+ All Categories
Home > Documents > REZUMAT TEZĂ DE DOCTORAT - umfiasi.ro Doctorat/rezumat... · universitatea de medicinĂ Şi...

REZUMAT TEZĂ DE DOCTORAT - umfiasi.ro Doctorat/rezumat... · universitatea de medicinĂ Şi...

Date post: 06-Feb-2018
Category:
Upload: phammien
View: 252 times
Download: 1 times
Share this document with a friend
33
UNIVERSITATEA DE MEDICINĂ ŞI FARMACIE “GRIGORE T. POPA” IAŞI FACULTATEA DE MEDICINĂ REZUMAT TEZĂ DE DOCTORAT ROLUL RECEPTORILOR ACTIVAŢI DE INDUCTORII PROLIFERĂRII PEROXIZOMILOR - ALPHA ÎN SINDROMUL METABOLIC Conducător ştiinţific, Prof. Univ. Dr. RODICA PETROVANU Doctorand, ELENA HATNEANU (POPA) Iaşi - 2014
Transcript
Page 1: REZUMAT TEZĂ DE DOCTORAT - umfiasi.ro Doctorat/rezumat... · universitatea de medicinĂ Şi farmacie “grigore t. popa” iaŞi facultatea de medicinĂ rezumat tezĂ de doctorat

UNIVERSITATEA DE MEDICINĂ ŞI FARMACIE

ldquoGRIGORE T POPArdquo IAŞI

FACULTATEA DE MEDICINĂ

REZUMAT

TEZĂ DE DOCTORAT

ROLUL RECEPTORILOR ACTIVAŢI DE INDUCTORII

PROLIFERĂRII PEROXIZOMILOR - ALPHA

IcircN SINDROMUL METABOLIC

Conducător ştiinţific

Prof Univ Dr RODICA PETROVANU

Doctorand

ELENA HATNEANU (POPA)

Iaşi - 2014

Cuprins

PARTEA GENERALĂ 1

CAPITOLUL I SINDROMUL METABOLIC 1

I1Introducere 1

I2 Criterii de diagnostic al sindromului metabolic 1

I3 Epidemiologia sindromului metabolic 3

I4 Patogenia sindromului metabolic 4

CAPITOLUL II RECEPTORII ACTIVAŢI DE INDUCTORII PROLIFERĂRII

PEROXIZOMILOR - ALPHA 11

II1 Generalităţi 11

II2 Istoric 12

II3 Structura PPAR 12

II4 Mecanismul acțiunii PPAR 13

II5 Clasificarea receptorilor PPAR 13

II6 Liganzii PPARα 15

II7 Reglarea expresiei PPARα 15

II8 Rolul receptorilor activaţi de inductorii proliferării peroxizomilor alpha ndashPeroxisome

Proliferator-Activated Receptor-Alpha ( PPARα) icircn organismul uman 16

II81 Rolul PPARα in reglarea homeostaziei energetice a organismului uman 16

II82 Rolul PPARα icircn reglarea metabolismului lipidic 17

II83 Rolul PPARα icircn modularea inflamaţiei 18

II9 Concluzii 39

PARTEA PERSONALĂ 41

CAPITOLUL III SCOPUL ŞI MOTIVAŢIA STUDIULUI CONSIDERAŢII ETICE 41

III1 Motivația cercetării 41

III2 Scopul studiului 42

III3 Considerații etice 42

CAPITOLUL IV STUDIUL SINDROMULUI METABOLIC IcircN POPULAŢIA

SELECTATĂ 43

IV1 Obiectivele studiului sindromului metabolic 43

IV2 Etapele studiului sindromului metabolic 43

IV3 Studiul epidemiologic icircn populaţia selectată 43

IV31Scopul studiului 43

IV32 Obiectivele studiului 43

IV33 Lotul de studiu 43

IV34 Protocolul studiului epidemiologic al sindromului metabolic 44

IV35 Metode utilizate icircn cercetare 45

IV36 Analiza statistică 46

IV37 Rezultate 46

IV38 Discuţii 62

IV39 Concluzii 64

IV4 Studiul sindromlui inflamator cronic icircn cadrul sindromului metabolic 65

IV41 Scopul studiului 65

IV42 Obiectivele studiului 65

IV43Material şi metodă 65

IV44 Analiza statistică 65

IV45 Rezultate 66

IV46Discuţii 79

IV47 Concluzii 80

Capitolul V STUDIUL RECEPTORILOR ACTIVAŢI DE INDUCTORII PROLIFERĂRII

PEROXIZOMILOR-ALPHA IcircN LEUCOCITELE CIRCULANTE 81

V1 Ipoteza de lucru 81

V2 Material și metodă 82

V3 Analiza statistică 87

V4 Rezultate 87

V41 Analiza loturilor studiate 87

V42 Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα 91

V43 Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor CD36 106

V44 Studiul corelaţiilor icircn cele două loturi 111

V5 Discuţii 118

V6 Concluzii 128

VI LIMITE ȘI DIFICULTĂȚI IcircN CERCETARE 129

VII ORIGINALITATEA ȘI CONTRIBUȚIILE INOVATIVE ALE TEZEI DE

DOCTORAT PERSPECTIVE DE CERCETARE 130

VIII CONCLUZII FINALE 131

IX BIBLIOGRAFIE 133

X ANEXE 148

Fişa electronică de studiu Consimţămacircntul informat al pacientului Recoltarea probelor de sacircnge venos pentru studiul PPARα

Protocol marcare CD14 - CD36

Imagini PPARα - citometrie icircn flux

Imagini CD36 Lista lucrări publicate

LISTA ABREVIERI

CA - Circumferinţa abdominalăcm - CentimetriCRP - Proteina C reactivăCol - Colesteroldl - DecilitruEo - EozinofileHDL - High density lipoprotein (lipoproteine cu densitate icircnaltă)IDF - Federaţia Internaţională de DiabetIgE - ImunoglobulinăIMC- Indice de masă corporalăLy - LimfociteLDL- Low density lipoprotein (lipoproteine cu densitate joasă)mg - MiligramMo- MonociteNCEP-ATP III - Naţional Cholesterol Education Program Adult Treatment Panel IIIPPAR - Receptorii Activaţi de Inductorii Proliferarii Peroxizomilor (peroxizome proliferator -activated receptor)PMN - PolimorfonucleareSM - Sindrom metabolicTA - Tensiunea arterialăTAS - Tensiune arterială sistolicăTAD - Tensiune arterială diastolicăTG - Trigliceride

Teza cuprinde un număr de 118 de figuri 41 de tabele și 280 referințe bibliograficeNumerotarea tabelelor şi figurilor este identică cu cea din teză

SCOPUL ŞI MOTIVAŢIA STUDIULUI

Motivația cercetării

La nivel mondial sindromul metabolic (SM) reprezintă o importantă problemă de

sănătate publică reunind asocierea dintre obezitate abdominală şi factori de risc majori

cardiovasculari (hiperglicemia dislipidemia hipertensiunea arterială) (12) Se estimează că

SM afectează peste 25 din populaţia generală iar aproximativ două treimi din pacienţii cu

SM sunt predispuşi la un eveniment cardiovascular major (3) Icircn prezent se acţionează pe

două căi pentru controlul factorilor de risc cardiometabolici incluşi icircn SM managementul

stilului de viaţă (scăderea greutăţii corporale prin combaterea sedentarismului şi adoptarea

unei diete antiaterogene şi hipocalorice) şi administrarea terapiei medicamentoase Deşi atacirct

modificarea stilului de viață cacirct și terapia medicamentoasă vizează controlul factorilor de risc

cardiometabolici conform ghidurilor medicale adoptate atingerea ţintelor terapeutice este

greu de realizat (1011) Icircn aceste condiţii introducerea unor noi metode diagnostice şi

terapeutice bazate pe etiopatogenia SM ar putea icircmbunătăţi calitatea vieţii bolnavilor şi SM şi

ar conduce pe termen lung la creşterea speranţei medii de viaţă Cercetările actuale sunt

orientate spre descifrarea modului icircn care modificările metabolismului incluzacircnd rezistenţa la

insulină dislipidemia obezitatea abdominală pot accelera ateroscleroza privită ca o

complicaţie metabolică și indusă de inflamație (12) Icircn contextul studiului SM receptorii

nucleari activaţi de inductorii proliferării peroxizomilor-alpha-α (PPARα) atrag atenţia

datorită rolului deţinut icircn reglarea oxidării acizilor graşi metabolismul lipidelor şi

lipoproteinelor inflamaţie cronică şi aterogeneză (131415) Aceștia reprezintă astfel veriga

lipsă patogenică care leagă modificările metabolice de procesul inflamator cronic

autoicircntreținut care duce la disfuncția endotelială și aterogeneză Acţionacircnd ca factori de

transcripţie activarea PPARα determină scăderea nivelului seric al trigliceridelor şi HDL-col

şi protejează față de profilul lipidic aterogenetic prin modularea status-ului proinflamator şi

diminuarea insulinorezistenţei (1617) Rolul PPARα icircn reglarea metabolismului lipidic

balanţei energetice şi icircn diminuarea răspunsului proinflamator fac din aceşti receptori o

potenţială ţinta icircn tratamentul afecţiunilor icircn care rolul inflamaţiei cronice este bine cunoscut

Se descrie astfel o nouă posibilitate de icircmbunătăţire a prognosticului afecţiunilor cronice cu

impact major asupra sănătăţii publice incluzacircnd ateroscleroza diabetul zaharat boala cronică

obstructivă pulmonară maladia Parkinson demența Alzheimer şi nu icircn ultimul racircnd

neoplaziile (18)

Scopul studiului

Icircn cadrul Tezei de Doctorat mi-am propus realizarea unei cercetări referitoare la

rolul Receptorilor Activaţi de Inhibitorii Proliferării Peroxizomilor- alpha icircn contextul

sindromului metabolic alături de completarea datelor epidemiologice existente cu privire la

prevalenţa acestui sindrom icircn populaţia aflată icircn evidenţa unui Cabinet de Medicină de

Familie din oraşul Iaşi Ca urmare cercetarea efectuată a urmărit două aspecte1 studiul

epidemiologic al SM icircn populaţia unui Cabinet de Medicină de Familie urmată de

investigarea markerilor inflamatori prezenţi icircn SM 2 investigarea prezenţei și a nivelului de

expresie relativă a receptorilor PPARα icircn leucocitele circulante recoltate din sacircngele

subiecţilor studiaţi celule care exprimă aceşti receptori şi a căror rol icircn inflamaţie şi

aterogeneză este bine cunoscut

Considerații etice Studiul a primit avizul Comisiei de Etică a Universităţii de Medicină

şi Farmacierdquo Gr T Popardquo Iaşi Studiul a fost condus icircn conformitate cu Declaraţia de la

Helsinki actualizată

STUDIUL SINDROMULUI METABOLIC IcircN POPULAŢIA SELECTATĂ

Obiectivele studiului sindromului metabolic

a evaluarea din punct de vedere clinic şi biologic a sindromului metabolic

b identificarea tipului de SM icircn raport cu numărul de componente

c stabilirea prevalenţei sindromului metabolic icircn populaţia studiată

d studiul markerilor inflamatori prezenţi icircn SM

Studiul epidemiologic icircn populaţia selectată

Am efectuat un studiu epidemiologic transversal care şi-a propus stabilirea prevalenţei

sindromului metabolic şi a componentelor sale icircn populaţia icircnscrisă pe lista unui cabinet de

medicină de familie Studiul s-a desfăşurat pe parcursul a 12 luni icircn perioada 01012013ndash

31122013 icircn cadrul Cabinetului de Medicină de Familie CMI Popa Elena situat icircn strada

Ion Creanga nr 73 din Iaşi

Obiectivele studiului - evaluarea din punct de vedere clinic şi biologic a sindromului metabolic

- identificarea tipului de SM icircn raport cu numărul de componente

- stabilirea prevalenţei sindromului metabolic icircn populaţia studiată

Lotul de studiu a fost constituit din populaţia de ambele sexe cu vacircrsta cuprinsă icircntre

18 şi 91 ani icircnscrisă pe lista medicului de familie Subiecţii au fost invitaţi să participe la

studiu icircn luna naşterii realizacircnd astfel o programare a vizitelor pe parcursul a 12 luni

Criteriile de includere icircn lotul de studiu vacircrsta peste 18 ani capacitate de decizie

domiciliul stabil icircn Romacircnia participare pe baza consimţămacircntului liber informat Criteriile

de excludere vacircrstă sub 18 ani femei gravide sau care alăptează bolnavi icircn faza terminală

subiecţi care refuză semnarea consimţămacircntului informat Nu s-au formulat criterii care să

aducă discriminări legate de sex etnie sau rasă

Protocolul studiului epidemiologic al sindromului metabolic

Icircn cadrul studiului epidemiologic s-au realizat cacircte două vizite pentru fiecare participant La

prima vizită subiecţii au fost informaţi asupra studiului icircn cadrul cercetării doctorale şi au

semnat Consimţămacircntul liber informat Pentru fiecare participant s-a completat fişa de studiu

computerizată incluzacircnd date anamnestice şi clinice (talie greutate corporală perimetru

abdominal) La a doua vizită s-au recoltat probe biologice (sacircnge venos) de către o asistentă

specializată pentru următoarele determinări biochimice (glicemie colesterol total HDL-

colesterol LDL-colesterol trigliceride acid uric creatinină fibrinogen proteină C reactivă)

şi hematologice (hemoleucograma VSH) Pentru diagnosticarea SM am utilizat criteriile

de diagnostic Harmonised I (tabel VI) Am comparat prevalenţa SM conform criteriilor

Harmonised I cu prevalenţa obţinută prin aplicarea criteriilor IDF respectiv ATP III

Analiza statistică Pentru analiza parametrilor studiaţi icircn SM am realizat icircmpreună cu

firma Arhilog Soft un program icircn care sunt incluşi parametrii de diagnostic ai SM şi care

permite icircncadrarea pacienţilor funcţie de componentele SM icircn SM3 SM4 SM5 De

asemenea programul permite editarea şi arhivarea unei fişe de observaţie pentru fiecare

participant la studiu precum şi crearea unei baze de date compatibile cu programul Microsoft

Office Excel 97-2003

Menţionăm că acest program poate stoca

şi alţi parametri clinici şi paraclinici utilizaţi icircn evaluarea complexă a SM putacircnd fi ulterior

introdus ca un program de monitorizare a evoluţiei pacienţilor Pentru prelucrarea statistică a

parametrilor s-au folosit programele Microsoft Office Excel 97-2003 SPSS-10 (Statistical

Package for Social Sciences) şi aplicaţia Medcalc Statistical Software ndash 1333 Valoarea lui p

Figura 41 Program de

analiză a parametrilor SM

mai mică de 005 a fost considerată semnificativ statistic

Rezultate Analiza lotului de studiu s-a efectuat icircn funcţie de mediul de provenienţă sex vacircrstă şi

vacircrsta medie Caracteristicile clinice şi biochimice ale lotului studiat sunt reprezentate icircn

tabelul VIII

Tabel VIII Caracteristicile lotului studiat Media 95 CI SD Minimum Maximum

Vacircrsta (ani) 4751 4661 - 4841 1798 1800 9100

CA (cm) 8830 8764 - 8896 1316 5600 13400

IMC (kgm2) 2603 2578 - 2628 497 1900 4500

TAD (mmHg) 7529 74883 - 7571 827 6000 11500

TAS (mmHg) 11730 11650 - 11810 1590 9000 19000

Glicemie (mgdl) 9435 9328 - 9542 2138 7200 40000

HDL- col(mgdl) 4498 4427 - 4570 1422 2100 9200

TG(mgdl) 12269 11887 - 12651 7157 4800 87900

Determinarea scorului SM

Am aplicat criteriile de diagnostic şi am calculat scorul de SM pentru fiecare subiect (0-

absenţa criteriului 2- prezenţa criteriului) (fig44)

Figura 44 Frecvenţa scorului SM icircn

populaţia studiată conform criteriilor

SM Harmonised (A) IDF (B) ATP III

(C) Se observă că distribuţia scorurilor

SM conform criteriilor de diagnostic este

identică icircn cazul aplicării criteriilor

Harmonized I şi IDF

Scorul de SM a avut valori pare

cuprinse icircntre intervalul 0 - 10 pacienţii

cu SM avacircnd un scor mai mare sau egal

cu 6

Icircn lotul studiat am analizat prezenţa simultană a criteriilor Harmonised I de diagnostic şi

am constatat prezenţa SM la 389 subiecţi (204 femei şi 185 bărbaţi) reprezentacircnd 2542

(95CI 2296-2808) din totalul populaţiei studiate Raportul prevalenţelor specifice pe sexe

bărbaţifemei a fost de 103 (95 CI084 -126)Icircn concordanţă cu criteriile IDF am

identificat un număr de 325 pacienţi cu SM (175 femei şi 150 bărbaţi) iar prevalenţa SM icircn

populaţia studiată conform IDF a fost de 2124 (95 CI 1899ndash 2368) Raportul

prevalenţelor specifice la bărbaţi versus femei a fost de 0977 (95 CI 078 ndash122) Utilizacircnd

definiţia ATP III au fost identificaţi un număr de 229 subiecţi cu SM Prevalenţa SM a fost

