhart am reprezentat variaţia intensităţii medii de
fluorescenţă pentru anticorpii anti-PPARα icircn MoVariaţia nivelului de expresie relativă a
receptorilor PPARα icircn Mo subiecţilor studiaţi este ilustrată icircn fig 512 513
Figura 512 Lot SM Variaţia
expresiei relative a PPARα icircn Mo
Număr pacienţi
26
Minim 128
Maxim 358
Media 22819
DS 5819
25 din 26 valori ale MFI s-au icircncadrat
icircn intervalul Media plusmn 2DS
Figura 513 Lot Non-SM Variaţia
expresiei relative a PPARα icircn Mo
Număr pacienţi 31
Minimum 786
Maximum 379
Media 23538
DS 7717
Cu excepţia unei singure
determinări valorile calculate s-au
icircncadrat icircn Media plusmn 2DS
Utilizacircnd testul parametric t-Student pentru variabilele cu distribuţie normală am
comparat valoarea medie a intensităţii de fluorescenţă a Ac anti-PPARα icircn lotul cu SM versus
subiecţi fără SM (Lot Non-SM) Analiza statistică efectuată nu a identificat diferenţe icircntre
50 100 150 200 250 300 350 400 450
0
5
10
15
20
25
30
35
MFI anti-PPAR a
Frecv
enta
relati
va (
)
Lot SM
0 50 100 150 200 250 300 350 400 450 500
0
5
10
15
20
25
30
35
MFI anti-PPAR a
Frecv
enta
relati
va (
)
Lot martor
1 6 11 16 21 26 31
0
50
100
150
200
250
300
350
400
450
MFI
anti-
PPAR
a
2282
1106
3458
518
4046
Media
LCI
LCI
1 6 11 16 21 26 31 36
-100
0
100
200
300
400
500
MFI a
nti-PP
AR
a
2354
810
3897
39
4669LCS
LCI
Media
cele două loturi icircn ceea ce priveşte expresia PPARα la nivelul Mo circulante (t- Test P=
069)
Studiul receptorilor PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de AHC şi dislipidemie
Nivelul de expresie al receptorilor PPARα α icircn Mo tinde să fie mai scăzut la subiecţii
cu AHC de HTA comparativ subiecţii care nu au declarat AHC de HTA (P= 006 fig 515)
AHC HTA
Număr 22
Mediana 19950
Percentila 25 17800
Percentila 75 22700
AHC HTA absente
Număr 35
Mediana 24800
Percentila 25 19025
Percentila 75 31700
Figura 515 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Mo funcţie de AHC de HTA
Nu s-au calculat diferenţe semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor
PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de dislipidemie atunci cacircnd aceştia au fost comparaţi cu
subiecţii fără AHC de tulburări ale metabolismului lipidic (t- Test P= 020)
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn limfocite
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn populaţia de Ly a
demonstrat prezenţa receptorilor PPARα icircn Ly tuturor subiecţilor studiaţi Pentru toţi
participanţii investigaţi analiza MFI a Ac anti - PPARα icircn populaţia de Ly a relevat un
interval de variaţie icircntre [748 314] iar valoarea medie a MFI a fost de 18058 plusmn 5600
Pentru ambele loturi aplicarea testului Shapiro-Wilk a evidenţiat distribuţia normală a
valorilor determinate pentru nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Ly Pentru
pacienţii cu SM valoarea medie a MFI determinată pentru expresia PPARα icircn populaţia de
Ly a fost de 18178 plusmn 61 16 iar pentru lotul martor a fost de 16800 plusmn 5229
Tabel XXX Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn limfocite
Lot SM Lot Non-SM
N 26 31
Media 181781 179574
SD 611694 522907
Mediana 165000 168000
Minimum 81300 74800
Maximum 314000 301000
Percentila 25 13400 - 145750
Percentila 75 21800 21700
Distribuţia frecvenţei valorilor MFI a Ac anti-PPARα icircn Ly este redată icircn figura 518
Figura 518 Distribuţia frecvenţelor relative a MFI a Ac anti-PPARα icircn Ly
94 din determinările efectuate pentru determinarea nivelului de expresie relativă al
MFI
ant
iPPA
R
a_Mo
190
200
210
220
230
240
250
260
270
280
DA NU
AHC HTA
P=006
50 89 128 167 206 244 283 322 361 400
0
5
10
15
20
25
30
35
MFI anti-PPAR a
Frecv
enta
relati
va (
)
Lot SM
0 50 100 150 200 250 300 350
0
5
10
15
20
25
30
35
40
MFI anti-PPAR a
Frec
venta
relat
iva (
)
Lot Non-SM
receptorilor PPARα icircn limfocitele subiecţilor cu SM s-au icircncadrat icircn intervalul Media plusmn 2DS
Figura 5 19 Lot SM Variaţia expresiei
relative a PPARα icircn Ly
Număr pacienţi 26
Minimum 813
Maximum 31400
Media 18178
Deviaţia Standard 6116
25 valori s-au icircncadrat icircn Media plusmn 2DS
Pentru lotul Non-SM diagrama de control (figura 520) a arătat toate valorile
determinate pentru lotul Non-SM se icircncadrează icircntre LCS şi LCI
Figura 520 Lot Non -SM Variaţia
expresiei relative a PPARα icircn Ly
Număr pacienţi 31
Minimum 748
Maximum 30100
Media 179574
Deviaţia Standard 5229
96 din valori icircncadrate icircn Media plusmn 2DS
Aplicarea testului t-Student pentru valorile medii ale intensităţii de fluorescenţă ale
PPARα icircn Ly nu a arătat existenţa unei diferenţe statistic semnificative icircntre lotul cu SM şi
lotul martor(t- Test P= 088)
Analiza receptorilor PPARα icircn Ly subiecţilor cu AHC de HTA şi dislipidemie
Studiind populaţiile de Ly la subiecţii care au prezentat AHC de hipertensiune
arterială analiza flowcitometrică a relevat existenţa unor valori mai mici pentru MFI la aceşti
subiecţi comparativ cu cei fără AHC de HTA (fig 522) deşi scăderea observată nu a
icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică (t- Test P = 009)
AHC HTA
Număr 22
Mediana 16000
Percentila 25 12700
Percentila 75 17100
AHC HTA absenţe
Număr 35
Mediana 18700
Percentila 25 14900
Percentila 75 23175
Figura 522 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Ly funcţie de AHC de HTA
Nu am calculat diferenţe statistic semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor
PPARα icircn populaţiile de Ly ale subiecţilor la care am identificat AHC de dislipidemie
comparativ cu cei care nu au declarat antecedente familiale de dislipidemie (t- Test P= 051)
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn neutrofile (PMN)
Analiza flowcitometrică a evidenţiat prezenţa PPARα icircn PMN recoltate din sacircngele
venos al tuturor participanţilor la studiu Pentru toţi subiecţii investigaţi analiza MFI a Ac -
PPARα icircn populaţia de PMN a relevat un interval de variaţie de [163419] iar valoarea medie
a MFI pentru Ac anti-PPARα a fost de 26392 plusmn 7064 Testul Shapiro-Wilk a arătat o
distribuţie normală a valorilor intensităţii medii de fluorescenţă a anticorpilor anti-PPARα atacirct
icircn lotul pacienţilor cu SM cacirct şi icircn lotul martor
1 6 11 16 21 26 31
-50
0
50
100
150
200
250
300
350
400
MFI
anti-
PPAR
a
1818
595
3041
-17
3653
Media+2DS
Media- 2DS
1 6 11 16 21 26 31 36
0
50
100
150
200
250
300
350
MFI
ant
i-PPA
R
a
1796
750
2841
227
3364
Media+2DS
Media
Media- 2DS
MFI
anti-
PPAR
a Ly
130
140
150
160
170
180
190
200
210
DA NU
AHC HTA
P=009
Tabel XXXII Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn PMN
Lot SM Lot Non-SM
N 26 31
Media 26273 26480
SD 6915 7088
Mediana 25900 25500
Minimum 17200 16300
Maximum 39500 41900
Percentila 25 19800 19600
Percentila 75 30500 31500
Icircn cele două loturi distribuţia frecvenţei valorilor nivelului relativ de expresie a
receptorilor PPARα icircn PMN a fost reprezentată sub formă de histograme (fig 525)
Figura 525 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti-PPARα icircn PMN
Pentru cei 26 de pacienţi din lotul cu SM a valoarea medie a nivelului de expresie
relativă a receptorilor PPARα icircn PMN a fost de 26273 plusmn 6915 Studiind diagrama Shewhart
din figura 526 se observă că toate valorile obţinute pentru nivelul de expresie relativă
PPARα icircn PMN investigate se icircncadrează icircntre limitele definite de valorile medii plusmn 2DS
Figura 526 Lot SM
Variaţia expresiei relative a PPARα icircn
PMN
Număr pacienţi 26
Minimum 17200
Maximum 39500
Media 26273
Deviaţia Standard 6915
Valorile MFI icircncadrate icircn Media plusmn 2DS
Pentru lotul martor valoarea medie calculată a MFI a anticorpilor anti-PPARα a fost de
26480 plusmn 7088 peste 95 din valorile MFI fiind cuprinse icircn Media plusmn 2DS (figura 527)
Figura 527 Lot Non-SM Variaţia expresiei
relative a PPARα icircn PMN
Număr pacienţi 31
Minimum 16300
Maximum 41900
Media 26480
Deviaţia Standard 7088
30 valoriicircn Media plusmn 2DS
Pentru PMN analiza statistica nu a arătat existenţa unei diferenţe statistic semnificative icircntre
nivelul de expresie relativă a PPARα la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii din lotul
Non-SM (t- Test P= 090) Studiind populaţiile de PMN la subiecţii care au prezentat AHC
de HTA nu am calculat o diferenţă statistic semnificativă icircntre expresia receptorilor PPARα
la subiecţii cu istoric familial de hipertensiune arterială comparativ cu cei pentru care nu s-au
notat AHC de HTA (t- Test P= 013)De asemenea am identificat diferenţe icircntre nivelul de
expresie al PPARα icircn PMN subiecţilor care prezentau AHC de dislipidemie comparativ cu
cei fără AHC de dislipidemie (t- Test P= 017)
50 100 150 200 250 300 350 400 450 500
0
5
10
15
20
25
30
35
MFI anti-PPAR a
Frecve
nta rel
ativa (
)
Lot SM
50 100 150 200 250 300 350 400 450 500
0
5
10
15
20
25
30
MFI anti-PPAR a
Frecv
enta
relati
va (
)
Lot Non-SM
1 6 11 16 21 26 31
0
50
100
150
200
250
300
350
400
450
500
MFI
anti-
PPA
R
a
2627
1244
4010
553
4702
Media + 2DS
Media - 2 DS
Media
1 6 11 16 21 26 31 36
0
50
100
150
200
250
300
350
400
450
500
MFI
anti-
PPAR
a
2648
1230
4066
522
4774
Media+ 2DS
Media - 2DS
Media
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile Tabel XXXIV Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn Eo
Lot SM Lot Non-SM
N 26 31
Mediaplusmn SD 141057 plusmn 47604 172209 plusmn 37565
Mediana 142450 171300
Minimum 35000 68500
Maximum 233700 250600
Percentila 25 119300 153225
Percentila 75 169700 199550
Am studiat nivelul relativ de expresie a receptorilor PPARα icircn Eo iar rezultatele au
fost figurate sub forma de histograme (figura 532)
Figura 532 Distribuţia frecventelor relative ale valorilor MFI anti- PPARα icircn Eo
Din diagrama Shewhart (figura 533) se observă că toate valorile determinate pentru
nivelul de expresie relativă a PPARα icircn Eo pentru lotul SM s-au icircncadrat icircn [Media plusmn 3 DS]
peste 90 din determinări fiind cuprinse icircn [Media plusmn 2 DS] iar icircn [Media plusmn 1 DS] sunt
incluse peste 65 din valorile MFI
Figura 533 Lot SM
Variaţia expresiei relative a PPARα icircn Eo
Număr pacienţi 26
Minimum 35000
Maximum 233700
Media 141057
Deviaţia Standard 47604
24 valori icircncadrat eicircn [Media plusmn 2DS]
Pentru subiecţii incluşi icircn lotul martor analiza diagramei (figura 534) a arătat că
toate cele 31 de valori ale MFI pentru PPARα icircn Eo se icircncadrează icircn [Media plusmn 3DS] iar 30
dintre acestea se icircncadrează icircn [ Media plusmn 2 DS]
Figura 534 Lot Non -SM
Variaţia expresiei relative a PPARα icircn Eo
Număr pacienţi 31
Minimum 685
Maximum 2506
Media 172209
Deviaţia Standard 375 65
30 valori icircncadrate icircn [Media plusmn 2DS]
Comparacircnd subiecţii cu SM cu cei din lotul martor am observat o scădere
semnificativă statistic a MFI a Ac anti - PPARα icircn Eo pentru pacienţiir cu SM ( figura 535)
PPARα Eo Lot Non-SM
Număr 31
Mediana 171300
Percentila 25 152325
Percentila 75 199550
PPARα Eo Lot SM
Număr 26
Mediana 142450
Percentila 25 119300
Percentila 75 169700
Figura 5 35 Comparaţie icircntre nivelul de expresie a PPARα icircn Eo
0 500 1000 1500 2000 2500 3000
0
10
20
30
40
50
MFI anti-PPAR a
Frecvent
a relativa
()
Lot SM
400 800 1200 1600 2000 2400 2800
0
5
10
15
20
25
30
35
40
45
MFI anti-PPAR a
Frecenta
relativa
()
Lot Non-SM
1 6 11 16 21 26 31
-500
0
500
1000
1500
2000
2500
3000
MFI a
nti-PP
AR
a
14106
4765
23447
94
28117
Media + 2DS
Media- 2DS
LCI
LCS
1 6 11 16 21 26 31 36
500
1000
1500
2000
2500
3000
MFI an
ti-PPA
R a
17221
9708
24734
5951
28490
LCI
Media-2DS
Media
Media +2 DS
LCS
1200
1300
1400
1500
1600
1700
1800
1900
Lot SM Lot Non-SM
P=00072
Cu ajutorul curbei ROC am evaluat posibilitatea utilizării MFI a Ac anti - PPARα icircn
Eo ca marker pentru diagnosticul SM Valoarea MFI a Ac anti - PPARα icircn Eo care prezice cu
cea mai mare acurateţe prezenţa SM a fost de 1533 (punctul de ldquocut-offrdquo) pentru care am
calculat o sensibilitate de 5652 şi o specificitate de 7778 Calculul ariei AUC a furnizat
valoarea de 0663 şi deci determinarea parametrului MFI anti- PPARα icircn Eo are valoarea
unui test cu acurateţe redusatilde icircn diagnosticul SM Studiind expresia PPARα icircn Eo la subiecţii
care au prezentat AHC de HTA am observat o scădere semnificativă statistic (P = 00023) a
expresiei PPARα la subiecţii cu istoric familial de HTA comparativ cu subiecţii fatilderatilde AHC de
HTA (figura 537)
AHC HTA
Număr 22
Mediana 148800
Percentila 25 116425
Percentila 75 170750
AHC HTA absente
Număr 35
Mediana 170850
Percentila 25 143700
Percentila 75 195000
Figura 537 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Eo funcţie de AHC de HTA
Studiind subiecţii cu AHC declarate de dislipidemie nu am identificat diferenţe icircntre
nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Eo subiecţilor cu AHC de dislipidemie
comparativ cu cei care nu au declarat prezenţa AHC de dislipidemie (t - Test P = 067)
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor CD36
Am studiat expresia receptorilor CD36 icircn Mo subiecţilor incluşi icircn studiu
Lot Non - SM
BLot SM
Figura 539 Analiza flowcitometrica pentru receptorii CD36 icircn Mo
Pentru toţi participanţii la studiu valorile MFI au variat icircn intervalul [817 6933] iar
valoarea medie a MFI a Ac anti-CD36 a fost de 397133 plusmn 120902 Tabel XXXVII Statistică descriptivă pentru a CD36 icircn Mo
Lot SM Lot Non-SM
Media 429034 370377
Deviatia Standard 109051 125514
Mediana 411000 362800
Minimum 266400 81700
Maximum 693300 616800
Percentila 25 346200 273750
Percentila 75 469000 453300
Distribuţia frecvenţelor relative a MFI au fost prezentate sub formă histogramelor
Figura 541 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti - CD36 icircn Mo
MFI
ant
i-PPA
R a Eo
1000
1100
1200
1300
1400
1500
1600
1700
1800
1900
DA NU
AHC HTA
P=00023
1000 2000 3000 4000 5000 6000 7000 8000
0
5
10
15
20
25
MFI anti-CD36
Frecve
nta rela
tiva (
)
Lot SM
0 1778 3556 5333 7111
0
5
10
15
20
25
30
35
MFI anti-CD36
Frecve
nta rel
ativa (
)
Lot Non - SM
Referitor la lotul SM 92 din valorile MFI a Ac anti- CD36 s-au icircncadrat icircn
intervalul Media plusmn 2 DS (figura 542) iar pentru lotul martor peste 90 dintre acestea icircn
Media plusmn 2 DS (figura 543)
Figura 542 Lot SM
Variaţia MFI anti-CD36 icircn Mo
Număr pacienţi 26
Minimum 2664
Maximum 6933
Media 429034
Deviaţia Standard 109051
Figura 543 Lot Non -SM
Variaţia MFI anti- CD36 icircn Mo
Număr 31
Minimum 81700
Maximum 616800
Media 370377
Deviaţia Standard 125514
Comparacircnd subiecţii cu SM cu cei din lotul normal am constatat o tendinţă de creştere
a expresiei CD36 icircn lotul cu SM((t - Test P= 0067)
MFI anti - CD36 Lot Non-SM
Număr 31
Mediana 3628
Percentila 25 2737
Percentila 75 4533
MFI anti - CD36 Lot SM
Număr 26
Mediana 4110
Percentila 25 3462
Percentila 75 4690
Figura 544 Comparaţie icircntre cel două loturi privind MFI anti - CD36 icircn Mo
Referindu-ne la subiecţii cu AHC de HTA am observat o tendinţă de creştere a
valorilor MFI anti-CD36 comparativ cu cei care nu au avut AHC de HTA (t - Test P = 0 08)
AHC HTA
Număr 22
Mediana 442800
Percentila 25 355275
Percentila 75 519475
AHC HTA absenţe
Număr 35
Mediana 377400
Percentila 25 316900
Percentila 75 443400
Figura 545 Comparaţie icircntre expresia CD36 icircn Mo funcţie de AHC de HTA
Nu s-au calculat diferenţe semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor
PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de dislipidemie atunci cacircnd aceştia au fost comparaţi cu
subiecţii fără AHC de dislipidemie (t - Test P=031)
Corelaţii icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα si CD36
Studiind valorile intensităţii medii de fluorescenţă a Ac anti-PPARα icircn Mo Ly şi
PMN am observat că nivelul de expresie celularatilde a PPARα icircn Mo Ly şi PMN sunt corelate
puternic pozitiv atacirct icircn lotul SM cacirct şi icircn lotul martor(fig547 548)
1 6 11 16 21 26 31
0
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
Pacienti
MFI a
nti-CD
36
42903
21093
64714
10188
75619
LCI
Media
LCS1 6 11 16 21 26 31 36
-1000
0
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
MFI a
nti- C
D36
37038
11935
62141
-616
74692Media + 2 DS
Media
Media - 2 DS
3200
3400
3600
3800
4000
4200
4400
4600
4800
Lot SM Lot Non-SM
P = 00676
MFI
anti-
CD36
3400
3600
3800
4000
4200
4400
4600
4800
5000
DA NU
AHC HTA
P = 008
Figura 547 Studiul relatiilor dintre
receptorii PPARα icircn SM A Mo vs PMN B Mo vs Ly
C PMN vs Ly Graficul ilustrează coeficienţii r P dreapta de
regresie (linia centrala) intervalul de icircncredere
95 şi intervalul de predicţie 95
Figura 548 Corelaţii icircntre receptorii PPARα icircn lotul
martor
A Mo vs PMN
B Mo vs Ly
C PMN vs Ly
Tot pentru lotul SM cacircnd am evaluat relaţia dintre nivelul de expresie relativă a
receptorilor PPARα icircn Eo şi nivelul de expresie relativa a receptorilor CD 36 am obţinut o
corelaţie negativă (r = - 05 P = 001) (fig 549 A)
50 100 150 200 250 300 350 50
100
150
200
250
300
350
400
450
500
PPARα Ly
PPARα PMN
y = 56641 + 1159 x r = 086 P lt 0001
C
50 100 150 200 250 300 350 400 0
50
100
150
200
250
300
350
PPARα Mo
PPARα Ly
y = 36665 + 0607 x r = 090 P lt 0001
B
150 200 250 300 350 400 450 0
50 100 150 200 250 300 350 400 450 500
PPARα PMN
PPARα Mo
y = 2505 + 0879 x r = 081 P lt 0001
A
50 100 150 200 250 300 350
50 100 150 200 250 300 350 400 450 500
PPARα Ly
PPARα PMN
y = 95668 + 0919 x r = 081 P lt 0001
C
100 150 200 250 300 350 400
0
50
100
150
200
250
300
350
400
PPARα Mo
PPARα Ly
y = -7503 + 0829 x r = 079 P lt 0001
B
100 150 200 250 300 350 400
50
100
150
200
250
300
350
400
450
500
PPARα Mo
PPARα PMN
y = 61384 + 0882 r = 074 P lt 0001
A
Figura 549 Corelaţii icircntre expresia PPARα icircn Eo şi alte tipuri de receptori investigaţi A PPARα Eo şi CD 36 (Lot SM) B PPARα Eo şi PPARα Mo( Lot Non-SM)
Icircn lotul martor am identificat o asociere moderată pozitivă (r = 038 P = 0033) icircntre
nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Eo şi Mo (figura 549B) corelaţie absentă icircn
lotul pacienţilor cu SM
Corelaţii dintre receptorii studiaţi şi componentele sindromului metabolic
Icircn lotul de control analiza statistică a relevat faptul că icircntre circumferinţa
abdominală (CA ) şi nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Mo Ly şi PMN există o
corelaţie inversă adică scăderea expresiei PPARα la nivelul acestor populatii celulare ar fi
icircnsoţită de creşterea CA (figura 550
Figura 550Corelaţii dintre receptorii
PPARα si CA A Mo B Ly C PMN
La pacienţii cu SM am notat o corelatie moderată negativă statistic semnificativă
icircntre TG şi valorile MFI a Ac anti- PPARα icircn Mo şi Ly( fig 551)
150 200 250 300 350 400 450 50
60
70
80
90
100
110
PPARα PMN
CA r = - 040 P = 0024
C
50 100 150 200 250 300 350 50
60
70
80
90
100
110
PPARα Ly
CA r = - 046 P = 0009
B
50 100 150 200 250 300 350 400 50
60
70
80
90
100
110
PPARα Mo
CA r = - 042 P = 0017
A
50 100 150 200 250 300 350 400 500
1000
1500
2000
2500
3000
PPARα Mo
PPARα Eo
r = 038 P = 0033
B
0 500 1000 1500 2000 2500 1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
PPARα Eo
CD36
r = 050 P = 0010
A
Figura 551 Lot SM Corelaţie icircntre expresia PPARα şi TG (A Mo B Ly)
Analizand corelatia dintre receptorii CD36 si valorile TA la pacientii cu SM am observat
o asociere pozitivă asteptată intre TAD si nivelul de expresie al receptorilor CD36 (fig 552)
Figura 552 Lot SM Corelaţii icircntre expresia
receptorilor CD36 şi valorile tensiunii arteriale
diastolice
Studiind corelaţiile dintre receptorii PPARα şi HDL-col la subiecţii din lotul martor am
notat o asociere pozitivă icircntre expresia PPARα icircn Mo şi Ly cu HDL-col (fig 553)
Figura 553 Lot martor Corelaţii icircntre HDL-col şi expresia PPARα icircn Mo(A) Ly(B)
Icircn lotul normal am evidenţiat corelaţii pozitive moderate dar semnificative statistic icircntre
CA şi valorile TAS (r = 062 P lt 0001) respectiv TAD (r = 050 P=0004) precum şi icircntre
CA şi glicemia subiecţilor normali (r = 052 P = 0003) Aceste date icircmpreună cu relaţia
invers proporţională identificată icircntre HDL-col şi CA (r = 050 P = 001) susţin validitatea
acestui studiu Icircn lotul subiecţilor cu SM am observat o corelaţie moderat pozitivă icircntre
expresia PPARα icircn populaţiiile de Mo şi Eo şi concentraţia a HDL-col (fig 554)
B
100 150 200 250 300 350 20
30
40
50
60
70
80
90
100
PPARα Ly
HDL-col-(mgdl)
r = 036 P = 0046
A
150 200 250 300 350 400 20
30
40
50
60
70
80
90
100
PPARα Mo
HDL-col-(mgd)l
r = 035 P = 005
70 75 80 85 90 95 100 1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
TAD (mmHg)
CD36
r = 048 P = 0013
B
50 100 150 200 250 300 350 -100
0
100
200
300
400
500
PPARα Ly
TG(mgdl)
r = - 042 P = 003
A
50 100 150 200 250 300 350 400 -100
0
100
200
300
400
500
PPARα Mo
TG ( mgdl) r =- 0 43 P = 0027
Figura 554 Corelaţii icircn SM icircntre HDL-col şi expresia PPARα icircn Mo (A) şi Eo(B)
Corelaţii icircntre nivelul de expresie relativă a PPARα şi markeri ai disfuncţiei
endoteliale şi inflamaţiei cronice
Deşi nu a icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică am reţinut corelaţia invers
proporţională (r = - 0331 P = 006) dintre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα
icircn PMN şi concentraţia serică a Non-HDL-colesterolului
Studiind relaţiile dintre parametri icircn lotul de pacienţi cu SM am observat o corelaţie
moderată invers proporţională icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Eo şi
acidul uric seric (figura 555 A) corelaţie absentă la subiecţii fără SM
Figura 555 Lot SM corelaţia dintre expresia PPARα icircn Eo şi acidul uric (A) respectiv
PPARα şi fibrinogen (B)
Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P=008) am notat pentru
pacienţii cu SM corelaţia invers proporţională dintre expresia PPARα icircn Eo şi concentraţia
serică a fibrinogenului ( figura 555B)
V5 Discuţii
Icircn cadrul lucrării de doctorat am studiat nivelul de expresie relativă a PPARα icircn
leucocitele pacienţilor cu SM comparativ cu cea a subiecţilor normali Expresia PPARα a fost
studiată icircn paralel cu cea a CD36 glicoproteină exprimată pe suprafaţa a numeroase celule
din organismul uman inclusiv pe cea a Mo şi macrofagelor Prin funcţia sa de receptor pentru
particulele oxidate de LDL CD36 cunoscut ca bdquoscavenger receptorrdquo de clasa B sau
bdquotrombospodin receptorrdquo contribuie la dezvoltarea inflamaţiei de la nivel endotelial şi
formarea plăcii de ateroscleroză Referitor la studiul PPARα icircn Eo icircn sindromul metabolic
menţionăm că studiul nostru este primul care arată că nivelul de expresie a proteinei PPARα
icircn Eo măsurat prin citometrie icircn flux este semnificativ mai redus la pacienţii care sunt
diagnosticaţi cu acest sindrom De asemenea icircn lotul cu SM cercetat icircn cadrul studiului
receptorilor PPARα numărul Eo circulante a fost semnificativ mai crescut la pacienţii cu SM
B
0 500 1000 1500 2000 2500 200
250
300
350
400
450
PPARα Eo o
Fibrinogen mgdl
r =- 036 P = 008
0 500 1000 1500 2000 2500 1 2 3 4 5 6 7 8 9
10 11
PPARα Eo_
Acid uric(mgdl) r = 048 P = 0014 A
0 500 1000 1500 2000 2500 10
20
30
40
50
60
70
80
PPARα Eo
HDL(mgdl)
r = 044 P = 0024
B
100 150 200 250 300 350 400 10
20
30
40
50
60
70
80
PPARα Mo
HDL( mgdl)
r = 046 P = 0019
A
(P = 003) Aceste constatări conduc la ipoteza că Eo joacă un rol special icircn mecanismele
patogenice declanşate icircn sindromul metabolic şi că receptorii PPARα sunt importanţi icircn
implicarea Eo icircn obezitate şi insulinorezistenţă Creşterea numărului de Eo circulante este
urmată de eliberarea mediatorilor proinflamatori iar reducerea expresiei PPARα icircn Eo
determină perturbarea mecanismelor de control al inflamaţiei cu exacerbarea cascadei
proinflamatorii Consecutiv se agravează disfuncţia endotelială şi se accelerează progresia
leziunilor de ateroscleroză Extrapolacircnd aceste ipoteze putem spune că asocierea raportată
dintre boala ischemică coronariană şi Eo poate fi şi consecinţa exacerbării cascadei
proinflamatorii de la nivel vascular produsă datorită scăderii expresiei PPARα icircn Eo iar
creşterea numărului de Eo circulante poate reprezenta o adaptare a organismului uman care
icircncearcă să suplinească deficitul de receptori PPARα Analizacircnd curba ROC pentru
intensităţile medii de fluorescenţă determinate pentru anticorpii anti- PPARα icircn Eo am
obţinut pentru acest biomarker o sensibilitate a testului de 565 şi o specificitate de 778
pentru un punct de cut-off de 1533 ( figura 536 ) Deşi aria AUC (Aria under the curve) egală
cu 0663 icircncadrează acest test ca avacircnd o acurateţe redusă observăm că că această valoare
este apropiată de determinările AUC pentru alţi factori (fibrinogen raport de aterogenitate
acid uric non- HDL-colesterol) cunoscuţi ca fiind implicaţi icircn aterogeneză şi inflamaţia
cronică (figura 431) Aceste remarci alături de faptul că icircn studiul receptorilor PPARα icircn
leucocite am inclus subiecţi la primul diagnostic de SM creează premisa integrării
determinării expresiei relative a receptorilor PPARα icircn diagnosticul complex al sindromului
metabolic Putem spune că icircn final studiul expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofilele
circulante se dovedește a fi util icircn diagnosticul precoce la nivel molecular al SM permiţacircnd
identificarea timpurie a unor indivizi cu risc cardiometabolic crescut Astfel intervenţia
precoce asupra subiecţilor cu deficit de PPARα icircn Eo contribuie la managementul eficient al
afecţiunilor degenerative icircn care inflamaţia cronică icircndeplineşte un rol primordial Referitor
la populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările efectuate prin citometrie de flux nu au
arătat existenţa unor diferenţe statistice icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα
la subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali Rezultatele noastre pot fi
consecinţa caracteristicilor loturilor studiate (icircn studiul nostru au fost incluşi subiecţi recrutaţi
la primul diagnostic de SM şi icircn absenţa stimulării receptorilor PPARα cu droguri agoniste
PPARα) dar icircn acelaşi timp pot apare diferenţe datorită metodei utilizate (231 232 233)
Făcacircnd o paralelă cu un studiu publicat icircn 2013 icircn Europa (231) care a arătat creşterea
nivelului de expresie al PPARα icircn Ly şi Mo observăm că deşi numărul de subiecţi a fost
aproximativ egal (57 participanţi icircn studiul nostru 60 icircn studiul DAmore) subiecţii icircn studiul
amintit au fost recrutaţi dintr-o clinică cu profil medical la primul diagnostic de SM icircn timp
ce metoda utilizată a fost PCR (Polymerase Chain Reaction) mult mai fidelă decacirct citometria
icircn flux icircn studiul receptorilor nucleari De asemenea DAmore nu investighează expresia
PPARα icircn Eo şi PMN icircn cercetare fiind incluse doar celulele CD14+ (predominant Mo) şi
CD14- (predominant Ly) Deşi nu am obţinut diferenţe statistic semnificative icircntre cele două
loturi referitoare la nivelul de expresie relativă a PPARα icircn Mo Ly şi PMN am observat
corelaţii puternice semnificative statistic icircntre expresia receptorilor PPARα icircn aceste tipuri
celulare Rezultatele obţinute sugerează existenţa unui mecanism diferit molecular de control
icircn eozinofile care reglează cantitatea de proteină PPARα icircn eozinofile versus alte tipuri de
leucocite (la pacienţii cu SM) şi acest lucru este icircn concordanţă cu cercetările care descriu
expresia PPARα mRNA icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale
bronşice keratinocite) Studiind prin citometrie de flux nivelul de expresie relativă a
receptorului CD36 la nivelul Mo am arătat prezenţa acestuia icircn Mo tuturor subiecţilor
investigaţi Analizacircnd valorile intensităţii medii de fluorescenţă a CD36 icircn loturile studiate
am observat o tendinţă de creştere la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali
confirmacircnd implicarea receptorului CD36 icircn patogeneza acestuia Referitor la expresia
receptorului CD36 rezultatele obţinute sunt icircn consens cu studii anterioare care au arătat
creşterea expresiei CD36 la pacienţii cu SM şi diabet zaharat Astfel pe lacircngă diferenţa icircn
expresia CD36 s-au raportat şi corelaţii inverse icircntre expresia proteinei CD36 şi nivelul
adiponectinei Acelaşi studiu a evidenţiat o corelaţie pozitivă intre expresia CD36 cu expresia
receptorilor PPAR gamma relaţia cu PPARα nefiind investigată
Analiza de subgrup a relaţiilor dintre componentele SM și elementele moleculare
proinflamatorii studiate a relevat prezenţa unor asocieri semnificativ statistice icircntre acestea
Se argumentează astfel că veridicitatea studiului este susţinută de interdependenţele statistice
ale componentelor SM Determinarea coeficientului de corelaţie Icircn studiul nostru nivelul de
expresie relativă a PPARα s-a corelat moderat negativ (figura 550) cu CA a subiecţilor din
lotul normal pentru populaţiile celulare de Mo (r = - 0420 P = 001) Ly (r = - 046 P =
0009) şi PMN (r = - 040 P = 0024) date care sunt icircn concordanţă cu studiile care arată
rolul PPARα icircn furnizarea energiei prin beta-oxidarea acizilor graşi Icircn acelaşi timp icircn lotul
pacienţilor cu SM nu am identificat prezenţa unei asocieri icircntre nivelul de expresie relativă a
PPARα şi valoarea măsurată a CA Asocierea dintre expresia relativă a PPARα cu obezitatea
de tip central completează datele existente referitoare la reglarea homeostaziei energetice
conturacircnd un mecanism de control deficitar al aportului caloric al SM Icircn condiţiile icircn care
rezultatele obţinute prin metoda citometriei icircn flux nu au arătat existenţa unei corelaţii intre
expresia PPARα şi CA la pacienţii cu SM considerăm că ar fi necesar studiul
polimorfismului genei PPARA care ar putea aduce informaţii importante cu privire la
implicarea acestor receptori icircn apariţia obezităţii de tip central Subliniem acest lucru deoarece
obezitatea este o boală plurifactorială icircn care pe lacircngă factorii ereditari sunt implicaţi factori
de mediu psihologici şi sociali (245) Existenţa unei componente genetice a aterosclerozei
este legată şi de prezenţa unor variante ale genei PPARA asociate cu creşterea incidenţei bolii
cardiovasculare (82) şi a SM (249) Icircn studiul nostru am constatat o scădere statistic
semnificativă a nivelului expresiei relative a receptorilor PPARα icircn Eo la subiecţii cu
antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială comparativ cu subiecţii fără istoric
familial de hipertensiune (figura 537) Deşi diferenţele calculate icircntre loturile studiate nu au
icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică la subiecţii care au declarat prezenţa
antecedentelor familiale de hipertensiune arterială remarcăm o tendinţă de scădere a
intensităţii medii de fluorescenţă pentru Ac anti-PPARα la nivelul Mo (figura 515 P = 006
) icircn timp ce expresia relativă a CD36 icircnregistrează o creştere la acesti subiecţi (figura 545 P
= 008) Icircn contextul riscului cardiovascular foarte icircnalt al pacienţilor cu SM amintim şi
existenţa corelaţiei pozitive dintre valorile tensiunii arteriale diastolice şi expresia relativă a
receptorului CD36 (r = 0483 P = 0013) Această constatare este icircn consens cu studiile care
au arătat că forma solubilă circulantă a CD36 este asociată cu factorii de risc cardiovasculari
fiind propusă ca un marker precoce al aterosclerozei Activarea PPARα este asociată cu
modularea metabolismului lipidic iar agoniştii PPARα sunt utilizaţi icircn mod curent pentru
tratamentul dislipidemiei Sub acţiunea agoniştilor PPARα se obţine o icircmbunătăţire a funcţiei
endoteliale şi a parametrilor reologici funcţiile pleiotropice ale agoniştilor PPARα fiind
dovedite icircn trialuri clinice controlate Icircn populaţiile de Mo şi Ly la pacienţii cu SM
cercetarea noastră a evidenţiat o asociere negativă icircntre nivelul de expresie relativă a
receptorilor PPARα şi concentraţia TG serice (figura 551) Astfel scăderea expresiei
receptorilor PPARα este asociată cu creşterea nivelului TG serice contribuind la profilul
lipidic aterogen din SM Icircn conformitate cu literatura de specialitate icircn studiul efectuat prin
metoda citometriei icircn flux am găsit prezenţa asocierii icircntre nivelul de expresie al PPARα şi
HDL-colesterol Corelaţia pozitivă dintre nivelul de expresie relativă PPARα şi concentraţia
HDL-colesterolului a fost observată icircn lotul martor icircn populaţiile de Mo (r = 035 P = 005)
şi Ly ( r = 036 P = 004) (figura 553) susţinacircnd faptul că stimularea receptorilor PPARα
este legată de creşterea nivelului seric al lipoproteinelor cu densitate crescută La pacienţii cu
SM corelaţia dintre expresia PPARα şi HDL-colesterol a fost evidenţiată icircn populaţiile de Mo
(r = 046 P = 0019) şi eozinofile (r = 044 P = 0024) Se desprinde concluzia că icircn
sindromul metabolic scăderea concentraţiei HDL-colesterol este legată de diminuarea
nivelului de expresie relativă a receptorilor nucleari PPARα icircntărind afirmaţiile legate de
rolul acestor receptori icircn progresia bolilor cardiovasculare Studiind reactanţii de fază acută
analiza statistică a relevat o diferenţă semnificativă din punct de vedere statistic icircntre valorile
fibrinogenului la pacienţii cu SM atunci cacircnd au fost comparaţi cu subiecţii fără SM
(Capitolul IV4 P lt0 001 figura 427A) De asemenea icircn Capitolul V dedicat studiul
expresiei relative a receptorilor PPARα studiul valorilor fibrinogenului a arătat creşterea
acestui reactant de faza acută icircn lotul cu SM comparativ cu lotul martor (P lt0 0001) Icircn
studiul nostru am calculat o corelaţie invers proporţionala (r = - -036 fig 555B) icircntre
nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile şi concentraţia serică a
fibrinogenului Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P = 008) am reţinut
această asociere deoarece am demonstrat că nivelul de expresie relativă al receptorilor
PPARα icircn eozinofile este mai scăzut icircn sindromul metabolic iar sindromul metabolic este
caracterizat printr-un status inflamator cronic status caracterizat şi de creşterea concentraţiei
serice a fibrinogenului De asemenea notam ca această corelaţie negativă se află icircn
concordanţă cu studiile care arata că tratamentul cu agonişti PPARα (fibraţi) determina
scăderea nivelului seric al fibrinogenului contribuind la diminuarea inflamaţiei cronice din
sindromul metabolic şi icircn consecinţă amelioracircnd insulinorezistenţa
LIMITE ȘI DIFICULTĂȚI IcircN CERCETARE
Icircn cadrul Tezei de Doctorat am desfăşurat o cercetare care şi-a propus studierea
expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Recrutarea anamneza şi examinarea
clinică a subiecţilor au fost realizate icircn cadrul Cabinetului de Medicină de Familie CMI Popa
Elena din Iaşi iar determinările hematologice şi biochimice s-au efectuat icircn cadrul
Laboratorului Ambulatorului de Specialitate al Spitalului Universitar ldquoSfacircntul Spiridon din
Iaşi Icircn studiul epidemiologic şi al markerilor inflamatori al sindromului metabolic desfăşurat
au fost incluşi un număr de 1530 de participanţi pe baza liberului consimţămacircnt examinaţi icircn
perioada 01012013 - 31122013 Icircn continuare icircn perioada 1012014 - 28022014 pe baza
criteriilor de includere şi excludere icircn cele două loturi de studiu am investigat un număr de 57
de subiecţi prezentaţi la consultaţie icircn această perioadă şi care au icircndeplinit criteriile de
includere icircn cele două loturi (Lot SM şi Lot Control) constituite pentru evaluarea nivelului de
expresie a receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Explorarea nivelului de expresie
relativă a receptorilor PPARα s-a desfăşurat icircn cadrul Laboratorului de Biologie Moleculară
de pe platforma Institutului Regional de Oncologie Datorită resurselor proprii financiare
limitate trebuie să subliniez că aceasta cercetare nu ar fi fost posibilă fără contribuţia unor
cercetători din domeniul medical care m-au sprijinit necondiţionat atacirct icircn elaborarea
protocolului de lucru cacirct şi icircn efectuarea propriu-zisă a studiului Icircn acest sens menţionăm şi
faptul că pentru studiul receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic am utilizat aparatura
Laboratorului de Biologie Moleculară (care deserveşte icircntreaga Regiune a Moldovei) Pe
această cale mulţumesc personalului Laboratorului de Biologie Moleculară pentru ajutorul
acordat icircn desfăşurarea cercetării doctorale icircn condiţiile icircn care se observa creşterea
numărului de pacienţi care se adresează acestei platforme de cercetare Mulţumesc de
asemenea şi Doamnei Doctor Elena Butoi din cadrul Institutului de Biologie şi Patologie
Moleculară ldquoNicolae Simionescurdquo Bucureşti) pentru donaţia anticorpului secundar anti-
FITC Icircn consecinţă pentru recrutarea unui număr mai mare de participanţi ar fi fost necesară
icircn primul racircnd obţinerea unor resurse financiare suplimentare pentru achiziţia de aparatură şi
reactivi Totuşi numărul subiecţilor recrutaţi este apropiat de numărul subiecţilor raportaţi icircn
cadrul unor granturi de cercetare care aveau ca ţinta studiul expresiei receptorilor PPARα
(212 227 228 231) Rezultatele obţinute continua seria lucrărilor care arata importanta
studiului mecanismelor etiopatogenice ale sindromului metabolic patologie care se afla icircntr-o
continuă creştere La pacienţii cu SM pe lacircngă diminuarea nivelului de expresie a receptorilor
PPARα icircn eozinofile ne aşteptam şi la evidenţierea unor modificări icircn expresia PPARα şi icircn
populaţiile de Ly Mo şi PMN Acest fapt poate fi explicat de utilizarea unor celule provenite
de la pacienţi fără afectare cardiovasculară fără diabet zaharat şi necesită continuarea
studiului pe culturi celulare icircn condiţii de stimulare cu agonişti PPARα deziderat care
impune continuarea investigării expresiei PPARα printr-un grant de cercetare
ORIGINALITATEA ȘI CONTRIBUȚIILE INOVATIVE ALE TEZEI DE
DOCTORAT PERSPECTIVE DE CERCETARE
Evaluarea nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn leucocitele circulante
aduce noi perspective icircn studiul obezităţii şi sindromului metabolic Importanta studiului
expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic derivă din prevalenta crescută a
sindromului metabolic icircn populaţia cercetată la care se adaugă riscul cardiovascular foarte
icircnalt al acestor pacienţi cu implicaţii majore icircn sănătatea publică Rolul receptorilor PPARα
icircn inflamaţie şi aterogeneza este binecunoscut dar studiul nostru este primul care a arătat că
nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα este semnificativ mai scăzut in populatiile
de eozinofile la pacienţii cu SM Această concluzie coroborata cu existenţa unei stracircnse
asocieri intre expresia receptorilor PPARα la nivelul Mo limfocitelor şi PMNlor creeaza
ipoteza existenţei unui mecanism de control diferit al expresiei PPARα la nivelul
eozinofilelor Această cercetare aduce informaţii importante referitoare la mecanismele
proinflamatorii care stau la baza insulinorezistenţei şi riscului cardiometabolic şi impune
continuarea studiului acestor receptori nucleari prin citometrie icircn flux metodă care poate fi
aplicată şi la scara mai largă dacă sunt asigurate resursele materiale necesare cercetării
Cercetarea prin citometrie icircn flux poate fi completată de studiul polimorfismului genei
PPARA şi astfel se pot identifica timpuriu indivizii cu potenţial risc cardiometabolic crescut
Studiul receptorilor PPARα a stabilit conexiuni cu factori proinflamatori şi aterogenetici iar
continuarea cercetării poate aduce şi elemente noi de diagnostic precoce icircn sindromul
metabolic contribuind la icircmbunătăţirea prognosticului acestor pacienţi
CONCLUZII FINALE
1 Aplicarea scorului de SM alături de implementarea algoritmului electronic de diagnostic
contribuie la o prelucrare rapidă eficientă și standardizată a informaţiilor la nivelul
medicinei primare
2 Prevalenţa SM calculată astfel icircn cadrul studiului este crescută (2732) icircn concordanţă
cu datele raportate
3 Controlul factorilor de risc cardiometabolici incluşi icircn SM se poate realiza prin
managementul stilului de viaţă (scăderea greutăţii corporale prin combaterea
sedentarismului şi adoptarea unei diete antiaterogene şi hipocalorice) şi administrarea
terapiei medicamentoase
4 Este necesară adoptarea unei politici de sănătate publică pentru prevenirea creşterii icircn
populaţie a prevalenţei obezităţii şi a diabetului zaharat
5 Noi metode de cercetare icircn domeniul SM axate pe diagnosticarea precoce şi cuantificarea
eficientă a acestuia duce la diminuarea incidenței evenimentelor cardiovasculare majore
6 Sindromul metabolic se caracterizează printr-un status inflamator cronic
7 Valorile Non-HDL-colesterolului şi a raportului de aterogenitate sunt semnificativ mai
mari la pacienţii cu SM
8 Dintre reactanţii de faza acută am observat că valoarea medie a fibrinogenului este mai
crescută icircn lotul cu SM
9 Valorile eozinofilelor sunt crescute icircn sindromul metabolic iar explorarea relaţiei dintre
eozinofile şi obezitate constituie una din direcţiile de studiu actuale ale sindromului
metabolic
10 Evaluarea markerilor inflamatori icircn contextul sindromului metabolic este utilă icircn
evaluarea complexă a a factorilor de risc cardiometabolici
11 Prin metoda citometriei icircn flux am demonstrat prezenta Receptorilor Activaţi de
Inductorii Proliferării Peroxizomilor ndash Alpha (PPARα) icircn toate populaţiile de leucocite
studiate (Mo limfocite PMN eozinofile) atacirct icircn lotul pacienţilor cu SM cacirct şi icircn lotul
martor
12 Utilizacircnd intensitatea medie de fluorescenţă a anticorpilor anti- PPARα am arătat că
nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile este semnificativ mai redus
la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali
13 Acest studiu este primul care a demonstrat existenţa unei scăderi statistic semnificative a
nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofilele pacienţilor cu SM
confirmacircnd cercetările recente care au evidenţiat rolul eozinofilelor şi al receptorilor
PPARα icircn obezitate reglarea inflamaţiei cronice şi aterogeneza
14 Contrar aşteptărilor noastre icircn populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările
efectuate icircn cele două loturi de studiu (cu şi fără sindom metabolic) nu am evidenţiat
diferenţe statistic seminificative icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα la
subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali
15 Icircn populaţiile de Mo limfocite şi polimorfonucleare am observat corelaţii puternice
semnificativ statistic icircntre expresia PPARα icircn aceste tipuri celulare sugeracircnd existenţa
unui mecanism unic de control al inflamaţiei cronice la nivelul acestor celule probabil
diferit de cel din eozinofile
16 La subiecţii cu SM expresia relativă a PPARα icircn Eo este invers asociată cu expresia
receptorului CD36 (receptor al particulelor de ox - LDL şi propus ca un marker precoce al
aterosclerozei) dovedind rolul antiinflamator al receptorilor PPARα la nivel endotelial
17 La pacienţii cu antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială nivelul de
expresie al receptorilor PPARα icircn eozinofile şi Mo este diminuat comparativ cu subiecţii
fără antecedente familiale de hipertensiune arterială Putem spune că studiul efectuat de
noi aduce informaţii importante legate de geneză aterosclerozei şi hipertensiunii arteriale
18 Prin studiul asocierilor dintre receptorii PPARα şi componentele clinice ale sindromului
metabolic am arătat rolul acestor receptori icircn determinismul obezităţii de tip central
nivelul expresiei relative a receptorilor PPARα fiind invers proporţional cu circumferinţa
abdominală
19 Icircn acelaşi timp nivelul de expresie a PPARα icircn sindromul metabolic este asociat pozitiv
cu concentraţia serică a HDL-colesterolului şi invers asociat cu nivelul trigliceridelor
serice dovedind rolul acestor receptori icircn diminuarea procesului inflamator cronic de la
nivel vascular
20 La pacienţii cu SM scăderea expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofile este corelată cu
creşterea unor markeri ai sindromului inflamator cronic cardiometabolic (acid uric
fibrinogen) ilustracircnd importanta receptorilor icircn reglarea status-ului inflamator cronic din
sindromul metabolic
21 Utilizarea metodei flowcitometrice pentru studiul expresiei relative a receptorilor PPARα
icircn leucocite a adus informaţii importante cu privire la mecanismele moleculare de control
implicate icircn patogenia bolilor cardiometabolice icircn concordanţă cu cercetările care descriu
expresia PPAR icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale bronşice
keratinocite)
BIBLIOGRAFIE SELECTIVA
1 Kahn R Metabolic syndrome- what is the clinical usefulness Lancet 2008371(9628)1892-3
2 Reaven GM The metabolic syndrome is this diagnosis necessary Am J Clin Nutr 2006 83(6)1237-7
3 Grundy SM Pre-Diabetes Metabolic Syndrome and Cardiovascular Risk J Am Coll Cardiol 201259(7)
635-43
4 International Diabetes Federation IDF Diabetes Atlas 6th edn International Diabetes Federation Belgium
Brussels 20131-155
5 World Health Organization Global Status Report on Noncommunicable Diseases 2010 World Health
Organization Geneva Switzerland 20111-176
6 Coman AE Petrovanu R Sindromul metabolic in practica de ambulator Editura Pim Iaşi 2009 1-103
7 Grundy SM Becker D Clark LT et alThird Report of the National Cholesterol Education Program (NCEP)
Expert Panel on Detection Evaluation and Treatment of High Blood Cholesterol in Adults (Adult
Treatment Panel III) Final Report Circulation 2002106(25)3143-90
8 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J Metabolic syndrome- a new worldwide definition A Consensus Statement
from the International Diabetes Federation Diabet Med 2006 23(5)469-80
9 KG Alberti KG Eckel RH Grundy SM etal International Diabetes Federation task force on epidemiology
and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart Association World Heart
Federation International Atherosclerosis Society International Association for the study of obesity
Harmonizing the metabolic syndrome a joint interim statement of the International Diabetes Federation task
force on epidemiology and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart
Association World Heart Federation International Atherosclerosis society and International Association
for the study of obesity Circulation 2009120(16)1640-5
10 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J IDF Epidemiology Task Force The metabolic syndrome new
worldwide definition Lancet 2005 366 1059 - 62
11 Oleszczyk M Svab I Seifert B et al Primary healthcare in the developing part of Europe changes and
development in the former Eastern Bloc countries that joined the European Union following 2004 Med Sci
Monit 2009(15)78ndash84
12 Jung U J Choi M S Obesity and Its Metabolic Complications The Role of Adipokines and the
Relationship between Obesity Inflammation Insulin Resistance Dyslipidemia and Nonalcoholic Fatty
Liver Disease Int J Mol Sci 2014rsquo15(4) 6184-223
13 Vanden Heuvel JP Peters JM Peroxisome Proliferators In Ramos K (ed) Cellular and Molecular
Toxicology (Second Edition) Volume 2 New York Elsevier Science Inc 2010 145 - 67
14 Yessoufou A Wahli W Multifaceted roles of peroxisome proliferator-activated receptors (PPARs) at the
cellular and whole organism levels Swiss Med Wkl 2010140w13071 doi104414smw201013071
15 Azhar S Peroxisome proliferator-activated receptors metabolic syndrome and cardiovascular disease
Future Cardiology 20106(5)657-91
16 Andries G Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity
Diabetes and Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(Suppl)24-32
17 Zandbergen F Plutzky J PPARalpha in atherosclerosis and inflammation Biochim Biophys Acta
20071771(8)972-82
18 Straus DS Glass CK Anti-inflammatory actions of PPAR ligands new insights on cellular and molecular
mechanisms Trends Immunol 200728(12)551-8
19 Zlei M Zugun- Eloae F Carasevici E Citometrie icircn flux - Bază şi clinică Icircn Hinescu ME (ed) Citometrie icircn
flux - principii şi aplicaţii clinice Bucureşti Editura Viaţa Medicală Romacircnească 20111-128
20 Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity Diabetes and
Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(9)24-32
21 Woerly G Honda K Loyens M et al Peroxisome proliferator-activated receptors alpha and gamma down-
regulate allergic inflammation and eosinophil activation J Exp Med 2003198(3)411-21
22 Salle-Saumont D Brenuchon C Kanda A et al Peroxisome proliferator-activated receptor alpha regulates
skin inflammation and humoral response in atopic dermatitis J Clin Allergy Immunology 2008 21(4)962-8
23 Schote A Turner J Schiltz J et al Nuclear receptors in human immune cells expression and correlations
Mol Immunolog 200744(6)1436-45
24 DAmore S Vacca M Graziano G et al Nuclear receptors expression chart icircn peripheral blood
mononuclear cells identifies patients with Metabolic Syndrome Biochim Biophys Acta
20131832(12)2289-301
25 Uthurralt J Gordish-Dressman H Bradbury M T et al PPARalpha L162V underlies variation in serum
triglycerides and subcutaneous fat volume in young males BMC Med Genet 2007855
26 Hiukka A Leinonen ES Jauhiainen M et al Long-term effects of fenofibrate on VLDL and HDL
subspecies icircn participants with type 2 diabetes mellitus Diabetologia 2007 50(10)2067-75
27 Robins SJ Rubins HB Faas FH et alInsulin resistance and cardiovascular events with low HDL
cholesterol The Veterans Affairs HDL Intervention Trial (VA-HIT) Diabetes Care 2003 26(5)1513-7
28 Devaraj S Siegel D Jialal I Statin Therapy in Metabolic Syndrome and Hypertension Post-JUPITER
What is the Value of CRP Curr Atheroscler Rep 2011 13(1) 31ndash42
29 Imperatore G Riccardi G Iovino C et al Plasma Fibrinogen A New Factor of the Metabolic Syndrome A
population-based study Diabetes Care 19982 1(4)649-54
30 Krysiak R Gdula-Dymek A Bachowski R Okopien B Pleiotropic effects of atorvastatin and fenofibrate
in metabolic syndrome and different types of pre-diabete Diabetes Care 201033(10)2266-70
31 Hermans MP Impact of Fenofibrate on Type 2 Diabetes Patients with Features of the Metabolic Syndrome
Subgroup Analysis From FIELD Curr Cardiol Rev 20106(2)112-8
32 Silverstein R Inflammation atherosclerosis and arterial thrombosis Role of the scavenger receptor CD36
Cleveland Clinic Journal of Medicine 200976(Suppl 2)S27-S30
33 Hăncu N Obezitatea In Vereşiu IA (ed) Diabetul zaharat nutritia si bolile metabolice Volume 2 Editura
Echinox Cluj- Napoca 2010 1-15
Lista lucrări publicate
1 Elena Popa Maria Maidaniuc Agnes Bacusca Alamir Diaa Rodica Petrovanu Adorata Elena
Coman Disfuncţia endotelială ndash de la mecanisme moleculare la cuantifi care şi tratament icircn practica
medicală Practica Medicală 20149(3) 109-14
2 Elena Popa Agnes Bacusca Alamir Diaa Maria Maidaniuc Rodica Petrovanu Adorata Elena Coman
The function of insulin receptor (IRF) in evolution of obesity correlation with adipocytes diameters
Archives of the Balkan Medical Union 201449(3) 275-9
3 Elena Popa Florin Zugun-Eloae Mihaela Zlei Daniela Jitaru Oana Maria Pintilie Adorata Elena
Coman Maria Traian Didona Anca Ungureanu Eugen Carasevici - acceptata pentru numarul 42014
Flow cytometry analysis of PPAR-alpha receptors in metabolic syndrome) Revista Romană de
Medicină de Laborator(RRLM-D-14-00034R1- adeverinţa ataşată
b identificarea tipului de SM icircn raport cu numărul de componente
c stabilirea prevalenţei sindromului metabolic icircn populaţia studiată
d studiul markerilor inflamatori prezenţi icircn SM
Studiul epidemiologic icircn populaţia selectată
Am efectuat un studiu epidemiologic transversal care şi-a propus stabilirea prevalenţei
sindromului metabolic şi a componentelor sale icircn populaţia icircnscrisă pe lista unui cabinet de
medicină de familie Studiul s-a desfăşurat pe parcursul a 12 luni icircn perioada 01012013ndash
31122013 icircn cadrul Cabinetului de Medicină de Familie CMI Popa Elena situat icircn strada
Ion Creanga nr 73 din Iaşi
Obiectivele studiului - evaluarea din punct de vedere clinic şi biologic a sindromului metabolic
- identificarea tipului de SM icircn raport cu numărul de componente
- stabilirea prevalenţei sindromului metabolic icircn populaţia studiată
Lotul de studiu a fost constituit din populaţia de ambele sexe cu vacircrsta cuprinsă icircntre
18 şi 91 ani icircnscrisă pe lista medicului de familie Subiecţii au fost invitaţi să participe la
studiu icircn luna naşterii realizacircnd astfel o programare a vizitelor pe parcursul a 12 luni
Criteriile de includere icircn lotul de studiu vacircrsta peste 18 ani capacitate de decizie
domiciliul stabil icircn Romacircnia participare pe baza consimţămacircntului liber informat Criteriile
de excludere vacircrstă sub 18 ani femei gravide sau care alăptează bolnavi icircn faza terminală
subiecţi care refuză semnarea consimţămacircntului informat Nu s-au formulat criterii care să
aducă discriminări legate de sex etnie sau rasă
Protocolul studiului epidemiologic al sindromului metabolic
Icircn cadrul studiului epidemiologic s-au realizat cacircte două vizite pentru fiecare participant La
prima vizită subiecţii au fost informaţi asupra studiului icircn cadrul cercetării doctorale şi au
semnat Consimţămacircntul liber informat Pentru fiecare participant s-a completat fişa de studiu
computerizată incluzacircnd date anamnestice şi clinice (talie greutate corporală perimetru
abdominal) La a doua vizită s-au recoltat probe biologice (sacircnge venos) de către o asistentă
specializată pentru următoarele determinări biochimice (glicemie colesterol total HDL-
colesterol LDL-colesterol trigliceride acid uric creatinină fibrinogen proteină C reactivă)
şi hematologice (hemoleucograma VSH) Pentru diagnosticarea SM am utilizat criteriile
de diagnostic Harmonised I (tabel VI) Am comparat prevalenţa SM conform criteriilor
Harmonised I cu prevalenţa obţinută prin aplicarea criteriilor IDF respectiv ATP III
Analiza statistică Pentru analiza parametrilor studiaţi icircn SM am realizat icircmpreună cu
firma Arhilog Soft un program icircn care sunt incluşi parametrii de diagnostic ai SM şi care
permite icircncadrarea pacienţilor funcţie de componentele SM icircn SM3 SM4 SM5 De
asemenea programul permite editarea şi arhivarea unei fişe de observaţie pentru fiecare
participant la studiu precum şi crearea unei baze de date compatibile cu programul Microsoft
Office Excel 97-2003
Menţionăm că acest program poate stoca
şi alţi parametri clinici şi paraclinici utilizaţi icircn evaluarea complexă a SM putacircnd fi ulterior
introdus ca un program de monitorizare a evoluţiei pacienţilor Pentru prelucrarea statistică a
parametrilor s-au folosit programele Microsoft Office Excel 97-2003 SPSS-10 (Statistical
Package for Social Sciences) şi aplicaţia Medcalc Statistical Software ndash 1333 Valoarea lui p
Figura 41 Program de
analiză a parametrilor SM
mai mică de 005 a fost considerată semnificativ statistic
Rezultate Analiza lotului de studiu s-a efectuat icircn funcţie de mediul de provenienţă sex vacircrstă şi
vacircrsta medie Caracteristicile clinice şi biochimice ale lotului studiat sunt reprezentate icircn
tabelul VIII
Tabel VIII Caracteristicile lotului studiat Media 95 CI SD Minimum Maximum
Vacircrsta (ani) 4751 4661 - 4841 1798 1800 9100
CA (cm) 8830 8764 - 8896 1316 5600 13400
IMC (kgm2) 2603 2578 - 2628 497 1900 4500
TAD (mmHg) 7529 74883 - 7571 827 6000 11500
TAS (mmHg) 11730 11650 - 11810 1590 9000 19000
Glicemie (mgdl) 9435 9328 - 9542 2138 7200 40000
HDL- col(mgdl) 4498 4427 - 4570 1422 2100 9200
TG(mgdl) 12269 11887 - 12651 7157 4800 87900
Determinarea scorului SM
Am aplicat criteriile de diagnostic şi am calculat scorul de SM pentru fiecare subiect (0-
absenţa criteriului 2- prezenţa criteriului) (fig44)
Figura 44 Frecvenţa scorului SM icircn
populaţia studiată conform criteriilor
SM Harmonised (A) IDF (B) ATP III
(C) Se observă că distribuţia scorurilor
SM conform criteriilor de diagnostic este
identică icircn cazul aplicării criteriilor
Harmonized I şi IDF
Scorul de SM a avut valori pare
cuprinse icircntre intervalul 0 - 10 pacienţii
cu SM avacircnd un scor mai mare sau egal
cu 6
Icircn lotul studiat am analizat prezenţa simultană a criteriilor Harmonised I de diagnostic şi
am constatat prezenţa SM la 389 subiecţi (204 femei şi 185 bărbaţi) reprezentacircnd 2542
(95CI 2296-2808) din totalul populaţiei studiate Raportul prevalenţelor specifice pe sexe
bărbaţifemei a fost de 103 (95 CI084 -126)Icircn concordanţă cu criteriile IDF am
identificat un număr de 325 pacienţi cu SM (175 femei şi 150 bărbaţi) iar prevalenţa SM icircn
populaţia studiată conform IDF a fost de 2124 (95 CI 1899ndash 2368) Raportul
prevalenţelor specifice la bărbaţi versus femei a fost de 0977 (95 CI 078 ndash122) Utilizacircnd
definiţia ATP III au fost identificaţi un număr de 229 subiecţi cu SM Prevalenţa SM a fost
C
0
100
200
300
400
500
600
700
Scor SM ATP III
Număr pacienţi
0 2 4 6 8 10
ATP III SM5 SM4 SM3 non SM
B
0 50
100 150 200 250 300 350 400 450
Scor SM IDF
Număr pacienţi
0 2 4 6 8 10
IDF SM5 SM4 SM3 non SM
A
0
50
100
150
200
250
300
350
400
450
Scor SM Harmonised I
Număr pacienţi
0 2 4 6 8 10
HARMONIZED I SM5 SM4 SM3 non SM
de 1497 (95CI 1309 ndash 1704) icircn populaţia studiată Au fost calculate prevalenţele pe
sexe şi au fost găsite valorile de 1343 (95CI 010 ndash 164) la bărbaţi respectiv 1632
(95 CI 1366 ndash 1934) la femei raportul dintre acestea fiind de 082 (95CI 062 ndash 107)
Pentru fiecare asociere dintre componentele SM diagnosticat conform criteriilor
Harmonised I am calculat prevalenţele icircn cadrul SM(tabel XVI)
Tabel XVI Prevalenţa asocierilor dintre componentele SM Număr
pacienţi
Ponderea icircn cadrul
pacienţilor cu SM
(95 CI)
Prevalenţa icircn
populaţia studiată
(95 CI)
SM cu trei componente (SM3)
241 6195 (5438ndash7029) 1575 (1383-
1787)
Obezitate centrală + hipertensiune arterială +
hipertrigliceridemie
45 1154 (844ndash1548) 294 (214-393)
Obezitate centrală + hipertensiune arterială + hipo-
HDLcolesterolemie
38 979 (691ndash1340) 248 (175-340)
Obezitate centrală + hipertrigliceridemie +
hipoHDL-colesterolemie
34
874 (605ndash1221) 222 (153-310)
Obezitate centrală + modificări ale metabolismului
glucidic + hipertensiune arterială
31 796 (541ndash1131) 202 (137-287)
Hipertensiune arterială + hiper-trigliceridemie +
hipoHDL- colesterolemie
26 668 (436 ndash979) 169 (111-249)
Modificări ale metabolismului glucidic +
hipertensiune arterială + hiper-trigliceridemie
21 539 (334-825) 137 (085-209)
Obezitate centrală + modificări ale metabolismului
glucidic + hipertrigliceridemie
15 385 (215-636) 098 (054-116)
Modificări ale metabolismului glucidic
hipertrigliceridemie + hipoHDL-colesterolemie
12 308 (159-538) 078 (040-137)
Modificări ale metabolismului glucidic +
hipertensiune arterială + hipoHDLcolesterolemie
10 257 (123ndash472) 065 (031-120)
Obezitate centrală + modificări ale metabolismului
glucidic + hipo-HDL-col
9 231 (105ndash439) 058 (026-111)
SM cu patru componente (SM4) 104 2674 (2184-239) 679 (555-823)
Obezitate centrală + modificări ale metabolismului
glucidic + hipertensiune arterială + hipoHDL-
colesterolemie
32 822 (562-1116) 209 (143-
295)
Obezitate centrală + hipertensiune arterială +
hipertrigliceridemie + hipoHDL-col
25 642 (415- 948) 163 (105-241)
Obezitate centrală + modificări ale metabolismului
glucidic + hipertri-gliceridemie + hipoHDL-
colesterolemie
12 308 (159-538) 078 (040-137)
Modificări ale metabolismului glucidic +
hipertensiune arterială + hipertri-gliceridemie +
hipoHDL-colesterolemie
6 154 (056- 335) 039 (014-085)
SM cu cinci componente (SM5) 44 1131 (822-1518) 287 (209-386)
Total (SM3 + SM4 + SM5) 389 100 2542(2296-
2808)
Analizacircnd componentele SM la cei 389 pacienţi diagnosticaţi cu SM conform criteriilor
Harmonised I am constatat că obezitatea centrală este cea mai bine reprezentată icircn SM dintre
aceste componente (8072 95CI 7644 - 8452) urmată de HTA (7892 95CI 7453
- 8287) hiperTG (6915 95 CI 6430-7371) hipo-HDL-col (6375 95 CI 5876-
6854) şi hiperglicemie (5681 95 CI5173- 6179)
Standardizarea prevalenţelor funcţie de vacircrstă şi sex Analiza statistică a relevat faptul
că prevalenţa SM creşte cu icircnaintarea icircn vacircrstă Dacă pentru vacircrsta cuprinsă icircntre 35-54 ani
prevalenţa la bărbaţi este semnificativ mai mare comparativ cu femeile (raport calculat B F -
183 P=0003) pentru celelalte grupe de vacircrsta nu s-au observat diferenţe semnificative icircntre
sexul feminin şi cel masculin Am observat că după instalarea menopauzei la femei
prevalenţa SM (corespunzătoare Harmonised I) la femei depăşeşte 50 iar la bărbaţi atinge
42 Utilizacircnd European Standard Population (175) am efectuat standardizarea funcţie de
vacircrstă şi sex a prevalenţelor bdquocruderdquo (brute) obţinute icircn populaţia studiată şi am calculat o
prevalenţă standardizată a SM de 2732 (95 CI 2460-3003) La sexul masculin
prevalenţa standardizată a SM a fost de 2760 (95 CI 2362 - 3157) iar la sexul feminin
am obţinut valoarea de 2854 (95 CI 2462 - 3245)
Discuţii
Studiul desfăşurat de noi a investigat prezenţa SM icircn populaţia unui Cabinet de Medicină
de Familie Icircn Europa prevalenţa SM este de aproximativ 25-30 Statele Unite Ale Americii
au raportat o prevalenţă a sindromului metabolic de 22 icircn populaţia cu vacircrsta peste 20 ani
pe cacircnd la vacircrstă mai mare de 60 ani s-a observat o prevalenţă de 44 (1419) Icircn studiul
efectuat am observat o prevalenţă standardizată de 2732 (95 CI 2460-3003) care este
icircn concordanţă cu prevalenţele raportate icircn Europa precum şi o creştere a ponderii SM icircn
populaţie icircn raport cu vacircrsta Am preferat utilizarea definiţiei Harmonised I pentru SM
deoarece cuprinde criterii adaptate pentru o abordare unitară a SM mărind astfel numărul
pacienţilor diagnosticaţi şi care vor urma tratament conform Ghidurilor de Practică Medicală
Limitările acestui studiu sunt legate de faptul că este concentrat doar pe populaţia asigurată şi
neasigurată aflată pe lista unui medic de familie din mediul urban Se pot efectua studii la
nivelul Cabinetelor Medicale de Medicină de Familie dar trebuie să se aplice pe un lot
reprezentativ urbanrural care să reprezinte populația acelei regiuni Utilizarea structurilor
populaționale atașate cabinetului de MF este utilă atacirct pentru cele clinice cacirct și pentru cele
epidemiologice deoarece surprinde populația studiată icircn mediul de viață cotidian Prevalenţa
mare a SM icircn populaţia studiată necesită aplicarea unei politici eficiente de sănătate publică
deoarece riscul producerii evenimentelor cardiovasculare majore poate fi redus semnificativ
printr-un control adecvat al componentelor SM (obezitate dislipidemii hipertensiune
arterială şi hiperglicemie
Studiul sindromului inflamator cronic icircn cadrul sindromului metabolic
Obiectivele studiului
- studierea markerilor inflamaţiei cronice şi aterogenezei la subiecţii cu şi fără SM
- evaluarea importanţei markerilor studiaţi ai inflamaţiei cronice icircn diagnosticul de
ambulator al sindromului metabolic
Material şi metodă
Icircn cercetarea inflamaţiei cronice din SM au fost incluşi 1530 subiecţi de ambele sexe cu
vacircrsta cuprinsă icircntre 18-91 ani icircnscrişi pe lista CMI Popa Elena Studiul s-a desfăşurat icircn
perioada 01012013ndash 31122013 Populaţia ţintă a fost identică cu cea din studiul
epidemiologic şi s-a desfăşurat concomitent cu studiul prevalentei SM Subiecţii au fost
icircmpărţiţi icircn două loturi lotul cu SM (Lot SM) şi lotul de control (fără SM)
Lot SM a) criterii de includerevacircrsta peste 18 ani recrutarea pe baza semnării
Consimţămacircntului liber informat SM diagnosticat pe baza criteriilor Harmonised I (14) b)
criterii de excluderevacircrstă sub 18 anirefuzul semnării Consimţămacircntului liber informat
femei icircn perioada de graviditate sau de lactaţie
Lot Control (fără SM) a) criterii de includerevacircrsta peste 18 anirecrutarea pe baza
semnării Consimţămacircntului liber informat absenţa sindromului metabolic b) criterii de
excluderevacircrstă sub 18 ani refuzul semnării Consimţămacircntului liber informatfemei icircn
perioada de graviditate sau de lactaţie
Rezultate
Lotul cu SM (Lot SM) a fost format din cei 389 pacienţi diagnosticaţi cu SM conform
criteriilor Harmonised I Lotul SM a fost alcătuit din 185 bărbaţi şi 204 femei raportul
bărbaţifemei fiind de 090 (95 CI073-112) Lotul de control (fără SM) a fost alcătuit
din cei 1141 participanţi care nu au icircntrunit criteriile de diagnostic ale sindromului metabolic
Din cei 1141 de subiecţi 530 au fost de sex masculin iar 611 de sex feminin raportul
bărbaţifemei fiind 087 (95 CI 077-097) Vacircrsta subiecţilor a fost semnificativ mai mare
icircn lotul pacienţilor cu SM (5976plusmn1322 ani) comparativ cu lotul martor (4333plusmn 1748 ani) (t-
Test Plt00001) Aşa cum ne-am aşteptat valorile medii ale componentelor clinice ale SM
(circumferinţa abdominală tensiunea arterială sistolică şi diastolică) au fost mai mari icircn lotul
pacienţilor cu SM (t-Test Plt0001 pentru fiecare dintre componente) Studiind parametrii
biochimici incluşi icircn diagnosticul SM valorile medii ale glicemiei şi TG au fost semnificativ
mai crescute icircn lotul SM (t-Test Plt00001 pentru ambele constante) Icircn acelaşi timp
valoarea medie determinată a HDL-col a fost semnificativ mai mare la subiecţii din lotul
martor ( t-Test Plt00001) SM se caracterizează printr-o dislipidemie aterogenă
caracterizată de creşterea TG scăderea HDL-col concomitent cu creşterea LDL-col creşterea
Non-HDL-col şi a raportului de aterogenitate (Col totalHDL-col) (185) Comparacircnd cele
două loturi am observat că valoarea medie a LDL-colesterolului determinată icircn lotul
pacienţilor cu SM a fost semnificativ mai mare faţă de subiecţii din lotul martor (t-Test P =
00002) Măsurarea Non-HDL-colesterolului a arătat prezenţa unei diferenţe semnificative
icircntre cele două loturi (figura 420 B) Astfel icircn concordanţă cu prezenţa dislipidemiei
aterogene valoarea medie a Non-HDL-col a fost semnificativ mai mare (t-Test Plt 00001) icircn
lotul cu SM comparativ cu lotul de control Icircn contextul inflamației cronice şi aterogenezei
din sindromul metabolic am evaluat sensibilitatea şi specificitatea Non-HDL-colesterolului
ca test diagnostic al SM Valoarea Non-HDL-colesterolului care prezice cu cea mai mare
acurateţe prezenţa SM a fost de 151 mgdl (punctul de ldquocut-offrdquo) pentru care am calculat o
sensibilitate de 64 27 şi o specificitate de 5872 Calculul ariei AUC a furnizat valoarea
de 0605 şi deci determinarea concentraţiei serice a parametrului Non-HDL-colesterolului are
valoarea unui marker cu acurateţe redusă Am studiat valorile raportului Col totalHDL-col icircn
cele două loturi şi am constatat că la pacienţii cu SM valoarea media a raportului de
aterogenitate este semnificativ mai mare faţă de valoarea raportului determinată icircn lotul
martor (t-Test Plt 00001) Pentru raportul de aterogenitate studiat analiza curbei ROC a
arătat că valorile mai mari decacirct punctul de ldquocut-offrdquo de 431 prezic prezenţa SM cu cea mai
mare sensibilitate (6381 ) şi specificitate (6582)Valoarea AUC pentru indicele de
aterogenitate a fost de 0667 şi icircn studiul SM acest indice poate fi considerat un marker cu
acurateţe redusă Valoarea medie determinată a acidului uric la subiecţii fără SM a fost
semnificativ mai mică decacirct icircn lotul SM (t-Test Plt 00001) Curba ROC a arătat că valorile
acidului mai mari de 43 mgdl prezic diagnosticul de SM cu cea mai mare sensibilitate
(8107) şi specificitate (5328) Pentru acidul uric AUC a avut valoarea de 0655 şi
icircncadrează determinarea acidului uric seric icircn racircndul testelor cu acurateţe redusă (187)
Comparacircnd populaţiile de leucocite (tabel XXI) valoarea medie determinată a
numărului de Eo a fost semnificativ mai mare icircn lotul cu SM comparativ cu lotul martor (t-
Test Plt0001) Analizacircnd curba ROC trasată pentru valorile numărului de Eo am observat
că valorile ldquocut-offrdquo mai mari de 200 Eomm3
pot prezice prezenta SM cu cea mai mare
specificitate (7705) şi sensibilitate (3978) Pentru diagnosticul SM calculul ariei AUC a
arătat faptul că determinarea numărului de Eo are valoarea unui test diagnostic cu acurateţe
redusă (AUC = 0 589) Comparacircnd valorile medii ale fibrinogenului am calculat o diferenţă
statistic semnificativă icircntre cele două loturi valoarea medie a fibrinogenului fiind mai mare icircn
lotul SM ((t-Test P lt 00001) Cu ajutorul curbei ROC am observat că valorile fibrinogenului
mai mari de 306 mgdl prezic sindromul metabolic cu o sensibilitate de 7511 şi specificitate
de 6056 Fibrinogenul a fost icircncadrat icircn categoria markerilor inflamatori cu acurateţe
redusă AUC avacircnd valoarea de 0690 Icircn loturile de studiu am calculat AUC corespunzătoare
criteriilor de diagnostic ale SM Am observat că icircn cazul scorului Harmonised I
sensibilitatea şi specificitatea sunt de 100 iar AUC este egală cu 1000 Pentru cele cinci
criterii de diagnostic AUC a avut valori icircntre 0636 (pentru variabila HDL-col) şi 0804
(pentru variabila CA) (figura 431)
AUC ES 95 CI
Scor SM Harmonised I 1000 00000 0997 - 1000
CA (cm) 0804 00133 0781 - 0825
TAD (mmHg) 0666 00169 0639 - 0692
TAS (mmHg) 0757 00148 0732 - 0780
Glicemie (mgdl) 0742 00160 0717 - 0766
Trigliceride (mgdl) 0756 00175 0732 - 0780
HDL- colesterol 0636 00183 0609 - 0662
Figura 431 Analiza AUC criterii de diagnostic ale SM
Studiind figura 432 se observă că valoarea AUC pentru markerii studiaţi este cuprinsă
icircntre 0589 (icircn cazul variabilei Eo) şi 0690 (icircn cazul fibrinogenului) Icircn contextul SM
acurateţea acestor markeri ai inflamaţiei cronice şi disfuncţiei endoteliale poate fi considerată
redusă deoarece AUClt07 pentru toţi markerii investigaţi (figura 431) Totuşi valorile ariilor
parametrilor reprezentaţi icircn figura 431 sunt apropiate de valorile AUC ale variabilelor TAD
şi HDL-col (figura 432) şi deci pot fi utilizaţi pentru completarea diagnosticului de SM
AUC ES 95 CI
Non-HDL-colesterol 0605 00171 0580 - 0630
Col totalHDL-col 0607 00163 0642 - 0691
Acid uric 0655 00161 0630 - 0679
Fibrinogen 0690 00206 0658 - 0720
Eozinofile 0589 00176 0564 - 0615
Figura 432 AUC markeri ai SM inflamaţiei cronice şi aterogenezei
Discuţii
Status-ul proinflamator din SM asociat cu insulinorezistenţa şi disfuncţia endotelială
constituie o verigă de legătură dintre inflamaţie şi procesele metabolice complexe icircnsoţindu-
se de deteriorarea funcţiilor vasculare şi creşterea riscului de evenimente cardiovasculare
majore (2858) Studiul efectuat a arătat o diferenţă icircntre vacircrstele subiecţilor din cele două
loturi vacircrsta pacienţilor cu SM fiind semnificativ mai mare (Plt0001) comparativ cu subiecţii
normali confirmacircnd faptul menţionat că vacircrsta reprezintă unul din stimulii care agravează
inflamaţia cronică Am arătat că valorile fibrinogenului sunt mai mari icircn SM comparativ cu
Scor Harmonised I
0 20 40 60 80 100
0
20
40
60
80
100
100-Specificitate
Sen
sib
ilit
ate
Criterii diagnostic SM
0 20 40 60 80 100
0
20
40
60
80
100
100-Specificitate
Sens
ibili
tate
CA
TAD
TAS
Glicemie
Trigliceride
HDL-C
0 20 40 60 80 100
0
20
40
60
80
100
100-Specificitate
Sensi
bilita
te
Non-HDL-C
Col T HDL-C
Acid uric
Fibrinogen
Eozinofile
lotul martor atacirct la bărbaţi cacirct şi la femei icircn concordanţă cu studiile anterioare Evaluarea
fibrinogenului este importantă nu numai icircn SM pentru definirea contextului proinflamator şi
protrombotic ci şi icircn predicţia cardiovasculară la subiecţii normali Studiind populaţiile
leucocitare am obţinut diferenţe semnificative icircn cazul Eo valoarea medie a acestora fiind
semnificativ mai mare icircn lotul cu SM comparativ cu lotul martor (P lt 0001 figura 425B)
Implicarea Eo icircn SM s-a conturat icircn ultimul deceniu aceste celule fiind implicate icircn recrutarea
macrofagelor din ţesutul adipos Experimental s-a constatat că o creştere a Eo apărută ca
urmare a infectării cu helminţi sau stimulare cu IL-5 este urmată de icircmbunătăţirea toleranţei la
glucoză (199) Controlul pe care icircl exercită Eo asupra activării macrofagelor ar putea fi cheia
intervenţiei asupra obezităţii icircn viitorul apropiat(165199) Hiperuricemia asociata frecvent cu
SM este cunoscut ca un factor independent de risc cardiovascular (192 202) In concordanţă
cu aceasta afirmaţie in studiul nostru am constatat ca nivelul seric al acidului uric a fost mai
crescut in lotul cu SM diferenţa semnificativă din punct de vedere statistic (P lt 00001)
Dislipidemia aterogenă din sindromul metabolic şi diabetul zaharat se caracterizează prin
creşterea trigliceridelor şi a Non-HDL-col scăderea HDL-col creşterea numărului de
particule LDL modificate (185190) La pacienţii cu SM am descris un profil aterogenetic
cu risc crescut de evenimente cardiovasculare majore
STUDIUL RECEPTORILOR ACTIVAŢI DE INDUCTORII PROLIFERĂRII
PEROXIZOMILOR-ALPHA IcircN LEUCOCITELE CIRCULANTE
Ipoteza de lucru
Studii experimentale efectuate au arătat că rolul PPARα icircn ateroscleroză derivă din
implicarea acestor receptori icircn limitarea inflamaţiei Plecacircnd de la acest fundament ne-am
propus evidenţierea receptorilor nucleari activaţi de inductorii proliferării peroxizomilor-
alpha (PPARα) prin citometrie de flux icircn leucocitele din sacircngele periferic alături de
evaluarea acestei metode icircn cuantificarea expresiei relative a PPARα ca test diagnostic
precoce al modificărilor metabolice SM Studiul expresiei relative a receptorilor PPARα a
plecat de la premisa că dacă SM se caracterizează printr-un status inflamator cronic nivelul
de expresie a PPARα icircn leucocitele circulante este mai scăzut la pacienţii cu SM comparativ
cu subiecţii normali Referitor la studiul receptorului CD36 am plecat de la presupunerea că
nivelul de expresie al acestui receptor icircn SM este crescut dat fiind importanţa acestui receptor
icircn inflamaţia aterosclerotică Avacircnd icircn vedere efectele receptorilor amintiţi icircn
insulinorezistenţă şi aterogeneză am considerat necesară evaluarea prezenţei receptorului
nuclear PPARα icircn paralel cu studiul receptorului bdquoscavengerrdquo CD-36 prin metoda citometriei
icircn flux Astfel icircn studiul efectuat mi-am propus şi investigarea existenţei unei legături icircntre
nivelul de expresie al receptorilor PPARα şi cel al receptorului CD-36 De asemenea ne-am
icircndreptat atenţia spre stabilirea unor asocieri icircntre componentele clinice şi biochimice ale
sindromului metabolic şi nivelul intensităţilor de fluorescenţă ale PPARα şi CD-36 ca măsură
a expresiei relative a acestor receptori
Material și metodă
Studiul receptorilor PPARα icircn contextul sindromului metabolic s-a desfăşurat icircn
perioada 1012014 -28022014 pe baza metodologiei studiilor de tip caz-martor Am urmărit
identificarea unor diferenţe icircntre expresia receptorilor PPARα la pacienţii cu SM comparativ
cu subiecţii sănătoşi diferenţe care ar putea fi utile icircn diagnosticul precoce al SMRecrutarea
pacienţilor s-a efectuat din pacienţii prezentaţi pentru consultaţie la Cabinetul Individual
ldquoCMI Dr Popa Elenardquo situat icircn strada Ion Creanga din Iaşi Pentru studiul receptorilor
PPARα icircn sindromul metabolic au fost selecţionaţi un număr de 57 de subiecţi 26 de subiecţi
cu SM (constituind lotul SM) şi 31 subiecţi fără SM constituind lotul de control (Lot Non-
SM) Pentru studiul SM pacienţii au fost recrutaţi din masa de populaţie arondată cabinetului
de MF fără istoric de SM diabet zaharat boală cardio-vasculară aflați la primul diagnostic
de SM evaluarea completă a acestora fiind urmată de includerea icircn programul de
management cardiovascular şi metabolic conform Ghidurilor Terapeutice aflate icircn vigoare
Lot SM a) criterii de includerevacircrsta peste 18 ani recrutarea pe baza semnării
Consimţămacircntului liber informatSM nou-diagnosticat pe baza prezenţei a minim trei criterii
de diagnostic pentru SM conform Harmonised I b) criterii de excluderevacircrstă sub 18 ani
refuzul semnării Consimţămacircntului liber informat femei icircn perioada de graviditate sau de
lactaţie SM anterior diagnosticat istoric de diabet zaharat boală cardiovasculară constituită
tratament cu agonişti PPARα (ie fibraţi etc)
Lot martor (Non-SM) a) criterii de includerevacircrsta peste 18 ani recrutarea pe baza
semnării Consimţămacircntului liber informat absenţa diagnosticului de SM b) criterii de
excludere vacircrstă sub 18 ani refuzul semnării Consimţămacircntului liber informat femei icircn
perioada de graviditate sau de lactaţie
Studiul receptorilor PPARα a inclus două subetape
A Studiul componentelor sindromului metabolic conform criteriilor Harmonised I
Evaluarea clinică a participanţilor s-a desfăşurat icircn cadrul Cabinetului de Medicină de
Familie iar determinările hematologice şi biochimice s-au efectuat icircn Laboratorul
Ambulatorului Clinic de Specialitate al Spitalului Clinic de Urgenţă bdquoSf Spiridonrdquo Iaşi
B Evaluarea icircn citometrie de flux a nivelului relativ de expresie a PPARα şi CD36
Studiul receptorilor PPARα s-a desfăşurat icircn Laboratorul de Biologie Moleculară al
Institutului Regional de Oncologie Iaşi prin metoda citometriei icircn flux (19) Nivelul relativ de
expresie al receptorilor nucleari PPARα a fost determinat icircn diferite tipuri de leucocite
circulante polimorfonucleare (PMN) limfocite (Ly) Mo(Mo) şi eozinofile(Eo) Am utilizat o
metodă de citometrie icircn flux optimizată ldquoin houserdquo elaborată icircn cadrul Laboratorului de
Biologie Moleculară al IRO Iaşi Icircn cursul procesului de optimizare am testat mai multe
concentraţii ale anticorpului anti-PPARα 1100 1500 11500 14500 iar icircn urma
determinărilor efectuate şi a analizei statistice concentraţia 1500 a fost considerată optimă
pentru desfăşurarea studiului (tabel XXIII figura 51)
Tabel XXIII Optimizarea concentraţiilor Ac anti-PPARα Diferenţa
mediilor
valorilor
medii
PMN
Diferenţa
mediilor
mediane-
lor
PMN
Diferenţa
mediilor
valorilor
medii
Ly
Diferenţa
mediilor
mediane-
lor
Ly
Diferenţa
mediilor
valorilor
medii
Mo
Diferenţa
mediilor
mediane-
lor
Mo
Diferenţă 0 1300 1600 100 100 700 750
normal - 1100 650 1050 1050 1350 450 900
patologic 1500 2850 2750 3800 3600 2850 2400
11500 -1050 800 3500 3300 2250 1800
14500 2200 2150 1300 1100 2950 2850
AOptimizare
BRepetabilitate
Figura 51 Optimizarea concentraţiei anticorpului anti-PPARα
Icircn concordanţă cu literatura de specialitate icircn cercetarea efectuată intensitatea medie
de fluorescenţă (MFI) a fost utilizată ca măsură pentru evaluarea expresiei celulare a
receptorilor PPARα (212) Un exemplu de analiză a probelor este reprezentat icircn figura 52
Figura 52 Exemplu de analiză flowcitometrică pentru receptorul nuclear PPARα Graficul din stacircnga reprezintă distribuţia leucocitelor iar cel din dreapta ilustrează distribuţia
intensităţii de fluorescenţă pentru populaţiile de celule selectate
Intensitatea Medie a Fluorescenţei (MFI) a CD36 ca o măsură a nivelului relativ de
expresie a acestor receptori la nivelul membranei Mo a fost detectată printr-o metodă
convenţională pentru marcare de suprafaţă şi evaluare pe bază de citometrie icircn flux folosind
aceleaşi probe de sacircnge cu EDTA cu focalizare pe Mo şi utilizacircnd CD14 ca marker specific
pentru Mo (figura 53)
Figura 53Analiza
flowcitometrică
pentru marcajul
CD14 - CD36
Rezultate
Icircn cele două loturi au fost incluşi icircn studiu un număr de 57 de participanţi care au fost
investigaţi din punct clinic şi paraclinic Vacircrsta subiecţilor incluşi icircn studiu a fost cuprinsă
icircntre 18 şi 79 ani iar vacircrsta medie calculată a avut valoarea de 4805 plusmn 1587 ani Pentru sexul
masculin vacircrsta medie este de 4925plusmn1617 ani iar pentru sexul feminin 4689 plusmn1 5ani
diferenţa obţinută icircntre vacircrstele pacienţilor fiind statistic nesemnificativă (P = 085)
Analizacircnd vacircrstele subiecţilor din cele două loturi am observat că vacircrsta medie a pacienţilor
cu SM (5476 plusmn 1183 ani) a fost semnificativ mai mare (t-test P = 0003) decacirct icircn lotul
martor (4258 plusmn 169 ani) Pentru diagnosticul sindromului metabolic am calculat scorul de
SM bazacircndu-ne pe criteriile Harmonised I Conform criteriilor diagnostice din cei 57 de
subiecţi investigaţi un număr de 26 participanţi (46) au fost incluşi icircn lotul cu SM (Lot
SM) iar 31 de subiecţi(54) nu au prezentat acest sindrom constituind lotul martor (Lot
Non-SM) Din punct de vedere al repartiţiei pe sexe nu au existat diferenţe statistic
semnificative raportul bărbaţifemei fiind de 0961 Din totalul celor 28 de bărbaţi incluşi icircn
studiu 4285 (12 bărbaţi) au icircntrunit cel puţin trei criterii diagnostice pentru SM fiind
incluşi icircn lotul SM Icircn acelaşi timp 14 femei reprezentacircnd 4827 din subiecţii de sex
feminin au icircntrunit condiţiile pentru includerea icircn lotul pacienţilor cu SM Valoarea medie
determinată pentru scorul de SM a arătat prezenţa unor valori semnificativ statistic mai mari
din punct (t-test P lt 00001) icircn lotul SM (769plusmn176) comparativ cu lotul martor (174 plusmn
184) Am studiat comparativ media valorilor măsurate ale criteriilor componentelor SM
Analiza statistică a arătat valori semnificativ statistic mai mari pentru CA TG glicemie TAS
şi TAD (plt0001) icircn lotul SM comparativ cu lotul normal Concomitent calculul statistica
evidenţiat o scăderea semnificativă a HDL-colesterolului icircn lotul cu SM comparativ cu
subiecţii din lotul martor (Non-SM) Aplicacircnd testul z am comparat ponderea pacienţilor
diagnosticaţi cu HTA dislipidemie şi tulburări ale metabolismului glucidic icircn lotul SM versus
lot Non-SM şi am constatat prezenţa acestor afecţiuni icircntr-un procent mai mare semnificativ
statistic icircn lotul SM ((plt0001)
Utilizacircnd testul t Student am calculat diferenţele statistice şi icircntre alți parametri
studiaţi care sunt factori de risc cardio-vascular dar care nu sunt componente ale SM Icircn lotul
cu SM valorile acidului uric fibrinogenului Col total Non-HDL-col şi LDL-col au fost
semnificativ mai mari comparativ cu lotul martor (tabel XXVI) Analizacircnd valorile medii ale
populaţiilor de leucocite am identificat doar pentru populaţia de Eo diferenţe statistice icircntre
cele două loturi numărul Eo icircn lotul SM fiind semnificativ mai mare decacirct icircn lotul martorTot
pentru caracterizarea celor două loturi am analizat prezenţa antecedentelor
heredocolaterale (AHC) de diabet zaharat boala cardiovasculară şi dislipidemie pentru toţi
subiecţii investigaţi Astfel existenţa AHC de HTA a fost declarată de 2580 din subiecţii
incluşi icircn lotul martor respectiv de 5384 din numărul pacienţilor cu SM Antecedentele
heredocolaterale de dislipidemie au fost prezente la 3461 din pacienţii cu SM icircn timp ce icircn
lotul martor anamneza a evidenţiat aceste antecedente la 3548 din subiecţi
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα
Icircn cercetarea desfăşurată am utilizat intensitatea medie de fluorescenţă (MFI) ca
măsură a nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn leucocitele studiate Pentru
populaţiile de leucocite analiza computerizată a probelor luate icircn studiu a furnizat valori
pentru MFI a receptorilor PPARα icircn funcţie de cantitatea de anticorpi anti-PPARα marcaţi cu
fluorocrom care se leagă de aceste celule şi apoi sunt captaţi de citometru (figura 59)
A Lot Non - SM
B Lot SM
Figura 59 Analiza flowcitometrică pentru receptorii PPARα icircn leucocite A lot normal B lot SM
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Mo
Analiza probelor efectuată conform protocolului de lucru descris a arătat prezenţa
PPARα icircn Mo recoltate din sacircngele tuturor subiecţilor incluşi icircn această cercetare Pentru toţi
participanţii investigaţi analiza MFI a Ac anti - PPARα icircn populaţia de Mo (Mo) a arătat un
interval de variaţie icircntre [786 395] Valoarea medie a nivelului de expresie relativă a PPARα
calculată pentru Mo a fost de 23210 plusmn7860 Pentru ambele loturi de studiu pacienţilor cu
SM testul Testul Shapiro-Wilk a arătat distribuţia normală a valorilor obţinute pentru nivelul
de expresie al PPARα icircn Mo
Tabel XXVIII Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn Mo
Lot SM Lot Non-SM
N 26 31
Media 22819 23538
SD 5819 7717
Mediana 22400 22600
Minimum 12800 78600
Maximum 35800 37900
Percentila 25 18300 18300
Percentila 75 26200 30350
Pentru pacienţii din lotul SM valoarea medie a MFI icircn Mo a fost de 22819 plusmn 5880 iar
pentru lotul martor s-a calculat o valoare medie a MFI a Ac anti-PPARα de 23538 plusmn 7717
Distribuţia statistică a frecvenţei valorilor MFI obţinute pentru nivelul de expresie a PPARα
icircn Mo subiecţilor din cele două loturi a fost reprezentată icircn figura 511
Figura 511 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti-PPARα icircn Mo
Sub forma unei diagrame de control Shewhart am reprezentat variaţia intensităţii medii de
fluorescenţă pentru anticorpii anti-PPARα icircn MoVariaţia nivelului de expresie relativă a
receptorilor PPARα icircn Mo subiecţilor studiaţi este ilustrată icircn fig 512 513
Figura 512 Lot SM Variaţia
expresiei relative a PPARα icircn Mo
Număr pacienţi
26
Minim 128
Maxim 358
Media 22819
DS 5819
25 din 26 valori ale MFI s-au icircncadrat
icircn intervalul Media plusmn 2DS
Figura 513 Lot Non-SM Variaţia
expresiei relative a PPARα icircn Mo
Număr pacienţi 31
Minimum 786
Maximum 379
Media 23538
DS 7717
Cu excepţia unei singure
determinări valorile calculate s-au
icircncadrat icircn Media plusmn 2DS
Utilizacircnd testul parametric t-Student pentru variabilele cu distribuţie normală am
comparat valoarea medie a intensităţii de fluorescenţă a Ac anti-PPARα icircn lotul cu SM versus
subiecţi fără SM (Lot Non-SM) Analiza statistică efectuată nu a identificat diferenţe icircntre
50 100 150 200 250 300 350 400 450
0
5
10
15
20
25
30
35
MFI anti-PPAR a
Frecv
enta
relati
va (
)
Lot SM
0 50 100 150 200 250 300 350 400 450 500
0
5
10
15
20
25
30
35
MFI anti-PPAR a
Frecv
enta
relati
va (
)
Lot martor
1 6 11 16 21 26 31
0
50
100
150
200
250
300
350
400
450
MFI
anti-
PPAR
a
2282
1106
3458
518
4046
Media
LCI
LCI
1 6 11 16 21 26 31 36
-100
0
100
200
300
400
500
MFI a
nti-PP
AR
a
2354
810
3897
39
4669LCS
LCI
Media
cele două loturi icircn ceea ce priveşte expresia PPARα la nivelul Mo circulante (t- Test P=
069)
Studiul receptorilor PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de AHC şi dislipidemie
Nivelul de expresie al receptorilor PPARα α icircn Mo tinde să fie mai scăzut la subiecţii
cu AHC de HTA comparativ subiecţii care nu au declarat AHC de HTA (P= 006 fig 515)
AHC HTA
Număr 22
Mediana 19950
Percentila 25 17800
Percentila 75 22700
AHC HTA absente
Număr 35
Mediana 24800
Percentila 25 19025
Percentila 75 31700
Figura 515 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Mo funcţie de AHC de HTA
Nu s-au calculat diferenţe semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor
PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de dislipidemie atunci cacircnd aceştia au fost comparaţi cu
subiecţii fără AHC de tulburări ale metabolismului lipidic (t- Test P= 020)
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn limfocite
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn populaţia de Ly a
demonstrat prezenţa receptorilor PPARα icircn Ly tuturor subiecţilor studiaţi Pentru toţi
participanţii investigaţi analiza MFI a Ac anti - PPARα icircn populaţia de Ly a relevat un
interval de variaţie icircntre [748 314] iar valoarea medie a MFI a fost de 18058 plusmn 5600
Pentru ambele loturi aplicarea testului Shapiro-Wilk a evidenţiat distribuţia normală a
valorilor determinate pentru nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Ly Pentru
pacienţii cu SM valoarea medie a MFI determinată pentru expresia PPARα icircn populaţia de
Ly a fost de 18178 plusmn 61 16 iar pentru lotul martor a fost de 16800 plusmn 5229
Tabel XXX Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn limfocite
Lot SM Lot Non-SM
N 26 31
Media 181781 179574
SD 611694 522907
Mediana 165000 168000
Minimum 81300 74800
Maximum 314000 301000
Percentila 25 13400 - 145750
Percentila 75 21800 21700
Distribuţia frecvenţei valorilor MFI a Ac anti-PPARα icircn Ly este redată icircn figura 518
Figura 518 Distribuţia frecvenţelor relative a MFI a Ac anti-PPARα icircn Ly
94 din determinările efectuate pentru determinarea nivelului de expresie relativă al
MFI
ant
iPPA
R
a_Mo
190
200
210
220
230
240
250
260
270
280
DA NU
AHC HTA
P=006
50 89 128 167 206 244 283 322 361 400
0
5
10
15
20
25
30
35
MFI anti-PPAR a
Frecv
enta
relati
va (
)
Lot SM
0 50 100 150 200 250 300 350
0
5
10
15
20
25
30
35
40
MFI anti-PPAR a
Frec
venta
relat
iva (
)
Lot Non-SM
receptorilor PPARα icircn limfocitele subiecţilor cu SM s-au icircncadrat icircn intervalul Media plusmn 2DS
Figura 5 19 Lot SM Variaţia expresiei
relative a PPARα icircn Ly
Număr pacienţi 26
Minimum 813
Maximum 31400
Media 18178
Deviaţia Standard 6116
25 valori s-au icircncadrat icircn Media plusmn 2DS
Pentru lotul Non-SM diagrama de control (figura 520) a arătat toate valorile
determinate pentru lotul Non-SM se icircncadrează icircntre LCS şi LCI
Figura 520 Lot Non -SM Variaţia
expresiei relative a PPARα icircn Ly
Număr pacienţi 31
Minimum 748
Maximum 30100
Media 179574
Deviaţia Standard 5229
96 din valori icircncadrate icircn Media plusmn 2DS
Aplicarea testului t-Student pentru valorile medii ale intensităţii de fluorescenţă ale
PPARα icircn Ly nu a arătat existenţa unei diferenţe statistic semnificative icircntre lotul cu SM şi
lotul martor(t- Test P= 088)
Analiza receptorilor PPARα icircn Ly subiecţilor cu AHC de HTA şi dislipidemie
Studiind populaţiile de Ly la subiecţii care au prezentat AHC de hipertensiune
arterială analiza flowcitometrică a relevat existenţa unor valori mai mici pentru MFI la aceşti
subiecţi comparativ cu cei fără AHC de HTA (fig 522) deşi scăderea observată nu a
icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică (t- Test P = 009)
AHC HTA
Număr 22
Mediana 16000
Percentila 25 12700
Percentila 75 17100
AHC HTA absenţe
Număr 35
Mediana 18700
Percentila 25 14900
Percentila 75 23175
Figura 522 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Ly funcţie de AHC de HTA
Nu am calculat diferenţe statistic semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor
PPARα icircn populaţiile de Ly ale subiecţilor la care am identificat AHC de dislipidemie
comparativ cu cei care nu au declarat antecedente familiale de dislipidemie (t- Test P= 051)
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn neutrofile (PMN)
Analiza flowcitometrică a evidenţiat prezenţa PPARα icircn PMN recoltate din sacircngele
venos al tuturor participanţilor la studiu Pentru toţi subiecţii investigaţi analiza MFI a Ac -
PPARα icircn populaţia de PMN a relevat un interval de variaţie de [163419] iar valoarea medie
a MFI pentru Ac anti-PPARα a fost de 26392 plusmn 7064 Testul Shapiro-Wilk a arătat o
distribuţie normală a valorilor intensităţii medii de fluorescenţă a anticorpilor anti-PPARα atacirct
icircn lotul pacienţilor cu SM cacirct şi icircn lotul martor
1 6 11 16 21 26 31
-50
0
50
100
150
200
250
300
350
400
MFI
anti-
PPAR
a
1818
595
3041
-17
3653
Media+2DS
Media- 2DS
1 6 11 16 21 26 31 36
0
50
100
150
200
250
300
350
MFI
ant
i-PPA
R
a
1796
750
2841
227
3364
Media+2DS
Media
Media- 2DS
MFI
anti-
PPAR
a Ly
130
140
150
160
170
180
190
200
210
DA NU
AHC HTA
P=009
Tabel XXXII Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn PMN
Lot SM Lot Non-SM
N 26 31
Media 26273 26480
SD 6915 7088
Mediana 25900 25500
Minimum 17200 16300
Maximum 39500 41900
Percentila 25 19800 19600
Percentila 75 30500 31500
Icircn cele două loturi distribuţia frecvenţei valorilor nivelului relativ de expresie a
receptorilor PPARα icircn PMN a fost reprezentată sub formă de histograme (fig 525)
Figura 525 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti-PPARα icircn PMN
Pentru cei 26 de pacienţi din lotul cu SM a valoarea medie a nivelului de expresie
relativă a receptorilor PPARα icircn PMN a fost de 26273 plusmn 6915 Studiind diagrama Shewhart
din figura 526 se observă că toate valorile obţinute pentru nivelul de expresie relativă
PPARα icircn PMN investigate se icircncadrează icircntre limitele definite de valorile medii plusmn 2DS
Figura 526 Lot SM
Variaţia expresiei relative a PPARα icircn
PMN
Număr pacienţi 26
Minimum 17200
Maximum 39500
Media 26273
Deviaţia Standard 6915
Valorile MFI icircncadrate icircn Media plusmn 2DS
Pentru lotul martor valoarea medie calculată a MFI a anticorpilor anti-PPARα a fost de
26480 plusmn 7088 peste 95 din valorile MFI fiind cuprinse icircn Media plusmn 2DS (figura 527)
Figura 527 Lot Non-SM Variaţia expresiei
relative a PPARα icircn PMN
Număr pacienţi 31
Minimum 16300
Maximum 41900
Media 26480
Deviaţia Standard 7088
30 valoriicircn Media plusmn 2DS
Pentru PMN analiza statistica nu a arătat existenţa unei diferenţe statistic semnificative icircntre
nivelul de expresie relativă a PPARα la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii din lotul
Non-SM (t- Test P= 090) Studiind populaţiile de PMN la subiecţii care au prezentat AHC
de HTA nu am calculat o diferenţă statistic semnificativă icircntre expresia receptorilor PPARα
la subiecţii cu istoric familial de hipertensiune arterială comparativ cu cei pentru care nu s-au
notat AHC de HTA (t- Test P= 013)De asemenea am identificat diferenţe icircntre nivelul de
expresie al PPARα icircn PMN subiecţilor care prezentau AHC de dislipidemie comparativ cu
cei fără AHC de dislipidemie (t- Test P= 017)
50 100 150 200 250 300 350 400 450 500
0
5
10
15
20
25
30
35
MFI anti-PPAR a
Frecve
nta rel
ativa (
)
Lot SM
50 100 150 200 250 300 350 400 450 500
0
5
10
15
20
25
30
MFI anti-PPAR a
Frecv
enta
relati
va (
)
Lot Non-SM
1 6 11 16 21 26 31
0
50
100
150
200
250
300
350
400
450
500
MFI
anti-
PPA
R
a
2627
1244
4010
553
4702
Media + 2DS
Media - 2 DS
Media
1 6 11 16 21 26 31 36
0
50
100
150
200
250
300
350
400
450
500
MFI
anti-
PPAR
a
2648
1230
4066
522
4774
Media+ 2DS
Media - 2DS
Media
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile Tabel XXXIV Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn Eo
Lot SM Lot Non-SM
N 26 31
Mediaplusmn SD 141057 plusmn 47604 172209 plusmn 37565
Mediana 142450 171300
Minimum 35000 68500
Maximum 233700 250600
Percentila 25 119300 153225
Percentila 75 169700 199550
Am studiat nivelul relativ de expresie a receptorilor PPARα icircn Eo iar rezultatele au
fost figurate sub forma de histograme (figura 532)
Figura 532 Distribuţia frecventelor relative ale valorilor MFI anti- PPARα icircn Eo
Din diagrama Shewhart (figura 533) se observă că toate valorile determinate pentru
nivelul de expresie relativă a PPARα icircn Eo pentru lotul SM s-au icircncadrat icircn [Media plusmn 3 DS]
peste 90 din determinări fiind cuprinse icircn [Media plusmn 2 DS] iar icircn [Media plusmn 1 DS] sunt
incluse peste 65 din valorile MFI
Figura 533 Lot SM
Variaţia expresiei relative a PPARα icircn Eo
Număr pacienţi 26
Minimum 35000
Maximum 233700
Media 141057
Deviaţia Standard 47604
24 valori icircncadrat eicircn [Media plusmn 2DS]
Pentru subiecţii incluşi icircn lotul martor analiza diagramei (figura 534) a arătat că
toate cele 31 de valori ale MFI pentru PPARα icircn Eo se icircncadrează icircn [Media plusmn 3DS] iar 30
dintre acestea se icircncadrează icircn [ Media plusmn 2 DS]
Figura 534 Lot Non -SM
Variaţia expresiei relative a PPARα icircn Eo
Număr pacienţi 31
Minimum 685
Maximum 2506
Media 172209
Deviaţia Standard 375 65
30 valori icircncadrate icircn [Media plusmn 2DS]
Comparacircnd subiecţii cu SM cu cei din lotul martor am observat o scădere
semnificativă statistic a MFI a Ac anti - PPARα icircn Eo pentru pacienţiir cu SM ( figura 535)
PPARα Eo Lot Non-SM
Număr 31
Mediana 171300
Percentila 25 152325
Percentila 75 199550
PPARα Eo Lot SM
Număr 26
Mediana 142450
Percentila 25 119300
Percentila 75 169700
Figura 5 35 Comparaţie icircntre nivelul de expresie a PPARα icircn Eo
0 500 1000 1500 2000 2500 3000
0
10
20
30
40
50
MFI anti-PPAR a
Frecvent
a relativa
()
Lot SM
400 800 1200 1600 2000 2400 2800
0
5
10
15
20
25
30
35
40
45
MFI anti-PPAR a
Frecenta
relativa
()
Lot Non-SM
1 6 11 16 21 26 31
-500
0
500
1000
1500
2000
2500
3000
MFI a
nti-PP
AR
a
14106
4765
23447
94
28117
Media + 2DS
Media- 2DS
LCI
LCS
1 6 11 16 21 26 31 36
500
1000
1500
2000
2500
3000
MFI an
ti-PPA
R a
17221
9708
24734
5951
28490
LCI
Media-2DS
Media
Media +2 DS
LCS
1200
1300
1400
1500
1600
1700
1800
1900
Lot SM Lot Non-SM
P=00072
Cu ajutorul curbei ROC am evaluat posibilitatea utilizării MFI a Ac anti - PPARα icircn
Eo ca marker pentru diagnosticul SM Valoarea MFI a Ac anti - PPARα icircn Eo care prezice cu
cea mai mare acurateţe prezenţa SM a fost de 1533 (punctul de ldquocut-offrdquo) pentru care am
calculat o sensibilitate de 5652 şi o specificitate de 7778 Calculul ariei AUC a furnizat
valoarea de 0663 şi deci determinarea parametrului MFI anti- PPARα icircn Eo are valoarea
unui test cu acurateţe redusatilde icircn diagnosticul SM Studiind expresia PPARα icircn Eo la subiecţii
care au prezentat AHC de HTA am observat o scădere semnificativă statistic (P = 00023) a
expresiei PPARα la subiecţii cu istoric familial de HTA comparativ cu subiecţii fatilderatilde AHC de
HTA (figura 537)
AHC HTA
Număr 22
Mediana 148800
Percentila 25 116425
Percentila 75 170750
AHC HTA absente
Număr 35
Mediana 170850
Percentila 25 143700
Percentila 75 195000
Figura 537 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Eo funcţie de AHC de HTA
Studiind subiecţii cu AHC declarate de dislipidemie nu am identificat diferenţe icircntre
nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Eo subiecţilor cu AHC de dislipidemie
comparativ cu cei care nu au declarat prezenţa AHC de dislipidemie (t - Test P = 067)
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor CD36
Am studiat expresia receptorilor CD36 icircn Mo subiecţilor incluşi icircn studiu
Lot Non - SM
BLot SM
Figura 539 Analiza flowcitometrica pentru receptorii CD36 icircn Mo
Pentru toţi participanţii la studiu valorile MFI au variat icircn intervalul [817 6933] iar
valoarea medie a MFI a Ac anti-CD36 a fost de 397133 plusmn 120902 Tabel XXXVII Statistică descriptivă pentru a CD36 icircn Mo
Lot SM Lot Non-SM
Media 429034 370377
Deviatia Standard 109051 125514
Mediana 411000 362800
Minimum 266400 81700
Maximum 693300 616800
Percentila 25 346200 273750
Percentila 75 469000 453300
Distribuţia frecvenţelor relative a MFI au fost prezentate sub formă histogramelor
Figura 541 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti - CD36 icircn Mo
MFI
ant
i-PPA
R a Eo
1000
1100
1200
1300
1400
1500
1600
1700
1800
1900
DA NU
AHC HTA
P=00023
1000 2000 3000 4000 5000 6000 7000 8000
0
5
10
15
20
25
MFI anti-CD36
Frecve
nta rela
tiva (
)
Lot SM
0 1778 3556 5333 7111
0
5
10
15
20
25
30
35
MFI anti-CD36
Frecve
nta rel
ativa (
)
Lot Non - SM
Referitor la lotul SM 92 din valorile MFI a Ac anti- CD36 s-au icircncadrat icircn
intervalul Media plusmn 2 DS (figura 542) iar pentru lotul martor peste 90 dintre acestea icircn
Media plusmn 2 DS (figura 543)
Figura 542 Lot SM
Variaţia MFI anti-CD36 icircn Mo
Număr pacienţi 26
Minimum 2664
Maximum 6933
Media 429034
Deviaţia Standard 109051
Figura 543 Lot Non -SM
Variaţia MFI anti- CD36 icircn Mo
Număr 31
Minimum 81700
Maximum 616800
Media 370377
Deviaţia Standard 125514
Comparacircnd subiecţii cu SM cu cei din lotul normal am constatat o tendinţă de creştere
a expresiei CD36 icircn lotul cu SM((t - Test P= 0067)
MFI anti - CD36 Lot Non-SM
Număr 31
Mediana 3628
Percentila 25 2737
Percentila 75 4533
MFI anti - CD36 Lot SM
Număr 26
Mediana 4110
Percentila 25 3462
Percentila 75 4690
Figura 544 Comparaţie icircntre cel două loturi privind MFI anti - CD36 icircn Mo
Referindu-ne la subiecţii cu AHC de HTA am observat o tendinţă de creştere a
valorilor MFI anti-CD36 comparativ cu cei care nu au avut AHC de HTA (t - Test P = 0 08)
AHC HTA
Număr 22
Mediana 442800
Percentila 25 355275
Percentila 75 519475
AHC HTA absenţe
Număr 35
Mediana 377400
Percentila 25 316900
Percentila 75 443400
Figura 545 Comparaţie icircntre expresia CD36 icircn Mo funcţie de AHC de HTA
Nu s-au calculat diferenţe semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor
PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de dislipidemie atunci cacircnd aceştia au fost comparaţi cu
subiecţii fără AHC de dislipidemie (t - Test P=031)
Corelaţii icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα si CD36
Studiind valorile intensităţii medii de fluorescenţă a Ac anti-PPARα icircn Mo Ly şi
PMN am observat că nivelul de expresie celularatilde a PPARα icircn Mo Ly şi PMN sunt corelate
puternic pozitiv atacirct icircn lotul SM cacirct şi icircn lotul martor(fig547 548)
1 6 11 16 21 26 31
0
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
Pacienti
MFI a
nti-CD
36
42903
21093
64714
10188
75619
LCI
Media
LCS1 6 11 16 21 26 31 36
-1000
0
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
MFI a
nti- C
D36
37038
11935
62141
-616
74692Media + 2 DS
Media
Media - 2 DS
3200
3400
3600
3800
4000
4200
4400
4600
4800
Lot SM Lot Non-SM
P = 00676
MFI
anti-
CD36
3400
3600
3800
4000
4200
4400
4600
4800
5000
DA NU
AHC HTA
P = 008
Figura 547 Studiul relatiilor dintre
receptorii PPARα icircn SM A Mo vs PMN B Mo vs Ly
C PMN vs Ly Graficul ilustrează coeficienţii r P dreapta de
regresie (linia centrala) intervalul de icircncredere
95 şi intervalul de predicţie 95
Figura 548 Corelaţii icircntre receptorii PPARα icircn lotul
martor
A Mo vs PMN
B Mo vs Ly
C PMN vs Ly
Tot pentru lotul SM cacircnd am evaluat relaţia dintre nivelul de expresie relativă a
receptorilor PPARα icircn Eo şi nivelul de expresie relativa a receptorilor CD 36 am obţinut o
corelaţie negativă (r = - 05 P = 001) (fig 549 A)
50 100 150 200 250 300 350 50
100
150
200
250
300
350
400
450
500
PPARα Ly
PPARα PMN
y = 56641 + 1159 x r = 086 P lt 0001
C
50 100 150 200 250 300 350 400 0
50
100
150
200
250
300
350
PPARα Mo
PPARα Ly
y = 36665 + 0607 x r = 090 P lt 0001
B
150 200 250 300 350 400 450 0
50 100 150 200 250 300 350 400 450 500
PPARα PMN
PPARα Mo
y = 2505 + 0879 x r = 081 P lt 0001
A
50 100 150 200 250 300 350
50 100 150 200 250 300 350 400 450 500
PPARα Ly
PPARα PMN
y = 95668 + 0919 x r = 081 P lt 0001
C
100 150 200 250 300 350 400
0
50
100
150
200
250
300
350
400
PPARα Mo
PPARα Ly
y = -7503 + 0829 x r = 079 P lt 0001
B
100 150 200 250 300 350 400
50
100
150
200
250
300
350
400
450
500
PPARα Mo
PPARα PMN
y = 61384 + 0882 r = 074 P lt 0001
A
Figura 549 Corelaţii icircntre expresia PPARα icircn Eo şi alte tipuri de receptori investigaţi A PPARα Eo şi CD 36 (Lot SM) B PPARα Eo şi PPARα Mo( Lot Non-SM)
Icircn lotul martor am identificat o asociere moderată pozitivă (r = 038 P = 0033) icircntre
nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Eo şi Mo (figura 549B) corelaţie absentă icircn
lotul pacienţilor cu SM
Corelaţii dintre receptorii studiaţi şi componentele sindromului metabolic
Icircn lotul de control analiza statistică a relevat faptul că icircntre circumferinţa
abdominală (CA ) şi nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Mo Ly şi PMN există o
corelaţie inversă adică scăderea expresiei PPARα la nivelul acestor populatii celulare ar fi
icircnsoţită de creşterea CA (figura 550
Figura 550Corelaţii dintre receptorii
PPARα si CA A Mo B Ly C PMN
La pacienţii cu SM am notat o corelatie moderată negativă statistic semnificativă
icircntre TG şi valorile MFI a Ac anti- PPARα icircn Mo şi Ly( fig 551)
150 200 250 300 350 400 450 50
60
70
80
90
100
110
PPARα PMN
CA r = - 040 P = 0024
C
50 100 150 200 250 300 350 50
60
70
80
90
100
110
PPARα Ly
CA r = - 046 P = 0009
B
50 100 150 200 250 300 350 400 50
60
70
80
90
100
110
PPARα Mo
CA r = - 042 P = 0017
A
50 100 150 200 250 300 350 400 500
1000
1500
2000
2500
3000
PPARα Mo
PPARα Eo
r = 038 P = 0033
B
0 500 1000 1500 2000 2500 1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
PPARα Eo
CD36
r = 050 P = 0010
A
Figura 551 Lot SM Corelaţie icircntre expresia PPARα şi TG (A Mo B Ly)
Analizand corelatia dintre receptorii CD36 si valorile TA la pacientii cu SM am observat
o asociere pozitivă asteptată intre TAD si nivelul de expresie al receptorilor CD36 (fig 552)
Figura 552 Lot SM Corelaţii icircntre expresia
receptorilor CD36 şi valorile tensiunii arteriale
diastolice
Studiind corelaţiile dintre receptorii PPARα şi HDL-col la subiecţii din lotul martor am
notat o asociere pozitivă icircntre expresia PPARα icircn Mo şi Ly cu HDL-col (fig 553)
Figura 553 Lot martor Corelaţii icircntre HDL-col şi expresia PPARα icircn Mo(A) Ly(B)
Icircn lotul normal am evidenţiat corelaţii pozitive moderate dar semnificative statistic icircntre
CA şi valorile TAS (r = 062 P lt 0001) respectiv TAD (r = 050 P=0004) precum şi icircntre
CA şi glicemia subiecţilor normali (r = 052 P = 0003) Aceste date icircmpreună cu relaţia
invers proporţională identificată icircntre HDL-col şi CA (r = 050 P = 001) susţin validitatea
acestui studiu Icircn lotul subiecţilor cu SM am observat o corelaţie moderat pozitivă icircntre
expresia PPARα icircn populaţiiile de Mo şi Eo şi concentraţia a HDL-col (fig 554)
B
100 150 200 250 300 350 20
30
40
50
60
70
80
90
100
PPARα Ly
HDL-col-(mgdl)
r = 036 P = 0046
A
150 200 250 300 350 400 20
30
40
50
60
70
80
90
100
PPARα Mo
HDL-col-(mgd)l
r = 035 P = 005
70 75 80 85 90 95 100 1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
TAD (mmHg)
CD36
r = 048 P = 0013
B
50 100 150 200 250 300 350 -100
0
100
200
300
400
500
PPARα Ly
TG(mgdl)
r = - 042 P = 003
A
50 100 150 200 250 300 350 400 -100
0
100
200
300
400
500
PPARα Mo
TG ( mgdl) r =- 0 43 P = 0027
Figura 554 Corelaţii icircn SM icircntre HDL-col şi expresia PPARα icircn Mo (A) şi Eo(B)
Corelaţii icircntre nivelul de expresie relativă a PPARα şi markeri ai disfuncţiei
endoteliale şi inflamaţiei cronice
Deşi nu a icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică am reţinut corelaţia invers
proporţională (r = - 0331 P = 006) dintre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα
icircn PMN şi concentraţia serică a Non-HDL-colesterolului
Studiind relaţiile dintre parametri icircn lotul de pacienţi cu SM am observat o corelaţie
moderată invers proporţională icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Eo şi
acidul uric seric (figura 555 A) corelaţie absentă la subiecţii fără SM
Figura 555 Lot SM corelaţia dintre expresia PPARα icircn Eo şi acidul uric (A) respectiv
PPARα şi fibrinogen (B)
Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P=008) am notat pentru
pacienţii cu SM corelaţia invers proporţională dintre expresia PPARα icircn Eo şi concentraţia
serică a fibrinogenului ( figura 555B)
V5 Discuţii
Icircn cadrul lucrării de doctorat am studiat nivelul de expresie relativă a PPARα icircn
leucocitele pacienţilor cu SM comparativ cu cea a subiecţilor normali Expresia PPARα a fost
studiată icircn paralel cu cea a CD36 glicoproteină exprimată pe suprafaţa a numeroase celule
din organismul uman inclusiv pe cea a Mo şi macrofagelor Prin funcţia sa de receptor pentru
particulele oxidate de LDL CD36 cunoscut ca bdquoscavenger receptorrdquo de clasa B sau
bdquotrombospodin receptorrdquo contribuie la dezvoltarea inflamaţiei de la nivel endotelial şi
formarea plăcii de ateroscleroză Referitor la studiul PPARα icircn Eo icircn sindromul metabolic
menţionăm că studiul nostru este primul care arată că nivelul de expresie a proteinei PPARα
icircn Eo măsurat prin citometrie icircn flux este semnificativ mai redus la pacienţii care sunt
diagnosticaţi cu acest sindrom De asemenea icircn lotul cu SM cercetat icircn cadrul studiului
receptorilor PPARα numărul Eo circulante a fost semnificativ mai crescut la pacienţii cu SM
B
0 500 1000 1500 2000 2500 200
250
300
350
400
450
PPARα Eo o
Fibrinogen mgdl
r =- 036 P = 008
0 500 1000 1500 2000 2500 1 2 3 4 5 6 7 8 9
10 11
PPARα Eo_
Acid uric(mgdl) r = 048 P = 0014 A
0 500 1000 1500 2000 2500 10
20
30
40
50
60
70
80
PPARα Eo
HDL(mgdl)
r = 044 P = 0024
B
100 150 200 250 300 350 400 10
20
30
40
50
60
70
80
PPARα Mo
HDL( mgdl)
r = 046 P = 0019
A
(P = 003) Aceste constatări conduc la ipoteza că Eo joacă un rol special icircn mecanismele
patogenice declanşate icircn sindromul metabolic şi că receptorii PPARα sunt importanţi icircn
implicarea Eo icircn obezitate şi insulinorezistenţă Creşterea numărului de Eo circulante este
urmată de eliberarea mediatorilor proinflamatori iar reducerea expresiei PPARα icircn Eo
determină perturbarea mecanismelor de control al inflamaţiei cu exacerbarea cascadei
proinflamatorii Consecutiv se agravează disfuncţia endotelială şi se accelerează progresia
leziunilor de ateroscleroză Extrapolacircnd aceste ipoteze putem spune că asocierea raportată
dintre boala ischemică coronariană şi Eo poate fi şi consecinţa exacerbării cascadei
proinflamatorii de la nivel vascular produsă datorită scăderii expresiei PPARα icircn Eo iar
creşterea numărului de Eo circulante poate reprezenta o adaptare a organismului uman care
icircncearcă să suplinească deficitul de receptori PPARα Analizacircnd curba ROC pentru
intensităţile medii de fluorescenţă determinate pentru anticorpii anti- PPARα icircn Eo am
obţinut pentru acest biomarker o sensibilitate a testului de 565 şi o specificitate de 778
pentru un punct de cut-off de 1533 ( figura 536 ) Deşi aria AUC (Aria under the curve) egală
cu 0663 icircncadrează acest test ca avacircnd o acurateţe redusă observăm că că această valoare
este apropiată de determinările AUC pentru alţi factori (fibrinogen raport de aterogenitate
acid uric non- HDL-colesterol) cunoscuţi ca fiind implicaţi icircn aterogeneză şi inflamaţia
cronică (figura 431) Aceste remarci alături de faptul că icircn studiul receptorilor PPARα icircn
leucocite am inclus subiecţi la primul diagnostic de SM creează premisa integrării
determinării expresiei relative a receptorilor PPARα icircn diagnosticul complex al sindromului
metabolic Putem spune că icircn final studiul expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofilele
circulante se dovedește a fi util icircn diagnosticul precoce la nivel molecular al SM permiţacircnd
identificarea timpurie a unor indivizi cu risc cardiometabolic crescut Astfel intervenţia
precoce asupra subiecţilor cu deficit de PPARα icircn Eo contribuie la managementul eficient al
afecţiunilor degenerative icircn care inflamaţia cronică icircndeplineşte un rol primordial Referitor
la populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările efectuate prin citometrie de flux nu au
arătat existenţa unor diferenţe statistice icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα
la subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali Rezultatele noastre pot fi
consecinţa caracteristicilor loturilor studiate (icircn studiul nostru au fost incluşi subiecţi recrutaţi
la primul diagnostic de SM şi icircn absenţa stimulării receptorilor PPARα cu droguri agoniste
PPARα) dar icircn acelaşi timp pot apare diferenţe datorită metodei utilizate (231 232 233)
Făcacircnd o paralelă cu un studiu publicat icircn 2013 icircn Europa (231) care a arătat creşterea
nivelului de expresie al PPARα icircn Ly şi Mo observăm că deşi numărul de subiecţi a fost
aproximativ egal (57 participanţi icircn studiul nostru 60 icircn studiul DAmore) subiecţii icircn studiul
amintit au fost recrutaţi dintr-o clinică cu profil medical la primul diagnostic de SM icircn timp
ce metoda utilizată a fost PCR (Polymerase Chain Reaction) mult mai fidelă decacirct citometria
icircn flux icircn studiul receptorilor nucleari De asemenea DAmore nu investighează expresia
PPARα icircn Eo şi PMN icircn cercetare fiind incluse doar celulele CD14+ (predominant Mo) şi
CD14- (predominant Ly) Deşi nu am obţinut diferenţe statistic semnificative icircntre cele două
loturi referitoare la nivelul de expresie relativă a PPARα icircn Mo Ly şi PMN am observat
corelaţii puternice semnificative statistic icircntre expresia receptorilor PPARα icircn aceste tipuri
celulare Rezultatele obţinute sugerează existenţa unui mecanism diferit molecular de control
icircn eozinofile care reglează cantitatea de proteină PPARα icircn eozinofile versus alte tipuri de
leucocite (la pacienţii cu SM) şi acest lucru este icircn concordanţă cu cercetările care descriu
expresia PPARα mRNA icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale
bronşice keratinocite) Studiind prin citometrie de flux nivelul de expresie relativă a
receptorului CD36 la nivelul Mo am arătat prezenţa acestuia icircn Mo tuturor subiecţilor
investigaţi Analizacircnd valorile intensităţii medii de fluorescenţă a CD36 icircn loturile studiate
am observat o tendinţă de creştere la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali
confirmacircnd implicarea receptorului CD36 icircn patogeneza acestuia Referitor la expresia
receptorului CD36 rezultatele obţinute sunt icircn consens cu studii anterioare care au arătat
creşterea expresiei CD36 la pacienţii cu SM şi diabet zaharat Astfel pe lacircngă diferenţa icircn
expresia CD36 s-au raportat şi corelaţii inverse icircntre expresia proteinei CD36 şi nivelul
adiponectinei Acelaşi studiu a evidenţiat o corelaţie pozitivă intre expresia CD36 cu expresia
receptorilor PPAR gamma relaţia cu PPARα nefiind investigată
Analiza de subgrup a relaţiilor dintre componentele SM și elementele moleculare
proinflamatorii studiate a relevat prezenţa unor asocieri semnificativ statistice icircntre acestea
Se argumentează astfel că veridicitatea studiului este susţinută de interdependenţele statistice
ale componentelor SM Determinarea coeficientului de corelaţie Icircn studiul nostru nivelul de
expresie relativă a PPARα s-a corelat moderat negativ (figura 550) cu CA a subiecţilor din
lotul normal pentru populaţiile celulare de Mo (r = - 0420 P = 001) Ly (r = - 046 P =
0009) şi PMN (r = - 040 P = 0024) date care sunt icircn concordanţă cu studiile care arată
rolul PPARα icircn furnizarea energiei prin beta-oxidarea acizilor graşi Icircn acelaşi timp icircn lotul
pacienţilor cu SM nu am identificat prezenţa unei asocieri icircntre nivelul de expresie relativă a
PPARα şi valoarea măsurată a CA Asocierea dintre expresia relativă a PPARα cu obezitatea
de tip central completează datele existente referitoare la reglarea homeostaziei energetice
conturacircnd un mecanism de control deficitar al aportului caloric al SM Icircn condiţiile icircn care
rezultatele obţinute prin metoda citometriei icircn flux nu au arătat existenţa unei corelaţii intre
expresia PPARα şi CA la pacienţii cu SM considerăm că ar fi necesar studiul
polimorfismului genei PPARA care ar putea aduce informaţii importante cu privire la
implicarea acestor receptori icircn apariţia obezităţii de tip central Subliniem acest lucru deoarece
obezitatea este o boală plurifactorială icircn care pe lacircngă factorii ereditari sunt implicaţi factori
de mediu psihologici şi sociali (245) Existenţa unei componente genetice a aterosclerozei
este legată şi de prezenţa unor variante ale genei PPARA asociate cu creşterea incidenţei bolii
cardiovasculare (82) şi a SM (249) Icircn studiul nostru am constatat o scădere statistic
semnificativă a nivelului expresiei relative a receptorilor PPARα icircn Eo la subiecţii cu
antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială comparativ cu subiecţii fără istoric
familial de hipertensiune (figura 537) Deşi diferenţele calculate icircntre loturile studiate nu au
icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică la subiecţii care au declarat prezenţa
antecedentelor familiale de hipertensiune arterială remarcăm o tendinţă de scădere a
intensităţii medii de fluorescenţă pentru Ac anti-PPARα la nivelul Mo (figura 515 P = 006
) icircn timp ce expresia relativă a CD36 icircnregistrează o creştere la acesti subiecţi (figura 545 P
= 008) Icircn contextul riscului cardiovascular foarte icircnalt al pacienţilor cu SM amintim şi
existenţa corelaţiei pozitive dintre valorile tensiunii arteriale diastolice şi expresia relativă a
receptorului CD36 (r = 0483 P = 0013) Această constatare este icircn consens cu studiile care
au arătat că forma solubilă circulantă a CD36 este asociată cu factorii de risc cardiovasculari
fiind propusă ca un marker precoce al aterosclerozei Activarea PPARα este asociată cu
modularea metabolismului lipidic iar agoniştii PPARα sunt utilizaţi icircn mod curent pentru
tratamentul dislipidemiei Sub acţiunea agoniştilor PPARα se obţine o icircmbunătăţire a funcţiei
endoteliale şi a parametrilor reologici funcţiile pleiotropice ale agoniştilor PPARα fiind
dovedite icircn trialuri clinice controlate Icircn populaţiile de Mo şi Ly la pacienţii cu SM
cercetarea noastră a evidenţiat o asociere negativă icircntre nivelul de expresie relativă a
receptorilor PPARα şi concentraţia TG serice (figura 551) Astfel scăderea expresiei
receptorilor PPARα este asociată cu creşterea nivelului TG serice contribuind la profilul
lipidic aterogen din SM Icircn conformitate cu literatura de specialitate icircn studiul efectuat prin
metoda citometriei icircn flux am găsit prezenţa asocierii icircntre nivelul de expresie al PPARα şi
HDL-colesterol Corelaţia pozitivă dintre nivelul de expresie relativă PPARα şi concentraţia
HDL-colesterolului a fost observată icircn lotul martor icircn populaţiile de Mo (r = 035 P = 005)
şi Ly ( r = 036 P = 004) (figura 553) susţinacircnd faptul că stimularea receptorilor PPARα
este legată de creşterea nivelului seric al lipoproteinelor cu densitate crescută La pacienţii cu
SM corelaţia dintre expresia PPARα şi HDL-colesterol a fost evidenţiată icircn populaţiile de Mo
(r = 046 P = 0019) şi eozinofile (r = 044 P = 0024) Se desprinde concluzia că icircn
sindromul metabolic scăderea concentraţiei HDL-colesterol este legată de diminuarea
nivelului de expresie relativă a receptorilor nucleari PPARα icircntărind afirmaţiile legate de
rolul acestor receptori icircn progresia bolilor cardiovasculare Studiind reactanţii de fază acută
analiza statistică a relevat o diferenţă semnificativă din punct de vedere statistic icircntre valorile
fibrinogenului la pacienţii cu SM atunci cacircnd au fost comparaţi cu subiecţii fără SM
(Capitolul IV4 P lt0 001 figura 427A) De asemenea icircn Capitolul V dedicat studiul
expresiei relative a receptorilor PPARα studiul valorilor fibrinogenului a arătat creşterea
acestui reactant de faza acută icircn lotul cu SM comparativ cu lotul martor (P lt0 0001) Icircn
studiul nostru am calculat o corelaţie invers proporţionala (r = - -036 fig 555B) icircntre
nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile şi concentraţia serică a
fibrinogenului Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P = 008) am reţinut
această asociere deoarece am demonstrat că nivelul de expresie relativă al receptorilor
PPARα icircn eozinofile este mai scăzut icircn sindromul metabolic iar sindromul metabolic este
caracterizat printr-un status inflamator cronic status caracterizat şi de creşterea concentraţiei
serice a fibrinogenului De asemenea notam ca această corelaţie negativă se află icircn
concordanţă cu studiile care arata că tratamentul cu agonişti PPARα (fibraţi) determina
scăderea nivelului seric al fibrinogenului contribuind la diminuarea inflamaţiei cronice din
sindromul metabolic şi icircn consecinţă amelioracircnd insulinorezistenţa
LIMITE ȘI DIFICULTĂȚI IcircN CERCETARE
Icircn cadrul Tezei de Doctorat am desfăşurat o cercetare care şi-a propus studierea
expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Recrutarea anamneza şi examinarea
clinică a subiecţilor au fost realizate icircn cadrul Cabinetului de Medicină de Familie CMI Popa
Elena din Iaşi iar determinările hematologice şi biochimice s-au efectuat icircn cadrul
Laboratorului Ambulatorului de Specialitate al Spitalului Universitar ldquoSfacircntul Spiridon din
Iaşi Icircn studiul epidemiologic şi al markerilor inflamatori al sindromului metabolic desfăşurat
au fost incluşi un număr de 1530 de participanţi pe baza liberului consimţămacircnt examinaţi icircn
perioada 01012013 - 31122013 Icircn continuare icircn perioada 1012014 - 28022014 pe baza
criteriilor de includere şi excludere icircn cele două loturi de studiu am investigat un număr de 57
de subiecţi prezentaţi la consultaţie icircn această perioadă şi care au icircndeplinit criteriile de
includere icircn cele două loturi (Lot SM şi Lot Control) constituite pentru evaluarea nivelului de
expresie a receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Explorarea nivelului de expresie
relativă a receptorilor PPARα s-a desfăşurat icircn cadrul Laboratorului de Biologie Moleculară
de pe platforma Institutului Regional de Oncologie Datorită resurselor proprii financiare
limitate trebuie să subliniez că aceasta cercetare nu ar fi fost posibilă fără contribuţia unor
cercetători din domeniul medical care m-au sprijinit necondiţionat atacirct icircn elaborarea
protocolului de lucru cacirct şi icircn efectuarea propriu-zisă a studiului Icircn acest sens menţionăm şi
faptul că pentru studiul receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic am utilizat aparatura
Laboratorului de Biologie Moleculară (care deserveşte icircntreaga Regiune a Moldovei) Pe
această cale mulţumesc personalului Laboratorului de Biologie Moleculară pentru ajutorul
acordat icircn desfăşurarea cercetării doctorale icircn condiţiile icircn care se observa creşterea
numărului de pacienţi care se adresează acestei platforme de cercetare Mulţumesc de
asemenea şi Doamnei Doctor Elena Butoi din cadrul Institutului de Biologie şi Patologie
Moleculară ldquoNicolae Simionescurdquo Bucureşti) pentru donaţia anticorpului secundar anti-
FITC Icircn consecinţă pentru recrutarea unui număr mai mare de participanţi ar fi fost necesară
icircn primul racircnd obţinerea unor resurse financiare suplimentare pentru achiziţia de aparatură şi
reactivi Totuşi numărul subiecţilor recrutaţi este apropiat de numărul subiecţilor raportaţi icircn
cadrul unor granturi de cercetare care aveau ca ţinta studiul expresiei receptorilor PPARα
(212 227 228 231) Rezultatele obţinute continua seria lucrărilor care arata importanta
studiului mecanismelor etiopatogenice ale sindromului metabolic patologie care se afla icircntr-o
continuă creştere La pacienţii cu SM pe lacircngă diminuarea nivelului de expresie a receptorilor
PPARα icircn eozinofile ne aşteptam şi la evidenţierea unor modificări icircn expresia PPARα şi icircn
populaţiile de Ly Mo şi PMN Acest fapt poate fi explicat de utilizarea unor celule provenite
de la pacienţi fără afectare cardiovasculară fără diabet zaharat şi necesită continuarea
studiului pe culturi celulare icircn condiţii de stimulare cu agonişti PPARα deziderat care
impune continuarea investigării expresiei PPARα printr-un grant de cercetare
ORIGINALITATEA ȘI CONTRIBUȚIILE INOVATIVE ALE TEZEI DE
DOCTORAT PERSPECTIVE DE CERCETARE
Evaluarea nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn leucocitele circulante
aduce noi perspective icircn studiul obezităţii şi sindromului metabolic Importanta studiului
expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic derivă din prevalenta crescută a
sindromului metabolic icircn populaţia cercetată la care se adaugă riscul cardiovascular foarte
icircnalt al acestor pacienţi cu implicaţii majore icircn sănătatea publică Rolul receptorilor PPARα
icircn inflamaţie şi aterogeneza este binecunoscut dar studiul nostru este primul care a arătat că
nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα este semnificativ mai scăzut in populatiile
de eozinofile la pacienţii cu SM Această concluzie coroborata cu existenţa unei stracircnse
asocieri intre expresia receptorilor PPARα la nivelul Mo limfocitelor şi PMNlor creeaza
ipoteza existenţei unui mecanism de control diferit al expresiei PPARα la nivelul
eozinofilelor Această cercetare aduce informaţii importante referitoare la mecanismele
proinflamatorii care stau la baza insulinorezistenţei şi riscului cardiometabolic şi impune
continuarea studiului acestor receptori nucleari prin citometrie icircn flux metodă care poate fi
aplicată şi la scara mai largă dacă sunt asigurate resursele materiale necesare cercetării
Cercetarea prin citometrie icircn flux poate fi completată de studiul polimorfismului genei
PPARA şi astfel se pot identifica timpuriu indivizii cu potenţial risc cardiometabolic crescut
Studiul receptorilor PPARα a stabilit conexiuni cu factori proinflamatori şi aterogenetici iar
continuarea cercetării poate aduce şi elemente noi de diagnostic precoce icircn sindromul
metabolic contribuind la icircmbunătăţirea prognosticului acestor pacienţi
CONCLUZII FINALE
1 Aplicarea scorului de SM alături de implementarea algoritmului electronic de diagnostic
contribuie la o prelucrare rapidă eficientă și standardizată a informaţiilor la nivelul
medicinei primare
2 Prevalenţa SM calculată astfel icircn cadrul studiului este crescută (2732) icircn concordanţă
cu datele raportate
3 Controlul factorilor de risc cardiometabolici incluşi icircn SM se poate realiza prin
managementul stilului de viaţă (scăderea greutăţii corporale prin combaterea
sedentarismului şi adoptarea unei diete antiaterogene şi hipocalorice) şi administrarea
terapiei medicamentoase
4 Este necesară adoptarea unei politici de sănătate publică pentru prevenirea creşterii icircn
populaţie a prevalenţei obezităţii şi a diabetului zaharat
5 Noi metode de cercetare icircn domeniul SM axate pe diagnosticarea precoce şi cuantificarea
eficientă a acestuia duce la diminuarea incidenței evenimentelor cardiovasculare majore
6 Sindromul metabolic se caracterizează printr-un status inflamator cronic
7 Valorile Non-HDL-colesterolului şi a raportului de aterogenitate sunt semnificativ mai
mari la pacienţii cu SM
8 Dintre reactanţii de faza acută am observat că valoarea medie a fibrinogenului este mai
crescută icircn lotul cu SM
9 Valorile eozinofilelor sunt crescute icircn sindromul metabolic iar explorarea relaţiei dintre
eozinofile şi obezitate constituie una din direcţiile de studiu actuale ale sindromului
metabolic
10 Evaluarea markerilor inflamatori icircn contextul sindromului metabolic este utilă icircn
evaluarea complexă a a factorilor de risc cardiometabolici
11 Prin metoda citometriei icircn flux am demonstrat prezenta Receptorilor Activaţi de
Inductorii Proliferării Peroxizomilor ndash Alpha (PPARα) icircn toate populaţiile de leucocite
studiate (Mo limfocite PMN eozinofile) atacirct icircn lotul pacienţilor cu SM cacirct şi icircn lotul
martor
12 Utilizacircnd intensitatea medie de fluorescenţă a anticorpilor anti- PPARα am arătat că
nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile este semnificativ mai redus
la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali
13 Acest studiu este primul care a demonstrat existenţa unei scăderi statistic semnificative a
nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofilele pacienţilor cu SM
confirmacircnd cercetările recente care au evidenţiat rolul eozinofilelor şi al receptorilor
PPARα icircn obezitate reglarea inflamaţiei cronice şi aterogeneza
14 Contrar aşteptărilor noastre icircn populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările
efectuate icircn cele două loturi de studiu (cu şi fără sindom metabolic) nu am evidenţiat
diferenţe statistic seminificative icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα la
subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali
15 Icircn populaţiile de Mo limfocite şi polimorfonucleare am observat corelaţii puternice
semnificativ statistic icircntre expresia PPARα icircn aceste tipuri celulare sugeracircnd existenţa
unui mecanism unic de control al inflamaţiei cronice la nivelul acestor celule probabil
diferit de cel din eozinofile
16 La subiecţii cu SM expresia relativă a PPARα icircn Eo este invers asociată cu expresia
receptorului CD36 (receptor al particulelor de ox - LDL şi propus ca un marker precoce al
aterosclerozei) dovedind rolul antiinflamator al receptorilor PPARα la nivel endotelial
17 La pacienţii cu antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială nivelul de
expresie al receptorilor PPARα icircn eozinofile şi Mo este diminuat comparativ cu subiecţii
fără antecedente familiale de hipertensiune arterială Putem spune că studiul efectuat de
noi aduce informaţii importante legate de geneză aterosclerozei şi hipertensiunii arteriale
18 Prin studiul asocierilor dintre receptorii PPARα şi componentele clinice ale sindromului
metabolic am arătat rolul acestor receptori icircn determinismul obezităţii de tip central
nivelul expresiei relative a receptorilor PPARα fiind invers proporţional cu circumferinţa
abdominală
19 Icircn acelaşi timp nivelul de expresie a PPARα icircn sindromul metabolic este asociat pozitiv
cu concentraţia serică a HDL-colesterolului şi invers asociat cu nivelul trigliceridelor
serice dovedind rolul acestor receptori icircn diminuarea procesului inflamator cronic de la
nivel vascular
20 La pacienţii cu SM scăderea expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofile este corelată cu
creşterea unor markeri ai sindromului inflamator cronic cardiometabolic (acid uric
fibrinogen) ilustracircnd importanta receptorilor icircn reglarea status-ului inflamator cronic din
sindromul metabolic
21 Utilizarea metodei flowcitometrice pentru studiul expresiei relative a receptorilor PPARα
icircn leucocite a adus informaţii importante cu privire la mecanismele moleculare de control
implicate icircn patogenia bolilor cardiometabolice icircn concordanţă cu cercetările care descriu
expresia PPAR icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale bronşice
keratinocite)
BIBLIOGRAFIE SELECTIVA
1 Kahn R Metabolic syndrome- what is the clinical usefulness Lancet 2008371(9628)1892-3
2 Reaven GM The metabolic syndrome is this diagnosis necessary Am J Clin Nutr 2006 83(6)1237-7
3 Grundy SM Pre-Diabetes Metabolic Syndrome and Cardiovascular Risk J Am Coll Cardiol 201259(7)
635-43
4 International Diabetes Federation IDF Diabetes Atlas 6th edn International Diabetes Federation Belgium
Brussels 20131-155
5 World Health Organization Global Status Report on Noncommunicable Diseases 2010 World Health
Organization Geneva Switzerland 20111-176
6 Coman AE Petrovanu R Sindromul metabolic in practica de ambulator Editura Pim Iaşi 2009 1-103
7 Grundy SM Becker D Clark LT et alThird Report of the National Cholesterol Education Program (NCEP)
Expert Panel on Detection Evaluation and Treatment of High Blood Cholesterol in Adults (Adult
Treatment Panel III) Final Report Circulation 2002106(25)3143-90
8 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J Metabolic syndrome- a new worldwide definition A Consensus Statement
from the International Diabetes Federation Diabet Med 2006 23(5)469-80
9 KG Alberti KG Eckel RH Grundy SM etal International Diabetes Federation task force on epidemiology
and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart Association World Heart
Federation International Atherosclerosis Society International Association for the study of obesity
Harmonizing the metabolic syndrome a joint interim statement of the International Diabetes Federation task
force on epidemiology and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart
Association World Heart Federation International Atherosclerosis society and International Association
for the study of obesity Circulation 2009120(16)1640-5
10 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J IDF Epidemiology Task Force The metabolic syndrome new
worldwide definition Lancet 2005 366 1059 - 62
11 Oleszczyk M Svab I Seifert B et al Primary healthcare in the developing part of Europe changes and
development in the former Eastern Bloc countries that joined the European Union following 2004 Med Sci
Monit 2009(15)78ndash84
12 Jung U J Choi M S Obesity and Its Metabolic Complications The Role of Adipokines and the
Relationship between Obesity Inflammation Insulin Resistance Dyslipidemia and Nonalcoholic Fatty
Liver Disease Int J Mol Sci 2014rsquo15(4) 6184-223
13 Vanden Heuvel JP Peters JM Peroxisome Proliferators In Ramos K (ed) Cellular and Molecular
Toxicology (Second Edition) Volume 2 New York Elsevier Science Inc 2010 145 - 67
14 Yessoufou A Wahli W Multifaceted roles of peroxisome proliferator-activated receptors (PPARs) at the
cellular and whole organism levels Swiss Med Wkl 2010140w13071 doi104414smw201013071
15 Azhar S Peroxisome proliferator-activated receptors metabolic syndrome and cardiovascular disease
Future Cardiology 20106(5)657-91
16 Andries G Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity
Diabetes and Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(Suppl)24-32
17 Zandbergen F Plutzky J PPARalpha in atherosclerosis and inflammation Biochim Biophys Acta
20071771(8)972-82
18 Straus DS Glass CK Anti-inflammatory actions of PPAR ligands new insights on cellular and molecular
mechanisms Trends Immunol 200728(12)551-8
19 Zlei M Zugun- Eloae F Carasevici E Citometrie icircn flux - Bază şi clinică Icircn Hinescu ME (ed) Citometrie icircn
flux - principii şi aplicaţii clinice Bucureşti Editura Viaţa Medicală Romacircnească 20111-128
20 Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity Diabetes and
Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(9)24-32
21 Woerly G Honda K Loyens M et al Peroxisome proliferator-activated receptors alpha and gamma down-
regulate allergic inflammation and eosinophil activation J Exp Med 2003198(3)411-21
22 Salle-Saumont D Brenuchon C Kanda A et al Peroxisome proliferator-activated receptor alpha regulates
skin inflammation and humoral response in atopic dermatitis J Clin Allergy Immunology 2008 21(4)962-8
23 Schote A Turner J Schiltz J et al Nuclear receptors in human immune cells expression and correlations
Mol Immunolog 200744(6)1436-45
24 DAmore S Vacca M Graziano G et al Nuclear receptors expression chart icircn peripheral blood
mononuclear cells identifies patients with Metabolic Syndrome Biochim Biophys Acta
20131832(12)2289-301
25 Uthurralt J Gordish-Dressman H Bradbury M T et al PPARalpha L162V underlies variation in serum
triglycerides and subcutaneous fat volume in young males BMC Med Genet 2007855
26 Hiukka A Leinonen ES Jauhiainen M et al Long-term effects of fenofibrate on VLDL and HDL
subspecies icircn participants with type 2 diabetes mellitus Diabetologia 2007 50(10)2067-75
27 Robins SJ Rubins HB Faas FH et alInsulin resistance and cardiovascular events with low HDL
cholesterol The Veterans Affairs HDL Intervention Trial (VA-HIT) Diabetes Care 2003 26(5)1513-7
28 Devaraj S Siegel D Jialal I Statin Therapy in Metabolic Syndrome and Hypertension Post-JUPITER
What is the Value of CRP Curr Atheroscler Rep 2011 13(1) 31ndash42
29 Imperatore G Riccardi G Iovino C et al Plasma Fibrinogen A New Factor of the Metabolic Syndrome A
population-based study Diabetes Care 19982 1(4)649-54
30 Krysiak R Gdula-Dymek A Bachowski R Okopien B Pleiotropic effects of atorvastatin and fenofibrate
in metabolic syndrome and different types of pre-diabete Diabetes Care 201033(10)2266-70
31 Hermans MP Impact of Fenofibrate on Type 2 Diabetes Patients with Features of the Metabolic Syndrome
Subgroup Analysis From FIELD Curr Cardiol Rev 20106(2)112-8
32 Silverstein R Inflammation atherosclerosis and arterial thrombosis Role of the scavenger receptor CD36
Cleveland Clinic Journal of Medicine 200976(Suppl 2)S27-S30
33 Hăncu N Obezitatea In Vereşiu IA (ed) Diabetul zaharat nutritia si bolile metabolice Volume 2 Editura
Echinox Cluj- Napoca 2010 1-15
Lista lucrări publicate
1 Elena Popa Maria Maidaniuc Agnes Bacusca Alamir Diaa Rodica Petrovanu Adorata Elena
Coman Disfuncţia endotelială ndash de la mecanisme moleculare la cuantifi care şi tratament icircn practica
medicală Practica Medicală 20149(3) 109-14
2 Elena Popa Agnes Bacusca Alamir Diaa Maria Maidaniuc Rodica Petrovanu Adorata Elena Coman
The function of insulin receptor (IRF) in evolution of obesity correlation with adipocytes diameters
Archives of the Balkan Medical Union 201449(3) 275-9
3 Elena Popa Florin Zugun-Eloae Mihaela Zlei Daniela Jitaru Oana Maria Pintilie Adorata Elena
Coman Maria Traian Didona Anca Ungureanu Eugen Carasevici - acceptata pentru numarul 42014
Flow cytometry analysis of PPAR-alpha receptors in metabolic syndrome) Revista Romană de
Medicină de Laborator(RRLM-D-14-00034R1- adeverinţa ataşată
mai mică de 005 a fost considerată semnificativ statistic
Rezultate Analiza lotului de studiu s-a efectuat icircn funcţie de mediul de provenienţă sex vacircrstă şi
vacircrsta medie Caracteristicile clinice şi biochimice ale lotului studiat sunt reprezentate icircn
tabelul VIII
Tabel VIII Caracteristicile lotului studiat Media 95 CI SD Minimum Maximum
Vacircrsta (ani) 4751 4661 - 4841 1798 1800 9100
CA (cm) 8830 8764 - 8896 1316 5600 13400
IMC (kgm2) 2603 2578 - 2628 497 1900 4500
TAD (mmHg) 7529 74883 - 7571 827 6000 11500
TAS (mmHg) 11730 11650 - 11810 1590 9000 19000
Glicemie (mgdl) 9435 9328 - 9542 2138 7200 40000
HDL- col(mgdl) 4498 4427 - 4570 1422 2100 9200
TG(mgdl) 12269 11887 - 12651 7157 4800 87900
Determinarea scorului SM
Am aplicat criteriile de diagnostic şi am calculat scorul de SM pentru fiecare subiect (0-
absenţa criteriului 2- prezenţa criteriului) (fig44)
Figura 44 Frecvenţa scorului SM icircn
populaţia studiată conform criteriilor
SM Harmonised (A) IDF (B) ATP III
(C) Se observă că distribuţia scorurilor
SM conform criteriilor de diagnostic este
identică icircn cazul aplicării criteriilor
Harmonized I şi IDF
Scorul de SM a avut valori pare
cuprinse icircntre intervalul 0 - 10 pacienţii
cu SM avacircnd un scor mai mare sau egal
cu 6
Icircn lotul studiat am analizat prezenţa simultană a criteriilor Harmonised I de diagnostic şi
am constatat prezenţa SM la 389 subiecţi (204 femei şi 185 bărbaţi) reprezentacircnd 2542
(95CI 2296-2808) din totalul populaţiei studiate Raportul prevalenţelor specifice pe sexe
bărbaţifemei a fost de 103 (95 CI084 -126)Icircn concordanţă cu criteriile IDF am
identificat un număr de 325 pacienţi cu SM (175 femei şi 150 bărbaţi) iar prevalenţa SM icircn
populaţia studiată conform IDF a fost de 2124 (95 CI 1899ndash 2368) Raportul
prevalenţelor specifice la bărbaţi versus femei a fost de 0977 (95 CI 078 ndash122) Utilizacircnd
definiţia ATP III au fost identificaţi un număr de 229 subiecţi cu SM Prevalenţa SM a fost
C
0
100
200
300
400
500
600
700
Scor SM ATP III
Număr pacienţi
0 2 4 6 8 10
ATP III SM5 SM4 SM3 non SM
B
0 50
100 150 200 250 300 350 400 450
Scor SM IDF
Număr pacienţi
0 2 4 6 8 10
IDF SM5 SM4 SM3 non SM
A
0
50
100
150
200
250
300
350
400
450
Scor SM Harmonised I
Număr pacienţi
0 2 4 6 8 10
HARMONIZED I SM5 SM4 SM3 non SM
de 1497 (95CI 1309 ndash 1704) icircn populaţia studiată Au fost calculate prevalenţele pe
sexe şi au fost găsite valorile de 1343 (95CI 010 ndash 164) la bărbaţi respectiv 1632
(95 CI 1366 ndash 1934) la femei raportul dintre acestea fiind de 082 (95CI 062 ndash 107)
Pentru fiecare asociere dintre componentele SM diagnosticat conform criteriilor
Harmonised I am calculat prevalenţele icircn cadrul SM(tabel XVI)
Tabel XVI Prevalenţa asocierilor dintre componentele SM Număr
pacienţi
Ponderea icircn cadrul
pacienţilor cu SM
(95 CI)
Prevalenţa icircn
populaţia studiată
(95 CI)
SM cu trei componente (SM3)
241 6195 (5438ndash7029) 1575 (1383-
1787)
Obezitate centrală + hipertensiune arterială +
hipertrigliceridemie
45 1154 (844ndash1548) 294 (214-393)
Obezitate centrală + hipertensiune arterială + hipo-
HDLcolesterolemie
38 979 (691ndash1340) 248 (175-340)
Obezitate centrală + hipertrigliceridemie +
hipoHDL-colesterolemie
34
874 (605ndash1221) 222 (153-310)
Obezitate centrală + modificări ale metabolismului
glucidic + hipertensiune arterială
31 796 (541ndash1131) 202 (137-287)
Hipertensiune arterială + hiper-trigliceridemie +
hipoHDL- colesterolemie
26 668 (436 ndash979) 169 (111-249)
Modificări ale metabolismului glucidic +
hipertensiune arterială + hiper-trigliceridemie
21 539 (334-825) 137 (085-209)
Obezitate centrală + modificări ale metabolismului
glucidic + hipertrigliceridemie
15 385 (215-636) 098 (054-116)
Modificări ale metabolismului glucidic
hipertrigliceridemie + hipoHDL-colesterolemie
12 308 (159-538) 078 (040-137)
Modificări ale metabolismului glucidic +
hipertensiune arterială + hipoHDLcolesterolemie
10 257 (123ndash472) 065 (031-120)
Obezitate centrală + modificări ale metabolismului
glucidic + hipo-HDL-col
9 231 (105ndash439) 058 (026-111)
SM cu patru componente (SM4) 104 2674 (2184-239) 679 (555-823)
Obezitate centrală + modificări ale metabolismului
glucidic + hipertensiune arterială + hipoHDL-
colesterolemie
32 822 (562-1116) 209 (143-
295)
Obezitate centrală + hipertensiune arterială +
hipertrigliceridemie + hipoHDL-col
25 642 (415- 948) 163 (105-241)
Obezitate centrală + modificări ale metabolismului
glucidic + hipertri-gliceridemie + hipoHDL-
colesterolemie
12 308 (159-538) 078 (040-137)
Modificări ale metabolismului glucidic +
hipertensiune arterială + hipertri-gliceridemie +
hipoHDL-colesterolemie
6 154 (056- 335) 039 (014-085)
SM cu cinci componente (SM5) 44 1131 (822-1518) 287 (209-386)
Total (SM3 + SM4 + SM5) 389 100 2542(2296-
2808)
Analizacircnd componentele SM la cei 389 pacienţi diagnosticaţi cu SM conform criteriilor
Harmonised I am constatat că obezitatea centrală este cea mai bine reprezentată icircn SM dintre
aceste componente (8072 95CI 7644 - 8452) urmată de HTA (7892 95CI 7453
- 8287) hiperTG (6915 95 CI 6430-7371) hipo-HDL-col (6375 95 CI 5876-
6854) şi hiperglicemie (5681 95 CI5173- 6179)
Standardizarea prevalenţelor funcţie de vacircrstă şi sex Analiza statistică a relevat faptul
că prevalenţa SM creşte cu icircnaintarea icircn vacircrstă Dacă pentru vacircrsta cuprinsă icircntre 35-54 ani
prevalenţa la bărbaţi este semnificativ mai mare comparativ cu femeile (raport calculat B F -
183 P=0003) pentru celelalte grupe de vacircrsta nu s-au observat diferenţe semnificative icircntre
sexul feminin şi cel masculin Am observat că după instalarea menopauzei la femei
prevalenţa SM (corespunzătoare Harmonised I) la femei depăşeşte 50 iar la bărbaţi atinge
42 Utilizacircnd European Standard Population (175) am efectuat standardizarea funcţie de
vacircrstă şi sex a prevalenţelor bdquocruderdquo (brute) obţinute icircn populaţia studiată şi am calculat o
prevalenţă standardizată a SM de 2732 (95 CI 2460-3003) La sexul masculin
prevalenţa standardizată a SM a fost de 2760 (95 CI 2362 - 3157) iar la sexul feminin
am obţinut valoarea de 2854 (95 CI 2462 - 3245)
Discuţii
Studiul desfăşurat de noi a investigat prezenţa SM icircn populaţia unui Cabinet de Medicină
de Familie Icircn Europa prevalenţa SM este de aproximativ 25-30 Statele Unite Ale Americii
au raportat o prevalenţă a sindromului metabolic de 22 icircn populaţia cu vacircrsta peste 20 ani
pe cacircnd la vacircrstă mai mare de 60 ani s-a observat o prevalenţă de 44 (1419) Icircn studiul
efectuat am observat o prevalenţă standardizată de 2732 (95 CI 2460-3003) care este
icircn concordanţă cu prevalenţele raportate icircn Europa precum şi o creştere a ponderii SM icircn
populaţie icircn raport cu vacircrsta Am preferat utilizarea definiţiei Harmonised I pentru SM
deoarece cuprinde criterii adaptate pentru o abordare unitară a SM mărind astfel numărul
pacienţilor diagnosticaţi şi care vor urma tratament conform Ghidurilor de Practică Medicală
Limitările acestui studiu sunt legate de faptul că este concentrat doar pe populaţia asigurată şi
neasigurată aflată pe lista unui medic de familie din mediul urban Se pot efectua studii la
nivelul Cabinetelor Medicale de Medicină de Familie dar trebuie să se aplice pe un lot
reprezentativ urbanrural care să reprezinte populația acelei regiuni Utilizarea structurilor
populaționale atașate cabinetului de MF este utilă atacirct pentru cele clinice cacirct și pentru cele
epidemiologice deoarece surprinde populația studiată icircn mediul de viață cotidian Prevalenţa
mare a SM icircn populaţia studiată necesită aplicarea unei politici eficiente de sănătate publică
deoarece riscul producerii evenimentelor cardiovasculare majore poate fi redus semnificativ
printr-un control adecvat al componentelor SM (obezitate dislipidemii hipertensiune
arterială şi hiperglicemie
Studiul sindromului inflamator cronic icircn cadrul sindromului metabolic
Obiectivele studiului
- studierea markerilor inflamaţiei cronice şi aterogenezei la subiecţii cu şi fără SM
- evaluarea importanţei markerilor studiaţi ai inflamaţiei cronice icircn diagnosticul de
ambulator al sindromului metabolic
Material şi metodă
Icircn cercetarea inflamaţiei cronice din SM au fost incluşi 1530 subiecţi de ambele sexe cu
vacircrsta cuprinsă icircntre 18-91 ani icircnscrişi pe lista CMI Popa Elena Studiul s-a desfăşurat icircn
perioada 01012013ndash 31122013 Populaţia ţintă a fost identică cu cea din studiul
epidemiologic şi s-a desfăşurat concomitent cu studiul prevalentei SM Subiecţii au fost
icircmpărţiţi icircn două loturi lotul cu SM (Lot SM) şi lotul de control (fără SM)
Lot SM a) criterii de includerevacircrsta peste 18 ani recrutarea pe baza semnării
Consimţămacircntului liber informat SM diagnosticat pe baza criteriilor Harmonised I (14) b)
criterii de excluderevacircrstă sub 18 anirefuzul semnării Consimţămacircntului liber informat
femei icircn perioada de graviditate sau de lactaţie
Lot Control (fără SM) a) criterii de includerevacircrsta peste 18 anirecrutarea pe baza
semnării Consimţămacircntului liber informat absenţa sindromului metabolic b) criterii de
excluderevacircrstă sub 18 ani refuzul semnării Consimţămacircntului liber informatfemei icircn
perioada de graviditate sau de lactaţie
Rezultate
Lotul cu SM (Lot SM) a fost format din cei 389 pacienţi diagnosticaţi cu SM conform
criteriilor Harmonised I Lotul SM a fost alcătuit din 185 bărbaţi şi 204 femei raportul
bărbaţifemei fiind de 090 (95 CI073-112) Lotul de control (fără SM) a fost alcătuit
din cei 1141 participanţi care nu au icircntrunit criteriile de diagnostic ale sindromului metabolic
Din cei 1141 de subiecţi 530 au fost de sex masculin iar 611 de sex feminin raportul
bărbaţifemei fiind 087 (95 CI 077-097) Vacircrsta subiecţilor a fost semnificativ mai mare
icircn lotul pacienţilor cu SM (5976plusmn1322 ani) comparativ cu lotul martor (4333plusmn 1748 ani) (t-
Test Plt00001) Aşa cum ne-am aşteptat valorile medii ale componentelor clinice ale SM
(circumferinţa abdominală tensiunea arterială sistolică şi diastolică) au fost mai mari icircn lotul
pacienţilor cu SM (t-Test Plt0001 pentru fiecare dintre componente) Studiind parametrii
biochimici incluşi icircn diagnosticul SM valorile medii ale glicemiei şi TG au fost semnificativ
mai crescute icircn lotul SM (t-Test Plt00001 pentru ambele constante) Icircn acelaşi timp
valoarea medie determinată a HDL-col a fost semnificativ mai mare la subiecţii din lotul
martor ( t-Test Plt00001) SM se caracterizează printr-o dislipidemie aterogenă
caracterizată de creşterea TG scăderea HDL-col concomitent cu creşterea LDL-col creşterea
Non-HDL-col şi a raportului de aterogenitate (Col totalHDL-col) (185) Comparacircnd cele
două loturi am observat că valoarea medie a LDL-colesterolului determinată icircn lotul
pacienţilor cu SM a fost semnificativ mai mare faţă de subiecţii din lotul martor (t-Test P =
00002) Măsurarea Non-HDL-colesterolului a arătat prezenţa unei diferenţe semnificative
icircntre cele două loturi (figura 420 B) Astfel icircn concordanţă cu prezenţa dislipidemiei
aterogene valoarea medie a Non-HDL-col a fost semnificativ mai mare (t-Test Plt 00001) icircn
lotul cu SM comparativ cu lotul de control Icircn contextul inflamației cronice şi aterogenezei
din sindromul metabolic am evaluat sensibilitatea şi specificitatea Non-HDL-colesterolului
ca test diagnostic al SM Valoarea Non-HDL-colesterolului care prezice cu cea mai mare
acurateţe prezenţa SM a fost de 151 mgdl (punctul de ldquocut-offrdquo) pentru care am calculat o
sensibilitate de 64 27 şi o specificitate de 5872 Calculul ariei AUC a furnizat valoarea
de 0605 şi deci determinarea concentraţiei serice a parametrului Non-HDL-colesterolului are
valoarea unui marker cu acurateţe redusă Am studiat valorile raportului Col totalHDL-col icircn
cele două loturi şi am constatat că la pacienţii cu SM valoarea media a raportului de
aterogenitate este semnificativ mai mare faţă de valoarea raportului determinată icircn lotul
martor (t-Test Plt 00001) Pentru raportul de aterogenitate studiat analiza curbei ROC a
arătat că valorile mai mari decacirct punctul de ldquocut-offrdquo de 431 prezic prezenţa SM cu cea mai
mare sensibilitate (6381 ) şi specificitate (6582)Valoarea AUC pentru indicele de
aterogenitate a fost de 0667 şi icircn studiul SM acest indice poate fi considerat un marker cu
acurateţe redusă Valoarea medie determinată a acidului uric la subiecţii fără SM a fost
semnificativ mai mică decacirct icircn lotul SM (t-Test Plt 00001) Curba ROC a arătat că valorile
acidului mai mari de 43 mgdl prezic diagnosticul de SM cu cea mai mare sensibilitate
(8107) şi specificitate (5328) Pentru acidul uric AUC a avut valoarea de 0655 şi
icircncadrează determinarea acidului uric seric icircn racircndul testelor cu acurateţe redusă (187)
Comparacircnd populaţiile de leucocite (tabel XXI) valoarea medie determinată a
numărului de Eo a fost semnificativ mai mare icircn lotul cu SM comparativ cu lotul martor (t-
Test Plt0001) Analizacircnd curba ROC trasată pentru valorile numărului de Eo am observat
că valorile ldquocut-offrdquo mai mari de 200 Eomm3
pot prezice prezenta SM cu cea mai mare
specificitate (7705) şi sensibilitate (3978) Pentru diagnosticul SM calculul ariei AUC a
arătat faptul că determinarea numărului de Eo are valoarea unui test diagnostic cu acurateţe
redusă (AUC = 0 589) Comparacircnd valorile medii ale fibrinogenului am calculat o diferenţă
statistic semnificativă icircntre cele două loturi valoarea medie a fibrinogenului fiind mai mare icircn
lotul SM ((t-Test P lt 00001) Cu ajutorul curbei ROC am observat că valorile fibrinogenului
mai mari de 306 mgdl prezic sindromul metabolic cu o sensibilitate de 7511 şi specificitate
de 6056 Fibrinogenul a fost icircncadrat icircn categoria markerilor inflamatori cu acurateţe
redusă AUC avacircnd valoarea de 0690 Icircn loturile de studiu am calculat AUC corespunzătoare
criteriilor de diagnostic ale SM Am observat că icircn cazul scorului Harmonised I
sensibilitatea şi specificitatea sunt de 100 iar AUC este egală cu 1000 Pentru cele cinci
criterii de diagnostic AUC a avut valori icircntre 0636 (pentru variabila HDL-col) şi 0804
(pentru variabila CA) (figura 431)
AUC ES 95 CI
Scor SM Harmonised I 1000 00000 0997 - 1000
CA (cm) 0804 00133 0781 - 0825
TAD (mmHg) 0666 00169 0639 - 0692
TAS (mmHg) 0757 00148 0732 - 0780
Glicemie (mgdl) 0742 00160 0717 - 0766
Trigliceride (mgdl) 0756 00175 0732 - 0780
HDL- colesterol 0636 00183 0609 - 0662
Figura 431 Analiza AUC criterii de diagnostic ale SM
Studiind figura 432 se observă că valoarea AUC pentru markerii studiaţi este cuprinsă
icircntre 0589 (icircn cazul variabilei Eo) şi 0690 (icircn cazul fibrinogenului) Icircn contextul SM
acurateţea acestor markeri ai inflamaţiei cronice şi disfuncţiei endoteliale poate fi considerată
redusă deoarece AUClt07 pentru toţi markerii investigaţi (figura 431) Totuşi valorile ariilor
parametrilor reprezentaţi icircn figura 431 sunt apropiate de valorile AUC ale variabilelor TAD
şi HDL-col (figura 432) şi deci pot fi utilizaţi pentru completarea diagnosticului de SM
AUC ES 95 CI
Non-HDL-colesterol 0605 00171 0580 - 0630
Col totalHDL-col 0607 00163 0642 - 0691
Acid uric 0655 00161 0630 - 0679
Fibrinogen 0690 00206 0658 - 0720
Eozinofile 0589 00176 0564 - 0615
Figura 432 AUC markeri ai SM inflamaţiei cronice şi aterogenezei
Discuţii
Status-ul proinflamator din SM asociat cu insulinorezistenţa şi disfuncţia endotelială
constituie o verigă de legătură dintre inflamaţie şi procesele metabolice complexe icircnsoţindu-
se de deteriorarea funcţiilor vasculare şi creşterea riscului de evenimente cardiovasculare
majore (2858) Studiul efectuat a arătat o diferenţă icircntre vacircrstele subiecţilor din cele două
loturi vacircrsta pacienţilor cu SM fiind semnificativ mai mare (Plt0001) comparativ cu subiecţii
normali confirmacircnd faptul menţionat că vacircrsta reprezintă unul din stimulii care agravează
inflamaţia cronică Am arătat că valorile fibrinogenului sunt mai mari icircn SM comparativ cu
Scor Harmonised I
0 20 40 60 80 100
0
20
40
60
80
100
100-Specificitate
Sen
sib
ilit
ate
Criterii diagnostic SM
0 20 40 60 80 100
0
20
40
60
80
100
100-Specificitate
Sens
ibili
tate
CA
TAD
TAS
Glicemie
Trigliceride
HDL-C
0 20 40 60 80 100
0
20
40
60
80
100
100-Specificitate
Sensi
bilita
te
Non-HDL-C
Col T HDL-C
Acid uric
Fibrinogen
Eozinofile
lotul martor atacirct la bărbaţi cacirct şi la femei icircn concordanţă cu studiile anterioare Evaluarea
fibrinogenului este importantă nu numai icircn SM pentru definirea contextului proinflamator şi
protrombotic ci şi icircn predicţia cardiovasculară la subiecţii normali Studiind populaţiile
leucocitare am obţinut diferenţe semnificative icircn cazul Eo valoarea medie a acestora fiind
semnificativ mai mare icircn lotul cu SM comparativ cu lotul martor (P lt 0001 figura 425B)
Implicarea Eo icircn SM s-a conturat icircn ultimul deceniu aceste celule fiind implicate icircn recrutarea
macrofagelor din ţesutul adipos Experimental s-a constatat că o creştere a Eo apărută ca
urmare a infectării cu helminţi sau stimulare cu IL-5 este urmată de icircmbunătăţirea toleranţei la
glucoză (199) Controlul pe care icircl exercită Eo asupra activării macrofagelor ar putea fi cheia
intervenţiei asupra obezităţii icircn viitorul apropiat(165199) Hiperuricemia asociata frecvent cu
SM este cunoscut ca un factor independent de risc cardiovascular (192 202) In concordanţă
cu aceasta afirmaţie in studiul nostru am constatat ca nivelul seric al acidului uric a fost mai
crescut in lotul cu SM diferenţa semnificativă din punct de vedere statistic (P lt 00001)
Dislipidemia aterogenă din sindromul metabolic şi diabetul zaharat se caracterizează prin
creşterea trigliceridelor şi a Non-HDL-col scăderea HDL-col creşterea numărului de
particule LDL modificate (185190) La pacienţii cu SM am descris un profil aterogenetic
cu risc crescut de evenimente cardiovasculare majore
STUDIUL RECEPTORILOR ACTIVAŢI DE INDUCTORII PROLIFERĂRII
PEROXIZOMILOR-ALPHA IcircN LEUCOCITELE CIRCULANTE
Ipoteza de lucru
Studii experimentale efectuate au arătat că rolul PPARα icircn ateroscleroză derivă din
implicarea acestor receptori icircn limitarea inflamaţiei Plecacircnd de la acest fundament ne-am
propus evidenţierea receptorilor nucleari activaţi de inductorii proliferării peroxizomilor-
alpha (PPARα) prin citometrie de flux icircn leucocitele din sacircngele periferic alături de
evaluarea acestei metode icircn cuantificarea expresiei relative a PPARα ca test diagnostic
precoce al modificărilor metabolice SM Studiul expresiei relative a receptorilor PPARα a
plecat de la premisa că dacă SM se caracterizează printr-un status inflamator cronic nivelul
de expresie a PPARα icircn leucocitele circulante este mai scăzut la pacienţii cu SM comparativ
cu subiecţii normali Referitor la studiul receptorului CD36 am plecat de la presupunerea că
nivelul de expresie al acestui receptor icircn SM este crescut dat fiind importanţa acestui receptor
icircn inflamaţia aterosclerotică Avacircnd icircn vedere efectele receptorilor amintiţi icircn
insulinorezistenţă şi aterogeneză am considerat necesară evaluarea prezenţei receptorului
nuclear PPARα icircn paralel cu studiul receptorului bdquoscavengerrdquo CD-36 prin metoda citometriei
icircn flux Astfel icircn studiul efectuat mi-am propus şi investigarea existenţei unei legături icircntre
nivelul de expresie al receptorilor PPARα şi cel al receptorului CD-36 De asemenea ne-am
icircndreptat atenţia spre stabilirea unor asocieri icircntre componentele clinice şi biochimice ale
sindromului metabolic şi nivelul intensităţilor de fluorescenţă ale PPARα şi CD-36 ca măsură
a expresiei relative a acestor receptori
Material și metodă
Studiul receptorilor PPARα icircn contextul sindromului metabolic s-a desfăşurat icircn
perioada 1012014 -28022014 pe baza metodologiei studiilor de tip caz-martor Am urmărit
identificarea unor diferenţe icircntre expresia receptorilor PPARα la pacienţii cu SM comparativ
cu subiecţii sănătoşi diferenţe care ar putea fi utile icircn diagnosticul precoce al SMRecrutarea
pacienţilor s-a efectuat din pacienţii prezentaţi pentru consultaţie la Cabinetul Individual
ldquoCMI Dr Popa Elenardquo situat icircn strada Ion Creanga din Iaşi Pentru studiul receptorilor
PPARα icircn sindromul metabolic au fost selecţionaţi un număr de 57 de subiecţi 26 de subiecţi
cu SM (constituind lotul SM) şi 31 subiecţi fără SM constituind lotul de control (Lot Non-
SM) Pentru studiul SM pacienţii au fost recrutaţi din masa de populaţie arondată cabinetului
de MF fără istoric de SM diabet zaharat boală cardio-vasculară aflați la primul diagnostic
de SM evaluarea completă a acestora fiind urmată de includerea icircn programul de
management cardiovascular şi metabolic conform Ghidurilor Terapeutice aflate icircn vigoare
Lot SM a) criterii de includerevacircrsta peste 18 ani recrutarea pe baza semnării
Consimţămacircntului liber informatSM nou-diagnosticat pe baza prezenţei a minim trei criterii
de diagnostic pentru SM conform Harmonised I b) criterii de excluderevacircrstă sub 18 ani
refuzul semnării Consimţămacircntului liber informat femei icircn perioada de graviditate sau de
lactaţie SM anterior diagnosticat istoric de diabet zaharat boală cardiovasculară constituită
tratament cu agonişti PPARα (ie fibraţi etc)
Lot martor (Non-SM) a) criterii de includerevacircrsta peste 18 ani recrutarea pe baza
semnării Consimţămacircntului liber informat absenţa diagnosticului de SM b) criterii de
excludere vacircrstă sub 18 ani refuzul semnării Consimţămacircntului liber informat femei icircn
perioada de graviditate sau de lactaţie
Studiul receptorilor PPARα a inclus două subetape
A Studiul componentelor sindromului metabolic conform criteriilor Harmonised I
Evaluarea clinică a participanţilor s-a desfăşurat icircn cadrul Cabinetului de Medicină de
Familie iar determinările hematologice şi biochimice s-au efectuat icircn Laboratorul
Ambulatorului Clinic de Specialitate al Spitalului Clinic de Urgenţă bdquoSf Spiridonrdquo Iaşi
B Evaluarea icircn citometrie de flux a nivelului relativ de expresie a PPARα şi CD36
Studiul receptorilor PPARα s-a desfăşurat icircn Laboratorul de Biologie Moleculară al
Institutului Regional de Oncologie Iaşi prin metoda citometriei icircn flux (19) Nivelul relativ de
expresie al receptorilor nucleari PPARα a fost determinat icircn diferite tipuri de leucocite
circulante polimorfonucleare (PMN) limfocite (Ly) Mo(Mo) şi eozinofile(Eo) Am utilizat o
metodă de citometrie icircn flux optimizată ldquoin houserdquo elaborată icircn cadrul Laboratorului de
Biologie Moleculară al IRO Iaşi Icircn cursul procesului de optimizare am testat mai multe
concentraţii ale anticorpului anti-PPARα 1100 1500 11500 14500 iar icircn urma
determinărilor efectuate şi a analizei statistice concentraţia 1500 a fost considerată optimă
pentru desfăşurarea studiului (tabel XXIII figura 51)
Tabel XXIII Optimizarea concentraţiilor Ac anti-PPARα Diferenţa
mediilor
valorilor
medii
PMN
Diferenţa
mediilor
mediane-
lor
PMN
Diferenţa
mediilor
valorilor
medii
Ly
Diferenţa
mediilor
mediane-
lor
Ly
Diferenţa
mediilor
valorilor
medii
Mo
Diferenţa
mediilor
mediane-
lor
Mo
Diferenţă 0 1300 1600 100 100 700 750
normal - 1100 650 1050 1050 1350 450 900
patologic 1500 2850 2750 3800 3600 2850 2400
11500 -1050 800 3500 3300 2250 1800
14500 2200 2150 1300 1100 2950 2850
AOptimizare
BRepetabilitate
Figura 51 Optimizarea concentraţiei anticorpului anti-PPARα
Icircn concordanţă cu literatura de specialitate icircn cercetarea efectuată intensitatea medie
de fluorescenţă (MFI) a fost utilizată ca măsură pentru evaluarea expresiei celulare a
receptorilor PPARα (212) Un exemplu de analiză a probelor este reprezentat icircn figura 52
Figura 52 Exemplu de analiză flowcitometrică pentru receptorul nuclear PPARα Graficul din stacircnga reprezintă distribuţia leucocitelor iar cel din dreapta ilustrează distribuţia
intensităţii de fluorescenţă pentru populaţiile de celule selectate
Intensitatea Medie a Fluorescenţei (MFI) a CD36 ca o măsură a nivelului relativ de
expresie a acestor receptori la nivelul membranei Mo a fost detectată printr-o metodă
convenţională pentru marcare de suprafaţă şi evaluare pe bază de citometrie icircn flux folosind
aceleaşi probe de sacircnge cu EDTA cu focalizare pe Mo şi utilizacircnd CD14 ca marker specific
pentru Mo (figura 53)
Figura 53Analiza
flowcitometrică
pentru marcajul
CD14 - CD36
Rezultate
Icircn cele două loturi au fost incluşi icircn studiu un număr de 57 de participanţi care au fost
investigaţi din punct clinic şi paraclinic Vacircrsta subiecţilor incluşi icircn studiu a fost cuprinsă
icircntre 18 şi 79 ani iar vacircrsta medie calculată a avut valoarea de 4805 plusmn 1587 ani Pentru sexul
masculin vacircrsta medie este de 4925plusmn1617 ani iar pentru sexul feminin 4689 plusmn1 5ani
diferenţa obţinută icircntre vacircrstele pacienţilor fiind statistic nesemnificativă (P = 085)
Analizacircnd vacircrstele subiecţilor din cele două loturi am observat că vacircrsta medie a pacienţilor
cu SM (5476 plusmn 1183 ani) a fost semnificativ mai mare (t-test P = 0003) decacirct icircn lotul
martor (4258 plusmn 169 ani) Pentru diagnosticul sindromului metabolic am calculat scorul de
SM bazacircndu-ne pe criteriile Harmonised I Conform criteriilor diagnostice din cei 57 de
subiecţi investigaţi un număr de 26 participanţi (46) au fost incluşi icircn lotul cu SM (Lot
SM) iar 31 de subiecţi(54) nu au prezentat acest sindrom constituind lotul martor (Lot
Non-SM) Din punct de vedere al repartiţiei pe sexe nu au existat diferenţe statistic
semnificative raportul bărbaţifemei fiind de 0961 Din totalul celor 28 de bărbaţi incluşi icircn
studiu 4285 (12 bărbaţi) au icircntrunit cel puţin trei criterii diagnostice pentru SM fiind
incluşi icircn lotul SM Icircn acelaşi timp 14 femei reprezentacircnd 4827 din subiecţii de sex
feminin au icircntrunit condiţiile pentru includerea icircn lotul pacienţilor cu SM Valoarea medie
determinată pentru scorul de SM a arătat prezenţa unor valori semnificativ statistic mai mari
din punct (t-test P lt 00001) icircn lotul SM (769plusmn176) comparativ cu lotul martor (174 plusmn
184) Am studiat comparativ media valorilor măsurate ale criteriilor componentelor SM
Analiza statistică a arătat valori semnificativ statistic mai mari pentru CA TG glicemie TAS