C

0

100

200

300

400

500

600

700

Scor SM ATP III

Număr pacienţi

0 2 4 6 8 10

ATP III SM5 SM4 SM3 non SM

B

0 50

100 150 200 250 300 350 400 450

Scor SM IDF

Număr pacienţi

0 2 4 6 8 10

IDF SM5 SM4 SM3 non SM

A

0

50

100

150

200

250

300

350

400

450

Scor SM Harmonised I

Număr pacienţi

0 2 4 6 8 10

HARMONIZED I SM5 SM4 SM3 non SM

de 1497 (95CI 1309 ndash 1704) icircn populaţia studiată Au fost calculate prevalenţele pe

sexe şi au fost găsite valorile de 1343 (95CI 010 ndash 164) la bărbaţi respectiv 1632

(95 CI 1366 ndash 1934) la femei raportul dintre acestea fiind de 082 (95CI 062 ndash 107)

Pentru fiecare asociere dintre componentele SM diagnosticat conform criteriilor

Harmonised I am calculat prevalenţele icircn cadrul SM(tabel XVI)

Tabel XVI Prevalenţa asocierilor dintre componentele SM Număr

pacienţi

Ponderea icircn cadrul

pacienţilor cu SM

(95 CI)

Prevalenţa icircn

populaţia studiată

(95 CI)

SM cu trei componente (SM3)

241 6195 (5438ndash7029) 1575 (1383-

1787)

Obezitate centrală + hipertensiune arterială +

hipertrigliceridemie

45 1154 (844ndash1548) 294 (214-393)

Obezitate centrală + hipertensiune arterială + hipo-

HDLcolesterolemie

38 979 (691ndash1340) 248 (175-340)

Obezitate centrală + hipertrigliceridemie +

hipoHDL-colesterolemie

34

874 (605ndash1221) 222 (153-310)

Obezitate centrală + modificări ale metabolismului

glucidic + hipertensiune arterială

31 796 (541ndash1131) 202 (137-287)

Hipertensiune arterială + hiper-trigliceridemie +

hipoHDL- colesterolemie

26 668 (436 ndash979) 169 (111-249)

Modificări ale metabolismului glucidic +

hipertensiune arterială + hiper-trigliceridemie

21 539 (334-825) 137 (085-209)

Obezitate centrală + modificări ale metabolismului

glucidic + hipertrigliceridemie

15 385 (215-636) 098 (054-116)

Modificări ale metabolismului glucidic

hipertrigliceridemie + hipoHDL-colesterolemie

12 308 (159-538) 078 (040-137)

Modificări ale metabolismului glucidic +

hipertensiune arterială + hipoHDLcolesterolemie

10 257 (123ndash472) 065 (031-120)

Obezitate centrală + modificări ale metabolismului

glucidic + hipo-HDL-col

9 231 (105ndash439) 058 (026-111)

SM cu patru componente (SM4) 104 2674 (2184-239) 679 (555-823)

Obezitate centrală + modificări ale metabolismului

glucidic + hipertensiune arterială + hipoHDL-

colesterolemie

32 822 (562-1116) 209 (143-

295)

Obezitate centrală + hipertensiune arterială +

hipertrigliceridemie + hipoHDL-col

25 642 (415- 948) 163 (105-241)

Obezitate centrală + modificări ale metabolismului

glucidic + hipertri-gliceridemie + hipoHDL-

colesterolemie

12 308 (159-538) 078 (040-137)

Modificări ale metabolismului glucidic +

hipertensiune arterială + hipertri-gliceridemie +

hipoHDL-colesterolemie

6 154 (056- 335) 039 (014-085)

SM cu cinci componente (SM5) 44 1131 (822-1518) 287 (209-386)

Total (SM3 + SM4 + SM5) 389 100 2542(2296-

2808)

Analizacircnd componentele SM la cei 389 pacienţi diagnosticaţi cu SM conform criteriilor

Harmonised I am constatat că obezitatea centrală este cea mai bine reprezentată icircn SM dintre

aceste componente (8072 95CI 7644 - 8452) urmată de HTA (7892 95CI 7453

- 8287) hiperTG (6915 95 CI 6430-7371) hipo-HDL-col (6375 95 CI 5876-

6854) şi hiperglicemie (5681 95 CI5173- 6179)

Standardizarea prevalenţelor funcţie de vacircrstă şi sex Analiza statistică a relevat faptul

că prevalenţa SM creşte cu icircnaintarea icircn vacircrstă Dacă pentru vacircrsta cuprinsă icircntre 35-54 ani

prevalenţa la bărbaţi este semnificativ mai mare comparativ cu femeile (raport calculat B F -

183 P=0003) pentru celelalte grupe de vacircrsta nu s-au observat diferenţe semnificative icircntre

sexul feminin şi cel masculin Am observat că după instalarea menopauzei la femei

prevalenţa SM (corespunzătoare Harmonised I) la femei depăşeşte 50 iar la bărbaţi atinge

42 Utilizacircnd European Standard Population (175) am efectuat standardizarea funcţie de

vacircrstă şi sex a prevalenţelor bdquocruderdquo (brute) obţinute icircn populaţia studiată şi am calculat o

prevalenţă standardizată a SM de 2732 (95 CI 2460-3003) La sexul masculin

prevalenţa standardizată a SM a fost de 2760 (95 CI 2362 - 3157) iar la sexul feminin

am obţinut valoarea de 2854 (95 CI 2462 - 3245)

Discuţii

Studiul desfăşurat de noi a investigat prezenţa SM icircn populaţia unui Cabinet de Medicină

de Familie Icircn Europa prevalenţa SM este de aproximativ 25-30 Statele Unite Ale Americii

au raportat o prevalenţă a sindromului metabolic de 22 icircn populaţia cu vacircrsta peste 20 ani

pe cacircnd la vacircrstă mai mare de 60 ani s-a observat o prevalenţă de 44 (1419) Icircn studiul

efectuat am observat o prevalenţă standardizată de 2732 (95 CI 2460-3003) care este

icircn concordanţă cu prevalenţele raportate icircn Europa precum şi o creştere a ponderii SM icircn

populaţie icircn raport cu vacircrsta Am preferat utilizarea definiţiei Harmonised I pentru SM

deoarece cuprinde criterii adaptate pentru o abordare unitară a SM mărind astfel numărul

pacienţilor diagnosticaţi şi care vor urma tratament conform Ghidurilor de Practică Medicală

Limitările acestui studiu sunt legate de faptul că este concentrat doar pe populaţia asigurată şi

neasigurată aflată pe lista unui medic de familie din mediul urban Se pot efectua studii la

nivelul Cabinetelor Medicale de Medicină de Familie dar trebuie să se aplice pe un lot

reprezentativ urbanrural care să reprezinte populația acelei regiuni Utilizarea structurilor

populaționale atașate cabinetului de MF este utilă atacirct pentru cele clinice cacirct și pentru cele

epidemiologice deoarece surprinde populația studiată icircn mediul de viață cotidian Prevalenţa

mare a SM icircn populaţia studiată necesită aplicarea unei politici eficiente de sănătate publică

deoarece riscul producerii evenimentelor cardiovasculare majore poate fi redus semnificativ

printr-un control adecvat al componentelor SM (obezitate dislipidemii hipertensiune

arterială şi hiperglicemie

Studiul sindromului inflamator cronic icircn cadrul sindromului metabolic

Obiectivele studiului

- studierea markerilor inflamaţiei cronice şi aterogenezei la subiecţii cu şi fără SM

- evaluarea importanţei markerilor studiaţi ai inflamaţiei cronice icircn diagnosticul de

ambulator al sindromului metabolic

Material şi metodă

Icircn cercetarea inflamaţiei cronice din SM au fost incluşi 1530 subiecţi de ambele sexe cu

vacircrsta cuprinsă icircntre 18-91 ani icircnscrişi pe lista CMI Popa Elena Studiul s-a desfăşurat icircn

perioada 01012013ndash 31122013 Populaţia ţintă a fost identică cu cea din studiul

epidemiologic şi s-a desfăşurat concomitent cu studiul prevalentei SM Subiecţii au fost

icircmpărţiţi icircn două loturi lotul cu SM (Lot SM) şi lotul de control (fără SM)

Lot SM a) criterii de includerevacircrsta peste 18 ani recrutarea pe baza semnării

Consimţămacircntului liber informat SM diagnosticat pe baza criteriilor Harmonised I (14) b)

criterii de excluderevacircrstă sub 18 anirefuzul semnării Consimţămacircntului liber informat

femei icircn perioada de graviditate sau de lactaţie

Lot Control (fără SM) a) criterii de includerevacircrsta peste 18 anirecrutarea pe baza

semnării Consimţămacircntului liber informat absenţa sindromului metabolic b) criterii de

excluderevacircrstă sub 18 ani refuzul semnării Consimţămacircntului liber informatfemei icircn

perioada de graviditate sau de lactaţie

Rezultate

Lotul cu SM (Lot SM) a fost format din cei 389 pacienţi diagnosticaţi cu SM conform

criteriilor Harmonised I Lotul SM a fost alcătuit din 185 bărbaţi şi 204 femei raportul

bărbaţifemei fiind de 090 (95 CI073-112) Lotul de control (fără SM) a fost alcătuit

din cei 1141 participanţi care nu au icircntrunit criteriile de diagnostic ale sindromului metabolic

Din cei 1141 de subiecţi 530 au fost de sex masculin iar 611 de sex feminin raportul

bărbaţifemei fiind 087 (95 CI 077-097) Vacircrsta subiecţilor a fost semnificativ mai mare

icircn lotul pacienţilor cu SM (5976plusmn1322 ani) comparativ cu lotul martor (4333plusmn 1748 ani) (t-

Test Plt00001) Aşa cum ne-am aşteptat valorile medii ale componentelor clinice ale SM

(circumferinţa abdominală tensiunea arterială sistolică şi diastolică) au fost mai mari icircn lotul

pacienţilor cu SM (t-Test Plt0001 pentru fiecare dintre componente) Studiind parametrii

biochimici incluşi icircn diagnosticul SM valorile medii ale glicemiei şi TG au fost semnificativ

mai crescute icircn lotul SM (t-Test Plt00001 pentru ambele constante) Icircn acelaşi timp

valoarea medie determinată a HDL-col a fost semnificativ mai mare la subiecţii din lotul

martor ( t-Test Plt00001) SM se caracterizează printr-o dislipidemie aterogenă

caracterizată de creşterea TG scăderea HDL-col concomitent cu creşterea LDL-col creşterea

Non-HDL-col şi a raportului de aterogenitate (Col totalHDL-col) (185) Comparacircnd cele

două loturi am observat că valoarea medie a LDL-colesterolului determinată icircn lotul

pacienţilor cu SM a fost semnificativ mai mare faţă de subiecţii din lotul martor (t-Test P =

00002) Măsurarea Non-HDL-colesterolului a arătat prezenţa unei diferenţe semnificative

icircntre cele două loturi (figura 420 B) Astfel icircn concordanţă cu prezenţa dislipidemiei

aterogene valoarea medie a Non-HDL-col a fost semnificativ mai mare (t-Test Plt 00001) icircn

lotul cu SM comparativ cu lotul de control Icircn contextul inflamației cronice şi aterogenezei

din sindromul metabolic am evaluat sensibilitatea şi specificitatea Non-HDL-colesterolului

ca test diagnostic al SM Valoarea Non-HDL-colesterolului care prezice cu cea mai mare

acurateţe prezenţa SM a fost de 151 mgdl (punctul de ldquocut-offrdquo) pentru care am calculat o

sensibilitate de 64 27 şi o specificitate de 5872 Calculul ariei AUC a furnizat valoarea

de 0605 şi deci determinarea concentraţiei serice a parametrului Non-HDL-colesterolului are

valoarea unui marker cu acurateţe redusă Am studiat valorile raportului Col totalHDL-col icircn

cele două loturi şi am constatat că la pacienţii cu SM valoarea media a raportului de

aterogenitate este semnificativ mai mare faţă de valoarea raportului determinată icircn lotul

martor (t-Test Plt 00001) Pentru raportul de aterogenitate studiat analiza curbei ROC a

arătat că valorile mai mari decacirct punctul de ldquocut-offrdquo de 431 prezic prezenţa SM cu cea mai

mare sensibilitate (6381 ) şi specificitate (6582)Valoarea AUC pentru indicele de

aterogenitate a fost de 0667 şi icircn studiul SM acest indice poate fi considerat un marker cu

acurateţe redusă Valoarea medie determinată a acidului uric la subiecţii fără SM a fost

semnificativ mai mică decacirct icircn lotul SM (t-Test Plt 00001) Curba ROC a arătat că valorile

acidului mai mari de 43 mgdl prezic diagnosticul de SM cu cea mai mare sensibilitate

(8107) şi specificitate (5328) Pentru acidul uric AUC a avut valoarea de 0655 şi

icircncadrează determinarea acidului uric seric icircn racircndul testelor cu acurateţe redusă (187)

Comparacircnd populaţiile de leucocite (tabel XXI) valoarea medie determinată a

numărului de Eo a fost semnificativ mai mare icircn lotul cu SM comparativ cu lotul martor (t-

Test Plt0001) Analizacircnd curba ROC trasată pentru valorile numărului de Eo am observat

că valorile ldquocut-offrdquo mai mari de 200 Eomm3

pot prezice prezenta SM cu cea mai mare

specificitate (7705) şi sensibilitate (3978) Pentru diagnosticul SM calculul ariei AUC a

arătat faptul că determinarea numărului de Eo are valoarea unui test diagnostic cu acurateţe

redusă (AUC = 0 589) Comparacircnd valorile medii ale fibrinogenului am calculat o diferenţă

statistic semnificativă icircntre cele două loturi valoarea medie a fibrinogenului fiind mai mare icircn

lotul SM ((t-Test P lt 00001) Cu ajutorul curbei ROC am observat că valorile fibrinogenului

mai mari de 306 mgdl prezic sindromul metabolic cu o sensibilitate de 7511 şi specificitate

de 6056 Fibrinogenul a fost icircncadrat icircn categoria markerilor inflamatori cu acurateţe

redusă AUC avacircnd valoarea de 0690 Icircn loturile de studiu am calculat AUC corespunzătoare

criteriilor de diagnostic ale SM Am observat că icircn cazul scorului Harmonised I

sensibilitatea şi specificitatea sunt de 100 iar AUC este egală cu 1000 Pentru cele cinci

criterii de diagnostic AUC a avut valori icircntre 0636 (pentru variabila HDL-col) şi 0804

(pentru variabila CA) (figura 431)

AUC ES 95 CI

Scor SM Harmonised I 1000 00000 0997 - 1000

CA (cm) 0804 00133 0781 - 0825

TAD (mmHg) 0666 00169 0639 - 0692

TAS (mmHg) 0757 00148 0732 - 0780

Glicemie (mgdl) 0742 00160 0717 - 0766

Trigliceride (mgdl) 0756 00175 0732 - 0780

HDL- colesterol 0636 00183 0609 - 0662

Figura 431 Analiza AUC criterii de diagnostic ale SM

Studiind figura 432 se observă că valoarea AUC pentru markerii studiaţi este cuprinsă

icircntre 0589 (icircn cazul variabilei Eo) şi 0690 (icircn cazul fibrinogenului) Icircn contextul SM

acurateţea acestor markeri ai inflamaţiei cronice şi disfuncţiei endoteliale poate fi considerată

redusă deoarece AUClt07 pentru toţi markerii investigaţi (figura 431) Totuşi valorile ariilor

parametrilor reprezentaţi icircn figura 431 sunt apropiate de valorile AUC ale variabilelor TAD

şi HDL-col (figura 432) şi deci pot fi utilizaţi pentru completarea diagnosticului de SM

AUC ES 95 CI

Non-HDL-colesterol 0605 00171 0580 - 0630

Col totalHDL-col 0607 00163 0642 - 0691

Acid uric 0655 00161 0630 - 0679

Fibrinogen 0690 00206 0658 - 0720

Eozinofile 0589 00176 0564 - 0615

Figura 432 AUC markeri ai SM inflamaţiei cronice şi aterogenezei

Discuţii

Status-ul proinflamator din SM asociat cu insulinorezistenţa şi disfuncţia endotelială

constituie o verigă de legătură dintre inflamaţie şi procesele metabolice complexe icircnsoţindu-

se de deteriorarea funcţiilor vasculare şi creşterea riscului de evenimente cardiovasculare

majore (2858) Studiul efectuat a arătat o diferenţă icircntre vacircrstele subiecţilor din cele două

loturi vacircrsta pacienţilor cu SM fiind semnificativ mai mare (Plt0001) comparativ cu subiecţii

normali confirmacircnd faptul menţionat că vacircrsta reprezintă unul din stimulii care agravează

inflamaţia cronică Am arătat că valorile fibrinogenului sunt mai mari icircn SM comparativ cu

Scor Harmonised I

0 20 40 60 80 100

0

20

40

60

80

100

100-Specificitate

Sen

sib

ilit

ate

Criterii diagnostic SM

0 20 40 60 80 100

0

20

40

60

80

100

100-Specificitate

Sens

ibili

tate

CA

TAD

TAS

Glicemie

Trigliceride

HDL-C

0 20 40 60 80 100

0

20

40

60

80

100

100-Specificitate

Sensi

bilita

te

Non-HDL-C

Col T HDL-C

Acid uric

Fibrinogen

Eozinofile

lotul martor atacirct la bărbaţi cacirct şi la femei icircn concordanţă cu studiile anterioare Evaluarea

fibrinogenului este importantă nu numai icircn SM pentru definirea contextului proinflamator şi

protrombotic ci şi icircn predicţia cardiovasculară la subiecţii normali Studiind populaţiile

leucocitare am obţinut diferenţe semnificative icircn cazul Eo valoarea medie a acestora fiind

semnificativ mai mare icircn lotul cu SM comparativ cu lotul martor (P lt 0001 figura 425B)

Implicarea Eo icircn SM s-a conturat icircn ultimul deceniu aceste celule fiind implicate icircn recrutarea

macrofagelor din ţesutul adipos Experimental s-a constatat că o creştere a Eo apărută ca

urmare a infectării cu helminţi sau stimulare cu IL-5 este urmată de icircmbunătăţirea toleranţei la

glucoză (199) Controlul pe care icircl exercită Eo asupra activării macrofagelor ar putea fi cheia

intervenţiei asupra obezităţii icircn viitorul apropiat(165199) Hiperuricemia asociata frecvent cu

SM este cunoscut ca un factor independent de risc cardiovascular (192 202) In concordanţă

cu aceasta afirmaţie in studiul nostru am constatat ca nivelul seric al acidului uric a fost mai

crescut in lotul cu SM diferenţa semnificativă din punct de vedere statistic (P lt 00001)

Dislipidemia aterogenă din sindromul metabolic şi diabetul zaharat se caracterizează prin

creşterea trigliceridelor şi a Non-HDL-col scăderea HDL-col creşterea numărului de

particule LDL modificate (185190) La pacienţii cu SM am descris un profil aterogenetic

cu risc crescut de evenimente cardiovasculare majore

STUDIUL RECEPTORILOR ACTIVAŢI DE INDUCTORII PROLIFERĂRII

PEROXIZOMILOR-ALPHA IcircN LEUCOCITELE CIRCULANTE

Ipoteza de lucru

Studii experimentale efectuate au arătat că rolul PPARα icircn ateroscleroză derivă din

implicarea acestor receptori icircn limitarea inflamaţiei Plecacircnd de la acest fundament ne-am

propus evidenţierea receptorilor nucleari activaţi de inductorii proliferării peroxizomilor-

alpha (PPARα) prin citometrie de flux icircn leucocitele din sacircngele periferic alături de

evaluarea acestei metode icircn cuantificarea expresiei relative a PPARα ca test diagnostic

precoce al modificărilor metabolice SM Studiul expresiei relative a receptorilor PPARα a

plecat de la premisa că dacă SM se caracterizează printr-un status inflamator cronic nivelul

de expresie a PPARα icircn leucocitele circulante este mai scăzut la pacienţii cu SM comparativ

cu subiecţii normali Referitor la studiul receptorului CD36 am plecat de la presupunerea că

nivelul de expresie al acestui receptor icircn SM este crescut dat fiind importanţa acestui receptor

icircn inflamaţia aterosclerotică Avacircnd icircn vedere efectele receptorilor amintiţi icircn

insulinorezistenţă şi aterogeneză am considerat necesară evaluarea prezenţei receptorului

nuclear PPARα icircn paralel cu studiul receptorului bdquoscavengerrdquo CD-36 prin metoda citometriei

icircn flux Astfel icircn studiul efectuat mi-am propus şi investigarea existenţei unei legături icircntre

nivelul de expresie al receptorilor PPARα şi cel al receptorului CD-36 De asemenea ne-am

icircndreptat atenţia spre stabilirea unor asocieri icircntre componentele clinice şi biochimice ale

sindromului metabolic şi nivelul intensităţilor de fluorescenţă ale PPARα şi CD-36 ca măsură

a expresiei relative a acestor receptori

Material și metodă

Studiul receptorilor PPARα icircn contextul sindromului metabolic s-a desfăşurat icircn

perioada 1012014 -28022014 pe baza metodologiei studiilor de tip caz-martor Am urmărit

identificarea unor diferenţe icircntre expresia receptorilor PPARα la pacienţii cu SM comparativ

cu subiecţii sănătoşi diferenţe care ar putea fi utile icircn diagnosticul precoce al SMRecrutarea

pacienţilor s-a efectuat din pacienţii prezentaţi pentru consultaţie la Cabinetul Individual

ldquoCMI Dr Popa Elenardquo situat icircn strada Ion Creanga din Iaşi Pentru studiul receptorilor

PPARα icircn sindromul metabolic au fost selecţionaţi un număr de 57 de subiecţi 26 de subiecţi

cu SM (constituind lotul SM) şi 31 subiecţi fără SM constituind lotul de control (Lot Non-

SM) Pentru studiul SM pacienţii au fost recrutaţi din masa de populaţie arondată cabinetului

de MF fără istoric de SM diabet zaharat boală cardio-vasculară aflați la primul diagnostic

de SM evaluarea completă a acestora fiind urmată de includerea icircn programul de

management cardiovascular şi metabolic conform Ghidurilor Terapeutice aflate icircn vigoare

Lot SM a) criterii de includerevacircrsta peste 18 ani recrutarea pe baza semnării

Consimţămacircntului liber informatSM nou-diagnosticat pe baza prezenţei a minim trei criterii

de diagnostic pentru SM conform Harmonised I b) criterii de excluderevacircrstă sub 18 ani

refuzul semnării Consimţămacircntului liber informat femei icircn perioada de graviditate sau de

lactaţie SM anterior diagnosticat istoric de diabet zaharat boală cardiovasculară constituită

tratament cu agonişti PPARα (ie fibraţi etc)

Lot martor (Non-SM) a) criterii de includerevacircrsta peste 18 ani recrutarea pe baza

semnării Consimţămacircntului liber informat absenţa diagnosticului de SM b) criterii de

excludere vacircrstă sub 18 ani refuzul semnării Consimţămacircntului liber informat femei icircn

perioada de graviditate sau de lactaţie

Studiul receptorilor PPARα a inclus două subetape

A Studiul componentelor sindromului metabolic conform criteriilor Harmonised I

Evaluarea clinică a participanţilor s-a desfăşurat icircn cadrul Cabinetului de Medicină de

Familie iar determinările hematologice şi biochimice s-au efectuat icircn Laboratorul

Ambulatorului Clinic de Specialitate al Spitalului Clinic de Urgenţă bdquoSf Spiridonrdquo Iaşi

B Evaluarea icircn citometrie de flux a nivelului relativ de expresie a PPARα şi CD36

Studiul receptorilor PPARα s-a desfăşurat icircn Laboratorul de Biologie Moleculară al

Institutului Regional de Oncologie Iaşi prin metoda citometriei icircn flux (19) Nivelul relativ de

expresie al receptorilor nucleari PPARα a fost determinat icircn diferite tipuri de leucocite

circulante polimorfonucleare (PMN) limfocite (Ly) Mo(Mo) şi eozinofile(Eo) Am utilizat o

metodă de citometrie icircn flux optimizată ldquoin houserdquo elaborată icircn cadrul Laboratorului de

Biologie Moleculară al IRO Iaşi Icircn cursul procesului de optimizare am testat mai multe

concentraţii ale anticorpului anti-PPARα 1100 1500 11500 14500 iar icircn urma

determinărilor efectuate şi a analizei statistice concentraţia 1500 a fost considerată optimă

pentru desfăşurarea studiului (tabel XXIII figura 51)

Tabel XXIII Optimizarea concentraţiilor Ac anti-PPARα Diferenţa

mediilor

valorilor

medii

PMN

Diferenţa

mediilor

mediane-

lor

PMN

Diferenţa

mediilor

valorilor

medii

Ly

Diferenţa

mediilor

mediane-

lor

Ly

Diferenţa

mediilor

valorilor

medii

Mo

Diferenţa

mediilor

mediane-

lor

Mo

Diferenţă 0 1300 1600 100 100 700 750

normal - 1100 650 1050 1050 1350 450 900

patologic 1500 2850 2750 3800 3600 2850 2400

11500 -1050 800 3500 3300 2250 1800

14500 2200 2150 1300 1100 2950 2850

AOptimizare

BRepetabilitate

Figura 51 Optimizarea concentraţiei anticorpului anti-PPARα

Icircn concordanţă cu literatura de specialitate icircn cercetarea efectuată intensitatea medie

de fluorescenţă (MFI) a fost utilizată ca măsură pentru evaluarea expresiei celulare a

receptorilor PPARα (212) Un exemplu de analiză a probelor este reprezentat icircn figura 52

Figura 52 Exemplu de analiză flowcitometrică pentru receptorul nuclear PPARα Graficul din stacircnga reprezintă distribuţia leucocitelor iar cel din dreapta ilustrează distribuţia

intensităţii de fluorescenţă pentru populaţiile de celule selectate

Intensitatea Medie a Fluorescenţei (MFI) a CD36 ca o măsură a nivelului relativ de

expresie a acestor receptori la nivelul membranei Mo a fost detectată printr-o metodă

convenţională pentru marcare de suprafaţă şi evaluare pe bază de citometrie icircn flux folosind

aceleaşi probe de sacircnge cu EDTA cu focalizare pe Mo şi utilizacircnd CD14 ca marker specific

pentru Mo (figura 53)

Figura 53Analiza

flowcitometrică

pentru marcajul

CD14 - CD36

Rezultate

Icircn cele două loturi au fost incluşi icircn studiu un număr de 57 de participanţi care au fost

investigaţi din punct clinic şi paraclinic Vacircrsta subiecţilor incluşi icircn studiu a fost cuprinsă

icircntre 18 şi 79 ani iar vacircrsta medie calculată a avut valoarea de 4805 plusmn 1587 ani Pentru sexul

masculin vacircrsta medie este de 4925plusmn1617 ani iar pentru sexul feminin 4689 plusmn1 5ani

diferenţa obţinută icircntre vacircrstele pacienţilor fiind statistic nesemnificativă (P = 085)

Analizacircnd vacircrstele subiecţilor din cele două loturi am observat că vacircrsta medie a pacienţilor

cu SM (5476 plusmn 1183 ani) a fost semnificativ mai mare (t-test P = 0003) decacirct icircn lotul

martor (4258 plusmn 169 ani) Pentru diagnosticul sindromului metabolic am calculat scorul de

SM bazacircndu-ne pe criteriile Harmonised I Conform criteriilor diagnostice din cei 57 de

subiecţi investigaţi un număr de 26 participanţi (46) au fost incluşi icircn lotul cu SM (Lot

SM) iar 31 de subiecţi(54) nu au prezentat acest sindrom constituind lotul martor (Lot

Non-SM) Din punct de vedere al repartiţiei pe sexe nu au existat diferenţe statistic

semnificative raportul bărbaţifemei fiind de 0961 Din totalul celor 28 de bărbaţi incluşi icircn

studiu 4285 (12 bărbaţi) au icircntrunit cel puţin trei criterii diagnostice pentru SM fiind

incluşi icircn lotul SM Icircn acelaşi timp 14 femei reprezentacircnd 4827 din subiecţii de sex

feminin au icircntrunit condiţiile pentru includerea icircn lotul pacienţilor cu SM Valoarea medie

determinată pentru scorul de SM a arătat prezenţa unor valori semnificativ statistic mai mari

din punct (t-test P lt 00001) icircn lotul SM (769plusmn176) comparativ cu lotul martor (174 plusmn

184) Am studiat comparativ media valorilor măsurate ale criteriilor componentelor SM

Analiza statistică a arătat valori semnificativ statistic mai mari pentru CA TG glicemie TAS

şi TAD (plt0001) icircn lotul SM comparativ cu lotul normal Concomitent calculul statistica

evidenţiat o scăderea semnificativă a HDL-colesterolului icircn lotul cu SM comparativ cu

subiecţii din lotul martor (Non-SM) Aplicacircnd testul z am comparat ponderea pacienţilor

diagnosticaţi cu HTA dislipidemie şi tulburări ale metabolismului glucidic icircn lotul SM versus

lot Non-SM şi am constatat prezenţa acestor afecţiuni icircntr-un procent mai mare semnificativ

statistic icircn lotul SM ((plt0001)

Utilizacircnd testul t Student am calculat diferenţele statistice şi icircntre alți parametri

studiaţi care sunt factori de risc cardio-vascular dar care nu sunt componente ale SM Icircn lotul

cu SM valorile acidului uric fibrinogenului Col total Non-HDL-col şi LDL-col au fost

semnificativ mai mari comparativ cu lotul martor (tabel XXVI) Analizacircnd valorile medii ale

populaţiilor de leucocite am identificat doar pentru populaţia de Eo diferenţe statistice icircntre

cele două loturi numărul Eo icircn lotul SM fiind semnificativ mai mare decacirct icircn lotul martorTot

pentru caracterizarea celor două loturi am analizat prezenţa antecedentelor

heredocolaterale (AHC) de diabet zaharat boala cardiovasculară şi dislipidemie pentru toţi

subiecţii investigaţi Astfel existenţa AHC de HTA a fost declarată de 2580 din subiecţii

incluşi icircn lotul martor respectiv de 5384 din numărul pacienţilor cu SM Antecedentele

heredocolaterale de dislipidemie au fost prezente la 3461 din pacienţii cu SM icircn timp ce icircn

lotul martor anamneza a evidenţiat aceste antecedente la 3548 din subiecţi

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα

Icircn cercetarea desfăşurată am utilizat intensitatea medie de fluorescenţă (MFI) ca

măsură a nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn leucocitele studiate Pentru

populaţiile de leucocite analiza computerizată a probelor luate icircn studiu a furnizat valori

pentru MFI a receptorilor PPARα icircn funcţie de cantitatea de anticorpi anti-PPARα marcaţi cu

fluorocrom care se leagă de aceste celule şi apoi sunt captaţi de citometru (figura 59)

A Lot Non - SM

B Lot SM

Figura 59 Analiza flowcitometrică pentru receptorii PPARα icircn leucocite A lot normal B lot SM

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Mo

Analiza probelor efectuată conform protocolului de lucru descris a arătat prezenţa

PPARα icircn Mo recoltate din sacircngele tuturor subiecţilor incluşi icircn această cercetare Pentru toţi

participanţii investigaţi analiza MFI a Ac anti - PPARα icircn populaţia de Mo (Mo) a arătat un

interval de variaţie icircntre [786 395] Valoarea medie a nivelului de expresie relativă a PPARα

calculată pentru Mo a fost de 23210 plusmn7860 Pentru ambele loturi de studiu pacienţilor cu

SM testul Testul Shapiro-Wilk a arătat distribuţia normală a valorilor obţinute pentru nivelul

de expresie al PPARα icircn Mo

Tabel XXVIII Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn Mo

Lot SM Lot Non-SM

N 26 31

Media 22819 23538

SD 5819 7717

Mediana 22400 22600

Minimum 12800 78600

Maximum 35800 37900

Percentila 25 18300 18300

Percentila 75 26200 30350

Pentru pacienţii din lotul SM valoarea medie a MFI icircn Mo a fost de 22819 plusmn 5880 iar

pentru lotul martor s-a calculat o valoare medie a MFI a Ac anti-PPARα de 23538 plusmn 7717

Distribuţia statistică a frecvenţei valorilor MFI obţinute pentru nivelul de expresie a PPARα

icircn Mo subiecţilor din cele două loturi a fost reprezentată icircn figura 511

Figura 511 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti-PPARα icircn Mo

Sub forma unei diagrame de control Shewhart am reprezentat variaţia intensităţii medii de

fluorescenţă pentru anticorpii anti-PPARα icircn MoVariaţia nivelului de expresie relativă a

receptorilor PPARα icircn Mo subiecţilor studiaţi este ilustrată icircn fig 512 513

Figura 512 Lot SM Variaţia

expresiei relative a PPARα icircn Mo

Număr pacienţi

26

Minim 128

Maxim 358

Media 22819

DS 5819

25 din 26 valori ale MFI s-au icircncadrat

icircn intervalul Media plusmn 2DS

Figura 513 Lot Non-SM Variaţia

expresiei relative a PPARα icircn Mo

Număr pacienţi 31

Minimum 786

Maximum 379

Media 23538

DS 7717

Cu excepţia unei singure

determinări valorile calculate s-au

icircncadrat icircn Media plusmn 2DS

Utilizacircnd testul parametric t-Student pentru variabilele cu distribuţie normală am

comparat valoarea medie a intensităţii de fluorescenţă a Ac anti-PPARα icircn lotul cu SM versus

subiecţi fără SM (Lot Non-SM) Analiza statistică efectuată nu a identificat diferenţe icircntre