şi TAD (plt0001) icircn lotul SM comparativ cu lotul normal Concomitent calculul statistica
evidenţiat o scăderea semnificativă a HDL-colesterolului icircn lotul cu SM comparativ cu
subiecţii din lotul martor (Non-SM) Aplicacircnd testul z am comparat ponderea pacienţilor
diagnosticaţi cu HTA dislipidemie şi tulburări ale metabolismului glucidic icircn lotul SM versus
lot Non-SM şi am constatat prezenţa acestor afecţiuni icircntr-un procent mai mare semnificativ
statistic icircn lotul SM ((plt0001)
Utilizacircnd testul t Student am calculat diferenţele statistice şi icircntre alți parametri
studiaţi care sunt factori de risc cardio-vascular dar care nu sunt componente ale SM Icircn lotul
cu SM valorile acidului uric fibrinogenului Col total Non-HDL-col şi LDL-col au fost
semnificativ mai mari comparativ cu lotul martor (tabel XXVI) Analizacircnd valorile medii ale
populaţiilor de leucocite am identificat doar pentru populaţia de Eo diferenţe statistice icircntre
cele două loturi numărul Eo icircn lotul SM fiind semnificativ mai mare decacirct icircn lotul martorTot
pentru caracterizarea celor două loturi am analizat prezenţa antecedentelor
heredocolaterale (AHC) de diabet zaharat boala cardiovasculară şi dislipidemie pentru toţi
subiecţii investigaţi Astfel existenţa AHC de HTA a fost declarată de 2580 din subiecţii
incluşi icircn lotul martor respectiv de 5384 din numărul pacienţilor cu SM Antecedentele
heredocolaterale de dislipidemie au fost prezente la 3461 din pacienţii cu SM icircn timp ce icircn
lotul martor anamneza a evidenţiat aceste antecedente la 3548 din subiecţi
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα
Icircn cercetarea desfăşurată am utilizat intensitatea medie de fluorescenţă (MFI) ca
măsură a nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn leucocitele studiate Pentru
populaţiile de leucocite analiza computerizată a probelor luate icircn studiu a furnizat valori
pentru MFI a receptorilor PPARα icircn funcţie de cantitatea de anticorpi anti-PPARα marcaţi cu
fluorocrom care se leagă de aceste celule şi apoi sunt captaţi de citometru (figura 59)
A Lot Non - SM
B Lot SM
Figura 59 Analiza flowcitometrică pentru receptorii PPARα icircn leucocite A lot normal B lot SM
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Mo
Analiza probelor efectuată conform protocolului de lucru descris a arătat prezenţa
PPARα icircn Mo recoltate din sacircngele tuturor subiecţilor incluşi icircn această cercetare Pentru toţi
participanţii investigaţi analiza MFI a Ac anti - PPARα icircn populaţia de Mo (Mo) a arătat un
interval de variaţie icircntre [786 395] Valoarea medie a nivelului de expresie relativă a PPARα
calculată pentru Mo a fost de 23210 plusmn7860 Pentru ambele loturi de studiu pacienţilor cu
SM testul Testul Shapiro-Wilk a arătat distribuţia normală a valorilor obţinute pentru nivelul
de expresie al PPARα icircn Mo
Tabel XXVIII Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn Mo
Lot SM Lot Non-SM
N 26 31
Media 22819 23538
SD 5819 7717
Mediana 22400 22600
Minimum 12800 78600
Maximum 35800 37900
Percentila 25 18300 18300
Percentila 75 26200 30350
Pentru pacienţii din lotul SM valoarea medie a MFI icircn Mo a fost de 22819 plusmn 5880 iar
pentru lotul martor s-a calculat o valoare medie a MFI a Ac anti-PPARα de 23538 plusmn 7717
Distribuţia statistică a frecvenţei valorilor MFI obţinute pentru nivelul de expresie a PPARα
icircn Mo subiecţilor din cele două loturi a fost reprezentată icircn figura 511
Figura 511 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti-PPARα icircn Mo
Sub forma unei diagrame de control Shewhart am reprezentat variaţia intensităţii medii de
fluorescenţă pentru anticorpii anti-PPARα icircn MoVariaţia nivelului de expresie relativă a
receptorilor PPARα icircn Mo subiecţilor studiaţi este ilustrată icircn fig 512 513
Figura 512 Lot SM Variaţia
expresiei relative a PPARα icircn Mo
Număr pacienţi
26
Minim 128
Maxim 358
Media 22819
DS 5819
25 din 26 valori ale MFI s-au icircncadrat
icircn intervalul Media plusmn 2DS
Figura 513 Lot Non-SM Variaţia
expresiei relative a PPARα icircn Mo
Număr pacienţi 31
Minimum 786
Maximum 379
Media 23538
DS 7717
Cu excepţia unei singure
determinări valorile calculate s-au
icircncadrat icircn Media plusmn 2DS
Utilizacircnd testul parametric t-Student pentru variabilele cu distribuţie normală am
comparat valoarea medie a intensităţii de fluorescenţă a Ac anti-PPARα icircn lotul cu SM versus
subiecţi fără SM (Lot Non-SM) Analiza statistică efectuată nu a identificat diferenţe icircntre
50 100 150 200 250 300 350 400 450
0
5
10
15
20
25
30
35
MFI anti-PPAR a
Frecv
enta
relati
va (
)
Lot SM
0 50 100 150 200 250 300 350 400 450 500
0
5
10
15
20
25
30
35
MFI anti-PPAR a
Frecv
enta
relati
va (
)
Lot martor
1 6 11 16 21 26 31
0
50
100
150
200
250
300
350
400
450
MFI
anti-
PPAR
a
2282
1106
3458
518
4046
Media
LCI
LCI
1 6 11 16 21 26 31 36
-100
0
100
200
300
400
500
MFI a
nti-PP
AR
a
2354
810
3897
39
4669LCS
LCI
Media
cele două loturi icircn ceea ce priveşte expresia PPARα la nivelul Mo circulante (t- Test P=
069)
Studiul receptorilor PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de AHC şi dislipidemie
Nivelul de expresie al receptorilor PPARα α icircn Mo tinde să fie mai scăzut la subiecţii
cu AHC de HTA comparativ subiecţii care nu au declarat AHC de HTA (P= 006 fig 515)
AHC HTA
Număr 22
Mediana 19950
Percentila 25 17800
Percentila 75 22700
AHC HTA absente
Număr 35
Mediana 24800
Percentila 25 19025
Percentila 75 31700
Figura 515 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Mo funcţie de AHC de HTA
Nu s-au calculat diferenţe semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor
PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de dislipidemie atunci cacircnd aceştia au fost comparaţi cu
subiecţii fără AHC de tulburări ale metabolismului lipidic (t- Test P= 020)
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn limfocite
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn populaţia de Ly a
demonstrat prezenţa receptorilor PPARα icircn Ly tuturor subiecţilor studiaţi Pentru toţi
participanţii investigaţi analiza MFI a Ac anti - PPARα icircn populaţia de Ly a relevat un
interval de variaţie icircntre [748 314] iar valoarea medie a MFI a fost de 18058 plusmn 5600
Pentru ambele loturi aplicarea testului Shapiro-Wilk a evidenţiat distribuţia normală a
valorilor determinate pentru nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Ly Pentru
pacienţii cu SM valoarea medie a MFI determinată pentru expresia PPARα icircn populaţia de
Ly a fost de 18178 plusmn 61 16 iar pentru lotul martor a fost de 16800 plusmn 5229
Tabel XXX Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn limfocite
Lot SM Lot Non-SM
N 26 31
Media 181781 179574
SD 611694 522907
Mediana 165000 168000
Minimum 81300 74800
Maximum 314000 301000
Percentila 25 13400 - 145750
Percentila 75 21800 21700
Distribuţia frecvenţei valorilor MFI a Ac anti-PPARα icircn Ly este redată icircn figura 518
Figura 518 Distribuţia frecvenţelor relative a MFI a Ac anti-PPARα icircn Ly
94 din determinările efectuate pentru determinarea nivelului de expresie relativă al
MFI
ant
iPPA
R
a_Mo
190
200
210
220
230
240
250
260
270
280
DA NU
AHC HTA
P=006
50 89 128 167 206 244 283 322 361 400
0
5
10
15
20
25
30
35
MFI anti-PPAR a
Frecv
enta
relati
va (
)
Lot SM
0 50 100 150 200 250 300 350
0
5
10
15
20
25
30
35
40
MFI anti-PPAR a
Frec
venta
relat
iva (
)
Lot Non-SM
receptorilor PPARα icircn limfocitele subiecţilor cu SM s-au icircncadrat icircn intervalul Media plusmn 2DS
Figura 5 19 Lot SM Variaţia expresiei
relative a PPARα icircn Ly
Număr pacienţi 26
Minimum 813
Maximum 31400
Media 18178
Deviaţia Standard 6116
25 valori s-au icircncadrat icircn Media plusmn 2DS
Pentru lotul Non-SM diagrama de control (figura 520) a arătat toate valorile
determinate pentru lotul Non-SM se icircncadrează icircntre LCS şi LCI
Figura 520 Lot Non -SM Variaţia
expresiei relative a PPARα icircn Ly
Număr pacienţi 31
Minimum 748
Maximum 30100
Media 179574
Deviaţia Standard 5229
96 din valori icircncadrate icircn Media plusmn 2DS
Aplicarea testului t-Student pentru valorile medii ale intensităţii de fluorescenţă ale
PPARα icircn Ly nu a arătat existenţa unei diferenţe statistic semnificative icircntre lotul cu SM şi
lotul martor(t- Test P= 088)
Analiza receptorilor PPARα icircn Ly subiecţilor cu AHC de HTA şi dislipidemie
Studiind populaţiile de Ly la subiecţii care au prezentat AHC de hipertensiune
arterială analiza flowcitometrică a relevat existenţa unor valori mai mici pentru MFI la aceşti
subiecţi comparativ cu cei fără AHC de HTA (fig 522) deşi scăderea observată nu a
icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică (t- Test P = 009)
AHC HTA
Număr 22
Mediana 16000
Percentila 25 12700
Percentila 75 17100
AHC HTA absenţe
Număr 35
Mediana 18700
Percentila 25 14900
Percentila 75 23175
Figura 522 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Ly funcţie de AHC de HTA
Nu am calculat diferenţe statistic semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor
PPARα icircn populaţiile de Ly ale subiecţilor la care am identificat AHC de dislipidemie
comparativ cu cei care nu au declarat antecedente familiale de dislipidemie (t- Test P= 051)
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn neutrofile (PMN)
Analiza flowcitometrică a evidenţiat prezenţa PPARα icircn PMN recoltate din sacircngele
venos al tuturor participanţilor la studiu Pentru toţi subiecţii investigaţi analiza MFI a Ac -
PPARα icircn populaţia de PMN a relevat un interval de variaţie de [163419] iar valoarea medie
a MFI pentru Ac anti-PPARα a fost de 26392 plusmn 7064 Testul Shapiro-Wilk a arătat o
distribuţie normală a valorilor intensităţii medii de fluorescenţă a anticorpilor anti-PPARα atacirct
icircn lotul pacienţilor cu SM cacirct şi icircn lotul martor
1 6 11 16 21 26 31
-50
0
50
100
150
200
250
300
350
400
MFI
anti-
PPAR
a
1818
595
3041
-17
3653
Media+2DS
Media- 2DS
1 6 11 16 21 26 31 36
0
50
100
150
200
250
300
350
MFI
ant
i-PPA
R
a
1796
750
2841
227
3364
Media+2DS
Media
Media- 2DS
MFI
anti-
PPAR
a Ly
130
140
150
160
170
180
190
200
210
DA NU
AHC HTA
P=009
Tabel XXXII Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn PMN
Lot SM Lot Non-SM
N 26 31
Media 26273 26480
SD 6915 7088
Mediana 25900 25500
Minimum 17200 16300
Maximum 39500 41900
Percentila 25 19800 19600
Percentila 75 30500 31500
Icircn cele două loturi distribuţia frecvenţei valorilor nivelului relativ de expresie a
receptorilor PPARα icircn PMN a fost reprezentată sub formă de histograme (fig 525)
Figura 525 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti-PPARα icircn PMN
Pentru cei 26 de pacienţi din lotul cu SM a valoarea medie a nivelului de expresie
relativă a receptorilor PPARα icircn PMN a fost de 26273 plusmn 6915 Studiind diagrama Shewhart
din figura 526 se observă că toate valorile obţinute pentru nivelul de expresie relativă
PPARα icircn PMN investigate se icircncadrează icircntre limitele definite de valorile medii plusmn 2DS
Figura 526 Lot SM
Variaţia expresiei relative a PPARα icircn
PMN
Număr pacienţi 26
Minimum 17200
Maximum 39500
Media 26273
Deviaţia Standard 6915
Valorile MFI icircncadrate icircn Media plusmn 2DS
Pentru lotul martor valoarea medie calculată a MFI a anticorpilor anti-PPARα a fost de
26480 plusmn 7088 peste 95 din valorile MFI fiind cuprinse icircn Media plusmn 2DS (figura 527)
Figura 527 Lot Non-SM Variaţia expresiei
relative a PPARα icircn PMN
Număr pacienţi 31
Minimum 16300
Maximum 41900
Media 26480
Deviaţia Standard 7088
30 valoriicircn Media plusmn 2DS
Pentru PMN analiza statistica nu a arătat existenţa unei diferenţe statistic semnificative icircntre
nivelul de expresie relativă a PPARα la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii din lotul
Non-SM (t- Test P= 090) Studiind populaţiile de PMN la subiecţii care au prezentat AHC
de HTA nu am calculat o diferenţă statistic semnificativă icircntre expresia receptorilor PPARα
la subiecţii cu istoric familial de hipertensiune arterială comparativ cu cei pentru care nu s-au
notat AHC de HTA (t- Test P= 013)De asemenea am identificat diferenţe icircntre nivelul de
expresie al PPARα icircn PMN subiecţilor care prezentau AHC de dislipidemie comparativ cu
cei fără AHC de dislipidemie (t- Test P= 017)
50 100 150 200 250 300 350 400 450 500
0
5
10
15
20
25
30
35
MFI anti-PPAR a
Frecve
nta rel
ativa (
)
Lot SM
50 100 150 200 250 300 350 400 450 500
0
5
10
15
20
25
30
MFI anti-PPAR a
Frecv
enta
relati
va (
)
Lot Non-SM
1 6 11 16 21 26 31
0
50
100
150
200
250
300
350
400
450
500
MFI
anti-
PPA
R
a
2627
1244
4010
553
4702
Media + 2DS
Media - 2 DS
Media
1 6 11 16 21 26 31 36
0
50
100
150
200
250
300
350
400
450
500
MFI
anti-
PPAR
a
2648
1230
4066
522
4774
Media+ 2DS
Media - 2DS
Media
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile Tabel XXXIV Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn Eo
Lot SM Lot Non-SM
N 26 31
Mediaplusmn SD 141057 plusmn 47604 172209 plusmn 37565
Mediana 142450 171300
Minimum 35000 68500
Maximum 233700 250600
Percentila 25 119300 153225
Percentila 75 169700 199550
Am studiat nivelul relativ de expresie a receptorilor PPARα icircn Eo iar rezultatele au
fost figurate sub forma de histograme (figura 532)
Figura 532 Distribuţia frecventelor relative ale valorilor MFI anti- PPARα icircn Eo
Din diagrama Shewhart (figura 533) se observă că toate valorile determinate pentru
nivelul de expresie relativă a PPARα icircn Eo pentru lotul SM s-au icircncadrat icircn [Media plusmn 3 DS]
peste 90 din determinări fiind cuprinse icircn [Media plusmn 2 DS] iar icircn [Media plusmn 1 DS] sunt
incluse peste 65 din valorile MFI
Figura 533 Lot SM
Variaţia expresiei relative a PPARα icircn Eo
Număr pacienţi 26
Minimum 35000
Maximum 233700
Media 141057
Deviaţia Standard 47604
24 valori icircncadrat eicircn [Media plusmn 2DS]
Pentru subiecţii incluşi icircn lotul martor analiza diagramei (figura 534) a arătat că
toate cele 31 de valori ale MFI pentru PPARα icircn Eo se icircncadrează icircn [Media plusmn 3DS] iar 30
dintre acestea se icircncadrează icircn [ Media plusmn 2 DS]
Figura 534 Lot Non -SM
Variaţia expresiei relative a PPARα icircn Eo
Număr pacienţi 31
Minimum 685
Maximum 2506
Media 172209
Deviaţia Standard 375 65
30 valori icircncadrate icircn [Media plusmn 2DS]
Comparacircnd subiecţii cu SM cu cei din lotul martor am observat o scădere
semnificativă statistic a MFI a Ac anti - PPARα icircn Eo pentru pacienţiir cu SM ( figura 535)
PPARα Eo Lot Non-SM
Număr 31
Mediana 171300
Percentila 25 152325
Percentila 75 199550
PPARα Eo Lot SM
Număr 26
Mediana 142450
Percentila 25 119300
Percentila 75 169700
Figura 5 35 Comparaţie icircntre nivelul de expresie a PPARα icircn Eo
0 500 1000 1500 2000 2500 3000
0
10
20
30
40
50
MFI anti-PPAR a
Frecvent
a relativa
()
Lot SM
400 800 1200 1600 2000 2400 2800
0
5
10
15
20
25
30
35
40
45
MFI anti-PPAR a
Frecenta
relativa
()
Lot Non-SM
1 6 11 16 21 26 31
-500
0
500
1000
1500
2000
2500
3000
MFI a
nti-PP
AR
a
14106
4765
23447
94
28117
Media + 2DS
Media- 2DS
LCI
LCS
1 6 11 16 21 26 31 36
500
1000
1500
2000
2500
3000
MFI an
ti-PPA
R a
17221
9708
24734
5951
28490
LCI
Media-2DS
Media
Media +2 DS
LCS
1200
1300
1400
1500
1600
1700
1800
1900
Lot SM Lot Non-SM
P=00072
Cu ajutorul curbei ROC am evaluat posibilitatea utilizării MFI a Ac anti - PPARα icircn
Eo ca marker pentru diagnosticul SM Valoarea MFI a Ac anti - PPARα icircn Eo care prezice cu
cea mai mare acurateţe prezenţa SM a fost de 1533 (punctul de ldquocut-offrdquo) pentru care am
calculat o sensibilitate de 5652 şi o specificitate de 7778 Calculul ariei AUC a furnizat
valoarea de 0663 şi deci determinarea parametrului MFI anti- PPARα icircn Eo are valoarea
unui test cu acurateţe redusatilde icircn diagnosticul SM Studiind expresia PPARα icircn Eo la subiecţii
care au prezentat AHC de HTA am observat o scădere semnificativă statistic (P = 00023) a
expresiei PPARα la subiecţii cu istoric familial de HTA comparativ cu subiecţii fatilderatilde AHC de
HTA (figura 537)
AHC HTA
Număr 22
Mediana 148800
Percentila 25 116425
Percentila 75 170750
AHC HTA absente
Număr 35
Mediana 170850
Percentila 25 143700
Percentila 75 195000
Figura 537 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Eo funcţie de AHC de HTA
Studiind subiecţii cu AHC declarate de dislipidemie nu am identificat diferenţe icircntre
nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Eo subiecţilor cu AHC de dislipidemie
comparativ cu cei care nu au declarat prezenţa AHC de dislipidemie (t - Test P = 067)
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor CD36
Am studiat expresia receptorilor CD36 icircn Mo subiecţilor incluşi icircn studiu
Lot Non - SM
BLot SM
Figura 539 Analiza flowcitometrica pentru receptorii CD36 icircn Mo
Pentru toţi participanţii la studiu valorile MFI au variat icircn intervalul [817 6933] iar
valoarea medie a MFI a Ac anti-CD36 a fost de 397133 plusmn 120902 Tabel XXXVII Statistică descriptivă pentru a CD36 icircn Mo
Lot SM Lot Non-SM
Media 429034 370377
Deviatia Standard 109051 125514
Mediana 411000 362800
Minimum 266400 81700
Maximum 693300 616800
Percentila 25 346200 273750
Percentila 75 469000 453300
Distribuţia frecvenţelor relative a MFI au fost prezentate sub formă histogramelor
Figura 541 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti - CD36 icircn Mo
MFI
ant
i-PPA
R a Eo
1000
1100
1200
1300
1400
1500
1600
1700
1800
1900
DA NU
AHC HTA
P=00023
1000 2000 3000 4000 5000 6000 7000 8000
0
5
10
15
20
25
MFI anti-CD36
Frecve
nta rela
tiva (
)
Lot SM
0 1778 3556 5333 7111
0
5
10
15
20
25
30
35
MFI anti-CD36
Frecve
nta rel
ativa (
)
Lot Non - SM
Referitor la lotul SM 92 din valorile MFI a Ac anti- CD36 s-au icircncadrat icircn
intervalul Media plusmn 2 DS (figura 542) iar pentru lotul martor peste 90 dintre acestea icircn
Media plusmn 2 DS (figura 543)
Figura 542 Lot SM
Variaţia MFI anti-CD36 icircn Mo
Număr pacienţi 26
Minimum 2664
Maximum 6933
Media 429034
Deviaţia Standard 109051
Figura 543 Lot Non -SM
Variaţia MFI anti- CD36 icircn Mo
Număr 31
Minimum 81700
Maximum 616800
Media 370377
Deviaţia Standard 125514
Comparacircnd subiecţii cu SM cu cei din lotul normal am constatat o tendinţă de creştere
a expresiei CD36 icircn lotul cu SM((t - Test P= 0067)
MFI anti - CD36 Lot Non-SM
Număr 31
Mediana 3628
Percentila 25 2737
Percentila 75 4533
MFI anti - CD36 Lot SM
Număr 26
Mediana 4110
Percentila 25 3462
Percentila 75 4690
Figura 544 Comparaţie icircntre cel două loturi privind MFI anti - CD36 icircn Mo
Referindu-ne la subiecţii cu AHC de HTA am observat o tendinţă de creştere a
valorilor MFI anti-CD36 comparativ cu cei care nu au avut AHC de HTA (t - Test P = 0 08)
AHC HTA
Număr 22
Mediana 442800
Percentila 25 355275
Percentila 75 519475
AHC HTA absenţe
Număr 35
Mediana 377400
Percentila 25 316900
Percentila 75 443400
Figura 545 Comparaţie icircntre expresia CD36 icircn Mo funcţie de AHC de HTA
Nu s-au calculat diferenţe semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor
PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de dislipidemie atunci cacircnd aceştia au fost comparaţi cu
subiecţii fără AHC de dislipidemie (t - Test P=031)
Corelaţii icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα si CD36
Studiind valorile intensităţii medii de fluorescenţă a Ac anti-PPARα icircn Mo Ly şi
PMN am observat că nivelul de expresie celularatilde a PPARα icircn Mo Ly şi PMN sunt corelate
puternic pozitiv atacirct icircn lotul SM cacirct şi icircn lotul martor(fig547 548)
1 6 11 16 21 26 31
0
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
Pacienti
MFI a
nti-CD
36
42903
21093
64714
10188
75619
LCI
Media
LCS1 6 11 16 21 26 31 36
-1000
0
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
MFI a
nti- C
D36
37038
11935
62141
-616
74692Media + 2 DS
Media
Media - 2 DS
3200
3400
3600
3800
4000
4200
4400
4600
4800
Lot SM Lot Non-SM
P = 00676
MFI
anti-
CD36
3400
3600
3800
4000
4200
4400
4600
4800
5000
DA NU
AHC HTA
P = 008
Figura 547 Studiul relatiilor dintre
receptorii PPARα icircn SM A Mo vs PMN B Mo vs Ly
C PMN vs Ly Graficul ilustrează coeficienţii r P dreapta de
regresie (linia centrala) intervalul de icircncredere
95 şi intervalul de predicţie 95
Figura 548 Corelaţii icircntre receptorii PPARα icircn lotul
martor
A Mo vs PMN
B Mo vs Ly
C PMN vs Ly
Tot pentru lotul SM cacircnd am evaluat relaţia dintre nivelul de expresie relativă a
receptorilor PPARα icircn Eo şi nivelul de expresie relativa a receptorilor CD 36 am obţinut o
corelaţie negativă (r = - 05 P = 001) (fig 549 A)
50 100 150 200 250 300 350 50
100
150
200
250
300
350
400
450
500
PPARα Ly
PPARα PMN
y = 56641 + 1159 x r = 086 P lt 0001
C
50 100 150 200 250 300 350 400 0
50
100
150
200
250
300
350
PPARα Mo
PPARα Ly
y = 36665 + 0607 x r = 090 P lt 0001
B
150 200 250 300 350 400 450 0
50 100 150 200 250 300 350 400 450 500
PPARα PMN
PPARα Mo
y = 2505 + 0879 x r = 081 P lt 0001
A
50 100 150 200 250 300 350
50 100 150 200 250 300 350 400 450 500
PPARα Ly
PPARα PMN
y = 95668 + 0919 x r = 081 P lt 0001
C
100 150 200 250 300 350 400
0
50
100
150
200
250
300
350
400
PPARα Mo
PPARα Ly
y = -7503 + 0829 x r = 079 P lt 0001
B
100 150 200 250 300 350 400
50
100
150
200
250
300
350
400
450
500
PPARα Mo
PPARα PMN
y = 61384 + 0882 r = 074 P lt 0001
A
Figura 549 Corelaţii icircntre expresia PPARα icircn Eo şi alte tipuri de receptori investigaţi A PPARα Eo şi CD 36 (Lot SM) B PPARα Eo şi PPARα Mo( Lot Non-SM)
Icircn lotul martor am identificat o asociere moderată pozitivă (r = 038 P = 0033) icircntre
nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Eo şi Mo (figura 549B) corelaţie absentă icircn
lotul pacienţilor cu SM
Corelaţii dintre receptorii studiaţi şi componentele sindromului metabolic
Icircn lotul de control analiza statistică a relevat faptul că icircntre circumferinţa
abdominală (CA ) şi nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Mo Ly şi PMN există o
corelaţie inversă adică scăderea expresiei PPARα la nivelul acestor populatii celulare ar fi
icircnsoţită de creşterea CA (figura 550
Figura 550Corelaţii dintre receptorii
PPARα si CA A Mo B Ly C PMN
La pacienţii cu SM am notat o corelatie moderată negativă statistic semnificativă
icircntre TG şi valorile MFI a Ac anti- PPARα icircn Mo şi Ly( fig 551)
150 200 250 300 350 400 450 50
60
70
80
90
100
110
PPARα PMN
CA r = - 040 P = 0024
C
50 100 150 200 250 300 350 50
60
70
80
90
100
110
PPARα Ly
CA r = - 046 P = 0009
B
50 100 150 200 250 300 350 400 50
60
70
80
90
100
110
PPARα Mo
CA r = - 042 P = 0017
A
50 100 150 200 250 300 350 400 500
1000
1500
2000
2500
3000
PPARα Mo
PPARα Eo
r = 038 P = 0033
B
0 500 1000 1500 2000 2500 1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
PPARα Eo
CD36
r = 050 P = 0010
A
Figura 551 Lot SM Corelaţie icircntre expresia PPARα şi TG (A Mo B Ly)
Analizand corelatia dintre receptorii CD36 si valorile TA la pacientii cu SM am observat
o asociere pozitivă asteptată intre TAD si nivelul de expresie al receptorilor CD36 (fig 552)
Figura 552 Lot SM Corelaţii icircntre expresia
receptorilor CD36 şi valorile tensiunii arteriale
diastolice
Studiind corelaţiile dintre receptorii PPARα şi HDL-col la subiecţii din lotul martor am
notat o asociere pozitivă icircntre expresia PPARα icircn Mo şi Ly cu HDL-col (fig 553)
Figura 553 Lot martor Corelaţii icircntre HDL-col şi expresia PPARα icircn Mo(A) Ly(B)
Icircn lotul normal am evidenţiat corelaţii pozitive moderate dar semnificative statistic icircntre
CA şi valorile TAS (r = 062 P lt 0001) respectiv TAD (r = 050 P=0004) precum şi icircntre
CA şi glicemia subiecţilor normali (r = 052 P = 0003) Aceste date icircmpreună cu relaţia
invers proporţională identificată icircntre HDL-col şi CA (r = 050 P = 001) susţin validitatea
acestui studiu Icircn lotul subiecţilor cu SM am observat o corelaţie moderat pozitivă icircntre
expresia PPARα icircn populaţiiile de Mo şi Eo şi concentraţia a HDL-col (fig 554)
B
100 150 200 250 300 350 20
30
40
50
60
70
80
90
100
PPARα Ly
HDL-col-(mgdl)
r = 036 P = 0046
A
150 200 250 300 350 400 20
30
40
50
60
70
80
90
100
PPARα Mo
HDL-col-(mgd)l
r = 035 P = 005
70 75 80 85 90 95 100 1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
TAD (mmHg)
CD36
r = 048 P = 0013
B
50 100 150 200 250 300 350 -100
0
100
200
300
400
500
PPARα Ly
TG(mgdl)
r = - 042 P = 003
A
50 100 150 200 250 300 350 400 -100
0
100
200
300
400
500
PPARα Mo
TG ( mgdl) r =- 0 43 P = 0027
Figura 554 Corelaţii icircn SM icircntre HDL-col şi expresia PPARα icircn Mo (A) şi Eo(B)
Corelaţii icircntre nivelul de expresie relativă a PPARα şi markeri ai disfuncţiei
endoteliale şi inflamaţiei cronice
Deşi nu a icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică am reţinut corelaţia invers
proporţională (r = - 0331 P = 006) dintre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα
icircn PMN şi concentraţia serică a Non-HDL-colesterolului
Studiind relaţiile dintre parametri icircn lotul de pacienţi cu SM am observat o corelaţie
moderată invers proporţională icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Eo şi
acidul uric seric (figura 555 A) corelaţie absentă la subiecţii fără SM
Figura 555 Lot SM corelaţia dintre expresia PPARα icircn Eo şi acidul uric (A) respectiv
PPARα şi fibrinogen (B)
Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P=008) am notat pentru
pacienţii cu SM corelaţia invers proporţională dintre expresia PPARα icircn Eo şi concentraţia
serică a fibrinogenului ( figura 555B)
V5 Discuţii
Icircn cadrul lucrării de doctorat am studiat nivelul de expresie relativă a PPARα icircn
leucocitele pacienţilor cu SM comparativ cu cea a subiecţilor normali Expresia PPARα a fost
studiată icircn paralel cu cea a CD36 glicoproteină exprimată pe suprafaţa a numeroase celule
din organismul uman inclusiv pe cea a Mo şi macrofagelor Prin funcţia sa de receptor pentru
particulele oxidate de LDL CD36 cunoscut ca bdquoscavenger receptorrdquo de clasa B sau
bdquotrombospodin receptorrdquo contribuie la dezvoltarea inflamaţiei de la nivel endotelial şi
formarea plăcii de ateroscleroză Referitor la studiul PPARα icircn Eo icircn sindromul metabolic
menţionăm că studiul nostru este primul care arată că nivelul de expresie a proteinei PPARα
icircn Eo măsurat prin citometrie icircn flux este semnificativ mai redus la pacienţii care sunt
diagnosticaţi cu acest sindrom De asemenea icircn lotul cu SM cercetat icircn cadrul studiului
receptorilor PPARα numărul Eo circulante a fost semnificativ mai crescut la pacienţii cu SM
B
0 500 1000 1500 2000 2500 200
250
300
350
400
450
PPARα Eo o
Fibrinogen mgdl
r =- 036 P = 008
0 500 1000 1500 2000 2500 1 2 3 4 5 6 7 8 9
10 11
PPARα Eo_
Acid uric(mgdl) r = 048 P = 0014 A
0 500 1000 1500 2000 2500 10
20
30
40
50
60
70
80
PPARα Eo
HDL(mgdl)
r = 044 P = 0024
B
100 150 200 250 300 350 400 10
20
30
40
50
60
70
80
PPARα Mo
HDL( mgdl)
r = 046 P = 0019
A
(P = 003) Aceste constatări conduc la ipoteza că Eo joacă un rol special icircn mecanismele
patogenice declanşate icircn sindromul metabolic şi că receptorii PPARα sunt importanţi icircn
implicarea Eo icircn obezitate şi insulinorezistenţă Creşterea numărului de Eo circulante este
urmată de eliberarea mediatorilor proinflamatori iar reducerea expresiei PPARα icircn Eo
determină perturbarea mecanismelor de control al inflamaţiei cu exacerbarea cascadei
proinflamatorii Consecutiv se agravează disfuncţia endotelială şi se accelerează progresia
leziunilor de ateroscleroză Extrapolacircnd aceste ipoteze putem spune că asocierea raportată
dintre boala ischemică coronariană şi Eo poate fi şi consecinţa exacerbării cascadei
proinflamatorii de la nivel vascular produsă datorită scăderii expresiei PPARα icircn Eo iar
creşterea numărului de Eo circulante poate reprezenta o adaptare a organismului uman care
icircncearcă să suplinească deficitul de receptori PPARα Analizacircnd curba ROC pentru
intensităţile medii de fluorescenţă determinate pentru anticorpii anti- PPARα icircn Eo am
obţinut pentru acest biomarker o sensibilitate a testului de 565 şi o specificitate de 778
pentru un punct de cut-off de 1533 ( figura 536 ) Deşi aria AUC (Aria under the curve) egală
cu 0663 icircncadrează acest test ca avacircnd o acurateţe redusă observăm că că această valoare
este apropiată de determinările AUC pentru alţi factori (fibrinogen raport de aterogenitate
acid uric non- HDL-colesterol) cunoscuţi ca fiind implicaţi icircn aterogeneză şi inflamaţia
cronică (figura 431) Aceste remarci alături de faptul că icircn studiul receptorilor PPARα icircn
leucocite am inclus subiecţi la primul diagnostic de SM creează premisa integrării
determinării expresiei relative a receptorilor PPARα icircn diagnosticul complex al sindromului
metabolic Putem spune că icircn final studiul expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofilele
circulante se dovedește a fi util icircn diagnosticul precoce la nivel molecular al SM permiţacircnd
identificarea timpurie a unor indivizi cu risc cardiometabolic crescut Astfel intervenţia
precoce asupra subiecţilor cu deficit de PPARα icircn Eo contribuie la managementul eficient al
afecţiunilor degenerative icircn care inflamaţia cronică icircndeplineşte un rol primordial Referitor
la populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările efectuate prin citometrie de flux nu au
arătat existenţa unor diferenţe statistice icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα
la subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali Rezultatele noastre pot fi
consecinţa caracteristicilor loturilor studiate (icircn studiul nostru au fost incluşi subiecţi recrutaţi
la primul diagnostic de SM şi icircn absenţa stimulării receptorilor PPARα cu droguri agoniste
PPARα) dar icircn acelaşi timp pot apare diferenţe datorită metodei utilizate (231 232 233)
Făcacircnd o paralelă cu un studiu publicat icircn 2013 icircn Europa (231) care a arătat creşterea
nivelului de expresie al PPARα icircn Ly şi Mo observăm că deşi numărul de subiecţi a fost
aproximativ egal (57 participanţi icircn studiul nostru 60 icircn studiul DAmore) subiecţii icircn studiul
amintit au fost recrutaţi dintr-o clinică cu profil medical la primul diagnostic de SM icircn timp
ce metoda utilizată a fost PCR (Polymerase Chain Reaction) mult mai fidelă decacirct citometria
icircn flux icircn studiul receptorilor nucleari De asemenea DAmore nu investighează expresia
PPARα icircn Eo şi PMN icircn cercetare fiind incluse doar celulele CD14+ (predominant Mo) şi
CD14- (predominant Ly) Deşi nu am obţinut diferenţe statistic semnificative icircntre cele două
loturi referitoare la nivelul de expresie relativă a PPARα icircn Mo Ly şi PMN am observat
corelaţii puternice semnificative statistic icircntre expresia receptorilor PPARα icircn aceste tipuri
celulare Rezultatele obţinute sugerează existenţa unui mecanism diferit molecular de control
icircn eozinofile care reglează cantitatea de proteină PPARα icircn eozinofile versus alte tipuri de
leucocite (la pacienţii cu SM) şi acest lucru este icircn concordanţă cu cercetările care descriu
expresia PPARα mRNA icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale
bronşice keratinocite) Studiind prin citometrie de flux nivelul de expresie relativă a
receptorului CD36 la nivelul Mo am arătat prezenţa acestuia icircn Mo tuturor subiecţilor
investigaţi Analizacircnd valorile intensităţii medii de fluorescenţă a CD36 icircn loturile studiate
am observat o tendinţă de creştere la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali
confirmacircnd implicarea receptorului CD36 icircn patogeneza acestuia Referitor la expresia
receptorului CD36 rezultatele obţinute sunt icircn consens cu studii anterioare care au arătat
creşterea expresiei CD36 la pacienţii cu SM şi diabet zaharat Astfel pe lacircngă diferenţa icircn
expresia CD36 s-au raportat şi corelaţii inverse icircntre expresia proteinei CD36 şi nivelul
adiponectinei Acelaşi studiu a evidenţiat o corelaţie pozitivă intre expresia CD36 cu expresia
receptorilor PPAR gamma relaţia cu PPARα nefiind investigată
Analiza de subgrup a relaţiilor dintre componentele SM și elementele moleculare
proinflamatorii studiate a relevat prezenţa unor asocieri semnificativ statistice icircntre acestea
Se argumentează astfel că veridicitatea studiului este susţinută de interdependenţele statistice
ale componentelor SM Determinarea coeficientului de corelaţie Icircn studiul nostru nivelul de
expresie relativă a PPARα s-a corelat moderat negativ (figura 550) cu CA a subiecţilor din
lotul normal pentru populaţiile celulare de Mo (r = - 0420 P = 001) Ly (r = - 046 P =
0009) şi PMN (r = - 040 P = 0024) date care sunt icircn concordanţă cu studiile care arată
rolul PPARα icircn furnizarea energiei prin beta-oxidarea acizilor graşi Icircn acelaşi timp icircn lotul
pacienţilor cu SM nu am identificat prezenţa unei asocieri icircntre nivelul de expresie relativă a
PPARα şi valoarea măsurată a CA Asocierea dintre expresia relativă a PPARα cu obezitatea
de tip central completează datele existente referitoare la reglarea homeostaziei energetice
conturacircnd un mecanism de control deficitar al aportului caloric al SM Icircn condiţiile icircn care
rezultatele obţinute prin metoda citometriei icircn flux nu au arătat existenţa unei corelaţii intre
expresia PPARα şi CA la pacienţii cu SM considerăm că ar fi necesar studiul
polimorfismului genei PPARA care ar putea aduce informaţii importante cu privire la
implicarea acestor receptori icircn apariţia obezităţii de tip central Subliniem acest lucru deoarece
obezitatea este o boală plurifactorială icircn care pe lacircngă factorii ereditari sunt implicaţi factori
de mediu psihologici şi sociali (245) Existenţa unei componente genetice a aterosclerozei
este legată şi de prezenţa unor variante ale genei PPARA asociate cu creşterea incidenţei bolii
cardiovasculare (82) şi a SM (249) Icircn studiul nostru am constatat o scădere statistic
semnificativă a nivelului expresiei relative a receptorilor PPARα icircn Eo la subiecţii cu
antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială comparativ cu subiecţii fără istoric
familial de hipertensiune (figura 537) Deşi diferenţele calculate icircntre loturile studiate nu au
icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică la subiecţii care au declarat prezenţa
antecedentelor familiale de hipertensiune arterială remarcăm o tendinţă de scădere a
intensităţii medii de fluorescenţă pentru Ac anti-PPARα la nivelul Mo (figura 515 P = 006
) icircn timp ce expresia relativă a CD36 icircnregistrează o creştere la acesti subiecţi (figura 545 P
= 008) Icircn contextul riscului cardiovascular foarte icircnalt al pacienţilor cu SM amintim şi
existenţa corelaţiei pozitive dintre valorile tensiunii arteriale diastolice şi expresia relativă a
receptorului CD36 (r = 0483 P = 0013) Această constatare este icircn consens cu studiile care
au arătat că forma solubilă circulantă a CD36 este asociată cu factorii de risc cardiovasculari
fiind propusă ca un marker precoce al aterosclerozei Activarea PPARα este asociată cu
modularea metabolismului lipidic iar agoniştii PPARα sunt utilizaţi icircn mod curent pentru
tratamentul dislipidemiei Sub acţiunea agoniştilor PPARα se obţine o icircmbunătăţire a funcţiei
endoteliale şi a parametrilor reologici funcţiile pleiotropice ale agoniştilor PPARα fiind
dovedite icircn trialuri clinice controlate Icircn populaţiile de Mo şi Ly la pacienţii cu SM
cercetarea noastră a evidenţiat o asociere negativă icircntre nivelul de expresie relativă a
receptorilor PPARα şi concentraţia TG serice (figura 551) Astfel scăderea expresiei
receptorilor PPARα este asociată cu creşterea nivelului TG serice contribuind la profilul
lipidic aterogen din SM Icircn conformitate cu literatura de specialitate icircn studiul efectuat prin
metoda citometriei icircn flux am găsit prezenţa asocierii icircntre nivelul de expresie al PPARα şi
HDL-colesterol Corelaţia pozitivă dintre nivelul de expresie relativă PPARα şi concentraţia
HDL-colesterolului a fost observată icircn lotul martor icircn populaţiile de Mo (r = 035 P = 005)
şi Ly ( r = 036 P = 004) (figura 553) susţinacircnd faptul că stimularea receptorilor PPARα
este legată de creşterea nivelului seric al lipoproteinelor cu densitate crescută La pacienţii cu
SM corelaţia dintre expresia PPARα şi HDL-colesterol a fost evidenţiată icircn populaţiile de Mo
(r = 046 P = 0019) şi eozinofile (r = 044 P = 0024) Se desprinde concluzia că icircn
sindromul metabolic scăderea concentraţiei HDL-colesterol este legată de diminuarea
nivelului de expresie relativă a receptorilor nucleari PPARα icircntărind afirmaţiile legate de
rolul acestor receptori icircn progresia bolilor cardiovasculare Studiind reactanţii de fază acută
analiza statistică a relevat o diferenţă semnificativă din punct de vedere statistic icircntre valorile
fibrinogenului la pacienţii cu SM atunci cacircnd au fost comparaţi cu subiecţii fără SM
(Capitolul IV4 P lt0 001 figura 427A) De asemenea icircn Capitolul V dedicat studiul
expresiei relative a receptorilor PPARα studiul valorilor fibrinogenului a arătat creşterea
acestui reactant de faza acută icircn lotul cu SM comparativ cu lotul martor (P lt0 0001) Icircn
studiul nostru am calculat o corelaţie invers proporţionala (r = - -036 fig 555B) icircntre
nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile şi concentraţia serică a
fibrinogenului Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P = 008) am reţinut
această asociere deoarece am demonstrat că nivelul de expresie relativă al receptorilor
PPARα icircn eozinofile este mai scăzut icircn sindromul metabolic iar sindromul metabolic este
caracterizat printr-un status inflamator cronic status caracterizat şi de creşterea concentraţiei
serice a fibrinogenului De asemenea notam ca această corelaţie negativă se află icircn
concordanţă cu studiile care arata că tratamentul cu agonişti PPARα (fibraţi) determina
scăderea nivelului seric al fibrinogenului contribuind la diminuarea inflamaţiei cronice din
sindromul metabolic şi icircn consecinţă amelioracircnd insulinorezistenţa
LIMITE ȘI DIFICULTĂȚI IcircN CERCETARE
Icircn cadrul Tezei de Doctorat am desfăşurat o cercetare care şi-a propus studierea
expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Recrutarea anamneza şi examinarea
clinică a subiecţilor au fost realizate icircn cadrul Cabinetului de Medicină de Familie CMI Popa
Elena din Iaşi iar determinările hematologice şi biochimice s-au efectuat icircn cadrul
Laboratorului Ambulatorului de Specialitate al Spitalului Universitar ldquoSfacircntul Spiridon din
Iaşi Icircn studiul epidemiologic şi al markerilor inflamatori al sindromului metabolic desfăşurat
au fost incluşi un număr de 1530 de participanţi pe baza liberului consimţămacircnt examinaţi icircn
perioada 01012013 - 31122013 Icircn continuare icircn perioada 1012014 - 28022014 pe baza
criteriilor de includere şi excludere icircn cele două loturi de studiu am investigat un număr de 57
de subiecţi prezentaţi la consultaţie icircn această perioadă şi care au icircndeplinit criteriile de
includere icircn cele două loturi (Lot SM şi Lot Control) constituite pentru evaluarea nivelului de
expresie a receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Explorarea nivelului de expresie
relativă a receptorilor PPARα s-a desfăşurat icircn cadrul Laboratorului de Biologie Moleculară
de pe platforma Institutului Regional de Oncologie Datorită resurselor proprii financiare
limitate trebuie să subliniez că aceasta cercetare nu ar fi fost posibilă fără contribuţia unor
cercetători din domeniul medical care m-au sprijinit necondiţionat atacirct icircn elaborarea
protocolului de lucru cacirct şi icircn efectuarea propriu-zisă a studiului Icircn acest sens menţionăm şi
faptul că pentru studiul receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic am utilizat aparatura
Laboratorului de Biologie Moleculară (care deserveşte icircntreaga Regiune a Moldovei) Pe
această cale mulţumesc personalului Laboratorului de Biologie Moleculară pentru ajutorul
acordat icircn desfăşurarea cercetării doctorale icircn condiţiile icircn care se observa creşterea
numărului de pacienţi care se adresează acestei platforme de cercetare Mulţumesc de
asemenea şi Doamnei Doctor Elena Butoi din cadrul Institutului de Biologie şi Patologie
Moleculară ldquoNicolae Simionescurdquo Bucureşti) pentru donaţia anticorpului secundar anti-
FITC Icircn consecinţă pentru recrutarea unui număr mai mare de participanţi ar fi fost necesară
icircn primul racircnd obţinerea unor resurse financiare suplimentare pentru achiziţia de aparatură şi
reactivi Totuşi numărul subiecţilor recrutaţi este apropiat de numărul subiecţilor raportaţi icircn
cadrul unor granturi de cercetare care aveau ca ţinta studiul expresiei receptorilor PPARα
(212 227 228 231) Rezultatele obţinute continua seria lucrărilor care arata importanta
studiului mecanismelor etiopatogenice ale sindromului metabolic patologie care se afla icircntr-o
continuă creştere La pacienţii cu SM pe lacircngă diminuarea nivelului de expresie a receptorilor
PPARα icircn eozinofile ne aşteptam şi la evidenţierea unor modificări icircn expresia PPARα şi icircn
populaţiile de Ly Mo şi PMN Acest fapt poate fi explicat de utilizarea unor celule provenite
de la pacienţi fără afectare cardiovasculară fără diabet zaharat şi necesită continuarea
studiului pe culturi celulare icircn condiţii de stimulare cu agonişti PPARα deziderat care
impune continuarea investigării expresiei PPARα printr-un grant de cercetare
ORIGINALITATEA ȘI CONTRIBUȚIILE INOVATIVE ALE TEZEI DE
DOCTORAT PERSPECTIVE DE CERCETARE
Evaluarea nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn leucocitele circulante
aduce noi perspective icircn studiul obezităţii şi sindromului metabolic Importanta studiului
expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic derivă din prevalenta crescută a
sindromului metabolic icircn populaţia cercetată la care se adaugă riscul cardiovascular foarte
icircnalt al acestor pacienţi cu implicaţii majore icircn sănătatea publică Rolul receptorilor PPARα
icircn inflamaţie şi aterogeneza este binecunoscut dar studiul nostru este primul care a arătat că
nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα este semnificativ mai scăzut in populatiile
de eozinofile la pacienţii cu SM Această concluzie coroborata cu existenţa unei stracircnse
asocieri intre expresia receptorilor PPARα la nivelul Mo limfocitelor şi PMNlor creeaza
ipoteza existenţei unui mecanism de control diferit al expresiei PPARα la nivelul
eozinofilelor Această cercetare aduce informaţii importante referitoare la mecanismele
proinflamatorii care stau la baza insulinorezistenţei şi riscului cardiometabolic şi impune
continuarea studiului acestor receptori nucleari prin citometrie icircn flux metodă care poate fi
aplicată şi la scara mai largă dacă sunt asigurate resursele materiale necesare cercetării
Cercetarea prin citometrie icircn flux poate fi completată de studiul polimorfismului genei
PPARA şi astfel se pot identifica timpuriu indivizii cu potenţial risc cardiometabolic crescut
Studiul receptorilor PPARα a stabilit conexiuni cu factori proinflamatori şi aterogenetici iar
continuarea cercetării poate aduce şi elemente noi de diagnostic precoce icircn sindromul
metabolic contribuind la icircmbunătăţirea prognosticului acestor pacienţi
CONCLUZII FINALE
1 Aplicarea scorului de SM alături de implementarea algoritmului electronic de diagnostic
contribuie la o prelucrare rapidă eficientă și standardizată a informaţiilor la nivelul
medicinei primare
2 Prevalenţa SM calculată astfel icircn cadrul studiului este crescută (2732) icircn concordanţă
cu datele raportate
3 Controlul factorilor de risc cardiometabolici incluşi icircn SM se poate realiza prin
managementul stilului de viaţă (scăderea greutăţii corporale prin combaterea
sedentarismului şi adoptarea unei diete antiaterogene şi hipocalorice) şi administrarea
terapiei medicamentoase
4 Este necesară adoptarea unei politici de sănătate publică pentru prevenirea creşterii icircn
populaţie a prevalenţei obezităţii şi a diabetului zaharat
5 Noi metode de cercetare icircn domeniul SM axate pe diagnosticarea precoce şi cuantificarea
eficientă a acestuia duce la diminuarea incidenței evenimentelor cardiovasculare majore
6 Sindromul metabolic se caracterizează printr-un status inflamator cronic
7 Valorile Non-HDL-colesterolului şi a raportului de aterogenitate sunt semnificativ mai
mari la pacienţii cu SM
8 Dintre reactanţii de faza acută am observat că valoarea medie a fibrinogenului este mai
crescută icircn lotul cu SM
9 Valorile eozinofilelor sunt crescute icircn sindromul metabolic iar explorarea relaţiei dintre
eozinofile şi obezitate constituie una din direcţiile de studiu actuale ale sindromului
metabolic
10 Evaluarea markerilor inflamatori icircn contextul sindromului metabolic este utilă icircn
evaluarea complexă a a factorilor de risc cardiometabolici
11 Prin metoda citometriei icircn flux am demonstrat prezenta Receptorilor Activaţi de
Inductorii Proliferării Peroxizomilor ndash Alpha (PPARα) icircn toate populaţiile de leucocite
studiate (Mo limfocite PMN eozinofile) atacirct icircn lotul pacienţilor cu SM cacirct şi icircn lotul
martor
12 Utilizacircnd intensitatea medie de fluorescenţă a anticorpilor anti- PPARα am arătat că
nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile este semnificativ mai redus
la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali
13 Acest studiu este primul care a demonstrat existenţa unei scăderi statistic semnificative a
nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofilele pacienţilor cu SM
confirmacircnd cercetările recente care au evidenţiat rolul eozinofilelor şi al receptorilor
PPARα icircn obezitate reglarea inflamaţiei cronice şi aterogeneza
14 Contrar aşteptărilor noastre icircn populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările
efectuate icircn cele două loturi de studiu (cu şi fără sindom metabolic) nu am evidenţiat
diferenţe statistic seminificative icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα la
subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali
15 Icircn populaţiile de Mo limfocite şi polimorfonucleare am observat corelaţii puternice
semnificativ statistic icircntre expresia PPARα icircn aceste tipuri celulare sugeracircnd existenţa
unui mecanism unic de control al inflamaţiei cronice la nivelul acestor celule probabil
diferit de cel din eozinofile
16 La subiecţii cu SM expresia relativă a PPARα icircn Eo este invers asociată cu expresia
receptorului CD36 (receptor al particulelor de ox - LDL şi propus ca un marker precoce al
aterosclerozei) dovedind rolul antiinflamator al receptorilor PPARα la nivel endotelial
17 La pacienţii cu antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială nivelul de
expresie al receptorilor PPARα icircn eozinofile şi Mo este diminuat comparativ cu subiecţii
fără antecedente familiale de hipertensiune arterială Putem spune că studiul efectuat de
noi aduce informaţii importante legate de geneză aterosclerozei şi hipertensiunii arteriale
18 Prin studiul asocierilor dintre receptorii PPARα şi componentele clinice ale sindromului
metabolic am arătat rolul acestor receptori icircn determinismul obezităţii de tip central
nivelul expresiei relative a receptorilor PPARα fiind invers proporţional cu circumferinţa
abdominală
19 Icircn acelaşi timp nivelul de expresie a PPARα icircn sindromul metabolic este asociat pozitiv
cu concentraţia serică a HDL-colesterolului şi invers asociat cu nivelul trigliceridelor
serice dovedind rolul acestor receptori icircn diminuarea procesului inflamator cronic de la
nivel vascular
20 La pacienţii cu SM scăderea expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofile este corelată cu
creşterea unor markeri ai sindromului inflamator cronic cardiometabolic (acid uric
fibrinogen) ilustracircnd importanta receptorilor icircn reglarea status-ului inflamator cronic din
sindromul metabolic
21 Utilizarea metodei flowcitometrice pentru studiul expresiei relative a receptorilor PPARα
icircn leucocite a adus informaţii importante cu privire la mecanismele moleculare de control
implicate icircn patogenia bolilor cardiometabolice icircn concordanţă cu cercetările care descriu
expresia PPAR icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale bronşice
keratinocite)
BIBLIOGRAFIE SELECTIVA
1 Kahn R Metabolic syndrome- what is the clinical usefulness Lancet 2008371(9628)1892-3
2 Reaven GM The metabolic syndrome is this diagnosis necessary Am J Clin Nutr 2006 83(6)1237-7
3 Grundy SM Pre-Diabetes Metabolic Syndrome and Cardiovascular Risk J Am Coll Cardiol 201259(7)
635-43
4 International Diabetes Federation IDF Diabetes Atlas 6th edn International Diabetes Federation Belgium
Brussels 20131-155
5 World Health Organization Global Status Report on Noncommunicable Diseases 2010 World Health
Organization Geneva Switzerland 20111-176
6 Coman AE Petrovanu R Sindromul metabolic in practica de ambulator Editura Pim Iaşi 2009 1-103
7 Grundy SM Becker D Clark LT et alThird Report of the National Cholesterol Education Program (NCEP)
Expert Panel on Detection Evaluation and Treatment of High Blood Cholesterol in Adults (Adult
Treatment Panel III) Final Report Circulation 2002106(25)3143-90
8 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J Metabolic syndrome- a new worldwide definition A Consensus Statement
from the International Diabetes Federation Diabet Med 2006 23(5)469-80
9 KG Alberti KG Eckel RH Grundy SM etal International Diabetes Federation task force on epidemiology
and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart Association World Heart
Federation International Atherosclerosis Society International Association for the study of obesity
Harmonizing the metabolic syndrome a joint interim statement of the International Diabetes Federation task
force on epidemiology and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart
Association World Heart Federation International Atherosclerosis society and International Association
for the study of obesity Circulation 2009120(16)1640-5
10 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J IDF Epidemiology Task Force The metabolic syndrome new
worldwide definition Lancet 2005 366 1059 - 62
11 Oleszczyk M Svab I Seifert B et al Primary healthcare in the developing part of Europe changes and
development in the former Eastern Bloc countries that joined the European Union following 2004 Med Sci
Monit 2009(15)78ndash84
12 Jung U J Choi M S Obesity and Its Metabolic Complications The Role of Adipokines and the
Relationship between Obesity Inflammation Insulin Resistance Dyslipidemia and Nonalcoholic Fatty
Liver Disease Int J Mol Sci 2014rsquo15(4) 6184-223
13 Vanden Heuvel JP Peters JM Peroxisome Proliferators In Ramos K (ed) Cellular and Molecular
Toxicology (Second Edition) Volume 2 New York Elsevier Science Inc 2010 145 - 67
14 Yessoufou A Wahli W Multifaceted roles of peroxisome proliferator-activated receptors (PPARs) at the
cellular and whole organism levels Swiss Med Wkl 2010140w13071 doi104414smw201013071
15 Azhar S Peroxisome proliferator-activated receptors metabolic syndrome and cardiovascular disease
Future Cardiology 20106(5)657-91
16 Andries G Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity
Diabetes and Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(Suppl)24-32
17 Zandbergen F Plutzky J PPARalpha in atherosclerosis and inflammation Biochim Biophys Acta
20071771(8)972-82
18 Straus DS Glass CK Anti-inflammatory actions of PPAR ligands new insights on cellular and molecular
mechanisms Trends Immunol 200728(12)551-8
19 Zlei M Zugun- Eloae F Carasevici E Citometrie icircn flux - Bază şi clinică Icircn Hinescu ME (ed) Citometrie icircn
flux - principii şi aplicaţii clinice Bucureşti Editura Viaţa Medicală Romacircnească 20111-128
20 Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity Diabetes and
Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(9)24-32
21 Woerly G Honda K Loyens M et al Peroxisome proliferator-activated receptors alpha and gamma down-
regulate allergic inflammation and eosinophil activation J Exp Med 2003198(3)411-21
22 Salle-Saumont D Brenuchon C Kanda A et al Peroxisome proliferator-activated receptor alpha regulates
skin inflammation and humoral response in atopic dermatitis J Clin Allergy Immunology 2008 21(4)962-8
23 Schote A Turner J Schiltz J et al Nuclear receptors in human immune cells expression and correlations
Mol Immunolog 200744(6)1436-45
24 DAmore S Vacca M Graziano G et al Nuclear receptors expression chart icircn peripheral blood
mononuclear cells identifies patients with Metabolic Syndrome Biochim Biophys Acta
20131832(12)2289-301
25 Uthurralt J Gordish-Dressman H Bradbury M T et al PPARalpha L162V underlies variation in serum
triglycerides and subcutaneous fat volume in young males BMC Med Genet 2007855
26 Hiukka A Leinonen ES Jauhiainen M et al Long-term effects of fenofibrate on VLDL and HDL
subspecies icircn participants with type 2 diabetes mellitus Diabetologia 2007 50(10)2067-75
27 Robins SJ Rubins HB Faas FH et alInsulin resistance and cardiovascular events with low HDL
cholesterol The Veterans Affairs HDL Intervention Trial (VA-HIT) Diabetes Care 2003 26(5)1513-7
28 Devaraj S Siegel D Jialal I Statin Therapy in Metabolic Syndrome and Hypertension Post-JUPITER
What is the Value of CRP Curr Atheroscler Rep 2011 13(1) 31ndash42
29 Imperatore G Riccardi G Iovino C et al Plasma Fibrinogen A New Factor of the Metabolic Syndrome A
population-based study Diabetes Care 19982 1(4)649-54
30 Krysiak R Gdula-Dymek A Bachowski R Okopien B Pleiotropic effects of atorvastatin and fenofibrate
in metabolic syndrome and different types of pre-diabete Diabetes Care 201033(10)2266-70
31 Hermans MP Impact of Fenofibrate on Type 2 Diabetes Patients with Features of the Metabolic Syndrome
Subgroup Analysis From FIELD Curr Cardiol Rev 20106(2)112-8
32 Silverstein R Inflammation atherosclerosis and arterial thrombosis Role of the scavenger receptor CD36
Cleveland Clinic Journal of Medicine 200976(Suppl 2)S27-S30
33 Hăncu N Obezitatea In Vereşiu IA (ed) Diabetul zaharat nutritia si bolile metabolice Volume 2 Editura
Echinox Cluj- Napoca 2010 1-15
Lista lucrări publicate
1 Elena Popa Maria Maidaniuc Agnes Bacusca Alamir Diaa Rodica Petrovanu Adorata Elena
Coman Disfuncţia endotelială ndash de la mecanisme moleculare la cuantifi care şi tratament icircn practica
medicală Practica Medicală 20149(3) 109-14
2 Elena Popa Agnes Bacusca Alamir Diaa Maria Maidaniuc Rodica Petrovanu Adorata Elena Coman
The function of insulin receptor (IRF) in evolution of obesity correlation with adipocytes diameters
Archives of the Balkan Medical Union 201449(3) 275-9
3 Elena Popa Florin Zugun-Eloae Mihaela Zlei Daniela Jitaru Oana Maria Pintilie Adorata Elena
Coman Maria Traian Didona Anca Ungureanu Eugen Carasevici - acceptata pentru numarul 42014
Flow cytometry analysis of PPAR-alpha receptors in metabolic syndrome) Revista Romană de
Medicină de Laborator(RRLM-D-14-00034R1- adeverinţa ataşată
de 1497 (95CI 1309 ndash 1704) icircn populaţia studiată Au fost calculate prevalenţele pe
sexe şi au fost găsite valorile de 1343 (95CI 010 ndash 164) la bărbaţi respectiv 1632
(95 CI 1366 ndash 1934) la femei raportul dintre acestea fiind de 082 (95CI 062 ndash 107)
Pentru fiecare asociere dintre componentele SM diagnosticat conform criteriilor
Harmonised I am calculat prevalenţele icircn cadrul SM(tabel XVI)
Tabel XVI Prevalenţa asocierilor dintre componentele SM Număr
pacienţi
Ponderea icircn cadrul
pacienţilor cu SM
(95 CI)
Prevalenţa icircn
populaţia studiată
(95 CI)
SM cu trei componente (SM3)
241 6195 (5438ndash7029) 1575 (1383-
1787)
Obezitate centrală + hipertensiune arterială +
hipertrigliceridemie
45 1154 (844ndash1548) 294 (214-393)
Obezitate centrală + hipertensiune arterială + hipo-
HDLcolesterolemie
38 979 (691ndash1340) 248 (175-340)
Obezitate centrală + hipertrigliceridemie +
hipoHDL-colesterolemie
34
874 (605ndash1221) 222 (153-310)
Obezitate centrală + modificări ale metabolismului
glucidic + hipertensiune arterială
31 796 (541ndash1131) 202 (137-287)
Hipertensiune arterială + hiper-trigliceridemie +
hipoHDL- colesterolemie
26 668 (436 ndash979) 169 (111-249)
Modificări ale metabolismului glucidic +
hipertensiune arterială + hiper-trigliceridemie
21 539 (334-825) 137 (085-209)
Obezitate centrală + modificări ale metabolismului
glucidic + hipertrigliceridemie
15 385 (215-636) 098 (054-116)
Modificări ale metabolismului glucidic
hipertrigliceridemie + hipoHDL-colesterolemie
12 308 (159-538) 078 (040-137)
Modificări ale metabolismului glucidic +
hipertensiune arterială + hipoHDLcolesterolemie
10 257 (123ndash472) 065 (031-120)
Obezitate centrală + modificări ale metabolismului
glucidic + hipo-HDL-col
9 231 (105ndash439) 058 (026-111)
SM cu patru componente (SM4) 104 2674 (2184-239) 679 (555-823)
Obezitate centrală + modificări ale metabolismului
glucidic + hipertensiune arterială + hipoHDL-
colesterolemie
32 822 (562-1116) 209 (143-
295)
Obezitate centrală + hipertensiune arterială +
hipertrigliceridemie + hipoHDL-col
25 642 (415- 948) 163 (105-241)
Obezitate centrală + modificări ale metabolismului
glucidic + hipertri-gliceridemie + hipoHDL-
colesterolemie
12 308 (159-538) 078 (040-137)
Modificări ale metabolismului glucidic +
hipertensiune arterială + hipertri-gliceridemie +
hipoHDL-colesterolemie
6 154 (056- 335) 039 (014-085)
SM cu cinci componente (SM5) 44 1131 (822-1518) 287 (209-386)
Total (SM3 + SM4 + SM5) 389 100 2542(2296-
2808)
Analizacircnd componentele SM la cei 389 pacienţi diagnosticaţi cu SM conform criteriilor
Harmonised I am constatat că obezitatea centrală este cea mai bine reprezentată icircn SM dintre
aceste componente (8072 95CI 7644 - 8452) urmată de HTA (7892 95CI 7453
- 8287) hiperTG (6915 95 CI 6430-7371) hipo-HDL-col (6375 95 CI 5876-
6854) şi hiperglicemie (5681 95 CI5173- 6179)
Standardizarea prevalenţelor funcţie de vacircrstă şi sex Analiza statistică a relevat faptul
că prevalenţa SM creşte cu icircnaintarea icircn vacircrstă Dacă pentru vacircrsta cuprinsă icircntre 35-54 ani
prevalenţa la bărbaţi este semnificativ mai mare comparativ cu femeile (raport calculat B F -
183 P=0003) pentru celelalte grupe de vacircrsta nu s-au observat diferenţe semnificative icircntre
sexul feminin şi cel masculin Am observat că după instalarea menopauzei la femei
prevalenţa SM (corespunzătoare Harmonised I) la femei depăşeşte 50 iar la bărbaţi atinge
42 Utilizacircnd European Standard Population (175) am efectuat standardizarea funcţie de
vacircrstă şi sex a prevalenţelor bdquocruderdquo (brute) obţinute icircn populaţia studiată şi am calculat o
prevalenţă standardizată a SM de 2732 (95 CI 2460-3003) La sexul masculin
prevalenţa standardizată a SM a fost de 2760 (95 CI 2362 - 3157) iar la sexul feminin
am obţinut valoarea de 2854 (95 CI 2462 - 3245)
Discuţii
Studiul desfăşurat de noi a investigat prezenţa SM icircn populaţia unui Cabinet de Medicină
de Familie Icircn Europa prevalenţa SM este de aproximativ 25-30 Statele Unite Ale Americii
au raportat o prevalenţă a sindromului metabolic de 22 icircn populaţia cu vacircrsta peste 20 ani
pe cacircnd la vacircrstă mai mare de 60 ani s-a observat o prevalenţă de 44 (1419) Icircn studiul
efectuat am observat o prevalenţă standardizată de 2732 (95 CI 2460-3003) care este
icircn concordanţă cu prevalenţele raportate icircn Europa precum şi o creştere a ponderii SM icircn
populaţie icircn raport cu vacircrsta Am preferat utilizarea definiţiei Harmonised I pentru SM
deoarece cuprinde criterii adaptate pentru o abordare unitară a SM mărind astfel numărul
pacienţilor diagnosticaţi şi care vor urma tratament conform Ghidurilor de Practică Medicală
Limitările acestui studiu sunt legate de faptul că este concentrat doar pe populaţia asigurată şi
neasigurată aflată pe lista unui medic de familie din mediul urban Se pot efectua studii la
nivelul Cabinetelor Medicale de Medicină de Familie dar trebuie să se aplice pe un lot
reprezentativ urbanrural care să reprezinte populația acelei regiuni Utilizarea structurilor
populaționale atașate cabinetului de MF este utilă atacirct pentru cele clinice cacirct și pentru cele
epidemiologice deoarece surprinde populația studiată icircn mediul de viață cotidian Prevalenţa
mare a SM icircn populaţia studiată necesită aplicarea unei politici eficiente de sănătate publică
deoarece riscul producerii evenimentelor cardiovasculare majore poate fi redus semnificativ
printr-un control adecvat al componentelor SM (obezitate dislipidemii hipertensiune
arterială şi hiperglicemie
Studiul sindromului inflamator cronic icircn cadrul sindromului metabolic
Obiectivele studiului
- studierea markerilor inflamaţiei cronice şi aterogenezei la subiecţii cu şi fără SM
- evaluarea importanţei markerilor studiaţi ai inflamaţiei cronice icircn diagnosticul de
ambulator al sindromului metabolic
Material şi metodă
Icircn cercetarea inflamaţiei cronice din SM au fost incluşi 1530 subiecţi de ambele sexe cu
vacircrsta cuprinsă icircntre 18-91 ani icircnscrişi pe lista CMI Popa Elena Studiul s-a desfăşurat icircn
perioada 01012013ndash 31122013 Populaţia ţintă a fost identică cu cea din studiul
epidemiologic şi s-a desfăşurat concomitent cu studiul prevalentei SM Subiecţii au fost
icircmpărţiţi icircn două loturi lotul cu SM (Lot SM) şi lotul de control (fără SM)
Lot SM a) criterii de includerevacircrsta peste 18 ani recrutarea pe baza semnării
Consimţămacircntului liber informat SM diagnosticat pe baza criteriilor Harmonised I (14) b)
criterii de excluderevacircrstă sub 18 anirefuzul semnării Consimţămacircntului liber informat
femei icircn perioada de graviditate sau de lactaţie
Lot Control (fără SM) a) criterii de includerevacircrsta peste 18 anirecrutarea pe baza
semnării Consimţămacircntului liber informat absenţa sindromului metabolic b) criterii de
excluderevacircrstă sub 18 ani refuzul semnării Consimţămacircntului liber informatfemei icircn
perioada de graviditate sau de lactaţie
Rezultate
Lotul cu SM (Lot SM) a fost format din cei 389 pacienţi diagnosticaţi cu SM conform
criteriilor Harmonised I Lotul SM a fost alcătuit din 185 bărbaţi şi 204 femei raportul
bărbaţifemei fiind de 090 (95 CI073-112) Lotul de control (fără SM) a fost alcătuit
din cei 1141 participanţi care nu au icircntrunit criteriile de diagnostic ale sindromului metabolic
Din cei 1141 de subiecţi 530 au fost de sex masculin iar 611 de sex feminin raportul
bărbaţifemei fiind 087 (95 CI 077-097) Vacircrsta subiecţilor a fost semnificativ mai mare
icircn lotul pacienţilor cu SM (5976plusmn1322 ani) comparativ cu lotul martor (4333plusmn 1748 ani) (t-
Test Plt00001) Aşa cum ne-am aşteptat valorile medii ale componentelor clinice ale SM
(circumferinţa abdominală tensiunea arterială sistolică şi diastolică) au fost mai mari icircn lotul
pacienţilor cu SM (t-Test Plt0001 pentru fiecare dintre componente) Studiind parametrii
biochimici incluşi icircn diagnosticul SM valorile medii ale glicemiei şi TG au fost semnificativ
mai crescute icircn lotul SM (t-Test Plt00001 pentru ambele constante) Icircn acelaşi timp
valoarea medie determinată a HDL-col a fost semnificativ mai mare la subiecţii din lotul
martor ( t-Test Plt00001) SM se caracterizează printr-o dislipidemie aterogenă
caracterizată de creşterea TG scăderea HDL-col concomitent cu creşterea LDL-col creşterea
Non-HDL-col şi a raportului de aterogenitate (Col totalHDL-col) (185) Comparacircnd cele
două loturi am observat că valoarea medie a LDL-colesterolului determinată icircn lotul
pacienţilor cu SM a fost semnificativ mai mare faţă de subiecţii din lotul martor (t-Test P =
00002) Măsurarea Non-HDL-colesterolului a arătat prezenţa unei diferenţe semnificative
icircntre cele două loturi (figura 420 B) Astfel icircn concordanţă cu prezenţa dislipidemiei
aterogene valoarea medie a Non-HDL-col a fost semnificativ mai mare (t-Test Plt 00001) icircn
lotul cu SM comparativ cu lotul de control Icircn contextul inflamației cronice şi aterogenezei
din sindromul metabolic am evaluat sensibilitatea şi specificitatea Non-HDL-colesterolului
ca test diagnostic al SM Valoarea Non-HDL-colesterolului care prezice cu cea mai mare
acurateţe prezenţa SM a fost de 151 mgdl (punctul de ldquocut-offrdquo) pentru care am calculat o
sensibilitate de 64 27 şi o specificitate de 5872 Calculul ariei AUC a furnizat valoarea
de 0605 şi deci determinarea concentraţiei serice a parametrului Non-HDL-colesterolului are
valoarea unui marker cu acurateţe redusă Am studiat valorile raportului Col totalHDL-col icircn
cele două loturi şi am constatat că la pacienţii cu SM valoarea media a raportului de
aterogenitate este semnificativ mai mare faţă de valoarea raportului determinată icircn lotul
martor (t-Test Plt 00001) Pentru raportul de aterogenitate studiat analiza curbei ROC a
arătat că valorile mai mari decacirct punctul de ldquocut-offrdquo de 431 prezic prezenţa SM cu cea mai
mare sensibilitate (6381 ) şi specificitate (6582)Valoarea AUC pentru indicele de
aterogenitate a fost de 0667 şi icircn studiul SM acest indice poate fi considerat un marker cu
acurateţe redusă Valoarea medie determinată a acidului uric la subiecţii fără SM a fost
semnificativ mai mică decacirct icircn lotul SM (t-Test Plt 00001) Curba ROC a arătat că valorile
acidului mai mari de 43 mgdl prezic diagnosticul de SM cu cea mai mare sensibilitate
(8107) şi specificitate (5328) Pentru acidul uric AUC a avut valoarea de 0655 şi
icircncadrează determinarea acidului uric seric icircn racircndul testelor cu acurateţe redusă (187)
Comparacircnd populaţiile de leucocite (tabel XXI) valoarea medie determinată a
numărului de Eo a fost semnificativ mai mare icircn lotul cu SM comparativ cu lotul martor (t-
Test Plt0001) Analizacircnd curba ROC trasată pentru valorile numărului de Eo am observat
că valorile ldquocut-offrdquo mai mari de 200 Eomm3
pot prezice prezenta SM cu cea mai mare
specificitate (7705) şi sensibilitate (3978) Pentru diagnosticul SM calculul ariei AUC a
arătat faptul că determinarea numărului de Eo are valoarea unui test diagnostic cu acurateţe
redusă (AUC = 0 589) Comparacircnd valorile medii ale fibrinogenului am calculat o diferenţă
statistic semnificativă icircntre cele două loturi valoarea medie a fibrinogenului fiind mai mare icircn
lotul SM ((t-Test P lt 00001) Cu ajutorul curbei ROC am observat că valorile fibrinogenului
mai mari de 306 mgdl prezic sindromul metabolic cu o sensibilitate de 7511 şi specificitate
de 6056 Fibrinogenul a fost icircncadrat icircn categoria markerilor inflamatori cu acurateţe
redusă AUC avacircnd valoarea de 0690 Icircn loturile de studiu am calculat AUC corespunzătoare
criteriilor de diagnostic ale SM Am observat că icircn cazul scorului Harmonised I
sensibilitatea şi specificitatea sunt de 100 iar AUC este egală cu 1000 Pentru cele cinci
criterii de diagnostic AUC a avut valori icircntre 0636 (pentru variabila HDL-col) şi 0804
(pentru variabila CA) (figura 431)
AUC ES 95 CI
Scor SM Harmonised I 1000 00000 0997 - 1000
CA (cm) 0804 00133 0781 - 0825
TAD (mmHg) 0666 00169 0639 - 0692
TAS (mmHg) 0757 00148 0732 - 0780
Glicemie (mgdl) 0742 00160 0717 - 0766
Trigliceride (mgdl) 0756 00175 0732 - 0780
HDL- colesterol 0636 00183 0609 - 0662
Figura 431 Analiza AUC criterii de diagnostic ale SM
Studiind figura 432 se observă că valoarea AUC pentru markerii studiaţi este cuprinsă
icircntre 0589 (icircn cazul variabilei Eo) şi 0690 (icircn cazul fibrinogenului) Icircn contextul SM
acurateţea acestor markeri ai inflamaţiei cronice şi disfuncţiei endoteliale poate fi considerată
redusă deoarece AUClt07 pentru toţi markerii investigaţi (figura 431) Totuşi valorile ariilor
parametrilor reprezentaţi icircn figura 431 sunt apropiate de valorile AUC ale variabilelor TAD
şi HDL-col (figura 432) şi deci pot fi utilizaţi pentru completarea diagnosticului de SM
AUC ES 95 CI
Non-HDL-colesterol 0605 00171 0580 - 0630
Col totalHDL-col 0607 00163 0642 - 0691
Acid uric 0655 00161 0630 - 0679
Fibrinogen 0690 00206 0658 - 0720
Eozinofile 0589 00176 0564 - 0615
Figura 432 AUC markeri ai SM inflamaţiei cronice şi aterogenezei
Discuţii
Status-ul proinflamator din SM asociat cu insulinorezistenţa şi disfuncţia endotelială
constituie o verigă de legătură dintre inflamaţie şi procesele metabolice complexe icircnsoţindu-
se de deteriorarea funcţiilor vasculare şi creşterea riscului de evenimente cardiovasculare
majore (2858) Studiul efectuat a arătat o diferenţă icircntre vacircrstele subiecţilor din cele două
loturi vacircrsta pacienţilor cu SM fiind semnificativ mai mare (Plt0001) comparativ cu subiecţii
normali confirmacircnd faptul menţionat că vacircrsta reprezintă unul din stimulii care agravează
inflamaţia cronică Am arătat că valorile fibrinogenului sunt mai mari icircn SM comparativ cu
Scor Harmonised I
0 20 40 60 80 100
0
20
40
60
80
100
100-Specificitate
Sen
sib
ilit
ate
Criterii diagnostic SM
0 20 40 60 80 100
0
20
40
60
80
100
100-Specificitate
Sens
ibili
tate
CA
TAD
TAS
Glicemie
Trigliceride
HDL-C
0 20 40 60 80 100
0
20
40
60
80
100
100-Specificitate
Sensi
bilita
te
Non-HDL-C
Col T HDL-C
Acid uric
Fibrinogen
Eozinofile
lotul martor atacirct la bărbaţi cacirct şi la femei icircn concordanţă cu studiile anterioare Evaluarea
fibrinogenului este importantă nu numai icircn SM pentru definirea contextului proinflamator şi
protrombotic ci şi icircn predicţia cardiovasculară la subiecţii normali Studiind populaţiile
leucocitare am obţinut diferenţe semnificative icircn cazul Eo valoarea medie a acestora fiind
semnificativ mai mare icircn lotul cu SM comparativ cu lotul martor (P lt 0001 figura 425B)
Implicarea Eo icircn SM s-a conturat icircn ultimul deceniu aceste celule fiind implicate icircn recrutarea
macrofagelor din ţesutul adipos Experimental s-a constatat că o creştere a Eo apărută ca
urmare a infectării cu helminţi sau stimulare cu IL-5 este urmată de icircmbunătăţirea toleranţei la
glucoză (199) Controlul pe care icircl exercită Eo asupra activării macrofagelor ar putea fi cheia
intervenţiei asupra obezităţii icircn viitorul apropiat(165199) Hiperuricemia asociata frecvent cu
SM este cunoscut ca un factor independent de risc cardiovascular (192 202) In concordanţă
cu aceasta afirmaţie in studiul nostru am constatat ca nivelul seric al acidului uric a fost mai
crescut in lotul cu SM diferenţa semnificativă din punct de vedere statistic (P lt 00001)
Dislipidemia aterogenă din sindromul metabolic şi diabetul zaharat se caracterizează prin
creşterea trigliceridelor şi a Non-HDL-col scăderea HDL-col creşterea numărului de
particule LDL modificate (185190) La pacienţii cu SM am descris un profil aterogenetic
cu risc crescut de evenimente cardiovasculare majore
STUDIUL RECEPTORILOR ACTIVAŢI DE INDUCTORII PROLIFERĂRII
PEROXIZOMILOR-ALPHA IcircN LEUCOCITELE CIRCULANTE
Ipoteza de lucru
Studii experimentale efectuate au arătat că rolul PPARα icircn ateroscleroză derivă din
implicarea acestor receptori icircn limitarea inflamaţiei Plecacircnd de la acest fundament ne-am
propus evidenţierea receptorilor nucleari activaţi de inductorii proliferării peroxizomilor-
alpha (PPARα) prin citometrie de flux icircn leucocitele din sacircngele periferic alături de
evaluarea acestei metode icircn cuantificarea expresiei relative a PPARα ca test diagnostic
precoce al modificărilor metabolice SM Studiul expresiei relative a receptorilor PPARα a
plecat de la premisa că dacă SM se caracterizează printr-un status inflamator cronic nivelul
de expresie a PPARα icircn leucocitele circulante este mai scăzut la pacienţii cu SM comparativ
cu subiecţii normali Referitor la studiul receptorului CD36 am plecat de la presupunerea că
nivelul de expresie al acestui receptor icircn SM este crescut dat fiind importanţa acestui receptor
icircn inflamaţia aterosclerotică Avacircnd icircn vedere efectele receptorilor amintiţi icircn
insulinorezistenţă şi aterogeneză am considerat necesară evaluarea prezenţei receptorului
nuclear PPARα icircn paralel cu studiul receptorului bdquoscavengerrdquo CD-36 prin metoda citometriei
icircn flux Astfel icircn studiul efectuat mi-am propus şi investigarea existenţei unei legături icircntre
nivelul de expresie al receptorilor PPARα şi cel al receptorului CD-36 De asemenea ne-am
icircndreptat atenţia spre stabilirea unor asocieri icircntre componentele clinice şi biochimice ale
sindromului metabolic şi nivelul intensităţilor de fluorescenţă ale PPARα şi CD-36 ca măsură
a expresiei relative a acestor receptori
Material și metodă
Studiul receptorilor PPARα icircn contextul sindromului metabolic s-a desfăşurat icircn
perioada 1012014 -28022014 pe baza metodologiei studiilor de tip caz-martor Am urmărit
identificarea unor diferenţe icircntre expresia receptorilor PPARα la pacienţii cu SM comparativ
cu subiecţii sănătoşi diferenţe care ar putea fi utile icircn diagnosticul precoce al SMRecrutarea
pacienţilor s-a efectuat din pacienţii prezentaţi pentru consultaţie la Cabinetul Individual
ldquoCMI Dr Popa Elenardquo situat icircn strada Ion Creanga din Iaşi Pentru studiul receptorilor
PPARα icircn sindromul metabolic au fost selecţionaţi un număr de 57 de subiecţi 26 de subiecţi
cu SM (constituind lotul SM) şi 31 subiecţi fără SM constituind lotul de control (Lot Non-
SM) Pentru studiul SM pacienţii au fost recrutaţi din masa de populaţie arondată cabinetului
de MF fără istoric de SM diabet zaharat boală cardio-vasculară aflați la primul diagnostic
de SM evaluarea completă a acestora fiind urmată de includerea icircn programul de
management cardiovascular şi metabolic conform Ghidurilor Terapeutice aflate icircn vigoare
Lot SM a) criterii de includerevacircrsta peste 18 ani recrutarea pe baza semnării
Consimţămacircntului liber informatSM nou-diagnosticat pe baza prezenţei a minim trei criterii
de diagnostic pentru SM conform Harmonised I b) criterii de excluderevacircrstă sub 18 ani
refuzul semnării Consimţămacircntului liber informat femei icircn perioada de graviditate sau de
lactaţie SM anterior diagnosticat istoric de diabet zaharat boală cardiovasculară constituită
tratament cu agonişti PPARα (ie fibraţi etc)
Lot martor (Non-SM) a) criterii de includerevacircrsta peste 18 ani recrutarea pe baza
semnării Consimţămacircntului liber informat absenţa diagnosticului de SM b) criterii de
excludere vacircrstă sub 18 ani refuzul semnării Consimţămacircntului liber informat femei icircn
perioada de graviditate sau de lactaţie
Studiul receptorilor PPARα a inclus două subetape
A Studiul componentelor sindromului metabolic conform criteriilor Harmonised I
Evaluarea clinică a participanţilor s-a desfăşurat icircn cadrul Cabinetului de Medicină de
Familie iar determinările hematologice şi biochimice s-au efectuat icircn Laboratorul
Ambulatorului Clinic de Specialitate al Spitalului Clinic de Urgenţă bdquoSf Spiridonrdquo Iaşi
B Evaluarea icircn citometrie de flux a nivelului relativ de expresie a PPARα şi CD36
Studiul receptorilor PPARα s-a desfăşurat icircn Laboratorul de Biologie Moleculară al
Institutului Regional de Oncologie Iaşi prin metoda citometriei icircn flux (19) Nivelul relativ de
expresie al receptorilor nucleari PPARα a fost determinat icircn diferite tipuri de leucocite
circulante polimorfonucleare (PMN) limfocite (Ly) Mo(Mo) şi eozinofile(Eo) Am utilizat o
metodă de citometrie icircn flux optimizată ldquoin houserdquo elaborată icircn cadrul Laboratorului de
Biologie Moleculară al IRO Iaşi Icircn cursul procesului de optimizare am testat mai multe
concentraţii ale anticorpului anti-PPARα 1100 1500 11500 14500 iar icircn urma
determinărilor efectuate şi a analizei statistice concentraţia 1500 a fost considerată optimă
pentru desfăşurarea studiului (tabel XXIII figura 51)
Tabel XXIII Optimizarea concentraţiilor Ac anti-PPARα Diferenţa
mediilor
valorilor
medii
PMN
Diferenţa
mediilor
mediane-
lor
PMN
Diferenţa
mediilor
valorilor
medii
Ly
Diferenţa
mediilor
mediane-
lor
Ly
Diferenţa
mediilor
valorilor
medii
Mo
Diferenţa
mediilor
mediane-
lor
Mo
Diferenţă 0 1300 1600 100 100 700 750
normal - 1100 650 1050 1050 1350 450 900
patologic 1500 2850 2750 3800 3600 2850 2400
11500 -1050 800 3500 3300 2250 1800
14500 2200 2150 1300 1100 2950 2850
AOptimizare
BRepetabilitate
Figura 51 Optimizarea concentraţiei anticorpului anti-PPARα
Icircn concordanţă cu literatura de specialitate icircn cercetarea efectuată intensitatea medie
de fluorescenţă (MFI) a fost utilizată ca măsură pentru evaluarea expresiei celulare a
receptorilor PPARα (212) Un exemplu de analiză a probelor este reprezentat icircn figura 52
Figura 52 Exemplu de analiză flowcitometrică pentru receptorul nuclear PPARα Graficul din stacircnga reprezintă distribuţia leucocitelor iar cel din dreapta ilustrează distribuţia
intensităţii de fluorescenţă pentru populaţiile de celule selectate
Intensitatea Medie a Fluorescenţei (MFI) a CD36 ca o măsură a nivelului relativ de
expresie a acestor receptori la nivelul membranei Mo a fost detectată printr-o metodă
convenţională pentru marcare de suprafaţă şi evaluare pe bază de citometrie icircn flux folosind
aceleaşi probe de sacircnge cu EDTA cu focalizare pe Mo şi utilizacircnd CD14 ca marker specific
pentru Mo (figura 53)
Figura 53Analiza
flowcitometrică
pentru marcajul
CD14 - CD36
Rezultate
Icircn cele două loturi au fost incluşi icircn studiu un număr de 57 de participanţi care au fost
investigaţi din punct clinic şi paraclinic Vacircrsta subiecţilor incluşi icircn studiu a fost cuprinsă
icircntre 18 şi 79 ani iar vacircrsta medie calculată a avut valoarea de 4805 plusmn 1587 ani Pentru sexul
masculin vacircrsta medie este de 4925plusmn1617 ani iar pentru sexul feminin 4689 plusmn1 5ani
diferenţa obţinută icircntre vacircrstele pacienţilor fiind statistic nesemnificativă (P = 085)
Analizacircnd vacircrstele subiecţilor din cele două loturi am observat că vacircrsta medie a pacienţilor
cu SM (5476 plusmn 1183 ani) a fost semnificativ mai mare (t-test P = 0003) decacirct icircn lotul
martor (4258 plusmn 169 ani) Pentru diagnosticul sindromului metabolic am calculat scorul de
SM bazacircndu-ne pe criteriile Harmonised I Conform criteriilor diagnostice din cei 57 de
subiecţi investigaţi un număr de 26 participanţi (46) au fost incluşi icircn lotul cu SM (Lot
SM) iar 31 de subiecţi(54) nu au prezentat acest sindrom constituind lotul martor (Lot
Non-SM) Din punct de vedere al repartiţiei pe sexe nu au existat diferenţe statistic
semnificative raportul bărbaţifemei fiind de 0961 Din totalul celor 28 de bărbaţi incluşi icircn
studiu 4285 (12 bărbaţi) au icircntrunit cel puţin trei criterii diagnostice pentru SM fiind
incluşi icircn lotul SM Icircn acelaşi timp 14 femei reprezentacircnd 4827 din subiecţii de sex
feminin au icircntrunit condiţiile pentru includerea icircn lotul pacienţilor cu SM Valoarea medie
determinată pentru scorul de SM a arătat prezenţa unor valori semnificativ statistic mai mari
din punct (t-test P lt 00001) icircn lotul SM (769plusmn176) comparativ cu lotul martor (174 plusmn
184) Am studiat comparativ media valorilor măsurate ale criteriilor componentelor SM
Analiza statistică a arătat valori semnificativ statistic mai mari pentru CA TG glicemie TAS
şi TAD (plt0001) icircn lotul SM comparativ cu lotul normal Concomitent calculul statistica
evidenţiat o scăderea semnificativă a HDL-colesterolului icircn lotul cu SM comparativ cu
subiecţii din lotul martor (Non-SM) Aplicacircnd testul z am comparat ponderea pacienţilor
diagnosticaţi cu HTA dislipidemie şi tulburări ale metabolismului glucidic icircn lotul SM versus
lot Non-SM şi am constatat prezenţa acestor afecţiuni icircntr-un procent mai mare semnificativ
statistic icircn lotul SM ((plt0001)
Utilizacircnd testul t Student am calculat diferenţele statistice şi icircntre alți parametri
studiaţi care sunt factori de risc cardio-vascular dar care nu sunt componente ale SM Icircn lotul
cu SM valorile acidului uric fibrinogenului Col total Non-HDL-col şi LDL-col au fost
semnificativ mai mari comparativ cu lotul martor (tabel XXVI) Analizacircnd valorile medii ale
populaţiilor de leucocite am identificat doar pentru populaţia de Eo diferenţe statistice icircntre
cele două loturi numărul Eo icircn lotul SM fiind semnificativ mai mare decacirct icircn lotul martorTot
pentru caracterizarea celor două loturi am analizat prezenţa antecedentelor
heredocolaterale (AHC) de diabet zaharat boala cardiovasculară şi dislipidemie pentru toţi
subiecţii investigaţi Astfel existenţa AHC de HTA a fost declarată de 2580 din subiecţii
incluşi icircn lotul martor respectiv de 5384 din numărul pacienţilor cu SM Antecedentele
heredocolaterale de dislipidemie au fost prezente la 3461 din pacienţii cu SM icircn timp ce icircn
lotul martor anamneza a evidenţiat aceste antecedente la 3548 din subiecţi
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα
Icircn cercetarea desfăşurată am utilizat intensitatea medie de fluorescenţă (MFI) ca
măsură a nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn leucocitele studiate Pentru
populaţiile de leucocite analiza computerizată a probelor luate icircn studiu a furnizat valori
pentru MFI a receptorilor PPARα icircn funcţie de cantitatea de anticorpi anti-PPARα marcaţi cu
fluorocrom care se leagă de aceste celule şi apoi sunt captaţi de citometru (figura 59)
A Lot Non - SM
B Lot SM
Figura 59 Analiza flowcitometrică pentru receptorii PPARα icircn leucocite A lot normal B lot SM
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Mo
Analiza probelor efectuată conform protocolului de lucru descris a arătat prezenţa
PPARα icircn Mo recoltate din sacircngele tuturor subiecţilor incluşi icircn această cercetare Pentru toţi
participanţii investigaţi analiza MFI a Ac anti - PPARα icircn populaţia de Mo (Mo) a arătat un
interval de variaţie icircntre [786 395] Valoarea medie a nivelului de expresie relativă a PPARα
calculată pentru Mo a fost de 23210 plusmn7860 Pentru ambele loturi de studiu pacienţilor cu
SM testul Testul Shapiro-Wilk a arătat distribuţia normală a valorilor obţinute pentru nivelul
de expresie al PPARα icircn Mo
Tabel XXVIII Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn Mo
Lot SM Lot Non-SM
N 26 31
Media 22819 23538
SD 5819 7717
Mediana 22400 22600
Minimum 12800 78600
Maximum 35800 37900
Percentila 25 18300 18300
Percentila 75 26200 30350
Pentru pacienţii din lotul SM valoarea medie a MFI icircn Mo a fost de 22819 plusmn 5880 iar
pentru lotul martor s-a calculat o valoare medie a MFI a Ac anti-PPARα de 23538 plusmn 7717
Distribuţia statistică a frecvenţei valorilor MFI obţinute pentru nivelul de expresie a PPARα
icircn Mo subiecţilor din cele două loturi a fost reprezentată icircn figura 511
Figura 511 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti-PPARα icircn Mo
Sub forma unei diagrame de control Shewhart am reprezentat variaţia intensităţii medii de
fluorescenţă pentru anticorpii anti-PPARα icircn MoVariaţia nivelului de expresie relativă a
receptorilor PPARα icircn Mo subiecţilor studiaţi este ilustrată icircn fig 512 513
Figura 512 Lot SM Variaţia
expresiei relative a PPARα icircn Mo
Număr pacienţi
26
Minim 128
Maxim 358
Media 22819
DS 5819
25 din 26 valori ale MFI s-au icircncadrat
icircn intervalul Media plusmn 2DS
Figura 513 Lot Non-SM Variaţia
expresiei relative a PPARα icircn Mo
Număr pacienţi 31
Minimum 786
Maximum 379
Media 23538
DS 7717
Cu excepţia unei singure
determinări valorile calculate s-au
icircncadrat icircn Media plusmn 2DS
Utilizacircnd testul parametric t-Student pentru variabilele cu distribuţie normală am
comparat valoarea medie a intensităţii de fluorescenţă a Ac anti-PPARα icircn lotul cu SM versus
subiecţi fără SM (Lot Non-SM) Analiza statistică efectuată nu a identificat diferenţe icircntre
50 100 150 200 250 300 350 400 450
0
5
10
15
20
25
30
35
MFI anti-PPAR a
Frecv
enta
relati
va (
)
Lot SM
0 50 100 150 200 250 300 350 400 450 500
0
5
10
15
20
25
30
35
MFI anti-PPAR a
Frecv
enta
relati
va (
)
Lot martor
1 6 11 16 21 26 31
0
50
100
150
200
250
300
350
400
450
MFI
anti-
PPAR
a
2282
1106
3458
518
4046
Media
LCI
LCI
1 6 11 16 21 26 31 36
-100
0
100
200
300
400
500
MFI a
nti-PP
AR
a
2354
810
3897
39
4669LCS
LCI
Media
cele două loturi icircn ceea ce priveşte expresia PPARα la nivelul Mo circulante (t- Test P=
069)
Studiul receptorilor PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de AHC şi dislipidemie
Nivelul de expresie al receptorilor PPARα α icircn Mo tinde să fie mai scăzut la subiecţii
cu AHC de HTA comparativ subiecţii care nu au declarat AHC de HTA (P= 006 fig 515)
AHC HTA
Număr 22
Mediana 19950
Percentila 25 17800
Percentila 75 22700
AHC HTA absente
Număr 35
Mediana 24800
Percentila 25 19025
Percentila 75 31700
Figura 515 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Mo funcţie de AHC de HTA
Nu s-au calculat diferenţe semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor
PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de dislipidemie atunci cacircnd aceştia au fost comparaţi cu
subiecţii fără AHC de tulburări ale metabolismului lipidic (t- Test P= 020)
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn limfocite
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn populaţia de Ly a
demonstrat prezenţa receptorilor PPARα icircn Ly tuturor subiecţilor studiaţi Pentru toţi
participanţii investigaţi analiza MFI a Ac anti - PPARα icircn populaţia de Ly a relevat un
interval de variaţie icircntre [748 314] iar valoarea medie a MFI a fost de 18058 plusmn 5600
Pentru ambele loturi aplicarea testului Shapiro-Wilk a evidenţiat distribuţia normală a
valorilor determinate pentru nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Ly Pentru
pacienţii cu SM valoarea medie a MFI determinată pentru expresia PPARα icircn populaţia de
Ly a fost de 18178 plusmn 61 16 iar pentru lotul martor a fost de 16800 plusmn 5229
Tabel XXX Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn limfocite
Lot SM Lot Non-SM
N 26 31
Media 181781 179574
SD 611694 522907
Mediana 165000 168000
Minimum 81300 74800
Maximum 314000 301000
Percentila 25 13400 - 145750
Percentila 75 21800 21700
Distribuţia frecvenţei valorilor MFI a Ac anti-PPARα icircn Ly este redată icircn figura 518
Figura 518 Distribuţia frecvenţelor relative a MFI a Ac anti-PPARα icircn Ly
94 din determinările efectuate pentru determinarea nivelului de expresie relativă al
MFI
ant
iPPA
R
a_Mo
190
200
210
220
230
240
250
260
270
280
DA NU
AHC HTA
P=006
50 89 128 167 206 244 283 322 361 400
0
5
10
15
20
25
30
35
MFI anti-PPAR a
Frecv
enta
relati
va (
)
Lot SM
0 50 100 150 200 250 300 350
0
5
10
15
20
25
30
35
40
MFI anti-PPAR a
Frec
venta
relat
iva (
)
Lot Non-SM
receptorilor PPARα icircn limfocitele subiecţilor cu SM s-au icircncadrat icircn intervalul Media plusmn 2DS
Figura 5 19 Lot SM Variaţia expresiei
relative a PPARα icircn Ly
Număr pacienţi 26
Minimum 813
Maximum 31400
Media 18178
Deviaţia Standard 6116
25 valori s-au icircncadrat icircn Media plusmn 2DS
Pentru lotul Non-SM diagrama de control (figura 520) a arătat toate valorile
determinate pentru lotul Non-SM se icircncadrează icircntre LCS şi LCI
Figura 520 Lot Non -SM Variaţia
expresiei relative a PPARα icircn Ly
Număr pacienţi 31
Minimum 748
Maximum 30100
Media 179574
Deviaţia Standard 5229
96 din valori icircncadrate icircn Media plusmn 2DS
Aplicarea testului t-Student pentru valorile medii ale intensităţii de fluorescenţă ale
PPARα icircn Ly nu a arătat existenţa unei diferenţe statistic semnificative icircntre lotul cu SM şi
lotul martor(t- Test P= 088)
Analiza receptorilor PPARα icircn Ly subiecţilor cu AHC de HTA şi dislipidemie
Studiind populaţiile de Ly la subiecţii care au prezentat AHC de hipertensiune
arterială analiza flowcitometrică a relevat existenţa unor valori mai mici pentru MFI la aceşti
subiecţi comparativ cu cei fără AHC de HTA (fig 522) deşi scăderea observată nu a
icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică (t- Test P = 009)
AHC HTA
Număr 22
Mediana 16000
Percentila 25 12700
Percentila 75 17100
AHC HTA absenţe
Număr 35
Mediana 18700
Percentila 25 14900
Percentila 75 23175
Figura 522 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Ly funcţie de AHC de HTA
Nu am calculat diferenţe statistic semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor
PPARα icircn populaţiile de Ly ale subiecţilor la care am identificat AHC de dislipidemie
comparativ cu cei care nu au declarat antecedente familiale de dislipidemie (t- Test P= 051)
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn neutrofile (PMN)
Analiza flowcitometrică a evidenţiat prezenţa PPARα icircn PMN recoltate din sacircngele
venos al tuturor participanţilor la studiu Pentru toţi subiecţii investigaţi analiza MFI a Ac -
PPARα icircn populaţia de PMN a relevat un interval de variaţie de [163419] iar valoarea medie
a MFI pentru Ac anti-PPARα a fost de 26392 plusmn 7064 Testul Shapiro-Wilk a arătat o
distribuţie normală a valorilor intensităţii medii de fluorescenţă a anticorpilor anti-PPARα atacirct
icircn lotul pacienţilor cu SM cacirct şi icircn lotul martor
1 6 11 16 21 26 31
-50
0
50
100
150
200
250
300
350
400
MFI
anti-
PPAR
a
1818
595
3041
-17
3653
Media+2DS
Media- 2DS
1 6 11 16 21 26 31 36
0
50
100
150
200
250
300
350
MFI
ant
i-PPA
R
a
1796
750
2841
227
3364
Media+2DS
Media
Media- 2DS
MFI
anti-
PPAR
a Ly
130
140
150
160
170
180
190
200
210
DA NU
AHC HTA
P=009
Tabel XXXII Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn PMN
Lot SM Lot Non-SM
N 26 31
Media 26273 26480
SD 6915 7088
Mediana 25900 25500
Minimum 17200 16300
Maximum 39500 41900
Percentila 25 19800 19600
Percentila 75 30500 31500
Icircn cele două loturi distribuţia frecvenţei valorilor nivelului relativ de expresie a
receptorilor PPARα icircn PMN a fost reprezentată sub formă de histograme (fig 525)
Figura 525 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti-PPARα icircn PMN
Pentru cei 26 de pacienţi din lotul cu SM a valoarea medie a nivelului de expresie
relativă a receptorilor PPARα icircn PMN a fost de 26273 plusmn 6915 Studiind diagrama Shewhart
din figura 526 se observă că toate valorile obţinute pentru nivelul de expresie relativă
PPARα icircn PMN investigate se icircncadrează icircntre limitele definite de valorile medii plusmn 2DS
Figura 526 Lot SM
Variaţia expresiei relative a PPARα icircn
PMN
Număr pacienţi 26
Minimum 17200
Maximum 39500
Media 26273
Deviaţia Standard 6915
Valorile MFI icircncadrate icircn Media plusmn 2DS
Pentru lotul martor valoarea medie calculată a MFI a anticorpilor anti-PPARα a fost de
26480 plusmn 7088 peste 95 din valorile MFI fiind cuprinse icircn Media plusmn 2DS (figura 527)
Figura 527 Lot Non-SM Variaţia expresiei
relative a PPARα icircn PMN
Număr pacienţi 31
Minimum 16300
Maximum 41900
Media 26480
Deviaţia Standard 7088
30 valoriicircn Media plusmn 2DS
Pentru PMN analiza statistica nu a arătat existenţa unei diferenţe statistic semnificative icircntre
nivelul de expresie relativă a PPARα la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii din lotul
Non-SM (t- Test P= 090) Studiind populaţiile de PMN la subiecţii care au prezentat AHC
de HTA nu am calculat o diferenţă statistic semnificativă icircntre expresia receptorilor PPARα
la subiecţii cu istoric familial de hipertensiune arterială comparativ cu cei pentru care nu s-au
notat AHC de HTA (t- Test P= 013)De asemenea am identificat diferenţe icircntre nivelul de
expresie al PPARα icircn PMN subiecţilor care prezentau AHC de dislipidemie comparativ cu
cei fără AHC de dislipidemie (t- Test P= 017)
50 100 150 200 250 300 350 400 450 500
0
5
10
15
20
25
30
35
MFI anti-PPAR a
Frecve
nta rel
ativa (
)
Lot SM
50 100 150 200 250 300 350 400 450 500
0
5
10
15
20
25
30
MFI anti-PPAR a
Frecv
enta
relati
va (
)
Lot Non-SM
1 6 11 16 21 26 31
0
50
100
150
200
250
300
350
400
450
500
MFI
anti-
PPA
R
a
2627
1244
4010
553
4702
Media + 2DS
Media - 2 DS
Media
1 6 11 16 21 26 31 36
0
50
100
150
200
250
300
350
400
450
500
MFI
anti-
PPAR
a
2648
1230
4066
522
4774
Media+ 2DS
Media - 2DS
Media
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile Tabel XXXIV Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn Eo
Lot SM Lot Non-SM
N 26 31
Mediaplusmn SD 141057 plusmn 47604 172209 plusmn 37565
Mediana 142450 171300
Minimum 35000 68500
Maximum 233700 250600
Percentila 25 119300 153225
Percentila 75 169700 199550
Am studiat nivelul relativ de expresie a receptorilor PPARα icircn Eo iar rezultatele au
fost figurate sub forma de histograme (figura 532)
Figura 532 Distribuţia frecventelor relative ale valorilor MFI anti- PPARα icircn Eo
Din diagrama Shewhart (figura 533) se observă că toate valorile determinate pentru
nivelul de expresie relativă a PPARα icircn Eo pentru lotul SM s-au icircncadrat icircn [Media plusmn 3 DS]
peste 90 din determinări fiind cuprinse icircn [Media plusmn 2 DS] iar icircn [Media plusmn 1 DS] sunt
incluse peste 65 din valorile MFI
Figura 533 Lot SM
Variaţia expresiei relative a PPARα icircn Eo
Număr pacienţi 26
Minimum 35000
Maximum 233700
Media 141057
Deviaţia Standard 47604
24 valori icircncadrat eicircn [Media plusmn 2DS]
Pentru subiecţii incluşi icircn lotul martor analiza diagramei (figura 534) a arătat că
toate cele 31 de valori ale MFI pentru PPARα icircn Eo se icircncadrează icircn [Media plusmn 3DS] iar 30
dintre acestea se icircncadrează icircn [ Media plusmn 2 DS]
Figura 534 Lot Non -SM
Variaţia expresiei relative a PPARα icircn Eo
Număr pacienţi 31
Minimum 685
Maximum 2506
Media 172209
Deviaţia Standard 375 65
30 valori icircncadrate icircn [Media plusmn 2DS]
Comparacircnd subiecţii cu SM cu cei din lotul martor am observat o scădere
semnificativă statistic a MFI a Ac anti - PPARα icircn Eo pentru pacienţiir cu SM ( figura 535)
PPARα Eo Lot Non-SM
Număr 31
Mediana 171300
Percentila 25 152325
Percentila 75 199550
PPARα Eo Lot SM
Număr 26
Mediana 142450
Percentila 25 119300
Percentila 75 169700
Figura 5 35 Comparaţie icircntre nivelul de expresie a PPARα icircn Eo
0 500 1000 1500 2000 2500 3000
0
10
20
30
40
50
MFI anti-PPAR a
Frecvent
a relativa
()
Lot SM
400 800 1200 1600 2000 2400 2800
0
5
10
15
20
25
30
35
40
45
MFI anti-PPAR a
Frecenta
relativa
()
Lot Non-SM
1 6 11 16 21 26 31
-500
0
500
1000
1500
2000
2500
3000
MFI a
nti-PP
AR
a
14106
4765
23447
94
28117
Media + 2DS
Media- 2DS
LCI
LCS
1 6 11 16 21 26 31 36
500
1000
1500
2000
2500
3000
MFI an
ti-PPA
R a
17221
9708
24734
5951
28490
LCI
Media-2DS
Media
Media +2 DS
LCS
1200
1300
1400
1500
1600
1700
1800
1900
Lot SM Lot Non-SM
P=00072
Cu ajutorul curbei ROC am evaluat posibilitatea utilizării MFI a Ac anti - PPARα icircn
Eo ca marker pentru diagnosticul SM Valoarea MFI a Ac anti - PPARα icircn Eo care prezice cu
cea mai mare acurateţe prezenţa SM a fost de 1533 (punctul de ldquocut-offrdquo) pentru care am
calculat o sensibilitate de 5652 şi o specificitate de 7778 Calculul ariei AUC a furnizat
valoarea de 0663 şi deci determinarea parametrului MFI anti- PPARα icircn Eo are valoarea
unui test cu acurateţe redusatilde icircn diagnosticul SM Studiind expresia PPARα icircn Eo la subiecţii
care au prezentat AHC de HTA am observat o scădere semnificativă statistic (P = 00023) a
expresiei PPARα la subiecţii cu istoric familial de HTA comparativ cu subiecţii fatilderatilde AHC de
HTA (figura 537)
AHC HTA
Număr 22
Mediana 148800
Percentila 25 116425
Percentila 75 170750
AHC HTA absente
Număr 35
Mediana 170850
Percentila 25 143700
Percentila 75 195000
Figura 537 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Eo funcţie de AHC de HTA
Studiind subiecţii cu AHC declarate de dislipidemie nu am identificat diferenţe icircntre
nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Eo subiecţilor cu AHC de dislipidemie
comparativ cu cei care nu au declarat prezenţa AHC de dislipidemie (t - Test P = 067)
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor CD36
Am studiat expresia receptorilor CD36 icircn Mo subiecţilor incluşi icircn studiu
Lot Non - SM
BLot SM
Figura 539 Analiza flowcitometrica pentru receptorii CD36 icircn Mo
Pentru toţi participanţii la studiu valorile MFI au variat icircn intervalul [817 6933] iar
valoarea medie a MFI a Ac anti-CD36 a fost de 397133 plusmn 120902 Tabel XXXVII Statistică descriptivă pentru a CD36 icircn Mo
Lot SM Lot Non-SM
Media 429034 370377
Deviatia Standard 109051 125514
Mediana 411000 362800
Minimum 266400 81700
Maximum 693300 616800
Percentila 25 346200 273750
Percentila 75 469000 453300
Distribuţia frecvenţelor relative a MFI au fost prezentate sub formă histogramelor
Figura 541 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti - CD36 icircn Mo
MFI
ant
i-PPA
R a Eo
1000
1100
1200
1300
1400
1500
1600
1700
1800
1900
DA NU
AHC HTA
P=00023
1000 2000 3000 4000 5000 6000 7000 8000
0
5
10
15
20
25
MFI anti-CD36
Frecve
nta rela
tiva (
)
Lot SM
0 1778 3556 5333 7111
0
5
10
15
20
25
30
35
MFI anti-CD36
Frecve
nta rel
ativa (
)
Lot Non - SM
Referitor la lotul SM 92 din valorile MFI a Ac anti- CD36 s-au icircncadrat icircn
intervalul Media plusmn 2 DS (figura 542) iar pentru lotul martor peste 90 dintre acestea icircn
Media plusmn 2 DS (figura 543)
Figura 542 Lot SM
Variaţia MFI anti-CD36 icircn Mo
Număr pacienţi 26
Minimum 2664
Maximum 6933
Media 429034
Deviaţia Standard 109051
Figura 543 Lot Non -SM
Variaţia MFI anti- CD36 icircn Mo
Număr 31
Minimum 81700
Maximum 616800
Media 370377
Deviaţia Standard 125514
Comparacircnd subiecţii cu SM cu cei din lotul normal am constatat o tendinţă de creştere
a expresiei CD36 icircn lotul cu SM((t - Test P= 0067)
MFI anti - CD36 Lot Non-SM
Număr 31
Mediana 3628
Percentila 25 2737
Percentila 75 4533
MFI anti - CD36 Lot SM
Număr 26
Mediana 4110
Percentila 25 3462
Percentila 75 4690
Figura 544 Comparaţie icircntre cel două loturi privind MFI anti - CD36 icircn Mo
Referindu-ne la subiecţii cu AHC de HTA am observat o tendinţă de creştere a
valorilor MFI anti-CD36 comparativ cu cei care nu au avut AHC de HTA (t - Test P = 0 08)
AHC HTA
Număr 22
Mediana 442800
Percentila 25 355275
Percentila 75 519475
AHC HTA absenţe
Număr 35
Mediana 377400
Percentila 25 316900
Percentila 75 443400
Figura 545 Comparaţie icircntre expresia CD36 icircn Mo funcţie de AHC de HTA
Nu s-au calculat diferenţe semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor
PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de dislipidemie atunci cacircnd aceştia au fost comparaţi cu
subiecţii fără AHC de dislipidemie (t - Test P=031)
Corelaţii icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα si CD36
Studiind valorile intensităţii medii de fluorescenţă a Ac anti-PPARα icircn Mo Ly şi
PMN am observat că nivelul de expresie celularatilde a PPARα icircn Mo Ly şi PMN sunt corelate
puternic pozitiv atacirct icircn lotul SM cacirct şi icircn lotul martor(fig547 548)
1 6 11 16 21 26 31
0
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
Pacienti
MFI a
nti-CD
36
42903
21093
64714
10188
75619
LCI
Media
LCS1 6 11 16 21 26 31 36
-1000
0
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
MFI a
nti- C
D36
37038
11935
62141
-616
74692Media + 2 DS
Media
Media - 2 DS
3200
3400
3600
3800
4000
4200
4400
4600
4800
Lot SM Lot Non-SM
P = 00676
MFI
anti-
CD36
3400
3600
3800
4000
4200
4400
4600
4800
5000
DA NU
AHC HTA
P = 008
Figura 547 Studiul relatiilor dintre
receptorii PPARα icircn SM A Mo vs PMN B Mo vs Ly
C PMN vs Ly Graficul ilustrează coeficienţii r P dreapta de
regresie (linia centrala) intervalul de icircncredere
95 şi intervalul de predicţie 95
Figura 548 Corelaţii icircntre receptorii PPARα icircn lotul
martor
A Mo vs PMN
B Mo vs Ly
C PMN vs Ly
Tot pentru lotul SM cacircnd am evaluat relaţia dintre nivelul de expresie relativă a
receptorilor PPARα icircn Eo şi nivelul de expresie relativa a receptorilor CD 36 am obţinut o
corelaţie negativă (r = - 05 P = 001) (fig 549 A)
50 100 150 200 250 300 350 50
100
150
200
250
300
350
400
450
500
PPARα Ly
PPARα PMN
y = 56641 + 1159 x r = 086 P lt 0001
C
50 100 150 200 250 300 350 400 0
50
100
150
200
250
300
350
PPARα Mo
PPARα Ly
y = 36665 + 0607 x r = 090 P lt 0001
B
150 200 250 300 350 400 450 0
50 100 150 200 250 300 350 400 450 500
PPARα PMN
PPARα Mo
y = 2505 + 0879 x r = 081 P lt 0001
A
50 100 150 200 250 300 350
50 100 150 200 250 300 350 400 450 500
PPARα Ly
PPARα PMN
y = 95668 + 0919 x r = 081 P lt 0001
C
100 150 200 250 300 350 400
0
50
100
150
200
250
300
350
400
PPARα Mo
PPARα Ly
y = -7503 + 0829 x r = 079 P lt 0001
B
100 150 200 250 300 350 400
50
100
150
200
250
300
350
400
450
500
PPARα Mo
PPARα PMN
y = 61384 + 0882 r = 074 P lt 0001
A
Figura 549 Corelaţii icircntre expresia PPARα icircn Eo şi alte tipuri de receptori investigaţi A PPARα Eo şi CD 36 (Lot SM) B PPARα Eo şi PPARα Mo( Lot Non-SM)
Icircn lotul martor am identificat o asociere moderată pozitivă (r = 038 P = 0033) icircntre
nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Eo şi Mo (figura 549B) corelaţie absentă icircn
lotul pacienţilor cu SM
Corelaţii dintre receptorii studiaţi şi componentele sindromului metabolic
Icircn lotul de control analiza statistică a relevat faptul că icircntre circumferinţa
abdominală (CA ) şi nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Mo Ly şi PMN există o
corelaţie inversă adică scăderea expresiei PPARα la nivelul acestor populatii celulare ar fi
icircnsoţită de creşterea CA (figura 550
Figura 550Corelaţii dintre receptorii
PPARα si CA A Mo B Ly C PMN
La pacienţii cu SM am notat o corelatie moderată negativă statistic semnificativă
icircntre TG şi valorile MFI a Ac anti- PPARα icircn Mo şi Ly( fig 551)
150 200 250 300 350 400 450 50
60
70
80
90
100
110
PPARα PMN
CA r = - 040 P = 0024
C
50 100 150 200 250 300 350 50
60
70
80
90
100
110
PPARα Ly
CA r = - 046 P = 0009
B
50 100 150 200 250 300 350 400 50
60
70
80
90
100
110
PPARα Mo
CA r = - 042 P = 0017
A
50 100 150 200 250 300 350 400 500
1000
1500
2000
2500
3000
PPARα Mo
PPARα Eo
r = 038 P = 0033
B
0 500 1000 1500 2000 2500 1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
PPARα Eo
CD36
r = 050 P = 0010
A
Figura 551 Lot SM Corelaţie icircntre expresia PPARα şi TG (A Mo B Ly)
Analizand corelatia dintre receptorii CD36 si valorile TA la pacientii cu SM am observat
o asociere pozitivă asteptată intre TAD si nivelul de expresie al receptorilor CD36 (fig 552)
Figura 552 Lot SM Corelaţii icircntre expresia
receptorilor CD36 şi valorile tensiunii arteriale
diastolice
Studiind corelaţiile dintre receptorii PPARα şi HDL-col la subiecţii din lotul martor am
notat o asociere pozitivă icircntre expresia PPARα icircn Mo şi Ly cu HDL-col (fig 553)
Figura 553 Lot martor Corelaţii icircntre HDL-col şi expresia PPARα icircn Mo(A) Ly(B)
Icircn lotul normal am evidenţiat corelaţii pozitive moderate dar semnificative statistic icircntre
CA şi valorile TAS (r = 062 P lt 0001) respectiv TAD (r = 050 P=0004) precum şi icircntre
CA şi glicemia subiecţilor normali (r = 052 P = 0003) Aceste date icircmpreună cu relaţia
invers proporţională identificată icircntre HDL-col şi CA (r = 050 P = 001) susţin validitatea
acestui studiu Icircn lotul subiecţilor cu SM am observat o corelaţie moderat pozitivă icircntre
expresia PPARα icircn populaţiiile de Mo şi Eo şi concentraţia a HDL-col (fig 554)
B
100 150 200 250 300 350 20
30
40
50
60
70
80
90
100
PPARα Ly
HDL-col-(mgdl)
r = 036 P = 0046
A
150 200 250 300 350 400 20
30
40
50
60
70
80
90
100
PPARα Mo
HDL-col-(mgd)l
r = 035 P = 005
70 75 80 85 90 95 100 1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
TAD (mmHg)
CD36
r = 048 P = 0013
B
50 100 150 200 250 300 350 -100
0
100
200
300
400
500
PPARα Ly
TG(mgdl)
r = - 042 P = 003
A
50 100 150 200 250 300 350 400 -100
0
100
200
300
400
500
PPARα Mo
TG ( mgdl) r =- 0 43 P = 0027
Figura 554 Corelaţii icircn SM icircntre HDL-col şi expresia PPARα icircn Mo (A) şi Eo(B)
Corelaţii icircntre nivelul de expresie relativă a PPARα şi markeri ai disfuncţiei
endoteliale şi inflamaţiei cronice
Deşi nu a icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică am reţinut corelaţia invers
proporţională (r = - 0331 P = 006) dintre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα
icircn PMN şi concentraţia serică a Non-HDL-colesterolului
Studiind relaţiile dintre parametri icircn lotul de pacienţi cu SM am observat o corelaţie
moderată invers proporţională icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Eo şi
acidul uric seric (figura 555 A) corelaţie absentă la subiecţii fără SM
Figura 555 Lot SM corelaţia dintre expresia PPARα icircn Eo şi acidul uric (A) respectiv
PPARα şi fibrinogen (B)
Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P=008) am notat pentru
pacienţii cu SM corelaţia invers proporţională dintre expresia PPARα icircn Eo şi concentraţia
serică a fibrinogenului ( figura 555B)
V5 Discuţii
Icircn cadrul lucrării de doctorat am studiat nivelul de expresie relativă a PPARα icircn
leucocitele pacienţilor cu SM comparativ cu cea a subiecţilor normali Expresia PPARα a fost
studiată icircn paralel cu cea a CD36 glicoproteină exprimată pe suprafaţa a numeroase celule
din organismul uman inclusiv pe cea a Mo şi macrofagelor Prin funcţia sa de receptor pentru
particulele oxidate de LDL CD36 cunoscut ca bdquoscavenger receptorrdquo de clasa B sau
bdquotrombospodin receptorrdquo contribuie la dezvoltarea inflamaţiei de la nivel endotelial şi
formarea plăcii de ateroscleroză Referitor la studiul PPARα icircn Eo icircn sindromul metabolic
menţionăm că studiul nostru este primul care arată că nivelul de expresie a proteinei PPARα
icircn Eo măsurat prin citometrie icircn flux este semnificativ mai redus la pacienţii care sunt
diagnosticaţi cu acest sindrom De asemenea icircn lotul cu SM cercetat icircn cadrul studiului
receptorilor PPARα numărul Eo circulante a fost semnificativ mai crescut la pacienţii cu SM
B
0 500 1000 1500 2000 2500 200
250
300
350
400
450
PPARα Eo o
Fibrinogen mgdl
r =- 036 P = 008
0 500 1000 1500 2000 2500 1 2 3 4 5 6 7 8 9
10 11
PPARα Eo_
Acid uric(mgdl) r = 048 P = 0014 A
0 500 1000 1500 2000 2500 10
20
30
40
50
60
70
80
PPARα Eo
HDL(mgdl)
r = 044 P = 0024
B
100 150 200 250 300 350 400 10
20
30
40
50
60
70
80
PPARα Mo
HDL( mgdl)
r = 046 P = 0019
A
(P = 003) Aceste constatări conduc la ipoteza că Eo joacă un rol special icircn mecanismele
patogenice declanşate icircn sindromul metabolic şi că receptorii PPARα sunt importanţi icircn
implicarea Eo icircn obezitate şi insulinorezistenţă Creşterea numărului de Eo circulante este
urmată de eliberarea mediatorilor proinflamatori iar reducerea expresiei PPARα icircn Eo
determină perturbarea mecanismelor de control al inflamaţiei cu exacerbarea cascadei
proinflamatorii Consecutiv se agravează disfuncţia endotelială şi se accelerează progresia
leziunilor de ateroscleroză Extrapolacircnd aceste ipoteze putem spune că asocierea raportată
dintre boala ischemică coronariană şi Eo poate fi şi consecinţa exacerbării cascadei
proinflamatorii de la nivel vascular produsă datorită scăderii expresiei PPARα icircn Eo iar
creşterea numărului de Eo circulante poate reprezenta o adaptare a organismului uman care
icircncearcă să suplinească deficitul de receptori PPARα Analizacircnd curba ROC pentru
intensităţile medii de fluorescenţă determinate pentru anticorpii anti- PPARα icircn Eo am
obţinut pentru acest biomarker o sensibilitate a testului de 565 şi o specificitate de 778
pentru un punct de cut-off de 1533 ( figura 536 ) Deşi aria AUC (Aria under the curve) egală
cu 0663 icircncadrează acest test ca avacircnd o acurateţe redusă observăm că că această valoare
este apropiată de determinările AUC pentru alţi factori (fibrinogen raport de aterogenitate
acid uric non- HDL-colesterol) cunoscuţi ca fiind implicaţi icircn aterogeneză şi inflamaţia
cronică (figura 431) Aceste remarci alături de faptul că icircn studiul receptorilor PPARα icircn
leucocite am inclus subiecţi la primul diagnostic de SM creează premisa integrării
determinării expresiei relative a receptorilor PPARα icircn diagnosticul complex al sindromului
metabolic Putem spune că icircn final studiul expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofilele
circulante se dovedește a fi util icircn diagnosticul precoce la nivel molecular al SM permiţacircnd
identificarea timpurie a unor indivizi cu risc cardiometabolic crescut Astfel intervenţia
precoce asupra subiecţilor cu deficit de PPARα icircn Eo contribuie la managementul eficient al
afecţiunilor degenerative icircn care inflamaţia cronică icircndeplineşte un rol primordial Referitor
la populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările efectuate prin citometrie de flux nu au
arătat existenţa unor diferenţe statistice icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα
la subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali Rezultatele noastre pot fi
consecinţa caracteristicilor loturilor studiate (icircn studiul nostru au fost incluşi subiecţi recrutaţi
la primul diagnostic de SM şi icircn absenţa stimulării receptorilor PPARα cu droguri agoniste
PPARα) dar icircn acelaşi timp pot apare diferenţe datorită metodei utilizate (231 232 233)
Făcacircnd o paralelă cu un studiu publicat icircn 2013 icircn Europa (231) care a arătat creşterea
nivelului de expresie al PPARα icircn Ly şi Mo observăm că deşi numărul de subiecţi a fost
aproximativ egal (57 participanţi icircn studiul nostru 60 icircn studiul DAmore) subiecţii icircn studiul
amintit au fost recrutaţi dintr-o clinică cu profil medical la primul diagnostic de SM icircn timp
ce metoda utilizată a fost PCR (Polymerase Chain Reaction) mult mai fidelă decacirct citometria
icircn flux icircn studiul receptorilor nucleari De asemenea DAmore nu investighează expresia
PPARα icircn Eo şi PMN icircn cercetare fiind incluse doar celulele CD14+ (predominant Mo) şi
CD14- (predominant Ly) Deşi nu am obţinut diferenţe statistic semnificative icircntre cele două
loturi referitoare la nivelul de expresie relativă a PPARα icircn Mo Ly şi PMN am observat
corelaţii puternice semnificative statistic icircntre expresia receptorilor PPARα icircn aceste tipuri
celulare Rezultatele obţinute sugerează existenţa unui mecanism diferit molecular de control
icircn eozinofile care reglează cantitatea de proteină PPARα icircn eozinofile versus alte tipuri de
leucocite (la pacienţii cu SM) şi acest lucru este icircn concordanţă cu cercetările care descriu
expresia PPARα mRNA icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale
bronşice keratinocite) Studiind prin citometrie de flux nivelul de expresie relativă a
receptorului CD36 la nivelul Mo am arătat prezenţa acestuia icircn Mo tuturor subiecţilor
investigaţi Analizacircnd valorile intensităţii medii de fluorescenţă a CD36 icircn loturile studiate
am observat o tendinţă de creştere la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali
confirmacircnd implicarea receptorului CD36 icircn patogeneza acestuia Referitor la expresia
receptorului CD36 rezultatele obţinute sunt icircn consens cu studii anterioare care au arătat
creşterea expresiei CD36 la pacienţii cu SM şi diabet zaharat Astfel pe lacircngă diferenţa icircn
expresia CD36 s-au raportat şi corelaţii inverse icircntre expresia proteinei CD36 şi nivelul
adiponectinei Acelaşi studiu a evidenţiat o corelaţie pozitivă intre expresia CD36 cu expresia
receptorilor PPAR gamma relaţia cu PPARα nefiind investigată
Analiza de subgrup a relaţiilor dintre componentele SM și elementele moleculare
proinflamatorii studiate a relevat prezenţa unor asocieri semnificativ statistice icircntre acestea
Se argumentează astfel că veridicitatea studiului este susţinută de interdependenţele statistice
ale componentelor SM Determinarea coeficientului de corelaţie Icircn studiul nostru nivelul de
expresie relativă a PPARα s-a corelat moderat negativ (figura 550) cu CA a subiecţilor din
lotul normal pentru populaţiile celulare de Mo (r = - 0420 P = 001) Ly (r = - 046 P =
0009) şi PMN (r = - 040 P = 0024) date care sunt icircn concordanţă cu studiile care arată
rolul PPARα icircn furnizarea energiei prin beta-oxidarea acizilor graşi Icircn acelaşi timp icircn lotul
pacienţilor cu SM nu am identificat prezenţa unei asocieri icircntre nivelul de expresie relativă a
PPARα şi valoarea măsurată a CA Asocierea dintre expresia relativă a PPARα cu obezitatea
de tip central completează datele existente referitoare la reglarea homeostaziei energetice
conturacircnd un mecanism de control deficitar al aportului caloric al SM Icircn condiţiile icircn care
rezultatele obţinute prin metoda citometriei icircn flux nu au arătat existenţa unei corelaţii intre
expresia PPARα şi CA la pacienţii cu SM considerăm că ar fi necesar studiul
polimorfismului genei PPARA care ar putea aduce informaţii importante cu privire la
implicarea acestor receptori icircn apariţia obezităţii de tip central Subliniem acest lucru deoarece
obezitatea este o boală plurifactorială icircn care pe lacircngă factorii ereditari sunt implicaţi factori
de mediu psihologici şi sociali (245) Existenţa unei componente genetice a aterosclerozei
este legată şi de prezenţa unor variante ale genei PPARA asociate cu creşterea incidenţei bolii
cardiovasculare (82) şi a SM (249) Icircn studiul nostru am constatat o scădere statistic
semnificativă a nivelului expresiei relative a receptorilor PPARα icircn Eo la subiecţii cu
antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială comparativ cu subiecţii fără istoric
familial de hipertensiune (figura 537) Deşi diferenţele calculate icircntre loturile studiate nu au
icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică la subiecţii care au declarat prezenţa
antecedentelor familiale de hipertensiune arterială remarcăm o tendinţă de scădere a
intensităţii medii de fluorescenţă pentru Ac anti-PPARα la nivelul Mo (figura 515 P = 006
) icircn timp ce expresia relativă a CD36 icircnregistrează o creştere la acesti subiecţi (figura 545 P
= 008) Icircn contextul riscului cardiovascular foarte icircnalt al pacienţilor cu SM amintim şi
existenţa corelaţiei pozitive dintre valorile tensiunii arteriale diastolice şi expresia relativă a
receptorului CD36 (r = 0483 P = 0013) Această constatare este icircn consens cu studiile care
au arătat că forma solubilă circulantă a CD36 este asociată cu factorii de risc cardiovasculari
fiind propusă ca un marker precoce al aterosclerozei Activarea PPARα este asociată cu
modularea metabolismului lipidic iar agoniştii PPARα sunt utilizaţi icircn mod curent pentru
tratamentul dislipidemiei Sub acţiunea agoniştilor PPARα se obţine o icircmbunătăţire a funcţiei
endoteliale şi a parametrilor reologici funcţiile pleiotropice ale agoniştilor PPARα fiind
dovedite icircn trialuri clinice controlate Icircn populaţiile de Mo şi Ly la pacienţii cu SM
cercetarea noastră a evidenţiat o asociere negativă icircntre nivelul de expresie relativă a
receptorilor PPARα şi concentraţia TG serice (figura 551) Astfel scăderea expresiei
receptorilor PPARα este asociată cu creşterea nivelului TG serice contribuind la profilul
lipidic aterogen din SM Icircn conformitate cu literatura de specialitate icircn studiul efectuat prin
metoda citometriei icircn flux am găsit prezenţa asocierii icircntre nivelul de expresie al PPARα şi
HDL-colesterol Corelaţia pozitivă dintre nivelul de expresie relativă PPARα şi concentraţia
HDL-colesterolului a fost observată icircn lotul martor icircn populaţiile de Mo (r = 035 P = 005)
şi Ly ( r = 036 P = 004) (figura 553) susţinacircnd faptul că stimularea receptorilor PPARα
este legată de creşterea nivelului seric al lipoproteinelor cu densitate crescută La pacienţii cu
SM corelaţia dintre expresia PPARα şi HDL-colesterol a fost evidenţiată icircn populaţiile de Mo
(r = 046 P = 0019) şi eozinofile (r = 044 P = 0024) Se desprinde concluzia că icircn
sindromul metabolic scăderea concentraţiei HDL-colesterol este legată de diminuarea
nivelului de expresie relativă a receptorilor nucleari PPARα icircntărind afirmaţiile legate de
rolul acestor receptori icircn progresia bolilor cardiovasculare Studiind reactanţii de fază acută
analiza statistică a relevat o diferenţă semnificativă din punct de vedere statistic icircntre valorile
fibrinogenului la pacienţii cu SM atunci cacircnd au fost comparaţi cu subiecţii fără SM
(Capitolul IV4 P lt0 001 figura 427A) De asemenea icircn Capitolul V dedicat studiul
expresiei relative a receptorilor PPARα studiul valorilor fibrinogenului a arătat creşterea
acestui reactant de faza acută icircn lotul cu SM comparativ cu lotul martor (P lt0 0001) Icircn
studiul nostru am calculat o corelaţie invers proporţionala (r = - -036 fig 555B) icircntre
nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile şi concentraţia serică a
fibrinogenului Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P = 008) am reţinut
această asociere deoarece am demonstrat că nivelul de expresie relativă al receptorilor
PPARα icircn eozinofile este mai scăzut icircn sindromul metabolic iar sindromul metabolic este
caracterizat printr-un status inflamator cronic status caracterizat şi de creşterea concentraţiei
serice a fibrinogenului De asemenea notam ca această corelaţie negativă se află icircn
concordanţă cu studiile care arata că tratamentul cu agonişti PPARα (fibraţi) determina
scăderea nivelului seric al fibrinogenului contribuind la diminuarea inflamaţiei cronice din
sindromul metabolic şi icircn consecinţă amelioracircnd insulinorezistenţa
LIMITE ȘI DIFICULTĂȚI IcircN CERCETARE
Icircn cadrul Tezei de Doctorat am desfăşurat o cercetare care şi-a propus studierea
expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Recrutarea anamneza şi examinarea
clinică a subiecţilor au fost realizate icircn cadrul Cabinetului de Medicină de Familie CMI Popa
Elena din Iaşi iar determinările hematologice şi biochimice s-au efectuat icircn cadrul
Laboratorului Ambulatorului de Specialitate al Spitalului Universitar ldquoSfacircntul Spiridon din
Iaşi Icircn studiul epidemiologic şi al markerilor inflamatori al sindromului metabolic desfăşurat
au fost incluşi un număr de 1530 de participanţi pe baza liberului consimţămacircnt examinaţi icircn
perioada 01012013 - 31122013 Icircn continuare icircn perioada 1012014 - 28022014 pe baza
criteriilor de includere şi excludere icircn cele două loturi de studiu am investigat un număr de 57
de subiecţi prezentaţi la consultaţie icircn această perioadă şi care au icircndeplinit criteriile de
includere icircn cele două loturi (Lot SM şi Lot Control) constituite pentru evaluarea nivelului de
expresie a receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Explorarea nivelului de expresie
relativă a receptorilor PPARα s-a desfăşurat icircn cadrul Laboratorului de Biologie Moleculară
de pe platforma Institutului Regional de Oncologie Datorită resurselor proprii financiare
limitate trebuie să subliniez că aceasta cercetare nu ar fi fost posibilă fără contribuţia unor
cercetători din domeniul medical care m-au sprijinit necondiţionat atacirct icircn elaborarea
protocolului de lucru cacirct şi icircn efectuarea propriu-zisă a studiului Icircn acest sens menţionăm şi
faptul că pentru studiul receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic am utilizat aparatura
Laboratorului de Biologie Moleculară (care deserveşte icircntreaga Regiune a Moldovei) Pe
această cale mulţumesc personalului Laboratorului de Biologie Moleculară pentru ajutorul
acordat icircn desfăşurarea cercetării doctorale icircn condiţiile icircn care se observa creşterea
numărului de pacienţi care se adresează acestei platforme de cercetare Mulţumesc de
asemenea şi Doamnei Doctor Elena Butoi din cadrul Institutului de Biologie şi Patologie
Moleculară ldquoNicolae Simionescurdquo Bucureşti) pentru donaţia anticorpului secundar anti-
FITC Icircn consecinţă pentru recrutarea unui număr mai mare de participanţi ar fi fost necesară
icircn primul racircnd obţinerea unor resurse financiare suplimentare pentru achiziţia de aparatură şi
reactivi Totuşi numărul subiecţilor recrutaţi este apropiat de numărul subiecţilor raportaţi icircn
cadrul unor granturi de cercetare care aveau ca ţinta studiul expresiei receptorilor PPARα
(212 227 228 231) Rezultatele obţinute continua seria lucrărilor care arata importanta
studiului mecanismelor etiopatogenice ale sindromului metabolic patologie care se afla icircntr-o
continuă creştere La pacienţii cu SM pe lacircngă diminuarea nivelului de expresie a receptorilor
PPARα icircn eozinofile ne aşteptam şi la evidenţierea unor modificări icircn expresia PPARα şi icircn
populaţiile de Ly Mo şi PMN Acest fapt poate fi explicat de utilizarea unor celule provenite
de la pacienţi fără afectare cardiovasculară fără diabet zaharat şi necesită continuarea
studiului pe culturi celulare icircn condiţii de stimulare cu agonişti PPARα deziderat care
impune continuarea investigării expresiei PPARα printr-un grant de cercetare
ORIGINALITATEA ȘI CONTRIBUȚIILE INOVATIVE ALE TEZEI DE
DOCTORAT PERSPECTIVE DE CERCETARE
Evaluarea nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn leucocitele circulante
aduce noi perspective icircn studiul obezităţii şi sindromului metabolic Importanta studiului
expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic derivă din prevalenta crescută a
sindromului metabolic icircn populaţia cercetată la care se adaugă riscul cardiovascular foarte
icircnalt al acestor pacienţi cu implicaţii majore icircn sănătatea publică Rolul receptorilor PPARα
icircn inflamaţie şi aterogeneza este binecunoscut dar studiul nostru este primul care a arătat că
nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα este semnificativ mai scăzut in populatiile
de eozinofile la pacienţii cu SM Această concluzie coroborata cu existenţa unei stracircnse
asocieri intre expresia receptorilor PPARα la nivelul Mo limfocitelor şi PMNlor creeaza
ipoteza existenţei unui mecanism de control diferit al expresiei PPARα la nivelul
eozinofilelor Această cercetare aduce informaţii importante referitoare la mecanismele
proinflamatorii care stau la baza insulinorezistenţei şi riscului cardiometabolic şi impune
continuarea studiului acestor receptori nucleari prin citometrie icircn flux metodă care poate fi
aplicată şi la scara mai largă dacă sunt asigurate resursele materiale necesare cercetării
Cercetarea prin citometrie icircn flux poate fi completată de studiul polimorfismului genei
PPARA şi astfel se pot identifica timpuriu indivizii cu potenţial risc cardiometabolic crescut
Studiul receptorilor PPARα a stabilit conexiuni cu factori proinflamatori şi aterogenetici iar
continuarea cercetării poate aduce şi elemente noi de diagnostic precoce icircn sindromul
metabolic contribuind la icircmbunătăţirea prognosticului acestor pacienţi
CONCLUZII FINALE
1 Aplicarea scorului de SM alături de implementarea algoritmului electronic de diagnostic
contribuie la o prelucrare rapidă eficientă și standardizată a informaţiilor la nivelul
medicinei primare
2 Prevalenţa SM calculată astfel icircn cadrul studiului este crescută (2732) icircn concordanţă
cu datele raportate
3 Controlul factorilor de risc cardiometabolici incluşi icircn SM se poate realiza prin
managementul stilului de viaţă (scăderea greutăţii corporale prin combaterea
sedentarismului şi adoptarea unei diete antiaterogene şi hipocalorice) şi administrarea
terapiei medicamentoase
4 Este necesară adoptarea unei politici de sănătate publică pentru prevenirea creşterii icircn
populaţie a prevalenţei obezităţii şi a diabetului zaharat
5 Noi metode de cercetare icircn domeniul SM axate pe diagnosticarea precoce şi cuantificarea
eficientă a acestuia duce la diminuarea incidenței evenimentelor cardiovasculare majore
6 Sindromul metabolic se caracterizează printr-un status inflamator cronic
7 Valorile Non-HDL-colesterolului şi a raportului de aterogenitate sunt semnificativ mai
mari la pacienţii cu SM
8 Dintre reactanţii de faza acută am observat că valoarea medie a fibrinogenului este mai
crescută icircn lotul cu SM
9 Valorile eozinofilelor sunt crescute icircn sindromul metabolic iar explorarea relaţiei dintre
eozinofile şi obezitate constituie una din direcţiile de studiu actuale ale sindromului
metabolic
10 Evaluarea markerilor inflamatori icircn contextul sindromului metabolic este utilă icircn
evaluarea complexă a a factorilor de risc cardiometabolici
11 Prin metoda citometriei icircn flux am demonstrat prezenta Receptorilor Activaţi de
Inductorii Proliferării Peroxizomilor ndash Alpha (PPARα) icircn toate populaţiile de leucocite
studiate (Mo limfocite PMN eozinofile) atacirct icircn lotul pacienţilor cu SM cacirct şi icircn lotul
martor
12 Utilizacircnd intensitatea medie de fluorescenţă a anticorpilor anti- PPARα am arătat că
nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile este semnificativ mai redus
la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali
13 Acest studiu este primul care a demonstrat existenţa unei scăderi statistic semnificative a
nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofilele pacienţilor cu SM
confirmacircnd cercetările recente care au evidenţiat rolul eozinofilelor şi al receptorilor
PPARα icircn obezitate reglarea inflamaţiei cronice şi aterogeneza
14 Contrar aşteptărilor noastre icircn populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările
efectuate icircn cele două loturi de studiu (cu şi fără sindom metabolic) nu am evidenţiat
diferenţe statistic seminificative icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα la
subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali
15 Icircn populaţiile de Mo limfocite şi polimorfonucleare am observat corelaţii puternice
semnificativ statistic icircntre expresia PPARα icircn aceste tipuri celulare sugeracircnd existenţa
unui mecanism unic de control al inflamaţiei cronice la nivelul acestor celule probabil
diferit de cel din eozinofile
16 La subiecţii cu SM expresia relativă a PPARα icircn Eo este invers asociată cu expresia
receptorului CD36 (receptor al particulelor de ox - LDL şi propus ca un marker precoce al
aterosclerozei) dovedind rolul antiinflamator al receptorilor PPARα la nivel endotelial
17 La pacienţii cu antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială nivelul de
expresie al receptorilor PPARα icircn eozinofile şi Mo este diminuat comparativ cu subiecţii
fără antecedente familiale de hipertensiune arterială Putem spune că studiul efectuat de
noi aduce informaţii importante legate de geneză aterosclerozei şi hipertensiunii arteriale
18 Prin studiul asocierilor dintre receptorii PPARα şi componentele clinice ale sindromului
metabolic am arătat rolul acestor receptori icircn determinismul obezităţii de tip central
nivelul expresiei relative a receptorilor PPARα fiind invers proporţional cu circumferinţa
abdominală
19 Icircn acelaşi timp nivelul de expresie a PPARα icircn sindromul metabolic este asociat pozitiv
cu concentraţia serică a HDL-colesterolului şi invers asociat cu nivelul trigliceridelor
serice dovedind rolul acestor receptori icircn diminuarea procesului inflamator cronic de la
nivel vascular
20 La pacienţii cu SM scăderea expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofile este corelată cu
creşterea unor markeri ai sindromului inflamator cronic cardiometabolic (acid uric
fibrinogen) ilustracircnd importanta receptorilor icircn reglarea status-ului inflamator cronic din
sindromul metabolic
21 Utilizarea metodei flowcitometrice pentru studiul expresiei relative a receptorilor PPARα
icircn leucocite a adus informaţii importante cu privire la mecanismele moleculare de control
implicate icircn patogenia bolilor cardiometabolice icircn concordanţă cu cercetările care descriu
expresia PPAR icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale bronşice
keratinocite)
BIBLIOGRAFIE SELECTIVA
1 Kahn R Metabolic syndrome- what is the clinical usefulness Lancet 2008371(9628)1892-3
2 Reaven GM The metabolic syndrome is this diagnosis necessary Am J Clin Nutr 2006 83(6)1237-7
3 Grundy SM Pre-Diabetes Metabolic Syndrome and Cardiovascular Risk J Am Coll Cardiol 201259(7)
635-43
4 International Diabetes Federation IDF Diabetes Atlas 6th edn International Diabetes Federation Belgium
Brussels 20131-155
5 World Health Organization Global Status Report on Noncommunicable Diseases 2010 World Health
Organization Geneva Switzerland 20111-176
6 Coman AE Petrovanu R Sindromul metabolic in practica de ambulator Editura Pim Iaşi 2009 1-103
7 Grundy SM Becker D Clark LT et alThird Report of the National Cholesterol Education Program (NCEP)
Expert Panel on Detection Evaluation and Treatment of High Blood Cholesterol in Adults (Adult
Treatment Panel III) Final Report Circulation 2002106(25)3143-90
8 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J Metabolic syndrome- a new worldwide definition A Consensus Statement
from the International Diabetes Federation Diabet Med 2006 23(5)469-80
9 KG Alberti KG Eckel RH Grundy SM etal International Diabetes Federation task force on epidemiology
and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart Association World Heart
Federation International Atherosclerosis Society International Association for the study of obesity
Harmonizing the metabolic syndrome a joint interim statement of the International Diabetes Federation task
force on epidemiology and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart
Association World Heart Federation International Atherosclerosis society and International Association
for the study of obesity Circulation 2009120(16)1640-5
10 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J IDF Epidemiology Task Force The metabolic syndrome new
worldwide definition Lancet 2005 366 1059 - 62
11 Oleszczyk M Svab I Seifert B et al Primary healthcare in the developing part of Europe changes and
development in the former Eastern Bloc countries that joined the European Union following 2004 Med Sci
Monit 2009(15)78ndash84
12 Jung U J Choi M S Obesity and Its Metabolic Complications The Role of Adipokines and the
Relationship between Obesity Inflammation Insulin Resistance Dyslipidemia and Nonalcoholic Fatty
Liver Disease Int J Mol Sci 2014rsquo15(4) 6184-223
13 Vanden Heuvel JP Peters JM Peroxisome Proliferators In Ramos K (ed) Cellular and Molecular
Toxicology (Second Edition) Volume 2 New York Elsevier Science Inc 2010 145 - 67
14 Yessoufou A Wahli W Multifaceted roles of peroxisome proliferator-activated receptors (PPARs) at the
cellular and whole organism levels Swiss Med Wkl 2010140w13071 doi104414smw201013071
15 Azhar S Peroxisome proliferator-activated receptors metabolic syndrome and cardiovascular disease
Future Cardiology 20106(5)657-91
16 Andries G Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity
Diabetes and Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(Suppl)24-32
17 Zandbergen F Plutzky J PPARalpha in atherosclerosis and inflammation Biochim Biophys Acta
20071771(8)972-82
18 Straus DS Glass CK Anti-inflammatory actions of PPAR ligands new insights on cellular and molecular
mechanisms Trends Immunol 200728(12)551-8
19 Zlei M Zugun- Eloae F Carasevici E Citometrie icircn flux - Bază şi clinică Icircn Hinescu ME (ed) Citometrie icircn
flux - principii şi aplicaţii clinice Bucureşti Editura Viaţa Medicală Romacircnească 20111-128
20 Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity Diabetes and
Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(9)24-32
21 Woerly G Honda K Loyens M et al Peroxisome proliferator-activated receptors alpha and gamma down-
regulate allergic inflammation and eosinophil activation J Exp Med 2003198(3)411-21
22 Salle-Saumont D Brenuchon C Kanda A et al Peroxisome proliferator-activated receptor alpha regulates
skin inflammation and humoral response in atopic dermatitis J Clin Allergy Immunology 2008 21(4)962-8
23 Schote A Turner J Schiltz J et al Nuclear receptors in human immune cells expression and correlations
Mol Immunolog 200744(6)1436-45
24 DAmore S Vacca M Graziano G et al Nuclear receptors expression chart icircn peripheral blood
mononuclear cells identifies patients with Metabolic Syndrome Biochim Biophys Acta
20131832(12)2289-301
25 Uthurralt J Gordish-Dressman H Bradbury M T et al PPARalpha L162V underlies variation in serum
triglycerides and subcutaneous fat volume in young males BMC Med Genet 2007855
26 Hiukka A Leinonen ES Jauhiainen M et al Long-term effects of fenofibrate on VLDL and HDL
subspecies icircn participants with type 2 diabetes mellitus Diabetologia 2007 50(10)2067-75
27 Robins SJ Rubins HB Faas FH et alInsulin resistance and cardiovascular events with low HDL
cholesterol The Veterans Affairs HDL Intervention Trial (VA-HIT) Diabetes Care 2003 26(5)1513-7
28 Devaraj S Siegel D Jialal I Statin Therapy in Metabolic Syndrome and Hypertension Post-JUPITER
What is the Value of CRP Curr Atheroscler Rep 2011 13(1) 31ndash42
29 Imperatore G Riccardi G Iovino C et al Plasma Fibrinogen A New Factor of the Metabolic Syndrome A
population-based study Diabetes Care 19982 1(4)649-54
30 Krysiak R Gdula-Dymek A Bachowski R Okopien B Pleiotropic effects of atorvastatin and fenofibrate
in metabolic syndrome and different types of pre-diabete Diabetes Care 201033(10)2266-70
31 Hermans MP Impact of Fenofibrate on Type 2 Diabetes Patients with Features of the Metabolic Syndrome
Subgroup Analysis From FIELD Curr Cardiol Rev 20106(2)112-8
32 Silverstein R Inflammation atherosclerosis and arterial thrombosis Role of the scavenger receptor CD36
Cleveland Clinic Journal of Medicine 200976(Suppl 2)S27-S30
33 Hăncu N Obezitatea In Vereşiu IA (ed) Diabetul zaharat nutritia si bolile metabolice Volume 2 Editura
Echinox Cluj- Napoca 2010 1-15
Lista lucrări publicate
1 Elena Popa Maria Maidaniuc Agnes Bacusca Alamir Diaa Rodica Petrovanu Adorata Elena
Coman Disfuncţia endotelială ndash de la mecanisme moleculare la cuantifi care şi tratament icircn practica
medicală Practica Medicală 20149(3) 109-14
2 Elena Popa Agnes Bacusca Alamir Diaa Maria Maidaniuc Rodica Petrovanu Adorata Elena Coman
The function of insulin receptor (IRF) in evolution of obesity correlation with adipocytes diameters
Archives of the Balkan Medical Union 201449(3) 275-9
3 Elena Popa Florin Zugun-Eloae Mihaela Zlei Daniela Jitaru Oana Maria Pintilie Adorata Elena
Coman Maria Traian Didona Anca Ungureanu Eugen Carasevici - acceptata pentru numarul 42014
Flow cytometry analysis of PPAR-alpha receptors in metabolic syndrome) Revista Romană de
Medicină de Laborator(RRLM-D-14-00034R1- adeverinţa ataşată
183 P=0003) pentru celelalte grupe de vacircrsta nu s-au observat diferenţe semnificative icircntre
sexul feminin şi cel masculin Am observat că după instalarea menopauzei la femei
prevalenţa SM (corespunzătoare Harmonised I) la femei depăşeşte 50 iar la bărbaţi atinge
42 Utilizacircnd European Standard Population (175) am efectuat standardizarea funcţie de
vacircrstă şi sex a prevalenţelor bdquocruderdquo (brute) obţinute icircn populaţia studiată şi am calculat o
prevalenţă standardizată a SM de 2732 (95 CI 2460-3003) La sexul masculin
prevalenţa standardizată a SM a fost de 2760 (95 CI 2362 - 3157) iar la sexul feminin
am obţinut valoarea de 2854 (95 CI 2462 - 3245)
Discuţii
Studiul desfăşurat de noi a investigat prezenţa SM icircn populaţia unui Cabinet de Medicină
de Familie Icircn Europa prevalenţa SM este de aproximativ 25-30 Statele Unite Ale Americii
au raportat o prevalenţă a sindromului metabolic de 22 icircn populaţia cu vacircrsta peste 20 ani
pe cacircnd la vacircrstă mai mare de 60 ani s-a observat o prevalenţă de 44 (1419) Icircn studiul
efectuat am observat o prevalenţă standardizată de 2732 (95 CI 2460-3003) care este
icircn concordanţă cu prevalenţele raportate icircn Europa precum şi o creştere a ponderii SM icircn
populaţie icircn raport cu vacircrsta Am preferat utilizarea definiţiei Harmonised I pentru SM
deoarece cuprinde criterii adaptate pentru o abordare unitară a SM mărind astfel numărul
pacienţilor diagnosticaţi şi care vor urma tratament conform Ghidurilor de Practică Medicală
Limitările acestui studiu sunt legate de faptul că este concentrat doar pe populaţia asigurată şi
neasigurată aflată pe lista unui medic de familie din mediul urban Se pot efectua studii la
nivelul Cabinetelor Medicale de Medicină de Familie dar trebuie să se aplice pe un lot
reprezentativ urbanrural care să reprezinte populația acelei regiuni Utilizarea structurilor
populaționale atașate cabinetului de MF este utilă atacirct pentru cele clinice cacirct și pentru cele
epidemiologice deoarece surprinde populația studiată icircn mediul de viață cotidian Prevalenţa
mare a SM icircn populaţia studiată necesită aplicarea unei politici eficiente de sănătate publică
deoarece riscul producerii evenimentelor cardiovasculare majore poate fi redus semnificativ
printr-un control adecvat al componentelor SM (obezitate dislipidemii hipertensiune
arterială şi hiperglicemie
Studiul sindromului inflamator cronic icircn cadrul sindromului metabolic
Obiectivele studiului
- studierea markerilor inflamaţiei cronice şi aterogenezei la subiecţii cu şi fără SM
- evaluarea importanţei markerilor studiaţi ai inflamaţiei cronice icircn diagnosticul de
ambulator al sindromului metabolic
Material şi metodă
Icircn cercetarea inflamaţiei cronice din SM au fost incluşi 1530 subiecţi de ambele sexe cu
vacircrsta cuprinsă icircntre 18-91 ani icircnscrişi pe lista CMI Popa Elena Studiul s-a desfăşurat icircn
perioada 01012013ndash 31122013 Populaţia ţintă a fost identică cu cea din studiul
epidemiologic şi s-a desfăşurat concomitent cu studiul prevalentei SM Subiecţii au fost
icircmpărţiţi icircn două loturi lotul cu SM (Lot SM) şi lotul de control (fără SM)
Lot SM a) criterii de includerevacircrsta peste 18 ani recrutarea pe baza semnării
Consimţămacircntului liber informat SM diagnosticat pe baza criteriilor Harmonised I (14) b)
criterii de excluderevacircrstă sub 18 anirefuzul semnării Consimţămacircntului liber informat
femei icircn perioada de graviditate sau de lactaţie
Lot Control (fără SM) a) criterii de includerevacircrsta peste 18 anirecrutarea pe baza
semnării Consimţămacircntului liber informat absenţa sindromului metabolic b) criterii de
excluderevacircrstă sub 18 ani refuzul semnării Consimţămacircntului liber informatfemei icircn
perioada de graviditate sau de lactaţie
Rezultate
Lotul cu SM (Lot SM) a fost format din cei 389 pacienţi diagnosticaţi cu SM conform
criteriilor Harmonised I Lotul SM a fost alcătuit din 185 bărbaţi şi 204 femei raportul
bărbaţifemei fiind de 090 (95 CI073-112) Lotul de control (fără SM) a fost alcătuit
din cei 1141 participanţi care nu au icircntrunit criteriile de diagnostic ale sindromului metabolic
Din cei 1141 de subiecţi 530 au fost de sex masculin iar 611 de sex feminin raportul
bărbaţifemei fiind 087 (95 CI 077-097) Vacircrsta subiecţilor a fost semnificativ mai mare
icircn lotul pacienţilor cu SM (5976plusmn1322 ani) comparativ cu lotul martor (4333plusmn 1748 ani) (t-
Test Plt00001) Aşa cum ne-am aşteptat valorile medii ale componentelor clinice ale SM
(circumferinţa abdominală tensiunea arterială sistolică şi diastolică) au fost mai mari icircn lotul
pacienţilor cu SM (t-Test Plt0001 pentru fiecare dintre componente) Studiind parametrii
biochimici incluşi icircn diagnosticul SM valorile medii ale glicemiei şi TG au fost semnificativ
mai crescute icircn lotul SM (t-Test Plt00001 pentru ambele constante) Icircn acelaşi timp
valoarea medie determinată a HDL-col a fost semnificativ mai mare la subiecţii din lotul
martor ( t-Test Plt00001) SM se caracterizează printr-o dislipidemie aterogenă
caracterizată de creşterea TG scăderea HDL-col concomitent cu creşterea LDL-col creşterea
Non-HDL-col şi a raportului de aterogenitate (Col totalHDL-col) (185) Comparacircnd cele
două loturi am observat că valoarea medie a LDL-colesterolului determinată icircn lotul
pacienţilor cu SM a fost semnificativ mai mare faţă de subiecţii din lotul martor (t-Test P =
00002) Măsurarea Non-HDL-colesterolului a arătat prezenţa unei diferenţe semnificative
icircntre cele două loturi (figura 420 B) Astfel icircn concordanţă cu prezenţa dislipidemiei
aterogene valoarea medie a Non-HDL-col a fost semnificativ mai mare (t-Test Plt 00001) icircn
lotul cu SM comparativ cu lotul de control Icircn contextul inflamației cronice şi aterogenezei
din sindromul metabolic am evaluat sensibilitatea şi specificitatea Non-HDL-colesterolului
ca test diagnostic al SM Valoarea Non-HDL-colesterolului care prezice cu cea mai mare
acurateţe prezenţa SM a fost de 151 mgdl (punctul de ldquocut-offrdquo) pentru care am calculat o
sensibilitate de 64 27 şi o specificitate de 5872 Calculul ariei AUC a furnizat valoarea
de 0605 şi deci determinarea concentraţiei serice a parametrului Non-HDL-colesterolului are
valoarea unui marker cu acurateţe redusă Am studiat valorile raportului Col totalHDL-col icircn
cele două loturi şi am constatat că la pacienţii cu SM valoarea media a raportului de
aterogenitate este semnificativ mai mare faţă de valoarea raportului determinată icircn lotul
martor (t-Test Plt 00001) Pentru raportul de aterogenitate studiat analiza curbei ROC a
arătat că valorile mai mari decacirct punctul de ldquocut-offrdquo de 431 prezic prezenţa SM cu cea mai
mare sensibilitate (6381 ) şi specificitate (6582)Valoarea AUC pentru indicele de
aterogenitate a fost de 0667 şi icircn studiul SM acest indice poate fi considerat un marker cu
acurateţe redusă Valoarea medie determinată a acidului uric la subiecţii fără SM a fost
semnificativ mai mică decacirct icircn lotul SM (t-Test Plt 00001) Curba ROC a arătat că valorile
acidului mai mari de 43 mgdl prezic diagnosticul de SM cu cea mai mare sensibilitate
(8107) şi specificitate (5328) Pentru acidul uric AUC a avut valoarea de 0655 şi
icircncadrează determinarea acidului uric seric icircn racircndul testelor cu acurateţe redusă (187)
Comparacircnd populaţiile de leucocite (tabel XXI) valoarea medie determinată a
numărului de Eo a fost semnificativ mai mare icircn lotul cu SM comparativ cu lotul martor (t-
Test Plt0001) Analizacircnd curba ROC trasată pentru valorile numărului de Eo am observat
că valorile ldquocut-offrdquo mai mari de 200 Eomm3
pot prezice prezenta SM cu cea mai mare
specificitate (7705) şi sensibilitate (3978) Pentru diagnosticul SM calculul ariei AUC a
arătat faptul că determinarea numărului de Eo are valoarea unui test diagnostic cu acurateţe
redusă (AUC = 0 589) Comparacircnd valorile medii ale fibrinogenului am calculat o diferenţă
statistic semnificativă icircntre cele două loturi valoarea medie a fibrinogenului fiind mai mare icircn
lotul SM ((t-Test P lt 00001) Cu ajutorul curbei ROC am observat că valorile fibrinogenului
mai mari de 306 mgdl prezic sindromul metabolic cu o sensibilitate de 7511 şi specificitate
de 6056 Fibrinogenul a fost icircncadrat icircn categoria markerilor inflamatori cu acurateţe
redusă AUC avacircnd valoarea de 0690 Icircn loturile de studiu am calculat AUC corespunzătoare
criteriilor de diagnostic ale SM Am observat că icircn cazul scorului Harmonised I
sensibilitatea şi specificitatea sunt de 100 iar AUC este egală cu 1000 Pentru cele cinci
criterii de diagnostic AUC a avut valori icircntre 0636 (pentru variabila HDL-col) şi 0804
(pentru variabila CA) (figura 431)
AUC ES 95 CI
Scor SM Harmonised I 1000 00000 0997 - 1000
CA (cm) 0804 00133 0781 - 0825
TAD (mmHg) 0666 00169 0639 - 0692
TAS (mmHg) 0757 00148 0732 - 0780
Glicemie (mgdl) 0742 00160 0717 - 0766
Trigliceride (mgdl) 0756 00175 0732 - 0780
HDL- colesterol 0636 00183 0609 - 0662
Figura 431 Analiza AUC criterii de diagnostic ale SM
Studiind figura 432 se observă că valoarea AUC pentru markerii studiaţi este cuprinsă
icircntre 0589 (icircn cazul variabilei Eo) şi 0690 (icircn cazul fibrinogenului) Icircn contextul SM
acurateţea acestor markeri ai inflamaţiei cronice şi disfuncţiei endoteliale poate fi considerată
redusă deoarece AUClt07 pentru toţi markerii investigaţi (figura 431) Totuşi valorile ariilor
parametrilor reprezentaţi icircn figura 431 sunt apropiate de valorile AUC ale variabilelor TAD
şi HDL-col (figura 432) şi deci pot fi utilizaţi pentru completarea diagnosticului de SM
AUC ES 95 CI
Non-HDL-colesterol 0605 00171 0580 - 0630
Col totalHDL-col 0607 00163 0642 - 0691
Acid uric 0655 00161 0630 - 0679
Fibrinogen 0690 00206 0658 - 0720
Eozinofile 0589 00176 0564 - 0615
Figura 432 AUC markeri ai SM inflamaţiei cronice şi aterogenezei
Discuţii
Status-ul proinflamator din SM asociat cu insulinorezistenţa şi disfuncţia endotelială
constituie o verigă de legătură dintre inflamaţie şi procesele metabolice complexe icircnsoţindu-
se de deteriorarea funcţiilor vasculare şi creşterea riscului de evenimente cardiovasculare
majore (2858) Studiul efectuat a arătat o diferenţă icircntre vacircrstele subiecţilor din cele două
loturi vacircrsta pacienţilor cu SM fiind semnificativ mai mare (Plt0001) comparativ cu subiecţii
normali confirmacircnd faptul menţionat că vacircrsta reprezintă unul din stimulii care agravează
inflamaţia cronică Am arătat că valorile fibrinogenului sunt mai mari icircn SM comparativ cu
Scor Harmonised I
0 20 40 60 80 100
0
20
40
60
80
100
100-Specificitate
Sen
sib
ilit
ate
Criterii diagnostic SM
0 20 40 60 80 100
0
20
40
60
80
100
100-Specificitate
Sens
ibili
tate
CA
TAD
TAS
Glicemie
Trigliceride
HDL-C
0 20 40 60 80 100
0
20
40
60
80
100
100-Specificitate
Sensi
bilita
te
Non-HDL-C
Col T HDL-C
Acid uric
Fibrinogen
Eozinofile
lotul martor atacirct la bărbaţi cacirct şi la femei icircn concordanţă cu studiile anterioare Evaluarea
fibrinogenului este importantă nu numai icircn SM pentru definirea contextului proinflamator şi
protrombotic ci şi icircn predicţia cardiovasculară la subiecţii normali Studiind populaţiile
leucocitare am obţinut diferenţe semnificative icircn cazul Eo valoarea medie a acestora fiind
semnificativ mai mare icircn lotul cu SM comparativ cu lotul martor (P lt 0001 figura 425B)
Implicarea Eo icircn SM s-a conturat icircn ultimul deceniu aceste celule fiind implicate icircn recrutarea
macrofagelor din ţesutul adipos Experimental s-a constatat că o creştere a Eo apărută ca
urmare a infectării cu helminţi sau stimulare cu IL-5 este urmată de icircmbunătăţirea toleranţei la
glucoză (199) Controlul pe care icircl exercită Eo asupra activării macrofagelor ar putea fi cheia
intervenţiei asupra obezităţii icircn viitorul apropiat(165199) Hiperuricemia asociata frecvent cu
SM este cunoscut ca un factor independent de risc cardiovascular (192 202) In concordanţă
cu aceasta afirmaţie in studiul nostru am constatat ca nivelul seric al acidului uric a fost mai
crescut in lotul cu SM diferenţa semnificativă din punct de vedere statistic (P lt 00001)
Dislipidemia aterogenă din sindromul metabolic şi diabetul zaharat se caracterizează prin
creşterea trigliceridelor şi a Non-HDL-col scăderea HDL-col creşterea numărului de
particule LDL modificate (185190) La pacienţii cu SM am descris un profil aterogenetic
cu risc crescut de evenimente cardiovasculare majore
STUDIUL RECEPTORILOR ACTIVAŢI DE INDUCTORII PROLIFERĂRII
PEROXIZOMILOR-ALPHA IcircN LEUCOCITELE CIRCULANTE
Ipoteza de lucru
Studii experimentale efectuate au arătat că rolul PPARα icircn ateroscleroză derivă din
implicarea acestor receptori icircn limitarea inflamaţiei Plecacircnd de la acest fundament ne-am
propus evidenţierea receptorilor nucleari activaţi de inductorii proliferării peroxizomilor-
alpha (PPARα) prin citometrie de flux icircn leucocitele din sacircngele periferic alături de
evaluarea acestei metode icircn cuantificarea expresiei relative a PPARα ca test diagnostic
precoce al modificărilor metabolice SM Studiul expresiei relative a receptorilor PPARα a
plecat de la premisa că dacă SM se caracterizează printr-un status inflamator cronic nivelul
de expresie a PPARα icircn leucocitele circulante este mai scăzut la pacienţii cu SM comparativ
cu subiecţii normali Referitor la studiul receptorului CD36 am plecat de la presupunerea că
nivelul de expresie al acestui receptor icircn SM este crescut dat fiind importanţa acestui receptor
icircn inflamaţia aterosclerotică Avacircnd icircn vedere efectele receptorilor amintiţi icircn
insulinorezistenţă şi aterogeneză am considerat necesară evaluarea prezenţei receptorului
nuclear PPARα icircn paralel cu studiul receptorului bdquoscavengerrdquo CD-36 prin metoda citometriei
icircn flux Astfel icircn studiul efectuat mi-am propus şi investigarea existenţei unei legături icircntre
nivelul de expresie al receptorilor PPARα şi cel al receptorului CD-36 De asemenea ne-am
icircndreptat atenţia spre stabilirea unor asocieri icircntre componentele clinice şi biochimice ale
sindromului metabolic şi nivelul intensităţilor de fluorescenţă ale PPARα şi CD-36 ca măsură
a expresiei relative a acestor receptori
Material și metodă
Studiul receptorilor PPARα icircn contextul sindromului metabolic s-a desfăşurat icircn
perioada 1012014 -28022014 pe baza metodologiei studiilor de tip caz-martor Am urmărit
identificarea unor diferenţe icircntre expresia receptorilor PPARα la pacienţii cu SM comparativ
cu subiecţii sănătoşi diferenţe care ar putea fi utile icircn diagnosticul precoce al SMRecrutarea
pacienţilor s-a efectuat din pacienţii prezentaţi pentru consultaţie la Cabinetul Individual
ldquoCMI Dr Popa Elenardquo situat icircn strada Ion Creanga din Iaşi Pentru studiul receptorilor
PPARα icircn sindromul metabolic au fost selecţionaţi un număr de 57 de subiecţi 26 de subiecţi
cu SM (constituind lotul SM) şi 31 subiecţi fără SM constituind lotul de control (Lot Non-
SM) Pentru studiul SM pacienţii au fost recrutaţi din masa de populaţie arondată cabinetului
de MF fără istoric de SM diabet zaharat boală cardio-vasculară aflați la primul diagnostic
de SM evaluarea completă a acestora fiind urmată de includerea icircn programul de
management cardiovascular şi metabolic conform Ghidurilor Terapeutice aflate icircn vigoare
Lot SM a) criterii de includerevacircrsta peste 18 ani recrutarea pe baza semnării
Consimţămacircntului liber informatSM nou-diagnosticat pe baza prezenţei a minim trei criterii
de diagnostic pentru SM conform Harmonised I b) criterii de excluderevacircrstă sub 18 ani
refuzul semnării Consimţămacircntului liber informat femei icircn perioada de graviditate sau de
lactaţie SM anterior diagnosticat istoric de diabet zaharat boală cardiovasculară constituită
tratament cu agonişti PPARα (ie fibraţi etc)
Lot martor (Non-SM) a) criterii de includerevacircrsta peste 18 ani recrutarea pe baza
semnării Consimţămacircntului liber informat absenţa diagnosticului de SM b) criterii de
excludere vacircrstă sub 18 ani refuzul semnării Consimţămacircntului liber informat femei icircn
perioada de graviditate sau de lactaţie
Studiul receptorilor PPARα a inclus două subetape
A Studiul componentelor sindromului metabolic conform criteriilor Harmonised I
Evaluarea clinică a participanţilor s-a desfăşurat icircn cadrul Cabinetului de Medicină de
Familie iar determinările hematologice şi biochimice s-au efectuat icircn Laboratorul
Ambulatorului Clinic de Specialitate al Spitalului Clinic de Urgenţă bdquoSf Spiridonrdquo Iaşi
B Evaluarea icircn citometrie de flux a nivelului relativ de expresie a PPARα şi CD36
Studiul receptorilor PPARα s-a desfăşurat icircn Laboratorul de Biologie Moleculară al
Institutului Regional de Oncologie Iaşi prin metoda citometriei icircn flux (19) Nivelul relativ de
expresie al receptorilor nucleari PPARα a fost determinat icircn diferite tipuri de leucocite
circulante polimorfonucleare (PMN) limfocite (Ly) Mo(Mo) şi eozinofile(Eo) Am utilizat o
metodă de citometrie icircn flux optimizată ldquoin houserdquo elaborată icircn cadrul Laboratorului de
Biologie Moleculară al IRO Iaşi Icircn cursul procesului de optimizare am testat mai multe
concentraţii ale anticorpului anti-PPARα 1100 1500 11500 14500 iar icircn urma
determinărilor efectuate şi a analizei statistice concentraţia 1500 a fost considerată optimă
pentru desfăşurarea studiului (tabel XXIII figura 51)
Tabel XXIII Optimizarea concentraţiilor Ac anti-PPARα Diferenţa
mediilor
valorilor
medii
PMN
Diferenţa
mediilor
mediane-
lor
PMN
Diferenţa
mediilor
valorilor
medii
Ly
Diferenţa
mediilor
mediane-
lor
Ly
Diferenţa
mediilor
valorilor
medii
Mo
Diferenţa
mediilor
mediane-
lor
Mo
Diferenţă 0 1300 1600 100 100 700 750
normal - 1100 650 1050 1050 1350 450 900
patologic 1500 2850 2750 3800 3600 2850 2400
11500 -1050 800 3500 3300 2250 1800
14500 2200 2150 1300 1100 2950 2850
AOptimizare
BRepetabilitate
Figura 51 Optimizarea concentraţiei anticorpului anti-PPARα
Icircn concordanţă cu literatura de specialitate icircn cercetarea efectuată intensitatea medie
de fluorescenţă (MFI) a fost utilizată ca măsură pentru evaluarea expresiei celulare a
receptorilor PPARα (212) Un exemplu de analiză a probelor este reprezentat icircn figura 52
Figura 52 Exemplu de analiză flowcitometrică pentru receptorul nuclear PPARα Graficul din stacircnga reprezintă distribuţia leucocitelor iar cel din dreapta ilustrează distribuţia
intensităţii de fluorescenţă pentru populaţiile de celule selectate
Intensitatea Medie a Fluorescenţei (MFI) a CD36 ca o măsură a nivelului relativ de
expresie a acestor receptori la nivelul membranei Mo a fost detectată printr-o metodă
convenţională pentru marcare de suprafaţă şi evaluare pe bază de citometrie icircn flux folosind
aceleaşi probe de sacircnge cu EDTA cu focalizare pe Mo şi utilizacircnd CD14 ca marker specific
pentru Mo (figura 53)
Figura 53Analiza
flowcitometrică
pentru marcajul
CD14 - CD36
Rezultate
Icircn cele două loturi au fost incluşi icircn studiu un număr de 57 de participanţi care au fost
investigaţi din punct clinic şi paraclinic Vacircrsta subiecţilor incluşi icircn studiu a fost cuprinsă
icircntre 18 şi 79 ani iar vacircrsta medie calculată a avut valoarea de 4805 plusmn 1587 ani Pentru sexul
masculin vacircrsta medie este de 4925plusmn1617 ani iar pentru sexul feminin 4689 plusmn1 5ani
diferenţa obţinută icircntre vacircrstele pacienţilor fiind statistic nesemnificativă (P = 085)
Analizacircnd vacircrstele subiecţilor din cele două loturi am observat că vacircrsta medie a pacienţilor
cu SM (5476 plusmn 1183 ani) a fost semnificativ mai mare (t-test P = 0003) decacirct icircn lotul
martor (4258 plusmn 169 ani) Pentru diagnosticul sindromului metabolic am calculat scorul de
SM bazacircndu-ne pe criteriile Harmonised I Conform criteriilor diagnostice din cei 57 de
subiecţi investigaţi un număr de 26 participanţi (46) au fost incluşi icircn lotul cu SM (Lot
SM) iar 31 de subiecţi(54) nu au prezentat acest sindrom constituind lotul martor (Lot
Non-SM) Din punct de vedere al repartiţiei pe sexe nu au existat diferenţe statistic
semnificative raportul bărbaţifemei fiind de 0961 Din totalul celor 28 de bărbaţi incluşi icircn
studiu 4285 (12 bărbaţi) au icircntrunit cel puţin trei criterii diagnostice pentru SM fiind
incluşi icircn lotul SM Icircn acelaşi timp 14 femei reprezentacircnd 4827 din subiecţii de sex
feminin au icircntrunit condiţiile pentru includerea icircn lotul pacienţilor cu SM Valoarea medie
determinată pentru scorul de SM a arătat prezenţa unor valori semnificativ statistic mai mari
din punct (t-test P lt 00001) icircn lotul SM (769plusmn176) comparativ cu lotul martor (174 plusmn
184) Am studiat comparativ media valorilor măsurate ale criteriilor componentelor SM
Analiza statistică a arătat valori semnificativ statistic mai mari pentru CA TG glicemie TAS
şi TAD (plt0001) icircn lotul SM comparativ cu lotul normal Concomitent calculul statistica
evidenţiat o scăderea semnificativă a HDL-colesterolului icircn lotul cu SM comparativ cu
subiecţii din lotul martor (Non-SM) Aplicacircnd testul z am comparat ponderea pacienţilor
diagnosticaţi cu HTA dislipidemie şi tulburări ale metabolismului glucidic icircn lotul SM versus
lot Non-SM şi am constatat prezenţa acestor afecţiuni icircntr-un procent mai mare semnificativ
statistic icircn lotul SM ((plt0001)
Utilizacircnd testul t Student am calculat diferenţele statistice şi icircntre alți parametri
studiaţi care sunt factori de risc cardio-vascular dar care nu sunt componente ale SM Icircn lotul
cu SM valorile acidului uric fibrinogenului Col total Non-HDL-col şi LDL-col au fost
semnificativ mai mari comparativ cu lotul martor (tabel XXVI) Analizacircnd valorile medii ale
populaţiilor de leucocite am identificat doar pentru populaţia de Eo diferenţe statistice icircntre
cele două loturi numărul Eo icircn lotul SM fiind semnificativ mai mare decacirct icircn lotul martorTot
pentru caracterizarea celor două loturi am analizat prezenţa antecedentelor
heredocolaterale (AHC) de diabet zaharat boala cardiovasculară şi dislipidemie pentru toţi
subiecţii investigaţi Astfel existenţa AHC de HTA a fost declarată de 2580 din subiecţii
incluşi icircn lotul martor respectiv de 5384 din numărul pacienţilor cu SM Antecedentele
heredocolaterale de dislipidemie au fost prezente la 3461 din pacienţii cu SM icircn timp ce icircn
lotul martor anamneza a evidenţiat aceste antecedente la 3548 din subiecţi
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα
Icircn cercetarea desfăşurată am utilizat intensitatea medie de fluorescenţă (MFI) ca
măsură a nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn leucocitele studiate Pentru
populaţiile de leucocite analiza computerizată a probelor luate icircn studiu a furnizat valori
pentru MFI a receptorilor PPARα icircn funcţie de cantitatea de anticorpi anti-PPARα marcaţi cu
fluorocrom care se leagă de aceste celule şi apoi sunt captaţi de citometru (figura 59)
A Lot Non - SM
B Lot SM
Figura 59 Analiza flowcitometrică pentru receptorii PPARα icircn leucocite A lot normal B lot SM
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Mo
Analiza probelor efectuată conform protocolului de lucru descris a arătat prezenţa
PPARα icircn Mo recoltate din sacircngele tuturor subiecţilor incluşi icircn această cercetare Pentru toţi
participanţii investigaţi analiza MFI a Ac anti - PPARα icircn populaţia de Mo (Mo) a arătat un
interval de variaţie icircntre [786 395] Valoarea medie a nivelului de expresie relativă a PPARα
calculată pentru Mo a fost de 23210 plusmn7860 Pentru ambele loturi de studiu pacienţilor cu
SM testul Testul Shapiro-Wilk a arătat distribuţia normală a valorilor obţinute pentru nivelul
de expresie al PPARα icircn Mo
Tabel XXVIII Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn Mo
Lot SM Lot Non-SM
N 26 31
Media 22819 23538
SD 5819 7717
Mediana 22400 22600
Minimum 12800 78600
Maximum 35800 37900
Percentila 25 18300 18300
Percentila 75 26200 30350
Pentru pacienţii din lotul SM valoarea medie a MFI icircn Mo a fost de 22819 plusmn 5880 iar
pentru lotul martor s-a calculat o valoare medie a MFI a Ac anti-PPARα de 23538 plusmn 7717
Distribuţia statistică a frecvenţei valorilor MFI obţinute pentru nivelul de expresie a PPARα
icircn Mo subiecţilor din cele două loturi a fost reprezentată icircn figura 511
Figura 511 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti-PPARα icircn Mo
Sub forma unei diagrame de control Shewhart am reprezentat variaţia intensităţii medii de
fluorescenţă pentru anticorpii anti-PPARα icircn MoVariaţia nivelului de expresie relativă a
receptorilor PPARα icircn Mo subiecţilor studiaţi este ilustrată icircn fig 512 513
Figura 512 Lot SM Variaţia
expresiei relative a PPARα icircn Mo
Număr pacienţi
26
Minim 128
Maxim 358
Media 22819
DS 5819
25 din 26 valori ale MFI s-au icircncadrat
icircn intervalul Media plusmn 2DS
Figura 513 Lot Non-SM Variaţia
expresiei relative a PPARα icircn Mo
Număr pacienţi 31
Minimum 786
Maximum 379
Media 23538
DS 7717
Cu excepţia unei singure
determinări valorile calculate s-au
icircncadrat icircn Media plusmn 2DS
Utilizacircnd testul parametric t-Student pentru variabilele cu distribuţie normală am
comparat valoarea medie a intensităţii de fluorescenţă a Ac anti-PPARα icircn lotul cu SM versus
subiecţi fără SM (Lot Non-SM) Analiza statistică efectuată nu a identificat diferenţe icircntre
50 100 150 200 250 300 350 400 450
0
5
10
15
20
25
30
35
MFI anti-PPAR a
Frecv
enta
relati
va (
)
Lot SM
0 50 100 150 200 250 300 350 400 450 500
0
5
10
15
20
25
30
35
MFI anti-PPAR a
Frecv
enta
relati
va (
)
Lot martor
1 6 11 16 21 26 31
0
50
100
150
200
250
300
350
400
450
MFI
anti-
PPAR
a
2282
1106
3458
518
4046
Media
LCI
LCI
1 6 11 16 21 26 31 36
-100
0
100
200
300
400
500
MFI a
nti-PP
AR
a
2354
810
3897
39
4669LCS
LCI
Media
cele două loturi icircn ceea ce priveşte expresia PPARα la nivelul Mo circulante (t- Test P=
069)
Studiul receptorilor PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de AHC şi dislipidemie
Nivelul de expresie al receptorilor PPARα α icircn Mo tinde să fie mai scăzut la subiecţii
cu AHC de HTA comparativ subiecţii care nu au declarat AHC de HTA (P= 006 fig 515)
AHC HTA
Număr 22
Mediana 19950
Percentila 25 17800
Percentila 75 22700
AHC HTA absente
Număr 35
Mediana 24800
Percentila 25 19025
Percentila 75 31700
Figura 515 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Mo funcţie de AHC de HTA
Nu s-au calculat diferenţe semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor
PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de dislipidemie atunci cacircnd aceştia au fost comparaţi cu
subiecţii fără AHC de tulburări ale metabolismului lipidic (t- Test P= 020)
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn limfocite
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn populaţia de Ly a
demonstrat prezenţa receptorilor PPARα icircn Ly tuturor subiecţilor studiaţi Pentru toţi
participanţii investigaţi analiza MFI a Ac anti - PPARα icircn populaţia de Ly a relevat un
interval de variaţie icircntre [748 314] iar valoarea medie a MFI a fost de 18058 plusmn 5600
Pentru ambele loturi aplicarea testului Shapiro-Wilk a evidenţiat distribuţia normală a
valorilor determinate pentru nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Ly Pentru
pacienţii cu SM valoarea medie a MFI determinată pentru expresia PPARα icircn populaţia de
Ly a fost de 18178 plusmn 61 16 iar pentru lotul martor a fost de 16800 plusmn 5229
Tabel XXX Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn limfocite
Lot SM Lot Non-SM
N 26 31
Media 181781 179574
SD 611694 522907
Mediana 165000 168000
Minimum 81300 74800
Maximum 314000 301000
Percentila 25 13400 - 145750
Percentila 75 21800 21700
Distribuţia frecvenţei valorilor MFI a Ac anti-PPARα icircn Ly este redată icircn figura 518
Figura 518 Distribuţia frecvenţelor relative a MFI a Ac anti-PPARα icircn Ly
94 din determinările efectuate pentru determinarea nivelului de expresie relativă al
MFI
ant
iPPA
R
a_Mo
190
200
210
220
230
240
250
260
270
280
DA NU
AHC HTA
P=006
50 89 128 167 206 244 283 322 361 400
0
5
10
15
20
25
30
35
MFI anti-PPAR a
Frecv
enta
relati
va (
)
Lot SM
0 50 100 150 200 250 300 350
0
5
10
15
20
25
30
35
40
MFI anti-PPAR a
Frec
venta
relat
iva (
)
Lot Non-SM
receptorilor PPARα icircn limfocitele subiecţilor cu SM s-au icircncadrat icircn intervalul Media plusmn 2DS
Figura 5 19 Lot SM Variaţia expresiei
relative a PPARα icircn Ly
Număr pacienţi 26
Minimum 813
Maximum 31400
Media 18178
Deviaţia Standard 6116
25 valori s-au icircncadrat icircn Media plusmn 2DS
Pentru lotul Non-SM diagrama de control (figura 520) a arătat toate valorile
determinate pentru lotul Non-SM se icircncadrează icircntre LCS şi LCI
Figura 520 Lot Non -SM Variaţia
expresiei relative a PPARα icircn Ly
Număr pacienţi 31
Minimum 748
Maximum 30100
Media 179574
Deviaţia Standard 5229
96 din valori icircncadrate icircn Media plusmn 2DS
Aplicarea testului t-Student pentru valorile medii ale intensităţii de fluorescenţă ale
PPARα icircn Ly nu a arătat existenţa unei diferenţe statistic semnificative icircntre lotul cu SM şi
lotul martor(t- Test P= 088)
Analiza receptorilor PPARα icircn Ly subiecţilor cu AHC de HTA şi dislipidemie
Studiind populaţiile de Ly la subiecţii care au prezentat AHC de hipertensiune
arterială analiza flowcitometrică a relevat existenţa unor valori mai mici pentru MFI la aceşti
subiecţi comparativ cu cei fără AHC de HTA (fig 522) deşi scăderea observată nu a
icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică (t- Test P = 009)
AHC HTA
Număr 22
Mediana 16000
Percentila 25 12700
Percentila 75 17100
AHC HTA absenţe
Număr 35
Mediana 18700
Percentila 25 14900
Percentila 75 23175
Figura 522 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Ly funcţie de AHC de HTA
Nu am calculat diferenţe statistic semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor
PPARα icircn populaţiile de Ly ale subiecţilor la care am identificat AHC de dislipidemie
comparativ cu cei care nu au declarat antecedente familiale de dislipidemie (t- Test P= 051)
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn neutrofile (PMN)
Analiza flowcitometrică a evidenţiat prezenţa PPARα icircn PMN recoltate din sacircngele
venos al tuturor participanţilor la studiu Pentru toţi subiecţii investigaţi analiza MFI a Ac -
PPARα icircn populaţia de PMN a relevat un interval de variaţie de [163419] iar valoarea medie
a MFI pentru Ac anti-PPARα a fost de 26392 plusmn 7064 Testul Shapiro-Wilk a arătat o
distribuţie normală a valorilor intensităţii medii de fluorescenţă a anticorpilor anti-PPARα atacirct
icircn lotul pacienţilor cu SM cacirct şi icircn lotul martor
1 6 11 16 21 26 31
-50
0
50
100
150
200
250
300
350
400
MFI
anti-
PPAR
a
1818
595
3041
-17
3653
Media+2DS
Media- 2DS
1 6 11 16 21 26 31 36
0
50
100
150
200
250
300
350
MFI
ant
i-PPA
R
a
1796
750
2841
227
3364
Media+2DS
Media
Media- 2DS
MFI
anti-
PPAR
a Ly
130
140
150
160
170
180
190
200
210
DA NU
AHC HTA
P=009
Tabel XXXII Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn PMN
Lot SM Lot Non-SM
N 26 31
Media 26273 26480
SD 6915 7088
Mediana 25900 25500
Minimum 17200 16300
Maximum 39500 41900
Percentila 25 19800 19600
Percentila 75 30500 31500
Icircn cele două loturi distribuţia frecvenţei valorilor nivelului relativ de expresie a
receptorilor PPARα icircn PMN a fost reprezentată sub formă de histograme (fig 525)
Figura 525 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti-PPARα icircn PMN
Pentru cei 26 de pacienţi din lotul cu SM a valoarea medie a nivelului de expresie
relativă a receptorilor PPARα icircn PMN a fost de 26273 plusmn 6915 Studiind diagrama Shewhart
din figura 526 se observă că toate valorile obţinute pentru nivelul de expresie relativă
PPARα icircn PMN investigate se icircncadrează icircntre limitele definite de valorile medii plusmn 2DS
Figura 526 Lot SM
Variaţia expresiei relative a PPARα icircn
PMN
Număr pacienţi 26
Minimum 17200
Maximum 39500
Media 26273
Deviaţia Standard 6915
Valorile MFI icircncadrate icircn Media plusmn 2DS
Pentru lotul martor valoarea medie calculată a MFI a anticorpilor anti-PPARα a fost de
26480 plusmn 7088 peste 95 din valorile MFI fiind cuprinse icircn Media plusmn 2DS (figura 527)
Figura 527 Lot Non-SM Variaţia expresiei
relative a PPARα icircn PMN
Număr pacienţi 31
Minimum 16300
Maximum 41900
Media 26480
Deviaţia Standard 7088
30 valoriicircn Media plusmn 2DS
Pentru PMN analiza statistica nu a arătat existenţa unei diferenţe statistic semnificative icircntre
nivelul de expresie relativă a PPARα la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii din lotul
Non-SM (t- Test P= 090) Studiind populaţiile de PMN la subiecţii care au prezentat AHC
de HTA nu am calculat o diferenţă statistic semnificativă icircntre expresia receptorilor PPARα
la subiecţii cu istoric familial de hipertensiune arterială comparativ cu cei pentru care nu s-au
notat AHC de HTA (t- Test P= 013)De asemenea am identificat diferenţe icircntre nivelul de
expresie al PPARα icircn PMN subiecţilor care prezentau AHC de dislipidemie comparativ cu
cei fără AHC de dislipidemie (t- Test P= 017)
50 100 150 200 250 300 350 400 450 500
0
5
10
15
20
25
30
35
MFI anti-PPAR a
Frecve
nta rel
ativa (
)
Lot SM
50 100 150 200 250 300 350 400 450 500
0
5
10
15
20
25
30
MFI anti-PPAR a
Frecv
enta
relati
va (
)
Lot Non-SM
1 6 11 16 21 26 31
0
50
100
150
200
250
300
350
400
450
500
MFI
anti-
PPA
R
a
2627
1244
4010
553
4702
Media + 2DS
Media - 2 DS
Media
1 6 11 16 21 26 31 36
0
50
100
150
200
250
300
350
400
450
500
MFI
anti-
PPAR
a
2648
1230
4066
522
4774
Media+ 2DS
Media - 2DS
Media
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile Tabel XXXIV Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn Eo
Lot SM Lot Non-SM
N 26 31
Mediaplusmn SD 141057 plusmn 47604 172209 plusmn 37565
Mediana 142450 171300
Minimum 35000 68500
Maximum 233700 250600
Percentila 25 119300 153225
Percentila 75 169700 199550
Am studiat nivelul relativ de expresie a receptorilor PPARα icircn Eo iar rezultatele au
fost figurate sub forma de histograme (figura 532)
Figura 532 Distribuţia frecventelor relative ale valorilor MFI anti- PPARα icircn Eo
Din diagrama Shewhart (figura 533) se observă că toate valorile determinate pentru
nivelul de expresie relativă a PPARα icircn Eo pentru lotul SM s-au icircncadrat icircn [Media plusmn 3 DS]
peste 90 din determinări fiind cuprinse icircn [Media plusmn 2 DS] iar icircn [Media plusmn 1 DS] sunt
incluse peste 65 din valorile MFI
Figura 533 Lot SM
Variaţia expresiei relative a PPARα icircn Eo
Număr pacienţi 26
Minimum 35000
Maximum 233700
Media 141057
Deviaţia Standard 47604
24 valori icircncadrat eicircn [Media plusmn 2DS]
Pentru subiecţii incluşi icircn lotul martor analiza diagramei (figura 534) a arătat că
toate cele 31 de valori ale MFI pentru PPARα icircn Eo se icircncadrează icircn [Media plusmn 3DS] iar 30
dintre acestea se icircncadrează icircn [ Media plusmn 2 DS]
Figura 534 Lot Non -SM
Variaţia expresiei relative a PPARα icircn Eo
Număr pacienţi 31
Minimum 685
Maximum 2506
Media 172209
Deviaţia Standard 375 65
30 valori icircncadrate icircn [Media plusmn 2DS]
Comparacircnd subiecţii cu SM cu cei din lotul martor am observat o scădere
semnificativă statistic a MFI a Ac anti - PPARα icircn Eo pentru pacienţiir cu SM ( figura 535)
PPARα Eo Lot Non-SM
Număr 31
Mediana 171300
Percentila 25 152325
Percentila 75 199550
PPARα Eo Lot SM
Număr 26
Mediana 142450
Percentila 25 119300
Percentila 75 169700
Figura 5 35 Comparaţie icircntre nivelul de expresie a PPARα icircn Eo
0 500 1000 1500 2000 2500 3000
0
10
20
30
40
50
MFI anti-PPAR a
Frecvent
a relativa
()
Lot SM
400 800 1200 1600 2000 2400 2800
0
5
10
15
20
25
30
35
40
45
MFI anti-PPAR a
Frecenta
relativa
()
Lot Non-SM
1 6 11 16 21 26 31
-500
0
500
1000
1500
2000
2500
3000
MFI a
nti-PP
AR
a
14106
4765
23447
94
28117
Media + 2DS
Media- 2DS
LCI
LCS
1 6 11 16 21 26 31 36
500
1000
1500
2000
2500
3000
MFI an
ti-PPA
R a
17221
9708
24734
5951
28490
LCI
Media-2DS
Media
Media +2 DS
LCS
1200
1300
1400
1500
1600
1700
1800
1900
Lot SM Lot Non-SM
P=00072
Cu ajutorul curbei ROC am evaluat posibilitatea utilizării MFI a Ac anti - PPARα icircn
Eo ca marker pentru diagnosticul SM Valoarea MFI a Ac anti - PPARα icircn Eo care prezice cu
cea mai mare acurateţe prezenţa SM a fost de 1533 (punctul de ldquocut-offrdquo) pentru care am
calculat o sensibilitate de 5652 şi o specificitate de 7778 Calculul ariei AUC a furnizat
valoarea de 0663 şi deci determinarea parametrului MFI anti- PPARα icircn Eo are valoarea
unui test cu acurateţe redusatilde icircn diagnosticul SM Studiind expresia PPARα icircn Eo la subiecţii
care au prezentat AHC de HTA am observat o scădere semnificativă statistic (P = 00023) a
expresiei PPARα la subiecţii cu istoric familial de HTA comparativ cu subiecţii fatilderatilde AHC de
HTA (figura 537)
AHC HTA
Număr 22
Mediana 148800
Percentila 25 116425
Percentila 75 170750
AHC HTA absente
Număr 35
Mediana 170850
Percentila 25 143700
Percentila 75 195000
Figura 537 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Eo funcţie de AHC de HTA
Studiind subiecţii cu AHC declarate de dislipidemie nu am identificat diferenţe icircntre
nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Eo subiecţilor cu AHC de dislipidemie
comparativ cu cei care nu au declarat prezenţa AHC de dislipidemie (t - Test P = 067)
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor CD36
Am studiat expresia receptorilor CD36 icircn Mo subiecţilor incluşi icircn studiu
Lot Non - SM
BLot SM
Figura 539 Analiza flowcitometrica pentru receptorii CD36 icircn Mo
Pentru toţi participanţii la studiu valorile MFI au variat icircn intervalul [817 6933] iar
valoarea medie a MFI a Ac anti-CD36 a fost de 397133 plusmn 120902 Tabel XXXVII Statistică descriptivă pentru a CD36 icircn Mo
Lot SM Lot Non-SM
Media 429034 370377
Deviatia Standard 109051 125514
Mediana 411000 362800
Minimum 266400 81700
Maximum 693300 616800
Percentila 25 346200 273750
Percentila 75 469000 453300
Distribuţia frecvenţelor relative a MFI au fost prezentate sub formă histogramelor
Figura 541 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti - CD36 icircn Mo
MFI
ant
i-PPA
R a Eo
1000
1100
1200
1300
1400
1500
1600
1700
1800
1900
DA NU
AHC HTA
P=00023
1000 2000 3000 4000 5000 6000 7000 8000
0
5
10
15
20
25
MFI anti-CD36
Frecve
nta rela
tiva (
)
Lot SM
0 1778 3556 5333 7111
0
5
10
15
20
25
30
35
MFI anti-CD36
Frecve
nta rel
ativa (
)
Lot Non - SM
Referitor la lotul SM 92 din valorile MFI a Ac anti- CD36 s-au icircncadrat icircn
intervalul Media plusmn 2 DS (figura 542) iar pentru lotul martor peste 90 dintre acestea icircn
Media plusmn 2 DS (figura 543)
Figura 542 Lot SM
Variaţia MFI anti-CD36 icircn Mo
Număr pacienţi 26
Minimum 2664
Maximum 6933
Media 429034
Deviaţia Standard 109051
Figura 543 Lot Non -SM
Variaţia MFI anti- CD36 icircn Mo
Număr 31
Minimum 81700
Maximum 616800
Media 370377
Deviaţia Standard 125514
Comparacircnd subiecţii cu SM cu cei din lotul normal am constatat o tendinţă de creştere
a expresiei CD36 icircn lotul cu SM((t - Test P= 0067)
MFI anti - CD36 Lot Non-SM
Număr 31
Mediana 3628
Percentila 25 2737
Percentila 75 4533
MFI anti - CD36 Lot SM
Număr 26
Mediana 4110
Percentila 25 3462
Percentila 75 4690
Figura 544 Comparaţie icircntre cel două loturi privind MFI anti - CD36 icircn Mo
Referindu-ne la subiecţii cu AHC de HTA am observat o tendinţă de creştere a
valorilor MFI anti-CD36 comparativ cu cei care nu au avut AHC de HTA (t - Test P = 0 08)
AHC HTA
Număr 22
Mediana 442800
Percentila 25 355275
Percentila 75 519475
AHC HTA absenţe
Număr 35
Mediana 377400
Percentila 25 316900
Percentila 75 443400
Figura 545 Comparaţie icircntre expresia CD36 icircn Mo funcţie de AHC de HTA
Nu s-au calculat diferenţe semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor
PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de dislipidemie atunci cacircnd aceştia au fost comparaţi cu
subiecţii fără AHC de dislipidemie (t - Test P=031)
Corelaţii icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα si CD36
Studiind valorile intensităţii medii de fluorescenţă a Ac anti-PPARα icircn Mo Ly şi
PMN am observat că nivelul de expresie celularatilde a PPARα icircn Mo Ly şi PMN sunt corelate
puternic pozitiv atacirct icircn lotul SM cacirct şi icircn lotul martor(fig547 548)
1 6 11 16 21 26 31
0
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
Pacienti
MFI a
nti-CD
36
42903
21093
64714
10188
75619
LCI
Media
LCS1 6 11 16 21 26 31 36
-1000
0
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
MFI a
nti- C
D36
37038
11935
62141
-616
74692Media + 2 DS
Media
Media - 2 DS
3200
3400
3600
3800
4000
4200
4400
4600
4800
Lot SM Lot Non-SM
P = 00676
MFI
anti-
CD36
3400
3600
3800
4000
4200
4400
4600
4800
5000
DA NU
AHC HTA
P = 008
Figura 547 Studiul relatiilor dintre
receptorii PPARα icircn SM A Mo vs PMN B Mo vs Ly
C PMN vs Ly Graficul ilustrează coeficienţii r P dreapta de
regresie (linia centrala) intervalul de icircncredere
95 şi intervalul de predicţie 95
Figura 548 Corelaţii icircntre receptorii PPARα icircn lotul
martor
A Mo vs PMN
B Mo vs Ly
C PMN vs Ly
Tot pentru lotul SM cacircnd am evaluat relaţia dintre nivelul de expresie relativă a
receptorilor PPARα icircn Eo şi nivelul de expresie relativa a receptorilor CD 36 am obţinut o
corelaţie negativă (r = - 05 P = 001) (fig 549 A)
50 100 150 200 250 300 350 50
100
150
200
250
300
350
400
450
500
PPARα Ly
PPARα PMN
y = 56641 + 1159 x r = 086 P lt 0001
C
50 100 150 200 250 300 350 400 0
50
100
150
200
250
300
350
PPARα Mo
PPARα Ly
y = 36665 + 0607 x r = 090 P lt 0001
B
150 200 250 300 350 400 450 0
50 100 150 200 250 300 350 400 450 500
PPARα PMN
PPARα Mo
y = 2505 + 0879 x r = 081 P lt 0001
A
50 100 150 200 250 300 350
50 100 150 200 250 300 350 400 450 500
PPARα Ly
PPARα PMN
y = 95668 + 0919 x r = 081 P lt 0001
C
100 150 200 250 300 350 400
0
50
100
150
200
250
300
350
400
PPARα Mo
PPARα Ly
y = -7503 + 0829 x r = 079 P lt 0001
B
100 150 200 250 300 350 400
50
100
150
200
250
300
350
400
450
500
PPARα Mo
PPARα PMN
y = 61384 + 0882 r = 074 P lt 0001
A
Figura 549 Corelaţii icircntre expresia PPARα icircn Eo şi alte tipuri de receptori investigaţi A PPARα Eo şi CD 36 (Lot SM) B PPARα Eo şi PPARα Mo( Lot Non-SM)
Icircn lotul martor am identificat o asociere moderată pozitivă (r = 038 P = 0033) icircntre
nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Eo şi Mo (figura 549B) corelaţie absentă icircn
lotul pacienţilor cu SM
Corelaţii dintre receptorii studiaţi şi componentele sindromului metabolic
Icircn lotul de control analiza statistică a relevat faptul că icircntre circumferinţa
abdominală (CA ) şi nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Mo Ly şi PMN există o
corelaţie inversă adică scăderea expresiei PPARα la nivelul acestor populatii celulare ar fi
icircnsoţită de creşterea CA (figura 550
Figura 550Corelaţii dintre receptorii
PPARα si CA A Mo B Ly C PMN
La pacienţii cu SM am notat o corelatie moderată negativă statistic semnificativă
icircntre TG şi valorile MFI a Ac anti- PPARα icircn Mo şi Ly( fig 551)
150 200 250 300 350 400 450 50
60
70
80
90
100
110
PPARα PMN
CA r = - 040 P = 0024
C
50 100 150 200 250 300 350 50
60
70
80
90
100
110
PPARα Ly
CA r = - 046 P = 0009
B
50 100 150 200 250 300 350 400 50
60
70
80
90
100
110
PPARα Mo
CA r = - 042 P = 0017
A
50 100 150 200 250 300 350 400 500
1000
1500
2000
2500
3000
PPARα Mo
PPARα Eo
r = 038 P = 0033
B
0 500 1000 1500 2000 2500 1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
PPARα Eo
CD36
r = 050 P = 0010
A
Figura 551 Lot SM Corelaţie icircntre expresia PPARα şi TG (A Mo B Ly)
Analizand corelatia dintre receptorii CD36 si valorile TA la pacientii cu SM am observat
o asociere pozitivă asteptată intre TAD si nivelul de expresie al receptorilor CD36 (fig 552)
Figura 552 Lot SM Corelaţii icircntre expresia
receptorilor CD36 şi valorile tensiunii arteriale
diastolice
Studiind corelaţiile dintre receptorii PPARα şi HDL-col la subiecţii din lotul martor am
notat o asociere pozitivă icircntre expresia PPARα icircn Mo şi Ly cu HDL-col (fig 553)
Figura 553 Lot martor Corelaţii icircntre HDL-col şi expresia PPARα icircn Mo(A) Ly(B)
Icircn lotul normal am evidenţiat corelaţii pozitive moderate dar semnificative statistic icircntre
CA şi valorile TAS (r = 062 P lt 0001) respectiv TAD (r = 050 P=0004) precum şi icircntre
CA şi glicemia subiecţilor normali (r = 052 P = 0003) Aceste date icircmpreună cu relaţia
invers proporţională identificată icircntre HDL-col şi CA (r = 050 P = 001) susţin validitatea
acestui studiu Icircn lotul subiecţilor cu SM am observat o corelaţie moderat pozitivă icircntre
expresia PPARα icircn populaţiiile de Mo şi Eo şi concentraţia a HDL-col (fig 554)
B
100 150 200 250 300 350 20
30
40
50
60
70
80
90
100
PPARα Ly
HDL-col-(mgdl)
r = 036 P = 0046
A
150 200 250 300 350 400 20
30
40
50
60
70
80
90
100
PPARα Mo
HDL-col-(mgd)l
r = 035 P = 005
70 75 80 85 90 95 100 1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
TAD (mmHg)
CD36
r = 048 P = 0013
B
50 100 150 200 250 300 350 -100
0
100
200
300
400
500
PPARα Ly
TG(mgdl)
r = - 042 P = 003
A
50 100 150 200 250 300 350 400 -100
0
100
200
300
400
500
PPARα Mo
TG ( mgdl) r =- 0 43 P = 0027
Figura 554 Corelaţii icircn SM icircntre HDL-col şi expresia PPARα icircn Mo (A) şi Eo(B)
Corelaţii icircntre nivelul de expresie relativă a PPARα şi markeri ai disfuncţiei
endoteliale şi inflamaţiei cronice
Deşi nu a icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică am reţinut corelaţia invers
proporţională (r = - 0331 P = 006) dintre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα
icircn PMN şi concentraţia serică a Non-HDL-colesterolului
Studiind relaţiile dintre parametri icircn lotul de pacienţi cu SM am observat o corelaţie
moderată invers proporţională icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Eo şi
acidul uric seric (figura 555 A) corelaţie absentă la subiecţii fără SM
Figura 555 Lot SM corelaţia dintre expresia PPARα icircn Eo şi acidul uric (A) respectiv
PPARα şi fibrinogen (B)
Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P=008) am notat pentru
pacienţii cu SM corelaţia invers proporţională dintre expresia PPARα icircn Eo şi concentraţia
serică a fibrinogenului ( figura 555B)
V5 Discuţii
Icircn cadrul lucrării de doctorat am studiat nivelul de expresie relativă a PPARα icircn
leucocitele pacienţilor cu SM comparativ cu cea a subiecţilor normali Expresia PPARα a fost
studiată icircn paralel cu cea a CD36 glicoproteină exprimată pe suprafaţa a numeroase celule
din organismul uman inclusiv pe cea a Mo şi macrofagelor Prin funcţia sa de receptor pentru
particulele oxidate de LDL CD36 cunoscut ca bdquoscavenger receptorrdquo de clasa B sau
bdquotrombospodin receptorrdquo contribuie la dezvoltarea inflamaţiei de la nivel endotelial şi
formarea plăcii de ateroscleroză Referitor la studiul PPARα icircn Eo icircn sindromul metabolic
menţionăm că studiul nostru este primul care arată că nivelul de expresie a proteinei PPARα
icircn Eo măsurat prin citometrie icircn flux este semnificativ mai redus la pacienţii care sunt
diagnosticaţi cu acest sindrom De asemenea icircn lotul cu SM cercetat icircn cadrul studiului
receptorilor PPARα numărul Eo circulante a fost semnificativ mai crescut la pacienţii cu SM
B
0 500 1000 1500 2000 2500 200
250
300
350
400
450
PPARα Eo o
Fibrinogen mgdl
r =- 036 P = 008
0 500 1000 1500 2000 2500 1 2 3 4 5 6 7 8 9
10 11
PPARα Eo_
Acid uric(mgdl) r = 048 P = 0014 A
0 500 1000 1500 2000 2500 10
20
30
40
50
60
70
80
PPARα Eo
HDL(mgdl)
r = 044 P = 0024
B
100 150 200 250 300 350 400 10
20
30
40
50
60
70
80
PPARα Mo
HDL( mgdl)
r = 046 P = 0019
A
(P = 003) Aceste constatări conduc la ipoteza că Eo joacă un rol special icircn mecanismele
patogenice declanşate icircn sindromul metabolic şi că receptorii PPARα sunt importanţi icircn
implicarea Eo icircn obezitate şi insulinorezistenţă Creşterea numărului de Eo circulante este
urmată de eliberarea mediatorilor proinflamatori iar reducerea expresiei PPARα icircn Eo
determină perturbarea mecanismelor de control al inflamaţiei cu exacerbarea cascadei
proinflamatorii Consecutiv se agravează disfuncţia endotelială şi se accelerează progresia
leziunilor de ateroscleroză Extrapolacircnd aceste ipoteze putem spune că asocierea raportată
dintre boala ischemică coronariană şi Eo poate fi şi consecinţa exacerbării cascadei
proinflamatorii de la nivel vascular produsă datorită scăderii expresiei PPARα icircn Eo iar
creşterea numărului de Eo circulante poate reprezenta o adaptare a organismului uman care
icircncearcă să suplinească deficitul de receptori PPARα Analizacircnd curba ROC pentru
intensităţile medii de fluorescenţă determinate pentru anticorpii anti- PPARα icircn Eo am
obţinut pentru acest biomarker o sensibilitate a testului de 565 şi o specificitate de 778
pentru un punct de cut-off de 1533 ( figura 536 ) Deşi aria AUC (Aria under the curve) egală
cu 0663 icircncadrează acest test ca avacircnd o acurateţe redusă observăm că că această valoare
este apropiată de determinările AUC pentru alţi factori (fibrinogen raport de aterogenitate
acid uric non- HDL-colesterol) cunoscuţi ca fiind implicaţi icircn aterogeneză şi inflamaţia
cronică (figura 431) Aceste remarci alături de faptul că icircn studiul receptorilor PPARα icircn
leucocite am inclus subiecţi la primul diagnostic de SM creează premisa integrării
determinării expresiei relative a receptorilor PPARα icircn diagnosticul complex al sindromului
metabolic Putem spune că icircn final studiul expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofilele
circulante se dovedește a fi util icircn diagnosticul precoce la nivel molecular al SM permiţacircnd
identificarea timpurie a unor indivizi cu risc cardiometabolic crescut Astfel intervenţia
precoce asupra subiecţilor cu deficit de PPARα icircn Eo contribuie la managementul eficient al
afecţiunilor degenerative icircn care inflamaţia cronică icircndeplineşte un rol primordial Referitor
la populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările efectuate prin citometrie de flux nu au
arătat existenţa unor diferenţe statistice icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα
la subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali Rezultatele noastre pot fi
consecinţa caracteristicilor loturilor studiate (icircn studiul nostru au fost incluşi subiecţi recrutaţi
la primul diagnostic de SM şi icircn absenţa stimulării receptorilor PPARα cu droguri agoniste
PPARα) dar icircn acelaşi timp pot apare diferenţe datorită metodei utilizate (231 232 233)
Făcacircnd o paralelă cu un studiu publicat icircn 2013 icircn Europa (231) care a arătat creşterea
nivelului de expresie al PPARα icircn Ly şi Mo observăm că deşi numărul de subiecţi a fost
aproximativ egal (57 participanţi icircn studiul nostru 60 icircn studiul DAmore) subiecţii icircn studiul
amintit au fost recrutaţi dintr-o clinică cu profil medical la primul diagnostic de SM icircn timp
ce metoda utilizată a fost PCR (Polymerase Chain Reaction) mult mai fidelă decacirct citometria
icircn flux icircn studiul receptorilor nucleari De asemenea DAmore nu investighează expresia
PPARα icircn Eo şi PMN icircn cercetare fiind incluse doar celulele CD14+ (predominant Mo) şi
CD14- (predominant Ly) Deşi nu am obţinut diferenţe statistic semnificative icircntre cele două
loturi referitoare la nivelul de expresie relativă a PPARα icircn Mo Ly şi PMN am observat
corelaţii puternice semnificative statistic icircntre expresia receptorilor PPARα icircn aceste tipuri
celulare Rezultatele obţinute sugerează existenţa unui mecanism diferit molecular de control
icircn eozinofile care reglează cantitatea de proteină PPARα icircn eozinofile versus alte tipuri de
leucocite (la pacienţii cu SM) şi acest lucru este icircn concordanţă cu cercetările care descriu
expresia PPARα mRNA icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale
bronşice keratinocite) Studiind prin citometrie de flux nivelul de expresie relativă a
receptorului CD36 la nivelul Mo am arătat prezenţa acestuia icircn Mo tuturor subiecţilor
investigaţi Analizacircnd valorile intensităţii medii de fluorescenţă a CD36 icircn loturile studiate
am observat o tendinţă de creştere la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali
confirmacircnd implicarea receptorului CD36 icircn patogeneza acestuia Referitor la expresia
receptorului CD36 rezultatele obţinute sunt icircn consens cu studii anterioare care au arătat
creşterea expresiei CD36 la pacienţii cu SM şi diabet zaharat Astfel pe lacircngă diferenţa icircn
expresia CD36 s-au raportat şi corelaţii inverse icircntre expresia proteinei CD36 şi nivelul
adiponectinei Acelaşi studiu a evidenţiat o corelaţie pozitivă intre expresia CD36 cu expresia
receptorilor PPAR gamma relaţia cu PPARα nefiind investigată
Analiza de subgrup a relaţiilor dintre componentele SM și elementele moleculare
proinflamatorii studiate a relevat prezenţa unor asocieri semnificativ statistice icircntre acestea
Se argumentează astfel că veridicitatea studiului este susţinută de interdependenţele statistice
ale componentelor SM Determinarea coeficientului de corelaţie Icircn studiul nostru nivelul de
expresie relativă a PPARα s-a corelat moderat negativ (figura 550) cu CA a subiecţilor din
lotul normal pentru populaţiile celulare de Mo (r = - 0420 P = 001) Ly (r = - 046 P =
0009) şi PMN (r = - 040 P = 0024) date care sunt icircn concordanţă cu studiile care arată
rolul PPARα icircn furnizarea energiei prin beta-oxidarea acizilor graşi Icircn acelaşi timp icircn lotul
pacienţilor cu SM nu am identificat prezenţa unei asocieri icircntre nivelul de expresie relativă a
PPARα şi valoarea măsurată a CA Asocierea dintre expresia relativă a PPARα cu obezitatea
de tip central completează datele existente referitoare la reglarea homeostaziei energetice
conturacircnd un mecanism de control deficitar al aportului caloric al SM Icircn condiţiile icircn care
rezultatele obţinute prin metoda citometriei icircn flux nu au arătat existenţa unei corelaţii intre
expresia PPARα şi CA la pacienţii cu SM considerăm că ar fi necesar studiul
polimorfismului genei PPARA care ar putea aduce informaţii importante cu privire la
implicarea acestor receptori icircn apariţia obezităţii de tip central Subliniem acest lucru deoarece
obezitatea este o boală plurifactorială icircn care pe lacircngă factorii ereditari sunt implicaţi factori
de mediu psihologici şi sociali (245) Existenţa unei componente genetice a aterosclerozei
este legată şi de prezenţa unor variante ale genei PPARA asociate cu creşterea incidenţei bolii
cardiovasculare (82) şi a SM (249) Icircn studiul nostru am constatat o scădere statistic
semnificativă a nivelului expresiei relative a receptorilor PPARα icircn Eo la subiecţii cu
antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială comparativ cu subiecţii fără istoric
familial de hipertensiune (figura 537) Deşi diferenţele calculate icircntre loturile studiate nu au
icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică la subiecţii care au declarat prezenţa
antecedentelor familiale de hipertensiune arterială remarcăm o tendinţă de scădere a
intensităţii medii de fluorescenţă pentru Ac anti-PPARα la nivelul Mo (figura 515 P = 006
) icircn timp ce expresia relativă a CD36 icircnregistrează o creştere la acesti subiecţi (figura 545 P
= 008) Icircn contextul riscului cardiovascular foarte icircnalt al pacienţilor cu SM amintim şi
existenţa corelaţiei pozitive dintre valorile tensiunii arteriale diastolice şi expresia relativă a
receptorului CD36 (r = 0483 P = 0013) Această constatare este icircn consens cu studiile care
au arătat că forma solubilă circulantă a CD36 este asociată cu factorii de risc cardiovasculari
fiind propusă ca un marker precoce al aterosclerozei Activarea PPARα este asociată cu
modularea metabolismului lipidic iar agoniştii PPARα sunt utilizaţi icircn mod curent pentru
tratamentul dislipidemiei Sub acţiunea agoniştilor PPARα se obţine o icircmbunătăţire a funcţiei
endoteliale şi a parametrilor reologici funcţiile pleiotropice ale agoniştilor PPARα fiind
dovedite icircn trialuri clinice controlate Icircn populaţiile de Mo şi Ly la pacienţii cu SM
cercetarea noastră a evidenţiat o asociere negativă icircntre nivelul de expresie relativă a
receptorilor PPARα şi concentraţia TG serice (figura 551) Astfel scăderea expresiei
receptorilor PPARα este asociată cu creşterea nivelului TG serice contribuind la profilul
lipidic aterogen din SM Icircn conformitate cu literatura de specialitate icircn studiul efectuat prin
metoda citometriei icircn flux am găsit prezenţa asocierii icircntre nivelul de expresie al PPARα şi
HDL-colesterol Corelaţia pozitivă dintre nivelul de expresie relativă PPARα şi concentraţia
HDL-colesterolului a fost observată icircn lotul martor icircn populaţiile de Mo (r = 035 P = 005)
şi Ly ( r = 036 P = 004) (figura 553) susţinacircnd faptul că stimularea receptorilor PPARα
este legată de creşterea nivelului seric al lipoproteinelor cu densitate crescută La pacienţii cu
SM corelaţia dintre expresia PPARα şi HDL-colesterol a fost evidenţiată icircn populaţiile de Mo
(r = 046 P = 0019) şi eozinofile (r = 044 P = 0024) Se desprinde concluzia că icircn
sindromul metabolic scăderea concentraţiei HDL-colesterol este legată de diminuarea
nivelului de expresie relativă a receptorilor nucleari PPARα icircntărind afirmaţiile legate de
rolul acestor receptori icircn progresia bolilor cardiovasculare Studiind reactanţii de fază acută
analiza statistică a relevat o diferenţă semnificativă din punct de vedere statistic icircntre valorile
fibrinogenului la pacienţii cu SM atunci cacircnd au fost comparaţi cu subiecţii fără SM
(Capitolul IV4 P lt0 001 figura 427A) De asemenea icircn Capitolul V dedicat studiul
expresiei relative a receptorilor PPARα studiul valorilor fibrinogenului a arătat creşterea
acestui reactant de faza acută icircn lotul cu SM comparativ cu lotul martor (P lt0 0001) Icircn
studiul nostru am calculat o corelaţie invers proporţionala (r = - -036 fig 555B) icircntre
nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile şi concentraţia serică a
fibrinogenului Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P = 008) am reţinut
această asociere deoarece am demonstrat că nivelul de expresie relativă al receptorilor
PPARα icircn eozinofile este mai scăzut icircn sindromul metabolic iar sindromul metabolic este
caracterizat printr-un status inflamator cronic status caracterizat şi de creşterea concentraţiei
serice a fibrinogenului De asemenea notam ca această corelaţie negativă se află icircn
concordanţă cu studiile care arata că tratamentul cu agonişti PPARα (fibraţi) determina
scăderea nivelului seric al fibrinogenului contribuind la diminuarea inflamaţiei cronice din
sindromul metabolic şi icircn consecinţă amelioracircnd insulinorezistenţa
LIMITE ȘI DIFICULTĂȚI IcircN CERCETARE
Icircn cadrul Tezei de Doctorat am desfăşurat o cercetare care şi-a propus studierea
expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Recrutarea anamneza şi examinarea
clinică a subiecţilor au fost realizate icircn cadrul Cabinetului de Medicină de Familie CMI Popa
Elena din Iaşi iar determinările hematologice şi biochimice s-au efectuat icircn cadrul
Laboratorului Ambulatorului de Specialitate al Spitalului Universitar ldquoSfacircntul Spiridon din
Iaşi Icircn studiul epidemiologic şi al markerilor inflamatori al sindromului metabolic desfăşurat
au fost incluşi un număr de 1530 de participanţi pe baza liberului consimţămacircnt examinaţi icircn
perioada 01012013 - 31122013 Icircn continuare icircn perioada 1012014 - 28022014 pe baza
criteriilor de includere şi excludere icircn cele două loturi de studiu am investigat un număr de 57
de subiecţi prezentaţi la consultaţie icircn această perioadă şi care au icircndeplinit criteriile de
includere icircn cele două loturi (Lot SM şi Lot Control) constituite pentru evaluarea nivelului de
expresie a receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Explorarea nivelului de expresie
relativă a receptorilor PPARα s-a desfăşurat icircn cadrul Laboratorului de Biologie Moleculară
de pe platforma Institutului Regional de Oncologie Datorită resurselor proprii financiare
limitate trebuie să subliniez că aceasta cercetare nu ar fi fost posibilă fără contribuţia unor
cercetători din domeniul medical care m-au sprijinit necondiţionat atacirct icircn elaborarea
protocolului de lucru cacirct şi icircn efectuarea propriu-zisă a studiului Icircn acest sens menţionăm şi
faptul că pentru studiul receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic am utilizat aparatura
Laboratorului de Biologie Moleculară (care deserveşte icircntreaga Regiune a Moldovei) Pe
această cale mulţumesc personalului Laboratorului de Biologie Moleculară pentru ajutorul
acordat icircn desfăşurarea cercetării doctorale icircn condiţiile icircn care se observa creşterea
numărului de pacienţi care se adresează acestei platforme de cercetare Mulţumesc de
asemenea şi Doamnei Doctor Elena Butoi din cadrul Institutului de Biologie şi Patologie
Moleculară ldquoNicolae Simionescurdquo Bucureşti) pentru donaţia anticorpului secundar anti-
FITC Icircn consecinţă pentru recrutarea unui număr mai mare de participanţi ar fi fost necesară
icircn primul racircnd obţinerea unor resurse financiare suplimentare pentru achiziţia de aparatură şi
reactivi Totuşi numărul subiecţilor recrutaţi este apropiat de numărul subiecţilor raportaţi icircn
cadrul unor granturi de cercetare care aveau ca ţinta studiul expresiei receptorilor PPARα
(212 227 228 231) Rezultatele obţinute continua seria lucrărilor care arata importanta
studiului mecanismelor etiopatogenice ale sindromului metabolic patologie care se afla icircntr-o
continuă creştere La pacienţii cu SM pe lacircngă diminuarea nivelului de expresie a receptorilor
PPARα icircn eozinofile ne aşteptam şi la evidenţierea unor modificări icircn expresia PPARα şi icircn
populaţiile de Ly Mo şi PMN Acest fapt poate fi explicat de utilizarea unor celule provenite
de la pacienţi fără afectare cardiovasculară fără diabet zaharat şi necesită continuarea
studiului pe culturi celulare icircn condiţii de stimulare cu agonişti PPARα deziderat care
impune continuarea investigării expresiei PPARα printr-un grant de cercetare
ORIGINALITATEA ȘI CONTRIBUȚIILE INOVATIVE ALE TEZEI DE
DOCTORAT PERSPECTIVE DE CERCETARE
Evaluarea nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn leucocitele circulante
aduce noi perspective icircn studiul obezităţii şi sindromului metabolic Importanta studiului
expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic derivă din prevalenta crescută a
sindromului metabolic icircn populaţia cercetată la care se adaugă riscul cardiovascular foarte
icircnalt al acestor pacienţi cu implicaţii majore icircn sănătatea publică Rolul receptorilor PPARα
icircn inflamaţie şi aterogeneza este binecunoscut dar studiul nostru este primul care a arătat că
nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα este semnificativ mai scăzut in populatiile
de eozinofile la pacienţii cu SM Această concluzie coroborata cu existenţa unei stracircnse
asocieri intre expresia receptorilor PPARα la nivelul Mo limfocitelor şi PMNlor creeaza
ipoteza existenţei unui mecanism de control diferit al expresiei PPARα la nivelul
eozinofilelor Această cercetare aduce informaţii importante referitoare la mecanismele
proinflamatorii care stau la baza insulinorezistenţei şi riscului cardiometabolic şi impune
continuarea studiului acestor receptori nucleari prin citometrie icircn flux metodă care poate fi
aplicată şi la scara mai largă dacă sunt asigurate resursele materiale necesare cercetării
Cercetarea prin citometrie icircn flux poate fi completată de studiul polimorfismului genei
PPARA şi astfel se pot identifica timpuriu indivizii cu potenţial risc cardiometabolic crescut
Studiul receptorilor PPARα a stabilit conexiuni cu factori proinflamatori şi aterogenetici iar
continuarea cercetării poate aduce şi elemente noi de diagnostic precoce icircn sindromul
metabolic contribuind la icircmbunătăţirea prognosticului acestor pacienţi
CONCLUZII FINALE
1 Aplicarea scorului de SM alături de implementarea algoritmului electronic de diagnostic
contribuie la o prelucrare rapidă eficientă și standardizată a informaţiilor la nivelul
medicinei primare
2 Prevalenţa SM calculată astfel icircn cadrul studiului este crescută (2732) icircn concordanţă
cu datele raportate
3 Controlul factorilor de risc cardiometabolici incluşi icircn SM se poate realiza prin
managementul stilului de viaţă (scăderea greutăţii corporale prin combaterea
sedentarismului şi adoptarea unei diete antiaterogene şi hipocalorice) şi administrarea
terapiei medicamentoase
4 Este necesară adoptarea unei politici de sănătate publică pentru prevenirea creşterii icircn
populaţie a prevalenţei obezităţii şi a diabetului zaharat
5 Noi metode de cercetare icircn domeniul SM axate pe diagnosticarea precoce şi cuantificarea
eficientă a acestuia duce la diminuarea incidenței evenimentelor cardiovasculare majore
6 Sindromul metabolic se caracterizează printr-un status inflamator cronic
7 Valorile Non-HDL-colesterolului şi a raportului de aterogenitate sunt semnificativ mai
mari la pacienţii cu SM
8 Dintre reactanţii de faza acută am observat că valoarea medie a fibrinogenului este mai
crescută icircn lotul cu SM
9 Valorile eozinofilelor sunt crescute icircn sindromul metabolic iar explorarea relaţiei dintre
eozinofile şi obezitate constituie una din direcţiile de studiu actuale ale sindromului
metabolic
10 Evaluarea markerilor inflamatori icircn contextul sindromului metabolic este utilă icircn
evaluarea complexă a a factorilor de risc cardiometabolici
11 Prin metoda citometriei icircn flux am demonstrat prezenta Receptorilor Activaţi de
Inductorii Proliferării Peroxizomilor ndash Alpha (PPARα) icircn toate populaţiile de leucocite
studiate (Mo limfocite PMN eozinofile) atacirct icircn lotul pacienţilor cu SM cacirct şi icircn lotul
martor
12 Utilizacircnd intensitatea medie de fluorescenţă a anticorpilor anti- PPARα am arătat că
nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile este semnificativ mai redus
la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali
13 Acest studiu este primul care a demonstrat existenţa unei scăderi statistic semnificative a
nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofilele pacienţilor cu SM
confirmacircnd cercetările recente care au evidenţiat rolul eozinofilelor şi al receptorilor
PPARα icircn obezitate reglarea inflamaţiei cronice şi aterogeneza
14 Contrar aşteptărilor noastre icircn populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările
efectuate icircn cele două loturi de studiu (cu şi fără sindom metabolic) nu am evidenţiat
diferenţe statistic seminificative icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα la
subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali
15 Icircn populaţiile de Mo limfocite şi polimorfonucleare am observat corelaţii puternice
semnificativ statistic icircntre expresia PPARα icircn aceste tipuri celulare sugeracircnd existenţa
unui mecanism unic de control al inflamaţiei cronice la nivelul acestor celule probabil
diferit de cel din eozinofile
16 La subiecţii cu SM expresia relativă a PPARα icircn Eo este invers asociată cu expresia
receptorului CD36 (receptor al particulelor de ox - LDL şi propus ca un marker precoce al
aterosclerozei) dovedind rolul antiinflamator al receptorilor PPARα la nivel endotelial
17 La pacienţii cu antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială nivelul de
expresie al receptorilor PPARα icircn eozinofile şi Mo este diminuat comparativ cu subiecţii
fără antecedente familiale de hipertensiune arterială Putem spune că studiul efectuat de
noi aduce informaţii importante legate de geneză aterosclerozei şi hipertensiunii arteriale
18 Prin studiul asocierilor dintre receptorii PPARα şi componentele clinice ale sindromului
metabolic am arătat rolul acestor receptori icircn determinismul obezităţii de tip central
nivelul expresiei relative a receptorilor PPARα fiind invers proporţional cu circumferinţa
abdominală
19 Icircn acelaşi timp nivelul de expresie a PPARα icircn sindromul metabolic este asociat pozitiv
cu concentraţia serică a HDL-colesterolului şi invers asociat cu nivelul trigliceridelor
serice dovedind rolul acestor receptori icircn diminuarea procesului inflamator cronic de la
nivel vascular
20 La pacienţii cu SM scăderea expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofile este corelată cu
creşterea unor markeri ai sindromului inflamator cronic cardiometabolic (acid uric
fibrinogen) ilustracircnd importanta receptorilor icircn reglarea status-ului inflamator cronic din
sindromul metabolic
21 Utilizarea metodei flowcitometrice pentru studiul expresiei relative a receptorilor PPARα
icircn leucocite a adus informaţii importante cu privire la mecanismele moleculare de control
implicate icircn patogenia bolilor cardiometabolice icircn concordanţă cu cercetările care descriu
expresia PPAR icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale bronşice
keratinocite)
BIBLIOGRAFIE SELECTIVA
1 Kahn R Metabolic syndrome- what is the clinical usefulness Lancet 2008371(9628)1892-3
2 Reaven GM The metabolic syndrome is this diagnosis necessary Am J Clin Nutr 2006 83(6)1237-7
3 Grundy SM Pre-Diabetes Metabolic Syndrome and Cardiovascular Risk J Am Coll Cardiol 201259(7)
635-43
4 International Diabetes Federation IDF Diabetes Atlas 6th edn International Diabetes Federation Belgium
Brussels 20131-155
5 World Health Organization Global Status Report on Noncommunicable Diseases 2010 World Health
Organization Geneva Switzerland 20111-176
6 Coman AE Petrovanu R Sindromul metabolic in practica de ambulator Editura Pim Iaşi 2009 1-103
7 Grundy SM Becker D Clark LT et alThird Report of the National Cholesterol Education Program (NCEP)
Expert Panel on Detection Evaluation and Treatment of High Blood Cholesterol in Adults (Adult
Treatment Panel III) Final Report Circulation 2002106(25)3143-90
8 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J Metabolic syndrome- a new worldwide definition A Consensus Statement
from the International Diabetes Federation Diabet Med 2006 23(5)469-80
9 KG Alberti KG Eckel RH Grundy SM etal International Diabetes Federation task force on epidemiology
and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart Association World Heart
Federation International Atherosclerosis Society International Association for the study of obesity
Harmonizing the metabolic syndrome a joint interim statement of the International Diabetes Federation task
force on epidemiology and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart
Association World Heart Federation International Atherosclerosis society and International Association
for the study of obesity Circulation 2009120(16)1640-5
10 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J IDF Epidemiology Task Force The metabolic syndrome new
worldwide definition Lancet 2005 366 1059 - 62
11 Oleszczyk M Svab I Seifert B et al Primary healthcare in the developing part of Europe changes and
development in the former Eastern Bloc countries that joined the European Union following 2004 Med Sci
Monit 2009(15)78ndash84
12 Jung U J Choi M S Obesity and Its Metabolic Complications The Role of Adipokines and the
Relationship between Obesity Inflammation Insulin Resistance Dyslipidemia and Nonalcoholic Fatty
Liver Disease Int J Mol Sci 2014rsquo15(4) 6184-223
13 Vanden Heuvel JP Peters JM Peroxisome Proliferators In Ramos K (ed) Cellular and Molecular
Toxicology (Second Edition) Volume 2 New York Elsevier Science Inc 2010 145 - 67
14 Yessoufou A Wahli W Multifaceted roles of peroxisome proliferator-activated receptors (PPARs) at the
cellular and whole organism levels Swiss Med Wkl 2010140w13071 doi104414smw201013071
15 Azhar S Peroxisome proliferator-activated receptors metabolic syndrome and cardiovascular disease
Future Cardiology 20106(5)657-91
16 Andries G Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity
Diabetes and Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(Suppl)24-32
17 Zandbergen F Plutzky J PPARalpha in atherosclerosis and inflammation Biochim Biophys Acta
20071771(8)972-82
18 Straus DS Glass CK Anti-inflammatory actions of PPAR ligands new insights on cellular and molecular
mechanisms Trends Immunol 200728(12)551-8
19 Zlei M Zugun- Eloae F Carasevici E Citometrie icircn flux - Bază şi clinică Icircn Hinescu ME (ed) Citometrie icircn
flux - principii şi aplicaţii clinice Bucureşti Editura Viaţa Medicală Romacircnească 20111-128
20 Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity Diabetes and
Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(9)24-32
21 Woerly G Honda K Loyens M et al Peroxisome proliferator-activated receptors alpha and gamma down-
regulate allergic inflammation and eosinophil activation J Exp Med 2003198(3)411-21
22 Salle-Saumont D Brenuchon C Kanda A et al Peroxisome proliferator-activated receptor alpha regulates
skin inflammation and humoral response in atopic dermatitis J Clin Allergy Immunology 2008 21(4)962-8
23 Schote A Turner J Schiltz J et al Nuclear receptors in human immune cells expression and correlations
Mol Immunolog 200744(6)1436-45
24 DAmore S Vacca M Graziano G et al Nuclear receptors expression chart icircn peripheral blood
mononuclear cells identifies patients with Metabolic Syndrome Biochim Biophys Acta
20131832(12)2289-301
25 Uthurralt J Gordish-Dressman H Bradbury M T et al PPARalpha L162V underlies variation in serum
triglycerides and subcutaneous fat volume in young males BMC Med Genet 2007855
26 Hiukka A Leinonen ES Jauhiainen M et al Long-term effects of fenofibrate on VLDL and HDL
subspecies icircn participants with type 2 diabetes mellitus Diabetologia 2007 50(10)2067-75
27 Robins SJ Rubins HB Faas FH et alInsulin resistance and cardiovascular events with low HDL
cholesterol The Veterans Affairs HDL Intervention Trial (VA-HIT) Diabetes Care 2003 26(5)1513-7
28 Devaraj S Siegel D Jialal I Statin Therapy in Metabolic Syndrome and Hypertension Post-JUPITER
What is the Value of CRP Curr Atheroscler Rep 2011 13(1) 31ndash42
29 Imperatore G Riccardi G Iovino C et al Plasma Fibrinogen A New Factor of the Metabolic Syndrome A
population-based study Diabetes Care 19982 1(4)649-54
30 Krysiak R Gdula-Dymek A Bachowski R Okopien B Pleiotropic effects of atorvastatin and fenofibrate
in metabolic syndrome and different types of pre-diabete Diabetes Care 201033(10)2266-70
31 Hermans MP Impact of Fenofibrate on Type 2 Diabetes Patients with Features of the Metabolic Syndrome
Subgroup Analysis From FIELD Curr Cardiol Rev 20106(2)112-8
32 Silverstein R Inflammation atherosclerosis and arterial thrombosis Role of the scavenger receptor CD36
Cleveland Clinic Journal of Medicine 200976(Suppl 2)S27-S30
33 Hăncu N Obezitatea In Vereşiu IA (ed) Diabetul zaharat nutritia si bolile metabolice Volume 2 Editura
Echinox Cluj- Napoca 2010 1-15
Lista lucrări publicate
1 Elena Popa Maria Maidaniuc Agnes Bacusca Alamir Diaa Rodica Petrovanu Adorata Elena
Coman Disfuncţia endotelială ndash de la mecanisme moleculare la cuantifi care şi tratament icircn practica
medicală Practica Medicală 20149(3) 109-14
2 Elena Popa Agnes Bacusca Alamir Diaa Maria Maidaniuc Rodica Petrovanu Adorata Elena Coman
The function of insulin receptor (IRF) in evolution of obesity correlation with adipocytes diameters
Archives of the Balkan Medical Union 201449(3) 275-9
3 Elena Popa Florin Zugun-Eloae Mihaela Zlei Daniela Jitaru Oana Maria Pintilie Adorata Elena
Coman Maria Traian Didona Anca Ungureanu Eugen Carasevici - acceptata pentru numarul 42014
Flow cytometry analysis of PPAR-alpha receptors in metabolic syndrome) Revista Romană de
Medicină de Laborator(RRLM-D-14-00034R1- adeverinţa ataşată
criteriilor Harmonised I Lotul SM a fost alcătuit din 185 bărbaţi şi 204 femei raportul
bărbaţifemei fiind de 090 (95 CI073-112) Lotul de control (fără SM) a fost alcătuit
din cei 1141 participanţi care nu au icircntrunit criteriile de diagnostic ale sindromului metabolic
Din cei 1141 de subiecţi 530 au fost de sex masculin iar 611 de sex feminin raportul
bărbaţifemei fiind 087 (95 CI 077-097) Vacircrsta subiecţilor a fost semnificativ mai mare
icircn lotul pacienţilor cu SM (5976plusmn1322 ani) comparativ cu lotul martor (4333plusmn 1748 ani) (t-
Test Plt00001) Aşa cum ne-am aşteptat valorile medii ale componentelor clinice ale SM
(circumferinţa abdominală tensiunea arterială sistolică şi diastolică) au fost mai mari icircn lotul
pacienţilor cu SM (t-Test Plt0001 pentru fiecare dintre componente) Studiind parametrii
biochimici incluşi icircn diagnosticul SM valorile medii ale glicemiei şi TG au fost semnificativ
mai crescute icircn lotul SM (t-Test Plt00001 pentru ambele constante) Icircn acelaşi timp
valoarea medie determinată a HDL-col a fost semnificativ mai mare la subiecţii din lotul
martor ( t-Test Plt00001) SM se caracterizează printr-o dislipidemie aterogenă
caracterizată de creşterea TG scăderea HDL-col concomitent cu creşterea LDL-col creşterea
Non-HDL-col şi a raportului de aterogenitate (Col totalHDL-col) (185) Comparacircnd cele
două loturi am observat că valoarea medie a LDL-colesterolului determinată icircn lotul
pacienţilor cu SM a fost semnificativ mai mare faţă de subiecţii din lotul martor (t-Test P =
00002) Măsurarea Non-HDL-colesterolului a arătat prezenţa unei diferenţe semnificative
icircntre cele două loturi (figura 420 B) Astfel icircn concordanţă cu prezenţa dislipidemiei
aterogene valoarea medie a Non-HDL-col a fost semnificativ mai mare (t-Test Plt 00001) icircn
lotul cu SM comparativ cu lotul de control Icircn contextul inflamației cronice şi aterogenezei
din sindromul metabolic am evaluat sensibilitatea şi specificitatea Non-HDL-colesterolului
ca test diagnostic al SM Valoarea Non-HDL-colesterolului care prezice cu cea mai mare
acurateţe prezenţa SM a fost de 151 mgdl (punctul de ldquocut-offrdquo) pentru care am calculat o
sensibilitate de 64 27 şi o specificitate de 5872 Calculul ariei AUC a furnizat valoarea
de 0605 şi deci determinarea concentraţiei serice a parametrului Non-HDL-colesterolului are
valoarea unui marker cu acurateţe redusă Am studiat valorile raportului Col totalHDL-col icircn
cele două loturi şi am constatat că la pacienţii cu SM valoarea media a raportului de
aterogenitate este semnificativ mai mare faţă de valoarea raportului determinată icircn lotul
martor (t-Test Plt 00001) Pentru raportul de aterogenitate studiat analiza curbei ROC a
arătat că valorile mai mari decacirct punctul de ldquocut-offrdquo de 431 prezic prezenţa SM cu cea mai
mare sensibilitate (6381 ) şi specificitate (6582)Valoarea AUC pentru indicele de
aterogenitate a fost de 0667 şi icircn studiul SM acest indice poate fi considerat un marker cu
acurateţe redusă Valoarea medie determinată a acidului uric la subiecţii fără SM a fost
semnificativ mai mică decacirct icircn lotul SM (t-Test Plt 00001) Curba ROC a arătat că valorile
acidului mai mari de 43 mgdl prezic diagnosticul de SM cu cea mai mare sensibilitate
(8107) şi specificitate (5328) Pentru acidul uric AUC a avut valoarea de 0655 şi
icircncadrează determinarea acidului uric seric icircn racircndul testelor cu acurateţe redusă (187)
Comparacircnd populaţiile de leucocite (tabel XXI) valoarea medie determinată a
numărului de Eo a fost semnificativ mai mare icircn lotul cu SM comparativ cu lotul martor (t-
Test Plt0001) Analizacircnd curba ROC trasată pentru valorile numărului de Eo am observat
că valorile ldquocut-offrdquo mai mari de 200 Eomm3
pot prezice prezenta SM cu cea mai mare
specificitate (7705) şi sensibilitate (3978) Pentru diagnosticul SM calculul ariei AUC a
arătat faptul că determinarea numărului de Eo are valoarea unui test diagnostic cu acurateţe
redusă (AUC = 0 589) Comparacircnd valorile medii ale fibrinogenului am calculat o diferenţă
statistic semnificativă icircntre cele două loturi valoarea medie a fibrinogenului fiind mai mare icircn
lotul SM ((t-Test P lt 00001) Cu ajutorul curbei ROC am observat că valorile fibrinogenului
mai mari de 306 mgdl prezic sindromul metabolic cu o sensibilitate de 7511 şi specificitate
de 6056 Fibrinogenul a fost icircncadrat icircn categoria markerilor inflamatori cu acurateţe
redusă AUC avacircnd valoarea de 0690 Icircn loturile de studiu am calculat AUC corespunzătoare
criteriilor de diagnostic ale SM Am observat că icircn cazul scorului Harmonised I
sensibilitatea şi specificitatea sunt de 100 iar AUC este egală cu 1000 Pentru cele cinci
criterii de diagnostic AUC a avut valori icircntre 0636 (pentru variabila HDL-col) şi 0804
(pentru variabila CA) (figura 431)
AUC ES 95 CI
Scor SM Harmonised I 1000 00000 0997 - 1000
CA (cm) 0804 00133 0781 - 0825
TAD (mmHg) 0666 00169 0639 - 0692
TAS (mmHg) 0757 00148 0732 - 0780
Glicemie (mgdl) 0742 00160 0717 - 0766
Trigliceride (mgdl) 0756 00175 0732 - 0780
HDL- colesterol 0636 00183 0609 - 0662
Figura 431 Analiza AUC criterii de diagnostic ale SM
Studiind figura 432 se observă că valoarea AUC pentru markerii studiaţi este cuprinsă
icircntre 0589 (icircn cazul variabilei Eo) şi 0690 (icircn cazul fibrinogenului) Icircn contextul SM
acurateţea acestor markeri ai inflamaţiei cronice şi disfuncţiei endoteliale poate fi considerată
redusă deoarece AUClt07 pentru toţi markerii investigaţi (figura 431) Totuşi valorile ariilor
parametrilor reprezentaţi icircn figura 431 sunt apropiate de valorile AUC ale variabilelor TAD
şi HDL-col (figura 432) şi deci pot fi utilizaţi pentru completarea diagnosticului de SM
AUC ES 95 CI
Non-HDL-colesterol 0605 00171 0580 - 0630
Col totalHDL-col 0607 00163 0642 - 0691
Acid uric 0655 00161 0630 - 0679
Fibrinogen 0690 00206 0658 - 0720
Eozinofile 0589 00176 0564 - 0615
Figura 432 AUC markeri ai SM inflamaţiei cronice şi aterogenezei
Discuţii
Status-ul proinflamator din SM asociat cu insulinorezistenţa şi disfuncţia endotelială
constituie o verigă de legătură dintre inflamaţie şi procesele metabolice complexe icircnsoţindu-
se de deteriorarea funcţiilor vasculare şi creşterea riscului de evenimente cardiovasculare
majore (2858) Studiul efectuat a arătat o diferenţă icircntre vacircrstele subiecţilor din cele două
loturi vacircrsta pacienţilor cu SM fiind semnificativ mai mare (Plt0001) comparativ cu subiecţii
normali confirmacircnd faptul menţionat că vacircrsta reprezintă unul din stimulii care agravează
inflamaţia cronică Am arătat că valorile fibrinogenului sunt mai mari icircn SM comparativ cu
Scor Harmonised I
0 20 40 60 80 100
0
20
40
60
80
100
100-Specificitate
Sen
sib
ilit
ate
Criterii diagnostic SM
0 20 40 60 80 100
0
20
40
60
80
100
100-Specificitate
Sens
ibili
tate
CA
TAD
TAS
Glicemie
Trigliceride
HDL-C
0 20 40 60 80 100
0
20
40
60
80
100
100-Specificitate
Sensi
bilita
te
Non-HDL-C
Col T HDL-C
Acid uric
Fibrinogen
Eozinofile
lotul martor atacirct la bărbaţi cacirct şi la femei icircn concordanţă cu studiile anterioare Evaluarea
fibrinogenului este importantă nu numai icircn SM pentru definirea contextului proinflamator şi
protrombotic ci şi icircn predicţia cardiovasculară la subiecţii normali Studiind populaţiile
leucocitare am obţinut diferenţe semnificative icircn cazul Eo valoarea medie a acestora fiind
semnificativ mai mare icircn lotul cu SM comparativ cu lotul martor (P lt 0001 figura 425B)
Implicarea Eo icircn SM s-a conturat icircn ultimul deceniu aceste celule fiind implicate icircn recrutarea
macrofagelor din ţesutul adipos Experimental s-a constatat că o creştere a Eo apărută ca
urmare a infectării cu helminţi sau stimulare cu IL-5 este urmată de icircmbunătăţirea toleranţei la
glucoză (199) Controlul pe care icircl exercită Eo asupra activării macrofagelor ar putea fi cheia
intervenţiei asupra obezităţii icircn viitorul apropiat(165199) Hiperuricemia asociata frecvent cu
SM este cunoscut ca un factor independent de risc cardiovascular (192 202) In concordanţă
cu aceasta afirmaţie in studiul nostru am constatat ca nivelul seric al acidului uric a fost mai
crescut in lotul cu SM diferenţa semnificativă din punct de vedere statistic (P lt 00001)
Dislipidemia aterogenă din sindromul metabolic şi diabetul zaharat se caracterizează prin
creşterea trigliceridelor şi a Non-HDL-col scăderea HDL-col creşterea numărului de
particule LDL modificate (185190) La pacienţii cu SM am descris un profil aterogenetic
cu risc crescut de evenimente cardiovasculare majore
STUDIUL RECEPTORILOR ACTIVAŢI DE INDUCTORII PROLIFERĂRII
PEROXIZOMILOR-ALPHA IcircN LEUCOCITELE CIRCULANTE
Ipoteza de lucru
Studii experimentale efectuate au arătat că rolul PPARα icircn ateroscleroză derivă din
implicarea acestor receptori icircn limitarea inflamaţiei Plecacircnd de la acest fundament ne-am
propus evidenţierea receptorilor nucleari activaţi de inductorii proliferării peroxizomilor-
alpha (PPARα) prin citometrie de flux icircn leucocitele din sacircngele periferic alături de
evaluarea acestei metode icircn cuantificarea expresiei relative a PPARα ca test diagnostic
precoce al modificărilor metabolice SM Studiul expresiei relative a receptorilor PPARα a
plecat de la premisa că dacă SM se caracterizează printr-un status inflamator cronic nivelul
de expresie a PPARα icircn leucocitele circulante este mai scăzut la pacienţii cu SM comparativ
cu subiecţii normali Referitor la studiul receptorului CD36 am plecat de la presupunerea că
nivelul de expresie al acestui receptor icircn SM este crescut dat fiind importanţa acestui receptor
icircn inflamaţia aterosclerotică Avacircnd icircn vedere efectele receptorilor amintiţi icircn
insulinorezistenţă şi aterogeneză am considerat necesară evaluarea prezenţei receptorului
nuclear PPARα icircn paralel cu studiul receptorului bdquoscavengerrdquo CD-36 prin metoda citometriei
icircn flux Astfel icircn studiul efectuat mi-am propus şi investigarea existenţei unei legături icircntre
nivelul de expresie al receptorilor PPARα şi cel al receptorului CD-36 De asemenea ne-am
icircndreptat atenţia spre stabilirea unor asocieri icircntre componentele clinice şi biochimice ale
sindromului metabolic şi nivelul intensităţilor de fluorescenţă ale PPARα şi CD-36 ca măsură
a expresiei relative a acestor receptori
Material și metodă
Studiul receptorilor PPARα icircn contextul sindromului metabolic s-a desfăşurat icircn
perioada 1012014 -28022014 pe baza metodologiei studiilor de tip caz-martor Am urmărit
identificarea unor diferenţe icircntre expresia receptorilor PPARα la pacienţii cu SM comparativ
cu subiecţii sănătoşi diferenţe care ar putea fi utile icircn diagnosticul precoce al SMRecrutarea
pacienţilor s-a efectuat din pacienţii prezentaţi pentru consultaţie la Cabinetul Individual
ldquoCMI Dr Popa Elenardquo situat icircn strada Ion Creanga din Iaşi Pentru studiul receptorilor
PPARα icircn sindromul metabolic au fost selecţionaţi un număr de 57 de subiecţi 26 de subiecţi
cu SM (constituind lotul SM) şi 31 subiecţi fără SM constituind lotul de control (Lot Non-
SM) Pentru studiul SM pacienţii au fost recrutaţi din masa de populaţie arondată cabinetului
de MF fără istoric de SM diabet zaharat boală cardio-vasculară aflați la primul diagnostic
de SM evaluarea completă a acestora fiind urmată de includerea icircn programul de
management cardiovascular şi metabolic conform Ghidurilor Terapeutice aflate icircn vigoare
Lot SM a) criterii de includerevacircrsta peste 18 ani recrutarea pe baza semnării
Consimţămacircntului liber informatSM nou-diagnosticat pe baza prezenţei a minim trei criterii
de diagnostic pentru SM conform Harmonised I b) criterii de excluderevacircrstă sub 18 ani
refuzul semnării Consimţămacircntului liber informat femei icircn perioada de graviditate sau de
lactaţie SM anterior diagnosticat istoric de diabet zaharat boală cardiovasculară constituită
tratament cu agonişti PPARα (ie fibraţi etc)
Lot martor (Non-SM) a) criterii de includerevacircrsta peste 18 ani recrutarea pe baza
semnării Consimţămacircntului liber informat absenţa diagnosticului de SM b) criterii de
excludere vacircrstă sub 18 ani refuzul semnării Consimţămacircntului liber informat femei icircn
perioada de graviditate sau de lactaţie
Studiul receptorilor PPARα a inclus două subetape
A Studiul componentelor sindromului metabolic conform criteriilor Harmonised I
Evaluarea clinică a participanţilor s-a desfăşurat icircn cadrul Cabinetului de Medicină de
Familie iar determinările hematologice şi biochimice s-au efectuat icircn Laboratorul
Ambulatorului Clinic de Specialitate al Spitalului Clinic de Urgenţă bdquoSf Spiridonrdquo Iaşi
B Evaluarea icircn citometrie de flux a nivelului relativ de expresie a PPARα şi CD36
Studiul receptorilor PPARα s-a desfăşurat icircn Laboratorul de Biologie Moleculară al
Institutului Regional de Oncologie Iaşi prin metoda citometriei icircn flux (19) Nivelul relativ de
expresie al receptorilor nucleari PPARα a fost determinat icircn diferite tipuri de leucocite
circulante polimorfonucleare (PMN) limfocite (Ly) Mo(Mo) şi eozinofile(Eo) Am utilizat o
metodă de citometrie icircn flux optimizată ldquoin houserdquo elaborată icircn cadrul Laboratorului de
Biologie Moleculară al IRO Iaşi Icircn cursul procesului de optimizare am testat mai multe
concentraţii ale anticorpului anti-PPARα 1100 1500 11500 14500 iar icircn urma
determinărilor efectuate şi a analizei statistice concentraţia 1500 a fost considerată optimă
pentru desfăşurarea studiului (tabel XXIII figura 51)
Tabel XXIII Optimizarea concentraţiilor Ac anti-PPARα Diferenţa
mediilor
valorilor
medii
PMN
Diferenţa
mediilor
mediane-
lor
PMN
Diferenţa
mediilor
valorilor
medii
Ly
Diferenţa
mediilor
mediane-
lor
Ly
Diferenţa
mediilor
valorilor
medii
Mo
Diferenţa
mediilor
mediane-
lor
Mo
Diferenţă 0 1300 1600 100 100 700 750
normal - 1100 650 1050 1050 1350 450 900
patologic 1500 2850 2750 3800 3600 2850 2400
11500 -1050 800 3500 3300 2250 1800
14500 2200 2150 1300 1100 2950 2850
AOptimizare
BRepetabilitate
Figura 51 Optimizarea concentraţiei anticorpului anti-PPARα
Icircn concordanţă cu literatura de specialitate icircn cercetarea efectuată intensitatea medie
de fluorescenţă (MFI) a fost utilizată ca măsură pentru evaluarea expresiei celulare a
receptorilor PPARα (212) Un exemplu de analiză a probelor este reprezentat icircn figura 52
Figura 52 Exemplu de analiză flowcitometrică pentru receptorul nuclear PPARα Graficul din stacircnga reprezintă distribuţia leucocitelor iar cel din dreapta ilustrează distribuţia
intensităţii de fluorescenţă pentru populaţiile de celule selectate
Intensitatea Medie a Fluorescenţei (MFI) a CD36 ca o măsură a nivelului relativ de
expresie a acestor receptori la nivelul membranei Mo a fost detectată printr-o metodă
convenţională pentru marcare de suprafaţă şi evaluare pe bază de citometrie icircn flux folosind
aceleaşi probe de sacircnge cu EDTA cu focalizare pe Mo şi utilizacircnd CD14 ca marker specific
pentru Mo (figura 53)
Figura 53Analiza
flowcitometrică
pentru marcajul
CD14 - CD36
Rezultate
Icircn cele două loturi au fost incluşi icircn studiu un număr de 57 de participanţi care au fost
investigaţi din punct clinic şi paraclinic Vacircrsta subiecţilor incluşi icircn studiu a fost cuprinsă
icircntre 18 şi 79 ani iar vacircrsta medie calculată a avut valoarea de 4805 plusmn 1587 ani Pentru sexul
masculin vacircrsta medie este de 4925plusmn1617 ani iar pentru sexul feminin 4689 plusmn1 5ani
diferenţa obţinută icircntre vacircrstele pacienţilor fiind statistic nesemnificativă (P = 085)
Analizacircnd vacircrstele subiecţilor din cele două loturi am observat că vacircrsta medie a pacienţilor
cu SM (5476 plusmn 1183 ani) a fost semnificativ mai mare (t-test P = 0003) decacirct icircn lotul
martor (4258 plusmn 169 ani) Pentru diagnosticul sindromului metabolic am calculat scorul de
SM bazacircndu-ne pe criteriile Harmonised I Conform criteriilor diagnostice din cei 57 de
subiecţi investigaţi un număr de 26 participanţi (46) au fost incluşi icircn lotul cu SM (Lot
SM) iar 31 de subiecţi(54) nu au prezentat acest sindrom constituind lotul martor (Lot
Non-SM) Din punct de vedere al repartiţiei pe sexe nu au existat diferenţe statistic
semnificative raportul bărbaţifemei fiind de 0961 Din totalul celor 28 de bărbaţi incluşi icircn
studiu 4285 (12 bărbaţi) au icircntrunit cel puţin trei criterii diagnostice pentru SM fiind
incluşi icircn lotul SM Icircn acelaşi timp 14 femei reprezentacircnd 4827 din subiecţii de sex
feminin au icircntrunit condiţiile pentru includerea icircn lotul pacienţilor cu SM Valoarea medie
determinată pentru scorul de SM a arătat prezenţa unor valori semnificativ statistic mai mari
din punct (t-test P lt 00001) icircn lotul SM (769plusmn176) comparativ cu lotul martor (174 plusmn
184) Am studiat comparativ media valorilor măsurate ale criteriilor componentelor SM
Analiza statistică a arătat valori semnificativ statistic mai mari pentru CA TG glicemie TAS
şi TAD (plt0001) icircn lotul SM comparativ cu lotul normal Concomitent calculul statistica
evidenţiat o scăderea semnificativă a HDL-colesterolului icircn lotul cu SM comparativ cu
subiecţii din lotul martor (Non-SM) Aplicacircnd testul z am comparat ponderea pacienţilor
diagnosticaţi cu HTA dislipidemie şi tulburări ale metabolismului glucidic icircn lotul SM versus
lot Non-SM şi am constatat prezenţa acestor afecţiuni icircntr-un procent mai mare semnificativ
statistic icircn lotul SM ((plt0001)
Utilizacircnd testul t Student am calculat diferenţele statistice şi icircntre alți parametri
studiaţi care sunt factori de risc cardio-vascular dar care nu sunt componente ale SM Icircn lotul
cu SM valorile acidului uric fibrinogenului Col total Non-HDL-col şi LDL-col au fost
semnificativ mai mari comparativ cu lotul martor (tabel XXVI) Analizacircnd valorile medii ale
populaţiilor de leucocite am identificat doar pentru populaţia de Eo diferenţe statistice icircntre
cele două loturi numărul Eo icircn lotul SM fiind semnificativ mai mare decacirct icircn lotul martorTot
pentru caracterizarea celor două loturi am analizat prezenţa antecedentelor
heredocolaterale (AHC) de diabet zaharat boala cardiovasculară şi dislipidemie pentru toţi
subiecţii investigaţi Astfel existenţa AHC de HTA a fost declarată de 2580 din subiecţii
incluşi icircn lotul martor respectiv de 5384 din numărul pacienţilor cu SM Antecedentele
heredocolaterale de dislipidemie au fost prezente la 3461 din pacienţii cu SM icircn timp ce icircn
lotul martor anamneza a evidenţiat aceste antecedente la 3548 din subiecţi
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα
Icircn cercetarea desfăşurată am utilizat intensitatea medie de fluorescenţă (MFI) ca
măsură a nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn leucocitele studiate Pentru
populaţiile de leucocite analiza computerizată a probelor luate icircn studiu a furnizat valori
pentru MFI a receptorilor PPARα icircn funcţie de cantitatea de anticorpi anti-PPARα marcaţi cu
fluorocrom care se leagă de aceste celule şi apoi sunt captaţi de citometru (figura 59)
A Lot Non - SM
B Lot SM
Figura 59 Analiza flowcitometrică pentru receptorii PPARα icircn leucocite A lot normal B lot SM
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Mo
Analiza probelor efectuată conform protocolului de lucru descris a arătat prezenţa
PPARα icircn Mo recoltate din sacircngele tuturor subiecţilor incluşi icircn această cercetare Pentru toţi
participanţii investigaţi analiza MFI a Ac anti - PPARα icircn populaţia de Mo (Mo) a arătat un
interval de variaţie icircntre [786 395] Valoarea medie a nivelului de expresie relativă a PPARα
calculată pentru Mo a fost de 23210 plusmn7860 Pentru ambele loturi de studiu pacienţilor cu
SM testul Testul Shapiro-Wilk a arătat distribuţia normală a valorilor obţinute pentru nivelul
de expresie al PPARα icircn Mo
Tabel XXVIII Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn Mo
Lot SM Lot Non-SM
N 26 31
Media 22819 23538
SD 5819 7717
Mediana 22400 22600
Minimum 12800 78600
Maximum 35800 37900
Percentila 25 18300 18300
Percentila 75 26200 30350
Pentru pacienţii din lotul SM valoarea medie a MFI icircn Mo a fost de 22819 plusmn 5880 iar
pentru lotul martor s-a calculat o valoare medie a MFI a Ac anti-PPARα de 23538 plusmn 7717
Distribuţia statistică a frecvenţei valorilor MFI obţinute pentru nivelul de expresie a PPARα
icircn Mo subiecţilor din cele două loturi a fost reprezentată icircn figura 511
Figura 511 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti-PPARα icircn Mo
Sub forma unei diagrame de control Shewhart am reprezentat variaţia intensităţii medii de
fluorescenţă pentru anticorpii anti-PPARα icircn MoVariaţia nivelului de expresie relativă a
receptorilor PPARα icircn Mo subiecţilor studiaţi este ilustrată icircn fig 512 513
Figura 512 Lot SM Variaţia
expresiei relative a PPARα icircn Mo
Număr pacienţi
26
Minim 128
Maxim 358
Media 22819
DS 5819
25 din 26 valori ale MFI s-au icircncadrat
icircn intervalul Media plusmn 2DS
Figura 513 Lot Non-SM Variaţia
expresiei relative a PPARα icircn Mo
Număr pacienţi 31
Minimum 786
Maximum 379
Media 23538
DS 7717
Cu excepţia unei singure
determinări valorile calculate s-au
icircncadrat icircn Media plusmn 2DS
Utilizacircnd testul parametric t-Student pentru variabilele cu distribuţie normală am
comparat valoarea medie a intensităţii de fluorescenţă a Ac anti-PPARα icircn lotul cu SM versus
subiecţi fără SM (Lot Non-SM) Analiza statistică efectuată nu a identificat diferenţe icircntre
50 100 150 200 250 300 350 400 450
0
5
10
15
20
25
30
35
MFI anti-PPAR a
Frecv
enta
relati
va (
)
Lot SM
0 50 100 150 200 250 300 350 400 450 500
0
5
10
15
20
25
30
35
MFI anti-PPAR a
Frecv
enta
relati
va (
)
Lot martor
1 6 11 16 21 26 31
0
50
100
150
200
250
300
350
400
450
MFI
anti-
PPAR
a
2282
1106
3458
518
4046
Media
LCI
LCI
1 6 11 16 21 26 31 36
-100
0
100
200
300
400
500
MFI a
nti-PP
AR
a
2354
810
3897
39
4669LCS
LCI
Media
cele două loturi icircn ceea ce priveşte expresia PPARα la nivelul Mo circulante (t- Test P=
069)
Studiul receptorilor PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de AHC şi dislipidemie
Nivelul de expresie al receptorilor PPARα α icircn Mo tinde să fie mai scăzut la subiecţii
cu AHC de HTA comparativ subiecţii care nu au declarat AHC de HTA (P= 006 fig 515)
AHC HTA
Număr 22
Mediana 19950
Percentila 25 17800
Percentila 75 22700
AHC HTA absente
Număr 35
Mediana 24800
Percentila 25 19025
Percentila 75 31700
Figura 515 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Mo funcţie de AHC de HTA
Nu s-au calculat diferenţe semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor
PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de dislipidemie atunci cacircnd aceştia au fost comparaţi cu
subiecţii fără AHC de tulburări ale metabolismului lipidic (t- Test P= 020)
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn limfocite
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn populaţia de Ly a
demonstrat prezenţa receptorilor PPARα icircn Ly tuturor subiecţilor studiaţi Pentru toţi
participanţii investigaţi analiza MFI a Ac anti - PPARα icircn populaţia de Ly a relevat un
interval de variaţie icircntre [748 314] iar valoarea medie a MFI a fost de 18058 plusmn 5600
Pentru ambele loturi aplicarea testului Shapiro-Wilk a evidenţiat distribuţia normală a
valorilor determinate pentru nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Ly Pentru
pacienţii cu SM valoarea medie a MFI determinată pentru expresia PPARα icircn populaţia de
Ly a fost de 18178 plusmn 61 16 iar pentru lotul martor a fost de 16800 plusmn 5229
Tabel XXX Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn limfocite
Lot SM Lot Non-SM
N 26 31
Media 181781 179574
SD 611694 522907
Mediana 165000 168000
Minimum 81300 74800
Maximum 314000 301000
Percentila 25 13400 - 145750
Percentila 75 21800 21700
Distribuţia frecvenţei valorilor MFI a Ac anti-PPARα icircn Ly este redată icircn figura 518
Figura 518 Distribuţia frecvenţelor relative a MFI a Ac anti-PPARα icircn Ly
94 din determinările efectuate pentru determinarea nivelului de expresie relativă al
MFI
ant
iPPA
R
a_Mo
190
200
210
220
230
240
250
260
270
280
DA NU
AHC HTA
P=006
50 89 128 167 206 244 283 322 361 400
0
5
10
15
20
25
30
35
MFI anti-PPAR a
Frecv
enta
relati
va (
)
Lot SM
0 50 100 150 200 250 300 350
0
5
10
15
20
25
30
35
40
MFI anti-PPAR a
Frec
venta
relat
iva (
)
Lot Non-SM
receptorilor PPARα icircn limfocitele subiecţilor cu SM s-au icircncadrat icircn intervalul Media plusmn 2DS
Figura 5 19 Lot SM Variaţia expresiei
relative a PPARα icircn Ly
Număr pacienţi 26
Minimum 813
Maximum 31400
Media 18178
Deviaţia Standard 6116
25 valori s-au icircncadrat icircn Media plusmn 2DS
Pentru lotul Non-SM diagrama de control (figura 520) a arătat toate valorile
determinate pentru lotul Non-SM se icircncadrează icircntre LCS şi LCI
Figura 520 Lot Non -SM Variaţia
expresiei relative a PPARα icircn Ly
Număr pacienţi 31
Minimum 748
Maximum 30100
Media 179574
Deviaţia Standard 5229
96 din valori icircncadrate icircn Media plusmn 2DS
Aplicarea testului t-Student pentru valorile medii ale intensităţii de fluorescenţă ale
PPARα icircn Ly nu a arătat existenţa unei diferenţe statistic semnificative icircntre lotul cu SM şi
lotul martor(t- Test P= 088)
Analiza receptorilor PPARα icircn Ly subiecţilor cu AHC de HTA şi dislipidemie
Studiind populaţiile de Ly la subiecţii care au prezentat AHC de hipertensiune
arterială analiza flowcitometrică a relevat existenţa unor valori mai mici pentru MFI la aceşti
subiecţi comparativ cu cei fără AHC de HTA (fig 522) deşi scăderea observată nu a
icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică (t- Test P = 009)
AHC HTA
Număr 22
Mediana 16000
Percentila 25 12700
Percentila 75 17100
AHC HTA absenţe
Număr 35
Mediana 18700
Percentila 25 14900
Percentila 75 23175
Figura 522 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Ly funcţie de AHC de HTA
Nu am calculat diferenţe statistic semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor
PPARα icircn populaţiile de Ly ale subiecţilor la care am identificat AHC de dislipidemie
comparativ cu cei care nu au declarat antecedente familiale de dislipidemie (t- Test P= 051)
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn neutrofile (PMN)
Analiza flowcitometrică a evidenţiat prezenţa PPARα icircn PMN recoltate din sacircngele
venos al tuturor participanţilor la studiu Pentru toţi subiecţii investigaţi analiza MFI a Ac -
PPARα icircn populaţia de PMN a relevat un interval de variaţie de [163419] iar valoarea medie
a MFI pentru Ac anti-PPARα a fost de 26392 plusmn 7064 Testul Shapiro-Wilk a arătat o
distribuţie normală a valorilor intensităţii medii de fluorescenţă a anticorpilor anti-PPARα atacirct
icircn lotul pacienţilor cu SM cacirct şi icircn lotul martor
1 6 11 16 21 26 31
-50
0
50
100
150
200
250
300
350
400
MFI
anti-
PPAR
a
1818
595
3041
-17
3653
Media+2DS
Media- 2DS
1 6 11 16 21 26 31 36
0
50
100
150
200
250
300
350
MFI
ant
i-PPA
R
a
1796
750
2841
227
3364
Media+2DS
Media
Media- 2DS
MFI
anti-
PPAR
a Ly
130
140
150
160
170
180
190
200
210
DA NU
AHC HTA
P=009
Tabel XXXII Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn PMN
Lot SM Lot Non-SM
N 26 31
Media 26273 26480
SD 6915 7088
Mediana 25900 25500
Minimum 17200 16300
Maximum 39500 41900
Percentila 25 19800 19600
Percentila 75 30500 31500
Icircn cele două loturi distribuţia frecvenţei valorilor nivelului relativ de expresie a
receptorilor PPARα icircn PMN a fost reprezentată sub formă de histograme (fig 525)
Figura 525 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti-PPARα icircn PMN
Pentru cei 26 de pacienţi din lotul cu SM a valoarea medie a nivelului de expresie
relativă a receptorilor PPARα icircn PMN a fost de 26273 plusmn 6915 Studiind diagrama Shewhart
din figura 526 se observă că toate valorile obţinute pentru nivelul de expresie relativă
PPARα icircn PMN investigate se icircncadrează icircntre limitele definite de valorile medii plusmn 2DS
Figura 526 Lot SM
Variaţia expresiei relative a PPARα icircn
PMN
Număr pacienţi 26
Minimum 17200
Maximum 39500
Media 26273
Deviaţia Standard 6915
Valorile MFI icircncadrate icircn Media plusmn 2DS
Pentru lotul martor valoarea medie calculată a MFI a anticorpilor anti-PPARα a fost de
26480 plusmn 7088 peste 95 din valorile MFI fiind cuprinse icircn Media plusmn 2DS (figura 527)
Figura 527 Lot Non-SM Variaţia expresiei
relative a PPARα icircn PMN
Număr pacienţi 31
Minimum 16300
Maximum 41900
Media 26480
Deviaţia Standard 7088
30 valoriicircn Media plusmn 2DS
Pentru PMN analiza statistica nu a arătat existenţa unei diferenţe statistic semnificative icircntre
nivelul de expresie relativă a PPARα la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii din lotul
Non-SM (t- Test P= 090) Studiind populaţiile de PMN la subiecţii care au prezentat AHC
de HTA nu am calculat o diferenţă statistic semnificativă icircntre expresia receptorilor PPARα
la subiecţii cu istoric familial de hipertensiune arterială comparativ cu cei pentru care nu s-au
notat AHC de HTA (t- Test P= 013)De asemenea am identificat diferenţe icircntre nivelul de
expresie al PPARα icircn PMN subiecţilor care prezentau AHC de dislipidemie comparativ cu
cei fără AHC de dislipidemie (t- Test P= 017)
50 100 150 200 250 300 350 400 450 500
0
5
10
15
20
25
30
35
MFI anti-PPAR a
Frecve
nta rel
ativa (
)
Lot SM
50 100 150 200 250 300 350 400 450 500
0
5
10
15
20
25
30
MFI anti-PPAR a
Frecv
enta
relati
va (
)
Lot Non-SM
1 6 11 16 21 26 31
0
50
100
150
200
250
300
350
400
450
500
MFI
anti-
PPA
R
a
2627
1244
4010
553
4702
Media + 2DS
Media - 2 DS
Media
1 6 11 16 21 26 31 36
0
50
100
150
200
250
300
350
400
450
500
MFI
anti-
PPAR
a
2648
1230
4066
522
4774
Media+ 2DS
Media - 2DS
Media
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile Tabel XXXIV Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn Eo
Lot SM Lot Non-SM
N 26 31
Mediaplusmn SD 141057 plusmn 47604 172209 plusmn 37565
Mediana 142450 171300
Minimum 35000 68500
Maximum 233700 250600
Percentila 25 119300 153225
Percentila 75 169700 199550
Am studiat nivelul relativ de expresie a receptorilor PPARα icircn Eo iar rezultatele au
fost figurate sub forma de histograme (figura 532)
Figura 532 Distribuţia frecventelor relative ale valorilor MFI anti- PPARα icircn Eo
Din diagrama Shewhart (figura 533) se observă că toate valorile determinate pentru
nivelul de expresie relativă a PPARα icircn Eo pentru lotul SM s-au icircncadrat icircn [Media plusmn 3 DS]
peste 90 din determinări fiind cuprinse icircn [Media plusmn 2 DS] iar icircn [Media plusmn 1 DS] sunt
incluse peste 65 din valorile MFI
Figura 533 Lot SM
Variaţia expresiei relative a PPARα icircn Eo
Număr pacienţi 26
Minimum 35000
Maximum 233700
Media 141057
Deviaţia Standard 47604
24 valori icircncadrat eicircn [Media plusmn 2DS]
Pentru subiecţii incluşi icircn lotul martor analiza diagramei (figura 534) a arătat că
toate cele 31 de valori ale MFI pentru PPARα icircn Eo se icircncadrează icircn [Media plusmn 3DS] iar 30
dintre acestea se icircncadrează icircn [ Media plusmn 2 DS]
Figura 534 Lot Non -SM
Variaţia expresiei relative a PPARα icircn Eo
Număr pacienţi 31
Minimum 685
Maximum 2506
Media 172209
Deviaţia Standard 375 65
30 valori icircncadrate icircn [Media plusmn 2DS]
Comparacircnd subiecţii cu SM cu cei din lotul martor am observat o scădere
semnificativă statistic a MFI a Ac anti - PPARα icircn Eo pentru pacienţiir cu SM ( figura 535)
PPARα Eo Lot Non-SM
Număr 31
Mediana 171300
Percentila 25 152325
Percentila 75 199550
PPARα Eo Lot SM
Număr 26
Mediana 142450
Percentila 25 119300
Percentila 75 169700
Figura 5 35 Comparaţie icircntre nivelul de expresie a PPARα icircn Eo
0 500 1000 1500 2000 2500 3000
0
10
20
30
40
50
MFI anti-PPAR a
Frecvent
a relativa
()
Lot SM
400 800 1200 1600 2000 2400 2800
0
5
10
15
20
25
30
35
40
45
MFI anti-PPAR a
Frecenta
relativa
()
Lot Non-SM
1 6 11 16 21 26 31
-500
0
500
1000
1500
2000
2500
3000
MFI a
nti-PP
AR
a
14106
4765
23447
94
28117
Media + 2DS
Media- 2DS
LCI
LCS
1 6 11 16 21 26 31 36
500
1000
1500
2000
2500
3000
MFI an
ti-PPA
R a
17221
9708
24734
5951
28490
LCI
Media-2DS
Media
Media +2 DS
LCS
1200
1300
1400
1500
1600
1700
1800
1900
Lot SM Lot Non-SM
P=00072
Cu ajutorul curbei ROC am evaluat posibilitatea utilizării MFI a Ac anti - PPARα icircn
Eo ca marker pentru diagnosticul SM Valoarea MFI a Ac anti - PPARα icircn Eo care prezice cu
cea mai mare acurateţe prezenţa SM a fost de 1533 (punctul de ldquocut-offrdquo) pentru care am
calculat o sensibilitate de 5652 şi o specificitate de 7778 Calculul ariei AUC a furnizat
valoarea de 0663 şi deci determinarea parametrului MFI anti- PPARα icircn Eo are valoarea
unui test cu acurateţe redusatilde icircn diagnosticul SM Studiind expresia PPARα icircn Eo la subiecţii
care au prezentat AHC de HTA am observat o scădere semnificativă statistic (P = 00023) a
expresiei PPARα la subiecţii cu istoric familial de HTA comparativ cu subiecţii fatilderatilde AHC de
HTA (figura 537)
AHC HTA
Număr 22
Mediana 148800
Percentila 25 116425
Percentila 75 170750
AHC HTA absente
Număr 35
Mediana 170850
Percentila 25 143700
Percentila 75 195000
Figura 537 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Eo funcţie de AHC de HTA
Studiind subiecţii cu AHC declarate de dislipidemie nu am identificat diferenţe icircntre
nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Eo subiecţilor cu AHC de dislipidemie
comparativ cu cei care nu au declarat prezenţa AHC de dislipidemie (t - Test P = 067)
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor CD36
Am studiat expresia receptorilor CD36 icircn Mo subiecţilor incluşi icircn studiu
Lot Non - SM
BLot SM
Figura 539 Analiza flowcitometrica pentru receptorii CD36 icircn Mo
Pentru toţi participanţii la studiu valorile MFI au variat icircn intervalul [817 6933] iar
valoarea medie a MFI a Ac anti-CD36 a fost de 397133 plusmn 120902 Tabel XXXVII Statistică descriptivă pentru a CD36 icircn Mo
Lot SM Lot Non-SM
Media 429034 370377
Deviatia Standard 109051 125514
Mediana 411000 362800
Minimum 266400 81700
Maximum 693300 616800
Percentila 25 346200 273750
Percentila 75 469000 453300
Distribuţia frecvenţelor relative a MFI au fost prezentate sub formă histogramelor
Figura 541 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti - CD36 icircn Mo
MFI
ant
i-PPA
R a Eo
1000
1100
1200
1300
1400
1500
1600
1700
1800
1900
DA NU
AHC HTA
P=00023
1000 2000 3000 4000 5000 6000 7000 8000
0
5
10
15
20
25
MFI anti-CD36
Frecve
nta rela
tiva (
)
Lot SM
0 1778 3556 5333 7111
0
5
10
15
20
25
30
35
MFI anti-CD36
Frecve
nta rel
ativa (
)
Lot Non - SM
Referitor la lotul SM 92 din valorile MFI a Ac anti- CD36 s-au icircncadrat icircn
intervalul Media plusmn 2 DS (figura 542) iar pentru lotul martor peste 90 dintre acestea icircn
Media plusmn 2 DS (figura 543)
Figura 542 Lot SM
Variaţia MFI anti-CD36 icircn Mo
Număr pacienţi 26
Minimum 2664
Maximum 6933
Media 429034
Deviaţia Standard 109051
Figura 543 Lot Non -SM
Variaţia MFI anti- CD36 icircn Mo
Număr 31
Minimum 81700
Maximum 616800
Media 370377
Deviaţia Standard 125514
Comparacircnd subiecţii cu SM cu cei din lotul normal am constatat o tendinţă de creştere
a expresiei CD36 icircn lotul cu SM((t - Test P= 0067)
MFI anti - CD36 Lot Non-SM
Număr 31
Mediana 3628
Percentila 25 2737
Percentila 75 4533
MFI anti - CD36 Lot SM
Număr 26
Mediana 4110
Percentila 25 3462
Percentila 75 4690
Figura 544 Comparaţie icircntre cel două loturi privind MFI anti - CD36 icircn Mo
Referindu-ne la subiecţii cu AHC de HTA am observat o tendinţă de creştere a
valorilor MFI anti-CD36 comparativ cu cei care nu au avut AHC de HTA (t - Test P = 0 08)
AHC HTA
Număr 22
Mediana 442800
Percentila 25 355275
Percentila 75 519475
AHC HTA absenţe
Număr 35
Mediana 377400
Percentila 25 316900
Percentila 75 443400
Figura 545 Comparaţie icircntre expresia CD36 icircn Mo funcţie de AHC de HTA
Nu s-au calculat diferenţe semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor
PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de dislipidemie atunci cacircnd aceştia au fost comparaţi cu
subiecţii fără AHC de dislipidemie (t - Test P=031)
Corelaţii icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα si CD36
Studiind valorile intensităţii medii de fluorescenţă a Ac anti-PPARα icircn Mo Ly şi
PMN am observat că nivelul de expresie celularatilde a PPARα icircn Mo Ly şi PMN sunt corelate
puternic pozitiv atacirct icircn lotul SM cacirct şi icircn lotul martor(fig547 548)
1 6 11 16 21 26 31
0
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
Pacienti
MFI a
nti-CD
36
42903
21093
64714
10188
75619
LCI
Media
LCS1 6 11 16 21 26 31 36
-1000
0
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
MFI a
nti- C
D36
37038
11935
62141
-616
74692Media + 2 DS
Media
Media - 2 DS
3200
3400
3600
3800
4000
4200
4400
4600
4800
Lot SM Lot Non-SM
P = 00676
MFI
anti-
CD36
3400
3600
3800
4000
4200
4400
4600
4800
5000
DA NU
AHC HTA
P = 008
Figura 547 Studiul relatiilor dintre
receptorii PPARα icircn SM A Mo vs PMN B Mo vs Ly
C PMN vs Ly Graficul ilustrează coeficienţii r P dreapta de
regresie (linia centrala) intervalul de icircncredere
95 şi intervalul de predicţie 95
Figura 548 Corelaţii icircntre receptorii PPARα icircn lotul
martor
A Mo vs PMN
B Mo vs Ly
C PMN vs Ly
Tot pentru lotul SM cacircnd am evaluat relaţia dintre nivelul de expresie relativă a
receptorilor PPARα icircn Eo şi nivelul de expresie relativa a receptorilor CD 36 am obţinut o
corelaţie negativă (r = - 05 P = 001) (fig 549 A)
50 100 150 200 250 300 350 50
100
150
200
250
300
350
400
450
500
PPARα Ly
PPARα PMN
y = 56641 + 1159 x r = 086 P lt 0001
C
50 100 150 200 250 300 350 400 0
50
100
150
200
250
300
350
PPARα Mo
PPARα Ly
y = 36665 + 0607 x r = 090 P lt 0001
B
150 200 250 300 350 400 450 0
50 100 150 200 250 300 350 400 450 500
PPARα PMN
PPARα Mo
y = 2505 + 0879 x r = 081 P lt 0001
A
50 100 150 200 250 300 350
50 100 150 200 250 300 350 400 450 500
PPARα Ly
PPARα PMN
y = 95668 + 0919 x r = 081 P lt 0001
C
100 150 200 250 300 350 400
0
50
100
150
200
250
300
350
400
PPARα Mo
PPARα Ly
y = -7503 + 0829 x r = 079 P lt 0001
B
100 150 200 250 300 350 400
50
100
150
200
250
300
350
400
450
500
PPARα Mo
PPARα PMN
y = 61384 + 0882 r = 074 P lt 0001
A
Figura 549 Corelaţii icircntre expresia PPARα icircn Eo şi alte tipuri de receptori investigaţi A PPARα Eo şi CD 36 (Lot SM) B PPARα Eo şi PPARα Mo( Lot Non-SM)
Icircn lotul martor am identificat o asociere moderată pozitivă (r = 038 P = 0033) icircntre
nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Eo şi Mo (figura 549B) corelaţie absentă icircn
lotul pacienţilor cu SM
Corelaţii dintre receptorii studiaţi şi componentele sindromului metabolic
Icircn lotul de control analiza statistică a relevat faptul că icircntre circumferinţa
abdominală (CA ) şi nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Mo Ly şi PMN există o
corelaţie inversă adică scăderea expresiei PPARα la nivelul acestor populatii celulare ar fi
icircnsoţită de creşterea CA (figura 550
Figura 550Corelaţii dintre receptorii
PPARα si CA A Mo B Ly C PMN
La pacienţii cu SM am notat o corelatie moderată negativă statistic semnificativă
icircntre TG şi valorile MFI a Ac anti- PPARα icircn Mo şi Ly( fig 551)
150 200 250 300 350 400 450 50
60
70
80
90
100
110
PPARα PMN
CA r = - 040 P = 0024
C
50 100 150 200 250 300 350 50
60
70
80
90
100
110
PPARα Ly
CA r = - 046 P = 0009
B
50 100 150 200 250 300 350 400 50
60
70
80
90
100
110
PPARα Mo
CA r = - 042 P = 0017
A
50 100 150 200 250 300 350 400 500
1000
1500
2000
2500
3000
PPARα Mo
PPARα Eo
r = 038 P = 0033
B
0 500 1000 1500 2000 2500 1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
PPARα Eo
CD36
r = 050 P = 0010
A
Figura 551 Lot SM Corelaţie icircntre expresia PPARα şi TG (A Mo B Ly)
Analizand corelatia dintre receptorii CD36 si valorile TA la pacientii cu SM am observat
o asociere pozitivă asteptată intre TAD si nivelul de expresie al receptorilor CD36 (fig 552)
Figura 552 Lot SM Corelaţii icircntre expresia
receptorilor CD36 şi valorile tensiunii arteriale
diastolice
Studiind corelaţiile dintre receptorii PPARα şi HDL-col la subiecţii din lotul martor am
notat o asociere pozitivă icircntre expresia PPARα icircn Mo şi Ly cu HDL-col (fig 553)
Figura 553 Lot martor Corelaţii icircntre HDL-col şi expresia PPARα icircn Mo(A) Ly(B)
Icircn lotul normal am evidenţiat corelaţii pozitive moderate dar semnificative statistic icircntre
CA şi valorile TAS (r = 062 P lt 0001) respectiv TAD (r = 050 P=0004) precum şi icircntre
CA şi glicemia subiecţilor normali (r = 052 P = 0003) Aceste date icircmpreună cu relaţia
invers proporţională identificată icircntre HDL-col şi CA (r = 050 P = 001) susţin validitatea
acestui studiu Icircn lotul subiecţilor cu SM am observat o corelaţie moderat pozitivă icircntre
expresia PPARα icircn populaţiiile de Mo şi Eo şi concentraţia a HDL-col (fig 554)
B
100 150 200 250 300 350 20
30
40
50
60
70
80
90
100
PPARα Ly
HDL-col-(mgdl)
r = 036 P = 0046
A
150 200 250 300 350 400 20
30
40
50
60
70
80
90
100
PPARα Mo
HDL-col-(mgd)l
r = 035 P = 005
70 75 80 85 90 95 100 1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
TAD (mmHg)
CD36
r = 048 P = 0013
B
50 100 150 200 250 300 350 -100
0
100
200
300
400
500
PPARα Ly
TG(mgdl)
r = - 042 P = 003
A
50 100 150 200 250 300 350 400 -100
0
100
200
300
400
500
PPARα Mo
TG ( mgdl) r =- 0 43 P = 0027
Figura 554 Corelaţii icircn SM icircntre HDL-col şi expresia PPARα icircn Mo (A) şi Eo(B)
Corelaţii icircntre nivelul de expresie relativă a PPARα şi markeri ai disfuncţiei
endoteliale şi inflamaţiei cronice
Deşi nu a icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică am reţinut corelaţia invers
proporţională (r = - 0331 P = 006) dintre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα
icircn PMN şi concentraţia serică a Non-HDL-colesterolului
Studiind relaţiile dintre parametri icircn lotul de pacienţi cu SM am observat o corelaţie
moderată invers proporţională icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Eo şi
acidul uric seric (figura 555 A) corelaţie absentă la subiecţii fără SM
Figura 555 Lot SM corelaţia dintre expresia PPARα icircn Eo şi acidul uric (A) respectiv
PPARα şi fibrinogen (B)
Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P=008) am notat pentru
pacienţii cu SM corelaţia invers proporţională dintre expresia PPARα icircn Eo şi concentraţia
serică a fibrinogenului ( figura 555B)
V5 Discuţii
Icircn cadrul lucrării de doctorat am studiat nivelul de expresie relativă a PPARα icircn
leucocitele pacienţilor cu SM comparativ cu cea a subiecţilor normali Expresia PPARα a fost
studiată icircn paralel cu cea a CD36 glicoproteină exprimată pe suprafaţa a numeroase celule
din organismul uman inclusiv pe cea a Mo şi macrofagelor Prin funcţia sa de receptor pentru
particulele oxidate de LDL CD36 cunoscut ca bdquoscavenger receptorrdquo de clasa B sau
bdquotrombospodin receptorrdquo contribuie la dezvoltarea inflamaţiei de la nivel endotelial şi
formarea plăcii de ateroscleroză Referitor la studiul PPARα icircn Eo icircn sindromul metabolic
menţionăm că studiul nostru este primul care arată că nivelul de expresie a proteinei PPARα
icircn Eo măsurat prin citometrie icircn flux este semnificativ mai redus la pacienţii care sunt
diagnosticaţi cu acest sindrom De asemenea icircn lotul cu SM cercetat icircn cadrul studiului
receptorilor PPARα numărul Eo circulante a fost semnificativ mai crescut la pacienţii cu SM
B
0 500 1000 1500 2000 2500 200
250
300
350
400
450
PPARα Eo o
Fibrinogen mgdl
r =- 036 P = 008
0 500 1000 1500 2000 2500 1 2 3 4 5 6 7 8 9
10 11
PPARα Eo_
Acid uric(mgdl) r = 048 P = 0014 A
0 500 1000 1500 2000 2500 10
20
30
40
50
60
70
80
PPARα Eo
HDL(mgdl)
r = 044 P = 0024
B
100 150 200 250 300 350 400 10
20
30
40
50
60
70
80
PPARα Mo
HDL( mgdl)
r = 046 P = 0019
A
(P = 003) Aceste constatări conduc la ipoteza că Eo joacă un rol special icircn mecanismele
patogenice declanşate icircn sindromul metabolic şi că receptorii PPARα sunt importanţi icircn
implicarea Eo icircn obezitate şi insulinorezistenţă Creşterea numărului de Eo circulante este
urmată de eliberarea mediatorilor proinflamatori iar reducerea expresiei PPARα icircn Eo
determină perturbarea mecanismelor de control al inflamaţiei cu exacerbarea cascadei
proinflamatorii Consecutiv se agravează disfuncţia endotelială şi se accelerează progresia
leziunilor de ateroscleroză Extrapolacircnd aceste ipoteze putem spune că asocierea raportată
dintre boala ischemică coronariană şi Eo poate fi şi consecinţa exacerbării cascadei
proinflamatorii de la nivel vascular produsă datorită scăderii expresiei PPARα icircn Eo iar
creşterea numărului de Eo circulante poate reprezenta o adaptare a organismului uman care
icircncearcă să suplinească deficitul de receptori PPARα Analizacircnd curba ROC pentru
intensităţile medii de fluorescenţă determinate pentru anticorpii anti- PPARα icircn Eo am
obţinut pentru acest biomarker o sensibilitate a testului de 565 şi o specificitate de 778
pentru un punct de cut-off de 1533 ( figura 536 ) Deşi aria AUC (Aria under the curve) egală
cu 0663 icircncadrează acest test ca avacircnd o acurateţe redusă observăm că că această valoare
este apropiată de determinările AUC pentru alţi factori (fibrinogen raport de aterogenitate
acid uric non- HDL-colesterol) cunoscuţi ca fiind implicaţi icircn aterogeneză şi inflamaţia
cronică (figura 431) Aceste remarci alături de faptul că icircn studiul receptorilor PPARα icircn
leucocite am inclus subiecţi la primul diagnostic de SM creează premisa integrării
determinării expresiei relative a receptorilor PPARα icircn diagnosticul complex al sindromului
metabolic Putem spune că icircn final studiul expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofilele
circulante se dovedește a fi util icircn diagnosticul precoce la nivel molecular al SM permiţacircnd
identificarea timpurie a unor indivizi cu risc cardiometabolic crescut Astfel intervenţia
precoce asupra subiecţilor cu deficit de PPARα icircn Eo contribuie la managementul eficient al
afecţiunilor degenerative icircn care inflamaţia cronică icircndeplineşte un rol primordial Referitor
la populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările efectuate prin citometrie de flux nu au
arătat existenţa unor diferenţe statistice icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα
la subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali Rezultatele noastre pot fi
consecinţa caracteristicilor loturilor studiate (icircn studiul nostru au fost incluşi subiecţi recrutaţi
la primul diagnostic de SM şi icircn absenţa stimulării receptorilor PPARα cu droguri agoniste
PPARα) dar icircn acelaşi timp pot apare diferenţe datorită metodei utilizate (231 232 233)
Făcacircnd o paralelă cu un studiu publicat icircn 2013 icircn Europa (231) care a arătat creşterea
nivelului de expresie al PPARα icircn Ly şi Mo observăm că deşi numărul de subiecţi a fost
aproximativ egal (57 participanţi icircn studiul nostru 60 icircn studiul DAmore) subiecţii icircn studiul
amintit au fost recrutaţi dintr-o clinică cu profil medical la primul diagnostic de SM icircn timp
ce metoda utilizată a fost PCR (Polymerase Chain Reaction) mult mai fidelă decacirct citometria
icircn flux icircn studiul receptorilor nucleari De asemenea DAmore nu investighează expresia
PPARα icircn Eo şi PMN icircn cercetare fiind incluse doar celulele CD14+ (predominant Mo) şi
CD14- (predominant Ly) Deşi nu am obţinut diferenţe statistic semnificative icircntre cele două
loturi referitoare la nivelul de expresie relativă a PPARα icircn Mo Ly şi PMN am observat
corelaţii puternice semnificative statistic icircntre expresia receptorilor PPARα icircn aceste tipuri
celulare Rezultatele obţinute sugerează existenţa unui mecanism diferit molecular de control
icircn eozinofile care reglează cantitatea de proteină PPARα icircn eozinofile versus alte tipuri de
leucocite (la pacienţii cu SM) şi acest lucru este icircn concordanţă cu cercetările care descriu
expresia PPARα mRNA icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale
bronşice keratinocite) Studiind prin citometrie de flux nivelul de expresie relativă a
receptorului CD36 la nivelul Mo am arătat prezenţa acestuia icircn Mo tuturor subiecţilor
investigaţi Analizacircnd valorile intensităţii medii de fluorescenţă a CD36 icircn loturile studiate
am observat o tendinţă de creştere la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali
confirmacircnd implicarea receptorului CD36 icircn patogeneza acestuia Referitor la expresia
receptorului CD36 rezultatele obţinute sunt icircn consens cu studii anterioare care au arătat
creşterea expresiei CD36 la pacienţii cu SM şi diabet zaharat Astfel pe lacircngă diferenţa icircn
expresia CD36 s-au raportat şi corelaţii inverse icircntre expresia proteinei CD36 şi nivelul
adiponectinei Acelaşi studiu a evidenţiat o corelaţie pozitivă intre expresia CD36 cu expresia
receptorilor PPAR gamma relaţia cu PPARα nefiind investigată
Analiza de subgrup a relaţiilor dintre componentele SM și elementele moleculare
proinflamatorii studiate a relevat prezenţa unor asocieri semnificativ statistice icircntre acestea
Se argumentează astfel că veridicitatea studiului este susţinută de interdependenţele statistice
ale componentelor SM Determinarea coeficientului de corelaţie Icircn studiul nostru nivelul de
expresie relativă a PPARα s-a corelat moderat negativ (figura 550) cu CA a subiecţilor din
lotul normal pentru populaţiile celulare de Mo (r = - 0420 P = 001) Ly (r = - 046 P =
0009) şi PMN (r = - 040 P = 0024) date care sunt icircn concordanţă cu studiile care arată
rolul PPARα icircn furnizarea energiei prin beta-oxidarea acizilor graşi Icircn acelaşi timp icircn lotul
pacienţilor cu SM nu am identificat prezenţa unei asocieri icircntre nivelul de expresie relativă a
PPARα şi valoarea măsurată a CA Asocierea dintre expresia relativă a PPARα cu obezitatea
de tip central completează datele existente referitoare la reglarea homeostaziei energetice
conturacircnd un mecanism de control deficitar al aportului caloric al SM Icircn condiţiile icircn care
rezultatele obţinute prin metoda citometriei icircn flux nu au arătat existenţa unei corelaţii intre
expresia PPARα şi CA la pacienţii cu SM considerăm că ar fi necesar studiul
polimorfismului genei PPARA care ar putea aduce informaţii importante cu privire la
implicarea acestor receptori icircn apariţia obezităţii de tip central Subliniem acest lucru deoarece
obezitatea este o boală plurifactorială icircn care pe lacircngă factorii ereditari sunt implicaţi factori
de mediu psihologici şi sociali (245) Existenţa unei componente genetice a aterosclerozei
este legată şi de prezenţa unor variante ale genei PPARA asociate cu creşterea incidenţei bolii
cardiovasculare (82) şi a SM (249) Icircn studiul nostru am constatat o scădere statistic
semnificativă a nivelului expresiei relative a receptorilor PPARα icircn Eo la subiecţii cu
antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială comparativ cu subiecţii fără istoric
familial de hipertensiune (figura 537) Deşi diferenţele calculate icircntre loturile studiate nu au
icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică la subiecţii care au declarat prezenţa
antecedentelor familiale de hipertensiune arterială remarcăm o tendinţă de scădere a
intensităţii medii de fluorescenţă pentru Ac anti-PPARα la nivelul Mo (figura 515 P = 006
) icircn timp ce expresia relativă a CD36 icircnregistrează o creştere la acesti subiecţi (figura 545 P
= 008) Icircn contextul riscului cardiovascular foarte icircnalt al pacienţilor cu SM amintim şi
existenţa corelaţiei pozitive dintre valorile tensiunii arteriale diastolice şi expresia relativă a
receptorului CD36 (r = 0483 P = 0013) Această constatare este icircn consens cu studiile care
au arătat că forma solubilă circulantă a CD36 este asociată cu factorii de risc cardiovasculari
fiind propusă ca un marker precoce al aterosclerozei Activarea PPARα este asociată cu
modularea metabolismului lipidic iar agoniştii PPARα sunt utilizaţi icircn mod curent pentru
tratamentul dislipidemiei Sub acţiunea agoniştilor PPARα se obţine o icircmbunătăţire a funcţiei
endoteliale şi a parametrilor reologici funcţiile pleiotropice ale agoniştilor PPARα fiind
dovedite icircn trialuri clinice controlate Icircn populaţiile de Mo şi Ly la pacienţii cu SM
cercetarea noastră a evidenţiat o asociere negativă icircntre nivelul de expresie relativă a
receptorilor PPARα şi concentraţia TG serice (figura 551) Astfel scăderea expresiei
receptorilor PPARα este asociată cu creşterea nivelului TG serice contribuind la profilul
lipidic aterogen din SM Icircn conformitate cu literatura de specialitate icircn studiul efectuat prin
metoda citometriei icircn flux am găsit prezenţa asocierii icircntre nivelul de expresie al PPARα şi
HDL-colesterol Corelaţia pozitivă dintre nivelul de expresie relativă PPARα şi concentraţia
HDL-colesterolului a fost observată icircn lotul martor icircn populaţiile de Mo (r = 035 P = 005)
şi Ly ( r = 036 P = 004) (figura 553) susţinacircnd faptul că stimularea receptorilor PPARα
este legată de creşterea nivelului seric al lipoproteinelor cu densitate crescută La pacienţii cu
SM corelaţia dintre expresia PPARα şi HDL-colesterol a fost evidenţiată icircn populaţiile de Mo
(r = 046 P = 0019) şi eozinofile (r = 044 P = 0024) Se desprinde concluzia că icircn
sindromul metabolic scăderea concentraţiei HDL-colesterol este legată de diminuarea
nivelului de expresie relativă a receptorilor nucleari PPARα icircntărind afirmaţiile legate de
rolul acestor receptori icircn progresia bolilor cardiovasculare Studiind reactanţii de fază acută
analiza statistică a relevat o diferenţă semnificativă din punct de vedere statistic icircntre valorile
fibrinogenului la pacienţii cu SM atunci cacircnd au fost comparaţi cu subiecţii fără SM
(Capitolul IV4 P lt0 001 figura 427A) De asemenea icircn Capitolul V dedicat studiul
expresiei relative a receptorilor PPARα studiul valorilor fibrinogenului a arătat creşterea
acestui reactant de faza acută icircn lotul cu SM comparativ cu lotul martor (P lt0 0001) Icircn
studiul nostru am calculat o corelaţie invers proporţionala (r = - -036 fig 555B) icircntre
nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile şi concentraţia serică a
fibrinogenului Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P = 008) am reţinut
această asociere deoarece am demonstrat că nivelul de expresie relativă al receptorilor
PPARα icircn eozinofile este mai scăzut icircn sindromul metabolic iar sindromul metabolic este
caracterizat printr-un status inflamator cronic status caracterizat şi de creşterea concentraţiei
serice a fibrinogenului De asemenea notam ca această corelaţie negativă se află icircn
concordanţă cu studiile care arata că tratamentul cu agonişti PPARα (fibraţi) determina
scăderea nivelului seric al fibrinogenului contribuind la diminuarea inflamaţiei cronice din
sindromul metabolic şi icircn consecinţă amelioracircnd insulinorezistenţa
LIMITE ȘI DIFICULTĂȚI IcircN CERCETARE
Icircn cadrul Tezei de Doctorat am desfăşurat o cercetare care şi-a propus studierea
expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Recrutarea anamneza şi examinarea
clinică a subiecţilor au fost realizate icircn cadrul Cabinetului de Medicină de Familie CMI Popa
Elena din Iaşi iar determinările hematologice şi biochimice s-au efectuat icircn cadrul
Laboratorului Ambulatorului de Specialitate al Spitalului Universitar ldquoSfacircntul Spiridon din
Iaşi Icircn studiul epidemiologic şi al markerilor inflamatori al sindromului metabolic desfăşurat
au fost incluşi un număr de 1530 de participanţi pe baza liberului consimţămacircnt examinaţi icircn
perioada 01012013 - 31122013 Icircn continuare icircn perioada 1012014 - 28022014 pe baza
criteriilor de includere şi excludere icircn cele două loturi de studiu am investigat un număr de 57
de subiecţi prezentaţi la consultaţie icircn această perioadă şi care au icircndeplinit criteriile de
includere icircn cele două loturi (Lot SM şi Lot Control) constituite pentru evaluarea nivelului de
expresie a receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Explorarea nivelului de expresie
relativă a receptorilor PPARα s-a desfăşurat icircn cadrul Laboratorului de Biologie Moleculară
de pe platforma Institutului Regional de Oncologie Datorită resurselor proprii financiare
limitate trebuie să subliniez că aceasta cercetare nu ar fi fost posibilă fără contribuţia unor
cercetători din domeniul medical care m-au sprijinit necondiţionat atacirct icircn elaborarea
protocolului de lucru cacirct şi icircn efectuarea propriu-zisă a studiului Icircn acest sens menţionăm şi
faptul că pentru studiul receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic am utilizat aparatura
Laboratorului de Biologie Moleculară (care deserveşte icircntreaga Regiune a Moldovei) Pe
această cale mulţumesc personalului Laboratorului de Biologie Moleculară pentru ajutorul
acordat icircn desfăşurarea cercetării doctorale icircn condiţiile icircn care se observa creşterea
numărului de pacienţi care se adresează acestei platforme de cercetare Mulţumesc de
asemenea şi Doamnei Doctor Elena Butoi din cadrul Institutului de Biologie şi Patologie
Moleculară ldquoNicolae Simionescurdquo Bucureşti) pentru donaţia anticorpului secundar anti-
FITC Icircn consecinţă pentru recrutarea unui număr mai mare de participanţi ar fi fost necesară
icircn primul racircnd obţinerea unor resurse financiare suplimentare pentru achiziţia de aparatură şi
reactivi Totuşi numărul subiecţilor recrutaţi este apropiat de numărul subiecţilor raportaţi icircn
cadrul unor granturi de cercetare care aveau ca ţinta studiul expresiei receptorilor PPARα
(212 227 228 231) Rezultatele obţinute continua seria lucrărilor care arata importanta
studiului mecanismelor etiopatogenice ale sindromului metabolic patologie care se afla icircntr-o
continuă creştere La pacienţii cu SM pe lacircngă diminuarea nivelului de expresie a receptorilor
PPARα icircn eozinofile ne aşteptam şi la evidenţierea unor modificări icircn expresia PPARα şi icircn
populaţiile de Ly Mo şi PMN Acest fapt poate fi explicat de utilizarea unor celule provenite
de la pacienţi fără afectare cardiovasculară fără diabet zaharat şi necesită continuarea
studiului pe culturi celulare icircn condiţii de stimulare cu agonişti PPARα deziderat care
impune continuarea investigării expresiei PPARα printr-un grant de cercetare
ORIGINALITATEA ȘI CONTRIBUȚIILE INOVATIVE ALE TEZEI DE
DOCTORAT PERSPECTIVE DE CERCETARE
Evaluarea nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn leucocitele circulante
aduce noi perspective icircn studiul obezităţii şi sindromului metabolic Importanta studiului
expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic derivă din prevalenta crescută a
sindromului metabolic icircn populaţia cercetată la care se adaugă riscul cardiovascular foarte
icircnalt al acestor pacienţi cu implicaţii majore icircn sănătatea publică Rolul receptorilor PPARα
icircn inflamaţie şi aterogeneza este binecunoscut dar studiul nostru este primul care a arătat că
nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα este semnificativ mai scăzut in populatiile
de eozinofile la pacienţii cu SM Această concluzie coroborata cu existenţa unei stracircnse
asocieri intre expresia receptorilor PPARα la nivelul Mo limfocitelor şi PMNlor creeaza
ipoteza existenţei unui mecanism de control diferit al expresiei PPARα la nivelul
eozinofilelor Această cercetare aduce informaţii importante referitoare la mecanismele
proinflamatorii care stau la baza insulinorezistenţei şi riscului cardiometabolic şi impune
continuarea studiului acestor receptori nucleari prin citometrie icircn flux metodă care poate fi
aplicată şi la scara mai largă dacă sunt asigurate resursele materiale necesare cercetării
Cercetarea prin citometrie icircn flux poate fi completată de studiul polimorfismului genei
PPARA şi astfel se pot identifica timpuriu indivizii cu potenţial risc cardiometabolic crescut
Studiul receptorilor PPARα a stabilit conexiuni cu factori proinflamatori şi aterogenetici iar
continuarea cercetării poate aduce şi elemente noi de diagnostic precoce icircn sindromul
metabolic contribuind la icircmbunătăţirea prognosticului acestor pacienţi
CONCLUZII FINALE
1 Aplicarea scorului de SM alături de implementarea algoritmului electronic de diagnostic
contribuie la o prelucrare rapidă eficientă și standardizată a informaţiilor la nivelul
medicinei primare
2 Prevalenţa SM calculată astfel icircn cadrul studiului este crescută (2732) icircn concordanţă
cu datele raportate
3 Controlul factorilor de risc cardiometabolici incluşi icircn SM se poate realiza prin
managementul stilului de viaţă (scăderea greutăţii corporale prin combaterea
sedentarismului şi adoptarea unei diete antiaterogene şi hipocalorice) şi administrarea
terapiei medicamentoase
4 Este necesară adoptarea unei politici de sănătate publică pentru prevenirea creşterii icircn
populaţie a prevalenţei obezităţii şi a diabetului zaharat
5 Noi metode de cercetare icircn domeniul SM axate pe diagnosticarea precoce şi cuantificarea
eficientă a acestuia duce la diminuarea incidenței evenimentelor cardiovasculare majore
6 Sindromul metabolic se caracterizează printr-un status inflamator cronic
7 Valorile Non-HDL-colesterolului şi a raportului de aterogenitate sunt semnificativ mai
mari la pacienţii cu SM
8 Dintre reactanţii de faza acută am observat că valoarea medie a fibrinogenului este mai
crescută icircn lotul cu SM
9 Valorile eozinofilelor sunt crescute icircn sindromul metabolic iar explorarea relaţiei dintre
eozinofile şi obezitate constituie una din direcţiile de studiu actuale ale sindromului
metabolic
10 Evaluarea markerilor inflamatori icircn contextul sindromului metabolic este utilă icircn
evaluarea complexă a a factorilor de risc cardiometabolici
11 Prin metoda citometriei icircn flux am demonstrat prezenta Receptorilor Activaţi de
Inductorii Proliferării Peroxizomilor ndash Alpha (PPARα) icircn toate populaţiile de leucocite
studiate (Mo limfocite PMN eozinofile) atacirct icircn lotul pacienţilor cu SM cacirct şi icircn lotul
martor
12 Utilizacircnd intensitatea medie de fluorescenţă a anticorpilor anti- PPARα am arătat că
nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile este semnificativ mai redus
la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali
13 Acest studiu este primul care a demonstrat existenţa unei scăderi statistic semnificative a
nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofilele pacienţilor cu SM
confirmacircnd cercetările recente care au evidenţiat rolul eozinofilelor şi al receptorilor
PPARα icircn obezitate reglarea inflamaţiei cronice şi aterogeneza
14 Contrar aşteptărilor noastre icircn populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările
efectuate icircn cele două loturi de studiu (cu şi fără sindom metabolic) nu am evidenţiat
diferenţe statistic seminificative icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα la
subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali
15 Icircn populaţiile de Mo limfocite şi polimorfonucleare am observat corelaţii puternice
semnificativ statistic icircntre expresia PPARα icircn aceste tipuri celulare sugeracircnd existenţa
unui mecanism unic de control al inflamaţiei cronice la nivelul acestor celule probabil
diferit de cel din eozinofile
16 La subiecţii cu SM expresia relativă a PPARα icircn Eo este invers asociată cu expresia
receptorului CD36 (receptor al particulelor de ox - LDL şi propus ca un marker precoce al
aterosclerozei) dovedind rolul antiinflamator al receptorilor PPARα la nivel endotelial
17 La pacienţii cu antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială nivelul de
expresie al receptorilor PPARα icircn eozinofile şi Mo este diminuat comparativ cu subiecţii
fără antecedente familiale de hipertensiune arterială Putem spune că studiul efectuat de
noi aduce informaţii importante legate de geneză aterosclerozei şi hipertensiunii arteriale
18 Prin studiul asocierilor dintre receptorii PPARα şi componentele clinice ale sindromului
metabolic am arătat rolul acestor receptori icircn determinismul obezităţii de tip central
nivelul expresiei relative a receptorilor PPARα fiind invers proporţional cu circumferinţa
abdominală
19 Icircn acelaşi timp nivelul de expresie a PPARα icircn sindromul metabolic este asociat pozitiv
cu concentraţia serică a HDL-colesterolului şi invers asociat cu nivelul trigliceridelor
serice dovedind rolul acestor receptori icircn diminuarea procesului inflamator cronic de la
nivel vascular
20 La pacienţii cu SM scăderea expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofile este corelată cu
creşterea unor markeri ai sindromului inflamator cronic cardiometabolic (acid uric
fibrinogen) ilustracircnd importanta receptorilor icircn reglarea status-ului inflamator cronic din
sindromul metabolic
21 Utilizarea metodei flowcitometrice pentru studiul expresiei relative a receptorilor PPARα
icircn leucocite a adus informaţii importante cu privire la mecanismele moleculare de control
implicate icircn patogenia bolilor cardiometabolice icircn concordanţă cu cercetările care descriu
expresia PPAR icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale bronşice
keratinocite)
BIBLIOGRAFIE SELECTIVA
1 Kahn R Metabolic syndrome- what is the clinical usefulness Lancet 2008371(9628)1892-3
2 Reaven GM The metabolic syndrome is this diagnosis necessary Am J Clin Nutr 2006 83(6)1237-7
3 Grundy SM Pre-Diabetes Metabolic Syndrome and Cardiovascular Risk J Am Coll Cardiol 201259(7)
635-43
4 International Diabetes Federation IDF Diabetes Atlas 6th edn International Diabetes Federation Belgium
Brussels 20131-155
5 World Health Organization Global Status Report on Noncommunicable Diseases 2010 World Health
Organization Geneva Switzerland 20111-176
6 Coman AE Petrovanu R Sindromul metabolic in practica de ambulator Editura Pim Iaşi 2009 1-103
7 Grundy SM Becker D Clark LT et alThird Report of the National Cholesterol Education Program (NCEP)
Expert Panel on Detection Evaluation and Treatment of High Blood Cholesterol in Adults (Adult
Treatment Panel III) Final Report Circulation 2002106(25)3143-90
8 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J Metabolic syndrome- a new worldwide definition A Consensus Statement
from the International Diabetes Federation Diabet Med 2006 23(5)469-80
9 KG Alberti KG Eckel RH Grundy SM etal International Diabetes Federation task force on epidemiology
and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart Association World Heart
Federation International Atherosclerosis Society International Association for the study of obesity
Harmonizing the metabolic syndrome a joint interim statement of the International Diabetes Federation task
force on epidemiology and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart
Association World Heart Federation International Atherosclerosis society and International Association
for the study of obesity Circulation 2009120(16)1640-5
10 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J IDF Epidemiology Task Force The metabolic syndrome new
worldwide definition Lancet 2005 366 1059 - 62
11 Oleszczyk M Svab I Seifert B et al Primary healthcare in the developing part of Europe changes and
development in the former Eastern Bloc countries that joined the European Union following 2004 Med Sci
Monit 2009(15)78ndash84
12 Jung U J Choi M S Obesity and Its Metabolic Complications The Role of Adipokines and the
Relationship between Obesity Inflammation Insulin Resistance Dyslipidemia and Nonalcoholic Fatty
Liver Disease Int J Mol Sci 2014rsquo15(4) 6184-223
13 Vanden Heuvel JP Peters JM Peroxisome Proliferators In Ramos K (ed) Cellular and Molecular
Toxicology (Second Edition) Volume 2 New York Elsevier Science Inc 2010 145 - 67
14 Yessoufou A Wahli W Multifaceted roles of peroxisome proliferator-activated receptors (PPARs) at the
cellular and whole organism levels Swiss Med Wkl 2010140w13071 doi104414smw201013071
15 Azhar S Peroxisome proliferator-activated receptors metabolic syndrome and cardiovascular disease
Future Cardiology 20106(5)657-91
16 Andries G Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity
Diabetes and Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(Suppl)24-32
17 Zandbergen F Plutzky J PPARalpha in atherosclerosis and inflammation Biochim Biophys Acta
20071771(8)972-82
18 Straus DS Glass CK Anti-inflammatory actions of PPAR ligands new insights on cellular and molecular
mechanisms Trends Immunol 200728(12)551-8
19 Zlei M Zugun- Eloae F Carasevici E Citometrie icircn flux - Bază şi clinică Icircn Hinescu ME (ed) Citometrie icircn
flux - principii şi aplicaţii clinice Bucureşti Editura Viaţa Medicală Romacircnească 20111-128
20 Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity Diabetes and
Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(9)24-32
21 Woerly G Honda K Loyens M et al Peroxisome proliferator-activated receptors alpha and gamma down-
regulate allergic inflammation and eosinophil activation J Exp Med 2003198(3)411-21
22 Salle-Saumont D Brenuchon C Kanda A et al Peroxisome proliferator-activated receptor alpha regulates
skin inflammation and humoral response in atopic dermatitis J Clin Allergy Immunology 2008 21(4)962-8
23 Schote A Turner J Schiltz J et al Nuclear receptors in human immune cells expression and correlations
Mol Immunolog 200744(6)1436-45
24 DAmore S Vacca M Graziano G et al Nuclear receptors expression chart icircn peripheral blood
mononuclear cells identifies patients with Metabolic Syndrome Biochim Biophys Acta
20131832(12)2289-301
25 Uthurralt J Gordish-Dressman H Bradbury M T et al PPARalpha L162V underlies variation in serum
triglycerides and subcutaneous fat volume in young males BMC Med Genet 2007855
26 Hiukka A Leinonen ES Jauhiainen M et al Long-term effects of fenofibrate on VLDL and HDL
subspecies icircn participants with type 2 diabetes mellitus Diabetologia 2007 50(10)2067-75
27 Robins SJ Rubins HB Faas FH et alInsulin resistance and cardiovascular events with low HDL
cholesterol The Veterans Affairs HDL Intervention Trial (VA-HIT) Diabetes Care 2003 26(5)1513-7
28 Devaraj S Siegel D Jialal I Statin Therapy in Metabolic Syndrome and Hypertension Post-JUPITER
What is the Value of CRP Curr Atheroscler Rep 2011 13(1) 31ndash42
29 Imperatore G Riccardi G Iovino C et al Plasma Fibrinogen A New Factor of the Metabolic Syndrome A
population-based study Diabetes Care 19982 1(4)649-54
30 Krysiak R Gdula-Dymek A Bachowski R Okopien B Pleiotropic effects of atorvastatin and fenofibrate
in metabolic syndrome and different types of pre-diabete Diabetes Care 201033(10)2266-70
31 Hermans MP Impact of Fenofibrate on Type 2 Diabetes Patients with Features of the Metabolic Syndrome
Subgroup Analysis From FIELD Curr Cardiol Rev 20106(2)112-8
32 Silverstein R Inflammation atherosclerosis and arterial thrombosis Role of the scavenger receptor CD36
Cleveland Clinic Journal of Medicine 200976(Suppl 2)S27-S30
33 Hăncu N Obezitatea In Vereşiu IA (ed) Diabetul zaharat nutritia si bolile metabolice Volume 2 Editura
Echinox Cluj- Napoca 2010 1-15
Lista lucrări publicate
1 Elena Popa Maria Maidaniuc Agnes Bacusca Alamir Diaa Rodica Petrovanu Adorata Elena
Coman Disfuncţia endotelială ndash de la mecanisme moleculare la cuantifi care şi tratament icircn practica
medicală Practica Medicală 20149(3) 109-14
2 Elena Popa Agnes Bacusca Alamir Diaa Maria Maidaniuc Rodica Petrovanu Adorata Elena Coman
The function of insulin receptor (IRF) in evolution of obesity correlation with adipocytes diameters
Archives of the Balkan Medical Union 201449(3) 275-9
3 Elena Popa Florin Zugun-Eloae Mihaela Zlei Daniela Jitaru Oana Maria Pintilie Adorata Elena
Coman Maria Traian Didona Anca Ungureanu Eugen Carasevici - acceptata pentru numarul 42014
Flow cytometry analysis of PPAR-alpha receptors in metabolic syndrome) Revista Romană de
Medicină de Laborator(RRLM-D-14-00034R1- adeverinţa ataşată
criteriilor de diagnostic ale SM Am observat că icircn cazul scorului Harmonised I
sensibilitatea şi specificitatea sunt de 100 iar AUC este egală cu 1000 Pentru cele cinci
criterii de diagnostic AUC a avut valori icircntre 0636 (pentru variabila HDL-col) şi 0804
(pentru variabila CA) (figura 431)
AUC ES 95 CI
Scor SM Harmonised I 1000 00000 0997 - 1000
CA (cm) 0804 00133 0781 - 0825
TAD (mmHg) 0666 00169 0639 - 0692
TAS (mmHg) 0757 00148 0732 - 0780
Glicemie (mgdl) 0742 00160 0717 - 0766
Trigliceride (mgdl) 0756 00175 0732 - 0780
HDL- colesterol 0636 00183 0609 - 0662
Figura 431 Analiza AUC criterii de diagnostic ale SM
Studiind figura 432 se observă că valoarea AUC pentru markerii studiaţi este cuprinsă
icircntre 0589 (icircn cazul variabilei Eo) şi 0690 (icircn cazul fibrinogenului) Icircn contextul SM
acurateţea acestor markeri ai inflamaţiei cronice şi disfuncţiei endoteliale poate fi considerată
redusă deoarece AUClt07 pentru toţi markerii investigaţi (figura 431) Totuşi valorile ariilor
parametrilor reprezentaţi icircn figura 431 sunt apropiate de valorile AUC ale variabilelor TAD
şi HDL-col (figura 432) şi deci pot fi utilizaţi pentru completarea diagnosticului de SM
AUC ES 95 CI
Non-HDL-colesterol 0605 00171 0580 - 0630
Col totalHDL-col 0607 00163 0642 - 0691
Acid uric 0655 00161 0630 - 0679
Fibrinogen 0690 00206 0658 - 0720
Eozinofile 0589 00176 0564 - 0615
Figura 432 AUC markeri ai SM inflamaţiei cronice şi aterogenezei
Discuţii
Status-ul proinflamator din SM asociat cu insulinorezistenţa şi disfuncţia endotelială
constituie o verigă de legătură dintre inflamaţie şi procesele metabolice complexe icircnsoţindu-
se de deteriorarea funcţiilor vasculare şi creşterea riscului de evenimente cardiovasculare
majore (2858) Studiul efectuat a arătat o diferenţă icircntre vacircrstele subiecţilor din cele două
loturi vacircrsta pacienţilor cu SM fiind semnificativ mai mare (Plt0001) comparativ cu subiecţii
normali confirmacircnd faptul menţionat că vacircrsta reprezintă unul din stimulii care agravează
inflamaţia cronică Am arătat că valorile fibrinogenului sunt mai mari icircn SM comparativ cu
Scor Harmonised I
0 20 40 60 80 100
0
20
40
60
80
100
100-Specificitate
Sen
sib
ilit
ate
Criterii diagnostic SM
0 20 40 60 80 100
0
20
40
60
80
100
100-Specificitate
Sens
ibili
tate
CA
TAD
TAS
Glicemie
Trigliceride
HDL-C
0 20 40 60 80 100
0
20
40
60
80
100
100-Specificitate
Sensi
bilita
te
Non-HDL-C
Col T HDL-C
Acid uric
Fibrinogen
Eozinofile
lotul martor atacirct la bărbaţi cacirct şi la femei icircn concordanţă cu studiile anterioare Evaluarea
fibrinogenului este importantă nu numai icircn SM pentru definirea contextului proinflamator şi
protrombotic ci şi icircn predicţia cardiovasculară la subiecţii normali Studiind populaţiile
leucocitare am obţinut diferenţe semnificative icircn cazul Eo valoarea medie a acestora fiind
semnificativ mai mare icircn lotul cu SM comparativ cu lotul martor (P lt 0001 figura 425B)
Implicarea Eo icircn SM s-a conturat icircn ultimul deceniu aceste celule fiind implicate icircn recrutarea
macrofagelor din ţesutul adipos Experimental s-a constatat că o creştere a Eo apărută ca
urmare a infectării cu helminţi sau stimulare cu IL-5 este urmată de icircmbunătăţirea toleranţei la
glucoză (199) Controlul pe care icircl exercită Eo asupra activării macrofagelor ar putea fi cheia
intervenţiei asupra obezităţii icircn viitorul apropiat(165199) Hiperuricemia asociata frecvent cu
SM este cunoscut ca un factor independent de risc cardiovascular (192 202) In concordanţă
cu aceasta afirmaţie in studiul nostru am constatat ca nivelul seric al acidului uric a fost mai
crescut in lotul cu SM diferenţa semnificativă din punct de vedere statistic (P lt 00001)
Dislipidemia aterogenă din sindromul metabolic şi diabetul zaharat se caracterizează prin
creşterea trigliceridelor şi a Non-HDL-col scăderea HDL-col creşterea numărului de
particule LDL modificate (185190) La pacienţii cu SM am descris un profil aterogenetic
cu risc crescut de evenimente cardiovasculare majore
STUDIUL RECEPTORILOR ACTIVAŢI DE INDUCTORII PROLIFERĂRII
PEROXIZOMILOR-ALPHA IcircN LEUCOCITELE CIRCULANTE
Ipoteza de lucru
Studii experimentale efectuate au arătat că rolul PPARα icircn ateroscleroză derivă din
implicarea acestor receptori icircn limitarea inflamaţiei Plecacircnd de la acest fundament ne-am
propus evidenţierea receptorilor nucleari activaţi de inductorii proliferării peroxizomilor-
alpha (PPARα) prin citometrie de flux icircn leucocitele din sacircngele periferic alături de
evaluarea acestei metode icircn cuantificarea expresiei relative a PPARα ca test diagnostic
precoce al modificărilor metabolice SM Studiul expresiei relative a receptorilor PPARα a
plecat de la premisa că dacă SM se caracterizează printr-un status inflamator cronic nivelul
de expresie a PPARα icircn leucocitele circulante este mai scăzut la pacienţii cu SM comparativ
cu subiecţii normali Referitor la studiul receptorului CD36 am plecat de la presupunerea că
nivelul de expresie al acestui receptor icircn SM este crescut dat fiind importanţa acestui receptor
icircn inflamaţia aterosclerotică Avacircnd icircn vedere efectele receptorilor amintiţi icircn
insulinorezistenţă şi aterogeneză am considerat necesară evaluarea prezenţei receptorului
nuclear PPARα icircn paralel cu studiul receptorului bdquoscavengerrdquo CD-36 prin metoda citometriei
icircn flux Astfel icircn studiul efectuat mi-am propus şi investigarea existenţei unei legături icircntre
nivelul de expresie al receptorilor PPARα şi cel al receptorului CD-36 De asemenea ne-am
icircndreptat atenţia spre stabilirea unor asocieri icircntre componentele clinice şi biochimice ale
sindromului metabolic şi nivelul intensităţilor de fluorescenţă ale PPARα şi CD-36 ca măsură
a expresiei relative a acestor receptori
Material și metodă
Studiul receptorilor PPARα icircn contextul sindromului metabolic s-a desfăşurat icircn
perioada 1012014 -28022014 pe baza metodologiei studiilor de tip caz-martor Am urmărit
identificarea unor diferenţe icircntre expresia receptorilor PPARα la pacienţii cu SM comparativ
cu subiecţii sănătoşi diferenţe care ar putea fi utile icircn diagnosticul precoce al SMRecrutarea
pacienţilor s-a efectuat din pacienţii prezentaţi pentru consultaţie la Cabinetul Individual
ldquoCMI Dr Popa Elenardquo situat icircn strada Ion Creanga din Iaşi Pentru studiul receptorilor
PPARα icircn sindromul metabolic au fost selecţionaţi un număr de 57 de subiecţi 26 de subiecţi
cu SM (constituind lotul SM) şi 31 subiecţi fără SM constituind lotul de control (Lot Non-
SM) Pentru studiul SM pacienţii au fost recrutaţi din masa de populaţie arondată cabinetului
de MF fără istoric de SM diabet zaharat boală cardio-vasculară aflați la primul diagnostic
de SM evaluarea completă a acestora fiind urmată de includerea icircn programul de
management cardiovascular şi metabolic conform Ghidurilor Terapeutice aflate icircn vigoare
Lot SM a) criterii de includerevacircrsta peste 18 ani recrutarea pe baza semnării
Consimţămacircntului liber informatSM nou-diagnosticat pe baza prezenţei a minim trei criterii
de diagnostic pentru SM conform Harmonised I b) criterii de excluderevacircrstă sub 18 ani
refuzul semnării Consimţămacircntului liber informat femei icircn perioada de graviditate sau de
lactaţie SM anterior diagnosticat istoric de diabet zaharat boală cardiovasculară constituită
tratament cu agonişti PPARα (ie fibraţi etc)
Lot martor (Non-SM) a) criterii de includerevacircrsta peste 18 ani recrutarea pe baza
semnării Consimţămacircntului liber informat absenţa diagnosticului de SM b) criterii de
excludere vacircrstă sub 18 ani refuzul semnării Consimţămacircntului liber informat femei icircn
perioada de graviditate sau de lactaţie
Studiul receptorilor PPARα a inclus două subetape
A Studiul componentelor sindromului metabolic conform criteriilor Harmonised I
Evaluarea clinică a participanţilor s-a desfăşurat icircn cadrul Cabinetului de Medicină de
Familie iar determinările hematologice şi biochimice s-au efectuat icircn Laboratorul
Ambulatorului Clinic de Specialitate al Spitalului Clinic de Urgenţă bdquoSf Spiridonrdquo Iaşi
B Evaluarea icircn citometrie de flux a nivelului relativ de expresie a PPARα şi CD36
Studiul receptorilor PPARα s-a desfăşurat icircn Laboratorul de Biologie Moleculară al
Institutului Regional de Oncologie Iaşi prin metoda citometriei icircn flux (19) Nivelul relativ de
expresie al receptorilor nucleari PPARα a fost determinat icircn diferite tipuri de leucocite
circulante polimorfonucleare (PMN) limfocite (Ly) Mo(Mo) şi eozinofile(Eo) Am utilizat o
metodă de citometrie icircn flux optimizată ldquoin houserdquo elaborată icircn cadrul Laboratorului de
Biologie Moleculară al IRO Iaşi Icircn cursul procesului de optimizare am testat mai multe
concentraţii ale anticorpului anti-PPARα 1100 1500 11500 14500 iar icircn urma
determinărilor efectuate şi a analizei statistice concentraţia 1500 a fost considerată optimă
pentru desfăşurarea studiului (tabel XXIII figura 51)
Tabel XXIII Optimizarea concentraţiilor Ac anti-PPARα Diferenţa
mediilor
valorilor
medii
PMN
Diferenţa
mediilor
mediane-
lor
PMN
Diferenţa
mediilor
valorilor
medii
Ly
Diferenţa
mediilor
mediane-
lor
Ly
Diferenţa
mediilor
valorilor
medii
Mo
Diferenţa
mediilor
mediane-
lor
Mo
Diferenţă 0 1300 1600 100 100 700 750
normal - 1100 650 1050 1050 1350 450 900
patologic 1500 2850 2750 3800 3600 2850 2400
11500 -1050 800 3500 3300 2250 1800
14500 2200 2150 1300 1100 2950 2850
AOptimizare
BRepetabilitate
Figura 51 Optimizarea concentraţiei anticorpului anti-PPARα
Icircn concordanţă cu literatura de specialitate icircn cercetarea efectuată intensitatea medie
de fluorescenţă (MFI) a fost utilizată ca măsură pentru evaluarea expresiei celulare a
receptorilor PPARα (212) Un exemplu de analiză a probelor este reprezentat icircn figura 52
Figura 52 Exemplu de analiză flowcitometrică pentru receptorul nuclear PPARα Graficul din stacircnga reprezintă distribuţia leucocitelor iar cel din dreapta ilustrează distribuţia
intensităţii de fluorescenţă pentru populaţiile de celule selectate
Intensitatea Medie a Fluorescenţei (MFI) a CD36 ca o măsură a nivelului relativ de
expresie a acestor receptori la nivelul membranei Mo a fost detectată printr-o metodă
convenţională pentru marcare de suprafaţă şi evaluare pe bază de citometrie icircn flux folosind
aceleaşi probe de sacircnge cu EDTA cu focalizare pe Mo şi utilizacircnd CD14 ca marker specific
pentru Mo (figura 53)
Figura 53Analiza
flowcitometrică
pentru marcajul
CD14 - CD36
Rezultate
Icircn cele două loturi au fost incluşi icircn studiu un număr de 57 de participanţi care au fost
investigaţi din punct clinic şi paraclinic Vacircrsta subiecţilor incluşi icircn studiu a fost cuprinsă
icircntre 18 şi 79 ani iar vacircrsta medie calculată a avut valoarea de 4805 plusmn 1587 ani Pentru sexul
masculin vacircrsta medie este de 4925plusmn1617 ani iar pentru sexul feminin 4689 plusmn1 5ani
diferenţa obţinută icircntre vacircrstele pacienţilor fiind statistic nesemnificativă (P = 085)
Analizacircnd vacircrstele subiecţilor din cele două loturi am observat că vacircrsta medie a pacienţilor
cu SM (5476 plusmn 1183 ani) a fost semnificativ mai mare (t-test P = 0003) decacirct icircn lotul
martor (4258 plusmn 169 ani) Pentru diagnosticul sindromului metabolic am calculat scorul de
SM bazacircndu-ne pe criteriile Harmonised I Conform criteriilor diagnostice din cei 57 de
subiecţi investigaţi un număr de 26 participanţi (46) au fost incluşi icircn lotul cu SM (Lot
SM) iar 31 de subiecţi(54) nu au prezentat acest sindrom constituind lotul martor (Lot
Non-SM) Din punct de vedere al repartiţiei pe sexe nu au existat diferenţe statistic
semnificative raportul bărbaţifemei fiind de 0961 Din totalul celor 28 de bărbaţi incluşi icircn
studiu 4285 (12 bărbaţi) au icircntrunit cel puţin trei criterii diagnostice pentru SM fiind
incluşi icircn lotul SM Icircn acelaşi timp 14 femei reprezentacircnd 4827 din subiecţii de sex
feminin au icircntrunit condiţiile pentru includerea icircn lotul pacienţilor cu SM Valoarea medie
determinată pentru scorul de SM a arătat prezenţa unor valori semnificativ statistic mai mari
din punct (t-test P lt 00001) icircn lotul SM (769plusmn176) comparativ cu lotul martor (174 plusmn
184) Am studiat comparativ media valorilor măsurate ale criteriilor componentelor SM
Analiza statistică a arătat valori semnificativ statistic mai mari pentru CA TG glicemie TAS
şi TAD (plt0001) icircn lotul SM comparativ cu lotul normal Concomitent calculul statistica
evidenţiat o scăderea semnificativă a HDL-colesterolului icircn lotul cu SM comparativ cu
subiecţii din lotul martor (Non-SM) Aplicacircnd testul z am comparat ponderea pacienţilor
diagnosticaţi cu HTA dislipidemie şi tulburări ale metabolismului glucidic icircn lotul SM versus
lot Non-SM şi am constatat prezenţa acestor afecţiuni icircntr-un procent mai mare semnificativ
statistic icircn lotul SM ((plt0001)
Utilizacircnd testul t Student am calculat diferenţele statistice şi icircntre alți parametri
studiaţi care sunt factori de risc cardio-vascular dar care nu sunt componente ale SM Icircn lotul
cu SM valorile acidului uric fibrinogenului Col total Non-HDL-col şi LDL-col au fost
semnificativ mai mari comparativ cu lotul martor (tabel XXVI) Analizacircnd valorile medii ale
populaţiilor de leucocite am identificat doar pentru populaţia de Eo diferenţe statistice icircntre
cele două loturi numărul Eo icircn lotul SM fiind semnificativ mai mare decacirct icircn lotul martorTot
pentru caracterizarea celor două loturi am analizat prezenţa antecedentelor
heredocolaterale (AHC) de diabet zaharat boala cardiovasculară şi dislipidemie pentru toţi
subiecţii investigaţi Astfel existenţa AHC de HTA a fost declarată de 2580 din subiecţii
incluşi icircn lotul martor respectiv de 5384 din numărul pacienţilor cu SM Antecedentele
heredocolaterale de dislipidemie au fost prezente la 3461 din pacienţii cu SM icircn timp ce icircn
lotul martor anamneza a evidenţiat aceste antecedente la 3548 din subiecţi
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα
Icircn cercetarea desfăşurată am utilizat intensitatea medie de fluorescenţă (MFI) ca
măsură a nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn leucocitele studiate Pentru
populaţiile de leucocite analiza computerizată a probelor luate icircn studiu a furnizat valori
pentru MFI a receptorilor PPARα icircn funcţie de cantitatea de anticorpi anti-PPARα marcaţi cu
fluorocrom care se leagă de aceste celule şi apoi sunt captaţi de citometru (figura 59)
A Lot Non - SM
B Lot SM
Figura 59 Analiza flowcitometrică pentru receptorii PPARα icircn leucocite A lot normal B lot SM
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Mo
Analiza probelor efectuată conform protocolului de lucru descris a arătat prezenţa
PPARα icircn Mo recoltate din sacircngele tuturor subiecţilor incluşi icircn această cercetare Pentru toţi
participanţii investigaţi analiza MFI a Ac anti - PPARα icircn populaţia de Mo (Mo) a arătat un
interval de variaţie icircntre [786 395] Valoarea medie a nivelului de expresie relativă a PPARα
calculată pentru Mo a fost de 23210 plusmn7860 Pentru ambele loturi de studiu pacienţilor cu
SM testul Testul Shapiro-Wilk a arătat distribuţia normală a valorilor obţinute pentru nivelul
de expresie al PPARα icircn Mo
Tabel XXVIII Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn Mo
Lot SM Lot Non-SM
N 26 31
Media 22819 23538
SD 5819 7717
Mediana 22400 22600
Minimum 12800 78600
Maximum 35800 37900
Percentila 25 18300 18300
Percentila 75 26200 30350
Pentru pacienţii din lotul SM valoarea medie a MFI icircn Mo a fost de 22819 plusmn 5880 iar
pentru lotul martor s-a calculat o valoare medie a MFI a Ac anti-PPARα de 23538 plusmn 7717
Distribuţia statistică a frecvenţei valorilor MFI obţinute pentru nivelul de expresie a PPARα
icircn Mo subiecţilor din cele două loturi a fost reprezentată icircn figura 511
Figura 511 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti-PPARα icircn Mo
Sub forma unei diagrame de control Shewhart am reprezentat variaţia intensităţii medii de
fluorescenţă pentru anticorpii anti-PPARα icircn MoVariaţia nivelului de expresie relativă a
receptorilor PPARα icircn Mo subiecţilor studiaţi este ilustrată icircn fig 512 513
Figura 512 Lot SM Variaţia
expresiei relative a PPARα icircn Mo
Număr pacienţi
26
Minim 128
Maxim 358
Media 22819
DS 5819
25 din 26 valori ale MFI s-au icircncadrat
icircn intervalul Media plusmn 2DS
Figura 513 Lot Non-SM Variaţia
expresiei relative a PPARα icircn Mo
Număr pacienţi 31
Minimum 786
Maximum 379
Media 23538
DS 7717
Cu excepţia unei singure
determinări valorile calculate s-au
icircncadrat icircn Media plusmn 2DS
Utilizacircnd testul parametric t-Student pentru variabilele cu distribuţie normală am
comparat valoarea medie a intensităţii de fluorescenţă a Ac anti-PPARα icircn lotul cu SM versus
subiecţi fără SM (Lot Non-SM) Analiza statistică efectuată nu a identificat diferenţe icircntre
50 100 150 200 250 300 350 400 450
0
5
10
15
20
25
30
35
MFI anti-PPAR a
Frecv
enta
relati
va (
)
Lot SM
0 50 100 150 200 250 300 350 400 450 500
0
5
10
15
20
25
30
35
MFI anti-PPAR a
Frecv
enta
relati
va (
)
Lot martor
1 6 11 16 21 26 31
0
50
100
150
200
250
300
350
400
450
MFI
anti-
PPAR
a
2282
1106
3458
518
4046
Media
LCI
LCI
1 6 11 16 21 26 31 36
-100
0
100
200
300
400
500
MFI a
nti-PP
AR
a
2354
810
3897
39
4669LCS
LCI
Media
cele două loturi icircn ceea ce priveşte expresia PPARα la nivelul Mo circulante (t- Test P=
069)
Studiul receptorilor PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de AHC şi dislipidemie
Nivelul de expresie al receptorilor PPARα α icircn Mo tinde să fie mai scăzut la subiecţii
cu AHC de HTA comparativ subiecţii care nu au declarat AHC de HTA (P= 006 fig 515)
AHC HTA
Număr 22
Mediana 19950
Percentila 25 17800
Percentila 75 22700
AHC HTA absente
Număr 35
Mediana 24800
Percentila 25 19025
Percentila 75 31700
Figura 515 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Mo funcţie de AHC de HTA
Nu s-au calculat diferenţe semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor
PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de dislipidemie atunci cacircnd aceştia au fost comparaţi cu
subiecţii fără AHC de tulburări ale metabolismului lipidic (t- Test P= 020)
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn limfocite
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn populaţia de Ly a
demonstrat prezenţa receptorilor PPARα icircn Ly tuturor subiecţilor studiaţi Pentru toţi
participanţii investigaţi analiza MFI a Ac anti - PPARα icircn populaţia de Ly a relevat un
interval de variaţie icircntre [748 314] iar valoarea medie a MFI a fost de 18058 plusmn 5600
Pentru ambele loturi aplicarea testului Shapiro-Wilk a evidenţiat distribuţia normală a
valorilor determinate pentru nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Ly Pentru
pacienţii cu SM valoarea medie a MFI determinată pentru expresia PPARα icircn populaţia de
Ly a fost de 18178 plusmn 61 16 iar pentru lotul martor a fost de 16800 plusmn 5229
Tabel XXX Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn limfocite
Lot SM Lot Non-SM
N 26 31
Media 181781 179574
SD 611694 522907
Mediana 165000 168000
Minimum 81300 74800
Maximum 314000 301000
Percentila 25 13400 - 145750
Percentila 75 21800 21700
Distribuţia frecvenţei valorilor MFI a Ac anti-PPARα icircn Ly este redată icircn figura 518
Figura 518 Distribuţia frecvenţelor relative a MFI a Ac anti-PPARα icircn Ly
94 din determinările efectuate pentru determinarea nivelului de expresie relativă al
MFI
ant
iPPA
R
a_Mo
190
200
210
220
230
240
250
260
270
280
DA NU
AHC HTA
P=006
50 89 128 167 206 244 283 322 361 400
0
5
10
15
20
25
30
35
MFI anti-PPAR a
Frecv
enta
relati
va (
)
Lot SM
0 50 100 150 200 250 300 350
0
5
10
15
20
25
30
35
40
MFI anti-PPAR a
Frec
venta
relat
iva (
)
Lot Non-SM
receptorilor PPARα icircn limfocitele subiecţilor cu SM s-au icircncadrat icircn intervalul Media plusmn 2DS
Figura 5 19 Lot SM Variaţia expresiei
relative a PPARα icircn Ly
Număr pacienţi 26
Minimum 813
Maximum 31400
Media 18178
Deviaţia Standard 6116
25 valori s-au icircncadrat icircn Media plusmn 2DS
Pentru lotul Non-SM diagrama de control (figura 520) a arătat toate valorile
determinate pentru lotul Non-SM se icircncadrează icircntre LCS şi LCI
Figura 520 Lot Non -SM Variaţia
expresiei relative a PPARα icircn Ly
Număr pacienţi 31
Minimum 748
Maximum 30100
Media 179574
Deviaţia Standard 5229
96 din valori icircncadrate icircn Media plusmn 2DS
Aplicarea testului t-Student pentru valorile medii ale intensităţii de fluorescenţă ale
PPARα icircn Ly nu a arătat existenţa unei diferenţe statistic semnificative icircntre lotul cu SM şi
lotul martor(t- Test P= 088)
Analiza receptorilor PPARα icircn Ly subiecţilor cu AHC de HTA şi dislipidemie
Studiind populaţiile de Ly la subiecţii care au prezentat AHC de hipertensiune
arterială analiza flowcitometrică a relevat existenţa unor valori mai mici pentru MFI la aceşti
subiecţi comparativ cu cei fără AHC de HTA (fig 522) deşi scăderea observată nu a
icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică (t- Test P = 009)
AHC HTA
Număr 22
Mediana 16000
Percentila 25 12700
Percentila 75 17100
AHC HTA absenţe
Număr 35
Mediana 18700
Percentila 25 14900
Percentila 75 23175
Figura 522 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Ly funcţie de AHC de HTA
Nu am calculat diferenţe statistic semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor
PPARα icircn populaţiile de Ly ale subiecţilor la care am identificat AHC de dislipidemie
comparativ cu cei care nu au declarat antecedente familiale de dislipidemie (t- Test P= 051)
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn neutrofile (PMN)
Analiza flowcitometrică a evidenţiat prezenţa PPARα icircn PMN recoltate din sacircngele
venos al tuturor participanţilor la studiu Pentru toţi subiecţii investigaţi analiza MFI a Ac -
PPARα icircn populaţia de PMN a relevat un interval de variaţie de [163419] iar valoarea medie
a MFI pentru Ac anti-PPARα a fost de 26392 plusmn 7064 Testul Shapiro-Wilk a arătat o
distribuţie normală a valorilor intensităţii medii de fluorescenţă a anticorpilor anti-PPARα atacirct
icircn lotul pacienţilor cu SM cacirct şi icircn lotul martor
1 6 11 16 21 26 31
-50
0
50
100
150
200
250
300
350
400
MFI
anti-
PPAR
a
1818
595
3041
-17
3653
Media+2DS
Media- 2DS
1 6 11 16 21 26 31 36
0
50
100
150
200
250
300
350
MFI
ant
i-PPA
R
a
1796
750
2841
227
3364
Media+2DS
Media
Media- 2DS
MFI
anti-
PPAR
a Ly
130
140
150
160
170
180
190
200
210
DA NU
AHC HTA
P=009
Tabel XXXII Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn PMN
Lot SM Lot Non-SM
N 26 31
Media 26273 26480
SD 6915 7088
Mediana 25900 25500
Minimum 17200 16300
Maximum 39500 41900
Percentila 25 19800 19600
Percentila 75 30500 31500
Icircn cele două loturi distribuţia frecvenţei valorilor nivelului relativ de expresie a
receptorilor PPARα icircn PMN a fost reprezentată sub formă de histograme (fig 525)
Figura 525 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti-PPARα icircn PMN
Pentru cei 26 de pacienţi din lotul cu SM a valoarea medie a nivelului de expresie
relativă a receptorilor PPARα icircn PMN a fost de 26273 plusmn 6915 Studiind diagrama Shewhart
din figura 526 se observă că toate valorile obţinute pentru nivelul de expresie relativă
PPARα icircn PMN investigate se icircncadrează icircntre limitele definite de valorile medii plusmn 2DS
Figura 526 Lot SM
Variaţia expresiei relative a PPARα icircn
PMN
Număr pacienţi 26
Minimum 17200
Maximum 39500
Media 26273
Deviaţia Standard 6915
Valorile MFI icircncadrate icircn Media plusmn 2DS
Pentru lotul martor valoarea medie calculată a MFI a anticorpilor anti-PPARα a fost de
26480 plusmn 7088 peste 95 din valorile MFI fiind cuprinse icircn Media plusmn 2DS (figura 527)
Figura 527 Lot Non-SM Variaţia expresiei
relative a PPARα icircn PMN
Număr pacienţi 31
Minimum 16300
Maximum 41900
Media 26480
Deviaţia Standard 7088
30 valoriicircn Media plusmn 2DS
Pentru PMN analiza statistica nu a arătat existenţa unei diferenţe statistic semnificative icircntre
nivelul de expresie relativă a PPARα la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii din lotul
Non-SM (t- Test P= 090) Studiind populaţiile de PMN la subiecţii care au prezentat AHC
de HTA nu am calculat o diferenţă statistic semnificativă icircntre expresia receptorilor PPARα
la subiecţii cu istoric familial de hipertensiune arterială comparativ cu cei pentru care nu s-au
notat AHC de HTA (t- Test P= 013)De asemenea am identificat diferenţe icircntre nivelul de
expresie al PPARα icircn PMN subiecţilor care prezentau AHC de dislipidemie comparativ cu
cei fără AHC de dislipidemie (t- Test P= 017)
50 100 150 200 250 300 350 400 450 500
0
5
10
15
20
25
30
35
MFI anti-PPAR a
Frecve
nta rel
ativa (
)
Lot SM
50 100 150 200 250 300 350 400 450 500
0
5
10
15
20
25
30
MFI anti-PPAR a
Frecv
enta
relati
va (
)
Lot Non-SM
1 6 11 16 21 26 31
0
50
100
150
200
250
300
350
400
450
500
MFI
anti-
PPA
R
a
2627
1244
4010
553
4702
Media + 2DS
Media - 2 DS
Media
1 6 11 16 21 26 31 36
0
50
100
150
200
250
300
350
400
450
500
MFI
anti-
PPAR
a
2648
1230
4066
522
4774
Media+ 2DS
Media - 2DS
Media
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile Tabel XXXIV Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn Eo
Lot SM Lot Non-SM
N 26 31
Mediaplusmn SD 141057 plusmn 47604 172209 plusmn 37565
Mediana 142450 171300
Minimum 35000 68500
Maximum 233700 250600
Percentila 25 119300 153225
Percentila 75 169700 199550
Am studiat nivelul relativ de expresie a receptorilor PPARα icircn Eo iar rezultatele au
fost figurate sub forma de histograme (figura 532)
Figura 532 Distribuţia frecventelor relative ale valorilor MFI anti- PPARα icircn Eo
Din diagrama Shewhart (figura 533) se observă că toate valorile determinate pentru
nivelul de expresie relativă a PPARα icircn Eo pentru lotul SM s-au icircncadrat icircn [Media plusmn 3 DS]
peste 90 din determinări fiind cuprinse icircn [Media plusmn 2 DS] iar icircn [Media plusmn 1 DS] sunt
incluse peste 65 din valorile MFI
Figura 533 Lot SM
Variaţia expresiei relative a PPARα icircn Eo
Număr pacienţi 26
Minimum 35000
Maximum 233700
Media 141057
Deviaţia Standard 47604
24 valori icircncadrat eicircn [Media plusmn 2DS]
Pentru subiecţii incluşi icircn lotul martor analiza diagramei (figura 534) a arătat că
toate cele 31 de valori ale MFI pentru PPARα icircn Eo se icircncadrează icircn [Media plusmn 3DS] iar 30
dintre acestea se icircncadrează icircn [ Media plusmn 2 DS]
Figura 534 Lot Non -SM
Variaţia expresiei relative a PPARα icircn Eo
Număr pacienţi 31
Minimum 685
Maximum 2506
Media 172209
Deviaţia Standard 375 65
30 valori icircncadrate icircn [Media plusmn 2DS]
Comparacircnd subiecţii cu SM cu cei din lotul martor am observat o scădere
semnificativă statistic a MFI a Ac anti - PPARα icircn Eo pentru pacienţiir cu SM ( figura 535)
PPARα Eo Lot Non-SM
Număr 31
Mediana 171300
Percentila 25 152325
Percentila 75 199550
PPARα Eo Lot SM
Număr 26
Mediana 142450
Percentila 25 119300
Percentila 75 169700
Figura 5 35 Comparaţie icircntre nivelul de expresie a PPARα icircn Eo
0 500 1000 1500 2000 2500 3000
0
10
20
30
40
50
MFI anti-PPAR a
Frecvent
a relativa
()
Lot SM
400 800 1200 1600 2000 2400 2800
0
5
10
15
20
25
30
35
40
45
MFI anti-PPAR a
Frecenta
relativa
()
Lot Non-SM
1 6 11 16 21 26 31
-500
0
500
1000
1500
2000
2500
3000
MFI a
nti-PP
AR
a
14106
4765
23447
94
28117
Media + 2DS
Media- 2DS
LCI
LCS
1 6 11 16 21 26 31 36
500
1000
1500
2000
2500
3000
MFI an
ti-PPA
R a
17221
9708
24734
5951
28490
LCI
Media-2DS
Media
Media +2 DS
LCS
1200
1300
1400
1500
1600
1700
1800
1900
Lot SM Lot Non-SM
P=00072
Cu ajutorul curbei ROC am evaluat posibilitatea utilizării MFI a Ac anti - PPARα icircn
Eo ca marker pentru diagnosticul SM Valoarea MFI a Ac anti - PPARα icircn Eo care prezice cu
cea mai mare acurateţe prezenţa SM a fost de 1533 (punctul de ldquocut-offrdquo) pentru care am
calculat o sensibilitate de 5652 şi o specificitate de 7778 Calculul ariei AUC a furnizat
valoarea de 0663 şi deci determinarea parametrului MFI anti- PPARα icircn Eo are valoarea
unui test cu acurateţe redusatilde icircn diagnosticul SM Studiind expresia PPARα icircn Eo la subiecţii
care au prezentat AHC de HTA am observat o scădere semnificativă statistic (P = 00023) a
expresiei PPARα la subiecţii cu istoric familial de HTA comparativ cu subiecţii fatilderatilde AHC de
HTA (figura 537)
AHC HTA
Număr 22
Mediana 148800
Percentila 25 116425
Percentila 75 170750
AHC HTA absente
Număr 35
Mediana 170850
Percentila 25 143700
Percentila 75 195000
Figura 537 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Eo funcţie de AHC de HTA
Studiind subiecţii cu AHC declarate de dislipidemie nu am identificat diferenţe icircntre
nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Eo subiecţilor cu AHC de dislipidemie
comparativ cu cei care nu au declarat prezenţa AHC de dislipidemie (t - Test P = 067)
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor CD36
Am studiat expresia receptorilor CD36 icircn Mo subiecţilor incluşi icircn studiu
Lot Non - SM
BLot SM
Figura 539 Analiza flowcitometrica pentru receptorii CD36 icircn Mo
Pentru toţi participanţii la studiu valorile MFI au variat icircn intervalul [817 6933] iar
valoarea medie a MFI a Ac anti-CD36 a fost de 397133 plusmn 120902 Tabel XXXVII Statistică descriptivă pentru a CD36 icircn Mo
Lot SM Lot Non-SM
Media 429034 370377
Deviatia Standard 109051 125514
Mediana 411000 362800
Minimum 266400 81700
Maximum 693300 616800
Percentila 25 346200 273750
Percentila 75 469000 453300
Distribuţia frecvenţelor relative a MFI au fost prezentate sub formă histogramelor
Figura 541 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti - CD36 icircn Mo
MFI
ant
i-PPA
R a Eo
1000
1100
1200
1300
1400
1500
1600
1700
1800
1900
DA NU
AHC HTA
P=00023
1000 2000 3000 4000 5000 6000 7000 8000
0
5
10
15
20
25
MFI anti-CD36
Frecve
nta rela
tiva (
)
Lot SM
0 1778 3556 5333 7111
0
5
10
15
20
25
30
35
MFI anti-CD36
Frecve
nta rel
ativa (
)
Lot Non - SM
Referitor la lotul SM 92 din valorile MFI a Ac anti- CD36 s-au icircncadrat icircn
intervalul Media plusmn 2 DS (figura 542) iar pentru lotul martor peste 90 dintre acestea icircn
Media plusmn 2 DS (figura 543)
Figura 542 Lot SM
Variaţia MFI anti-CD36 icircn Mo
Număr pacienţi 26
Minimum 2664
Maximum 6933
Media 429034
Deviaţia Standard 109051
Figura 543 Lot Non -SM
Variaţia MFI anti- CD36 icircn Mo
Număr 31
Minimum 81700
Maximum 616800
Media 370377
Deviaţia Standard 125514
Comparacircnd subiecţii cu SM cu cei din lotul normal am constatat o tendinţă de creştere
a expresiei CD36 icircn lotul cu SM((t - Test P= 0067)
MFI anti - CD36 Lot Non-SM
Număr 31
Mediana 3628
Percentila 25 2737
Percentila 75 4533
MFI anti - CD36 Lot SM
Număr 26
Mediana 4110
Percentila 25 3462
Percentila 75 4690
Figura 544 Comparaţie icircntre cel două loturi privind MFI anti - CD36 icircn Mo
Referindu-ne la subiecţii cu AHC de HTA am observat o tendinţă de creştere a
valorilor MFI anti-CD36 comparativ cu cei care nu au avut AHC de HTA (t - Test P = 0 08)
AHC HTA
Număr 22
Mediana 442800
Percentila 25 355275
Percentila 75 519475
AHC HTA absenţe
Număr 35
Mediana 377400
Percentila 25 316900
Percentila 75 443400
Figura 545 Comparaţie icircntre expresia CD36 icircn Mo funcţie de AHC de HTA
Nu s-au calculat diferenţe semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor
PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de dislipidemie atunci cacircnd aceştia au fost comparaţi cu
subiecţii fără AHC de dislipidemie (t - Test P=031)
Corelaţii icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα si CD36
Studiind valorile intensităţii medii de fluorescenţă a Ac anti-PPARα icircn Mo Ly şi
PMN am observat că nivelul de expresie celularatilde a PPARα icircn Mo Ly şi PMN sunt corelate
puternic pozitiv atacirct icircn lotul SM cacirct şi icircn lotul martor(fig547 548)
1 6 11 16 21 26 31
0
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
Pacienti
MFI a
nti-CD
36
42903
21093
64714
10188
75619
LCI
Media
LCS1 6 11 16 21 26 31 36
-1000
0
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
MFI a
nti- C
D36
37038
11935
62141
-616
74692Media + 2 DS
Media
Media - 2 DS
3200
3400
3600
3800
4000
4200
4400
4600
4800
Lot SM Lot Non-SM
P = 00676
MFI
anti-
CD36
3400
3600
3800
4000
4200
4400
4600
4800
5000
DA NU
AHC HTA
P = 008
Figura 547 Studiul relatiilor dintre
receptorii PPARα icircn SM A Mo vs PMN B Mo vs Ly
C PMN vs Ly Graficul ilustrează coeficienţii r P dreapta de
regresie (linia centrala) intervalul de icircncredere
95 şi intervalul de predicţie 95
Figura 548 Corelaţii icircntre receptorii PPARα icircn lotul
martor
A Mo vs PMN
B Mo vs Ly
C PMN vs Ly
Tot pentru lotul SM cacircnd am evaluat relaţia dintre nivelul de expresie relativă a
receptorilor PPARα icircn Eo şi nivelul de expresie relativa a receptorilor CD 36 am obţinut o
corelaţie negativă (r = - 05 P = 001) (fig 549 A)
50 100 150 200 250 300 350 50
100
150
200
250
300
350
400
450
500
PPARα Ly
PPARα PMN
y = 56641 + 1159 x r = 086 P lt 0001
C
50 100 150 200 250 300 350 400 0
50
100
150
200
250
300
350
PPARα Mo
PPARα Ly
y = 36665 + 0607 x r = 090 P lt 0001
B
150 200 250 300 350 400 450 0
50 100 150 200 250 300 350 400 450 500
PPARα PMN
PPARα Mo
y = 2505 + 0879 x r = 081 P lt 0001
A
50 100 150 200 250 300 350
50 100 150 200 250 300 350 400 450 500
PPARα Ly
PPARα PMN
y = 95668 + 0919 x r = 081 P lt 0001
C
100 150 200 250 300 350 400
0
50
100
150
200
250
300
350
400
PPARα Mo
PPARα Ly
y = -7503 + 0829 x r = 079 P lt 0001
B
100 150 200 250 300 350 400
50
100
150
200
250
300
350
400
450
500
PPARα Mo
PPARα PMN
y = 61384 + 0882 r = 074 P lt 0001
A
Figura 549 Corelaţii icircntre expresia PPARα icircn Eo şi alte tipuri de receptori investigaţi A PPARα Eo şi CD 36 (Lot SM) B PPARα Eo şi PPARα Mo( Lot Non-SM)
Icircn lotul martor am identificat o asociere moderată pozitivă (r = 038 P = 0033) icircntre
nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Eo şi Mo (figura 549B) corelaţie absentă icircn
lotul pacienţilor cu SM
Corelaţii dintre receptorii studiaţi şi componentele sindromului metabolic
Icircn lotul de control analiza statistică a relevat faptul că icircntre circumferinţa
abdominală (CA ) şi nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Mo Ly şi PMN există o
corelaţie inversă adică scăderea expresiei PPARα la nivelul acestor populatii celulare ar fi
icircnsoţită de creşterea CA (figura 550
Figura 550Corelaţii dintre receptorii
PPARα si CA A Mo B Ly C PMN
La pacienţii cu SM am notat o corelatie moderată negativă statistic semnificativă
icircntre TG şi valorile MFI a Ac anti- PPARα icircn Mo şi Ly( fig 551)
150 200 250 300 350 400 450 50
60
70
80
90
100
110
PPARα PMN
CA r = - 040 P = 0024
C
50 100 150 200 250 300 350 50
60
70
80
90
100
110
PPARα Ly
CA r = - 046 P = 0009
B
50 100 150 200 250 300 350 400 50
60
70
80
90
100
110
PPARα Mo
CA r = - 042 P = 0017
A
50 100 150 200 250 300 350 400 500
1000
1500
2000
2500
3000
PPARα Mo
PPARα Eo
r = 038 P = 0033
B
0 500 1000 1500 2000 2500 1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
PPARα Eo
CD36
r = 050 P = 0010
A
Figura 551 Lot SM Corelaţie icircntre expresia PPARα şi TG (A Mo B Ly)
Analizand corelatia dintre receptorii CD36 si valorile TA la pacientii cu SM am observat
o asociere pozitivă asteptată intre TAD si nivelul de expresie al receptorilor CD36 (fig 552)
Figura 552 Lot SM Corelaţii icircntre expresia
receptorilor CD36 şi valorile tensiunii arteriale
diastolice
Studiind corelaţiile dintre receptorii PPARα şi HDL-col la subiecţii din lotul martor am
notat o asociere pozitivă icircntre expresia PPARα icircn Mo şi Ly cu HDL-col (fig 553)
Figura 553 Lot martor Corelaţii icircntre HDL-col şi expresia PPARα icircn Mo(A) Ly(B)
Icircn lotul normal am evidenţiat corelaţii pozitive moderate dar semnificative statistic icircntre
CA şi valorile TAS (r = 062 P lt 0001) respectiv TAD (r = 050 P=0004) precum şi icircntre
CA şi glicemia subiecţilor normali (r = 052 P = 0003) Aceste date icircmpreună cu relaţia
invers proporţională identificată icircntre HDL-col şi CA (r = 050 P = 001) susţin validitatea
acestui studiu Icircn lotul subiecţilor cu SM am observat o corelaţie moderat pozitivă icircntre
expresia PPARα icircn populaţiiile de Mo şi Eo şi concentraţia a HDL-col (fig 554)
B
100 150 200 250 300 350 20
30
40
50
60
70
80
90
100
PPARα Ly
HDL-col-(mgdl)
r = 036 P = 0046
A
150 200 250 300 350 400 20
30
40
50
60
70
80
90
100
PPARα Mo
HDL-col-(mgd)l
r = 035 P = 005
70 75 80 85 90 95 100 1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
TAD (mmHg)
CD36
r = 048 P = 0013
B
50 100 150 200 250 300 350 -100
0
100
200
300
400
500
PPARα Ly
TG(mgdl)
r = - 042 P = 003
A
50 100 150 200 250 300 350 400 -100
0
100
200
300
400
500
PPARα Mo
TG ( mgdl) r =- 0 43 P = 0027
Figura 554 Corelaţii icircn SM icircntre HDL-col şi expresia PPARα icircn Mo (A) şi Eo(B)
Corelaţii icircntre nivelul de expresie relativă a PPARα şi markeri ai disfuncţiei
endoteliale şi inflamaţiei cronice
Deşi nu a icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică am reţinut corelaţia invers
proporţională (r = - 0331 P = 006) dintre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα
icircn PMN şi concentraţia serică a Non-HDL-colesterolului
Studiind relaţiile dintre parametri icircn lotul de pacienţi cu SM am observat o corelaţie
moderată invers proporţională icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Eo şi
acidul uric seric (figura 555 A) corelaţie absentă la subiecţii fără SM
Figura 555 Lot SM corelaţia dintre expresia PPARα icircn Eo şi acidul uric (A) respectiv
PPARα şi fibrinogen (B)
Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P=008) am notat pentru
pacienţii cu SM corelaţia invers proporţională dintre expresia PPARα icircn Eo şi concentraţia
serică a fibrinogenului ( figura 555B)
V5 Discuţii
Icircn cadrul lucrării de doctorat am studiat nivelul de expresie relativă a PPARα icircn
leucocitele pacienţilor cu SM comparativ cu cea a subiecţilor normali Expresia PPARα a fost
studiată icircn paralel cu cea a CD36 glicoproteină exprimată pe suprafaţa a numeroase celule
din organismul uman inclusiv pe cea a Mo şi macrofagelor Prin funcţia sa de receptor pentru
particulele oxidate de LDL CD36 cunoscut ca bdquoscavenger receptorrdquo de clasa B sau
bdquotrombospodin receptorrdquo contribuie la dezvoltarea inflamaţiei de la nivel endotelial şi
formarea plăcii de ateroscleroză Referitor la studiul PPARα icircn Eo icircn sindromul metabolic
menţionăm că studiul nostru este primul care arată că nivelul de expresie a proteinei PPARα
icircn Eo măsurat prin citometrie icircn flux este semnificativ mai redus la pacienţii care sunt
diagnosticaţi cu acest sindrom De asemenea icircn lotul cu SM cercetat icircn cadrul studiului
receptorilor PPARα numărul Eo circulante a fost semnificativ mai crescut la pacienţii cu SM
B
0 500 1000 1500 2000 2500 200
250
300
350
400
450
PPARα Eo o
Fibrinogen mgdl
r =- 036 P = 008
0 500 1000 1500 2000 2500 1 2 3 4 5 6 7 8 9
10 11
PPARα Eo_
Acid uric(mgdl) r = 048 P = 0014 A
0 500 1000 1500 2000 2500 10
20
30
40
50
60
70
80
PPARα Eo
HDL(mgdl)
r = 044 P = 0024
B
100 150 200 250 300 350 400 10
20
30
40
50
60
70
80
PPARα Mo
HDL( mgdl)
r = 046 P = 0019
A
(P = 003) Aceste constatări conduc la ipoteza că Eo joacă un rol special icircn mecanismele
patogenice declanşate icircn sindromul metabolic şi că receptorii PPARα sunt importanţi icircn
implicarea Eo icircn obezitate şi insulinorezistenţă Creşterea numărului de Eo circulante este
urmată de eliberarea mediatorilor proinflamatori iar reducerea expresiei PPARα icircn Eo
determină perturbarea mecanismelor de control al inflamaţiei cu exacerbarea cascadei
proinflamatorii Consecutiv se agravează disfuncţia endotelială şi se accelerează progresia
leziunilor de ateroscleroză Extrapolacircnd aceste ipoteze putem spune că asocierea raportată
dintre boala ischemică coronariană şi Eo poate fi şi consecinţa exacerbării cascadei
proinflamatorii de la nivel vascular produsă datorită scăderii expresiei PPARα icircn Eo iar
creşterea numărului de Eo circulante poate reprezenta o adaptare a organismului uman care
icircncearcă să suplinească deficitul de receptori PPARα Analizacircnd curba ROC pentru
intensităţile medii de fluorescenţă determinate pentru anticorpii anti- PPARα icircn Eo am
obţinut pentru acest biomarker o sensibilitate a testului de 565 şi o specificitate de 778
pentru un punct de cut-off de 1533 ( figura 536 ) Deşi aria AUC (Aria under the curve) egală
cu 0663 icircncadrează acest test ca avacircnd o acurateţe redusă observăm că că această valoare
este apropiată de determinările AUC pentru alţi factori (fibrinogen raport de aterogenitate
acid uric non- HDL-colesterol) cunoscuţi ca fiind implicaţi icircn aterogeneză şi inflamaţia
cronică (figura 431) Aceste remarci alături de faptul că icircn studiul receptorilor PPARα icircn
leucocite am inclus subiecţi la primul diagnostic de SM creează premisa integrării
determinării expresiei relative a receptorilor PPARα icircn diagnosticul complex al sindromului
metabolic Putem spune că icircn final studiul expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofilele
circulante se dovedește a fi util icircn diagnosticul precoce la nivel molecular al SM permiţacircnd
identificarea timpurie a unor indivizi cu risc cardiometabolic crescut Astfel intervenţia
precoce asupra subiecţilor cu deficit de PPARα icircn Eo contribuie la managementul eficient al
afecţiunilor degenerative icircn care inflamaţia cronică icircndeplineşte un rol primordial Referitor
la populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările efectuate prin citometrie de flux nu au
arătat existenţa unor diferenţe statistice icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα
la subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali Rezultatele noastre pot fi
consecinţa caracteristicilor loturilor studiate (icircn studiul nostru au fost incluşi subiecţi recrutaţi
la primul diagnostic de SM şi icircn absenţa stimulării receptorilor PPARα cu droguri agoniste
PPARα) dar icircn acelaşi timp pot apare diferenţe datorită metodei utilizate (231 232 233)
Făcacircnd o paralelă cu un studiu publicat icircn 2013 icircn Europa (231) care a arătat creşterea
nivelului de expresie al PPARα icircn Ly şi Mo observăm că deşi numărul de subiecţi a fost
aproximativ egal (57 participanţi icircn studiul nostru 60 icircn studiul DAmore) subiecţii icircn studiul
amintit au fost recrutaţi dintr-o clinică cu profil medical la primul diagnostic de SM icircn timp
ce metoda utilizată a fost PCR (Polymerase Chain Reaction) mult mai fidelă decacirct citometria
icircn flux icircn studiul receptorilor nucleari De asemenea DAmore nu investighează expresia
PPARα icircn Eo şi PMN icircn cercetare fiind incluse doar celulele CD14+ (predominant Mo) şi
CD14- (predominant Ly) Deşi nu am obţinut diferenţe statistic semnificative icircntre cele două
loturi referitoare la nivelul de expresie relativă a PPARα icircn Mo Ly şi PMN am observat
corelaţii puternice semnificative statistic icircntre expresia receptorilor PPARα icircn aceste tipuri
celulare Rezultatele obţinute sugerează existenţa unui mecanism diferit molecular de control
icircn eozinofile care reglează cantitatea de proteină PPARα icircn eozinofile versus alte tipuri de