50 100 150 200 250 300 350 400 450

0

5

10

15

20

25

30

35

MFI anti-PPAR a

Frecv

enta

relati

va (

)

Lot SM

0 50 100 150 200 250 300 350 400 450 500

0

5

10

15

20

25

30

35

MFI anti-PPAR a

Frecv

enta

relati

va (

)

Lot martor

1 6 11 16 21 26 31

0

50

100

150

200

250

300

350

400

450

MFI

anti-

PPAR

a

2282

1106

3458

518

4046

Media

LCI

LCI

1 6 11 16 21 26 31 36

-100

0

100

200

300

400

500

MFI a

nti-PP

AR

a

2354

810

3897

39

4669LCS

LCI

Media

cele două loturi icircn ceea ce priveşte expresia PPARα la nivelul Mo circulante (t- Test P=

069)

Studiul receptorilor PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de AHC şi dislipidemie

Nivelul de expresie al receptorilor PPARα α icircn Mo tinde să fie mai scăzut la subiecţii

cu AHC de HTA comparativ subiecţii care nu au declarat AHC de HTA (P= 006 fig 515)

AHC HTA

Număr 22

Mediana 19950

Percentila 25 17800

Percentila 75 22700

AHC HTA absente

Număr 35

Mediana 24800

Percentila 25 19025

Percentila 75 31700

Figura 515 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Mo funcţie de AHC de HTA

Nu s-au calculat diferenţe semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor

PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de dislipidemie atunci cacircnd aceştia au fost comparaţi cu

subiecţii fără AHC de tulburări ale metabolismului lipidic (t- Test P= 020)

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn limfocite

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn populaţia de Ly a

demonstrat prezenţa receptorilor PPARα icircn Ly tuturor subiecţilor studiaţi Pentru toţi

participanţii investigaţi analiza MFI a Ac anti - PPARα icircn populaţia de Ly a relevat un

interval de variaţie icircntre [748 314] iar valoarea medie a MFI a fost de 18058 plusmn 5600

Pentru ambele loturi aplicarea testului Shapiro-Wilk a evidenţiat distribuţia normală a

valorilor determinate pentru nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Ly Pentru

pacienţii cu SM valoarea medie a MFI determinată pentru expresia PPARα icircn populaţia de

Ly a fost de 18178 plusmn 61 16 iar pentru lotul martor a fost de 16800 plusmn 5229

Tabel XXX Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn limfocite

Lot SM Lot Non-SM

N 26 31

Media 181781 179574

SD 611694 522907

Mediana 165000 168000

Minimum 81300 74800

Maximum 314000 301000

Percentila 25 13400 - 145750

Percentila 75 21800 21700

Distribuţia frecvenţei valorilor MFI a Ac anti-PPARα icircn Ly este redată icircn figura 518

Figura 518 Distribuţia frecvenţelor relative a MFI a Ac anti-PPARα icircn Ly

94 din determinările efectuate pentru determinarea nivelului de expresie relativă al

MFI

ant

iPPA

R

a_Mo

190

200

210

220

230

240

250

260

270

280

DA NU

AHC HTA

P=006

50 89 128 167 206 244 283 322 361 400

0

5

10

15

20

25

30

35

MFI anti-PPAR a

Frecv

enta

relati

va (

)

Lot SM

0 50 100 150 200 250 300 350

0

5

10

15

20

25

30

35

40

MFI anti-PPAR a

Frec

venta

relat

iva (

)

Lot Non-SM

receptorilor PPARα icircn limfocitele subiecţilor cu SM s-au icircncadrat icircn intervalul Media plusmn 2DS

Figura 5 19 Lot SM Variaţia expresiei

relative a PPARα icircn Ly

Număr pacienţi 26

Minimum 813

Maximum 31400

Media 18178

Deviaţia Standard 6116

25 valori s-au icircncadrat icircn Media plusmn 2DS

Pentru lotul Non-SM diagrama de control (figura 520) a arătat toate valorile

determinate pentru lotul Non-SM se icircncadrează icircntre LCS şi LCI

Figura 520 Lot Non -SM Variaţia

expresiei relative a PPARα icircn Ly

Număr pacienţi 31

Minimum 748

Maximum 30100

Media 179574

Deviaţia Standard 5229

96 din valori icircncadrate icircn Media plusmn 2DS

Aplicarea testului t-Student pentru valorile medii ale intensităţii de fluorescenţă ale

PPARα icircn Ly nu a arătat existenţa unei diferenţe statistic semnificative icircntre lotul cu SM şi

lotul martor(t- Test P= 088)

Analiza receptorilor PPARα icircn Ly subiecţilor cu AHC de HTA şi dislipidemie

Studiind populaţiile de Ly la subiecţii care au prezentat AHC de hipertensiune

arterială analiza flowcitometrică a relevat existenţa unor valori mai mici pentru MFI la aceşti

subiecţi comparativ cu cei fără AHC de HTA (fig 522) deşi scăderea observată nu a

icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică (t- Test P = 009)

AHC HTA

Număr 22

Mediana 16000

Percentila 25 12700

Percentila 75 17100

AHC HTA absenţe

Număr 35

Mediana 18700

Percentila 25 14900

Percentila 75 23175

Figura 522 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Ly funcţie de AHC de HTA

Nu am calculat diferenţe statistic semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor

PPARα icircn populaţiile de Ly ale subiecţilor la care am identificat AHC de dislipidemie

comparativ cu cei care nu au declarat antecedente familiale de dislipidemie (t- Test P= 051)

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn neutrofile (PMN)

Analiza flowcitometrică a evidenţiat prezenţa PPARα icircn PMN recoltate din sacircngele

venos al tuturor participanţilor la studiu Pentru toţi subiecţii investigaţi analiza MFI a Ac -

PPARα icircn populaţia de PMN a relevat un interval de variaţie de [163419] iar valoarea medie

a MFI pentru Ac anti-PPARα a fost de 26392 plusmn 7064 Testul Shapiro-Wilk a arătat o

distribuţie normală a valorilor intensităţii medii de fluorescenţă a anticorpilor anti-PPARα atacirct

icircn lotul pacienţilor cu SM cacirct şi icircn lotul martor

1 6 11 16 21 26 31

-50

0

50

100

150

200

250

300

350

400

MFI

anti-

PPAR

a

1818

595

3041

-17

3653

Media+2DS

Media- 2DS

1 6 11 16 21 26 31 36

0

50

100

150

200

250

300

350

MFI

ant

i-PPA

R

a

1796

750

2841

227

3364

Media+2DS

Media

Media- 2DS

MFI

anti-

PPAR

a Ly

130

140

150

160

170

180

190

200

210

DA NU

AHC HTA

P=009

Tabel XXXII Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn PMN

Lot SM Lot Non-SM

N 26 31

Media 26273 26480

SD 6915 7088

Mediana 25900 25500

Minimum 17200 16300

Maximum 39500 41900

Percentila 25 19800 19600

Percentila 75 30500 31500

Icircn cele două loturi distribuţia frecvenţei valorilor nivelului relativ de expresie a

receptorilor PPARα icircn PMN a fost reprezentată sub formă de histograme (fig 525)

Figura 525 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti-PPARα icircn PMN

Pentru cei 26 de pacienţi din lotul cu SM a valoarea medie a nivelului de expresie

relativă a receptorilor PPARα icircn PMN a fost de 26273 plusmn 6915 Studiind diagrama Shewhart

din figura 526 se observă că toate valorile obţinute pentru nivelul de expresie relativă

PPARα icircn PMN investigate se icircncadrează icircntre limitele definite de valorile medii plusmn 2DS

Figura 526 Lot SM

Variaţia expresiei relative a PPARα icircn

PMN

Număr pacienţi 26

Minimum 17200

Maximum 39500

Media 26273

Deviaţia Standard 6915

Valorile MFI icircncadrate icircn Media plusmn 2DS

Pentru lotul martor valoarea medie calculată a MFI a anticorpilor anti-PPARα a fost de

26480 plusmn 7088 peste 95 din valorile MFI fiind cuprinse icircn Media plusmn 2DS (figura 527)

Figura 527 Lot Non-SM Variaţia expresiei

relative a PPARα icircn PMN

Număr pacienţi 31

Minimum 16300

Maximum 41900

Media 26480

Deviaţia Standard 7088

30 valoriicircn Media plusmn 2DS

Pentru PMN analiza statistica nu a arătat existenţa unei diferenţe statistic semnificative icircntre

nivelul de expresie relativă a PPARα la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii din lotul

Non-SM (t- Test P= 090) Studiind populaţiile de PMN la subiecţii care au prezentat AHC

de HTA nu am calculat o diferenţă statistic semnificativă icircntre expresia receptorilor PPARα

la subiecţii cu istoric familial de hipertensiune arterială comparativ cu cei pentru care nu s-au

notat AHC de HTA (t- Test P= 013)De asemenea am identificat diferenţe icircntre nivelul de

expresie al PPARα icircn PMN subiecţilor care prezentau AHC de dislipidemie comparativ cu

cei fără AHC de dislipidemie (t- Test P= 017)

50 100 150 200 250 300 350 400 450 500

0

5

10

15

20

25

30

35

MFI anti-PPAR a

Frecve

nta rel

ativa (

)

Lot SM

50 100 150 200 250 300 350 400 450 500

0

5

10

15

20

25

30

MFI anti-PPAR a

Frecv

enta

relati

va (

)

Lot Non-SM

1 6 11 16 21 26 31

0

50

100

150

200

250

300

350

400

450

500

MFI

anti-

PPA

R

a

2627

1244

4010

553

4702

Media + 2DS

Media - 2 DS

Media

1 6 11 16 21 26 31 36

0

50

100

150

200

250

300

350

400

450

500

MFI

anti-

PPAR

a

2648

1230

4066

522

4774

Media+ 2DS

Media - 2DS

Media

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile Tabel XXXIV Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn Eo

Lot SM Lot Non-SM

N 26 31

Mediaplusmn SD 141057 plusmn 47604 172209 plusmn 37565

Mediana 142450 171300

Minimum 35000 68500

Maximum 233700 250600

Percentila 25 119300 153225

Percentila 75 169700 199550

Am studiat nivelul relativ de expresie a receptorilor PPARα icircn Eo iar rezultatele au

fost figurate sub forma de histograme (figura 532)

Figura 532 Distribuţia frecventelor relative ale valorilor MFI anti- PPARα icircn Eo

Din diagrama Shewhart (figura 533) se observă că toate valorile determinate pentru

nivelul de expresie relativă a PPARα icircn Eo pentru lotul SM s-au icircncadrat icircn [Media plusmn 3 DS]

peste 90 din determinări fiind cuprinse icircn [Media plusmn 2 DS] iar icircn [Media plusmn 1 DS] sunt

incluse peste 65 din valorile MFI

Figura 533 Lot SM

Variaţia expresiei relative a PPARα icircn Eo

Număr pacienţi 26

Minimum 35000

Maximum 233700

Media 141057

Deviaţia Standard 47604

24 valori icircncadrat eicircn [Media plusmn 2DS]

Pentru subiecţii incluşi icircn lotul martor analiza diagramei (figura 534) a arătat că

toate cele 31 de valori ale MFI pentru PPARα icircn Eo se icircncadrează icircn [Media plusmn 3DS] iar 30

dintre acestea se icircncadrează icircn [ Media plusmn 2 DS]

Figura 534 Lot Non -SM

Variaţia expresiei relative a PPARα icircn Eo

Număr pacienţi 31

Minimum 685

Maximum 2506

Media 172209

Deviaţia Standard 375 65

30 valori icircncadrate icircn [Media plusmn 2DS]

Comparacircnd subiecţii cu SM cu cei din lotul martor am observat o scădere

semnificativă statistic a MFI a Ac anti - PPARα icircn Eo pentru pacienţiir cu SM ( figura 535)

PPARα Eo Lot Non-SM

Număr 31

Mediana 171300

Percentila 25 152325

Percentila 75 199550

PPARα Eo Lot SM

Număr 26

Mediana 142450

Percentila 25 119300

Percentila 75 169700

Figura 5 35 Comparaţie icircntre nivelul de expresie a PPARα icircn Eo

0 500 1000 1500 2000 2500 3000

0

10

20

30

40

50

MFI anti-PPAR a

Frecvent

a relativa

()

Lot SM

400 800 1200 1600 2000 2400 2800

0

5

10

15

20

25

30

35

40

45

MFI anti-PPAR a

Frecenta

relativa

()

Lot Non-SM

1 6 11 16 21 26 31

-500

0

500

1000

1500

2000

2500

3000

MFI a

nti-PP

AR

a

14106

4765

23447

94

28117

Media + 2DS

Media- 2DS

LCI

LCS

1 6 11 16 21 26 31 36

500

1000

1500

2000

2500

3000

MFI an

ti-PPA

R a

17221

9708

24734

5951

28490

LCI

Media-2DS

Media

Media +2 DS

LCS

1200

1300

1400

1500

1600

1700

1800

1900

Lot SM Lot Non-SM

P=00072

Cu ajutorul curbei ROC am evaluat posibilitatea utilizării MFI a Ac anti - PPARα icircn

Eo ca marker pentru diagnosticul SM Valoarea MFI a Ac anti - PPARα icircn Eo care prezice cu

cea mai mare acurateţe prezenţa SM a fost de 1533 (punctul de ldquocut-offrdquo) pentru care am

calculat o sensibilitate de 5652 şi o specificitate de 7778 Calculul ariei AUC a furnizat

valoarea de 0663 şi deci determinarea parametrului MFI anti- PPARα icircn Eo are valoarea

unui test cu acurateţe redusatilde icircn diagnosticul SM Studiind expresia PPARα icircn Eo la subiecţii

care au prezentat AHC de HTA am observat o scădere semnificativă statistic (P = 00023) a

expresiei PPARα la subiecţii cu istoric familial de HTA comparativ cu subiecţii fatilderatilde AHC de

HTA (figura 537)

AHC HTA

Număr 22

Mediana 148800

Percentila 25 116425

Percentila 75 170750

AHC HTA absente

Număr 35

Mediana 170850

Percentila 25 143700

Percentila 75 195000

Figura 537 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Eo funcţie de AHC de HTA

Studiind subiecţii cu AHC declarate de dislipidemie nu am identificat diferenţe icircntre

nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Eo subiecţilor cu AHC de dislipidemie

comparativ cu cei care nu au declarat prezenţa AHC de dislipidemie (t - Test P = 067)

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor CD36

Am studiat expresia receptorilor CD36 icircn Mo subiecţilor incluşi icircn studiu

Lot Non - SM

BLot SM

Figura 539 Analiza flowcitometrica pentru receptorii CD36 icircn Mo

Pentru toţi participanţii la studiu valorile MFI au variat icircn intervalul [817 6933] iar

valoarea medie a MFI a Ac anti-CD36 a fost de 397133 plusmn 120902 Tabel XXXVII Statistică descriptivă pentru a CD36 icircn Mo

Lot SM Lot Non-SM

Media 429034 370377

Deviatia Standard 109051 125514

Mediana 411000 362800

Minimum 266400 81700

Maximum 693300 616800

Percentila 25 346200 273750

Percentila 75 469000 453300

Distribuţia frecvenţelor relative a MFI au fost prezentate sub formă histogramelor

Figura 541 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti - CD36 icircn Mo

MFI

ant

i-PPA

R a Eo

1000

1100

1200

1300

1400

1500

1600

1700

1800

1900

DA NU

AHC HTA

P=00023

1000 2000 3000 4000 5000 6000 7000 8000

0

5

10

15

20

25

MFI anti-CD36

Frecve

nta rela

tiva (

)

Lot SM

0 1778 3556 5333 7111

0

5

10

15

20

25

30

35

MFI anti-CD36

Frecve

nta rel

ativa (

)

Lot Non - SM

Referitor la lotul SM 92 din valorile MFI a Ac anti- CD36 s-au icircncadrat icircn

intervalul Media plusmn 2 DS (figura 542) iar pentru lotul martor peste 90 dintre acestea icircn

Media plusmn 2 DS (figura 543)

Figura 542 Lot SM

Variaţia MFI anti-CD36 icircn Mo

Număr pacienţi 26

Minimum 2664

Maximum 6933

Media 429034

Deviaţia Standard 109051

Figura 543 Lot Non -SM

Variaţia MFI anti- CD36 icircn Mo

Număr 31

Minimum 81700

Maximum 616800

Media 370377

Deviaţia Standard 125514

Comparacircnd subiecţii cu SM cu cei din lotul normal am constatat o tendinţă de creştere

a expresiei CD36 icircn lotul cu SM((t - Test P= 0067)

MFI anti - CD36 Lot Non-SM

Număr 31

Mediana 3628

Percentila 25 2737

Percentila 75 4533

MFI anti - CD36 Lot SM

Număr 26

Mediana 4110

Percentila 25 3462

Percentila 75 4690

Figura 544 Comparaţie icircntre cel două loturi privind MFI anti - CD36 icircn Mo

Referindu-ne la subiecţii cu AHC de HTA am observat o tendinţă de creştere a

valorilor MFI anti-CD36 comparativ cu cei care nu au avut AHC de HTA (t - Test P = 0 08)