leucocite (la pacienţii cu SM) şi acest lucru este icircn concordanţă cu cercetările care descriu
expresia PPARα mRNA icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale
bronşice keratinocite) Studiind prin citometrie de flux nivelul de expresie relativă a
receptorului CD36 la nivelul Mo am arătat prezenţa acestuia icircn Mo tuturor subiecţilor
investigaţi Analizacircnd valorile intensităţii medii de fluorescenţă a CD36 icircn loturile studiate
am observat o tendinţă de creştere la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali
confirmacircnd implicarea receptorului CD36 icircn patogeneza acestuia Referitor la expresia
receptorului CD36 rezultatele obţinute sunt icircn consens cu studii anterioare care au arătat
creşterea expresiei CD36 la pacienţii cu SM şi diabet zaharat Astfel pe lacircngă diferenţa icircn
expresia CD36 s-au raportat şi corelaţii inverse icircntre expresia proteinei CD36 şi nivelul
adiponectinei Acelaşi studiu a evidenţiat o corelaţie pozitivă intre expresia CD36 cu expresia
receptorilor PPAR gamma relaţia cu PPARα nefiind investigată
Analiza de subgrup a relaţiilor dintre componentele SM și elementele moleculare
proinflamatorii studiate a relevat prezenţa unor asocieri semnificativ statistice icircntre acestea
Se argumentează astfel că veridicitatea studiului este susţinută de interdependenţele statistice
ale componentelor SM Determinarea coeficientului de corelaţie Icircn studiul nostru nivelul de
expresie relativă a PPARα s-a corelat moderat negativ (figura 550) cu CA a subiecţilor din
lotul normal pentru populaţiile celulare de Mo (r = - 0420 P = 001) Ly (r = - 046 P =
0009) şi PMN (r = - 040 P = 0024) date care sunt icircn concordanţă cu studiile care arată
rolul PPARα icircn furnizarea energiei prin beta-oxidarea acizilor graşi Icircn acelaşi timp icircn lotul
pacienţilor cu SM nu am identificat prezenţa unei asocieri icircntre nivelul de expresie relativă a
PPARα şi valoarea măsurată a CA Asocierea dintre expresia relativă a PPARα cu obezitatea
de tip central completează datele existente referitoare la reglarea homeostaziei energetice
conturacircnd un mecanism de control deficitar al aportului caloric al SM Icircn condiţiile icircn care
rezultatele obţinute prin metoda citometriei icircn flux nu au arătat existenţa unei corelaţii intre
expresia PPARα şi CA la pacienţii cu SM considerăm că ar fi necesar studiul
polimorfismului genei PPARA care ar putea aduce informaţii importante cu privire la
implicarea acestor receptori icircn apariţia obezităţii de tip central Subliniem acest lucru deoarece
obezitatea este o boală plurifactorială icircn care pe lacircngă factorii ereditari sunt implicaţi factori
de mediu psihologici şi sociali (245) Existenţa unei componente genetice a aterosclerozei
este legată şi de prezenţa unor variante ale genei PPARA asociate cu creşterea incidenţei bolii
cardiovasculare (82) şi a SM (249) Icircn studiul nostru am constatat o scădere statistic
semnificativă a nivelului expresiei relative a receptorilor PPARα icircn Eo la subiecţii cu
antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială comparativ cu subiecţii fără istoric
familial de hipertensiune (figura 537) Deşi diferenţele calculate icircntre loturile studiate nu au
icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică la subiecţii care au declarat prezenţa
antecedentelor familiale de hipertensiune arterială remarcăm o tendinţă de scădere a
intensităţii medii de fluorescenţă pentru Ac anti-PPARα la nivelul Mo (figura 515 P = 006
) icircn timp ce expresia relativă a CD36 icircnregistrează o creştere la acesti subiecţi (figura 545 P
= 008) Icircn contextul riscului cardiovascular foarte icircnalt al pacienţilor cu SM amintim şi
existenţa corelaţiei pozitive dintre valorile tensiunii arteriale diastolice şi expresia relativă a
receptorului CD36 (r = 0483 P = 0013) Această constatare este icircn consens cu studiile care
au arătat că forma solubilă circulantă a CD36 este asociată cu factorii de risc cardiovasculari
fiind propusă ca un marker precoce al aterosclerozei Activarea PPARα este asociată cu
modularea metabolismului lipidic iar agoniştii PPARα sunt utilizaţi icircn mod curent pentru
tratamentul dislipidemiei Sub acţiunea agoniştilor PPARα se obţine o icircmbunătăţire a funcţiei
endoteliale şi a parametrilor reologici funcţiile pleiotropice ale agoniştilor PPARα fiind
dovedite icircn trialuri clinice controlate Icircn populaţiile de Mo şi Ly la pacienţii cu SM
cercetarea noastră a evidenţiat o asociere negativă icircntre nivelul de expresie relativă a
receptorilor PPARα şi concentraţia TG serice (figura 551) Astfel scăderea expresiei
receptorilor PPARα este asociată cu creşterea nivelului TG serice contribuind la profilul
lipidic aterogen din SM Icircn conformitate cu literatura de specialitate icircn studiul efectuat prin
metoda citometriei icircn flux am găsit prezenţa asocierii icircntre nivelul de expresie al PPARα şi
HDL-colesterol Corelaţia pozitivă dintre nivelul de expresie relativă PPARα şi concentraţia
HDL-colesterolului a fost observată icircn lotul martor icircn populaţiile de Mo (r = 035 P = 005)
şi Ly ( r = 036 P = 004) (figura 553) susţinacircnd faptul că stimularea receptorilor PPARα
este legată de creşterea nivelului seric al lipoproteinelor cu densitate crescută La pacienţii cu
SM corelaţia dintre expresia PPARα şi HDL-colesterol a fost evidenţiată icircn populaţiile de Mo
(r = 046 P = 0019) şi eozinofile (r = 044 P = 0024) Se desprinde concluzia că icircn
sindromul metabolic scăderea concentraţiei HDL-colesterol este legată de diminuarea
nivelului de expresie relativă a receptorilor nucleari PPARα icircntărind afirmaţiile legate de
rolul acestor receptori icircn progresia bolilor cardiovasculare Studiind reactanţii de fază acută
analiza statistică a relevat o diferenţă semnificativă din punct de vedere statistic icircntre valorile
fibrinogenului la pacienţii cu SM atunci cacircnd au fost comparaţi cu subiecţii fără SM
(Capitolul IV4 P lt0 001 figura 427A) De asemenea icircn Capitolul V dedicat studiul
expresiei relative a receptorilor PPARα studiul valorilor fibrinogenului a arătat creşterea
acestui reactant de faza acută icircn lotul cu SM comparativ cu lotul martor (P lt0 0001) Icircn
studiul nostru am calculat o corelaţie invers proporţionala (r = - -036 fig 555B) icircntre
nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile şi concentraţia serică a
fibrinogenului Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P = 008) am reţinut
această asociere deoarece am demonstrat că nivelul de expresie relativă al receptorilor
PPARα icircn eozinofile este mai scăzut icircn sindromul metabolic iar sindromul metabolic este
caracterizat printr-un status inflamator cronic status caracterizat şi de creşterea concentraţiei
serice a fibrinogenului De asemenea notam ca această corelaţie negativă se află icircn
concordanţă cu studiile care arata că tratamentul cu agonişti PPARα (fibraţi) determina
scăderea nivelului seric al fibrinogenului contribuind la diminuarea inflamaţiei cronice din
sindromul metabolic şi icircn consecinţă amelioracircnd insulinorezistenţa
LIMITE ȘI DIFICULTĂȚI IcircN CERCETARE
Icircn cadrul Tezei de Doctorat am desfăşurat o cercetare care şi-a propus studierea
expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Recrutarea anamneza şi examinarea
clinică a subiecţilor au fost realizate icircn cadrul Cabinetului de Medicină de Familie CMI Popa
Elena din Iaşi iar determinările hematologice şi biochimice s-au efectuat icircn cadrul
Laboratorului Ambulatorului de Specialitate al Spitalului Universitar ldquoSfacircntul Spiridon din
Iaşi Icircn studiul epidemiologic şi al markerilor inflamatori al sindromului metabolic desfăşurat
au fost incluşi un număr de 1530 de participanţi pe baza liberului consimţămacircnt examinaţi icircn
perioada 01012013 - 31122013 Icircn continuare icircn perioada 1012014 - 28022014 pe baza
criteriilor de includere şi excludere icircn cele două loturi de studiu am investigat un număr de 57
de subiecţi prezentaţi la consultaţie icircn această perioadă şi care au icircndeplinit criteriile de
includere icircn cele două loturi (Lot SM şi Lot Control) constituite pentru evaluarea nivelului de
expresie a receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Explorarea nivelului de expresie
relativă a receptorilor PPARα s-a desfăşurat icircn cadrul Laboratorului de Biologie Moleculară
de pe platforma Institutului Regional de Oncologie Datorită resurselor proprii financiare
limitate trebuie să subliniez că aceasta cercetare nu ar fi fost posibilă fără contribuţia unor
cercetători din domeniul medical care m-au sprijinit necondiţionat atacirct icircn elaborarea
protocolului de lucru cacirct şi icircn efectuarea propriu-zisă a studiului Icircn acest sens menţionăm şi
faptul că pentru studiul receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic am utilizat aparatura
Laboratorului de Biologie Moleculară (care deserveşte icircntreaga Regiune a Moldovei) Pe
această cale mulţumesc personalului Laboratorului de Biologie Moleculară pentru ajutorul
acordat icircn desfăşurarea cercetării doctorale icircn condiţiile icircn care se observa creşterea
numărului de pacienţi care se adresează acestei platforme de cercetare Mulţumesc de
asemenea şi Doamnei Doctor Elena Butoi din cadrul Institutului de Biologie şi Patologie
Moleculară ldquoNicolae Simionescurdquo Bucureşti) pentru donaţia anticorpului secundar anti-
FITC Icircn consecinţă pentru recrutarea unui număr mai mare de participanţi ar fi fost necesară
icircn primul racircnd obţinerea unor resurse financiare suplimentare pentru achiziţia de aparatură şi
reactivi Totuşi numărul subiecţilor recrutaţi este apropiat de numărul subiecţilor raportaţi icircn
cadrul unor granturi de cercetare care aveau ca ţinta studiul expresiei receptorilor PPARα
(212 227 228 231) Rezultatele obţinute continua seria lucrărilor care arata importanta
studiului mecanismelor etiopatogenice ale sindromului metabolic patologie care se afla icircntr-o
continuă creştere La pacienţii cu SM pe lacircngă diminuarea nivelului de expresie a receptorilor
PPARα icircn eozinofile ne aşteptam şi la evidenţierea unor modificări icircn expresia PPARα şi icircn
populaţiile de Ly Mo şi PMN Acest fapt poate fi explicat de utilizarea unor celule provenite
de la pacienţi fără afectare cardiovasculară fără diabet zaharat şi necesită continuarea
studiului pe culturi celulare icircn condiţii de stimulare cu agonişti PPARα deziderat care
impune continuarea investigării expresiei PPARα printr-un grant de cercetare
ORIGINALITATEA ȘI CONTRIBUȚIILE INOVATIVE ALE TEZEI DE
DOCTORAT PERSPECTIVE DE CERCETARE
Evaluarea nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn leucocitele circulante
aduce noi perspective icircn studiul obezităţii şi sindromului metabolic Importanta studiului
expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic derivă din prevalenta crescută a
sindromului metabolic icircn populaţia cercetată la care se adaugă riscul cardiovascular foarte
icircnalt al acestor pacienţi cu implicaţii majore icircn sănătatea publică Rolul receptorilor PPARα
icircn inflamaţie şi aterogeneza este binecunoscut dar studiul nostru este primul care a arătat că
nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα este semnificativ mai scăzut in populatiile
de eozinofile la pacienţii cu SM Această concluzie coroborata cu existenţa unei stracircnse
asocieri intre expresia receptorilor PPARα la nivelul Mo limfocitelor şi PMNlor creeaza
ipoteza existenţei unui mecanism de control diferit al expresiei PPARα la nivelul
eozinofilelor Această cercetare aduce informaţii importante referitoare la mecanismele
proinflamatorii care stau la baza insulinorezistenţei şi riscului cardiometabolic şi impune
continuarea studiului acestor receptori nucleari prin citometrie icircn flux metodă care poate fi
aplicată şi la scara mai largă dacă sunt asigurate resursele materiale necesare cercetării
Cercetarea prin citometrie icircn flux poate fi completată de studiul polimorfismului genei
PPARA şi astfel se pot identifica timpuriu indivizii cu potenţial risc cardiometabolic crescut
Studiul receptorilor PPARα a stabilit conexiuni cu factori proinflamatori şi aterogenetici iar
continuarea cercetării poate aduce şi elemente noi de diagnostic precoce icircn sindromul
metabolic contribuind la icircmbunătăţirea prognosticului acestor pacienţi
CONCLUZII FINALE
1 Aplicarea scorului de SM alături de implementarea algoritmului electronic de diagnostic
contribuie la o prelucrare rapidă eficientă și standardizată a informaţiilor la nivelul
medicinei primare
2 Prevalenţa SM calculată astfel icircn cadrul studiului este crescută (2732) icircn concordanţă
cu datele raportate
3 Controlul factorilor de risc cardiometabolici incluşi icircn SM se poate realiza prin
managementul stilului de viaţă (scăderea greutăţii corporale prin combaterea
sedentarismului şi adoptarea unei diete antiaterogene şi hipocalorice) şi administrarea
terapiei medicamentoase
4 Este necesară adoptarea unei politici de sănătate publică pentru prevenirea creşterii icircn
populaţie a prevalenţei obezităţii şi a diabetului zaharat
5 Noi metode de cercetare icircn domeniul SM axate pe diagnosticarea precoce şi cuantificarea
eficientă a acestuia duce la diminuarea incidenței evenimentelor cardiovasculare majore
6 Sindromul metabolic se caracterizează printr-un status inflamator cronic
7 Valorile Non-HDL-colesterolului şi a raportului de aterogenitate sunt semnificativ mai
mari la pacienţii cu SM
8 Dintre reactanţii de faza acută am observat că valoarea medie a fibrinogenului este mai
crescută icircn lotul cu SM
9 Valorile eozinofilelor sunt crescute icircn sindromul metabolic iar explorarea relaţiei dintre
eozinofile şi obezitate constituie una din direcţiile de studiu actuale ale sindromului
metabolic
10 Evaluarea markerilor inflamatori icircn contextul sindromului metabolic este utilă icircn
evaluarea complexă a a factorilor de risc cardiometabolici
11 Prin metoda citometriei icircn flux am demonstrat prezenta Receptorilor Activaţi de
Inductorii Proliferării Peroxizomilor ndash Alpha (PPARα) icircn toate populaţiile de leucocite
studiate (Mo limfocite PMN eozinofile) atacirct icircn lotul pacienţilor cu SM cacirct şi icircn lotul
martor
12 Utilizacircnd intensitatea medie de fluorescenţă a anticorpilor anti- PPARα am arătat că
nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile este semnificativ mai redus
la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali
13 Acest studiu este primul care a demonstrat existenţa unei scăderi statistic semnificative a
nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofilele pacienţilor cu SM
confirmacircnd cercetările recente care au evidenţiat rolul eozinofilelor şi al receptorilor
PPARα icircn obezitate reglarea inflamaţiei cronice şi aterogeneza
14 Contrar aşteptărilor noastre icircn populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările
efectuate icircn cele două loturi de studiu (cu şi fără sindom metabolic) nu am evidenţiat
diferenţe statistic seminificative icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα la
subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali
15 Icircn populaţiile de Mo limfocite şi polimorfonucleare am observat corelaţii puternice
semnificativ statistic icircntre expresia PPARα icircn aceste tipuri celulare sugeracircnd existenţa
unui mecanism unic de control al inflamaţiei cronice la nivelul acestor celule probabil
diferit de cel din eozinofile
16 La subiecţii cu SM expresia relativă a PPARα icircn Eo este invers asociată cu expresia
receptorului CD36 (receptor al particulelor de ox - LDL şi propus ca un marker precoce al
aterosclerozei) dovedind rolul antiinflamator al receptorilor PPARα la nivel endotelial
17 La pacienţii cu antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială nivelul de
expresie al receptorilor PPARα icircn eozinofile şi Mo este diminuat comparativ cu subiecţii
fără antecedente familiale de hipertensiune arterială Putem spune că studiul efectuat de
noi aduce informaţii importante legate de geneză aterosclerozei şi hipertensiunii arteriale
18 Prin studiul asocierilor dintre receptorii PPARα şi componentele clinice ale sindromului
metabolic am arătat rolul acestor receptori icircn determinismul obezităţii de tip central
nivelul expresiei relative a receptorilor PPARα fiind invers proporţional cu circumferinţa
abdominală
19 Icircn acelaşi timp nivelul de expresie a PPARα icircn sindromul metabolic este asociat pozitiv
cu concentraţia serică a HDL-colesterolului şi invers asociat cu nivelul trigliceridelor
serice dovedind rolul acestor receptori icircn diminuarea procesului inflamator cronic de la
nivel vascular
20 La pacienţii cu SM scăderea expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofile este corelată cu
creşterea unor markeri ai sindromului inflamator cronic cardiometabolic (acid uric
fibrinogen) ilustracircnd importanta receptorilor icircn reglarea status-ului inflamator cronic din
sindromul metabolic
21 Utilizarea metodei flowcitometrice pentru studiul expresiei relative a receptorilor PPARα
icircn leucocite a adus informaţii importante cu privire la mecanismele moleculare de control
implicate icircn patogenia bolilor cardiometabolice icircn concordanţă cu cercetările care descriu
expresia PPAR icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale bronşice
keratinocite)
BIBLIOGRAFIE SELECTIVA
1 Kahn R Metabolic syndrome- what is the clinical usefulness Lancet 2008371(9628)1892-3
2 Reaven GM The metabolic syndrome is this diagnosis necessary Am J Clin Nutr 2006 83(6)1237-7
3 Grundy SM Pre-Diabetes Metabolic Syndrome and Cardiovascular Risk J Am Coll Cardiol 201259(7)
635-43
4 International Diabetes Federation IDF Diabetes Atlas 6th edn International Diabetes Federation Belgium
Brussels 20131-155
5 World Health Organization Global Status Report on Noncommunicable Diseases 2010 World Health
Organization Geneva Switzerland 20111-176
6 Coman AE Petrovanu R Sindromul metabolic in practica de ambulator Editura Pim Iaşi 2009 1-103
7 Grundy SM Becker D Clark LT et alThird Report of the National Cholesterol Education Program (NCEP)
Expert Panel on Detection Evaluation and Treatment of High Blood Cholesterol in Adults (Adult
Treatment Panel III) Final Report Circulation 2002106(25)3143-90
8 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J Metabolic syndrome- a new worldwide definition A Consensus Statement
from the International Diabetes Federation Diabet Med 2006 23(5)469-80
9 KG Alberti KG Eckel RH Grundy SM etal International Diabetes Federation task force on epidemiology
and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart Association World Heart
Federation International Atherosclerosis Society International Association for the study of obesity
Harmonizing the metabolic syndrome a joint interim statement of the International Diabetes Federation task
force on epidemiology and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart
Association World Heart Federation International Atherosclerosis society and International Association
for the study of obesity Circulation 2009120(16)1640-5
10 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J IDF Epidemiology Task Force The metabolic syndrome new
worldwide definition Lancet 2005 366 1059 - 62
11 Oleszczyk M Svab I Seifert B et al Primary healthcare in the developing part of Europe changes and
development in the former Eastern Bloc countries that joined the European Union following 2004 Med Sci
Monit 2009(15)78ndash84
12 Jung U J Choi M S Obesity and Its Metabolic Complications The Role of Adipokines and the
Relationship between Obesity Inflammation Insulin Resistance Dyslipidemia and Nonalcoholic Fatty
Liver Disease Int J Mol Sci 2014rsquo15(4) 6184-223
13 Vanden Heuvel JP Peters JM Peroxisome Proliferators In Ramos K (ed) Cellular and Molecular
Toxicology (Second Edition) Volume 2 New York Elsevier Science Inc 2010 145 - 67
14 Yessoufou A Wahli W Multifaceted roles of peroxisome proliferator-activated receptors (PPARs) at the
cellular and whole organism levels Swiss Med Wkl 2010140w13071 doi104414smw201013071
15 Azhar S Peroxisome proliferator-activated receptors metabolic syndrome and cardiovascular disease
Future Cardiology 20106(5)657-91
16 Andries G Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity
Diabetes and Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(Suppl)24-32
17 Zandbergen F Plutzky J PPARalpha in atherosclerosis and inflammation Biochim Biophys Acta
20071771(8)972-82
18 Straus DS Glass CK Anti-inflammatory actions of PPAR ligands new insights on cellular and molecular
mechanisms Trends Immunol 200728(12)551-8
19 Zlei M Zugun- Eloae F Carasevici E Citometrie icircn flux - Bază şi clinică Icircn Hinescu ME (ed) Citometrie icircn
flux - principii şi aplicaţii clinice Bucureşti Editura Viaţa Medicală Romacircnească 20111-128
20 Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity Diabetes and
Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(9)24-32
21 Woerly G Honda K Loyens M et al Peroxisome proliferator-activated receptors alpha and gamma down-
regulate allergic inflammation and eosinophil activation J Exp Med 2003198(3)411-21
22 Salle-Saumont D Brenuchon C Kanda A et al Peroxisome proliferator-activated receptor alpha regulates
skin inflammation and humoral response in atopic dermatitis J Clin Allergy Immunology 2008 21(4)962-8
23 Schote A Turner J Schiltz J et al Nuclear receptors in human immune cells expression and correlations
Mol Immunolog 200744(6)1436-45
24 DAmore S Vacca M Graziano G et al Nuclear receptors expression chart icircn peripheral blood
mononuclear cells identifies patients with Metabolic Syndrome Biochim Biophys Acta
20131832(12)2289-301
25 Uthurralt J Gordish-Dressman H Bradbury M T et al PPARalpha L162V underlies variation in serum
triglycerides and subcutaneous fat volume in young males BMC Med Genet 2007855
26 Hiukka A Leinonen ES Jauhiainen M et al Long-term effects of fenofibrate on VLDL and HDL
subspecies icircn participants with type 2 diabetes mellitus Diabetologia 2007 50(10)2067-75
27 Robins SJ Rubins HB Faas FH et alInsulin resistance and cardiovascular events with low HDL
cholesterol The Veterans Affairs HDL Intervention Trial (VA-HIT) Diabetes Care 2003 26(5)1513-7
28 Devaraj S Siegel D Jialal I Statin Therapy in Metabolic Syndrome and Hypertension Post-JUPITER
What is the Value of CRP Curr Atheroscler Rep 2011 13(1) 31ndash42
29 Imperatore G Riccardi G Iovino C et al Plasma Fibrinogen A New Factor of the Metabolic Syndrome A
population-based study Diabetes Care 19982 1(4)649-54
30 Krysiak R Gdula-Dymek A Bachowski R Okopien B Pleiotropic effects of atorvastatin and fenofibrate
in metabolic syndrome and different types of pre-diabete Diabetes Care 201033(10)2266-70
31 Hermans MP Impact of Fenofibrate on Type 2 Diabetes Patients with Features of the Metabolic Syndrome
Subgroup Analysis From FIELD Curr Cardiol Rev 20106(2)112-8
32 Silverstein R Inflammation atherosclerosis and arterial thrombosis Role of the scavenger receptor CD36
Cleveland Clinic Journal of Medicine 200976(Suppl 2)S27-S30
33 Hăncu N Obezitatea In Vereşiu IA (ed) Diabetul zaharat nutritia si bolile metabolice Volume 2 Editura
Echinox Cluj- Napoca 2010 1-15
Lista lucrări publicate
1 Elena Popa Maria Maidaniuc Agnes Bacusca Alamir Diaa Rodica Petrovanu Adorata Elena
Coman Disfuncţia endotelială ndash de la mecanisme moleculare la cuantifi care şi tratament icircn practica
medicală Practica Medicală 20149(3) 109-14
2 Elena Popa Agnes Bacusca Alamir Diaa Maria Maidaniuc Rodica Petrovanu Adorata Elena Coman
The function of insulin receptor (IRF) in evolution of obesity correlation with adipocytes diameters
Archives of the Balkan Medical Union 201449(3) 275-9
3 Elena Popa Florin Zugun-Eloae Mihaela Zlei Daniela Jitaru Oana Maria Pintilie Adorata Elena
Coman Maria Traian Didona Anca Ungureanu Eugen Carasevici - acceptata pentru numarul 42014
Flow cytometry analysis of PPAR-alpha receptors in metabolic syndrome) Revista Romană de
Medicină de Laborator(RRLM-D-14-00034R1- adeverinţa ataşată
lotul martor atacirct la bărbaţi cacirct şi la femei icircn concordanţă cu studiile anterioare Evaluarea
fibrinogenului este importantă nu numai icircn SM pentru definirea contextului proinflamator şi
protrombotic ci şi icircn predicţia cardiovasculară la subiecţii normali Studiind populaţiile
leucocitare am obţinut diferenţe semnificative icircn cazul Eo valoarea medie a acestora fiind
semnificativ mai mare icircn lotul cu SM comparativ cu lotul martor (P lt 0001 figura 425B)
Implicarea Eo icircn SM s-a conturat icircn ultimul deceniu aceste celule fiind implicate icircn recrutarea
macrofagelor din ţesutul adipos Experimental s-a constatat că o creştere a Eo apărută ca
urmare a infectării cu helminţi sau stimulare cu IL-5 este urmată de icircmbunătăţirea toleranţei la
glucoză (199) Controlul pe care icircl exercită Eo asupra activării macrofagelor ar putea fi cheia
intervenţiei asupra obezităţii icircn viitorul apropiat(165199) Hiperuricemia asociata frecvent cu
SM este cunoscut ca un factor independent de risc cardiovascular (192 202) In concordanţă
cu aceasta afirmaţie in studiul nostru am constatat ca nivelul seric al acidului uric a fost mai
crescut in lotul cu SM diferenţa semnificativă din punct de vedere statistic (P lt 00001)
Dislipidemia aterogenă din sindromul metabolic şi diabetul zaharat se caracterizează prin
creşterea trigliceridelor şi a Non-HDL-col scăderea HDL-col creşterea numărului de
particule LDL modificate (185190) La pacienţii cu SM am descris un profil aterogenetic
cu risc crescut de evenimente cardiovasculare majore
STUDIUL RECEPTORILOR ACTIVAŢI DE INDUCTORII PROLIFERĂRII
PEROXIZOMILOR-ALPHA IcircN LEUCOCITELE CIRCULANTE
Ipoteza de lucru
Studii experimentale efectuate au arătat că rolul PPARα icircn ateroscleroză derivă din
implicarea acestor receptori icircn limitarea inflamaţiei Plecacircnd de la acest fundament ne-am
propus evidenţierea receptorilor nucleari activaţi de inductorii proliferării peroxizomilor-
alpha (PPARα) prin citometrie de flux icircn leucocitele din sacircngele periferic alături de
evaluarea acestei metode icircn cuantificarea expresiei relative a PPARα ca test diagnostic
precoce al modificărilor metabolice SM Studiul expresiei relative a receptorilor PPARα a
plecat de la premisa că dacă SM se caracterizează printr-un status inflamator cronic nivelul
de expresie a PPARα icircn leucocitele circulante este mai scăzut la pacienţii cu SM comparativ
cu subiecţii normali Referitor la studiul receptorului CD36 am plecat de la presupunerea că
nivelul de expresie al acestui receptor icircn SM este crescut dat fiind importanţa acestui receptor
icircn inflamaţia aterosclerotică Avacircnd icircn vedere efectele receptorilor amintiţi icircn
insulinorezistenţă şi aterogeneză am considerat necesară evaluarea prezenţei receptorului
nuclear PPARα icircn paralel cu studiul receptorului bdquoscavengerrdquo CD-36 prin metoda citometriei
icircn flux Astfel icircn studiul efectuat mi-am propus şi investigarea existenţei unei legături icircntre
nivelul de expresie al receptorilor PPARα şi cel al receptorului CD-36 De asemenea ne-am
icircndreptat atenţia spre stabilirea unor asocieri icircntre componentele clinice şi biochimice ale
sindromului metabolic şi nivelul intensităţilor de fluorescenţă ale PPARα şi CD-36 ca măsură
a expresiei relative a acestor receptori
Material și metodă
Studiul receptorilor PPARα icircn contextul sindromului metabolic s-a desfăşurat icircn
perioada 1012014 -28022014 pe baza metodologiei studiilor de tip caz-martor Am urmărit
identificarea unor diferenţe icircntre expresia receptorilor PPARα la pacienţii cu SM comparativ
cu subiecţii sănătoşi diferenţe care ar putea fi utile icircn diagnosticul precoce al SMRecrutarea
pacienţilor s-a efectuat din pacienţii prezentaţi pentru consultaţie la Cabinetul Individual
ldquoCMI Dr Popa Elenardquo situat icircn strada Ion Creanga din Iaşi Pentru studiul receptorilor
PPARα icircn sindromul metabolic au fost selecţionaţi un număr de 57 de subiecţi 26 de subiecţi
cu SM (constituind lotul SM) şi 31 subiecţi fără SM constituind lotul de control (Lot Non-
SM) Pentru studiul SM pacienţii au fost recrutaţi din masa de populaţie arondată cabinetului
de MF fără istoric de SM diabet zaharat boală cardio-vasculară aflați la primul diagnostic
de SM evaluarea completă a acestora fiind urmată de includerea icircn programul de
management cardiovascular şi metabolic conform Ghidurilor Terapeutice aflate icircn vigoare
Lot SM a) criterii de includerevacircrsta peste 18 ani recrutarea pe baza semnării
Consimţămacircntului liber informatSM nou-diagnosticat pe baza prezenţei a minim trei criterii
de diagnostic pentru SM conform Harmonised I b) criterii de excluderevacircrstă sub 18 ani
refuzul semnării Consimţămacircntului liber informat femei icircn perioada de graviditate sau de
lactaţie SM anterior diagnosticat istoric de diabet zaharat boală cardiovasculară constituită
tratament cu agonişti PPARα (ie fibraţi etc)
Lot martor (Non-SM) a) criterii de includerevacircrsta peste 18 ani recrutarea pe baza
semnării Consimţămacircntului liber informat absenţa diagnosticului de SM b) criterii de
excludere vacircrstă sub 18 ani refuzul semnării Consimţămacircntului liber informat femei icircn
perioada de graviditate sau de lactaţie
Studiul receptorilor PPARα a inclus două subetape
A Studiul componentelor sindromului metabolic conform criteriilor Harmonised I
Evaluarea clinică a participanţilor s-a desfăşurat icircn cadrul Cabinetului de Medicină de
Familie iar determinările hematologice şi biochimice s-au efectuat icircn Laboratorul
Ambulatorului Clinic de Specialitate al Spitalului Clinic de Urgenţă bdquoSf Spiridonrdquo Iaşi
B Evaluarea icircn citometrie de flux a nivelului relativ de expresie a PPARα şi CD36
Studiul receptorilor PPARα s-a desfăşurat icircn Laboratorul de Biologie Moleculară al
Institutului Regional de Oncologie Iaşi prin metoda citometriei icircn flux (19) Nivelul relativ de
expresie al receptorilor nucleari PPARα a fost determinat icircn diferite tipuri de leucocite
circulante polimorfonucleare (PMN) limfocite (Ly) Mo(Mo) şi eozinofile(Eo) Am utilizat o
metodă de citometrie icircn flux optimizată ldquoin houserdquo elaborată icircn cadrul Laboratorului de
Biologie Moleculară al IRO Iaşi Icircn cursul procesului de optimizare am testat mai multe
concentraţii ale anticorpului anti-PPARα 1100 1500 11500 14500 iar icircn urma
determinărilor efectuate şi a analizei statistice concentraţia 1500 a fost considerată optimă
pentru desfăşurarea studiului (tabel XXIII figura 51)
Tabel XXIII Optimizarea concentraţiilor Ac anti-PPARα Diferenţa
mediilor
valorilor
medii
PMN
Diferenţa
mediilor
mediane-
lor
PMN
Diferenţa
mediilor
valorilor
medii
Ly
Diferenţa
mediilor
mediane-
lor
Ly
Diferenţa
mediilor
valorilor
medii
Mo
Diferenţa
mediilor
mediane-
lor
Mo
Diferenţă 0 1300 1600 100 100 700 750
normal - 1100 650 1050 1050 1350 450 900
patologic 1500 2850 2750 3800 3600 2850 2400
11500 -1050 800 3500 3300 2250 1800
14500 2200 2150 1300 1100 2950 2850
AOptimizare
BRepetabilitate
Figura 51 Optimizarea concentraţiei anticorpului anti-PPARα
Icircn concordanţă cu literatura de specialitate icircn cercetarea efectuată intensitatea medie
de fluorescenţă (MFI) a fost utilizată ca măsură pentru evaluarea expresiei celulare a
receptorilor PPARα (212) Un exemplu de analiză a probelor este reprezentat icircn figura 52
Figura 52 Exemplu de analiză flowcitometrică pentru receptorul nuclear PPARα Graficul din stacircnga reprezintă distribuţia leucocitelor iar cel din dreapta ilustrează distribuţia
intensităţii de fluorescenţă pentru populaţiile de celule selectate
Intensitatea Medie a Fluorescenţei (MFI) a CD36 ca o măsură a nivelului relativ de
expresie a acestor receptori la nivelul membranei Mo a fost detectată printr-o metodă
convenţională pentru marcare de suprafaţă şi evaluare pe bază de citometrie icircn flux folosind
aceleaşi probe de sacircnge cu EDTA cu focalizare pe Mo şi utilizacircnd CD14 ca marker specific
pentru Mo (figura 53)
Figura 53Analiza
flowcitometrică
pentru marcajul
CD14 - CD36
Rezultate
Icircn cele două loturi au fost incluşi icircn studiu un număr de 57 de participanţi care au fost
investigaţi din punct clinic şi paraclinic Vacircrsta subiecţilor incluşi icircn studiu a fost cuprinsă
icircntre 18 şi 79 ani iar vacircrsta medie calculată a avut valoarea de 4805 plusmn 1587 ani Pentru sexul
masculin vacircrsta medie este de 4925plusmn1617 ani iar pentru sexul feminin 4689 plusmn1 5ani
diferenţa obţinută icircntre vacircrstele pacienţilor fiind statistic nesemnificativă (P = 085)
Analizacircnd vacircrstele subiecţilor din cele două loturi am observat că vacircrsta medie a pacienţilor
cu SM (5476 plusmn 1183 ani) a fost semnificativ mai mare (t-test P = 0003) decacirct icircn lotul
martor (4258 plusmn 169 ani) Pentru diagnosticul sindromului metabolic am calculat scorul de
SM bazacircndu-ne pe criteriile Harmonised I Conform criteriilor diagnostice din cei 57 de
subiecţi investigaţi un număr de 26 participanţi (46) au fost incluşi icircn lotul cu SM (Lot
SM) iar 31 de subiecţi(54) nu au prezentat acest sindrom constituind lotul martor (Lot
Non-SM) Din punct de vedere al repartiţiei pe sexe nu au existat diferenţe statistic
semnificative raportul bărbaţifemei fiind de 0961 Din totalul celor 28 de bărbaţi incluşi icircn
studiu 4285 (12 bărbaţi) au icircntrunit cel puţin trei criterii diagnostice pentru SM fiind
incluşi icircn lotul SM Icircn acelaşi timp 14 femei reprezentacircnd 4827 din subiecţii de sex
feminin au icircntrunit condiţiile pentru includerea icircn lotul pacienţilor cu SM Valoarea medie
determinată pentru scorul de SM a arătat prezenţa unor valori semnificativ statistic mai mari
din punct (t-test P lt 00001) icircn lotul SM (769plusmn176) comparativ cu lotul martor (174 plusmn
184) Am studiat comparativ media valorilor măsurate ale criteriilor componentelor SM
Analiza statistică a arătat valori semnificativ statistic mai mari pentru CA TG glicemie TAS
şi TAD (plt0001) icircn lotul SM comparativ cu lotul normal Concomitent calculul statistica
evidenţiat o scăderea semnificativă a HDL-colesterolului icircn lotul cu SM comparativ cu
subiecţii din lotul martor (Non-SM) Aplicacircnd testul z am comparat ponderea pacienţilor
diagnosticaţi cu HTA dislipidemie şi tulburări ale metabolismului glucidic icircn lotul SM versus
lot Non-SM şi am constatat prezenţa acestor afecţiuni icircntr-un procent mai mare semnificativ
statistic icircn lotul SM ((plt0001)
Utilizacircnd testul t Student am calculat diferenţele statistice şi icircntre alți parametri
studiaţi care sunt factori de risc cardio-vascular dar care nu sunt componente ale SM Icircn lotul
cu SM valorile acidului uric fibrinogenului Col total Non-HDL-col şi LDL-col au fost
semnificativ mai mari comparativ cu lotul martor (tabel XXVI) Analizacircnd valorile medii ale
populaţiilor de leucocite am identificat doar pentru populaţia de Eo diferenţe statistice icircntre
cele două loturi numărul Eo icircn lotul SM fiind semnificativ mai mare decacirct icircn lotul martorTot
pentru caracterizarea celor două loturi am analizat prezenţa antecedentelor
heredocolaterale (AHC) de diabet zaharat boala cardiovasculară şi dislipidemie pentru toţi
subiecţii investigaţi Astfel existenţa AHC de HTA a fost declarată de 2580 din subiecţii
incluşi icircn lotul martor respectiv de 5384 din numărul pacienţilor cu SM Antecedentele
heredocolaterale de dislipidemie au fost prezente la 3461 din pacienţii cu SM icircn timp ce icircn
lotul martor anamneza a evidenţiat aceste antecedente la 3548 din subiecţi
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα
Icircn cercetarea desfăşurată am utilizat intensitatea medie de fluorescenţă (MFI) ca
măsură a nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn leucocitele studiate Pentru
populaţiile de leucocite analiza computerizată a probelor luate icircn studiu a furnizat valori
pentru MFI a receptorilor PPARα icircn funcţie de cantitatea de anticorpi anti-PPARα marcaţi cu
fluorocrom care se leagă de aceste celule şi apoi sunt captaţi de citometru (figura 59)
A Lot Non - SM
B Lot SM
Figura 59 Analiza flowcitometrică pentru receptorii PPARα icircn leucocite A lot normal B lot SM
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Mo
Analiza probelor efectuată conform protocolului de lucru descris a arătat prezenţa
PPARα icircn Mo recoltate din sacircngele tuturor subiecţilor incluşi icircn această cercetare Pentru toţi
participanţii investigaţi analiza MFI a Ac anti - PPARα icircn populaţia de Mo (Mo) a arătat un
interval de variaţie icircntre [786 395] Valoarea medie a nivelului de expresie relativă a PPARα
calculată pentru Mo a fost de 23210 plusmn7860 Pentru ambele loturi de studiu pacienţilor cu
SM testul Testul Shapiro-Wilk a arătat distribuţia normală a valorilor obţinute pentru nivelul
de expresie al PPARα icircn Mo
Tabel XXVIII Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn Mo
Lot SM Lot Non-SM
N 26 31
Media 22819 23538
SD 5819 7717
Mediana 22400 22600
Minimum 12800 78600
Maximum 35800 37900
Percentila 25 18300 18300
Percentila 75 26200 30350
Pentru pacienţii din lotul SM valoarea medie a MFI icircn Mo a fost de 22819 plusmn 5880 iar
pentru lotul martor s-a calculat o valoare medie a MFI a Ac anti-PPARα de 23538 plusmn 7717
Distribuţia statistică a frecvenţei valorilor MFI obţinute pentru nivelul de expresie a PPARα
icircn Mo subiecţilor din cele două loturi a fost reprezentată icircn figura 511
Figura 511 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti-PPARα icircn Mo
Sub forma unei diagrame de control Shewhart am reprezentat variaţia intensităţii medii de
fluorescenţă pentru anticorpii anti-PPARα icircn MoVariaţia nivelului de expresie relativă a
receptorilor PPARα icircn Mo subiecţilor studiaţi este ilustrată icircn fig 512 513
Figura 512 Lot SM Variaţia
expresiei relative a PPARα icircn Mo
Număr pacienţi
26
Minim 128
Maxim 358
Media 22819
DS 5819
25 din 26 valori ale MFI s-au icircncadrat
icircn intervalul Media plusmn 2DS
Figura 513 Lot Non-SM Variaţia
expresiei relative a PPARα icircn Mo
Număr pacienţi 31
Minimum 786
Maximum 379
Media 23538
DS 7717
Cu excepţia unei singure
determinări valorile calculate s-au
icircncadrat icircn Media plusmn 2DS
Utilizacircnd testul parametric t-Student pentru variabilele cu distribuţie normală am
comparat valoarea medie a intensităţii de fluorescenţă a Ac anti-PPARα icircn lotul cu SM versus
subiecţi fără SM (Lot Non-SM) Analiza statistică efectuată nu a identificat diferenţe icircntre
50 100 150 200 250 300 350 400 450
0
5
10
15
20
25
30
35
MFI anti-PPAR a
Frecv
enta
relati
va (
)
Lot SM
0 50 100 150 200 250 300 350 400 450 500
0
5
10
15
20
25
30
35
MFI anti-PPAR a
Frecv
enta
relati
va (
)
Lot martor
1 6 11 16 21 26 31
0
50
100
150
200
250
300
350
400
450
MFI
anti-
PPAR
a
2282
1106
3458
518
4046
Media
LCI
LCI
1 6 11 16 21 26 31 36
-100
0
100
200
300
400
500
MFI a
nti-PP
AR
a
2354
810
3897
39
4669LCS
LCI
Media
cele două loturi icircn ceea ce priveşte expresia PPARα la nivelul Mo circulante (t- Test P=
069)
Studiul receptorilor PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de AHC şi dislipidemie
Nivelul de expresie al receptorilor PPARα α icircn Mo tinde să fie mai scăzut la subiecţii
cu AHC de HTA comparativ subiecţii care nu au declarat AHC de HTA (P= 006 fig 515)
AHC HTA
Număr 22
Mediana 19950
Percentila 25 17800
Percentila 75 22700
AHC HTA absente
Număr 35
Mediana 24800
Percentila 25 19025
Percentila 75 31700
Figura 515 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Mo funcţie de AHC de HTA
Nu s-au calculat diferenţe semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor
PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de dislipidemie atunci cacircnd aceştia au fost comparaţi cu
subiecţii fără AHC de tulburări ale metabolismului lipidic (t- Test P= 020)
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn limfocite
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn populaţia de Ly a
demonstrat prezenţa receptorilor PPARα icircn Ly tuturor subiecţilor studiaţi Pentru toţi
participanţii investigaţi analiza MFI a Ac anti - PPARα icircn populaţia de Ly a relevat un
interval de variaţie icircntre [748 314] iar valoarea medie a MFI a fost de 18058 plusmn 5600
Pentru ambele loturi aplicarea testului Shapiro-Wilk a evidenţiat distribuţia normală a
valorilor determinate pentru nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Ly Pentru
pacienţii cu SM valoarea medie a MFI determinată pentru expresia PPARα icircn populaţia de
Ly a fost de 18178 plusmn 61 16 iar pentru lotul martor a fost de 16800 plusmn 5229
Tabel XXX Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn limfocite
Lot SM Lot Non-SM
N 26 31
Media 181781 179574
SD 611694 522907
Mediana 165000 168000
Minimum 81300 74800
Maximum 314000 301000
Percentila 25 13400 - 145750
Percentila 75 21800 21700
Distribuţia frecvenţei valorilor MFI a Ac anti-PPARα icircn Ly este redată icircn figura 518
Figura 518 Distribuţia frecvenţelor relative a MFI a Ac anti-PPARα icircn Ly
94 din determinările efectuate pentru determinarea nivelului de expresie relativă al
MFI
ant
iPPA
R
a_Mo
190
200
210
220
230
240
250
260
270
280
DA NU
AHC HTA
P=006
50 89 128 167 206 244 283 322 361 400
0
5
10
15
20
25
30
35
MFI anti-PPAR a
Frecv
enta
relati
va (
)
Lot SM
0 50 100 150 200 250 300 350
0
5
10
15
20
25
30
35
40
MFI anti-PPAR a
Frec
venta
relat
iva (
)
Lot Non-SM
receptorilor PPARα icircn limfocitele subiecţilor cu SM s-au icircncadrat icircn intervalul Media plusmn 2DS
Figura 5 19 Lot SM Variaţia expresiei
relative a PPARα icircn Ly
Număr pacienţi 26
Minimum 813
Maximum 31400
Media 18178
Deviaţia Standard 6116
25 valori s-au icircncadrat icircn Media plusmn 2DS
Pentru lotul Non-SM diagrama de control (figura 520) a arătat toate valorile
determinate pentru lotul Non-SM se icircncadrează icircntre LCS şi LCI
Figura 520 Lot Non -SM Variaţia
expresiei relative a PPARα icircn Ly
Număr pacienţi 31
Minimum 748
Maximum 30100
Media 179574
Deviaţia Standard 5229
96 din valori icircncadrate icircn Media plusmn 2DS
Aplicarea testului t-Student pentru valorile medii ale intensităţii de fluorescenţă ale
PPARα icircn Ly nu a arătat existenţa unei diferenţe statistic semnificative icircntre lotul cu SM şi
lotul martor(t- Test P= 088)
Analiza receptorilor PPARα icircn Ly subiecţilor cu AHC de HTA şi dislipidemie
Studiind populaţiile de Ly la subiecţii care au prezentat AHC de hipertensiune
arterială analiza flowcitometrică a relevat existenţa unor valori mai mici pentru MFI la aceşti
subiecţi comparativ cu cei fără AHC de HTA (fig 522) deşi scăderea observată nu a
icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică (t- Test P = 009)
AHC HTA
Număr 22
Mediana 16000
Percentila 25 12700
Percentila 75 17100
AHC HTA absenţe
Număr 35
Mediana 18700
Percentila 25 14900
Percentila 75 23175
Figura 522 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Ly funcţie de AHC de HTA
Nu am calculat diferenţe statistic semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor
PPARα icircn populaţiile de Ly ale subiecţilor la care am identificat AHC de dislipidemie
comparativ cu cei care nu au declarat antecedente familiale de dislipidemie (t- Test P= 051)
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn neutrofile (PMN)
Analiza flowcitometrică a evidenţiat prezenţa PPARα icircn PMN recoltate din sacircngele
venos al tuturor participanţilor la studiu Pentru toţi subiecţii investigaţi analiza MFI a Ac -
PPARα icircn populaţia de PMN a relevat un interval de variaţie de [163419] iar valoarea medie
a MFI pentru Ac anti-PPARα a fost de 26392 plusmn 7064 Testul Shapiro-Wilk a arătat o
distribuţie normală a valorilor intensităţii medii de fluorescenţă a anticorpilor anti-PPARα atacirct
icircn lotul pacienţilor cu SM cacirct şi icircn lotul martor
1 6 11 16 21 26 31
-50
0
50
100
150
200
250
300
350
400
MFI
anti-
PPAR
a
1818
595
3041
-17
3653
Media+2DS
Media- 2DS
1 6 11 16 21 26 31 36
0
50
100
150
200
250
300
350
MFI
ant
i-PPA
R
a
1796
750
2841
227
3364
Media+2DS
Media
Media- 2DS
MFI
anti-
PPAR
a Ly
130
140
150
160
170
180
190
200
210
DA NU
AHC HTA
P=009
Tabel XXXII Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn PMN
Lot SM Lot Non-SM
N 26 31
Media 26273 26480
SD 6915 7088
Mediana 25900 25500
Minimum 17200 16300
Maximum 39500 41900
Percentila 25 19800 19600
Percentila 75 30500 31500
Icircn cele două loturi distribuţia frecvenţei valorilor nivelului relativ de expresie a
receptorilor PPARα icircn PMN a fost reprezentată sub formă de histograme (fig 525)
Figura 525 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti-PPARα icircn PMN
Pentru cei 26 de pacienţi din lotul cu SM a valoarea medie a nivelului de expresie
relativă a receptorilor PPARα icircn PMN a fost de 26273 plusmn 6915 Studiind diagrama Shewhart
din figura 526 se observă că toate valorile obţinute pentru nivelul de expresie relativă
PPARα icircn PMN investigate se icircncadrează icircntre limitele definite de valorile medii plusmn 2DS
Figura 526 Lot SM
Variaţia expresiei relative a PPARα icircn
PMN
Număr pacienţi 26
Minimum 17200
Maximum 39500
Media 26273
Deviaţia Standard 6915
Valorile MFI icircncadrate icircn Media plusmn 2DS
Pentru lotul martor valoarea medie calculată a MFI a anticorpilor anti-PPARα a fost de
26480 plusmn 7088 peste 95 din valorile MFI fiind cuprinse icircn Media plusmn 2DS (figura 527)
Figura 527 Lot Non-SM Variaţia expresiei
relative a PPARα icircn PMN
Număr pacienţi 31
Minimum 16300
Maximum 41900
Media 26480
Deviaţia Standard 7088
30 valoriicircn Media plusmn 2DS
Pentru PMN analiza statistica nu a arătat existenţa unei diferenţe statistic semnificative icircntre
nivelul de expresie relativă a PPARα la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii din lotul
Non-SM (t- Test P= 090) Studiind populaţiile de PMN la subiecţii care au prezentat AHC
de HTA nu am calculat o diferenţă statistic semnificativă icircntre expresia receptorilor PPARα
la subiecţii cu istoric familial de hipertensiune arterială comparativ cu cei pentru care nu s-au
notat AHC de HTA (t- Test P= 013)De asemenea am identificat diferenţe icircntre nivelul de
expresie al PPARα icircn PMN subiecţilor care prezentau AHC de dislipidemie comparativ cu
cei fără AHC de dislipidemie (t- Test P= 017)
50 100 150 200 250 300 350 400 450 500
0
5
10
15
20
25
30
35
MFI anti-PPAR a
Frecve
nta rel
ativa (
)
Lot SM
50 100 150 200 250 300 350 400 450 500
0
5
10
15
20
25
30
MFI anti-PPAR a
Frecv
enta
relati
va (
)
Lot Non-SM
1 6 11 16 21 26 31
0
50
100
150
200
250
300
350
400
450
500
MFI
anti-
PPA
R
a
2627
1244
4010
553
4702
Media + 2DS
Media - 2 DS
Media
1 6 11 16 21 26 31 36
0
50
100
150
200
250
300
350
400
450
500
MFI
anti-
PPAR
a
2648
1230
4066
522
4774
Media+ 2DS
Media - 2DS
Media
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile Tabel XXXIV Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn Eo
Lot SM Lot Non-SM
N 26 31
Mediaplusmn SD 141057 plusmn 47604 172209 plusmn 37565
Mediana 142450 171300
Minimum 35000 68500
Maximum 233700 250600
Percentila 25 119300 153225
Percentila 75 169700 199550
Am studiat nivelul relativ de expresie a receptorilor PPARα icircn Eo iar rezultatele au
fost figurate sub forma de histograme (figura 532)
Figura 532 Distribuţia frecventelor relative ale valorilor MFI anti- PPARα icircn Eo
Din diagrama Shewhart (figura 533) se observă că toate valorile determinate pentru
nivelul de expresie relativă a PPARα icircn Eo pentru lotul SM s-au icircncadrat icircn [Media plusmn 3 DS]
peste 90 din determinări fiind cuprinse icircn [Media plusmn 2 DS] iar icircn [Media plusmn 1 DS] sunt
incluse peste 65 din valorile MFI
Figura 533 Lot SM
Variaţia expresiei relative a PPARα icircn Eo
Număr pacienţi 26
Minimum 35000
Maximum 233700
Media 141057
Deviaţia Standard 47604
24 valori icircncadrat eicircn [Media plusmn 2DS]
Pentru subiecţii incluşi icircn lotul martor analiza diagramei (figura 534) a arătat că
toate cele 31 de valori ale MFI pentru PPARα icircn Eo se icircncadrează icircn [Media plusmn 3DS] iar 30
dintre acestea se icircncadrează icircn [ Media plusmn 2 DS]
Figura 534 Lot Non -SM
Variaţia expresiei relative a PPARα icircn Eo
Număr pacienţi 31
Minimum 685
Maximum 2506
Media 172209
Deviaţia Standard 375 65
30 valori icircncadrate icircn [Media plusmn 2DS]
Comparacircnd subiecţii cu SM cu cei din lotul martor am observat o scădere
semnificativă statistic a MFI a Ac anti - PPARα icircn Eo pentru pacienţiir cu SM ( figura 535)
PPARα Eo Lot Non-SM
Număr 31
Mediana 171300
Percentila 25 152325
Percentila 75 199550
PPARα Eo Lot SM
Număr 26
Mediana 142450
Percentila 25 119300
Percentila 75 169700
Figura 5 35 Comparaţie icircntre nivelul de expresie a PPARα icircn Eo
0 500 1000 1500 2000 2500 3000
0
10
20
30
40
50
MFI anti-PPAR a
Frecvent
a relativa
()
Lot SM
400 800 1200 1600 2000 2400 2800
0
5
10
15
20
25
30
35
40
45
MFI anti-PPAR a
Frecenta
relativa
()
Lot Non-SM
1 6 11 16 21 26 31
-500
0
500
1000
1500
2000
2500
3000
MFI a
nti-PP
AR
a
14106
4765
23447
94
28117
Media + 2DS
Media- 2DS
LCI
LCS
1 6 11 16 21 26 31 36
500
1000
1500
2000
2500
3000
MFI an
ti-PPA
R a
17221
9708
24734
5951
28490
LCI
Media-2DS
Media
Media +2 DS
LCS
1200
1300
1400
1500
1600
1700
1800
1900
Lot SM Lot Non-SM
P=00072
Cu ajutorul curbei ROC am evaluat posibilitatea utilizării MFI a Ac anti - PPARα icircn
Eo ca marker pentru diagnosticul SM Valoarea MFI a Ac anti - PPARα icircn Eo care prezice cu
cea mai mare acurateţe prezenţa SM a fost de 1533 (punctul de ldquocut-offrdquo) pentru care am
calculat o sensibilitate de 5652 şi o specificitate de 7778 Calculul ariei AUC a furnizat
valoarea de 0663 şi deci determinarea parametrului MFI anti- PPARα icircn Eo are valoarea
unui test cu acurateţe redusatilde icircn diagnosticul SM Studiind expresia PPARα icircn Eo la subiecţii
care au prezentat AHC de HTA am observat o scădere semnificativă statistic (P = 00023) a
expresiei PPARα la subiecţii cu istoric familial de HTA comparativ cu subiecţii fatilderatilde AHC de
HTA (figura 537)
AHC HTA
Număr 22
Mediana 148800
Percentila 25 116425
Percentila 75 170750
AHC HTA absente
Număr 35
Mediana 170850
Percentila 25 143700
Percentila 75 195000
Figura 537 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Eo funcţie de AHC de HTA
Studiind subiecţii cu AHC declarate de dislipidemie nu am identificat diferenţe icircntre
nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Eo subiecţilor cu AHC de dislipidemie
comparativ cu cei care nu au declarat prezenţa AHC de dislipidemie (t - Test P = 067)
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor CD36
Am studiat expresia receptorilor CD36 icircn Mo subiecţilor incluşi icircn studiu
Lot Non - SM
BLot SM
Figura 539 Analiza flowcitometrica pentru receptorii CD36 icircn Mo
Pentru toţi participanţii la studiu valorile MFI au variat icircn intervalul [817 6933] iar
valoarea medie a MFI a Ac anti-CD36 a fost de 397133 plusmn 120902 Tabel XXXVII Statistică descriptivă pentru a CD36 icircn Mo
Lot SM Lot Non-SM
Media 429034 370377
Deviatia Standard 109051 125514
Mediana 411000 362800
Minimum 266400 81700
Maximum 693300 616800
Percentila 25 346200 273750
Percentila 75 469000 453300
Distribuţia frecvenţelor relative a MFI au fost prezentate sub formă histogramelor
Figura 541 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti - CD36 icircn Mo
MFI
ant
i-PPA
R a Eo
1000
1100
1200
1300
1400
1500
1600
1700
1800
1900
DA NU
AHC HTA
P=00023
1000 2000 3000 4000 5000 6000 7000 8000
0
5
10
15
20
25
MFI anti-CD36
Frecve
nta rela
tiva (
)
Lot SM
0 1778 3556 5333 7111
0
5
10
15
20
25
30
35
MFI anti-CD36
Frecve
nta rel
ativa (
)
Lot Non - SM
Referitor la lotul SM 92 din valorile MFI a Ac anti- CD36 s-au icircncadrat icircn
intervalul Media plusmn 2 DS (figura 542) iar pentru lotul martor peste 90 dintre acestea icircn
Media plusmn 2 DS (figura 543)
Figura 542 Lot SM
Variaţia MFI anti-CD36 icircn Mo
Număr pacienţi 26
Minimum 2664
Maximum 6933
Media 429034
Deviaţia Standard 109051
Figura 543 Lot Non -SM
Variaţia MFI anti- CD36 icircn Mo
Număr 31
Minimum 81700
Maximum 616800
Media 370377
Deviaţia Standard 125514
Comparacircnd subiecţii cu SM cu cei din lotul normal am constatat o tendinţă de creştere
a expresiei CD36 icircn lotul cu SM((t - Test P= 0067)
MFI anti - CD36 Lot Non-SM
Număr 31
Mediana 3628
Percentila 25 2737
Percentila 75 4533
MFI anti - CD36 Lot SM
Număr 26
Mediana 4110
Percentila 25 3462
Percentila 75 4690
Figura 544 Comparaţie icircntre cel două loturi privind MFI anti - CD36 icircn Mo
Referindu-ne la subiecţii cu AHC de HTA am observat o tendinţă de creştere a
valorilor MFI anti-CD36 comparativ cu cei care nu au avut AHC de HTA (t - Test P = 0 08)
AHC HTA
Număr 22
Mediana 442800
Percentila 25 355275
Percentila 75 519475
AHC HTA absenţe
Număr 35
Mediana 377400
Percentila 25 316900
Percentila 75 443400
Figura 545 Comparaţie icircntre expresia CD36 icircn Mo funcţie de AHC de HTA
Nu s-au calculat diferenţe semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor
PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de dislipidemie atunci cacircnd aceştia au fost comparaţi cu
subiecţii fără AHC de dislipidemie (t - Test P=031)
Corelaţii icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα si CD36
Studiind valorile intensităţii medii de fluorescenţă a Ac anti-PPARα icircn Mo Ly şi
PMN am observat că nivelul de expresie celularatilde a PPARα icircn Mo Ly şi PMN sunt corelate
puternic pozitiv atacirct icircn lotul SM cacirct şi icircn lotul martor(fig547 548)
1 6 11 16 21 26 31
0
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
Pacienti
MFI a
nti-CD
36
42903
21093
64714
10188
75619
LCI
Media
LCS1 6 11 16 21 26 31 36
-1000
0
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
MFI a
nti- C
D36
37038
11935
62141
-616
74692Media + 2 DS
Media
Media - 2 DS
3200
3400
3600
3800
4000
4200
4400
4600
4800
Lot SM Lot Non-SM
P = 00676
MFI
anti-
CD36
3400
3600
3800
4000
4200
4400
4600
4800
5000
DA NU
AHC HTA
P = 008
Figura 547 Studiul relatiilor dintre
receptorii PPARα icircn SM A Mo vs PMN B Mo vs Ly
C PMN vs Ly Graficul ilustrează coeficienţii r P dreapta de
regresie (linia centrala) intervalul de icircncredere
95 şi intervalul de predicţie 95
Figura 548 Corelaţii icircntre receptorii PPARα icircn lotul
martor
A Mo vs PMN
B Mo vs Ly
C PMN vs Ly
Tot pentru lotul SM cacircnd am evaluat relaţia dintre nivelul de expresie relativă a
receptorilor PPARα icircn Eo şi nivelul de expresie relativa a receptorilor CD 36 am obţinut o
corelaţie negativă (r = - 05 P = 001) (fig 549 A)
50 100 150 200 250 300 350 50
100
150
200
250
300
350
400
450
500
PPARα Ly
PPARα PMN
y = 56641 + 1159 x r = 086 P lt 0001
C
50 100 150 200 250 300 350 400 0
50
100
150
200
250
300
350
PPARα Mo
PPARα Ly
y = 36665 + 0607 x r = 090 P lt 0001
B
150 200 250 300 350 400 450 0
50 100 150 200 250 300 350 400 450 500
PPARα PMN
PPARα Mo
y = 2505 + 0879 x r = 081 P lt 0001
A
50 100 150 200 250 300 350
50 100 150 200 250 300 350 400 450 500
PPARα Ly
PPARα PMN
y = 95668 + 0919 x r = 081 P lt 0001
C
100 150 200 250 300 350 400
0
50
100
150
200
250
300
350
400
PPARα Mo
PPARα Ly
y = -7503 + 0829 x r = 079 P lt 0001
B
100 150 200 250 300 350 400
50
100
150
200
250
300
350
400
450
500
PPARα Mo
PPARα PMN
y = 61384 + 0882 r = 074 P lt 0001
A
Figura 549 Corelaţii icircntre expresia PPARα icircn Eo şi alte tipuri de receptori investigaţi A PPARα Eo şi CD 36 (Lot SM) B PPARα Eo şi PPARα Mo( Lot Non-SM)
Icircn lotul martor am identificat o asociere moderată pozitivă (r = 038 P = 0033) icircntre
nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Eo şi Mo (figura 549B) corelaţie absentă icircn
lotul pacienţilor cu SM
Corelaţii dintre receptorii studiaţi şi componentele sindromului metabolic
Icircn lotul de control analiza statistică a relevat faptul că icircntre circumferinţa
abdominală (CA ) şi nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Mo Ly şi PMN există o
corelaţie inversă adică scăderea expresiei PPARα la nivelul acestor populatii celulare ar fi
icircnsoţită de creşterea CA (figura 550
Figura 550Corelaţii dintre receptorii
PPARα si CA A Mo B Ly C PMN
La pacienţii cu SM am notat o corelatie moderată negativă statistic semnificativă
icircntre TG şi valorile MFI a Ac anti- PPARα icircn Mo şi Ly( fig 551)
150 200 250 300 350 400 450 50
60
70
80
90
100
110
PPARα PMN
CA r = - 040 P = 0024
C
50 100 150 200 250 300 350 50
60
70
80
90
100
110
PPARα Ly
CA r = - 046 P = 0009
B
50 100 150 200 250 300 350 400 50
60
70
80
90
100
110
PPARα Mo
CA r = - 042 P = 0017
A
50 100 150 200 250 300 350 400 500
1000
1500
2000
2500
3000
PPARα Mo
PPARα Eo
r = 038 P = 0033
B
0 500 1000 1500 2000 2500 1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
PPARα Eo
CD36
r = 050 P = 0010
A
Figura 551 Lot SM Corelaţie icircntre expresia PPARα şi TG (A Mo B Ly)
Analizand corelatia dintre receptorii CD36 si valorile TA la pacientii cu SM am observat
o asociere pozitivă asteptată intre TAD si nivelul de expresie al receptorilor CD36 (fig 552)
Figura 552 Lot SM Corelaţii icircntre expresia
receptorilor CD36 şi valorile tensiunii arteriale
diastolice
Studiind corelaţiile dintre receptorii PPARα şi HDL-col la subiecţii din lotul martor am
notat o asociere pozitivă icircntre expresia PPARα icircn Mo şi Ly cu HDL-col (fig 553)
Figura 553 Lot martor Corelaţii icircntre HDL-col şi expresia PPARα icircn Mo(A) Ly(B)
Icircn lotul normal am evidenţiat corelaţii pozitive moderate dar semnificative statistic icircntre
CA şi valorile TAS (r = 062 P lt 0001) respectiv TAD (r = 050 P=0004) precum şi icircntre
CA şi glicemia subiecţilor normali (r = 052 P = 0003) Aceste date icircmpreună cu relaţia
invers proporţională identificată icircntre HDL-col şi CA (r = 050 P = 001) susţin validitatea
acestui studiu Icircn lotul subiecţilor cu SM am observat o corelaţie moderat pozitivă icircntre
expresia PPARα icircn populaţiiile de Mo şi Eo şi concentraţia a HDL-col (fig 554)
B
100 150 200 250 300 350 20
30
40
50
60
70
80
90
100
PPARα Ly
HDL-col-(mgdl)
r = 036 P = 0046
A
150 200 250 300 350 400 20
30
40
50
60
70
80
90
100
PPARα Mo
HDL-col-(mgd)l
r = 035 P = 005
70 75 80 85 90 95 100 1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
TAD (mmHg)
CD36
r = 048 P = 0013
B
50 100 150 200 250 300 350 -100
0
100
200
300
400
500
PPARα Ly
TG(mgdl)
r = - 042 P = 003
A
50 100 150 200 250 300 350 400 -100
0
100
200
300
400
500
PPARα Mo
TG ( mgdl) r =- 0 43 P = 0027
Figura 554 Corelaţii icircn SM icircntre HDL-col şi expresia PPARα icircn Mo (A) şi Eo(B)
Corelaţii icircntre nivelul de expresie relativă a PPARα şi markeri ai disfuncţiei
endoteliale şi inflamaţiei cronice
Deşi nu a icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică am reţinut corelaţia invers
proporţională (r = - 0331 P = 006) dintre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα
icircn PMN şi concentraţia serică a Non-HDL-colesterolului
Studiind relaţiile dintre parametri icircn lotul de pacienţi cu SM am observat o corelaţie
moderată invers proporţională icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Eo şi
acidul uric seric (figura 555 A) corelaţie absentă la subiecţii fără SM
Figura 555 Lot SM corelaţia dintre expresia PPARα icircn Eo şi acidul uric (A) respectiv
PPARα şi fibrinogen (B)
Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P=008) am notat pentru
pacienţii cu SM corelaţia invers proporţională dintre expresia PPARα icircn Eo şi concentraţia
serică a fibrinogenului ( figura 555B)
V5 Discuţii
Icircn cadrul lucrării de doctorat am studiat nivelul de expresie relativă a PPARα icircn
leucocitele pacienţilor cu SM comparativ cu cea a subiecţilor normali Expresia PPARα a fost
studiată icircn paralel cu cea a CD36 glicoproteină exprimată pe suprafaţa a numeroase celule
din organismul uman inclusiv pe cea a Mo şi macrofagelor Prin funcţia sa de receptor pentru
particulele oxidate de LDL CD36 cunoscut ca bdquoscavenger receptorrdquo de clasa B sau
bdquotrombospodin receptorrdquo contribuie la dezvoltarea inflamaţiei de la nivel endotelial şi
formarea plăcii de ateroscleroză Referitor la studiul PPARα icircn Eo icircn sindromul metabolic
menţionăm că studiul nostru este primul care arată că nivelul de expresie a proteinei PPARα
icircn Eo măsurat prin citometrie icircn flux este semnificativ mai redus la pacienţii care sunt
diagnosticaţi cu acest sindrom De asemenea icircn lotul cu SM cercetat icircn cadrul studiului
receptorilor PPARα numărul Eo circulante a fost semnificativ mai crescut la pacienţii cu SM
B
0 500 1000 1500 2000 2500 200
250
300
350
400
450
PPARα Eo o
Fibrinogen mgdl
r =- 036 P = 008
0 500 1000 1500 2000 2500 1 2 3 4 5 6 7 8 9
10 11
PPARα Eo_
Acid uric(mgdl) r = 048 P = 0014 A
0 500 1000 1500 2000 2500 10
20
30
40
50
60
70
80
PPARα Eo
HDL(mgdl)
r = 044 P = 0024
B
100 150 200 250 300 350 400 10
20
30
40
50
60
70
80
PPARα Mo
HDL( mgdl)
r = 046 P = 0019
A
(P = 003) Aceste constatări conduc la ipoteza că Eo joacă un rol special icircn mecanismele
patogenice declanşate icircn sindromul metabolic şi că receptorii PPARα sunt importanţi icircn
implicarea Eo icircn obezitate şi insulinorezistenţă Creşterea numărului de Eo circulante este
urmată de eliberarea mediatorilor proinflamatori iar reducerea expresiei PPARα icircn Eo
determină perturbarea mecanismelor de control al inflamaţiei cu exacerbarea cascadei
proinflamatorii Consecutiv se agravează disfuncţia endotelială şi se accelerează progresia
leziunilor de ateroscleroză Extrapolacircnd aceste ipoteze putem spune că asocierea raportată
dintre boala ischemică coronariană şi Eo poate fi şi consecinţa exacerbării cascadei
proinflamatorii de la nivel vascular produsă datorită scăderii expresiei PPARα icircn Eo iar
creşterea numărului de Eo circulante poate reprezenta o adaptare a organismului uman care
icircncearcă să suplinească deficitul de receptori PPARα Analizacircnd curba ROC pentru
intensităţile medii de fluorescenţă determinate pentru anticorpii anti- PPARα icircn Eo am
obţinut pentru acest biomarker o sensibilitate a testului de 565 şi o specificitate de 778
pentru un punct de cut-off de 1533 ( figura 536 ) Deşi aria AUC (Aria under the curve) egală
cu 0663 icircncadrează acest test ca avacircnd o acurateţe redusă observăm că că această valoare
este apropiată de determinările AUC pentru alţi factori (fibrinogen raport de aterogenitate
acid uric non- HDL-colesterol) cunoscuţi ca fiind implicaţi icircn aterogeneză şi inflamaţia
cronică (figura 431) Aceste remarci alături de faptul că icircn studiul receptorilor PPARα icircn
leucocite am inclus subiecţi la primul diagnostic de SM creează premisa integrării
determinării expresiei relative a receptorilor PPARα icircn diagnosticul complex al sindromului
metabolic Putem spune că icircn final studiul expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofilele
circulante se dovedește a fi util icircn diagnosticul precoce la nivel molecular al SM permiţacircnd
identificarea timpurie a unor indivizi cu risc cardiometabolic crescut Astfel intervenţia
precoce asupra subiecţilor cu deficit de PPARα icircn Eo contribuie la managementul eficient al
afecţiunilor degenerative icircn care inflamaţia cronică icircndeplineşte un rol primordial Referitor
la populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările efectuate prin citometrie de flux nu au
arătat existenţa unor diferenţe statistice icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα
la subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali Rezultatele noastre pot fi
consecinţa caracteristicilor loturilor studiate (icircn studiul nostru au fost incluşi subiecţi recrutaţi
la primul diagnostic de SM şi icircn absenţa stimulării receptorilor PPARα cu droguri agoniste
PPARα) dar icircn acelaşi timp pot apare diferenţe datorită metodei utilizate (231 232 233)
Făcacircnd o paralelă cu un studiu publicat icircn 2013 icircn Europa (231) care a arătat creşterea
nivelului de expresie al PPARα icircn Ly şi Mo observăm că deşi numărul de subiecţi a fost
aproximativ egal (57 participanţi icircn studiul nostru 60 icircn studiul DAmore) subiecţii icircn studiul
amintit au fost recrutaţi dintr-o clinică cu profil medical la primul diagnostic de SM icircn timp
ce metoda utilizată a fost PCR (Polymerase Chain Reaction) mult mai fidelă decacirct citometria
icircn flux icircn studiul receptorilor nucleari De asemenea DAmore nu investighează expresia
PPARα icircn Eo şi PMN icircn cercetare fiind incluse doar celulele CD14+ (predominant Mo) şi
CD14- (predominant Ly) Deşi nu am obţinut diferenţe statistic semnificative icircntre cele două
loturi referitoare la nivelul de expresie relativă a PPARα icircn Mo Ly şi PMN am observat
corelaţii puternice semnificative statistic icircntre expresia receptorilor PPARα icircn aceste tipuri
celulare Rezultatele obţinute sugerează existenţa unui mecanism diferit molecular de control
icircn eozinofile care reglează cantitatea de proteină PPARα icircn eozinofile versus alte tipuri de
leucocite (la pacienţii cu SM) şi acest lucru este icircn concordanţă cu cercetările care descriu
expresia PPARα mRNA icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale
bronşice keratinocite) Studiind prin citometrie de flux nivelul de expresie relativă a
receptorului CD36 la nivelul Mo am arătat prezenţa acestuia icircn Mo tuturor subiecţilor
investigaţi Analizacircnd valorile intensităţii medii de fluorescenţă a CD36 icircn loturile studiate
am observat o tendinţă de creştere la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali
confirmacircnd implicarea receptorului CD36 icircn patogeneza acestuia Referitor la expresia
receptorului CD36 rezultatele obţinute sunt icircn consens cu studii anterioare care au arătat
creşterea expresiei CD36 la pacienţii cu SM şi diabet zaharat Astfel pe lacircngă diferenţa icircn
expresia CD36 s-au raportat şi corelaţii inverse icircntre expresia proteinei CD36 şi nivelul
adiponectinei Acelaşi studiu a evidenţiat o corelaţie pozitivă intre expresia CD36 cu expresia
receptorilor PPAR gamma relaţia cu PPARα nefiind investigată
Analiza de subgrup a relaţiilor dintre componentele SM și elementele moleculare
proinflamatorii studiate a relevat prezenţa unor asocieri semnificativ statistice icircntre acestea
Se argumentează astfel că veridicitatea studiului este susţinută de interdependenţele statistice
ale componentelor SM Determinarea coeficientului de corelaţie Icircn studiul nostru nivelul de
expresie relativă a PPARα s-a corelat moderat negativ (figura 550) cu CA a subiecţilor din
lotul normal pentru populaţiile celulare de Mo (r = - 0420 P = 001) Ly (r = - 046 P =
0009) şi PMN (r = - 040 P = 0024) date care sunt icircn concordanţă cu studiile care arată
rolul PPARα icircn furnizarea energiei prin beta-oxidarea acizilor graşi Icircn acelaşi timp icircn lotul
pacienţilor cu SM nu am identificat prezenţa unei asocieri icircntre nivelul de expresie relativă a
PPARα şi valoarea măsurată a CA Asocierea dintre expresia relativă a PPARα cu obezitatea
de tip central completează datele existente referitoare la reglarea homeostaziei energetice
conturacircnd un mecanism de control deficitar al aportului caloric al SM Icircn condiţiile icircn care
rezultatele obţinute prin metoda citometriei icircn flux nu au arătat existenţa unei corelaţii intre
expresia PPARα şi CA la pacienţii cu SM considerăm că ar fi necesar studiul
polimorfismului genei PPARA care ar putea aduce informaţii importante cu privire la
implicarea acestor receptori icircn apariţia obezităţii de tip central Subliniem acest lucru deoarece
obezitatea este o boală plurifactorială icircn care pe lacircngă factorii ereditari sunt implicaţi factori
de mediu psihologici şi sociali (245) Existenţa unei componente genetice a aterosclerozei
este legată şi de prezenţa unor variante ale genei PPARA asociate cu creşterea incidenţei bolii
cardiovasculare (82) şi a SM (249) Icircn studiul nostru am constatat o scădere statistic
semnificativă a nivelului expresiei relative a receptorilor PPARα icircn Eo la subiecţii cu
antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială comparativ cu subiecţii fără istoric
familial de hipertensiune (figura 537) Deşi diferenţele calculate icircntre loturile studiate nu au
icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică la subiecţii care au declarat prezenţa
antecedentelor familiale de hipertensiune arterială remarcăm o tendinţă de scădere a
intensităţii medii de fluorescenţă pentru Ac anti-PPARα la nivelul Mo (figura 515 P = 006
) icircn timp ce expresia relativă a CD36 icircnregistrează o creştere la acesti subiecţi (figura 545 P
= 008) Icircn contextul riscului cardiovascular foarte icircnalt al pacienţilor cu SM amintim şi
existenţa corelaţiei pozitive dintre valorile tensiunii arteriale diastolice şi expresia relativă a
receptorului CD36 (r = 0483 P = 0013) Această constatare este icircn consens cu studiile care
au arătat că forma solubilă circulantă a CD36 este asociată cu factorii de risc cardiovasculari
fiind propusă ca un marker precoce al aterosclerozei Activarea PPARα este asociată cu
modularea metabolismului lipidic iar agoniştii PPARα sunt utilizaţi icircn mod curent pentru
tratamentul dislipidemiei Sub acţiunea agoniştilor PPARα se obţine o icircmbunătăţire a funcţiei
endoteliale şi a parametrilor reologici funcţiile pleiotropice ale agoniştilor PPARα fiind
dovedite icircn trialuri clinice controlate Icircn populaţiile de Mo şi Ly la pacienţii cu SM
cercetarea noastră a evidenţiat o asociere negativă icircntre nivelul de expresie relativă a
receptorilor PPARα şi concentraţia TG serice (figura 551) Astfel scăderea expresiei
receptorilor PPARα este asociată cu creşterea nivelului TG serice contribuind la profilul
lipidic aterogen din SM Icircn conformitate cu literatura de specialitate icircn studiul efectuat prin
metoda citometriei icircn flux am găsit prezenţa asocierii icircntre nivelul de expresie al PPARα şi
HDL-colesterol Corelaţia pozitivă dintre nivelul de expresie relativă PPARα şi concentraţia
HDL-colesterolului a fost observată icircn lotul martor icircn populaţiile de Mo (r = 035 P = 005)
şi Ly ( r = 036 P = 004) (figura 553) susţinacircnd faptul că stimularea receptorilor PPARα
este legată de creşterea nivelului seric al lipoproteinelor cu densitate crescută La pacienţii cu
SM corelaţia dintre expresia PPARα şi HDL-colesterol a fost evidenţiată icircn populaţiile de Mo
(r = 046 P = 0019) şi eozinofile (r = 044 P = 0024) Se desprinde concluzia că icircn
sindromul metabolic scăderea concentraţiei HDL-colesterol este legată de diminuarea
nivelului de expresie relativă a receptorilor nucleari PPARα icircntărind afirmaţiile legate de
rolul acestor receptori icircn progresia bolilor cardiovasculare Studiind reactanţii de fază acută
analiza statistică a relevat o diferenţă semnificativă din punct de vedere statistic icircntre valorile
fibrinogenului la pacienţii cu SM atunci cacircnd au fost comparaţi cu subiecţii fără SM
(Capitolul IV4 P lt0 001 figura 427A) De asemenea icircn Capitolul V dedicat studiul
expresiei relative a receptorilor PPARα studiul valorilor fibrinogenului a arătat creşterea
acestui reactant de faza acută icircn lotul cu SM comparativ cu lotul martor (P lt0 0001) Icircn
studiul nostru am calculat o corelaţie invers proporţionala (r = - -036 fig 555B) icircntre
nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile şi concentraţia serică a
fibrinogenului Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P = 008) am reţinut
această asociere deoarece am demonstrat că nivelul de expresie relativă al receptorilor
PPARα icircn eozinofile este mai scăzut icircn sindromul metabolic iar sindromul metabolic este
caracterizat printr-un status inflamator cronic status caracterizat şi de creşterea concentraţiei
serice a fibrinogenului De asemenea notam ca această corelaţie negativă se află icircn
concordanţă cu studiile care arata că tratamentul cu agonişti PPARα (fibraţi) determina
scăderea nivelului seric al fibrinogenului contribuind la diminuarea inflamaţiei cronice din
sindromul metabolic şi icircn consecinţă amelioracircnd insulinorezistenţa
LIMITE ȘI DIFICULTĂȚI IcircN CERCETARE
Icircn cadrul Tezei de Doctorat am desfăşurat o cercetare care şi-a propus studierea
expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Recrutarea anamneza şi examinarea
clinică a subiecţilor au fost realizate icircn cadrul Cabinetului de Medicină de Familie CMI Popa
Elena din Iaşi iar determinările hematologice şi biochimice s-au efectuat icircn cadrul
Laboratorului Ambulatorului de Specialitate al Spitalului Universitar ldquoSfacircntul Spiridon din
Iaşi Icircn studiul epidemiologic şi al markerilor inflamatori al sindromului metabolic desfăşurat
au fost incluşi un număr de 1530 de participanţi pe baza liberului consimţămacircnt examinaţi icircn
perioada 01012013 - 31122013 Icircn continuare icircn perioada 1012014 - 28022014 pe baza
criteriilor de includere şi excludere icircn cele două loturi de studiu am investigat un număr de 57
de subiecţi prezentaţi la consultaţie icircn această perioadă şi care au icircndeplinit criteriile de
includere icircn cele două loturi (Lot SM şi Lot Control) constituite pentru evaluarea nivelului de
expresie a receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Explorarea nivelului de expresie
relativă a receptorilor PPARα s-a desfăşurat icircn cadrul Laboratorului de Biologie Moleculară
de pe platforma Institutului Regional de Oncologie Datorită resurselor proprii financiare
limitate trebuie să subliniez că aceasta cercetare nu ar fi fost posibilă fără contribuţia unor
cercetători din domeniul medical care m-au sprijinit necondiţionat atacirct icircn elaborarea
protocolului de lucru cacirct şi icircn efectuarea propriu-zisă a studiului Icircn acest sens menţionăm şi
faptul că pentru studiul receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic am utilizat aparatura
Laboratorului de Biologie Moleculară (care deserveşte icircntreaga Regiune a Moldovei) Pe
această cale mulţumesc personalului Laboratorului de Biologie Moleculară pentru ajutorul
acordat icircn desfăşurarea cercetării doctorale icircn condiţiile icircn care se observa creşterea
numărului de pacienţi care se adresează acestei platforme de cercetare Mulţumesc de
asemenea şi Doamnei Doctor Elena Butoi din cadrul Institutului de Biologie şi Patologie
Moleculară ldquoNicolae Simionescurdquo Bucureşti) pentru donaţia anticorpului secundar anti-
FITC Icircn consecinţă pentru recrutarea unui număr mai mare de participanţi ar fi fost necesară
icircn primul racircnd obţinerea unor resurse financiare suplimentare pentru achiziţia de aparatură şi
reactivi Totuşi numărul subiecţilor recrutaţi este apropiat de numărul subiecţilor raportaţi icircn
cadrul unor granturi de cercetare care aveau ca ţinta studiul expresiei receptorilor PPARα
(212 227 228 231) Rezultatele obţinute continua seria lucrărilor care arata importanta
studiului mecanismelor etiopatogenice ale sindromului metabolic patologie care se afla icircntr-o
continuă creştere La pacienţii cu SM pe lacircngă diminuarea nivelului de expresie a receptorilor
PPARα icircn eozinofile ne aşteptam şi la evidenţierea unor modificări icircn expresia PPARα şi icircn
populaţiile de Ly Mo şi PMN Acest fapt poate fi explicat de utilizarea unor celule provenite
de la pacienţi fără afectare cardiovasculară fără diabet zaharat şi necesită continuarea
studiului pe culturi celulare icircn condiţii de stimulare cu agonişti PPARα deziderat care
impune continuarea investigării expresiei PPARα printr-un grant de cercetare
ORIGINALITATEA ȘI CONTRIBUȚIILE INOVATIVE ALE TEZEI DE
DOCTORAT PERSPECTIVE DE CERCETARE
Evaluarea nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn leucocitele circulante
aduce noi perspective icircn studiul obezităţii şi sindromului metabolic Importanta studiului
expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic derivă din prevalenta crescută a
sindromului metabolic icircn populaţia cercetată la care se adaugă riscul cardiovascular foarte
icircnalt al acestor pacienţi cu implicaţii majore icircn sănătatea publică Rolul receptorilor PPARα
icircn inflamaţie şi aterogeneza este binecunoscut dar studiul nostru este primul care a arătat că
nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα este semnificativ mai scăzut in populatiile
de eozinofile la pacienţii cu SM Această concluzie coroborata cu existenţa unei stracircnse
asocieri intre expresia receptorilor PPARα la nivelul Mo limfocitelor şi PMNlor creeaza
ipoteza existenţei unui mecanism de control diferit al expresiei PPARα la nivelul
eozinofilelor Această cercetare aduce informaţii importante referitoare la mecanismele
proinflamatorii care stau la baza insulinorezistenţei şi riscului cardiometabolic şi impune
continuarea studiului acestor receptori nucleari prin citometrie icircn flux metodă care poate fi
aplicată şi la scara mai largă dacă sunt asigurate resursele materiale necesare cercetării
Cercetarea prin citometrie icircn flux poate fi completată de studiul polimorfismului genei
PPARA şi astfel se pot identifica timpuriu indivizii cu potenţial risc cardiometabolic crescut
Studiul receptorilor PPARα a stabilit conexiuni cu factori proinflamatori şi aterogenetici iar
continuarea cercetării poate aduce şi elemente noi de diagnostic precoce icircn sindromul
metabolic contribuind la icircmbunătăţirea prognosticului acestor pacienţi
CONCLUZII FINALE
1 Aplicarea scorului de SM alături de implementarea algoritmului electronic de diagnostic
contribuie la o prelucrare rapidă eficientă și standardizată a informaţiilor la nivelul
medicinei primare
2 Prevalenţa SM calculată astfel icircn cadrul studiului este crescută (2732) icircn concordanţă
cu datele raportate
3 Controlul factorilor de risc cardiometabolici incluşi icircn SM se poate realiza prin
managementul stilului de viaţă (scăderea greutăţii corporale prin combaterea
sedentarismului şi adoptarea unei diete antiaterogene şi hipocalorice) şi administrarea
terapiei medicamentoase
4 Este necesară adoptarea unei politici de sănătate publică pentru prevenirea creşterii icircn
populaţie a prevalenţei obezităţii şi a diabetului zaharat
5 Noi metode de cercetare icircn domeniul SM axate pe diagnosticarea precoce şi cuantificarea
eficientă a acestuia duce la diminuarea incidenței evenimentelor cardiovasculare majore
6 Sindromul metabolic se caracterizează printr-un status inflamator cronic
7 Valorile Non-HDL-colesterolului şi a raportului de aterogenitate sunt semnificativ mai
mari la pacienţii cu SM
8 Dintre reactanţii de faza acută am observat că valoarea medie a fibrinogenului este mai
crescută icircn lotul cu SM
9 Valorile eozinofilelor sunt crescute icircn sindromul metabolic iar explorarea relaţiei dintre
eozinofile şi obezitate constituie una din direcţiile de studiu actuale ale sindromului
metabolic
10 Evaluarea markerilor inflamatori icircn contextul sindromului metabolic este utilă icircn
evaluarea complexă a a factorilor de risc cardiometabolici
11 Prin metoda citometriei icircn flux am demonstrat prezenta Receptorilor Activaţi de
Inductorii Proliferării Peroxizomilor ndash Alpha (PPARα) icircn toate populaţiile de leucocite
studiate (Mo limfocite PMN eozinofile) atacirct icircn lotul pacienţilor cu SM cacirct şi icircn lotul
martor
12 Utilizacircnd intensitatea medie de fluorescenţă a anticorpilor anti- PPARα am arătat că
nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile este semnificativ mai redus
la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali
13 Acest studiu este primul care a demonstrat existenţa unei scăderi statistic semnificative a
nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofilele pacienţilor cu SM
confirmacircnd cercetările recente care au evidenţiat rolul eozinofilelor şi al receptorilor
PPARα icircn obezitate reglarea inflamaţiei cronice şi aterogeneza
14 Contrar aşteptărilor noastre icircn populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările
efectuate icircn cele două loturi de studiu (cu şi fără sindom metabolic) nu am evidenţiat
diferenţe statistic seminificative icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα la
subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali
15 Icircn populaţiile de Mo limfocite şi polimorfonucleare am observat corelaţii puternice
semnificativ statistic icircntre expresia PPARα icircn aceste tipuri celulare sugeracircnd existenţa
unui mecanism unic de control al inflamaţiei cronice la nivelul acestor celule probabil
diferit de cel din eozinofile
16 La subiecţii cu SM expresia relativă a PPARα icircn Eo este invers asociată cu expresia
receptorului CD36 (receptor al particulelor de ox - LDL şi propus ca un marker precoce al
aterosclerozei) dovedind rolul antiinflamator al receptorilor PPARα la nivel endotelial
17 La pacienţii cu antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială nivelul de
expresie al receptorilor PPARα icircn eozinofile şi Mo este diminuat comparativ cu subiecţii
fără antecedente familiale de hipertensiune arterială Putem spune că studiul efectuat de
noi aduce informaţii importante legate de geneză aterosclerozei şi hipertensiunii arteriale
18 Prin studiul asocierilor dintre receptorii PPARα şi componentele clinice ale sindromului
metabolic am arătat rolul acestor receptori icircn determinismul obezităţii de tip central
nivelul expresiei relative a receptorilor PPARα fiind invers proporţional cu circumferinţa
abdominală
19 Icircn acelaşi timp nivelul de expresie a PPARα icircn sindromul metabolic este asociat pozitiv
cu concentraţia serică a HDL-colesterolului şi invers asociat cu nivelul trigliceridelor
serice dovedind rolul acestor receptori icircn diminuarea procesului inflamator cronic de la
nivel vascular
20 La pacienţii cu SM scăderea expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofile este corelată cu
creşterea unor markeri ai sindromului inflamator cronic cardiometabolic (acid uric
fibrinogen) ilustracircnd importanta receptorilor icircn reglarea status-ului inflamator cronic din
sindromul metabolic
21 Utilizarea metodei flowcitometrice pentru studiul expresiei relative a receptorilor PPARα
icircn leucocite a adus informaţii importante cu privire la mecanismele moleculare de control
implicate icircn patogenia bolilor cardiometabolice icircn concordanţă cu cercetările care descriu
expresia PPAR icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale bronşice
keratinocite)
BIBLIOGRAFIE SELECTIVA
1 Kahn R Metabolic syndrome- what is the clinical usefulness Lancet 2008371(9628)1892-3
2 Reaven GM The metabolic syndrome is this diagnosis necessary Am J Clin Nutr 2006 83(6)1237-7
3 Grundy SM Pre-Diabetes Metabolic Syndrome and Cardiovascular Risk J Am Coll Cardiol 201259(7)
635-43
4 International Diabetes Federation IDF Diabetes Atlas 6th edn International Diabetes Federation Belgium
Brussels 20131-155
5 World Health Organization Global Status Report on Noncommunicable Diseases 2010 World Health
Organization Geneva Switzerland 20111-176
6 Coman AE Petrovanu R Sindromul metabolic in practica de ambulator Editura Pim Iaşi 2009 1-103
7 Grundy SM Becker D Clark LT et alThird Report of the National Cholesterol Education Program (NCEP)
Expert Panel on Detection Evaluation and Treatment of High Blood Cholesterol in Adults (Adult
Treatment Panel III) Final Report Circulation 2002106(25)3143-90
8 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J Metabolic syndrome- a new worldwide definition A Consensus Statement
from the International Diabetes Federation Diabet Med 2006 23(5)469-80
9 KG Alberti KG Eckel RH Grundy SM etal International Diabetes Federation task force on epidemiology
and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart Association World Heart
Federation International Atherosclerosis Society International Association for the study of obesity
Harmonizing the metabolic syndrome a joint interim statement of the International Diabetes Federation task
force on epidemiology and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart
Association World Heart Federation International Atherosclerosis society and International Association
for the study of obesity Circulation 2009120(16)1640-5
10 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J IDF Epidemiology Task Force The metabolic syndrome new
worldwide definition Lancet 2005 366 1059 - 62
11 Oleszczyk M Svab I Seifert B et al Primary healthcare in the developing part of Europe changes and
development in the former Eastern Bloc countries that joined the European Union following 2004 Med Sci
Monit 2009(15)78ndash84
12 Jung U J Choi M S Obesity and Its Metabolic Complications The Role of Adipokines and the
Relationship between Obesity Inflammation Insulin Resistance Dyslipidemia and Nonalcoholic Fatty
Liver Disease Int J Mol Sci 2014rsquo15(4) 6184-223
13 Vanden Heuvel JP Peters JM Peroxisome Proliferators In Ramos K (ed) Cellular and Molecular
Toxicology (Second Edition) Volume 2 New York Elsevier Science Inc 2010 145 - 67
14 Yessoufou A Wahli W Multifaceted roles of peroxisome proliferator-activated receptors (PPARs) at the
cellular and whole organism levels Swiss Med Wkl 2010140w13071 doi104414smw201013071
15 Azhar S Peroxisome proliferator-activated receptors metabolic syndrome and cardiovascular disease
Future Cardiology 20106(5)657-91
16 Andries G Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity
Diabetes and Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(Suppl)24-32
17 Zandbergen F Plutzky J PPARalpha in atherosclerosis and inflammation Biochim Biophys Acta
20071771(8)972-82
18 Straus DS Glass CK Anti-inflammatory actions of PPAR ligands new insights on cellular and molecular
mechanisms Trends Immunol 200728(12)551-8
19 Zlei M Zugun- Eloae F Carasevici E Citometrie icircn flux - Bază şi clinică Icircn Hinescu ME (ed) Citometrie icircn
flux - principii şi aplicaţii clinice Bucureşti Editura Viaţa Medicală Romacircnească 20111-128
20 Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity Diabetes and
Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(9)24-32
21 Woerly G Honda K Loyens M et al Peroxisome proliferator-activated receptors alpha and gamma down-
regulate allergic inflammation and eosinophil activation J Exp Med 2003198(3)411-21
22 Salle-Saumont D Brenuchon C Kanda A et al Peroxisome proliferator-activated receptor alpha regulates
skin inflammation and humoral response in atopic dermatitis J Clin Allergy Immunology 2008 21(4)962-8
23 Schote A Turner J Schiltz J et al Nuclear receptors in human immune cells expression and correlations
Mol Immunolog 200744(6)1436-45
24 DAmore S Vacca M Graziano G et al Nuclear receptors expression chart icircn peripheral blood
mononuclear cells identifies patients with Metabolic Syndrome Biochim Biophys Acta
20131832(12)2289-301
25 Uthurralt J Gordish-Dressman H Bradbury M T et al PPARalpha L162V underlies variation in serum
triglycerides and subcutaneous fat volume in young males BMC Med Genet 2007855
26 Hiukka A Leinonen ES Jauhiainen M et al Long-term effects of fenofibrate on VLDL and HDL
subspecies icircn participants with type 2 diabetes mellitus Diabetologia 2007 50(10)2067-75
27 Robins SJ Rubins HB Faas FH et alInsulin resistance and cardiovascular events with low HDL
cholesterol The Veterans Affairs HDL Intervention Trial (VA-HIT) Diabetes Care 2003 26(5)1513-7
28 Devaraj S Siegel D Jialal I Statin Therapy in Metabolic Syndrome and Hypertension Post-JUPITER
What is the Value of CRP Curr Atheroscler Rep 2011 13(1) 31ndash42
29 Imperatore G Riccardi G Iovino C et al Plasma Fibrinogen A New Factor of the Metabolic Syndrome A
population-based study Diabetes Care 19982 1(4)649-54
30 Krysiak R Gdula-Dymek A Bachowski R Okopien B Pleiotropic effects of atorvastatin and fenofibrate
in metabolic syndrome and different types of pre-diabete Diabetes Care 201033(10)2266-70
31 Hermans MP Impact of Fenofibrate on Type 2 Diabetes Patients with Features of the Metabolic Syndrome
Subgroup Analysis From FIELD Curr Cardiol Rev 20106(2)112-8
32 Silverstein R Inflammation atherosclerosis and arterial thrombosis Role of the scavenger receptor CD36
Cleveland Clinic Journal of Medicine 200976(Suppl 2)S27-S30
33 Hăncu N Obezitatea In Vereşiu IA (ed) Diabetul zaharat nutritia si bolile metabolice Volume 2 Editura
Echinox Cluj- Napoca 2010 1-15
Lista lucrări publicate
1 Elena Popa Maria Maidaniuc Agnes Bacusca Alamir Diaa Rodica Petrovanu Adorata Elena
Coman Disfuncţia endotelială ndash de la mecanisme moleculare la cuantifi care şi tratament icircn practica
medicală Practica Medicală 20149(3) 109-14
2 Elena Popa Agnes Bacusca Alamir Diaa Maria Maidaniuc Rodica Petrovanu Adorata Elena Coman
The function of insulin receptor (IRF) in evolution of obesity correlation with adipocytes diameters
Archives of the Balkan Medical Union 201449(3) 275-9
3 Elena Popa Florin Zugun-Eloae Mihaela Zlei Daniela Jitaru Oana Maria Pintilie Adorata Elena
Coman Maria Traian Didona Anca Ungureanu Eugen Carasevici - acceptata pentru numarul 42014
Flow cytometry analysis of PPAR-alpha receptors in metabolic syndrome) Revista Romană de
Medicină de Laborator(RRLM-D-14-00034R1- adeverinţa ataşată
SM) Pentru studiul SM pacienţii au fost recrutaţi din masa de populaţie arondată cabinetului
de MF fără istoric de SM diabet zaharat boală cardio-vasculară aflați la primul diagnostic
de SM evaluarea completă a acestora fiind urmată de includerea icircn programul de
management cardiovascular şi metabolic conform Ghidurilor Terapeutice aflate icircn vigoare
Lot SM a) criterii de includerevacircrsta peste 18 ani recrutarea pe baza semnării
Consimţămacircntului liber informatSM nou-diagnosticat pe baza prezenţei a minim trei criterii
de diagnostic pentru SM conform Harmonised I b) criterii de excluderevacircrstă sub 18 ani
refuzul semnării Consimţămacircntului liber informat femei icircn perioada de graviditate sau de
lactaţie SM anterior diagnosticat istoric de diabet zaharat boală cardiovasculară constituită
tratament cu agonişti PPARα (ie fibraţi etc)
Lot martor (Non-SM) a) criterii de includerevacircrsta peste 18 ani recrutarea pe baza
semnării Consimţămacircntului liber informat absenţa diagnosticului de SM b) criterii de
excludere vacircrstă sub 18 ani refuzul semnării Consimţămacircntului liber informat femei icircn
perioada de graviditate sau de lactaţie
Studiul receptorilor PPARα a inclus două subetape
A Studiul componentelor sindromului metabolic conform criteriilor Harmonised I
Evaluarea clinică a participanţilor s-a desfăşurat icircn cadrul Cabinetului de Medicină de
Familie iar determinările hematologice şi biochimice s-au efectuat icircn Laboratorul
Ambulatorului Clinic de Specialitate al Spitalului Clinic de Urgenţă bdquoSf Spiridonrdquo Iaşi
B Evaluarea icircn citometrie de flux a nivelului relativ de expresie a PPARα şi CD36
Studiul receptorilor PPARα s-a desfăşurat icircn Laboratorul de Biologie Moleculară al
Institutului Regional de Oncologie Iaşi prin metoda citometriei icircn flux (19) Nivelul relativ de
expresie al receptorilor nucleari PPARα a fost determinat icircn diferite tipuri de leucocite
circulante polimorfonucleare (PMN) limfocite (Ly) Mo(Mo) şi eozinofile(Eo) Am utilizat o
metodă de citometrie icircn flux optimizată ldquoin houserdquo elaborată icircn cadrul Laboratorului de
Biologie Moleculară al IRO Iaşi Icircn cursul procesului de optimizare am testat mai multe
concentraţii ale anticorpului anti-PPARα 1100 1500 11500 14500 iar icircn urma
determinărilor efectuate şi a analizei statistice concentraţia 1500 a fost considerată optimă
pentru desfăşurarea studiului (tabel XXIII figura 51)
Tabel XXIII Optimizarea concentraţiilor Ac anti-PPARα Diferenţa
mediilor
valorilor
medii
PMN
Diferenţa
mediilor
mediane-
lor
PMN
Diferenţa
mediilor
valorilor
medii
Ly
Diferenţa
mediilor
mediane-
lor
Ly
Diferenţa
mediilor
valorilor
medii
Mo
Diferenţa
mediilor
mediane-
lor
Mo
Diferenţă 0 1300 1600 100 100 700 750
normal - 1100 650 1050 1050 1350 450 900
patologic 1500 2850 2750 3800 3600 2850 2400
11500 -1050 800 3500 3300 2250 1800
14500 2200 2150 1300 1100 2950 2850
AOptimizare
BRepetabilitate
Figura 51 Optimizarea concentraţiei anticorpului anti-PPARα
Icircn concordanţă cu literatura de specialitate icircn cercetarea efectuată intensitatea medie
de fluorescenţă (MFI) a fost utilizată ca măsură pentru evaluarea expresiei celulare a
receptorilor PPARα (212) Un exemplu de analiză a probelor este reprezentat icircn figura 52
Figura 52 Exemplu de analiză flowcitometrică pentru receptorul nuclear PPARα Graficul din stacircnga reprezintă distribuţia leucocitelor iar cel din dreapta ilustrează distribuţia
intensităţii de fluorescenţă pentru populaţiile de celule selectate
Intensitatea Medie a Fluorescenţei (MFI) a CD36 ca o măsură a nivelului relativ de
expresie a acestor receptori la nivelul membranei Mo a fost detectată printr-o metodă
convenţională pentru marcare de suprafaţă şi evaluare pe bază de citometrie icircn flux folosind
aceleaşi probe de sacircnge cu EDTA cu focalizare pe Mo şi utilizacircnd CD14 ca marker specific
pentru Mo (figura 53)
Figura 53Analiza
flowcitometrică
pentru marcajul
CD14 - CD36
Rezultate
Icircn cele două loturi au fost incluşi icircn studiu un număr de 57 de participanţi care au fost
investigaţi din punct clinic şi paraclinic Vacircrsta subiecţilor incluşi icircn studiu a fost cuprinsă
icircntre 18 şi 79 ani iar vacircrsta medie calculată a avut valoarea de 4805 plusmn 1587 ani Pentru sexul
masculin vacircrsta medie este de 4925plusmn1617 ani iar pentru sexul feminin 4689 plusmn1 5ani
diferenţa obţinută icircntre vacircrstele pacienţilor fiind statistic nesemnificativă (P = 085)
Analizacircnd vacircrstele subiecţilor din cele două loturi am observat că vacircrsta medie a pacienţilor
cu SM (5476 plusmn 1183 ani) a fost semnificativ mai mare (t-test P = 0003) decacirct icircn lotul
martor (4258 plusmn 169 ani) Pentru diagnosticul sindromului metabolic am calculat scorul de
SM bazacircndu-ne pe criteriile Harmonised I Conform criteriilor diagnostice din cei 57 de
subiecţi investigaţi un număr de 26 participanţi (46) au fost incluşi icircn lotul cu SM (Lot
SM) iar 31 de subiecţi(54) nu au prezentat acest sindrom constituind lotul martor (Lot
Non-SM) Din punct de vedere al repartiţiei pe sexe nu au existat diferenţe statistic
semnificative raportul bărbaţifemei fiind de 0961 Din totalul celor 28 de bărbaţi incluşi icircn
studiu 4285 (12 bărbaţi) au icircntrunit cel puţin trei criterii diagnostice pentru SM fiind
incluşi icircn lotul SM Icircn acelaşi timp 14 femei reprezentacircnd 4827 din subiecţii de sex
feminin au icircntrunit condiţiile pentru includerea icircn lotul pacienţilor cu SM Valoarea medie
determinată pentru scorul de SM a arătat prezenţa unor valori semnificativ statistic mai mari
din punct (t-test P lt 00001) icircn lotul SM (769plusmn176) comparativ cu lotul martor (174 plusmn
184) Am studiat comparativ media valorilor măsurate ale criteriilor componentelor SM
Analiza statistică a arătat valori semnificativ statistic mai mari pentru CA TG glicemie TAS
şi TAD (plt0001) icircn lotul SM comparativ cu lotul normal Concomitent calculul statistica
evidenţiat o scăderea semnificativă a HDL-colesterolului icircn lotul cu SM comparativ cu
subiecţii din lotul martor (Non-SM) Aplicacircnd testul z am comparat ponderea pacienţilor
diagnosticaţi cu HTA dislipidemie şi tulburări ale metabolismului glucidic icircn lotul SM versus
lot Non-SM şi am constatat prezenţa acestor afecţiuni icircntr-un procent mai mare semnificativ
statistic icircn lotul SM ((plt0001)
Utilizacircnd testul t Student am calculat diferenţele statistice şi icircntre alți parametri
studiaţi care sunt factori de risc cardio-vascular dar care nu sunt componente ale SM Icircn lotul
cu SM valorile acidului uric fibrinogenului Col total Non-HDL-col şi LDL-col au fost
semnificativ mai mari comparativ cu lotul martor (tabel XXVI) Analizacircnd valorile medii ale
populaţiilor de leucocite am identificat doar pentru populaţia de Eo diferenţe statistice icircntre
cele două loturi numărul Eo icircn lotul SM fiind semnificativ mai mare decacirct icircn lotul martorTot
pentru caracterizarea celor două loturi am analizat prezenţa antecedentelor
heredocolaterale (AHC) de diabet zaharat boala cardiovasculară şi dislipidemie pentru toţi
subiecţii investigaţi Astfel existenţa AHC de HTA a fost declarată de 2580 din subiecţii
incluşi icircn lotul martor respectiv de 5384 din numărul pacienţilor cu SM Antecedentele
heredocolaterale de dislipidemie au fost prezente la 3461 din pacienţii cu SM icircn timp ce icircn
lotul martor anamneza a evidenţiat aceste antecedente la 3548 din subiecţi
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα
Icircn cercetarea desfăşurată am utilizat intensitatea medie de fluorescenţă (MFI) ca
măsură a nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn leucocitele studiate Pentru
populaţiile de leucocite analiza computerizată a probelor luate icircn studiu a furnizat valori
pentru MFI a receptorilor PPARα icircn funcţie de cantitatea de anticorpi anti-PPARα marcaţi cu
fluorocrom care se leagă de aceste celule şi apoi sunt captaţi de citometru (figura 59)
A Lot Non - SM
B Lot SM
Figura 59 Analiza flowcitometrică pentru receptorii PPARα icircn leucocite A lot normal B lot SM
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Mo
Analiza probelor efectuată conform protocolului de lucru descris a arătat prezenţa
PPARα icircn Mo recoltate din sacircngele tuturor subiecţilor incluşi icircn această cercetare Pentru toţi
participanţii investigaţi analiza MFI a Ac anti - PPARα icircn populaţia de Mo (Mo) a arătat un
interval de variaţie icircntre [786 395] Valoarea medie a nivelului de expresie relativă a PPARα
calculată pentru Mo a fost de 23210 plusmn7860 Pentru ambele loturi de studiu pacienţilor cu
SM testul Testul Shapiro-Wilk a arătat distribuţia normală a valorilor obţinute pentru nivelul
de expresie al PPARα icircn Mo
Tabel XXVIII Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn Mo
Lot SM Lot Non-SM
N 26 31
Media 22819 23538
SD 5819 7717
Mediana 22400 22600
Minimum 12800 78600
Maximum 35800 37900
Percentila 25 18300 18300
Percentila 75 26200 30350
Pentru pacienţii din lotul SM valoarea medie a MFI icircn Mo a fost de 22819 plusmn 5880 iar
pentru lotul martor s-a calculat o valoare medie a MFI a Ac anti-PPARα de 23538 plusmn 7717
Distribuţia statistică a frecvenţei valorilor MFI obţinute pentru nivelul de expresie a PPARα
icircn Mo subiecţilor din cele două loturi a fost reprezentată icircn figura 511
Figura 511 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti-PPARα icircn Mo
Sub forma unei diagrame de control Shewhart am reprezentat variaţia intensităţii medii de
fluorescenţă pentru anticorpii anti-PPARα icircn MoVariaţia nivelului de expresie relativă a
receptorilor PPARα icircn Mo subiecţilor studiaţi este ilustrată icircn fig 512 513
Figura 512 Lot SM Variaţia
expresiei relative a PPARα icircn Mo
Număr pacienţi
26
Minim 128
Maxim 358
Media 22819
DS 5819
25 din 26 valori ale MFI s-au icircncadrat
icircn intervalul Media plusmn 2DS
Figura 513 Lot Non-SM Variaţia
expresiei relative a PPARα icircn Mo
Număr pacienţi 31
Minimum 786
Maximum 379
Media 23538
DS 7717
Cu excepţia unei singure
determinări valorile calculate s-au
icircncadrat icircn Media plusmn 2DS
Utilizacircnd testul parametric t-Student pentru variabilele cu distribuţie normală am
comparat valoarea medie a intensităţii de fluorescenţă a Ac anti-PPARα icircn lotul cu SM versus
subiecţi fără SM (Lot Non-SM) Analiza statistică efectuată nu a identificat diferenţe icircntre
50 100 150 200 250 300 350 400 450
0
5
10
15
20
25
30
35
MFI anti-PPAR a
Frecv
enta
relati
va (
)
Lot SM
0 50 100 150 200 250 300 350 400 450 500
0
5
10
15
20
25
30
35
MFI anti-PPAR a
Frecv
enta
relati
va (
)
Lot martor
1 6 11 16 21 26 31
0
50
100
150
200
250
300
350
400
450
MFI
anti-
PPAR
a
2282
1106
3458
518
4046
Media
LCI
LCI
1 6 11 16 21 26 31 36
-100
0
100
200
300
400
500
MFI a
nti-PP
AR
a
2354
810
3897
39
4669LCS
LCI
Media
cele două loturi icircn ceea ce priveşte expresia PPARα la nivelul Mo circulante (t- Test P=
069)
Studiul receptorilor PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de AHC şi dislipidemie
Nivelul de expresie al receptorilor PPARα α icircn Mo tinde să fie mai scăzut la subiecţii
cu AHC de HTA comparativ subiecţii care nu au declarat AHC de HTA (P= 006 fig 515)
AHC HTA
Număr 22
Mediana 19950
Percentila 25 17800
Percentila 75 22700
AHC HTA absente
Număr 35
Mediana 24800
Percentila 25 19025
Percentila 75 31700
Figura 515 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Mo funcţie de AHC de HTA
Nu s-au calculat diferenţe semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor
PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de dislipidemie atunci cacircnd aceştia au fost comparaţi cu
subiecţii fără AHC de tulburări ale metabolismului lipidic (t- Test P= 020)
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn limfocite
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn populaţia de Ly a
demonstrat prezenţa receptorilor PPARα icircn Ly tuturor subiecţilor studiaţi Pentru toţi
participanţii investigaţi analiza MFI a Ac anti - PPARα icircn populaţia de Ly a relevat un
interval de variaţie icircntre [748 314] iar valoarea medie a MFI a fost de 18058 plusmn 5600
Pentru ambele loturi aplicarea testului Shapiro-Wilk a evidenţiat distribuţia normală a
valorilor determinate pentru nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Ly Pentru
pacienţii cu SM valoarea medie a MFI determinată pentru expresia PPARα icircn populaţia de
Ly a fost de 18178 plusmn 61 16 iar pentru lotul martor a fost de 16800 plusmn 5229
Tabel XXX Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn limfocite
Lot SM Lot Non-SM
N 26 31
Media 181781 179574
SD 611694 522907
Mediana 165000 168000
Minimum 81300 74800
Maximum 314000 301000
Percentila 25 13400 - 145750
Percentila 75 21800 21700
Distribuţia frecvenţei valorilor MFI a Ac anti-PPARα icircn Ly este redată icircn figura 518
Figura 518 Distribuţia frecvenţelor relative a MFI a Ac anti-PPARα icircn Ly
94 din determinările efectuate pentru determinarea nivelului de expresie relativă al
MFI
ant
iPPA
R
a_Mo
190
200
210
220
230
240
250
260
270
280
DA NU
AHC HTA
P=006
50 89 128 167 206 244 283 322 361 400
0
5
10
15
20
25
30
35
MFI anti-PPAR a
Frecv
enta
relati
va (
)
Lot SM
0 50 100 150 200 250 300 350
0
5
10
15
20
25
30
35
40
MFI anti-PPAR a
Frec
venta
relat
iva (
)
Lot Non-SM
receptorilor PPARα icircn limfocitele subiecţilor cu SM s-au icircncadrat icircn intervalul Media plusmn 2DS
Figura 5 19 Lot SM Variaţia expresiei
relative a PPARα icircn Ly
Număr pacienţi 26
Minimum 813
Maximum 31400
Media 18178
Deviaţia Standard 6116
25 valori s-au icircncadrat icircn Media plusmn 2DS
Pentru lotul Non-SM diagrama de control (figura 520) a arătat toate valorile
determinate pentru lotul Non-SM se icircncadrează icircntre LCS şi LCI
Figura 520 Lot Non -SM Variaţia
expresiei relative a PPARα icircn Ly
Număr pacienţi 31
Minimum 748
Maximum 30100
Media 179574
Deviaţia Standard 5229
96 din valori icircncadrate icircn Media plusmn 2DS
Aplicarea testului t-Student pentru valorile medii ale intensităţii de fluorescenţă ale
PPARα icircn Ly nu a arătat existenţa unei diferenţe statistic semnificative icircntre lotul cu SM şi
lotul martor(t- Test P= 088)
Analiza receptorilor PPARα icircn Ly subiecţilor cu AHC de HTA şi dislipidemie
Studiind populaţiile de Ly la subiecţii care au prezentat AHC de hipertensiune
arterială analiza flowcitometrică a relevat existenţa unor valori mai mici pentru MFI la aceşti
subiecţi comparativ cu cei fără AHC de HTA (fig 522) deşi scăderea observată nu a
icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică (t- Test P = 009)
AHC HTA
Număr 22
Mediana 16000
Percentila 25 12700
Percentila 75 17100
AHC HTA absenţe
Număr 35
Mediana 18700
Percentila 25 14900
Percentila 75 23175
Figura 522 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Ly funcţie de AHC de HTA
Nu am calculat diferenţe statistic semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor
PPARα icircn populaţiile de Ly ale subiecţilor la care am identificat AHC de dislipidemie
comparativ cu cei care nu au declarat antecedente familiale de dislipidemie (t- Test P= 051)
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn neutrofile (PMN)
Analiza flowcitometrică a evidenţiat prezenţa PPARα icircn PMN recoltate din sacircngele
venos al tuturor participanţilor la studiu Pentru toţi subiecţii investigaţi analiza MFI a Ac -
PPARα icircn populaţia de PMN a relevat un interval de variaţie de [163419] iar valoarea medie
a MFI pentru Ac anti-PPARα a fost de 26392 plusmn 7064 Testul Shapiro-Wilk a arătat o
distribuţie normală a valorilor intensităţii medii de fluorescenţă a anticorpilor anti-PPARα atacirct
icircn lotul pacienţilor cu SM cacirct şi icircn lotul martor
1 6 11 16 21 26 31
-50
0
50
100
150
200
250
300
350
400
MFI
anti-
PPAR
a
1818
595
3041
-17
3653
Media+2DS
Media- 2DS
1 6 11 16 21 26 31 36
0
50
100
150
200
250
300
350
MFI
ant
i-PPA
R
a
1796
750
2841
227
3364
Media+2DS
Media
Media- 2DS
MFI
anti-
PPAR
a Ly
130
140
150
160
170
180
190
200
210
DA NU
AHC HTA
P=009
Tabel XXXII Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn PMN
Lot SM Lot Non-SM
N 26 31
Media 26273 26480
SD 6915 7088
Mediana 25900 25500
Minimum 17200 16300
Maximum 39500 41900
Percentila 25 19800 19600
Percentila 75 30500 31500
Icircn cele două loturi distribuţia frecvenţei valorilor nivelului relativ de expresie a
receptorilor PPARα icircn PMN a fost reprezentată sub formă de histograme (fig 525)
Figura 525 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti-PPARα icircn PMN
Pentru cei 26 de pacienţi din lotul cu SM a valoarea medie a nivelului de expresie
relativă a receptorilor PPARα icircn PMN a fost de 26273 plusmn 6915 Studiind diagrama Shewhart
din figura 526 se observă că toate valorile obţinute pentru nivelul de expresie relativă
PPARα icircn PMN investigate se icircncadrează icircntre limitele definite de valorile medii plusmn 2DS
Figura 526 Lot SM
Variaţia expresiei relative a PPARα icircn
PMN
Număr pacienţi 26
Minimum 17200
Maximum 39500
Media 26273
Deviaţia Standard 6915
Valorile MFI icircncadrate icircn Media plusmn 2DS
Pentru lotul martor valoarea medie calculată a MFI a anticorpilor anti-PPARα a fost de
26480 plusmn 7088 peste 95 din valorile MFI fiind cuprinse icircn Media plusmn 2DS (figura 527)
Figura 527 Lot Non-SM Variaţia expresiei
relative a PPARα icircn PMN
Număr pacienţi 31
Minimum 16300
Maximum 41900
Media 26480
Deviaţia Standard 7088
30 valoriicircn Media plusmn 2DS
Pentru PMN analiza statistica nu a arătat existenţa unei diferenţe statistic semnificative icircntre
nivelul de expresie relativă a PPARα la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii din lotul
Non-SM (t- Test P= 090) Studiind populaţiile de PMN la subiecţii care au prezentat AHC
de HTA nu am calculat o diferenţă statistic semnificativă icircntre expresia receptorilor PPARα
la subiecţii cu istoric familial de hipertensiune arterială comparativ cu cei pentru care nu s-au
notat AHC de HTA (t- Test P= 013)De asemenea am identificat diferenţe icircntre nivelul de
expresie al PPARα icircn PMN subiecţilor care prezentau AHC de dislipidemie comparativ cu
cei fără AHC de dislipidemie (t- Test P= 017)
50 100 150 200 250 300 350 400 450 500
0
5
10
15
20
25
30
35
MFI anti-PPAR a
Frecve
nta rel
ativa (
)
Lot SM
50 100 150 200 250 300 350 400 450 500
0
5
10
15
20
25
30
MFI anti-PPAR a
Frecv
enta
relati
va (
)
Lot Non-SM
1 6 11 16 21 26 31
0
50
100
150
200
250
300
350
400
450
500
MFI
anti-
PPA
R
a
2627
1244
4010
553
4702
Media + 2DS
Media - 2 DS
Media
1 6 11 16 21 26 31 36
0
50
100
150
200
250
300
350
400
450
500
MFI
anti-
PPAR
a
2648
1230
4066
522
4774
Media+ 2DS
Media - 2DS
Media
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile Tabel XXXIV Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn Eo
Lot SM Lot Non-SM
N 26 31
Mediaplusmn SD 141057 plusmn 47604 172209 plusmn 37565
Mediana 142450 171300
Minimum 35000 68500
Maximum 233700 250600
Percentila 25 119300 153225
Percentila 75 169700 199550
Am studiat nivelul relativ de expresie a receptorilor PPARα icircn Eo iar rezultatele au
fost figurate sub forma de histograme (figura 532)
Figura 532 Distribuţia frecventelor relative ale valorilor MFI anti- PPARα icircn Eo
Din diagrama Shewhart (figura 533) se observă că toate valorile determinate pentru
nivelul de expresie relativă a PPARα icircn Eo pentru lotul SM s-au icircncadrat icircn [Media plusmn 3 DS]
peste 90 din determinări fiind cuprinse icircn [Media plusmn 2 DS] iar icircn [Media plusmn 1 DS] sunt
incluse peste 65 din valorile MFI
Figura 533 Lot SM
Variaţia expresiei relative a PPARα icircn Eo
Număr pacienţi 26
Minimum 35000
Maximum 233700
Media 141057
Deviaţia Standard 47604
24 valori icircncadrat eicircn [Media plusmn 2DS]
Pentru subiecţii incluşi icircn lotul martor analiza diagramei (figura 534) a arătat că
toate cele 31 de valori ale MFI pentru PPARα icircn Eo se icircncadrează icircn [Media plusmn 3DS] iar 30
dintre acestea se icircncadrează icircn [ Media plusmn 2 DS]
Figura 534 Lot Non -SM
Variaţia expresiei relative a PPARα icircn Eo
Număr pacienţi 31
Minimum 685
Maximum 2506
Media 172209
Deviaţia Standard 375 65
30 valori icircncadrate icircn [Media plusmn 2DS]
Comparacircnd subiecţii cu SM cu cei din lotul martor am observat o scădere
semnificativă statistic a MFI a Ac anti - PPARα icircn Eo pentru pacienţiir cu SM ( figura 535)
PPARα Eo Lot Non-SM
Număr 31
Mediana 171300
Percentila 25 152325
Percentila 75 199550
PPARα Eo Lot SM
Număr 26
Mediana 142450
Percentila 25 119300
Percentila 75 169700
Figura 5 35 Comparaţie icircntre nivelul de expresie a PPARα icircn Eo
0 500 1000 1500 2000 2500 3000
0
10
20
30
40
50
MFI anti-PPAR a
Frecvent
a relativa
()
Lot SM
400 800 1200 1600 2000 2400 2800
0
5
10
15
20
25
30
35
40
45
MFI anti-PPAR a
Frecenta
relativa
()
Lot Non-SM
1 6 11 16 21 26 31
-500
0
500
1000
1500
2000
2500
3000
MFI a
nti-PP
AR
a
14106
4765
23447
94
28117
Media + 2DS
Media- 2DS
LCI
LCS
1 6 11 16 21 26 31 36
500
1000
1500
2000
2500
3000
MFI an
ti-PPA
R a
17221
9708
24734
5951
28490
LCI
Media-2DS
Media
Media +2 DS
LCS
1200
1300
1400
1500
1600
1700
1800
1900
Lot SM Lot Non-SM
P=00072
Cu ajutorul curbei ROC am evaluat posibilitatea utilizării MFI a Ac anti - PPARα icircn
Eo ca marker pentru diagnosticul SM Valoarea MFI a Ac anti - PPARα icircn Eo care prezice cu
cea mai mare acurateţe prezenţa SM a fost de 1533 (punctul de ldquocut-offrdquo) pentru care am
calculat o sensibilitate de 5652 şi o specificitate de 7778 Calculul ariei AUC a furnizat
valoarea de 0663 şi deci determinarea parametrului MFI anti- PPARα icircn Eo are valoarea
unui test cu acurateţe redusatilde icircn diagnosticul SM Studiind expresia PPARα icircn Eo la subiecţii
care au prezentat AHC de HTA am observat o scădere semnificativă statistic (P = 00023) a
expresiei PPARα la subiecţii cu istoric familial de HTA comparativ cu subiecţii fatilderatilde AHC de
HTA (figura 537)
AHC HTA
Număr 22
Mediana 148800
Percentila 25 116425
Percentila 75 170750
AHC HTA absente
Număr 35
Mediana 170850
Percentila 25 143700
Percentila 75 195000
Figura 537 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Eo funcţie de AHC de HTA
Studiind subiecţii cu AHC declarate de dislipidemie nu am identificat diferenţe icircntre
nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Eo subiecţilor cu AHC de dislipidemie
comparativ cu cei care nu au declarat prezenţa AHC de dislipidemie (t - Test P = 067)
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor CD36
Am studiat expresia receptorilor CD36 icircn Mo subiecţilor incluşi icircn studiu
Lot Non - SM
BLot SM
Figura 539 Analiza flowcitometrica pentru receptorii CD36 icircn Mo
Pentru toţi participanţii la studiu valorile MFI au variat icircn intervalul [817 6933] iar
valoarea medie a MFI a Ac anti-CD36 a fost de 397133 plusmn 120902 Tabel XXXVII Statistică descriptivă pentru a CD36 icircn Mo
Lot SM Lot Non-SM
Media 429034 370377
Deviatia Standard 109051 125514
Mediana 411000 362800
Minimum 266400 81700
Maximum 693300 616800
Percentila 25 346200 273750
Percentila 75 469000 453300
Distribuţia frecvenţelor relative a MFI au fost prezentate sub formă histogramelor
Figura 541 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti - CD36 icircn Mo
MFI
ant
i-PPA
R a Eo
1000
1100
1200
1300
1400
1500
1600
1700
1800
1900
DA NU
AHC HTA
P=00023
1000 2000 3000 4000 5000 6000 7000 8000
0
5
10
15
20
25
MFI anti-CD36
Frecve
nta rela
tiva (
)
Lot SM
0 1778 3556 5333 7111
0
5
10
15
20
25
30
35
MFI anti-CD36
Frecve
nta rel
ativa (
)
Lot Non - SM
Referitor la lotul SM 92 din valorile MFI a Ac anti- CD36 s-au icircncadrat icircn
intervalul Media plusmn 2 DS (figura 542) iar pentru lotul martor peste 90 dintre acestea icircn
Media plusmn 2 DS (figura 543)
Figura 542 Lot SM
Variaţia MFI anti-CD36 icircn Mo
Număr pacienţi 26
Minimum 2664
Maximum 6933
Media 429034
Deviaţia Standard 109051
Figura 543 Lot Non -SM
Variaţia MFI anti- CD36 icircn Mo
Număr 31
Minimum 81700
Maximum 616800
Media 370377
Deviaţia Standard 125514
Comparacircnd subiecţii cu SM cu cei din lotul normal am constatat o tendinţă de creştere
a expresiei CD36 icircn lotul cu SM((t - Test P= 0067)
MFI anti - CD36 Lot Non-SM
Număr 31
Mediana 3628
Percentila 25 2737
Percentila 75 4533
MFI anti - CD36 Lot SM
Număr 26
Mediana 4110
Percentila 25 3462
Percentila 75 4690
Figura 544 Comparaţie icircntre cel două loturi privind MFI anti - CD36 icircn Mo
Referindu-ne la subiecţii cu AHC de HTA am observat o tendinţă de creştere a
valorilor MFI anti-CD36 comparativ cu cei care nu au avut AHC de HTA (t - Test P = 0 08)
AHC HTA
Număr 22
Mediana 442800
Percentila 25 355275
Percentila 75 519475
AHC HTA absenţe
Număr 35
Mediana 377400
Percentila 25 316900
Percentila 75 443400
Figura 545 Comparaţie icircntre expresia CD36 icircn Mo funcţie de AHC de HTA
Nu s-au calculat diferenţe semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor
PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de dislipidemie atunci cacircnd aceştia au fost comparaţi cu
subiecţii fără AHC de dislipidemie (t - Test P=031)
Corelaţii icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα si CD36
Studiind valorile intensităţii medii de fluorescenţă a Ac anti-PPARα icircn Mo Ly şi
PMN am observat că nivelul de expresie celularatilde a PPARα icircn Mo Ly şi PMN sunt corelate
puternic pozitiv atacirct icircn lotul SM cacirct şi icircn lotul martor(fig547 548)
1 6 11 16 21 26 31
0
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
Pacienti
MFI a
nti-CD
36
42903
21093
64714
10188
75619
LCI
Media
LCS1 6 11 16 21 26 31 36
-1000
0
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
MFI a
nti- C
D36
37038
11935
62141
-616
74692Media + 2 DS
Media
Media - 2 DS
3200
3400
3600
3800
4000
4200
4400
4600
4800
Lot SM Lot Non-SM
P = 00676
MFI
anti-
CD36
3400
3600
3800
4000
4200
4400
4600
4800
5000
DA NU
AHC HTA
P = 008
Figura 547 Studiul relatiilor dintre
receptorii PPARα icircn SM A Mo vs PMN B Mo vs Ly
C PMN vs Ly Graficul ilustrează coeficienţii r P dreapta de
regresie (linia centrala) intervalul de icircncredere
95 şi intervalul de predicţie 95
Figura 548 Corelaţii icircntre receptorii PPARα icircn lotul
martor
A Mo vs PMN
B Mo vs Ly
C PMN vs Ly
Tot pentru lotul SM cacircnd am evaluat relaţia dintre nivelul de expresie relativă a
receptorilor PPARα icircn Eo şi nivelul de expresie relativa a receptorilor CD 36 am obţinut o
corelaţie negativă (r = - 05 P = 001) (fig 549 A)
50 100 150 200 250 300 350 50
100
150
200
250
300
350
400
450
500
PPARα Ly
PPARα PMN
y = 56641 + 1159 x r = 086 P lt 0001
C
50 100 150 200 250 300 350 400 0
50
100
150
200
250
300
350
PPARα Mo
PPARα Ly
y = 36665 + 0607 x r = 090 P lt 0001
B
150 200 250 300 350 400 450 0
50 100 150 200 250 300 350 400 450 500
PPARα PMN
PPARα Mo
y = 2505 + 0879 x r = 081 P lt 0001
A
50 100 150 200 250 300 350
50 100 150 200 250 300 350 400 450 500
PPARα Ly
PPARα PMN
y = 95668 + 0919 x r = 081 P lt 0001
C
100 150 200 250 300 350 400
0
50
100
150
200
250
300
350
400
PPARα Mo
PPARα Ly
y = -7503 + 0829 x r = 079 P lt 0001
B
100 150 200 250 300 350 400
50
100
150
200
250
300
350
400
450
500
PPARα Mo
PPARα PMN
y = 61384 + 0882 r = 074 P lt 0001
A
Figura 549 Corelaţii icircntre expresia PPARα icircn Eo şi alte tipuri de receptori investigaţi A PPARα Eo şi CD 36 (Lot SM) B PPARα Eo şi PPARα Mo( Lot Non-SM)
Icircn lotul martor am identificat o asociere moderată pozitivă (r = 038 P = 0033) icircntre
nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Eo şi Mo (figura 549B) corelaţie absentă icircn
lotul pacienţilor cu SM
Corelaţii dintre receptorii studiaţi şi componentele sindromului metabolic
Icircn lotul de control analiza statistică a relevat faptul că icircntre circumferinţa
abdominală (CA ) şi nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Mo Ly şi PMN există o
corelaţie inversă adică scăderea expresiei PPARα la nivelul acestor populatii celulare ar fi
icircnsoţită de creşterea CA (figura 550
Figura 550Corelaţii dintre receptorii
PPARα si CA A Mo B Ly C PMN
La pacienţii cu SM am notat o corelatie moderată negativă statistic semnificativă
icircntre TG şi valorile MFI a Ac anti- PPARα icircn Mo şi Ly( fig 551)
150 200 250 300 350 400 450 50
60
70
80
90
100
110
PPARα PMN
CA r = - 040 P = 0024
C
50 100 150 200 250 300 350 50
60
70
80
90
100
110
PPARα Ly
CA r = - 046 P = 0009
B
50 100 150 200 250 300 350 400 50
60
70
80
90
100
110
PPARα Mo
CA r = - 042 P = 0017
A
50 100 150 200 250 300 350 400 500
1000
1500
2000
2500
3000
PPARα Mo
PPARα Eo
r = 038 P = 0033
B
0 500 1000 1500 2000 2500 1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
PPARα Eo
CD36
r = 050 P = 0010
A
Figura 551 Lot SM Corelaţie icircntre expresia PPARα şi TG (A Mo B Ly)
Analizand corelatia dintre receptorii CD36 si valorile TA la pacientii cu SM am observat
o asociere pozitivă asteptată intre TAD si nivelul de expresie al receptorilor CD36 (fig 552)
Figura 552 Lot SM Corelaţii icircntre expresia
receptorilor CD36 şi valorile tensiunii arteriale
diastolice
Studiind corelaţiile dintre receptorii PPARα şi HDL-col la subiecţii din lotul martor am
notat o asociere pozitivă icircntre expresia PPARα icircn Mo şi Ly cu HDL-col (fig 553)
Figura 553 Lot martor Corelaţii icircntre HDL-col şi expresia PPARα icircn Mo(A) Ly(B)
Icircn lotul normal am evidenţiat corelaţii pozitive moderate dar semnificative statistic icircntre
CA şi valorile TAS (r = 062 P lt 0001) respectiv TAD (r = 050 P=0004) precum şi icircntre
CA şi glicemia subiecţilor normali (r = 052 P = 0003) Aceste date icircmpreună cu relaţia
invers proporţională identificată icircntre HDL-col şi CA (r = 050 P = 001) susţin validitatea
acestui studiu Icircn lotul subiecţilor cu SM am observat o corelaţie moderat pozitivă icircntre
expresia PPARα icircn populaţiiile de Mo şi Eo şi concentraţia a HDL-col (fig 554)
B
100 150 200 250 300 350 20
30
40
50
60
70
80
90
100
PPARα Ly
HDL-col-(mgdl)
r = 036 P = 0046
A
150 200 250 300 350 400 20
30
40
50
60
70
80
90
100
PPARα Mo
HDL-col-(mgd)l
r = 035 P = 005
70 75 80 85 90 95 100 1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
TAD (mmHg)
CD36
r = 048 P = 0013
B
50 100 150 200 250 300 350 -100
0
100
200
300
400
500
PPARα Ly
TG(mgdl)
r = - 042 P = 003
A
50 100 150 200 250 300 350 400 -100
0
100
200
300
400
500
PPARα Mo
TG ( mgdl) r =- 0 43 P = 0027
Figura 554 Corelaţii icircn SM icircntre HDL-col şi expresia PPARα icircn Mo (A) şi Eo(B)
Corelaţii icircntre nivelul de expresie relativă a PPARα şi markeri ai disfuncţiei
endoteliale şi inflamaţiei cronice
Deşi nu a icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică am reţinut corelaţia invers
proporţională (r = - 0331 P = 006) dintre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα
icircn PMN şi concentraţia serică a Non-HDL-colesterolului
Studiind relaţiile dintre parametri icircn lotul de pacienţi cu SM am observat o corelaţie
moderată invers proporţională icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Eo şi
acidul uric seric (figura 555 A) corelaţie absentă la subiecţii fără SM
Figura 555 Lot SM corelaţia dintre expresia PPARα icircn Eo şi acidul uric (A) respectiv
PPARα şi fibrinogen (B)
Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P=008) am notat pentru
pacienţii cu SM corelaţia invers proporţională dintre expresia PPARα icircn Eo şi concentraţia
serică a fibrinogenului ( figura 555B)
V5 Discuţii
Icircn cadrul lucrării de doctorat am studiat nivelul de expresie relativă a PPARα icircn
leucocitele pacienţilor cu SM comparativ cu cea a subiecţilor normali Expresia PPARα a fost
studiată icircn paralel cu cea a CD36 glicoproteină exprimată pe suprafaţa a numeroase celule
din organismul uman inclusiv pe cea a Mo şi macrofagelor Prin funcţia sa de receptor pentru
particulele oxidate de LDL CD36 cunoscut ca bdquoscavenger receptorrdquo de clasa B sau
bdquotrombospodin receptorrdquo contribuie la dezvoltarea inflamaţiei de la nivel endotelial şi
formarea plăcii de ateroscleroză Referitor la studiul PPARα icircn Eo icircn sindromul metabolic
menţionăm că studiul nostru este primul care arată că nivelul de expresie a proteinei PPARα
icircn Eo măsurat prin citometrie icircn flux este semnificativ mai redus la pacienţii care sunt
diagnosticaţi cu acest sindrom De asemenea icircn lotul cu SM cercetat icircn cadrul studiului
receptorilor PPARα numărul Eo circulante a fost semnificativ mai crescut la pacienţii cu SM
B
0 500 1000 1500 2000 2500 200
250
300
350
400
450
PPARα Eo o
Fibrinogen mgdl
r =- 036 P = 008
0 500 1000 1500 2000 2500 1 2 3 4 5 6 7 8 9
10 11
PPARα Eo_
Acid uric(mgdl) r = 048 P = 0014 A
0 500 1000 1500 2000 2500 10
20
30
40
50
60
70
80
PPARα Eo
HDL(mgdl)
r = 044 P = 0024
B
100 150 200 250 300 350 400 10
20
30
40
50
60
70
80
PPARα Mo
HDL( mgdl)
r = 046 P = 0019
A
(P = 003) Aceste constatări conduc la ipoteza că Eo joacă un rol special icircn mecanismele
patogenice declanşate icircn sindromul metabolic şi că receptorii PPARα sunt importanţi icircn
implicarea Eo icircn obezitate şi insulinorezistenţă Creşterea numărului de Eo circulante este
urmată de eliberarea mediatorilor proinflamatori iar reducerea expresiei PPARα icircn Eo
determină perturbarea mecanismelor de control al inflamaţiei cu exacerbarea cascadei
proinflamatorii Consecutiv se agravează disfuncţia endotelială şi se accelerează progresia
leziunilor de ateroscleroză Extrapolacircnd aceste ipoteze putem spune că asocierea raportată
dintre boala ischemică coronariană şi Eo poate fi şi consecinţa exacerbării cascadei
proinflamatorii de la nivel vascular produsă datorită scăderii expresiei PPARα icircn Eo iar
creşterea numărului de Eo circulante poate reprezenta o adaptare a organismului uman care
icircncearcă să suplinească deficitul de receptori PPARα Analizacircnd curba ROC pentru
intensităţile medii de fluorescenţă determinate pentru anticorpii anti- PPARα icircn Eo am
obţinut pentru acest biomarker o sensibilitate a testului de 565 şi o specificitate de 778
pentru un punct de cut-off de 1533 ( figura 536 ) Deşi aria AUC (Aria under the curve) egală
cu 0663 icircncadrează acest test ca avacircnd o acurateţe redusă observăm că că această valoare
este apropiată de determinările AUC pentru alţi factori (fibrinogen raport de aterogenitate
acid uric non- HDL-colesterol) cunoscuţi ca fiind implicaţi icircn aterogeneză şi inflamaţia
cronică (figura 431) Aceste remarci alături de faptul că icircn studiul receptorilor PPARα icircn
leucocite am inclus subiecţi la primul diagnostic de SM creează premisa integrării
determinării expresiei relative a receptorilor PPARα icircn diagnosticul complex al sindromului
metabolic Putem spune că icircn final studiul expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofilele
circulante se dovedește a fi util icircn diagnosticul precoce la nivel molecular al SM permiţacircnd
identificarea timpurie a unor indivizi cu risc cardiometabolic crescut Astfel intervenţia
precoce asupra subiecţilor cu deficit de PPARα icircn Eo contribuie la managementul eficient al
afecţiunilor degenerative icircn care inflamaţia cronică icircndeplineşte un rol primordial Referitor
la populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările efectuate prin citometrie de flux nu au
arătat existenţa unor diferenţe statistice icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα
la subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali Rezultatele noastre pot fi
consecinţa caracteristicilor loturilor studiate (icircn studiul nostru au fost incluşi subiecţi recrutaţi
la primul diagnostic de SM şi icircn absenţa stimulării receptorilor PPARα cu droguri agoniste
PPARα) dar icircn acelaşi timp pot apare diferenţe datorită metodei utilizate (231 232 233)
Făcacircnd o paralelă cu un studiu publicat icircn 2013 icircn Europa (231) care a arătat creşterea
nivelului de expresie al PPARα icircn Ly şi Mo observăm că deşi numărul de subiecţi a fost
aproximativ egal (57 participanţi icircn studiul nostru 60 icircn studiul DAmore) subiecţii icircn studiul
amintit au fost recrutaţi dintr-o clinică cu profil medical la primul diagnostic de SM icircn timp
ce metoda utilizată a fost PCR (Polymerase Chain Reaction) mult mai fidelă decacirct citometria
icircn flux icircn studiul receptorilor nucleari De asemenea DAmore nu investighează expresia
PPARα icircn Eo şi PMN icircn cercetare fiind incluse doar celulele CD14+ (predominant Mo) şi
CD14- (predominant Ly) Deşi nu am obţinut diferenţe statistic semnificative icircntre cele două
loturi referitoare la nivelul de expresie relativă a PPARα icircn Mo Ly şi PMN am observat
corelaţii puternice semnificative statistic icircntre expresia receptorilor PPARα icircn aceste tipuri
celulare Rezultatele obţinute sugerează existenţa unui mecanism diferit molecular de control
icircn eozinofile care reglează cantitatea de proteină PPARα icircn eozinofile versus alte tipuri de
leucocite (la pacienţii cu SM) şi acest lucru este icircn concordanţă cu cercetările care descriu
expresia PPARα mRNA icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale
bronşice keratinocite) Studiind prin citometrie de flux nivelul de expresie relativă a
receptorului CD36 la nivelul Mo am arătat prezenţa acestuia icircn Mo tuturor subiecţilor
investigaţi Analizacircnd valorile intensităţii medii de fluorescenţă a CD36 icircn loturile studiate
am observat o tendinţă de creştere la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali
confirmacircnd implicarea receptorului CD36 icircn patogeneza acestuia Referitor la expresia
receptorului CD36 rezultatele obţinute sunt icircn consens cu studii anterioare care au arătat
creşterea expresiei CD36 la pacienţii cu SM şi diabet zaharat Astfel pe lacircngă diferenţa icircn
expresia CD36 s-au raportat şi corelaţii inverse icircntre expresia proteinei CD36 şi nivelul
adiponectinei Acelaşi studiu a evidenţiat o corelaţie pozitivă intre expresia CD36 cu expresia
receptorilor PPAR gamma relaţia cu PPARα nefiind investigată
Analiza de subgrup a relaţiilor dintre componentele SM și elementele moleculare
proinflamatorii studiate a relevat prezenţa unor asocieri semnificativ statistice icircntre acestea
Se argumentează astfel că veridicitatea studiului este susţinută de interdependenţele statistice
ale componentelor SM Determinarea coeficientului de corelaţie Icircn studiul nostru nivelul de
expresie relativă a PPARα s-a corelat moderat negativ (figura 550) cu CA a subiecţilor din
lotul normal pentru populaţiile celulare de Mo (r = - 0420 P = 001) Ly (r = - 046 P =
0009) şi PMN (r = - 040 P = 0024) date care sunt icircn concordanţă cu studiile care arată
rolul PPARα icircn furnizarea energiei prin beta-oxidarea acizilor graşi Icircn acelaşi timp icircn lotul
pacienţilor cu SM nu am identificat prezenţa unei asocieri icircntre nivelul de expresie relativă a
PPARα şi valoarea măsurată a CA Asocierea dintre expresia relativă a PPARα cu obezitatea
de tip central completează datele existente referitoare la reglarea homeostaziei energetice
conturacircnd un mecanism de control deficitar al aportului caloric al SM Icircn condiţiile icircn care
rezultatele obţinute prin metoda citometriei icircn flux nu au arătat existenţa unei corelaţii intre
expresia PPARα şi CA la pacienţii cu SM considerăm că ar fi necesar studiul
polimorfismului genei PPARA care ar putea aduce informaţii importante cu privire la
implicarea acestor receptori icircn apariţia obezităţii de tip central Subliniem acest lucru deoarece
obezitatea este o boală plurifactorială icircn care pe lacircngă factorii ereditari sunt implicaţi factori
de mediu psihologici şi sociali (245) Existenţa unei componente genetice a aterosclerozei
este legată şi de prezenţa unor variante ale genei PPARA asociate cu creşterea incidenţei bolii
cardiovasculare (82) şi a SM (249) Icircn studiul nostru am constatat o scădere statistic
semnificativă a nivelului expresiei relative a receptorilor PPARα icircn Eo la subiecţii cu
antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială comparativ cu subiecţii fără istoric
familial de hipertensiune (figura 537) Deşi diferenţele calculate icircntre loturile studiate nu au
icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică la subiecţii care au declarat prezenţa
antecedentelor familiale de hipertensiune arterială remarcăm o tendinţă de scădere a
intensităţii medii de fluorescenţă pentru Ac anti-PPARα la nivelul Mo (figura 515 P = 006
) icircn timp ce expresia relativă a CD36 icircnregistrează o creştere la acesti subiecţi (figura 545 P
= 008) Icircn contextul riscului cardiovascular foarte icircnalt al pacienţilor cu SM amintim şi
existenţa corelaţiei pozitive dintre valorile tensiunii arteriale diastolice şi expresia relativă a
receptorului CD36 (r = 0483 P = 0013) Această constatare este icircn consens cu studiile care
au arătat că forma solubilă circulantă a CD36 este asociată cu factorii de risc cardiovasculari
fiind propusă ca un marker precoce al aterosclerozei Activarea PPARα este asociată cu
modularea metabolismului lipidic iar agoniştii PPARα sunt utilizaţi icircn mod curent pentru
tratamentul dislipidemiei Sub acţiunea agoniştilor PPARα se obţine o icircmbunătăţire a funcţiei
endoteliale şi a parametrilor reologici funcţiile pleiotropice ale agoniştilor PPARα fiind
dovedite icircn trialuri clinice controlate Icircn populaţiile de Mo şi Ly la pacienţii cu SM
cercetarea noastră a evidenţiat o asociere negativă icircntre nivelul de expresie relativă a
receptorilor PPARα şi concentraţia TG serice (figura 551) Astfel scăderea expresiei
receptorilor PPARα este asociată cu creşterea nivelului TG serice contribuind la profilul
lipidic aterogen din SM Icircn conformitate cu literatura de specialitate icircn studiul efectuat prin
metoda citometriei icircn flux am găsit prezenţa asocierii icircntre nivelul de expresie al PPARα şi
HDL-colesterol Corelaţia pozitivă dintre nivelul de expresie relativă PPARα şi concentraţia
HDL-colesterolului a fost observată icircn lotul martor icircn populaţiile de Mo (r = 035 P = 005)
şi Ly ( r = 036 P = 004) (figura 553) susţinacircnd faptul că stimularea receptorilor PPARα
este legată de creşterea nivelului seric al lipoproteinelor cu densitate crescută La pacienţii cu
SM corelaţia dintre expresia PPARα şi HDL-colesterol a fost evidenţiată icircn populaţiile de Mo
(r = 046 P = 0019) şi eozinofile (r = 044 P = 0024) Se desprinde concluzia că icircn
sindromul metabolic scăderea concentraţiei HDL-colesterol este legată de diminuarea
nivelului de expresie relativă a receptorilor nucleari PPARα icircntărind afirmaţiile legate de
rolul acestor receptori icircn progresia bolilor cardiovasculare Studiind reactanţii de fază acută
analiza statistică a relevat o diferenţă semnificativă din punct de vedere statistic icircntre valorile
fibrinogenului la pacienţii cu SM atunci cacircnd au fost comparaţi cu subiecţii fără SM
(Capitolul IV4 P lt0 001 figura 427A) De asemenea icircn Capitolul V dedicat studiul
expresiei relative a receptorilor PPARα studiul valorilor fibrinogenului a arătat creşterea
acestui reactant de faza acută icircn lotul cu SM comparativ cu lotul martor (P lt0 0001) Icircn
studiul nostru am calculat o corelaţie invers proporţionala (r = - -036 fig 555B) icircntre
nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile şi concentraţia serică a
fibrinogenului Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P = 008) am reţinut
această asociere deoarece am demonstrat că nivelul de expresie relativă al receptorilor
PPARα icircn eozinofile este mai scăzut icircn sindromul metabolic iar sindromul metabolic este
caracterizat printr-un status inflamator cronic status caracterizat şi de creşterea concentraţiei
serice a fibrinogenului De asemenea notam ca această corelaţie negativă se află icircn
concordanţă cu studiile care arata că tratamentul cu agonişti PPARα (fibraţi) determina
scăderea nivelului seric al fibrinogenului contribuind la diminuarea inflamaţiei cronice din
sindromul metabolic şi icircn consecinţă amelioracircnd insulinorezistenţa
LIMITE ȘI DIFICULTĂȚI IcircN CERCETARE
Icircn cadrul Tezei de Doctorat am desfăşurat o cercetare care şi-a propus studierea
expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Recrutarea anamneza şi examinarea
clinică a subiecţilor au fost realizate icircn cadrul Cabinetului de Medicină de Familie CMI Popa
Elena din Iaşi iar determinările hematologice şi biochimice s-au efectuat icircn cadrul
Laboratorului Ambulatorului de Specialitate al Spitalului Universitar ldquoSfacircntul Spiridon din
Iaşi Icircn studiul epidemiologic şi al markerilor inflamatori al sindromului metabolic desfăşurat
au fost incluşi un număr de 1530 de participanţi pe baza liberului consimţămacircnt examinaţi icircn
perioada 01012013 - 31122013 Icircn continuare icircn perioada 1012014 - 28022014 pe baza
criteriilor de includere şi excludere icircn cele două loturi de studiu am investigat un număr de 57
de subiecţi prezentaţi la consultaţie icircn această perioadă şi care au icircndeplinit criteriile de
includere icircn cele două loturi (Lot SM şi Lot Control) constituite pentru evaluarea nivelului de
expresie a receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Explorarea nivelului de expresie
relativă a receptorilor PPARα s-a desfăşurat icircn cadrul Laboratorului de Biologie Moleculară
de pe platforma Institutului Regional de Oncologie Datorită resurselor proprii financiare
limitate trebuie să subliniez că aceasta cercetare nu ar fi fost posibilă fără contribuţia unor
cercetători din domeniul medical care m-au sprijinit necondiţionat atacirct icircn elaborarea
protocolului de lucru cacirct şi icircn efectuarea propriu-zisă a studiului Icircn acest sens menţionăm şi
faptul că pentru studiul receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic am utilizat aparatura
Laboratorului de Biologie Moleculară (care deserveşte icircntreaga Regiune a Moldovei) Pe
această cale mulţumesc personalului Laboratorului de Biologie Moleculară pentru ajutorul
acordat icircn desfăşurarea cercetării doctorale icircn condiţiile icircn care se observa creşterea
numărului de pacienţi care se adresează acestei platforme de cercetare Mulţumesc de
asemenea şi Doamnei Doctor Elena Butoi din cadrul Institutului de Biologie şi Patologie
Moleculară ldquoNicolae Simionescurdquo Bucureşti) pentru donaţia anticorpului secundar anti-
FITC Icircn consecinţă pentru recrutarea unui număr mai mare de participanţi ar fi fost necesară
icircn primul racircnd obţinerea unor resurse financiare suplimentare pentru achiziţia de aparatură şi
reactivi Totuşi numărul subiecţilor recrutaţi este apropiat de numărul subiecţilor raportaţi icircn
cadrul unor granturi de cercetare care aveau ca ţinta studiul expresiei receptorilor PPARα
(212 227 228 231) Rezultatele obţinute continua seria lucrărilor care arata importanta
studiului mecanismelor etiopatogenice ale sindromului metabolic patologie care se afla icircntr-o
continuă creştere La pacienţii cu SM pe lacircngă diminuarea nivelului de expresie a receptorilor
PPARα icircn eozinofile ne aşteptam şi la evidenţierea unor modificări icircn expresia PPARα şi icircn
populaţiile de Ly Mo şi PMN Acest fapt poate fi explicat de utilizarea unor celule provenite
de la pacienţi fără afectare cardiovasculară fără diabet zaharat şi necesită continuarea
studiului pe culturi celulare icircn condiţii de stimulare cu agonişti PPARα deziderat care
impune continuarea investigării expresiei PPARα printr-un grant de cercetare
ORIGINALITATEA ȘI CONTRIBUȚIILE INOVATIVE ALE TEZEI DE
DOCTORAT PERSPECTIVE DE CERCETARE
Evaluarea nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn leucocitele circulante
aduce noi perspective icircn studiul obezităţii şi sindromului metabolic Importanta studiului
expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic derivă din prevalenta crescută a
sindromului metabolic icircn populaţia cercetată la care se adaugă riscul cardiovascular foarte
icircnalt al acestor pacienţi cu implicaţii majore icircn sănătatea publică Rolul receptorilor PPARα
icircn inflamaţie şi aterogeneza este binecunoscut dar studiul nostru este primul care a arătat că
nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα este semnificativ mai scăzut in populatiile
de eozinofile la pacienţii cu SM Această concluzie coroborata cu existenţa unei stracircnse
asocieri intre expresia receptorilor PPARα la nivelul Mo limfocitelor şi PMNlor creeaza
ipoteza existenţei unui mecanism de control diferit al expresiei PPARα la nivelul
eozinofilelor Această cercetare aduce informaţii importante referitoare la mecanismele
proinflamatorii care stau la baza insulinorezistenţei şi riscului cardiometabolic şi impune
continuarea studiului acestor receptori nucleari prin citometrie icircn flux metodă care poate fi
aplicată şi la scara mai largă dacă sunt asigurate resursele materiale necesare cercetării
Cercetarea prin citometrie icircn flux poate fi completată de studiul polimorfismului genei
PPARA şi astfel se pot identifica timpuriu indivizii cu potenţial risc cardiometabolic crescut
Studiul receptorilor PPARα a stabilit conexiuni cu factori proinflamatori şi aterogenetici iar
continuarea cercetării poate aduce şi elemente noi de diagnostic precoce icircn sindromul
metabolic contribuind la icircmbunătăţirea prognosticului acestor pacienţi
CONCLUZII FINALE
1 Aplicarea scorului de SM alături de implementarea algoritmului electronic de diagnostic
contribuie la o prelucrare rapidă eficientă și standardizată a informaţiilor la nivelul
medicinei primare
2 Prevalenţa SM calculată astfel icircn cadrul studiului este crescută (2732) icircn concordanţă
cu datele raportate
3 Controlul factorilor de risc cardiometabolici incluşi icircn SM se poate realiza prin
managementul stilului de viaţă (scăderea greutăţii corporale prin combaterea
sedentarismului şi adoptarea unei diete antiaterogene şi hipocalorice) şi administrarea
terapiei medicamentoase
4 Este necesară adoptarea unei politici de sănătate publică pentru prevenirea creşterii icircn
populaţie a prevalenţei obezităţii şi a diabetului zaharat
5 Noi metode de cercetare icircn domeniul SM axate pe diagnosticarea precoce şi cuantificarea
eficientă a acestuia duce la diminuarea incidenței evenimentelor cardiovasculare majore
6 Sindromul metabolic se caracterizează printr-un status inflamator cronic
7 Valorile Non-HDL-colesterolului şi a raportului de aterogenitate sunt semnificativ mai
mari la pacienţii cu SM
8 Dintre reactanţii de faza acută am observat că valoarea medie a fibrinogenului este mai
crescută icircn lotul cu SM
9 Valorile eozinofilelor sunt crescute icircn sindromul metabolic iar explorarea relaţiei dintre
eozinofile şi obezitate constituie una din direcţiile de studiu actuale ale sindromului
metabolic
10 Evaluarea markerilor inflamatori icircn contextul sindromului metabolic este utilă icircn
evaluarea complexă a a factorilor de risc cardiometabolici
11 Prin metoda citometriei icircn flux am demonstrat prezenta Receptorilor Activaţi de
Inductorii Proliferării Peroxizomilor ndash Alpha (PPARα) icircn toate populaţiile de leucocite
studiate (Mo limfocite PMN eozinofile) atacirct icircn lotul pacienţilor cu SM cacirct şi icircn lotul
martor
12 Utilizacircnd intensitatea medie de fluorescenţă a anticorpilor anti- PPARα am arătat că
nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile este semnificativ mai redus
la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali
13 Acest studiu este primul care a demonstrat existenţa unei scăderi statistic semnificative a
nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofilele pacienţilor cu SM
confirmacircnd cercetările recente care au evidenţiat rolul eozinofilelor şi al receptorilor
PPARα icircn obezitate reglarea inflamaţiei cronice şi aterogeneza
14 Contrar aşteptărilor noastre icircn populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările
efectuate icircn cele două loturi de studiu (cu şi fără sindom metabolic) nu am evidenţiat
diferenţe statistic seminificative icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα la
subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali
15 Icircn populaţiile de Mo limfocite şi polimorfonucleare am observat corelaţii puternice
semnificativ statistic icircntre expresia PPARα icircn aceste tipuri celulare sugeracircnd existenţa
unui mecanism unic de control al inflamaţiei cronice la nivelul acestor celule probabil
diferit de cel din eozinofile
16 La subiecţii cu SM expresia relativă a PPARα icircn Eo este invers asociată cu expresia
receptorului CD36 (receptor al particulelor de ox - LDL şi propus ca un marker precoce al
aterosclerozei) dovedind rolul antiinflamator al receptorilor PPARα la nivel endotelial
17 La pacienţii cu antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială nivelul de
expresie al receptorilor PPARα icircn eozinofile şi Mo este diminuat comparativ cu subiecţii
fără antecedente familiale de hipertensiune arterială Putem spune că studiul efectuat de
noi aduce informaţii importante legate de geneză aterosclerozei şi hipertensiunii arteriale
18 Prin studiul asocierilor dintre receptorii PPARα şi componentele clinice ale sindromului
metabolic am arătat rolul acestor receptori icircn determinismul obezităţii de tip central
nivelul expresiei relative a receptorilor PPARα fiind invers proporţional cu circumferinţa
abdominală
19 Icircn acelaşi timp nivelul de expresie a PPARα icircn sindromul metabolic este asociat pozitiv
cu concentraţia serică a HDL-colesterolului şi invers asociat cu nivelul trigliceridelor
serice dovedind rolul acestor receptori icircn diminuarea procesului inflamator cronic de la
nivel vascular
20 La pacienţii cu SM scăderea expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofile este corelată cu
creşterea unor markeri ai sindromului inflamator cronic cardiometabolic (acid uric
fibrinogen) ilustracircnd importanta receptorilor icircn reglarea status-ului inflamator cronic din
sindromul metabolic
21 Utilizarea metodei flowcitometrice pentru studiul expresiei relative a receptorilor PPARα
icircn leucocite a adus informaţii importante cu privire la mecanismele moleculare de control
implicate icircn patogenia bolilor cardiometabolice icircn concordanţă cu cercetările care descriu
expresia PPAR icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale bronşice
keratinocite)
BIBLIOGRAFIE SELECTIVA
1 Kahn R Metabolic syndrome- what is the clinical usefulness Lancet 2008371(9628)1892-3
2 Reaven GM The metabolic syndrome is this diagnosis necessary Am J Clin Nutr 2006 83(6)1237-7
3 Grundy SM Pre-Diabetes Metabolic Syndrome and Cardiovascular Risk J Am Coll Cardiol 201259(7)
635-43
4 International Diabetes Federation IDF Diabetes Atlas 6th edn International Diabetes Federation Belgium
Brussels 20131-155
5 World Health Organization Global Status Report on Noncommunicable Diseases 2010 World Health
Organization Geneva Switzerland 20111-176
6 Coman AE Petrovanu R Sindromul metabolic in practica de ambulator Editura Pim Iaşi 2009 1-103
7 Grundy SM Becker D Clark LT et alThird Report of the National Cholesterol Education Program (NCEP)
Expert Panel on Detection Evaluation and Treatment of High Blood Cholesterol in Adults (Adult
Treatment Panel III) Final Report Circulation 2002106(25)3143-90
8 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J Metabolic syndrome- a new worldwide definition A Consensus Statement
from the International Diabetes Federation Diabet Med 2006 23(5)469-80
9 KG Alberti KG Eckel RH Grundy SM etal International Diabetes Federation task force on epidemiology
and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart Association World Heart
Federation International Atherosclerosis Society International Association for the study of obesity
Harmonizing the metabolic syndrome a joint interim statement of the International Diabetes Federation task
force on epidemiology and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart
Association World Heart Federation International Atherosclerosis society and International Association
for the study of obesity Circulation 2009120(16)1640-5
10 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J IDF Epidemiology Task Force The metabolic syndrome new
worldwide definition Lancet 2005 366 1059 - 62
11 Oleszczyk M Svab I Seifert B et al Primary healthcare in the developing part of Europe changes and
development in the former Eastern Bloc countries that joined the European Union following 2004 Med Sci
Monit 2009(15)78ndash84
12 Jung U J Choi M S Obesity and Its Metabolic Complications The Role of Adipokines and the
Relationship between Obesity Inflammation Insulin Resistance Dyslipidemia and Nonalcoholic Fatty
Liver Disease Int J Mol Sci 2014rsquo15(4) 6184-223
13 Vanden Heuvel JP Peters JM Peroxisome Proliferators In Ramos K (ed) Cellular and Molecular
Toxicology (Second Edition) Volume 2 New York Elsevier Science Inc 2010 145 - 67
14 Yessoufou A Wahli W Multifaceted roles of peroxisome proliferator-activated receptors (PPARs) at the
cellular and whole organism levels Swiss Med Wkl 2010140w13071 doi104414smw201013071
15 Azhar S Peroxisome proliferator-activated receptors metabolic syndrome and cardiovascular disease
Future Cardiology 20106(5)657-91
16 Andries G Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity
Diabetes and Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(Suppl)24-32
17 Zandbergen F Plutzky J PPARalpha in atherosclerosis and inflammation Biochim Biophys Acta
20071771(8)972-82
18 Straus DS Glass CK Anti-inflammatory actions of PPAR ligands new insights on cellular and molecular
mechanisms Trends Immunol 200728(12)551-8
19 Zlei M Zugun- Eloae F Carasevici E Citometrie icircn flux - Bază şi clinică Icircn Hinescu ME (ed) Citometrie icircn
flux - principii şi aplicaţii clinice Bucureşti Editura Viaţa Medicală Romacircnească 20111-128
20 Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity Diabetes and
Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(9)24-32
21 Woerly G Honda K Loyens M et al Peroxisome proliferator-activated receptors alpha and gamma down-
regulate allergic inflammation and eosinophil activation J Exp Med 2003198(3)411-21
22 Salle-Saumont D Brenuchon C Kanda A et al Peroxisome proliferator-activated receptor alpha regulates
skin inflammation and humoral response in atopic dermatitis J Clin Allergy Immunology 2008 21(4)962-8
23 Schote A Turner J Schiltz J et al Nuclear receptors in human immune cells expression and correlations
Mol Immunolog 200744(6)1436-45
24 DAmore S Vacca M Graziano G et al Nuclear receptors expression chart icircn peripheral blood
mononuclear cells identifies patients with Metabolic Syndrome Biochim Biophys Acta
20131832(12)2289-301
25 Uthurralt J Gordish-Dressman H Bradbury M T et al PPARalpha L162V underlies variation in serum
triglycerides and subcutaneous fat volume in young males BMC Med Genet 2007855
26 Hiukka A Leinonen ES Jauhiainen M et al Long-term effects of fenofibrate on VLDL and HDL
subspecies icircn participants with type 2 diabetes mellitus Diabetologia 2007 50(10)2067-75
27 Robins SJ Rubins HB Faas FH et alInsulin resistance and cardiovascular events with low HDL
cholesterol The Veterans Affairs HDL Intervention Trial (VA-HIT) Diabetes Care 2003 26(5)1513-7
28 Devaraj S Siegel D Jialal I Statin Therapy in Metabolic Syndrome and Hypertension Post-JUPITER
What is the Value of CRP Curr Atheroscler Rep 2011 13(1) 31ndash42
29 Imperatore G Riccardi G Iovino C et al Plasma Fibrinogen A New Factor of the Metabolic Syndrome A
population-based study Diabetes Care 19982 1(4)649-54
30 Krysiak R Gdula-Dymek A Bachowski R Okopien B Pleiotropic effects of atorvastatin and fenofibrate
in metabolic syndrome and different types of pre-diabete Diabetes Care 201033(10)2266-70
31 Hermans MP Impact of Fenofibrate on Type 2 Diabetes Patients with Features of the Metabolic Syndrome
Subgroup Analysis From FIELD Curr Cardiol Rev 20106(2)112-8
32 Silverstein R Inflammation atherosclerosis and arterial thrombosis Role of the scavenger receptor CD36
Cleveland Clinic Journal of Medicine 200976(Suppl 2)S27-S30
33 Hăncu N Obezitatea In Vereşiu IA (ed) Diabetul zaharat nutritia si bolile metabolice Volume 2 Editura
Echinox Cluj- Napoca 2010 1-15
Lista lucrări publicate
1 Elena Popa Maria Maidaniuc Agnes Bacusca Alamir Diaa Rodica Petrovanu Adorata Elena
Coman Disfuncţia endotelială ndash de la mecanisme moleculare la cuantifi care şi tratament icircn practica
medicală Practica Medicală 20149(3) 109-14
2 Elena Popa Agnes Bacusca Alamir Diaa Maria Maidaniuc Rodica Petrovanu Adorata Elena Coman
The function of insulin receptor (IRF) in evolution of obesity correlation with adipocytes diameters
Archives of the Balkan Medical Union 201449(3) 275-9
3 Elena Popa Florin Zugun-Eloae Mihaela Zlei Daniela Jitaru Oana Maria Pintilie Adorata Elena
Coman Maria Traian Didona Anca Ungureanu Eugen Carasevici - acceptata pentru numarul 42014
Flow cytometry analysis of PPAR-alpha receptors in metabolic syndrome) Revista Romană de
Medicină de Laborator(RRLM-D-14-00034R1- adeverinţa ataşată
Figura 51 Optimizarea concentraţiei anticorpului anti-PPARα
Icircn concordanţă cu literatura de specialitate icircn cercetarea efectuată intensitatea medie
de fluorescenţă (MFI) a fost utilizată ca măsură pentru evaluarea expresiei celulare a
receptorilor PPARα (212) Un exemplu de analiză a probelor este reprezentat icircn figura 52
Figura 52 Exemplu de analiză flowcitometrică pentru receptorul nuclear PPARα Graficul din stacircnga reprezintă distribuţia leucocitelor iar cel din dreapta ilustrează distribuţia
intensităţii de fluorescenţă pentru populaţiile de celule selectate
Intensitatea Medie a Fluorescenţei (MFI) a CD36 ca o măsură a nivelului relativ de
expresie a acestor receptori la nivelul membranei Mo a fost detectată printr-o metodă
convenţională pentru marcare de suprafaţă şi evaluare pe bază de citometrie icircn flux folosind
aceleaşi probe de sacircnge cu EDTA cu focalizare pe Mo şi utilizacircnd CD14 ca marker specific
pentru Mo (figura 53)
Figura 53Analiza
flowcitometrică
pentru marcajul
CD14 - CD36
Rezultate
Icircn cele două loturi au fost incluşi icircn studiu un număr de 57 de participanţi care au fost
investigaţi din punct clinic şi paraclinic Vacircrsta subiecţilor incluşi icircn studiu a fost cuprinsă
icircntre 18 şi 79 ani iar vacircrsta medie calculată a avut valoarea de 4805 plusmn 1587 ani Pentru sexul
masculin vacircrsta medie este de 4925plusmn1617 ani iar pentru sexul feminin 4689 plusmn1 5ani
diferenţa obţinută icircntre vacircrstele pacienţilor fiind statistic nesemnificativă (P = 085)
Analizacircnd vacircrstele subiecţilor din cele două loturi am observat că vacircrsta medie a pacienţilor
cu SM (5476 plusmn 1183 ani) a fost semnificativ mai mare (t-test P = 0003) decacirct icircn lotul
martor (4258 plusmn 169 ani) Pentru diagnosticul sindromului metabolic am calculat scorul de
SM bazacircndu-ne pe criteriile Harmonised I Conform criteriilor diagnostice din cei 57 de
subiecţi investigaţi un număr de 26 participanţi (46) au fost incluşi icircn lotul cu SM (Lot
SM) iar 31 de subiecţi(54) nu au prezentat acest sindrom constituind lotul martor (Lot
Non-SM) Din punct de vedere al repartiţiei pe sexe nu au existat diferenţe statistic
semnificative raportul bărbaţifemei fiind de 0961 Din totalul celor 28 de bărbaţi incluşi icircn
studiu 4285 (12 bărbaţi) au icircntrunit cel puţin trei criterii diagnostice pentru SM fiind
incluşi icircn lotul SM Icircn acelaşi timp 14 femei reprezentacircnd 4827 din subiecţii de sex
feminin au icircntrunit condiţiile pentru includerea icircn lotul pacienţilor cu SM Valoarea medie
determinată pentru scorul de SM a arătat prezenţa unor valori semnificativ statistic mai mari
din punct (t-test P lt 00001) icircn lotul SM (769plusmn176) comparativ cu lotul martor (174 plusmn
184) Am studiat comparativ media valorilor măsurate ale criteriilor componentelor SM
Analiza statistică a arătat valori semnificativ statistic mai mari pentru CA TG glicemie TAS
şi TAD (plt0001) icircn lotul SM comparativ cu lotul normal Concomitent calculul statistica
evidenţiat o scăderea semnificativă a HDL-colesterolului icircn lotul cu SM comparativ cu
subiecţii din lotul martor (Non-SM) Aplicacircnd testul z am comparat ponderea pacienţilor
diagnosticaţi cu HTA dislipidemie şi tulburări ale metabolismului glucidic icircn lotul SM versus
lot Non-SM şi am constatat prezenţa acestor afecţiuni icircntr-un procent mai mare semnificativ
statistic icircn lotul SM ((plt0001)
Utilizacircnd testul t Student am calculat diferenţele statistice şi icircntre alți parametri
studiaţi care sunt factori de risc cardio-vascular dar care nu sunt componente ale SM Icircn lotul
cu SM valorile acidului uric fibrinogenului Col total Non-HDL-col şi LDL-col au fost
semnificativ mai mari comparativ cu lotul martor (tabel XXVI) Analizacircnd valorile medii ale
populaţiilor de leucocite am identificat doar pentru populaţia de Eo diferenţe statistice icircntre
cele două loturi numărul Eo icircn lotul SM fiind semnificativ mai mare decacirct icircn lotul martorTot
pentru caracterizarea celor două loturi am analizat prezenţa antecedentelor
heredocolaterale (AHC) de diabet zaharat boala cardiovasculară şi dislipidemie pentru toţi
subiecţii investigaţi Astfel existenţa AHC de HTA a fost declarată de 2580 din subiecţii
incluşi icircn lotul martor respectiv de 5384 din numărul pacienţilor cu SM Antecedentele
heredocolaterale de dislipidemie au fost prezente la 3461 din pacienţii cu SM icircn timp ce icircn
lotul martor anamneza a evidenţiat aceste antecedente la 3548 din subiecţi
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα
Icircn cercetarea desfăşurată am utilizat intensitatea medie de fluorescenţă (MFI) ca
măsură a nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn leucocitele studiate Pentru
populaţiile de leucocite analiza computerizată a probelor luate icircn studiu a furnizat valori
pentru MFI a receptorilor PPARα icircn funcţie de cantitatea de anticorpi anti-PPARα marcaţi cu
fluorocrom care se leagă de aceste celule şi apoi sunt captaţi de citometru (figura 59)
A Lot Non - SM
B Lot SM
Figura 59 Analiza flowcitometrică pentru receptorii PPARα icircn leucocite A lot normal B lot SM
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Mo
Analiza probelor efectuată conform protocolului de lucru descris a arătat prezenţa
PPARα icircn Mo recoltate din sacircngele tuturor subiecţilor incluşi icircn această cercetare Pentru toţi
participanţii investigaţi analiza MFI a Ac anti - PPARα icircn populaţia de Mo (Mo) a arătat un
interval de variaţie icircntre [786 395] Valoarea medie a nivelului de expresie relativă a PPARα
calculată pentru Mo a fost de 23210 plusmn7860 Pentru ambele loturi de studiu pacienţilor cu
SM testul Testul Shapiro-Wilk a arătat distribuţia normală a valorilor obţinute pentru nivelul
de expresie al PPARα icircn Mo
Tabel XXVIII Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn Mo
Lot SM Lot Non-SM
N 26 31
Media 22819 23538
SD 5819 7717
Mediana 22400 22600
Minimum 12800 78600
Maximum 35800 37900
Percentila 25 18300 18300
Percentila 75 26200 30350
Pentru pacienţii din lotul SM valoarea medie a MFI icircn Mo a fost de 22819 plusmn 5880 iar
pentru lotul martor s-a calculat o valoare medie a MFI a Ac anti-PPARα de 23538 plusmn 7717
Distribuţia statistică a frecvenţei valorilor MFI obţinute pentru nivelul de expresie a PPARα
icircn Mo subiecţilor din cele două loturi a fost reprezentată icircn figura 511
Figura 511 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti-PPARα icircn Mo
Sub forma unei diagrame de control Shewhart am reprezentat variaţia intensităţii medii de
fluorescenţă pentru anticorpii anti-PPARα icircn MoVariaţia nivelului de expresie relativă a
receptorilor PPARα icircn Mo subiecţilor studiaţi este ilustrată icircn fig 512 513
Figura 512 Lot SM Variaţia
expresiei relative a PPARα icircn Mo
Număr pacienţi
26
Minim 128
Maxim 358
Media 22819
DS 5819
25 din 26 valori ale MFI s-au icircncadrat
icircn intervalul Media plusmn 2DS
Figura 513 Lot Non-SM Variaţia
expresiei relative a PPARα icircn Mo
Număr pacienţi 31
Minimum 786
Maximum 379
Media 23538
DS 7717
Cu excepţia unei singure
determinări valorile calculate s-au
icircncadrat icircn Media plusmn 2DS
Utilizacircnd testul parametric t-Student pentru variabilele cu distribuţie normală am
comparat valoarea medie a intensităţii de fluorescenţă a Ac anti-PPARα icircn lotul cu SM versus
subiecţi fără SM (Lot Non-SM) Analiza statistică efectuată nu a identificat diferenţe icircntre
50 100 150 200 250 300 350 400 450
0
5
10
15
20
25
30
35
MFI anti-PPAR a
Frecv
enta
relati
va (
)
Lot SM
0 50 100 150 200 250 300 350 400 450 500
0
5
10
15
20
25
30
35
MFI anti-PPAR a
Frecv
enta
relati
va (
)
Lot martor
1 6 11 16 21 26 31
0
50
100
150
200
250
300
350
400
450
MFI
anti-
PPAR
a
2282
1106
3458
518
4046
Media
LCI
LCI
1 6 11 16 21 26 31 36
-100
0
100
200
300
400
500
MFI a
nti-PP
AR
a
2354
810
3897
39
4669LCS
LCI
Media
cele două loturi icircn ceea ce priveşte expresia PPARα la nivelul Mo circulante (t- Test P=
069)
Studiul receptorilor PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de AHC şi dislipidemie
Nivelul de expresie al receptorilor PPARα α icircn Mo tinde să fie mai scăzut la subiecţii
cu AHC de HTA comparativ subiecţii care nu au declarat AHC de HTA (P= 006 fig 515)
AHC HTA
Număr 22
Mediana 19950
Percentila 25 17800
Percentila 75 22700
AHC HTA absente
Număr 35
Mediana 24800
Percentila 25 19025
Percentila 75 31700
Figura 515 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Mo funcţie de AHC de HTA
Nu s-au calculat diferenţe semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor
PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de dislipidemie atunci cacircnd aceştia au fost comparaţi cu
subiecţii fără AHC de tulburări ale metabolismului lipidic (t- Test P= 020)
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn limfocite
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn populaţia de Ly a
demonstrat prezenţa receptorilor PPARα icircn Ly tuturor subiecţilor studiaţi Pentru toţi
participanţii investigaţi analiza MFI a Ac anti - PPARα icircn populaţia de Ly a relevat un
interval de variaţie icircntre [748 314] iar valoarea medie a MFI a fost de 18058 plusmn 5600
Pentru ambele loturi aplicarea testului Shapiro-Wilk a evidenţiat distribuţia normală a
valorilor determinate pentru nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Ly Pentru
pacienţii cu SM valoarea medie a MFI determinată pentru expresia PPARα icircn populaţia de
Ly a fost de 18178 plusmn 61 16 iar pentru lotul martor a fost de 16800 plusmn 5229
Tabel XXX Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn limfocite
Lot SM Lot Non-SM
N 26 31
Media 181781 179574
SD 611694 522907
Mediana 165000 168000
Minimum 81300 74800
Maximum 314000 301000
Percentila 25 13400 - 145750
Percentila 75 21800 21700
Distribuţia frecvenţei valorilor MFI a Ac anti-PPARα icircn Ly este redată icircn figura 518
Figura 518 Distribuţia frecvenţelor relative a MFI a Ac anti-PPARα icircn Ly
94 din determinările efectuate pentru determinarea nivelului de expresie relativă al
MFI
ant
iPPA
R
a_Mo
190
200
210
220
230
240
250
260
270
280
DA NU
AHC HTA
P=006
50 89 128 167 206 244 283 322 361 400
0
5
10
15
20
25
30
35
MFI anti-PPAR a
Frecv
enta
relati
va (
)
Lot SM
0 50 100 150 200 250 300 350
0
5
10
15
20
25
30
35
40
MFI anti-PPAR a
Frec
venta
relat
iva (
)
Lot Non-SM
receptorilor PPARα icircn limfocitele subiecţilor cu SM s-au icircncadrat icircn intervalul Media plusmn 2DS
Figura 5 19 Lot SM Variaţia expresiei
relative a PPARα icircn Ly
Număr pacienţi 26
Minimum 813
Maximum 31400
Media 18178
Deviaţia Standard 6116
25 valori s-au icircncadrat icircn Media plusmn 2DS
Pentru lotul Non-SM diagrama de control (figura 520) a arătat toate valorile
determinate pentru lotul Non-SM se icircncadrează icircntre LCS şi LCI
Figura 520 Lot Non -SM Variaţia
expresiei relative a PPARα icircn Ly
Număr pacienţi 31
Minimum 748
Maximum 30100
Media 179574
Deviaţia Standard 5229
96 din valori icircncadrate icircn Media plusmn 2DS
Aplicarea testului t-Student pentru valorile medii ale intensităţii de fluorescenţă ale
PPARα icircn Ly nu a arătat existenţa unei diferenţe statistic semnificative icircntre lotul cu SM şi
lotul martor(t- Test P= 088)
Analiza receptorilor PPARα icircn Ly subiecţilor cu AHC de HTA şi dislipidemie
Studiind populaţiile de Ly la subiecţii care au prezentat AHC de hipertensiune
arterială analiza flowcitometrică a relevat existenţa unor valori mai mici pentru MFI la aceşti
subiecţi comparativ cu cei fără AHC de HTA (fig 522) deşi scăderea observată nu a
icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică (t- Test P = 009)
AHC HTA
Număr 22
Mediana 16000
Percentila 25 12700
Percentila 75 17100
AHC HTA absenţe
Număr 35
Mediana 18700
Percentila 25 14900
Percentila 75 23175
Figura 522 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Ly funcţie de AHC de HTA
Nu am calculat diferenţe statistic semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor
PPARα icircn populaţiile de Ly ale subiecţilor la care am identificat AHC de dislipidemie
comparativ cu cei care nu au declarat antecedente familiale de dislipidemie (t- Test P= 051)
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn neutrofile (PMN)
Analiza flowcitometrică a evidenţiat prezenţa PPARα icircn PMN recoltate din sacircngele
venos al tuturor participanţilor la studiu Pentru toţi subiecţii investigaţi analiza MFI a Ac -
PPARα icircn populaţia de PMN a relevat un interval de variaţie de [163419] iar valoarea medie
a MFI pentru Ac anti-PPARα a fost de 26392 plusmn 7064 Testul Shapiro-Wilk a arătat o
distribuţie normală a valorilor intensităţii medii de fluorescenţă a anticorpilor anti-PPARα atacirct
icircn lotul pacienţilor cu SM cacirct şi icircn lotul martor
1 6 11 16 21 26 31
-50
0
50
100
150
200
250
300
350
400
MFI
anti-
PPAR
a
1818
595
3041
-17
3653
Media+2DS
Media- 2DS
1 6 11 16 21 26 31 36
0
50
100
150
200
250
300
350
MFI
ant
i-PPA
R
a
1796
750
2841
227
3364
Media+2DS
Media
Media- 2DS
MFI
anti-
PPAR
a Ly
130
140
150
160
170
180
190
200
210
DA NU
AHC HTA
P=009
Tabel XXXII Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn PMN
Lot SM Lot Non-SM
N 26 31
Media 26273 26480
SD 6915 7088
Mediana 25900 25500
Minimum 17200 16300
Maximum 39500 41900
Percentila 25 19800 19600
Percentila 75 30500 31500
Icircn cele două loturi distribuţia frecvenţei valorilor nivelului relativ de expresie a
receptorilor PPARα icircn PMN a fost reprezentată sub formă de histograme (fig 525)
Figura 525 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti-PPARα icircn PMN
Pentru cei 26 de pacienţi din lotul cu SM a valoarea medie a nivelului de expresie
relativă a receptorilor PPARα icircn PMN a fost de 26273 plusmn 6915 Studiind diagrama Shewhart
din figura 526 se observă că toate valorile obţinute pentru nivelul de expresie relativă
PPARα icircn PMN investigate se icircncadrează icircntre limitele definite de valorile medii plusmn 2DS
Figura 526 Lot SM
Variaţia expresiei relative a PPARα icircn
PMN
Număr pacienţi 26
Minimum 17200
Maximum 39500
Media 26273
Deviaţia Standard 6915
Valorile MFI icircncadrate icircn Media plusmn 2DS
Pentru lotul martor valoarea medie calculată a MFI a anticorpilor anti-PPARα a fost de
26480 plusmn 7088 peste 95 din valorile MFI fiind cuprinse icircn Media plusmn 2DS (figura 527)
Figura 527 Lot Non-SM Variaţia expresiei
relative a PPARα icircn PMN
Număr pacienţi 31
Minimum 16300
Maximum 41900
Media 26480
Deviaţia Standard 7088
30 valoriicircn Media plusmn 2DS
Pentru PMN analiza statistica nu a arătat existenţa unei diferenţe statistic semnificative icircntre
nivelul de expresie relativă a PPARα la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii din lotul
Non-SM (t- Test P= 090) Studiind populaţiile de PMN la subiecţii care au prezentat AHC
de HTA nu am calculat o diferenţă statistic semnificativă icircntre expresia receptorilor PPARα
la subiecţii cu istoric familial de hipertensiune arterială comparativ cu cei pentru care nu s-au
notat AHC de HTA (t- Test P= 013)De asemenea am identificat diferenţe icircntre nivelul de
expresie al PPARα icircn PMN subiecţilor care prezentau AHC de dislipidemie comparativ cu
cei fără AHC de dislipidemie (t- Test P= 017)
50 100 150 200 250 300 350 400 450 500
0
5
10
15
20
25
30
35
MFI anti-PPAR a
Frecve
nta rel
ativa (
)
Lot SM
50 100 150 200 250 300 350 400 450 500
0
5
10
15
20
25
30
MFI anti-PPAR a
Frecv
enta
relati
va (
)
Lot Non-SM
1 6 11 16 21 26 31
0
50
100
150
200
250
300
350
400
450
500
MFI
anti-
PPA
R
a
2627
1244
4010
553
4702
Media + 2DS
Media - 2 DS
Media
1 6 11 16 21 26 31 36
0
50
100
150
200
250
300
350
400
450
500
MFI
anti-
PPAR
a
2648
1230
4066
522
4774
Media+ 2DS
Media - 2DS
Media
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile Tabel XXXIV Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn Eo
Lot SM Lot Non-SM
N 26 31
Mediaplusmn SD 141057 plusmn 47604 172209 plusmn 37565
Mediana 142450 171300
Minimum 35000 68500
Maximum 233700 250600
Percentila 25 119300 153225
Percentila 75 169700 199550
Am studiat nivelul relativ de expresie a receptorilor PPARα icircn Eo iar rezultatele au
fost figurate sub forma de histograme (figura 532)
Figura 532 Distribuţia frecventelor relative ale valorilor MFI anti- PPARα icircn Eo
Din diagrama Shewhart (figura 533) se observă că toate valorile determinate pentru
nivelul de expresie relativă a PPARα icircn Eo pentru lotul SM s-au icircncadrat icircn [Media plusmn 3 DS]
peste 90 din determinări fiind cuprinse icircn [Media plusmn 2 DS] iar icircn [Media plusmn 1 DS] sunt
incluse peste 65 din valorile MFI
Figura 533 Lot SM
Variaţia expresiei relative a PPARα icircn Eo
Număr pacienţi 26
Minimum 35000
Maximum 233700
Media 141057
Deviaţia Standard 47604
24 valori icircncadrat eicircn [Media plusmn 2DS]
Pentru subiecţii incluşi icircn lotul martor analiza diagramei (figura 534) a arătat că
toate cele 31 de valori ale MFI pentru PPARα icircn Eo se icircncadrează icircn [Media plusmn 3DS] iar 30
dintre acestea se icircncadrează icircn [ Media plusmn 2 DS]
Figura 534 Lot Non -SM
Variaţia expresiei relative a PPARα icircn Eo
Număr pacienţi 31
Minimum 685
Maximum 2506
Media 172209
Deviaţia Standard 375 65
30 valori icircncadrate icircn [Media plusmn 2DS]
Comparacircnd subiecţii cu SM cu cei din lotul martor am observat o scădere
semnificativă statistic a MFI a Ac anti - PPARα icircn Eo pentru pacienţiir cu SM ( figura 535)
PPARα Eo Lot Non-SM
Număr 31
Mediana 171300
Percentila 25 152325
Percentila 75 199550
PPARα Eo Lot SM
Număr 26
Mediana 142450
Percentila 25 119300
Percentila 75 169700
Figura 5 35 Comparaţie icircntre nivelul de expresie a PPARα icircn Eo
0 500 1000 1500 2000 2500 3000
0
10
20
30
40
50
MFI anti-PPAR a
Frecvent
a relativa
()
Lot SM
400 800 1200 1600 2000 2400 2800
0
5
10
15
20
25
30
35
40
45
MFI anti-PPAR a
Frecenta
relativa
()
Lot Non-SM
1 6 11 16 21 26 31
-500
0
500
1000
1500
2000
2500
3000
MFI a
nti-PP
AR
a
14106
4765
23447
94
28117
Media + 2DS
Media- 2DS
LCI
LCS
1 6 11 16 21 26 31 36
500
1000
1500
2000
2500
3000
MFI an
ti-PPA
R a
17221
9708
24734
5951
28490
LCI
Media-2DS
Media
Media +2 DS
LCS
1200
1300
1400
1500
1600
1700
1800
1900
Lot SM Lot Non-SM
P=00072
Cu ajutorul curbei ROC am evaluat posibilitatea utilizării MFI a Ac anti - PPARα icircn
Eo ca marker pentru diagnosticul SM Valoarea MFI a Ac anti - PPARα icircn Eo care prezice cu
cea mai mare acurateţe prezenţa SM a fost de 1533 (punctul de ldquocut-offrdquo) pentru care am
calculat o sensibilitate de 5652 şi o specificitate de 7778 Calculul ariei AUC a furnizat
valoarea de 0663 şi deci determinarea parametrului MFI anti- PPARα icircn Eo are valoarea
unui test cu acurateţe redusatilde icircn diagnosticul SM Studiind expresia PPARα icircn Eo la subiecţii
care au prezentat AHC de HTA am observat o scădere semnificativă statistic (P = 00023) a
expresiei PPARα la subiecţii cu istoric familial de HTA comparativ cu subiecţii fatilderatilde AHC de
HTA (figura 537)
AHC HTA
Număr 22
Mediana 148800
Percentila 25 116425
Percentila 75 170750
AHC HTA absente
Număr 35
Mediana 170850
Percentila 25 143700
Percentila 75 195000
Figura 537 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Eo funcţie de AHC de HTA
Studiind subiecţii cu AHC declarate de dislipidemie nu am identificat diferenţe icircntre
nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Eo subiecţilor cu AHC de dislipidemie
comparativ cu cei care nu au declarat prezenţa AHC de dislipidemie (t - Test P = 067)
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor CD36
Am studiat expresia receptorilor CD36 icircn Mo subiecţilor incluşi icircn studiu
Lot Non - SM
BLot SM
Figura 539 Analiza flowcitometrica pentru receptorii CD36 icircn Mo
Pentru toţi participanţii la studiu valorile MFI au variat icircn intervalul [817 6933] iar
valoarea medie a MFI a Ac anti-CD36 a fost de 397133 plusmn 120902 Tabel XXXVII Statistică descriptivă pentru a CD36 icircn Mo
Lot SM Lot Non-SM
Media 429034 370377
Deviatia Standard 109051 125514
Mediana 411000 362800
Minimum 266400 81700
Maximum 693300 616800
Percentila 25 346200 273750
Percentila 75 469000 453300
Distribuţia frecvenţelor relative a MFI au fost prezentate sub formă histogramelor
Figura 541 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti - CD36 icircn Mo
MFI
ant
i-PPA
R a Eo
1000
1100
1200
1300
1400
1500
1600
1700
1800
1900
DA NU
AHC HTA
P=00023
1000 2000 3000 4000 5000 6000 7000 8000
0
5
10
15
20
25
MFI anti-CD36
Frecve
nta rela
tiva (
)
Lot SM
0 1778 3556 5333 7111
0
5
10
15
20
25
30
35
MFI anti-CD36
Frecve
nta rel
ativa (
)
Lot Non - SM
Referitor la lotul SM 92 din valorile MFI a Ac anti- CD36 s-au icircncadrat icircn
intervalul Media plusmn 2 DS (figura 542) iar pentru lotul martor peste 90 dintre acestea icircn
Media plusmn 2 DS (figura 543)
Figura 542 Lot SM
Variaţia MFI anti-CD36 icircn Mo
Număr pacienţi 26
Minimum 2664
Maximum 6933
Media 429034
Deviaţia Standard 109051
Figura 543 Lot Non -SM
Variaţia MFI anti- CD36 icircn Mo
Număr 31
Minimum 81700
Maximum 616800
Media 370377
Deviaţia Standard 125514
Comparacircnd subiecţii cu SM cu cei din lotul normal am constatat o tendinţă de creştere
a expresiei CD36 icircn lotul cu SM((t - Test P= 0067)
MFI anti - CD36 Lot Non-SM
Număr 31
Mediana 3628
Percentila 25 2737
Percentila 75 4533
MFI anti - CD36 Lot SM
Număr 26
Mediana 4110
Percentila 25 3462
Percentila 75 4690
Figura 544 Comparaţie icircntre cel două loturi privind MFI anti - CD36 icircn Mo
Referindu-ne la subiecţii cu AHC de HTA am observat o tendinţă de creştere a
valorilor MFI anti-CD36 comparativ cu cei care nu au avut AHC de HTA (t - Test P = 0 08)
AHC HTA
Număr 22
Mediana 442800
Percentila 25 355275
Percentila 75 519475
AHC HTA absenţe
Număr 35
Mediana 377400
Percentila 25 316900
Percentila 75 443400
Figura 545 Comparaţie icircntre expresia CD36 icircn Mo funcţie de AHC de HTA
Nu s-au calculat diferenţe semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor
PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de dislipidemie atunci cacircnd aceştia au fost comparaţi cu
subiecţii fără AHC de dislipidemie (t - Test P=031)
Corelaţii icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα si CD36
Studiind valorile intensităţii medii de fluorescenţă a Ac anti-PPARα icircn Mo Ly şi
PMN am observat că nivelul de expresie celularatilde a PPARα icircn Mo Ly şi PMN sunt corelate
puternic pozitiv atacirct icircn lotul SM cacirct şi icircn lotul martor(fig547 548)
1 6 11 16 21 26 31
0
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
Pacienti
MFI a
nti-CD
36
42903
21093
64714
10188
75619
LCI
Media
LCS1 6 11 16 21 26 31 36
-1000
0
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
MFI a
nti- C
D36
37038
11935
62141
-616
74692Media + 2 DS
Media
Media - 2 DS
3200
3400
3600
3800
4000
4200
4400
4600
4800
Lot SM Lot Non-SM
P = 00676
MFI
anti-
CD36
3400
3600
3800
4000
4200
4400
4600
4800
5000
DA NU
AHC HTA
P = 008
Figura 547 Studiul relatiilor dintre
receptorii PPARα icircn SM A Mo vs PMN B Mo vs Ly
C PMN vs Ly Graficul ilustrează coeficienţii r P dreapta de
regresie (linia centrala) intervalul de icircncredere
95 şi intervalul de predicţie 95
Figura 548 Corelaţii icircntre receptorii PPARα icircn lotul
martor
A Mo vs PMN
B Mo vs Ly
C PMN vs Ly
Tot pentru lotul SM cacircnd am evaluat relaţia dintre nivelul de expresie relativă a
receptorilor PPARα icircn Eo şi nivelul de expresie relativa a receptorilor CD 36 am obţinut o
corelaţie negativă (r = - 05 P = 001) (fig 549 A)
50 100 150 200 250 300 350 50
100
150
200
250
300
350
400
450
500
PPARα Ly
PPARα PMN
y = 56641 + 1159 x r = 086 P lt 0001
C
50 100 150 200 250 300 350 400 0
50
100
150
200
250
300
350
PPARα Mo
PPARα Ly
y = 36665 + 0607 x r = 090 P lt 0001
B
150 200 250 300 350 400 450 0
50 100 150 200 250 300 350 400 450 500
PPARα PMN
PPARα Mo
y = 2505 + 0879 x r = 081 P lt 0001
A
50 100 150 200 250 300 350
50 100 150 200 250 300 350 400 450 500
PPARα Ly
PPARα PMN
y = 95668 + 0919 x r = 081 P lt 0001
C
100 150 200 250 300 350 400
0
50
100
150
200
250
300
350
400
PPARα Mo
PPARα Ly
y = -7503 + 0829 x r = 079 P lt 0001
B
100 150 200 250 300 350 400
50
100
150
200
250
300
350
400
450
500
PPARα Mo
PPARα PMN
y = 61384 + 0882 r = 074 P lt 0001
A
Figura 549 Corelaţii icircntre expresia PPARα icircn Eo şi alte tipuri de receptori investigaţi A PPARα Eo şi CD 36 (Lot SM) B PPARα Eo şi PPARα Mo( Lot Non-SM)
Icircn lotul martor am identificat o asociere moderată pozitivă (r = 038 P = 0033) icircntre
nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Eo şi Mo (figura 549B) corelaţie absentă icircn
lotul pacienţilor cu SM
Corelaţii dintre receptorii studiaţi şi componentele sindromului metabolic
Icircn lotul de control analiza statistică a relevat faptul că icircntre circumferinţa
abdominală (CA ) şi nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Mo Ly şi PMN există o
corelaţie inversă adică scăderea expresiei PPARα la nivelul acestor populatii celulare ar fi
icircnsoţită de creşterea CA (figura 550
Figura 550Corelaţii dintre receptorii
PPARα si CA A Mo B Ly C PMN
La pacienţii cu SM am notat o corelatie moderată negativă statistic semnificativă
icircntre TG şi valorile MFI a Ac anti- PPARα icircn Mo şi Ly( fig 551)
150 200 250 300 350 400 450 50
60
70
80
90
100
110
PPARα PMN
CA r = - 040 P = 0024
C
50 100 150 200 250 300 350 50
60
70
80
90
100
110
PPARα Ly
CA r = - 046 P = 0009
B
50 100 150 200 250 300 350 400 50
60
70
80
90
100
110
PPARα Mo
CA r = - 042 P = 0017
A
50 100 150 200 250 300 350 400 500
1000
1500
2000
2500
3000
PPARα Mo
PPARα Eo
r = 038 P = 0033
B
0 500 1000 1500 2000 2500 1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
PPARα Eo
CD36
r = 050 P = 0010
A
Figura 551 Lot SM Corelaţie icircntre expresia PPARα şi TG (A Mo B Ly)
Analizand corelatia dintre receptorii CD36 si valorile TA la pacientii cu SM am observat
o asociere pozitivă asteptată intre TAD si nivelul de expresie al receptorilor CD36 (fig 552)
Figura 552 Lot SM Corelaţii icircntre expresia
receptorilor CD36 şi valorile tensiunii arteriale
diastolice
Studiind corelaţiile dintre receptorii PPARα şi HDL-col la subiecţii din lotul martor am
notat o asociere pozitivă icircntre expresia PPARα icircn Mo şi Ly cu HDL-col (fig 553)
Figura 553 Lot martor Corelaţii icircntre HDL-col şi expresia PPARα icircn Mo(A) Ly(B)
Icircn lotul normal am evidenţiat corelaţii pozitive moderate dar semnificative statistic icircntre
CA şi valorile TAS (r = 062 P lt 0001) respectiv TAD (r = 050 P=0004) precum şi icircntre
CA şi glicemia subiecţilor normali (r = 052 P = 0003) Aceste date icircmpreună cu relaţia
invers proporţională identificată icircntre HDL-col şi CA (r = 050 P = 001) susţin validitatea
acestui studiu Icircn lotul subiecţilor cu SM am observat o corelaţie moderat pozitivă icircntre
expresia PPARα icircn populaţiiile de Mo şi Eo şi concentraţia a HDL-col (fig 554)
B
100 150 200 250 300 350 20
30
40
50
60
70
80
90
100
PPARα Ly
HDL-col-(mgdl)
r = 036 P = 0046
A
150 200 250 300 350 400 20
30
40
50
60
70
80
90
100
PPARα Mo
HDL-col-(mgd)l
r = 035 P = 005
70 75 80 85 90 95 100 1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
TAD (mmHg)
CD36
r = 048 P = 0013
B
50 100 150 200 250 300 350 -100
0
100
200
300
400
500
PPARα Ly
TG(mgdl)
r = - 042 P = 003
A
50 100 150 200 250 300 350 400 -100
0
100
200
300
400
500
PPARα Mo
TG ( mgdl) r =- 0 43 P = 0027
Figura 554 Corelaţii icircn SM icircntre HDL-col şi expresia PPARα icircn Mo (A) şi Eo(B)
Corelaţii icircntre nivelul de expresie relativă a PPARα şi markeri ai disfuncţiei
endoteliale şi inflamaţiei cronice
Deşi nu a icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică am reţinut corelaţia invers
proporţională (r = - 0331 P = 006) dintre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα
icircn PMN şi concentraţia serică a Non-HDL-colesterolului
Studiind relaţiile dintre parametri icircn lotul de pacienţi cu SM am observat o corelaţie
moderată invers proporţională icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Eo şi
acidul uric seric (figura 555 A) corelaţie absentă la subiecţii fără SM
Figura 555 Lot SM corelaţia dintre expresia PPARα icircn Eo şi acidul uric (A) respectiv
PPARα şi fibrinogen (B)
Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P=008) am notat pentru
pacienţii cu SM corelaţia invers proporţională dintre expresia PPARα icircn Eo şi concentraţia
serică a fibrinogenului ( figura 555B)
V5 Discuţii
Icircn cadrul lucrării de doctorat am studiat nivelul de expresie relativă a PPARα icircn
leucocitele pacienţilor cu SM comparativ cu cea a subiecţilor normali Expresia PPARα a fost
studiată icircn paralel cu cea a CD36 glicoproteină exprimată pe suprafaţa a numeroase celule
din organismul uman inclusiv pe cea a Mo şi macrofagelor Prin funcţia sa de receptor pentru
particulele oxidate de LDL CD36 cunoscut ca bdquoscavenger receptorrdquo de clasa B sau
bdquotrombospodin receptorrdquo contribuie la dezvoltarea inflamaţiei de la nivel endotelial şi
formarea plăcii de ateroscleroză Referitor la studiul PPARα icircn Eo icircn sindromul metabolic
menţionăm că studiul nostru este primul care arată că nivelul de expresie a proteinei PPARα
icircn Eo măsurat prin citometrie icircn flux este semnificativ mai redus la pacienţii care sunt
diagnosticaţi cu acest sindrom De asemenea icircn lotul cu SM cercetat icircn cadrul studiului
receptorilor PPARα numărul Eo circulante a fost semnificativ mai crescut la pacienţii cu SM
B
0 500 1000 1500 2000 2500 200
250
300
350
400
450
PPARα Eo o
Fibrinogen mgdl
r =- 036 P = 008
0 500 1000 1500 2000 2500 1 2 3 4 5 6 7 8 9
10 11
PPARα Eo_
Acid uric(mgdl) r = 048 P = 0014 A
0 500 1000 1500 2000 2500 10
20
30
40
50
60
70
80
PPARα Eo
HDL(mgdl)
r = 044 P = 0024
B
100 150 200 250 300 350 400 10
20
30
40
50
60
70
80
PPARα Mo
HDL( mgdl)
r = 046 P = 0019
A
(P = 003) Aceste constatări conduc la ipoteza că Eo joacă un rol special icircn mecanismele
patogenice declanşate icircn sindromul metabolic şi că receptorii PPARα sunt importanţi icircn
implicarea Eo icircn obezitate şi insulinorezistenţă Creşterea numărului de Eo circulante este
urmată de eliberarea mediatorilor proinflamatori iar reducerea expresiei PPARα icircn Eo
determină perturbarea mecanismelor de control al inflamaţiei cu exacerbarea cascadei
proinflamatorii Consecutiv se agravează disfuncţia endotelială şi se accelerează progresia
leziunilor de ateroscleroză Extrapolacircnd aceste ipoteze putem spune că asocierea raportată
dintre boala ischemică coronariană şi Eo poate fi şi consecinţa exacerbării cascadei
proinflamatorii de la nivel vascular produsă datorită scăderii expresiei PPARα icircn Eo iar
creşterea numărului de Eo circulante poate reprezenta o adaptare a organismului uman care
icircncearcă să suplinească deficitul de receptori PPARα Analizacircnd curba ROC pentru
intensităţile medii de fluorescenţă determinate pentru anticorpii anti- PPARα icircn Eo am
obţinut pentru acest biomarker o sensibilitate a testului de 565 şi o specificitate de 778
pentru un punct de cut-off de 1533 ( figura 536 ) Deşi aria AUC (Aria under the curve) egală
cu 0663 icircncadrează acest test ca avacircnd o acurateţe redusă observăm că că această valoare
este apropiată de determinările AUC pentru alţi factori (fibrinogen raport de aterogenitate
acid uric non- HDL-colesterol) cunoscuţi ca fiind implicaţi icircn aterogeneză şi inflamaţia
cronică (figura 431) Aceste remarci alături de faptul că icircn studiul receptorilor PPARα icircn
leucocite am inclus subiecţi la primul diagnostic de SM creează premisa integrării
determinării expresiei relative a receptorilor PPARα icircn diagnosticul complex al sindromului
metabolic Putem spune că icircn final studiul expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofilele
circulante se dovedește a fi util icircn diagnosticul precoce la nivel molecular al SM permiţacircnd
identificarea timpurie a unor indivizi cu risc cardiometabolic crescut Astfel intervenţia
precoce asupra subiecţilor cu deficit de PPARα icircn Eo contribuie la managementul eficient al
afecţiunilor degenerative icircn care inflamaţia cronică icircndeplineşte un rol primordial Referitor
la populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările efectuate prin citometrie de flux nu au
arătat existenţa unor diferenţe statistice icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα
la subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali Rezultatele noastre pot fi
consecinţa caracteristicilor loturilor studiate (icircn studiul nostru au fost incluşi subiecţi recrutaţi
la primul diagnostic de SM şi icircn absenţa stimulării receptorilor PPARα cu droguri agoniste
PPARα) dar icircn acelaşi timp pot apare diferenţe datorită metodei utilizate (231 232 233)
Făcacircnd o paralelă cu un studiu publicat icircn 2013 icircn Europa (231) care a arătat creşterea
nivelului de expresie al PPARα icircn Ly şi Mo observăm că deşi numărul de subiecţi a fost
aproximativ egal (57 participanţi icircn studiul nostru 60 icircn studiul DAmore) subiecţii icircn studiul
amintit au fost recrutaţi dintr-o clinică cu profil medical la primul diagnostic de SM icircn timp
ce metoda utilizată a fost PCR (Polymerase Chain Reaction) mult mai fidelă decacirct citometria
icircn flux icircn studiul receptorilor nucleari De asemenea DAmore nu investighează expresia
PPARα icircn Eo şi PMN icircn cercetare fiind incluse doar celulele CD14+ (predominant Mo) şi
CD14- (predominant Ly) Deşi nu am obţinut diferenţe statistic semnificative icircntre cele două
loturi referitoare la nivelul de expresie relativă a PPARα icircn Mo Ly şi PMN am observat
corelaţii puternice semnificative statistic icircntre expresia receptorilor PPARα icircn aceste tipuri
celulare Rezultatele obţinute sugerează existenţa unui mecanism diferit molecular de control
icircn eozinofile care reglează cantitatea de proteină PPARα icircn eozinofile versus alte tipuri de
leucocite (la pacienţii cu SM) şi acest lucru este icircn concordanţă cu cercetările care descriu
expresia PPARα mRNA icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale
bronşice keratinocite) Studiind prin citometrie de flux nivelul de expresie relativă a
receptorului CD36 la nivelul Mo am arătat prezenţa acestuia icircn Mo tuturor subiecţilor
investigaţi Analizacircnd valorile intensităţii medii de fluorescenţă a CD36 icircn loturile studiate
am observat o tendinţă de creştere la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali
confirmacircnd implicarea receptorului CD36 icircn patogeneza acestuia Referitor la expresia
receptorului CD36 rezultatele obţinute sunt icircn consens cu studii anterioare care au arătat
creşterea expresiei CD36 la pacienţii cu SM şi diabet zaharat Astfel pe lacircngă diferenţa icircn
expresia CD36 s-au raportat şi corelaţii inverse icircntre expresia proteinei CD36 şi nivelul
adiponectinei Acelaşi studiu a evidenţiat o corelaţie pozitivă intre expresia CD36 cu expresia
receptorilor PPAR gamma relaţia cu PPARα nefiind investigată
Analiza de subgrup a relaţiilor dintre componentele SM și elementele moleculare
proinflamatorii studiate a relevat prezenţa unor asocieri semnificativ statistice icircntre acestea
Se argumentează astfel că veridicitatea studiului este susţinută de interdependenţele statistice
ale componentelor SM Determinarea coeficientului de corelaţie Icircn studiul nostru nivelul de
expresie relativă a PPARα s-a corelat moderat negativ (figura 550) cu CA a subiecţilor din
lotul normal pentru populaţiile celulare de Mo (r = - 0420 P = 001) Ly (r = - 046 P =
0009) şi PMN (r = - 040 P = 0024) date care sunt icircn concordanţă cu studiile care arată
rolul PPARα icircn furnizarea energiei prin beta-oxidarea acizilor graşi Icircn acelaşi timp icircn lotul
pacienţilor cu SM nu am identificat prezenţa unei asocieri icircntre nivelul de expresie relativă a
PPARα şi valoarea măsurată a CA Asocierea dintre expresia relativă a PPARα cu obezitatea
de tip central completează datele existente referitoare la reglarea homeostaziei energetice
conturacircnd un mecanism de control deficitar al aportului caloric al SM Icircn condiţiile icircn care
rezultatele obţinute prin metoda citometriei icircn flux nu au arătat existenţa unei corelaţii intre
expresia PPARα şi CA la pacienţii cu SM considerăm că ar fi necesar studiul
polimorfismului genei PPARA care ar putea aduce informaţii importante cu privire la
implicarea acestor receptori icircn apariţia obezităţii de tip central Subliniem acest lucru deoarece
obezitatea este o boală plurifactorială icircn care pe lacircngă factorii ereditari sunt implicaţi factori
de mediu psihologici şi sociali (245) Existenţa unei componente genetice a aterosclerozei
este legată şi de prezenţa unor variante ale genei PPARA asociate cu creşterea incidenţei bolii
cardiovasculare (82) şi a SM (249) Icircn studiul nostru am constatat o scădere statistic
semnificativă a nivelului expresiei relative a receptorilor PPARα icircn Eo la subiecţii cu
antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială comparativ cu subiecţii fără istoric
familial de hipertensiune (figura 537) Deşi diferenţele calculate icircntre loturile studiate nu au
icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică la subiecţii care au declarat prezenţa
antecedentelor familiale de hipertensiune arterială remarcăm o tendinţă de scădere a
intensităţii medii de fluorescenţă pentru Ac anti-PPARα la nivelul Mo (figura 515 P = 006
) icircn timp ce expresia relativă a CD36 icircnregistrează o creştere la acesti subiecţi (figura 545 P
= 008) Icircn contextul riscului cardiovascular foarte icircnalt al pacienţilor cu SM amintim şi
existenţa corelaţiei pozitive dintre valorile tensiunii arteriale diastolice şi expresia relativă a
receptorului CD36 (r = 0483 P = 0013) Această constatare este icircn consens cu studiile care
au arătat că forma solubilă circulantă a CD36 este asociată cu factorii de risc cardiovasculari
fiind propusă ca un marker precoce al aterosclerozei Activarea PPARα este asociată cu
modularea metabolismului lipidic iar agoniştii PPARα sunt utilizaţi icircn mod curent pentru
tratamentul dislipidemiei Sub acţiunea agoniştilor PPARα se obţine o icircmbunătăţire a funcţiei
endoteliale şi a parametrilor reologici funcţiile pleiotropice ale agoniştilor PPARα fiind
dovedite icircn trialuri clinice controlate Icircn populaţiile de Mo şi Ly la pacienţii cu SM
cercetarea noastră a evidenţiat o asociere negativă icircntre nivelul de expresie relativă a
receptorilor PPARα şi concentraţia TG serice (figura 551) Astfel scăderea expresiei
receptorilor PPARα este asociată cu creşterea nivelului TG serice contribuind la profilul
lipidic aterogen din SM Icircn conformitate cu literatura de specialitate icircn studiul efectuat prin
metoda citometriei icircn flux am găsit prezenţa asocierii icircntre nivelul de expresie al PPARα şi
HDL-colesterol Corelaţia pozitivă dintre nivelul de expresie relativă PPARα şi concentraţia
HDL-colesterolului a fost observată icircn lotul martor icircn populaţiile de Mo (r = 035 P = 005)
şi Ly ( r = 036 P = 004) (figura 553) susţinacircnd faptul că stimularea receptorilor PPARα
este legată de creşterea nivelului seric al lipoproteinelor cu densitate crescută La pacienţii cu
SM corelaţia dintre expresia PPARα şi HDL-colesterol a fost evidenţiată icircn populaţiile de Mo
(r = 046 P = 0019) şi eozinofile (r = 044 P = 0024) Se desprinde concluzia că icircn
sindromul metabolic scăderea concentraţiei HDL-colesterol este legată de diminuarea
nivelului de expresie relativă a receptorilor nucleari PPARα icircntărind afirmaţiile legate de
rolul acestor receptori icircn progresia bolilor cardiovasculare Studiind reactanţii de fază acută
analiza statistică a relevat o diferenţă semnificativă din punct de vedere statistic icircntre valorile
fibrinogenului la pacienţii cu SM atunci cacircnd au fost comparaţi cu subiecţii fără SM
(Capitolul IV4 P lt0 001 figura 427A) De asemenea icircn Capitolul V dedicat studiul
expresiei relative a receptorilor PPARα studiul valorilor fibrinogenului a arătat creşterea
acestui reactant de faza acută icircn lotul cu SM comparativ cu lotul martor (P lt0 0001) Icircn
studiul nostru am calculat o corelaţie invers proporţionala (r = - -036 fig 555B) icircntre
nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile şi concentraţia serică a
fibrinogenului Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P = 008) am reţinut
această asociere deoarece am demonstrat că nivelul de expresie relativă al receptorilor
PPARα icircn eozinofile este mai scăzut icircn sindromul metabolic iar sindromul metabolic este
caracterizat printr-un status inflamator cronic status caracterizat şi de creşterea concentraţiei
serice a fibrinogenului De asemenea notam ca această corelaţie negativă se află icircn
concordanţă cu studiile care arata că tratamentul cu agonişti PPARα (fibraţi) determina
scăderea nivelului seric al fibrinogenului contribuind la diminuarea inflamaţiei cronice din
sindromul metabolic şi icircn consecinţă amelioracircnd insulinorezistenţa
LIMITE ȘI DIFICULTĂȚI IcircN CERCETARE
Icircn cadrul Tezei de Doctorat am desfăşurat o cercetare care şi-a propus studierea
expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Recrutarea anamneza şi examinarea
clinică a subiecţilor au fost realizate icircn cadrul Cabinetului de Medicină de Familie CMI Popa
Elena din Iaşi iar determinările hematologice şi biochimice s-au efectuat icircn cadrul
Laboratorului Ambulatorului de Specialitate al Spitalului Universitar ldquoSfacircntul Spiridon din
Iaşi Icircn studiul epidemiologic şi al markerilor inflamatori al sindromului metabolic desfăşurat
au fost incluşi un număr de 1530 de participanţi pe baza liberului consimţămacircnt examinaţi icircn
perioada 01012013 - 31122013 Icircn continuare icircn perioada 1012014 - 28022014 pe baza
criteriilor de includere şi excludere icircn cele două loturi de studiu am investigat un număr de 57
de subiecţi prezentaţi la consultaţie icircn această perioadă şi care au icircndeplinit criteriile de
includere icircn cele două loturi (Lot SM şi Lot Control) constituite pentru evaluarea nivelului de
expresie a receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Explorarea nivelului de expresie
relativă a receptorilor PPARα s-a desfăşurat icircn cadrul Laboratorului de Biologie Moleculară
de pe platforma Institutului Regional de Oncologie Datorită resurselor proprii financiare
limitate trebuie să subliniez că aceasta cercetare nu ar fi fost posibilă fără contribuţia unor
cercetători din domeniul medical care m-au sprijinit necondiţionat atacirct icircn elaborarea
protocolului de lucru cacirct şi icircn efectuarea propriu-zisă a studiului Icircn acest sens menţionăm şi
faptul că pentru studiul receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic am utilizat aparatura
Laboratorului de Biologie Moleculară (care deserveşte icircntreaga Regiune a Moldovei) Pe
această cale mulţumesc personalului Laboratorului de Biologie Moleculară pentru ajutorul
acordat icircn desfăşurarea cercetării doctorale icircn condiţiile icircn care se observa creşterea
numărului de pacienţi care se adresează acestei platforme de cercetare Mulţumesc de
asemenea şi Doamnei Doctor Elena Butoi din cadrul Institutului de Biologie şi Patologie
Moleculară ldquoNicolae Simionescurdquo Bucureşti) pentru donaţia anticorpului secundar anti-
FITC Icircn consecinţă pentru recrutarea unui număr mai mare de participanţi ar fi fost necesară
icircn primul racircnd obţinerea unor resurse financiare suplimentare pentru achiziţia de aparatură şi
reactivi Totuşi numărul subiecţilor recrutaţi este apropiat de numărul subiecţilor raportaţi icircn
cadrul unor granturi de cercetare care aveau ca ţinta studiul expresiei receptorilor PPARα
(212 227 228 231) Rezultatele obţinute continua seria lucrărilor care arata importanta
studiului mecanismelor etiopatogenice ale sindromului metabolic patologie care se afla icircntr-o
continuă creştere La pacienţii cu SM pe lacircngă diminuarea nivelului de expresie a receptorilor
PPARα icircn eozinofile ne aşteptam şi la evidenţierea unor modificări icircn expresia PPARα şi icircn
populaţiile de Ly Mo şi PMN Acest fapt poate fi explicat de utilizarea unor celule provenite
de la pacienţi fără afectare cardiovasculară fără diabet zaharat şi necesită continuarea
studiului pe culturi celulare icircn condiţii de stimulare cu agonişti PPARα deziderat care
impune continuarea investigării expresiei PPARα printr-un grant de cercetare
ORIGINALITATEA ȘI CONTRIBUȚIILE INOVATIVE ALE TEZEI DE
DOCTORAT PERSPECTIVE DE CERCETARE
Evaluarea nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn leucocitele circulante
aduce noi perspective icircn studiul obezităţii şi sindromului metabolic Importanta studiului
expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic derivă din prevalenta crescută a
sindromului metabolic icircn populaţia cercetată la care se adaugă riscul cardiovascular foarte
icircnalt al acestor pacienţi cu implicaţii majore icircn sănătatea publică Rolul receptorilor PPARα
icircn inflamaţie şi aterogeneza este binecunoscut dar studiul nostru este primul care a arătat că
nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα este semnificativ mai scăzut in populatiile
de eozinofile la pacienţii cu SM Această concluzie coroborata cu existenţa unei stracircnse
asocieri intre expresia receptorilor PPARα la nivelul Mo limfocitelor şi PMNlor creeaza
ipoteza existenţei unui mecanism de control diferit al expresiei PPARα la nivelul
eozinofilelor Această cercetare aduce informaţii importante referitoare la mecanismele
proinflamatorii care stau la baza insulinorezistenţei şi riscului cardiometabolic şi impune
continuarea studiului acestor receptori nucleari prin citometrie icircn flux metodă care poate fi
aplicată şi la scara mai largă dacă sunt asigurate resursele materiale necesare cercetării
Cercetarea prin citometrie icircn flux poate fi completată de studiul polimorfismului genei
PPARA şi astfel se pot identifica timpuriu indivizii cu potenţial risc cardiometabolic crescut
Studiul receptorilor PPARα a stabilit conexiuni cu factori proinflamatori şi aterogenetici iar
continuarea cercetării poate aduce şi elemente noi de diagnostic precoce icircn sindromul
metabolic contribuind la icircmbunătăţirea prognosticului acestor pacienţi
CONCLUZII FINALE
1 Aplicarea scorului de SM alături de implementarea algoritmului electronic de diagnostic
contribuie la o prelucrare rapidă eficientă și standardizată a informaţiilor la nivelul
medicinei primare
2 Prevalenţa SM calculată astfel icircn cadrul studiului este crescută (2732) icircn concordanţă
cu datele raportate
3 Controlul factorilor de risc cardiometabolici incluşi icircn SM se poate realiza prin
managementul stilului de viaţă (scăderea greutăţii corporale prin combaterea
sedentarismului şi adoptarea unei diete antiaterogene şi hipocalorice) şi administrarea
terapiei medicamentoase
4 Este necesară adoptarea unei politici de sănătate publică pentru prevenirea creşterii icircn
populaţie a prevalenţei obezităţii şi a diabetului zaharat
5 Noi metode de cercetare icircn domeniul SM axate pe diagnosticarea precoce şi cuantificarea
eficientă a acestuia duce la diminuarea incidenței evenimentelor cardiovasculare majore
6 Sindromul metabolic se caracterizează printr-un status inflamator cronic
7 Valorile Non-HDL-colesterolului şi a raportului de aterogenitate sunt semnificativ mai
mari la pacienţii cu SM
8 Dintre reactanţii de faza acută am observat că valoarea medie a fibrinogenului este mai
crescută icircn lotul cu SM
9 Valorile eozinofilelor sunt crescute icircn sindromul metabolic iar explorarea relaţiei dintre
eozinofile şi obezitate constituie una din direcţiile de studiu actuale ale sindromului
metabolic
10 Evaluarea markerilor inflamatori icircn contextul sindromului metabolic este utilă icircn
evaluarea complexă a a factorilor de risc cardiometabolici
11 Prin metoda citometriei icircn flux am demonstrat prezenta Receptorilor Activaţi de
Inductorii Proliferării Peroxizomilor ndash Alpha (PPARα) icircn toate populaţiile de leucocite
studiate (Mo limfocite PMN eozinofile) atacirct icircn lotul pacienţilor cu SM cacirct şi icircn lotul
martor
12 Utilizacircnd intensitatea medie de fluorescenţă a anticorpilor anti- PPARα am arătat că
nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile este semnificativ mai redus
la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali
13 Acest studiu este primul care a demonstrat existenţa unei scăderi statistic semnificative a
nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofilele pacienţilor cu SM
confirmacircnd cercetările recente care au evidenţiat rolul eozinofilelor şi al receptorilor
PPARα icircn obezitate reglarea inflamaţiei cronice şi aterogeneza
14 Contrar aşteptărilor noastre icircn populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările
efectuate icircn cele două loturi de studiu (cu şi fără sindom metabolic) nu am evidenţiat
diferenţe statistic seminificative icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα la
subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali
15 Icircn populaţiile de Mo limfocite şi polimorfonucleare am observat corelaţii puternice
semnificativ statistic icircntre expresia PPARα icircn aceste tipuri celulare sugeracircnd existenţa
unui mecanism unic de control al inflamaţiei cronice la nivelul acestor celule probabil
diferit de cel din eozinofile
16 La subiecţii cu SM expresia relativă a PPARα icircn Eo este invers asociată cu expresia
receptorului CD36 (receptor al particulelor de ox - LDL şi propus ca un marker precoce al
aterosclerozei) dovedind rolul antiinflamator al receptorilor PPARα la nivel endotelial
17 La pacienţii cu antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială nivelul de
expresie al receptorilor PPARα icircn eozinofile şi Mo este diminuat comparativ cu subiecţii
fără antecedente familiale de hipertensiune arterială Putem spune că studiul efectuat de
noi aduce informaţii importante legate de geneză aterosclerozei şi hipertensiunii arteriale
18 Prin studiul asocierilor dintre receptorii PPARα şi componentele clinice ale sindromului
metabolic am arătat rolul acestor receptori icircn determinismul obezităţii de tip central
nivelul expresiei relative a receptorilor PPARα fiind invers proporţional cu circumferinţa
abdominală
19 Icircn acelaşi timp nivelul de expresie a PPARα icircn sindromul metabolic este asociat pozitiv
cu concentraţia serică a HDL-colesterolului şi invers asociat cu nivelul trigliceridelor
serice dovedind rolul acestor receptori icircn diminuarea procesului inflamator cronic de la
nivel vascular
20 La pacienţii cu SM scăderea expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofile este corelată cu
creşterea unor markeri ai sindromului inflamator cronic cardiometabolic (acid uric
fibrinogen) ilustracircnd importanta receptorilor icircn reglarea status-ului inflamator cronic din
sindromul metabolic
21 Utilizarea metodei flowcitometrice pentru studiul expresiei relative a receptorilor PPARα
icircn leucocite a adus informaţii importante cu privire la mecanismele moleculare de control
implicate icircn patogenia bolilor cardiometabolice icircn concordanţă cu cercetările care descriu
expresia PPAR icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale bronşice
keratinocite)
BIBLIOGRAFIE SELECTIVA
1 Kahn R Metabolic syndrome- what is the clinical usefulness Lancet 2008371(9628)1892-3
2 Reaven GM The metabolic syndrome is this diagnosis necessary Am J Clin Nutr 2006 83(6)1237-7
3 Grundy SM Pre-Diabetes Metabolic Syndrome and Cardiovascular Risk J Am Coll Cardiol 201259(7)
635-43
4 International Diabetes Federation IDF Diabetes Atlas 6th edn International Diabetes Federation Belgium
Brussels 20131-155
5 World Health Organization Global Status Report on Noncommunicable Diseases 2010 World Health
Organization Geneva Switzerland 20111-176
6 Coman AE Petrovanu R Sindromul metabolic in practica de ambulator Editura Pim Iaşi 2009 1-103
7 Grundy SM Becker D Clark LT et alThird Report of the National Cholesterol Education Program (NCEP)
Expert Panel on Detection Evaluation and Treatment of High Blood Cholesterol in Adults (Adult
Treatment Panel III) Final Report Circulation 2002106(25)3143-90
8 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J Metabolic syndrome- a new worldwide definition A Consensus Statement
from the International Diabetes Federation Diabet Med 2006 23(5)469-80
9 KG Alberti KG Eckel RH Grundy SM etal International Diabetes Federation task force on epidemiology
and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart Association World Heart
Federation International Atherosclerosis Society International Association for the study of obesity
Harmonizing the metabolic syndrome a joint interim statement of the International Diabetes Federation task
force on epidemiology and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart
Association World Heart Federation International Atherosclerosis society and International Association
for the study of obesity Circulation 2009120(16)1640-5
10 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J IDF Epidemiology Task Force The metabolic syndrome new
worldwide definition Lancet 2005 366 1059 - 62
11 Oleszczyk M Svab I Seifert B et al Primary healthcare in the developing part of Europe changes and
development in the former Eastern Bloc countries that joined the European Union following 2004 Med Sci
Monit 2009(15)78ndash84
12 Jung U J Choi M S Obesity and Its Metabolic Complications The Role of Adipokines and the
Relationship between Obesity Inflammation Insulin Resistance Dyslipidemia and Nonalcoholic Fatty
Liver Disease Int J Mol Sci 2014rsquo15(4) 6184-223
13 Vanden Heuvel JP Peters JM Peroxisome Proliferators In Ramos K (ed) Cellular and Molecular
Toxicology (Second Edition) Volume 2 New York Elsevier Science Inc 2010 145 - 67
14 Yessoufou A Wahli W Multifaceted roles of peroxisome proliferator-activated receptors (PPARs) at the
cellular and whole organism levels Swiss Med Wkl 2010140w13071 doi104414smw201013071
15 Azhar S Peroxisome proliferator-activated receptors metabolic syndrome and cardiovascular disease
Future Cardiology 20106(5)657-91
16 Andries G Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity
Diabetes and Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(Suppl)24-32
17 Zandbergen F Plutzky J PPARalpha in atherosclerosis and inflammation Biochim Biophys Acta
20071771(8)972-82
18 Straus DS Glass CK Anti-inflammatory actions of PPAR ligands new insights on cellular and molecular
mechanisms Trends Immunol 200728(12)551-8
19 Zlei M Zugun- Eloae F Carasevici E Citometrie icircn flux - Bază şi clinică Icircn Hinescu ME (ed) Citometrie icircn
flux - principii şi aplicaţii clinice Bucureşti Editura Viaţa Medicală Romacircnească 20111-128
20 Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity Diabetes and
Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(9)24-32
21 Woerly G Honda K Loyens M et al Peroxisome proliferator-activated receptors alpha and gamma down-
regulate allergic inflammation and eosinophil activation J Exp Med 2003198(3)411-21
22 Salle-Saumont D Brenuchon C Kanda A et al Peroxisome proliferator-activated receptor alpha regulates
skin inflammation and humoral response in atopic dermatitis J Clin Allergy Immunology 2008 21(4)962-8
23 Schote A Turner J Schiltz J et al Nuclear receptors in human immune cells expression and correlations
Mol Immunolog 200744(6)1436-45
24 DAmore S Vacca M Graziano G et al Nuclear receptors expression chart icircn peripheral blood
mononuclear cells identifies patients with Metabolic Syndrome Biochim Biophys Acta
20131832(12)2289-301
25 Uthurralt J Gordish-Dressman H Bradbury M T et al PPARalpha L162V underlies variation in serum
triglycerides and subcutaneous fat volume in young males BMC Med Genet 2007855
26 Hiukka A Leinonen ES Jauhiainen M et al Long-term effects of fenofibrate on VLDL and HDL
subspecies icircn participants with type 2 diabetes mellitus Diabetologia 2007 50(10)2067-75
27 Robins SJ Rubins HB Faas FH et alInsulin resistance and cardiovascular events with low HDL
cholesterol The Veterans Affairs HDL Intervention Trial (VA-HIT) Diabetes Care 2003 26(5)1513-7
28 Devaraj S Siegel D Jialal I Statin Therapy in Metabolic Syndrome and Hypertension Post-JUPITER
What is the Value of CRP Curr Atheroscler Rep 2011 13(1) 31ndash42
29 Imperatore G Riccardi G Iovino C et al Plasma Fibrinogen A New Factor of the Metabolic Syndrome A
population-based study Diabetes Care 19982 1(4)649-54
30 Krysiak R Gdula-Dymek A Bachowski R Okopien B Pleiotropic effects of atorvastatin and fenofibrate
in metabolic syndrome and different types of pre-diabete Diabetes Care 201033(10)2266-70
31 Hermans MP Impact of Fenofibrate on Type 2 Diabetes Patients with Features of the Metabolic Syndrome
Subgroup Analysis From FIELD Curr Cardiol Rev 20106(2)112-8
32 Silverstein R Inflammation atherosclerosis and arterial thrombosis Role of the scavenger receptor CD36
Cleveland Clinic Journal of Medicine 200976(Suppl 2)S27-S30
33 Hăncu N Obezitatea In Vereşiu IA (ed) Diabetul zaharat nutritia si bolile metabolice Volume 2 Editura
Echinox Cluj- Napoca 2010 1-15
Lista lucrări publicate
1 Elena Popa Maria Maidaniuc Agnes Bacusca Alamir Diaa Rodica Petrovanu Adorata Elena
Coman Disfuncţia endotelială ndash de la mecanisme moleculare la cuantifi care şi tratament icircn practica
medicală Practica Medicală 20149(3) 109-14
2 Elena Popa Agnes Bacusca Alamir Diaa Maria Maidaniuc Rodica Petrovanu Adorata Elena Coman
The function of insulin receptor (IRF) in evolution of obesity correlation with adipocytes diameters
Archives of the Balkan Medical Union 201449(3) 275-9
3 Elena Popa Florin Zugun-Eloae Mihaela Zlei Daniela Jitaru Oana Maria Pintilie Adorata Elena
Coman Maria Traian Didona Anca Ungureanu Eugen Carasevici - acceptata pentru numarul 42014
Flow cytometry analysis of PPAR-alpha receptors in metabolic syndrome) Revista Romană de
Medicină de Laborator(RRLM-D-14-00034R1- adeverinţa ataşată
studiu 4285 (12 bărbaţi) au icircntrunit cel puţin trei criterii diagnostice pentru SM fiind
incluşi icircn lotul SM Icircn acelaşi timp 14 femei reprezentacircnd 4827 din subiecţii de sex
feminin au icircntrunit condiţiile pentru includerea icircn lotul pacienţilor cu SM Valoarea medie
determinată pentru scorul de SM a arătat prezenţa unor valori semnificativ statistic mai mari
din punct (t-test P lt 00001) icircn lotul SM (769plusmn176) comparativ cu lotul martor (174 plusmn
184) Am studiat comparativ media valorilor măsurate ale criteriilor componentelor SM
Analiza statistică a arătat valori semnificativ statistic mai mari pentru CA TG glicemie TAS
şi TAD (plt0001) icircn lotul SM comparativ cu lotul normal Concomitent calculul statistica
evidenţiat o scăderea semnificativă a HDL-colesterolului icircn lotul cu SM comparativ cu
subiecţii din lotul martor (Non-SM) Aplicacircnd testul z am comparat ponderea pacienţilor
diagnosticaţi cu HTA dislipidemie şi tulburări ale metabolismului glucidic icircn lotul SM versus
lot Non-SM şi am constatat prezenţa acestor afecţiuni icircntr-un procent mai mare semnificativ
statistic icircn lotul SM ((plt0001)
Utilizacircnd testul t Student am calculat diferenţele statistice şi icircntre alți parametri
studiaţi care sunt factori de risc cardio-vascular dar care nu sunt componente ale SM Icircn lotul
cu SM valorile acidului uric fibrinogenului Col total Non-HDL-col şi LDL-col au fost
semnificativ mai mari comparativ cu lotul martor (tabel XXVI) Analizacircnd valorile medii ale
populaţiilor de leucocite am identificat doar pentru populaţia de Eo diferenţe statistice icircntre
cele două loturi numărul Eo icircn lotul SM fiind semnificativ mai mare decacirct icircn lotul martorTot
pentru caracterizarea celor două loturi am analizat prezenţa antecedentelor
heredocolaterale (AHC) de diabet zaharat boala cardiovasculară şi dislipidemie pentru toţi
subiecţii investigaţi Astfel existenţa AHC de HTA a fost declarată de 2580 din subiecţii
incluşi icircn lotul martor respectiv de 5384 din numărul pacienţilor cu SM Antecedentele
heredocolaterale de dislipidemie au fost prezente la 3461 din pacienţii cu SM icircn timp ce icircn
lotul martor anamneza a evidenţiat aceste antecedente la 3548 din subiecţi
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα
Icircn cercetarea desfăşurată am utilizat intensitatea medie de fluorescenţă (MFI) ca
măsură a nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn leucocitele studiate Pentru
populaţiile de leucocite analiza computerizată a probelor luate icircn studiu a furnizat valori
pentru MFI a receptorilor PPARα icircn funcţie de cantitatea de anticorpi anti-PPARα marcaţi cu
fluorocrom care se leagă de aceste celule şi apoi sunt captaţi de citometru (figura 59)
A Lot Non - SM
B Lot SM
Figura 59 Analiza flowcitometrică pentru receptorii PPARα icircn leucocite A lot normal B lot SM
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Mo
Analiza probelor efectuată conform protocolului de lucru descris a arătat prezenţa
PPARα icircn Mo recoltate din sacircngele tuturor subiecţilor incluşi icircn această cercetare Pentru toţi
participanţii investigaţi analiza MFI a Ac anti - PPARα icircn populaţia de Mo (Mo) a arătat un
interval de variaţie icircntre [786 395] Valoarea medie a nivelului de expresie relativă a PPARα
calculată pentru Mo a fost de 23210 plusmn7860 Pentru ambele loturi de studiu pacienţilor cu
SM testul Testul Shapiro-Wilk a arătat distribuţia normală a valorilor obţinute pentru nivelul
de expresie al PPARα icircn Mo
Tabel XXVIII Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn Mo
Lot SM Lot Non-SM
N 26 31
Media 22819 23538
SD 5819 7717
Mediana 22400 22600
Minimum 12800 78600
Maximum 35800 37900
Percentila 25 18300 18300
Percentila 75 26200 30350
Pentru pacienţii din lotul SM valoarea medie a MFI icircn Mo a fost de 22819 plusmn 5880 iar
pentru lotul martor s-a calculat o valoare medie a MFI a Ac anti-PPARα de 23538 plusmn 7717
Distribuţia statistică a frecvenţei valorilor MFI obţinute pentru nivelul de expresie a PPARα
icircn Mo subiecţilor din cele două loturi a fost reprezentată icircn figura 511
Figura 511 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti-PPARα icircn Mo
Sub forma unei diagrame de control Shewhart am reprezentat variaţia intensităţii medii de
fluorescenţă pentru anticorpii anti-PPARα icircn MoVariaţia nivelului de expresie relativă a
receptorilor PPARα icircn Mo subiecţilor studiaţi este ilustrată icircn fig 512 513
Figura 512 Lot SM Variaţia
expresiei relative a PPARα icircn Mo
Număr pacienţi
26
Minim 128
Maxim 358
Media 22819
DS 5819
25 din 26 valori ale MFI s-au icircncadrat
icircn intervalul Media plusmn 2DS
Figura 513 Lot Non-SM Variaţia
expresiei relative a PPARα icircn Mo
Număr pacienţi 31
Minimum 786
Maximum 379
Media 23538
DS 7717
Cu excepţia unei singure
determinări valorile calculate s-au
icircncadrat icircn Media plusmn 2DS
Utilizacircnd testul parametric t-Student pentru variabilele cu distribuţie normală am
comparat valoarea medie a intensităţii de fluorescenţă a Ac anti-PPARα icircn lotul cu SM versus
subiecţi fără SM (Lot Non-SM) Analiza statistică efectuată nu a identificat diferenţe icircntre
50 100 150 200 250 300 350 400 450
0
5
10
15
20
25
30
35
MFI anti-PPAR a
Frecv
enta
relati
va (
)
Lot SM
0 50 100 150 200 250 300 350 400 450 500
0
5
10
15
20
25
30
35
MFI anti-PPAR a
Frecv
enta
relati
va (
)
Lot martor
1 6 11 16 21 26 31
0
50
100
150
200
250
300
350
400
450
MFI
anti-
PPAR
a
2282
1106
3458
518
4046
Media
LCI
LCI
1 6 11 16 21 26 31 36
-100
0
100
200
300
400
500
MFI a
nti-PP
AR
a
2354
810
3897
39
4669LCS
LCI
Media
cele două loturi icircn ceea ce priveşte expresia PPARα la nivelul Mo circulante (t- Test P=
069)
Studiul receptorilor PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de AHC şi dislipidemie
Nivelul de expresie al receptorilor PPARα α icircn Mo tinde să fie mai scăzut la subiecţii
cu AHC de HTA comparativ subiecţii care nu au declarat AHC de HTA (P= 006 fig 515)
AHC HTA
Număr 22
Mediana 19950
Percentila 25 17800
Percentila 75 22700
AHC HTA absente
Număr 35
Mediana 24800
Percentila 25 19025
Percentila 75 31700
Figura 515 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Mo funcţie de AHC de HTA
Nu s-au calculat diferenţe semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor
PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de dislipidemie atunci cacircnd aceştia au fost comparaţi cu
subiecţii fără AHC de tulburări ale metabolismului lipidic (t- Test P= 020)
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn limfocite
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn populaţia de Ly a
demonstrat prezenţa receptorilor PPARα icircn Ly tuturor subiecţilor studiaţi Pentru toţi
participanţii investigaţi analiza MFI a Ac anti - PPARα icircn populaţia de Ly a relevat un
interval de variaţie icircntre [748 314] iar valoarea medie a MFI a fost de 18058 plusmn 5600
Pentru ambele loturi aplicarea testului Shapiro-Wilk a evidenţiat distribuţia normală a
valorilor determinate pentru nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Ly Pentru
pacienţii cu SM valoarea medie a MFI determinată pentru expresia PPARα icircn populaţia de
Ly a fost de 18178 plusmn 61 16 iar pentru lotul martor a fost de 16800 plusmn 5229
Tabel XXX Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn limfocite
Lot SM Lot Non-SM
N 26 31
Media 181781 179574
SD 611694 522907
Mediana 165000 168000
Minimum 81300 74800
Maximum 314000 301000
Percentila 25 13400 - 145750
Percentila 75 21800 21700
Distribuţia frecvenţei valorilor MFI a Ac anti-PPARα icircn Ly este redată icircn figura 518
Figura 518 Distribuţia frecvenţelor relative a MFI a Ac anti-PPARα icircn Ly
94 din determinările efectuate pentru determinarea nivelului de expresie relativă al
MFI
ant
iPPA
R
a_Mo
190
200
210
220
230
240
250
260
270
280
DA NU
AHC HTA
P=006
50 89 128 167 206 244 283 322 361 400
0
5
10
15
20
25
30
35
MFI anti-PPAR a
Frecv
enta
relati
va (
)
Lot SM
0 50 100 150 200 250 300 350
0
5
10
15
20
25
30
35
40
MFI anti-PPAR a
Frec
venta
relat
iva (
)
Lot Non-SM
receptorilor PPARα icircn limfocitele subiecţilor cu SM s-au icircncadrat icircn intervalul Media plusmn 2DS
Figura 5 19 Lot SM Variaţia expresiei
relative a PPARα icircn Ly
Număr pacienţi 26
Minimum 813
Maximum 31400
Media 18178
Deviaţia Standard 6116
25 valori s-au icircncadrat icircn Media plusmn 2DS
Pentru lotul Non-SM diagrama de control (figura 520) a arătat toate valorile
determinate pentru lotul Non-SM se icircncadrează icircntre LCS şi LCI
Figura 520 Lot Non -SM Variaţia
expresiei relative a PPARα icircn Ly
Număr pacienţi 31
Minimum 748
Maximum 30100
Media 179574
Deviaţia Standard 5229
96 din valori icircncadrate icircn Media plusmn 2DS
Aplicarea testului t-Student pentru valorile medii ale intensităţii de fluorescenţă ale
PPARα icircn Ly nu a arătat existenţa unei diferenţe statistic semnificative icircntre lotul cu SM şi
lotul martor(t- Test P= 088)
Analiza receptorilor PPARα icircn Ly subiecţilor cu AHC de HTA şi dislipidemie
Studiind populaţiile de Ly la subiecţii care au prezentat AHC de hipertensiune
arterială analiza flowcitometrică a relevat existenţa unor valori mai mici pentru MFI la aceşti
subiecţi comparativ cu cei fără AHC de HTA (fig 522) deşi scăderea observată nu a
icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică (t- Test P = 009)
AHC HTA
Număr 22
Mediana 16000
Percentila 25 12700
Percentila 75 17100
AHC HTA absenţe
Număr 35
Mediana 18700
Percentila 25 14900
Percentila 75 23175
Figura 522 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Ly funcţie de AHC de HTA
Nu am calculat diferenţe statistic semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor
PPARα icircn populaţiile de Ly ale subiecţilor la care am identificat AHC de dislipidemie
comparativ cu cei care nu au declarat antecedente familiale de dislipidemie (t- Test P= 051)
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn neutrofile (PMN)
Analiza flowcitometrică a evidenţiat prezenţa PPARα icircn PMN recoltate din sacircngele
venos al tuturor participanţilor la studiu Pentru toţi subiecţii investigaţi analiza MFI a Ac -
PPARα icircn populaţia de PMN a relevat un interval de variaţie de [163419] iar valoarea medie
a MFI pentru Ac anti-PPARα a fost de 26392 plusmn 7064 Testul Shapiro-Wilk a arătat o
distribuţie normală a valorilor intensităţii medii de fluorescenţă a anticorpilor anti-PPARα atacirct
icircn lotul pacienţilor cu SM cacirct şi icircn lotul martor
1 6 11 16 21 26 31
-50
0
50
100
150
200
250
300
350
400
MFI
anti-
PPAR
a
1818
595
3041
-17
3653
Media+2DS
Media- 2DS
1 6 11 16 21 26 31 36
0
50
100
150
200
250
300
350
MFI
ant
i-PPA
R
a
1796
750
2841
227
3364
Media+2DS
Media
Media- 2DS
MFI
anti-
PPAR
a Ly
130
140
150
160
170
180
190
200
210
DA NU
AHC HTA
P=009
Tabel XXXII Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn PMN
Lot SM Lot Non-SM
N 26 31
Media 26273 26480
SD 6915 7088
Mediana 25900 25500
Minimum 17200 16300
Maximum 39500 41900
Percentila 25 19800 19600
Percentila 75 30500 31500
Icircn cele două loturi distribuţia frecvenţei valorilor nivelului relativ de expresie a
receptorilor PPARα icircn PMN a fost reprezentată sub formă de histograme (fig 525)
Figura 525 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti-PPARα icircn PMN
Pentru cei 26 de pacienţi din lotul cu SM a valoarea medie a nivelului de expresie
relativă a receptorilor PPARα icircn PMN a fost de 26273 plusmn 6915 Studiind diagrama Shewhart
din figura 526 se observă că toate valorile obţinute pentru nivelul de expresie relativă
PPARα icircn PMN investigate se icircncadrează icircntre limitele definite de valorile medii plusmn 2DS
Figura 526 Lot SM
Variaţia expresiei relative a PPARα icircn
PMN
Număr pacienţi 26
Minimum 17200
Maximum 39500
Media 26273
Deviaţia Standard 6915
Valorile MFI icircncadrate icircn Media plusmn 2DS
Pentru lotul martor valoarea medie calculată a MFI a anticorpilor anti-PPARα a fost de
26480 plusmn 7088 peste 95 din valorile MFI fiind cuprinse icircn Media plusmn 2DS (figura 527)
Figura 527 Lot Non-SM Variaţia expresiei
relative a PPARα icircn PMN
Număr pacienţi 31
Minimum 16300
Maximum 41900
Media 26480
Deviaţia Standard 7088
30 valoriicircn Media plusmn 2DS
Pentru PMN analiza statistica nu a arătat existenţa unei diferenţe statistic semnificative icircntre
nivelul de expresie relativă a PPARα la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii din lotul
Non-SM (t- Test P= 090) Studiind populaţiile de PMN la subiecţii care au prezentat AHC
de HTA nu am calculat o diferenţă statistic semnificativă icircntre expresia receptorilor PPARα
la subiecţii cu istoric familial de hipertensiune arterială comparativ cu cei pentru care nu s-au
notat AHC de HTA (t- Test P= 013)De asemenea am identificat diferenţe icircntre nivelul de
expresie al PPARα icircn PMN subiecţilor care prezentau AHC de dislipidemie comparativ cu
cei fără AHC de dislipidemie (t- Test P= 017)
50 100 150 200 250 300 350 400 450 500
0
5
10
15
20
25
30
35
MFI anti-PPAR a
Frecve
nta rel
ativa (
)
Lot SM
50 100 150 200 250 300 350 400 450 500
0
5
10
15
20
25
30
MFI anti-PPAR a
Frecv
enta
relati
va (
)
Lot Non-SM
1 6 11 16 21 26 31
0
50
100
150
200
250
300
350
400
450
500
MFI
anti-
PPA
R
a
2627
1244
4010
553
4702
Media + 2DS
Media - 2 DS
Media
1 6 11 16 21 26 31 36
0
50
100
150
200
250
300
350
400
450
500
MFI
anti-
PPAR
a
2648
1230
4066
522
4774
Media+ 2DS
Media - 2DS
Media
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile Tabel XXXIV Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn Eo
Lot SM Lot Non-SM
N 26 31
Mediaplusmn SD 141057 plusmn 47604 172209 plusmn 37565
Mediana 142450 171300
Minimum 35000 68500
Maximum 233700 250600
Percentila 25 119300 153225
Percentila 75 169700 199550
Am studiat nivelul relativ de expresie a receptorilor PPARα icircn Eo iar rezultatele au
fost figurate sub forma de histograme (figura 532)
Figura 532 Distribuţia frecventelor relative ale valorilor MFI anti- PPARα icircn Eo
Din diagrama Shewhart (figura 533) se observă că toate valorile determinate pentru
nivelul de expresie relativă a PPARα icircn Eo pentru lotul SM s-au icircncadrat icircn [Media plusmn 3 DS]
peste 90 din determinări fiind cuprinse icircn [Media plusmn 2 DS] iar icircn [Media plusmn 1 DS] sunt
incluse peste 65 din valorile MFI
Figura 533 Lot SM
Variaţia expresiei relative a PPARα icircn Eo
Număr pacienţi 26
Minimum 35000
Maximum 233700
Media 141057
Deviaţia Standard 47604
24 valori icircncadrat eicircn [Media plusmn 2DS]
Pentru subiecţii incluşi icircn lotul martor analiza diagramei (figura 534) a arătat că
toate cele 31 de valori ale MFI pentru PPARα icircn Eo se icircncadrează icircn [Media plusmn 3DS] iar 30
dintre acestea se icircncadrează icircn [ Media plusmn 2 DS]
Figura 534 Lot Non -SM
Variaţia expresiei relative a PPARα icircn Eo
Număr pacienţi 31
Minimum 685
Maximum 2506
Media 172209
Deviaţia Standard 375 65
30 valori icircncadrate icircn [Media plusmn 2DS]
Comparacircnd subiecţii cu SM cu cei din lotul martor am observat o scădere
semnificativă statistic a MFI a Ac anti - PPARα icircn Eo pentru pacienţiir cu SM ( figura 535)
PPARα Eo Lot Non-SM
Număr 31
Mediana 171300
Percentila 25 152325
Percentila 75 199550
PPARα Eo Lot SM
Număr 26
Mediana 142450
Percentila 25 119300
Percentila 75 169700
Figura 5 35 Comparaţie icircntre nivelul de expresie a PPARα icircn Eo
0 500 1000 1500 2000 2500 3000
0
10
20
30
40
50
MFI anti-PPAR a
Frecvent
a relativa
()
Lot SM
400 800 1200 1600 2000 2400 2800
0
5
10
15
20
25
30
35
40
45
MFI anti-PPAR a
Frecenta
relativa
()
Lot Non-SM
1 6 11 16 21 26 31
-500
0
500
1000
1500
2000
2500
3000
MFI a
nti-PP
AR
a
14106
4765
23447
94
28117
Media + 2DS
Media- 2DS
LCI
LCS
1 6 11 16 21 26 31 36
500
1000
1500
2000
2500
3000
MFI an
ti-PPA
R a
17221
9708
24734
5951
28490
LCI
Media-2DS
Media
Media +2 DS
LCS
1200
1300
1400
1500
1600
1700
1800
1900
Lot SM Lot Non-SM
P=00072
Cu ajutorul curbei ROC am evaluat posibilitatea utilizării MFI a Ac anti - PPARα icircn
Eo ca marker pentru diagnosticul SM Valoarea MFI a Ac anti - PPARα icircn Eo care prezice cu
cea mai mare acurateţe prezenţa SM a fost de 1533 (punctul de ldquocut-offrdquo) pentru care am
calculat o sensibilitate de 5652 şi o specificitate de 7778 Calculul ariei AUC a furnizat
valoarea de 0663 şi deci determinarea parametrului MFI anti- PPARα icircn Eo are valoarea
unui test cu acurateţe redusatilde icircn diagnosticul SM Studiind expresia PPARα icircn Eo la subiecţii
care au prezentat AHC de HTA am observat o scădere semnificativă statistic (P = 00023) a
expresiei PPARα la subiecţii cu istoric familial de HTA comparativ cu subiecţii fatilderatilde AHC de
HTA (figura 537)
AHC HTA
Număr 22
Mediana 148800
Percentila 25 116425
Percentila 75 170750
AHC HTA absente
Număr 35
Mediana 170850
Percentila 25 143700
Percentila 75 195000
Figura 537 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Eo funcţie de AHC de HTA
Studiind subiecţii cu AHC declarate de dislipidemie nu am identificat diferenţe icircntre
nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Eo subiecţilor cu AHC de dislipidemie
comparativ cu cei care nu au declarat prezenţa AHC de dislipidemie (t - Test P = 067)
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor CD36
Am studiat expresia receptorilor CD36 icircn Mo subiecţilor incluşi icircn studiu
Lot Non - SM
BLot SM
Figura 539 Analiza flowcitometrica pentru receptorii CD36 icircn Mo
Pentru toţi participanţii la studiu valorile MFI au variat icircn intervalul [817 6933] iar
valoarea medie a MFI a Ac anti-CD36 a fost de 397133 plusmn 120902 Tabel XXXVII Statistică descriptivă pentru a CD36 icircn Mo
Lot SM Lot Non-SM
Media 429034 370377
Deviatia Standard 109051 125514
Mediana 411000 362800
Minimum 266400 81700
Maximum 693300 616800
Percentila 25 346200 273750
Percentila 75 469000 453300
Distribuţia frecvenţelor relative a MFI au fost prezentate sub formă histogramelor
Figura 541 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti - CD36 icircn Mo
MFI
ant
i-PPA
R a Eo
1000
1100
1200
1300
1400
1500
1600
1700
1800
1900
DA NU
AHC HTA
P=00023
1000 2000 3000 4000 5000 6000 7000 8000
0
5
10
15
20
25
MFI anti-CD36
Frecve
nta rela
tiva (
)
Lot SM
0 1778 3556 5333 7111
0
5
10
15
20
25
30
35
MFI anti-CD36
Frecve
nta rel
ativa (
)
Lot Non - SM
Referitor la lotul SM 92 din valorile MFI a Ac anti- CD36 s-au icircncadrat icircn
intervalul Media plusmn 2 DS (figura 542) iar pentru lotul martor peste 90 dintre acestea icircn
Media plusmn 2 DS (figura 543)
Figura 542 Lot SM
Variaţia MFI anti-CD36 icircn Mo
Număr pacienţi 26
Minimum 2664
Maximum 6933
Media 429034
Deviaţia Standard 109051
Figura 543 Lot Non -SM
Variaţia MFI anti- CD36 icircn Mo
Număr 31
Minimum 81700
Maximum 616800
Media 370377
Deviaţia Standard 125514
Comparacircnd subiecţii cu SM cu cei din lotul normal am constatat o tendinţă de creştere
a expresiei CD36 icircn lotul cu SM((t - Test P= 0067)
MFI anti - CD36 Lot Non-SM
Număr 31
Mediana 3628
Percentila 25 2737
Percentila 75 4533
MFI anti - CD36 Lot SM
Număr 26
Mediana 4110
Percentila 25 3462
Percentila 75 4690
Figura 544 Comparaţie icircntre cel două loturi privind MFI anti - CD36 icircn Mo
Referindu-ne la subiecţii cu AHC de HTA am observat o tendinţă de creştere a
valorilor MFI anti-CD36 comparativ cu cei care nu au avut AHC de HTA (t - Test P = 0 08)
AHC HTA
Număr 22
Mediana 442800
Percentila 25 355275
Percentila 75 519475
AHC HTA absenţe
Număr 35
Mediana 377400
Percentila 25 316900
Percentila 75 443400
Figura 545 Comparaţie icircntre expresia CD36 icircn Mo funcţie de AHC de HTA
Nu s-au calculat diferenţe semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor
PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de dislipidemie atunci cacircnd aceştia au fost comparaţi cu
subiecţii fără AHC de dislipidemie (t - Test P=031)
Corelaţii icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα si CD36
Studiind valorile intensităţii medii de fluorescenţă a Ac anti-PPARα icircn Mo Ly şi
PMN am observat că nivelul de expresie celularatilde a PPARα icircn Mo Ly şi PMN sunt corelate
puternic pozitiv atacirct icircn lotul SM cacirct şi icircn lotul martor(fig547 548)
1 6 11 16 21 26 31
0
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
Pacienti
MFI a
nti-CD
36
42903
21093
64714
10188
75619
LCI
Media
LCS1 6 11 16 21 26 31 36
-1000
0
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
MFI a
nti- C
D36
37038
11935
62141
-616
74692Media + 2 DS
Media
Media - 2 DS
3200
3400
3600
3800
4000
4200
4400
4600
4800
Lot SM Lot Non-SM
P = 00676
MFI
anti-
CD36
3400
3600
3800
4000
4200
4400
4600
4800
5000
DA NU
AHC HTA
P = 008
Figura 547 Studiul relatiilor dintre
receptorii PPARα icircn SM A Mo vs PMN B Mo vs Ly
C PMN vs Ly Graficul ilustrează coeficienţii r P dreapta de
regresie (linia centrala) intervalul de icircncredere
95 şi intervalul de predicţie 95
Figura 548 Corelaţii icircntre receptorii PPARα icircn lotul
martor
A Mo vs PMN
B Mo vs Ly
C PMN vs Ly
Tot pentru lotul SM cacircnd am evaluat relaţia dintre nivelul de expresie relativă a
receptorilor PPARα icircn Eo şi nivelul de expresie relativa a receptorilor CD 36 am obţinut o
corelaţie negativă (r = - 05 P = 001) (fig 549 A)
50 100 150 200 250 300 350 50
100
150
200
250
300
350
400
450
500
PPARα Ly
PPARα PMN
y = 56641 + 1159 x r = 086 P lt 0001
C
50 100 150 200 250 300 350 400 0
50
100
150
200
250
300
350
PPARα Mo
PPARα Ly
y = 36665 + 0607 x r = 090 P lt 0001
B
150 200 250 300 350 400 450 0
50 100 150 200 250 300 350 400 450 500
PPARα PMN
PPARα Mo
y = 2505 + 0879 x r = 081 P lt 0001
A
50 100 150 200 250 300 350
50 100 150 200 250 300 350 400 450 500
PPARα Ly
PPARα PMN
y = 95668 + 0919 x r = 081 P lt 0001
C
100 150 200 250 300 350 400
0
50
100
150
200
250
300
350
400
PPARα Mo
PPARα Ly
y = -7503 + 0829 x r = 079 P lt 0001
B
100 150 200 250 300 350 400
50
100
150
200
250
300
350
400
450
500
PPARα Mo
PPARα PMN
y = 61384 + 0882 r = 074 P lt 0001
A
Figura 549 Corelaţii icircntre expresia PPARα icircn Eo şi alte tipuri de receptori investigaţi A PPARα Eo şi CD 36 (Lot SM) B PPARα Eo şi PPARα Mo( Lot Non-SM)
Icircn lotul martor am identificat o asociere moderată pozitivă (r = 038 P = 0033) icircntre
nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Eo şi Mo (figura 549B) corelaţie absentă icircn
lotul pacienţilor cu SM
Corelaţii dintre receptorii studiaţi şi componentele sindromului metabolic
Icircn lotul de control analiza statistică a relevat faptul că icircntre circumferinţa
abdominală (CA ) şi nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Mo Ly şi PMN există o
corelaţie inversă adică scăderea expresiei PPARα la nivelul acestor populatii celulare ar fi
icircnsoţită de creşterea CA (figura 550
Figura 550Corelaţii dintre receptorii
PPARα si CA A Mo B Ly C PMN
La pacienţii cu SM am notat o corelatie moderată negativă statistic semnificativă
icircntre TG şi valorile MFI a Ac anti- PPARα icircn Mo şi Ly( fig 551)
150 200 250 300 350 400 450 50
60
70
80
90
100
110
PPARα PMN
CA r = - 040 P = 0024
C
50 100 150 200 250 300 350 50
60
70
80
90
100
110
PPARα Ly
CA r = - 046 P = 0009
B
50 100 150 200 250 300 350 400 50
60
70
80
90
100
110
PPARα Mo
CA r = - 042 P = 0017
A
50 100 150 200 250 300 350 400 500
1000
1500
2000
2500
3000
PPARα Mo
PPARα Eo
r = 038 P = 0033
B
0 500 1000 1500 2000 2500 1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
PPARα Eo
CD36
r = 050 P = 0010
A
Figura 551 Lot SM Corelaţie icircntre expresia PPARα şi TG (A Mo B Ly)
Analizand corelatia dintre receptorii CD36 si valorile TA la pacientii cu SM am observat
o asociere pozitivă asteptată intre TAD si nivelul de expresie al receptorilor CD36 (fig 552)
Figura 552 Lot SM Corelaţii icircntre expresia
receptorilor CD36 şi valorile tensiunii arteriale
diastolice
Studiind corelaţiile dintre receptorii PPARα şi HDL-col la subiecţii din lotul martor am
notat o asociere pozitivă icircntre expresia PPARα icircn Mo şi Ly cu HDL-col (fig 553)
Figura 553 Lot martor Corelaţii icircntre HDL-col şi expresia PPARα icircn Mo(A) Ly(B)
Icircn lotul normal am evidenţiat corelaţii pozitive moderate dar semnificative statistic icircntre
CA şi valorile TAS (r = 062 P lt 0001) respectiv TAD (r = 050 P=0004) precum şi icircntre
CA şi glicemia subiecţilor normali (r = 052 P = 0003) Aceste date icircmpreună cu relaţia
invers proporţională identificată icircntre HDL-col şi CA (r = 050 P = 001) susţin validitatea
acestui studiu Icircn lotul subiecţilor cu SM am observat o corelaţie moderat pozitivă icircntre
expresia PPARα icircn populaţiiile de Mo şi Eo şi concentraţia a HDL-col (fig 554)
B
100 150 200 250 300 350 20
30
40
50
60
70
80
90
100
PPARα Ly
HDL-col-(mgdl)
r = 036 P = 0046
A
150 200 250 300 350 400 20
30
40
50
60
70
80
90
100
PPARα Mo
HDL-col-(mgd)l
r = 035 P = 005
70 75 80 85 90 95 100 1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
TAD (mmHg)
CD36
r = 048 P = 0013
B
50 100 150 200 250 300 350 -100
0
100
200
300
400
500
PPARα Ly
TG(mgdl)
r = - 042 P = 003
A
50 100 150 200 250 300 350 400 -100
0
100
200
300
400
500
PPARα Mo
TG ( mgdl) r =- 0 43 P = 0027
Figura 554 Corelaţii icircn SM icircntre HDL-col şi expresia PPARα icircn Mo (A) şi Eo(B)
Corelaţii icircntre nivelul de expresie relativă a PPARα şi markeri ai disfuncţiei
endoteliale şi inflamaţiei cronice
Deşi nu a icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică am reţinut corelaţia invers
proporţională (r = - 0331 P = 006) dintre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα
icircn PMN şi concentraţia serică a Non-HDL-colesterolului
Studiind relaţiile dintre parametri icircn lotul de pacienţi cu SM am observat o corelaţie
moderată invers proporţională icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Eo şi
acidul uric seric (figura 555 A) corelaţie absentă la subiecţii fără SM
Figura 555 Lot SM corelaţia dintre expresia PPARα icircn Eo şi acidul uric (A) respectiv
PPARα şi fibrinogen (B)
Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P=008) am notat pentru
pacienţii cu SM corelaţia invers proporţională dintre expresia PPARα icircn Eo şi concentraţia
serică a fibrinogenului ( figura 555B)
V5 Discuţii
Icircn cadrul lucrării de doctorat am studiat nivelul de expresie relativă a PPARα icircn
leucocitele pacienţilor cu SM comparativ cu cea a subiecţilor normali Expresia PPARα a fost
studiată icircn paralel cu cea a CD36 glicoproteină exprimată pe suprafaţa a numeroase celule
din organismul uman inclusiv pe cea a Mo şi macrofagelor Prin funcţia sa de receptor pentru
particulele oxidate de LDL CD36 cunoscut ca bdquoscavenger receptorrdquo de clasa B sau
bdquotrombospodin receptorrdquo contribuie la dezvoltarea inflamaţiei de la nivel endotelial şi
formarea plăcii de ateroscleroză Referitor la studiul PPARα icircn Eo icircn sindromul metabolic
menţionăm că studiul nostru este primul care arată că nivelul de expresie a proteinei PPARα
icircn Eo măsurat prin citometrie icircn flux este semnificativ mai redus la pacienţii care sunt
diagnosticaţi cu acest sindrom De asemenea icircn lotul cu SM cercetat icircn cadrul studiului
receptorilor PPARα numărul Eo circulante a fost semnificativ mai crescut la pacienţii cu SM
B
0 500 1000 1500 2000 2500 200
250
300
350
400
450
PPARα Eo o
Fibrinogen mgdl
r =- 036 P = 008
0 500 1000 1500 2000 2500 1 2 3 4 5 6 7 8 9
10 11
PPARα Eo_
Acid uric(mgdl) r = 048 P = 0014 A
0 500 1000 1500 2000 2500 10
20
30
40
50
60
70
80
PPARα Eo
HDL(mgdl)
r = 044 P = 0024
B
100 150 200 250 300 350 400 10
20
30
40
50
60
70
80
PPARα Mo
HDL( mgdl)
r = 046 P = 0019
A
(P = 003) Aceste constatări conduc la ipoteza că Eo joacă un rol special icircn mecanismele
patogenice declanşate icircn sindromul metabolic şi că receptorii PPARα sunt importanţi icircn
implicarea Eo icircn obezitate şi insulinorezistenţă Creşterea numărului de Eo circulante este
urmată de eliberarea mediatorilor proinflamatori iar reducerea expresiei PPARα icircn Eo
determină perturbarea mecanismelor de control al inflamaţiei cu exacerbarea cascadei
proinflamatorii Consecutiv se agravează disfuncţia endotelială şi se accelerează progresia
leziunilor de ateroscleroză Extrapolacircnd aceste ipoteze putem spune că asocierea raportată
dintre boala ischemică coronariană şi Eo poate fi şi consecinţa exacerbării cascadei
proinflamatorii de la nivel vascular produsă datorită scăderii expresiei PPARα icircn Eo iar
creşterea numărului de Eo circulante poate reprezenta o adaptare a organismului uman care
icircncearcă să suplinească deficitul de receptori PPARα Analizacircnd curba ROC pentru
intensităţile medii de fluorescenţă determinate pentru anticorpii anti- PPARα icircn Eo am
obţinut pentru acest biomarker o sensibilitate a testului de 565 şi o specificitate de 778
pentru un punct de cut-off de 1533 ( figura 536 ) Deşi aria AUC (Aria under the curve) egală
cu 0663 icircncadrează acest test ca avacircnd o acurateţe redusă observăm că că această valoare
este apropiată de determinările AUC pentru alţi factori (fibrinogen raport de aterogenitate
acid uric non- HDL-colesterol) cunoscuţi ca fiind implicaţi icircn aterogeneză şi inflamaţia
cronică (figura 431) Aceste remarci alături de faptul că icircn studiul receptorilor PPARα icircn
leucocite am inclus subiecţi la primul diagnostic de SM creează premisa integrării
determinării expresiei relative a receptorilor PPARα icircn diagnosticul complex al sindromului
metabolic Putem spune că icircn final studiul expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofilele
circulante se dovedește a fi util icircn diagnosticul precoce la nivel molecular al SM permiţacircnd
identificarea timpurie a unor indivizi cu risc cardiometabolic crescut Astfel intervenţia
precoce asupra subiecţilor cu deficit de PPARα icircn Eo contribuie la managementul eficient al
afecţiunilor degenerative icircn care inflamaţia cronică icircndeplineşte un rol primordial Referitor
la populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările efectuate prin citometrie de flux nu au
arătat existenţa unor diferenţe statistice icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα
la subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali Rezultatele noastre pot fi
consecinţa caracteristicilor loturilor studiate (icircn studiul nostru au fost incluşi subiecţi recrutaţi
la primul diagnostic de SM şi icircn absenţa stimulării receptorilor PPARα cu droguri agoniste
PPARα) dar icircn acelaşi timp pot apare diferenţe datorită metodei utilizate (231 232 233)
Făcacircnd o paralelă cu un studiu publicat icircn 2013 icircn Europa (231) care a arătat creşterea
nivelului de expresie al PPARα icircn Ly şi Mo observăm că deşi numărul de subiecţi a fost
aproximativ egal (57 participanţi icircn studiul nostru 60 icircn studiul DAmore) subiecţii icircn studiul
amintit au fost recrutaţi dintr-o clinică cu profil medical la primul diagnostic de SM icircn timp
ce metoda utilizată a fost PCR (Polymerase Chain Reaction) mult mai fidelă decacirct citometria
icircn flux icircn studiul receptorilor nucleari De asemenea DAmore nu investighează expresia
PPARα icircn Eo şi PMN icircn cercetare fiind incluse doar celulele CD14+ (predominant Mo) şi
CD14- (predominant Ly) Deşi nu am obţinut diferenţe statistic semnificative icircntre cele două
loturi referitoare la nivelul de expresie relativă a PPARα icircn Mo Ly şi PMN am observat
corelaţii puternice semnificative statistic icircntre expresia receptorilor PPARα icircn aceste tipuri
celulare Rezultatele obţinute sugerează existenţa unui mecanism diferit molecular de control
icircn eozinofile care reglează cantitatea de proteină PPARα icircn eozinofile versus alte tipuri de
leucocite (la pacienţii cu SM) şi acest lucru este icircn concordanţă cu cercetările care descriu
expresia PPARα mRNA icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale
bronşice keratinocite) Studiind prin citometrie de flux nivelul de expresie relativă a
receptorului CD36 la nivelul Mo am arătat prezenţa acestuia icircn Mo tuturor subiecţilor
investigaţi Analizacircnd valorile intensităţii medii de fluorescenţă a CD36 icircn loturile studiate
am observat o tendinţă de creştere la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali
confirmacircnd implicarea receptorului CD36 icircn patogeneza acestuia Referitor la expresia
receptorului CD36 rezultatele obţinute sunt icircn consens cu studii anterioare care au arătat
creşterea expresiei CD36 la pacienţii cu SM şi diabet zaharat Astfel pe lacircngă diferenţa icircn
expresia CD36 s-au raportat şi corelaţii inverse icircntre expresia proteinei CD36 şi nivelul
adiponectinei Acelaşi studiu a evidenţiat o corelaţie pozitivă intre expresia CD36 cu expresia
receptorilor PPAR gamma relaţia cu PPARα nefiind investigată
Analiza de subgrup a relaţiilor dintre componentele SM și elementele moleculare
proinflamatorii studiate a relevat prezenţa unor asocieri semnificativ statistice icircntre acestea
Se argumentează astfel că veridicitatea studiului este susţinută de interdependenţele statistice
ale componentelor SM Determinarea coeficientului de corelaţie Icircn studiul nostru nivelul de
expresie relativă a PPARα s-a corelat moderat negativ (figura 550) cu CA a subiecţilor din
lotul normal pentru populaţiile celulare de Mo (r = - 0420 P = 001) Ly (r = - 046 P =
0009) şi PMN (r = - 040 P = 0024) date care sunt icircn concordanţă cu studiile care arată
rolul PPARα icircn furnizarea energiei prin beta-oxidarea acizilor graşi Icircn acelaşi timp icircn lotul
pacienţilor cu SM nu am identificat prezenţa unei asocieri icircntre nivelul de expresie relativă a
PPARα şi valoarea măsurată a CA Asocierea dintre expresia relativă a PPARα cu obezitatea
de tip central completează datele existente referitoare la reglarea homeostaziei energetice
conturacircnd un mecanism de control deficitar al aportului caloric al SM Icircn condiţiile icircn care
rezultatele obţinute prin metoda citometriei icircn flux nu au arătat existenţa unei corelaţii intre
expresia PPARα şi CA la pacienţii cu SM considerăm că ar fi necesar studiul
polimorfismului genei PPARA care ar putea aduce informaţii importante cu privire la
implicarea acestor receptori icircn apariţia obezităţii de tip central Subliniem acest lucru deoarece
obezitatea este o boală plurifactorială icircn care pe lacircngă factorii ereditari sunt implicaţi factori
de mediu psihologici şi sociali (245) Existenţa unei componente genetice a aterosclerozei
este legată şi de prezenţa unor variante ale genei PPARA asociate cu creşterea incidenţei bolii
cardiovasculare (82) şi a SM (249) Icircn studiul nostru am constatat o scădere statistic
semnificativă a nivelului expresiei relative a receptorilor PPARα icircn Eo la subiecţii cu
antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială comparativ cu subiecţii fără istoric
familial de hipertensiune (figura 537) Deşi diferenţele calculate icircntre loturile studiate nu au
icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică la subiecţii care au declarat prezenţa
antecedentelor familiale de hipertensiune arterială remarcăm o tendinţă de scădere a
intensităţii medii de fluorescenţă pentru Ac anti-PPARα la nivelul Mo (figura 515 P = 006
) icircn timp ce expresia relativă a CD36 icircnregistrează o creştere la acesti subiecţi (figura 545 P
= 008) Icircn contextul riscului cardiovascular foarte icircnalt al pacienţilor cu SM amintim şi
existenţa corelaţiei pozitive dintre valorile tensiunii arteriale diastolice şi expresia relativă a
receptorului CD36 (r = 0483 P = 0013) Această constatare este icircn consens cu studiile care
au arătat că forma solubilă circulantă a CD36 este asociată cu factorii de risc cardiovasculari
fiind propusă ca un marker precoce al aterosclerozei Activarea PPARα este asociată cu
modularea metabolismului lipidic iar agoniştii PPARα sunt utilizaţi icircn mod curent pentru
tratamentul dislipidemiei Sub acţiunea agoniştilor PPARα se obţine o icircmbunătăţire a funcţiei
endoteliale şi a parametrilor reologici funcţiile pleiotropice ale agoniştilor PPARα fiind
dovedite icircn trialuri clinice controlate Icircn populaţiile de Mo şi Ly la pacienţii cu SM
cercetarea noastră a evidenţiat o asociere negativă icircntre nivelul de expresie relativă a
receptorilor PPARα şi concentraţia TG serice (figura 551) Astfel scăderea expresiei
receptorilor PPARα este asociată cu creşterea nivelului TG serice contribuind la profilul
lipidic aterogen din SM Icircn conformitate cu literatura de specialitate icircn studiul efectuat prin
metoda citometriei icircn flux am găsit prezenţa asocierii icircntre nivelul de expresie al PPARα şi
HDL-colesterol Corelaţia pozitivă dintre nivelul de expresie relativă PPARα şi concentraţia
HDL-colesterolului a fost observată icircn lotul martor icircn populaţiile de Mo (r = 035 P = 005)
şi Ly ( r = 036 P = 004) (figura 553) susţinacircnd faptul că stimularea receptorilor PPARα
este legată de creşterea nivelului seric al lipoproteinelor cu densitate crescută La pacienţii cu
SM corelaţia dintre expresia PPARα şi HDL-colesterol a fost evidenţiată icircn populaţiile de Mo
(r = 046 P = 0019) şi eozinofile (r = 044 P = 0024) Se desprinde concluzia că icircn
sindromul metabolic scăderea concentraţiei HDL-colesterol este legată de diminuarea
nivelului de expresie relativă a receptorilor nucleari PPARα icircntărind afirmaţiile legate de
rolul acestor receptori icircn progresia bolilor cardiovasculare Studiind reactanţii de fază acută
analiza statistică a relevat o diferenţă semnificativă din punct de vedere statistic icircntre valorile
fibrinogenului la pacienţii cu SM atunci cacircnd au fost comparaţi cu subiecţii fără SM
(Capitolul IV4 P lt0 001 figura 427A) De asemenea icircn Capitolul V dedicat studiul
expresiei relative a receptorilor PPARα studiul valorilor fibrinogenului a arătat creşterea
acestui reactant de faza acută icircn lotul cu SM comparativ cu lotul martor (P lt0 0001) Icircn
studiul nostru am calculat o corelaţie invers proporţionala (r = - -036 fig 555B) icircntre
nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile şi concentraţia serică a
fibrinogenului Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P = 008) am reţinut
această asociere deoarece am demonstrat că nivelul de expresie relativă al receptorilor
PPARα icircn eozinofile este mai scăzut icircn sindromul metabolic iar sindromul metabolic este
caracterizat printr-un status inflamator cronic status caracterizat şi de creşterea concentraţiei
serice a fibrinogenului De asemenea notam ca această corelaţie negativă se află icircn
concordanţă cu studiile care arata că tratamentul cu agonişti PPARα (fibraţi) determina
scăderea nivelului seric al fibrinogenului contribuind la diminuarea inflamaţiei cronice din
sindromul metabolic şi icircn consecinţă amelioracircnd insulinorezistenţa
LIMITE ȘI DIFICULTĂȚI IcircN CERCETARE
Icircn cadrul Tezei de Doctorat am desfăşurat o cercetare care şi-a propus studierea
expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Recrutarea anamneza şi examinarea
clinică a subiecţilor au fost realizate icircn cadrul Cabinetului de Medicină de Familie CMI Popa
Elena din Iaşi iar determinările hematologice şi biochimice s-au efectuat icircn cadrul
Laboratorului Ambulatorului de Specialitate al Spitalului Universitar ldquoSfacircntul Spiridon din
Iaşi Icircn studiul epidemiologic şi al markerilor inflamatori al sindromului metabolic desfăşurat
au fost incluşi un număr de 1530 de participanţi pe baza liberului consimţămacircnt examinaţi icircn
perioada 01012013 - 31122013 Icircn continuare icircn perioada 1012014 - 28022014 pe baza
criteriilor de includere şi excludere icircn cele două loturi de studiu am investigat un număr de 57
de subiecţi prezentaţi la consultaţie icircn această perioadă şi care au icircndeplinit criteriile de
includere icircn cele două loturi (Lot SM şi Lot Control) constituite pentru evaluarea nivelului de
expresie a receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Explorarea nivelului de expresie
relativă a receptorilor PPARα s-a desfăşurat icircn cadrul Laboratorului de Biologie Moleculară
de pe platforma Institutului Regional de Oncologie Datorită resurselor proprii financiare
limitate trebuie să subliniez că aceasta cercetare nu ar fi fost posibilă fără contribuţia unor
cercetători din domeniul medical care m-au sprijinit necondiţionat atacirct icircn elaborarea
protocolului de lucru cacirct şi icircn efectuarea propriu-zisă a studiului Icircn acest sens menţionăm şi
faptul că pentru studiul receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic am utilizat aparatura
Laboratorului de Biologie Moleculară (care deserveşte icircntreaga Regiune a Moldovei) Pe
această cale mulţumesc personalului Laboratorului de Biologie Moleculară pentru ajutorul
acordat icircn desfăşurarea cercetării doctorale icircn condiţiile icircn care se observa creşterea
numărului de pacienţi care se adresează acestei platforme de cercetare Mulţumesc de
asemenea şi Doamnei Doctor Elena Butoi din cadrul Institutului de Biologie şi Patologie
Moleculară ldquoNicolae Simionescurdquo Bucureşti) pentru donaţia anticorpului secundar anti-
FITC Icircn consecinţă pentru recrutarea unui număr mai mare de participanţi ar fi fost necesară
icircn primul racircnd obţinerea unor resurse financiare suplimentare pentru achiziţia de aparatură şi
reactivi Totuşi numărul subiecţilor recrutaţi este apropiat de numărul subiecţilor raportaţi icircn
cadrul unor granturi de cercetare care aveau ca ţinta studiul expresiei receptorilor PPARα
(212 227 228 231) Rezultatele obţinute continua seria lucrărilor care arata importanta
studiului mecanismelor etiopatogenice ale sindromului metabolic patologie care se afla icircntr-o
continuă creştere La pacienţii cu SM pe lacircngă diminuarea nivelului de expresie a receptorilor
PPARα icircn eozinofile ne aşteptam şi la evidenţierea unor modificări icircn expresia PPARα şi icircn
populaţiile de Ly Mo şi PMN Acest fapt poate fi explicat de utilizarea unor celule provenite
de la pacienţi fără afectare cardiovasculară fără diabet zaharat şi necesită continuarea
studiului pe culturi celulare icircn condiţii de stimulare cu agonişti PPARα deziderat care
impune continuarea investigării expresiei PPARα printr-un grant de cercetare
ORIGINALITATEA ȘI CONTRIBUȚIILE INOVATIVE ALE TEZEI DE
DOCTORAT PERSPECTIVE DE CERCETARE
Evaluarea nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn leucocitele circulante
aduce noi perspective icircn studiul obezităţii şi sindromului metabolic Importanta studiului
expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic derivă din prevalenta crescută a
sindromului metabolic icircn populaţia cercetată la care se adaugă riscul cardiovascular foarte
icircnalt al acestor pacienţi cu implicaţii majore icircn sănătatea publică Rolul receptorilor PPARα
icircn inflamaţie şi aterogeneza este binecunoscut dar studiul nostru este primul care a arătat că
nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα este semnificativ mai scăzut in populatiile
de eozinofile la pacienţii cu SM Această concluzie coroborata cu existenţa unei stracircnse
asocieri intre expresia receptorilor PPARα la nivelul Mo limfocitelor şi PMNlor creeaza
ipoteza existenţei unui mecanism de control diferit al expresiei PPARα la nivelul
eozinofilelor Această cercetare aduce informaţii importante referitoare la mecanismele
proinflamatorii care stau la baza insulinorezistenţei şi riscului cardiometabolic şi impune
continuarea studiului acestor receptori nucleari prin citometrie icircn flux metodă care poate fi
aplicată şi la scara mai largă dacă sunt asigurate resursele materiale necesare cercetării
Cercetarea prin citometrie icircn flux poate fi completată de studiul polimorfismului genei
PPARA şi astfel se pot identifica timpuriu indivizii cu potenţial risc cardiometabolic crescut
Studiul receptorilor PPARα a stabilit conexiuni cu factori proinflamatori şi aterogenetici iar
continuarea cercetării poate aduce şi elemente noi de diagnostic precoce icircn sindromul
metabolic contribuind la icircmbunătăţirea prognosticului acestor pacienţi
CONCLUZII FINALE
1 Aplicarea scorului de SM alături de implementarea algoritmului electronic de diagnostic
contribuie la o prelucrare rapidă eficientă și standardizată a informaţiilor la nivelul
medicinei primare
2 Prevalenţa SM calculată astfel icircn cadrul studiului este crescută (2732) icircn concordanţă
cu datele raportate
3 Controlul factorilor de risc cardiometabolici incluşi icircn SM se poate realiza prin
managementul stilului de viaţă (scăderea greutăţii corporale prin combaterea
sedentarismului şi adoptarea unei diete antiaterogene şi hipocalorice) şi administrarea
terapiei medicamentoase
4 Este necesară adoptarea unei politici de sănătate publică pentru prevenirea creşterii icircn
populaţie a prevalenţei obezităţii şi a diabetului zaharat
5 Noi metode de cercetare icircn domeniul SM axate pe diagnosticarea precoce şi cuantificarea
eficientă a acestuia duce la diminuarea incidenței evenimentelor cardiovasculare majore
6 Sindromul metabolic se caracterizează printr-un status inflamator cronic
7 Valorile Non-HDL-colesterolului şi a raportului de aterogenitate sunt semnificativ mai
mari la pacienţii cu SM
8 Dintre reactanţii de faza acută am observat că valoarea medie a fibrinogenului este mai
crescută icircn lotul cu SM
9 Valorile eozinofilelor sunt crescute icircn sindromul metabolic iar explorarea relaţiei dintre
eozinofile şi obezitate constituie una din direcţiile de studiu actuale ale sindromului
metabolic
10 Evaluarea markerilor inflamatori icircn contextul sindromului metabolic este utilă icircn
evaluarea complexă a a factorilor de risc cardiometabolici
11 Prin metoda citometriei icircn flux am demonstrat prezenta Receptorilor Activaţi de
Inductorii Proliferării Peroxizomilor ndash Alpha (PPARα) icircn toate populaţiile de leucocite
studiate (Mo limfocite PMN eozinofile) atacirct icircn lotul pacienţilor cu SM cacirct şi icircn lotul
martor
12 Utilizacircnd intensitatea medie de fluorescenţă a anticorpilor anti- PPARα am arătat că
nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile este semnificativ mai redus
la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali
13 Acest studiu este primul care a demonstrat existenţa unei scăderi statistic semnificative a
nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofilele pacienţilor cu SM
confirmacircnd cercetările recente care au evidenţiat rolul eozinofilelor şi al receptorilor
PPARα icircn obezitate reglarea inflamaţiei cronice şi aterogeneza
14 Contrar aşteptărilor noastre icircn populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările
efectuate icircn cele două loturi de studiu (cu şi fără sindom metabolic) nu am evidenţiat
diferenţe statistic seminificative icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα la
subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali
15 Icircn populaţiile de Mo limfocite şi polimorfonucleare am observat corelaţii puternice
semnificativ statistic icircntre expresia PPARα icircn aceste tipuri celulare sugeracircnd existenţa
unui mecanism unic de control al inflamaţiei cronice la nivelul acestor celule probabil
diferit de cel din eozinofile
16 La subiecţii cu SM expresia relativă a PPARα icircn Eo este invers asociată cu expresia
receptorului CD36 (receptor al particulelor de ox - LDL şi propus ca un marker precoce al
aterosclerozei) dovedind rolul antiinflamator al receptorilor PPARα la nivel endotelial
17 La pacienţii cu antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială nivelul de
expresie al receptorilor PPARα icircn eozinofile şi Mo este diminuat comparativ cu subiecţii
fără antecedente familiale de hipertensiune arterială Putem spune că studiul efectuat de
noi aduce informaţii importante legate de geneză aterosclerozei şi hipertensiunii arteriale
18 Prin studiul asocierilor dintre receptorii PPARα şi componentele clinice ale sindromului
metabolic am arătat rolul acestor receptori icircn determinismul obezităţii de tip central
nivelul expresiei relative a receptorilor PPARα fiind invers proporţional cu circumferinţa
abdominală
19 Icircn acelaşi timp nivelul de expresie a PPARα icircn sindromul metabolic este asociat pozitiv
cu concentraţia serică a HDL-colesterolului şi invers asociat cu nivelul trigliceridelor
serice dovedind rolul acestor receptori icircn diminuarea procesului inflamator cronic de la
nivel vascular
20 La pacienţii cu SM scăderea expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofile este corelată cu
creşterea unor markeri ai sindromului inflamator cronic cardiometabolic (acid uric
fibrinogen) ilustracircnd importanta receptorilor icircn reglarea status-ului inflamator cronic din
sindromul metabolic
21 Utilizarea metodei flowcitometrice pentru studiul expresiei relative a receptorilor PPARα
icircn leucocite a adus informaţii importante cu privire la mecanismele moleculare de control
implicate icircn patogenia bolilor cardiometabolice icircn concordanţă cu cercetările care descriu
expresia PPAR icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale bronşice
keratinocite)
BIBLIOGRAFIE SELECTIVA
1 Kahn R Metabolic syndrome- what is the clinical usefulness Lancet 2008371(9628)1892-3
2 Reaven GM The metabolic syndrome is this diagnosis necessary Am J Clin Nutr 2006 83(6)1237-7
3 Grundy SM Pre-Diabetes Metabolic Syndrome and Cardiovascular Risk J Am Coll Cardiol 201259(7)
635-43
4 International Diabetes Federation IDF Diabetes Atlas 6th edn International Diabetes Federation Belgium
Brussels 20131-155
5 World Health Organization Global Status Report on Noncommunicable Diseases 2010 World Health
Organization Geneva Switzerland 20111-176
6 Coman AE Petrovanu R Sindromul metabolic in practica de ambulator Editura Pim Iaşi 2009 1-103
7 Grundy SM Becker D Clark LT et alThird Report of the National Cholesterol Education Program (NCEP)
Expert Panel on Detection Evaluation and Treatment of High Blood Cholesterol in Adults (Adult
Treatment Panel III) Final Report Circulation 2002106(25)3143-90
8 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J Metabolic syndrome- a new worldwide definition A Consensus Statement
from the International Diabetes Federation Diabet Med 2006 23(5)469-80
9 KG Alberti KG Eckel RH Grundy SM etal International Diabetes Federation task force on epidemiology
and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart Association World Heart
Federation International Atherosclerosis Society International Association for the study of obesity
Harmonizing the metabolic syndrome a joint interim statement of the International Diabetes Federation task
force on epidemiology and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart
Association World Heart Federation International Atherosclerosis society and International Association
for the study of obesity Circulation 2009120(16)1640-5
10 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J IDF Epidemiology Task Force The metabolic syndrome new
worldwide definition Lancet 2005 366 1059 - 62
11 Oleszczyk M Svab I Seifert B et al Primary healthcare in the developing part of Europe changes and
development in the former Eastern Bloc countries that joined the European Union following 2004 Med Sci
Monit 2009(15)78ndash84
12 Jung U J Choi M S Obesity and Its Metabolic Complications The Role of Adipokines and the
Relationship between Obesity Inflammation Insulin Resistance Dyslipidemia and Nonalcoholic Fatty
Liver Disease Int J Mol Sci 2014rsquo15(4) 6184-223
13 Vanden Heuvel JP Peters JM Peroxisome Proliferators In Ramos K (ed) Cellular and Molecular
Toxicology (Second Edition) Volume 2 New York Elsevier Science Inc 2010 145 - 67
14 Yessoufou A Wahli W Multifaceted roles of peroxisome proliferator-activated receptors (PPARs) at the
cellular and whole organism levels Swiss Med Wkl 2010140w13071 doi104414smw201013071
15 Azhar S Peroxisome proliferator-activated receptors metabolic syndrome and cardiovascular disease
Future Cardiology 20106(5)657-91
16 Andries G Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity
Diabetes and Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(Suppl)24-32
17 Zandbergen F Plutzky J PPARalpha in atherosclerosis and inflammation Biochim Biophys Acta
20071771(8)972-82
18 Straus DS Glass CK Anti-inflammatory actions of PPAR ligands new insights on cellular and molecular
mechanisms Trends Immunol 200728(12)551-8
19 Zlei M Zugun- Eloae F Carasevici E Citometrie icircn flux - Bază şi clinică Icircn Hinescu ME (ed) Citometrie icircn
flux - principii şi aplicaţii clinice Bucureşti Editura Viaţa Medicală Romacircnească 20111-128
20 Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity Diabetes and
Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(9)24-32
21 Woerly G Honda K Loyens M et al Peroxisome proliferator-activated receptors alpha and gamma down-
regulate allergic inflammation and eosinophil activation J Exp Med 2003198(3)411-21
22 Salle-Saumont D Brenuchon C Kanda A et al Peroxisome proliferator-activated receptor alpha regulates
skin inflammation and humoral response in atopic dermatitis J Clin Allergy Immunology 2008 21(4)962-8
23 Schote A Turner J Schiltz J et al Nuclear receptors in human immune cells expression and correlations
Mol Immunolog 200744(6)1436-45
24 DAmore S Vacca M Graziano G et al Nuclear receptors expression chart icircn peripheral blood
mononuclear cells identifies patients with Metabolic Syndrome Biochim Biophys Acta
20131832(12)2289-301
25 Uthurralt J Gordish-Dressman H Bradbury M T et al PPARalpha L162V underlies variation in serum
triglycerides and subcutaneous fat volume in young males BMC Med Genet 2007855
26 Hiukka A Leinonen ES Jauhiainen M et al Long-term effects of fenofibrate on VLDL and HDL
subspecies icircn participants with type 2 diabetes mellitus Diabetologia 2007 50(10)2067-75
27 Robins SJ Rubins HB Faas FH et alInsulin resistance and cardiovascular events with low HDL
cholesterol The Veterans Affairs HDL Intervention Trial (VA-HIT) Diabetes Care 2003 26(5)1513-7
28 Devaraj S Siegel D Jialal I Statin Therapy in Metabolic Syndrome and Hypertension Post-JUPITER
What is the Value of CRP Curr Atheroscler Rep 2011 13(1) 31ndash42
29 Imperatore G Riccardi G Iovino C et al Plasma Fibrinogen A New Factor of the Metabolic Syndrome A
population-based study Diabetes Care 19982 1(4)649-54
30 Krysiak R Gdula-Dymek A Bachowski R Okopien B Pleiotropic effects of atorvastatin and fenofibrate
in metabolic syndrome and different types of pre-diabete Diabetes Care 201033(10)2266-70
31 Hermans MP Impact of Fenofibrate on Type 2 Diabetes Patients with Features of the Metabolic Syndrome
Subgroup Analysis From FIELD Curr Cardiol Rev 20106(2)112-8
32 Silverstein R Inflammation atherosclerosis and arterial thrombosis Role of the scavenger receptor CD36
Cleveland Clinic Journal of Medicine 200976(Suppl 2)S27-S30
33 Hăncu N Obezitatea In Vereşiu IA (ed) Diabetul zaharat nutritia si bolile metabolice Volume 2 Editura
Echinox Cluj- Napoca 2010 1-15
Lista lucrări publicate
1 Elena Popa Maria Maidaniuc Agnes Bacusca Alamir Diaa Rodica Petrovanu Adorata Elena
Coman Disfuncţia endotelială ndash de la mecanisme moleculare la cuantifi care şi tratament icircn practica
medicală Practica Medicală 20149(3) 109-14
2 Elena Popa Agnes Bacusca Alamir Diaa Maria Maidaniuc Rodica Petrovanu Adorata Elena Coman
The function of insulin receptor (IRF) in evolution of obesity correlation with adipocytes diameters
Archives of the Balkan Medical Union 201449(3) 275-9
3 Elena Popa Florin Zugun-Eloae Mihaela Zlei Daniela Jitaru Oana Maria Pintilie Adorata Elena
Coman Maria Traian Didona Anca Ungureanu Eugen Carasevici - acceptata pentru numarul 42014
Flow cytometry analysis of PPAR-alpha receptors in metabolic syndrome) Revista Romană de
Medicină de Laborator(RRLM-D-14-00034R1- adeverinţa ataşată
participanţii investigaţi analiza MFI a Ac anti - PPARα icircn populaţia de Mo (Mo) a arătat un
interval de variaţie icircntre [786 395] Valoarea medie a nivelului de expresie relativă a PPARα
calculată pentru Mo a fost de 23210 plusmn7860 Pentru ambele loturi de studiu pacienţilor cu
SM testul Testul Shapiro-Wilk a arătat distribuţia normală a valorilor obţinute pentru nivelul
de expresie al PPARα icircn Mo
Tabel XXVIII Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn Mo
Lot SM Lot Non-SM
N 26 31
Media 22819 23538
SD 5819 7717
Mediana 22400 22600
Minimum 12800 78600
Maximum 35800 37900
Percentila 25 18300 18300
Percentila 75 26200 30350
Pentru pacienţii din lotul SM valoarea medie a MFI icircn Mo a fost de 22819 plusmn 5880 iar
pentru lotul martor s-a calculat o valoare medie a MFI a Ac anti-PPARα de 23538 plusmn 7717
Distribuţia statistică a frecvenţei valorilor MFI obţinute pentru nivelul de expresie a PPARα
icircn Mo subiecţilor din cele două loturi a fost reprezentată icircn figura 511
Figura 511 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti-PPARα icircn Mo
Sub forma unei diagrame de control Shewhart am reprezentat variaţia intensităţii medii de
fluorescenţă pentru anticorpii anti-PPARα icircn MoVariaţia nivelului de expresie relativă a
receptorilor PPARα icircn Mo subiecţilor studiaţi este ilustrată icircn fig 512 513
Figura 512 Lot SM Variaţia
expresiei relative a PPARα icircn Mo
Număr pacienţi
26
Minim 128
Maxim 358
Media 22819
DS 5819
25 din 26 valori ale MFI s-au icircncadrat
icircn intervalul Media plusmn 2DS
Figura 513 Lot Non-SM Variaţia
expresiei relative a PPARα icircn Mo
Număr pacienţi 31
Minimum 786
Maximum 379
Media 23538
DS 7717
Cu excepţia unei singure
determinări valorile calculate s-au
icircncadrat icircn Media plusmn 2DS
Utilizacircnd testul parametric t-Student pentru variabilele cu distribuţie normală am
comparat valoarea medie a intensităţii de fluorescenţă a Ac anti-PPARα icircn lotul cu SM versus
subiecţi fără SM (Lot Non-SM) Analiza statistică efectuată nu a identificat diferenţe icircntre
50 100 150 200 250 300 350 400 450
0
5
10
15
20
25
30
35
MFI anti-PPAR a
Frecv
enta
relati
va (
)
Lot SM
0 50 100 150 200 250 300 350 400 450 500
0
5
10
15
20
25
30
35
MFI anti-PPAR a
Frecv
enta
relati
va (
)
Lot martor
1 6 11 16 21 26 31
0
50
100
150
200
250
300
350
400
450
MFI
anti-
PPAR
a
2282
1106
3458
518
4046
Media
LCI
LCI
1 6 11 16 21 26 31 36
-100
0
100
200
300
400
500
MFI a
nti-PP
AR
a
2354
810
3897
39
4669LCS
LCI
Media
cele două loturi icircn ceea ce priveşte expresia PPARα la nivelul Mo circulante (t- Test P=
069)
Studiul receptorilor PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de AHC şi dislipidemie
Nivelul de expresie al receptorilor PPARα α icircn Mo tinde să fie mai scăzut la subiecţii
cu AHC de HTA comparativ subiecţii care nu au declarat AHC de HTA (P= 006 fig 515)
AHC HTA
Număr 22
Mediana 19950
Percentila 25 17800
Percentila 75 22700
AHC HTA absente
Număr 35
Mediana 24800
Percentila 25 19025
Percentila 75 31700
Figura 515 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Mo funcţie de AHC de HTA
Nu s-au calculat diferenţe semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor
PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de dislipidemie atunci cacircnd aceştia au fost comparaţi cu
subiecţii fără AHC de tulburări ale metabolismului lipidic (t- Test P= 020)
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn limfocite
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn populaţia de Ly a
demonstrat prezenţa receptorilor PPARα icircn Ly tuturor subiecţilor studiaţi Pentru toţi
participanţii investigaţi analiza MFI a Ac anti - PPARα icircn populaţia de Ly a relevat un
interval de variaţie icircntre [748 314] iar valoarea medie a MFI a fost de 18058 plusmn 5600
Pentru ambele loturi aplicarea testului Shapiro-Wilk a evidenţiat distribuţia normală a
valorilor determinate pentru nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Ly Pentru
pacienţii cu SM valoarea medie a MFI determinată pentru expresia PPARα icircn populaţia de
Ly a fost de 18178 plusmn 61 16 iar pentru lotul martor a fost de 16800 plusmn 5229
Tabel XXX Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn limfocite
Lot SM Lot Non-SM
N 26 31
Media 181781 179574
SD 611694 522907
Mediana 165000 168000
Minimum 81300 74800
Maximum 314000 301000
Percentila 25 13400 - 145750
Percentila 75 21800 21700
Distribuţia frecvenţei valorilor MFI a Ac anti-PPARα icircn Ly este redată icircn figura 518
Figura 518 Distribuţia frecvenţelor relative a MFI a Ac anti-PPARα icircn Ly
94 din determinările efectuate pentru determinarea nivelului de expresie relativă al
MFI
ant
iPPA
R
a_Mo
190
200
210
220
230
240
250
260
270
280
DA NU
AHC HTA
P=006
50 89 128 167 206 244 283 322 361 400
0
5
10
15
20
25
30
35
MFI anti-PPAR a
Frecv
enta
relati
va (
)
Lot SM
0 50 100 150 200 250 300 350
0
5
10
15
20
25
30
35
40
MFI anti-PPAR a
Frec
venta
relat
iva (
)
Lot Non-SM
receptorilor PPARα icircn limfocitele subiecţilor cu SM s-au icircncadrat icircn intervalul Media plusmn 2DS
Figura 5 19 Lot SM Variaţia expresiei
relative a PPARα icircn Ly
Număr pacienţi 26
Minimum 813
Maximum 31400
Media 18178
Deviaţia Standard 6116
25 valori s-au icircncadrat icircn Media plusmn 2DS
Pentru lotul Non-SM diagrama de control (figura 520) a arătat toate valorile
determinate pentru lotul Non-SM se icircncadrează icircntre LCS şi LCI
Figura 520 Lot Non -SM Variaţia
expresiei relative a PPARα icircn Ly
Număr pacienţi 31
Minimum 748
Maximum 30100
Media 179574
Deviaţia Standard 5229
96 din valori icircncadrate icircn Media plusmn 2DS
Aplicarea testului t-Student pentru valorile medii ale intensităţii de fluorescenţă ale
PPARα icircn Ly nu a arătat existenţa unei diferenţe statistic semnificative icircntre lotul cu SM şi
lotul martor(t- Test P= 088)
Analiza receptorilor PPARα icircn Ly subiecţilor cu AHC de HTA şi dislipidemie
Studiind populaţiile de Ly la subiecţii care au prezentat AHC de hipertensiune
arterială analiza flowcitometrică a relevat existenţa unor valori mai mici pentru MFI la aceşti
subiecţi comparativ cu cei fără AHC de HTA (fig 522) deşi scăderea observată nu a
icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică (t- Test P = 009)
AHC HTA
Număr 22
Mediana 16000
Percentila 25 12700
Percentila 75 17100
AHC HTA absenţe
Număr 35
Mediana 18700
Percentila 25 14900
Percentila 75 23175
Figura 522 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Ly funcţie de AHC de HTA
Nu am calculat diferenţe statistic semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor
PPARα icircn populaţiile de Ly ale subiecţilor la care am identificat AHC de dislipidemie
comparativ cu cei care nu au declarat antecedente familiale de dislipidemie (t- Test P= 051)
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn neutrofile (PMN)
Analiza flowcitometrică a evidenţiat prezenţa PPARα icircn PMN recoltate din sacircngele
venos al tuturor participanţilor la studiu Pentru toţi subiecţii investigaţi analiza MFI a Ac -
PPARα icircn populaţia de PMN a relevat un interval de variaţie de [163419] iar valoarea medie
a MFI pentru Ac anti-PPARα a fost de 26392 plusmn 7064 Testul Shapiro-Wilk a arătat o
distribuţie normală a valorilor intensităţii medii de fluorescenţă a anticorpilor anti-PPARα atacirct
icircn lotul pacienţilor cu SM cacirct şi icircn lotul martor
1 6 11 16 21 26 31
-50
0
50
100
150
200
250
300
350
400
MFI
anti-
PPAR
a
1818
595
3041
-17
3653
Media+2DS
Media- 2DS
1 6 11 16 21 26 31 36
0
50
100
150
200
250
300
350
MFI
ant
i-PPA
R
a
1796
750
2841
227
3364
Media+2DS
Media
Media- 2DS
MFI
anti-
PPAR
a Ly
130
140
150
160
170
180
190
200
210
DA NU
AHC HTA
P=009
Tabel XXXII Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn PMN
Lot SM Lot Non-SM
N 26 31
Media 26273 26480
SD 6915 7088
Mediana 25900 25500
Minimum 17200 16300
Maximum 39500 41900
Percentila 25 19800 19600
Percentila 75 30500 31500
Icircn cele două loturi distribuţia frecvenţei valorilor nivelului relativ de expresie a
receptorilor PPARα icircn PMN a fost reprezentată sub formă de histograme (fig 525)
Figura 525 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti-PPARα icircn PMN
Pentru cei 26 de pacienţi din lotul cu SM a valoarea medie a nivelului de expresie
relativă a receptorilor PPARα icircn PMN a fost de 26273 plusmn 6915 Studiind diagrama Shewhart
din figura 526 se observă că toate valorile obţinute pentru nivelul de expresie relativă
PPARα icircn PMN investigate se icircncadrează icircntre limitele definite de valorile medii plusmn 2DS
Figura 526 Lot SM
Variaţia expresiei relative a PPARα icircn
PMN
Număr pacienţi 26
Minimum 17200
Maximum 39500
Media 26273
Deviaţia Standard 6915
Valorile MFI icircncadrate icircn Media plusmn 2DS
Pentru lotul martor valoarea medie calculată a MFI a anticorpilor anti-PPARα a fost de
26480 plusmn 7088 peste 95 din valorile MFI fiind cuprinse icircn Media plusmn 2DS (figura 527)
Figura 527 Lot Non-SM Variaţia expresiei
relative a PPARα icircn PMN
Număr pacienţi 31
Minimum 16300
Maximum 41900
Media 26480
Deviaţia Standard 7088
30 valoriicircn Media plusmn 2DS
Pentru PMN analiza statistica nu a arătat existenţa unei diferenţe statistic semnificative icircntre
nivelul de expresie relativă a PPARα la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii din lotul
Non-SM (t- Test P= 090) Studiind populaţiile de PMN la subiecţii care au prezentat AHC
de HTA nu am calculat o diferenţă statistic semnificativă icircntre expresia receptorilor PPARα
la subiecţii cu istoric familial de hipertensiune arterială comparativ cu cei pentru care nu s-au
notat AHC de HTA (t- Test P= 013)De asemenea am identificat diferenţe icircntre nivelul de
expresie al PPARα icircn PMN subiecţilor care prezentau AHC de dislipidemie comparativ cu
cei fără AHC de dislipidemie (t- Test P= 017)
50 100 150 200 250 300 350 400 450 500
0
5
10
15
20
25
30
35
MFI anti-PPAR a
Frecve
nta rel
ativa (
)
Lot SM
50 100 150 200 250 300 350 400 450 500
0
5
10
15
20
25
30
MFI anti-PPAR a
Frecv
enta
relati
va (
)
Lot Non-SM
1 6 11 16 21 26 31
0
50
100
150
200
250
300
350
400
450
500
MFI
anti-
PPA
R
a
2627
1244
4010
553
4702
Media + 2DS
Media - 2 DS
Media
1 6 11 16 21 26 31 36
0
50
100
150
200
250
300
350
400
450
500
MFI
anti-
PPAR
a
2648
1230
4066
522
4774
Media+ 2DS
Media - 2DS
Media
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile Tabel XXXIV Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn Eo
Lot SM Lot Non-SM
N 26 31
Mediaplusmn SD 141057 plusmn 47604 172209 plusmn 37565
Mediana 142450 171300
Minimum 35000 68500
Maximum 233700 250600
Percentila 25 119300 153225
Percentila 75 169700 199550
Am studiat nivelul relativ de expresie a receptorilor PPARα icircn Eo iar rezultatele au
fost figurate sub forma de histograme (figura 532)
Figura 532 Distribuţia frecventelor relative ale valorilor MFI anti- PPARα icircn Eo
Din diagrama Shewhart (figura 533) se observă că toate valorile determinate pentru
nivelul de expresie relativă a PPARα icircn Eo pentru lotul SM s-au icircncadrat icircn [Media plusmn 3 DS]
peste 90 din determinări fiind cuprinse icircn [Media plusmn 2 DS] iar icircn [Media plusmn 1 DS] sunt
incluse peste 65 din valorile MFI
Figura 533 Lot SM
Variaţia expresiei relative a PPARα icircn Eo
Număr pacienţi 26
Minimum 35000
Maximum 233700
Media 141057
Deviaţia Standard 47604
24 valori icircncadrat eicircn [Media plusmn 2DS]
Pentru subiecţii incluşi icircn lotul martor analiza diagramei (figura 534) a arătat că
toate cele 31 de valori ale MFI pentru PPARα icircn Eo se icircncadrează icircn [Media plusmn 3DS] iar 30
dintre acestea se icircncadrează icircn [ Media plusmn 2 DS]
Figura 534 Lot Non -SM
Variaţia expresiei relative a PPARα icircn Eo
Număr pacienţi 31
Minimum 685
Maximum 2506
Media 172209
Deviaţia Standard 375 65
30 valori icircncadrate icircn [Media plusmn 2DS]
Comparacircnd subiecţii cu SM cu cei din lotul martor am observat o scădere
semnificativă statistic a MFI a Ac anti - PPARα icircn Eo pentru pacienţiir cu SM ( figura 535)
PPARα Eo Lot Non-SM
Număr 31
Mediana 171300
Percentila 25 152325
Percentila 75 199550
PPARα Eo Lot SM
Număr 26
Mediana 142450
Percentila 25 119300
Percentila 75 169700
Figura 5 35 Comparaţie icircntre nivelul de expresie a PPARα icircn Eo
0 500 1000 1500 2000 2500 3000
0
10
20
30
40
50
MFI anti-PPAR a
Frecvent
a relativa
()
Lot SM
400 800 1200 1600 2000 2400 2800
0
5
10
15
20
25
30
35
40
45
MFI anti-PPAR a
Frecenta
relativa
()
Lot Non-SM
1 6 11 16 21 26 31
-500
0
500
1000
1500
2000
2500
3000
MFI a
nti-PP
AR
a
14106
4765
23447
94
28117
Media + 2DS
Media- 2DS
LCI
LCS
1 6 11 16 21 26 31 36
500
1000
1500
2000
2500
3000
MFI an
ti-PPA
R a
17221
9708
24734
5951
28490
LCI
Media-2DS
Media
Media +2 DS
LCS
1200
1300
1400
1500
1600
1700
1800
1900
Lot SM Lot Non-SM
P=00072
Cu ajutorul curbei ROC am evaluat posibilitatea utilizării MFI a Ac anti - PPARα icircn
Eo ca marker pentru diagnosticul SM Valoarea MFI a Ac anti - PPARα icircn Eo care prezice cu
cea mai mare acurateţe prezenţa SM a fost de 1533 (punctul de ldquocut-offrdquo) pentru care am
calculat o sensibilitate de 5652 şi o specificitate de 7778 Calculul ariei AUC a furnizat
valoarea de 0663 şi deci determinarea parametrului MFI anti- PPARα icircn Eo are valoarea
unui test cu acurateţe redusatilde icircn diagnosticul SM Studiind expresia PPARα icircn Eo la subiecţii
care au prezentat AHC de HTA am observat o scădere semnificativă statistic (P = 00023) a
expresiei PPARα la subiecţii cu istoric familial de HTA comparativ cu subiecţii fatilderatilde AHC de
HTA (figura 537)
AHC HTA
Număr 22
Mediana 148800
Percentila 25 116425
Percentila 75 170750
AHC HTA absente
Număr 35
Mediana 170850
Percentila 25 143700
Percentila 75 195000
Figura 537 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Eo funcţie de AHC de HTA
Studiind subiecţii cu AHC declarate de dislipidemie nu am identificat diferenţe icircntre
nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Eo subiecţilor cu AHC de dislipidemie
comparativ cu cei care nu au declarat prezenţa AHC de dislipidemie (t - Test P = 067)
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor CD36
Am studiat expresia receptorilor CD36 icircn Mo subiecţilor incluşi icircn studiu
Lot Non - SM
BLot SM
Figura 539 Analiza flowcitometrica pentru receptorii CD36 icircn Mo
Pentru toţi participanţii la studiu valorile MFI au variat icircn intervalul [817 6933] iar
valoarea medie a MFI a Ac anti-CD36 a fost de 397133 plusmn 120902 Tabel XXXVII Statistică descriptivă pentru a CD36 icircn Mo
Lot SM Lot Non-SM
Media 429034 370377
Deviatia Standard 109051 125514
Mediana 411000 362800
Minimum 266400 81700
Maximum 693300 616800
Percentila 25 346200 273750
Percentila 75 469000 453300
Distribuţia frecvenţelor relative a MFI au fost prezentate sub formă histogramelor
Figura 541 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti - CD36 icircn Mo
MFI
ant
i-PPA
R a Eo
1000
1100
1200
1300
1400
1500
1600
1700
1800
1900
DA NU
AHC HTA
P=00023
1000 2000 3000 4000 5000 6000 7000 8000
0
5
10
15
20
25
MFI anti-CD36
Frecve
nta rela
tiva (
)
Lot SM
0 1778 3556 5333 7111
0
5
10
15
20
25
30
35
MFI anti-CD36
Frecve
nta rel
ativa (
)
Lot Non - SM
Referitor la lotul SM 92 din valorile MFI a Ac anti- CD36 s-au icircncadrat icircn
intervalul Media plusmn 2 DS (figura 542) iar pentru lotul martor peste 90 dintre acestea icircn
Media plusmn 2 DS (figura 543)
Figura 542 Lot SM
Variaţia MFI anti-CD36 icircn Mo
Număr pacienţi 26
Minimum 2664
Maximum 6933
Media 429034
Deviaţia Standard 109051
Figura 543 Lot Non -SM
Variaţia MFI anti- CD36 icircn Mo
Număr 31
Minimum 81700
Maximum 616800
Media 370377
Deviaţia Standard 125514
Comparacircnd subiecţii cu SM cu cei din lotul normal am constatat o tendinţă de creştere
a expresiei CD36 icircn lotul cu SM((t - Test P= 0067)
MFI anti - CD36 Lot Non-SM
Număr 31
Mediana 3628
Percentila 25 2737
Percentila 75 4533
MFI anti - CD36 Lot SM
Număr 26
Mediana 4110
Percentila 25 3462
Percentila 75 4690
Figura 544 Comparaţie icircntre cel două loturi privind MFI anti - CD36 icircn Mo
Referindu-ne la subiecţii cu AHC de HTA am observat o tendinţă de creştere a
valorilor MFI anti-CD36 comparativ cu cei care nu au avut AHC de HTA (t - Test P = 0 08)
AHC HTA
Număr 22
Mediana 442800
Percentila 25 355275
Percentila 75 519475
AHC HTA absenţe
Număr 35
Mediana 377400
Percentila 25 316900
Percentila 75 443400
Figura 545 Comparaţie icircntre expresia CD36 icircn Mo funcţie de AHC de HTA
Nu s-au calculat diferenţe semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor
PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de dislipidemie atunci cacircnd aceştia au fost comparaţi cu
subiecţii fără AHC de dislipidemie (t - Test P=031)
Corelaţii icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα si CD36
Studiind valorile intensităţii medii de fluorescenţă a Ac anti-PPARα icircn Mo Ly şi
PMN am observat că nivelul de expresie celularatilde a PPARα icircn Mo Ly şi PMN sunt corelate
puternic pozitiv atacirct icircn lotul SM cacirct şi icircn lotul martor(fig547 548)
1 6 11 16 21 26 31
0
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
Pacienti
MFI a
nti-CD
36
42903
21093
64714
10188
75619
LCI
Media
LCS1 6 11 16 21 26 31 36
-1000
0
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
MFI a
nti- C
D36
37038
11935
62141
-616
74692Media + 2 DS
Media
Media - 2 DS
3200
3400
3600
3800
4000
4200
4400
4600
4800
Lot SM Lot Non-SM
P = 00676
MFI
anti-
CD36
3400
3600
3800
4000
4200
4400
4600
4800
5000
DA NU
AHC HTA
P = 008
Figura 547 Studiul relatiilor dintre
receptorii PPARα icircn SM A Mo vs PMN B Mo vs Ly
C PMN vs Ly Graficul ilustrează coeficienţii r P dreapta de
regresie (linia centrala) intervalul de icircncredere
95 şi intervalul de predicţie 95
Figura 548 Corelaţii icircntre receptorii PPARα icircn lotul
martor
A Mo vs PMN
B Mo vs Ly
C PMN vs Ly
Tot pentru lotul SM cacircnd am evaluat relaţia dintre nivelul de expresie relativă a
receptorilor PPARα icircn Eo şi nivelul de expresie relativa a receptorilor CD 36 am obţinut o
corelaţie negativă (r = - 05 P = 001) (fig 549 A)
50 100 150 200 250 300 350 50
100
150
200
250
300
350
400
450
500
PPARα Ly
PPARα PMN
y = 56641 + 1159 x r = 086 P lt 0001
C
50 100 150 200 250 300 350 400 0
50
100
150
200
250
300
350
PPARα Mo
PPARα Ly
y = 36665 + 0607 x r = 090 P lt 0001
B
150 200 250 300 350 400 450 0
50 100 150 200 250 300 350 400 450 500
PPARα PMN
PPARα Mo
y = 2505 + 0879 x r = 081 P lt 0001
A
50 100 150 200 250 300 350
50 100 150 200 250 300 350 400 450 500
PPARα Ly
PPARα PMN
y = 95668 + 0919 x r = 081 P lt 0001
C
100 150 200 250 300 350 400
0
50
100
150
200
250
300
350
400
PPARα Mo
PPARα Ly
y = -7503 + 0829 x r = 079 P lt 0001
B
100 150 200 250 300 350 400
50
100
150
200
250
300
350
400
450
500
PPARα Mo
PPARα PMN
y = 61384 + 0882 r = 074 P lt 0001
A
Figura 549 Corelaţii icircntre expresia PPARα icircn Eo şi alte tipuri de receptori investigaţi A PPARα Eo şi CD 36 (Lot SM) B PPARα Eo şi PPARα Mo( Lot Non-SM)
Icircn lotul martor am identificat o asociere moderată pozitivă (r = 038 P = 0033) icircntre
nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Eo şi Mo (figura 549B) corelaţie absentă icircn
lotul pacienţilor cu SM
Corelaţii dintre receptorii studiaţi şi componentele sindromului metabolic
Icircn lotul de control analiza statistică a relevat faptul că icircntre circumferinţa
abdominală (CA ) şi nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Mo Ly şi PMN există o
corelaţie inversă adică scăderea expresiei PPARα la nivelul acestor populatii celulare ar fi
icircnsoţită de creşterea CA (figura 550
Figura 550Corelaţii dintre receptorii
PPARα si CA A Mo B Ly C PMN
La pacienţii cu SM am notat o corelatie moderată negativă statistic semnificativă
icircntre TG şi valorile MFI a Ac anti- PPARα icircn Mo şi Ly( fig 551)
150 200 250 300 350 400 450 50
60
70
80
90
100
110
PPARα PMN
CA r = - 040 P = 0024
C
50 100 150 200 250 300 350 50
60
70
80
90
100
110
PPARα Ly
CA r = - 046 P = 0009
B
50 100 150 200 250 300 350 400 50
60
70
80
90
100
110
PPARα Mo
CA r = - 042 P = 0017
A
50 100 150 200 250 300 350 400 500
1000
1500
2000
2500
3000
PPARα Mo
PPARα Eo
r = 038 P = 0033
B
0 500 1000 1500 2000 2500 1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
PPARα Eo
CD36
r = 050 P = 0010
A
Figura 551 Lot SM Corelaţie icircntre expresia PPARα şi TG (A Mo B Ly)
Analizand corelatia dintre receptorii CD36 si valorile TA la pacientii cu SM am observat
o asociere pozitivă asteptată intre TAD si nivelul de expresie al receptorilor CD36 (fig 552)
Figura 552 Lot SM Corelaţii icircntre expresia
receptorilor CD36 şi valorile tensiunii arteriale
diastolice
Studiind corelaţiile dintre receptorii PPARα şi HDL-col la subiecţii din lotul martor am
notat o asociere pozitivă icircntre expresia PPARα icircn Mo şi Ly cu HDL-col (fig 553)
Figura 553 Lot martor Corelaţii icircntre HDL-col şi expresia PPARα icircn Mo(A) Ly(B)
Icircn lotul normal am evidenţiat corelaţii pozitive moderate dar semnificative statistic icircntre
CA şi valorile TAS (r = 062 P lt 0001) respectiv TAD (r = 050 P=0004) precum şi icircntre
CA şi glicemia subiecţilor normali (r = 052 P = 0003) Aceste date icircmpreună cu relaţia
invers proporţională identificată icircntre HDL-col şi CA (r = 050 P = 001) susţin validitatea
acestui studiu Icircn lotul subiecţilor cu SM am observat o corelaţie moderat pozitivă icircntre
expresia PPARα icircn populaţiiile de Mo şi Eo şi concentraţia a HDL-col (fig 554)
B
100 150 200 250 300 350 20
30
40
50
60
70
80
90
100
PPARα Ly
HDL-col-(mgdl)
r = 036 P = 0046
A
150 200 250 300 350 400 20
30
40
50
60
70
80
90
100
PPARα Mo
HDL-col-(mgd)l
r = 035 P = 005
70 75 80 85 90 95 100 1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
TAD (mmHg)
CD36
r = 048 P = 0013
B
50 100 150 200 250 300 350 -100
0
100
200
300
400
500
PPARα Ly
TG(mgdl)
r = - 042 P = 003
A
50 100 150 200 250 300 350 400 -100
0
100
200
300
400
500
PPARα Mo
TG ( mgdl) r =- 0 43 P = 0027
Figura 554 Corelaţii icircn SM icircntre HDL-col şi expresia PPARα icircn Mo (A) şi Eo(B)
Corelaţii icircntre nivelul de expresie relativă a PPARα şi markeri ai disfuncţiei
endoteliale şi inflamaţiei cronice
Deşi nu a icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică am reţinut corelaţia invers
proporţională (r = - 0331 P = 006) dintre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα
icircn PMN şi concentraţia serică a Non-HDL-colesterolului
Studiind relaţiile dintre parametri icircn lotul de pacienţi cu SM am observat o corelaţie
moderată invers proporţională icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Eo şi
acidul uric seric (figura 555 A) corelaţie absentă la subiecţii fără SM
Figura 555 Lot SM corelaţia dintre expresia PPARα icircn Eo şi acidul uric (A) respectiv
PPARα şi fibrinogen (B)
Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P=008) am notat pentru
pacienţii cu SM corelaţia invers proporţională dintre expresia PPARα icircn Eo şi concentraţia
serică a fibrinogenului ( figura 555B)
V5 Discuţii
Icircn cadrul lucrării de doctorat am studiat nivelul de expresie relativă a PPARα icircn
leucocitele pacienţilor cu SM comparativ cu cea a subiecţilor normali Expresia PPARα a fost
studiată icircn paralel cu cea a CD36 glicoproteină exprimată pe suprafaţa a numeroase celule
din organismul uman inclusiv pe cea a Mo şi macrofagelor Prin funcţia sa de receptor pentru
particulele oxidate de LDL CD36 cunoscut ca bdquoscavenger receptorrdquo de clasa B sau
bdquotrombospodin receptorrdquo contribuie la dezvoltarea inflamaţiei de la nivel endotelial şi
formarea plăcii de ateroscleroză Referitor la studiul PPARα icircn Eo icircn sindromul metabolic
menţionăm că studiul nostru este primul care arată că nivelul de expresie a proteinei PPARα
icircn Eo măsurat prin citometrie icircn flux este semnificativ mai redus la pacienţii care sunt
diagnosticaţi cu acest sindrom De asemenea icircn lotul cu SM cercetat icircn cadrul studiului
receptorilor PPARα numărul Eo circulante a fost semnificativ mai crescut la pacienţii cu SM
B
0 500 1000 1500 2000 2500 200
250
300
350
400
450
PPARα Eo o
Fibrinogen mgdl
r =- 036 P = 008
0 500 1000 1500 2000 2500 1 2 3 4 5 6 7 8 9
10 11
PPARα Eo_
Acid uric(mgdl) r = 048 P = 0014 A
0 500 1000 1500 2000 2500 10
20
30
40
50
60
70
80
PPARα Eo
HDL(mgdl)
r = 044 P = 0024
B
100 150 200 250 300 350 400 10
20
30
40
50
60
70
80
PPARα Mo
HDL( mgdl)
r = 046 P = 0019
A
(P = 003) Aceste constatări conduc la ipoteza că Eo joacă un rol special icircn mecanismele
patogenice declanşate icircn sindromul metabolic şi că receptorii PPARα sunt importanţi icircn
implicarea Eo icircn obezitate şi insulinorezistenţă Creşterea numărului de Eo circulante este
urmată de eliberarea mediatorilor proinflamatori iar reducerea expresiei PPARα icircn Eo
determină perturbarea mecanismelor de control al inflamaţiei cu exacerbarea cascadei
proinflamatorii Consecutiv se agravează disfuncţia endotelială şi se accelerează progresia
leziunilor de ateroscleroză Extrapolacircnd aceste ipoteze putem spune că asocierea raportată
dintre boala ischemică coronariană şi Eo poate fi şi consecinţa exacerbării cascadei
proinflamatorii de la nivel vascular produsă datorită scăderii expresiei PPARα icircn Eo iar
creşterea numărului de Eo circulante poate reprezenta o adaptare a organismului uman care
icircncearcă să suplinească deficitul de receptori PPARα Analizacircnd curba ROC pentru
intensităţile medii de fluorescenţă determinate pentru anticorpii anti- PPARα icircn Eo am
obţinut pentru acest biomarker o sensibilitate a testului de 565 şi o specificitate de 778
pentru un punct de cut-off de 1533 ( figura 536 ) Deşi aria AUC (Aria under the curve) egală
cu 0663 icircncadrează acest test ca avacircnd o acurateţe redusă observăm că că această valoare
este apropiată de determinările AUC pentru alţi factori (fibrinogen raport de aterogenitate
acid uric non- HDL-colesterol) cunoscuţi ca fiind implicaţi icircn aterogeneză şi inflamaţia
cronică (figura 431) Aceste remarci alături de faptul că icircn studiul receptorilor PPARα icircn
leucocite am inclus subiecţi la primul diagnostic de SM creează premisa integrării
determinării expresiei relative a receptorilor PPARα icircn diagnosticul complex al sindromului
metabolic Putem spune că icircn final studiul expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofilele
circulante se dovedește a fi util icircn diagnosticul precoce la nivel molecular al SM permiţacircnd
identificarea timpurie a unor indivizi cu risc cardiometabolic crescut Astfel intervenţia
precoce asupra subiecţilor cu deficit de PPARα icircn Eo contribuie la managementul eficient al
afecţiunilor degenerative icircn care inflamaţia cronică icircndeplineşte un rol primordial Referitor
la populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările efectuate prin citometrie de flux nu au
arătat existenţa unor diferenţe statistice icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα
la subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali Rezultatele noastre pot fi
consecinţa caracteristicilor loturilor studiate (icircn studiul nostru au fost incluşi subiecţi recrutaţi
la primul diagnostic de SM şi icircn absenţa stimulării receptorilor PPARα cu droguri agoniste
PPARα) dar icircn acelaşi timp pot apare diferenţe datorită metodei utilizate (231 232 233)
Făcacircnd o paralelă cu un studiu publicat icircn 2013 icircn Europa (231) care a arătat creşterea
nivelului de expresie al PPARα icircn Ly şi Mo observăm că deşi numărul de subiecţi a fost
aproximativ egal (57 participanţi icircn studiul nostru 60 icircn studiul DAmore) subiecţii icircn studiul
amintit au fost recrutaţi dintr-o clinică cu profil medical la primul diagnostic de SM icircn timp
ce metoda utilizată a fost PCR (Polymerase Chain Reaction) mult mai fidelă decacirct citometria
icircn flux icircn studiul receptorilor nucleari De asemenea DAmore nu investighează expresia
PPARα icircn Eo şi PMN icircn cercetare fiind incluse doar celulele CD14+ (predominant Mo) şi
CD14- (predominant Ly) Deşi nu am obţinut diferenţe statistic semnificative icircntre cele două
loturi referitoare la nivelul de expresie relativă a PPARα icircn Mo Ly şi PMN am observat
corelaţii puternice semnificative statistic icircntre expresia receptorilor PPARα icircn aceste tipuri
celulare Rezultatele obţinute sugerează existenţa unui mecanism diferit molecular de control
icircn eozinofile care reglează cantitatea de proteină PPARα icircn eozinofile versus alte tipuri de
leucocite (la pacienţii cu SM) şi acest lucru este icircn concordanţă cu cercetările care descriu
expresia PPARα mRNA icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale
bronşice keratinocite) Studiind prin citometrie de flux nivelul de expresie relativă a
receptorului CD36 la nivelul Mo am arătat prezenţa acestuia icircn Mo tuturor subiecţilor
investigaţi Analizacircnd valorile intensităţii medii de fluorescenţă a CD36 icircn loturile studiate
am observat o tendinţă de creştere la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali
confirmacircnd implicarea receptorului CD36 icircn patogeneza acestuia Referitor la expresia
receptorului CD36 rezultatele obţinute sunt icircn consens cu studii anterioare care au arătat
creşterea expresiei CD36 la pacienţii cu SM şi diabet zaharat Astfel pe lacircngă diferenţa icircn
expresia CD36 s-au raportat şi corelaţii inverse icircntre expresia proteinei CD36 şi nivelul
adiponectinei Acelaşi studiu a evidenţiat o corelaţie pozitivă intre expresia CD36 cu expresia
receptorilor PPAR gamma relaţia cu PPARα nefiind investigată
Analiza de subgrup a relaţiilor dintre componentele SM și elementele moleculare
proinflamatorii studiate a relevat prezenţa unor asocieri semnificativ statistice icircntre acestea
Se argumentează astfel că veridicitatea studiului este susţinută de interdependenţele statistice
ale componentelor SM Determinarea coeficientului de corelaţie Icircn studiul nostru nivelul de
expresie relativă a PPARα s-a corelat moderat negativ (figura 550) cu CA a subiecţilor din
lotul normal pentru populaţiile celulare de Mo (r = - 0420 P = 001) Ly (r = - 046 P =
0009) şi PMN (r = - 040 P = 0024) date care sunt icircn concordanţă cu studiile care arată
rolul PPARα icircn furnizarea energiei prin beta-oxidarea acizilor graşi Icircn acelaşi timp icircn lotul
pacienţilor cu SM nu am identificat prezenţa unei asocieri icircntre nivelul de expresie relativă a
PPARα şi valoarea măsurată a CA Asocierea dintre expresia relativă a PPARα cu obezitatea
de tip central completează datele existente referitoare la reglarea homeostaziei energetice
conturacircnd un mecanism de control deficitar al aportului caloric al SM Icircn condiţiile icircn care
rezultatele obţinute prin metoda citometriei icircn flux nu au arătat existenţa unei corelaţii intre
expresia PPARα şi CA la pacienţii cu SM considerăm că ar fi necesar studiul
polimorfismului genei PPARA care ar putea aduce informaţii importante cu privire la
implicarea acestor receptori icircn apariţia obezităţii de tip central Subliniem acest lucru deoarece
obezitatea este o boală plurifactorială icircn care pe lacircngă factorii ereditari sunt implicaţi factori
de mediu psihologici şi sociali (245) Existenţa unei componente genetice a aterosclerozei
este legată şi de prezenţa unor variante ale genei PPARA asociate cu creşterea incidenţei bolii
cardiovasculare (82) şi a SM (249) Icircn studiul nostru am constatat o scădere statistic
semnificativă a nivelului expresiei relative a receptorilor PPARα icircn Eo la subiecţii cu
antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială comparativ cu subiecţii fără istoric
familial de hipertensiune (figura 537) Deşi diferenţele calculate icircntre loturile studiate nu au
icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică la subiecţii care au declarat prezenţa
antecedentelor familiale de hipertensiune arterială remarcăm o tendinţă de scădere a
intensităţii medii de fluorescenţă pentru Ac anti-PPARα la nivelul Mo (figura 515 P = 006
) icircn timp ce expresia relativă a CD36 icircnregistrează o creştere la acesti subiecţi (figura 545 P
= 008) Icircn contextul riscului cardiovascular foarte icircnalt al pacienţilor cu SM amintim şi
existenţa corelaţiei pozitive dintre valorile tensiunii arteriale diastolice şi expresia relativă a
receptorului CD36 (r = 0483 P = 0013) Această constatare este icircn consens cu studiile care
au arătat că forma solubilă circulantă a CD36 este asociată cu factorii de risc cardiovasculari
fiind propusă ca un marker precoce al aterosclerozei Activarea PPARα este asociată cu
modularea metabolismului lipidic iar agoniştii PPARα sunt utilizaţi icircn mod curent pentru
tratamentul dislipidemiei Sub acţiunea agoniştilor PPARα se obţine o icircmbunătăţire a funcţiei
endoteliale şi a parametrilor reologici funcţiile pleiotropice ale agoniştilor PPARα fiind
dovedite icircn trialuri clinice controlate Icircn populaţiile de Mo şi Ly la pacienţii cu SM
cercetarea noastră a evidenţiat o asociere negativă icircntre nivelul de expresie relativă a
receptorilor PPARα şi concentraţia TG serice (figura 551) Astfel scăderea expresiei
receptorilor PPARα este asociată cu creşterea nivelului TG serice contribuind la profilul
lipidic aterogen din SM Icircn conformitate cu literatura de specialitate icircn studiul efectuat prin
metoda citometriei icircn flux am găsit prezenţa asocierii icircntre nivelul de expresie al PPARα şi
HDL-colesterol Corelaţia pozitivă dintre nivelul de expresie relativă PPARα şi concentraţia
HDL-colesterolului a fost observată icircn lotul martor icircn populaţiile de Mo (r = 035 P = 005)
şi Ly ( r = 036 P = 004) (figura 553) susţinacircnd faptul că stimularea receptorilor PPARα
este legată de creşterea nivelului seric al lipoproteinelor cu densitate crescută La pacienţii cu
SM corelaţia dintre expresia PPARα şi HDL-colesterol a fost evidenţiată icircn populaţiile de Mo
(r = 046 P = 0019) şi eozinofile (r = 044 P = 0024) Se desprinde concluzia că icircn
sindromul metabolic scăderea concentraţiei HDL-colesterol este legată de diminuarea
nivelului de expresie relativă a receptorilor nucleari PPARα icircntărind afirmaţiile legate de
rolul acestor receptori icircn progresia bolilor cardiovasculare Studiind reactanţii de fază acută
analiza statistică a relevat o diferenţă semnificativă din punct de vedere statistic icircntre valorile
fibrinogenului la pacienţii cu SM atunci cacircnd au fost comparaţi cu subiecţii fără SM
(Capitolul IV4 P lt0 001 figura 427A) De asemenea icircn Capitolul V dedicat studiul
expresiei relative a receptorilor PPARα studiul valorilor fibrinogenului a arătat creşterea
acestui reactant de faza acută icircn lotul cu SM comparativ cu lotul martor (P lt0 0001) Icircn
studiul nostru am calculat o corelaţie invers proporţionala (r = - -036 fig 555B) icircntre
nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile şi concentraţia serică a
fibrinogenului Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P = 008) am reţinut
această asociere deoarece am demonstrat că nivelul de expresie relativă al receptorilor
PPARα icircn eozinofile este mai scăzut icircn sindromul metabolic iar sindromul metabolic este
caracterizat printr-un status inflamator cronic status caracterizat şi de creşterea concentraţiei
serice a fibrinogenului De asemenea notam ca această corelaţie negativă se află icircn
concordanţă cu studiile care arata că tratamentul cu agonişti PPARα (fibraţi) determina
scăderea nivelului seric al fibrinogenului contribuind la diminuarea inflamaţiei cronice din
sindromul metabolic şi icircn consecinţă amelioracircnd insulinorezistenţa
LIMITE ȘI DIFICULTĂȚI IcircN CERCETARE
Icircn cadrul Tezei de Doctorat am desfăşurat o cercetare care şi-a propus studierea
expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Recrutarea anamneza şi examinarea
clinică a subiecţilor au fost realizate icircn cadrul Cabinetului de Medicină de Familie CMI Popa
Elena din Iaşi iar determinările hematologice şi biochimice s-au efectuat icircn cadrul
Laboratorului Ambulatorului de Specialitate al Spitalului Universitar ldquoSfacircntul Spiridon din
Iaşi Icircn studiul epidemiologic şi al markerilor inflamatori al sindromului metabolic desfăşurat
au fost incluşi un număr de 1530 de participanţi pe baza liberului consimţămacircnt examinaţi icircn
perioada 01012013 - 31122013 Icircn continuare icircn perioada 1012014 - 28022014 pe baza
criteriilor de includere şi excludere icircn cele două loturi de studiu am investigat un număr de 57
de subiecţi prezentaţi la consultaţie icircn această perioadă şi care au icircndeplinit criteriile de
includere icircn cele două loturi (Lot SM şi Lot Control) constituite pentru evaluarea nivelului de
expresie a receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Explorarea nivelului de expresie
relativă a receptorilor PPARα s-a desfăşurat icircn cadrul Laboratorului de Biologie Moleculară
de pe platforma Institutului Regional de Oncologie Datorită resurselor proprii financiare
limitate trebuie să subliniez că aceasta cercetare nu ar fi fost posibilă fără contribuţia unor
cercetători din domeniul medical care m-au sprijinit necondiţionat atacirct icircn elaborarea
protocolului de lucru cacirct şi icircn efectuarea propriu-zisă a studiului Icircn acest sens menţionăm şi
faptul că pentru studiul receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic am utilizat aparatura
Laboratorului de Biologie Moleculară (care deserveşte icircntreaga Regiune a Moldovei) Pe
această cale mulţumesc personalului Laboratorului de Biologie Moleculară pentru ajutorul
acordat icircn desfăşurarea cercetării doctorale icircn condiţiile icircn care se observa creşterea
numărului de pacienţi care se adresează acestei platforme de cercetare Mulţumesc de
asemenea şi Doamnei Doctor Elena Butoi din cadrul Institutului de Biologie şi Patologie
Moleculară ldquoNicolae Simionescurdquo Bucureşti) pentru donaţia anticorpului secundar anti-
FITC Icircn consecinţă pentru recrutarea unui număr mai mare de participanţi ar fi fost necesară
icircn primul racircnd obţinerea unor resurse financiare suplimentare pentru achiziţia de aparatură şi
reactivi Totuşi numărul subiecţilor recrutaţi este apropiat de numărul subiecţilor raportaţi icircn
cadrul unor granturi de cercetare care aveau ca ţinta studiul expresiei receptorilor PPARα
(212 227 228 231) Rezultatele obţinute continua seria lucrărilor care arata importanta
studiului mecanismelor etiopatogenice ale sindromului metabolic patologie care se afla icircntr-o
continuă creştere La pacienţii cu SM pe lacircngă diminuarea nivelului de expresie a receptorilor
PPARα icircn eozinofile ne aşteptam şi la evidenţierea unor modificări icircn expresia PPARα şi icircn
populaţiile de Ly Mo şi PMN Acest fapt poate fi explicat de utilizarea unor celule provenite
de la pacienţi fără afectare cardiovasculară fără diabet zaharat şi necesită continuarea
studiului pe culturi celulare icircn condiţii de stimulare cu agonişti PPARα deziderat care
impune continuarea investigării expresiei PPARα printr-un grant de cercetare
ORIGINALITATEA ȘI CONTRIBUȚIILE INOVATIVE ALE TEZEI DE
DOCTORAT PERSPECTIVE DE CERCETARE
Evaluarea nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn leucocitele circulante
aduce noi perspective icircn studiul obezităţii şi sindromului metabolic Importanta studiului
expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic derivă din prevalenta crescută a
sindromului metabolic icircn populaţia cercetată la care se adaugă riscul cardiovascular foarte
icircnalt al acestor pacienţi cu implicaţii majore icircn sănătatea publică Rolul receptorilor PPARα
icircn inflamaţie şi aterogeneza este binecunoscut dar studiul nostru este primul care a arătat că
nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα este semnificativ mai scăzut in populatiile
de eozinofile la pacienţii cu SM Această concluzie coroborata cu existenţa unei stracircnse
asocieri intre expresia receptorilor PPARα la nivelul Mo limfocitelor şi PMNlor creeaza
ipoteza existenţei unui mecanism de control diferit al expresiei PPARα la nivelul
eozinofilelor Această cercetare aduce informaţii importante referitoare la mecanismele
proinflamatorii care stau la baza insulinorezistenţei şi riscului cardiometabolic şi impune
continuarea studiului acestor receptori nucleari prin citometrie icircn flux metodă care poate fi
aplicată şi la scara mai largă dacă sunt asigurate resursele materiale necesare cercetării
Cercetarea prin citometrie icircn flux poate fi completată de studiul polimorfismului genei
PPARA şi astfel se pot identifica timpuriu indivizii cu potenţial risc cardiometabolic crescut
Studiul receptorilor PPARα a stabilit conexiuni cu factori proinflamatori şi aterogenetici iar
continuarea cercetării poate aduce şi elemente noi de diagnostic precoce icircn sindromul
metabolic contribuind la icircmbunătăţirea prognosticului acestor pacienţi
CONCLUZII FINALE
1 Aplicarea scorului de SM alături de implementarea algoritmului electronic de diagnostic
contribuie la o prelucrare rapidă eficientă și standardizată a informaţiilor la nivelul
medicinei primare
2 Prevalenţa SM calculată astfel icircn cadrul studiului este crescută (2732) icircn concordanţă
cu datele raportate
3 Controlul factorilor de risc cardiometabolici incluşi icircn SM se poate realiza prin
managementul stilului de viaţă (scăderea greutăţii corporale prin combaterea
sedentarismului şi adoptarea unei diete antiaterogene şi hipocalorice) şi administrarea
terapiei medicamentoase
4 Este necesară adoptarea unei politici de sănătate publică pentru prevenirea creşterii icircn
populaţie a prevalenţei obezităţii şi a diabetului zaharat
5 Noi metode de cercetare icircn domeniul SM axate pe diagnosticarea precoce şi cuantificarea
eficientă a acestuia duce la diminuarea incidenței evenimentelor cardiovasculare majore
6 Sindromul metabolic se caracterizează printr-un status inflamator cronic
7 Valorile Non-HDL-colesterolului şi a raportului de aterogenitate sunt semnificativ mai
mari la pacienţii cu SM
8 Dintre reactanţii de faza acută am observat că valoarea medie a fibrinogenului este mai
crescută icircn lotul cu SM
9 Valorile eozinofilelor sunt crescute icircn sindromul metabolic iar explorarea relaţiei dintre
eozinofile şi obezitate constituie una din direcţiile de studiu actuale ale sindromului
metabolic
10 Evaluarea markerilor inflamatori icircn contextul sindromului metabolic este utilă icircn
evaluarea complexă a a factorilor de risc cardiometabolici
11 Prin metoda citometriei icircn flux am demonstrat prezenta Receptorilor Activaţi de
Inductorii Proliferării Peroxizomilor ndash Alpha (PPARα) icircn toate populaţiile de leucocite
studiate (Mo limfocite PMN eozinofile) atacirct icircn lotul pacienţilor cu SM cacirct şi icircn lotul
martor
12 Utilizacircnd intensitatea medie de fluorescenţă a anticorpilor anti- PPARα am arătat că
nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile este semnificativ mai redus
la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali
13 Acest studiu este primul care a demonstrat existenţa unei scăderi statistic semnificative a
nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofilele pacienţilor cu SM
confirmacircnd cercetările recente care au evidenţiat rolul eozinofilelor şi al receptorilor
PPARα icircn obezitate reglarea inflamaţiei cronice şi aterogeneza
14 Contrar aşteptărilor noastre icircn populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările
efectuate icircn cele două loturi de studiu (cu şi fără sindom metabolic) nu am evidenţiat
diferenţe statistic seminificative icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα la
subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali
15 Icircn populaţiile de Mo limfocite şi polimorfonucleare am observat corelaţii puternice
semnificativ statistic icircntre expresia PPARα icircn aceste tipuri celulare sugeracircnd existenţa
unui mecanism unic de control al inflamaţiei cronice la nivelul acestor celule probabil
diferit de cel din eozinofile
16 La subiecţii cu SM expresia relativă a PPARα icircn Eo este invers asociată cu expresia
receptorului CD36 (receptor al particulelor de ox - LDL şi propus ca un marker precoce al
aterosclerozei) dovedind rolul antiinflamator al receptorilor PPARα la nivel endotelial
17 La pacienţii cu antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială nivelul de
expresie al receptorilor PPARα icircn eozinofile şi Mo este diminuat comparativ cu subiecţii
fără antecedente familiale de hipertensiune arterială Putem spune că studiul efectuat de
noi aduce informaţii importante legate de geneză aterosclerozei şi hipertensiunii arteriale
18 Prin studiul asocierilor dintre receptorii PPARα şi componentele clinice ale sindromului
metabolic am arătat rolul acestor receptori icircn determinismul obezităţii de tip central
nivelul expresiei relative a receptorilor PPARα fiind invers proporţional cu circumferinţa
abdominală
19 Icircn acelaşi timp nivelul de expresie a PPARα icircn sindromul metabolic este asociat pozitiv
cu concentraţia serică a HDL-colesterolului şi invers asociat cu nivelul trigliceridelor
serice dovedind rolul acestor receptori icircn diminuarea procesului inflamator cronic de la
nivel vascular
20 La pacienţii cu SM scăderea expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofile este corelată cu
creşterea unor markeri ai sindromului inflamator cronic cardiometabolic (acid uric
fibrinogen) ilustracircnd importanta receptorilor icircn reglarea status-ului inflamator cronic din
sindromul metabolic
21 Utilizarea metodei flowcitometrice pentru studiul expresiei relative a receptorilor PPARα
icircn leucocite a adus informaţii importante cu privire la mecanismele moleculare de control
implicate icircn patogenia bolilor cardiometabolice icircn concordanţă cu cercetările care descriu
expresia PPAR icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale bronşice
keratinocite)
BIBLIOGRAFIE SELECTIVA
1 Kahn R Metabolic syndrome- what is the clinical usefulness Lancet 2008371(9628)1892-3
2 Reaven GM The metabolic syndrome is this diagnosis necessary Am J Clin Nutr 2006 83(6)1237-7
3 Grundy SM Pre-Diabetes Metabolic Syndrome and Cardiovascular Risk J Am Coll Cardiol 201259(7)
635-43
4 International Diabetes Federation IDF Diabetes Atlas 6th edn International Diabetes Federation Belgium
Brussels 20131-155
5 World Health Organization Global Status Report on Noncommunicable Diseases 2010 World Health
Organization Geneva Switzerland 20111-176
6 Coman AE Petrovanu R Sindromul metabolic in practica de ambulator Editura Pim Iaşi 2009 1-103
7 Grundy SM Becker D Clark LT et alThird Report of the National Cholesterol Education Program (NCEP)
Expert Panel on Detection Evaluation and Treatment of High Blood Cholesterol in Adults (Adult
Treatment Panel III) Final Report Circulation 2002106(25)3143-90
8 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J Metabolic syndrome- a new worldwide definition A Consensus Statement
from the International Diabetes Federation Diabet Med 2006 23(5)469-80
9 KG Alberti KG Eckel RH Grundy SM etal International Diabetes Federation task force on epidemiology
and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart Association World Heart
Federation International Atherosclerosis Society International Association for the study of obesity
Harmonizing the metabolic syndrome a joint interim statement of the International Diabetes Federation task
force on epidemiology and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart
Association World Heart Federation International Atherosclerosis society and International Association
for the study of obesity Circulation 2009120(16)1640-5
10 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J IDF Epidemiology Task Force The metabolic syndrome new
worldwide definition Lancet 2005 366 1059 - 62
11 Oleszczyk M Svab I Seifert B et al Primary healthcare in the developing part of Europe changes and
development in the former Eastern Bloc countries that joined the European Union following 2004 Med Sci
Monit 2009(15)78ndash84
12 Jung U J Choi M S Obesity and Its Metabolic Complications The Role of Adipokines and the
Relationship between Obesity Inflammation Insulin Resistance Dyslipidemia and Nonalcoholic Fatty
Liver Disease Int J Mol Sci 2014rsquo15(4) 6184-223
13 Vanden Heuvel JP Peters JM Peroxisome Proliferators In Ramos K (ed) Cellular and Molecular
Toxicology (Second Edition) Volume 2 New York Elsevier Science Inc 2010 145 - 67
14 Yessoufou A Wahli W Multifaceted roles of peroxisome proliferator-activated receptors (PPARs) at the
cellular and whole organism levels Swiss Med Wkl 2010140w13071 doi104414smw201013071
15 Azhar S Peroxisome proliferator-activated receptors metabolic syndrome and cardiovascular disease
Future Cardiology 20106(5)657-91
16 Andries G Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity
Diabetes and Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(Suppl)24-32
17 Zandbergen F Plutzky J PPARalpha in atherosclerosis and inflammation Biochim Biophys Acta
20071771(8)972-82
18 Straus DS Glass CK Anti-inflammatory actions of PPAR ligands new insights on cellular and molecular
mechanisms Trends Immunol 200728(12)551-8
19 Zlei M Zugun- Eloae F Carasevici E Citometrie icircn flux - Bază şi clinică Icircn Hinescu ME (ed) Citometrie icircn
flux - principii şi aplicaţii clinice Bucureşti Editura Viaţa Medicală Romacircnească 20111-128
20 Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity Diabetes and
Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(9)24-32
21 Woerly G Honda K Loyens M et al Peroxisome proliferator-activated receptors alpha and gamma down-
regulate allergic inflammation and eosinophil activation J Exp Med 2003198(3)411-21
22 Salle-Saumont D Brenuchon C Kanda A et al Peroxisome proliferator-activated receptor alpha regulates
skin inflammation and humoral response in atopic dermatitis J Clin Allergy Immunology 2008 21(4)962-8
23 Schote A Turner J Schiltz J et al Nuclear receptors in human immune cells expression and correlations
Mol Immunolog 200744(6)1436-45
24 DAmore S Vacca M Graziano G et al Nuclear receptors expression chart icircn peripheral blood
mononuclear cells identifies patients with Metabolic Syndrome Biochim Biophys Acta
20131832(12)2289-301
25 Uthurralt J Gordish-Dressman H Bradbury M T et al PPARalpha L162V underlies variation in serum
triglycerides and subcutaneous fat volume in young males BMC Med Genet 2007855
26 Hiukka A Leinonen ES Jauhiainen M et al Long-term effects of fenofibrate on VLDL and HDL
subspecies icircn participants with type 2 diabetes mellitus Diabetologia 2007 50(10)2067-75
27 Robins SJ Rubins HB Faas FH et alInsulin resistance and cardiovascular events with low HDL
cholesterol The Veterans Affairs HDL Intervention Trial (VA-HIT) Diabetes Care 2003 26(5)1513-7
28 Devaraj S Siegel D Jialal I Statin Therapy in Metabolic Syndrome and Hypertension Post-JUPITER
What is the Value of CRP Curr Atheroscler Rep 2011 13(1) 31ndash42
29 Imperatore G Riccardi G Iovino C et al Plasma Fibrinogen A New Factor of the Metabolic Syndrome A
population-based study Diabetes Care 19982 1(4)649-54
30 Krysiak R Gdula-Dymek A Bachowski R Okopien B Pleiotropic effects of atorvastatin and fenofibrate
in metabolic syndrome and different types of pre-diabete Diabetes Care 201033(10)2266-70
31 Hermans MP Impact of Fenofibrate on Type 2 Diabetes Patients with Features of the Metabolic Syndrome
Subgroup Analysis From FIELD Curr Cardiol Rev 20106(2)112-8
32 Silverstein R Inflammation atherosclerosis and arterial thrombosis Role of the scavenger receptor CD36
Cleveland Clinic Journal of Medicine 200976(Suppl 2)S27-S30
33 Hăncu N Obezitatea In Vereşiu IA (ed) Diabetul zaharat nutritia si bolile metabolice Volume 2 Editura
Echinox Cluj- Napoca 2010 1-15
Lista lucrări publicate
1 Elena Popa Maria Maidaniuc Agnes Bacusca Alamir Diaa Rodica Petrovanu Adorata Elena
Coman Disfuncţia endotelială ndash de la mecanisme moleculare la cuantifi care şi tratament icircn practica
medicală Practica Medicală 20149(3) 109-14
2 Elena Popa Agnes Bacusca Alamir Diaa Maria Maidaniuc Rodica Petrovanu Adorata Elena Coman
The function of insulin receptor (IRF) in evolution of obesity correlation with adipocytes diameters
Archives of the Balkan Medical Union 201449(3) 275-9
3 Elena Popa Florin Zugun-Eloae Mihaela Zlei Daniela Jitaru Oana Maria Pintilie Adorata Elena
Coman Maria Traian Didona Anca Ungureanu Eugen Carasevici - acceptata pentru numarul 42014
Flow cytometry analysis of PPAR-alpha receptors in metabolic syndrome) Revista Romană de
Medicină de Laborator(RRLM-D-14-00034R1- adeverinţa ataşată
cele două loturi icircn ceea ce priveşte expresia PPARα la nivelul Mo circulante (t- Test P=
069)
Studiul receptorilor PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de AHC şi dislipidemie
Nivelul de expresie al receptorilor PPARα α icircn Mo tinde să fie mai scăzut la subiecţii
cu AHC de HTA comparativ subiecţii care nu au declarat AHC de HTA (P= 006 fig 515)
AHC HTA
Număr 22
Mediana 19950
Percentila 25 17800
Percentila 75 22700
AHC HTA absente
Număr 35
Mediana 24800
Percentila 25 19025
Percentila 75 31700
Figura 515 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Mo funcţie de AHC de HTA
Nu s-au calculat diferenţe semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor
PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de dislipidemie atunci cacircnd aceştia au fost comparaţi cu
subiecţii fără AHC de tulburări ale metabolismului lipidic (t- Test P= 020)
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn limfocite
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn populaţia de Ly a
demonstrat prezenţa receptorilor PPARα icircn Ly tuturor subiecţilor studiaţi Pentru toţi
participanţii investigaţi analiza MFI a Ac anti - PPARα icircn populaţia de Ly a relevat un
interval de variaţie icircntre [748 314] iar valoarea medie a MFI a fost de 18058 plusmn 5600
Pentru ambele loturi aplicarea testului Shapiro-Wilk a evidenţiat distribuţia normală a
valorilor determinate pentru nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Ly Pentru
pacienţii cu SM valoarea medie a MFI determinată pentru expresia PPARα icircn populaţia de
Ly a fost de 18178 plusmn 61 16 iar pentru lotul martor a fost de 16800 plusmn 5229
Tabel XXX Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn limfocite
Lot SM Lot Non-SM
N 26 31
Media 181781 179574
SD 611694 522907
Mediana 165000 168000
Minimum 81300 74800
Maximum 314000 301000
Percentila 25 13400 - 145750
Percentila 75 21800 21700
Distribuţia frecvenţei valorilor MFI a Ac anti-PPARα icircn Ly este redată icircn figura 518
Figura 518 Distribuţia frecvenţelor relative a MFI a Ac anti-PPARα icircn Ly
94 din determinările efectuate pentru determinarea nivelului de expresie relativă al
MFI
ant
iPPA
R
a_Mo
190
200
210
220
230
240
250
260
270
280
DA NU
AHC HTA
P=006
50 89 128 167 206 244 283 322 361 400
0
5
10
15
20
25
30
35
MFI anti-PPAR a
Frecv
enta
relati
va (
)
Lot SM
0 50 100 150 200 250 300 350
0
5
10
15
20
25
30
35
40
MFI anti-PPAR a
Frec
venta
relat
iva (
)
Lot Non-SM
receptorilor PPARα icircn limfocitele subiecţilor cu SM s-au icircncadrat icircn intervalul Media plusmn 2DS
Figura 5 19 Lot SM Variaţia expresiei
relative a PPARα icircn Ly
Număr pacienţi 26
Minimum 813
Maximum 31400
Media 18178
Deviaţia Standard 6116
25 valori s-au icircncadrat icircn Media plusmn 2DS
Pentru lotul Non-SM diagrama de control (figura 520) a arătat toate valorile
determinate pentru lotul Non-SM se icircncadrează icircntre LCS şi LCI
Figura 520 Lot Non -SM Variaţia
expresiei relative a PPARα icircn Ly
Număr pacienţi 31
Minimum 748
Maximum 30100
Media 179574
Deviaţia Standard 5229
96 din valori icircncadrate icircn Media plusmn 2DS
Aplicarea testului t-Student pentru valorile medii ale intensităţii de fluorescenţă ale
PPARα icircn Ly nu a arătat existenţa unei diferenţe statistic semnificative icircntre lotul cu SM şi
lotul martor(t- Test P= 088)
Analiza receptorilor PPARα icircn Ly subiecţilor cu AHC de HTA şi dislipidemie
Studiind populaţiile de Ly la subiecţii care au prezentat AHC de hipertensiune
arterială analiza flowcitometrică a relevat existenţa unor valori mai mici pentru MFI la aceşti
subiecţi comparativ cu cei fără AHC de HTA (fig 522) deşi scăderea observată nu a
icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică (t- Test P = 009)
AHC HTA
Număr 22
Mediana 16000
Percentila 25 12700
Percentila 75 17100
AHC HTA absenţe
Număr 35
Mediana 18700
Percentila 25 14900
Percentila 75 23175
Figura 522 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Ly funcţie de AHC de HTA
Nu am calculat diferenţe statistic semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor
PPARα icircn populaţiile de Ly ale subiecţilor la care am identificat AHC de dislipidemie
comparativ cu cei care nu au declarat antecedente familiale de dislipidemie (t- Test P= 051)
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn neutrofile (PMN)
Analiza flowcitometrică a evidenţiat prezenţa PPARα icircn PMN recoltate din sacircngele
venos al tuturor participanţilor la studiu Pentru toţi subiecţii investigaţi analiza MFI a Ac -
PPARα icircn populaţia de PMN a relevat un interval de variaţie de [163419] iar valoarea medie
a MFI pentru Ac anti-PPARα a fost de 26392 plusmn 7064 Testul Shapiro-Wilk a arătat o
distribuţie normală a valorilor intensităţii medii de fluorescenţă a anticorpilor anti-PPARα atacirct
icircn lotul pacienţilor cu SM cacirct şi icircn lotul martor
1 6 11 16 21 26 31
-50
0
50
100
150
200
250
300
350
400
MFI
anti-
PPAR
a
1818
595
3041
-17
3653
Media+2DS
Media- 2DS
1 6 11 16 21 26 31 36
0
50
100
150
200
250
300
350
MFI
ant
i-PPA
R
a
1796
750
2841
227
3364
Media+2DS
Media
Media- 2DS
MFI
anti-
PPAR
a Ly
130
140
150
160
170
180
190
200
210
DA NU
AHC HTA
P=009
Tabel XXXII Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn PMN
Lot SM Lot Non-SM
N 26 31
Media 26273 26480
SD 6915 7088
Mediana 25900 25500
Minimum 17200 16300
Maximum 39500 41900
Percentila 25 19800 19600
Percentila 75 30500 31500
Icircn cele două loturi distribuţia frecvenţei valorilor nivelului relativ de expresie a
receptorilor PPARα icircn PMN a fost reprezentată sub formă de histograme (fig 525)
Figura 525 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti-PPARα icircn PMN
Pentru cei 26 de pacienţi din lotul cu SM a valoarea medie a nivelului de expresie
relativă a receptorilor PPARα icircn PMN a fost de 26273 plusmn 6915 Studiind diagrama Shewhart
din figura 526 se observă că toate valorile obţinute pentru nivelul de expresie relativă
PPARα icircn PMN investigate se icircncadrează icircntre limitele definite de valorile medii plusmn 2DS
Figura 526 Lot SM
Variaţia expresiei relative a PPARα icircn
PMN
Număr pacienţi 26
Minimum 17200
Maximum 39500
Media 26273
Deviaţia Standard 6915
Valorile MFI icircncadrate icircn Media plusmn 2DS
Pentru lotul martor valoarea medie calculată a MFI a anticorpilor anti-PPARα a fost de
26480 plusmn 7088 peste 95 din valorile MFI fiind cuprinse icircn Media plusmn 2DS (figura 527)
Figura 527 Lot Non-SM Variaţia expresiei
relative a PPARα icircn PMN
Număr pacienţi 31
Minimum 16300
Maximum 41900
Media 26480
Deviaţia Standard 7088
30 valoriicircn Media plusmn 2DS
Pentru PMN analiza statistica nu a arătat existenţa unei diferenţe statistic semnificative icircntre
nivelul de expresie relativă a PPARα la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii din lotul
Non-SM (t- Test P= 090) Studiind populaţiile de PMN la subiecţii care au prezentat AHC
de HTA nu am calculat o diferenţă statistic semnificativă icircntre expresia receptorilor PPARα
la subiecţii cu istoric familial de hipertensiune arterială comparativ cu cei pentru care nu s-au
notat AHC de HTA (t- Test P= 013)De asemenea am identificat diferenţe icircntre nivelul de
expresie al PPARα icircn PMN subiecţilor care prezentau AHC de dislipidemie comparativ cu
cei fără AHC de dislipidemie (t- Test P= 017)
50 100 150 200 250 300 350 400 450 500
0
5
10
15
20
25
30
35
MFI anti-PPAR a
Frecve
nta rel
ativa (
)
Lot SM
50 100 150 200 250 300 350 400 450 500
0
5
10
15
20
25
30
MFI anti-PPAR a
Frecv
enta
relati
va (
)
Lot Non-SM
1 6 11 16 21 26 31
0
50
100
150
200
250
300
350
400
450
500
MFI
anti-
PPA
R
a
2627
1244
4010
553
4702
Media + 2DS
Media - 2 DS
Media
1 6 11 16 21 26 31 36
0
50
100
150
200
250
300
350
400
450
500
MFI
anti-
PPAR
a
2648
1230
4066
522
4774
Media+ 2DS
Media - 2DS
Media
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile Tabel XXXIV Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn Eo
Lot SM Lot Non-SM
N 26 31
Mediaplusmn SD 141057 plusmn 47604 172209 plusmn 37565
Mediana 142450 171300
Minimum 35000 68500
Maximum 233700 250600
Percentila 25 119300 153225
Percentila 75 169700 199550
Am studiat nivelul relativ de expresie a receptorilor PPARα icircn Eo iar rezultatele au
fost figurate sub forma de histograme (figura 532)
Figura 532 Distribuţia frecventelor relative ale valorilor MFI anti- PPARα icircn Eo
Din diagrama Shewhart (figura 533) se observă că toate valorile determinate pentru
nivelul de expresie relativă a PPARα icircn Eo pentru lotul SM s-au icircncadrat icircn [Media plusmn 3 DS]
peste 90 din determinări fiind cuprinse icircn [Media plusmn 2 DS] iar icircn [Media plusmn 1 DS] sunt
incluse peste 65 din valorile MFI
Figura 533 Lot SM
Variaţia expresiei relative a PPARα icircn Eo
Număr pacienţi 26
Minimum 35000
Maximum 233700
Media 141057
Deviaţia Standard 47604
24 valori icircncadrat eicircn [Media plusmn 2DS]
Pentru subiecţii incluşi icircn lotul martor analiza diagramei (figura 534) a arătat că
toate cele 31 de valori ale MFI pentru PPARα icircn Eo se icircncadrează icircn [Media plusmn 3DS] iar 30
dintre acestea se icircncadrează icircn [ Media plusmn 2 DS]
Figura 534 Lot Non -SM
Variaţia expresiei relative a PPARα icircn Eo
Număr pacienţi 31
Minimum 685
Maximum 2506
Media 172209
Deviaţia Standard 375 65
30 valori icircncadrate icircn [Media plusmn 2DS]
Comparacircnd subiecţii cu SM cu cei din lotul martor am observat o scădere