AHC HTA

Număr 22

Mediana 442800

Percentila 25 355275

Percentila 75 519475

AHC HTA absenţe

Număr 35

Mediana 377400

Percentila 25 316900

Percentila 75 443400

Figura 545 Comparaţie icircntre expresia CD36 icircn Mo funcţie de AHC de HTA

Nu s-au calculat diferenţe semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor

PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de dislipidemie atunci cacircnd aceştia au fost comparaţi cu

subiecţii fără AHC de dislipidemie (t - Test P=031)

Corelaţii icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα si CD36

Studiind valorile intensităţii medii de fluorescenţă a Ac anti-PPARα icircn Mo Ly şi

PMN am observat că nivelul de expresie celularatilde a PPARα icircn Mo Ly şi PMN sunt corelate

puternic pozitiv atacirct icircn lotul SM cacirct şi icircn lotul martor(fig547 548)

1 6 11 16 21 26 31

0

1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

8000

Pacienti

MFI a

nti-CD

36

42903

21093

64714

10188

75619

LCI

Media

LCS1 6 11 16 21 26 31 36

-1000

0

1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

8000

MFI a

nti- C

D36

37038

11935

62141

-616

74692Media + 2 DS

Media

Media - 2 DS

3200

3400

3600

3800

4000

4200

4400

4600

4800

Lot SM Lot Non-SM

P = 00676

MFI

anti-

CD36

3400

3600

3800

4000

4200

4400

4600

4800

5000

DA NU

AHC HTA

P = 008

Figura 547 Studiul relatiilor dintre

receptorii PPARα icircn SM A Mo vs PMN B Mo vs Ly

C PMN vs Ly Graficul ilustrează coeficienţii r P dreapta de

regresie (linia centrala) intervalul de icircncredere

95 şi intervalul de predicţie 95

Figura 548 Corelaţii icircntre receptorii PPARα icircn lotul

martor

A Mo vs PMN

B Mo vs Ly

C PMN vs Ly

Tot pentru lotul SM cacircnd am evaluat relaţia dintre nivelul de expresie relativă a

receptorilor PPARα icircn Eo şi nivelul de expresie relativa a receptorilor CD 36 am obţinut o

corelaţie negativă (r = - 05 P = 001) (fig 549 A)

50 100 150 200 250 300 350 50

100

150

200

250

300

350

400

450

500

PPARα Ly

PPARα PMN

y = 56641 + 1159 x r = 086 P lt 0001

C

50 100 150 200 250 300 350 400 0

50

100

150

200

250

300

350

PPARα Mo

PPARα Ly

y = 36665 + 0607 x r = 090 P lt 0001

B

150 200 250 300 350 400 450 0

50 100 150 200 250 300 350 400 450 500

PPARα PMN

PPARα Mo

y = 2505 + 0879 x r = 081 P lt 0001

A

50 100 150 200 250 300 350

50 100 150 200 250 300 350 400 450 500

PPARα Ly

PPARα PMN

y = 95668 + 0919 x r = 081 P lt 0001

C

100 150 200 250 300 350 400

0

50

100

150

200

250

300

350

400

PPARα Mo

PPARα Ly

y = -7503 + 0829 x r = 079 P lt 0001

B

100 150 200 250 300 350 400

50

100

150

200

250

300

350

400

450

500

PPARα Mo

PPARα PMN

y = 61384 + 0882 r = 074 P lt 0001

A

Figura 549 Corelaţii icircntre expresia PPARα icircn Eo şi alte tipuri de receptori investigaţi A PPARα Eo şi CD 36 (Lot SM) B PPARα Eo şi PPARα Mo( Lot Non-SM)

Icircn lotul martor am identificat o asociere moderată pozitivă (r = 038 P = 0033) icircntre

nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Eo şi Mo (figura 549B) corelaţie absentă icircn

lotul pacienţilor cu SM

Corelaţii dintre receptorii studiaţi şi componentele sindromului metabolic

Icircn lotul de control analiza statistică a relevat faptul că icircntre circumferinţa

abdominală (CA ) şi nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Mo Ly şi PMN există o

corelaţie inversă adică scăderea expresiei PPARα la nivelul acestor populatii celulare ar fi

icircnsoţită de creşterea CA (figura 550

Figura 550Corelaţii dintre receptorii

PPARα si CA A Mo B Ly C PMN

La pacienţii cu SM am notat o corelatie moderată negativă statistic semnificativă

icircntre TG şi valorile MFI a Ac anti- PPARα icircn Mo şi Ly( fig 551)

150 200 250 300 350 400 450 50

60

70

80

90

100

110

PPARα PMN

CA r = - 040 P = 0024

C

50 100 150 200 250 300 350 50

60

70

80

90

100

110

PPARα Ly

CA r = - 046 P = 0009

B

50 100 150 200 250 300 350 400 50

60

70

80

90

100

110

PPARα Mo

CA r = - 042 P = 0017

A

50 100 150 200 250 300 350 400 500

1000

1500

2000

2500

3000

PPARα Mo

PPARα Eo

r = 038 P = 0033

B

0 500 1000 1500 2000 2500 1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

8000

PPARα Eo

CD36

r = 050 P = 0010

A

Figura 551 Lot SM Corelaţie icircntre expresia PPARα şi TG (A Mo B Ly)

Analizand corelatia dintre receptorii CD36 si valorile TA la pacientii cu SM am observat

o asociere pozitivă asteptată intre TAD si nivelul de expresie al receptorilor CD36 (fig 552)

Figura 552 Lot SM Corelaţii icircntre expresia

receptorilor CD36 şi valorile tensiunii arteriale

diastolice

Studiind corelaţiile dintre receptorii PPARα şi HDL-col la subiecţii din lotul martor am

notat o asociere pozitivă icircntre expresia PPARα icircn Mo şi Ly cu HDL-col (fig 553)

Figura 553 Lot martor Corelaţii icircntre HDL-col şi expresia PPARα icircn Mo(A) Ly(B)

Icircn lotul normal am evidenţiat corelaţii pozitive moderate dar semnificative statistic icircntre

CA şi valorile TAS (r = 062 P lt 0001) respectiv TAD (r = 050 P=0004) precum şi icircntre

CA şi glicemia subiecţilor normali (r = 052 P = 0003) Aceste date icircmpreună cu relaţia

invers proporţională identificată icircntre HDL-col şi CA (r = 050 P = 001) susţin validitatea

acestui studiu Icircn lotul subiecţilor cu SM am observat o corelaţie moderat pozitivă icircntre

expresia PPARα icircn populaţiiile de Mo şi Eo şi concentraţia a HDL-col (fig 554)

B

100 150 200 250 300 350 20

30

40

50

60

70

80

90

100

PPARα Ly

HDL-col-(mgdl)

r = 036 P = 0046

A

150 200 250 300 350 400 20

30

40

50

60

70

80

90

100

PPARα Mo

HDL-col-(mgd)l

r = 035 P = 005

70 75 80 85 90 95 100 1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

8000

TAD (mmHg)

CD36

r = 048 P = 0013

B

50 100 150 200 250 300 350 -100

0

100

200

300

400

500

PPARα Ly

TG(mgdl)

r = - 042 P = 003

A

50 100 150 200 250 300 350 400 -100

0

100

200

300

400

500

PPARα Mo

TG ( mgdl) r =- 0 43 P = 0027

Figura 554 Corelaţii icircn SM icircntre HDL-col şi expresia PPARα icircn Mo (A) şi Eo(B)

Corelaţii icircntre nivelul de expresie relativă a PPARα şi markeri ai disfuncţiei

endoteliale şi inflamaţiei cronice

Deşi nu a icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică am reţinut corelaţia invers

proporţională (r = - 0331 P = 006) dintre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα

icircn PMN şi concentraţia serică a Non-HDL-colesterolului

Studiind relaţiile dintre parametri icircn lotul de pacienţi cu SM am observat o corelaţie

moderată invers proporţională icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Eo şi

acidul uric seric (figura 555 A) corelaţie absentă la subiecţii fără SM

Figura 555 Lot SM corelaţia dintre expresia PPARα icircn Eo şi acidul uric (A) respectiv

PPARα şi fibrinogen (B)

Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P=008) am notat pentru

pacienţii cu SM corelaţia invers proporţională dintre expresia PPARα icircn Eo şi concentraţia

serică a fibrinogenului ( figura 555B)

V5 Discuţii

Icircn cadrul lucrării de doctorat am studiat nivelul de expresie relativă a PPARα icircn

leucocitele pacienţilor cu SM comparativ cu cea a subiecţilor normali Expresia PPARα a fost

studiată icircn paralel cu cea a CD36 glicoproteină exprimată pe suprafaţa a numeroase celule

din organismul uman inclusiv pe cea a Mo şi macrofagelor Prin funcţia sa de receptor pentru

particulele oxidate de LDL CD36 cunoscut ca bdquoscavenger receptorrdquo de clasa B sau

bdquotrombospodin receptorrdquo contribuie la dezvoltarea inflamaţiei de la nivel endotelial şi

formarea plăcii de ateroscleroză Referitor la studiul PPARα icircn Eo icircn sindromul metabolic

menţionăm că studiul nostru este primul care arată că nivelul de expresie a proteinei PPARα

icircn Eo măsurat prin citometrie icircn flux este semnificativ mai redus la pacienţii care sunt

diagnosticaţi cu acest sindrom De asemenea icircn lotul cu SM cercetat icircn cadrul studiului

receptorilor PPARα numărul Eo circulante a fost semnificativ mai crescut la pacienţii cu SM

B

0 500 1000 1500 2000 2500 200

250

300

350

400

450

PPARα Eo o

Fibrinogen mgdl

r =- 036 P = 008

0 500 1000 1500 2000 2500 1 2 3 4 5 6 7 8 9

10 11

PPARα Eo_

Acid uric(mgdl) r = 048 P = 0014 A

0 500 1000 1500 2000 2500 10

20

30

40

50

60

70

80

PPARα Eo

HDL(mgdl)

r = 044 P = 0024

B

100 150 200 250 300 350 400 10

20

30

40

50

60

70

80

PPARα Mo

HDL( mgdl)

r = 046 P = 0019

A

(P = 003) Aceste constatări conduc la ipoteza că Eo joacă un rol special icircn mecanismele

patogenice declanşate icircn sindromul metabolic şi că receptorii PPARα sunt importanţi icircn

implicarea Eo icircn obezitate şi insulinorezistenţă Creşterea numărului de Eo circulante este

urmată de eliberarea mediatorilor proinflamatori iar reducerea expresiei PPARα icircn Eo

determină perturbarea mecanismelor de control al inflamaţiei cu exacerbarea cascadei

proinflamatorii Consecutiv se agravează disfuncţia endotelială şi se accelerează progresia

leziunilor de ateroscleroză Extrapolacircnd aceste ipoteze putem spune că asocierea raportată

dintre boala ischemică coronariană şi Eo poate fi şi consecinţa exacerbării cascadei

proinflamatorii de la nivel vascular produsă datorită scăderii expresiei PPARα icircn Eo iar

creşterea numărului de Eo circulante poate reprezenta o adaptare a organismului uman care

icircncearcă să suplinească deficitul de receptori PPARα Analizacircnd curba ROC pentru

intensităţile medii de fluorescenţă determinate pentru anticorpii anti- PPARα icircn Eo am

obţinut pentru acest biomarker o sensibilitate a testului de 565 şi o specificitate de 778

pentru un punct de cut-off de 1533 ( figura 536 ) Deşi aria AUC (Aria under the curve) egală

cu 0663 icircncadrează acest test ca avacircnd o acurateţe redusă observăm că că această valoare

este apropiată de determinările AUC pentru alţi factori (fibrinogen raport de aterogenitate

acid uric non- HDL-colesterol) cunoscuţi ca fiind implicaţi icircn aterogeneză şi inflamaţia

cronică (figura 431) Aceste remarci alături de faptul că icircn studiul receptorilor PPARα icircn

leucocite am inclus subiecţi la primul diagnostic de SM creează premisa integrării

determinării expresiei relative a receptorilor PPARα icircn diagnosticul complex al sindromului

metabolic Putem spune că icircn final studiul expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofilele

circulante se dovedește a fi util icircn diagnosticul precoce la nivel molecular al SM permiţacircnd

identificarea timpurie a unor indivizi cu risc cardiometabolic crescut Astfel intervenţia

precoce asupra subiecţilor cu deficit de PPARα icircn Eo contribuie la managementul eficient al

afecţiunilor degenerative icircn care inflamaţia cronică icircndeplineşte un rol primordial Referitor

la populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările efectuate prin citometrie de flux nu au

arătat existenţa unor diferenţe statistice icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα

la subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali Rezultatele noastre pot fi

consecinţa caracteristicilor loturilor studiate (icircn studiul nostru au fost incluşi subiecţi recrutaţi

la primul diagnostic de SM şi icircn absenţa stimulării receptorilor PPARα cu droguri agoniste

PPARα) dar icircn acelaşi timp pot apare diferenţe datorită metodei utilizate (231 232 233)

Făcacircnd o paralelă cu un studiu publicat icircn 2013 icircn Europa (231) care a arătat creşterea

nivelului de expresie al PPARα icircn Ly şi Mo observăm că deşi numărul de subiecţi a fost

aproximativ egal (57 participanţi icircn studiul nostru 60 icircn studiul DAmore) subiecţii icircn studiul

amintit au fost recrutaţi dintr-o clinică cu profil medical la primul diagnostic de SM icircn timp

ce metoda utilizată a fost PCR (Polymerase Chain Reaction) mult mai fidelă decacirct citometria

icircn flux icircn studiul receptorilor nucleari De asemenea DAmore nu investighează expresia

PPARα icircn Eo şi PMN icircn cercetare fiind incluse doar celulele CD14+ (predominant Mo) şi

CD14- (predominant Ly) Deşi nu am obţinut diferenţe statistic semnificative icircntre cele două

loturi referitoare la nivelul de expresie relativă a PPARα icircn Mo Ly şi PMN am observat

corelaţii puternice semnificative statistic icircntre expresia receptorilor PPARα icircn aceste tipuri

celulare Rezultatele obţinute sugerează existenţa unui mecanism diferit molecular de control

icircn eozinofile care reglează cantitatea de proteină PPARα icircn eozinofile versus alte tipuri de

leucocite (la pacienţii cu SM) şi acest lucru este icircn concordanţă cu cercetările care descriu

expresia PPARα mRNA icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale

bronşice keratinocite) Studiind prin citometrie de flux nivelul de expresie relativă a

receptorului CD36 la nivelul Mo am arătat prezenţa acestuia icircn Mo tuturor subiecţilor

investigaţi Analizacircnd valorile intensităţii medii de fluorescenţă a CD36 icircn loturile studiate

am observat o tendinţă de creştere la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali

confirmacircnd implicarea receptorului CD36 icircn patogeneza acestuia Referitor la expresia

receptorului CD36 rezultatele obţinute sunt icircn consens cu studii anterioare care au arătat

creşterea expresiei CD36 la pacienţii cu SM şi diabet zaharat Astfel pe lacircngă diferenţa icircn

expresia CD36 s-au raportat şi corelaţii inverse icircntre expresia proteinei CD36 şi nivelul

adiponectinei Acelaşi studiu a evidenţiat o corelaţie pozitivă intre expresia CD36 cu expresia

receptorilor PPAR gamma relaţia cu PPARα nefiind investigată

Analiza de subgrup a relaţiilor dintre componentele SM și elementele moleculare

proinflamatorii studiate a relevat prezenţa unor asocieri semnificativ statistice icircntre acestea

Se argumentează astfel că veridicitatea studiului este susţinută de interdependenţele statistice

ale componentelor SM Determinarea coeficientului de corelaţie Icircn studiul nostru nivelul de

expresie relativă a PPARα s-a corelat moderat negativ (figura 550) cu CA a subiecţilor din

lotul normal pentru populaţiile celulare de Mo (r = - 0420 P = 001) Ly (r = - 046 P =

0009) şi PMN (r = - 040 P = 0024) date care sunt icircn concordanţă cu studiile care arată

rolul PPARα icircn furnizarea energiei prin beta-oxidarea acizilor graşi Icircn acelaşi timp icircn lotul

pacienţilor cu SM nu am identificat prezenţa unei asocieri icircntre nivelul de expresie relativă a

PPARα şi valoarea măsurată a CA Asocierea dintre expresia relativă a PPARα cu obezitatea

de tip central completează datele existente referitoare la reglarea homeostaziei energetice

conturacircnd un mecanism de control deficitar al aportului caloric al SM Icircn condiţiile icircn care

rezultatele obţinute prin metoda citometriei icircn flux nu au arătat existenţa unei corelaţii intre

expresia PPARα şi CA la pacienţii cu SM considerăm că ar fi necesar studiul

polimorfismului genei PPARA care ar putea aduce informaţii importante cu privire la

implicarea acestor receptori icircn apariţia obezităţii de tip central Subliniem acest lucru deoarece

obezitatea este o boală plurifactorială icircn care pe lacircngă factorii ereditari sunt implicaţi factori

de mediu psihologici şi sociali (245) Existenţa unei componente genetice a aterosclerozei

este legată şi de prezenţa unor variante ale genei PPARA asociate cu creşterea incidenţei bolii

cardiovasculare (82) şi a SM (249) Icircn studiul nostru am constatat o scădere statistic

semnificativă a nivelului expresiei relative a receptorilor PPARα icircn Eo la subiecţii cu

antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială comparativ cu subiecţii fără istoric

familial de hipertensiune (figura 537) Deşi diferenţele calculate icircntre loturile studiate nu au

icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică la subiecţii care au declarat prezenţa

antecedentelor familiale de hipertensiune arterială remarcăm o tendinţă de scădere a

intensităţii medii de fluorescenţă pentru Ac anti-PPARα la nivelul Mo (figura 515 P = 006

) icircn timp ce expresia relativă a CD36 icircnregistrează o creştere la acesti subiecţi (figura 545 P

= 008) Icircn contextul riscului cardiovascular foarte icircnalt al pacienţilor cu SM amintim şi

existenţa corelaţiei pozitive dintre valorile tensiunii arteriale diastolice şi expresia relativă a

receptorului CD36 (r = 0483 P = 0013) Această constatare este icircn consens cu studiile care

au arătat că forma solubilă circulantă a CD36 este asociată cu factorii de risc cardiovasculari

fiind propusă ca un marker precoce al aterosclerozei Activarea PPARα este asociată cu

modularea metabolismului lipidic iar agoniştii PPARα sunt utilizaţi icircn mod curent pentru

tratamentul dislipidemiei Sub acţiunea agoniştilor PPARα se obţine o icircmbunătăţire a funcţiei

endoteliale şi a parametrilor reologici funcţiile pleiotropice ale agoniştilor PPARα fiind

dovedite icircn trialuri clinice controlate Icircn populaţiile de Mo şi Ly la pacienţii cu SM

cercetarea noastră a evidenţiat o asociere negativă icircntre nivelul de expresie relativă a

receptorilor PPARα şi concentraţia TG serice (figura 551) Astfel scăderea expresiei

receptorilor PPARα este asociată cu creşterea nivelului TG serice contribuind la profilul

lipidic aterogen din SM Icircn conformitate cu literatura de specialitate icircn studiul efectuat prin

metoda citometriei icircn flux am găsit prezenţa asocierii icircntre nivelul de expresie al PPARα şi

HDL-colesterol Corelaţia pozitivă dintre nivelul de expresie relativă PPARα şi concentraţia

HDL-colesterolului a fost observată icircn lotul martor icircn populaţiile de Mo (r = 035 P = 005)

şi Ly ( r = 036 P = 004) (figura 553) susţinacircnd faptul că stimularea receptorilor PPARα

este legată de creşterea nivelului seric al lipoproteinelor cu densitate crescută La pacienţii cu

SM corelaţia dintre expresia PPARα şi HDL-colesterol a fost evidenţiată icircn populaţiile de Mo

(r = 046 P = 0019) şi eozinofile (r = 044 P = 0024) Se desprinde concluzia că icircn

sindromul metabolic scăderea concentraţiei HDL-colesterol este legată de diminuarea

nivelului de expresie relativă a receptorilor nucleari PPARα icircntărind afirmaţiile legate de

rolul acestor receptori icircn progresia bolilor cardiovasculare Studiind reactanţii de fază acută

analiza statistică a relevat o diferenţă semnificativă din punct de vedere statistic icircntre valorile

fibrinogenului la pacienţii cu SM atunci cacircnd au fost comparaţi cu subiecţii fără SM

(Capitolul IV4 P lt0 001 figura 427A) De asemenea icircn Capitolul V dedicat studiul

expresiei relative a receptorilor PPARα studiul valorilor fibrinogenului a arătat creşterea

acestui reactant de faza acută icircn lotul cu SM comparativ cu lotul martor (P lt0 0001) Icircn

studiul nostru am calculat o corelaţie invers proporţionala (r = - -036 fig 555B) icircntre

nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile şi concentraţia serică a

fibrinogenului Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P = 008) am reţinut

această asociere deoarece am demonstrat că nivelul de expresie relativă al receptorilor

PPARα icircn eozinofile este mai scăzut icircn sindromul metabolic iar sindromul metabolic este

caracterizat printr-un status inflamator cronic status caracterizat şi de creşterea concentraţiei

serice a fibrinogenului De asemenea notam ca această corelaţie negativă se află icircn

concordanţă cu studiile care arata că tratamentul cu agonişti PPARα (fibraţi) determina

scăderea nivelului seric al fibrinogenului contribuind la diminuarea inflamaţiei cronice din

sindromul metabolic şi icircn consecinţă amelioracircnd insulinorezistenţa

LIMITE ȘI DIFICULTĂȚI IcircN CERCETARE

Icircn cadrul Tezei de Doctorat am desfăşurat o cercetare care şi-a propus studierea

expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Recrutarea anamneza şi examinarea

clinică a subiecţilor au fost realizate icircn cadrul Cabinetului de Medicină de Familie CMI Popa

Elena din Iaşi iar determinările hematologice şi biochimice s-au efectuat icircn cadrul

Laboratorului Ambulatorului de Specialitate al Spitalului Universitar ldquoSfacircntul Spiridon din

Iaşi Icircn studiul epidemiologic şi al markerilor inflamatori al sindromului metabolic desfăşurat

au fost incluşi un număr de 1530 de participanţi pe baza liberului consimţămacircnt examinaţi icircn

perioada 01012013 - 31122013 Icircn continuare icircn perioada 1012014 - 28022014 pe baza

criteriilor de includere şi excludere icircn cele două loturi de studiu am investigat un număr de 57

de subiecţi prezentaţi la consultaţie icircn această perioadă şi care au icircndeplinit criteriile de

includere icircn cele două loturi (Lot SM şi Lot Control) constituite pentru evaluarea nivelului de

expresie a receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Explorarea nivelului de expresie

relativă a receptorilor PPARα s-a desfăşurat icircn cadrul Laboratorului de Biologie Moleculară

de pe platforma Institutului Regional de Oncologie Datorită resurselor proprii financiare

limitate trebuie să subliniez că aceasta cercetare nu ar fi fost posibilă fără contribuţia unor

cercetători din domeniul medical care m-au sprijinit necondiţionat atacirct icircn elaborarea

protocolului de lucru cacirct şi icircn efectuarea propriu-zisă a studiului Icircn acest sens menţionăm şi

faptul că pentru studiul receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic am utilizat aparatura

Laboratorului de Biologie Moleculară (care deserveşte icircntreaga Regiune a Moldovei) Pe

această cale mulţumesc personalului Laboratorului de Biologie Moleculară pentru ajutorul

acordat icircn desfăşurarea cercetării doctorale icircn condiţiile icircn care se observa creşterea

numărului de pacienţi care se adresează acestei platforme de cercetare Mulţumesc de

asemenea şi Doamnei Doctor Elena Butoi din cadrul Institutului de Biologie şi Patologie

Moleculară ldquoNicolae Simionescurdquo Bucureşti) pentru donaţia anticorpului secundar anti-

FITC Icircn consecinţă pentru recrutarea unui număr mai mare de participanţi ar fi fost necesară

icircn primul racircnd obţinerea unor resurse financiare suplimentare pentru achiziţia de aparatură şi

reactivi Totuşi numărul subiecţilor recrutaţi este apropiat de numărul subiecţilor raportaţi icircn

cadrul unor granturi de cercetare care aveau ca ţinta studiul expresiei receptorilor PPARα

(212 227 228 231) Rezultatele obţinute continua seria lucrărilor care arata importanta

studiului mecanismelor etiopatogenice ale sindromului metabolic patologie care se afla icircntr-o

continuă creştere La pacienţii cu SM pe lacircngă diminuarea nivelului de expresie a receptorilor

PPARα icircn eozinofile ne aşteptam şi la evidenţierea unor modificări icircn expresia PPARα şi icircn

populaţiile de Ly Mo şi PMN Acest fapt poate fi explicat de utilizarea unor celule provenite

de la pacienţi fără afectare cardiovasculară fără diabet zaharat şi necesită continuarea

studiului pe culturi celulare icircn condiţii de stimulare cu agonişti PPARα deziderat care

impune continuarea investigării expresiei PPARα printr-un grant de cercetare

ORIGINALITATEA ȘI CONTRIBUȚIILE INOVATIVE ALE TEZEI DE

DOCTORAT PERSPECTIVE DE CERCETARE

Evaluarea nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn leucocitele circulante

aduce noi perspective icircn studiul obezităţii şi sindromului metabolic Importanta studiului

expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic derivă din prevalenta crescută a

sindromului metabolic icircn populaţia cercetată la care se adaugă riscul cardiovascular foarte

icircnalt al acestor pacienţi cu implicaţii majore icircn sănătatea publică Rolul receptorilor PPARα

icircn inflamaţie şi aterogeneza este binecunoscut dar studiul nostru este primul care a arătat că

nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα este semnificativ mai scăzut in populatiile

de eozinofile la pacienţii cu SM Această concluzie coroborata cu existenţa unei stracircnse

asocieri intre expresia receptorilor PPARα la nivelul Mo limfocitelor şi PMNlor creeaza

ipoteza existenţei unui mecanism de control diferit al expresiei PPARα la nivelul

eozinofilelor Această cercetare aduce informaţii importante referitoare la mecanismele

proinflamatorii care stau la baza insulinorezistenţei şi riscului cardiometabolic şi impune

continuarea studiului acestor receptori nucleari prin citometrie icircn flux metodă care poate fi

aplicată şi la scara mai largă dacă sunt asigurate resursele materiale necesare cercetării

Cercetarea prin citometrie icircn flux poate fi completată de studiul polimorfismului genei

PPARA şi astfel se pot identifica timpuriu indivizii cu potenţial risc cardiometabolic crescut

Studiul receptorilor PPARα a stabilit conexiuni cu factori proinflamatori şi aterogenetici iar

continuarea cercetării poate aduce şi elemente noi de diagnostic precoce icircn sindromul

metabolic contribuind la icircmbunătăţirea prognosticului acestor pacienţi

CONCLUZII FINALE

1 Aplicarea scorului de SM alături de implementarea algoritmului electronic de diagnostic

contribuie la o prelucrare rapidă eficientă și standardizată a informaţiilor la nivelul

medicinei primare

2 Prevalenţa SM calculată astfel icircn cadrul studiului este crescută (2732) icircn concordanţă

cu datele raportate

3 Controlul factorilor de risc cardiometabolici incluşi icircn SM se poate realiza prin

managementul stilului de viaţă (scăderea greutăţii corporale prin combaterea

sedentarismului şi adoptarea unei diete antiaterogene şi hipocalorice) şi administrarea

terapiei medicamentoase

4 Este necesară adoptarea unei politici de sănătate publică pentru prevenirea creşterii icircn

populaţie a prevalenţei obezităţii şi a diabetului zaharat

5 Noi metode de cercetare icircn domeniul SM axate pe diagnosticarea precoce şi cuantificarea

eficientă a acestuia duce la diminuarea incidenței evenimentelor cardiovasculare majore

6 Sindromul metabolic se caracterizează printr-un status inflamator cronic

7 Valorile Non-HDL-colesterolului şi a raportului de aterogenitate sunt semnificativ mai

mari la pacienţii cu SM

8 Dintre reactanţii de faza acută am observat că valoarea medie a fibrinogenului este mai

crescută icircn lotul cu SM

9 Valorile eozinofilelor sunt crescute icircn sindromul metabolic iar explorarea relaţiei dintre

eozinofile şi obezitate constituie una din direcţiile de studiu actuale ale sindromului

metabolic

10 Evaluarea markerilor inflamatori icircn contextul sindromului metabolic este utilă icircn

evaluarea complexă a a factorilor de risc cardiometabolici

11 Prin metoda citometriei icircn flux am demonstrat prezenta Receptorilor Activaţi de

Inductorii Proliferării Peroxizomilor ndash Alpha (PPARα) icircn toate populaţiile de leucocite

studiate (Mo limfocite PMN eozinofile) atacirct icircn lotul pacienţilor cu SM cacirct şi icircn lotul

martor

12 Utilizacircnd intensitatea medie de fluorescenţă a anticorpilor anti- PPARα am arătat că

nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile este semnificativ mai redus

la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali

13 Acest studiu este primul care a demonstrat existenţa unei scăderi statistic semnificative a

nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofilele pacienţilor cu SM

confirmacircnd cercetările recente care au evidenţiat rolul eozinofilelor şi al receptorilor

PPARα icircn obezitate reglarea inflamaţiei cronice şi aterogeneza

14 Contrar aşteptărilor noastre icircn populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările

efectuate icircn cele două loturi de studiu (cu şi fără sindom metabolic) nu am evidenţiat

diferenţe statistic seminificative icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα la

subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali

15 Icircn populaţiile de Mo limfocite şi polimorfonucleare am observat corelaţii puternice

semnificativ statistic icircntre expresia PPARα icircn aceste tipuri celulare sugeracircnd existenţa

unui mecanism unic de control al inflamaţiei cronice la nivelul acestor celule probabil

diferit de cel din eozinofile

16 La subiecţii cu SM expresia relativă a PPARα icircn Eo este invers asociată cu expresia

receptorului CD36 (receptor al particulelor de ox - LDL şi propus ca un marker precoce al

aterosclerozei) dovedind rolul antiinflamator al receptorilor PPARα la nivel endotelial

17 La pacienţii cu antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială nivelul de

expresie al receptorilor PPARα icircn eozinofile şi Mo este diminuat comparativ cu subiecţii

fără antecedente familiale de hipertensiune arterială Putem spune că studiul efectuat de

noi aduce informaţii importante legate de geneză aterosclerozei şi hipertensiunii arteriale

18 Prin studiul asocierilor dintre receptorii PPARα şi componentele clinice ale sindromului

metabolic am arătat rolul acestor receptori icircn determinismul obezităţii de tip central

nivelul expresiei relative a receptorilor PPARα fiind invers proporţional cu circumferinţa

abdominală

19 Icircn acelaşi timp nivelul de expresie a PPARα icircn sindromul metabolic este asociat pozitiv

cu concentraţia serică a HDL-colesterolului şi invers asociat cu nivelul trigliceridelor

serice dovedind rolul acestor receptori icircn diminuarea procesului inflamator cronic de la

nivel vascular

20 La pacienţii cu SM scăderea expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofile este corelată cu

creşterea unor markeri ai sindromului inflamator cronic cardiometabolic (acid uric

fibrinogen) ilustracircnd importanta receptorilor icircn reglarea status-ului inflamator cronic din

sindromul metabolic

21 Utilizarea metodei flowcitometrice pentru studiul expresiei relative a receptorilor PPARα

icircn leucocite a adus informaţii importante cu privire la mecanismele moleculare de control

implicate icircn patogenia bolilor cardiometabolice icircn concordanţă cu cercetările care descriu

expresia PPAR icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale bronşice

keratinocite)

BIBLIOGRAFIE SELECTIVA

1 Kahn R Metabolic syndrome- what is the clinical usefulness Lancet 2008371(9628)1892-3

2 Reaven GM The metabolic syndrome is this diagnosis necessary Am J Clin Nutr 2006 83(6)1237-7

3 Grundy SM Pre-Diabetes Metabolic Syndrome and Cardiovascular Risk J Am Coll Cardiol 201259(7)

635-43

4 International Diabetes Federation IDF Diabetes Atlas 6th edn International Diabetes Federation Belgium

Brussels 20131-155

5 World Health Organization Global Status Report on Noncommunicable Diseases 2010 World Health

Organization Geneva Switzerland 20111-176

6 Coman AE Petrovanu R Sindromul metabolic in practica de ambulator Editura Pim Iaşi 2009 1-103

7 Grundy SM Becker D Clark LT et alThird Report of the National Cholesterol Education Program (NCEP)

Expert Panel on Detection Evaluation and Treatment of High Blood Cholesterol in Adults (Adult

Treatment Panel III) Final Report Circulation 2002106(25)3143-90

8 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J Metabolic syndrome- a new worldwide definition A Consensus Statement

from the International Diabetes Federation Diabet Med 2006 23(5)469-80

9 KG Alberti KG Eckel RH Grundy SM etal International Diabetes Federation task force on epidemiology

and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart Association World Heart

Federation International Atherosclerosis Society International Association for the study of obesity

Harmonizing the metabolic syndrome a joint interim statement of the International Diabetes Federation task

force on epidemiology and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart

Association World Heart Federation International Atherosclerosis society and International Association

for the study of obesity Circulation 2009120(16)1640-5

10 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J IDF Epidemiology Task Force The metabolic syndrome new

worldwide definition Lancet 2005 366 1059 - 62

11 Oleszczyk M Svab I Seifert B et al Primary healthcare in the developing part of Europe changes and

development in the former Eastern Bloc countries that joined the European Union following 2004 Med Sci