semnificativă statistic a MFI a Ac anti - PPARα icircn Eo pentru pacienţiir cu SM ( figura 535)
PPARα Eo Lot Non-SM
Număr 31
Mediana 171300
Percentila 25 152325
Percentila 75 199550
PPARα Eo Lot SM
Număr 26
Mediana 142450
Percentila 25 119300
Percentila 75 169700
Figura 5 35 Comparaţie icircntre nivelul de expresie a PPARα icircn Eo
0 500 1000 1500 2000 2500 3000
0
10
20
30
40
50
MFI anti-PPAR a
Frecvent
a relativa
()
Lot SM
400 800 1200 1600 2000 2400 2800
0
5
10
15
20
25
30
35
40
45
MFI anti-PPAR a
Frecenta
relativa
()
Lot Non-SM
1 6 11 16 21 26 31
-500
0
500
1000
1500
2000
2500
3000
MFI a
nti-PP
AR
a
14106
4765
23447
94
28117
Media + 2DS
Media- 2DS
LCI
LCS
1 6 11 16 21 26 31 36
500
1000
1500
2000
2500
3000
MFI an
ti-PPA
R a
17221
9708
24734
5951
28490
LCI
Media-2DS
Media
Media +2 DS
LCS
1200
1300
1400
1500
1600
1700
1800
1900
Lot SM Lot Non-SM
P=00072
Cu ajutorul curbei ROC am evaluat posibilitatea utilizării MFI a Ac anti - PPARα icircn
Eo ca marker pentru diagnosticul SM Valoarea MFI a Ac anti - PPARα icircn Eo care prezice cu
cea mai mare acurateţe prezenţa SM a fost de 1533 (punctul de ldquocut-offrdquo) pentru care am
calculat o sensibilitate de 5652 şi o specificitate de 7778 Calculul ariei AUC a furnizat
valoarea de 0663 şi deci determinarea parametrului MFI anti- PPARα icircn Eo are valoarea
unui test cu acurateţe redusatilde icircn diagnosticul SM Studiind expresia PPARα icircn Eo la subiecţii
care au prezentat AHC de HTA am observat o scădere semnificativă statistic (P = 00023) a
expresiei PPARα la subiecţii cu istoric familial de HTA comparativ cu subiecţii fatilderatilde AHC de
HTA (figura 537)
AHC HTA
Număr 22
Mediana 148800
Percentila 25 116425
Percentila 75 170750
AHC HTA absente
Număr 35
Mediana 170850
Percentila 25 143700
Percentila 75 195000
Figura 537 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Eo funcţie de AHC de HTA
Studiind subiecţii cu AHC declarate de dislipidemie nu am identificat diferenţe icircntre
nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Eo subiecţilor cu AHC de dislipidemie
comparativ cu cei care nu au declarat prezenţa AHC de dislipidemie (t - Test P = 067)
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor CD36
Am studiat expresia receptorilor CD36 icircn Mo subiecţilor incluşi icircn studiu
Lot Non - SM
BLot SM
Figura 539 Analiza flowcitometrica pentru receptorii CD36 icircn Mo
Pentru toţi participanţii la studiu valorile MFI au variat icircn intervalul [817 6933] iar
valoarea medie a MFI a Ac anti-CD36 a fost de 397133 plusmn 120902 Tabel XXXVII Statistică descriptivă pentru a CD36 icircn Mo
Lot SM Lot Non-SM
Media 429034 370377
Deviatia Standard 109051 125514
Mediana 411000 362800
Minimum 266400 81700
Maximum 693300 616800
Percentila 25 346200 273750
Percentila 75 469000 453300
Distribuţia frecvenţelor relative a MFI au fost prezentate sub formă histogramelor
Figura 541 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti - CD36 icircn Mo
MFI
ant
i-PPA
R a Eo
1000
1100
1200
1300
1400
1500
1600
1700
1800
1900
DA NU
AHC HTA
P=00023
1000 2000 3000 4000 5000 6000 7000 8000
0
5
10
15
20
25
MFI anti-CD36
Frecve
nta rela
tiva (
)
Lot SM
0 1778 3556 5333 7111
0
5
10
15
20
25
30
35
MFI anti-CD36
Frecve
nta rel
ativa (
)
Lot Non - SM
Referitor la lotul SM 92 din valorile MFI a Ac anti- CD36 s-au icircncadrat icircn
intervalul Media plusmn 2 DS (figura 542) iar pentru lotul martor peste 90 dintre acestea icircn
Media plusmn 2 DS (figura 543)
Figura 542 Lot SM
Variaţia MFI anti-CD36 icircn Mo
Număr pacienţi 26
Minimum 2664
Maximum 6933
Media 429034
Deviaţia Standard 109051
Figura 543 Lot Non -SM
Variaţia MFI anti- CD36 icircn Mo
Număr 31
Minimum 81700
Maximum 616800
Media 370377
Deviaţia Standard 125514
Comparacircnd subiecţii cu SM cu cei din lotul normal am constatat o tendinţă de creştere
a expresiei CD36 icircn lotul cu SM((t - Test P= 0067)
MFI anti - CD36 Lot Non-SM
Număr 31
Mediana 3628
Percentila 25 2737
Percentila 75 4533
MFI anti - CD36 Lot SM
Număr 26
Mediana 4110
Percentila 25 3462
Percentila 75 4690
Figura 544 Comparaţie icircntre cel două loturi privind MFI anti - CD36 icircn Mo
Referindu-ne la subiecţii cu AHC de HTA am observat o tendinţă de creştere a
valorilor MFI anti-CD36 comparativ cu cei care nu au avut AHC de HTA (t - Test P = 0 08)
AHC HTA
Număr 22
Mediana 442800
Percentila 25 355275
Percentila 75 519475
AHC HTA absenţe
Număr 35
Mediana 377400
Percentila 25 316900
Percentila 75 443400
Figura 545 Comparaţie icircntre expresia CD36 icircn Mo funcţie de AHC de HTA
Nu s-au calculat diferenţe semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor
PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de dislipidemie atunci cacircnd aceştia au fost comparaţi cu
subiecţii fără AHC de dislipidemie (t - Test P=031)
Corelaţii icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα si CD36
Studiind valorile intensităţii medii de fluorescenţă a Ac anti-PPARα icircn Mo Ly şi
PMN am observat că nivelul de expresie celularatilde a PPARα icircn Mo Ly şi PMN sunt corelate
puternic pozitiv atacirct icircn lotul SM cacirct şi icircn lotul martor(fig547 548)
1 6 11 16 21 26 31
0
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
Pacienti
MFI a
nti-CD
36
42903
21093
64714
10188
75619
LCI
Media
LCS1 6 11 16 21 26 31 36
-1000
0
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
MFI a
nti- C
D36
37038
11935
62141
-616
74692Media + 2 DS
Media
Media - 2 DS
3200
3400
3600
3800
4000
4200
4400
4600
4800
Lot SM Lot Non-SM
P = 00676
MFI
anti-
CD36
3400
3600
3800
4000
4200
4400
4600
4800
5000
DA NU
AHC HTA
P = 008
Figura 547 Studiul relatiilor dintre
receptorii PPARα icircn SM A Mo vs PMN B Mo vs Ly
C PMN vs Ly Graficul ilustrează coeficienţii r P dreapta de
regresie (linia centrala) intervalul de icircncredere
95 şi intervalul de predicţie 95
Figura 548 Corelaţii icircntre receptorii PPARα icircn lotul
martor
A Mo vs PMN
B Mo vs Ly
C PMN vs Ly
Tot pentru lotul SM cacircnd am evaluat relaţia dintre nivelul de expresie relativă a
receptorilor PPARα icircn Eo şi nivelul de expresie relativa a receptorilor CD 36 am obţinut o
corelaţie negativă (r = - 05 P = 001) (fig 549 A)
50 100 150 200 250 300 350 50
100
150
200
250
300
350
400
450
500
PPARα Ly
PPARα PMN
y = 56641 + 1159 x r = 086 P lt 0001
C
50 100 150 200 250 300 350 400 0
50
100
150
200
250
300
350
PPARα Mo
PPARα Ly
y = 36665 + 0607 x r = 090 P lt 0001
B
150 200 250 300 350 400 450 0
50 100 150 200 250 300 350 400 450 500
PPARα PMN
PPARα Mo
y = 2505 + 0879 x r = 081 P lt 0001
A
50 100 150 200 250 300 350
50 100 150 200 250 300 350 400 450 500
PPARα Ly
PPARα PMN
y = 95668 + 0919 x r = 081 P lt 0001
C
100 150 200 250 300 350 400
0
50
100
150
200
250
300
350
400
PPARα Mo
PPARα Ly
y = -7503 + 0829 x r = 079 P lt 0001
B
100 150 200 250 300 350 400
50
100
150
200
250
300
350
400
450
500
PPARα Mo
PPARα PMN
y = 61384 + 0882 r = 074 P lt 0001
A
Figura 549 Corelaţii icircntre expresia PPARα icircn Eo şi alte tipuri de receptori investigaţi A PPARα Eo şi CD 36 (Lot SM) B PPARα Eo şi PPARα Mo( Lot Non-SM)
Icircn lotul martor am identificat o asociere moderată pozitivă (r = 038 P = 0033) icircntre
nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Eo şi Mo (figura 549B) corelaţie absentă icircn
lotul pacienţilor cu SM
Corelaţii dintre receptorii studiaţi şi componentele sindromului metabolic
Icircn lotul de control analiza statistică a relevat faptul că icircntre circumferinţa
abdominală (CA ) şi nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Mo Ly şi PMN există o
corelaţie inversă adică scăderea expresiei PPARα la nivelul acestor populatii celulare ar fi
icircnsoţită de creşterea CA (figura 550
Figura 550Corelaţii dintre receptorii
PPARα si CA A Mo B Ly C PMN
La pacienţii cu SM am notat o corelatie moderată negativă statistic semnificativă
icircntre TG şi valorile MFI a Ac anti- PPARα icircn Mo şi Ly( fig 551)
150 200 250 300 350 400 450 50
60
70
80
90
100
110
PPARα PMN
CA r = - 040 P = 0024
C
50 100 150 200 250 300 350 50
60
70
80
90
100
110
PPARα Ly
CA r = - 046 P = 0009
B
50 100 150 200 250 300 350 400 50
60
70
80
90
100
110
PPARα Mo
CA r = - 042 P = 0017
A
50 100 150 200 250 300 350 400 500
1000
1500
2000
2500
3000
PPARα Mo
PPARα Eo
r = 038 P = 0033
B
0 500 1000 1500 2000 2500 1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
PPARα Eo
CD36
r = 050 P = 0010
A
Figura 551 Lot SM Corelaţie icircntre expresia PPARα şi TG (A Mo B Ly)
Analizand corelatia dintre receptorii CD36 si valorile TA la pacientii cu SM am observat
o asociere pozitivă asteptată intre TAD si nivelul de expresie al receptorilor CD36 (fig 552)
Figura 552 Lot SM Corelaţii icircntre expresia
receptorilor CD36 şi valorile tensiunii arteriale
diastolice
Studiind corelaţiile dintre receptorii PPARα şi HDL-col la subiecţii din lotul martor am
notat o asociere pozitivă icircntre expresia PPARα icircn Mo şi Ly cu HDL-col (fig 553)
Figura 553 Lot martor Corelaţii icircntre HDL-col şi expresia PPARα icircn Mo(A) Ly(B)
Icircn lotul normal am evidenţiat corelaţii pozitive moderate dar semnificative statistic icircntre
CA şi valorile TAS (r = 062 P lt 0001) respectiv TAD (r = 050 P=0004) precum şi icircntre
CA şi glicemia subiecţilor normali (r = 052 P = 0003) Aceste date icircmpreună cu relaţia
invers proporţională identificată icircntre HDL-col şi CA (r = 050 P = 001) susţin validitatea
acestui studiu Icircn lotul subiecţilor cu SM am observat o corelaţie moderat pozitivă icircntre
expresia PPARα icircn populaţiiile de Mo şi Eo şi concentraţia a HDL-col (fig 554)
B
100 150 200 250 300 350 20
30
40
50
60
70
80
90
100
PPARα Ly
HDL-col-(mgdl)
r = 036 P = 0046
A
150 200 250 300 350 400 20
30
40
50
60
70
80
90
100
PPARα Mo
HDL-col-(mgd)l
r = 035 P = 005
70 75 80 85 90 95 100 1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
TAD (mmHg)
CD36
r = 048 P = 0013
B
50 100 150 200 250 300 350 -100
0
100
200
300
400
500
PPARα Ly
TG(mgdl)
r = - 042 P = 003
A
50 100 150 200 250 300 350 400 -100
0
100
200
300
400
500
PPARα Mo
TG ( mgdl) r =- 0 43 P = 0027
Figura 554 Corelaţii icircn SM icircntre HDL-col şi expresia PPARα icircn Mo (A) şi Eo(B)
Corelaţii icircntre nivelul de expresie relativă a PPARα şi markeri ai disfuncţiei
endoteliale şi inflamaţiei cronice
Deşi nu a icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică am reţinut corelaţia invers
proporţională (r = - 0331 P = 006) dintre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα
icircn PMN şi concentraţia serică a Non-HDL-colesterolului
Studiind relaţiile dintre parametri icircn lotul de pacienţi cu SM am observat o corelaţie
moderată invers proporţională icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Eo şi
acidul uric seric (figura 555 A) corelaţie absentă la subiecţii fără SM
Figura 555 Lot SM corelaţia dintre expresia PPARα icircn Eo şi acidul uric (A) respectiv
PPARα şi fibrinogen (B)
Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P=008) am notat pentru
pacienţii cu SM corelaţia invers proporţională dintre expresia PPARα icircn Eo şi concentraţia
serică a fibrinogenului ( figura 555B)
V5 Discuţii
Icircn cadrul lucrării de doctorat am studiat nivelul de expresie relativă a PPARα icircn
leucocitele pacienţilor cu SM comparativ cu cea a subiecţilor normali Expresia PPARα a fost
studiată icircn paralel cu cea a CD36 glicoproteină exprimată pe suprafaţa a numeroase celule
din organismul uman inclusiv pe cea a Mo şi macrofagelor Prin funcţia sa de receptor pentru
particulele oxidate de LDL CD36 cunoscut ca bdquoscavenger receptorrdquo de clasa B sau
bdquotrombospodin receptorrdquo contribuie la dezvoltarea inflamaţiei de la nivel endotelial şi
formarea plăcii de ateroscleroză Referitor la studiul PPARα icircn Eo icircn sindromul metabolic
menţionăm că studiul nostru este primul care arată că nivelul de expresie a proteinei PPARα
icircn Eo măsurat prin citometrie icircn flux este semnificativ mai redus la pacienţii care sunt
diagnosticaţi cu acest sindrom De asemenea icircn lotul cu SM cercetat icircn cadrul studiului
receptorilor PPARα numărul Eo circulante a fost semnificativ mai crescut la pacienţii cu SM
B
0 500 1000 1500 2000 2500 200
250
300
350
400
450
PPARα Eo o
Fibrinogen mgdl
r =- 036 P = 008
0 500 1000 1500 2000 2500 1 2 3 4 5 6 7 8 9
10 11
PPARα Eo_
Acid uric(mgdl) r = 048 P = 0014 A
0 500 1000 1500 2000 2500 10
20
30
40
50
60
70
80
PPARα Eo
HDL(mgdl)
r = 044 P = 0024
B
100 150 200 250 300 350 400 10
20
30
40
50
60
70
80
PPARα Mo
HDL( mgdl)
r = 046 P = 0019
A
(P = 003) Aceste constatări conduc la ipoteza că Eo joacă un rol special icircn mecanismele
patogenice declanşate icircn sindromul metabolic şi că receptorii PPARα sunt importanţi icircn
implicarea Eo icircn obezitate şi insulinorezistenţă Creşterea numărului de Eo circulante este
urmată de eliberarea mediatorilor proinflamatori iar reducerea expresiei PPARα icircn Eo
determină perturbarea mecanismelor de control al inflamaţiei cu exacerbarea cascadei
proinflamatorii Consecutiv se agravează disfuncţia endotelială şi se accelerează progresia
leziunilor de ateroscleroză Extrapolacircnd aceste ipoteze putem spune că asocierea raportată
dintre boala ischemică coronariană şi Eo poate fi şi consecinţa exacerbării cascadei
proinflamatorii de la nivel vascular produsă datorită scăderii expresiei PPARα icircn Eo iar
creşterea numărului de Eo circulante poate reprezenta o adaptare a organismului uman care
icircncearcă să suplinească deficitul de receptori PPARα Analizacircnd curba ROC pentru
intensităţile medii de fluorescenţă determinate pentru anticorpii anti- PPARα icircn Eo am
obţinut pentru acest biomarker o sensibilitate a testului de 565 şi o specificitate de 778
pentru un punct de cut-off de 1533 ( figura 536 ) Deşi aria AUC (Aria under the curve) egală
cu 0663 icircncadrează acest test ca avacircnd o acurateţe redusă observăm că că această valoare
este apropiată de determinările AUC pentru alţi factori (fibrinogen raport de aterogenitate
acid uric non- HDL-colesterol) cunoscuţi ca fiind implicaţi icircn aterogeneză şi inflamaţia
cronică (figura 431) Aceste remarci alături de faptul că icircn studiul receptorilor PPARα icircn
leucocite am inclus subiecţi la primul diagnostic de SM creează premisa integrării
determinării expresiei relative a receptorilor PPARα icircn diagnosticul complex al sindromului
metabolic Putem spune că icircn final studiul expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofilele
circulante se dovedește a fi util icircn diagnosticul precoce la nivel molecular al SM permiţacircnd
identificarea timpurie a unor indivizi cu risc cardiometabolic crescut Astfel intervenţia
precoce asupra subiecţilor cu deficit de PPARα icircn Eo contribuie la managementul eficient al
afecţiunilor degenerative icircn care inflamaţia cronică icircndeplineşte un rol primordial Referitor
la populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările efectuate prin citometrie de flux nu au
arătat existenţa unor diferenţe statistice icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα
la subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali Rezultatele noastre pot fi
consecinţa caracteristicilor loturilor studiate (icircn studiul nostru au fost incluşi subiecţi recrutaţi
la primul diagnostic de SM şi icircn absenţa stimulării receptorilor PPARα cu droguri agoniste
PPARα) dar icircn acelaşi timp pot apare diferenţe datorită metodei utilizate (231 232 233)
Făcacircnd o paralelă cu un studiu publicat icircn 2013 icircn Europa (231) care a arătat creşterea
nivelului de expresie al PPARα icircn Ly şi Mo observăm că deşi numărul de subiecţi a fost
aproximativ egal (57 participanţi icircn studiul nostru 60 icircn studiul DAmore) subiecţii icircn studiul
amintit au fost recrutaţi dintr-o clinică cu profil medical la primul diagnostic de SM icircn timp
ce metoda utilizată a fost PCR (Polymerase Chain Reaction) mult mai fidelă decacirct citometria
icircn flux icircn studiul receptorilor nucleari De asemenea DAmore nu investighează expresia
PPARα icircn Eo şi PMN icircn cercetare fiind incluse doar celulele CD14+ (predominant Mo) şi
CD14- (predominant Ly) Deşi nu am obţinut diferenţe statistic semnificative icircntre cele două
loturi referitoare la nivelul de expresie relativă a PPARα icircn Mo Ly şi PMN am observat
corelaţii puternice semnificative statistic icircntre expresia receptorilor PPARα icircn aceste tipuri
celulare Rezultatele obţinute sugerează existenţa unui mecanism diferit molecular de control
icircn eozinofile care reglează cantitatea de proteină PPARα icircn eozinofile versus alte tipuri de
leucocite (la pacienţii cu SM) şi acest lucru este icircn concordanţă cu cercetările care descriu
expresia PPARα mRNA icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale
bronşice keratinocite) Studiind prin citometrie de flux nivelul de expresie relativă a
receptorului CD36 la nivelul Mo am arătat prezenţa acestuia icircn Mo tuturor subiecţilor
investigaţi Analizacircnd valorile intensităţii medii de fluorescenţă a CD36 icircn loturile studiate
am observat o tendinţă de creştere la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali
confirmacircnd implicarea receptorului CD36 icircn patogeneza acestuia Referitor la expresia
receptorului CD36 rezultatele obţinute sunt icircn consens cu studii anterioare care au arătat
creşterea expresiei CD36 la pacienţii cu SM şi diabet zaharat Astfel pe lacircngă diferenţa icircn
expresia CD36 s-au raportat şi corelaţii inverse icircntre expresia proteinei CD36 şi nivelul
adiponectinei Acelaşi studiu a evidenţiat o corelaţie pozitivă intre expresia CD36 cu expresia
receptorilor PPAR gamma relaţia cu PPARα nefiind investigată
Analiza de subgrup a relaţiilor dintre componentele SM și elementele moleculare
proinflamatorii studiate a relevat prezenţa unor asocieri semnificativ statistice icircntre acestea
Se argumentează astfel că veridicitatea studiului este susţinută de interdependenţele statistice
ale componentelor SM Determinarea coeficientului de corelaţie Icircn studiul nostru nivelul de
expresie relativă a PPARα s-a corelat moderat negativ (figura 550) cu CA a subiecţilor din
lotul normal pentru populaţiile celulare de Mo (r = - 0420 P = 001) Ly (r = - 046 P =
0009) şi PMN (r = - 040 P = 0024) date care sunt icircn concordanţă cu studiile care arată
rolul PPARα icircn furnizarea energiei prin beta-oxidarea acizilor graşi Icircn acelaşi timp icircn lotul
pacienţilor cu SM nu am identificat prezenţa unei asocieri icircntre nivelul de expresie relativă a
PPARα şi valoarea măsurată a CA Asocierea dintre expresia relativă a PPARα cu obezitatea
de tip central completează datele existente referitoare la reglarea homeostaziei energetice
conturacircnd un mecanism de control deficitar al aportului caloric al SM Icircn condiţiile icircn care
rezultatele obţinute prin metoda citometriei icircn flux nu au arătat existenţa unei corelaţii intre
expresia PPARα şi CA la pacienţii cu SM considerăm că ar fi necesar studiul
polimorfismului genei PPARA care ar putea aduce informaţii importante cu privire la
implicarea acestor receptori icircn apariţia obezităţii de tip central Subliniem acest lucru deoarece
obezitatea este o boală plurifactorială icircn care pe lacircngă factorii ereditari sunt implicaţi factori
de mediu psihologici şi sociali (245) Existenţa unei componente genetice a aterosclerozei
este legată şi de prezenţa unor variante ale genei PPARA asociate cu creşterea incidenţei bolii
cardiovasculare (82) şi a SM (249) Icircn studiul nostru am constatat o scădere statistic
semnificativă a nivelului expresiei relative a receptorilor PPARα icircn Eo la subiecţii cu
antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială comparativ cu subiecţii fără istoric
familial de hipertensiune (figura 537) Deşi diferenţele calculate icircntre loturile studiate nu au
icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică la subiecţii care au declarat prezenţa
antecedentelor familiale de hipertensiune arterială remarcăm o tendinţă de scădere a
intensităţii medii de fluorescenţă pentru Ac anti-PPARα la nivelul Mo (figura 515 P = 006
) icircn timp ce expresia relativă a CD36 icircnregistrează o creştere la acesti subiecţi (figura 545 P
= 008) Icircn contextul riscului cardiovascular foarte icircnalt al pacienţilor cu SM amintim şi
existenţa corelaţiei pozitive dintre valorile tensiunii arteriale diastolice şi expresia relativă a
receptorului CD36 (r = 0483 P = 0013) Această constatare este icircn consens cu studiile care
au arătat că forma solubilă circulantă a CD36 este asociată cu factorii de risc cardiovasculari
fiind propusă ca un marker precoce al aterosclerozei Activarea PPARα este asociată cu
modularea metabolismului lipidic iar agoniştii PPARα sunt utilizaţi icircn mod curent pentru
tratamentul dislipidemiei Sub acţiunea agoniştilor PPARα se obţine o icircmbunătăţire a funcţiei
endoteliale şi a parametrilor reologici funcţiile pleiotropice ale agoniştilor PPARα fiind
dovedite icircn trialuri clinice controlate Icircn populaţiile de Mo şi Ly la pacienţii cu SM
cercetarea noastră a evidenţiat o asociere negativă icircntre nivelul de expresie relativă a
receptorilor PPARα şi concentraţia TG serice (figura 551) Astfel scăderea expresiei
receptorilor PPARα este asociată cu creşterea nivelului TG serice contribuind la profilul
lipidic aterogen din SM Icircn conformitate cu literatura de specialitate icircn studiul efectuat prin
metoda citometriei icircn flux am găsit prezenţa asocierii icircntre nivelul de expresie al PPARα şi
HDL-colesterol Corelaţia pozitivă dintre nivelul de expresie relativă PPARα şi concentraţia
HDL-colesterolului a fost observată icircn lotul martor icircn populaţiile de Mo (r = 035 P = 005)
şi Ly ( r = 036 P = 004) (figura 553) susţinacircnd faptul că stimularea receptorilor PPARα
este legată de creşterea nivelului seric al lipoproteinelor cu densitate crescută La pacienţii cu
SM corelaţia dintre expresia PPARα şi HDL-colesterol a fost evidenţiată icircn populaţiile de Mo
(r = 046 P = 0019) şi eozinofile (r = 044 P = 0024) Se desprinde concluzia că icircn
sindromul metabolic scăderea concentraţiei HDL-colesterol este legată de diminuarea
nivelului de expresie relativă a receptorilor nucleari PPARα icircntărind afirmaţiile legate de
rolul acestor receptori icircn progresia bolilor cardiovasculare Studiind reactanţii de fază acută
analiza statistică a relevat o diferenţă semnificativă din punct de vedere statistic icircntre valorile
fibrinogenului la pacienţii cu SM atunci cacircnd au fost comparaţi cu subiecţii fără SM
(Capitolul IV4 P lt0 001 figura 427A) De asemenea icircn Capitolul V dedicat studiul
expresiei relative a receptorilor PPARα studiul valorilor fibrinogenului a arătat creşterea
acestui reactant de faza acută icircn lotul cu SM comparativ cu lotul martor (P lt0 0001) Icircn
studiul nostru am calculat o corelaţie invers proporţionala (r = - -036 fig 555B) icircntre
nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile şi concentraţia serică a
fibrinogenului Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P = 008) am reţinut
această asociere deoarece am demonstrat că nivelul de expresie relativă al receptorilor
PPARα icircn eozinofile este mai scăzut icircn sindromul metabolic iar sindromul metabolic este
caracterizat printr-un status inflamator cronic status caracterizat şi de creşterea concentraţiei
serice a fibrinogenului De asemenea notam ca această corelaţie negativă se află icircn
concordanţă cu studiile care arata că tratamentul cu agonişti PPARα (fibraţi) determina
scăderea nivelului seric al fibrinogenului contribuind la diminuarea inflamaţiei cronice din
sindromul metabolic şi icircn consecinţă amelioracircnd insulinorezistenţa
LIMITE ȘI DIFICULTĂȚI IcircN CERCETARE
Icircn cadrul Tezei de Doctorat am desfăşurat o cercetare care şi-a propus studierea
expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Recrutarea anamneza şi examinarea
clinică a subiecţilor au fost realizate icircn cadrul Cabinetului de Medicină de Familie CMI Popa
Elena din Iaşi iar determinările hematologice şi biochimice s-au efectuat icircn cadrul
Laboratorului Ambulatorului de Specialitate al Spitalului Universitar ldquoSfacircntul Spiridon din
Iaşi Icircn studiul epidemiologic şi al markerilor inflamatori al sindromului metabolic desfăşurat
au fost incluşi un număr de 1530 de participanţi pe baza liberului consimţămacircnt examinaţi icircn
perioada 01012013 - 31122013 Icircn continuare icircn perioada 1012014 - 28022014 pe baza
criteriilor de includere şi excludere icircn cele două loturi de studiu am investigat un număr de 57
de subiecţi prezentaţi la consultaţie icircn această perioadă şi care au icircndeplinit criteriile de
includere icircn cele două loturi (Lot SM şi Lot Control) constituite pentru evaluarea nivelului de
expresie a receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Explorarea nivelului de expresie
relativă a receptorilor PPARα s-a desfăşurat icircn cadrul Laboratorului de Biologie Moleculară
de pe platforma Institutului Regional de Oncologie Datorită resurselor proprii financiare
limitate trebuie să subliniez că aceasta cercetare nu ar fi fost posibilă fără contribuţia unor
cercetători din domeniul medical care m-au sprijinit necondiţionat atacirct icircn elaborarea
protocolului de lucru cacirct şi icircn efectuarea propriu-zisă a studiului Icircn acest sens menţionăm şi
faptul că pentru studiul receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic am utilizat aparatura
Laboratorului de Biologie Moleculară (care deserveşte icircntreaga Regiune a Moldovei) Pe
această cale mulţumesc personalului Laboratorului de Biologie Moleculară pentru ajutorul
acordat icircn desfăşurarea cercetării doctorale icircn condiţiile icircn care se observa creşterea
numărului de pacienţi care se adresează acestei platforme de cercetare Mulţumesc de
asemenea şi Doamnei Doctor Elena Butoi din cadrul Institutului de Biologie şi Patologie
Moleculară ldquoNicolae Simionescurdquo Bucureşti) pentru donaţia anticorpului secundar anti-
FITC Icircn consecinţă pentru recrutarea unui număr mai mare de participanţi ar fi fost necesară
icircn primul racircnd obţinerea unor resurse financiare suplimentare pentru achiziţia de aparatură şi
reactivi Totuşi numărul subiecţilor recrutaţi este apropiat de numărul subiecţilor raportaţi icircn
cadrul unor granturi de cercetare care aveau ca ţinta studiul expresiei receptorilor PPARα
(212 227 228 231) Rezultatele obţinute continua seria lucrărilor care arata importanta
studiului mecanismelor etiopatogenice ale sindromului metabolic patologie care se afla icircntr-o
continuă creştere La pacienţii cu SM pe lacircngă diminuarea nivelului de expresie a receptorilor
PPARα icircn eozinofile ne aşteptam şi la evidenţierea unor modificări icircn expresia PPARα şi icircn
populaţiile de Ly Mo şi PMN Acest fapt poate fi explicat de utilizarea unor celule provenite
de la pacienţi fără afectare cardiovasculară fără diabet zaharat şi necesită continuarea
studiului pe culturi celulare icircn condiţii de stimulare cu agonişti PPARα deziderat care
impune continuarea investigării expresiei PPARα printr-un grant de cercetare
ORIGINALITATEA ȘI CONTRIBUȚIILE INOVATIVE ALE TEZEI DE
DOCTORAT PERSPECTIVE DE CERCETARE
Evaluarea nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn leucocitele circulante
aduce noi perspective icircn studiul obezităţii şi sindromului metabolic Importanta studiului
expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic derivă din prevalenta crescută a
sindromului metabolic icircn populaţia cercetată la care se adaugă riscul cardiovascular foarte
icircnalt al acestor pacienţi cu implicaţii majore icircn sănătatea publică Rolul receptorilor PPARα
icircn inflamaţie şi aterogeneza este binecunoscut dar studiul nostru este primul care a arătat că
nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα este semnificativ mai scăzut in populatiile
de eozinofile la pacienţii cu SM Această concluzie coroborata cu existenţa unei stracircnse
asocieri intre expresia receptorilor PPARα la nivelul Mo limfocitelor şi PMNlor creeaza
ipoteza existenţei unui mecanism de control diferit al expresiei PPARα la nivelul
eozinofilelor Această cercetare aduce informaţii importante referitoare la mecanismele
proinflamatorii care stau la baza insulinorezistenţei şi riscului cardiometabolic şi impune
continuarea studiului acestor receptori nucleari prin citometrie icircn flux metodă care poate fi
aplicată şi la scara mai largă dacă sunt asigurate resursele materiale necesare cercetării
Cercetarea prin citometrie icircn flux poate fi completată de studiul polimorfismului genei
PPARA şi astfel se pot identifica timpuriu indivizii cu potenţial risc cardiometabolic crescut
Studiul receptorilor PPARα a stabilit conexiuni cu factori proinflamatori şi aterogenetici iar
continuarea cercetării poate aduce şi elemente noi de diagnostic precoce icircn sindromul
metabolic contribuind la icircmbunătăţirea prognosticului acestor pacienţi
CONCLUZII FINALE
1 Aplicarea scorului de SM alături de implementarea algoritmului electronic de diagnostic
contribuie la o prelucrare rapidă eficientă și standardizată a informaţiilor la nivelul
medicinei primare
2 Prevalenţa SM calculată astfel icircn cadrul studiului este crescută (2732) icircn concordanţă
cu datele raportate
3 Controlul factorilor de risc cardiometabolici incluşi icircn SM se poate realiza prin
managementul stilului de viaţă (scăderea greutăţii corporale prin combaterea
sedentarismului şi adoptarea unei diete antiaterogene şi hipocalorice) şi administrarea
terapiei medicamentoase
4 Este necesară adoptarea unei politici de sănătate publică pentru prevenirea creşterii icircn
populaţie a prevalenţei obezităţii şi a diabetului zaharat
5 Noi metode de cercetare icircn domeniul SM axate pe diagnosticarea precoce şi cuantificarea
eficientă a acestuia duce la diminuarea incidenței evenimentelor cardiovasculare majore
6 Sindromul metabolic se caracterizează printr-un status inflamator cronic
7 Valorile Non-HDL-colesterolului şi a raportului de aterogenitate sunt semnificativ mai
mari la pacienţii cu SM
8 Dintre reactanţii de faza acută am observat că valoarea medie a fibrinogenului este mai
crescută icircn lotul cu SM
9 Valorile eozinofilelor sunt crescute icircn sindromul metabolic iar explorarea relaţiei dintre
eozinofile şi obezitate constituie una din direcţiile de studiu actuale ale sindromului
metabolic
10 Evaluarea markerilor inflamatori icircn contextul sindromului metabolic este utilă icircn
evaluarea complexă a a factorilor de risc cardiometabolici
11 Prin metoda citometriei icircn flux am demonstrat prezenta Receptorilor Activaţi de
Inductorii Proliferării Peroxizomilor ndash Alpha (PPARα) icircn toate populaţiile de leucocite
studiate (Mo limfocite PMN eozinofile) atacirct icircn lotul pacienţilor cu SM cacirct şi icircn lotul
martor
12 Utilizacircnd intensitatea medie de fluorescenţă a anticorpilor anti- PPARα am arătat că
nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile este semnificativ mai redus
la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali
13 Acest studiu este primul care a demonstrat existenţa unei scăderi statistic semnificative a
nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofilele pacienţilor cu SM
confirmacircnd cercetările recente care au evidenţiat rolul eozinofilelor şi al receptorilor
PPARα icircn obezitate reglarea inflamaţiei cronice şi aterogeneza
14 Contrar aşteptărilor noastre icircn populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările
efectuate icircn cele două loturi de studiu (cu şi fără sindom metabolic) nu am evidenţiat
diferenţe statistic seminificative icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα la
subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali
15 Icircn populaţiile de Mo limfocite şi polimorfonucleare am observat corelaţii puternice
semnificativ statistic icircntre expresia PPARα icircn aceste tipuri celulare sugeracircnd existenţa
unui mecanism unic de control al inflamaţiei cronice la nivelul acestor celule probabil
diferit de cel din eozinofile
16 La subiecţii cu SM expresia relativă a PPARα icircn Eo este invers asociată cu expresia
receptorului CD36 (receptor al particulelor de ox - LDL şi propus ca un marker precoce al
aterosclerozei) dovedind rolul antiinflamator al receptorilor PPARα la nivel endotelial
17 La pacienţii cu antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială nivelul de
expresie al receptorilor PPARα icircn eozinofile şi Mo este diminuat comparativ cu subiecţii
fără antecedente familiale de hipertensiune arterială Putem spune că studiul efectuat de
noi aduce informaţii importante legate de geneză aterosclerozei şi hipertensiunii arteriale
18 Prin studiul asocierilor dintre receptorii PPARα şi componentele clinice ale sindromului
metabolic am arătat rolul acestor receptori icircn determinismul obezităţii de tip central
nivelul expresiei relative a receptorilor PPARα fiind invers proporţional cu circumferinţa
abdominală
19 Icircn acelaşi timp nivelul de expresie a PPARα icircn sindromul metabolic este asociat pozitiv
cu concentraţia serică a HDL-colesterolului şi invers asociat cu nivelul trigliceridelor
serice dovedind rolul acestor receptori icircn diminuarea procesului inflamator cronic de la
nivel vascular
20 La pacienţii cu SM scăderea expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofile este corelată cu
creşterea unor markeri ai sindromului inflamator cronic cardiometabolic (acid uric
fibrinogen) ilustracircnd importanta receptorilor icircn reglarea status-ului inflamator cronic din
sindromul metabolic
21 Utilizarea metodei flowcitometrice pentru studiul expresiei relative a receptorilor PPARα
icircn leucocite a adus informaţii importante cu privire la mecanismele moleculare de control
implicate icircn patogenia bolilor cardiometabolice icircn concordanţă cu cercetările care descriu
expresia PPAR icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale bronşice
keratinocite)
BIBLIOGRAFIE SELECTIVA
1 Kahn R Metabolic syndrome- what is the clinical usefulness Lancet 2008371(9628)1892-3
2 Reaven GM The metabolic syndrome is this diagnosis necessary Am J Clin Nutr 2006 83(6)1237-7
3 Grundy SM Pre-Diabetes Metabolic Syndrome and Cardiovascular Risk J Am Coll Cardiol 201259(7)
635-43
4 International Diabetes Federation IDF Diabetes Atlas 6th edn International Diabetes Federation Belgium
Brussels 20131-155
5 World Health Organization Global Status Report on Noncommunicable Diseases 2010 World Health
Organization Geneva Switzerland 20111-176
6 Coman AE Petrovanu R Sindromul metabolic in practica de ambulator Editura Pim Iaşi 2009 1-103
7 Grundy SM Becker D Clark LT et alThird Report of the National Cholesterol Education Program (NCEP)
Expert Panel on Detection Evaluation and Treatment of High Blood Cholesterol in Adults (Adult
Treatment Panel III) Final Report Circulation 2002106(25)3143-90
8 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J Metabolic syndrome- a new worldwide definition A Consensus Statement
from the International Diabetes Federation Diabet Med 2006 23(5)469-80
9 KG Alberti KG Eckel RH Grundy SM etal International Diabetes Federation task force on epidemiology
and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart Association World Heart
Federation International Atherosclerosis Society International Association for the study of obesity
Harmonizing the metabolic syndrome a joint interim statement of the International Diabetes Federation task
force on epidemiology and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart
Association World Heart Federation International Atherosclerosis society and International Association
for the study of obesity Circulation 2009120(16)1640-5
10 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J IDF Epidemiology Task Force The metabolic syndrome new
worldwide definition Lancet 2005 366 1059 - 62
11 Oleszczyk M Svab I Seifert B et al Primary healthcare in the developing part of Europe changes and
development in the former Eastern Bloc countries that joined the European Union following 2004 Med Sci
Monit 2009(15)78ndash84
12 Jung U J Choi M S Obesity and Its Metabolic Complications The Role of Adipokines and the
Relationship between Obesity Inflammation Insulin Resistance Dyslipidemia and Nonalcoholic Fatty
Liver Disease Int J Mol Sci 2014rsquo15(4) 6184-223
13 Vanden Heuvel JP Peters JM Peroxisome Proliferators In Ramos K (ed) Cellular and Molecular
Toxicology (Second Edition) Volume 2 New York Elsevier Science Inc 2010 145 - 67
14 Yessoufou A Wahli W Multifaceted roles of peroxisome proliferator-activated receptors (PPARs) at the
cellular and whole organism levels Swiss Med Wkl 2010140w13071 doi104414smw201013071
15 Azhar S Peroxisome proliferator-activated receptors metabolic syndrome and cardiovascular disease
Future Cardiology 20106(5)657-91
16 Andries G Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity
Diabetes and Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(Suppl)24-32
17 Zandbergen F Plutzky J PPARalpha in atherosclerosis and inflammation Biochim Biophys Acta
20071771(8)972-82
18 Straus DS Glass CK Anti-inflammatory actions of PPAR ligands new insights on cellular and molecular
mechanisms Trends Immunol 200728(12)551-8
19 Zlei M Zugun- Eloae F Carasevici E Citometrie icircn flux - Bază şi clinică Icircn Hinescu ME (ed) Citometrie icircn
flux - principii şi aplicaţii clinice Bucureşti Editura Viaţa Medicală Romacircnească 20111-128
20 Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity Diabetes and
Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(9)24-32
21 Woerly G Honda K Loyens M et al Peroxisome proliferator-activated receptors alpha and gamma down-
regulate allergic inflammation and eosinophil activation J Exp Med 2003198(3)411-21
22 Salle-Saumont D Brenuchon C Kanda A et al Peroxisome proliferator-activated receptor alpha regulates
skin inflammation and humoral response in atopic dermatitis J Clin Allergy Immunology 2008 21(4)962-8
23 Schote A Turner J Schiltz J et al Nuclear receptors in human immune cells expression and correlations
Mol Immunolog 200744(6)1436-45
24 DAmore S Vacca M Graziano G et al Nuclear receptors expression chart icircn peripheral blood
mononuclear cells identifies patients with Metabolic Syndrome Biochim Biophys Acta
20131832(12)2289-301
25 Uthurralt J Gordish-Dressman H Bradbury M T et al PPARalpha L162V underlies variation in serum
triglycerides and subcutaneous fat volume in young males BMC Med Genet 2007855
26 Hiukka A Leinonen ES Jauhiainen M et al Long-term effects of fenofibrate on VLDL and HDL
subspecies icircn participants with type 2 diabetes mellitus Diabetologia 2007 50(10)2067-75
27 Robins SJ Rubins HB Faas FH et alInsulin resistance and cardiovascular events with low HDL
cholesterol The Veterans Affairs HDL Intervention Trial (VA-HIT) Diabetes Care 2003 26(5)1513-7
28 Devaraj S Siegel D Jialal I Statin Therapy in Metabolic Syndrome and Hypertension Post-JUPITER
What is the Value of CRP Curr Atheroscler Rep 2011 13(1) 31ndash42
29 Imperatore G Riccardi G Iovino C et al Plasma Fibrinogen A New Factor of the Metabolic Syndrome A
population-based study Diabetes Care 19982 1(4)649-54
30 Krysiak R Gdula-Dymek A Bachowski R Okopien B Pleiotropic effects of atorvastatin and fenofibrate
in metabolic syndrome and different types of pre-diabete Diabetes Care 201033(10)2266-70
31 Hermans MP Impact of Fenofibrate on Type 2 Diabetes Patients with Features of the Metabolic Syndrome
Subgroup Analysis From FIELD Curr Cardiol Rev 20106(2)112-8
32 Silverstein R Inflammation atherosclerosis and arterial thrombosis Role of the scavenger receptor CD36
Cleveland Clinic Journal of Medicine 200976(Suppl 2)S27-S30
33 Hăncu N Obezitatea In Vereşiu IA (ed) Diabetul zaharat nutritia si bolile metabolice Volume 2 Editura
Echinox Cluj- Napoca 2010 1-15
Lista lucrări publicate
1 Elena Popa Maria Maidaniuc Agnes Bacusca Alamir Diaa Rodica Petrovanu Adorata Elena
Coman Disfuncţia endotelială ndash de la mecanisme moleculare la cuantifi care şi tratament icircn practica
medicală Practica Medicală 20149(3) 109-14
2 Elena Popa Agnes Bacusca Alamir Diaa Maria Maidaniuc Rodica Petrovanu Adorata Elena Coman
The function of insulin receptor (IRF) in evolution of obesity correlation with adipocytes diameters
Archives of the Balkan Medical Union 201449(3) 275-9
3 Elena Popa Florin Zugun-Eloae Mihaela Zlei Daniela Jitaru Oana Maria Pintilie Adorata Elena
Coman Maria Traian Didona Anca Ungureanu Eugen Carasevici - acceptata pentru numarul 42014
Flow cytometry analysis of PPAR-alpha receptors in metabolic syndrome) Revista Romană de
Medicină de Laborator(RRLM-D-14-00034R1- adeverinţa ataşată
receptorilor PPARα icircn limfocitele subiecţilor cu SM s-au icircncadrat icircn intervalul Media plusmn 2DS
Figura 5 19 Lot SM Variaţia expresiei
relative a PPARα icircn Ly
Număr pacienţi 26
Minimum 813
Maximum 31400
Media 18178
Deviaţia Standard 6116
25 valori s-au icircncadrat icircn Media plusmn 2DS
Pentru lotul Non-SM diagrama de control (figura 520) a arătat toate valorile
determinate pentru lotul Non-SM se icircncadrează icircntre LCS şi LCI
Figura 520 Lot Non -SM Variaţia
expresiei relative a PPARα icircn Ly
Număr pacienţi 31
Minimum 748
Maximum 30100
Media 179574
Deviaţia Standard 5229
96 din valori icircncadrate icircn Media plusmn 2DS
Aplicarea testului t-Student pentru valorile medii ale intensităţii de fluorescenţă ale
PPARα icircn Ly nu a arătat existenţa unei diferenţe statistic semnificative icircntre lotul cu SM şi
lotul martor(t- Test P= 088)
Analiza receptorilor PPARα icircn Ly subiecţilor cu AHC de HTA şi dislipidemie
Studiind populaţiile de Ly la subiecţii care au prezentat AHC de hipertensiune
arterială analiza flowcitometrică a relevat existenţa unor valori mai mici pentru MFI la aceşti
subiecţi comparativ cu cei fără AHC de HTA (fig 522) deşi scăderea observată nu a
icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică (t- Test P = 009)
AHC HTA
Număr 22
Mediana 16000
Percentila 25 12700
Percentila 75 17100
AHC HTA absenţe
Număr 35
Mediana 18700
Percentila 25 14900
Percentila 75 23175
Figura 522 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Ly funcţie de AHC de HTA
Nu am calculat diferenţe statistic semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor
PPARα icircn populaţiile de Ly ale subiecţilor la care am identificat AHC de dislipidemie
comparativ cu cei care nu au declarat antecedente familiale de dislipidemie (t- Test P= 051)
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn neutrofile (PMN)
Analiza flowcitometrică a evidenţiat prezenţa PPARα icircn PMN recoltate din sacircngele
venos al tuturor participanţilor la studiu Pentru toţi subiecţii investigaţi analiza MFI a Ac -
PPARα icircn populaţia de PMN a relevat un interval de variaţie de [163419] iar valoarea medie
a MFI pentru Ac anti-PPARα a fost de 26392 plusmn 7064 Testul Shapiro-Wilk a arătat o
distribuţie normală a valorilor intensităţii medii de fluorescenţă a anticorpilor anti-PPARα atacirct
icircn lotul pacienţilor cu SM cacirct şi icircn lotul martor
1 6 11 16 21 26 31
-50
0
50
100
150
200
250
300
350
400
MFI
anti-
PPAR
a
1818
595
3041
-17
3653
Media+2DS
Media- 2DS
1 6 11 16 21 26 31 36
0
50
100
150
200
250
300
350
MFI
ant
i-PPA
R
a
1796
750
2841
227
3364
Media+2DS
Media
Media- 2DS
MFI
anti-
PPAR
a Ly
130
140
150
160
170
180
190
200
210
DA NU
AHC HTA
P=009
Tabel XXXII Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn PMN
Lot SM Lot Non-SM
N 26 31
Media 26273 26480
SD 6915 7088
Mediana 25900 25500
Minimum 17200 16300
Maximum 39500 41900
Percentila 25 19800 19600
Percentila 75 30500 31500
Icircn cele două loturi distribuţia frecvenţei valorilor nivelului relativ de expresie a
receptorilor PPARα icircn PMN a fost reprezentată sub formă de histograme (fig 525)
Figura 525 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti-PPARα icircn PMN
Pentru cei 26 de pacienţi din lotul cu SM a valoarea medie a nivelului de expresie
relativă a receptorilor PPARα icircn PMN a fost de 26273 plusmn 6915 Studiind diagrama Shewhart
din figura 526 se observă că toate valorile obţinute pentru nivelul de expresie relativă
PPARα icircn PMN investigate se icircncadrează icircntre limitele definite de valorile medii plusmn 2DS
Figura 526 Lot SM
Variaţia expresiei relative a PPARα icircn
PMN
Număr pacienţi 26
Minimum 17200
Maximum 39500
Media 26273
Deviaţia Standard 6915
Valorile MFI icircncadrate icircn Media plusmn 2DS
Pentru lotul martor valoarea medie calculată a MFI a anticorpilor anti-PPARα a fost de
26480 plusmn 7088 peste 95 din valorile MFI fiind cuprinse icircn Media plusmn 2DS (figura 527)
Figura 527 Lot Non-SM Variaţia expresiei
relative a PPARα icircn PMN
Număr pacienţi 31
Minimum 16300
Maximum 41900
Media 26480
Deviaţia Standard 7088
30 valoriicircn Media plusmn 2DS
Pentru PMN analiza statistica nu a arătat existenţa unei diferenţe statistic semnificative icircntre
nivelul de expresie relativă a PPARα la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii din lotul
Non-SM (t- Test P= 090) Studiind populaţiile de PMN la subiecţii care au prezentat AHC
de HTA nu am calculat o diferenţă statistic semnificativă icircntre expresia receptorilor PPARα
la subiecţii cu istoric familial de hipertensiune arterială comparativ cu cei pentru care nu s-au
notat AHC de HTA (t- Test P= 013)De asemenea am identificat diferenţe icircntre nivelul de
expresie al PPARα icircn PMN subiecţilor care prezentau AHC de dislipidemie comparativ cu
cei fără AHC de dislipidemie (t- Test P= 017)
50 100 150 200 250 300 350 400 450 500
0
5
10
15
20
25
30
35
MFI anti-PPAR a
Frecve
nta rel
ativa (
)
Lot SM
50 100 150 200 250 300 350 400 450 500
0
5
10
15
20
25
30
MFI anti-PPAR a
Frecv
enta
relati
va (
)
Lot Non-SM
1 6 11 16 21 26 31
0
50
100
150
200
250
300
350
400
450
500
MFI
anti-
PPA
R
a
2627
1244
4010
553
4702
Media + 2DS
Media - 2 DS
Media
1 6 11 16 21 26 31 36
0
50
100
150
200
250
300
350
400
450
500
MFI
anti-
PPAR
a
2648
1230
4066
522
4774
Media+ 2DS
Media - 2DS
Media
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile Tabel XXXIV Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn Eo
Lot SM Lot Non-SM
N 26 31
Mediaplusmn SD 141057 plusmn 47604 172209 plusmn 37565
Mediana 142450 171300
Minimum 35000 68500
Maximum 233700 250600
Percentila 25 119300 153225
Percentila 75 169700 199550
Am studiat nivelul relativ de expresie a receptorilor PPARα icircn Eo iar rezultatele au
fost figurate sub forma de histograme (figura 532)
Figura 532 Distribuţia frecventelor relative ale valorilor MFI anti- PPARα icircn Eo
Din diagrama Shewhart (figura 533) se observă că toate valorile determinate pentru
nivelul de expresie relativă a PPARα icircn Eo pentru lotul SM s-au icircncadrat icircn [Media plusmn 3 DS]
peste 90 din determinări fiind cuprinse icircn [Media plusmn 2 DS] iar icircn [Media plusmn 1 DS] sunt
incluse peste 65 din valorile MFI
Figura 533 Lot SM
Variaţia expresiei relative a PPARα icircn Eo
Număr pacienţi 26
Minimum 35000
Maximum 233700
Media 141057
Deviaţia Standard 47604
24 valori icircncadrat eicircn [Media plusmn 2DS]
Pentru subiecţii incluşi icircn lotul martor analiza diagramei (figura 534) a arătat că
toate cele 31 de valori ale MFI pentru PPARα icircn Eo se icircncadrează icircn [Media plusmn 3DS] iar 30
dintre acestea se icircncadrează icircn [ Media plusmn 2 DS]
Figura 534 Lot Non -SM
Variaţia expresiei relative a PPARα icircn Eo
Număr pacienţi 31
Minimum 685
Maximum 2506
Media 172209
Deviaţia Standard 375 65
30 valori icircncadrate icircn [Media plusmn 2DS]
Comparacircnd subiecţii cu SM cu cei din lotul martor am observat o scădere
semnificativă statistic a MFI a Ac anti - PPARα icircn Eo pentru pacienţiir cu SM ( figura 535)
PPARα Eo Lot Non-SM
Număr 31
Mediana 171300
Percentila 25 152325
Percentila 75 199550
PPARα Eo Lot SM
Număr 26
Mediana 142450
Percentila 25 119300
Percentila 75 169700
Figura 5 35 Comparaţie icircntre nivelul de expresie a PPARα icircn Eo
0 500 1000 1500 2000 2500 3000
0
10
20
30
40
50
MFI anti-PPAR a
Frecvent
a relativa
()
Lot SM
400 800 1200 1600 2000 2400 2800
0
5
10
15
20
25
30
35
40
45
MFI anti-PPAR a
Frecenta
relativa
()
Lot Non-SM
1 6 11 16 21 26 31
-500
0
500
1000
1500
2000
2500
3000
MFI a
nti-PP
AR
a
14106
4765
23447
94
28117
Media + 2DS
Media- 2DS
LCI
LCS
1 6 11 16 21 26 31 36
500
1000
1500
2000
2500
3000
MFI an
ti-PPA
R a
17221
9708
24734
5951
28490
LCI
Media-2DS
Media
Media +2 DS
LCS
1200
1300
1400
1500
1600
1700
1800
1900
Lot SM Lot Non-SM
P=00072
Cu ajutorul curbei ROC am evaluat posibilitatea utilizării MFI a Ac anti - PPARα icircn
Eo ca marker pentru diagnosticul SM Valoarea MFI a Ac anti - PPARα icircn Eo care prezice cu
cea mai mare acurateţe prezenţa SM a fost de 1533 (punctul de ldquocut-offrdquo) pentru care am
calculat o sensibilitate de 5652 şi o specificitate de 7778 Calculul ariei AUC a furnizat
valoarea de 0663 şi deci determinarea parametrului MFI anti- PPARα icircn Eo are valoarea
unui test cu acurateţe redusatilde icircn diagnosticul SM Studiind expresia PPARα icircn Eo la subiecţii
care au prezentat AHC de HTA am observat o scădere semnificativă statistic (P = 00023) a
expresiei PPARα la subiecţii cu istoric familial de HTA comparativ cu subiecţii fatilderatilde AHC de
HTA (figura 537)
AHC HTA
Număr 22
Mediana 148800
Percentila 25 116425
Percentila 75 170750
AHC HTA absente
Număr 35
Mediana 170850
Percentila 25 143700
Percentila 75 195000
Figura 537 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Eo funcţie de AHC de HTA
Studiind subiecţii cu AHC declarate de dislipidemie nu am identificat diferenţe icircntre
nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Eo subiecţilor cu AHC de dislipidemie
comparativ cu cei care nu au declarat prezenţa AHC de dislipidemie (t - Test P = 067)
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor CD36
Am studiat expresia receptorilor CD36 icircn Mo subiecţilor incluşi icircn studiu
Lot Non - SM
BLot SM
Figura 539 Analiza flowcitometrica pentru receptorii CD36 icircn Mo
Pentru toţi participanţii la studiu valorile MFI au variat icircn intervalul [817 6933] iar
valoarea medie a MFI a Ac anti-CD36 a fost de 397133 plusmn 120902 Tabel XXXVII Statistică descriptivă pentru a CD36 icircn Mo
Lot SM Lot Non-SM
Media 429034 370377
Deviatia Standard 109051 125514
Mediana 411000 362800
Minimum 266400 81700
Maximum 693300 616800
Percentila 25 346200 273750
Percentila 75 469000 453300
Distribuţia frecvenţelor relative a MFI au fost prezentate sub formă histogramelor
Figura 541 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti - CD36 icircn Mo
MFI
ant
i-PPA
R a Eo
1000
1100
1200
1300
1400
1500
1600
1700
1800
1900
DA NU
AHC HTA
P=00023
1000 2000 3000 4000 5000 6000 7000 8000
0
5
10
15
20
25
MFI anti-CD36
Frecve
nta rela
tiva (
)
Lot SM
0 1778 3556 5333 7111
0
5
10
15
20
25
30
35
MFI anti-CD36
Frecve
nta rel
ativa (
)
Lot Non - SM
Referitor la lotul SM 92 din valorile MFI a Ac anti- CD36 s-au icircncadrat icircn
intervalul Media plusmn 2 DS (figura 542) iar pentru lotul martor peste 90 dintre acestea icircn
Media plusmn 2 DS (figura 543)
Figura 542 Lot SM
Variaţia MFI anti-CD36 icircn Mo
Număr pacienţi 26
Minimum 2664
Maximum 6933
Media 429034
Deviaţia Standard 109051
Figura 543 Lot Non -SM
Variaţia MFI anti- CD36 icircn Mo
Număr 31
Minimum 81700
Maximum 616800
Media 370377
Deviaţia Standard 125514
Comparacircnd subiecţii cu SM cu cei din lotul normal am constatat o tendinţă de creştere
a expresiei CD36 icircn lotul cu SM((t - Test P= 0067)
MFI anti - CD36 Lot Non-SM
Număr 31
Mediana 3628
Percentila 25 2737
Percentila 75 4533
MFI anti - CD36 Lot SM
Număr 26
Mediana 4110
Percentila 25 3462
Percentila 75 4690
Figura 544 Comparaţie icircntre cel două loturi privind MFI anti - CD36 icircn Mo
Referindu-ne la subiecţii cu AHC de HTA am observat o tendinţă de creştere a
valorilor MFI anti-CD36 comparativ cu cei care nu au avut AHC de HTA (t - Test P = 0 08)
AHC HTA
Număr 22
Mediana 442800
Percentila 25 355275
Percentila 75 519475
AHC HTA absenţe
Număr 35
Mediana 377400
Percentila 25 316900
Percentila 75 443400
Figura 545 Comparaţie icircntre expresia CD36 icircn Mo funcţie de AHC de HTA
Nu s-au calculat diferenţe semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor
PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de dislipidemie atunci cacircnd aceştia au fost comparaţi cu
subiecţii fără AHC de dislipidemie (t - Test P=031)
Corelaţii icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα si CD36
Studiind valorile intensităţii medii de fluorescenţă a Ac anti-PPARα icircn Mo Ly şi
PMN am observat că nivelul de expresie celularatilde a PPARα icircn Mo Ly şi PMN sunt corelate
puternic pozitiv atacirct icircn lotul SM cacirct şi icircn lotul martor(fig547 548)
1 6 11 16 21 26 31
0
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
Pacienti
MFI a
nti-CD
36
42903
21093
64714
10188
75619
LCI
Media
LCS1 6 11 16 21 26 31 36
-1000
0
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
MFI a
nti- C
D36
37038
11935
62141
-616
74692Media + 2 DS
Media
Media - 2 DS
3200
3400
3600
3800
4000
4200
4400
4600
4800
Lot SM Lot Non-SM
P = 00676
MFI
anti-
CD36
3400
3600
3800
4000
4200
4400
4600
4800
5000
DA NU
AHC HTA
P = 008
Figura 547 Studiul relatiilor dintre
receptorii PPARα icircn SM A Mo vs PMN B Mo vs Ly
C PMN vs Ly Graficul ilustrează coeficienţii r P dreapta de
regresie (linia centrala) intervalul de icircncredere
95 şi intervalul de predicţie 95
Figura 548 Corelaţii icircntre receptorii PPARα icircn lotul
martor
A Mo vs PMN
B Mo vs Ly
C PMN vs Ly
Tot pentru lotul SM cacircnd am evaluat relaţia dintre nivelul de expresie relativă a
receptorilor PPARα icircn Eo şi nivelul de expresie relativa a receptorilor CD 36 am obţinut o
corelaţie negativă (r = - 05 P = 001) (fig 549 A)
50 100 150 200 250 300 350 50
100
150
200
250
300
350
400
450
500
PPARα Ly
PPARα PMN
y = 56641 + 1159 x r = 086 P lt 0001
C
50 100 150 200 250 300 350 400 0
50
100
150
200
250
300
350
PPARα Mo
PPARα Ly
y = 36665 + 0607 x r = 090 P lt 0001
B
150 200 250 300 350 400 450 0
50 100 150 200 250 300 350 400 450 500
PPARα PMN
PPARα Mo
y = 2505 + 0879 x r = 081 P lt 0001
A
50 100 150 200 250 300 350
50 100 150 200 250 300 350 400 450 500
PPARα Ly
PPARα PMN
y = 95668 + 0919 x r = 081 P lt 0001
C
100 150 200 250 300 350 400
0
50
100
150
200
250
300
350
400
PPARα Mo
PPARα Ly
y = -7503 + 0829 x r = 079 P lt 0001
B
100 150 200 250 300 350 400
50
100
150
200
250
300
350
400
450
500
PPARα Mo
PPARα PMN
y = 61384 + 0882 r = 074 P lt 0001
A
Figura 549 Corelaţii icircntre expresia PPARα icircn Eo şi alte tipuri de receptori investigaţi A PPARα Eo şi CD 36 (Lot SM) B PPARα Eo şi PPARα Mo( Lot Non-SM)
Icircn lotul martor am identificat o asociere moderată pozitivă (r = 038 P = 0033) icircntre
nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Eo şi Mo (figura 549B) corelaţie absentă icircn
lotul pacienţilor cu SM
Corelaţii dintre receptorii studiaţi şi componentele sindromului metabolic
Icircn lotul de control analiza statistică a relevat faptul că icircntre circumferinţa
abdominală (CA ) şi nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Mo Ly şi PMN există o
corelaţie inversă adică scăderea expresiei PPARα la nivelul acestor populatii celulare ar fi
icircnsoţită de creşterea CA (figura 550
Figura 550Corelaţii dintre receptorii
PPARα si CA A Mo B Ly C PMN
La pacienţii cu SM am notat o corelatie moderată negativă statistic semnificativă
icircntre TG şi valorile MFI a Ac anti- PPARα icircn Mo şi Ly( fig 551)
150 200 250 300 350 400 450 50
60
70
80
90
100
110
PPARα PMN
CA r = - 040 P = 0024
C
50 100 150 200 250 300 350 50
60
70
80
90
100
110
PPARα Ly
CA r = - 046 P = 0009
B
50 100 150 200 250 300 350 400 50
60
70
80
90
100
110
PPARα Mo
CA r = - 042 P = 0017
A
50 100 150 200 250 300 350 400 500
1000
1500
2000
2500
3000
PPARα Mo
PPARα Eo
r = 038 P = 0033
B
0 500 1000 1500 2000 2500 1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
PPARα Eo
CD36
r = 050 P = 0010
A
Figura 551 Lot SM Corelaţie icircntre expresia PPARα şi TG (A Mo B Ly)
Analizand corelatia dintre receptorii CD36 si valorile TA la pacientii cu SM am observat
o asociere pozitivă asteptată intre TAD si nivelul de expresie al receptorilor CD36 (fig 552)
Figura 552 Lot SM Corelaţii icircntre expresia
receptorilor CD36 şi valorile tensiunii arteriale
diastolice
Studiind corelaţiile dintre receptorii PPARα şi HDL-col la subiecţii din lotul martor am
notat o asociere pozitivă icircntre expresia PPARα icircn Mo şi Ly cu HDL-col (fig 553)
Figura 553 Lot martor Corelaţii icircntre HDL-col şi expresia PPARα icircn Mo(A) Ly(B)
Icircn lotul normal am evidenţiat corelaţii pozitive moderate dar semnificative statistic icircntre
CA şi valorile TAS (r = 062 P lt 0001) respectiv TAD (r = 050 P=0004) precum şi icircntre
CA şi glicemia subiecţilor normali (r = 052 P = 0003) Aceste date icircmpreună cu relaţia
invers proporţională identificată icircntre HDL-col şi CA (r = 050 P = 001) susţin validitatea
acestui studiu Icircn lotul subiecţilor cu SM am observat o corelaţie moderat pozitivă icircntre
expresia PPARα icircn populaţiiile de Mo şi Eo şi concentraţia a HDL-col (fig 554)
B
100 150 200 250 300 350 20
30
40
50
60
70
80
90
100
PPARα Ly
HDL-col-(mgdl)
r = 036 P = 0046
A
150 200 250 300 350 400 20
30
40
50
60
70
80
90
100
PPARα Mo
HDL-col-(mgd)l
r = 035 P = 005
70 75 80 85 90 95 100 1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
TAD (mmHg)
CD36
r = 048 P = 0013
B
50 100 150 200 250 300 350 -100
0
100
200
300
400
500
PPARα Ly
TG(mgdl)
r = - 042 P = 003
A
50 100 150 200 250 300 350 400 -100
0
100
200
300
400
500
PPARα Mo
TG ( mgdl) r =- 0 43 P = 0027
Figura 554 Corelaţii icircn SM icircntre HDL-col şi expresia PPARα icircn Mo (A) şi Eo(B)
Corelaţii icircntre nivelul de expresie relativă a PPARα şi markeri ai disfuncţiei
endoteliale şi inflamaţiei cronice
Deşi nu a icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică am reţinut corelaţia invers
proporţională (r = - 0331 P = 006) dintre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα
icircn PMN şi concentraţia serică a Non-HDL-colesterolului
Studiind relaţiile dintre parametri icircn lotul de pacienţi cu SM am observat o corelaţie
moderată invers proporţională icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Eo şi
acidul uric seric (figura 555 A) corelaţie absentă la subiecţii fără SM
Figura 555 Lot SM corelaţia dintre expresia PPARα icircn Eo şi acidul uric (A) respectiv
PPARα şi fibrinogen (B)
Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P=008) am notat pentru
pacienţii cu SM corelaţia invers proporţională dintre expresia PPARα icircn Eo şi concentraţia
serică a fibrinogenului ( figura 555B)
V5 Discuţii
Icircn cadrul lucrării de doctorat am studiat nivelul de expresie relativă a PPARα icircn
leucocitele pacienţilor cu SM comparativ cu cea a subiecţilor normali Expresia PPARα a fost
studiată icircn paralel cu cea a CD36 glicoproteină exprimată pe suprafaţa a numeroase celule
din organismul uman inclusiv pe cea a Mo şi macrofagelor Prin funcţia sa de receptor pentru
particulele oxidate de LDL CD36 cunoscut ca bdquoscavenger receptorrdquo de clasa B sau
bdquotrombospodin receptorrdquo contribuie la dezvoltarea inflamaţiei de la nivel endotelial şi
formarea plăcii de ateroscleroză Referitor la studiul PPARα icircn Eo icircn sindromul metabolic
menţionăm că studiul nostru este primul care arată că nivelul de expresie a proteinei PPARα
icircn Eo măsurat prin citometrie icircn flux este semnificativ mai redus la pacienţii care sunt
diagnosticaţi cu acest sindrom De asemenea icircn lotul cu SM cercetat icircn cadrul studiului
receptorilor PPARα numărul Eo circulante a fost semnificativ mai crescut la pacienţii cu SM
B
0 500 1000 1500 2000 2500 200
250
300
350
400
450
PPARα Eo o
Fibrinogen mgdl
r =- 036 P = 008
0 500 1000 1500 2000 2500 1 2 3 4 5 6 7 8 9
10 11
PPARα Eo_
Acid uric(mgdl) r = 048 P = 0014 A
0 500 1000 1500 2000 2500 10
20
30
40
50
60
70
80
PPARα Eo
HDL(mgdl)
r = 044 P = 0024
B
100 150 200 250 300 350 400 10
20
30
40
50
60
70
80
PPARα Mo
HDL( mgdl)
r = 046 P = 0019
A
(P = 003) Aceste constatări conduc la ipoteza că Eo joacă un rol special icircn mecanismele
patogenice declanşate icircn sindromul metabolic şi că receptorii PPARα sunt importanţi icircn
implicarea Eo icircn obezitate şi insulinorezistenţă Creşterea numărului de Eo circulante este
urmată de eliberarea mediatorilor proinflamatori iar reducerea expresiei PPARα icircn Eo
determină perturbarea mecanismelor de control al inflamaţiei cu exacerbarea cascadei
proinflamatorii Consecutiv se agravează disfuncţia endotelială şi se accelerează progresia
leziunilor de ateroscleroză Extrapolacircnd aceste ipoteze putem spune că asocierea raportată
dintre boala ischemică coronariană şi Eo poate fi şi consecinţa exacerbării cascadei
proinflamatorii de la nivel vascular produsă datorită scăderii expresiei PPARα icircn Eo iar
creşterea numărului de Eo circulante poate reprezenta o adaptare a organismului uman care
icircncearcă să suplinească deficitul de receptori PPARα Analizacircnd curba ROC pentru
intensităţile medii de fluorescenţă determinate pentru anticorpii anti- PPARα icircn Eo am
obţinut pentru acest biomarker o sensibilitate a testului de 565 şi o specificitate de 778
pentru un punct de cut-off de 1533 ( figura 536 ) Deşi aria AUC (Aria under the curve) egală
cu 0663 icircncadrează acest test ca avacircnd o acurateţe redusă observăm că că această valoare
este apropiată de determinările AUC pentru alţi factori (fibrinogen raport de aterogenitate
acid uric non- HDL-colesterol) cunoscuţi ca fiind implicaţi icircn aterogeneză şi inflamaţia
cronică (figura 431) Aceste remarci alături de faptul că icircn studiul receptorilor PPARα icircn
leucocite am inclus subiecţi la primul diagnostic de SM creează premisa integrării
determinării expresiei relative a receptorilor PPARα icircn diagnosticul complex al sindromului
metabolic Putem spune că icircn final studiul expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofilele
circulante se dovedește a fi util icircn diagnosticul precoce la nivel molecular al SM permiţacircnd
identificarea timpurie a unor indivizi cu risc cardiometabolic crescut Astfel intervenţia
precoce asupra subiecţilor cu deficit de PPARα icircn Eo contribuie la managementul eficient al
afecţiunilor degenerative icircn care inflamaţia cronică icircndeplineşte un rol primordial Referitor
la populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările efectuate prin citometrie de flux nu au
arătat existenţa unor diferenţe statistice icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα
la subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali Rezultatele noastre pot fi
consecinţa caracteristicilor loturilor studiate (icircn studiul nostru au fost incluşi subiecţi recrutaţi
la primul diagnostic de SM şi icircn absenţa stimulării receptorilor PPARα cu droguri agoniste
PPARα) dar icircn acelaşi timp pot apare diferenţe datorită metodei utilizate (231 232 233)
Făcacircnd o paralelă cu un studiu publicat icircn 2013 icircn Europa (231) care a arătat creşterea
nivelului de expresie al PPARα icircn Ly şi Mo observăm că deşi numărul de subiecţi a fost
aproximativ egal (57 participanţi icircn studiul nostru 60 icircn studiul DAmore) subiecţii icircn studiul
amintit au fost recrutaţi dintr-o clinică cu profil medical la primul diagnostic de SM icircn timp
ce metoda utilizată a fost PCR (Polymerase Chain Reaction) mult mai fidelă decacirct citometria
icircn flux icircn studiul receptorilor nucleari De asemenea DAmore nu investighează expresia
PPARα icircn Eo şi PMN icircn cercetare fiind incluse doar celulele CD14+ (predominant Mo) şi
CD14- (predominant Ly) Deşi nu am obţinut diferenţe statistic semnificative icircntre cele două
loturi referitoare la nivelul de expresie relativă a PPARα icircn Mo Ly şi PMN am observat
corelaţii puternice semnificative statistic icircntre expresia receptorilor PPARα icircn aceste tipuri
celulare Rezultatele obţinute sugerează existenţa unui mecanism diferit molecular de control
icircn eozinofile care reglează cantitatea de proteină PPARα icircn eozinofile versus alte tipuri de
leucocite (la pacienţii cu SM) şi acest lucru este icircn concordanţă cu cercetările care descriu
expresia PPARα mRNA icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale
bronşice keratinocite) Studiind prin citometrie de flux nivelul de expresie relativă a
receptorului CD36 la nivelul Mo am arătat prezenţa acestuia icircn Mo tuturor subiecţilor
investigaţi Analizacircnd valorile intensităţii medii de fluorescenţă a CD36 icircn loturile studiate
am observat o tendinţă de creştere la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali
confirmacircnd implicarea receptorului CD36 icircn patogeneza acestuia Referitor la expresia
receptorului CD36 rezultatele obţinute sunt icircn consens cu studii anterioare care au arătat
creşterea expresiei CD36 la pacienţii cu SM şi diabet zaharat Astfel pe lacircngă diferenţa icircn
expresia CD36 s-au raportat şi corelaţii inverse icircntre expresia proteinei CD36 şi nivelul
adiponectinei Acelaşi studiu a evidenţiat o corelaţie pozitivă intre expresia CD36 cu expresia
receptorilor PPAR gamma relaţia cu PPARα nefiind investigată
Analiza de subgrup a relaţiilor dintre componentele SM și elementele moleculare
proinflamatorii studiate a relevat prezenţa unor asocieri semnificativ statistice icircntre acestea
Se argumentează astfel că veridicitatea studiului este susţinută de interdependenţele statistice
ale componentelor SM Determinarea coeficientului de corelaţie Icircn studiul nostru nivelul de
expresie relativă a PPARα s-a corelat moderat negativ (figura 550) cu CA a subiecţilor din
lotul normal pentru populaţiile celulare de Mo (r = - 0420 P = 001) Ly (r = - 046 P =
0009) şi PMN (r = - 040 P = 0024) date care sunt icircn concordanţă cu studiile care arată
rolul PPARα icircn furnizarea energiei prin beta-oxidarea acizilor graşi Icircn acelaşi timp icircn lotul
pacienţilor cu SM nu am identificat prezenţa unei asocieri icircntre nivelul de expresie relativă a
PPARα şi valoarea măsurată a CA Asocierea dintre expresia relativă a PPARα cu obezitatea
de tip central completează datele existente referitoare la reglarea homeostaziei energetice
conturacircnd un mecanism de control deficitar al aportului caloric al SM Icircn condiţiile icircn care
rezultatele obţinute prin metoda citometriei icircn flux nu au arătat existenţa unei corelaţii intre
expresia PPARα şi CA la pacienţii cu SM considerăm că ar fi necesar studiul
polimorfismului genei PPARA care ar putea aduce informaţii importante cu privire la
implicarea acestor receptori icircn apariţia obezităţii de tip central Subliniem acest lucru deoarece
obezitatea este o boală plurifactorială icircn care pe lacircngă factorii ereditari sunt implicaţi factori
de mediu psihologici şi sociali (245) Existenţa unei componente genetice a aterosclerozei
este legată şi de prezenţa unor variante ale genei PPARA asociate cu creşterea incidenţei bolii
cardiovasculare (82) şi a SM (249) Icircn studiul nostru am constatat o scădere statistic
semnificativă a nivelului expresiei relative a receptorilor PPARα icircn Eo la subiecţii cu
antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială comparativ cu subiecţii fără istoric
familial de hipertensiune (figura 537) Deşi diferenţele calculate icircntre loturile studiate nu au
icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică la subiecţii care au declarat prezenţa
antecedentelor familiale de hipertensiune arterială remarcăm o tendinţă de scădere a
intensităţii medii de fluorescenţă pentru Ac anti-PPARα la nivelul Mo (figura 515 P = 006
) icircn timp ce expresia relativă a CD36 icircnregistrează o creştere la acesti subiecţi (figura 545 P
= 008) Icircn contextul riscului cardiovascular foarte icircnalt al pacienţilor cu SM amintim şi
existenţa corelaţiei pozitive dintre valorile tensiunii arteriale diastolice şi expresia relativă a
receptorului CD36 (r = 0483 P = 0013) Această constatare este icircn consens cu studiile care
au arătat că forma solubilă circulantă a CD36 este asociată cu factorii de risc cardiovasculari
fiind propusă ca un marker precoce al aterosclerozei Activarea PPARα este asociată cu
modularea metabolismului lipidic iar agoniştii PPARα sunt utilizaţi icircn mod curent pentru
tratamentul dislipidemiei Sub acţiunea agoniştilor PPARα se obţine o icircmbunătăţire a funcţiei
endoteliale şi a parametrilor reologici funcţiile pleiotropice ale agoniştilor PPARα fiind
dovedite icircn trialuri clinice controlate Icircn populaţiile de Mo şi Ly la pacienţii cu SM
cercetarea noastră a evidenţiat o asociere negativă icircntre nivelul de expresie relativă a
receptorilor PPARα şi concentraţia TG serice (figura 551) Astfel scăderea expresiei
receptorilor PPARα este asociată cu creşterea nivelului TG serice contribuind la profilul
lipidic aterogen din SM Icircn conformitate cu literatura de specialitate icircn studiul efectuat prin
metoda citometriei icircn flux am găsit prezenţa asocierii icircntre nivelul de expresie al PPARα şi
HDL-colesterol Corelaţia pozitivă dintre nivelul de expresie relativă PPARα şi concentraţia
HDL-colesterolului a fost observată icircn lotul martor icircn populaţiile de Mo (r = 035 P = 005)
şi Ly ( r = 036 P = 004) (figura 553) susţinacircnd faptul că stimularea receptorilor PPARα
este legată de creşterea nivelului seric al lipoproteinelor cu densitate crescută La pacienţii cu
SM corelaţia dintre expresia PPARα şi HDL-colesterol a fost evidenţiată icircn populaţiile de Mo
(r = 046 P = 0019) şi eozinofile (r = 044 P = 0024) Se desprinde concluzia că icircn
sindromul metabolic scăderea concentraţiei HDL-colesterol este legată de diminuarea
nivelului de expresie relativă a receptorilor nucleari PPARα icircntărind afirmaţiile legate de
rolul acestor receptori icircn progresia bolilor cardiovasculare Studiind reactanţii de fază acută
analiza statistică a relevat o diferenţă semnificativă din punct de vedere statistic icircntre valorile
fibrinogenului la pacienţii cu SM atunci cacircnd au fost comparaţi cu subiecţii fără SM
(Capitolul IV4 P lt0 001 figura 427A) De asemenea icircn Capitolul V dedicat studiul
expresiei relative a receptorilor PPARα studiul valorilor fibrinogenului a arătat creşterea
acestui reactant de faza acută icircn lotul cu SM comparativ cu lotul martor (P lt0 0001) Icircn
studiul nostru am calculat o corelaţie invers proporţionala (r = - -036 fig 555B) icircntre
nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile şi concentraţia serică a
fibrinogenului Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P = 008) am reţinut
această asociere deoarece am demonstrat că nivelul de expresie relativă al receptorilor
PPARα icircn eozinofile este mai scăzut icircn sindromul metabolic iar sindromul metabolic este
caracterizat printr-un status inflamator cronic status caracterizat şi de creşterea concentraţiei
serice a fibrinogenului De asemenea notam ca această corelaţie negativă se află icircn
concordanţă cu studiile care arata că tratamentul cu agonişti PPARα (fibraţi) determina
scăderea nivelului seric al fibrinogenului contribuind la diminuarea inflamaţiei cronice din
sindromul metabolic şi icircn consecinţă amelioracircnd insulinorezistenţa
LIMITE ȘI DIFICULTĂȚI IcircN CERCETARE
Icircn cadrul Tezei de Doctorat am desfăşurat o cercetare care şi-a propus studierea
expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Recrutarea anamneza şi examinarea
clinică a subiecţilor au fost realizate icircn cadrul Cabinetului de Medicină de Familie CMI Popa
Elena din Iaşi iar determinările hematologice şi biochimice s-au efectuat icircn cadrul
Laboratorului Ambulatorului de Specialitate al Spitalului Universitar ldquoSfacircntul Spiridon din
Iaşi Icircn studiul epidemiologic şi al markerilor inflamatori al sindromului metabolic desfăşurat
au fost incluşi un număr de 1530 de participanţi pe baza liberului consimţămacircnt examinaţi icircn
perioada 01012013 - 31122013 Icircn continuare icircn perioada 1012014 - 28022014 pe baza
criteriilor de includere şi excludere icircn cele două loturi de studiu am investigat un număr de 57
de subiecţi prezentaţi la consultaţie icircn această perioadă şi care au icircndeplinit criteriile de
includere icircn cele două loturi (Lot SM şi Lot Control) constituite pentru evaluarea nivelului de
expresie a receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Explorarea nivelului de expresie
relativă a receptorilor PPARα s-a desfăşurat icircn cadrul Laboratorului de Biologie Moleculară
de pe platforma Institutului Regional de Oncologie Datorită resurselor proprii financiare
limitate trebuie să subliniez că aceasta cercetare nu ar fi fost posibilă fără contribuţia unor
cercetători din domeniul medical care m-au sprijinit necondiţionat atacirct icircn elaborarea
protocolului de lucru cacirct şi icircn efectuarea propriu-zisă a studiului Icircn acest sens menţionăm şi
faptul că pentru studiul receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic am utilizat aparatura
Laboratorului de Biologie Moleculară (care deserveşte icircntreaga Regiune a Moldovei) Pe
această cale mulţumesc personalului Laboratorului de Biologie Moleculară pentru ajutorul
acordat icircn desfăşurarea cercetării doctorale icircn condiţiile icircn care se observa creşterea
numărului de pacienţi care se adresează acestei platforme de cercetare Mulţumesc de
asemenea şi Doamnei Doctor Elena Butoi din cadrul Institutului de Biologie şi Patologie
Moleculară ldquoNicolae Simionescurdquo Bucureşti) pentru donaţia anticorpului secundar anti-
FITC Icircn consecinţă pentru recrutarea unui număr mai mare de participanţi ar fi fost necesară
icircn primul racircnd obţinerea unor resurse financiare suplimentare pentru achiziţia de aparatură şi
reactivi Totuşi numărul subiecţilor recrutaţi este apropiat de numărul subiecţilor raportaţi icircn
cadrul unor granturi de cercetare care aveau ca ţinta studiul expresiei receptorilor PPARα
(212 227 228 231) Rezultatele obţinute continua seria lucrărilor care arata importanta
studiului mecanismelor etiopatogenice ale sindromului metabolic patologie care se afla icircntr-o
continuă creştere La pacienţii cu SM pe lacircngă diminuarea nivelului de expresie a receptorilor
PPARα icircn eozinofile ne aşteptam şi la evidenţierea unor modificări icircn expresia PPARα şi icircn
populaţiile de Ly Mo şi PMN Acest fapt poate fi explicat de utilizarea unor celule provenite
de la pacienţi fără afectare cardiovasculară fără diabet zaharat şi necesită continuarea
studiului pe culturi celulare icircn condiţii de stimulare cu agonişti PPARα deziderat care
impune continuarea investigării expresiei PPARα printr-un grant de cercetare
ORIGINALITATEA ȘI CONTRIBUȚIILE INOVATIVE ALE TEZEI DE
DOCTORAT PERSPECTIVE DE CERCETARE
Evaluarea nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn leucocitele circulante
aduce noi perspective icircn studiul obezităţii şi sindromului metabolic Importanta studiului
expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic derivă din prevalenta crescută a
sindromului metabolic icircn populaţia cercetată la care se adaugă riscul cardiovascular foarte
icircnalt al acestor pacienţi cu implicaţii majore icircn sănătatea publică Rolul receptorilor PPARα
icircn inflamaţie şi aterogeneza este binecunoscut dar studiul nostru este primul care a arătat că
nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα este semnificativ mai scăzut in populatiile
de eozinofile la pacienţii cu SM Această concluzie coroborata cu existenţa unei stracircnse
asocieri intre expresia receptorilor PPARα la nivelul Mo limfocitelor şi PMNlor creeaza
ipoteza existenţei unui mecanism de control diferit al expresiei PPARα la nivelul
eozinofilelor Această cercetare aduce informaţii importante referitoare la mecanismele
proinflamatorii care stau la baza insulinorezistenţei şi riscului cardiometabolic şi impune
continuarea studiului acestor receptori nucleari prin citometrie icircn flux metodă care poate fi
aplicată şi la scara mai largă dacă sunt asigurate resursele materiale necesare cercetării
Cercetarea prin citometrie icircn flux poate fi completată de studiul polimorfismului genei
PPARA şi astfel se pot identifica timpuriu indivizii cu potenţial risc cardiometabolic crescut
Studiul receptorilor PPARα a stabilit conexiuni cu factori proinflamatori şi aterogenetici iar
continuarea cercetării poate aduce şi elemente noi de diagnostic precoce icircn sindromul
metabolic contribuind la icircmbunătăţirea prognosticului acestor pacienţi
CONCLUZII FINALE
1 Aplicarea scorului de SM alături de implementarea algoritmului electronic de diagnostic
contribuie la o prelucrare rapidă eficientă și standardizată a informaţiilor la nivelul
medicinei primare
2 Prevalenţa SM calculată astfel icircn cadrul studiului este crescută (2732) icircn concordanţă
cu datele raportate
3 Controlul factorilor de risc cardiometabolici incluşi icircn SM se poate realiza prin
managementul stilului de viaţă (scăderea greutăţii corporale prin combaterea
sedentarismului şi adoptarea unei diete antiaterogene şi hipocalorice) şi administrarea
terapiei medicamentoase
4 Este necesară adoptarea unei politici de sănătate publică pentru prevenirea creşterii icircn
populaţie a prevalenţei obezităţii şi a diabetului zaharat
5 Noi metode de cercetare icircn domeniul SM axate pe diagnosticarea precoce şi cuantificarea
eficientă a acestuia duce la diminuarea incidenței evenimentelor cardiovasculare majore
6 Sindromul metabolic se caracterizează printr-un status inflamator cronic
7 Valorile Non-HDL-colesterolului şi a raportului de aterogenitate sunt semnificativ mai
mari la pacienţii cu SM
8 Dintre reactanţii de faza acută am observat că valoarea medie a fibrinogenului este mai
crescută icircn lotul cu SM
9 Valorile eozinofilelor sunt crescute icircn sindromul metabolic iar explorarea relaţiei dintre
eozinofile şi obezitate constituie una din direcţiile de studiu actuale ale sindromului
metabolic
10 Evaluarea markerilor inflamatori icircn contextul sindromului metabolic este utilă icircn
evaluarea complexă a a factorilor de risc cardiometabolici
11 Prin metoda citometriei icircn flux am demonstrat prezenta Receptorilor Activaţi de
Inductorii Proliferării Peroxizomilor ndash Alpha (PPARα) icircn toate populaţiile de leucocite
studiate (Mo limfocite PMN eozinofile) atacirct icircn lotul pacienţilor cu SM cacirct şi icircn lotul
martor
12 Utilizacircnd intensitatea medie de fluorescenţă a anticorpilor anti- PPARα am arătat că
nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile este semnificativ mai redus
la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali
13 Acest studiu este primul care a demonstrat existenţa unei scăderi statistic semnificative a
nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofilele pacienţilor cu SM
confirmacircnd cercetările recente care au evidenţiat rolul eozinofilelor şi al receptorilor
PPARα icircn obezitate reglarea inflamaţiei cronice şi aterogeneza
14 Contrar aşteptărilor noastre icircn populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările
efectuate icircn cele două loturi de studiu (cu şi fără sindom metabolic) nu am evidenţiat
diferenţe statistic seminificative icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα la
subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali
15 Icircn populaţiile de Mo limfocite şi polimorfonucleare am observat corelaţii puternice
semnificativ statistic icircntre expresia PPARα icircn aceste tipuri celulare sugeracircnd existenţa
unui mecanism unic de control al inflamaţiei cronice la nivelul acestor celule probabil
diferit de cel din eozinofile
16 La subiecţii cu SM expresia relativă a PPARα icircn Eo este invers asociată cu expresia
receptorului CD36 (receptor al particulelor de ox - LDL şi propus ca un marker precoce al
aterosclerozei) dovedind rolul antiinflamator al receptorilor PPARα la nivel endotelial
17 La pacienţii cu antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială nivelul de
expresie al receptorilor PPARα icircn eozinofile şi Mo este diminuat comparativ cu subiecţii
fără antecedente familiale de hipertensiune arterială Putem spune că studiul efectuat de
noi aduce informaţii importante legate de geneză aterosclerozei şi hipertensiunii arteriale
18 Prin studiul asocierilor dintre receptorii PPARα şi componentele clinice ale sindromului
metabolic am arătat rolul acestor receptori icircn determinismul obezităţii de tip central
nivelul expresiei relative a receptorilor PPARα fiind invers proporţional cu circumferinţa
abdominală
19 Icircn acelaşi timp nivelul de expresie a PPARα icircn sindromul metabolic este asociat pozitiv
cu concentraţia serică a HDL-colesterolului şi invers asociat cu nivelul trigliceridelor
serice dovedind rolul acestor receptori icircn diminuarea procesului inflamator cronic de la
nivel vascular
20 La pacienţii cu SM scăderea expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofile este corelată cu
creşterea unor markeri ai sindromului inflamator cronic cardiometabolic (acid uric
fibrinogen) ilustracircnd importanta receptorilor icircn reglarea status-ului inflamator cronic din
sindromul metabolic
21 Utilizarea metodei flowcitometrice pentru studiul expresiei relative a receptorilor PPARα
icircn leucocite a adus informaţii importante cu privire la mecanismele moleculare de control
implicate icircn patogenia bolilor cardiometabolice icircn concordanţă cu cercetările care descriu
expresia PPAR icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale bronşice
keratinocite)
BIBLIOGRAFIE SELECTIVA
1 Kahn R Metabolic syndrome- what is the clinical usefulness Lancet 2008371(9628)1892-3
2 Reaven GM The metabolic syndrome is this diagnosis necessary Am J Clin Nutr 2006 83(6)1237-7
3 Grundy SM Pre-Diabetes Metabolic Syndrome and Cardiovascular Risk J Am Coll Cardiol 201259(7)
635-43
4 International Diabetes Federation IDF Diabetes Atlas 6th edn International Diabetes Federation Belgium
Brussels 20131-155
5 World Health Organization Global Status Report on Noncommunicable Diseases 2010 World Health
Organization Geneva Switzerland 20111-176
6 Coman AE Petrovanu R Sindromul metabolic in practica de ambulator Editura Pim Iaşi 2009 1-103
7 Grundy SM Becker D Clark LT et alThird Report of the National Cholesterol Education Program (NCEP)
Expert Panel on Detection Evaluation and Treatment of High Blood Cholesterol in Adults (Adult
Treatment Panel III) Final Report Circulation 2002106(25)3143-90
8 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J Metabolic syndrome- a new worldwide definition A Consensus Statement
from the International Diabetes Federation Diabet Med 2006 23(5)469-80
9 KG Alberti KG Eckel RH Grundy SM etal International Diabetes Federation task force on epidemiology
and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart Association World Heart
Federation International Atherosclerosis Society International Association for the study of obesity
Harmonizing the metabolic syndrome a joint interim statement of the International Diabetes Federation task
force on epidemiology and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart
Association World Heart Federation International Atherosclerosis society and International Association
for the study of obesity Circulation 2009120(16)1640-5
10 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J IDF Epidemiology Task Force The metabolic syndrome new
worldwide definition Lancet 2005 366 1059 - 62
11 Oleszczyk M Svab I Seifert B et al Primary healthcare in the developing part of Europe changes and
development in the former Eastern Bloc countries that joined the European Union following 2004 Med Sci
Monit 2009(15)78ndash84
12 Jung U J Choi M S Obesity and Its Metabolic Complications The Role of Adipokines and the
Relationship between Obesity Inflammation Insulin Resistance Dyslipidemia and Nonalcoholic Fatty
Liver Disease Int J Mol Sci 2014rsquo15(4) 6184-223
13 Vanden Heuvel JP Peters JM Peroxisome Proliferators In Ramos K (ed) Cellular and Molecular
Toxicology (Second Edition) Volume 2 New York Elsevier Science Inc 2010 145 - 67
14 Yessoufou A Wahli W Multifaceted roles of peroxisome proliferator-activated receptors (PPARs) at the
cellular and whole organism levels Swiss Med Wkl 2010140w13071 doi104414smw201013071
15 Azhar S Peroxisome proliferator-activated receptors metabolic syndrome and cardiovascular disease
Future Cardiology 20106(5)657-91
16 Andries G Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity
Diabetes and Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(Suppl)24-32
17 Zandbergen F Plutzky J PPARalpha in atherosclerosis and inflammation Biochim Biophys Acta
20071771(8)972-82
18 Straus DS Glass CK Anti-inflammatory actions of PPAR ligands new insights on cellular and molecular
mechanisms Trends Immunol 200728(12)551-8
19 Zlei M Zugun- Eloae F Carasevici E Citometrie icircn flux - Bază şi clinică Icircn Hinescu ME (ed) Citometrie icircn
flux - principii şi aplicaţii clinice Bucureşti Editura Viaţa Medicală Romacircnească 20111-128
20 Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity Diabetes and
Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(9)24-32
21 Woerly G Honda K Loyens M et al Peroxisome proliferator-activated receptors alpha and gamma down-
regulate allergic inflammation and eosinophil activation J Exp Med 2003198(3)411-21
22 Salle-Saumont D Brenuchon C Kanda A et al Peroxisome proliferator-activated receptor alpha regulates
skin inflammation and humoral response in atopic dermatitis J Clin Allergy Immunology 2008 21(4)962-8
23 Schote A Turner J Schiltz J et al Nuclear receptors in human immune cells expression and correlations
Mol Immunolog 200744(6)1436-45
24 DAmore S Vacca M Graziano G et al Nuclear receptors expression chart icircn peripheral blood
mononuclear cells identifies patients with Metabolic Syndrome Biochim Biophys Acta
20131832(12)2289-301
25 Uthurralt J Gordish-Dressman H Bradbury M T et al PPARalpha L162V underlies variation in serum
triglycerides and subcutaneous fat volume in young males BMC Med Genet 2007855
26 Hiukka A Leinonen ES Jauhiainen M et al Long-term effects of fenofibrate on VLDL and HDL
subspecies icircn participants with type 2 diabetes mellitus Diabetologia 2007 50(10)2067-75
27 Robins SJ Rubins HB Faas FH et alInsulin resistance and cardiovascular events with low HDL
cholesterol The Veterans Affairs HDL Intervention Trial (VA-HIT) Diabetes Care 2003 26(5)1513-7
28 Devaraj S Siegel D Jialal I Statin Therapy in Metabolic Syndrome and Hypertension Post-JUPITER
What is the Value of CRP Curr Atheroscler Rep 2011 13(1) 31ndash42
29 Imperatore G Riccardi G Iovino C et al Plasma Fibrinogen A New Factor of the Metabolic Syndrome A
population-based study Diabetes Care 19982 1(4)649-54
30 Krysiak R Gdula-Dymek A Bachowski R Okopien B Pleiotropic effects of atorvastatin and fenofibrate
in metabolic syndrome and different types of pre-diabete Diabetes Care 201033(10)2266-70
31 Hermans MP Impact of Fenofibrate on Type 2 Diabetes Patients with Features of the Metabolic Syndrome
Subgroup Analysis From FIELD Curr Cardiol Rev 20106(2)112-8
32 Silverstein R Inflammation atherosclerosis and arterial thrombosis Role of the scavenger receptor CD36
Cleveland Clinic Journal of Medicine 200976(Suppl 2)S27-S30
33 Hăncu N Obezitatea In Vereşiu IA (ed) Diabetul zaharat nutritia si bolile metabolice Volume 2 Editura
Echinox Cluj- Napoca 2010 1-15
Lista lucrări publicate
1 Elena Popa Maria Maidaniuc Agnes Bacusca Alamir Diaa Rodica Petrovanu Adorata Elena
Coman Disfuncţia endotelială ndash de la mecanisme moleculare la cuantifi care şi tratament icircn practica
medicală Practica Medicală 20149(3) 109-14
2 Elena Popa Agnes Bacusca Alamir Diaa Maria Maidaniuc Rodica Petrovanu Adorata Elena Coman
The function of insulin receptor (IRF) in evolution of obesity correlation with adipocytes diameters
Archives of the Balkan Medical Union 201449(3) 275-9
3 Elena Popa Florin Zugun-Eloae Mihaela Zlei Daniela Jitaru Oana Maria Pintilie Adorata Elena
Coman Maria Traian Didona Anca Ungureanu Eugen Carasevici - acceptata pentru numarul 42014
Flow cytometry analysis of PPAR-alpha receptors in metabolic syndrome) Revista Romană de
Medicină de Laborator(RRLM-D-14-00034R1- adeverinţa ataşată
Tabel XXXII Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn PMN
Lot SM Lot Non-SM
N 26 31
Media 26273 26480
SD 6915 7088
Mediana 25900 25500
Minimum 17200 16300
Maximum 39500 41900
Percentila 25 19800 19600
Percentila 75 30500 31500
Icircn cele două loturi distribuţia frecvenţei valorilor nivelului relativ de expresie a
receptorilor PPARα icircn PMN a fost reprezentată sub formă de histograme (fig 525)
Figura 525 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti-PPARα icircn PMN
Pentru cei 26 de pacienţi din lotul cu SM a valoarea medie a nivelului de expresie
relativă a receptorilor PPARα icircn PMN a fost de 26273 plusmn 6915 Studiind diagrama Shewhart
din figura 526 se observă că toate valorile obţinute pentru nivelul de expresie relativă
PPARα icircn PMN investigate se icircncadrează icircntre limitele definite de valorile medii plusmn 2DS
Figura 526 Lot SM
Variaţia expresiei relative a PPARα icircn
PMN
Număr pacienţi 26
Minimum 17200
Maximum 39500
Media 26273
Deviaţia Standard 6915
Valorile MFI icircncadrate icircn Media plusmn 2DS
Pentru lotul martor valoarea medie calculată a MFI a anticorpilor anti-PPARα a fost de
26480 plusmn 7088 peste 95 din valorile MFI fiind cuprinse icircn Media plusmn 2DS (figura 527)
Figura 527 Lot Non-SM Variaţia expresiei
relative a PPARα icircn PMN
Număr pacienţi 31
Minimum 16300
Maximum 41900
Media 26480
Deviaţia Standard 7088
30 valoriicircn Media plusmn 2DS
Pentru PMN analiza statistica nu a arătat existenţa unei diferenţe statistic semnificative icircntre
nivelul de expresie relativă a PPARα la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii din lotul
Non-SM (t- Test P= 090) Studiind populaţiile de PMN la subiecţii care au prezentat AHC
de HTA nu am calculat o diferenţă statistic semnificativă icircntre expresia receptorilor PPARα
la subiecţii cu istoric familial de hipertensiune arterială comparativ cu cei pentru care nu s-au
notat AHC de HTA (t- Test P= 013)De asemenea am identificat diferenţe icircntre nivelul de
expresie al PPARα icircn PMN subiecţilor care prezentau AHC de dislipidemie comparativ cu
cei fără AHC de dislipidemie (t- Test P= 017)
50 100 150 200 250 300 350 400 450 500
0
5
10
15
20
25
30
35
MFI anti-PPAR a
Frecve
nta rel
ativa (
)
Lot SM
50 100 150 200 250 300 350 400 450 500
0
5
10
15
20
25
30
MFI anti-PPAR a
Frecv
enta
relati
va (
)
Lot Non-SM
1 6 11 16 21 26 31
0
50
100
150
200
250
300
350
400
450
500
MFI
anti-
PPA
R
a
2627
1244
4010
553
4702
Media + 2DS
Media - 2 DS
Media
1 6 11 16 21 26 31 36
0
50
100
150
200
250
300
350
400
450
500
MFI
anti-
PPAR
a
2648
1230
4066
522
4774
Media+ 2DS
Media - 2DS
Media
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile Tabel XXXIV Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn Eo
Lot SM Lot Non-SM
N 26 31
Mediaplusmn SD 141057 plusmn 47604 172209 plusmn 37565
Mediana 142450 171300
Minimum 35000 68500
Maximum 233700 250600
Percentila 25 119300 153225
Percentila 75 169700 199550
Am studiat nivelul relativ de expresie a receptorilor PPARα icircn Eo iar rezultatele au
fost figurate sub forma de histograme (figura 532)
Figura 532 Distribuţia frecventelor relative ale valorilor MFI anti- PPARα icircn Eo
Din diagrama Shewhart (figura 533) se observă că toate valorile determinate pentru
nivelul de expresie relativă a PPARα icircn Eo pentru lotul SM s-au icircncadrat icircn [Media plusmn 3 DS]
peste 90 din determinări fiind cuprinse icircn [Media plusmn 2 DS] iar icircn [Media plusmn 1 DS] sunt
incluse peste 65 din valorile MFI
Figura 533 Lot SM
Variaţia expresiei relative a PPARα icircn Eo
Număr pacienţi 26
Minimum 35000
Maximum 233700
Media 141057
Deviaţia Standard 47604
24 valori icircncadrat eicircn [Media plusmn 2DS]
Pentru subiecţii incluşi icircn lotul martor analiza diagramei (figura 534) a arătat că
toate cele 31 de valori ale MFI pentru PPARα icircn Eo se icircncadrează icircn [Media plusmn 3DS] iar 30
dintre acestea se icircncadrează icircn [ Media plusmn 2 DS]
Figura 534 Lot Non -SM
Variaţia expresiei relative a PPARα icircn Eo
Număr pacienţi 31
Minimum 685
Maximum 2506
Media 172209
Deviaţia Standard 375 65
30 valori icircncadrate icircn [Media plusmn 2DS]
Comparacircnd subiecţii cu SM cu cei din lotul martor am observat o scădere
semnificativă statistic a MFI a Ac anti - PPARα icircn Eo pentru pacienţiir cu SM ( figura 535)
PPARα Eo Lot Non-SM
Număr 31
Mediana 171300
Percentila 25 152325
Percentila 75 199550
PPARα Eo Lot SM
Număr 26
Mediana 142450
Percentila 25 119300
Percentila 75 169700
Figura 5 35 Comparaţie icircntre nivelul de expresie a PPARα icircn Eo
0 500 1000 1500 2000 2500 3000
0
10
20
30
40
50
MFI anti-PPAR a
Frecvent
a relativa
()
Lot SM
400 800 1200 1600 2000 2400 2800
0
5
10
15
20
25
30
35
40
45
MFI anti-PPAR a
Frecenta
relativa
()
Lot Non-SM
1 6 11 16 21 26 31
-500
0
500
1000
1500
2000
2500
3000
MFI a
nti-PP
AR
a
14106
4765
23447
94
28117
Media + 2DS
Media- 2DS
LCI
LCS
1 6 11 16 21 26 31 36
500
1000
1500
2000
2500
3000
MFI an
ti-PPA
R a
17221
9708
24734
5951
28490
LCI
Media-2DS
Media
Media +2 DS
LCS
1200
1300
1400
1500
1600
1700
1800
1900
Lot SM Lot Non-SM
P=00072
Cu ajutorul curbei ROC am evaluat posibilitatea utilizării MFI a Ac anti - PPARα icircn
Eo ca marker pentru diagnosticul SM Valoarea MFI a Ac anti - PPARα icircn Eo care prezice cu
cea mai mare acurateţe prezenţa SM a fost de 1533 (punctul de ldquocut-offrdquo) pentru care am
calculat o sensibilitate de 5652 şi o specificitate de 7778 Calculul ariei AUC a furnizat
valoarea de 0663 şi deci determinarea parametrului MFI anti- PPARα icircn Eo are valoarea
unui test cu acurateţe redusatilde icircn diagnosticul SM Studiind expresia PPARα icircn Eo la subiecţii
care au prezentat AHC de HTA am observat o scădere semnificativă statistic (P = 00023) a
expresiei PPARα la subiecţii cu istoric familial de HTA comparativ cu subiecţii fatilderatilde AHC de
HTA (figura 537)
AHC HTA
Număr 22
Mediana 148800
Percentila 25 116425
Percentila 75 170750
AHC HTA absente
Număr 35
Mediana 170850
Percentila 25 143700
Percentila 75 195000
Figura 537 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Eo funcţie de AHC de HTA
Studiind subiecţii cu AHC declarate de dislipidemie nu am identificat diferenţe icircntre
nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Eo subiecţilor cu AHC de dislipidemie
comparativ cu cei care nu au declarat prezenţa AHC de dislipidemie (t - Test P = 067)
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor CD36
Am studiat expresia receptorilor CD36 icircn Mo subiecţilor incluşi icircn studiu
Lot Non - SM
BLot SM
Figura 539 Analiza flowcitometrica pentru receptorii CD36 icircn Mo
Pentru toţi participanţii la studiu valorile MFI au variat icircn intervalul [817 6933] iar
valoarea medie a MFI a Ac anti-CD36 a fost de 397133 plusmn 120902 Tabel XXXVII Statistică descriptivă pentru a CD36 icircn Mo
Lot SM Lot Non-SM
Media 429034 370377
Deviatia Standard 109051 125514
Mediana 411000 362800
Minimum 266400 81700
Maximum 693300 616800
Percentila 25 346200 273750
Percentila 75 469000 453300
Distribuţia frecvenţelor relative a MFI au fost prezentate sub formă histogramelor
Figura 541 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti - CD36 icircn Mo
MFI
ant
i-PPA
R a Eo
1000
1100
1200
1300
1400
1500
1600
1700
1800
1900
DA NU
AHC HTA
P=00023
1000 2000 3000 4000 5000 6000 7000 8000
0
5
10
15
20
25
MFI anti-CD36
Frecve
nta rela
tiva (
)
Lot SM
0 1778 3556 5333 7111
0
5
10
15
20
25
30
35
MFI anti-CD36
Frecve
nta rel
ativa (
)
Lot Non - SM
Referitor la lotul SM 92 din valorile MFI a Ac anti- CD36 s-au icircncadrat icircn
intervalul Media plusmn 2 DS (figura 542) iar pentru lotul martor peste 90 dintre acestea icircn
Media plusmn 2 DS (figura 543)
Figura 542 Lot SM
Variaţia MFI anti-CD36 icircn Mo
Număr pacienţi 26
Minimum 2664
Maximum 6933
Media 429034
Deviaţia Standard 109051
Figura 543 Lot Non -SM
Variaţia MFI anti- CD36 icircn Mo
Număr 31
Minimum 81700
Maximum 616800
Media 370377
Deviaţia Standard 125514
Comparacircnd subiecţii cu SM cu cei din lotul normal am constatat o tendinţă de creştere
a expresiei CD36 icircn lotul cu SM((t - Test P= 0067)
MFI anti - CD36 Lot Non-SM
Număr 31
Mediana 3628
Percentila 25 2737
Percentila 75 4533
MFI anti - CD36 Lot SM
Număr 26
Mediana 4110
Percentila 25 3462
Percentila 75 4690
Figura 544 Comparaţie icircntre cel două loturi privind MFI anti - CD36 icircn Mo
Referindu-ne la subiecţii cu AHC de HTA am observat o tendinţă de creştere a
valorilor MFI anti-CD36 comparativ cu cei care nu au avut AHC de HTA (t - Test P = 0 08)
AHC HTA
Număr 22
Mediana 442800
Percentila 25 355275
Percentila 75 519475
AHC HTA absenţe
Număr 35
Mediana 377400
Percentila 25 316900
Percentila 75 443400
Figura 545 Comparaţie icircntre expresia CD36 icircn Mo funcţie de AHC de HTA
Nu s-au calculat diferenţe semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor
PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de dislipidemie atunci cacircnd aceştia au fost comparaţi cu
subiecţii fără AHC de dislipidemie (t - Test P=031)
Corelaţii icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα si CD36
Studiind valorile intensităţii medii de fluorescenţă a Ac anti-PPARα icircn Mo Ly şi
PMN am observat că nivelul de expresie celularatilde a PPARα icircn Mo Ly şi PMN sunt corelate
puternic pozitiv atacirct icircn lotul SM cacirct şi icircn lotul martor(fig547 548)
1 6 11 16 21 26 31
0
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
Pacienti
MFI a
nti-CD
36
42903
21093
64714
10188
75619
LCI
Media
LCS1 6 11 16 21 26 31 36
-1000
0
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
MFI a
nti- C
D36
37038
11935
62141
-616
74692Media + 2 DS
Media
Media - 2 DS
3200
3400
3600
3800
4000
4200
4400
4600
4800
Lot SM Lot Non-SM
P = 00676
MFI
anti-
CD36
3400
3600
3800
4000
4200
4400
4600
4800
5000
DA NU
AHC HTA
P = 008
Figura 547 Studiul relatiilor dintre
receptorii PPARα icircn SM A Mo vs PMN B Mo vs Ly
C PMN vs Ly Graficul ilustrează coeficienţii r P dreapta de
regresie (linia centrala) intervalul de icircncredere
95 şi intervalul de predicţie 95
Figura 548 Corelaţii icircntre receptorii PPARα icircn lotul
martor
A Mo vs PMN
B Mo vs Ly
C PMN vs Ly
Tot pentru lotul SM cacircnd am evaluat relaţia dintre nivelul de expresie relativă a
receptorilor PPARα icircn Eo şi nivelul de expresie relativa a receptorilor CD 36 am obţinut o
corelaţie negativă (r = - 05 P = 001) (fig 549 A)
50 100 150 200 250 300 350 50
100
150
200
250
300
350
400
450
500
PPARα Ly
PPARα PMN
y = 56641 + 1159 x r = 086 P lt 0001
C
50 100 150 200 250 300 350 400 0
50
100
150
200
250
300
350
PPARα Mo
PPARα Ly
y = 36665 + 0607 x r = 090 P lt 0001
B
150 200 250 300 350 400 450 0
50 100 150 200 250 300 350 400 450 500
PPARα PMN
PPARα Mo
y = 2505 + 0879 x r = 081 P lt 0001
A
50 100 150 200 250 300 350
50 100 150 200 250 300 350 400 450 500
PPARα Ly
PPARα PMN
y = 95668 + 0919 x r = 081 P lt 0001
C
100 150 200 250 300 350 400
0
50
100
150
200
250
300
350
400
PPARα Mo
PPARα Ly
y = -7503 + 0829 x r = 079 P lt 0001
B
100 150 200 250 300 350 400
50
100
150
200
250
300
350
400
450
500
PPARα Mo
PPARα PMN
y = 61384 + 0882 r = 074 P lt 0001
A
Figura 549 Corelaţii icircntre expresia PPARα icircn Eo şi alte tipuri de receptori investigaţi A PPARα Eo şi CD 36 (Lot SM) B PPARα Eo şi PPARα Mo( Lot Non-SM)
Icircn lotul martor am identificat o asociere moderată pozitivă (r = 038 P = 0033) icircntre
nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Eo şi Mo (figura 549B) corelaţie absentă icircn
lotul pacienţilor cu SM
Corelaţii dintre receptorii studiaţi şi componentele sindromului metabolic
Icircn lotul de control analiza statistică a relevat faptul că icircntre circumferinţa
abdominală (CA ) şi nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Mo Ly şi PMN există o
corelaţie inversă adică scăderea expresiei PPARα la nivelul acestor populatii celulare ar fi
icircnsoţită de creşterea CA (figura 550
Figura 550Corelaţii dintre receptorii
PPARα si CA A Mo B Ly C PMN
La pacienţii cu SM am notat o corelatie moderată negativă statistic semnificativă
icircntre TG şi valorile MFI a Ac anti- PPARα icircn Mo şi Ly( fig 551)
150 200 250 300 350 400 450 50
60
70
80
90
100
110
PPARα PMN
CA r = - 040 P = 0024
C
50 100 150 200 250 300 350 50
60
70
80
90
100
110
PPARα Ly
CA r = - 046 P = 0009
B
50 100 150 200 250 300 350 400 50
60
70
80
90
100
110
PPARα Mo
CA r = - 042 P = 0017
A
50 100 150 200 250 300 350 400 500
1000
1500
2000
2500
3000
PPARα Mo
PPARα Eo
r = 038 P = 0033
B
0 500 1000 1500 2000 2500 1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
PPARα Eo
CD36
r = 050 P = 0010
A
Figura 551 Lot SM Corelaţie icircntre expresia PPARα şi TG (A Mo B Ly)
Analizand corelatia dintre receptorii CD36 si valorile TA la pacientii cu SM am observat
o asociere pozitivă asteptată intre TAD si nivelul de expresie al receptorilor CD36 (fig 552)
Figura 552 Lot SM Corelaţii icircntre expresia
receptorilor CD36 şi valorile tensiunii arteriale
diastolice
Studiind corelaţiile dintre receptorii PPARα şi HDL-col la subiecţii din lotul martor am
notat o asociere pozitivă icircntre expresia PPARα icircn Mo şi Ly cu HDL-col (fig 553)
Figura 553 Lot martor Corelaţii icircntre HDL-col şi expresia PPARα icircn Mo(A) Ly(B)
Icircn lotul normal am evidenţiat corelaţii pozitive moderate dar semnificative statistic icircntre
CA şi valorile TAS (r = 062 P lt 0001) respectiv TAD (r = 050 P=0004) precum şi icircntre
CA şi glicemia subiecţilor normali (r = 052 P = 0003) Aceste date icircmpreună cu relaţia
invers proporţională identificată icircntre HDL-col şi CA (r = 050 P = 001) susţin validitatea
acestui studiu Icircn lotul subiecţilor cu SM am observat o corelaţie moderat pozitivă icircntre
expresia PPARα icircn populaţiiile de Mo şi Eo şi concentraţia a HDL-col (fig 554)
B
100 150 200 250 300 350 20
30
40
50
60
70
80
90
100
PPARα Ly
HDL-col-(mgdl)
r = 036 P = 0046
A
150 200 250 300 350 400 20
30
40
50
60
70
80
90
100
PPARα Mo
HDL-col-(mgd)l
r = 035 P = 005
70 75 80 85 90 95 100 1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
TAD (mmHg)
CD36
r = 048 P = 0013
B
50 100 150 200 250 300 350 -100
0
100
200
300
400
500
PPARα Ly
TG(mgdl)
r = - 042 P = 003
A
50 100 150 200 250 300 350 400 -100
0
100
200
300
400
500
PPARα Mo
TG ( mgdl) r =- 0 43 P = 0027
Figura 554 Corelaţii icircn SM icircntre HDL-col şi expresia PPARα icircn Mo (A) şi Eo(B)
Corelaţii icircntre nivelul de expresie relativă a PPARα şi markeri ai disfuncţiei
endoteliale şi inflamaţiei cronice
Deşi nu a icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică am reţinut corelaţia invers
proporţională (r = - 0331 P = 006) dintre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα
icircn PMN şi concentraţia serică a Non-HDL-colesterolului
Studiind relaţiile dintre parametri icircn lotul de pacienţi cu SM am observat o corelaţie
moderată invers proporţională icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Eo şi
acidul uric seric (figura 555 A) corelaţie absentă la subiecţii fără SM
Figura 555 Lot SM corelaţia dintre expresia PPARα icircn Eo şi acidul uric (A) respectiv
PPARα şi fibrinogen (B)
Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P=008) am notat pentru
pacienţii cu SM corelaţia invers proporţională dintre expresia PPARα icircn Eo şi concentraţia
serică a fibrinogenului ( figura 555B)
V5 Discuţii
Icircn cadrul lucrării de doctorat am studiat nivelul de expresie relativă a PPARα icircn
leucocitele pacienţilor cu SM comparativ cu cea a subiecţilor normali Expresia PPARα a fost
studiată icircn paralel cu cea a CD36 glicoproteină exprimată pe suprafaţa a numeroase celule
din organismul uman inclusiv pe cea a Mo şi macrofagelor Prin funcţia sa de receptor pentru
particulele oxidate de LDL CD36 cunoscut ca bdquoscavenger receptorrdquo de clasa B sau
bdquotrombospodin receptorrdquo contribuie la dezvoltarea inflamaţiei de la nivel endotelial şi
formarea plăcii de ateroscleroză Referitor la studiul PPARα icircn Eo icircn sindromul metabolic
menţionăm că studiul nostru este primul care arată că nivelul de expresie a proteinei PPARα
icircn Eo măsurat prin citometrie icircn flux este semnificativ mai redus la pacienţii care sunt
diagnosticaţi cu acest sindrom De asemenea icircn lotul cu SM cercetat icircn cadrul studiului
receptorilor PPARα numărul Eo circulante a fost semnificativ mai crescut la pacienţii cu SM
B
0 500 1000 1500 2000 2500 200
250
300
350
400
450
PPARα Eo o
Fibrinogen mgdl
r =- 036 P = 008
0 500 1000 1500 2000 2500 1 2 3 4 5 6 7 8 9
10 11
PPARα Eo_
Acid uric(mgdl) r = 048 P = 0014 A
0 500 1000 1500 2000 2500 10
20
30
40
50
60
70
80
PPARα Eo
HDL(mgdl)
r = 044 P = 0024
B
100 150 200 250 300 350 400 10
20
30
40
50
60
70
80
PPARα Mo
HDL( mgdl)
r = 046 P = 0019
A
(P = 003) Aceste constatări conduc la ipoteza că Eo joacă un rol special icircn mecanismele
patogenice declanşate icircn sindromul metabolic şi că receptorii PPARα sunt importanţi icircn
implicarea Eo icircn obezitate şi insulinorezistenţă Creşterea numărului de Eo circulante este
urmată de eliberarea mediatorilor proinflamatori iar reducerea expresiei PPARα icircn Eo
determină perturbarea mecanismelor de control al inflamaţiei cu exacerbarea cascadei
proinflamatorii Consecutiv se agravează disfuncţia endotelială şi se accelerează progresia
leziunilor de ateroscleroză Extrapolacircnd aceste ipoteze putem spune că asocierea raportată
dintre boala ischemică coronariană şi Eo poate fi şi consecinţa exacerbării cascadei
proinflamatorii de la nivel vascular produsă datorită scăderii expresiei PPARα icircn Eo iar
creşterea numărului de Eo circulante poate reprezenta o adaptare a organismului uman care
icircncearcă să suplinească deficitul de receptori PPARα Analizacircnd curba ROC pentru
intensităţile medii de fluorescenţă determinate pentru anticorpii anti- PPARα icircn Eo am
obţinut pentru acest biomarker o sensibilitate a testului de 565 şi o specificitate de 778
pentru un punct de cut-off de 1533 ( figura 536 ) Deşi aria AUC (Aria under the curve) egală
cu 0663 icircncadrează acest test ca avacircnd o acurateţe redusă observăm că că această valoare
este apropiată de determinările AUC pentru alţi factori (fibrinogen raport de aterogenitate
acid uric non- HDL-colesterol) cunoscuţi ca fiind implicaţi icircn aterogeneză şi inflamaţia
cronică (figura 431) Aceste remarci alături de faptul că icircn studiul receptorilor PPARα icircn
leucocite am inclus subiecţi la primul diagnostic de SM creează premisa integrării
determinării expresiei relative a receptorilor PPARα icircn diagnosticul complex al sindromului
metabolic Putem spune că icircn final studiul expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofilele
circulante se dovedește a fi util icircn diagnosticul precoce la nivel molecular al SM permiţacircnd
identificarea timpurie a unor indivizi cu risc cardiometabolic crescut Astfel intervenţia
precoce asupra subiecţilor cu deficit de PPARα icircn Eo contribuie la managementul eficient al
afecţiunilor degenerative icircn care inflamaţia cronică icircndeplineşte un rol primordial Referitor
la populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările efectuate prin citometrie de flux nu au
arătat existenţa unor diferenţe statistice icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα
la subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali Rezultatele noastre pot fi
consecinţa caracteristicilor loturilor studiate (icircn studiul nostru au fost incluşi subiecţi recrutaţi
la primul diagnostic de SM şi icircn absenţa stimulării receptorilor PPARα cu droguri agoniste
PPARα) dar icircn acelaşi timp pot apare diferenţe datorită metodei utilizate (231 232 233)
Făcacircnd o paralelă cu un studiu publicat icircn 2013 icircn Europa (231) care a arătat creşterea
nivelului de expresie al PPARα icircn Ly şi Mo observăm că deşi numărul de subiecţi a fost
aproximativ egal (57 participanţi icircn studiul nostru 60 icircn studiul DAmore) subiecţii icircn studiul
amintit au fost recrutaţi dintr-o clinică cu profil medical la primul diagnostic de SM icircn timp
ce metoda utilizată a fost PCR (Polymerase Chain Reaction) mult mai fidelă decacirct citometria
icircn flux icircn studiul receptorilor nucleari De asemenea DAmore nu investighează expresia
PPARα icircn Eo şi PMN icircn cercetare fiind incluse doar celulele CD14+ (predominant Mo) şi
CD14- (predominant Ly) Deşi nu am obţinut diferenţe statistic semnificative icircntre cele două
loturi referitoare la nivelul de expresie relativă a PPARα icircn Mo Ly şi PMN am observat
corelaţii puternice semnificative statistic icircntre expresia receptorilor PPARα icircn aceste tipuri
celulare Rezultatele obţinute sugerează existenţa unui mecanism diferit molecular de control
icircn eozinofile care reglează cantitatea de proteină PPARα icircn eozinofile versus alte tipuri de
leucocite (la pacienţii cu SM) şi acest lucru este icircn concordanţă cu cercetările care descriu
expresia PPARα mRNA icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale
bronşice keratinocite) Studiind prin citometrie de flux nivelul de expresie relativă a
receptorului CD36 la nivelul Mo am arătat prezenţa acestuia icircn Mo tuturor subiecţilor
investigaţi Analizacircnd valorile intensităţii medii de fluorescenţă a CD36 icircn loturile studiate
am observat o tendinţă de creştere la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali
confirmacircnd implicarea receptorului CD36 icircn patogeneza acestuia Referitor la expresia
receptorului CD36 rezultatele obţinute sunt icircn consens cu studii anterioare care au arătat
creşterea expresiei CD36 la pacienţii cu SM şi diabet zaharat Astfel pe lacircngă diferenţa icircn
expresia CD36 s-au raportat şi corelaţii inverse icircntre expresia proteinei CD36 şi nivelul
adiponectinei Acelaşi studiu a evidenţiat o corelaţie pozitivă intre expresia CD36 cu expresia
receptorilor PPAR gamma relaţia cu PPARα nefiind investigată
Analiza de subgrup a relaţiilor dintre componentele SM și elementele moleculare
proinflamatorii studiate a relevat prezenţa unor asocieri semnificativ statistice icircntre acestea
Se argumentează astfel că veridicitatea studiului este susţinută de interdependenţele statistice
ale componentelor SM Determinarea coeficientului de corelaţie Icircn studiul nostru nivelul de
expresie relativă a PPARα s-a corelat moderat negativ (figura 550) cu CA a subiecţilor din
lotul normal pentru populaţiile celulare de Mo (r = - 0420 P = 001) Ly (r = - 046 P =
0009) şi PMN (r = - 040 P = 0024) date care sunt icircn concordanţă cu studiile care arată
rolul PPARα icircn furnizarea energiei prin beta-oxidarea acizilor graşi Icircn acelaşi timp icircn lotul
pacienţilor cu SM nu am identificat prezenţa unei asocieri icircntre nivelul de expresie relativă a
PPARα şi valoarea măsurată a CA Asocierea dintre expresia relativă a PPARα cu obezitatea
de tip central completează datele existente referitoare la reglarea homeostaziei energetice
conturacircnd un mecanism de control deficitar al aportului caloric al SM Icircn condiţiile icircn care
rezultatele obţinute prin metoda citometriei icircn flux nu au arătat existenţa unei corelaţii intre
expresia PPARα şi CA la pacienţii cu SM considerăm că ar fi necesar studiul
polimorfismului genei PPARA care ar putea aduce informaţii importante cu privire la
implicarea acestor receptori icircn apariţia obezităţii de tip central Subliniem acest lucru deoarece
obezitatea este o boală plurifactorială icircn care pe lacircngă factorii ereditari sunt implicaţi factori
de mediu psihologici şi sociali (245) Existenţa unei componente genetice a aterosclerozei
este legată şi de prezenţa unor variante ale genei PPARA asociate cu creşterea incidenţei bolii
cardiovasculare (82) şi a SM (249) Icircn studiul nostru am constatat o scădere statistic
semnificativă a nivelului expresiei relative a receptorilor PPARα icircn Eo la subiecţii cu
antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială comparativ cu subiecţii fără istoric
familial de hipertensiune (figura 537) Deşi diferenţele calculate icircntre loturile studiate nu au
icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică la subiecţii care au declarat prezenţa
antecedentelor familiale de hipertensiune arterială remarcăm o tendinţă de scădere a
intensităţii medii de fluorescenţă pentru Ac anti-PPARα la nivelul Mo (figura 515 P = 006
) icircn timp ce expresia relativă a CD36 icircnregistrează o creştere la acesti subiecţi (figura 545 P
= 008) Icircn contextul riscului cardiovascular foarte icircnalt al pacienţilor cu SM amintim şi
existenţa corelaţiei pozitive dintre valorile tensiunii arteriale diastolice şi expresia relativă a
receptorului CD36 (r = 0483 P = 0013) Această constatare este icircn consens cu studiile care
au arătat că forma solubilă circulantă a CD36 este asociată cu factorii de risc cardiovasculari
fiind propusă ca un marker precoce al aterosclerozei Activarea PPARα este asociată cu
modularea metabolismului lipidic iar agoniştii PPARα sunt utilizaţi icircn mod curent pentru
tratamentul dislipidemiei Sub acţiunea agoniştilor PPARα se obţine o icircmbunătăţire a funcţiei
endoteliale şi a parametrilor reologici funcţiile pleiotropice ale agoniştilor PPARα fiind
dovedite icircn trialuri clinice controlate Icircn populaţiile de Mo şi Ly la pacienţii cu SM
cercetarea noastră a evidenţiat o asociere negativă icircntre nivelul de expresie relativă a
receptorilor PPARα şi concentraţia TG serice (figura 551) Astfel scăderea expresiei
receptorilor PPARα este asociată cu creşterea nivelului TG serice contribuind la profilul
lipidic aterogen din SM Icircn conformitate cu literatura de specialitate icircn studiul efectuat prin
metoda citometriei icircn flux am găsit prezenţa asocierii icircntre nivelul de expresie al PPARα şi
HDL-colesterol Corelaţia pozitivă dintre nivelul de expresie relativă PPARα şi concentraţia
HDL-colesterolului a fost observată icircn lotul martor icircn populaţiile de Mo (r = 035 P = 005)
şi Ly ( r = 036 P = 004) (figura 553) susţinacircnd faptul că stimularea receptorilor PPARα
este legată de creşterea nivelului seric al lipoproteinelor cu densitate crescută La pacienţii cu
SM corelaţia dintre expresia PPARα şi HDL-colesterol a fost evidenţiată icircn populaţiile de Mo
(r = 046 P = 0019) şi eozinofile (r = 044 P = 0024) Se desprinde concluzia că icircn
sindromul metabolic scăderea concentraţiei HDL-colesterol este legată de diminuarea
nivelului de expresie relativă a receptorilor nucleari PPARα icircntărind afirmaţiile legate de
rolul acestor receptori icircn progresia bolilor cardiovasculare Studiind reactanţii de fază acută
analiza statistică a relevat o diferenţă semnificativă din punct de vedere statistic icircntre valorile
fibrinogenului la pacienţii cu SM atunci cacircnd au fost comparaţi cu subiecţii fără SM
(Capitolul IV4 P lt0 001 figura 427A) De asemenea icircn Capitolul V dedicat studiul
expresiei relative a receptorilor PPARα studiul valorilor fibrinogenului a arătat creşterea
acestui reactant de faza acută icircn lotul cu SM comparativ cu lotul martor (P lt0 0001) Icircn
studiul nostru am calculat o corelaţie invers proporţionala (r = - -036 fig 555B) icircntre
nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile şi concentraţia serică a
fibrinogenului Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P = 008) am reţinut
această asociere deoarece am demonstrat că nivelul de expresie relativă al receptorilor
PPARα icircn eozinofile este mai scăzut icircn sindromul metabolic iar sindromul metabolic este
caracterizat printr-un status inflamator cronic status caracterizat şi de creşterea concentraţiei
serice a fibrinogenului De asemenea notam ca această corelaţie negativă se află icircn
concordanţă cu studiile care arata că tratamentul cu agonişti PPARα (fibraţi) determina
scăderea nivelului seric al fibrinogenului contribuind la diminuarea inflamaţiei cronice din
sindromul metabolic şi icircn consecinţă amelioracircnd insulinorezistenţa
LIMITE ȘI DIFICULTĂȚI IcircN CERCETARE
Icircn cadrul Tezei de Doctorat am desfăşurat o cercetare care şi-a propus studierea
expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Recrutarea anamneza şi examinarea
clinică a subiecţilor au fost realizate icircn cadrul Cabinetului de Medicină de Familie CMI Popa
Elena din Iaşi iar determinările hematologice şi biochimice s-au efectuat icircn cadrul
Laboratorului Ambulatorului de Specialitate al Spitalului Universitar ldquoSfacircntul Spiridon din
Iaşi Icircn studiul epidemiologic şi al markerilor inflamatori al sindromului metabolic desfăşurat
au fost incluşi un număr de 1530 de participanţi pe baza liberului consimţămacircnt examinaţi icircn
perioada 01012013 - 31122013 Icircn continuare icircn perioada 1012014 - 28022014 pe baza
criteriilor de includere şi excludere icircn cele două loturi de studiu am investigat un număr de 57
de subiecţi prezentaţi la consultaţie icircn această perioadă şi care au icircndeplinit criteriile de
includere icircn cele două loturi (Lot SM şi Lot Control) constituite pentru evaluarea nivelului de
expresie a receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Explorarea nivelului de expresie
relativă a receptorilor PPARα s-a desfăşurat icircn cadrul Laboratorului de Biologie Moleculară
de pe platforma Institutului Regional de Oncologie Datorită resurselor proprii financiare
limitate trebuie să subliniez că aceasta cercetare nu ar fi fost posibilă fără contribuţia unor
cercetători din domeniul medical care m-au sprijinit necondiţionat atacirct icircn elaborarea
protocolului de lucru cacirct şi icircn efectuarea propriu-zisă a studiului Icircn acest sens menţionăm şi
faptul că pentru studiul receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic am utilizat aparatura
Laboratorului de Biologie Moleculară (care deserveşte icircntreaga Regiune a Moldovei) Pe
această cale mulţumesc personalului Laboratorului de Biologie Moleculară pentru ajutorul
acordat icircn desfăşurarea cercetării doctorale icircn condiţiile icircn care se observa creşterea
numărului de pacienţi care se adresează acestei platforme de cercetare Mulţumesc de
asemenea şi Doamnei Doctor Elena Butoi din cadrul Institutului de Biologie şi Patologie
Moleculară ldquoNicolae Simionescurdquo Bucureşti) pentru donaţia anticorpului secundar anti-
FITC Icircn consecinţă pentru recrutarea unui număr mai mare de participanţi ar fi fost necesară
icircn primul racircnd obţinerea unor resurse financiare suplimentare pentru achiziţia de aparatură şi
reactivi Totuşi numărul subiecţilor recrutaţi este apropiat de numărul subiecţilor raportaţi icircn
cadrul unor granturi de cercetare care aveau ca ţinta studiul expresiei receptorilor PPARα
(212 227 228 231) Rezultatele obţinute continua seria lucrărilor care arata importanta
studiului mecanismelor etiopatogenice ale sindromului metabolic patologie care se afla icircntr-o
continuă creştere La pacienţii cu SM pe lacircngă diminuarea nivelului de expresie a receptorilor
PPARα icircn eozinofile ne aşteptam şi la evidenţierea unor modificări icircn expresia PPARα şi icircn
populaţiile de Ly Mo şi PMN Acest fapt poate fi explicat de utilizarea unor celule provenite
de la pacienţi fără afectare cardiovasculară fără diabet zaharat şi necesită continuarea
studiului pe culturi celulare icircn condiţii de stimulare cu agonişti PPARα deziderat care
impune continuarea investigării expresiei PPARα printr-un grant de cercetare
ORIGINALITATEA ȘI CONTRIBUȚIILE INOVATIVE ALE TEZEI DE
DOCTORAT PERSPECTIVE DE CERCETARE
Evaluarea nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn leucocitele circulante
aduce noi perspective icircn studiul obezităţii şi sindromului metabolic Importanta studiului
expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic derivă din prevalenta crescută a
sindromului metabolic icircn populaţia cercetată la care se adaugă riscul cardiovascular foarte
icircnalt al acestor pacienţi cu implicaţii majore icircn sănătatea publică Rolul receptorilor PPARα
icircn inflamaţie şi aterogeneza este binecunoscut dar studiul nostru este primul care a arătat că
nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα este semnificativ mai scăzut in populatiile
de eozinofile la pacienţii cu SM Această concluzie coroborata cu existenţa unei stracircnse
asocieri intre expresia receptorilor PPARα la nivelul Mo limfocitelor şi PMNlor creeaza
ipoteza existenţei unui mecanism de control diferit al expresiei PPARα la nivelul
eozinofilelor Această cercetare aduce informaţii importante referitoare la mecanismele
proinflamatorii care stau la baza insulinorezistenţei şi riscului cardiometabolic şi impune
continuarea studiului acestor receptori nucleari prin citometrie icircn flux metodă care poate fi
aplicată şi la scara mai largă dacă sunt asigurate resursele materiale necesare cercetării
Cercetarea prin citometrie icircn flux poate fi completată de studiul polimorfismului genei
PPARA şi astfel se pot identifica timpuriu indivizii cu potenţial risc cardiometabolic crescut
Studiul receptorilor PPARα a stabilit conexiuni cu factori proinflamatori şi aterogenetici iar
continuarea cercetării poate aduce şi elemente noi de diagnostic precoce icircn sindromul
metabolic contribuind la icircmbunătăţirea prognosticului acestor pacienţi
CONCLUZII FINALE
1 Aplicarea scorului de SM alături de implementarea algoritmului electronic de diagnostic
contribuie la o prelucrare rapidă eficientă și standardizată a informaţiilor la nivelul
medicinei primare
2 Prevalenţa SM calculată astfel icircn cadrul studiului este crescută (2732) icircn concordanţă
cu datele raportate
3 Controlul factorilor de risc cardiometabolici incluşi icircn SM se poate realiza prin
managementul stilului de viaţă (scăderea greutăţii corporale prin combaterea
sedentarismului şi adoptarea unei diete antiaterogene şi hipocalorice) şi administrarea
terapiei medicamentoase
4 Este necesară adoptarea unei politici de sănătate publică pentru prevenirea creşterii icircn
populaţie a prevalenţei obezităţii şi a diabetului zaharat
5 Noi metode de cercetare icircn domeniul SM axate pe diagnosticarea precoce şi cuantificarea
eficientă a acestuia duce la diminuarea incidenței evenimentelor cardiovasculare majore
6 Sindromul metabolic se caracterizează printr-un status inflamator cronic
7 Valorile Non-HDL-colesterolului şi a raportului de aterogenitate sunt semnificativ mai
mari la pacienţii cu SM
8 Dintre reactanţii de faza acută am observat că valoarea medie a fibrinogenului este mai
crescută icircn lotul cu SM
9 Valorile eozinofilelor sunt crescute icircn sindromul metabolic iar explorarea relaţiei dintre
eozinofile şi obezitate constituie una din direcţiile de studiu actuale ale sindromului
metabolic
10 Evaluarea markerilor inflamatori icircn contextul sindromului metabolic este utilă icircn
evaluarea complexă a a factorilor de risc cardiometabolici
11 Prin metoda citometriei icircn flux am demonstrat prezenta Receptorilor Activaţi de
Inductorii Proliferării Peroxizomilor ndash Alpha (PPARα) icircn toate populaţiile de leucocite
studiate (Mo limfocite PMN eozinofile) atacirct icircn lotul pacienţilor cu SM cacirct şi icircn lotul
martor
12 Utilizacircnd intensitatea medie de fluorescenţă a anticorpilor anti- PPARα am arătat că
nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile este semnificativ mai redus
la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali
13 Acest studiu este primul care a demonstrat existenţa unei scăderi statistic semnificative a
nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofilele pacienţilor cu SM
confirmacircnd cercetările recente care au evidenţiat rolul eozinofilelor şi al receptorilor
PPARα icircn obezitate reglarea inflamaţiei cronice şi aterogeneza
14 Contrar aşteptărilor noastre icircn populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările
efectuate icircn cele două loturi de studiu (cu şi fără sindom metabolic) nu am evidenţiat
diferenţe statistic seminificative icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα la
subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali
15 Icircn populaţiile de Mo limfocite şi polimorfonucleare am observat corelaţii puternice
semnificativ statistic icircntre expresia PPARα icircn aceste tipuri celulare sugeracircnd existenţa
unui mecanism unic de control al inflamaţiei cronice la nivelul acestor celule probabil
diferit de cel din eozinofile
16 La subiecţii cu SM expresia relativă a PPARα icircn Eo este invers asociată cu expresia
receptorului CD36 (receptor al particulelor de ox - LDL şi propus ca un marker precoce al
aterosclerozei) dovedind rolul antiinflamator al receptorilor PPARα la nivel endotelial
17 La pacienţii cu antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială nivelul de
expresie al receptorilor PPARα icircn eozinofile şi Mo este diminuat comparativ cu subiecţii
fără antecedente familiale de hipertensiune arterială Putem spune că studiul efectuat de
noi aduce informaţii importante legate de geneză aterosclerozei şi hipertensiunii arteriale
18 Prin studiul asocierilor dintre receptorii PPARα şi componentele clinice ale sindromului
metabolic am arătat rolul acestor receptori icircn determinismul obezităţii de tip central
nivelul expresiei relative a receptorilor PPARα fiind invers proporţional cu circumferinţa
abdominală
19 Icircn acelaşi timp nivelul de expresie a PPARα icircn sindromul metabolic este asociat pozitiv
cu concentraţia serică a HDL-colesterolului şi invers asociat cu nivelul trigliceridelor
serice dovedind rolul acestor receptori icircn diminuarea procesului inflamator cronic de la
nivel vascular
20 La pacienţii cu SM scăderea expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofile este corelată cu
creşterea unor markeri ai sindromului inflamator cronic cardiometabolic (acid uric
fibrinogen) ilustracircnd importanta receptorilor icircn reglarea status-ului inflamator cronic din
sindromul metabolic
21 Utilizarea metodei flowcitometrice pentru studiul expresiei relative a receptorilor PPARα
icircn leucocite a adus informaţii importante cu privire la mecanismele moleculare de control
implicate icircn patogenia bolilor cardiometabolice icircn concordanţă cu cercetările care descriu
expresia PPAR icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale bronşice
keratinocite)
BIBLIOGRAFIE SELECTIVA
1 Kahn R Metabolic syndrome- what is the clinical usefulness Lancet 2008371(9628)1892-3
2 Reaven GM The metabolic syndrome is this diagnosis necessary Am J Clin Nutr 2006 83(6)1237-7
3 Grundy SM Pre-Diabetes Metabolic Syndrome and Cardiovascular Risk J Am Coll Cardiol 201259(7)
635-43
4 International Diabetes Federation IDF Diabetes Atlas 6th edn International Diabetes Federation Belgium
Brussels 20131-155
5 World Health Organization Global Status Report on Noncommunicable Diseases 2010 World Health
Organization Geneva Switzerland 20111-176
6 Coman AE Petrovanu R Sindromul metabolic in practica de ambulator Editura Pim Iaşi 2009 1-103
7 Grundy SM Becker D Clark LT et alThird Report of the National Cholesterol Education Program (NCEP)
Expert Panel on Detection Evaluation and Treatment of High Blood Cholesterol in Adults (Adult
Treatment Panel III) Final Report Circulation 2002106(25)3143-90
8 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J Metabolic syndrome- a new worldwide definition A Consensus Statement
from the International Diabetes Federation Diabet Med 2006 23(5)469-80
9 KG Alberti KG Eckel RH Grundy SM etal International Diabetes Federation task force on epidemiology
and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart Association World Heart
Federation International Atherosclerosis Society International Association for the study of obesity
Harmonizing the metabolic syndrome a joint interim statement of the International Diabetes Federation task
force on epidemiology and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart
Association World Heart Federation International Atherosclerosis society and International Association
for the study of obesity Circulation 2009120(16)1640-5
10 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J IDF Epidemiology Task Force The metabolic syndrome new
worldwide definition Lancet 2005 366 1059 - 62
11 Oleszczyk M Svab I Seifert B et al Primary healthcare in the developing part of Europe changes and
development in the former Eastern Bloc countries that joined the European Union following 2004 Med Sci
Monit 2009(15)78ndash84
12 Jung U J Choi M S Obesity and Its Metabolic Complications The Role of Adipokines and the
Relationship between Obesity Inflammation Insulin Resistance Dyslipidemia and Nonalcoholic Fatty
Liver Disease Int J Mol Sci 2014rsquo15(4) 6184-223
13 Vanden Heuvel JP Peters JM Peroxisome Proliferators In Ramos K (ed) Cellular and Molecular
Toxicology (Second Edition) Volume 2 New York Elsevier Science Inc 2010 145 - 67
14 Yessoufou A Wahli W Multifaceted roles of peroxisome proliferator-activated receptors (PPARs) at the
cellular and whole organism levels Swiss Med Wkl 2010140w13071 doi104414smw201013071
15 Azhar S Peroxisome proliferator-activated receptors metabolic syndrome and cardiovascular disease
Future Cardiology 20106(5)657-91
16 Andries G Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity
Diabetes and Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(Suppl)24-32
17 Zandbergen F Plutzky J PPARalpha in atherosclerosis and inflammation Biochim Biophys Acta
20071771(8)972-82
18 Straus DS Glass CK Anti-inflammatory actions of PPAR ligands new insights on cellular and molecular
mechanisms Trends Immunol 200728(12)551-8
19 Zlei M Zugun- Eloae F Carasevici E Citometrie icircn flux - Bază şi clinică Icircn Hinescu ME (ed) Citometrie icircn
flux - principii şi aplicaţii clinice Bucureşti Editura Viaţa Medicală Romacircnească 20111-128
20 Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity Diabetes and
Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(9)24-32
21 Woerly G Honda K Loyens M et al Peroxisome proliferator-activated receptors alpha and gamma down-
regulate allergic inflammation and eosinophil activation J Exp Med 2003198(3)411-21
22 Salle-Saumont D Brenuchon C Kanda A et al Peroxisome proliferator-activated receptor alpha regulates
skin inflammation and humoral response in atopic dermatitis J Clin Allergy Immunology 2008 21(4)962-8
23 Schote A Turner J Schiltz J et al Nuclear receptors in human immune cells expression and correlations
Mol Immunolog 200744(6)1436-45
24 DAmore S Vacca M Graziano G et al Nuclear receptors expression chart icircn peripheral blood
mononuclear cells identifies patients with Metabolic Syndrome Biochim Biophys Acta
20131832(12)2289-301
25 Uthurralt J Gordish-Dressman H Bradbury M T et al PPARalpha L162V underlies variation in serum
triglycerides and subcutaneous fat volume in young males BMC Med Genet 2007855
26 Hiukka A Leinonen ES Jauhiainen M et al Long-term effects of fenofibrate on VLDL and HDL
subspecies icircn participants with type 2 diabetes mellitus Diabetologia 2007 50(10)2067-75
27 Robins SJ Rubins HB Faas FH et alInsulin resistance and cardiovascular events with low HDL
cholesterol The Veterans Affairs HDL Intervention Trial (VA-HIT) Diabetes Care 2003 26(5)1513-7
28 Devaraj S Siegel D Jialal I Statin Therapy in Metabolic Syndrome and Hypertension Post-JUPITER
What is the Value of CRP Curr Atheroscler Rep 2011 13(1) 31ndash42
29 Imperatore G Riccardi G Iovino C et al Plasma Fibrinogen A New Factor of the Metabolic Syndrome A
population-based study Diabetes Care 19982 1(4)649-54
30 Krysiak R Gdula-Dymek A Bachowski R Okopien B Pleiotropic effects of atorvastatin and fenofibrate
in metabolic syndrome and different types of pre-diabete Diabetes Care 201033(10)2266-70
31 Hermans MP Impact of Fenofibrate on Type 2 Diabetes Patients with Features of the Metabolic Syndrome
Subgroup Analysis From FIELD Curr Cardiol Rev 20106(2)112-8
32 Silverstein R Inflammation atherosclerosis and arterial thrombosis Role of the scavenger receptor CD36
Cleveland Clinic Journal of Medicine 200976(Suppl 2)S27-S30
33 Hăncu N Obezitatea In Vereşiu IA (ed) Diabetul zaharat nutritia si bolile metabolice Volume 2 Editura
Echinox Cluj- Napoca 2010 1-15
Lista lucrări publicate
1 Elena Popa Maria Maidaniuc Agnes Bacusca Alamir Diaa Rodica Petrovanu Adorata Elena
Coman Disfuncţia endotelială ndash de la mecanisme moleculare la cuantifi care şi tratament icircn practica
medicală Practica Medicală 20149(3) 109-14
2 Elena Popa Agnes Bacusca Alamir Diaa Maria Maidaniuc Rodica Petrovanu Adorata Elena Coman
The function of insulin receptor (IRF) in evolution of obesity correlation with adipocytes diameters
Archives of the Balkan Medical Union 201449(3) 275-9
3 Elena Popa Florin Zugun-Eloae Mihaela Zlei Daniela Jitaru Oana Maria Pintilie Adorata Elena
Coman Maria Traian Didona Anca Ungureanu Eugen Carasevici - acceptata pentru numarul 42014
Flow cytometry analysis of PPAR-alpha receptors in metabolic syndrome) Revista Romană de
Medicină de Laborator(RRLM-D-14-00034R1- adeverinţa ataşată
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile Tabel XXXIV Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn Eo
Lot SM Lot Non-SM
N 26 31
Mediaplusmn SD 141057 plusmn 47604 172209 plusmn 37565
Mediana 142450 171300
Minimum 35000 68500
Maximum 233700 250600
Percentila 25 119300 153225
Percentila 75 169700 199550
Am studiat nivelul relativ de expresie a receptorilor PPARα icircn Eo iar rezultatele au
fost figurate sub forma de histograme (figura 532)
Figura 532 Distribuţia frecventelor relative ale valorilor MFI anti- PPARα icircn Eo
Din diagrama Shewhart (figura 533) se observă că toate valorile determinate pentru
nivelul de expresie relativă a PPARα icircn Eo pentru lotul SM s-au icircncadrat icircn [Media plusmn 3 DS]
peste 90 din determinări fiind cuprinse icircn [Media plusmn 2 DS] iar icircn [Media plusmn 1 DS] sunt
incluse peste 65 din valorile MFI
Figura 533 Lot SM
Variaţia expresiei relative a PPARα icircn Eo
Număr pacienţi 26
Minimum 35000
Maximum 233700
Media 141057
Deviaţia Standard 47604
24 valori icircncadrat eicircn [Media plusmn 2DS]
Pentru subiecţii incluşi icircn lotul martor analiza diagramei (figura 534) a arătat că
toate cele 31 de valori ale MFI pentru PPARα icircn Eo se icircncadrează icircn [Media plusmn 3DS] iar 30
dintre acestea se icircncadrează icircn [ Media plusmn 2 DS]
Figura 534 Lot Non -SM
Variaţia expresiei relative a PPARα icircn Eo
Număr pacienţi 31
Minimum 685
Maximum 2506
Media 172209
Deviaţia Standard 375 65
30 valori icircncadrate icircn [Media plusmn 2DS]
Comparacircnd subiecţii cu SM cu cei din lotul martor am observat o scădere
semnificativă statistic a MFI a Ac anti - PPARα icircn Eo pentru pacienţiir cu SM ( figura 535)
PPARα Eo Lot Non-SM
Număr 31
Mediana 171300
Percentila 25 152325
Percentila 75 199550
PPARα Eo Lot SM
Număr 26
Mediana 142450
Percentila 25 119300
Percentila 75 169700
Figura 5 35 Comparaţie icircntre nivelul de expresie a PPARα icircn Eo
0 500 1000 1500 2000 2500 3000
0
10
20
30
40
50
MFI anti-PPAR a
Frecvent
a relativa
()
Lot SM
400 800 1200 1600 2000 2400 2800
0
5
10
15
20
25
30
35
40
45
MFI anti-PPAR a
Frecenta
relativa
()
Lot Non-SM
1 6 11 16 21 26 31
-500
0
500
1000
1500
2000
2500
3000
MFI a
nti-PP
AR
a
14106
4765
23447
94
28117
Media + 2DS
Media- 2DS
LCI
LCS
1 6 11 16 21 26 31 36
500
1000
1500
2000
2500
3000
MFI an
ti-PPA
R a
17221
9708
24734
5951
28490
LCI
Media-2DS
Media
Media +2 DS
LCS
1200
1300
1400
1500
1600
1700
1800
1900
Lot SM Lot Non-SM
P=00072
Cu ajutorul curbei ROC am evaluat posibilitatea utilizării MFI a Ac anti - PPARα icircn
Eo ca marker pentru diagnosticul SM Valoarea MFI a Ac anti - PPARα icircn Eo care prezice cu
cea mai mare acurateţe prezenţa SM a fost de 1533 (punctul de ldquocut-offrdquo) pentru care am
calculat o sensibilitate de 5652 şi o specificitate de 7778 Calculul ariei AUC a furnizat
valoarea de 0663 şi deci determinarea parametrului MFI anti- PPARα icircn Eo are valoarea
unui test cu acurateţe redusatilde icircn diagnosticul SM Studiind expresia PPARα icircn Eo la subiecţii
care au prezentat AHC de HTA am observat o scădere semnificativă statistic (P = 00023) a
expresiei PPARα la subiecţii cu istoric familial de HTA comparativ cu subiecţii fatilderatilde AHC de
HTA (figura 537)
AHC HTA
Număr 22
Mediana 148800
Percentila 25 116425
Percentila 75 170750
AHC HTA absente
Număr 35
Mediana 170850
Percentila 25 143700
Percentila 75 195000
Figura 537 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Eo funcţie de AHC de HTA
Studiind subiecţii cu AHC declarate de dislipidemie nu am identificat diferenţe icircntre
nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Eo subiecţilor cu AHC de dislipidemie
comparativ cu cei care nu au declarat prezenţa AHC de dislipidemie (t - Test P = 067)
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor CD36
Am studiat expresia receptorilor CD36 icircn Mo subiecţilor incluşi icircn studiu
Lot Non - SM
BLot SM
Figura 539 Analiza flowcitometrica pentru receptorii CD36 icircn Mo
Pentru toţi participanţii la studiu valorile MFI au variat icircn intervalul [817 6933] iar
valoarea medie a MFI a Ac anti-CD36 a fost de 397133 plusmn 120902 Tabel XXXVII Statistică descriptivă pentru a CD36 icircn Mo
Lot SM Lot Non-SM
Media 429034 370377
Deviatia Standard 109051 125514
Mediana 411000 362800
Minimum 266400 81700
Maximum 693300 616800
Percentila 25 346200 273750
Percentila 75 469000 453300
Distribuţia frecvenţelor relative a MFI au fost prezentate sub formă histogramelor
Figura 541 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti - CD36 icircn Mo
MFI
ant
i-PPA
R a Eo
1000
1100
1200
1300
1400
1500
1600
1700
1800
1900
DA NU
AHC HTA
P=00023
1000 2000 3000 4000 5000 6000 7000 8000
0
5
10
15
20
25
MFI anti-CD36
Frecve
nta rela
tiva (
)
Lot SM
0 1778 3556 5333 7111
0
5
10
15
20
25
30
35
MFI anti-CD36
Frecve
nta rel
ativa (
)
Lot Non - SM
Referitor la lotul SM 92 din valorile MFI a Ac anti- CD36 s-au icircncadrat icircn
intervalul Media plusmn 2 DS (figura 542) iar pentru lotul martor peste 90 dintre acestea icircn
Media plusmn 2 DS (figura 543)
Figura 542 Lot SM
Variaţia MFI anti-CD36 icircn Mo
Număr pacienţi 26
Minimum 2664
Maximum 6933
Media 429034
Deviaţia Standard 109051
Figura 543 Lot Non -SM
Variaţia MFI anti- CD36 icircn Mo
Număr 31
Minimum 81700
Maximum 616800
Media 370377
Deviaţia Standard 125514
Comparacircnd subiecţii cu SM cu cei din lotul normal am constatat o tendinţă de creştere
a expresiei CD36 icircn lotul cu SM((t - Test P= 0067)
MFI anti - CD36 Lot Non-SM
Număr 31
Mediana 3628
Percentila 25 2737
Percentila 75 4533
MFI anti - CD36 Lot SM
Număr 26
Mediana 4110
Percentila 25 3462
Percentila 75 4690
Figura 544 Comparaţie icircntre cel două loturi privind MFI anti - CD36 icircn Mo
Referindu-ne la subiecţii cu AHC de HTA am observat o tendinţă de creştere a
valorilor MFI anti-CD36 comparativ cu cei care nu au avut AHC de HTA (t - Test P = 0 08)
AHC HTA
Număr 22
Mediana 442800
Percentila 25 355275
Percentila 75 519475
AHC HTA absenţe
Număr 35
Mediana 377400
Percentila 25 316900
Percentila 75 443400
Figura 545 Comparaţie icircntre expresia CD36 icircn Mo funcţie de AHC de HTA
Nu s-au calculat diferenţe semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor
PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de dislipidemie atunci cacircnd aceştia au fost comparaţi cu
subiecţii fără AHC de dislipidemie (t - Test P=031)
Corelaţii icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα si CD36
Studiind valorile intensităţii medii de fluorescenţă a Ac anti-PPARα icircn Mo Ly şi
PMN am observat că nivelul de expresie celularatilde a PPARα icircn Mo Ly şi PMN sunt corelate
puternic pozitiv atacirct icircn lotul SM cacirct şi icircn lotul martor(fig547 548)
1 6 11 16 21 26 31
0
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
Pacienti
MFI a
nti-CD
36
42903
21093
64714
10188
75619
LCI
Media
LCS1 6 11 16 21 26 31 36
-1000
0
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
MFI a
nti- C
D36
37038
11935
62141
-616
74692Media + 2 DS
Media
Media - 2 DS
3200
3400
3600
3800
4000
4200
4400
4600
4800
Lot SM Lot Non-SM
P = 00676
MFI
anti-
CD36
3400
3600
3800
4000
4200
4400
4600
4800
5000
DA NU
AHC HTA
P = 008
Figura 547 Studiul relatiilor dintre
receptorii PPARα icircn SM A Mo vs PMN B Mo vs Ly
C PMN vs Ly Graficul ilustrează coeficienţii r P dreapta de
regresie (linia centrala) intervalul de icircncredere
95 şi intervalul de predicţie 95
Figura 548 Corelaţii icircntre receptorii PPARα icircn lotul
martor
A Mo vs PMN
B Mo vs Ly
C PMN vs Ly
Tot pentru lotul SM cacircnd am evaluat relaţia dintre nivelul de expresie relativă a
receptorilor PPARα icircn Eo şi nivelul de expresie relativa a receptorilor CD 36 am obţinut o
corelaţie negativă (r = - 05 P = 001) (fig 549 A)
50 100 150 200 250 300 350 50
100
150
200
250
300
350
400
450
500
PPARα Ly
PPARα PMN
y = 56641 + 1159 x r = 086 P lt 0001
C
50 100 150 200 250 300 350 400 0
50
100
150
200
250
300
350
PPARα Mo
PPARα Ly
y = 36665 + 0607 x r = 090 P lt 0001
B
150 200 250 300 350 400 450 0
50 100 150 200 250 300 350 400 450 500
PPARα PMN
PPARα Mo
y = 2505 + 0879 x r = 081 P lt 0001
A
50 100 150 200 250 300 350
50 100 150 200 250 300 350 400 450 500
PPARα Ly
PPARα PMN
y = 95668 + 0919 x r = 081 P lt 0001
C
100 150 200 250 300 350 400
0
50
100
150
200
250
300
350
400
PPARα Mo
PPARα Ly
y = -7503 + 0829 x r = 079 P lt 0001
B
100 150 200 250 300 350 400
50
100
150
200
250
300
350
400
450
500
PPARα Mo
PPARα PMN
y = 61384 + 0882 r = 074 P lt 0001
A
Figura 549 Corelaţii icircntre expresia PPARα icircn Eo şi alte tipuri de receptori investigaţi A PPARα Eo şi CD 36 (Lot SM) B PPARα Eo şi PPARα Mo( Lot Non-SM)
Icircn lotul martor am identificat o asociere moderată pozitivă (r = 038 P = 0033) icircntre
nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Eo şi Mo (figura 549B) corelaţie absentă icircn
lotul pacienţilor cu SM
Corelaţii dintre receptorii studiaţi şi componentele sindromului metabolic
Icircn lotul de control analiza statistică a relevat faptul că icircntre circumferinţa
abdominală (CA ) şi nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Mo Ly şi PMN există o
corelaţie inversă adică scăderea expresiei PPARα la nivelul acestor populatii celulare ar fi
icircnsoţită de creşterea CA (figura 550
Figura 550Corelaţii dintre receptorii
PPARα si CA A Mo B Ly C PMN
La pacienţii cu SM am notat o corelatie moderată negativă statistic semnificativă
icircntre TG şi valorile MFI a Ac anti- PPARα icircn Mo şi Ly( fig 551)
150 200 250 300 350 400 450 50
60
70
80
90
100
110
PPARα PMN
CA r = - 040 P = 0024
C
50 100 150 200 250 300 350 50
60
70
80
90
100
110
PPARα Ly
CA r = - 046 P = 0009
B
50 100 150 200 250 300 350 400 50
60
70
80
90
100
110
PPARα Mo
CA r = - 042 P = 0017
A
50 100 150 200 250 300 350 400 500
1000
1500
2000
2500
3000
PPARα Mo
PPARα Eo
r = 038 P = 0033
B
0 500 1000 1500 2000 2500 1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
PPARα Eo
CD36
r = 050 P = 0010
A
Figura 551 Lot SM Corelaţie icircntre expresia PPARα şi TG (A Mo B Ly)
Analizand corelatia dintre receptorii CD36 si valorile TA la pacientii cu SM am observat
o asociere pozitivă asteptată intre TAD si nivelul de expresie al receptorilor CD36 (fig 552)
Figura 552 Lot SM Corelaţii icircntre expresia
receptorilor CD36 şi valorile tensiunii arteriale
diastolice
Studiind corelaţiile dintre receptorii PPARα şi HDL-col la subiecţii din lotul martor am
notat o asociere pozitivă icircntre expresia PPARα icircn Mo şi Ly cu HDL-col (fig 553)
Figura 553 Lot martor Corelaţii icircntre HDL-col şi expresia PPARα icircn Mo(A) Ly(B)
Icircn lotul normal am evidenţiat corelaţii pozitive moderate dar semnificative statistic icircntre
CA şi valorile TAS (r = 062 P lt 0001) respectiv TAD (r = 050 P=0004) precum şi icircntre
CA şi glicemia subiecţilor normali (r = 052 P = 0003) Aceste date icircmpreună cu relaţia
invers proporţională identificată icircntre HDL-col şi CA (r = 050 P = 001) susţin validitatea
acestui studiu Icircn lotul subiecţilor cu SM am observat o corelaţie moderat pozitivă icircntre
expresia PPARα icircn populaţiiile de Mo şi Eo şi concentraţia a HDL-col (fig 554)
B
100 150 200 250 300 350 20
30
40
50
60
70
80
90
100
PPARα Ly
HDL-col-(mgdl)
r = 036 P = 0046
A
150 200 250 300 350 400 20
30
40
50
60
70
80
90
100
PPARα Mo
HDL-col-(mgd)l
r = 035 P = 005
70 75 80 85 90 95 100 1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
TAD (mmHg)
CD36
r = 048 P = 0013
B
50 100 150 200 250 300 350 -100
0
100
200
300
400
500
PPARα Ly
TG(mgdl)
r = - 042 P = 003
A
50 100 150 200 250 300 350 400 -100
0
100
200
300
400
500
PPARα Mo
TG ( mgdl) r =- 0 43 P = 0027
Figura 554 Corelaţii icircn SM icircntre HDL-col şi expresia PPARα icircn Mo (A) şi Eo(B)
Corelaţii icircntre nivelul de expresie relativă a PPARα şi markeri ai disfuncţiei
endoteliale şi inflamaţiei cronice
Deşi nu a icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică am reţinut corelaţia invers
proporţională (r = - 0331 P = 006) dintre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα
icircn PMN şi concentraţia serică a Non-HDL-colesterolului
Studiind relaţiile dintre parametri icircn lotul de pacienţi cu SM am observat o corelaţie
moderată invers proporţională icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Eo şi
acidul uric seric (figura 555 A) corelaţie absentă la subiecţii fără SM
Figura 555 Lot SM corelaţia dintre expresia PPARα icircn Eo şi acidul uric (A) respectiv
PPARα şi fibrinogen (B)
Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P=008) am notat pentru
pacienţii cu SM corelaţia invers proporţională dintre expresia PPARα icircn Eo şi concentraţia
serică a fibrinogenului ( figura 555B)
V5 Discuţii
Icircn cadrul lucrării de doctorat am studiat nivelul de expresie relativă a PPARα icircn
leucocitele pacienţilor cu SM comparativ cu cea a subiecţilor normali Expresia PPARα a fost
studiată icircn paralel cu cea a CD36 glicoproteină exprimată pe suprafaţa a numeroase celule
din organismul uman inclusiv pe cea a Mo şi macrofagelor Prin funcţia sa de receptor pentru
particulele oxidate de LDL CD36 cunoscut ca bdquoscavenger receptorrdquo de clasa B sau
bdquotrombospodin receptorrdquo contribuie la dezvoltarea inflamaţiei de la nivel endotelial şi
formarea plăcii de ateroscleroză Referitor la studiul PPARα icircn Eo icircn sindromul metabolic
menţionăm că studiul nostru este primul care arată că nivelul de expresie a proteinei PPARα
icircn Eo măsurat prin citometrie icircn flux este semnificativ mai redus la pacienţii care sunt
diagnosticaţi cu acest sindrom De asemenea icircn lotul cu SM cercetat icircn cadrul studiului
receptorilor PPARα numărul Eo circulante a fost semnificativ mai crescut la pacienţii cu SM
B
0 500 1000 1500 2000 2500 200
250
300
350
400
450
PPARα Eo o
Fibrinogen mgdl
r =- 036 P = 008
0 500 1000 1500 2000 2500 1 2 3 4 5 6 7 8 9
10 11
PPARα Eo_
Acid uric(mgdl) r = 048 P = 0014 A
0 500 1000 1500 2000 2500 10
20
30
40
50
60
70
80
PPARα Eo
HDL(mgdl)
r = 044 P = 0024
B
100 150 200 250 300 350 400 10
20
30
40
50
60
70
80
PPARα Mo
HDL( mgdl)
r = 046 P = 0019
A
(P = 003) Aceste constatări conduc la ipoteza că Eo joacă un rol special icircn mecanismele
patogenice declanşate icircn sindromul metabolic şi că receptorii PPARα sunt importanţi icircn
implicarea Eo icircn obezitate şi insulinorezistenţă Creşterea numărului de Eo circulante este
urmată de eliberarea mediatorilor proinflamatori iar reducerea expresiei PPARα icircn Eo
determină perturbarea mecanismelor de control al inflamaţiei cu exacerbarea cascadei
proinflamatorii Consecutiv se agravează disfuncţia endotelială şi se accelerează progresia
leziunilor de ateroscleroză Extrapolacircnd aceste ipoteze putem spune că asocierea raportată
dintre boala ischemică coronariană şi Eo poate fi şi consecinţa exacerbării cascadei
proinflamatorii de la nivel vascular produsă datorită scăderii expresiei PPARα icircn Eo iar
creşterea numărului de Eo circulante poate reprezenta o adaptare a organismului uman care
icircncearcă să suplinească deficitul de receptori PPARα Analizacircnd curba ROC pentru
intensităţile medii de fluorescenţă determinate pentru anticorpii anti- PPARα icircn Eo am
obţinut pentru acest biomarker o sensibilitate a testului de 565 şi o specificitate de 778
pentru un punct de cut-off de 1533 ( figura 536 ) Deşi aria AUC (Aria under the curve) egală
cu 0663 icircncadrează acest test ca avacircnd o acurateţe redusă observăm că că această valoare
este apropiată de determinările AUC pentru alţi factori (fibrinogen raport de aterogenitate
acid uric non- HDL-colesterol) cunoscuţi ca fiind implicaţi icircn aterogeneză şi inflamaţia
cronică (figura 431) Aceste remarci alături de faptul că icircn studiul receptorilor PPARα icircn
leucocite am inclus subiecţi la primul diagnostic de SM creează premisa integrării
determinării expresiei relative a receptorilor PPARα icircn diagnosticul complex al sindromului
metabolic Putem spune că icircn final studiul expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofilele
circulante se dovedește a fi util icircn diagnosticul precoce la nivel molecular al SM permiţacircnd
identificarea timpurie a unor indivizi cu risc cardiometabolic crescut Astfel intervenţia
precoce asupra subiecţilor cu deficit de PPARα icircn Eo contribuie la managementul eficient al
afecţiunilor degenerative icircn care inflamaţia cronică icircndeplineşte un rol primordial Referitor
la populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările efectuate prin citometrie de flux nu au
arătat existenţa unor diferenţe statistice icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα
la subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali Rezultatele noastre pot fi
consecinţa caracteristicilor loturilor studiate (icircn studiul nostru au fost incluşi subiecţi recrutaţi
la primul diagnostic de SM şi icircn absenţa stimulării receptorilor PPARα cu droguri agoniste
PPARα) dar icircn acelaşi timp pot apare diferenţe datorită metodei utilizate (231 232 233)
Făcacircnd o paralelă cu un studiu publicat icircn 2013 icircn Europa (231) care a arătat creşterea
nivelului de expresie al PPARα icircn Ly şi Mo observăm că deşi numărul de subiecţi a fost
aproximativ egal (57 participanţi icircn studiul nostru 60 icircn studiul DAmore) subiecţii icircn studiul
amintit au fost recrutaţi dintr-o clinică cu profil medical la primul diagnostic de SM icircn timp
ce metoda utilizată a fost PCR (Polymerase Chain Reaction) mult mai fidelă decacirct citometria
icircn flux icircn studiul receptorilor nucleari De asemenea DAmore nu investighează expresia
PPARα icircn Eo şi PMN icircn cercetare fiind incluse doar celulele CD14+ (predominant Mo) şi
CD14- (predominant Ly) Deşi nu am obţinut diferenţe statistic semnificative icircntre cele două
loturi referitoare la nivelul de expresie relativă a PPARα icircn Mo Ly şi PMN am observat
corelaţii puternice semnificative statistic icircntre expresia receptorilor PPARα icircn aceste tipuri
celulare Rezultatele obţinute sugerează existenţa unui mecanism diferit molecular de control
icircn eozinofile care reglează cantitatea de proteină PPARα icircn eozinofile versus alte tipuri de
leucocite (la pacienţii cu SM) şi acest lucru este icircn concordanţă cu cercetările care descriu
expresia PPARα mRNA icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale
bronşice keratinocite) Studiind prin citometrie de flux nivelul de expresie relativă a
receptorului CD36 la nivelul Mo am arătat prezenţa acestuia icircn Mo tuturor subiecţilor
investigaţi Analizacircnd valorile intensităţii medii de fluorescenţă a CD36 icircn loturile studiate
am observat o tendinţă de creştere la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali
confirmacircnd implicarea receptorului CD36 icircn patogeneza acestuia Referitor la expresia
receptorului CD36 rezultatele obţinute sunt icircn consens cu studii anterioare care au arătat
creşterea expresiei CD36 la pacienţii cu SM şi diabet zaharat Astfel pe lacircngă diferenţa icircn
expresia CD36 s-au raportat şi corelaţii inverse icircntre expresia proteinei CD36 şi nivelul
adiponectinei Acelaşi studiu a evidenţiat o corelaţie pozitivă intre expresia CD36 cu expresia
receptorilor PPAR gamma relaţia cu PPARα nefiind investigată
Analiza de subgrup a relaţiilor dintre componentele SM și elementele moleculare
proinflamatorii studiate a relevat prezenţa unor asocieri semnificativ statistice icircntre acestea
Se argumentează astfel că veridicitatea studiului este susţinută de interdependenţele statistice
ale componentelor SM Determinarea coeficientului de corelaţie Icircn studiul nostru nivelul de
expresie relativă a PPARα s-a corelat moderat negativ (figura 550) cu CA a subiecţilor din
lotul normal pentru populaţiile celulare de Mo (r = - 0420 P = 001) Ly (r = - 046 P =
0009) şi PMN (r = - 040 P = 0024) date care sunt icircn concordanţă cu studiile care arată
rolul PPARα icircn furnizarea energiei prin beta-oxidarea acizilor graşi Icircn acelaşi timp icircn lotul
pacienţilor cu SM nu am identificat prezenţa unei asocieri icircntre nivelul de expresie relativă a
PPARα şi valoarea măsurată a CA Asocierea dintre expresia relativă a PPARα cu obezitatea
de tip central completează datele existente referitoare la reglarea homeostaziei energetice
conturacircnd un mecanism de control deficitar al aportului caloric al SM Icircn condiţiile icircn care
rezultatele obţinute prin metoda citometriei icircn flux nu au arătat existenţa unei corelaţii intre
expresia PPARα şi CA la pacienţii cu SM considerăm că ar fi necesar studiul
polimorfismului genei PPARA care ar putea aduce informaţii importante cu privire la
implicarea acestor receptori icircn apariţia obezităţii de tip central Subliniem acest lucru deoarece
obezitatea este o boală plurifactorială icircn care pe lacircngă factorii ereditari sunt implicaţi factori
de mediu psihologici şi sociali (245) Existenţa unei componente genetice a aterosclerozei
este legată şi de prezenţa unor variante ale genei PPARA asociate cu creşterea incidenţei bolii
cardiovasculare (82) şi a SM (249) Icircn studiul nostru am constatat o scădere statistic
semnificativă a nivelului expresiei relative a receptorilor PPARα icircn Eo la subiecţii cu
antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială comparativ cu subiecţii fără istoric
familial de hipertensiune (figura 537) Deşi diferenţele calculate icircntre loturile studiate nu au
icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică la subiecţii care au declarat prezenţa
antecedentelor familiale de hipertensiune arterială remarcăm o tendinţă de scădere a
intensităţii medii de fluorescenţă pentru Ac anti-PPARα la nivelul Mo (figura 515 P = 006
) icircn timp ce expresia relativă a CD36 icircnregistrează o creştere la acesti subiecţi (figura 545 P
= 008) Icircn contextul riscului cardiovascular foarte icircnalt al pacienţilor cu SM amintim şi
existenţa corelaţiei pozitive dintre valorile tensiunii arteriale diastolice şi expresia relativă a
receptorului CD36 (r = 0483 P = 0013) Această constatare este icircn consens cu studiile care
au arătat că forma solubilă circulantă a CD36 este asociată cu factorii de risc cardiovasculari
fiind propusă ca un marker precoce al aterosclerozei Activarea PPARα este asociată cu
modularea metabolismului lipidic iar agoniştii PPARα sunt utilizaţi icircn mod curent pentru
tratamentul dislipidemiei Sub acţiunea agoniştilor PPARα se obţine o icircmbunătăţire a funcţiei
endoteliale şi a parametrilor reologici funcţiile pleiotropice ale agoniştilor PPARα fiind
dovedite icircn trialuri clinice controlate Icircn populaţiile de Mo şi Ly la pacienţii cu SM
cercetarea noastră a evidenţiat o asociere negativă icircntre nivelul de expresie relativă a
receptorilor PPARα şi concentraţia TG serice (figura 551) Astfel scăderea expresiei
receptorilor PPARα este asociată cu creşterea nivelului TG serice contribuind la profilul
lipidic aterogen din SM Icircn conformitate cu literatura de specialitate icircn studiul efectuat prin
metoda citometriei icircn flux am găsit prezenţa asocierii icircntre nivelul de expresie al PPARα şi
HDL-colesterol Corelaţia pozitivă dintre nivelul de expresie relativă PPARα şi concentraţia
HDL-colesterolului a fost observată icircn lotul martor icircn populaţiile de Mo (r = 035 P = 005)
şi Ly ( r = 036 P = 004) (figura 553) susţinacircnd faptul că stimularea receptorilor PPARα
este legată de creşterea nivelului seric al lipoproteinelor cu densitate crescută La pacienţii cu
SM corelaţia dintre expresia PPARα şi HDL-colesterol a fost evidenţiată icircn populaţiile de Mo
(r = 046 P = 0019) şi eozinofile (r = 044 P = 0024) Se desprinde concluzia că icircn
sindromul metabolic scăderea concentraţiei HDL-colesterol este legată de diminuarea
nivelului de expresie relativă a receptorilor nucleari PPARα icircntărind afirmaţiile legate de
rolul acestor receptori icircn progresia bolilor cardiovasculare Studiind reactanţii de fază acută
analiza statistică a relevat o diferenţă semnificativă din punct de vedere statistic icircntre valorile
fibrinogenului la pacienţii cu SM atunci cacircnd au fost comparaţi cu subiecţii fără SM
(Capitolul IV4 P lt0 001 figura 427A) De asemenea icircn Capitolul V dedicat studiul
expresiei relative a receptorilor PPARα studiul valorilor fibrinogenului a arătat creşterea
acestui reactant de faza acută icircn lotul cu SM comparativ cu lotul martor (P lt0 0001) Icircn
studiul nostru am calculat o corelaţie invers proporţionala (r = - -036 fig 555B) icircntre
nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile şi concentraţia serică a
fibrinogenului Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P = 008) am reţinut
această asociere deoarece am demonstrat că nivelul de expresie relativă al receptorilor
PPARα icircn eozinofile este mai scăzut icircn sindromul metabolic iar sindromul metabolic este
caracterizat printr-un status inflamator cronic status caracterizat şi de creşterea concentraţiei
serice a fibrinogenului De asemenea notam ca această corelaţie negativă se află icircn
concordanţă cu studiile care arata că tratamentul cu agonişti PPARα (fibraţi) determina
scăderea nivelului seric al fibrinogenului contribuind la diminuarea inflamaţiei cronice din
sindromul metabolic şi icircn consecinţă amelioracircnd insulinorezistenţa
LIMITE ȘI DIFICULTĂȚI IcircN CERCETARE
Icircn cadrul Tezei de Doctorat am desfăşurat o cercetare care şi-a propus studierea
expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Recrutarea anamneza şi examinarea
clinică a subiecţilor au fost realizate icircn cadrul Cabinetului de Medicină de Familie CMI Popa
Elena din Iaşi iar determinările hematologice şi biochimice s-au efectuat icircn cadrul
Laboratorului Ambulatorului de Specialitate al Spitalului Universitar ldquoSfacircntul Spiridon din
Iaşi Icircn studiul epidemiologic şi al markerilor inflamatori al sindromului metabolic desfăşurat
au fost incluşi un număr de 1530 de participanţi pe baza liberului consimţămacircnt examinaţi icircn
perioada 01012013 - 31122013 Icircn continuare icircn perioada 1012014 - 28022014 pe baza
criteriilor de includere şi excludere icircn cele două loturi de studiu am investigat un număr de 57
de subiecţi prezentaţi la consultaţie icircn această perioadă şi care au icircndeplinit criteriile de
includere icircn cele două loturi (Lot SM şi Lot Control) constituite pentru evaluarea nivelului de
expresie a receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Explorarea nivelului de expresie
relativă a receptorilor PPARα s-a desfăşurat icircn cadrul Laboratorului de Biologie Moleculară
de pe platforma Institutului Regional de Oncologie Datorită resurselor proprii financiare
limitate trebuie să subliniez că aceasta cercetare nu ar fi fost posibilă fără contribuţia unor
cercetători din domeniul medical care m-au sprijinit necondiţionat atacirct icircn elaborarea
protocolului de lucru cacirct şi icircn efectuarea propriu-zisă a studiului Icircn acest sens menţionăm şi
faptul că pentru studiul receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic am utilizat aparatura
Laboratorului de Biologie Moleculară (care deserveşte icircntreaga Regiune a Moldovei) Pe
această cale mulţumesc personalului Laboratorului de Biologie Moleculară pentru ajutorul
acordat icircn desfăşurarea cercetării doctorale icircn condiţiile icircn care se observa creşterea
numărului de pacienţi care se adresează acestei platforme de cercetare Mulţumesc de
asemenea şi Doamnei Doctor Elena Butoi din cadrul Institutului de Biologie şi Patologie
Moleculară ldquoNicolae Simionescurdquo Bucureşti) pentru donaţia anticorpului secundar anti-
FITC Icircn consecinţă pentru recrutarea unui număr mai mare de participanţi ar fi fost necesară
icircn primul racircnd obţinerea unor resurse financiare suplimentare pentru achiziţia de aparatură şi
reactivi Totuşi numărul subiecţilor recrutaţi este apropiat de numărul subiecţilor raportaţi icircn
cadrul unor granturi de cercetare care aveau ca ţinta studiul expresiei receptorilor PPARα
(212 227 228 231) Rezultatele obţinute continua seria lucrărilor care arata importanta
studiului mecanismelor etiopatogenice ale sindromului metabolic patologie care se afla icircntr-o
continuă creştere La pacienţii cu SM pe lacircngă diminuarea nivelului de expresie a receptorilor
PPARα icircn eozinofile ne aşteptam şi la evidenţierea unor modificări icircn expresia PPARα şi icircn
populaţiile de Ly Mo şi PMN Acest fapt poate fi explicat de utilizarea unor celule provenite
de la pacienţi fără afectare cardiovasculară fără diabet zaharat şi necesită continuarea
studiului pe culturi celulare icircn condiţii de stimulare cu agonişti PPARα deziderat care
impune continuarea investigării expresiei PPARα printr-un grant de cercetare
ORIGINALITATEA ȘI CONTRIBUȚIILE INOVATIVE ALE TEZEI DE
DOCTORAT PERSPECTIVE DE CERCETARE
Evaluarea nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn leucocitele circulante
aduce noi perspective icircn studiul obezităţii şi sindromului metabolic Importanta studiului
expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic derivă din prevalenta crescută a
sindromului metabolic icircn populaţia cercetată la care se adaugă riscul cardiovascular foarte
icircnalt al acestor pacienţi cu implicaţii majore icircn sănătatea publică Rolul receptorilor PPARα
icircn inflamaţie şi aterogeneza este binecunoscut dar studiul nostru este primul care a arătat că
nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα este semnificativ mai scăzut in populatiile
de eozinofile la pacienţii cu SM Această concluzie coroborata cu existenţa unei stracircnse
asocieri intre expresia receptorilor PPARα la nivelul Mo limfocitelor şi PMNlor creeaza
ipoteza existenţei unui mecanism de control diferit al expresiei PPARα la nivelul
eozinofilelor Această cercetare aduce informaţii importante referitoare la mecanismele
proinflamatorii care stau la baza insulinorezistenţei şi riscului cardiometabolic şi impune
continuarea studiului acestor receptori nucleari prin citometrie icircn flux metodă care poate fi
aplicată şi la scara mai largă dacă sunt asigurate resursele materiale necesare cercetării
Cercetarea prin citometrie icircn flux poate fi completată de studiul polimorfismului genei
PPARA şi astfel se pot identifica timpuriu indivizii cu potenţial risc cardiometabolic crescut
Studiul receptorilor PPARα a stabilit conexiuni cu factori proinflamatori şi aterogenetici iar
continuarea cercetării poate aduce şi elemente noi de diagnostic precoce icircn sindromul
metabolic contribuind la icircmbunătăţirea prognosticului acestor pacienţi
CONCLUZII FINALE
1 Aplicarea scorului de SM alături de implementarea algoritmului electronic de diagnostic
contribuie la o prelucrare rapidă eficientă și standardizată a informaţiilor la nivelul
medicinei primare
2 Prevalenţa SM calculată astfel icircn cadrul studiului este crescută (2732) icircn concordanţă
cu datele raportate
3 Controlul factorilor de risc cardiometabolici incluşi icircn SM se poate realiza prin
managementul stilului de viaţă (scăderea greutăţii corporale prin combaterea
sedentarismului şi adoptarea unei diete antiaterogene şi hipocalorice) şi administrarea
terapiei medicamentoase
4 Este necesară adoptarea unei politici de sănătate publică pentru prevenirea creşterii icircn
populaţie a prevalenţei obezităţii şi a diabetului zaharat
5 Noi metode de cercetare icircn domeniul SM axate pe diagnosticarea precoce şi cuantificarea
eficientă a acestuia duce la diminuarea incidenței evenimentelor cardiovasculare majore
6 Sindromul metabolic se caracterizează printr-un status inflamator cronic
7 Valorile Non-HDL-colesterolului şi a raportului de aterogenitate sunt semnificativ mai
mari la pacienţii cu SM
8 Dintre reactanţii de faza acută am observat că valoarea medie a fibrinogenului este mai
crescută icircn lotul cu SM
9 Valorile eozinofilelor sunt crescute icircn sindromul metabolic iar explorarea relaţiei dintre
eozinofile şi obezitate constituie una din direcţiile de studiu actuale ale sindromului
metabolic
10 Evaluarea markerilor inflamatori icircn contextul sindromului metabolic este utilă icircn
evaluarea complexă a a factorilor de risc cardiometabolici
11 Prin metoda citometriei icircn flux am demonstrat prezenta Receptorilor Activaţi de
Inductorii Proliferării Peroxizomilor ndash Alpha (PPARα) icircn toate populaţiile de leucocite
studiate (Mo limfocite PMN eozinofile) atacirct icircn lotul pacienţilor cu SM cacirct şi icircn lotul
martor
12 Utilizacircnd intensitatea medie de fluorescenţă a anticorpilor anti- PPARα am arătat că
nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile este semnificativ mai redus
la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali
13 Acest studiu este primul care a demonstrat existenţa unei scăderi statistic semnificative a
nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofilele pacienţilor cu SM
confirmacircnd cercetările recente care au evidenţiat rolul eozinofilelor şi al receptorilor
PPARα icircn obezitate reglarea inflamaţiei cronice şi aterogeneza
14 Contrar aşteptărilor noastre icircn populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările
efectuate icircn cele două loturi de studiu (cu şi fără sindom metabolic) nu am evidenţiat
diferenţe statistic seminificative icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα la
subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali
15 Icircn populaţiile de Mo limfocite şi polimorfonucleare am observat corelaţii puternice
semnificativ statistic icircntre expresia PPARα icircn aceste tipuri celulare sugeracircnd existenţa
unui mecanism unic de control al inflamaţiei cronice la nivelul acestor celule probabil
diferit de cel din eozinofile
16 La subiecţii cu SM expresia relativă a PPARα icircn Eo este invers asociată cu expresia
receptorului CD36 (receptor al particulelor de ox - LDL şi propus ca un marker precoce al
aterosclerozei) dovedind rolul antiinflamator al receptorilor PPARα la nivel endotelial
17 La pacienţii cu antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială nivelul de
expresie al receptorilor PPARα icircn eozinofile şi Mo este diminuat comparativ cu subiecţii
fără antecedente familiale de hipertensiune arterială Putem spune că studiul efectuat de
noi aduce informaţii importante legate de geneză aterosclerozei şi hipertensiunii arteriale
18 Prin studiul asocierilor dintre receptorii PPARα şi componentele clinice ale sindromului
metabolic am arătat rolul acestor receptori icircn determinismul obezităţii de tip central
nivelul expresiei relative a receptorilor PPARα fiind invers proporţional cu circumferinţa
abdominală
19 Icircn acelaşi timp nivelul de expresie a PPARα icircn sindromul metabolic este asociat pozitiv
cu concentraţia serică a HDL-colesterolului şi invers asociat cu nivelul trigliceridelor
serice dovedind rolul acestor receptori icircn diminuarea procesului inflamator cronic de la
nivel vascular
20 La pacienţii cu SM scăderea expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofile este corelată cu
creşterea unor markeri ai sindromului inflamator cronic cardiometabolic (acid uric
fibrinogen) ilustracircnd importanta receptorilor icircn reglarea status-ului inflamator cronic din
sindromul metabolic
21 Utilizarea metodei flowcitometrice pentru studiul expresiei relative a receptorilor PPARα
icircn leucocite a adus informaţii importante cu privire la mecanismele moleculare de control
implicate icircn patogenia bolilor cardiometabolice icircn concordanţă cu cercetările care descriu
expresia PPAR icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale bronşice
keratinocite)
BIBLIOGRAFIE SELECTIVA
1 Kahn R Metabolic syndrome- what is the clinical usefulness Lancet 2008371(9628)1892-3
2 Reaven GM The metabolic syndrome is this diagnosis necessary Am J Clin Nutr 2006 83(6)1237-7
3 Grundy SM Pre-Diabetes Metabolic Syndrome and Cardiovascular Risk J Am Coll Cardiol 201259(7)
635-43
4 International Diabetes Federation IDF Diabetes Atlas 6th edn International Diabetes Federation Belgium
Brussels 20131-155
5 World Health Organization Global Status Report on Noncommunicable Diseases 2010 World Health
Organization Geneva Switzerland 20111-176
6 Coman AE Petrovanu R Sindromul metabolic in practica de ambulator Editura Pim Iaşi 2009 1-103
7 Grundy SM Becker D Clark LT et alThird Report of the National Cholesterol Education Program (NCEP)
Expert Panel on Detection Evaluation and Treatment of High Blood Cholesterol in Adults (Adult
Treatment Panel III) Final Report Circulation 2002106(25)3143-90
8 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J Metabolic syndrome- a new worldwide definition A Consensus Statement
from the International Diabetes Federation Diabet Med 2006 23(5)469-80
9 KG Alberti KG Eckel RH Grundy SM etal International Diabetes Federation task force on epidemiology
and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart Association World Heart
Federation International Atherosclerosis Society International Association for the study of obesity
Harmonizing the metabolic syndrome a joint interim statement of the International Diabetes Federation task
force on epidemiology and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart
Association World Heart Federation International Atherosclerosis society and International Association
for the study of obesity Circulation 2009120(16)1640-5
10 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J IDF Epidemiology Task Force The metabolic syndrome new
worldwide definition Lancet 2005 366 1059 - 62
11 Oleszczyk M Svab I Seifert B et al Primary healthcare in the developing part of Europe changes and
development in the former Eastern Bloc countries that joined the European Union following 2004 Med Sci
Monit 2009(15)78ndash84
12 Jung U J Choi M S Obesity and Its Metabolic Complications The Role of Adipokines and the
Relationship between Obesity Inflammation Insulin Resistance Dyslipidemia and Nonalcoholic Fatty
Liver Disease Int J Mol Sci 2014rsquo15(4) 6184-223
13 Vanden Heuvel JP Peters JM Peroxisome Proliferators In Ramos K (ed) Cellular and Molecular
Toxicology (Second Edition) Volume 2 New York Elsevier Science Inc 2010 145 - 67
14 Yessoufou A Wahli W Multifaceted roles of peroxisome proliferator-activated receptors (PPARs) at the
cellular and whole organism levels Swiss Med Wkl 2010140w13071 doi104414smw201013071
15 Azhar S Peroxisome proliferator-activated receptors metabolic syndrome and cardiovascular disease
Future Cardiology 20106(5)657-91
16 Andries G Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity
Diabetes and Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(Suppl)24-32
17 Zandbergen F Plutzky J PPARalpha in atherosclerosis and inflammation Biochim Biophys Acta
20071771(8)972-82
18 Straus DS Glass CK Anti-inflammatory actions of PPAR ligands new insights on cellular and molecular
mechanisms Trends Immunol 200728(12)551-8
19 Zlei M Zugun- Eloae F Carasevici E Citometrie icircn flux - Bază şi clinică Icircn Hinescu ME (ed) Citometrie icircn
flux - principii şi aplicaţii clinice Bucureşti Editura Viaţa Medicală Romacircnească 20111-128
20 Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity Diabetes and
Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(9)24-32
21 Woerly G Honda K Loyens M et al Peroxisome proliferator-activated receptors alpha and gamma down-
regulate allergic inflammation and eosinophil activation J Exp Med 2003198(3)411-21
22 Salle-Saumont D Brenuchon C Kanda A et al Peroxisome proliferator-activated receptor alpha regulates
skin inflammation and humoral response in atopic dermatitis J Clin Allergy Immunology 2008 21(4)962-8
23 Schote A Turner J Schiltz J et al Nuclear receptors in human immune cells expression and correlations
Mol Immunolog 200744(6)1436-45
24 DAmore S Vacca M Graziano G et al Nuclear receptors expression chart icircn peripheral blood
mononuclear cells identifies patients with Metabolic Syndrome Biochim Biophys Acta
20131832(12)2289-301
25 Uthurralt J Gordish-Dressman H Bradbury M T et al PPARalpha L162V underlies variation in serum
triglycerides and subcutaneous fat volume in young males BMC Med Genet 2007855
26 Hiukka A Leinonen ES Jauhiainen M et al Long-term effects of fenofibrate on VLDL and HDL
subspecies icircn participants with type 2 diabetes mellitus Diabetologia 2007 50(10)2067-75
27 Robins SJ Rubins HB Faas FH et alInsulin resistance and cardiovascular events with low HDL
cholesterol The Veterans Affairs HDL Intervention Trial (VA-HIT) Diabetes Care 2003 26(5)1513-7
28 Devaraj S Siegel D Jialal I Statin Therapy in Metabolic Syndrome and Hypertension Post-JUPITER
What is the Value of CRP Curr Atheroscler Rep 2011 13(1) 31ndash42
29 Imperatore G Riccardi G Iovino C et al Plasma Fibrinogen A New Factor of the Metabolic Syndrome A
population-based study Diabetes Care 19982 1(4)649-54
30 Krysiak R Gdula-Dymek A Bachowski R Okopien B Pleiotropic effects of atorvastatin and fenofibrate
in metabolic syndrome and different types of pre-diabete Diabetes Care 201033(10)2266-70
31 Hermans MP Impact of Fenofibrate on Type 2 Diabetes Patients with Features of the Metabolic Syndrome
Subgroup Analysis From FIELD Curr Cardiol Rev 20106(2)112-8
32 Silverstein R Inflammation atherosclerosis and arterial thrombosis Role of the scavenger receptor CD36
Cleveland Clinic Journal of Medicine 200976(Suppl 2)S27-S30
33 Hăncu N Obezitatea In Vereşiu IA (ed) Diabetul zaharat nutritia si bolile metabolice Volume 2 Editura
Echinox Cluj- Napoca 2010 1-15
Lista lucrări publicate
1 Elena Popa Maria Maidaniuc Agnes Bacusca Alamir Diaa Rodica Petrovanu Adorata Elena
Coman Disfuncţia endotelială ndash de la mecanisme moleculare la cuantifi care şi tratament icircn practica
medicală Practica Medicală 20149(3) 109-14
2 Elena Popa Agnes Bacusca Alamir Diaa Maria Maidaniuc Rodica Petrovanu Adorata Elena Coman
The function of insulin receptor (IRF) in evolution of obesity correlation with adipocytes diameters
Archives of the Balkan Medical Union 201449(3) 275-9
3 Elena Popa Florin Zugun-Eloae Mihaela Zlei Daniela Jitaru Oana Maria Pintilie Adorata Elena
Coman Maria Traian Didona Anca Ungureanu Eugen Carasevici - acceptata pentru numarul 42014
Flow cytometry analysis of PPAR-alpha receptors in metabolic syndrome) Revista Romană de
Medicină de Laborator(RRLM-D-14-00034R1- adeverinţa ataşată
Cu ajutorul curbei ROC am evaluat posibilitatea utilizării MFI a Ac anti - PPARα icircn
Eo ca marker pentru diagnosticul SM Valoarea MFI a Ac anti - PPARα icircn Eo care prezice cu
cea mai mare acurateţe prezenţa SM a fost de 1533 (punctul de ldquocut-offrdquo) pentru care am
calculat o sensibilitate de 5652 şi o specificitate de 7778 Calculul ariei AUC a furnizat
valoarea de 0663 şi deci determinarea parametrului MFI anti- PPARα icircn Eo are valoarea
unui test cu acurateţe redusatilde icircn diagnosticul SM Studiind expresia PPARα icircn Eo la subiecţii
care au prezentat AHC de HTA am observat o scădere semnificativă statistic (P = 00023) a
expresiei PPARα la subiecţii cu istoric familial de HTA comparativ cu subiecţii fatilderatilde AHC de
HTA (figura 537)
AHC HTA
Număr 22
Mediana 148800
Percentila 25 116425
Percentila 75 170750
AHC HTA absente
Număr 35
Mediana 170850
Percentila 25 143700
Percentila 75 195000
Figura 537 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Eo funcţie de AHC de HTA
Studiind subiecţii cu AHC declarate de dislipidemie nu am identificat diferenţe icircntre
nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Eo subiecţilor cu AHC de dislipidemie
comparativ cu cei care nu au declarat prezenţa AHC de dislipidemie (t - Test P = 067)
Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor CD36
Am studiat expresia receptorilor CD36 icircn Mo subiecţilor incluşi icircn studiu
Lot Non - SM
BLot SM
Figura 539 Analiza flowcitometrica pentru receptorii CD36 icircn Mo
Pentru toţi participanţii la studiu valorile MFI au variat icircn intervalul [817 6933] iar
valoarea medie a MFI a Ac anti-CD36 a fost de 397133 plusmn 120902 Tabel XXXVII Statistică descriptivă pentru a CD36 icircn Mo
Lot SM Lot Non-SM
Media 429034 370377
Deviatia Standard 109051 125514
Mediana 411000 362800
Minimum 266400 81700
Maximum 693300 616800
Percentila 25 346200 273750
Percentila 75 469000 453300
Distribuţia frecvenţelor relative a MFI au fost prezentate sub formă histogramelor
Figura 541 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti - CD36 icircn Mo
MFI
ant
i-PPA
R a Eo
1000
1100
1200
1300
1400
1500
1600
1700
1800
1900
DA NU
AHC HTA
P=00023
1000 2000 3000 4000 5000 6000 7000 8000
0
5
10
15
20
25
MFI anti-CD36
Frecve
nta rela
tiva (
)
Lot SM
0 1778 3556 5333 7111
0
5
10
15
20
25
30
35
MFI anti-CD36
Frecve
nta rel
ativa (
)
Lot Non - SM
Referitor la lotul SM 92 din valorile MFI a Ac anti- CD36 s-au icircncadrat icircn
intervalul Media plusmn 2 DS (figura 542) iar pentru lotul martor peste 90 dintre acestea icircn
Media plusmn 2 DS (figura 543)
Figura 542 Lot SM
Variaţia MFI anti-CD36 icircn Mo
Număr pacienţi 26
Minimum 2664
Maximum 6933
Media 429034
Deviaţia Standard 109051
Figura 543 Lot Non -SM
Variaţia MFI anti- CD36 icircn Mo
Număr 31
Minimum 81700
Maximum 616800
Media 370377
Deviaţia Standard 125514
Comparacircnd subiecţii cu SM cu cei din lotul normal am constatat o tendinţă de creştere
a expresiei CD36 icircn lotul cu SM((t - Test P= 0067)
MFI anti - CD36 Lot Non-SM
Număr 31
Mediana 3628
Percentila 25 2737
Percentila 75 4533
MFI anti - CD36 Lot SM
Număr 26
Mediana 4110
Percentila 25 3462
Percentila 75 4690
Figura 544 Comparaţie icircntre cel două loturi privind MFI anti - CD36 icircn Mo
Referindu-ne la subiecţii cu AHC de HTA am observat o tendinţă de creştere a
valorilor MFI anti-CD36 comparativ cu cei care nu au avut AHC de HTA (t - Test P = 0 08)
AHC HTA
Număr 22
Mediana 442800
Percentila 25 355275
Percentila 75 519475
AHC HTA absenţe
Număr 35
Mediana 377400
Percentila 25 316900
Percentila 75 443400
Figura 545 Comparaţie icircntre expresia CD36 icircn Mo funcţie de AHC de HTA
Nu s-au calculat diferenţe semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor
PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de dislipidemie atunci cacircnd aceştia au fost comparaţi cu
subiecţii fără AHC de dislipidemie (t - Test P=031)
Corelaţii icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα si CD36
Studiind valorile intensităţii medii de fluorescenţă a Ac anti-PPARα icircn Mo Ly şi
PMN am observat că nivelul de expresie celularatilde a PPARα icircn Mo Ly şi PMN sunt corelate
puternic pozitiv atacirct icircn lotul SM cacirct şi icircn lotul martor(fig547 548)
1 6 11 16 21 26 31
0
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
Pacienti
MFI a
nti-CD
36
42903
21093
64714
10188
75619
LCI
Media
LCS1 6 11 16 21 26 31 36
-1000
0
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
MFI a
nti- C
D36
37038
11935
62141
-616
74692Media + 2 DS
Media
Media - 2 DS
3200
3400
3600
3800
4000
4200
4400
4600
4800
Lot SM Lot Non-SM
P = 00676
MFI
anti-
CD36
3400
3600
3800
4000
4200
4400
4600
4800
5000
DA NU
AHC HTA
P = 008
Figura 547 Studiul relatiilor dintre
receptorii PPARα icircn SM A Mo vs PMN B Mo vs Ly
C PMN vs Ly Graficul ilustrează coeficienţii r P dreapta de
regresie (linia centrala) intervalul de icircncredere
95 şi intervalul de predicţie 95
Figura 548 Corelaţii icircntre receptorii PPARα icircn lotul
martor
A Mo vs PMN
B Mo vs Ly
C PMN vs Ly
Tot pentru lotul SM cacircnd am evaluat relaţia dintre nivelul de expresie relativă a
receptorilor PPARα icircn Eo şi nivelul de expresie relativa a receptorilor CD 36 am obţinut o
corelaţie negativă (r = - 05 P = 001) (fig 549 A)
50 100 150 200 250 300 350 50
100
150
200
250
300
350
400
450
500
PPARα Ly
PPARα PMN
y = 56641 + 1159 x r = 086 P lt 0001
C
50 100 150 200 250 300 350 400 0
50
100
150
200
250
300
350
PPARα Mo
PPARα Ly
y = 36665 + 0607 x r = 090 P lt 0001
B
150 200 250 300 350 400 450 0
50 100 150 200 250 300 350 400 450 500
PPARα PMN
PPARα Mo
y = 2505 + 0879 x r = 081 P lt 0001
A
50 100 150 200 250 300 350
50 100 150 200 250 300 350 400 450 500
PPARα Ly
PPARα PMN
y = 95668 + 0919 x r = 081 P lt 0001
C
100 150 200 250 300 350 400
0
50
100
150
200
250
300
350
400
PPARα Mo
PPARα Ly
y = -7503 + 0829 x r = 079 P lt 0001
B
100 150 200 250 300 350 400
50
100
150
200
250
300
350
400
450
500
PPARα Mo
PPARα PMN
y = 61384 + 0882 r = 074 P lt 0001
A
Figura 549 Corelaţii icircntre expresia PPARα icircn Eo şi alte tipuri de receptori investigaţi A PPARα Eo şi CD 36 (Lot SM) B PPARα Eo şi PPARα Mo( Lot Non-SM)
Icircn lotul martor am identificat o asociere moderată pozitivă (r = 038 P = 0033) icircntre
nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Eo şi Mo (figura 549B) corelaţie absentă icircn
lotul pacienţilor cu SM
Corelaţii dintre receptorii studiaţi şi componentele sindromului metabolic
Icircn lotul de control analiza statistică a relevat faptul că icircntre circumferinţa
abdominală (CA ) şi nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Mo Ly şi PMN există o
corelaţie inversă adică scăderea expresiei PPARα la nivelul acestor populatii celulare ar fi
icircnsoţită de creşterea CA (figura 550
Figura 550Corelaţii dintre receptorii
PPARα si CA A Mo B Ly C PMN
La pacienţii cu SM am notat o corelatie moderată negativă statistic semnificativă
icircntre TG şi valorile MFI a Ac anti- PPARα icircn Mo şi Ly( fig 551)
150 200 250 300 350 400 450 50
60
70
80
90
100
110
PPARα PMN
CA r = - 040 P = 0024
C
50 100 150 200 250 300 350 50
60
70
80
90
100
110
PPARα Ly
CA r = - 046 P = 0009
B
50 100 150 200 250 300 350 400 50
60
70
80
90
100
110
PPARα Mo
CA r = - 042 P = 0017
A
50 100 150 200 250 300 350 400 500
1000
1500
2000
2500
3000
PPARα Mo
PPARα Eo
r = 038 P = 0033
B
0 500 1000 1500 2000 2500 1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
PPARα Eo
CD36
r = 050 P = 0010
A
Figura 551 Lot SM Corelaţie icircntre expresia PPARα şi TG (A Mo B Ly)
Analizand corelatia dintre receptorii CD36 si valorile TA la pacientii cu SM am observat
o asociere pozitivă asteptată intre TAD si nivelul de expresie al receptorilor CD36 (fig 552)
Figura 552 Lot SM Corelaţii icircntre expresia
receptorilor CD36 şi valorile tensiunii arteriale
diastolice
Studiind corelaţiile dintre receptorii PPARα şi HDL-col la subiecţii din lotul martor am
notat o asociere pozitivă icircntre expresia PPARα icircn Mo şi Ly cu HDL-col (fig 553)
Figura 553 Lot martor Corelaţii icircntre HDL-col şi expresia PPARα icircn Mo(A) Ly(B)
Icircn lotul normal am evidenţiat corelaţii pozitive moderate dar semnificative statistic icircntre
CA şi valorile TAS (r = 062 P lt 0001) respectiv TAD (r = 050 P=0004) precum şi icircntre
CA şi glicemia subiecţilor normali (r = 052 P = 0003) Aceste date icircmpreună cu relaţia
invers proporţională identificată icircntre HDL-col şi CA (r = 050 P = 001) susţin validitatea
acestui studiu Icircn lotul subiecţilor cu SM am observat o corelaţie moderat pozitivă icircntre
expresia PPARα icircn populaţiiile de Mo şi Eo şi concentraţia a HDL-col (fig 554)
B
100 150 200 250 300 350 20
30
40
50
60
70
80
90
100
PPARα Ly
HDL-col-(mgdl)
r = 036 P = 0046
A
150 200 250 300 350 400 20
30
40
50
60
70
80
90
100
PPARα Mo
HDL-col-(mgd)l
r = 035 P = 005
70 75 80 85 90 95 100 1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
TAD (mmHg)
CD36
r = 048 P = 0013
B
50 100 150 200 250 300 350 -100
0
100
200
300
400
500
PPARα Ly
TG(mgdl)
r = - 042 P = 003
A
50 100 150 200 250 300 350 400 -100
0
100
200
300
400
500
PPARα Mo
TG ( mgdl) r =- 0 43 P = 0027
Figura 554 Corelaţii icircn SM icircntre HDL-col şi expresia PPARα icircn Mo (A) şi Eo(B)
Corelaţii icircntre nivelul de expresie relativă a PPARα şi markeri ai disfuncţiei
endoteliale şi inflamaţiei cronice
Deşi nu a icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică am reţinut corelaţia invers
proporţională (r = - 0331 P = 006) dintre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα
icircn PMN şi concentraţia serică a Non-HDL-colesterolului
Studiind relaţiile dintre parametri icircn lotul de pacienţi cu SM am observat o corelaţie
moderată invers proporţională icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Eo şi
acidul uric seric (figura 555 A) corelaţie absentă la subiecţii fără SM
Figura 555 Lot SM corelaţia dintre expresia PPARα icircn Eo şi acidul uric (A) respectiv
PPARα şi fibrinogen (B)
Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P=008) am notat pentru
pacienţii cu SM corelaţia invers proporţională dintre expresia PPARα icircn Eo şi concentraţia
serică a fibrinogenului ( figura 555B)
V5 Discuţii
Icircn cadrul lucrării de doctorat am studiat nivelul de expresie relativă a PPARα icircn
leucocitele pacienţilor cu SM comparativ cu cea a subiecţilor normali Expresia PPARα a fost
studiată icircn paralel cu cea a CD36 glicoproteină exprimată pe suprafaţa a numeroase celule
din organismul uman inclusiv pe cea a Mo şi macrofagelor Prin funcţia sa de receptor pentru
particulele oxidate de LDL CD36 cunoscut ca bdquoscavenger receptorrdquo de clasa B sau
bdquotrombospodin receptorrdquo contribuie la dezvoltarea inflamaţiei de la nivel endotelial şi
formarea plăcii de ateroscleroză Referitor la studiul PPARα icircn Eo icircn sindromul metabolic
menţionăm că studiul nostru este primul care arată că nivelul de expresie a proteinei PPARα
icircn Eo măsurat prin citometrie icircn flux este semnificativ mai redus la pacienţii care sunt
diagnosticaţi cu acest sindrom De asemenea icircn lotul cu SM cercetat icircn cadrul studiului
receptorilor PPARα numărul Eo circulante a fost semnificativ mai crescut la pacienţii cu SM
B
0 500 1000 1500 2000 2500 200
250
300
350
400
450
PPARα Eo o
Fibrinogen mgdl
r =- 036 P = 008
0 500 1000 1500 2000 2500 1 2 3 4 5 6 7 8 9
10 11
PPARα Eo_
Acid uric(mgdl) r = 048 P = 0014 A
0 500 1000 1500 2000 2500 10
20
30
40
50
60
70
80
PPARα Eo
HDL(mgdl)
r = 044 P = 0024
B
100 150 200 250 300 350 400 10
20
30
40
50
60
70
80
PPARα Mo
HDL( mgdl)
r = 046 P = 0019
A
(P = 003) Aceste constatări conduc la ipoteza că Eo joacă un rol special icircn mecanismele
patogenice declanşate icircn sindromul metabolic şi că receptorii PPARα sunt importanţi icircn
implicarea Eo icircn obezitate şi insulinorezistenţă Creşterea numărului de Eo circulante este
urmată de eliberarea mediatorilor proinflamatori iar reducerea expresiei PPARα icircn Eo
determină perturbarea mecanismelor de control al inflamaţiei cu exacerbarea cascadei
proinflamatorii Consecutiv se agravează disfuncţia endotelială şi se accelerează progresia
leziunilor de ateroscleroză Extrapolacircnd aceste ipoteze putem spune că asocierea raportată
dintre boala ischemică coronariană şi Eo poate fi şi consecinţa exacerbării cascadei
proinflamatorii de la nivel vascular produsă datorită scăderii expresiei PPARα icircn Eo iar
creşterea numărului de Eo circulante poate reprezenta o adaptare a organismului uman care
icircncearcă să suplinească deficitul de receptori PPARα Analizacircnd curba ROC pentru
intensităţile medii de fluorescenţă determinate pentru anticorpii anti- PPARα icircn Eo am
obţinut pentru acest biomarker o sensibilitate a testului de 565 şi o specificitate de 778
pentru un punct de cut-off de 1533 ( figura 536 ) Deşi aria AUC (Aria under the curve) egală
cu 0663 icircncadrează acest test ca avacircnd o acurateţe redusă observăm că că această valoare
este apropiată de determinările AUC pentru alţi factori (fibrinogen raport de aterogenitate
acid uric non- HDL-colesterol) cunoscuţi ca fiind implicaţi icircn aterogeneză şi inflamaţia
cronică (figura 431) Aceste remarci alături de faptul că icircn studiul receptorilor PPARα icircn
leucocite am inclus subiecţi la primul diagnostic de SM creează premisa integrării
determinării expresiei relative a receptorilor PPARα icircn diagnosticul complex al sindromului
metabolic Putem spune că icircn final studiul expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofilele
circulante se dovedește a fi util icircn diagnosticul precoce la nivel molecular al SM permiţacircnd
identificarea timpurie a unor indivizi cu risc cardiometabolic crescut Astfel intervenţia
precoce asupra subiecţilor cu deficit de PPARα icircn Eo contribuie la managementul eficient al
afecţiunilor degenerative icircn care inflamaţia cronică icircndeplineşte un rol primordial Referitor
la populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările efectuate prin citometrie de flux nu au
arătat existenţa unor diferenţe statistice icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα
la subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali Rezultatele noastre pot fi
consecinţa caracteristicilor loturilor studiate (icircn studiul nostru au fost incluşi subiecţi recrutaţi
la primul diagnostic de SM şi icircn absenţa stimulării receptorilor PPARα cu droguri agoniste
PPARα) dar icircn acelaşi timp pot apare diferenţe datorită metodei utilizate (231 232 233)
Făcacircnd o paralelă cu un studiu publicat icircn 2013 icircn Europa (231) care a arătat creşterea
nivelului de expresie al PPARα icircn Ly şi Mo observăm că deşi numărul de subiecţi a fost
aproximativ egal (57 participanţi icircn studiul nostru 60 icircn studiul DAmore) subiecţii icircn studiul
amintit au fost recrutaţi dintr-o clinică cu profil medical la primul diagnostic de SM icircn timp
ce metoda utilizată a fost PCR (Polymerase Chain Reaction) mult mai fidelă decacirct citometria
icircn flux icircn studiul receptorilor nucleari De asemenea DAmore nu investighează expresia
PPARα icircn Eo şi PMN icircn cercetare fiind incluse doar celulele CD14+ (predominant Mo) şi
CD14- (predominant Ly) Deşi nu am obţinut diferenţe statistic semnificative icircntre cele două
loturi referitoare la nivelul de expresie relativă a PPARα icircn Mo Ly şi PMN am observat
corelaţii puternice semnificative statistic icircntre expresia receptorilor PPARα icircn aceste tipuri
celulare Rezultatele obţinute sugerează existenţa unui mecanism diferit molecular de control
icircn eozinofile care reglează cantitatea de proteină PPARα icircn eozinofile versus alte tipuri de
leucocite (la pacienţii cu SM) şi acest lucru este icircn concordanţă cu cercetările care descriu
expresia PPARα mRNA icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale
bronşice keratinocite) Studiind prin citometrie de flux nivelul de expresie relativă a
receptorului CD36 la nivelul Mo am arătat prezenţa acestuia icircn Mo tuturor subiecţilor
investigaţi Analizacircnd valorile intensităţii medii de fluorescenţă a CD36 icircn loturile studiate
am observat o tendinţă de creştere la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali
confirmacircnd implicarea receptorului CD36 icircn patogeneza acestuia Referitor la expresia
receptorului CD36 rezultatele obţinute sunt icircn consens cu studii anterioare care au arătat
creşterea expresiei CD36 la pacienţii cu SM şi diabet zaharat Astfel pe lacircngă diferenţa icircn
expresia CD36 s-au raportat şi corelaţii inverse icircntre expresia proteinei CD36 şi nivelul
adiponectinei Acelaşi studiu a evidenţiat o corelaţie pozitivă intre expresia CD36 cu expresia
receptorilor PPAR gamma relaţia cu PPARα nefiind investigată
Analiza de subgrup a relaţiilor dintre componentele SM și elementele moleculare
proinflamatorii studiate a relevat prezenţa unor asocieri semnificativ statistice icircntre acestea
Se argumentează astfel că veridicitatea studiului este susţinută de interdependenţele statistice
ale componentelor SM Determinarea coeficientului de corelaţie Icircn studiul nostru nivelul de
expresie relativă a PPARα s-a corelat moderat negativ (figura 550) cu CA a subiecţilor din
lotul normal pentru populaţiile celulare de Mo (r = - 0420 P = 001) Ly (r = - 046 P =
0009) şi PMN (r = - 040 P = 0024) date care sunt icircn concordanţă cu studiile care arată
rolul PPARα icircn furnizarea energiei prin beta-oxidarea acizilor graşi Icircn acelaşi timp icircn lotul
pacienţilor cu SM nu am identificat prezenţa unei asocieri icircntre nivelul de expresie relativă a
PPARα şi valoarea măsurată a CA Asocierea dintre expresia relativă a PPARα cu obezitatea
de tip central completează datele existente referitoare la reglarea homeostaziei energetice
conturacircnd un mecanism de control deficitar al aportului caloric al SM Icircn condiţiile icircn care
rezultatele obţinute prin metoda citometriei icircn flux nu au arătat existenţa unei corelaţii intre
expresia PPARα şi CA la pacienţii cu SM considerăm că ar fi necesar studiul
polimorfismului genei PPARA care ar putea aduce informaţii importante cu privire la
implicarea acestor receptori icircn apariţia obezităţii de tip central Subliniem acest lucru deoarece
obezitatea este o boală plurifactorială icircn care pe lacircngă factorii ereditari sunt implicaţi factori
de mediu psihologici şi sociali (245) Existenţa unei componente genetice a aterosclerozei
este legată şi de prezenţa unor variante ale genei PPARA asociate cu creşterea incidenţei bolii
cardiovasculare (82) şi a SM (249) Icircn studiul nostru am constatat o scădere statistic
semnificativă a nivelului expresiei relative a receptorilor PPARα icircn Eo la subiecţii cu
antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială comparativ cu subiecţii fără istoric
familial de hipertensiune (figura 537) Deşi diferenţele calculate icircntre loturile studiate nu au
icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică la subiecţii care au declarat prezenţa
antecedentelor familiale de hipertensiune arterială remarcăm o tendinţă de scădere a
intensităţii medii de fluorescenţă pentru Ac anti-PPARα la nivelul Mo (figura 515 P = 006
) icircn timp ce expresia relativă a CD36 icircnregistrează o creştere la acesti subiecţi (figura 545 P
= 008) Icircn contextul riscului cardiovascular foarte icircnalt al pacienţilor cu SM amintim şi
existenţa corelaţiei pozitive dintre valorile tensiunii arteriale diastolice şi expresia relativă a
receptorului CD36 (r = 0483 P = 0013) Această constatare este icircn consens cu studiile care
au arătat că forma solubilă circulantă a CD36 este asociată cu factorii de risc cardiovasculari
fiind propusă ca un marker precoce al aterosclerozei Activarea PPARα este asociată cu
modularea metabolismului lipidic iar agoniştii PPARα sunt utilizaţi icircn mod curent pentru
tratamentul dislipidemiei Sub acţiunea agoniştilor PPARα se obţine o icircmbunătăţire a funcţiei
endoteliale şi a parametrilor reologici funcţiile pleiotropice ale agoniştilor PPARα fiind
dovedite icircn trialuri clinice controlate Icircn populaţiile de Mo şi Ly la pacienţii cu SM
cercetarea noastră a evidenţiat o asociere negativă icircntre nivelul de expresie relativă a
receptorilor PPARα şi concentraţia TG serice (figura 551) Astfel scăderea expresiei
receptorilor PPARα este asociată cu creşterea nivelului TG serice contribuind la profilul
lipidic aterogen din SM Icircn conformitate cu literatura de specialitate icircn studiul efectuat prin
metoda citometriei icircn flux am găsit prezenţa asocierii icircntre nivelul de expresie al PPARα şi
HDL-colesterol Corelaţia pozitivă dintre nivelul de expresie relativă PPARα şi concentraţia
HDL-colesterolului a fost observată icircn lotul martor icircn populaţiile de Mo (r = 035 P = 005)
şi Ly ( r = 036 P = 004) (figura 553) susţinacircnd faptul că stimularea receptorilor PPARα
este legată de creşterea nivelului seric al lipoproteinelor cu densitate crescută La pacienţii cu
SM corelaţia dintre expresia PPARα şi HDL-colesterol a fost evidenţiată icircn populaţiile de Mo
(r = 046 P = 0019) şi eozinofile (r = 044 P = 0024) Se desprinde concluzia că icircn
sindromul metabolic scăderea concentraţiei HDL-colesterol este legată de diminuarea
nivelului de expresie relativă a receptorilor nucleari PPARα icircntărind afirmaţiile legate de
rolul acestor receptori icircn progresia bolilor cardiovasculare Studiind reactanţii de fază acută
analiza statistică a relevat o diferenţă semnificativă din punct de vedere statistic icircntre valorile
fibrinogenului la pacienţii cu SM atunci cacircnd au fost comparaţi cu subiecţii fără SM
(Capitolul IV4 P lt0 001 figura 427A) De asemenea icircn Capitolul V dedicat studiul
expresiei relative a receptorilor PPARα studiul valorilor fibrinogenului a arătat creşterea
acestui reactant de faza acută icircn lotul cu SM comparativ cu lotul martor (P lt0 0001) Icircn
studiul nostru am calculat o corelaţie invers proporţionala (r = - -036 fig 555B) icircntre
nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile şi concentraţia serică a
fibrinogenului Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P = 008) am reţinut
această asociere deoarece am demonstrat că nivelul de expresie relativă al receptorilor
PPARα icircn eozinofile este mai scăzut icircn sindromul metabolic iar sindromul metabolic este
caracterizat printr-un status inflamator cronic status caracterizat şi de creşterea concentraţiei
serice a fibrinogenului De asemenea notam ca această corelaţie negativă se află icircn
concordanţă cu studiile care arata că tratamentul cu agonişti PPARα (fibraţi) determina
scăderea nivelului seric al fibrinogenului contribuind la diminuarea inflamaţiei cronice din
sindromul metabolic şi icircn consecinţă amelioracircnd insulinorezistenţa
LIMITE ȘI DIFICULTĂȚI IcircN CERCETARE
Icircn cadrul Tezei de Doctorat am desfăşurat o cercetare care şi-a propus studierea
expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Recrutarea anamneza şi examinarea
clinică a subiecţilor au fost realizate icircn cadrul Cabinetului de Medicină de Familie CMI Popa
Elena din Iaşi iar determinările hematologice şi biochimice s-au efectuat icircn cadrul
Laboratorului Ambulatorului de Specialitate al Spitalului Universitar ldquoSfacircntul Spiridon din
Iaşi Icircn studiul epidemiologic şi al markerilor inflamatori al sindromului metabolic desfăşurat
au fost incluşi un număr de 1530 de participanţi pe baza liberului consimţămacircnt examinaţi icircn
perioada 01012013 - 31122013 Icircn continuare icircn perioada 1012014 - 28022014 pe baza
criteriilor de includere şi excludere icircn cele două loturi de studiu am investigat un număr de 57
de subiecţi prezentaţi la consultaţie icircn această perioadă şi care au icircndeplinit criteriile de
includere icircn cele două loturi (Lot SM şi Lot Control) constituite pentru evaluarea nivelului de
expresie a receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Explorarea nivelului de expresie
relativă a receptorilor PPARα s-a desfăşurat icircn cadrul Laboratorului de Biologie Moleculară
de pe platforma Institutului Regional de Oncologie Datorită resurselor proprii financiare
limitate trebuie să subliniez că aceasta cercetare nu ar fi fost posibilă fără contribuţia unor
cercetători din domeniul medical care m-au sprijinit necondiţionat atacirct icircn elaborarea
protocolului de lucru cacirct şi icircn efectuarea propriu-zisă a studiului Icircn acest sens menţionăm şi
faptul că pentru studiul receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic am utilizat aparatura
Laboratorului de Biologie Moleculară (care deserveşte icircntreaga Regiune a Moldovei) Pe
această cale mulţumesc personalului Laboratorului de Biologie Moleculară pentru ajutorul
acordat icircn desfăşurarea cercetării doctorale icircn condiţiile icircn care se observa creşterea
numărului de pacienţi care se adresează acestei platforme de cercetare Mulţumesc de
asemenea şi Doamnei Doctor Elena Butoi din cadrul Institutului de Biologie şi Patologie
Moleculară ldquoNicolae Simionescurdquo Bucureşti) pentru donaţia anticorpului secundar anti-
FITC Icircn consecinţă pentru recrutarea unui număr mai mare de participanţi ar fi fost necesară
icircn primul racircnd obţinerea unor resurse financiare suplimentare pentru achiziţia de aparatură şi
reactivi Totuşi numărul subiecţilor recrutaţi este apropiat de numărul subiecţilor raportaţi icircn
cadrul unor granturi de cercetare care aveau ca ţinta studiul expresiei receptorilor PPARα
(212 227 228 231) Rezultatele obţinute continua seria lucrărilor care arata importanta
studiului mecanismelor etiopatogenice ale sindromului metabolic patologie care se afla icircntr-o
continuă creştere La pacienţii cu SM pe lacircngă diminuarea nivelului de expresie a receptorilor
PPARα icircn eozinofile ne aşteptam şi la evidenţierea unor modificări icircn expresia PPARα şi icircn
populaţiile de Ly Mo şi PMN Acest fapt poate fi explicat de utilizarea unor celule provenite
de la pacienţi fără afectare cardiovasculară fără diabet zaharat şi necesită continuarea
studiului pe culturi celulare icircn condiţii de stimulare cu agonişti PPARα deziderat care
impune continuarea investigării expresiei PPARα printr-un grant de cercetare
ORIGINALITATEA ȘI CONTRIBUȚIILE INOVATIVE ALE TEZEI DE
DOCTORAT PERSPECTIVE DE CERCETARE
Evaluarea nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn leucocitele circulante
aduce noi perspective icircn studiul obezităţii şi sindromului metabolic Importanta studiului
expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic derivă din prevalenta crescută a
sindromului metabolic icircn populaţia cercetată la care se adaugă riscul cardiovascular foarte
icircnalt al acestor pacienţi cu implicaţii majore icircn sănătatea publică Rolul receptorilor PPARα
icircn inflamaţie şi aterogeneza este binecunoscut dar studiul nostru este primul care a arătat că
nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα este semnificativ mai scăzut in populatiile
de eozinofile la pacienţii cu SM Această concluzie coroborata cu existenţa unei stracircnse
asocieri intre expresia receptorilor PPARα la nivelul Mo limfocitelor şi PMNlor creeaza
ipoteza existenţei unui mecanism de control diferit al expresiei PPARα la nivelul
eozinofilelor Această cercetare aduce informaţii importante referitoare la mecanismele
proinflamatorii care stau la baza insulinorezistenţei şi riscului cardiometabolic şi impune
continuarea studiului acestor receptori nucleari prin citometrie icircn flux metodă care poate fi
aplicată şi la scara mai largă dacă sunt asigurate resursele materiale necesare cercetării
Cercetarea prin citometrie icircn flux poate fi completată de studiul polimorfismului genei
PPARA şi astfel se pot identifica timpuriu indivizii cu potenţial risc cardiometabolic crescut
Studiul receptorilor PPARα a stabilit conexiuni cu factori proinflamatori şi aterogenetici iar
continuarea cercetării poate aduce şi elemente noi de diagnostic precoce icircn sindromul
metabolic contribuind la icircmbunătăţirea prognosticului acestor pacienţi
CONCLUZII FINALE
1 Aplicarea scorului de SM alături de implementarea algoritmului electronic de diagnostic
contribuie la o prelucrare rapidă eficientă și standardizată a informaţiilor la nivelul
medicinei primare
2 Prevalenţa SM calculată astfel icircn cadrul studiului este crescută (2732) icircn concordanţă
cu datele raportate
3 Controlul factorilor de risc cardiometabolici incluşi icircn SM se poate realiza prin
managementul stilului de viaţă (scăderea greutăţii corporale prin combaterea
sedentarismului şi adoptarea unei diete antiaterogene şi hipocalorice) şi administrarea
terapiei medicamentoase
4 Este necesară adoptarea unei politici de sănătate publică pentru prevenirea creşterii icircn
populaţie a prevalenţei obezităţii şi a diabetului zaharat
5 Noi metode de cercetare icircn domeniul SM axate pe diagnosticarea precoce şi cuantificarea
eficientă a acestuia duce la diminuarea incidenței evenimentelor cardiovasculare majore
6 Sindromul metabolic se caracterizează printr-un status inflamator cronic
7 Valorile Non-HDL-colesterolului şi a raportului de aterogenitate sunt semnificativ mai
mari la pacienţii cu SM
8 Dintre reactanţii de faza acută am observat că valoarea medie a fibrinogenului este mai
crescută icircn lotul cu SM
9 Valorile eozinofilelor sunt crescute icircn sindromul metabolic iar explorarea relaţiei dintre
eozinofile şi obezitate constituie una din direcţiile de studiu actuale ale sindromului
metabolic
10 Evaluarea markerilor inflamatori icircn contextul sindromului metabolic este utilă icircn
evaluarea complexă a a factorilor de risc cardiometabolici
11 Prin metoda citometriei icircn flux am demonstrat prezenta Receptorilor Activaţi de
Inductorii Proliferării Peroxizomilor ndash Alpha (PPARα) icircn toate populaţiile de leucocite
studiate (Mo limfocite PMN eozinofile) atacirct icircn lotul pacienţilor cu SM cacirct şi icircn lotul
martor
12 Utilizacircnd intensitatea medie de fluorescenţă a anticorpilor anti- PPARα am arătat că
nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile este semnificativ mai redus
la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali
13 Acest studiu este primul care a demonstrat existenţa unei scăderi statistic semnificative a
nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofilele pacienţilor cu SM
confirmacircnd cercetările recente care au evidenţiat rolul eozinofilelor şi al receptorilor
PPARα icircn obezitate reglarea inflamaţiei cronice şi aterogeneza
14 Contrar aşteptărilor noastre icircn populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările
efectuate icircn cele două loturi de studiu (cu şi fără sindom metabolic) nu am evidenţiat
diferenţe statistic seminificative icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα la
subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali
15 Icircn populaţiile de Mo limfocite şi polimorfonucleare am observat corelaţii puternice
semnificativ statistic icircntre expresia PPARα icircn aceste tipuri celulare sugeracircnd existenţa
unui mecanism unic de control al inflamaţiei cronice la nivelul acestor celule probabil
diferit de cel din eozinofile
16 La subiecţii cu SM expresia relativă a PPARα icircn Eo este invers asociată cu expresia
receptorului CD36 (receptor al particulelor de ox - LDL şi propus ca un marker precoce al
aterosclerozei) dovedind rolul antiinflamator al receptorilor PPARα la nivel endotelial
17 La pacienţii cu antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială nivelul de
expresie al receptorilor PPARα icircn eozinofile şi Mo este diminuat comparativ cu subiecţii
fără antecedente familiale de hipertensiune arterială Putem spune că studiul efectuat de
noi aduce informaţii importante legate de geneză aterosclerozei şi hipertensiunii arteriale
18 Prin studiul asocierilor dintre receptorii PPARα şi componentele clinice ale sindromului
metabolic am arătat rolul acestor receptori icircn determinismul obezităţii de tip central
nivelul expresiei relative a receptorilor PPARα fiind invers proporţional cu circumferinţa
abdominală
19 Icircn acelaşi timp nivelul de expresie a PPARα icircn sindromul metabolic este asociat pozitiv
cu concentraţia serică a HDL-colesterolului şi invers asociat cu nivelul trigliceridelor
serice dovedind rolul acestor receptori icircn diminuarea procesului inflamator cronic de la
nivel vascular
20 La pacienţii cu SM scăderea expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofile este corelată cu
creşterea unor markeri ai sindromului inflamator cronic cardiometabolic (acid uric
fibrinogen) ilustracircnd importanta receptorilor icircn reglarea status-ului inflamator cronic din
sindromul metabolic
21 Utilizarea metodei flowcitometrice pentru studiul expresiei relative a receptorilor PPARα
icircn leucocite a adus informaţii importante cu privire la mecanismele moleculare de control
implicate icircn patogenia bolilor cardiometabolice icircn concordanţă cu cercetările care descriu
expresia PPAR icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale bronşice
keratinocite)
BIBLIOGRAFIE SELECTIVA
1 Kahn R Metabolic syndrome- what is the clinical usefulness Lancet 2008371(9628)1892-3
2 Reaven GM The metabolic syndrome is this diagnosis necessary Am J Clin Nutr 2006 83(6)1237-7
3 Grundy SM Pre-Diabetes Metabolic Syndrome and Cardiovascular Risk J Am Coll Cardiol 201259(7)
635-43
4 International Diabetes Federation IDF Diabetes Atlas 6th edn International Diabetes Federation Belgium
Brussels 20131-155
5 World Health Organization Global Status Report on Noncommunicable Diseases 2010 World Health
Organization Geneva Switzerland 20111-176
6 Coman AE Petrovanu R Sindromul metabolic in practica de ambulator Editura Pim Iaşi 2009 1-103
7 Grundy SM Becker D Clark LT et alThird Report of the National Cholesterol Education Program (NCEP)
Expert Panel on Detection Evaluation and Treatment of High Blood Cholesterol in Adults (Adult
Treatment Panel III) Final Report Circulation 2002106(25)3143-90
8 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J Metabolic syndrome- a new worldwide definition A Consensus Statement
from the International Diabetes Federation Diabet Med 2006 23(5)469-80
9 KG Alberti KG Eckel RH Grundy SM etal International Diabetes Federation task force on epidemiology
and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart Association World Heart
Federation International Atherosclerosis Society International Association for the study of obesity
Harmonizing the metabolic syndrome a joint interim statement of the International Diabetes Federation task
force on epidemiology and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart
Association World Heart Federation International Atherosclerosis society and International Association
for the study of obesity Circulation 2009120(16)1640-5
10 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J IDF Epidemiology Task Force The metabolic syndrome new
worldwide definition Lancet 2005 366 1059 - 62
11 Oleszczyk M Svab I Seifert B et al Primary healthcare in the developing part of Europe changes and
development in the former Eastern Bloc countries that joined the European Union following 2004 Med Sci
Monit 2009(15)78ndash84
12 Jung U J Choi M S Obesity and Its Metabolic Complications The Role of Adipokines and the
Relationship between Obesity Inflammation Insulin Resistance Dyslipidemia and Nonalcoholic Fatty
Liver Disease Int J Mol Sci 2014rsquo15(4) 6184-223
13 Vanden Heuvel JP Peters JM Peroxisome Proliferators In Ramos K (ed) Cellular and Molecular
Toxicology (Second Edition) Volume 2 New York Elsevier Science Inc 2010 145 - 67
14 Yessoufou A Wahli W Multifaceted roles of peroxisome proliferator-activated receptors (PPARs) at the
cellular and whole organism levels Swiss Med Wkl 2010140w13071 doi104414smw201013071
15 Azhar S Peroxisome proliferator-activated receptors metabolic syndrome and cardiovascular disease
Future Cardiology 20106(5)657-91
16 Andries G Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity
Diabetes and Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(Suppl)24-32
17 Zandbergen F Plutzky J PPARalpha in atherosclerosis and inflammation Biochim Biophys Acta
20071771(8)972-82
18 Straus DS Glass CK Anti-inflammatory actions of PPAR ligands new insights on cellular and molecular
mechanisms Trends Immunol 200728(12)551-8
19 Zlei M Zugun- Eloae F Carasevici E Citometrie icircn flux - Bază şi clinică Icircn Hinescu ME (ed) Citometrie icircn
flux - principii şi aplicaţii clinice Bucureşti Editura Viaţa Medicală Romacircnească 20111-128
20 Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity Diabetes and
Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(9)24-32
21 Woerly G Honda K Loyens M et al Peroxisome proliferator-activated receptors alpha and gamma down-
regulate allergic inflammation and eosinophil activation J Exp Med 2003198(3)411-21
22 Salle-Saumont D Brenuchon C Kanda A et al Peroxisome proliferator-activated receptor alpha regulates
skin inflammation and humoral response in atopic dermatitis J Clin Allergy Immunology 2008 21(4)962-8
23 Schote A Turner J Schiltz J et al Nuclear receptors in human immune cells expression and correlations
Mol Immunolog 200744(6)1436-45
24 DAmore S Vacca M Graziano G et al Nuclear receptors expression chart icircn peripheral blood
mononuclear cells identifies patients with Metabolic Syndrome Biochim Biophys Acta
20131832(12)2289-301
25 Uthurralt J Gordish-Dressman H Bradbury M T et al PPARalpha L162V underlies variation in serum
triglycerides and subcutaneous fat volume in young males BMC Med Genet 2007855
26 Hiukka A Leinonen ES Jauhiainen M et al Long-term effects of fenofibrate on VLDL and HDL
subspecies icircn participants with type 2 diabetes mellitus Diabetologia 2007 50(10)2067-75
27 Robins SJ Rubins HB Faas FH et alInsulin resistance and cardiovascular events with low HDL
cholesterol The Veterans Affairs HDL Intervention Trial (VA-HIT) Diabetes Care 2003 26(5)1513-7
28 Devaraj S Siegel D Jialal I Statin Therapy in Metabolic Syndrome and Hypertension Post-JUPITER
What is the Value of CRP Curr Atheroscler Rep 2011 13(1) 31ndash42
29 Imperatore G Riccardi G Iovino C et al Plasma Fibrinogen A New Factor of the Metabolic Syndrome A
population-based study Diabetes Care 19982 1(4)649-54
30 Krysiak R Gdula-Dymek A Bachowski R Okopien B Pleiotropic effects of atorvastatin and fenofibrate
in metabolic syndrome and different types of pre-diabete Diabetes Care 201033(10)2266-70
31 Hermans MP Impact of Fenofibrate on Type 2 Diabetes Patients with Features of the Metabolic Syndrome
Subgroup Analysis From FIELD Curr Cardiol Rev 20106(2)112-8
32 Silverstein R Inflammation atherosclerosis and arterial thrombosis Role of the scavenger receptor CD36
Cleveland Clinic Journal of Medicine 200976(Suppl 2)S27-S30
33 Hăncu N Obezitatea In Vereşiu IA (ed) Diabetul zaharat nutritia si bolile metabolice Volume 2 Editura
Echinox Cluj- Napoca 2010 1-15
Lista lucrări publicate
1 Elena Popa Maria Maidaniuc Agnes Bacusca Alamir Diaa Rodica Petrovanu Adorata Elena
Coman Disfuncţia endotelială ndash de la mecanisme moleculare la cuantifi care şi tratament icircn practica
medicală Practica Medicală 20149(3) 109-14
2 Elena Popa Agnes Bacusca Alamir Diaa Maria Maidaniuc Rodica Petrovanu Adorata Elena Coman
The function of insulin receptor (IRF) in evolution of obesity correlation with adipocytes diameters
Archives of the Balkan Medical Union 201449(3) 275-9
3 Elena Popa Florin Zugun-Eloae Mihaela Zlei Daniela Jitaru Oana Maria Pintilie Adorata Elena
Coman Maria Traian Didona Anca Ungureanu Eugen Carasevici - acceptata pentru numarul 42014
Flow cytometry analysis of PPAR-alpha receptors in metabolic syndrome) Revista Romană de
Medicină de Laborator(RRLM-D-14-00034R1- adeverinţa ataşată
Referitor la lotul SM 92 din valorile MFI a Ac anti- CD36 s-au icircncadrat icircn
intervalul Media plusmn 2 DS (figura 542) iar pentru lotul martor peste 90 dintre acestea icircn
Media plusmn 2 DS (figura 543)
Figura 542 Lot SM
Variaţia MFI anti-CD36 icircn Mo
Număr pacienţi 26
Minimum 2664
Maximum 6933
Media 429034
Deviaţia Standard 109051
Figura 543 Lot Non -SM
Variaţia MFI anti- CD36 icircn Mo
Număr 31
Minimum 81700
Maximum 616800
Media 370377
Deviaţia Standard 125514
Comparacircnd subiecţii cu SM cu cei din lotul normal am constatat o tendinţă de creştere
a expresiei CD36 icircn lotul cu SM((t - Test P= 0067)
MFI anti - CD36 Lot Non-SM
Număr 31
Mediana 3628
Percentila 25 2737
Percentila 75 4533
MFI anti - CD36 Lot SM
Număr 26
Mediana 4110
Percentila 25 3462
Percentila 75 4690
Figura 544 Comparaţie icircntre cel două loturi privind MFI anti - CD36 icircn Mo
Referindu-ne la subiecţii cu AHC de HTA am observat o tendinţă de creştere a
valorilor MFI anti-CD36 comparativ cu cei care nu au avut AHC de HTA (t - Test P = 0 08)
AHC HTA
Număr 22
Mediana 442800
Percentila 25 355275
Percentila 75 519475
AHC HTA absenţe
Număr 35
Mediana 377400
Percentila 25 316900
Percentila 75 443400
Figura 545 Comparaţie icircntre expresia CD36 icircn Mo funcţie de AHC de HTA
Nu s-au calculat diferenţe semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor
PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de dislipidemie atunci cacircnd aceştia au fost comparaţi cu
subiecţii fără AHC de dislipidemie (t - Test P=031)
Corelaţii icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα si CD36
Studiind valorile intensităţii medii de fluorescenţă a Ac anti-PPARα icircn Mo Ly şi
PMN am observat că nivelul de expresie celularatilde a PPARα icircn Mo Ly şi PMN sunt corelate
puternic pozitiv atacirct icircn lotul SM cacirct şi icircn lotul martor(fig547 548)
1 6 11 16 21 26 31
0
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
Pacienti
MFI a
nti-CD
36
42903
21093
64714
10188
75619
LCI
Media
LCS1 6 11 16 21 26 31 36
-1000
0
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
MFI a
nti- C
D36
37038
11935
62141
-616
74692Media + 2 DS
Media
Media - 2 DS
3200
3400
3600
3800
4000
4200
4400
4600
4800
Lot SM Lot Non-SM
P = 00676
MFI
anti-
CD36
3400
3600
3800
4000
4200
4400
4600
4800
5000
DA NU
AHC HTA
P = 008
Figura 547 Studiul relatiilor dintre
receptorii PPARα icircn SM A Mo vs PMN B Mo vs Ly
C PMN vs Ly Graficul ilustrează coeficienţii r P dreapta de
regresie (linia centrala) intervalul de icircncredere
95 şi intervalul de predicţie 95
Figura 548 Corelaţii icircntre receptorii PPARα icircn lotul
martor
A Mo vs PMN
B Mo vs Ly
C PMN vs Ly
Tot pentru lotul SM cacircnd am evaluat relaţia dintre nivelul de expresie relativă a
receptorilor PPARα icircn Eo şi nivelul de expresie relativa a receptorilor CD 36 am obţinut o
corelaţie negativă (r = - 05 P = 001) (fig 549 A)
50 100 150 200 250 300 350 50
100
150
200
250
300
350
400
450
500
PPARα Ly
PPARα PMN
y = 56641 + 1159 x r = 086 P lt 0001
C
50 100 150 200 250 300 350 400 0
50
100
150
200
250
300
350
PPARα Mo
PPARα Ly
y = 36665 + 0607 x r = 090 P lt 0001
B
150 200 250 300 350 400 450 0
50 100 150 200 250 300 350 400 450 500
PPARα PMN
PPARα Mo
y = 2505 + 0879 x r = 081 P lt 0001
A
50 100 150 200 250 300 350
50 100 150 200 250 300 350 400 450 500
PPARα Ly
PPARα PMN
y = 95668 + 0919 x r = 081 P lt 0001
C
100 150 200 250 300 350 400
0
50
100
150
200
250
300
350
400
PPARα Mo
PPARα Ly
y = -7503 + 0829 x r = 079 P lt 0001
B
100 150 200 250 300 350 400
50
100
150
200
250
300
350
400
450
500
PPARα Mo
PPARα PMN
y = 61384 + 0882 r = 074 P lt 0001
A
Figura 549 Corelaţii icircntre expresia PPARα icircn Eo şi alte tipuri de receptori investigaţi A PPARα Eo şi CD 36 (Lot SM) B PPARα Eo şi PPARα Mo( Lot Non-SM)
Icircn lotul martor am identificat o asociere moderată pozitivă (r = 038 P = 0033) icircntre
nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Eo şi Mo (figura 549B) corelaţie absentă icircn
lotul pacienţilor cu SM
Corelaţii dintre receptorii studiaţi şi componentele sindromului metabolic
Icircn lotul de control analiza statistică a relevat faptul că icircntre circumferinţa
abdominală (CA ) şi nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Mo Ly şi PMN există o
corelaţie inversă adică scăderea expresiei PPARα la nivelul acestor populatii celulare ar fi
icircnsoţită de creşterea CA (figura 550
Figura 550Corelaţii dintre receptorii
PPARα si CA A Mo B Ly C PMN
La pacienţii cu SM am notat o corelatie moderată negativă statistic semnificativă
icircntre TG şi valorile MFI a Ac anti- PPARα icircn Mo şi Ly( fig 551)
150 200 250 300 350 400 450 50
60
70
80
90
100
110
PPARα PMN
CA r = - 040 P = 0024
C
50 100 150 200 250 300 350 50
60
70
80
90
100
110
PPARα Ly
CA r = - 046 P = 0009
B
50 100 150 200 250 300 350 400 50
60
70
80
90
100
110
PPARα Mo
CA r = - 042 P = 0017
A
50 100 150 200 250 300 350 400 500
1000
1500
2000
2500
3000
PPARα Mo
PPARα Eo
r = 038 P = 0033
B
0 500 1000 1500 2000 2500 1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
PPARα Eo
CD36
r = 050 P = 0010
A
Figura 551 Lot SM Corelaţie icircntre expresia PPARα şi TG (A Mo B Ly)
Analizand corelatia dintre receptorii CD36 si valorile TA la pacientii cu SM am observat
o asociere pozitivă asteptată intre TAD si nivelul de expresie al receptorilor CD36 (fig 552)
Figura 552 Lot SM Corelaţii icircntre expresia
receptorilor CD36 şi valorile tensiunii arteriale
diastolice
Studiind corelaţiile dintre receptorii PPARα şi HDL-col la subiecţii din lotul martor am
notat o asociere pozitivă icircntre expresia PPARα icircn Mo şi Ly cu HDL-col (fig 553)
Figura 553 Lot martor Corelaţii icircntre HDL-col şi expresia PPARα icircn Mo(A) Ly(B)
Icircn lotul normal am evidenţiat corelaţii pozitive moderate dar semnificative statistic icircntre
CA şi valorile TAS (r = 062 P lt 0001) respectiv TAD (r = 050 P=0004) precum şi icircntre
CA şi glicemia subiecţilor normali (r = 052 P = 0003) Aceste date icircmpreună cu relaţia
invers proporţională identificată icircntre HDL-col şi CA (r = 050 P = 001) susţin validitatea
acestui studiu Icircn lotul subiecţilor cu SM am observat o corelaţie moderat pozitivă icircntre
expresia PPARα icircn populaţiiile de Mo şi Eo şi concentraţia a HDL-col (fig 554)
B
100 150 200 250 300 350 20
30
40
50
60
70
80
90
100
PPARα Ly
HDL-col-(mgdl)
r = 036 P = 0046
A
150 200 250 300 350 400 20
30
40
50
60
70
80
90
100
PPARα Mo
HDL-col-(mgd)l
r = 035 P = 005
70 75 80 85 90 95 100 1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
TAD (mmHg)
CD36
r = 048 P = 0013
B
50 100 150 200 250 300 350 -100
0
100
200
300
400
500
PPARα Ly
TG(mgdl)
r = - 042 P = 003
A
50 100 150 200 250 300 350 400 -100
0
100
200
300
400
500
PPARα Mo
TG ( mgdl) r =- 0 43 P = 0027
Figura 554 Corelaţii icircn SM icircntre HDL-col şi expresia PPARα icircn Mo (A) şi Eo(B)
Corelaţii icircntre nivelul de expresie relativă a PPARα şi markeri ai disfuncţiei
endoteliale şi inflamaţiei cronice
Deşi nu a icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică am reţinut corelaţia invers
proporţională (r = - 0331 P = 006) dintre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα
icircn PMN şi concentraţia serică a Non-HDL-colesterolului
Studiind relaţiile dintre parametri icircn lotul de pacienţi cu SM am observat o corelaţie
moderată invers proporţională icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Eo şi
acidul uric seric (figura 555 A) corelaţie absentă la subiecţii fără SM
Figura 555 Lot SM corelaţia dintre expresia PPARα icircn Eo şi acidul uric (A) respectiv
PPARα şi fibrinogen (B)
Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P=008) am notat pentru
pacienţii cu SM corelaţia invers proporţională dintre expresia PPARα icircn Eo şi concentraţia
serică a fibrinogenului ( figura 555B)
V5 Discuţii
Icircn cadrul lucrării de doctorat am studiat nivelul de expresie relativă a PPARα icircn
leucocitele pacienţilor cu SM comparativ cu cea a subiecţilor normali Expresia PPARα a fost
studiată icircn paralel cu cea a CD36 glicoproteină exprimată pe suprafaţa a numeroase celule
din organismul uman inclusiv pe cea a Mo şi macrofagelor Prin funcţia sa de receptor pentru
particulele oxidate de LDL CD36 cunoscut ca bdquoscavenger receptorrdquo de clasa B sau
bdquotrombospodin receptorrdquo contribuie la dezvoltarea inflamaţiei de la nivel endotelial şi
formarea plăcii de ateroscleroză Referitor la studiul PPARα icircn Eo icircn sindromul metabolic
menţionăm că studiul nostru este primul care arată că nivelul de expresie a proteinei PPARα
icircn Eo măsurat prin citometrie icircn flux este semnificativ mai redus la pacienţii care sunt
diagnosticaţi cu acest sindrom De asemenea icircn lotul cu SM cercetat icircn cadrul studiului
receptorilor PPARα numărul Eo circulante a fost semnificativ mai crescut la pacienţii cu SM
B
0 500 1000 1500 2000 2500 200
250
300
350
400
450
PPARα Eo o
Fibrinogen mgdl
r =- 036 P = 008
0 500 1000 1500 2000 2500 1 2 3 4 5 6 7 8 9
10 11
PPARα Eo_
Acid uric(mgdl) r = 048 P = 0014 A
0 500 1000 1500 2000 2500 10
20
30
40
50
60
70
80
PPARα Eo
HDL(mgdl)
r = 044 P = 0024
B
100 150 200 250 300 350 400 10
20
30
40
50
60
70
80
PPARα Mo
HDL( mgdl)
r = 046 P = 0019
A
(P = 003) Aceste constatări conduc la ipoteza că Eo joacă un rol special icircn mecanismele
patogenice declanşate icircn sindromul metabolic şi că receptorii PPARα sunt importanţi icircn
implicarea Eo icircn obezitate şi insulinorezistenţă Creşterea numărului de Eo circulante este
urmată de eliberarea mediatorilor proinflamatori iar reducerea expresiei PPARα icircn Eo
determină perturbarea mecanismelor de control al inflamaţiei cu exacerbarea cascadei
proinflamatorii Consecutiv se agravează disfuncţia endotelială şi se accelerează progresia
leziunilor de ateroscleroză Extrapolacircnd aceste ipoteze putem spune că asocierea raportată
dintre boala ischemică coronariană şi Eo poate fi şi consecinţa exacerbării cascadei
proinflamatorii de la nivel vascular produsă datorită scăderii expresiei PPARα icircn Eo iar
creşterea numărului de Eo circulante poate reprezenta o adaptare a organismului uman care
icircncearcă să suplinească deficitul de receptori PPARα Analizacircnd curba ROC pentru
intensităţile medii de fluorescenţă determinate pentru anticorpii anti- PPARα icircn Eo am
obţinut pentru acest biomarker o sensibilitate a testului de 565 şi o specificitate de 778
pentru un punct de cut-off de 1533 ( figura 536 ) Deşi aria AUC (Aria under the curve) egală
cu 0663 icircncadrează acest test ca avacircnd o acurateţe redusă observăm că că această valoare
este apropiată de determinările AUC pentru alţi factori (fibrinogen raport de aterogenitate
acid uric non- HDL-colesterol) cunoscuţi ca fiind implicaţi icircn aterogeneză şi inflamaţia
cronică (figura 431) Aceste remarci alături de faptul că icircn studiul receptorilor PPARα icircn
leucocite am inclus subiecţi la primul diagnostic de SM creează premisa integrării
determinării expresiei relative a receptorilor PPARα icircn diagnosticul complex al sindromului
metabolic Putem spune că icircn final studiul expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofilele
circulante se dovedește a fi util icircn diagnosticul precoce la nivel molecular al SM permiţacircnd
identificarea timpurie a unor indivizi cu risc cardiometabolic crescut Astfel intervenţia
precoce asupra subiecţilor cu deficit de PPARα icircn Eo contribuie la managementul eficient al
afecţiunilor degenerative icircn care inflamaţia cronică icircndeplineşte un rol primordial Referitor
la populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările efectuate prin citometrie de flux nu au
arătat existenţa unor diferenţe statistice icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα
la subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali Rezultatele noastre pot fi
consecinţa caracteristicilor loturilor studiate (icircn studiul nostru au fost incluşi subiecţi recrutaţi
la primul diagnostic de SM şi icircn absenţa stimulării receptorilor PPARα cu droguri agoniste
PPARα) dar icircn acelaşi timp pot apare diferenţe datorită metodei utilizate (231 232 233)
Făcacircnd o paralelă cu un studiu publicat icircn 2013 icircn Europa (231) care a arătat creşterea
nivelului de expresie al PPARα icircn Ly şi Mo observăm că deşi numărul de subiecţi a fost
aproximativ egal (57 participanţi icircn studiul nostru 60 icircn studiul DAmore) subiecţii icircn studiul
amintit au fost recrutaţi dintr-o clinică cu profil medical la primul diagnostic de SM icircn timp
ce metoda utilizată a fost PCR (Polymerase Chain Reaction) mult mai fidelă decacirct citometria
icircn flux icircn studiul receptorilor nucleari De asemenea DAmore nu investighează expresia
PPARα icircn Eo şi PMN icircn cercetare fiind incluse doar celulele CD14+ (predominant Mo) şi
CD14- (predominant Ly) Deşi nu am obţinut diferenţe statistic semnificative icircntre cele două
loturi referitoare la nivelul de expresie relativă a PPARα icircn Mo Ly şi PMN am observat
corelaţii puternice semnificative statistic icircntre expresia receptorilor PPARα icircn aceste tipuri
celulare Rezultatele obţinute sugerează existenţa unui mecanism diferit molecular de control
icircn eozinofile care reglează cantitatea de proteină PPARα icircn eozinofile versus alte tipuri de
leucocite (la pacienţii cu SM) şi acest lucru este icircn concordanţă cu cercetările care descriu
expresia PPARα mRNA icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale
bronşice keratinocite) Studiind prin citometrie de flux nivelul de expresie relativă a
receptorului CD36 la nivelul Mo am arătat prezenţa acestuia icircn Mo tuturor subiecţilor
investigaţi Analizacircnd valorile intensităţii medii de fluorescenţă a CD36 icircn loturile studiate
am observat o tendinţă de creştere la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali
confirmacircnd implicarea receptorului CD36 icircn patogeneza acestuia Referitor la expresia
receptorului CD36 rezultatele obţinute sunt icircn consens cu studii anterioare care au arătat
creşterea expresiei CD36 la pacienţii cu SM şi diabet zaharat Astfel pe lacircngă diferenţa icircn
expresia CD36 s-au raportat şi corelaţii inverse icircntre expresia proteinei CD36 şi nivelul
adiponectinei Acelaşi studiu a evidenţiat o corelaţie pozitivă intre expresia CD36 cu expresia
receptorilor PPAR gamma relaţia cu PPARα nefiind investigată
Analiza de subgrup a relaţiilor dintre componentele SM și elementele moleculare
proinflamatorii studiate a relevat prezenţa unor asocieri semnificativ statistice icircntre acestea
Se argumentează astfel că veridicitatea studiului este susţinută de interdependenţele statistice
ale componentelor SM Determinarea coeficientului de corelaţie Icircn studiul nostru nivelul de
expresie relativă a PPARα s-a corelat moderat negativ (figura 550) cu CA a subiecţilor din
lotul normal pentru populaţiile celulare de Mo (r = - 0420 P = 001) Ly (r = - 046 P =
0009) şi PMN (r = - 040 P = 0024) date care sunt icircn concordanţă cu studiile care arată
rolul PPARα icircn furnizarea energiei prin beta-oxidarea acizilor graşi Icircn acelaşi timp icircn lotul
pacienţilor cu SM nu am identificat prezenţa unei asocieri icircntre nivelul de expresie relativă a
PPARα şi valoarea măsurată a CA Asocierea dintre expresia relativă a PPARα cu obezitatea
de tip central completează datele existente referitoare la reglarea homeostaziei energetice
conturacircnd un mecanism de control deficitar al aportului caloric al SM Icircn condiţiile icircn care
rezultatele obţinute prin metoda citometriei icircn flux nu au arătat existenţa unei corelaţii intre
expresia PPARα şi CA la pacienţii cu SM considerăm că ar fi necesar studiul
polimorfismului genei PPARA care ar putea aduce informaţii importante cu privire la
implicarea acestor receptori icircn apariţia obezităţii de tip central Subliniem acest lucru deoarece
obezitatea este o boală plurifactorială icircn care pe lacircngă factorii ereditari sunt implicaţi factori
de mediu psihologici şi sociali (245) Existenţa unei componente genetice a aterosclerozei
este legată şi de prezenţa unor variante ale genei PPARA asociate cu creşterea incidenţei bolii
cardiovasculare (82) şi a SM (249) Icircn studiul nostru am constatat o scădere statistic
semnificativă a nivelului expresiei relative a receptorilor PPARα icircn Eo la subiecţii cu
antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială comparativ cu subiecţii fără istoric
familial de hipertensiune (figura 537) Deşi diferenţele calculate icircntre loturile studiate nu au
icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică la subiecţii care au declarat prezenţa
antecedentelor familiale de hipertensiune arterială remarcăm o tendinţă de scădere a
intensităţii medii de fluorescenţă pentru Ac anti-PPARα la nivelul Mo (figura 515 P = 006
) icircn timp ce expresia relativă a CD36 icircnregistrează o creştere la acesti subiecţi (figura 545 P
= 008) Icircn contextul riscului cardiovascular foarte icircnalt al pacienţilor cu SM amintim şi
existenţa corelaţiei pozitive dintre valorile tensiunii arteriale diastolice şi expresia relativă a
receptorului CD36 (r = 0483 P = 0013) Această constatare este icircn consens cu studiile care
au arătat că forma solubilă circulantă a CD36 este asociată cu factorii de risc cardiovasculari
fiind propusă ca un marker precoce al aterosclerozei Activarea PPARα este asociată cu
modularea metabolismului lipidic iar agoniştii PPARα sunt utilizaţi icircn mod curent pentru
tratamentul dislipidemiei Sub acţiunea agoniştilor PPARα se obţine o icircmbunătăţire a funcţiei
endoteliale şi a parametrilor reologici funcţiile pleiotropice ale agoniştilor PPARα fiind
dovedite icircn trialuri clinice controlate Icircn populaţiile de Mo şi Ly la pacienţii cu SM
cercetarea noastră a evidenţiat o asociere negativă icircntre nivelul de expresie relativă a
receptorilor PPARα şi concentraţia TG serice (figura 551) Astfel scăderea expresiei
receptorilor PPARα este asociată cu creşterea nivelului TG serice contribuind la profilul
lipidic aterogen din SM Icircn conformitate cu literatura de specialitate icircn studiul efectuat prin
metoda citometriei icircn flux am găsit prezenţa asocierii icircntre nivelul de expresie al PPARα şi
HDL-colesterol Corelaţia pozitivă dintre nivelul de expresie relativă PPARα şi concentraţia
HDL-colesterolului a fost observată icircn lotul martor icircn populaţiile de Mo (r = 035 P = 005)
şi Ly ( r = 036 P = 004) (figura 553) susţinacircnd faptul că stimularea receptorilor PPARα
este legată de creşterea nivelului seric al lipoproteinelor cu densitate crescută La pacienţii cu
SM corelaţia dintre expresia PPARα şi HDL-colesterol a fost evidenţiată icircn populaţiile de Mo
(r = 046 P = 0019) şi eozinofile (r = 044 P = 0024) Se desprinde concluzia că icircn
sindromul metabolic scăderea concentraţiei HDL-colesterol este legată de diminuarea
nivelului de expresie relativă a receptorilor nucleari PPARα icircntărind afirmaţiile legate de
rolul acestor receptori icircn progresia bolilor cardiovasculare Studiind reactanţii de fază acută
analiza statistică a relevat o diferenţă semnificativă din punct de vedere statistic icircntre valorile
fibrinogenului la pacienţii cu SM atunci cacircnd au fost comparaţi cu subiecţii fără SM
(Capitolul IV4 P lt0 001 figura 427A) De asemenea icircn Capitolul V dedicat studiul
expresiei relative a receptorilor PPARα studiul valorilor fibrinogenului a arătat creşterea
acestui reactant de faza acută icircn lotul cu SM comparativ cu lotul martor (P lt0 0001) Icircn
studiul nostru am calculat o corelaţie invers proporţionala (r = - -036 fig 555B) icircntre
nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile şi concentraţia serică a
fibrinogenului Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P = 008) am reţinut
această asociere deoarece am demonstrat că nivelul de expresie relativă al receptorilor
PPARα icircn eozinofile este mai scăzut icircn sindromul metabolic iar sindromul metabolic este
caracterizat printr-un status inflamator cronic status caracterizat şi de creşterea concentraţiei
serice a fibrinogenului De asemenea notam ca această corelaţie negativă se află icircn
concordanţă cu studiile care arata că tratamentul cu agonişti PPARα (fibraţi) determina
scăderea nivelului seric al fibrinogenului contribuind la diminuarea inflamaţiei cronice din
sindromul metabolic şi icircn consecinţă amelioracircnd insulinorezistenţa
LIMITE ȘI DIFICULTĂȚI IcircN CERCETARE
Icircn cadrul Tezei de Doctorat am desfăşurat o cercetare care şi-a propus studierea
expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Recrutarea anamneza şi examinarea
clinică a subiecţilor au fost realizate icircn cadrul Cabinetului de Medicină de Familie CMI Popa
Elena din Iaşi iar determinările hematologice şi biochimice s-au efectuat icircn cadrul
Laboratorului Ambulatorului de Specialitate al Spitalului Universitar ldquoSfacircntul Spiridon din
Iaşi Icircn studiul epidemiologic şi al markerilor inflamatori al sindromului metabolic desfăşurat
au fost incluşi un număr de 1530 de participanţi pe baza liberului consimţămacircnt examinaţi icircn
perioada 01012013 - 31122013 Icircn continuare icircn perioada 1012014 - 28022014 pe baza
criteriilor de includere şi excludere icircn cele două loturi de studiu am investigat un număr de 57
de subiecţi prezentaţi la consultaţie icircn această perioadă şi care au icircndeplinit criteriile de
includere icircn cele două loturi (Lot SM şi Lot Control) constituite pentru evaluarea nivelului de
expresie a receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Explorarea nivelului de expresie
relativă a receptorilor PPARα s-a desfăşurat icircn cadrul Laboratorului de Biologie Moleculară
de pe platforma Institutului Regional de Oncologie Datorită resurselor proprii financiare
limitate trebuie să subliniez că aceasta cercetare nu ar fi fost posibilă fără contribuţia unor
cercetători din domeniul medical care m-au sprijinit necondiţionat atacirct icircn elaborarea
protocolului de lucru cacirct şi icircn efectuarea propriu-zisă a studiului Icircn acest sens menţionăm şi
faptul că pentru studiul receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic am utilizat aparatura
Laboratorului de Biologie Moleculară (care deserveşte icircntreaga Regiune a Moldovei) Pe
această cale mulţumesc personalului Laboratorului de Biologie Moleculară pentru ajutorul
acordat icircn desfăşurarea cercetării doctorale icircn condiţiile icircn care se observa creşterea
numărului de pacienţi care se adresează acestei platforme de cercetare Mulţumesc de
asemenea şi Doamnei Doctor Elena Butoi din cadrul Institutului de Biologie şi Patologie
Moleculară ldquoNicolae Simionescurdquo Bucureşti) pentru donaţia anticorpului secundar anti-
FITC Icircn consecinţă pentru recrutarea unui număr mai mare de participanţi ar fi fost necesară
icircn primul racircnd obţinerea unor resurse financiare suplimentare pentru achiziţia de aparatură şi
reactivi Totuşi numărul subiecţilor recrutaţi este apropiat de numărul subiecţilor raportaţi icircn
cadrul unor granturi de cercetare care aveau ca ţinta studiul expresiei receptorilor PPARα
(212 227 228 231) Rezultatele obţinute continua seria lucrărilor care arata importanta
studiului mecanismelor etiopatogenice ale sindromului metabolic patologie care se afla icircntr-o
continuă creştere La pacienţii cu SM pe lacircngă diminuarea nivelului de expresie a receptorilor
PPARα icircn eozinofile ne aşteptam şi la evidenţierea unor modificări icircn expresia PPARα şi icircn
populaţiile de Ly Mo şi PMN Acest fapt poate fi explicat de utilizarea unor celule provenite
de la pacienţi fără afectare cardiovasculară fără diabet zaharat şi necesită continuarea
studiului pe culturi celulare icircn condiţii de stimulare cu agonişti PPARα deziderat care
impune continuarea investigării expresiei PPARα printr-un grant de cercetare
ORIGINALITATEA ȘI CONTRIBUȚIILE INOVATIVE ALE TEZEI DE
DOCTORAT PERSPECTIVE DE CERCETARE
Evaluarea nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn leucocitele circulante
aduce noi perspective icircn studiul obezităţii şi sindromului metabolic Importanta studiului
expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic derivă din prevalenta crescută a
sindromului metabolic icircn populaţia cercetată la care se adaugă riscul cardiovascular foarte
icircnalt al acestor pacienţi cu implicaţii majore icircn sănătatea publică Rolul receptorilor PPARα
icircn inflamaţie şi aterogeneza este binecunoscut dar studiul nostru este primul care a arătat că
nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα este semnificativ mai scăzut in populatiile
de eozinofile la pacienţii cu SM Această concluzie coroborata cu existenţa unei stracircnse
asocieri intre expresia receptorilor PPARα la nivelul Mo limfocitelor şi PMNlor creeaza
ipoteza existenţei unui mecanism de control diferit al expresiei PPARα la nivelul
eozinofilelor Această cercetare aduce informaţii importante referitoare la mecanismele
proinflamatorii care stau la baza insulinorezistenţei şi riscului cardiometabolic şi impune
continuarea studiului acestor receptori nucleari prin citometrie icircn flux metodă care poate fi
aplicată şi la scara mai largă dacă sunt asigurate resursele materiale necesare cercetării
Cercetarea prin citometrie icircn flux poate fi completată de studiul polimorfismului genei
PPARA şi astfel se pot identifica timpuriu indivizii cu potenţial risc cardiometabolic crescut
Studiul receptorilor PPARα a stabilit conexiuni cu factori proinflamatori şi aterogenetici iar
continuarea cercetării poate aduce şi elemente noi de diagnostic precoce icircn sindromul
metabolic contribuind la icircmbunătăţirea prognosticului acestor pacienţi
CONCLUZII FINALE
1 Aplicarea scorului de SM alături de implementarea algoritmului electronic de diagnostic
contribuie la o prelucrare rapidă eficientă și standardizată a informaţiilor la nivelul
medicinei primare
2 Prevalenţa SM calculată astfel icircn cadrul studiului este crescută (2732) icircn concordanţă
cu datele raportate
3 Controlul factorilor de risc cardiometabolici incluşi icircn SM se poate realiza prin
managementul stilului de viaţă (scăderea greutăţii corporale prin combaterea
sedentarismului şi adoptarea unei diete antiaterogene şi hipocalorice) şi administrarea
terapiei medicamentoase
4 Este necesară adoptarea unei politici de sănătate publică pentru prevenirea creşterii icircn
populaţie a prevalenţei obezităţii şi a diabetului zaharat
5 Noi metode de cercetare icircn domeniul SM axate pe diagnosticarea precoce şi cuantificarea
eficientă a acestuia duce la diminuarea incidenței evenimentelor cardiovasculare majore
6 Sindromul metabolic se caracterizează printr-un status inflamator cronic
7 Valorile Non-HDL-colesterolului şi a raportului de aterogenitate sunt semnificativ mai
mari la pacienţii cu SM
8 Dintre reactanţii de faza acută am observat că valoarea medie a fibrinogenului este mai
crescută icircn lotul cu SM
9 Valorile eozinofilelor sunt crescute icircn sindromul metabolic iar explorarea relaţiei dintre
eozinofile şi obezitate constituie una din direcţiile de studiu actuale ale sindromului
metabolic
10 Evaluarea markerilor inflamatori icircn contextul sindromului metabolic este utilă icircn
evaluarea complexă a a factorilor de risc cardiometabolici
11 Prin metoda citometriei icircn flux am demonstrat prezenta Receptorilor Activaţi de
Inductorii Proliferării Peroxizomilor ndash Alpha (PPARα) icircn toate populaţiile de leucocite
studiate (Mo limfocite PMN eozinofile) atacirct icircn lotul pacienţilor cu SM cacirct şi icircn lotul
martor
12 Utilizacircnd intensitatea medie de fluorescenţă a anticorpilor anti- PPARα am arătat că
nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile este semnificativ mai redus
la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali
13 Acest studiu este primul care a demonstrat existenţa unei scăderi statistic semnificative a
nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofilele pacienţilor cu SM
confirmacircnd cercetările recente care au evidenţiat rolul eozinofilelor şi al receptorilor
PPARα icircn obezitate reglarea inflamaţiei cronice şi aterogeneza
14 Contrar aşteptărilor noastre icircn populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările
efectuate icircn cele două loturi de studiu (cu şi fără sindom metabolic) nu am evidenţiat
diferenţe statistic seminificative icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα la
subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali
15 Icircn populaţiile de Mo limfocite şi polimorfonucleare am observat corelaţii puternice
semnificativ statistic icircntre expresia PPARα icircn aceste tipuri celulare sugeracircnd existenţa
unui mecanism unic de control al inflamaţiei cronice la nivelul acestor celule probabil
diferit de cel din eozinofile
16 La subiecţii cu SM expresia relativă a PPARα icircn Eo este invers asociată cu expresia
receptorului CD36 (receptor al particulelor de ox - LDL şi propus ca un marker precoce al
aterosclerozei) dovedind rolul antiinflamator al receptorilor PPARα la nivel endotelial
17 La pacienţii cu antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială nivelul de
expresie al receptorilor PPARα icircn eozinofile şi Mo este diminuat comparativ cu subiecţii
fără antecedente familiale de hipertensiune arterială Putem spune că studiul efectuat de
noi aduce informaţii importante legate de geneză aterosclerozei şi hipertensiunii arteriale
18 Prin studiul asocierilor dintre receptorii PPARα şi componentele clinice ale sindromului
metabolic am arătat rolul acestor receptori icircn determinismul obezităţii de tip central
nivelul expresiei relative a receptorilor PPARα fiind invers proporţional cu circumferinţa
abdominală
19 Icircn acelaşi timp nivelul de expresie a PPARα icircn sindromul metabolic este asociat pozitiv
cu concentraţia serică a HDL-colesterolului şi invers asociat cu nivelul trigliceridelor
serice dovedind rolul acestor receptori icircn diminuarea procesului inflamator cronic de la
nivel vascular
20 La pacienţii cu SM scăderea expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofile este corelată cu
creşterea unor markeri ai sindromului inflamator cronic cardiometabolic (acid uric
fibrinogen) ilustracircnd importanta receptorilor icircn reglarea status-ului inflamator cronic din
sindromul metabolic
21 Utilizarea metodei flowcitometrice pentru studiul expresiei relative a receptorilor PPARα
icircn leucocite a adus informaţii importante cu privire la mecanismele moleculare de control
implicate icircn patogenia bolilor cardiometabolice icircn concordanţă cu cercetările care descriu
expresia PPAR icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale bronşice
keratinocite)
BIBLIOGRAFIE SELECTIVA
1 Kahn R Metabolic syndrome- what is the clinical usefulness Lancet 2008371(9628)1892-3
2 Reaven GM The metabolic syndrome is this diagnosis necessary Am J Clin Nutr 2006 83(6)1237-7
3 Grundy SM Pre-Diabetes Metabolic Syndrome and Cardiovascular Risk J Am Coll Cardiol 201259(7)
635-43
4 International Diabetes Federation IDF Diabetes Atlas 6th edn International Diabetes Federation Belgium
Brussels 20131-155
5 World Health Organization Global Status Report on Noncommunicable Diseases 2010 World Health
Organization Geneva Switzerland 20111-176
6 Coman AE Petrovanu R Sindromul metabolic in practica de ambulator Editura Pim Iaşi 2009 1-103
7 Grundy SM Becker D Clark LT et alThird Report of the National Cholesterol Education Program (NCEP)
Expert Panel on Detection Evaluation and Treatment of High Blood Cholesterol in Adults (Adult
Treatment Panel III) Final Report Circulation 2002106(25)3143-90
8 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J Metabolic syndrome- a new worldwide definition A Consensus Statement
from the International Diabetes Federation Diabet Med 2006 23(5)469-80
9 KG Alberti KG Eckel RH Grundy SM etal International Diabetes Federation task force on epidemiology
and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart Association World Heart
Federation International Atherosclerosis Society International Association for the study of obesity
Harmonizing the metabolic syndrome a joint interim statement of the International Diabetes Federation task
force on epidemiology and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart
Association World Heart Federation International Atherosclerosis society and International Association
for the study of obesity Circulation 2009120(16)1640-5
10 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J IDF Epidemiology Task Force The metabolic syndrome new
worldwide definition Lancet 2005 366 1059 - 62
11 Oleszczyk M Svab I Seifert B et al Primary healthcare in the developing part of Europe changes and
development in the former Eastern Bloc countries that joined the European Union following 2004 Med Sci
Monit 2009(15)78ndash84
12 Jung U J Choi M S Obesity and Its Metabolic Complications The Role of Adipokines and the
Relationship between Obesity Inflammation Insulin Resistance Dyslipidemia and Nonalcoholic Fatty
Liver Disease Int J Mol Sci 2014rsquo15(4) 6184-223
13 Vanden Heuvel JP Peters JM Peroxisome Proliferators In Ramos K (ed) Cellular and Molecular
Toxicology (Second Edition) Volume 2 New York Elsevier Science Inc 2010 145 - 67
14 Yessoufou A Wahli W Multifaceted roles of peroxisome proliferator-activated receptors (PPARs) at the
cellular and whole organism levels Swiss Med Wkl 2010140w13071 doi104414smw201013071
15 Azhar S Peroxisome proliferator-activated receptors metabolic syndrome and cardiovascular disease
Future Cardiology 20106(5)657-91
16 Andries G Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity
Diabetes and Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(Suppl)24-32
17 Zandbergen F Plutzky J PPARalpha in atherosclerosis and inflammation Biochim Biophys Acta
20071771(8)972-82
18 Straus DS Glass CK Anti-inflammatory actions of PPAR ligands new insights on cellular and molecular
mechanisms Trends Immunol 200728(12)551-8
19 Zlei M Zugun- Eloae F Carasevici E Citometrie icircn flux - Bază şi clinică Icircn Hinescu ME (ed) Citometrie icircn
flux - principii şi aplicaţii clinice Bucureşti Editura Viaţa Medicală Romacircnească 20111-128
20 Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity Diabetes and
Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(9)24-32
21 Woerly G Honda K Loyens M et al Peroxisome proliferator-activated receptors alpha and gamma down-
regulate allergic inflammation and eosinophil activation J Exp Med 2003198(3)411-21
22 Salle-Saumont D Brenuchon C Kanda A et al Peroxisome proliferator-activated receptor alpha regulates
skin inflammation and humoral response in atopic dermatitis J Clin Allergy Immunology 2008 21(4)962-8
23 Schote A Turner J Schiltz J et al Nuclear receptors in human immune cells expression and correlations
Mol Immunolog 200744(6)1436-45
24 DAmore S Vacca M Graziano G et al Nuclear receptors expression chart icircn peripheral blood
mononuclear cells identifies patients with Metabolic Syndrome Biochim Biophys Acta
20131832(12)2289-301
25 Uthurralt J Gordish-Dressman H Bradbury M T et al PPARalpha L162V underlies variation in serum
triglycerides and subcutaneous fat volume in young males BMC Med Genet 2007855
26 Hiukka A Leinonen ES Jauhiainen M et al Long-term effects of fenofibrate on VLDL and HDL
subspecies icircn participants with type 2 diabetes mellitus Diabetologia 2007 50(10)2067-75
27 Robins SJ Rubins HB Faas FH et alInsulin resistance and cardiovascular events with low HDL
cholesterol The Veterans Affairs HDL Intervention Trial (VA-HIT) Diabetes Care 2003 26(5)1513-7
28 Devaraj S Siegel D Jialal I Statin Therapy in Metabolic Syndrome and Hypertension Post-JUPITER
What is the Value of CRP Curr Atheroscler Rep 2011 13(1) 31ndash42
29 Imperatore G Riccardi G Iovino C et al Plasma Fibrinogen A New Factor of the Metabolic Syndrome A
population-based study Diabetes Care 19982 1(4)649-54
30 Krysiak R Gdula-Dymek A Bachowski R Okopien B Pleiotropic effects of atorvastatin and fenofibrate
in metabolic syndrome and different types of pre-diabete Diabetes Care 201033(10)2266-70
31 Hermans MP Impact of Fenofibrate on Type 2 Diabetes Patients with Features of the Metabolic Syndrome
Subgroup Analysis From FIELD Curr Cardiol Rev 20106(2)112-8
32 Silverstein R Inflammation atherosclerosis and arterial thrombosis Role of the scavenger receptor CD36
Cleveland Clinic Journal of Medicine 200976(Suppl 2)S27-S30
33 Hăncu N Obezitatea In Vereşiu IA (ed) Diabetul zaharat nutritia si bolile metabolice Volume 2 Editura
Echinox Cluj- Napoca 2010 1-15
Lista lucrări publicate
1 Elena Popa Maria Maidaniuc Agnes Bacusca Alamir Diaa Rodica Petrovanu Adorata Elena
Coman Disfuncţia endotelială ndash de la mecanisme moleculare la cuantifi care şi tratament icircn practica
medicală Practica Medicală 20149(3) 109-14
2 Elena Popa Agnes Bacusca Alamir Diaa Maria Maidaniuc Rodica Petrovanu Adorata Elena Coman
The function of insulin receptor (IRF) in evolution of obesity correlation with adipocytes diameters
Archives of the Balkan Medical Union 201449(3) 275-9
3 Elena Popa Florin Zugun-Eloae Mihaela Zlei Daniela Jitaru Oana Maria Pintilie Adorata Elena
Coman Maria Traian Didona Anca Ungureanu Eugen Carasevici - acceptata pentru numarul 42014
Flow cytometry analysis of PPAR-alpha receptors in metabolic syndrome) Revista Romană de
Medicină de Laborator(RRLM-D-14-00034R1- adeverinţa ataşată
Figura 547 Studiul relatiilor dintre
receptorii PPARα icircn SM A Mo vs PMN B Mo vs Ly
C PMN vs Ly Graficul ilustrează coeficienţii r P dreapta de
regresie (linia centrala) intervalul de icircncredere
95 şi intervalul de predicţie 95
Figura 548 Corelaţii icircntre receptorii PPARα icircn lotul
martor
A Mo vs PMN
B Mo vs Ly
C PMN vs Ly
Tot pentru lotul SM cacircnd am evaluat relaţia dintre nivelul de expresie relativă a
receptorilor PPARα icircn Eo şi nivelul de expresie relativa a receptorilor CD 36 am obţinut o
corelaţie negativă (r = - 05 P = 001) (fig 549 A)
50 100 150 200 250 300 350 50
100
150
200
250
300
350
400
450
500
PPARα Ly
PPARα PMN
y = 56641 + 1159 x r = 086 P lt 0001
C
50 100 150 200 250 300 350 400 0
50
100
150
200
250
300
350
PPARα Mo
PPARα Ly
y = 36665 + 0607 x r = 090 P lt 0001
B
150 200 250 300 350 400 450 0
50 100 150 200 250 300 350 400 450 500
PPARα PMN
PPARα Mo
y = 2505 + 0879 x r = 081 P lt 0001
A
50 100 150 200 250 300 350
50 100 150 200 250 300 350 400 450 500
PPARα Ly
PPARα PMN
y = 95668 + 0919 x r = 081 P lt 0001
C
100 150 200 250 300 350 400
0
50
100
150
200
250
300
350
400
PPARα Mo
PPARα Ly
y = -7503 + 0829 x r = 079 P lt 0001
B
100 150 200 250 300 350 400
50
100
150
200
250
300
350
400
450
500
PPARα Mo
PPARα PMN
y = 61384 + 0882 r = 074 P lt 0001
A
Figura 549 Corelaţii icircntre expresia PPARα icircn Eo şi alte tipuri de receptori investigaţi A PPARα Eo şi CD 36 (Lot SM) B PPARα Eo şi PPARα Mo( Lot Non-SM)
Icircn lotul martor am identificat o asociere moderată pozitivă (r = 038 P = 0033) icircntre
nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Eo şi Mo (figura 549B) corelaţie absentă icircn
lotul pacienţilor cu SM
Corelaţii dintre receptorii studiaţi şi componentele sindromului metabolic
Icircn lotul de control analiza statistică a relevat faptul că icircntre circumferinţa
abdominală (CA ) şi nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Mo Ly şi PMN există o
corelaţie inversă adică scăderea expresiei PPARα la nivelul acestor populatii celulare ar fi
icircnsoţită de creşterea CA (figura 550
Figura 550Corelaţii dintre receptorii
PPARα si CA A Mo B Ly C PMN
La pacienţii cu SM am notat o corelatie moderată negativă statistic semnificativă
icircntre TG şi valorile MFI a Ac anti- PPARα icircn Mo şi Ly( fig 551)
150 200 250 300 350 400 450 50
60
70
80
90
100
110
PPARα PMN
CA r = - 040 P = 0024
C
50 100 150 200 250 300 350 50
60
70
80
90
100
110
PPARα Ly
CA r = - 046 P = 0009
B
50 100 150 200 250 300 350 400 50
60
70
80
90
100
110
PPARα Mo
CA r = - 042 P = 0017
A
50 100 150 200 250 300 350 400 500
1000
1500
2000
2500
3000
PPARα Mo
PPARα Eo
r = 038 P = 0033
B
0 500 1000 1500 2000 2500 1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
PPARα Eo
CD36
r = 050 P = 0010
A
Figura 551 Lot SM Corelaţie icircntre expresia PPARα şi TG (A Mo B Ly)
Analizand corelatia dintre receptorii CD36 si valorile TA la pacientii cu SM am observat
o asociere pozitivă asteptată intre TAD si nivelul de expresie al receptorilor CD36 (fig 552)
Figura 552 Lot SM Corelaţii icircntre expresia
receptorilor CD36 şi valorile tensiunii arteriale
diastolice
Studiind corelaţiile dintre receptorii PPARα şi HDL-col la subiecţii din lotul martor am
notat o asociere pozitivă icircntre expresia PPARα icircn Mo şi Ly cu HDL-col (fig 553)
Figura 553 Lot martor Corelaţii icircntre HDL-col şi expresia PPARα icircn Mo(A) Ly(B)
Icircn lotul normal am evidenţiat corelaţii pozitive moderate dar semnificative statistic icircntre
CA şi valorile TAS (r = 062 P lt 0001) respectiv TAD (r = 050 P=0004) precum şi icircntre
CA şi glicemia subiecţilor normali (r = 052 P = 0003) Aceste date icircmpreună cu relaţia
invers proporţională identificată icircntre HDL-col şi CA (r = 050 P = 001) susţin validitatea
acestui studiu Icircn lotul subiecţilor cu SM am observat o corelaţie moderat pozitivă icircntre
expresia PPARα icircn populaţiiile de Mo şi Eo şi concentraţia a HDL-col (fig 554)
B
100 150 200 250 300 350 20
30
40
50
60
70
80
90
100
PPARα Ly
HDL-col-(mgdl)
r = 036 P = 0046
A
150 200 250 300 350 400 20
30
40
50
60
70
80
90
100
PPARα Mo
HDL-col-(mgd)l
r = 035 P = 005
70 75 80 85 90 95 100 1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
TAD (mmHg)
CD36
r = 048 P = 0013
B
50 100 150 200 250 300 350 -100
0
100
200
300
400
500
PPARα Ly
TG(mgdl)
r = - 042 P = 003
A
50 100 150 200 250 300 350 400 -100
0
100
200
300
400
500
PPARα Mo
TG ( mgdl) r =- 0 43 P = 0027
Figura 554 Corelaţii icircn SM icircntre HDL-col şi expresia PPARα icircn Mo (A) şi Eo(B)
Corelaţii icircntre nivelul de expresie relativă a PPARα şi markeri ai disfuncţiei
endoteliale şi inflamaţiei cronice
Deşi nu a icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică am reţinut corelaţia invers
proporţională (r = - 0331 P = 006) dintre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα
icircn PMN şi concentraţia serică a Non-HDL-colesterolului
Studiind relaţiile dintre parametri icircn lotul de pacienţi cu SM am observat o corelaţie
moderată invers proporţională icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Eo şi
acidul uric seric (figura 555 A) corelaţie absentă la subiecţii fără SM
Figura 555 Lot SM corelaţia dintre expresia PPARα icircn Eo şi acidul uric (A) respectiv
PPARα şi fibrinogen (B)
Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P=008) am notat pentru
pacienţii cu SM corelaţia invers proporţională dintre expresia PPARα icircn Eo şi concentraţia
serică a fibrinogenului ( figura 555B)
V5 Discuţii
Icircn cadrul lucrării de doctorat am studiat nivelul de expresie relativă a PPARα icircn
leucocitele pacienţilor cu SM comparativ cu cea a subiecţilor normali Expresia PPARα a fost
studiată icircn paralel cu cea a CD36 glicoproteină exprimată pe suprafaţa a numeroase celule
din organismul uman inclusiv pe cea a Mo şi macrofagelor Prin funcţia sa de receptor pentru
particulele oxidate de LDL CD36 cunoscut ca bdquoscavenger receptorrdquo de clasa B sau
bdquotrombospodin receptorrdquo contribuie la dezvoltarea inflamaţiei de la nivel endotelial şi
formarea plăcii de ateroscleroză Referitor la studiul PPARα icircn Eo icircn sindromul metabolic
menţionăm că studiul nostru este primul care arată că nivelul de expresie a proteinei PPARα
icircn Eo măsurat prin citometrie icircn flux este semnificativ mai redus la pacienţii care sunt
diagnosticaţi cu acest sindrom De asemenea icircn lotul cu SM cercetat icircn cadrul studiului
receptorilor PPARα numărul Eo circulante a fost semnificativ mai crescut la pacienţii cu SM
B
0 500 1000 1500 2000 2500 200
250
300
350
400
450
PPARα Eo o
Fibrinogen mgdl
r =- 036 P = 008
0 500 1000 1500 2000 2500 1 2 3 4 5 6 7 8 9
10 11
PPARα Eo_
Acid uric(mgdl) r = 048 P = 0014 A
0 500 1000 1500 2000 2500 10
20
30
40
50
60
70
80
PPARα Eo
HDL(mgdl)
r = 044 P = 0024
B
100 150 200 250 300 350 400 10
20
30
40
50
60
70
80
PPARα Mo
HDL( mgdl)
r = 046 P = 0019
A
(P = 003) Aceste constatări conduc la ipoteza că Eo joacă un rol special icircn mecanismele
patogenice declanşate icircn sindromul metabolic şi că receptorii PPARα sunt importanţi icircn
implicarea Eo icircn obezitate şi insulinorezistenţă Creşterea numărului de Eo circulante este
urmată de eliberarea mediatorilor proinflamatori iar reducerea expresiei PPARα icircn Eo
determină perturbarea mecanismelor de control al inflamaţiei cu exacerbarea cascadei
proinflamatorii Consecutiv se agravează disfuncţia endotelială şi se accelerează progresia
leziunilor de ateroscleroză Extrapolacircnd aceste ipoteze putem spune că asocierea raportată
dintre boala ischemică coronariană şi Eo poate fi şi consecinţa exacerbării cascadei
proinflamatorii de la nivel vascular produsă datorită scăderii expresiei PPARα icircn Eo iar
creşterea numărului de Eo circulante poate reprezenta o adaptare a organismului uman care
icircncearcă să suplinească deficitul de receptori PPARα Analizacircnd curba ROC pentru
intensităţile medii de fluorescenţă determinate pentru anticorpii anti- PPARα icircn Eo am
obţinut pentru acest biomarker o sensibilitate a testului de 565 şi o specificitate de 778
pentru un punct de cut-off de 1533 ( figura 536 ) Deşi aria AUC (Aria under the curve) egală
cu 0663 icircncadrează acest test ca avacircnd o acurateţe redusă observăm că că această valoare
este apropiată de determinările AUC pentru alţi factori (fibrinogen raport de aterogenitate
acid uric non- HDL-colesterol) cunoscuţi ca fiind implicaţi icircn aterogeneză şi inflamaţia
cronică (figura 431) Aceste remarci alături de faptul că icircn studiul receptorilor PPARα icircn
leucocite am inclus subiecţi la primul diagnostic de SM creează premisa integrării
determinării expresiei relative a receptorilor PPARα icircn diagnosticul complex al sindromului
metabolic Putem spune că icircn final studiul expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofilele
circulante se dovedește a fi util icircn diagnosticul precoce la nivel molecular al SM permiţacircnd
identificarea timpurie a unor indivizi cu risc cardiometabolic crescut Astfel intervenţia
precoce asupra subiecţilor cu deficit de PPARα icircn Eo contribuie la managementul eficient al
afecţiunilor degenerative icircn care inflamaţia cronică icircndeplineşte un rol primordial Referitor
la populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările efectuate prin citometrie de flux nu au
arătat existenţa unor diferenţe statistice icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα
la subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali Rezultatele noastre pot fi
consecinţa caracteristicilor loturilor studiate (icircn studiul nostru au fost incluşi subiecţi recrutaţi
la primul diagnostic de SM şi icircn absenţa stimulării receptorilor PPARα cu droguri agoniste
PPARα) dar icircn acelaşi timp pot apare diferenţe datorită metodei utilizate (231 232 233)
Făcacircnd o paralelă cu un studiu publicat icircn 2013 icircn Europa (231) care a arătat creşterea
nivelului de expresie al PPARα icircn Ly şi Mo observăm că deşi numărul de subiecţi a fost
aproximativ egal (57 participanţi icircn studiul nostru 60 icircn studiul DAmore) subiecţii icircn studiul
amintit au fost recrutaţi dintr-o clinică cu profil medical la primul diagnostic de SM icircn timp
ce metoda utilizată a fost PCR (Polymerase Chain Reaction) mult mai fidelă decacirct citometria
icircn flux icircn studiul receptorilor nucleari De asemenea DAmore nu investighează expresia
PPARα icircn Eo şi PMN icircn cercetare fiind incluse doar celulele CD14+ (predominant Mo) şi
CD14- (predominant Ly) Deşi nu am obţinut diferenţe statistic semnificative icircntre cele două
loturi referitoare la nivelul de expresie relativă a PPARα icircn Mo Ly şi PMN am observat
corelaţii puternice semnificative statistic icircntre expresia receptorilor PPARα icircn aceste tipuri
celulare Rezultatele obţinute sugerează existenţa unui mecanism diferit molecular de control
icircn eozinofile care reglează cantitatea de proteină PPARα icircn eozinofile versus alte tipuri de
leucocite (la pacienţii cu SM) şi acest lucru este icircn concordanţă cu cercetările care descriu
expresia PPARα mRNA icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale
bronşice keratinocite) Studiind prin citometrie de flux nivelul de expresie relativă a
receptorului CD36 la nivelul Mo am arătat prezenţa acestuia icircn Mo tuturor subiecţilor
investigaţi Analizacircnd valorile intensităţii medii de fluorescenţă a CD36 icircn loturile studiate
am observat o tendinţă de creştere la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali
confirmacircnd implicarea receptorului CD36 icircn patogeneza acestuia Referitor la expresia
receptorului CD36 rezultatele obţinute sunt icircn consens cu studii anterioare care au arătat
creşterea expresiei CD36 la pacienţii cu SM şi diabet zaharat Astfel pe lacircngă diferenţa icircn
expresia CD36 s-au raportat şi corelaţii inverse icircntre expresia proteinei CD36 şi nivelul
adiponectinei Acelaşi studiu a evidenţiat o corelaţie pozitivă intre expresia CD36 cu expresia
receptorilor PPAR gamma relaţia cu PPARα nefiind investigată
Analiza de subgrup a relaţiilor dintre componentele SM și elementele moleculare
proinflamatorii studiate a relevat prezenţa unor asocieri semnificativ statistice icircntre acestea
Se argumentează astfel că veridicitatea studiului este susţinută de interdependenţele statistice
ale componentelor SM Determinarea coeficientului de corelaţie Icircn studiul nostru nivelul de
expresie relativă a PPARα s-a corelat moderat negativ (figura 550) cu CA a subiecţilor din
lotul normal pentru populaţiile celulare de Mo (r = - 0420 P = 001) Ly (r = - 046 P =
0009) şi PMN (r = - 040 P = 0024) date care sunt icircn concordanţă cu studiile care arată
rolul PPARα icircn furnizarea energiei prin beta-oxidarea acizilor graşi Icircn acelaşi timp icircn lotul
pacienţilor cu SM nu am identificat prezenţa unei asocieri icircntre nivelul de expresie relativă a
PPARα şi valoarea măsurată a CA Asocierea dintre expresia relativă a PPARα cu obezitatea
de tip central completează datele existente referitoare la reglarea homeostaziei energetice
conturacircnd un mecanism de control deficitar al aportului caloric al SM Icircn condiţiile icircn care
rezultatele obţinute prin metoda citometriei icircn flux nu au arătat existenţa unei corelaţii intre
expresia PPARα şi CA la pacienţii cu SM considerăm că ar fi necesar studiul
polimorfismului genei PPARA care ar putea aduce informaţii importante cu privire la
implicarea acestor receptori icircn apariţia obezităţii de tip central Subliniem acest lucru deoarece
obezitatea este o boală plurifactorială icircn care pe lacircngă factorii ereditari sunt implicaţi factori
de mediu psihologici şi sociali (245) Existenţa unei componente genetice a aterosclerozei
este legată şi de prezenţa unor variante ale genei PPARA asociate cu creşterea incidenţei bolii
cardiovasculare (82) şi a SM (249) Icircn studiul nostru am constatat o scădere statistic
semnificativă a nivelului expresiei relative a receptorilor PPARα icircn Eo la subiecţii cu
antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială comparativ cu subiecţii fără istoric
familial de hipertensiune (figura 537) Deşi diferenţele calculate icircntre loturile studiate nu au
icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică la subiecţii care au declarat prezenţa
antecedentelor familiale de hipertensiune arterială remarcăm o tendinţă de scădere a
intensităţii medii de fluorescenţă pentru Ac anti-PPARα la nivelul Mo (figura 515 P = 006
) icircn timp ce expresia relativă a CD36 icircnregistrează o creştere la acesti subiecţi (figura 545 P
= 008) Icircn contextul riscului cardiovascular foarte icircnalt al pacienţilor cu SM amintim şi
existenţa corelaţiei pozitive dintre valorile tensiunii arteriale diastolice şi expresia relativă a
receptorului CD36 (r = 0483 P = 0013) Această constatare este icircn consens cu studiile care
au arătat că forma solubilă circulantă a CD36 este asociată cu factorii de risc cardiovasculari
fiind propusă ca un marker precoce al aterosclerozei Activarea PPARα este asociată cu
modularea metabolismului lipidic iar agoniştii PPARα sunt utilizaţi icircn mod curent pentru
tratamentul dislipidemiei Sub acţiunea agoniştilor PPARα se obţine o icircmbunătăţire a funcţiei
endoteliale şi a parametrilor reologici funcţiile pleiotropice ale agoniştilor PPARα fiind
dovedite icircn trialuri clinice controlate Icircn populaţiile de Mo şi Ly la pacienţii cu SM
cercetarea noastră a evidenţiat o asociere negativă icircntre nivelul de expresie relativă a
receptorilor PPARα şi concentraţia TG serice (figura 551) Astfel scăderea expresiei
receptorilor PPARα este asociată cu creşterea nivelului TG serice contribuind la profilul
lipidic aterogen din SM Icircn conformitate cu literatura de specialitate icircn studiul efectuat prin
metoda citometriei icircn flux am găsit prezenţa asocierii icircntre nivelul de expresie al PPARα şi
HDL-colesterol Corelaţia pozitivă dintre nivelul de expresie relativă PPARα şi concentraţia
HDL-colesterolului a fost observată icircn lotul martor icircn populaţiile de Mo (r = 035 P = 005)
şi Ly ( r = 036 P = 004) (figura 553) susţinacircnd faptul că stimularea receptorilor PPARα
este legată de creşterea nivelului seric al lipoproteinelor cu densitate crescută La pacienţii cu
SM corelaţia dintre expresia PPARα şi HDL-colesterol a fost evidenţiată icircn populaţiile de Mo
(r = 046 P = 0019) şi eozinofile (r = 044 P = 0024) Se desprinde concluzia că icircn
sindromul metabolic scăderea concentraţiei HDL-colesterol este legată de diminuarea
nivelului de expresie relativă a receptorilor nucleari PPARα icircntărind afirmaţiile legate de
rolul acestor receptori icircn progresia bolilor cardiovasculare Studiind reactanţii de fază acută
analiza statistică a relevat o diferenţă semnificativă din punct de vedere statistic icircntre valorile
fibrinogenului la pacienţii cu SM atunci cacircnd au fost comparaţi cu subiecţii fără SM
(Capitolul IV4 P lt0 001 figura 427A) De asemenea icircn Capitolul V dedicat studiul
expresiei relative a receptorilor PPARα studiul valorilor fibrinogenului a arătat creşterea
acestui reactant de faza acută icircn lotul cu SM comparativ cu lotul martor (P lt0 0001) Icircn
studiul nostru am calculat o corelaţie invers proporţionala (r = - -036 fig 555B) icircntre
nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile şi concentraţia serică a
fibrinogenului Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P = 008) am reţinut
această asociere deoarece am demonstrat că nivelul de expresie relativă al receptorilor
PPARα icircn eozinofile este mai scăzut icircn sindromul metabolic iar sindromul metabolic este
caracterizat printr-un status inflamator cronic status caracterizat şi de creşterea concentraţiei
serice a fibrinogenului De asemenea notam ca această corelaţie negativă se află icircn
concordanţă cu studiile care arata că tratamentul cu agonişti PPARα (fibraţi) determina
scăderea nivelului seric al fibrinogenului contribuind la diminuarea inflamaţiei cronice din
sindromul metabolic şi icircn consecinţă amelioracircnd insulinorezistenţa
LIMITE ȘI DIFICULTĂȚI IcircN CERCETARE
Icircn cadrul Tezei de Doctorat am desfăşurat o cercetare care şi-a propus studierea
expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Recrutarea anamneza şi examinarea
clinică a subiecţilor au fost realizate icircn cadrul Cabinetului de Medicină de Familie CMI Popa
Elena din Iaşi iar determinările hematologice şi biochimice s-au efectuat icircn cadrul
Laboratorului Ambulatorului de Specialitate al Spitalului Universitar ldquoSfacircntul Spiridon din
Iaşi Icircn studiul epidemiologic şi al markerilor inflamatori al sindromului metabolic desfăşurat
au fost incluşi un număr de 1530 de participanţi pe baza liberului consimţămacircnt examinaţi icircn
perioada 01012013 - 31122013 Icircn continuare icircn perioada 1012014 - 28022014 pe baza
criteriilor de includere şi excludere icircn cele două loturi de studiu am investigat un număr de 57
de subiecţi prezentaţi la consultaţie icircn această perioadă şi care au icircndeplinit criteriile de
includere icircn cele două loturi (Lot SM şi Lot Control) constituite pentru evaluarea nivelului de
expresie a receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Explorarea nivelului de expresie
relativă a receptorilor PPARα s-a desfăşurat icircn cadrul Laboratorului de Biologie Moleculară
de pe platforma Institutului Regional de Oncologie Datorită resurselor proprii financiare
limitate trebuie să subliniez că aceasta cercetare nu ar fi fost posibilă fără contribuţia unor
cercetători din domeniul medical care m-au sprijinit necondiţionat atacirct icircn elaborarea
protocolului de lucru cacirct şi icircn efectuarea propriu-zisă a studiului Icircn acest sens menţionăm şi
faptul că pentru studiul receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic am utilizat aparatura
Laboratorului de Biologie Moleculară (care deserveşte icircntreaga Regiune a Moldovei) Pe
această cale mulţumesc personalului Laboratorului de Biologie Moleculară pentru ajutorul
acordat icircn desfăşurarea cercetării doctorale icircn condiţiile icircn care se observa creşterea
numărului de pacienţi care se adresează acestei platforme de cercetare Mulţumesc de
asemenea şi Doamnei Doctor Elena Butoi din cadrul Institutului de Biologie şi Patologie
Moleculară ldquoNicolae Simionescurdquo Bucureşti) pentru donaţia anticorpului secundar anti-
FITC Icircn consecinţă pentru recrutarea unui număr mai mare de participanţi ar fi fost necesară
icircn primul racircnd obţinerea unor resurse financiare suplimentare pentru achiziţia de aparatură şi
reactivi Totuşi numărul subiecţilor recrutaţi este apropiat de numărul subiecţilor raportaţi icircn
cadrul unor granturi de cercetare care aveau ca ţinta studiul expresiei receptorilor PPARα
(212 227 228 231) Rezultatele obţinute continua seria lucrărilor care arata importanta
studiului mecanismelor etiopatogenice ale sindromului metabolic patologie care se afla icircntr-o
continuă creştere La pacienţii cu SM pe lacircngă diminuarea nivelului de expresie a receptorilor
PPARα icircn eozinofile ne aşteptam şi la evidenţierea unor modificări icircn expresia PPARα şi icircn
populaţiile de Ly Mo şi PMN Acest fapt poate fi explicat de utilizarea unor celule provenite
de la pacienţi fără afectare cardiovasculară fără diabet zaharat şi necesită continuarea
studiului pe culturi celulare icircn condiţii de stimulare cu agonişti PPARα deziderat care
impune continuarea investigării expresiei PPARα printr-un grant de cercetare
ORIGINALITATEA ȘI CONTRIBUȚIILE INOVATIVE ALE TEZEI DE
DOCTORAT PERSPECTIVE DE CERCETARE
Evaluarea nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn leucocitele circulante
aduce noi perspective icircn studiul obezităţii şi sindromului metabolic Importanta studiului
expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic derivă din prevalenta crescută a
sindromului metabolic icircn populaţia cercetată la care se adaugă riscul cardiovascular foarte
icircnalt al acestor pacienţi cu implicaţii majore icircn sănătatea publică Rolul receptorilor PPARα
icircn inflamaţie şi aterogeneza este binecunoscut dar studiul nostru este primul care a arătat că
nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα este semnificativ mai scăzut in populatiile
de eozinofile la pacienţii cu SM Această concluzie coroborata cu existenţa unei stracircnse
asocieri intre expresia receptorilor PPARα la nivelul Mo limfocitelor şi PMNlor creeaza
ipoteza existenţei unui mecanism de control diferit al expresiei PPARα la nivelul
eozinofilelor Această cercetare aduce informaţii importante referitoare la mecanismele
proinflamatorii care stau la baza insulinorezistenţei şi riscului cardiometabolic şi impune
continuarea studiului acestor receptori nucleari prin citometrie icircn flux metodă care poate fi
aplicată şi la scara mai largă dacă sunt asigurate resursele materiale necesare cercetării
Cercetarea prin citometrie icircn flux poate fi completată de studiul polimorfismului genei
PPARA şi astfel se pot identifica timpuriu indivizii cu potenţial risc cardiometabolic crescut
Studiul receptorilor PPARα a stabilit conexiuni cu factori proinflamatori şi aterogenetici iar
continuarea cercetării poate aduce şi elemente noi de diagnostic precoce icircn sindromul
metabolic contribuind la icircmbunătăţirea prognosticului acestor pacienţi
CONCLUZII FINALE
1 Aplicarea scorului de SM alături de implementarea algoritmului electronic de diagnostic
contribuie la o prelucrare rapidă eficientă și standardizată a informaţiilor la nivelul
medicinei primare
2 Prevalenţa SM calculată astfel icircn cadrul studiului este crescută (2732) icircn concordanţă
cu datele raportate
3 Controlul factorilor de risc cardiometabolici incluşi icircn SM se poate realiza prin
managementul stilului de viaţă (scăderea greutăţii corporale prin combaterea
sedentarismului şi adoptarea unei diete antiaterogene şi hipocalorice) şi administrarea
terapiei medicamentoase
4 Este necesară adoptarea unei politici de sănătate publică pentru prevenirea creşterii icircn
populaţie a prevalenţei obezităţii şi a diabetului zaharat
5 Noi metode de cercetare icircn domeniul SM axate pe diagnosticarea precoce şi cuantificarea
eficientă a acestuia duce la diminuarea incidenței evenimentelor cardiovasculare majore
6 Sindromul metabolic se caracterizează printr-un status inflamator cronic
7 Valorile Non-HDL-colesterolului şi a raportului de aterogenitate sunt semnificativ mai
mari la pacienţii cu SM
8 Dintre reactanţii de faza acută am observat că valoarea medie a fibrinogenului este mai
crescută icircn lotul cu SM
9 Valorile eozinofilelor sunt crescute icircn sindromul metabolic iar explorarea relaţiei dintre
eozinofile şi obezitate constituie una din direcţiile de studiu actuale ale sindromului
metabolic
10 Evaluarea markerilor inflamatori icircn contextul sindromului metabolic este utilă icircn
evaluarea complexă a a factorilor de risc cardiometabolici
11 Prin metoda citometriei icircn flux am demonstrat prezenta Receptorilor Activaţi de
Inductorii Proliferării Peroxizomilor ndash Alpha (PPARα) icircn toate populaţiile de leucocite
studiate (Mo limfocite PMN eozinofile) atacirct icircn lotul pacienţilor cu SM cacirct şi icircn lotul
martor
12 Utilizacircnd intensitatea medie de fluorescenţă a anticorpilor anti- PPARα am arătat că
nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile este semnificativ mai redus
la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali
13 Acest studiu este primul care a demonstrat existenţa unei scăderi statistic semnificative a
nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofilele pacienţilor cu SM
confirmacircnd cercetările recente care au evidenţiat rolul eozinofilelor şi al receptorilor
PPARα icircn obezitate reglarea inflamaţiei cronice şi aterogeneza
14 Contrar aşteptărilor noastre icircn populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările
efectuate icircn cele două loturi de studiu (cu şi fără sindom metabolic) nu am evidenţiat
diferenţe statistic seminificative icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα la
subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali
15 Icircn populaţiile de Mo limfocite şi polimorfonucleare am observat corelaţii puternice
semnificativ statistic icircntre expresia PPARα icircn aceste tipuri celulare sugeracircnd existenţa
unui mecanism unic de control al inflamaţiei cronice la nivelul acestor celule probabil
diferit de cel din eozinofile
16 La subiecţii cu SM expresia relativă a PPARα icircn Eo este invers asociată cu expresia
receptorului CD36 (receptor al particulelor de ox - LDL şi propus ca un marker precoce al
aterosclerozei) dovedind rolul antiinflamator al receptorilor PPARα la nivel endotelial
17 La pacienţii cu antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială nivelul de
expresie al receptorilor PPARα icircn eozinofile şi Mo este diminuat comparativ cu subiecţii
fără antecedente familiale de hipertensiune arterială Putem spune că studiul efectuat de
noi aduce informaţii importante legate de geneză aterosclerozei şi hipertensiunii arteriale
18 Prin studiul asocierilor dintre receptorii PPARα şi componentele clinice ale sindromului
metabolic am arătat rolul acestor receptori icircn determinismul obezităţii de tip central
nivelul expresiei relative a receptorilor PPARα fiind invers proporţional cu circumferinţa
abdominală
19 Icircn acelaşi timp nivelul de expresie a PPARα icircn sindromul metabolic este asociat pozitiv
cu concentraţia serică a HDL-colesterolului şi invers asociat cu nivelul trigliceridelor
serice dovedind rolul acestor receptori icircn diminuarea procesului inflamator cronic de la
nivel vascular
20 La pacienţii cu SM scăderea expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofile este corelată cu
creşterea unor markeri ai sindromului inflamator cronic cardiometabolic (acid uric
fibrinogen) ilustracircnd importanta receptorilor icircn reglarea status-ului inflamator cronic din
sindromul metabolic
21 Utilizarea metodei flowcitometrice pentru studiul expresiei relative a receptorilor PPARα
icircn leucocite a adus informaţii importante cu privire la mecanismele moleculare de control
implicate icircn patogenia bolilor cardiometabolice icircn concordanţă cu cercetările care descriu
expresia PPAR icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale bronşice
keratinocite)
BIBLIOGRAFIE SELECTIVA
1 Kahn R Metabolic syndrome- what is the clinical usefulness Lancet 2008371(9628)1892-3
2 Reaven GM The metabolic syndrome is this diagnosis necessary Am J Clin Nutr 2006 83(6)1237-7
3 Grundy SM Pre-Diabetes Metabolic Syndrome and Cardiovascular Risk J Am Coll Cardiol 201259(7)
635-43
4 International Diabetes Federation IDF Diabetes Atlas 6th edn International Diabetes Federation Belgium
Brussels 20131-155
5 World Health Organization Global Status Report on Noncommunicable Diseases 2010 World Health
Organization Geneva Switzerland 20111-176
6 Coman AE Petrovanu R Sindromul metabolic in practica de ambulator Editura Pim Iaşi 2009 1-103
7 Grundy SM Becker D Clark LT et alThird Report of the National Cholesterol Education Program (NCEP)
Expert Panel on Detection Evaluation and Treatment of High Blood Cholesterol in Adults (Adult
Treatment Panel III) Final Report Circulation 2002106(25)3143-90
8 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J Metabolic syndrome- a new worldwide definition A Consensus Statement
from the International Diabetes Federation Diabet Med 2006 23(5)469-80
9 KG Alberti KG Eckel RH Grundy SM etal International Diabetes Federation task force on epidemiology
and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart Association World Heart
Federation International Atherosclerosis Society International Association for the study of obesity
Harmonizing the metabolic syndrome a joint interim statement of the International Diabetes Federation task
force on epidemiology and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart
Association World Heart Federation International Atherosclerosis society and International Association
for the study of obesity Circulation 2009120(16)1640-5
10 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J IDF Epidemiology Task Force The metabolic syndrome new
worldwide definition Lancet 2005 366 1059 - 62
11 Oleszczyk M Svab I Seifert B et al Primary healthcare in the developing part of Europe changes and
development in the former Eastern Bloc countries that joined the European Union following 2004 Med Sci
Monit 2009(15)78ndash84
12 Jung U J Choi M S Obesity and Its Metabolic Complications The Role of Adipokines and the
Relationship between Obesity Inflammation Insulin Resistance Dyslipidemia and Nonalcoholic Fatty
Liver Disease Int J Mol Sci 2014rsquo15(4) 6184-223
13 Vanden Heuvel JP Peters JM Peroxisome Proliferators In Ramos K (ed) Cellular and Molecular
Toxicology (Second Edition) Volume 2 New York Elsevier Science Inc 2010 145 - 67
14 Yessoufou A Wahli W Multifaceted roles of peroxisome proliferator-activated receptors (PPARs) at the
cellular and whole organism levels Swiss Med Wkl 2010140w13071 doi104414smw201013071
15 Azhar S Peroxisome proliferator-activated receptors metabolic syndrome and cardiovascular disease
Future Cardiology 20106(5)657-91
16 Andries G Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity
Diabetes and Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(Suppl)24-32
17 Zandbergen F Plutzky J PPARalpha in atherosclerosis and inflammation Biochim Biophys Acta
20071771(8)972-82
18 Straus DS Glass CK Anti-inflammatory actions of PPAR ligands new insights on cellular and molecular
mechanisms Trends Immunol 200728(12)551-8
19 Zlei M Zugun- Eloae F Carasevici E Citometrie icircn flux - Bază şi clinică Icircn Hinescu ME (ed) Citometrie icircn
flux - principii şi aplicaţii clinice Bucureşti Editura Viaţa Medicală Romacircnească 20111-128
20 Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity Diabetes and
Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(9)24-32
21 Woerly G Honda K Loyens M et al Peroxisome proliferator-activated receptors alpha and gamma down-
regulate allergic inflammation and eosinophil activation J Exp Med 2003198(3)411-21
22 Salle-Saumont D Brenuchon C Kanda A et al Peroxisome proliferator-activated receptor alpha regulates
skin inflammation and humoral response in atopic dermatitis J Clin Allergy Immunology 2008 21(4)962-8
23 Schote A Turner J Schiltz J et al Nuclear receptors in human immune cells expression and correlations
Mol Immunolog 200744(6)1436-45
24 DAmore S Vacca M Graziano G et al Nuclear receptors expression chart icircn peripheral blood
mononuclear cells identifies patients with Metabolic Syndrome Biochim Biophys Acta
20131832(12)2289-301
25 Uthurralt J Gordish-Dressman H Bradbury M T et al PPARalpha L162V underlies variation in serum
triglycerides and subcutaneous fat volume in young males BMC Med Genet 2007855
26 Hiukka A Leinonen ES Jauhiainen M et al Long-term effects of fenofibrate on VLDL and HDL
subspecies icircn participants with type 2 diabetes mellitus Diabetologia 2007 50(10)2067-75
27 Robins SJ Rubins HB Faas FH et alInsulin resistance and cardiovascular events with low HDL
cholesterol The Veterans Affairs HDL Intervention Trial (VA-HIT) Diabetes Care 2003 26(5)1513-7
28 Devaraj S Siegel D Jialal I Statin Therapy in Metabolic Syndrome and Hypertension Post-JUPITER
What is the Value of CRP Curr Atheroscler Rep 2011 13(1) 31ndash42
29 Imperatore G Riccardi G Iovino C et al Plasma Fibrinogen A New Factor of the Metabolic Syndrome A
population-based study Diabetes Care 19982 1(4)649-54
30 Krysiak R Gdula-Dymek A Bachowski R Okopien B Pleiotropic effects of atorvastatin and fenofibrate
in metabolic syndrome and different types of pre-diabete Diabetes Care 201033(10)2266-70
31 Hermans MP Impact of Fenofibrate on Type 2 Diabetes Patients with Features of the Metabolic Syndrome
Subgroup Analysis From FIELD Curr Cardiol Rev 20106(2)112-8
32 Silverstein R Inflammation atherosclerosis and arterial thrombosis Role of the scavenger receptor CD36
Cleveland Clinic Journal of Medicine 200976(Suppl 2)S27-S30
33 Hăncu N Obezitatea In Vereşiu IA (ed) Diabetul zaharat nutritia si bolile metabolice Volume 2 Editura
Echinox Cluj- Napoca 2010 1-15
Lista lucrări publicate
1 Elena Popa Maria Maidaniuc Agnes Bacusca Alamir Diaa Rodica Petrovanu Adorata Elena
Coman Disfuncţia endotelială ndash de la mecanisme moleculare la cuantifi care şi tratament icircn practica
medicală Practica Medicală 20149(3) 109-14
2 Elena Popa Agnes Bacusca Alamir Diaa Maria Maidaniuc Rodica Petrovanu Adorata Elena Coman
The function of insulin receptor (IRF) in evolution of obesity correlation with adipocytes diameters
Archives of the Balkan Medical Union 201449(3) 275-9
3 Elena Popa Florin Zugun-Eloae Mihaela Zlei Daniela Jitaru Oana Maria Pintilie Adorata Elena
Coman Maria Traian Didona Anca Ungureanu Eugen Carasevici - acceptata pentru numarul 42014
Flow cytometry analysis of PPAR-alpha receptors in metabolic syndrome) Revista Romană de
Medicină de Laborator(RRLM-D-14-00034R1- adeverinţa ataşată
Figura 549 Corelaţii icircntre expresia PPARα icircn Eo şi alte tipuri de receptori investigaţi A PPARα Eo şi CD 36 (Lot SM) B PPARα Eo şi PPARα Mo( Lot Non-SM)
Icircn lotul martor am identificat o asociere moderată pozitivă (r = 038 P = 0033) icircntre
nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Eo şi Mo (figura 549B) corelaţie absentă icircn
lotul pacienţilor cu SM
Corelaţii dintre receptorii studiaţi şi componentele sindromului metabolic
Icircn lotul de control analiza statistică a relevat faptul că icircntre circumferinţa
abdominală (CA ) şi nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Mo Ly şi PMN există o
corelaţie inversă adică scăderea expresiei PPARα la nivelul acestor populatii celulare ar fi
icircnsoţită de creşterea CA (figura 550
Figura 550Corelaţii dintre receptorii
PPARα si CA A Mo B Ly C PMN
La pacienţii cu SM am notat o corelatie moderată negativă statistic semnificativă
icircntre TG şi valorile MFI a Ac anti- PPARα icircn Mo şi Ly( fig 551)
150 200 250 300 350 400 450 50
60
70
80
90
100
110
PPARα PMN
CA r = - 040 P = 0024
C
50 100 150 200 250 300 350 50
60
70
80
90
100
110
PPARα Ly
CA r = - 046 P = 0009
B
50 100 150 200 250 300 350 400 50
60
70
80
90
100
110
PPARα Mo
CA r = - 042 P = 0017
A
50 100 150 200 250 300 350 400 500
1000
1500
2000
2500
3000
PPARα Mo
PPARα Eo
r = 038 P = 0033
B
0 500 1000 1500 2000 2500 1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
PPARα Eo
CD36
r = 050 P = 0010
A
Figura 551 Lot SM Corelaţie icircntre expresia PPARα şi TG (A Mo B Ly)
Analizand corelatia dintre receptorii CD36 si valorile TA la pacientii cu SM am observat
o asociere pozitivă asteptată intre TAD si nivelul de expresie al receptorilor CD36 (fig 552)
Figura 552 Lot SM Corelaţii icircntre expresia
receptorilor CD36 şi valorile tensiunii arteriale
diastolice
Studiind corelaţiile dintre receptorii PPARα şi HDL-col la subiecţii din lotul martor am
notat o asociere pozitivă icircntre expresia PPARα icircn Mo şi Ly cu HDL-col (fig 553)
Figura 553 Lot martor Corelaţii icircntre HDL-col şi expresia PPARα icircn Mo(A) Ly(B)
Icircn lotul normal am evidenţiat corelaţii pozitive moderate dar semnificative statistic icircntre
CA şi valorile TAS (r = 062 P lt 0001) respectiv TAD (r = 050 P=0004) precum şi icircntre
CA şi glicemia subiecţilor normali (r = 052 P = 0003) Aceste date icircmpreună cu relaţia
invers proporţională identificată icircntre HDL-col şi CA (r = 050 P = 001) susţin validitatea
acestui studiu Icircn lotul subiecţilor cu SM am observat o corelaţie moderat pozitivă icircntre
expresia PPARα icircn populaţiiile de Mo şi Eo şi concentraţia a HDL-col (fig 554)
B
100 150 200 250 300 350 20
30
40
50
60
70
80
90
100
PPARα Ly
HDL-col-(mgdl)
r = 036 P = 0046
A
150 200 250 300 350 400 20
30
40
50
60
70
80
90
100
PPARα Mo
HDL-col-(mgd)l
r = 035 P = 005
70 75 80 85 90 95 100 1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
TAD (mmHg)
CD36
r = 048 P = 0013
B
50 100 150 200 250 300 350 -100
0
100
200
300
400
500
PPARα Ly
TG(mgdl)
r = - 042 P = 003
A
50 100 150 200 250 300 350 400 -100
0
100
200
300
400
500
PPARα Mo
TG ( mgdl) r =- 0 43 P = 0027
Figura 554 Corelaţii icircn SM icircntre HDL-col şi expresia PPARα icircn Mo (A) şi Eo(B)
Corelaţii icircntre nivelul de expresie relativă a PPARα şi markeri ai disfuncţiei
endoteliale şi inflamaţiei cronice
Deşi nu a icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică am reţinut corelaţia invers
proporţională (r = - 0331 P = 006) dintre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα
icircn PMN şi concentraţia serică a Non-HDL-colesterolului
Studiind relaţiile dintre parametri icircn lotul de pacienţi cu SM am observat o corelaţie
moderată invers proporţională icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Eo şi
acidul uric seric (figura 555 A) corelaţie absentă la subiecţii fără SM
Figura 555 Lot SM corelaţia dintre expresia PPARα icircn Eo şi acidul uric (A) respectiv
PPARα şi fibrinogen (B)
Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P=008) am notat pentru
pacienţii cu SM corelaţia invers proporţională dintre expresia PPARα icircn Eo şi concentraţia
serică a fibrinogenului ( figura 555B)
V5 Discuţii
Icircn cadrul lucrării de doctorat am studiat nivelul de expresie relativă a PPARα icircn
leucocitele pacienţilor cu SM comparativ cu cea a subiecţilor normali Expresia PPARα a fost
studiată icircn paralel cu cea a CD36 glicoproteină exprimată pe suprafaţa a numeroase celule
din organismul uman inclusiv pe cea a Mo şi macrofagelor Prin funcţia sa de receptor pentru
particulele oxidate de LDL CD36 cunoscut ca bdquoscavenger receptorrdquo de clasa B sau
bdquotrombospodin receptorrdquo contribuie la dezvoltarea inflamaţiei de la nivel endotelial şi
formarea plăcii de ateroscleroză Referitor la studiul PPARα icircn Eo icircn sindromul metabolic
menţionăm că studiul nostru este primul care arată că nivelul de expresie a proteinei PPARα
icircn Eo măsurat prin citometrie icircn flux este semnificativ mai redus la pacienţii care sunt
diagnosticaţi cu acest sindrom De asemenea icircn lotul cu SM cercetat icircn cadrul studiului
receptorilor PPARα numărul Eo circulante a fost semnificativ mai crescut la pacienţii cu SM
B
0 500 1000 1500 2000 2500 200
250
300
350
400
450
PPARα Eo o
Fibrinogen mgdl
r =- 036 P = 008
0 500 1000 1500 2000 2500 1 2 3 4 5 6 7 8 9
10 11
PPARα Eo_
Acid uric(mgdl) r = 048 P = 0014 A
0 500 1000 1500 2000 2500 10
20
30
40
50
60
70
80
PPARα Eo
HDL(mgdl)
r = 044 P = 0024
B
100 150 200 250 300 350 400 10
20
30
40
50
60
70
80
PPARα Mo
HDL( mgdl)
r = 046 P = 0019
A
(P = 003) Aceste constatări conduc la ipoteza că Eo joacă un rol special icircn mecanismele
patogenice declanşate icircn sindromul metabolic şi că receptorii PPARα sunt importanţi icircn
implicarea Eo icircn obezitate şi insulinorezistenţă Creşterea numărului de Eo circulante este
urmată de eliberarea mediatorilor proinflamatori iar reducerea expresiei PPARα icircn Eo
determină perturbarea mecanismelor de control al inflamaţiei cu exacerbarea cascadei
proinflamatorii Consecutiv se agravează disfuncţia endotelială şi se accelerează progresia
leziunilor de ateroscleroză Extrapolacircnd aceste ipoteze putem spune că asocierea raportată
dintre boala ischemică coronariană şi Eo poate fi şi consecinţa exacerbării cascadei
proinflamatorii de la nivel vascular produsă datorită scăderii expresiei PPARα icircn Eo iar
creşterea numărului de Eo circulante poate reprezenta o adaptare a organismului uman care
icircncearcă să suplinească deficitul de receptori PPARα Analizacircnd curba ROC pentru
intensităţile medii de fluorescenţă determinate pentru anticorpii anti- PPARα icircn Eo am
obţinut pentru acest biomarker o sensibilitate a testului de 565 şi o specificitate de 778
pentru un punct de cut-off de 1533 ( figura 536 ) Deşi aria AUC (Aria under the curve) egală
cu 0663 icircncadrează acest test ca avacircnd o acurateţe redusă observăm că că această valoare
este apropiată de determinările AUC pentru alţi factori (fibrinogen raport de aterogenitate
acid uric non- HDL-colesterol) cunoscuţi ca fiind implicaţi icircn aterogeneză şi inflamaţia
cronică (figura 431) Aceste remarci alături de faptul că icircn studiul receptorilor PPARα icircn
leucocite am inclus subiecţi la primul diagnostic de SM creează premisa integrării
determinării expresiei relative a receptorilor PPARα icircn diagnosticul complex al sindromului
metabolic Putem spune că icircn final studiul expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofilele
circulante se dovedește a fi util icircn diagnosticul precoce la nivel molecular al SM permiţacircnd
identificarea timpurie a unor indivizi cu risc cardiometabolic crescut Astfel intervenţia
precoce asupra subiecţilor cu deficit de PPARα icircn Eo contribuie la managementul eficient al
afecţiunilor degenerative icircn care inflamaţia cronică icircndeplineşte un rol primordial Referitor
la populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările efectuate prin citometrie de flux nu au
arătat existenţa unor diferenţe statistice icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα
la subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali Rezultatele noastre pot fi
consecinţa caracteristicilor loturilor studiate (icircn studiul nostru au fost incluşi subiecţi recrutaţi
la primul diagnostic de SM şi icircn absenţa stimulării receptorilor PPARα cu droguri agoniste
PPARα) dar icircn acelaşi timp pot apare diferenţe datorită metodei utilizate (231 232 233)
Făcacircnd o paralelă cu un studiu publicat icircn 2013 icircn Europa (231) care a arătat creşterea
nivelului de expresie al PPARα icircn Ly şi Mo observăm că deşi numărul de subiecţi a fost
aproximativ egal (57 participanţi icircn studiul nostru 60 icircn studiul DAmore) subiecţii icircn studiul
amintit au fost recrutaţi dintr-o clinică cu profil medical la primul diagnostic de SM icircn timp
ce metoda utilizată a fost PCR (Polymerase Chain Reaction) mult mai fidelă decacirct citometria
icircn flux icircn studiul receptorilor nucleari De asemenea DAmore nu investighează expresia
PPARα icircn Eo şi PMN icircn cercetare fiind incluse doar celulele CD14+ (predominant Mo) şi
CD14- (predominant Ly) Deşi nu am obţinut diferenţe statistic semnificative icircntre cele două
loturi referitoare la nivelul de expresie relativă a PPARα icircn Mo Ly şi PMN am observat
corelaţii puternice semnificative statistic icircntre expresia receptorilor PPARα icircn aceste tipuri
celulare Rezultatele obţinute sugerează existenţa unui mecanism diferit molecular de control
icircn eozinofile care reglează cantitatea de proteină PPARα icircn eozinofile versus alte tipuri de
leucocite (la pacienţii cu SM) şi acest lucru este icircn concordanţă cu cercetările care descriu
expresia PPARα mRNA icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale
bronşice keratinocite) Studiind prin citometrie de flux nivelul de expresie relativă a
receptorului CD36 la nivelul Mo am arătat prezenţa acestuia icircn Mo tuturor subiecţilor
investigaţi Analizacircnd valorile intensităţii medii de fluorescenţă a CD36 icircn loturile studiate
am observat o tendinţă de creştere la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali
confirmacircnd implicarea receptorului CD36 icircn patogeneza acestuia Referitor la expresia
receptorului CD36 rezultatele obţinute sunt icircn consens cu studii anterioare care au arătat
creşterea expresiei CD36 la pacienţii cu SM şi diabet zaharat Astfel pe lacircngă diferenţa icircn
expresia CD36 s-au raportat şi corelaţii inverse icircntre expresia proteinei CD36 şi nivelul
adiponectinei Acelaşi studiu a evidenţiat o corelaţie pozitivă intre expresia CD36 cu expresia
receptorilor PPAR gamma relaţia cu PPARα nefiind investigată
Analiza de subgrup a relaţiilor dintre componentele SM și elementele moleculare
proinflamatorii studiate a relevat prezenţa unor asocieri semnificativ statistice icircntre acestea
Se argumentează astfel că veridicitatea studiului este susţinută de interdependenţele statistice
ale componentelor SM Determinarea coeficientului de corelaţie Icircn studiul nostru nivelul de
expresie relativă a PPARα s-a corelat moderat negativ (figura 550) cu CA a subiecţilor din
lotul normal pentru populaţiile celulare de Mo (r = - 0420 P = 001) Ly (r = - 046 P =
0009) şi PMN (r = - 040 P = 0024) date care sunt icircn concordanţă cu studiile care arată
rolul PPARα icircn furnizarea energiei prin beta-oxidarea acizilor graşi Icircn acelaşi timp icircn lotul
pacienţilor cu SM nu am identificat prezenţa unei asocieri icircntre nivelul de expresie relativă a
PPARα şi valoarea măsurată a CA Asocierea dintre expresia relativă a PPARα cu obezitatea
de tip central completează datele existente referitoare la reglarea homeostaziei energetice
conturacircnd un mecanism de control deficitar al aportului caloric al SM Icircn condiţiile icircn care
rezultatele obţinute prin metoda citometriei icircn flux nu au arătat existenţa unei corelaţii intre
expresia PPARα şi CA la pacienţii cu SM considerăm că ar fi necesar studiul
polimorfismului genei PPARA care ar putea aduce informaţii importante cu privire la
implicarea acestor receptori icircn apariţia obezităţii de tip central Subliniem acest lucru deoarece
obezitatea este o boală plurifactorială icircn care pe lacircngă factorii ereditari sunt implicaţi factori
de mediu psihologici şi sociali (245) Existenţa unei componente genetice a aterosclerozei
este legată şi de prezenţa unor variante ale genei PPARA asociate cu creşterea incidenţei bolii
cardiovasculare (82) şi a SM (249) Icircn studiul nostru am constatat o scădere statistic
semnificativă a nivelului expresiei relative a receptorilor PPARα icircn Eo la subiecţii cu
antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială comparativ cu subiecţii fără istoric
familial de hipertensiune (figura 537) Deşi diferenţele calculate icircntre loturile studiate nu au
icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică la subiecţii care au declarat prezenţa
antecedentelor familiale de hipertensiune arterială remarcăm o tendinţă de scădere a
intensităţii medii de fluorescenţă pentru Ac anti-PPARα la nivelul Mo (figura 515 P = 006
) icircn timp ce expresia relativă a CD36 icircnregistrează o creştere la acesti subiecţi (figura 545 P
= 008) Icircn contextul riscului cardiovascular foarte icircnalt al pacienţilor cu SM amintim şi
existenţa corelaţiei pozitive dintre valorile tensiunii arteriale diastolice şi expresia relativă a
receptorului CD36 (r = 0483 P = 0013) Această constatare este icircn consens cu studiile care
au arătat că forma solubilă circulantă a CD36 este asociată cu factorii de risc cardiovasculari
fiind propusă ca un marker precoce al aterosclerozei Activarea PPARα este asociată cu
modularea metabolismului lipidic iar agoniştii PPARα sunt utilizaţi icircn mod curent pentru
tratamentul dislipidemiei Sub acţiunea agoniştilor PPARα se obţine o icircmbunătăţire a funcţiei
endoteliale şi a parametrilor reologici funcţiile pleiotropice ale agoniştilor PPARα fiind
dovedite icircn trialuri clinice controlate Icircn populaţiile de Mo şi Ly la pacienţii cu SM
cercetarea noastră a evidenţiat o asociere negativă icircntre nivelul de expresie relativă a
receptorilor PPARα şi concentraţia TG serice (figura 551) Astfel scăderea expresiei
receptorilor PPARα este asociată cu creşterea nivelului TG serice contribuind la profilul
lipidic aterogen din SM Icircn conformitate cu literatura de specialitate icircn studiul efectuat prin
metoda citometriei icircn flux am găsit prezenţa asocierii icircntre nivelul de expresie al PPARα şi
HDL-colesterol Corelaţia pozitivă dintre nivelul de expresie relativă PPARα şi concentraţia
HDL-colesterolului a fost observată icircn lotul martor icircn populaţiile de Mo (r = 035 P = 005)
şi Ly ( r = 036 P = 004) (figura 553) susţinacircnd faptul că stimularea receptorilor PPARα
este legată de creşterea nivelului seric al lipoproteinelor cu densitate crescută La pacienţii cu
SM corelaţia dintre expresia PPARα şi HDL-colesterol a fost evidenţiată icircn populaţiile de Mo
(r = 046 P = 0019) şi eozinofile (r = 044 P = 0024) Se desprinde concluzia că icircn
sindromul metabolic scăderea concentraţiei HDL-colesterol este legată de diminuarea
nivelului de expresie relativă a receptorilor nucleari PPARα icircntărind afirmaţiile legate de
rolul acestor receptori icircn progresia bolilor cardiovasculare Studiind reactanţii de fază acută
analiza statistică a relevat o diferenţă semnificativă din punct de vedere statistic icircntre valorile
fibrinogenului la pacienţii cu SM atunci cacircnd au fost comparaţi cu subiecţii fără SM
(Capitolul IV4 P lt0 001 figura 427A) De asemenea icircn Capitolul V dedicat studiul
expresiei relative a receptorilor PPARα studiul valorilor fibrinogenului a arătat creşterea
acestui reactant de faza acută icircn lotul cu SM comparativ cu lotul martor (P lt0 0001) Icircn
studiul nostru am calculat o corelaţie invers proporţionala (r = - -036 fig 555B) icircntre
nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile şi concentraţia serică a
fibrinogenului Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P = 008) am reţinut
această asociere deoarece am demonstrat că nivelul de expresie relativă al receptorilor
PPARα icircn eozinofile este mai scăzut icircn sindromul metabolic iar sindromul metabolic este
caracterizat printr-un status inflamator cronic status caracterizat şi de creşterea concentraţiei
serice a fibrinogenului De asemenea notam ca această corelaţie negativă se află icircn
concordanţă cu studiile care arata că tratamentul cu agonişti PPARα (fibraţi) determina
scăderea nivelului seric al fibrinogenului contribuind la diminuarea inflamaţiei cronice din
sindromul metabolic şi icircn consecinţă amelioracircnd insulinorezistenţa
LIMITE ȘI DIFICULTĂȚI IcircN CERCETARE
Icircn cadrul Tezei de Doctorat am desfăşurat o cercetare care şi-a propus studierea
expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Recrutarea anamneza şi examinarea
clinică a subiecţilor au fost realizate icircn cadrul Cabinetului de Medicină de Familie CMI Popa
Elena din Iaşi iar determinările hematologice şi biochimice s-au efectuat icircn cadrul
Laboratorului Ambulatorului de Specialitate al Spitalului Universitar ldquoSfacircntul Spiridon din
Iaşi Icircn studiul epidemiologic şi al markerilor inflamatori al sindromului metabolic desfăşurat
au fost incluşi un număr de 1530 de participanţi pe baza liberului consimţămacircnt examinaţi icircn
perioada 01012013 - 31122013 Icircn continuare icircn perioada 1012014 - 28022014 pe baza
criteriilor de includere şi excludere icircn cele două loturi de studiu am investigat un număr de 57
de subiecţi prezentaţi la consultaţie icircn această perioadă şi care au icircndeplinit criteriile de
includere icircn cele două loturi (Lot SM şi Lot Control) constituite pentru evaluarea nivelului de
expresie a receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Explorarea nivelului de expresie
relativă a receptorilor PPARα s-a desfăşurat icircn cadrul Laboratorului de Biologie Moleculară
de pe platforma Institutului Regional de Oncologie Datorită resurselor proprii financiare
limitate trebuie să subliniez că aceasta cercetare nu ar fi fost posibilă fără contribuţia unor
cercetători din domeniul medical care m-au sprijinit necondiţionat atacirct icircn elaborarea
protocolului de lucru cacirct şi icircn efectuarea propriu-zisă a studiului Icircn acest sens menţionăm şi
faptul că pentru studiul receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic am utilizat aparatura
Laboratorului de Biologie Moleculară (care deserveşte icircntreaga Regiune a Moldovei) Pe
această cale mulţumesc personalului Laboratorului de Biologie Moleculară pentru ajutorul
acordat icircn desfăşurarea cercetării doctorale icircn condiţiile icircn care se observa creşterea
numărului de pacienţi care se adresează acestei platforme de cercetare Mulţumesc de
asemenea şi Doamnei Doctor Elena Butoi din cadrul Institutului de Biologie şi Patologie
Moleculară ldquoNicolae Simionescurdquo Bucureşti) pentru donaţia anticorpului secundar anti-
FITC Icircn consecinţă pentru recrutarea unui număr mai mare de participanţi ar fi fost necesară
icircn primul racircnd obţinerea unor resurse financiare suplimentare pentru achiziţia de aparatură şi
reactivi Totuşi numărul subiecţilor recrutaţi este apropiat de numărul subiecţilor raportaţi icircn
cadrul unor granturi de cercetare care aveau ca ţinta studiul expresiei receptorilor PPARα
(212 227 228 231) Rezultatele obţinute continua seria lucrărilor care arata importanta
studiului mecanismelor etiopatogenice ale sindromului metabolic patologie care se afla icircntr-o
continuă creştere La pacienţii cu SM pe lacircngă diminuarea nivelului de expresie a receptorilor
PPARα icircn eozinofile ne aşteptam şi la evidenţierea unor modificări icircn expresia PPARα şi icircn
populaţiile de Ly Mo şi PMN Acest fapt poate fi explicat de utilizarea unor celule provenite
de la pacienţi fără afectare cardiovasculară fără diabet zaharat şi necesită continuarea
studiului pe culturi celulare icircn condiţii de stimulare cu agonişti PPARα deziderat care
impune continuarea investigării expresiei PPARα printr-un grant de cercetare
ORIGINALITATEA ȘI CONTRIBUȚIILE INOVATIVE ALE TEZEI DE
DOCTORAT PERSPECTIVE DE CERCETARE
Evaluarea nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn leucocitele circulante
aduce noi perspective icircn studiul obezităţii şi sindromului metabolic Importanta studiului
expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic derivă din prevalenta crescută a
sindromului metabolic icircn populaţia cercetată la care se adaugă riscul cardiovascular foarte
icircnalt al acestor pacienţi cu implicaţii majore icircn sănătatea publică Rolul receptorilor PPARα
icircn inflamaţie şi aterogeneza este binecunoscut dar studiul nostru este primul care a arătat că
nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα este semnificativ mai scăzut in populatiile
de eozinofile la pacienţii cu SM Această concluzie coroborata cu existenţa unei stracircnse
asocieri intre expresia receptorilor PPARα la nivelul Mo limfocitelor şi PMNlor creeaza
ipoteza existenţei unui mecanism de control diferit al expresiei PPARα la nivelul
eozinofilelor Această cercetare aduce informaţii importante referitoare la mecanismele
proinflamatorii care stau la baza insulinorezistenţei şi riscului cardiometabolic şi impune
continuarea studiului acestor receptori nucleari prin citometrie icircn flux metodă care poate fi
aplicată şi la scara mai largă dacă sunt asigurate resursele materiale necesare cercetării
Cercetarea prin citometrie icircn flux poate fi completată de studiul polimorfismului genei
PPARA şi astfel se pot identifica timpuriu indivizii cu potenţial risc cardiometabolic crescut
Studiul receptorilor PPARα a stabilit conexiuni cu factori proinflamatori şi aterogenetici iar
continuarea cercetării poate aduce şi elemente noi de diagnostic precoce icircn sindromul
metabolic contribuind la icircmbunătăţirea prognosticului acestor pacienţi
CONCLUZII FINALE
1 Aplicarea scorului de SM alături de implementarea algoritmului electronic de diagnostic
contribuie la o prelucrare rapidă eficientă și standardizată a informaţiilor la nivelul
medicinei primare
2 Prevalenţa SM calculată astfel icircn cadrul studiului este crescută (2732) icircn concordanţă
cu datele raportate
3 Controlul factorilor de risc cardiometabolici incluşi icircn SM se poate realiza prin
managementul stilului de viaţă (scăderea greutăţii corporale prin combaterea
sedentarismului şi adoptarea unei diete antiaterogene şi hipocalorice) şi administrarea
terapiei medicamentoase
4 Este necesară adoptarea unei politici de sănătate publică pentru prevenirea creşterii icircn
populaţie a prevalenţei obezităţii şi a diabetului zaharat
5 Noi metode de cercetare icircn domeniul SM axate pe diagnosticarea precoce şi cuantificarea
eficientă a acestuia duce la diminuarea incidenței evenimentelor cardiovasculare majore
6 Sindromul metabolic se caracterizează printr-un status inflamator cronic
7 Valorile Non-HDL-colesterolului şi a raportului de aterogenitate sunt semnificativ mai
mari la pacienţii cu SM
8 Dintre reactanţii de faza acută am observat că valoarea medie a fibrinogenului este mai
crescută icircn lotul cu SM
9 Valorile eozinofilelor sunt crescute icircn sindromul metabolic iar explorarea relaţiei dintre
eozinofile şi obezitate constituie una din direcţiile de studiu actuale ale sindromului
metabolic
10 Evaluarea markerilor inflamatori icircn contextul sindromului metabolic este utilă icircn
evaluarea complexă a a factorilor de risc cardiometabolici
11 Prin metoda citometriei icircn flux am demonstrat prezenta Receptorilor Activaţi de
Inductorii Proliferării Peroxizomilor ndash Alpha (PPARα) icircn toate populaţiile de leucocite
studiate (Mo limfocite PMN eozinofile) atacirct icircn lotul pacienţilor cu SM cacirct şi icircn lotul
martor
12 Utilizacircnd intensitatea medie de fluorescenţă a anticorpilor anti- PPARα am arătat că
nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile este semnificativ mai redus
la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali
13 Acest studiu este primul care a demonstrat existenţa unei scăderi statistic semnificative a
nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofilele pacienţilor cu SM
confirmacircnd cercetările recente care au evidenţiat rolul eozinofilelor şi al receptorilor
PPARα icircn obezitate reglarea inflamaţiei cronice şi aterogeneza
14 Contrar aşteptărilor noastre icircn populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările
efectuate icircn cele două loturi de studiu (cu şi fără sindom metabolic) nu am evidenţiat
diferenţe statistic seminificative icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα la
subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali
15 Icircn populaţiile de Mo limfocite şi polimorfonucleare am observat corelaţii puternice
semnificativ statistic icircntre expresia PPARα icircn aceste tipuri celulare sugeracircnd existenţa
unui mecanism unic de control al inflamaţiei cronice la nivelul acestor celule probabil
diferit de cel din eozinofile
16 La subiecţii cu SM expresia relativă a PPARα icircn Eo este invers asociată cu expresia
receptorului CD36 (receptor al particulelor de ox - LDL şi propus ca un marker precoce al
aterosclerozei) dovedind rolul antiinflamator al receptorilor PPARα la nivel endotelial
17 La pacienţii cu antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială nivelul de
expresie al receptorilor PPARα icircn eozinofile şi Mo este diminuat comparativ cu subiecţii
fără antecedente familiale de hipertensiune arterială Putem spune că studiul efectuat de
noi aduce informaţii importante legate de geneză aterosclerozei şi hipertensiunii arteriale
18 Prin studiul asocierilor dintre receptorii PPARα şi componentele clinice ale sindromului
metabolic am arătat rolul acestor receptori icircn determinismul obezităţii de tip central
nivelul expresiei relative a receptorilor PPARα fiind invers proporţional cu circumferinţa
abdominală
19 Icircn acelaşi timp nivelul de expresie a PPARα icircn sindromul metabolic este asociat pozitiv
cu concentraţia serică a HDL-colesterolului şi invers asociat cu nivelul trigliceridelor
serice dovedind rolul acestor receptori icircn diminuarea procesului inflamator cronic de la
nivel vascular
20 La pacienţii cu SM scăderea expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofile este corelată cu
creşterea unor markeri ai sindromului inflamator cronic cardiometabolic (acid uric
fibrinogen) ilustracircnd importanta receptorilor icircn reglarea status-ului inflamator cronic din
sindromul metabolic
21 Utilizarea metodei flowcitometrice pentru studiul expresiei relative a receptorilor PPARα
icircn leucocite a adus informaţii importante cu privire la mecanismele moleculare de control
implicate icircn patogenia bolilor cardiometabolice icircn concordanţă cu cercetările care descriu
expresia PPAR icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale bronşice
keratinocite)
BIBLIOGRAFIE SELECTIVA
1 Kahn R Metabolic syndrome- what is the clinical usefulness Lancet 2008371(9628)1892-3
2 Reaven GM The metabolic syndrome is this diagnosis necessary Am J Clin Nutr 2006 83(6)1237-7
3 Grundy SM Pre-Diabetes Metabolic Syndrome and Cardiovascular Risk J Am Coll Cardiol 201259(7)
635-43
4 International Diabetes Federation IDF Diabetes Atlas 6th edn International Diabetes Federation Belgium
Brussels 20131-155
5 World Health Organization Global Status Report on Noncommunicable Diseases 2010 World Health
Organization Geneva Switzerland 20111-176
6 Coman AE Petrovanu R Sindromul metabolic in practica de ambulator Editura Pim Iaşi 2009 1-103
7 Grundy SM Becker D Clark LT et alThird Report of the National Cholesterol Education Program (NCEP)
Expert Panel on Detection Evaluation and Treatment of High Blood Cholesterol in Adults (Adult
Treatment Panel III) Final Report Circulation 2002106(25)3143-90
8 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J Metabolic syndrome- a new worldwide definition A Consensus Statement
from the International Diabetes Federation Diabet Med 2006 23(5)469-80
9 KG Alberti KG Eckel RH Grundy SM etal International Diabetes Federation task force on epidemiology
and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart Association World Heart
Federation International Atherosclerosis Society International Association for the study of obesity
Harmonizing the metabolic syndrome a joint interim statement of the International Diabetes Federation task
force on epidemiology and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart
Association World Heart Federation International Atherosclerosis society and International Association
for the study of obesity Circulation 2009120(16)1640-5
10 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J IDF Epidemiology Task Force The metabolic syndrome new
worldwide definition Lancet 2005 366 1059 - 62
11 Oleszczyk M Svab I Seifert B et al Primary healthcare in the developing part of Europe changes and
development in the former Eastern Bloc countries that joined the European Union following 2004 Med Sci
Monit 2009(15)78ndash84
12 Jung U J Choi M S Obesity and Its Metabolic Complications The Role of Adipokines and the
Relationship between Obesity Inflammation Insulin Resistance Dyslipidemia and Nonalcoholic Fatty
Liver Disease Int J Mol Sci 2014rsquo15(4) 6184-223
13 Vanden Heuvel JP Peters JM Peroxisome Proliferators In Ramos K (ed) Cellular and Molecular
Toxicology (Second Edition) Volume 2 New York Elsevier Science Inc 2010 145 - 67
14 Yessoufou A Wahli W Multifaceted roles of peroxisome proliferator-activated receptors (PPARs) at the
cellular and whole organism levels Swiss Med Wkl 2010140w13071 doi104414smw201013071
15 Azhar S Peroxisome proliferator-activated receptors metabolic syndrome and cardiovascular disease
Future Cardiology 20106(5)657-91
16 Andries G Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity
Diabetes and Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(Suppl)24-32
17 Zandbergen F Plutzky J PPARalpha in atherosclerosis and inflammation Biochim Biophys Acta
20071771(8)972-82
18 Straus DS Glass CK Anti-inflammatory actions of PPAR ligands new insights on cellular and molecular
mechanisms Trends Immunol 200728(12)551-8
19 Zlei M Zugun- Eloae F Carasevici E Citometrie icircn flux - Bază şi clinică Icircn Hinescu ME (ed) Citometrie icircn
flux - principii şi aplicaţii clinice Bucureşti Editura Viaţa Medicală Romacircnească 20111-128
20 Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity Diabetes and
Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(9)24-32
21 Woerly G Honda K Loyens M et al Peroxisome proliferator-activated receptors alpha and gamma down-
regulate allergic inflammation and eosinophil activation J Exp Med 2003198(3)411-21
22 Salle-Saumont D Brenuchon C Kanda A et al Peroxisome proliferator-activated receptor alpha regulates
skin inflammation and humoral response in atopic dermatitis J Clin Allergy Immunology 2008 21(4)962-8
23 Schote A Turner J Schiltz J et al Nuclear receptors in human immune cells expression and correlations
Mol Immunolog 200744(6)1436-45
24 DAmore S Vacca M Graziano G et al Nuclear receptors expression chart icircn peripheral blood
mononuclear cells identifies patients with Metabolic Syndrome Biochim Biophys Acta
20131832(12)2289-301
25 Uthurralt J Gordish-Dressman H Bradbury M T et al PPARalpha L162V underlies variation in serum
triglycerides and subcutaneous fat volume in young males BMC Med Genet 2007855
26 Hiukka A Leinonen ES Jauhiainen M et al Long-term effects of fenofibrate on VLDL and HDL
subspecies icircn participants with type 2 diabetes mellitus Diabetologia 2007 50(10)2067-75
27 Robins SJ Rubins HB Faas FH et alInsulin resistance and cardiovascular events with low HDL
cholesterol The Veterans Affairs HDL Intervention Trial (VA-HIT) Diabetes Care 2003 26(5)1513-7
28 Devaraj S Siegel D Jialal I Statin Therapy in Metabolic Syndrome and Hypertension Post-JUPITER
What is the Value of CRP Curr Atheroscler Rep 2011 13(1) 31ndash42
29 Imperatore G Riccardi G Iovino C et al Plasma Fibrinogen A New Factor of the Metabolic Syndrome A
population-based study Diabetes Care 19982 1(4)649-54
30 Krysiak R Gdula-Dymek A Bachowski R Okopien B Pleiotropic effects of atorvastatin and fenofibrate
in metabolic syndrome and different types of pre-diabete Diabetes Care 201033(10)2266-70
31 Hermans MP Impact of Fenofibrate on Type 2 Diabetes Patients with Features of the Metabolic Syndrome
Subgroup Analysis From FIELD Curr Cardiol Rev 20106(2)112-8
32 Silverstein R Inflammation atherosclerosis and arterial thrombosis Role of the scavenger receptor CD36
Cleveland Clinic Journal of Medicine 200976(Suppl 2)S27-S30
33 Hăncu N Obezitatea In Vereşiu IA (ed) Diabetul zaharat nutritia si bolile metabolice Volume 2 Editura
Echinox Cluj- Napoca 2010 1-15
Lista lucrări publicate
1 Elena Popa Maria Maidaniuc Agnes Bacusca Alamir Diaa Rodica Petrovanu Adorata Elena
Coman Disfuncţia endotelială ndash de la mecanisme moleculare la cuantifi care şi tratament icircn practica
medicală Practica Medicală 20149(3) 109-14
2 Elena Popa Agnes Bacusca Alamir Diaa Maria Maidaniuc Rodica Petrovanu Adorata Elena Coman
The function of insulin receptor (IRF) in evolution of obesity correlation with adipocytes diameters
Archives of the Balkan Medical Union 201449(3) 275-9
3 Elena Popa Florin Zugun-Eloae Mihaela Zlei Daniela Jitaru Oana Maria Pintilie Adorata Elena
Coman Maria Traian Didona Anca Ungureanu Eugen Carasevici - acceptata pentru numarul 42014
Flow cytometry analysis of PPAR-alpha receptors in metabolic syndrome) Revista Romană de
Medicină de Laborator(RRLM-D-14-00034R1- adeverinţa ataşată
Figura 551 Lot SM Corelaţie icircntre expresia PPARα şi TG (A Mo B Ly)
Analizand corelatia dintre receptorii CD36 si valorile TA la pacientii cu SM am observat
o asociere pozitivă asteptată intre TAD si nivelul de expresie al receptorilor CD36 (fig 552)
Figura 552 Lot SM Corelaţii icircntre expresia
receptorilor CD36 şi valorile tensiunii arteriale
diastolice
Studiind corelaţiile dintre receptorii PPARα şi HDL-col la subiecţii din lotul martor am
notat o asociere pozitivă icircntre expresia PPARα icircn Mo şi Ly cu HDL-col (fig 553)
Figura 553 Lot martor Corelaţii icircntre HDL-col şi expresia PPARα icircn Mo(A) Ly(B)
Icircn lotul normal am evidenţiat corelaţii pozitive moderate dar semnificative statistic icircntre
CA şi valorile TAS (r = 062 P lt 0001) respectiv TAD (r = 050 P=0004) precum şi icircntre
CA şi glicemia subiecţilor normali (r = 052 P = 0003) Aceste date icircmpreună cu relaţia
invers proporţională identificată icircntre HDL-col şi CA (r = 050 P = 001) susţin validitatea
acestui studiu Icircn lotul subiecţilor cu SM am observat o corelaţie moderat pozitivă icircntre
expresia PPARα icircn populaţiiile de Mo şi Eo şi concentraţia a HDL-col (fig 554)
B
100 150 200 250 300 350 20
30
40
50
60
70
80
90
100
PPARα Ly
HDL-col-(mgdl)
r = 036 P = 0046
A
150 200 250 300 350 400 20
30
40
50
60
70
80
90
100
PPARα Mo
HDL-col-(mgd)l
r = 035 P = 005
70 75 80 85 90 95 100 1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
TAD (mmHg)
CD36
r = 048 P = 0013
B
50 100 150 200 250 300 350 -100
0
100
200
300
400
500
PPARα Ly
TG(mgdl)
r = - 042 P = 003
A
50 100 150 200 250 300 350 400 -100
0
100
200
300
400
500
PPARα Mo
TG ( mgdl) r =- 0 43 P = 0027
Figura 554 Corelaţii icircn SM icircntre HDL-col şi expresia PPARα icircn Mo (A) şi Eo(B)
Corelaţii icircntre nivelul de expresie relativă a PPARα şi markeri ai disfuncţiei
endoteliale şi inflamaţiei cronice
Deşi nu a icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică am reţinut corelaţia invers
proporţională (r = - 0331 P = 006) dintre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα
icircn PMN şi concentraţia serică a Non-HDL-colesterolului
Studiind relaţiile dintre parametri icircn lotul de pacienţi cu SM am observat o corelaţie
moderată invers proporţională icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Eo şi
acidul uric seric (figura 555 A) corelaţie absentă la subiecţii fără SM
Figura 555 Lot SM corelaţia dintre expresia PPARα icircn Eo şi acidul uric (A) respectiv
PPARα şi fibrinogen (B)
Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P=008) am notat pentru
pacienţii cu SM corelaţia invers proporţională dintre expresia PPARα icircn Eo şi concentraţia
serică a fibrinogenului ( figura 555B)
V5 Discuţii
Icircn cadrul lucrării de doctorat am studiat nivelul de expresie relativă a PPARα icircn
leucocitele pacienţilor cu SM comparativ cu cea a subiecţilor normali Expresia PPARα a fost
studiată icircn paralel cu cea a CD36 glicoproteină exprimată pe suprafaţa a numeroase celule
din organismul uman inclusiv pe cea a Mo şi macrofagelor Prin funcţia sa de receptor pentru
particulele oxidate de LDL CD36 cunoscut ca bdquoscavenger receptorrdquo de clasa B sau
bdquotrombospodin receptorrdquo contribuie la dezvoltarea inflamaţiei de la nivel endotelial şi
formarea plăcii de ateroscleroză Referitor la studiul PPARα icircn Eo icircn sindromul metabolic
menţionăm că studiul nostru este primul care arată că nivelul de expresie a proteinei PPARα
icircn Eo măsurat prin citometrie icircn flux este semnificativ mai redus la pacienţii care sunt
diagnosticaţi cu acest sindrom De asemenea icircn lotul cu SM cercetat icircn cadrul studiului
receptorilor PPARα numărul Eo circulante a fost semnificativ mai crescut la pacienţii cu SM
B
0 500 1000 1500 2000 2500 200
250
300
350
400
450
PPARα Eo o
Fibrinogen mgdl
r =- 036 P = 008
0 500 1000 1500 2000 2500 1 2 3 4 5 6 7 8 9
10 11
PPARα Eo_
Acid uric(mgdl) r = 048 P = 0014 A
0 500 1000 1500 2000 2500 10
20
30
40
50
60
70
80
PPARα Eo
HDL(mgdl)
r = 044 P = 0024
B
100 150 200 250 300 350 400 10
20
30
40
50
60
70
80
PPARα Mo
HDL( mgdl)
r = 046 P = 0019
A
(P = 003) Aceste constatări conduc la ipoteza că Eo joacă un rol special icircn mecanismele