Monit 2009(15)78ndash84

12 Jung U J Choi M S Obesity and Its Metabolic Complications The Role of Adipokines and the

Relationship between Obesity Inflammation Insulin Resistance Dyslipidemia and Nonalcoholic Fatty

Liver Disease Int J Mol Sci 2014rsquo15(4) 6184-223

13 Vanden Heuvel JP Peters JM Peroxisome Proliferators In Ramos K (ed) Cellular and Molecular

Toxicology (Second Edition) Volume 2 New York Elsevier Science Inc 2010 145 - 67

14 Yessoufou A Wahli W Multifaceted roles of peroxisome proliferator-activated receptors (PPARs) at the

cellular and whole organism levels Swiss Med Wkl 2010140w13071 doi104414smw201013071

15 Azhar S Peroxisome proliferator-activated receptors metabolic syndrome and cardiovascular disease

Future Cardiology 20106(5)657-91

16 Andries G Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity

Diabetes and Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(Suppl)24-32

17 Zandbergen F Plutzky J PPARalpha in atherosclerosis and inflammation Biochim Biophys Acta

20071771(8)972-82

18 Straus DS Glass CK Anti-inflammatory actions of PPAR ligands new insights on cellular and molecular

mechanisms Trends Immunol 200728(12)551-8

19 Zlei M Zugun- Eloae F Carasevici E Citometrie icircn flux - Bază şi clinică Icircn Hinescu ME (ed) Citometrie icircn

flux - principii şi aplicaţii clinice Bucureşti Editura Viaţa Medicală Romacircnească 20111-128

20 Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity Diabetes and

Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(9)24-32

21 Woerly G Honda K Loyens M et al Peroxisome proliferator-activated receptors alpha and gamma down-

regulate allergic inflammation and eosinophil activation J Exp Med 2003198(3)411-21

22 Salle-Saumont D Brenuchon C Kanda A et al Peroxisome proliferator-activated receptor alpha regulates

skin inflammation and humoral response in atopic dermatitis J Clin Allergy Immunology 2008 21(4)962-8

23 Schote A Turner J Schiltz J et al Nuclear receptors in human immune cells expression and correlations

Mol Immunolog 200744(6)1436-45

24 DAmore S Vacca M Graziano G et al Nuclear receptors expression chart icircn peripheral blood

mononuclear cells identifies patients with Metabolic Syndrome Biochim Biophys Acta

20131832(12)2289-301

25 Uthurralt J Gordish-Dressman H Bradbury M T et al PPARalpha L162V underlies variation in serum

triglycerides and subcutaneous fat volume in young males BMC Med Genet 2007855

26 Hiukka A Leinonen ES Jauhiainen M et al Long-term effects of fenofibrate on VLDL and HDL

subspecies icircn participants with type 2 diabetes mellitus Diabetologia 2007 50(10)2067-75

27 Robins SJ Rubins HB Faas FH et alInsulin resistance and cardiovascular events with low HDL

cholesterol The Veterans Affairs HDL Intervention Trial (VA-HIT) Diabetes Care 2003 26(5)1513-7

28 Devaraj S Siegel D Jialal I Statin Therapy in Metabolic Syndrome and Hypertension Post-JUPITER

What is the Value of CRP Curr Atheroscler Rep 2011 13(1) 31ndash42

29 Imperatore G Riccardi G Iovino C et al Plasma Fibrinogen A New Factor of the Metabolic Syndrome A

population-based study Diabetes Care 19982 1(4)649-54

30 Krysiak R Gdula-Dymek A Bachowski R Okopien B Pleiotropic effects of atorvastatin and fenofibrate

in metabolic syndrome and different types of pre-diabete Diabetes Care 201033(10)2266-70

31 Hermans MP Impact of Fenofibrate on Type 2 Diabetes Patients with Features of the Metabolic Syndrome

Subgroup Analysis From FIELD Curr Cardiol Rev 20106(2)112-8

32 Silverstein R Inflammation atherosclerosis and arterial thrombosis Role of the scavenger receptor CD36

Cleveland Clinic Journal of Medicine 200976(Suppl 2)S27-S30

33 Hăncu N Obezitatea In Vereşiu IA (ed) Diabetul zaharat nutritia si bolile metabolice Volume 2 Editura

Echinox Cluj- Napoca 2010 1-15

Lista lucrări publicate

1 Elena Popa Maria Maidaniuc Agnes Bacusca Alamir Diaa Rodica Petrovanu Adorata Elena

Coman Disfuncţia endotelială ndash de la mecanisme moleculare la cuantifi care şi tratament icircn practica

medicală Practica Medicală 20149(3) 109-14

2 Elena Popa Agnes Bacusca Alamir Diaa Maria Maidaniuc Rodica Petrovanu Adorata Elena Coman

The function of insulin receptor (IRF) in evolution of obesity correlation with adipocytes diameters

Archives of the Balkan Medical Union 201449(3) 275-9

3 Elena Popa Florin Zugun-Eloae Mihaela Zlei Daniela Jitaru Oana Maria Pintilie Adorata Elena

Coman Maria Traian Didona Anca Ungureanu Eugen Carasevici - acceptata pentru numarul 42014

Flow cytometry analysis of PPAR-alpha receptors in metabolic syndrome) Revista Romană de

Medicină de Laborator(RRLM-D-14-00034R1- adeverinţa ataşată

Page 2: REZUMAT TEZĂ DE DOCTORAT - umfiasi.ro Doctorat/rezumat... · universitatea de medicinĂ Şi farmacie “grigore t. popa” iaŞi facultatea de medicinĂ rezumat tezĂ de doctorat

Cuprins

PARTEA GENERALĂ 1

CAPITOLUL I SINDROMUL METABOLIC 1

I1Introducere 1

I2 Criterii de diagnostic al sindromului metabolic 1

I3 Epidemiologia sindromului metabolic 3

I4 Patogenia sindromului metabolic 4

CAPITOLUL II RECEPTORII ACTIVAŢI DE INDUCTORII PROLIFERĂRII

PEROXIZOMILOR - ALPHA 11

II1 Generalităţi 11

II2 Istoric 12

II3 Structura PPAR 12

II4 Mecanismul acțiunii PPAR 13

II5 Clasificarea receptorilor PPAR 13

II6 Liganzii PPARα 15

II7 Reglarea expresiei PPARα 15

II8 Rolul receptorilor activaţi de inductorii proliferării peroxizomilor alpha ndashPeroxisome

Proliferator-Activated Receptor-Alpha ( PPARα) icircn organismul uman 16

II81 Rolul PPARα in reglarea homeostaziei energetice a organismului uman 16

II82 Rolul PPARα icircn reglarea metabolismului lipidic 17

II83 Rolul PPARα icircn modularea inflamaţiei 18

II9 Concluzii 39

PARTEA PERSONALĂ 41

CAPITOLUL III SCOPUL ŞI MOTIVAŢIA STUDIULUI CONSIDERAŢII ETICE 41

III1 Motivația cercetării 41

III2 Scopul studiului 42

III3 Considerații etice 42

CAPITOLUL IV STUDIUL SINDROMULUI METABOLIC IcircN POPULAŢIA

SELECTATĂ 43

IV1 Obiectivele studiului sindromului metabolic 43

IV2 Etapele studiului sindromului metabolic 43

IV3 Studiul epidemiologic icircn populaţia selectată 43

IV31Scopul studiului 43

IV32 Obiectivele studiului 43

IV33 Lotul de studiu 43

IV34 Protocolul studiului epidemiologic al sindromului metabolic 44

IV35 Metode utilizate icircn cercetare 45

IV36 Analiza statistică 46

IV37 Rezultate 46

IV38 Discuţii 62

IV39 Concluzii 64

IV4 Studiul sindromlui inflamator cronic icircn cadrul sindromului metabolic 65

IV41 Scopul studiului 65

IV42 Obiectivele studiului 65

IV43Material şi metodă 65

IV44 Analiza statistică 65

IV45 Rezultate 66

IV46Discuţii 79

IV47 Concluzii 80

Capitolul V STUDIUL RECEPTORILOR ACTIVAŢI DE INDUCTORII PROLIFERĂRII

PEROXIZOMILOR-ALPHA IcircN LEUCOCITELE CIRCULANTE 81

V1 Ipoteza de lucru 81

V2 Material și metodă 82

V3 Analiza statistică 87

V4 Rezultate 87

V41 Analiza loturilor studiate 87

V42 Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα 91

V43 Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor CD36 106

V44 Studiul corelaţiilor icircn cele două loturi 111

V5 Discuţii 118

V6 Concluzii 128

VI LIMITE ȘI DIFICULTĂȚI IcircN CERCETARE 129

VII ORIGINALITATEA ȘI CONTRIBUȚIILE INOVATIVE ALE TEZEI DE

DOCTORAT PERSPECTIVE DE CERCETARE 130

VIII CONCLUZII FINALE 131

IX BIBLIOGRAFIE 133

X ANEXE 148

Fişa electronică de studiu Consimţămacircntul informat al pacientului Recoltarea probelor de sacircnge venos pentru studiul PPARα

Protocol marcare CD14 - CD36

Imagini PPARα - citometrie icircn flux

Imagini CD36 Lista lucrări publicate

LISTA ABREVIERI

CA - Circumferinţa abdominalăcm - CentimetriCRP - Proteina C reactivăCol - Colesteroldl - DecilitruEo - EozinofileHDL - High density lipoprotein (lipoproteine cu densitate icircnaltă)IDF - Federaţia Internaţională de DiabetIgE - ImunoglobulinăIMC- Indice de masă corporalăLy - LimfociteLDL- Low density lipoprotein (lipoproteine cu densitate joasă)mg - MiligramMo- MonociteNCEP-ATP III - Naţional Cholesterol Education Program Adult Treatment Panel IIIPPAR - Receptorii Activaţi de Inductorii Proliferarii Peroxizomilor (peroxizome proliferator -activated receptor)PMN - PolimorfonucleareSM - Sindrom metabolicTA - Tensiunea arterialăTAS - Tensiune arterială sistolicăTAD - Tensiune arterială diastolicăTG - Trigliceride

Teza cuprinde un număr de 118 de figuri 41 de tabele și 280 referințe bibliograficeNumerotarea tabelelor şi figurilor este identică cu cea din teză

SCOPUL ŞI MOTIVAŢIA STUDIULUI

Motivația cercetării

La nivel mondial sindromul metabolic (SM) reprezintă o importantă problemă de

sănătate publică reunind asocierea dintre obezitate abdominală şi factori de risc majori

cardiovasculari (hiperglicemia dislipidemia hipertensiunea arterială) (12) Se estimează că

SM afectează peste 25 din populaţia generală iar aproximativ două treimi din pacienţii cu

SM sunt predispuşi la un eveniment cardiovascular major (3) Icircn prezent se acţionează pe

două căi pentru controlul factorilor de risc cardiometabolici incluşi icircn SM managementul

stilului de viaţă (scăderea greutăţii corporale prin combaterea sedentarismului şi adoptarea

unei diete antiaterogene şi hipocalorice) şi administrarea terapiei medicamentoase Deşi atacirct

modificarea stilului de viață cacirct și terapia medicamentoasă vizează controlul factorilor de risc

cardiometabolici conform ghidurilor medicale adoptate atingerea ţintelor terapeutice este

greu de realizat (1011) Icircn aceste condiţii introducerea unor noi metode diagnostice şi

terapeutice bazate pe etiopatogenia SM ar putea icircmbunătăţi calitatea vieţii bolnavilor şi SM şi

ar conduce pe termen lung la creşterea speranţei medii de viaţă Cercetările actuale sunt

orientate spre descifrarea modului icircn care modificările metabolismului incluzacircnd rezistenţa la

insulină dislipidemia obezitatea abdominală pot accelera ateroscleroza privită ca o

complicaţie metabolică și indusă de inflamație (12) Icircn contextul studiului SM receptorii

nucleari activaţi de inductorii proliferării peroxizomilor-alpha-α (PPARα) atrag atenţia

datorită rolului deţinut icircn reglarea oxidării acizilor graşi metabolismul lipidelor şi

lipoproteinelor inflamaţie cronică şi aterogeneză (131415) Aceștia reprezintă astfel veriga

lipsă patogenică care leagă modificările metabolice de procesul inflamator cronic

autoicircntreținut care duce la disfuncția endotelială și aterogeneză Acţionacircnd ca factori de

transcripţie activarea PPARα determină scăderea nivelului seric al trigliceridelor şi HDL-col

şi protejează față de profilul lipidic aterogenetic prin modularea status-ului proinflamator şi

diminuarea insulinorezistenţei (1617) Rolul PPARα icircn reglarea metabolismului lipidic

balanţei energetice şi icircn diminuarea răspunsului proinflamator fac din aceşti receptori o

potenţială ţinta icircn tratamentul afecţiunilor icircn care rolul inflamaţiei cronice este bine cunoscut

Se descrie astfel o nouă posibilitate de icircmbunătăţire a prognosticului afecţiunilor cronice cu

impact major asupra sănătăţii publice incluzacircnd ateroscleroza diabetul zaharat boala cronică

obstructivă pulmonară maladia Parkinson demența Alzheimer şi nu icircn ultimul racircnd

neoplaziile (18)

Scopul studiului

Icircn cadrul Tezei de Doctorat mi-am propus realizarea unei cercetări referitoare la

rolul Receptorilor Activaţi de Inhibitorii Proliferării Peroxizomilor- alpha icircn contextul

sindromului metabolic alături de completarea datelor epidemiologice existente cu privire la

prevalenţa acestui sindrom icircn populaţia aflată icircn evidenţa unui Cabinet de Medicină de

Familie din oraşul Iaşi Ca urmare cercetarea efectuată a urmărit două aspecte1 studiul

epidemiologic al SM icircn populaţia unui Cabinet de Medicină de Familie urmată de

investigarea markerilor inflamatori prezenţi icircn SM 2 investigarea prezenţei și a nivelului de

expresie relativă a receptorilor PPARα icircn leucocitele circulante recoltate din sacircngele

subiecţilor studiaţi celule care exprimă aceşti receptori şi a căror rol icircn inflamaţie şi

aterogeneză este bine cunoscut

Considerații etice Studiul a primit avizul Comisiei de Etică a Universităţii de Medicină

şi Farmacierdquo Gr T Popardquo Iaşi Studiul a fost condus icircn conformitate cu Declaraţia de la

Helsinki actualizată

STUDIUL SINDROMULUI METABOLIC IcircN POPULAŢIA SELECTATĂ

Obiectivele studiului sindromului metabolic

a evaluarea din punct de vedere clinic şi biologic a sindromului metabolic

b identificarea tipului de SM icircn raport cu numărul de componente

c stabilirea prevalenţei sindromului metabolic icircn populaţia studiată

d studiul markerilor inflamatori prezenţi icircn SM

Studiul epidemiologic icircn populaţia selectată

Am efectuat un studiu epidemiologic transversal care şi-a propus stabilirea prevalenţei

sindromului metabolic şi a componentelor sale icircn populaţia icircnscrisă pe lista unui cabinet de

medicină de familie Studiul s-a desfăşurat pe parcursul a 12 luni icircn perioada 01012013ndash

31122013 icircn cadrul Cabinetului de Medicină de Familie CMI Popa Elena situat icircn strada

Ion Creanga nr 73 din Iaşi

Obiectivele studiului - evaluarea din punct de vedere clinic şi biologic a sindromului metabolic

- identificarea tipului de SM icircn raport cu numărul de componente

- stabilirea prevalenţei sindromului metabolic icircn populaţia studiată

Lotul de studiu a fost constituit din populaţia de ambele sexe cu vacircrsta cuprinsă icircntre

18 şi 91 ani icircnscrisă pe lista medicului de familie Subiecţii au fost invitaţi să participe la

studiu icircn luna naşterii realizacircnd astfel o programare a vizitelor pe parcursul a 12 luni

Criteriile de includere icircn lotul de studiu vacircrsta peste 18 ani capacitate de decizie

domiciliul stabil icircn Romacircnia participare pe baza consimţămacircntului liber informat Criteriile

de excludere vacircrstă sub 18 ani femei gravide sau care alăptează bolnavi icircn faza terminală

subiecţi care refuză semnarea consimţămacircntului informat Nu s-au formulat criterii care să

aducă discriminări legate de sex etnie sau rasă

Protocolul studiului epidemiologic al sindromului metabolic

Icircn cadrul studiului epidemiologic s-au realizat cacircte două vizite pentru fiecare participant La

prima vizită subiecţii au fost informaţi asupra studiului icircn cadrul cercetării doctorale şi au

semnat Consimţămacircntul liber informat Pentru fiecare participant s-a completat fişa de studiu

computerizată incluzacircnd date anamnestice şi clinice (talie greutate corporală perimetru

abdominal) La a doua vizită s-au recoltat probe biologice (sacircnge venos) de către o asistentă

specializată pentru următoarele determinări biochimice (glicemie colesterol total HDL-

colesterol LDL-colesterol trigliceride acid uric creatinină fibrinogen proteină C reactivă)