patogenice declanşate icircn sindromul metabolic şi că receptorii PPARα sunt importanţi icircn
implicarea Eo icircn obezitate şi insulinorezistenţă Creşterea numărului de Eo circulante este
urmată de eliberarea mediatorilor proinflamatori iar reducerea expresiei PPARα icircn Eo
determină perturbarea mecanismelor de control al inflamaţiei cu exacerbarea cascadei
proinflamatorii Consecutiv se agravează disfuncţia endotelială şi se accelerează progresia
leziunilor de ateroscleroză Extrapolacircnd aceste ipoteze putem spune că asocierea raportată
dintre boala ischemică coronariană şi Eo poate fi şi consecinţa exacerbării cascadei
proinflamatorii de la nivel vascular produsă datorită scăderii expresiei PPARα icircn Eo iar
creşterea numărului de Eo circulante poate reprezenta o adaptare a organismului uman care
icircncearcă să suplinească deficitul de receptori PPARα Analizacircnd curba ROC pentru
intensităţile medii de fluorescenţă determinate pentru anticorpii anti- PPARα icircn Eo am
obţinut pentru acest biomarker o sensibilitate a testului de 565 şi o specificitate de 778
pentru un punct de cut-off de 1533 ( figura 536 ) Deşi aria AUC (Aria under the curve) egală
cu 0663 icircncadrează acest test ca avacircnd o acurateţe redusă observăm că că această valoare
este apropiată de determinările AUC pentru alţi factori (fibrinogen raport de aterogenitate
acid uric non- HDL-colesterol) cunoscuţi ca fiind implicaţi icircn aterogeneză şi inflamaţia
cronică (figura 431) Aceste remarci alături de faptul că icircn studiul receptorilor PPARα icircn
leucocite am inclus subiecţi la primul diagnostic de SM creează premisa integrării
determinării expresiei relative a receptorilor PPARα icircn diagnosticul complex al sindromului
metabolic Putem spune că icircn final studiul expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofilele
circulante se dovedește a fi util icircn diagnosticul precoce la nivel molecular al SM permiţacircnd
identificarea timpurie a unor indivizi cu risc cardiometabolic crescut Astfel intervenţia
precoce asupra subiecţilor cu deficit de PPARα icircn Eo contribuie la managementul eficient al
afecţiunilor degenerative icircn care inflamaţia cronică icircndeplineşte un rol primordial Referitor
la populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările efectuate prin citometrie de flux nu au
arătat existenţa unor diferenţe statistice icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα
la subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali Rezultatele noastre pot fi
consecinţa caracteristicilor loturilor studiate (icircn studiul nostru au fost incluşi subiecţi recrutaţi
la primul diagnostic de SM şi icircn absenţa stimulării receptorilor PPARα cu droguri agoniste
PPARα) dar icircn acelaşi timp pot apare diferenţe datorită metodei utilizate (231 232 233)
Făcacircnd o paralelă cu un studiu publicat icircn 2013 icircn Europa (231) care a arătat creşterea
nivelului de expresie al PPARα icircn Ly şi Mo observăm că deşi numărul de subiecţi a fost
aproximativ egal (57 participanţi icircn studiul nostru 60 icircn studiul DAmore) subiecţii icircn studiul
amintit au fost recrutaţi dintr-o clinică cu profil medical la primul diagnostic de SM icircn timp
ce metoda utilizată a fost PCR (Polymerase Chain Reaction) mult mai fidelă decacirct citometria
icircn flux icircn studiul receptorilor nucleari De asemenea DAmore nu investighează expresia
PPARα icircn Eo şi PMN icircn cercetare fiind incluse doar celulele CD14+ (predominant Mo) şi
CD14- (predominant Ly) Deşi nu am obţinut diferenţe statistic semnificative icircntre cele două
loturi referitoare la nivelul de expresie relativă a PPARα icircn Mo Ly şi PMN am observat
corelaţii puternice semnificative statistic icircntre expresia receptorilor PPARα icircn aceste tipuri
celulare Rezultatele obţinute sugerează existenţa unui mecanism diferit molecular de control
icircn eozinofile care reglează cantitatea de proteină PPARα icircn eozinofile versus alte tipuri de
leucocite (la pacienţii cu SM) şi acest lucru este icircn concordanţă cu cercetările care descriu
expresia PPARα mRNA icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale
bronşice keratinocite) Studiind prin citometrie de flux nivelul de expresie relativă a
receptorului CD36 la nivelul Mo am arătat prezenţa acestuia icircn Mo tuturor subiecţilor
investigaţi Analizacircnd valorile intensităţii medii de fluorescenţă a CD36 icircn loturile studiate
am observat o tendinţă de creştere la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali
confirmacircnd implicarea receptorului CD36 icircn patogeneza acestuia Referitor la expresia
receptorului CD36 rezultatele obţinute sunt icircn consens cu studii anterioare care au arătat
creşterea expresiei CD36 la pacienţii cu SM şi diabet zaharat Astfel pe lacircngă diferenţa icircn
expresia CD36 s-au raportat şi corelaţii inverse icircntre expresia proteinei CD36 şi nivelul
adiponectinei Acelaşi studiu a evidenţiat o corelaţie pozitivă intre expresia CD36 cu expresia
receptorilor PPAR gamma relaţia cu PPARα nefiind investigată
Analiza de subgrup a relaţiilor dintre componentele SM și elementele moleculare
proinflamatorii studiate a relevat prezenţa unor asocieri semnificativ statistice icircntre acestea
Se argumentează astfel că veridicitatea studiului este susţinută de interdependenţele statistice
ale componentelor SM Determinarea coeficientului de corelaţie Icircn studiul nostru nivelul de
expresie relativă a PPARα s-a corelat moderat negativ (figura 550) cu CA a subiecţilor din
lotul normal pentru populaţiile celulare de Mo (r = - 0420 P = 001) Ly (r = - 046 P =
0009) şi PMN (r = - 040 P = 0024) date care sunt icircn concordanţă cu studiile care arată
rolul PPARα icircn furnizarea energiei prin beta-oxidarea acizilor graşi Icircn acelaşi timp icircn lotul
pacienţilor cu SM nu am identificat prezenţa unei asocieri icircntre nivelul de expresie relativă a
PPARα şi valoarea măsurată a CA Asocierea dintre expresia relativă a PPARα cu obezitatea
de tip central completează datele existente referitoare la reglarea homeostaziei energetice
conturacircnd un mecanism de control deficitar al aportului caloric al SM Icircn condiţiile icircn care
rezultatele obţinute prin metoda citometriei icircn flux nu au arătat existenţa unei corelaţii intre
expresia PPARα şi CA la pacienţii cu SM considerăm că ar fi necesar studiul
polimorfismului genei PPARA care ar putea aduce informaţii importante cu privire la
implicarea acestor receptori icircn apariţia obezităţii de tip central Subliniem acest lucru deoarece
obezitatea este o boală plurifactorială icircn care pe lacircngă factorii ereditari sunt implicaţi factori
de mediu psihologici şi sociali (245) Existenţa unei componente genetice a aterosclerozei
este legată şi de prezenţa unor variante ale genei PPARA asociate cu creşterea incidenţei bolii
cardiovasculare (82) şi a SM (249) Icircn studiul nostru am constatat o scădere statistic
semnificativă a nivelului expresiei relative a receptorilor PPARα icircn Eo la subiecţii cu
antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială comparativ cu subiecţii fără istoric
familial de hipertensiune (figura 537) Deşi diferenţele calculate icircntre loturile studiate nu au
icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică la subiecţii care au declarat prezenţa
antecedentelor familiale de hipertensiune arterială remarcăm o tendinţă de scădere a
intensităţii medii de fluorescenţă pentru Ac anti-PPARα la nivelul Mo (figura 515 P = 006
) icircn timp ce expresia relativă a CD36 icircnregistrează o creştere la acesti subiecţi (figura 545 P
= 008) Icircn contextul riscului cardiovascular foarte icircnalt al pacienţilor cu SM amintim şi
existenţa corelaţiei pozitive dintre valorile tensiunii arteriale diastolice şi expresia relativă a
receptorului CD36 (r = 0483 P = 0013) Această constatare este icircn consens cu studiile care
au arătat că forma solubilă circulantă a CD36 este asociată cu factorii de risc cardiovasculari
fiind propusă ca un marker precoce al aterosclerozei Activarea PPARα este asociată cu
modularea metabolismului lipidic iar agoniştii PPARα sunt utilizaţi icircn mod curent pentru
tratamentul dislipidemiei Sub acţiunea agoniştilor PPARα se obţine o icircmbunătăţire a funcţiei
endoteliale şi a parametrilor reologici funcţiile pleiotropice ale agoniştilor PPARα fiind
dovedite icircn trialuri clinice controlate Icircn populaţiile de Mo şi Ly la pacienţii cu SM
cercetarea noastră a evidenţiat o asociere negativă icircntre nivelul de expresie relativă a
receptorilor PPARα şi concentraţia TG serice (figura 551) Astfel scăderea expresiei
receptorilor PPARα este asociată cu creşterea nivelului TG serice contribuind la profilul
lipidic aterogen din SM Icircn conformitate cu literatura de specialitate icircn studiul efectuat prin
metoda citometriei icircn flux am găsit prezenţa asocierii icircntre nivelul de expresie al PPARα şi
HDL-colesterol Corelaţia pozitivă dintre nivelul de expresie relativă PPARα şi concentraţia
HDL-colesterolului a fost observată icircn lotul martor icircn populaţiile de Mo (r = 035 P = 005)
şi Ly ( r = 036 P = 004) (figura 553) susţinacircnd faptul că stimularea receptorilor PPARα
este legată de creşterea nivelului seric al lipoproteinelor cu densitate crescută La pacienţii cu
SM corelaţia dintre expresia PPARα şi HDL-colesterol a fost evidenţiată icircn populaţiile de Mo
(r = 046 P = 0019) şi eozinofile (r = 044 P = 0024) Se desprinde concluzia că icircn
sindromul metabolic scăderea concentraţiei HDL-colesterol este legată de diminuarea
nivelului de expresie relativă a receptorilor nucleari PPARα icircntărind afirmaţiile legate de
rolul acestor receptori icircn progresia bolilor cardiovasculare Studiind reactanţii de fază acută
analiza statistică a relevat o diferenţă semnificativă din punct de vedere statistic icircntre valorile
fibrinogenului la pacienţii cu SM atunci cacircnd au fost comparaţi cu subiecţii fără SM
(Capitolul IV4 P lt0 001 figura 427A) De asemenea icircn Capitolul V dedicat studiul
expresiei relative a receptorilor PPARα studiul valorilor fibrinogenului a arătat creşterea
acestui reactant de faza acută icircn lotul cu SM comparativ cu lotul martor (P lt0 0001) Icircn
studiul nostru am calculat o corelaţie invers proporţionala (r = - -036 fig 555B) icircntre
nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile şi concentraţia serică a
fibrinogenului Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P = 008) am reţinut
această asociere deoarece am demonstrat că nivelul de expresie relativă al receptorilor
PPARα icircn eozinofile este mai scăzut icircn sindromul metabolic iar sindromul metabolic este
caracterizat printr-un status inflamator cronic status caracterizat şi de creşterea concentraţiei
serice a fibrinogenului De asemenea notam ca această corelaţie negativă se află icircn
concordanţă cu studiile care arata că tratamentul cu agonişti PPARα (fibraţi) determina
scăderea nivelului seric al fibrinogenului contribuind la diminuarea inflamaţiei cronice din
sindromul metabolic şi icircn consecinţă amelioracircnd insulinorezistenţa
LIMITE ȘI DIFICULTĂȚI IcircN CERCETARE
Icircn cadrul Tezei de Doctorat am desfăşurat o cercetare care şi-a propus studierea
expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Recrutarea anamneza şi examinarea
clinică a subiecţilor au fost realizate icircn cadrul Cabinetului de Medicină de Familie CMI Popa
Elena din Iaşi iar determinările hematologice şi biochimice s-au efectuat icircn cadrul
Laboratorului Ambulatorului de Specialitate al Spitalului Universitar ldquoSfacircntul Spiridon din
Iaşi Icircn studiul epidemiologic şi al markerilor inflamatori al sindromului metabolic desfăşurat
au fost incluşi un număr de 1530 de participanţi pe baza liberului consimţămacircnt examinaţi icircn
perioada 01012013 - 31122013 Icircn continuare icircn perioada 1012014 - 28022014 pe baza
criteriilor de includere şi excludere icircn cele două loturi de studiu am investigat un număr de 57
de subiecţi prezentaţi la consultaţie icircn această perioadă şi care au icircndeplinit criteriile de
includere icircn cele două loturi (Lot SM şi Lot Control) constituite pentru evaluarea nivelului de
expresie a receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Explorarea nivelului de expresie
relativă a receptorilor PPARα s-a desfăşurat icircn cadrul Laboratorului de Biologie Moleculară
de pe platforma Institutului Regional de Oncologie Datorită resurselor proprii financiare
limitate trebuie să subliniez că aceasta cercetare nu ar fi fost posibilă fără contribuţia unor
cercetători din domeniul medical care m-au sprijinit necondiţionat atacirct icircn elaborarea
protocolului de lucru cacirct şi icircn efectuarea propriu-zisă a studiului Icircn acest sens menţionăm şi
faptul că pentru studiul receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic am utilizat aparatura
Laboratorului de Biologie Moleculară (care deserveşte icircntreaga Regiune a Moldovei) Pe
această cale mulţumesc personalului Laboratorului de Biologie Moleculară pentru ajutorul
acordat icircn desfăşurarea cercetării doctorale icircn condiţiile icircn care se observa creşterea
numărului de pacienţi care se adresează acestei platforme de cercetare Mulţumesc de
asemenea şi Doamnei Doctor Elena Butoi din cadrul Institutului de Biologie şi Patologie
Moleculară ldquoNicolae Simionescurdquo Bucureşti) pentru donaţia anticorpului secundar anti-
FITC Icircn consecinţă pentru recrutarea unui număr mai mare de participanţi ar fi fost necesară
icircn primul racircnd obţinerea unor resurse financiare suplimentare pentru achiziţia de aparatură şi
reactivi Totuşi numărul subiecţilor recrutaţi este apropiat de numărul subiecţilor raportaţi icircn
cadrul unor granturi de cercetare care aveau ca ţinta studiul expresiei receptorilor PPARα
(212 227 228 231) Rezultatele obţinute continua seria lucrărilor care arata importanta
studiului mecanismelor etiopatogenice ale sindromului metabolic patologie care se afla icircntr-o
continuă creştere La pacienţii cu SM pe lacircngă diminuarea nivelului de expresie a receptorilor
PPARα icircn eozinofile ne aşteptam şi la evidenţierea unor modificări icircn expresia PPARα şi icircn
populaţiile de Ly Mo şi PMN Acest fapt poate fi explicat de utilizarea unor celule provenite
de la pacienţi fără afectare cardiovasculară fără diabet zaharat şi necesită continuarea
studiului pe culturi celulare icircn condiţii de stimulare cu agonişti PPARα deziderat care
impune continuarea investigării expresiei PPARα printr-un grant de cercetare
ORIGINALITATEA ȘI CONTRIBUȚIILE INOVATIVE ALE TEZEI DE
DOCTORAT PERSPECTIVE DE CERCETARE
Evaluarea nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn leucocitele circulante
aduce noi perspective icircn studiul obezităţii şi sindromului metabolic Importanta studiului
expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic derivă din prevalenta crescută a
sindromului metabolic icircn populaţia cercetată la care se adaugă riscul cardiovascular foarte
icircnalt al acestor pacienţi cu implicaţii majore icircn sănătatea publică Rolul receptorilor PPARα
icircn inflamaţie şi aterogeneza este binecunoscut dar studiul nostru este primul care a arătat că
nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα este semnificativ mai scăzut in populatiile
de eozinofile la pacienţii cu SM Această concluzie coroborata cu existenţa unei stracircnse
asocieri intre expresia receptorilor PPARα la nivelul Mo limfocitelor şi PMNlor creeaza
ipoteza existenţei unui mecanism de control diferit al expresiei PPARα la nivelul
eozinofilelor Această cercetare aduce informaţii importante referitoare la mecanismele
proinflamatorii care stau la baza insulinorezistenţei şi riscului cardiometabolic şi impune
continuarea studiului acestor receptori nucleari prin citometrie icircn flux metodă care poate fi
aplicată şi la scara mai largă dacă sunt asigurate resursele materiale necesare cercetării
Cercetarea prin citometrie icircn flux poate fi completată de studiul polimorfismului genei
PPARA şi astfel se pot identifica timpuriu indivizii cu potenţial risc cardiometabolic crescut
Studiul receptorilor PPARα a stabilit conexiuni cu factori proinflamatori şi aterogenetici iar
continuarea cercetării poate aduce şi elemente noi de diagnostic precoce icircn sindromul
metabolic contribuind la icircmbunătăţirea prognosticului acestor pacienţi
CONCLUZII FINALE
1 Aplicarea scorului de SM alături de implementarea algoritmului electronic de diagnostic
contribuie la o prelucrare rapidă eficientă și standardizată a informaţiilor la nivelul
medicinei primare
2 Prevalenţa SM calculată astfel icircn cadrul studiului este crescută (2732) icircn concordanţă
cu datele raportate
3 Controlul factorilor de risc cardiometabolici incluşi icircn SM se poate realiza prin
managementul stilului de viaţă (scăderea greutăţii corporale prin combaterea
sedentarismului şi adoptarea unei diete antiaterogene şi hipocalorice) şi administrarea
terapiei medicamentoase
4 Este necesară adoptarea unei politici de sănătate publică pentru prevenirea creşterii icircn
populaţie a prevalenţei obezităţii şi a diabetului zaharat
5 Noi metode de cercetare icircn domeniul SM axate pe diagnosticarea precoce şi cuantificarea
eficientă a acestuia duce la diminuarea incidenței evenimentelor cardiovasculare majore
6 Sindromul metabolic se caracterizează printr-un status inflamator cronic
7 Valorile Non-HDL-colesterolului şi a raportului de aterogenitate sunt semnificativ mai
mari la pacienţii cu SM
8 Dintre reactanţii de faza acută am observat că valoarea medie a fibrinogenului este mai
crescută icircn lotul cu SM
9 Valorile eozinofilelor sunt crescute icircn sindromul metabolic iar explorarea relaţiei dintre
eozinofile şi obezitate constituie una din direcţiile de studiu actuale ale sindromului
metabolic
10 Evaluarea markerilor inflamatori icircn contextul sindromului metabolic este utilă icircn
evaluarea complexă a a factorilor de risc cardiometabolici
11 Prin metoda citometriei icircn flux am demonstrat prezenta Receptorilor Activaţi de
Inductorii Proliferării Peroxizomilor ndash Alpha (PPARα) icircn toate populaţiile de leucocite
studiate (Mo limfocite PMN eozinofile) atacirct icircn lotul pacienţilor cu SM cacirct şi icircn lotul
martor
12 Utilizacircnd intensitatea medie de fluorescenţă a anticorpilor anti- PPARα am arătat că
nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile este semnificativ mai redus
la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali
13 Acest studiu este primul care a demonstrat existenţa unei scăderi statistic semnificative a
nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofilele pacienţilor cu SM
confirmacircnd cercetările recente care au evidenţiat rolul eozinofilelor şi al receptorilor
PPARα icircn obezitate reglarea inflamaţiei cronice şi aterogeneza
14 Contrar aşteptărilor noastre icircn populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările
efectuate icircn cele două loturi de studiu (cu şi fără sindom metabolic) nu am evidenţiat
diferenţe statistic seminificative icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα la
subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali
15 Icircn populaţiile de Mo limfocite şi polimorfonucleare am observat corelaţii puternice
semnificativ statistic icircntre expresia PPARα icircn aceste tipuri celulare sugeracircnd existenţa
unui mecanism unic de control al inflamaţiei cronice la nivelul acestor celule probabil
diferit de cel din eozinofile
16 La subiecţii cu SM expresia relativă a PPARα icircn Eo este invers asociată cu expresia
receptorului CD36 (receptor al particulelor de ox - LDL şi propus ca un marker precoce al
aterosclerozei) dovedind rolul antiinflamator al receptorilor PPARα la nivel endotelial
17 La pacienţii cu antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială nivelul de
expresie al receptorilor PPARα icircn eozinofile şi Mo este diminuat comparativ cu subiecţii
fără antecedente familiale de hipertensiune arterială Putem spune că studiul efectuat de
noi aduce informaţii importante legate de geneză aterosclerozei şi hipertensiunii arteriale
18 Prin studiul asocierilor dintre receptorii PPARα şi componentele clinice ale sindromului
metabolic am arătat rolul acestor receptori icircn determinismul obezităţii de tip central
nivelul expresiei relative a receptorilor PPARα fiind invers proporţional cu circumferinţa
abdominală
19 Icircn acelaşi timp nivelul de expresie a PPARα icircn sindromul metabolic este asociat pozitiv
cu concentraţia serică a HDL-colesterolului şi invers asociat cu nivelul trigliceridelor
serice dovedind rolul acestor receptori icircn diminuarea procesului inflamator cronic de la
nivel vascular
20 La pacienţii cu SM scăderea expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofile este corelată cu
creşterea unor markeri ai sindromului inflamator cronic cardiometabolic (acid uric
fibrinogen) ilustracircnd importanta receptorilor icircn reglarea status-ului inflamator cronic din
sindromul metabolic
21 Utilizarea metodei flowcitometrice pentru studiul expresiei relative a receptorilor PPARα
icircn leucocite a adus informaţii importante cu privire la mecanismele moleculare de control
implicate icircn patogenia bolilor cardiometabolice icircn concordanţă cu cercetările care descriu
expresia PPAR icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale bronşice
keratinocite)
BIBLIOGRAFIE SELECTIVA
1 Kahn R Metabolic syndrome- what is the clinical usefulness Lancet 2008371(9628)1892-3
2 Reaven GM The metabolic syndrome is this diagnosis necessary Am J Clin Nutr 2006 83(6)1237-7
3 Grundy SM Pre-Diabetes Metabolic Syndrome and Cardiovascular Risk J Am Coll Cardiol 201259(7)
635-43
4 International Diabetes Federation IDF Diabetes Atlas 6th edn International Diabetes Federation Belgium
Brussels 20131-155
5 World Health Organization Global Status Report on Noncommunicable Diseases 2010 World Health
Organization Geneva Switzerland 20111-176
6 Coman AE Petrovanu R Sindromul metabolic in practica de ambulator Editura Pim Iaşi 2009 1-103
7 Grundy SM Becker D Clark LT et alThird Report of the National Cholesterol Education Program (NCEP)
Expert Panel on Detection Evaluation and Treatment of High Blood Cholesterol in Adults (Adult
Treatment Panel III) Final Report Circulation 2002106(25)3143-90
8 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J Metabolic syndrome- a new worldwide definition A Consensus Statement
from the International Diabetes Federation Diabet Med 2006 23(5)469-80
9 KG Alberti KG Eckel RH Grundy SM etal International Diabetes Federation task force on epidemiology
and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart Association World Heart
Federation International Atherosclerosis Society International Association for the study of obesity
Harmonizing the metabolic syndrome a joint interim statement of the International Diabetes Federation task
force on epidemiology and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart
Association World Heart Federation International Atherosclerosis society and International Association
for the study of obesity Circulation 2009120(16)1640-5
10 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J IDF Epidemiology Task Force The metabolic syndrome new
worldwide definition Lancet 2005 366 1059 - 62
11 Oleszczyk M Svab I Seifert B et al Primary healthcare in the developing part of Europe changes and
development in the former Eastern Bloc countries that joined the European Union following 2004 Med Sci
Monit 2009(15)78ndash84
12 Jung U J Choi M S Obesity and Its Metabolic Complications The Role of Adipokines and the
Relationship between Obesity Inflammation Insulin Resistance Dyslipidemia and Nonalcoholic Fatty
Liver Disease Int J Mol Sci 2014rsquo15(4) 6184-223
13 Vanden Heuvel JP Peters JM Peroxisome Proliferators In Ramos K (ed) Cellular and Molecular
Toxicology (Second Edition) Volume 2 New York Elsevier Science Inc 2010 145 - 67
14 Yessoufou A Wahli W Multifaceted roles of peroxisome proliferator-activated receptors (PPARs) at the
cellular and whole organism levels Swiss Med Wkl 2010140w13071 doi104414smw201013071
15 Azhar S Peroxisome proliferator-activated receptors metabolic syndrome and cardiovascular disease
Future Cardiology 20106(5)657-91
16 Andries G Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity
Diabetes and Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(Suppl)24-32
17 Zandbergen F Plutzky J PPARalpha in atherosclerosis and inflammation Biochim Biophys Acta
20071771(8)972-82
18 Straus DS Glass CK Anti-inflammatory actions of PPAR ligands new insights on cellular and molecular
mechanisms Trends Immunol 200728(12)551-8
19 Zlei M Zugun- Eloae F Carasevici E Citometrie icircn flux - Bază şi clinică Icircn Hinescu ME (ed) Citometrie icircn
flux - principii şi aplicaţii clinice Bucureşti Editura Viaţa Medicală Romacircnească 20111-128
20 Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity Diabetes and
Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(9)24-32
21 Woerly G Honda K Loyens M et al Peroxisome proliferator-activated receptors alpha and gamma down-
regulate allergic inflammation and eosinophil activation J Exp Med 2003198(3)411-21
22 Salle-Saumont D Brenuchon C Kanda A et al Peroxisome proliferator-activated receptor alpha regulates
skin inflammation and humoral response in atopic dermatitis J Clin Allergy Immunology 2008 21(4)962-8
23 Schote A Turner J Schiltz J et al Nuclear receptors in human immune cells expression and correlations
Mol Immunolog 200744(6)1436-45
24 DAmore S Vacca M Graziano G et al Nuclear receptors expression chart icircn peripheral blood
mononuclear cells identifies patients with Metabolic Syndrome Biochim Biophys Acta
20131832(12)2289-301
25 Uthurralt J Gordish-Dressman H Bradbury M T et al PPARalpha L162V underlies variation in serum
triglycerides and subcutaneous fat volume in young males BMC Med Genet 2007855
26 Hiukka A Leinonen ES Jauhiainen M et al Long-term effects of fenofibrate on VLDL and HDL
subspecies icircn participants with type 2 diabetes mellitus Diabetologia 2007 50(10)2067-75
27 Robins SJ Rubins HB Faas FH et alInsulin resistance and cardiovascular events with low HDL
cholesterol The Veterans Affairs HDL Intervention Trial (VA-HIT) Diabetes Care 2003 26(5)1513-7
28 Devaraj S Siegel D Jialal I Statin Therapy in Metabolic Syndrome and Hypertension Post-JUPITER
What is the Value of CRP Curr Atheroscler Rep 2011 13(1) 31ndash42
29 Imperatore G Riccardi G Iovino C et al Plasma Fibrinogen A New Factor of the Metabolic Syndrome A
population-based study Diabetes Care 19982 1(4)649-54
30 Krysiak R Gdula-Dymek A Bachowski R Okopien B Pleiotropic effects of atorvastatin and fenofibrate
in metabolic syndrome and different types of pre-diabete Diabetes Care 201033(10)2266-70
31 Hermans MP Impact of Fenofibrate on Type 2 Diabetes Patients with Features of the Metabolic Syndrome
Subgroup Analysis From FIELD Curr Cardiol Rev 20106(2)112-8
32 Silverstein R Inflammation atherosclerosis and arterial thrombosis Role of the scavenger receptor CD36
Cleveland Clinic Journal of Medicine 200976(Suppl 2)S27-S30
33 Hăncu N Obezitatea In Vereşiu IA (ed) Diabetul zaharat nutritia si bolile metabolice Volume 2 Editura
Echinox Cluj- Napoca 2010 1-15
Lista lucrări publicate
1 Elena Popa Maria Maidaniuc Agnes Bacusca Alamir Diaa Rodica Petrovanu Adorata Elena
Coman Disfuncţia endotelială ndash de la mecanisme moleculare la cuantifi care şi tratament icircn practica
medicală Practica Medicală 20149(3) 109-14
2 Elena Popa Agnes Bacusca Alamir Diaa Maria Maidaniuc Rodica Petrovanu Adorata Elena Coman
The function of insulin receptor (IRF) in evolution of obesity correlation with adipocytes diameters
Archives of the Balkan Medical Union 201449(3) 275-9
3 Elena Popa Florin Zugun-Eloae Mihaela Zlei Daniela Jitaru Oana Maria Pintilie Adorata Elena
Coman Maria Traian Didona Anca Ungureanu Eugen Carasevici - acceptata pentru numarul 42014
Flow cytometry analysis of PPAR-alpha receptors in metabolic syndrome) Revista Romană de
Medicină de Laborator(RRLM-D-14-00034R1- adeverinţa ataşată
Figura 554 Corelaţii icircn SM icircntre HDL-col şi expresia PPARα icircn Mo (A) şi Eo(B)
Corelaţii icircntre nivelul de expresie relativă a PPARα şi markeri ai disfuncţiei
endoteliale şi inflamaţiei cronice
Deşi nu a icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică am reţinut corelaţia invers
proporţională (r = - 0331 P = 006) dintre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα
icircn PMN şi concentraţia serică a Non-HDL-colesterolului
Studiind relaţiile dintre parametri icircn lotul de pacienţi cu SM am observat o corelaţie
moderată invers proporţională icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Eo şi
acidul uric seric (figura 555 A) corelaţie absentă la subiecţii fără SM
Figura 555 Lot SM corelaţia dintre expresia PPARα icircn Eo şi acidul uric (A) respectiv
PPARα şi fibrinogen (B)
Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P=008) am notat pentru
pacienţii cu SM corelaţia invers proporţională dintre expresia PPARα icircn Eo şi concentraţia
serică a fibrinogenului ( figura 555B)
V5 Discuţii
Icircn cadrul lucrării de doctorat am studiat nivelul de expresie relativă a PPARα icircn
leucocitele pacienţilor cu SM comparativ cu cea a subiecţilor normali Expresia PPARα a fost
studiată icircn paralel cu cea a CD36 glicoproteină exprimată pe suprafaţa a numeroase celule
din organismul uman inclusiv pe cea a Mo şi macrofagelor Prin funcţia sa de receptor pentru
particulele oxidate de LDL CD36 cunoscut ca bdquoscavenger receptorrdquo de clasa B sau
bdquotrombospodin receptorrdquo contribuie la dezvoltarea inflamaţiei de la nivel endotelial şi
formarea plăcii de ateroscleroză Referitor la studiul PPARα icircn Eo icircn sindromul metabolic
menţionăm că studiul nostru este primul care arată că nivelul de expresie a proteinei PPARα
icircn Eo măsurat prin citometrie icircn flux este semnificativ mai redus la pacienţii care sunt
diagnosticaţi cu acest sindrom De asemenea icircn lotul cu SM cercetat icircn cadrul studiului
receptorilor PPARα numărul Eo circulante a fost semnificativ mai crescut la pacienţii cu SM
B
0 500 1000 1500 2000 2500 200
250
300
350
400
450
PPARα Eo o
Fibrinogen mgdl
r =- 036 P = 008
0 500 1000 1500 2000 2500 1 2 3 4 5 6 7 8 9
10 11
PPARα Eo_
Acid uric(mgdl) r = 048 P = 0014 A
0 500 1000 1500 2000 2500 10
20
30
40
50
60
70
80
PPARα Eo
HDL(mgdl)
r = 044 P = 0024
B
100 150 200 250 300 350 400 10
20
30
40
50
60
70
80
PPARα Mo
HDL( mgdl)
r = 046 P = 0019
A
(P = 003) Aceste constatări conduc la ipoteza că Eo joacă un rol special icircn mecanismele
patogenice declanşate icircn sindromul metabolic şi că receptorii PPARα sunt importanţi icircn
implicarea Eo icircn obezitate şi insulinorezistenţă Creşterea numărului de Eo circulante este
urmată de eliberarea mediatorilor proinflamatori iar reducerea expresiei PPARα icircn Eo
determină perturbarea mecanismelor de control al inflamaţiei cu exacerbarea cascadei
proinflamatorii Consecutiv se agravează disfuncţia endotelială şi se accelerează progresia
leziunilor de ateroscleroză Extrapolacircnd aceste ipoteze putem spune că asocierea raportată
dintre boala ischemică coronariană şi Eo poate fi şi consecinţa exacerbării cascadei
proinflamatorii de la nivel vascular produsă datorită scăderii expresiei PPARα icircn Eo iar
creşterea numărului de Eo circulante poate reprezenta o adaptare a organismului uman care
icircncearcă să suplinească deficitul de receptori PPARα Analizacircnd curba ROC pentru
intensităţile medii de fluorescenţă determinate pentru anticorpii anti- PPARα icircn Eo am
obţinut pentru acest biomarker o sensibilitate a testului de 565 şi o specificitate de 778
pentru un punct de cut-off de 1533 ( figura 536 ) Deşi aria AUC (Aria under the curve) egală
cu 0663 icircncadrează acest test ca avacircnd o acurateţe redusă observăm că că această valoare
este apropiată de determinările AUC pentru alţi factori (fibrinogen raport de aterogenitate
acid uric non- HDL-colesterol) cunoscuţi ca fiind implicaţi icircn aterogeneză şi inflamaţia
cronică (figura 431) Aceste remarci alături de faptul că icircn studiul receptorilor PPARα icircn
leucocite am inclus subiecţi la primul diagnostic de SM creează premisa integrării
determinării expresiei relative a receptorilor PPARα icircn diagnosticul complex al sindromului
metabolic Putem spune că icircn final studiul expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofilele
circulante se dovedește a fi util icircn diagnosticul precoce la nivel molecular al SM permiţacircnd
identificarea timpurie a unor indivizi cu risc cardiometabolic crescut Astfel intervenţia
precoce asupra subiecţilor cu deficit de PPARα icircn Eo contribuie la managementul eficient al
afecţiunilor degenerative icircn care inflamaţia cronică icircndeplineşte un rol primordial Referitor
la populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările efectuate prin citometrie de flux nu au
arătat existenţa unor diferenţe statistice icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα
la subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali Rezultatele noastre pot fi
consecinţa caracteristicilor loturilor studiate (icircn studiul nostru au fost incluşi subiecţi recrutaţi
la primul diagnostic de SM şi icircn absenţa stimulării receptorilor PPARα cu droguri agoniste
PPARα) dar icircn acelaşi timp pot apare diferenţe datorită metodei utilizate (231 232 233)
Făcacircnd o paralelă cu un studiu publicat icircn 2013 icircn Europa (231) care a arătat creşterea
nivelului de expresie al PPARα icircn Ly şi Mo observăm că deşi numărul de subiecţi a fost
aproximativ egal (57 participanţi icircn studiul nostru 60 icircn studiul DAmore) subiecţii icircn studiul
amintit au fost recrutaţi dintr-o clinică cu profil medical la primul diagnostic de SM icircn timp
ce metoda utilizată a fost PCR (Polymerase Chain Reaction) mult mai fidelă decacirct citometria
icircn flux icircn studiul receptorilor nucleari De asemenea DAmore nu investighează expresia
PPARα icircn Eo şi PMN icircn cercetare fiind incluse doar celulele CD14+ (predominant Mo) şi
CD14- (predominant Ly) Deşi nu am obţinut diferenţe statistic semnificative icircntre cele două
loturi referitoare la nivelul de expresie relativă a PPARα icircn Mo Ly şi PMN am observat
corelaţii puternice semnificative statistic icircntre expresia receptorilor PPARα icircn aceste tipuri
celulare Rezultatele obţinute sugerează existenţa unui mecanism diferit molecular de control
icircn eozinofile care reglează cantitatea de proteină PPARα icircn eozinofile versus alte tipuri de
leucocite (la pacienţii cu SM) şi acest lucru este icircn concordanţă cu cercetările care descriu
expresia PPARα mRNA icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale
bronşice keratinocite) Studiind prin citometrie de flux nivelul de expresie relativă a
receptorului CD36 la nivelul Mo am arătat prezenţa acestuia icircn Mo tuturor subiecţilor
investigaţi Analizacircnd valorile intensităţii medii de fluorescenţă a CD36 icircn loturile studiate
am observat o tendinţă de creştere la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali
confirmacircnd implicarea receptorului CD36 icircn patogeneza acestuia Referitor la expresia
receptorului CD36 rezultatele obţinute sunt icircn consens cu studii anterioare care au arătat
creşterea expresiei CD36 la pacienţii cu SM şi diabet zaharat Astfel pe lacircngă diferenţa icircn
expresia CD36 s-au raportat şi corelaţii inverse icircntre expresia proteinei CD36 şi nivelul
adiponectinei Acelaşi studiu a evidenţiat o corelaţie pozitivă intre expresia CD36 cu expresia
receptorilor PPAR gamma relaţia cu PPARα nefiind investigată
Analiza de subgrup a relaţiilor dintre componentele SM și elementele moleculare
proinflamatorii studiate a relevat prezenţa unor asocieri semnificativ statistice icircntre acestea
Se argumentează astfel că veridicitatea studiului este susţinută de interdependenţele statistice
ale componentelor SM Determinarea coeficientului de corelaţie Icircn studiul nostru nivelul de
expresie relativă a PPARα s-a corelat moderat negativ (figura 550) cu CA a subiecţilor din
lotul normal pentru populaţiile celulare de Mo (r = - 0420 P = 001) Ly (r = - 046 P =
0009) şi PMN (r = - 040 P = 0024) date care sunt icircn concordanţă cu studiile care arată
rolul PPARα icircn furnizarea energiei prin beta-oxidarea acizilor graşi Icircn acelaşi timp icircn lotul
pacienţilor cu SM nu am identificat prezenţa unei asocieri icircntre nivelul de expresie relativă a
PPARα şi valoarea măsurată a CA Asocierea dintre expresia relativă a PPARα cu obezitatea
de tip central completează datele existente referitoare la reglarea homeostaziei energetice
conturacircnd un mecanism de control deficitar al aportului caloric al SM Icircn condiţiile icircn care
rezultatele obţinute prin metoda citometriei icircn flux nu au arătat existenţa unei corelaţii intre
expresia PPARα şi CA la pacienţii cu SM considerăm că ar fi necesar studiul
polimorfismului genei PPARA care ar putea aduce informaţii importante cu privire la
implicarea acestor receptori icircn apariţia obezităţii de tip central Subliniem acest lucru deoarece
obezitatea este o boală plurifactorială icircn care pe lacircngă factorii ereditari sunt implicaţi factori
de mediu psihologici şi sociali (245) Existenţa unei componente genetice a aterosclerozei
este legată şi de prezenţa unor variante ale genei PPARA asociate cu creşterea incidenţei bolii
cardiovasculare (82) şi a SM (249) Icircn studiul nostru am constatat o scădere statistic
semnificativă a nivelului expresiei relative a receptorilor PPARα icircn Eo la subiecţii cu
antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială comparativ cu subiecţii fără istoric
familial de hipertensiune (figura 537) Deşi diferenţele calculate icircntre loturile studiate nu au
icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică la subiecţii care au declarat prezenţa
antecedentelor familiale de hipertensiune arterială remarcăm o tendinţă de scădere a
intensităţii medii de fluorescenţă pentru Ac anti-PPARα la nivelul Mo (figura 515 P = 006
) icircn timp ce expresia relativă a CD36 icircnregistrează o creştere la acesti subiecţi (figura 545 P
= 008) Icircn contextul riscului cardiovascular foarte icircnalt al pacienţilor cu SM amintim şi
existenţa corelaţiei pozitive dintre valorile tensiunii arteriale diastolice şi expresia relativă a
receptorului CD36 (r = 0483 P = 0013) Această constatare este icircn consens cu studiile care
au arătat că forma solubilă circulantă a CD36 este asociată cu factorii de risc cardiovasculari
fiind propusă ca un marker precoce al aterosclerozei Activarea PPARα este asociată cu
modularea metabolismului lipidic iar agoniştii PPARα sunt utilizaţi icircn mod curent pentru
tratamentul dislipidemiei Sub acţiunea agoniştilor PPARα se obţine o icircmbunătăţire a funcţiei
endoteliale şi a parametrilor reologici funcţiile pleiotropice ale agoniştilor PPARα fiind
dovedite icircn trialuri clinice controlate Icircn populaţiile de Mo şi Ly la pacienţii cu SM
cercetarea noastră a evidenţiat o asociere negativă icircntre nivelul de expresie relativă a
receptorilor PPARα şi concentraţia TG serice (figura 551) Astfel scăderea expresiei
receptorilor PPARα este asociată cu creşterea nivelului TG serice contribuind la profilul
lipidic aterogen din SM Icircn conformitate cu literatura de specialitate icircn studiul efectuat prin
metoda citometriei icircn flux am găsit prezenţa asocierii icircntre nivelul de expresie al PPARα şi
HDL-colesterol Corelaţia pozitivă dintre nivelul de expresie relativă PPARα şi concentraţia
HDL-colesterolului a fost observată icircn lotul martor icircn populaţiile de Mo (r = 035 P = 005)
şi Ly ( r = 036 P = 004) (figura 553) susţinacircnd faptul că stimularea receptorilor PPARα
este legată de creşterea nivelului seric al lipoproteinelor cu densitate crescută La pacienţii cu
SM corelaţia dintre expresia PPARα şi HDL-colesterol a fost evidenţiată icircn populaţiile de Mo
(r = 046 P = 0019) şi eozinofile (r = 044 P = 0024) Se desprinde concluzia că icircn
sindromul metabolic scăderea concentraţiei HDL-colesterol este legată de diminuarea
nivelului de expresie relativă a receptorilor nucleari PPARα icircntărind afirmaţiile legate de
rolul acestor receptori icircn progresia bolilor cardiovasculare Studiind reactanţii de fază acută
analiza statistică a relevat o diferenţă semnificativă din punct de vedere statistic icircntre valorile
fibrinogenului la pacienţii cu SM atunci cacircnd au fost comparaţi cu subiecţii fără SM
(Capitolul IV4 P lt0 001 figura 427A) De asemenea icircn Capitolul V dedicat studiul
expresiei relative a receptorilor PPARα studiul valorilor fibrinogenului a arătat creşterea
acestui reactant de faza acută icircn lotul cu SM comparativ cu lotul martor (P lt0 0001) Icircn
studiul nostru am calculat o corelaţie invers proporţionala (r = - -036 fig 555B) icircntre
nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile şi concentraţia serică a
fibrinogenului Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P = 008) am reţinut
această asociere deoarece am demonstrat că nivelul de expresie relativă al receptorilor
PPARα icircn eozinofile este mai scăzut icircn sindromul metabolic iar sindromul metabolic este
caracterizat printr-un status inflamator cronic status caracterizat şi de creşterea concentraţiei
serice a fibrinogenului De asemenea notam ca această corelaţie negativă se află icircn
concordanţă cu studiile care arata că tratamentul cu agonişti PPARα (fibraţi) determina
scăderea nivelului seric al fibrinogenului contribuind la diminuarea inflamaţiei cronice din
sindromul metabolic şi icircn consecinţă amelioracircnd insulinorezistenţa
LIMITE ȘI DIFICULTĂȚI IcircN CERCETARE
Icircn cadrul Tezei de Doctorat am desfăşurat o cercetare care şi-a propus studierea
expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Recrutarea anamneza şi examinarea
clinică a subiecţilor au fost realizate icircn cadrul Cabinetului de Medicină de Familie CMI Popa
Elena din Iaşi iar determinările hematologice şi biochimice s-au efectuat icircn cadrul
Laboratorului Ambulatorului de Specialitate al Spitalului Universitar ldquoSfacircntul Spiridon din
Iaşi Icircn studiul epidemiologic şi al markerilor inflamatori al sindromului metabolic desfăşurat
au fost incluşi un număr de 1530 de participanţi pe baza liberului consimţămacircnt examinaţi icircn
perioada 01012013 - 31122013 Icircn continuare icircn perioada 1012014 - 28022014 pe baza
criteriilor de includere şi excludere icircn cele două loturi de studiu am investigat un număr de 57
de subiecţi prezentaţi la consultaţie icircn această perioadă şi care au icircndeplinit criteriile de
includere icircn cele două loturi (Lot SM şi Lot Control) constituite pentru evaluarea nivelului de
expresie a receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Explorarea nivelului de expresie
relativă a receptorilor PPARα s-a desfăşurat icircn cadrul Laboratorului de Biologie Moleculară
de pe platforma Institutului Regional de Oncologie Datorită resurselor proprii financiare
limitate trebuie să subliniez că aceasta cercetare nu ar fi fost posibilă fără contribuţia unor
cercetători din domeniul medical care m-au sprijinit necondiţionat atacirct icircn elaborarea
protocolului de lucru cacirct şi icircn efectuarea propriu-zisă a studiului Icircn acest sens menţionăm şi
faptul că pentru studiul receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic am utilizat aparatura
Laboratorului de Biologie Moleculară (care deserveşte icircntreaga Regiune a Moldovei) Pe
această cale mulţumesc personalului Laboratorului de Biologie Moleculară pentru ajutorul
acordat icircn desfăşurarea cercetării doctorale icircn condiţiile icircn care se observa creşterea
numărului de pacienţi care se adresează acestei platforme de cercetare Mulţumesc de
asemenea şi Doamnei Doctor Elena Butoi din cadrul Institutului de Biologie şi Patologie
Moleculară ldquoNicolae Simionescurdquo Bucureşti) pentru donaţia anticorpului secundar anti-
FITC Icircn consecinţă pentru recrutarea unui număr mai mare de participanţi ar fi fost necesară
icircn primul racircnd obţinerea unor resurse financiare suplimentare pentru achiziţia de aparatură şi
reactivi Totuşi numărul subiecţilor recrutaţi este apropiat de numărul subiecţilor raportaţi icircn
cadrul unor granturi de cercetare care aveau ca ţinta studiul expresiei receptorilor PPARα
(212 227 228 231) Rezultatele obţinute continua seria lucrărilor care arata importanta
studiului mecanismelor etiopatogenice ale sindromului metabolic patologie care se afla icircntr-o
continuă creştere La pacienţii cu SM pe lacircngă diminuarea nivelului de expresie a receptorilor
PPARα icircn eozinofile ne aşteptam şi la evidenţierea unor modificări icircn expresia PPARα şi icircn
populaţiile de Ly Mo şi PMN Acest fapt poate fi explicat de utilizarea unor celule provenite
de la pacienţi fără afectare cardiovasculară fără diabet zaharat şi necesită continuarea
studiului pe culturi celulare icircn condiţii de stimulare cu agonişti PPARα deziderat care
impune continuarea investigării expresiei PPARα printr-un grant de cercetare
ORIGINALITATEA ȘI CONTRIBUȚIILE INOVATIVE ALE TEZEI DE
DOCTORAT PERSPECTIVE DE CERCETARE
Evaluarea nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn leucocitele circulante
aduce noi perspective icircn studiul obezităţii şi sindromului metabolic Importanta studiului
expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic derivă din prevalenta crescută a
sindromului metabolic icircn populaţia cercetată la care se adaugă riscul cardiovascular foarte
icircnalt al acestor pacienţi cu implicaţii majore icircn sănătatea publică Rolul receptorilor PPARα
icircn inflamaţie şi aterogeneza este binecunoscut dar studiul nostru este primul care a arătat că
nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα este semnificativ mai scăzut in populatiile
de eozinofile la pacienţii cu SM Această concluzie coroborata cu existenţa unei stracircnse
asocieri intre expresia receptorilor PPARα la nivelul Mo limfocitelor şi PMNlor creeaza
ipoteza existenţei unui mecanism de control diferit al expresiei PPARα la nivelul
eozinofilelor Această cercetare aduce informaţii importante referitoare la mecanismele
proinflamatorii care stau la baza insulinorezistenţei şi riscului cardiometabolic şi impune
continuarea studiului acestor receptori nucleari prin citometrie icircn flux metodă care poate fi
aplicată şi la scara mai largă dacă sunt asigurate resursele materiale necesare cercetării
Cercetarea prin citometrie icircn flux poate fi completată de studiul polimorfismului genei
PPARA şi astfel se pot identifica timpuriu indivizii cu potenţial risc cardiometabolic crescut
Studiul receptorilor PPARα a stabilit conexiuni cu factori proinflamatori şi aterogenetici iar
continuarea cercetării poate aduce şi elemente noi de diagnostic precoce icircn sindromul
metabolic contribuind la icircmbunătăţirea prognosticului acestor pacienţi
CONCLUZII FINALE
1 Aplicarea scorului de SM alături de implementarea algoritmului electronic de diagnostic
contribuie la o prelucrare rapidă eficientă și standardizată a informaţiilor la nivelul
medicinei primare
2 Prevalenţa SM calculată astfel icircn cadrul studiului este crescută (2732) icircn concordanţă
cu datele raportate
3 Controlul factorilor de risc cardiometabolici incluşi icircn SM se poate realiza prin
managementul stilului de viaţă (scăderea greutăţii corporale prin combaterea
sedentarismului şi adoptarea unei diete antiaterogene şi hipocalorice) şi administrarea
terapiei medicamentoase
4 Este necesară adoptarea unei politici de sănătate publică pentru prevenirea creşterii icircn
populaţie a prevalenţei obezităţii şi a diabetului zaharat
5 Noi metode de cercetare icircn domeniul SM axate pe diagnosticarea precoce şi cuantificarea
eficientă a acestuia duce la diminuarea incidenței evenimentelor cardiovasculare majore
6 Sindromul metabolic se caracterizează printr-un status inflamator cronic
7 Valorile Non-HDL-colesterolului şi a raportului de aterogenitate sunt semnificativ mai
mari la pacienţii cu SM
8 Dintre reactanţii de faza acută am observat că valoarea medie a fibrinogenului este mai
crescută icircn lotul cu SM
9 Valorile eozinofilelor sunt crescute icircn sindromul metabolic iar explorarea relaţiei dintre
eozinofile şi obezitate constituie una din direcţiile de studiu actuale ale sindromului
metabolic
10 Evaluarea markerilor inflamatori icircn contextul sindromului metabolic este utilă icircn
evaluarea complexă a a factorilor de risc cardiometabolici
11 Prin metoda citometriei icircn flux am demonstrat prezenta Receptorilor Activaţi de
Inductorii Proliferării Peroxizomilor ndash Alpha (PPARα) icircn toate populaţiile de leucocite
studiate (Mo limfocite PMN eozinofile) atacirct icircn lotul pacienţilor cu SM cacirct şi icircn lotul
martor
12 Utilizacircnd intensitatea medie de fluorescenţă a anticorpilor anti- PPARα am arătat că
nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile este semnificativ mai redus
la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali
13 Acest studiu este primul care a demonstrat existenţa unei scăderi statistic semnificative a
nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofilele pacienţilor cu SM
confirmacircnd cercetările recente care au evidenţiat rolul eozinofilelor şi al receptorilor
PPARα icircn obezitate reglarea inflamaţiei cronice şi aterogeneza
14 Contrar aşteptărilor noastre icircn populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările
efectuate icircn cele două loturi de studiu (cu şi fără sindom metabolic) nu am evidenţiat
diferenţe statistic seminificative icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα la
subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali
15 Icircn populaţiile de Mo limfocite şi polimorfonucleare am observat corelaţii puternice
semnificativ statistic icircntre expresia PPARα icircn aceste tipuri celulare sugeracircnd existenţa
unui mecanism unic de control al inflamaţiei cronice la nivelul acestor celule probabil
diferit de cel din eozinofile
16 La subiecţii cu SM expresia relativă a PPARα icircn Eo este invers asociată cu expresia
receptorului CD36 (receptor al particulelor de ox - LDL şi propus ca un marker precoce al
aterosclerozei) dovedind rolul antiinflamator al receptorilor PPARα la nivel endotelial
17 La pacienţii cu antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială nivelul de
expresie al receptorilor PPARα icircn eozinofile şi Mo este diminuat comparativ cu subiecţii
fără antecedente familiale de hipertensiune arterială Putem spune că studiul efectuat de
noi aduce informaţii importante legate de geneză aterosclerozei şi hipertensiunii arteriale
18 Prin studiul asocierilor dintre receptorii PPARα şi componentele clinice ale sindromului
metabolic am arătat rolul acestor receptori icircn determinismul obezităţii de tip central
nivelul expresiei relative a receptorilor PPARα fiind invers proporţional cu circumferinţa
abdominală
19 Icircn acelaşi timp nivelul de expresie a PPARα icircn sindromul metabolic este asociat pozitiv
cu concentraţia serică a HDL-colesterolului şi invers asociat cu nivelul trigliceridelor
serice dovedind rolul acestor receptori icircn diminuarea procesului inflamator cronic de la
nivel vascular
20 La pacienţii cu SM scăderea expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofile este corelată cu
creşterea unor markeri ai sindromului inflamator cronic cardiometabolic (acid uric
fibrinogen) ilustracircnd importanta receptorilor icircn reglarea status-ului inflamator cronic din
sindromul metabolic
21 Utilizarea metodei flowcitometrice pentru studiul expresiei relative a receptorilor PPARα
icircn leucocite a adus informaţii importante cu privire la mecanismele moleculare de control
implicate icircn patogenia bolilor cardiometabolice icircn concordanţă cu cercetările care descriu
expresia PPAR icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale bronşice
keratinocite)
BIBLIOGRAFIE SELECTIVA
1 Kahn R Metabolic syndrome- what is the clinical usefulness Lancet 2008371(9628)1892-3
2 Reaven GM The metabolic syndrome is this diagnosis necessary Am J Clin Nutr 2006 83(6)1237-7
3 Grundy SM Pre-Diabetes Metabolic Syndrome and Cardiovascular Risk J Am Coll Cardiol 201259(7)
635-43
4 International Diabetes Federation IDF Diabetes Atlas 6th edn International Diabetes Federation Belgium
Brussels 20131-155
5 World Health Organization Global Status Report on Noncommunicable Diseases 2010 World Health
Organization Geneva Switzerland 20111-176
6 Coman AE Petrovanu R Sindromul metabolic in practica de ambulator Editura Pim Iaşi 2009 1-103
7 Grundy SM Becker D Clark LT et alThird Report of the National Cholesterol Education Program (NCEP)
Expert Panel on Detection Evaluation and Treatment of High Blood Cholesterol in Adults (Adult
Treatment Panel III) Final Report Circulation 2002106(25)3143-90
8 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J Metabolic syndrome- a new worldwide definition A Consensus Statement
from the International Diabetes Federation Diabet Med 2006 23(5)469-80
9 KG Alberti KG Eckel RH Grundy SM etal International Diabetes Federation task force on epidemiology
and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart Association World Heart
Federation International Atherosclerosis Society International Association for the study of obesity
Harmonizing the metabolic syndrome a joint interim statement of the International Diabetes Federation task
force on epidemiology and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart
Association World Heart Federation International Atherosclerosis society and International Association
for the study of obesity Circulation 2009120(16)1640-5
10 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J IDF Epidemiology Task Force The metabolic syndrome new
worldwide definition Lancet 2005 366 1059 - 62
11 Oleszczyk M Svab I Seifert B et al Primary healthcare in the developing part of Europe changes and
development in the former Eastern Bloc countries that joined the European Union following 2004 Med Sci
Monit 2009(15)78ndash84
12 Jung U J Choi M S Obesity and Its Metabolic Complications The Role of Adipokines and the
Relationship between Obesity Inflammation Insulin Resistance Dyslipidemia and Nonalcoholic Fatty
Liver Disease Int J Mol Sci 2014rsquo15(4) 6184-223
13 Vanden Heuvel JP Peters JM Peroxisome Proliferators In Ramos K (ed) Cellular and Molecular
Toxicology (Second Edition) Volume 2 New York Elsevier Science Inc 2010 145 - 67
14 Yessoufou A Wahli W Multifaceted roles of peroxisome proliferator-activated receptors (PPARs) at the
cellular and whole organism levels Swiss Med Wkl 2010140w13071 doi104414smw201013071
15 Azhar S Peroxisome proliferator-activated receptors metabolic syndrome and cardiovascular disease
Future Cardiology 20106(5)657-91
16 Andries G Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity
Diabetes and Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(Suppl)24-32
17 Zandbergen F Plutzky J PPARalpha in atherosclerosis and inflammation Biochim Biophys Acta
20071771(8)972-82
18 Straus DS Glass CK Anti-inflammatory actions of PPAR ligands new insights on cellular and molecular
mechanisms Trends Immunol 200728(12)551-8
19 Zlei M Zugun- Eloae F Carasevici E Citometrie icircn flux - Bază şi clinică Icircn Hinescu ME (ed) Citometrie icircn
flux - principii şi aplicaţii clinice Bucureşti Editura Viaţa Medicală Romacircnească 20111-128
20 Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity Diabetes and
Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(9)24-32
21 Woerly G Honda K Loyens M et al Peroxisome proliferator-activated receptors alpha and gamma down-
regulate allergic inflammation and eosinophil activation J Exp Med 2003198(3)411-21
22 Salle-Saumont D Brenuchon C Kanda A et al Peroxisome proliferator-activated receptor alpha regulates
skin inflammation and humoral response in atopic dermatitis J Clin Allergy Immunology 2008 21(4)962-8
23 Schote A Turner J Schiltz J et al Nuclear receptors in human immune cells expression and correlations
Mol Immunolog 200744(6)1436-45
24 DAmore S Vacca M Graziano G et al Nuclear receptors expression chart icircn peripheral blood
mononuclear cells identifies patients with Metabolic Syndrome Biochim Biophys Acta
20131832(12)2289-301
25 Uthurralt J Gordish-Dressman H Bradbury M T et al PPARalpha L162V underlies variation in serum
triglycerides and subcutaneous fat volume in young males BMC Med Genet 2007855
26 Hiukka A Leinonen ES Jauhiainen M et al Long-term effects of fenofibrate on VLDL and HDL
subspecies icircn participants with type 2 diabetes mellitus Diabetologia 2007 50(10)2067-75
27 Robins SJ Rubins HB Faas FH et alInsulin resistance and cardiovascular events with low HDL
cholesterol The Veterans Affairs HDL Intervention Trial (VA-HIT) Diabetes Care 2003 26(5)1513-7
28 Devaraj S Siegel D Jialal I Statin Therapy in Metabolic Syndrome and Hypertension Post-JUPITER
What is the Value of CRP Curr Atheroscler Rep 2011 13(1) 31ndash42
29 Imperatore G Riccardi G Iovino C et al Plasma Fibrinogen A New Factor of the Metabolic Syndrome A
population-based study Diabetes Care 19982 1(4)649-54
30 Krysiak R Gdula-Dymek A Bachowski R Okopien B Pleiotropic effects of atorvastatin and fenofibrate
in metabolic syndrome and different types of pre-diabete Diabetes Care 201033(10)2266-70
31 Hermans MP Impact of Fenofibrate on Type 2 Diabetes Patients with Features of the Metabolic Syndrome
Subgroup Analysis From FIELD Curr Cardiol Rev 20106(2)112-8
32 Silverstein R Inflammation atherosclerosis and arterial thrombosis Role of the scavenger receptor CD36
Cleveland Clinic Journal of Medicine 200976(Suppl 2)S27-S30
33 Hăncu N Obezitatea In Vereşiu IA (ed) Diabetul zaharat nutritia si bolile metabolice Volume 2 Editura
Echinox Cluj- Napoca 2010 1-15
Lista lucrări publicate
1 Elena Popa Maria Maidaniuc Agnes Bacusca Alamir Diaa Rodica Petrovanu Adorata Elena
Coman Disfuncţia endotelială ndash de la mecanisme moleculare la cuantifi care şi tratament icircn practica
medicală Practica Medicală 20149(3) 109-14
2 Elena Popa Agnes Bacusca Alamir Diaa Maria Maidaniuc Rodica Petrovanu Adorata Elena Coman
The function of insulin receptor (IRF) in evolution of obesity correlation with adipocytes diameters
Archives of the Balkan Medical Union 201449(3) 275-9
3 Elena Popa Florin Zugun-Eloae Mihaela Zlei Daniela Jitaru Oana Maria Pintilie Adorata Elena
Coman Maria Traian Didona Anca Ungureanu Eugen Carasevici - acceptata pentru numarul 42014
Flow cytometry analysis of PPAR-alpha receptors in metabolic syndrome) Revista Romană de
Medicină de Laborator(RRLM-D-14-00034R1- adeverinţa ataşată
(P = 003) Aceste constatări conduc la ipoteza că Eo joacă un rol special icircn mecanismele
patogenice declanşate icircn sindromul metabolic şi că receptorii PPARα sunt importanţi icircn
implicarea Eo icircn obezitate şi insulinorezistenţă Creşterea numărului de Eo circulante este
urmată de eliberarea mediatorilor proinflamatori iar reducerea expresiei PPARα icircn Eo
determină perturbarea mecanismelor de control al inflamaţiei cu exacerbarea cascadei
proinflamatorii Consecutiv se agravează disfuncţia endotelială şi se accelerează progresia
leziunilor de ateroscleroză Extrapolacircnd aceste ipoteze putem spune că asocierea raportată
dintre boala ischemică coronariană şi Eo poate fi şi consecinţa exacerbării cascadei
proinflamatorii de la nivel vascular produsă datorită scăderii expresiei PPARα icircn Eo iar
creşterea numărului de Eo circulante poate reprezenta o adaptare a organismului uman care
icircncearcă să suplinească deficitul de receptori PPARα Analizacircnd curba ROC pentru
intensităţile medii de fluorescenţă determinate pentru anticorpii anti- PPARα icircn Eo am
obţinut pentru acest biomarker o sensibilitate a testului de 565 şi o specificitate de 778
pentru un punct de cut-off de 1533 ( figura 536 ) Deşi aria AUC (Aria under the curve) egală
cu 0663 icircncadrează acest test ca avacircnd o acurateţe redusă observăm că că această valoare
este apropiată de determinările AUC pentru alţi factori (fibrinogen raport de aterogenitate
acid uric non- HDL-colesterol) cunoscuţi ca fiind implicaţi icircn aterogeneză şi inflamaţia
cronică (figura 431) Aceste remarci alături de faptul că icircn studiul receptorilor PPARα icircn
leucocite am inclus subiecţi la primul diagnostic de SM creează premisa integrării
determinării expresiei relative a receptorilor PPARα icircn diagnosticul complex al sindromului
metabolic Putem spune că icircn final studiul expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofilele
circulante se dovedește a fi util icircn diagnosticul precoce la nivel molecular al SM permiţacircnd
identificarea timpurie a unor indivizi cu risc cardiometabolic crescut Astfel intervenţia
precoce asupra subiecţilor cu deficit de PPARα icircn Eo contribuie la managementul eficient al
afecţiunilor degenerative icircn care inflamaţia cronică icircndeplineşte un rol primordial Referitor
la populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările efectuate prin citometrie de flux nu au
arătat existenţa unor diferenţe statistice icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα
la subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali Rezultatele noastre pot fi
consecinţa caracteristicilor loturilor studiate (icircn studiul nostru au fost incluşi subiecţi recrutaţi
la primul diagnostic de SM şi icircn absenţa stimulării receptorilor PPARα cu droguri agoniste
PPARα) dar icircn acelaşi timp pot apare diferenţe datorită metodei utilizate (231 232 233)
Făcacircnd o paralelă cu un studiu publicat icircn 2013 icircn Europa (231) care a arătat creşterea
nivelului de expresie al PPARα icircn Ly şi Mo observăm că deşi numărul de subiecţi a fost
aproximativ egal (57 participanţi icircn studiul nostru 60 icircn studiul DAmore) subiecţii icircn studiul
amintit au fost recrutaţi dintr-o clinică cu profil medical la primul diagnostic de SM icircn timp
ce metoda utilizată a fost PCR (Polymerase Chain Reaction) mult mai fidelă decacirct citometria
icircn flux icircn studiul receptorilor nucleari De asemenea DAmore nu investighează expresia
PPARα icircn Eo şi PMN icircn cercetare fiind incluse doar celulele CD14+ (predominant Mo) şi
CD14- (predominant Ly) Deşi nu am obţinut diferenţe statistic semnificative icircntre cele două
loturi referitoare la nivelul de expresie relativă a PPARα icircn Mo Ly şi PMN am observat
corelaţii puternice semnificative statistic icircntre expresia receptorilor PPARα icircn aceste tipuri
celulare Rezultatele obţinute sugerează existenţa unui mecanism diferit molecular de control
icircn eozinofile care reglează cantitatea de proteină PPARα icircn eozinofile versus alte tipuri de
leucocite (la pacienţii cu SM) şi acest lucru este icircn concordanţă cu cercetările care descriu
expresia PPARα mRNA icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale
bronşice keratinocite) Studiind prin citometrie de flux nivelul de expresie relativă a
receptorului CD36 la nivelul Mo am arătat prezenţa acestuia icircn Mo tuturor subiecţilor
investigaţi Analizacircnd valorile intensităţii medii de fluorescenţă a CD36 icircn loturile studiate
am observat o tendinţă de creştere la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali
confirmacircnd implicarea receptorului CD36 icircn patogeneza acestuia Referitor la expresia
receptorului CD36 rezultatele obţinute sunt icircn consens cu studii anterioare care au arătat
creşterea expresiei CD36 la pacienţii cu SM şi diabet zaharat Astfel pe lacircngă diferenţa icircn
expresia CD36 s-au raportat şi corelaţii inverse icircntre expresia proteinei CD36 şi nivelul
adiponectinei Acelaşi studiu a evidenţiat o corelaţie pozitivă intre expresia CD36 cu expresia
receptorilor PPAR gamma relaţia cu PPARα nefiind investigată
Analiza de subgrup a relaţiilor dintre componentele SM și elementele moleculare
proinflamatorii studiate a relevat prezenţa unor asocieri semnificativ statistice icircntre acestea
Se argumentează astfel că veridicitatea studiului este susţinută de interdependenţele statistice
ale componentelor SM Determinarea coeficientului de corelaţie Icircn studiul nostru nivelul de
expresie relativă a PPARα s-a corelat moderat negativ (figura 550) cu CA a subiecţilor din
lotul normal pentru populaţiile celulare de Mo (r = - 0420 P = 001) Ly (r = - 046 P =
0009) şi PMN (r = - 040 P = 0024) date care sunt icircn concordanţă cu studiile care arată
rolul PPARα icircn furnizarea energiei prin beta-oxidarea acizilor graşi Icircn acelaşi timp icircn lotul
pacienţilor cu SM nu am identificat prezenţa unei asocieri icircntre nivelul de expresie relativă a
PPARα şi valoarea măsurată a CA Asocierea dintre expresia relativă a PPARα cu obezitatea
de tip central completează datele existente referitoare la reglarea homeostaziei energetice
conturacircnd un mecanism de control deficitar al aportului caloric al SM Icircn condiţiile icircn care
rezultatele obţinute prin metoda citometriei icircn flux nu au arătat existenţa unei corelaţii intre
expresia PPARα şi CA la pacienţii cu SM considerăm că ar fi necesar studiul
polimorfismului genei PPARA care ar putea aduce informaţii importante cu privire la
implicarea acestor receptori icircn apariţia obezităţii de tip central Subliniem acest lucru deoarece
obezitatea este o boală plurifactorială icircn care pe lacircngă factorii ereditari sunt implicaţi factori
de mediu psihologici şi sociali (245) Existenţa unei componente genetice a aterosclerozei
este legată şi de prezenţa unor variante ale genei PPARA asociate cu creşterea incidenţei bolii
cardiovasculare (82) şi a SM (249) Icircn studiul nostru am constatat o scădere statistic
semnificativă a nivelului expresiei relative a receptorilor PPARα icircn Eo la subiecţii cu
antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială comparativ cu subiecţii fără istoric
familial de hipertensiune (figura 537) Deşi diferenţele calculate icircntre loturile studiate nu au
icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică la subiecţii care au declarat prezenţa
antecedentelor familiale de hipertensiune arterială remarcăm o tendinţă de scădere a
intensităţii medii de fluorescenţă pentru Ac anti-PPARα la nivelul Mo (figura 515 P = 006
) icircn timp ce expresia relativă a CD36 icircnregistrează o creştere la acesti subiecţi (figura 545 P
= 008) Icircn contextul riscului cardiovascular foarte icircnalt al pacienţilor cu SM amintim şi
existenţa corelaţiei pozitive dintre valorile tensiunii arteriale diastolice şi expresia relativă a
receptorului CD36 (r = 0483 P = 0013) Această constatare este icircn consens cu studiile care
au arătat că forma solubilă circulantă a CD36 este asociată cu factorii de risc cardiovasculari
fiind propusă ca un marker precoce al aterosclerozei Activarea PPARα este asociată cu
modularea metabolismului lipidic iar agoniştii PPARα sunt utilizaţi icircn mod curent pentru
tratamentul dislipidemiei Sub acţiunea agoniştilor PPARα se obţine o icircmbunătăţire a funcţiei
endoteliale şi a parametrilor reologici funcţiile pleiotropice ale agoniştilor PPARα fiind
dovedite icircn trialuri clinice controlate Icircn populaţiile de Mo şi Ly la pacienţii cu SM
cercetarea noastră a evidenţiat o asociere negativă icircntre nivelul de expresie relativă a
receptorilor PPARα şi concentraţia TG serice (figura 551) Astfel scăderea expresiei
receptorilor PPARα este asociată cu creşterea nivelului TG serice contribuind la profilul
lipidic aterogen din SM Icircn conformitate cu literatura de specialitate icircn studiul efectuat prin
metoda citometriei icircn flux am găsit prezenţa asocierii icircntre nivelul de expresie al PPARα şi
HDL-colesterol Corelaţia pozitivă dintre nivelul de expresie relativă PPARα şi concentraţia
HDL-colesterolului a fost observată icircn lotul martor icircn populaţiile de Mo (r = 035 P = 005)
şi Ly ( r = 036 P = 004) (figura 553) susţinacircnd faptul că stimularea receptorilor PPARα
este legată de creşterea nivelului seric al lipoproteinelor cu densitate crescută La pacienţii cu
SM corelaţia dintre expresia PPARα şi HDL-colesterol a fost evidenţiată icircn populaţiile de Mo
(r = 046 P = 0019) şi eozinofile (r = 044 P = 0024) Se desprinde concluzia că icircn
sindromul metabolic scăderea concentraţiei HDL-colesterol este legată de diminuarea
nivelului de expresie relativă a receptorilor nucleari PPARα icircntărind afirmaţiile legate de
rolul acestor receptori icircn progresia bolilor cardiovasculare Studiind reactanţii de fază acută
analiza statistică a relevat o diferenţă semnificativă din punct de vedere statistic icircntre valorile
fibrinogenului la pacienţii cu SM atunci cacircnd au fost comparaţi cu subiecţii fără SM
(Capitolul IV4 P lt0 001 figura 427A) De asemenea icircn Capitolul V dedicat studiul
expresiei relative a receptorilor PPARα studiul valorilor fibrinogenului a arătat creşterea
acestui reactant de faza acută icircn lotul cu SM comparativ cu lotul martor (P lt0 0001) Icircn
studiul nostru am calculat o corelaţie invers proporţionala (r = - -036 fig 555B) icircntre
nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile şi concentraţia serică a
fibrinogenului Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P = 008) am reţinut
această asociere deoarece am demonstrat că nivelul de expresie relativă al receptorilor
PPARα icircn eozinofile este mai scăzut icircn sindromul metabolic iar sindromul metabolic este
caracterizat printr-un status inflamator cronic status caracterizat şi de creşterea concentraţiei
serice a fibrinogenului De asemenea notam ca această corelaţie negativă se află icircn
concordanţă cu studiile care arata că tratamentul cu agonişti PPARα (fibraţi) determina
scăderea nivelului seric al fibrinogenului contribuind la diminuarea inflamaţiei cronice din
sindromul metabolic şi icircn consecinţă amelioracircnd insulinorezistenţa
LIMITE ȘI DIFICULTĂȚI IcircN CERCETARE
Icircn cadrul Tezei de Doctorat am desfăşurat o cercetare care şi-a propus studierea
expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Recrutarea anamneza şi examinarea
clinică a subiecţilor au fost realizate icircn cadrul Cabinetului de Medicină de Familie CMI Popa
Elena din Iaşi iar determinările hematologice şi biochimice s-au efectuat icircn cadrul
Laboratorului Ambulatorului de Specialitate al Spitalului Universitar ldquoSfacircntul Spiridon din
Iaşi Icircn studiul epidemiologic şi al markerilor inflamatori al sindromului metabolic desfăşurat
au fost incluşi un număr de 1530 de participanţi pe baza liberului consimţămacircnt examinaţi icircn
perioada 01012013 - 31122013 Icircn continuare icircn perioada 1012014 - 28022014 pe baza
criteriilor de includere şi excludere icircn cele două loturi de studiu am investigat un număr de 57
de subiecţi prezentaţi la consultaţie icircn această perioadă şi care au icircndeplinit criteriile de
includere icircn cele două loturi (Lot SM şi Lot Control) constituite pentru evaluarea nivelului de
expresie a receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Explorarea nivelului de expresie
relativă a receptorilor PPARα s-a desfăşurat icircn cadrul Laboratorului de Biologie Moleculară
de pe platforma Institutului Regional de Oncologie Datorită resurselor proprii financiare
limitate trebuie să subliniez că aceasta cercetare nu ar fi fost posibilă fără contribuţia unor
cercetători din domeniul medical care m-au sprijinit necondiţionat atacirct icircn elaborarea
protocolului de lucru cacirct şi icircn efectuarea propriu-zisă a studiului Icircn acest sens menţionăm şi
faptul că pentru studiul receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic am utilizat aparatura
Laboratorului de Biologie Moleculară (care deserveşte icircntreaga Regiune a Moldovei) Pe
această cale mulţumesc personalului Laboratorului de Biologie Moleculară pentru ajutorul
acordat icircn desfăşurarea cercetării doctorale icircn condiţiile icircn care se observa creşterea
numărului de pacienţi care se adresează acestei platforme de cercetare Mulţumesc de
asemenea şi Doamnei Doctor Elena Butoi din cadrul Institutului de Biologie şi Patologie
Moleculară ldquoNicolae Simionescurdquo Bucureşti) pentru donaţia anticorpului secundar anti-
FITC Icircn consecinţă pentru recrutarea unui număr mai mare de participanţi ar fi fost necesară
icircn primul racircnd obţinerea unor resurse financiare suplimentare pentru achiziţia de aparatură şi
reactivi Totuşi numărul subiecţilor recrutaţi este apropiat de numărul subiecţilor raportaţi icircn
cadrul unor granturi de cercetare care aveau ca ţinta studiul expresiei receptorilor PPARα
(212 227 228 231) Rezultatele obţinute continua seria lucrărilor care arata importanta
studiului mecanismelor etiopatogenice ale sindromului metabolic patologie care se afla icircntr-o
continuă creştere La pacienţii cu SM pe lacircngă diminuarea nivelului de expresie a receptorilor
PPARα icircn eozinofile ne aşteptam şi la evidenţierea unor modificări icircn expresia PPARα şi icircn
populaţiile de Ly Mo şi PMN Acest fapt poate fi explicat de utilizarea unor celule provenite
de la pacienţi fără afectare cardiovasculară fără diabet zaharat şi necesită continuarea
studiului pe culturi celulare icircn condiţii de stimulare cu agonişti PPARα deziderat care
impune continuarea investigării expresiei PPARα printr-un grant de cercetare
ORIGINALITATEA ȘI CONTRIBUȚIILE INOVATIVE ALE TEZEI DE
DOCTORAT PERSPECTIVE DE CERCETARE
Evaluarea nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn leucocitele circulante
aduce noi perspective icircn studiul obezităţii şi sindromului metabolic Importanta studiului
expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic derivă din prevalenta crescută a
sindromului metabolic icircn populaţia cercetată la care se adaugă riscul cardiovascular foarte
icircnalt al acestor pacienţi cu implicaţii majore icircn sănătatea publică Rolul receptorilor PPARα
icircn inflamaţie şi aterogeneza este binecunoscut dar studiul nostru este primul care a arătat că
nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα este semnificativ mai scăzut in populatiile
de eozinofile la pacienţii cu SM Această concluzie coroborata cu existenţa unei stracircnse
asocieri intre expresia receptorilor PPARα la nivelul Mo limfocitelor şi PMNlor creeaza
ipoteza existenţei unui mecanism de control diferit al expresiei PPARα la nivelul
eozinofilelor Această cercetare aduce informaţii importante referitoare la mecanismele
proinflamatorii care stau la baza insulinorezistenţei şi riscului cardiometabolic şi impune
continuarea studiului acestor receptori nucleari prin citometrie icircn flux metodă care poate fi
aplicată şi la scara mai largă dacă sunt asigurate resursele materiale necesare cercetării
Cercetarea prin citometrie icircn flux poate fi completată de studiul polimorfismului genei
PPARA şi astfel se pot identifica timpuriu indivizii cu potenţial risc cardiometabolic crescut
Studiul receptorilor PPARα a stabilit conexiuni cu factori proinflamatori şi aterogenetici iar
continuarea cercetării poate aduce şi elemente noi de diagnostic precoce icircn sindromul
metabolic contribuind la icircmbunătăţirea prognosticului acestor pacienţi
CONCLUZII FINALE
1 Aplicarea scorului de SM alături de implementarea algoritmului electronic de diagnostic
contribuie la o prelucrare rapidă eficientă și standardizată a informaţiilor la nivelul
medicinei primare
2 Prevalenţa SM calculată astfel icircn cadrul studiului este crescută (2732) icircn concordanţă
cu datele raportate
3 Controlul factorilor de risc cardiometabolici incluşi icircn SM se poate realiza prin
managementul stilului de viaţă (scăderea greutăţii corporale prin combaterea
sedentarismului şi adoptarea unei diete antiaterogene şi hipocalorice) şi administrarea
terapiei medicamentoase
4 Este necesară adoptarea unei politici de sănătate publică pentru prevenirea creşterii icircn
populaţie a prevalenţei obezităţii şi a diabetului zaharat
5 Noi metode de cercetare icircn domeniul SM axate pe diagnosticarea precoce şi cuantificarea
eficientă a acestuia duce la diminuarea incidenței evenimentelor cardiovasculare majore
6 Sindromul metabolic se caracterizează printr-un status inflamator cronic
7 Valorile Non-HDL-colesterolului şi a raportului de aterogenitate sunt semnificativ mai
mari la pacienţii cu SM
8 Dintre reactanţii de faza acută am observat că valoarea medie a fibrinogenului este mai
crescută icircn lotul cu SM
9 Valorile eozinofilelor sunt crescute icircn sindromul metabolic iar explorarea relaţiei dintre
eozinofile şi obezitate constituie una din direcţiile de studiu actuale ale sindromului
metabolic
10 Evaluarea markerilor inflamatori icircn contextul sindromului metabolic este utilă icircn
evaluarea complexă a a factorilor de risc cardiometabolici
11 Prin metoda citometriei icircn flux am demonstrat prezenta Receptorilor Activaţi de
Inductorii Proliferării Peroxizomilor ndash Alpha (PPARα) icircn toate populaţiile de leucocite
studiate (Mo limfocite PMN eozinofile) atacirct icircn lotul pacienţilor cu SM cacirct şi icircn lotul
martor
12 Utilizacircnd intensitatea medie de fluorescenţă a anticorpilor anti- PPARα am arătat că
nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile este semnificativ mai redus
la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali
13 Acest studiu este primul care a demonstrat existenţa unei scăderi statistic semnificative a
nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofilele pacienţilor cu SM
confirmacircnd cercetările recente care au evidenţiat rolul eozinofilelor şi al receptorilor
PPARα icircn obezitate reglarea inflamaţiei cronice şi aterogeneza
14 Contrar aşteptărilor noastre icircn populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările
efectuate icircn cele două loturi de studiu (cu şi fără sindom metabolic) nu am evidenţiat
diferenţe statistic seminificative icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα la
subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali
15 Icircn populaţiile de Mo limfocite şi polimorfonucleare am observat corelaţii puternice
semnificativ statistic icircntre expresia PPARα icircn aceste tipuri celulare sugeracircnd existenţa
unui mecanism unic de control al inflamaţiei cronice la nivelul acestor celule probabil
diferit de cel din eozinofile
16 La subiecţii cu SM expresia relativă a PPARα icircn Eo este invers asociată cu expresia
receptorului CD36 (receptor al particulelor de ox - LDL şi propus ca un marker precoce al
aterosclerozei) dovedind rolul antiinflamator al receptorilor PPARα la nivel endotelial
17 La pacienţii cu antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială nivelul de
expresie al receptorilor PPARα icircn eozinofile şi Mo este diminuat comparativ cu subiecţii
fără antecedente familiale de hipertensiune arterială Putem spune că studiul efectuat de
noi aduce informaţii importante legate de geneză aterosclerozei şi hipertensiunii arteriale
18 Prin studiul asocierilor dintre receptorii PPARα şi componentele clinice ale sindromului
metabolic am arătat rolul acestor receptori icircn determinismul obezităţii de tip central
nivelul expresiei relative a receptorilor PPARα fiind invers proporţional cu circumferinţa
abdominală
19 Icircn acelaşi timp nivelul de expresie a PPARα icircn sindromul metabolic este asociat pozitiv
cu concentraţia serică a HDL-colesterolului şi invers asociat cu nivelul trigliceridelor
serice dovedind rolul acestor receptori icircn diminuarea procesului inflamator cronic de la
nivel vascular
20 La pacienţii cu SM scăderea expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofile este corelată cu
creşterea unor markeri ai sindromului inflamator cronic cardiometabolic (acid uric
fibrinogen) ilustracircnd importanta receptorilor icircn reglarea status-ului inflamator cronic din
sindromul metabolic
21 Utilizarea metodei flowcitometrice pentru studiul expresiei relative a receptorilor PPARα
icircn leucocite a adus informaţii importante cu privire la mecanismele moleculare de control
implicate icircn patogenia bolilor cardiometabolice icircn concordanţă cu cercetările care descriu
expresia PPAR icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale bronşice
keratinocite)
BIBLIOGRAFIE SELECTIVA
1 Kahn R Metabolic syndrome- what is the clinical usefulness Lancet 2008371(9628)1892-3
2 Reaven GM The metabolic syndrome is this diagnosis necessary Am J Clin Nutr 2006 83(6)1237-7
3 Grundy SM Pre-Diabetes Metabolic Syndrome and Cardiovascular Risk J Am Coll Cardiol 201259(7)
635-43
4 International Diabetes Federation IDF Diabetes Atlas 6th edn International Diabetes Federation Belgium
Brussels 20131-155
5 World Health Organization Global Status Report on Noncommunicable Diseases 2010 World Health
Organization Geneva Switzerland 20111-176
6 Coman AE Petrovanu R Sindromul metabolic in practica de ambulator Editura Pim Iaşi 2009 1-103
7 Grundy SM Becker D Clark LT et alThird Report of the National Cholesterol Education Program (NCEP)
Expert Panel on Detection Evaluation and Treatment of High Blood Cholesterol in Adults (Adult
Treatment Panel III) Final Report Circulation 2002106(25)3143-90
8 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J Metabolic syndrome- a new worldwide definition A Consensus Statement
from the International Diabetes Federation Diabet Med 2006 23(5)469-80
9 KG Alberti KG Eckel RH Grundy SM etal International Diabetes Federation task force on epidemiology
and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart Association World Heart
Federation International Atherosclerosis Society International Association for the study of obesity
Harmonizing the metabolic syndrome a joint interim statement of the International Diabetes Federation task
force on epidemiology and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart
Association World Heart Federation International Atherosclerosis society and International Association
for the study of obesity Circulation 2009120(16)1640-5
10 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J IDF Epidemiology Task Force The metabolic syndrome new
worldwide definition Lancet 2005 366 1059 - 62
11 Oleszczyk M Svab I Seifert B et al Primary healthcare in the developing part of Europe changes and
development in the former Eastern Bloc countries that joined the European Union following 2004 Med Sci
Monit 2009(15)78ndash84
12 Jung U J Choi M S Obesity and Its Metabolic Complications The Role of Adipokines and the
Relationship between Obesity Inflammation Insulin Resistance Dyslipidemia and Nonalcoholic Fatty
Liver Disease Int J Mol Sci 2014rsquo15(4) 6184-223
13 Vanden Heuvel JP Peters JM Peroxisome Proliferators In Ramos K (ed) Cellular and Molecular
Toxicology (Second Edition) Volume 2 New York Elsevier Science Inc 2010 145 - 67
14 Yessoufou A Wahli W Multifaceted roles of peroxisome proliferator-activated receptors (PPARs) at the
cellular and whole organism levels Swiss Med Wkl 2010140w13071 doi104414smw201013071
15 Azhar S Peroxisome proliferator-activated receptors metabolic syndrome and cardiovascular disease
Future Cardiology 20106(5)657-91
16 Andries G Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity
Diabetes and Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(Suppl)24-32
17 Zandbergen F Plutzky J PPARalpha in atherosclerosis and inflammation Biochim Biophys Acta
20071771(8)972-82
18 Straus DS Glass CK Anti-inflammatory actions of PPAR ligands new insights on cellular and molecular
mechanisms Trends Immunol 200728(12)551-8
19 Zlei M Zugun- Eloae F Carasevici E Citometrie icircn flux - Bază şi clinică Icircn Hinescu ME (ed) Citometrie icircn
flux - principii şi aplicaţii clinice Bucureşti Editura Viaţa Medicală Romacircnească 20111-128
20 Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity Diabetes and
Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(9)24-32
21 Woerly G Honda K Loyens M et al Peroxisome proliferator-activated receptors alpha and gamma down-
regulate allergic inflammation and eosinophil activation J Exp Med 2003198(3)411-21
22 Salle-Saumont D Brenuchon C Kanda A et al Peroxisome proliferator-activated receptor alpha regulates
skin inflammation and humoral response in atopic dermatitis J Clin Allergy Immunology 2008 21(4)962-8
23 Schote A Turner J Schiltz J et al Nuclear receptors in human immune cells expression and correlations
Mol Immunolog 200744(6)1436-45
24 DAmore S Vacca M Graziano G et al Nuclear receptors expression chart icircn peripheral blood
mononuclear cells identifies patients with Metabolic Syndrome Biochim Biophys Acta
20131832(12)2289-301
25 Uthurralt J Gordish-Dressman H Bradbury M T et al PPARalpha L162V underlies variation in serum
triglycerides and subcutaneous fat volume in young males BMC Med Genet 2007855
26 Hiukka A Leinonen ES Jauhiainen M et al Long-term effects of fenofibrate on VLDL and HDL
subspecies icircn participants with type 2 diabetes mellitus Diabetologia 2007 50(10)2067-75
27 Robins SJ Rubins HB Faas FH et alInsulin resistance and cardiovascular events with low HDL
cholesterol The Veterans Affairs HDL Intervention Trial (VA-HIT) Diabetes Care 2003 26(5)1513-7
28 Devaraj S Siegel D Jialal I Statin Therapy in Metabolic Syndrome and Hypertension Post-JUPITER
What is the Value of CRP Curr Atheroscler Rep 2011 13(1) 31ndash42
29 Imperatore G Riccardi G Iovino C et al Plasma Fibrinogen A New Factor of the Metabolic Syndrome A
population-based study Diabetes Care 19982 1(4)649-54
30 Krysiak R Gdula-Dymek A Bachowski R Okopien B Pleiotropic effects of atorvastatin and fenofibrate
in metabolic syndrome and different types of pre-diabete Diabetes Care 201033(10)2266-70
31 Hermans MP Impact of Fenofibrate on Type 2 Diabetes Patients with Features of the Metabolic Syndrome
Subgroup Analysis From FIELD Curr Cardiol Rev 20106(2)112-8
32 Silverstein R Inflammation atherosclerosis and arterial thrombosis Role of the scavenger receptor CD36
Cleveland Clinic Journal of Medicine 200976(Suppl 2)S27-S30
33 Hăncu N Obezitatea In Vereşiu IA (ed) Diabetul zaharat nutritia si bolile metabolice Volume 2 Editura
Echinox Cluj- Napoca 2010 1-15
Lista lucrări publicate
1 Elena Popa Maria Maidaniuc Agnes Bacusca Alamir Diaa Rodica Petrovanu Adorata Elena
Coman Disfuncţia endotelială ndash de la mecanisme moleculare la cuantifi care şi tratament icircn practica
medicală Practica Medicală 20149(3) 109-14
2 Elena Popa Agnes Bacusca Alamir Diaa Maria Maidaniuc Rodica Petrovanu Adorata Elena Coman
The function of insulin receptor (IRF) in evolution of obesity correlation with adipocytes diameters
Archives of the Balkan Medical Union 201449(3) 275-9
3 Elena Popa Florin Zugun-Eloae Mihaela Zlei Daniela Jitaru Oana Maria Pintilie Adorata Elena
Coman Maria Traian Didona Anca Ungureanu Eugen Carasevici - acceptata pentru numarul 42014
Flow cytometry analysis of PPAR-alpha receptors in metabolic syndrome) Revista Romană de
Medicină de Laborator(RRLM-D-14-00034R1- adeverinţa ataşată
receptorului CD36 rezultatele obţinute sunt icircn consens cu studii anterioare care au arătat
creşterea expresiei CD36 la pacienţii cu SM şi diabet zaharat Astfel pe lacircngă diferenţa icircn
expresia CD36 s-au raportat şi corelaţii inverse icircntre expresia proteinei CD36 şi nivelul
adiponectinei Acelaşi studiu a evidenţiat o corelaţie pozitivă intre expresia CD36 cu expresia
receptorilor PPAR gamma relaţia cu PPARα nefiind investigată
Analiza de subgrup a relaţiilor dintre componentele SM și elementele moleculare
proinflamatorii studiate a relevat prezenţa unor asocieri semnificativ statistice icircntre acestea
Se argumentează astfel că veridicitatea studiului este susţinută de interdependenţele statistice
ale componentelor SM Determinarea coeficientului de corelaţie Icircn studiul nostru nivelul de
expresie relativă a PPARα s-a corelat moderat negativ (figura 550) cu CA a subiecţilor din
lotul normal pentru populaţiile celulare de Mo (r = - 0420 P = 001) Ly (r = - 046 P =
0009) şi PMN (r = - 040 P = 0024) date care sunt icircn concordanţă cu studiile care arată
rolul PPARα icircn furnizarea energiei prin beta-oxidarea acizilor graşi Icircn acelaşi timp icircn lotul
pacienţilor cu SM nu am identificat prezenţa unei asocieri icircntre nivelul de expresie relativă a
PPARα şi valoarea măsurată a CA Asocierea dintre expresia relativă a PPARα cu obezitatea
de tip central completează datele existente referitoare la reglarea homeostaziei energetice
conturacircnd un mecanism de control deficitar al aportului caloric al SM Icircn condiţiile icircn care
rezultatele obţinute prin metoda citometriei icircn flux nu au arătat existenţa unei corelaţii intre
expresia PPARα şi CA la pacienţii cu SM considerăm că ar fi necesar studiul
polimorfismului genei PPARA care ar putea aduce informaţii importante cu privire la
implicarea acestor receptori icircn apariţia obezităţii de tip central Subliniem acest lucru deoarece
obezitatea este o boală plurifactorială icircn care pe lacircngă factorii ereditari sunt implicaţi factori
de mediu psihologici şi sociali (245) Existenţa unei componente genetice a aterosclerozei
este legată şi de prezenţa unor variante ale genei PPARA asociate cu creşterea incidenţei bolii
cardiovasculare (82) şi a SM (249) Icircn studiul nostru am constatat o scădere statistic
semnificativă a nivelului expresiei relative a receptorilor PPARα icircn Eo la subiecţii cu
antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială comparativ cu subiecţii fără istoric
familial de hipertensiune (figura 537) Deşi diferenţele calculate icircntre loturile studiate nu au
icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică la subiecţii care au declarat prezenţa
antecedentelor familiale de hipertensiune arterială remarcăm o tendinţă de scădere a
intensităţii medii de fluorescenţă pentru Ac anti-PPARα la nivelul Mo (figura 515 P = 006
) icircn timp ce expresia relativă a CD36 icircnregistrează o creştere la acesti subiecţi (figura 545 P
= 008) Icircn contextul riscului cardiovascular foarte icircnalt al pacienţilor cu SM amintim şi
existenţa corelaţiei pozitive dintre valorile tensiunii arteriale diastolice şi expresia relativă a
receptorului CD36 (r = 0483 P = 0013) Această constatare este icircn consens cu studiile care
au arătat că forma solubilă circulantă a CD36 este asociată cu factorii de risc cardiovasculari
fiind propusă ca un marker precoce al aterosclerozei Activarea PPARα este asociată cu
modularea metabolismului lipidic iar agoniştii PPARα sunt utilizaţi icircn mod curent pentru
tratamentul dislipidemiei Sub acţiunea agoniştilor PPARα se obţine o icircmbunătăţire a funcţiei
endoteliale şi a parametrilor reologici funcţiile pleiotropice ale agoniştilor PPARα fiind
dovedite icircn trialuri clinice controlate Icircn populaţiile de Mo şi Ly la pacienţii cu SM
cercetarea noastră a evidenţiat o asociere negativă icircntre nivelul de expresie relativă a
receptorilor PPARα şi concentraţia TG serice (figura 551) Astfel scăderea expresiei
receptorilor PPARα este asociată cu creşterea nivelului TG serice contribuind la profilul
lipidic aterogen din SM Icircn conformitate cu literatura de specialitate icircn studiul efectuat prin
metoda citometriei icircn flux am găsit prezenţa asocierii icircntre nivelul de expresie al PPARα şi
HDL-colesterol Corelaţia pozitivă dintre nivelul de expresie relativă PPARα şi concentraţia
HDL-colesterolului a fost observată icircn lotul martor icircn populaţiile de Mo (r = 035 P = 005)
şi Ly ( r = 036 P = 004) (figura 553) susţinacircnd faptul că stimularea receptorilor PPARα
este legată de creşterea nivelului seric al lipoproteinelor cu densitate crescută La pacienţii cu
SM corelaţia dintre expresia PPARα şi HDL-colesterol a fost evidenţiată icircn populaţiile de Mo
(r = 046 P = 0019) şi eozinofile (r = 044 P = 0024) Se desprinde concluzia că icircn
sindromul metabolic scăderea concentraţiei HDL-colesterol este legată de diminuarea
nivelului de expresie relativă a receptorilor nucleari PPARα icircntărind afirmaţiile legate de
rolul acestor receptori icircn progresia bolilor cardiovasculare Studiind reactanţii de fază acută
analiza statistică a relevat o diferenţă semnificativă din punct de vedere statistic icircntre valorile
fibrinogenului la pacienţii cu SM atunci cacircnd au fost comparaţi cu subiecţii fără SM
(Capitolul IV4 P lt0 001 figura 427A) De asemenea icircn Capitolul V dedicat studiul
expresiei relative a receptorilor PPARα studiul valorilor fibrinogenului a arătat creşterea
acestui reactant de faza acută icircn lotul cu SM comparativ cu lotul martor (P lt0 0001) Icircn
studiul nostru am calculat o corelaţie invers proporţionala (r = - -036 fig 555B) icircntre
nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile şi concentraţia serică a
fibrinogenului Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P = 008) am reţinut
această asociere deoarece am demonstrat că nivelul de expresie relativă al receptorilor
PPARα icircn eozinofile este mai scăzut icircn sindromul metabolic iar sindromul metabolic este
caracterizat printr-un status inflamator cronic status caracterizat şi de creşterea concentraţiei
serice a fibrinogenului De asemenea notam ca această corelaţie negativă se află icircn
concordanţă cu studiile care arata că tratamentul cu agonişti PPARα (fibraţi) determina
scăderea nivelului seric al fibrinogenului contribuind la diminuarea inflamaţiei cronice din
sindromul metabolic şi icircn consecinţă amelioracircnd insulinorezistenţa
LIMITE ȘI DIFICULTĂȚI IcircN CERCETARE
Icircn cadrul Tezei de Doctorat am desfăşurat o cercetare care şi-a propus studierea
expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Recrutarea anamneza şi examinarea
clinică a subiecţilor au fost realizate icircn cadrul Cabinetului de Medicină de Familie CMI Popa
Elena din Iaşi iar determinările hematologice şi biochimice s-au efectuat icircn cadrul
Laboratorului Ambulatorului de Specialitate al Spitalului Universitar ldquoSfacircntul Spiridon din
Iaşi Icircn studiul epidemiologic şi al markerilor inflamatori al sindromului metabolic desfăşurat
au fost incluşi un număr de 1530 de participanţi pe baza liberului consimţămacircnt examinaţi icircn
perioada 01012013 - 31122013 Icircn continuare icircn perioada 1012014 - 28022014 pe baza
criteriilor de includere şi excludere icircn cele două loturi de studiu am investigat un număr de 57
de subiecţi prezentaţi la consultaţie icircn această perioadă şi care au icircndeplinit criteriile de
includere icircn cele două loturi (Lot SM şi Lot Control) constituite pentru evaluarea nivelului de
expresie a receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Explorarea nivelului de expresie
relativă a receptorilor PPARα s-a desfăşurat icircn cadrul Laboratorului de Biologie Moleculară
de pe platforma Institutului Regional de Oncologie Datorită resurselor proprii financiare
limitate trebuie să subliniez că aceasta cercetare nu ar fi fost posibilă fără contribuţia unor
cercetători din domeniul medical care m-au sprijinit necondiţionat atacirct icircn elaborarea
protocolului de lucru cacirct şi icircn efectuarea propriu-zisă a studiului Icircn acest sens menţionăm şi
faptul că pentru studiul receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic am utilizat aparatura
Laboratorului de Biologie Moleculară (care deserveşte icircntreaga Regiune a Moldovei) Pe
această cale mulţumesc personalului Laboratorului de Biologie Moleculară pentru ajutorul
acordat icircn desfăşurarea cercetării doctorale icircn condiţiile icircn care se observa creşterea
numărului de pacienţi care se adresează acestei platforme de cercetare Mulţumesc de
asemenea şi Doamnei Doctor Elena Butoi din cadrul Institutului de Biologie şi Patologie
Moleculară ldquoNicolae Simionescurdquo Bucureşti) pentru donaţia anticorpului secundar anti-
FITC Icircn consecinţă pentru recrutarea unui număr mai mare de participanţi ar fi fost necesară
icircn primul racircnd obţinerea unor resurse financiare suplimentare pentru achiziţia de aparatură şi
reactivi Totuşi numărul subiecţilor recrutaţi este apropiat de numărul subiecţilor raportaţi icircn
cadrul unor granturi de cercetare care aveau ca ţinta studiul expresiei receptorilor PPARα
(212 227 228 231) Rezultatele obţinute continua seria lucrărilor care arata importanta
studiului mecanismelor etiopatogenice ale sindromului metabolic patologie care se afla icircntr-o
continuă creştere La pacienţii cu SM pe lacircngă diminuarea nivelului de expresie a receptorilor
PPARα icircn eozinofile ne aşteptam şi la evidenţierea unor modificări icircn expresia PPARα şi icircn
populaţiile de Ly Mo şi PMN Acest fapt poate fi explicat de utilizarea unor celule provenite
de la pacienţi fără afectare cardiovasculară fără diabet zaharat şi necesită continuarea
studiului pe culturi celulare icircn condiţii de stimulare cu agonişti PPARα deziderat care
impune continuarea investigării expresiei PPARα printr-un grant de cercetare
ORIGINALITATEA ȘI CONTRIBUȚIILE INOVATIVE ALE TEZEI DE
DOCTORAT PERSPECTIVE DE CERCETARE
Evaluarea nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn leucocitele circulante
aduce noi perspective icircn studiul obezităţii şi sindromului metabolic Importanta studiului
expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic derivă din prevalenta crescută a
sindromului metabolic icircn populaţia cercetată la care se adaugă riscul cardiovascular foarte
icircnalt al acestor pacienţi cu implicaţii majore icircn sănătatea publică Rolul receptorilor PPARα
icircn inflamaţie şi aterogeneza este binecunoscut dar studiul nostru este primul care a arătat că
nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα este semnificativ mai scăzut in populatiile
de eozinofile la pacienţii cu SM Această concluzie coroborata cu existenţa unei stracircnse
asocieri intre expresia receptorilor PPARα la nivelul Mo limfocitelor şi PMNlor creeaza
ipoteza existenţei unui mecanism de control diferit al expresiei PPARα la nivelul
eozinofilelor Această cercetare aduce informaţii importante referitoare la mecanismele
proinflamatorii care stau la baza insulinorezistenţei şi riscului cardiometabolic şi impune
continuarea studiului acestor receptori nucleari prin citometrie icircn flux metodă care poate fi
aplicată şi la scara mai largă dacă sunt asigurate resursele materiale necesare cercetării
Cercetarea prin citometrie icircn flux poate fi completată de studiul polimorfismului genei
PPARA şi astfel se pot identifica timpuriu indivizii cu potenţial risc cardiometabolic crescut
Studiul receptorilor PPARα a stabilit conexiuni cu factori proinflamatori şi aterogenetici iar
continuarea cercetării poate aduce şi elemente noi de diagnostic precoce icircn sindromul
metabolic contribuind la icircmbunătăţirea prognosticului acestor pacienţi
CONCLUZII FINALE
1 Aplicarea scorului de SM alături de implementarea algoritmului electronic de diagnostic
contribuie la o prelucrare rapidă eficientă și standardizată a informaţiilor la nivelul
medicinei primare
2 Prevalenţa SM calculată astfel icircn cadrul studiului este crescută (2732) icircn concordanţă
cu datele raportate
3 Controlul factorilor de risc cardiometabolici incluşi icircn SM se poate realiza prin
managementul stilului de viaţă (scăderea greutăţii corporale prin combaterea
sedentarismului şi adoptarea unei diete antiaterogene şi hipocalorice) şi administrarea
terapiei medicamentoase
4 Este necesară adoptarea unei politici de sănătate publică pentru prevenirea creşterii icircn
populaţie a prevalenţei obezităţii şi a diabetului zaharat
5 Noi metode de cercetare icircn domeniul SM axate pe diagnosticarea precoce şi cuantificarea
eficientă a acestuia duce la diminuarea incidenței evenimentelor cardiovasculare majore
6 Sindromul metabolic se caracterizează printr-un status inflamator cronic
7 Valorile Non-HDL-colesterolului şi a raportului de aterogenitate sunt semnificativ mai
mari la pacienţii cu SM
8 Dintre reactanţii de faza acută am observat că valoarea medie a fibrinogenului este mai
crescută icircn lotul cu SM
9 Valorile eozinofilelor sunt crescute icircn sindromul metabolic iar explorarea relaţiei dintre
eozinofile şi obezitate constituie una din direcţiile de studiu actuale ale sindromului
metabolic
10 Evaluarea markerilor inflamatori icircn contextul sindromului metabolic este utilă icircn
evaluarea complexă a a factorilor de risc cardiometabolici
11 Prin metoda citometriei icircn flux am demonstrat prezenta Receptorilor Activaţi de
Inductorii Proliferării Peroxizomilor ndash Alpha (PPARα) icircn toate populaţiile de leucocite
studiate (Mo limfocite PMN eozinofile) atacirct icircn lotul pacienţilor cu SM cacirct şi icircn lotul
martor
12 Utilizacircnd intensitatea medie de fluorescenţă a anticorpilor anti- PPARα am arătat că
nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile este semnificativ mai redus
la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali
13 Acest studiu este primul care a demonstrat existenţa unei scăderi statistic semnificative a
nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofilele pacienţilor cu SM
confirmacircnd cercetările recente care au evidenţiat rolul eozinofilelor şi al receptorilor
PPARα icircn obezitate reglarea inflamaţiei cronice şi aterogeneza
14 Contrar aşteptărilor noastre icircn populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările
efectuate icircn cele două loturi de studiu (cu şi fără sindom metabolic) nu am evidenţiat
diferenţe statistic seminificative icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα la
subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali
15 Icircn populaţiile de Mo limfocite şi polimorfonucleare am observat corelaţii puternice
semnificativ statistic icircntre expresia PPARα icircn aceste tipuri celulare sugeracircnd existenţa
unui mecanism unic de control al inflamaţiei cronice la nivelul acestor celule probabil
diferit de cel din eozinofile
16 La subiecţii cu SM expresia relativă a PPARα icircn Eo este invers asociată cu expresia
receptorului CD36 (receptor al particulelor de ox - LDL şi propus ca un marker precoce al
aterosclerozei) dovedind rolul antiinflamator al receptorilor PPARα la nivel endotelial
17 La pacienţii cu antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială nivelul de
expresie al receptorilor PPARα icircn eozinofile şi Mo este diminuat comparativ cu subiecţii
fără antecedente familiale de hipertensiune arterială Putem spune că studiul efectuat de
noi aduce informaţii importante legate de geneză aterosclerozei şi hipertensiunii arteriale
18 Prin studiul asocierilor dintre receptorii PPARα şi componentele clinice ale sindromului
metabolic am arătat rolul acestor receptori icircn determinismul obezităţii de tip central
nivelul expresiei relative a receptorilor PPARα fiind invers proporţional cu circumferinţa
abdominală
19 Icircn acelaşi timp nivelul de expresie a PPARα icircn sindromul metabolic este asociat pozitiv
cu concentraţia serică a HDL-colesterolului şi invers asociat cu nivelul trigliceridelor
serice dovedind rolul acestor receptori icircn diminuarea procesului inflamator cronic de la
nivel vascular
20 La pacienţii cu SM scăderea expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofile este corelată cu
creşterea unor markeri ai sindromului inflamator cronic cardiometabolic (acid uric
fibrinogen) ilustracircnd importanta receptorilor icircn reglarea status-ului inflamator cronic din
sindromul metabolic
21 Utilizarea metodei flowcitometrice pentru studiul expresiei relative a receptorilor PPARα
icircn leucocite a adus informaţii importante cu privire la mecanismele moleculare de control
implicate icircn patogenia bolilor cardiometabolice icircn concordanţă cu cercetările care descriu
expresia PPAR icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale bronşice
keratinocite)
BIBLIOGRAFIE SELECTIVA
1 Kahn R Metabolic syndrome- what is the clinical usefulness Lancet 2008371(9628)1892-3
2 Reaven GM The metabolic syndrome is this diagnosis necessary Am J Clin Nutr 2006 83(6)1237-7
3 Grundy SM Pre-Diabetes Metabolic Syndrome and Cardiovascular Risk J Am Coll Cardiol 201259(7)
635-43
4 International Diabetes Federation IDF Diabetes Atlas 6th edn International Diabetes Federation Belgium
Brussels 20131-155
5 World Health Organization Global Status Report on Noncommunicable Diseases 2010 World Health
Organization Geneva Switzerland 20111-176
6 Coman AE Petrovanu R Sindromul metabolic in practica de ambulator Editura Pim Iaşi 2009 1-103
7 Grundy SM Becker D Clark LT et alThird Report of the National Cholesterol Education Program (NCEP)
Expert Panel on Detection Evaluation and Treatment of High Blood Cholesterol in Adults (Adult
Treatment Panel III) Final Report Circulation 2002106(25)3143-90
8 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J Metabolic syndrome- a new worldwide definition A Consensus Statement
from the International Diabetes Federation Diabet Med 2006 23(5)469-80
9 KG Alberti KG Eckel RH Grundy SM etal International Diabetes Federation task force on epidemiology
and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart Association World Heart
Federation International Atherosclerosis Society International Association for the study of obesity
Harmonizing the metabolic syndrome a joint interim statement of the International Diabetes Federation task
force on epidemiology and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart
Association World Heart Federation International Atherosclerosis society and International Association
for the study of obesity Circulation 2009120(16)1640-5
10 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J IDF Epidemiology Task Force The metabolic syndrome new
worldwide definition Lancet 2005 366 1059 - 62
11 Oleszczyk M Svab I Seifert B et al Primary healthcare in the developing part of Europe changes and
development in the former Eastern Bloc countries that joined the European Union following 2004 Med Sci
Monit 2009(15)78ndash84
12 Jung U J Choi M S Obesity and Its Metabolic Complications The Role of Adipokines and the
Relationship between Obesity Inflammation Insulin Resistance Dyslipidemia and Nonalcoholic Fatty
Liver Disease Int J Mol Sci 2014rsquo15(4) 6184-223
13 Vanden Heuvel JP Peters JM Peroxisome Proliferators In Ramos K (ed) Cellular and Molecular
Toxicology (Second Edition) Volume 2 New York Elsevier Science Inc 2010 145 - 67
14 Yessoufou A Wahli W Multifaceted roles of peroxisome proliferator-activated receptors (PPARs) at the
cellular and whole organism levels Swiss Med Wkl 2010140w13071 doi104414smw201013071
15 Azhar S Peroxisome proliferator-activated receptors metabolic syndrome and cardiovascular disease
Future Cardiology 20106(5)657-91
16 Andries G Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity
Diabetes and Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(Suppl)24-32
17 Zandbergen F Plutzky J PPARalpha in atherosclerosis and inflammation Biochim Biophys Acta
20071771(8)972-82
18 Straus DS Glass CK Anti-inflammatory actions of PPAR ligands new insights on cellular and molecular
mechanisms Trends Immunol 200728(12)551-8
19 Zlei M Zugun- Eloae F Carasevici E Citometrie icircn flux - Bază şi clinică Icircn Hinescu ME (ed) Citometrie icircn
flux - principii şi aplicaţii clinice Bucureşti Editura Viaţa Medicală Romacircnească 20111-128
20 Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity Diabetes and
Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(9)24-32
21 Woerly G Honda K Loyens M et al Peroxisome proliferator-activated receptors alpha and gamma down-
regulate allergic inflammation and eosinophil activation J Exp Med 2003198(3)411-21
22 Salle-Saumont D Brenuchon C Kanda A et al Peroxisome proliferator-activated receptor alpha regulates
skin inflammation and humoral response in atopic dermatitis J Clin Allergy Immunology 2008 21(4)962-8
23 Schote A Turner J Schiltz J et al Nuclear receptors in human immune cells expression and correlations
Mol Immunolog 200744(6)1436-45
24 DAmore S Vacca M Graziano G et al Nuclear receptors expression chart icircn peripheral blood
mononuclear cells identifies patients with Metabolic Syndrome Biochim Biophys Acta
20131832(12)2289-301
25 Uthurralt J Gordish-Dressman H Bradbury M T et al PPARalpha L162V underlies variation in serum
triglycerides and subcutaneous fat volume in young males BMC Med Genet 2007855
26 Hiukka A Leinonen ES Jauhiainen M et al Long-term effects of fenofibrate on VLDL and HDL
subspecies icircn participants with type 2 diabetes mellitus Diabetologia 2007 50(10)2067-75
27 Robins SJ Rubins HB Faas FH et alInsulin resistance and cardiovascular events with low HDL
cholesterol The Veterans Affairs HDL Intervention Trial (VA-HIT) Diabetes Care 2003 26(5)1513-7
28 Devaraj S Siegel D Jialal I Statin Therapy in Metabolic Syndrome and Hypertension Post-JUPITER
What is the Value of CRP Curr Atheroscler Rep 2011 13(1) 31ndash42
29 Imperatore G Riccardi G Iovino C et al Plasma Fibrinogen A New Factor of the Metabolic Syndrome A
population-based study Diabetes Care 19982 1(4)649-54
30 Krysiak R Gdula-Dymek A Bachowski R Okopien B Pleiotropic effects of atorvastatin and fenofibrate
in metabolic syndrome and different types of pre-diabete Diabetes Care 201033(10)2266-70
31 Hermans MP Impact of Fenofibrate on Type 2 Diabetes Patients with Features of the Metabolic Syndrome
Subgroup Analysis From FIELD Curr Cardiol Rev 20106(2)112-8
32 Silverstein R Inflammation atherosclerosis and arterial thrombosis Role of the scavenger receptor CD36
Cleveland Clinic Journal of Medicine 200976(Suppl 2)S27-S30
33 Hăncu N Obezitatea In Vereşiu IA (ed) Diabetul zaharat nutritia si bolile metabolice Volume 2 Editura
Echinox Cluj- Napoca 2010 1-15
Lista lucrări publicate
1 Elena Popa Maria Maidaniuc Agnes Bacusca Alamir Diaa Rodica Petrovanu Adorata Elena
Coman Disfuncţia endotelială ndash de la mecanisme moleculare la cuantifi care şi tratament icircn practica
medicală Practica Medicală 20149(3) 109-14
2 Elena Popa Agnes Bacusca Alamir Diaa Maria Maidaniuc Rodica Petrovanu Adorata Elena Coman
The function of insulin receptor (IRF) in evolution of obesity correlation with adipocytes diameters
Archives of the Balkan Medical Union 201449(3) 275-9
3 Elena Popa Florin Zugun-Eloae Mihaela Zlei Daniela Jitaru Oana Maria Pintilie Adorata Elena
Coman Maria Traian Didona Anca Ungureanu Eugen Carasevici - acceptata pentru numarul 42014
Flow cytometry analysis of PPAR-alpha receptors in metabolic syndrome) Revista Romană de
Medicină de Laborator(RRLM-D-14-00034R1- adeverinţa ataşată
SM corelaţia dintre expresia PPARα şi HDL-colesterol a fost evidenţiată icircn populaţiile de Mo
(r = 046 P = 0019) şi eozinofile (r = 044 P = 0024) Se desprinde concluzia că icircn
sindromul metabolic scăderea concentraţiei HDL-colesterol este legată de diminuarea
nivelului de expresie relativă a receptorilor nucleari PPARα icircntărind afirmaţiile legate de
rolul acestor receptori icircn progresia bolilor cardiovasculare Studiind reactanţii de fază acută
analiza statistică a relevat o diferenţă semnificativă din punct de vedere statistic icircntre valorile
fibrinogenului la pacienţii cu SM atunci cacircnd au fost comparaţi cu subiecţii fără SM
(Capitolul IV4 P lt0 001 figura 427A) De asemenea icircn Capitolul V dedicat studiul
expresiei relative a receptorilor PPARα studiul valorilor fibrinogenului a arătat creşterea
acestui reactant de faza acută icircn lotul cu SM comparativ cu lotul martor (P lt0 0001) Icircn
studiul nostru am calculat o corelaţie invers proporţionala (r = - -036 fig 555B) icircntre
nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile şi concentraţia serică a
fibrinogenului Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P = 008) am reţinut
această asociere deoarece am demonstrat că nivelul de expresie relativă al receptorilor
PPARα icircn eozinofile este mai scăzut icircn sindromul metabolic iar sindromul metabolic este
caracterizat printr-un status inflamator cronic status caracterizat şi de creşterea concentraţiei
serice a fibrinogenului De asemenea notam ca această corelaţie negativă se află icircn
concordanţă cu studiile care arata că tratamentul cu agonişti PPARα (fibraţi) determina
scăderea nivelului seric al fibrinogenului contribuind la diminuarea inflamaţiei cronice din
sindromul metabolic şi icircn consecinţă amelioracircnd insulinorezistenţa
LIMITE ȘI DIFICULTĂȚI IcircN CERCETARE
Icircn cadrul Tezei de Doctorat am desfăşurat o cercetare care şi-a propus studierea
expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Recrutarea anamneza şi examinarea
clinică a subiecţilor au fost realizate icircn cadrul Cabinetului de Medicină de Familie CMI Popa
Elena din Iaşi iar determinările hematologice şi biochimice s-au efectuat icircn cadrul
Laboratorului Ambulatorului de Specialitate al Spitalului Universitar ldquoSfacircntul Spiridon din
Iaşi Icircn studiul epidemiologic şi al markerilor inflamatori al sindromului metabolic desfăşurat
au fost incluşi un număr de 1530 de participanţi pe baza liberului consimţămacircnt examinaţi icircn
perioada 01012013 - 31122013 Icircn continuare icircn perioada 1012014 - 28022014 pe baza
criteriilor de includere şi excludere icircn cele două loturi de studiu am investigat un număr de 57
de subiecţi prezentaţi la consultaţie icircn această perioadă şi care au icircndeplinit criteriile de
includere icircn cele două loturi (Lot SM şi Lot Control) constituite pentru evaluarea nivelului de
expresie a receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Explorarea nivelului de expresie
relativă a receptorilor PPARα s-a desfăşurat icircn cadrul Laboratorului de Biologie Moleculară
de pe platforma Institutului Regional de Oncologie Datorită resurselor proprii financiare
limitate trebuie să subliniez că aceasta cercetare nu ar fi fost posibilă fără contribuţia unor
cercetători din domeniul medical care m-au sprijinit necondiţionat atacirct icircn elaborarea
protocolului de lucru cacirct şi icircn efectuarea propriu-zisă a studiului Icircn acest sens menţionăm şi
faptul că pentru studiul receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic am utilizat aparatura
Laboratorului de Biologie Moleculară (care deserveşte icircntreaga Regiune a Moldovei) Pe
această cale mulţumesc personalului Laboratorului de Biologie Moleculară pentru ajutorul
acordat icircn desfăşurarea cercetării doctorale icircn condiţiile icircn care se observa creşterea
numărului de pacienţi care se adresează acestei platforme de cercetare Mulţumesc de
asemenea şi Doamnei Doctor Elena Butoi din cadrul Institutului de Biologie şi Patologie
Moleculară ldquoNicolae Simionescurdquo Bucureşti) pentru donaţia anticorpului secundar anti-
FITC Icircn consecinţă pentru recrutarea unui număr mai mare de participanţi ar fi fost necesară
icircn primul racircnd obţinerea unor resurse financiare suplimentare pentru achiziţia de aparatură şi
reactivi Totuşi numărul subiecţilor recrutaţi este apropiat de numărul subiecţilor raportaţi icircn
cadrul unor granturi de cercetare care aveau ca ţinta studiul expresiei receptorilor PPARα
(212 227 228 231) Rezultatele obţinute continua seria lucrărilor care arata importanta
studiului mecanismelor etiopatogenice ale sindromului metabolic patologie care se afla icircntr-o
continuă creştere La pacienţii cu SM pe lacircngă diminuarea nivelului de expresie a receptorilor
PPARα icircn eozinofile ne aşteptam şi la evidenţierea unor modificări icircn expresia PPARα şi icircn
populaţiile de Ly Mo şi PMN Acest fapt poate fi explicat de utilizarea unor celule provenite
de la pacienţi fără afectare cardiovasculară fără diabet zaharat şi necesită continuarea
studiului pe culturi celulare icircn condiţii de stimulare cu agonişti PPARα deziderat care
impune continuarea investigării expresiei PPARα printr-un grant de cercetare
ORIGINALITATEA ȘI CONTRIBUȚIILE INOVATIVE ALE TEZEI DE
DOCTORAT PERSPECTIVE DE CERCETARE
Evaluarea nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn leucocitele circulante
aduce noi perspective icircn studiul obezităţii şi sindromului metabolic Importanta studiului
expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic derivă din prevalenta crescută a
sindromului metabolic icircn populaţia cercetată la care se adaugă riscul cardiovascular foarte
icircnalt al acestor pacienţi cu implicaţii majore icircn sănătatea publică Rolul receptorilor PPARα
icircn inflamaţie şi aterogeneza este binecunoscut dar studiul nostru este primul care a arătat că
nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα este semnificativ mai scăzut in populatiile
de eozinofile la pacienţii cu SM Această concluzie coroborata cu existenţa unei stracircnse
asocieri intre expresia receptorilor PPARα la nivelul Mo limfocitelor şi PMNlor creeaza
ipoteza existenţei unui mecanism de control diferit al expresiei PPARα la nivelul
eozinofilelor Această cercetare aduce informaţii importante referitoare la mecanismele
proinflamatorii care stau la baza insulinorezistenţei şi riscului cardiometabolic şi impune
continuarea studiului acestor receptori nucleari prin citometrie icircn flux metodă care poate fi
aplicată şi la scara mai largă dacă sunt asigurate resursele materiale necesare cercetării
Cercetarea prin citometrie icircn flux poate fi completată de studiul polimorfismului genei
PPARA şi astfel se pot identifica timpuriu indivizii cu potenţial risc cardiometabolic crescut
Studiul receptorilor PPARα a stabilit conexiuni cu factori proinflamatori şi aterogenetici iar
continuarea cercetării poate aduce şi elemente noi de diagnostic precoce icircn sindromul
metabolic contribuind la icircmbunătăţirea prognosticului acestor pacienţi
CONCLUZII FINALE
1 Aplicarea scorului de SM alături de implementarea algoritmului electronic de diagnostic
contribuie la o prelucrare rapidă eficientă și standardizată a informaţiilor la nivelul
medicinei primare
2 Prevalenţa SM calculată astfel icircn cadrul studiului este crescută (2732) icircn concordanţă
cu datele raportate
3 Controlul factorilor de risc cardiometabolici incluşi icircn SM se poate realiza prin
managementul stilului de viaţă (scăderea greutăţii corporale prin combaterea
sedentarismului şi adoptarea unei diete antiaterogene şi hipocalorice) şi administrarea
terapiei medicamentoase
4 Este necesară adoptarea unei politici de sănătate publică pentru prevenirea creşterii icircn
populaţie a prevalenţei obezităţii şi a diabetului zaharat
5 Noi metode de cercetare icircn domeniul SM axate pe diagnosticarea precoce şi cuantificarea
eficientă a acestuia duce la diminuarea incidenței evenimentelor cardiovasculare majore
6 Sindromul metabolic se caracterizează printr-un status inflamator cronic
7 Valorile Non-HDL-colesterolului şi a raportului de aterogenitate sunt semnificativ mai
mari la pacienţii cu SM
8 Dintre reactanţii de faza acută am observat că valoarea medie a fibrinogenului este mai
crescută icircn lotul cu SM
9 Valorile eozinofilelor sunt crescute icircn sindromul metabolic iar explorarea relaţiei dintre
eozinofile şi obezitate constituie una din direcţiile de studiu actuale ale sindromului
metabolic
10 Evaluarea markerilor inflamatori icircn contextul sindromului metabolic este utilă icircn
evaluarea complexă a a factorilor de risc cardiometabolici
11 Prin metoda citometriei icircn flux am demonstrat prezenta Receptorilor Activaţi de
Inductorii Proliferării Peroxizomilor ndash Alpha (PPARα) icircn toate populaţiile de leucocite
studiate (Mo limfocite PMN eozinofile) atacirct icircn lotul pacienţilor cu SM cacirct şi icircn lotul
martor
12 Utilizacircnd intensitatea medie de fluorescenţă a anticorpilor anti- PPARα am arătat că
nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile este semnificativ mai redus
la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali
13 Acest studiu este primul care a demonstrat existenţa unei scăderi statistic semnificative a
nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofilele pacienţilor cu SM
confirmacircnd cercetările recente care au evidenţiat rolul eozinofilelor şi al receptorilor
PPARα icircn obezitate reglarea inflamaţiei cronice şi aterogeneza
14 Contrar aşteptărilor noastre icircn populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările
efectuate icircn cele două loturi de studiu (cu şi fără sindom metabolic) nu am evidenţiat
diferenţe statistic seminificative icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα la
subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali
15 Icircn populaţiile de Mo limfocite şi polimorfonucleare am observat corelaţii puternice
semnificativ statistic icircntre expresia PPARα icircn aceste tipuri celulare sugeracircnd existenţa
unui mecanism unic de control al inflamaţiei cronice la nivelul acestor celule probabil
diferit de cel din eozinofile
16 La subiecţii cu SM expresia relativă a PPARα icircn Eo este invers asociată cu expresia
receptorului CD36 (receptor al particulelor de ox - LDL şi propus ca un marker precoce al
aterosclerozei) dovedind rolul antiinflamator al receptorilor PPARα la nivel endotelial
17 La pacienţii cu antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială nivelul de
expresie al receptorilor PPARα icircn eozinofile şi Mo este diminuat comparativ cu subiecţii
fără antecedente familiale de hipertensiune arterială Putem spune că studiul efectuat de
noi aduce informaţii importante legate de geneză aterosclerozei şi hipertensiunii arteriale
18 Prin studiul asocierilor dintre receptorii PPARα şi componentele clinice ale sindromului
metabolic am arătat rolul acestor receptori icircn determinismul obezităţii de tip central
nivelul expresiei relative a receptorilor PPARα fiind invers proporţional cu circumferinţa
abdominală
19 Icircn acelaşi timp nivelul de expresie a PPARα icircn sindromul metabolic este asociat pozitiv
cu concentraţia serică a HDL-colesterolului şi invers asociat cu nivelul trigliceridelor
serice dovedind rolul acestor receptori icircn diminuarea procesului inflamator cronic de la
nivel vascular
20 La pacienţii cu SM scăderea expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofile este corelată cu
creşterea unor markeri ai sindromului inflamator cronic cardiometabolic (acid uric
fibrinogen) ilustracircnd importanta receptorilor icircn reglarea status-ului inflamator cronic din
sindromul metabolic
21 Utilizarea metodei flowcitometrice pentru studiul expresiei relative a receptorilor PPARα
icircn leucocite a adus informaţii importante cu privire la mecanismele moleculare de control
implicate icircn patogenia bolilor cardiometabolice icircn concordanţă cu cercetările care descriu
expresia PPAR icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale bronşice
keratinocite)
BIBLIOGRAFIE SELECTIVA
1 Kahn R Metabolic syndrome- what is the clinical usefulness Lancet 2008371(9628)1892-3
2 Reaven GM The metabolic syndrome is this diagnosis necessary Am J Clin Nutr 2006 83(6)1237-7
3 Grundy SM Pre-Diabetes Metabolic Syndrome and Cardiovascular Risk J Am Coll Cardiol 201259(7)
635-43
4 International Diabetes Federation IDF Diabetes Atlas 6th edn International Diabetes Federation Belgium
Brussels 20131-155
5 World Health Organization Global Status Report on Noncommunicable Diseases 2010 World Health
Organization Geneva Switzerland 20111-176
6 Coman AE Petrovanu R Sindromul metabolic in practica de ambulator Editura Pim Iaşi 2009 1-103
7 Grundy SM Becker D Clark LT et alThird Report of the National Cholesterol Education Program (NCEP)
Expert Panel on Detection Evaluation and Treatment of High Blood Cholesterol in Adults (Adult
Treatment Panel III) Final Report Circulation 2002106(25)3143-90
8 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J Metabolic syndrome- a new worldwide definition A Consensus Statement
from the International Diabetes Federation Diabet Med 2006 23(5)469-80
9 KG Alberti KG Eckel RH Grundy SM etal International Diabetes Federation task force on epidemiology
and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart Association World Heart
Federation International Atherosclerosis Society International Association for the study of obesity
Harmonizing the metabolic syndrome a joint interim statement of the International Diabetes Federation task
force on epidemiology and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart
Association World Heart Federation International Atherosclerosis society and International Association
for the study of obesity Circulation 2009120(16)1640-5
10 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J IDF Epidemiology Task Force The metabolic syndrome new
worldwide definition Lancet 2005 366 1059 - 62
11 Oleszczyk M Svab I Seifert B et al Primary healthcare in the developing part of Europe changes and
development in the former Eastern Bloc countries that joined the European Union following 2004 Med Sci
Monit 2009(15)78ndash84
12 Jung U J Choi M S Obesity and Its Metabolic Complications The Role of Adipokines and the
Relationship between Obesity Inflammation Insulin Resistance Dyslipidemia and Nonalcoholic Fatty
Liver Disease Int J Mol Sci 2014rsquo15(4) 6184-223
13 Vanden Heuvel JP Peters JM Peroxisome Proliferators In Ramos K (ed) Cellular and Molecular
Toxicology (Second Edition) Volume 2 New York Elsevier Science Inc 2010 145 - 67
14 Yessoufou A Wahli W Multifaceted roles of peroxisome proliferator-activated receptors (PPARs) at the
cellular and whole organism levels Swiss Med Wkl 2010140w13071 doi104414smw201013071
15 Azhar S Peroxisome proliferator-activated receptors metabolic syndrome and cardiovascular disease
Future Cardiology 20106(5)657-91
16 Andries G Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity
Diabetes and Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(Suppl)24-32
17 Zandbergen F Plutzky J PPARalpha in atherosclerosis and inflammation Biochim Biophys Acta
20071771(8)972-82
18 Straus DS Glass CK Anti-inflammatory actions of PPAR ligands new insights on cellular and molecular
mechanisms Trends Immunol 200728(12)551-8
19 Zlei M Zugun- Eloae F Carasevici E Citometrie icircn flux - Bază şi clinică Icircn Hinescu ME (ed) Citometrie icircn
flux - principii şi aplicaţii clinice Bucureşti Editura Viaţa Medicală Romacircnească 20111-128
20 Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity Diabetes and
Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(9)24-32
21 Woerly G Honda K Loyens M et al Peroxisome proliferator-activated receptors alpha and gamma down-
regulate allergic inflammation and eosinophil activation J Exp Med 2003198(3)411-21
22 Salle-Saumont D Brenuchon C Kanda A et al Peroxisome proliferator-activated receptor alpha regulates
skin inflammation and humoral response in atopic dermatitis J Clin Allergy Immunology 2008 21(4)962-8
23 Schote A Turner J Schiltz J et al Nuclear receptors in human immune cells expression and correlations
Mol Immunolog 200744(6)1436-45
24 DAmore S Vacca M Graziano G et al Nuclear receptors expression chart icircn peripheral blood
mononuclear cells identifies patients with Metabolic Syndrome Biochim Biophys Acta
20131832(12)2289-301
25 Uthurralt J Gordish-Dressman H Bradbury M T et al PPARalpha L162V underlies variation in serum
triglycerides and subcutaneous fat volume in young males BMC Med Genet 2007855
26 Hiukka A Leinonen ES Jauhiainen M et al Long-term effects of fenofibrate on VLDL and HDL
subspecies icircn participants with type 2 diabetes mellitus Diabetologia 2007 50(10)2067-75
27 Robins SJ Rubins HB Faas FH et alInsulin resistance and cardiovascular events with low HDL
cholesterol The Veterans Affairs HDL Intervention Trial (VA-HIT) Diabetes Care 2003 26(5)1513-7
28 Devaraj S Siegel D Jialal I Statin Therapy in Metabolic Syndrome and Hypertension Post-JUPITER
What is the Value of CRP Curr Atheroscler Rep 2011 13(1) 31ndash42
29 Imperatore G Riccardi G Iovino C et al Plasma Fibrinogen A New Factor of the Metabolic Syndrome A
population-based study Diabetes Care 19982 1(4)649-54
30 Krysiak R Gdula-Dymek A Bachowski R Okopien B Pleiotropic effects of atorvastatin and fenofibrate
in metabolic syndrome and different types of pre-diabete Diabetes Care 201033(10)2266-70
31 Hermans MP Impact of Fenofibrate on Type 2 Diabetes Patients with Features of the Metabolic Syndrome
Subgroup Analysis From FIELD Curr Cardiol Rev 20106(2)112-8
32 Silverstein R Inflammation atherosclerosis and arterial thrombosis Role of the scavenger receptor CD36
Cleveland Clinic Journal of Medicine 200976(Suppl 2)S27-S30
33 Hăncu N Obezitatea In Vereşiu IA (ed) Diabetul zaharat nutritia si bolile metabolice Volume 2 Editura
Echinox Cluj- Napoca 2010 1-15
Lista lucrări publicate
1 Elena Popa Maria Maidaniuc Agnes Bacusca Alamir Diaa Rodica Petrovanu Adorata Elena
Coman Disfuncţia endotelială ndash de la mecanisme moleculare la cuantifi care şi tratament icircn practica
medicală Practica Medicală 20149(3) 109-14
2 Elena Popa Agnes Bacusca Alamir Diaa Maria Maidaniuc Rodica Petrovanu Adorata Elena Coman
The function of insulin receptor (IRF) in evolution of obesity correlation with adipocytes diameters
Archives of the Balkan Medical Union 201449(3) 275-9
3 Elena Popa Florin Zugun-Eloae Mihaela Zlei Daniela Jitaru Oana Maria Pintilie Adorata Elena
Coman Maria Traian Didona Anca Ungureanu Eugen Carasevici - acceptata pentru numarul 42014
Flow cytometry analysis of PPAR-alpha receptors in metabolic syndrome) Revista Romană de
Medicină de Laborator(RRLM-D-14-00034R1- adeverinţa ataşată
(212 227 228 231) Rezultatele obţinute continua seria lucrărilor care arata importanta
studiului mecanismelor etiopatogenice ale sindromului metabolic patologie care se afla icircntr-o
continuă creştere La pacienţii cu SM pe lacircngă diminuarea nivelului de expresie a receptorilor
PPARα icircn eozinofile ne aşteptam şi la evidenţierea unor modificări icircn expresia PPARα şi icircn
populaţiile de Ly Mo şi PMN Acest fapt poate fi explicat de utilizarea unor celule provenite
de la pacienţi fără afectare cardiovasculară fără diabet zaharat şi necesită continuarea
studiului pe culturi celulare icircn condiţii de stimulare cu agonişti PPARα deziderat care
impune continuarea investigării expresiei PPARα printr-un grant de cercetare
ORIGINALITATEA ȘI CONTRIBUȚIILE INOVATIVE ALE TEZEI DE
DOCTORAT PERSPECTIVE DE CERCETARE
Evaluarea nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn leucocitele circulante
aduce noi perspective icircn studiul obezităţii şi sindromului metabolic Importanta studiului
expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic derivă din prevalenta crescută a
sindromului metabolic icircn populaţia cercetată la care se adaugă riscul cardiovascular foarte
icircnalt al acestor pacienţi cu implicaţii majore icircn sănătatea publică Rolul receptorilor PPARα
icircn inflamaţie şi aterogeneza este binecunoscut dar studiul nostru este primul care a arătat că
nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα este semnificativ mai scăzut in populatiile
de eozinofile la pacienţii cu SM Această concluzie coroborata cu existenţa unei stracircnse
asocieri intre expresia receptorilor PPARα la nivelul Mo limfocitelor şi PMNlor creeaza
ipoteza existenţei unui mecanism de control diferit al expresiei PPARα la nivelul
eozinofilelor Această cercetare aduce informaţii importante referitoare la mecanismele
proinflamatorii care stau la baza insulinorezistenţei şi riscului cardiometabolic şi impune
continuarea studiului acestor receptori nucleari prin citometrie icircn flux metodă care poate fi
aplicată şi la scara mai largă dacă sunt asigurate resursele materiale necesare cercetării
Cercetarea prin citometrie icircn flux poate fi completată de studiul polimorfismului genei
PPARA şi astfel se pot identifica timpuriu indivizii cu potenţial risc cardiometabolic crescut
Studiul receptorilor PPARα a stabilit conexiuni cu factori proinflamatori şi aterogenetici iar
continuarea cercetării poate aduce şi elemente noi de diagnostic precoce icircn sindromul
metabolic contribuind la icircmbunătăţirea prognosticului acestor pacienţi
CONCLUZII FINALE
1 Aplicarea scorului de SM alături de implementarea algoritmului electronic de diagnostic
contribuie la o prelucrare rapidă eficientă și standardizată a informaţiilor la nivelul
medicinei primare
2 Prevalenţa SM calculată astfel icircn cadrul studiului este crescută (2732) icircn concordanţă
cu datele raportate
3 Controlul factorilor de risc cardiometabolici incluşi icircn SM se poate realiza prin
managementul stilului de viaţă (scăderea greutăţii corporale prin combaterea
sedentarismului şi adoptarea unei diete antiaterogene şi hipocalorice) şi administrarea
terapiei medicamentoase
4 Este necesară adoptarea unei politici de sănătate publică pentru prevenirea creşterii icircn
populaţie a prevalenţei obezităţii şi a diabetului zaharat
5 Noi metode de cercetare icircn domeniul SM axate pe diagnosticarea precoce şi cuantificarea
eficientă a acestuia duce la diminuarea incidenței evenimentelor cardiovasculare majore
6 Sindromul metabolic se caracterizează printr-un status inflamator cronic
7 Valorile Non-HDL-colesterolului şi a raportului de aterogenitate sunt semnificativ mai
mari la pacienţii cu SM
8 Dintre reactanţii de faza acută am observat că valoarea medie a fibrinogenului este mai
crescută icircn lotul cu SM
9 Valorile eozinofilelor sunt crescute icircn sindromul metabolic iar explorarea relaţiei dintre
eozinofile şi obezitate constituie una din direcţiile de studiu actuale ale sindromului
metabolic
10 Evaluarea markerilor inflamatori icircn contextul sindromului metabolic este utilă icircn
evaluarea complexă a a factorilor de risc cardiometabolici
11 Prin metoda citometriei icircn flux am demonstrat prezenta Receptorilor Activaţi de
Inductorii Proliferării Peroxizomilor ndash Alpha (PPARα) icircn toate populaţiile de leucocite
studiate (Mo limfocite PMN eozinofile) atacirct icircn lotul pacienţilor cu SM cacirct şi icircn lotul
martor
12 Utilizacircnd intensitatea medie de fluorescenţă a anticorpilor anti- PPARα am arătat că
nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile este semnificativ mai redus
la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali
13 Acest studiu este primul care a demonstrat existenţa unei scăderi statistic semnificative a
nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofilele pacienţilor cu SM
confirmacircnd cercetările recente care au evidenţiat rolul eozinofilelor şi al receptorilor
PPARα icircn obezitate reglarea inflamaţiei cronice şi aterogeneza
14 Contrar aşteptărilor noastre icircn populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările
efectuate icircn cele două loturi de studiu (cu şi fără sindom metabolic) nu am evidenţiat
diferenţe statistic seminificative icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα la
subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali
15 Icircn populaţiile de Mo limfocite şi polimorfonucleare am observat corelaţii puternice
semnificativ statistic icircntre expresia PPARα icircn aceste tipuri celulare sugeracircnd existenţa
unui mecanism unic de control al inflamaţiei cronice la nivelul acestor celule probabil
diferit de cel din eozinofile
16 La subiecţii cu SM expresia relativă a PPARα icircn Eo este invers asociată cu expresia
receptorului CD36 (receptor al particulelor de ox - LDL şi propus ca un marker precoce al
aterosclerozei) dovedind rolul antiinflamator al receptorilor PPARα la nivel endotelial
17 La pacienţii cu antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială nivelul de
expresie al receptorilor PPARα icircn eozinofile şi Mo este diminuat comparativ cu subiecţii
fără antecedente familiale de hipertensiune arterială Putem spune că studiul efectuat de
noi aduce informaţii importante legate de geneză aterosclerozei şi hipertensiunii arteriale
18 Prin studiul asocierilor dintre receptorii PPARα şi componentele clinice ale sindromului
metabolic am arătat rolul acestor receptori icircn determinismul obezităţii de tip central
nivelul expresiei relative a receptorilor PPARα fiind invers proporţional cu circumferinţa
abdominală
19 Icircn acelaşi timp nivelul de expresie a PPARα icircn sindromul metabolic este asociat pozitiv
cu concentraţia serică a HDL-colesterolului şi invers asociat cu nivelul trigliceridelor
serice dovedind rolul acestor receptori icircn diminuarea procesului inflamator cronic de la
nivel vascular
20 La pacienţii cu SM scăderea expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofile este corelată cu
creşterea unor markeri ai sindromului inflamator cronic cardiometabolic (acid uric
fibrinogen) ilustracircnd importanta receptorilor icircn reglarea status-ului inflamator cronic din
sindromul metabolic
21 Utilizarea metodei flowcitometrice pentru studiul expresiei relative a receptorilor PPARα
icircn leucocite a adus informaţii importante cu privire la mecanismele moleculare de control
implicate icircn patogenia bolilor cardiometabolice icircn concordanţă cu cercetările care descriu
expresia PPAR icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale bronşice
keratinocite)
BIBLIOGRAFIE SELECTIVA
1 Kahn R Metabolic syndrome- what is the clinical usefulness Lancet 2008371(9628)1892-3
2 Reaven GM The metabolic syndrome is this diagnosis necessary Am J Clin Nutr 2006 83(6)1237-7
3 Grundy SM Pre-Diabetes Metabolic Syndrome and Cardiovascular Risk J Am Coll Cardiol 201259(7)
635-43
4 International Diabetes Federation IDF Diabetes Atlas 6th edn International Diabetes Federation Belgium
Brussels 20131-155
5 World Health Organization Global Status Report on Noncommunicable Diseases 2010 World Health
Organization Geneva Switzerland 20111-176
6 Coman AE Petrovanu R Sindromul metabolic in practica de ambulator Editura Pim Iaşi 2009 1-103
7 Grundy SM Becker D Clark LT et alThird Report of the National Cholesterol Education Program (NCEP)
Expert Panel on Detection Evaluation and Treatment of High Blood Cholesterol in Adults (Adult
Treatment Panel III) Final Report Circulation 2002106(25)3143-90
8 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J Metabolic syndrome- a new worldwide definition A Consensus Statement
from the International Diabetes Federation Diabet Med 2006 23(5)469-80
9 KG Alberti KG Eckel RH Grundy SM etal International Diabetes Federation task force on epidemiology
and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart Association World Heart
Federation International Atherosclerosis Society International Association for the study of obesity
Harmonizing the metabolic syndrome a joint interim statement of the International Diabetes Federation task
force on epidemiology and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart
Association World Heart Federation International Atherosclerosis society and International Association
for the study of obesity Circulation 2009120(16)1640-5
10 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J IDF Epidemiology Task Force The metabolic syndrome new
worldwide definition Lancet 2005 366 1059 - 62
11 Oleszczyk M Svab I Seifert B et al Primary healthcare in the developing part of Europe changes and
development in the former Eastern Bloc countries that joined the European Union following 2004 Med Sci
Monit 2009(15)78ndash84
12 Jung U J Choi M S Obesity and Its Metabolic Complications The Role of Adipokines and the
Relationship between Obesity Inflammation Insulin Resistance Dyslipidemia and Nonalcoholic Fatty
Liver Disease Int J Mol Sci 2014rsquo15(4) 6184-223
13 Vanden Heuvel JP Peters JM Peroxisome Proliferators In Ramos K (ed) Cellular and Molecular
Toxicology (Second Edition) Volume 2 New York Elsevier Science Inc 2010 145 - 67
14 Yessoufou A Wahli W Multifaceted roles of peroxisome proliferator-activated receptors (PPARs) at the
cellular and whole organism levels Swiss Med Wkl 2010140w13071 doi104414smw201013071
15 Azhar S Peroxisome proliferator-activated receptors metabolic syndrome and cardiovascular disease
Future Cardiology 20106(5)657-91
16 Andries G Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity
Diabetes and Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(Suppl)24-32
17 Zandbergen F Plutzky J PPARalpha in atherosclerosis and inflammation Biochim Biophys Acta
20071771(8)972-82
18 Straus DS Glass CK Anti-inflammatory actions of PPAR ligands new insights on cellular and molecular
mechanisms Trends Immunol 200728(12)551-8
19 Zlei M Zugun- Eloae F Carasevici E Citometrie icircn flux - Bază şi clinică Icircn Hinescu ME (ed) Citometrie icircn
flux - principii şi aplicaţii clinice Bucureşti Editura Viaţa Medicală Romacircnească 20111-128
20 Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity Diabetes and
Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(9)24-32
21 Woerly G Honda K Loyens M et al Peroxisome proliferator-activated receptors alpha and gamma down-
regulate allergic inflammation and eosinophil activation J Exp Med 2003198(3)411-21
22 Salle-Saumont D Brenuchon C Kanda A et al Peroxisome proliferator-activated receptor alpha regulates
skin inflammation and humoral response in atopic dermatitis J Clin Allergy Immunology 2008 21(4)962-8
23 Schote A Turner J Schiltz J et al Nuclear receptors in human immune cells expression and correlations
Mol Immunolog 200744(6)1436-45
24 DAmore S Vacca M Graziano G et al Nuclear receptors expression chart icircn peripheral blood
mononuclear cells identifies patients with Metabolic Syndrome Biochim Biophys Acta
20131832(12)2289-301
25 Uthurralt J Gordish-Dressman H Bradbury M T et al PPARalpha L162V underlies variation in serum
triglycerides and subcutaneous fat volume in young males BMC Med Genet 2007855
26 Hiukka A Leinonen ES Jauhiainen M et al Long-term effects of fenofibrate on VLDL and HDL
subspecies icircn participants with type 2 diabetes mellitus Diabetologia 2007 50(10)2067-75
27 Robins SJ Rubins HB Faas FH et alInsulin resistance and cardiovascular events with low HDL
cholesterol The Veterans Affairs HDL Intervention Trial (VA-HIT) Diabetes Care 2003 26(5)1513-7
28 Devaraj S Siegel D Jialal I Statin Therapy in Metabolic Syndrome and Hypertension Post-JUPITER
What is the Value of CRP Curr Atheroscler Rep 2011 13(1) 31ndash42
29 Imperatore G Riccardi G Iovino C et al Plasma Fibrinogen A New Factor of the Metabolic Syndrome A
population-based study Diabetes Care 19982 1(4)649-54
30 Krysiak R Gdula-Dymek A Bachowski R Okopien B Pleiotropic effects of atorvastatin and fenofibrate
in metabolic syndrome and different types of pre-diabete Diabetes Care 201033(10)2266-70
31 Hermans MP Impact of Fenofibrate on Type 2 Diabetes Patients with Features of the Metabolic Syndrome
Subgroup Analysis From FIELD Curr Cardiol Rev 20106(2)112-8
32 Silverstein R Inflammation atherosclerosis and arterial thrombosis Role of the scavenger receptor CD36
Cleveland Clinic Journal of Medicine 200976(Suppl 2)S27-S30
33 Hăncu N Obezitatea In Vereşiu IA (ed) Diabetul zaharat nutritia si bolile metabolice Volume 2 Editura
Echinox Cluj- Napoca 2010 1-15
Lista lucrări publicate
1 Elena Popa Maria Maidaniuc Agnes Bacusca Alamir Diaa Rodica Petrovanu Adorata Elena
Coman Disfuncţia endotelială ndash de la mecanisme moleculare la cuantifi care şi tratament icircn practica
medicală Practica Medicală 20149(3) 109-14
2 Elena Popa Agnes Bacusca Alamir Diaa Maria Maidaniuc Rodica Petrovanu Adorata Elena Coman
The function of insulin receptor (IRF) in evolution of obesity correlation with adipocytes diameters
Archives of the Balkan Medical Union 201449(3) 275-9
3 Elena Popa Florin Zugun-Eloae Mihaela Zlei Daniela Jitaru Oana Maria Pintilie Adorata Elena
Coman Maria Traian Didona Anca Ungureanu Eugen Carasevici - acceptata pentru numarul 42014
Flow cytometry analysis of PPAR-alpha receptors in metabolic syndrome) Revista Romană de
Medicină de Laborator(RRLM-D-14-00034R1- adeverinţa ataşată
9 Valorile eozinofilelor sunt crescute icircn sindromul metabolic iar explorarea relaţiei dintre
eozinofile şi obezitate constituie una din direcţiile de studiu actuale ale sindromului
metabolic
10 Evaluarea markerilor inflamatori icircn contextul sindromului metabolic este utilă icircn
evaluarea complexă a a factorilor de risc cardiometabolici
11 Prin metoda citometriei icircn flux am demonstrat prezenta Receptorilor Activaţi de
Inductorii Proliferării Peroxizomilor ndash Alpha (PPARα) icircn toate populaţiile de leucocite
studiate (Mo limfocite PMN eozinofile) atacirct icircn lotul pacienţilor cu SM cacirct şi icircn lotul
martor
12 Utilizacircnd intensitatea medie de fluorescenţă a anticorpilor anti- PPARα am arătat că
nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile este semnificativ mai redus
la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali
13 Acest studiu este primul care a demonstrat existenţa unei scăderi statistic semnificative a
nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofilele pacienţilor cu SM
confirmacircnd cercetările recente care au evidenţiat rolul eozinofilelor şi al receptorilor
PPARα icircn obezitate reglarea inflamaţiei cronice şi aterogeneza
14 Contrar aşteptărilor noastre icircn populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările
efectuate icircn cele două loturi de studiu (cu şi fără sindom metabolic) nu am evidenţiat
diferenţe statistic seminificative icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα la
subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali
15 Icircn populaţiile de Mo limfocite şi polimorfonucleare am observat corelaţii puternice
semnificativ statistic icircntre expresia PPARα icircn aceste tipuri celulare sugeracircnd existenţa
unui mecanism unic de control al inflamaţiei cronice la nivelul acestor celule probabil
diferit de cel din eozinofile
16 La subiecţii cu SM expresia relativă a PPARα icircn Eo este invers asociată cu expresia
receptorului CD36 (receptor al particulelor de ox - LDL şi propus ca un marker precoce al
aterosclerozei) dovedind rolul antiinflamator al receptorilor PPARα la nivel endotelial
17 La pacienţii cu antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială nivelul de
expresie al receptorilor PPARα icircn eozinofile şi Mo este diminuat comparativ cu subiecţii
fără antecedente familiale de hipertensiune arterială Putem spune că studiul efectuat de
noi aduce informaţii importante legate de geneză aterosclerozei şi hipertensiunii arteriale
18 Prin studiul asocierilor dintre receptorii PPARα şi componentele clinice ale sindromului
metabolic am arătat rolul acestor receptori icircn determinismul obezităţii de tip central
nivelul expresiei relative a receptorilor PPARα fiind invers proporţional cu circumferinţa
abdominală
19 Icircn acelaşi timp nivelul de expresie a PPARα icircn sindromul metabolic este asociat pozitiv
cu concentraţia serică a HDL-colesterolului şi invers asociat cu nivelul trigliceridelor
serice dovedind rolul acestor receptori icircn diminuarea procesului inflamator cronic de la
nivel vascular
20 La pacienţii cu SM scăderea expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofile este corelată cu
creşterea unor markeri ai sindromului inflamator cronic cardiometabolic (acid uric
fibrinogen) ilustracircnd importanta receptorilor icircn reglarea status-ului inflamator cronic din
sindromul metabolic
21 Utilizarea metodei flowcitometrice pentru studiul expresiei relative a receptorilor PPARα
icircn leucocite a adus informaţii importante cu privire la mecanismele moleculare de control
implicate icircn patogenia bolilor cardiometabolice icircn concordanţă cu cercetările care descriu
expresia PPAR icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale bronşice
keratinocite)
BIBLIOGRAFIE SELECTIVA
1 Kahn R Metabolic syndrome- what is the clinical usefulness Lancet 2008371(9628)1892-3
2 Reaven GM The metabolic syndrome is this diagnosis necessary Am J Clin Nutr 2006 83(6)1237-7
3 Grundy SM Pre-Diabetes Metabolic Syndrome and Cardiovascular Risk J Am Coll Cardiol 201259(7)
635-43
4 International Diabetes Federation IDF Diabetes Atlas 6th edn International Diabetes Federation Belgium
Brussels 20131-155
5 World Health Organization Global Status Report on Noncommunicable Diseases 2010 World Health
Organization Geneva Switzerland 20111-176
6 Coman AE Petrovanu R Sindromul metabolic in practica de ambulator Editura Pim Iaşi 2009 1-103
7 Grundy SM Becker D Clark LT et alThird Report of the National Cholesterol Education Program (NCEP)
Expert Panel on Detection Evaluation and Treatment of High Blood Cholesterol in Adults (Adult
Treatment Panel III) Final Report Circulation 2002106(25)3143-90
8 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J Metabolic syndrome- a new worldwide definition A Consensus Statement
from the International Diabetes Federation Diabet Med 2006 23(5)469-80
9 KG Alberti KG Eckel RH Grundy SM etal International Diabetes Federation task force on epidemiology
and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart Association World Heart
Federation International Atherosclerosis Society International Association for the study of obesity
Harmonizing the metabolic syndrome a joint interim statement of the International Diabetes Federation task
force on epidemiology and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart
Association World Heart Federation International Atherosclerosis society and International Association
for the study of obesity Circulation 2009120(16)1640-5
10 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J IDF Epidemiology Task Force The metabolic syndrome new
worldwide definition Lancet 2005 366 1059 - 62
11 Oleszczyk M Svab I Seifert B et al Primary healthcare in the developing part of Europe changes and
development in the former Eastern Bloc countries that joined the European Union following 2004 Med Sci
Monit 2009(15)78ndash84
12 Jung U J Choi M S Obesity and Its Metabolic Complications The Role of Adipokines and the
Relationship between Obesity Inflammation Insulin Resistance Dyslipidemia and Nonalcoholic Fatty
Liver Disease Int J Mol Sci 2014rsquo15(4) 6184-223
13 Vanden Heuvel JP Peters JM Peroxisome Proliferators In Ramos K (ed) Cellular and Molecular
Toxicology (Second Edition) Volume 2 New York Elsevier Science Inc 2010 145 - 67
14 Yessoufou A Wahli W Multifaceted roles of peroxisome proliferator-activated receptors (PPARs) at the
cellular and whole organism levels Swiss Med Wkl 2010140w13071 doi104414smw201013071
15 Azhar S Peroxisome proliferator-activated receptors metabolic syndrome and cardiovascular disease
Future Cardiology 20106(5)657-91
16 Andries G Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity
Diabetes and Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(Suppl)24-32
17 Zandbergen F Plutzky J PPARalpha in atherosclerosis and inflammation Biochim Biophys Acta
20071771(8)972-82
18 Straus DS Glass CK Anti-inflammatory actions of PPAR ligands new insights on cellular and molecular
mechanisms Trends Immunol 200728(12)551-8
19 Zlei M Zugun- Eloae F Carasevici E Citometrie icircn flux - Bază şi clinică Icircn Hinescu ME (ed) Citometrie icircn
flux - principii şi aplicaţii clinice Bucureşti Editura Viaţa Medicală Romacircnească 20111-128
20 Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity Diabetes and
Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(9)24-32
21 Woerly G Honda K Loyens M et al Peroxisome proliferator-activated receptors alpha and gamma down-
regulate allergic inflammation and eosinophil activation J Exp Med 2003198(3)411-21
22 Salle-Saumont D Brenuchon C Kanda A et al Peroxisome proliferator-activated receptor alpha regulates
skin inflammation and humoral response in atopic dermatitis J Clin Allergy Immunology 2008 21(4)962-8
23 Schote A Turner J Schiltz J et al Nuclear receptors in human immune cells expression and correlations
Mol Immunolog 200744(6)1436-45
24 DAmore S Vacca M Graziano G et al Nuclear receptors expression chart icircn peripheral blood
mononuclear cells identifies patients with Metabolic Syndrome Biochim Biophys Acta
20131832(12)2289-301
25 Uthurralt J Gordish-Dressman H Bradbury M T et al PPARalpha L162V underlies variation in serum
triglycerides and subcutaneous fat volume in young males BMC Med Genet 2007855
26 Hiukka A Leinonen ES Jauhiainen M et al Long-term effects of fenofibrate on VLDL and HDL
subspecies icircn participants with type 2 diabetes mellitus Diabetologia 2007 50(10)2067-75
27 Robins SJ Rubins HB Faas FH et alInsulin resistance and cardiovascular events with low HDL
cholesterol The Veterans Affairs HDL Intervention Trial (VA-HIT) Diabetes Care 2003 26(5)1513-7
28 Devaraj S Siegel D Jialal I Statin Therapy in Metabolic Syndrome and Hypertension Post-JUPITER
What is the Value of CRP Curr Atheroscler Rep 2011 13(1) 31ndash42
29 Imperatore G Riccardi G Iovino C et al Plasma Fibrinogen A New Factor of the Metabolic Syndrome A
population-based study Diabetes Care 19982 1(4)649-54
30 Krysiak R Gdula-Dymek A Bachowski R Okopien B Pleiotropic effects of atorvastatin and fenofibrate
in metabolic syndrome and different types of pre-diabete Diabetes Care 201033(10)2266-70
31 Hermans MP Impact of Fenofibrate on Type 2 Diabetes Patients with Features of the Metabolic Syndrome
Subgroup Analysis From FIELD Curr Cardiol Rev 20106(2)112-8
32 Silverstein R Inflammation atherosclerosis and arterial thrombosis Role of the scavenger receptor CD36
Cleveland Clinic Journal of Medicine 200976(Suppl 2)S27-S30
33 Hăncu N Obezitatea In Vereşiu IA (ed) Diabetul zaharat nutritia si bolile metabolice Volume 2 Editura
Echinox Cluj- Napoca 2010 1-15
Lista lucrări publicate
1 Elena Popa Maria Maidaniuc Agnes Bacusca Alamir Diaa Rodica Petrovanu Adorata Elena
Coman Disfuncţia endotelială ndash de la mecanisme moleculare la cuantifi care şi tratament icircn practica
medicală Practica Medicală 20149(3) 109-14
2 Elena Popa Agnes Bacusca Alamir Diaa Maria Maidaniuc Rodica Petrovanu Adorata Elena Coman
The function of insulin receptor (IRF) in evolution of obesity correlation with adipocytes diameters
Archives of the Balkan Medical Union 201449(3) 275-9
3 Elena Popa Florin Zugun-Eloae Mihaela Zlei Daniela Jitaru Oana Maria Pintilie Adorata Elena
Coman Maria Traian Didona Anca Ungureanu Eugen Carasevici - acceptata pentru numarul 42014
Flow cytometry analysis of PPAR-alpha receptors in metabolic syndrome) Revista Romană de
Medicină de Laborator(RRLM-D-14-00034R1- adeverinţa ataşată
BIBLIOGRAFIE SELECTIVA
1 Kahn R Metabolic syndrome- what is the clinical usefulness Lancet 2008371(9628)1892-3
2 Reaven GM The metabolic syndrome is this diagnosis necessary Am J Clin Nutr 2006 83(6)1237-7
3 Grundy SM Pre-Diabetes Metabolic Syndrome and Cardiovascular Risk J Am Coll Cardiol 201259(7)
635-43
4 International Diabetes Federation IDF Diabetes Atlas 6th edn International Diabetes Federation Belgium
Brussels 20131-155
5 World Health Organization Global Status Report on Noncommunicable Diseases 2010 World Health
Organization Geneva Switzerland 20111-176
6 Coman AE Petrovanu R Sindromul metabolic in practica de ambulator Editura Pim Iaşi 2009 1-103
7 Grundy SM Becker D Clark LT et alThird Report of the National Cholesterol Education Program (NCEP)
Expert Panel on Detection Evaluation and Treatment of High Blood Cholesterol in Adults (Adult
Treatment Panel III) Final Report Circulation 2002106(25)3143-90
8 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J Metabolic syndrome- a new worldwide definition A Consensus Statement
from the International Diabetes Federation Diabet Med 2006 23(5)469-80
9 KG Alberti KG Eckel RH Grundy SM etal International Diabetes Federation task force on epidemiology
and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart Association World Heart
Federation International Atherosclerosis Society International Association for the study of obesity
Harmonizing the metabolic syndrome a joint interim statement of the International Diabetes Federation task
force on epidemiology and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart
Association World Heart Federation International Atherosclerosis society and International Association
for the study of obesity Circulation 2009120(16)1640-5
10 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J IDF Epidemiology Task Force The metabolic syndrome new
worldwide definition Lancet 2005 366 1059 - 62
11 Oleszczyk M Svab I Seifert B et al Primary healthcare in the developing part of Europe changes and
development in the former Eastern Bloc countries that joined the European Union following 2004 Med Sci
Monit 2009(15)78ndash84
12 Jung U J Choi M S Obesity and Its Metabolic Complications The Role of Adipokines and the
Relationship between Obesity Inflammation Insulin Resistance Dyslipidemia and Nonalcoholic Fatty
Liver Disease Int J Mol Sci 2014rsquo15(4) 6184-223
13 Vanden Heuvel JP Peters JM Peroxisome Proliferators In Ramos K (ed) Cellular and Molecular
Toxicology (Second Edition) Volume 2 New York Elsevier Science Inc 2010 145 - 67
14 Yessoufou A Wahli W Multifaceted roles of peroxisome proliferator-activated receptors (PPARs) at the
cellular and whole organism levels Swiss Med Wkl 2010140w13071 doi104414smw201013071
15 Azhar S Peroxisome proliferator-activated receptors metabolic syndrome and cardiovascular disease
Future Cardiology 20106(5)657-91
16 Andries G Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity
Diabetes and Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(Suppl)24-32
17 Zandbergen F Plutzky J PPARalpha in atherosclerosis and inflammation Biochim Biophys Acta
20071771(8)972-82
18 Straus DS Glass CK Anti-inflammatory actions of PPAR ligands new insights on cellular and molecular
mechanisms Trends Immunol 200728(12)551-8
19 Zlei M Zugun- Eloae F Carasevici E Citometrie icircn flux - Bază şi clinică Icircn Hinescu ME (ed) Citometrie icircn
flux - principii şi aplicaţii clinice Bucureşti Editura Viaţa Medicală Romacircnească 20111-128
20 Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity Diabetes and
Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(9)24-32
21 Woerly G Honda K Loyens M et al Peroxisome proliferator-activated receptors alpha and gamma down-
regulate allergic inflammation and eosinophil activation J Exp Med 2003198(3)411-21
22 Salle-Saumont D Brenuchon C Kanda A et al Peroxisome proliferator-activated receptor alpha regulates
skin inflammation and humoral response in atopic dermatitis J Clin Allergy Immunology 2008 21(4)962-8
23 Schote A Turner J Schiltz J et al Nuclear receptors in human immune cells expression and correlations
Mol Immunolog 200744(6)1436-45
24 DAmore S Vacca M Graziano G et al Nuclear receptors expression chart icircn peripheral blood
mononuclear cells identifies patients with Metabolic Syndrome Biochim Biophys Acta
20131832(12)2289-301
25 Uthurralt J Gordish-Dressman H Bradbury M T et al PPARalpha L162V underlies variation in serum
triglycerides and subcutaneous fat volume in young males BMC Med Genet 2007855
26 Hiukka A Leinonen ES Jauhiainen M et al Long-term effects of fenofibrate on VLDL and HDL
subspecies icircn participants with type 2 diabetes mellitus Diabetologia 2007 50(10)2067-75
27 Robins SJ Rubins HB Faas FH et alInsulin resistance and cardiovascular events with low HDL
cholesterol The Veterans Affairs HDL Intervention Trial (VA-HIT) Diabetes Care 2003 26(5)1513-7
28 Devaraj S Siegel D Jialal I Statin Therapy in Metabolic Syndrome and Hypertension Post-JUPITER
What is the Value of CRP Curr Atheroscler Rep 2011 13(1) 31ndash42
29 Imperatore G Riccardi G Iovino C et al Plasma Fibrinogen A New Factor of the Metabolic Syndrome A
population-based study Diabetes Care 19982 1(4)649-54
30 Krysiak R Gdula-Dymek A Bachowski R Okopien B Pleiotropic effects of atorvastatin and fenofibrate
in metabolic syndrome and different types of pre-diabete Diabetes Care 201033(10)2266-70
31 Hermans MP Impact of Fenofibrate on Type 2 Diabetes Patients with Features of the Metabolic Syndrome
Subgroup Analysis From FIELD Curr Cardiol Rev 20106(2)112-8
32 Silverstein R Inflammation atherosclerosis and arterial thrombosis Role of the scavenger receptor CD36
Cleveland Clinic Journal of Medicine 200976(Suppl 2)S27-S30
33 Hăncu N Obezitatea In Vereşiu IA (ed) Diabetul zaharat nutritia si bolile metabolice Volume 2 Editura
Echinox Cluj- Napoca 2010 1-15
Lista lucrări publicate
1 Elena Popa Maria Maidaniuc Agnes Bacusca Alamir Diaa Rodica Petrovanu Adorata Elena
Coman Disfuncţia endotelială ndash de la mecanisme moleculare la cuantifi care şi tratament icircn practica
medicală Practica Medicală 20149(3) 109-14
2 Elena Popa Agnes Bacusca Alamir Diaa Maria Maidaniuc Rodica Petrovanu Adorata Elena Coman
The function of insulin receptor (IRF) in evolution of obesity correlation with adipocytes diameters
Archives of the Balkan Medical Union 201449(3) 275-9
3 Elena Popa Florin Zugun-Eloae Mihaela Zlei Daniela Jitaru Oana Maria Pintilie Adorata Elena
Coman Maria Traian Didona Anca Ungureanu Eugen Carasevici - acceptata pentru numarul 42014
Flow cytometry analysis of PPAR-alpha receptors in metabolic syndrome) Revista Romană de
Medicină de Laborator(RRLM-D-14-00034R1- adeverinţa ataşată
cholesterol The Veterans Affairs HDL Intervention Trial (VA-HIT) Diabetes Care 2003 26(5)1513-7
28 Devaraj S Siegel D Jialal I Statin Therapy in Metabolic Syndrome and Hypertension Post-JUPITER
What is the Value of CRP Curr Atheroscler Rep 2011 13(1) 31ndash42
29 Imperatore G Riccardi G Iovino C et al Plasma Fibrinogen A New Factor of the Metabolic Syndrome A
population-based study Diabetes Care 19982 1(4)649-54
30 Krysiak R Gdula-Dymek A Bachowski R Okopien B Pleiotropic effects of atorvastatin and fenofibrate
in metabolic syndrome and different types of pre-diabete Diabetes Care 201033(10)2266-70
31 Hermans MP Impact of Fenofibrate on Type 2 Diabetes Patients with Features of the Metabolic Syndrome
Subgroup Analysis From FIELD Curr Cardiol Rev 20106(2)112-8
32 Silverstein R Inflammation atherosclerosis and arterial thrombosis Role of the scavenger receptor CD36
Cleveland Clinic Journal of Medicine 200976(Suppl 2)S27-S30
33 Hăncu N Obezitatea In Vereşiu IA (ed) Diabetul zaharat nutritia si bolile metabolice Volume 2 Editura
Echinox Cluj- Napoca 2010 1-15
Lista lucrări publicate
1 Elena Popa Maria Maidaniuc Agnes Bacusca Alamir Diaa Rodica Petrovanu Adorata Elena
Coman Disfuncţia endotelială ndash de la mecanisme moleculare la cuantifi care şi tratament icircn practica
medicală Practica Medicală 20149(3) 109-14
2 Elena Popa Agnes Bacusca Alamir Diaa Maria Maidaniuc Rodica Petrovanu Adorata Elena Coman
The function of insulin receptor (IRF) in evolution of obesity correlation with adipocytes diameters
Archives of the Balkan Medical Union 201449(3) 275-9
3 Elena Popa Florin Zugun-Eloae Mihaela Zlei Daniela Jitaru Oana Maria Pintilie Adorata Elena
Coman Maria Traian Didona Anca Ungureanu Eugen Carasevici - acceptata pentru numarul 42014
Flow cytometry analysis of PPAR-alpha receptors in metabolic syndrome) Revista Romană de
Medicină de Laborator(RRLM-D-14-00034R1- adeverinţa ataşată