şi hematologice (hemoleucograma VSH) Pentru diagnosticarea SM am utilizat criteriile

de diagnostic Harmonised I (tabel VI) Am comparat prevalenţa SM conform criteriilor

Harmonised I cu prevalenţa obţinută prin aplicarea criteriilor IDF respectiv ATP III

Analiza statistică Pentru analiza parametrilor studiaţi icircn SM am realizat icircmpreună cu

firma Arhilog Soft un program icircn care sunt incluşi parametrii de diagnostic ai SM şi care

permite icircncadrarea pacienţilor funcţie de componentele SM icircn SM3 SM4 SM5 De

asemenea programul permite editarea şi arhivarea unei fişe de observaţie pentru fiecare

participant la studiu precum şi crearea unei baze de date compatibile cu programul Microsoft

Office Excel 97-2003

Menţionăm că acest program poate stoca

şi alţi parametri clinici şi paraclinici utilizaţi icircn evaluarea complexă a SM putacircnd fi ulterior

introdus ca un program de monitorizare a evoluţiei pacienţilor Pentru prelucrarea statistică a

parametrilor s-au folosit programele Microsoft Office Excel 97-2003 SPSS-10 (Statistical

Package for Social Sciences) şi aplicaţia Medcalc Statistical Software ndash 1333 Valoarea lui p

Figura 41 Program de

analiză a parametrilor SM

mai mică de 005 a fost considerată semnificativ statistic

Rezultate Analiza lotului de studiu s-a efectuat icircn funcţie de mediul de provenienţă sex vacircrstă şi

vacircrsta medie Caracteristicile clinice şi biochimice ale lotului studiat sunt reprezentate icircn

tabelul VIII

Tabel VIII Caracteristicile lotului studiat Media 95 CI SD Minimum Maximum

Vacircrsta (ani) 4751 4661 - 4841 1798 1800 9100

CA (cm) 8830 8764 - 8896 1316 5600 13400

IMC (kgm2) 2603 2578 - 2628 497 1900 4500

TAD (mmHg) 7529 74883 - 7571 827 6000 11500

TAS (mmHg) 11730 11650 - 11810 1590 9000 19000

Glicemie (mgdl) 9435 9328 - 9542 2138 7200 40000

HDL- col(mgdl) 4498 4427 - 4570 1422 2100 9200

TG(mgdl) 12269 11887 - 12651 7157 4800 87900

Determinarea scorului SM

Am aplicat criteriile de diagnostic şi am calculat scorul de SM pentru fiecare subiect (0-

absenţa criteriului 2- prezenţa criteriului) (fig44)

Figura 44 Frecvenţa scorului SM icircn

populaţia studiată conform criteriilor

SM Harmonised (A) IDF (B) ATP III

(C) Se observă că distribuţia scorurilor

SM conform criteriilor de diagnostic este

identică icircn cazul aplicării criteriilor

Harmonized I şi IDF

Scorul de SM a avut valori pare

cuprinse icircntre intervalul 0 - 10 pacienţii

cu SM avacircnd un scor mai mare sau egal

cu 6

Icircn lotul studiat am analizat prezenţa simultană a criteriilor Harmonised I de diagnostic şi

am constatat prezenţa SM la 389 subiecţi (204 femei şi 185 bărbaţi) reprezentacircnd 2542

(95CI 2296-2808) din totalul populaţiei studiate Raportul prevalenţelor specifice pe sexe

bărbaţifemei a fost de 103 (95 CI084 -126)Icircn concordanţă cu criteriile IDF am

identificat un număr de 325 pacienţi cu SM (175 femei şi 150 bărbaţi) iar prevalenţa SM icircn

populaţia studiată conform IDF a fost de 2124 (95 CI 1899ndash 2368) Raportul

prevalenţelor specifice la bărbaţi versus femei a fost de 0977 (95 CI 078 ndash122) Utilizacircnd

definiţia ATP III au fost identificaţi un număr de 229 subiecţi cu SM Prevalenţa SM a fost

C

0

100

200

300

400

500

600

700

Scor SM ATP III

Număr pacienţi

0 2 4 6 8 10

ATP III SM5 SM4 SM3 non SM

B

0 50

100 150 200 250 300 350 400 450

Scor SM IDF

Număr pacienţi

0 2 4 6 8 10

IDF SM5 SM4 SM3 non SM

A

0

50

100

150

200

250

300

350

400

450

Scor SM Harmonised I

Număr pacienţi

0 2 4 6 8 10

HARMONIZED I SM5 SM4 SM3 non SM

de 1497 (95CI 1309 ndash 1704) icircn populaţia studiată Au fost calculate prevalenţele pe

sexe şi au fost găsite valorile de 1343 (95CI 010 ndash 164) la bărbaţi respectiv 1632

(95 CI 1366 ndash 1934) la femei raportul dintre acestea fiind de 082 (95CI 062 ndash 107)

Pentru fiecare asociere dintre componentele SM diagnosticat conform criteriilor

Harmonised I am calculat prevalenţele icircn cadrul SM(tabel XVI)

Tabel XVI Prevalenţa asocierilor dintre componentele SM Număr

pacienţi

Ponderea icircn cadrul

pacienţilor cu SM

(95 CI)

Prevalenţa icircn

populaţia studiată

(95 CI)

SM cu trei componente (SM3)

241 6195 (5438ndash7029) 1575 (1383-

1787)

Obezitate centrală + hipertensiune arterială +

hipertrigliceridemie

45 1154 (844ndash1548) 294 (214-393)

Obezitate centrală + hipertensiune arterială + hipo-

HDLcolesterolemie

38 979 (691ndash1340) 248 (175-340)

Obezitate centrală + hipertrigliceridemie +

hipoHDL-colesterolemie

34

874 (605ndash1221) 222 (153-310)

Obezitate centrală + modificări ale metabolismului

glucidic + hipertensiune arterială

31 796 (541ndash1131) 202 (137-287)

Hipertensiune arterială + hiper-trigliceridemie +

hipoHDL- colesterolemie

26 668 (436 ndash979) 169 (111-249)

Modificări ale metabolismului glucidic +

hipertensiune arterială + hiper-trigliceridemie

21 539 (334-825) 137 (085-209)

Obezitate centrală + modificări ale metabolismului

glucidic + hipertrigliceridemie

15 385 (215-636) 098 (054-116)

Modificări ale metabolismului glucidic

hipertrigliceridemie + hipoHDL-colesterolemie

12 308 (159-538) 078 (040-137)

Modificări ale metabolismului glucidic +

hipertensiune arterială + hipoHDLcolesterolemie

10 257 (123ndash472) 065 (031-120)

Obezitate centrală + modificări ale metabolismului

glucidic + hipo-HDL-col

9 231 (105ndash439) 058 (026-111)

SM cu patru componente (SM4) 104 2674 (2184-239) 679 (555-823)

Obezitate centrală + modificări ale metabolismului

glucidic + hipertensiune arterială + hipoHDL-

colesterolemie

32 822 (562-1116) 209 (143-

295)

Obezitate centrală + hipertensiune arterială +

hipertrigliceridemie + hipoHDL-col

25 642 (415- 948) 163 (105-241)

Obezitate centrală + modificări ale metabolismului

glucidic + hipertri-gliceridemie + hipoHDL-

colesterolemie

12 308 (159-538) 078 (040-137)

Modificări ale metabolismului glucidic +

hipertensiune arterială + hipertri-gliceridemie +

hipoHDL-colesterolemie

6 154 (056- 335) 039 (014-085)

SM cu cinci componente (SM5) 44 1131 (822-1518) 287 (209-386)

Total (SM3 + SM4 + SM5) 389 100 2542(2296-

2808)

Analizacircnd componentele SM la cei 389 pacienţi diagnosticaţi cu SM conform criteriilor

Harmonised I am constatat că obezitatea centrală este cea mai bine reprezentată icircn SM dintre

aceste componente (8072 95CI 7644 - 8452) urmată de HTA (7892 95CI 7453

- 8287) hiperTG (6915 95 CI 6430-7371) hipo-HDL-col (6375 95 CI 5876-

6854) şi hiperglicemie (5681 95 CI5173- 6179)

Standardizarea prevalenţelor funcţie de vacircrstă şi sex Analiza statistică a relevat faptul

că prevalenţa SM creşte cu icircnaintarea icircn vacircrstă Dacă pentru vacircrsta cuprinsă icircntre 35-54 ani

prevalenţa la bărbaţi este semnificativ mai mare comparativ cu femeile (raport calculat B F -

183 P=0003) pentru celelalte grupe de vacircrsta nu s-au observat diferenţe semnificative icircntre

sexul feminin şi cel masculin Am observat că după instalarea menopauzei la femei

prevalenţa SM (corespunzătoare Harmonised I) la femei depăşeşte 50 iar la bărbaţi atinge

42 Utilizacircnd European Standard Population (175) am efectuat standardizarea funcţie de

vacircrstă şi sex a prevalenţelor bdquocruderdquo (brute) obţinute icircn populaţia studiată şi am calculat o

prevalenţă standardizată a SM de 2732 (95 CI 2460-3003) La sexul masculin

prevalenţa standardizată a SM a fost de 2760 (95 CI 2362 - 3157) iar la sexul feminin

am obţinut valoarea de 2854 (95 CI 2462 - 3245)

Discuţii

Studiul desfăşurat de noi a investigat prezenţa SM icircn populaţia unui Cabinet de Medicină

de Familie Icircn Europa prevalenţa SM este de aproximativ 25-30 Statele Unite Ale Americii

au raportat o prevalenţă a sindromului metabolic de 22 icircn populaţia cu vacircrsta peste 20 ani

pe cacircnd la vacircrstă mai mare de 60 ani s-a observat o prevalenţă de 44 (1419) Icircn studiul

efectuat am observat o prevalenţă standardizată de 2732 (95 CI 2460-3003) care este

icircn concordanţă cu prevalenţele raportate icircn Europa precum şi o creştere a ponderii SM icircn

populaţie icircn raport cu vacircrsta Am preferat utilizarea definiţiei Harmonised I pentru SM

deoarece cuprinde criterii adaptate pentru o abordare unitară a SM mărind astfel numărul

pacienţilor diagnosticaţi şi care vor urma tratament conform Ghidurilor de Practică Medicală

Limitările acestui studiu sunt legate de faptul că este concentrat doar pe populaţia asigurată şi

neasigurată aflată pe lista unui medic de familie din mediul urban Se pot efectua studii la

nivelul Cabinetelor Medicale de Medicină de Familie dar trebuie să se aplice pe un lot

reprezentativ urbanrural care să reprezinte populația acelei regiuni Utilizarea structurilor

populaționale atașate cabinetului de MF este utilă atacirct pentru cele clinice cacirct și pentru cele

epidemiologice deoarece surprinde populația studiată icircn mediul de viață cotidian Prevalenţa

mare a SM icircn populaţia studiată necesită aplicarea unei politici eficiente de sănătate publică

deoarece riscul producerii evenimentelor cardiovasculare majore poate fi redus semnificativ

printr-un control adecvat al componentelor SM (obezitate dislipidemii hipertensiune

arterială şi hiperglicemie

Studiul sindromului inflamator cronic icircn cadrul sindromului metabolic

Obiectivele studiului

- studierea markerilor inflamaţiei cronice şi aterogenezei la subiecţii cu şi fără SM

- evaluarea importanţei markerilor studiaţi ai inflamaţiei cronice icircn diagnosticul de

ambulator al sindromului metabolic

Material şi metodă

Icircn cercetarea inflamaţiei cronice din SM au fost incluşi 1530 subiecţi de ambele sexe cu

vacircrsta cuprinsă icircntre 18-91 ani icircnscrişi pe lista CMI Popa Elena Studiul s-a desfăşurat icircn

perioada 01012013ndash 31122013 Populaţia ţintă a fost identică cu cea din studiul

epidemiologic şi s-a desfăşurat concomitent cu studiul prevalentei SM Subiecţii au fost

icircmpărţiţi icircn două loturi lotul cu SM (Lot SM) şi lotul de control (fără SM)

Lot SM a) criterii de includerevacircrsta peste 18 ani recrutarea pe baza semnării

Consimţămacircntului liber informat SM diagnosticat pe baza criteriilor Harmonised I (14) b)

criterii de excluderevacircrstă sub 18 anirefuzul semnării Consimţămacircntului liber informat

femei icircn perioada de graviditate sau de lactaţie

Lot Control (fără SM) a) criterii de includerevacircrsta peste 18 anirecrutarea pe baza

semnării Consimţămacircntului liber informat absenţa sindromului metabolic b) criterii de

excluderevacircrstă sub 18 ani refuzul semnării Consimţămacircntului liber informatfemei icircn

perioada de graviditate sau de lactaţie

Rezultate

Lotul cu SM (Lot SM) a fost format din cei 389 pacienţi diagnosticaţi cu SM conform

criteriilor Harmonised I Lotul SM a fost alcătuit din 185 bărbaţi şi 204 femei raportul

bărbaţifemei fiind de 090 (95 CI073-112) Lotul de control (fără SM) a fost alcătuit

din cei 1141 participanţi care nu au icircntrunit criteriile de diagnostic ale sindromului metabolic

Din cei 1141 de subiecţi 530 au fost de sex masculin iar 611 de sex feminin raportul

bărbaţifemei fiind 087 (95 CI 077-097) Vacircrsta subiecţilor a fost semnificativ mai mare

icircn lotul pacienţilor cu SM (5976plusmn1322 ani) comparativ cu lotul martor (4333plusmn 1748 ani) (t-

Test Plt00001) Aşa cum ne-am aşteptat valorile medii ale componentelor clinice ale SM

(circumferinţa abdominală tensiunea arterială sistolică şi diastolică) au fost mai mari icircn lotul

pacienţilor cu SM (t-Test Plt0001 pentru fiecare dintre componente) Studiind parametrii

biochimici incluşi icircn diagnosticul SM valorile medii ale glicemiei şi TG au fost semnificativ

mai crescute icircn lotul SM (t-Test Plt00001 pentru ambele constante) Icircn acelaşi timp

valoarea medie determinată a HDL-col a fost semnificativ mai mare la subiecţii din lotul

martor ( t-Test Plt00001) SM se caracterizează printr-o dislipidemie aterogenă

caracterizată de creşterea TG scăderea HDL-col concomitent cu creşterea LDL-col creşterea

Non-HDL-col şi a raportului de aterogenitate (Col totalHDL-col) (185) Comparacircnd cele

două loturi am observat că valoarea medie a LDL-colesterolului determinată icircn lotul

pacienţilor cu SM a fost semnificativ mai mare faţă de subiecţii din lotul martor (t-Test P =

00002) Măsurarea Non-HDL-colesterolului a arătat prezenţa unei diferenţe semnificative

icircntre cele două loturi (figura 420 B) Astfel icircn concordanţă cu prezenţa dislipidemiei

aterogene valoarea medie a Non-HDL-col a fost semnificativ mai mare (t-Test Plt 00001) icircn

lotul cu SM comparativ cu lotul de control Icircn contextul inflamației cronice şi aterogenezei

din sindromul metabolic am evaluat sensibilitatea şi specificitatea Non-HDL-colesterolului

ca test diagnostic al SM Valoarea Non-HDL-colesterolului care prezice cu cea mai mare

acurateţe prezenţa SM a fost de 151 mgdl (punctul de ldquocut-offrdquo) pentru care am calculat o

sensibilitate de 64 27 şi o specificitate de 5872 Calculul ariei AUC a furnizat valoarea

de 0605 şi deci determinarea concentraţiei serice a parametrului Non-HDL-colesterolului are

valoarea unui marker cu acurateţe redusă Am studiat valorile raportului Col totalHDL-col icircn

cele două loturi şi am constatat că la pacienţii cu SM valoarea media a raportului de

aterogenitate este semnificativ mai mare faţă de valoarea raportului determinată icircn lotul

martor (t-Test Plt 00001) Pentru raportul de aterogenitate studiat analiza curbei ROC a

arătat că valorile mai mari decacirct punctul de ldquocut-offrdquo de 431 prezic prezenţa SM cu cea mai

mare sensibilitate (6381 ) şi specificitate (6582)Valoarea AUC pentru indicele de

aterogenitate a fost de 0667 şi icircn studiul SM acest indice poate fi considerat un marker cu

acurateţe redusă Valoarea medie determinată a acidului uric la subiecţii fără SM a fost

semnificativ mai mică decacirct icircn lotul SM (t-Test Plt 00001) Curba ROC a arătat că valorile

acidului mai mari de 43 mgdl prezic diagnosticul de SM cu cea mai mare sensibilitate

(8107) şi specificitate (5328) Pentru acidul uric AUC a avut valoarea de 0655 şi

icircncadrează determinarea acidului uric seric icircn racircndul testelor cu acurateţe redusă (187)

Comparacircnd populaţiile de leucocite (tabel XXI) valoarea medie determinată a

numărului de Eo a fost semnificativ mai mare icircn lotul cu SM comparativ cu lotul martor (t-

Test Plt0001) Analizacircnd curba ROC trasată pentru valorile numărului de Eo am observat

că valorile ldquocut-offrdquo mai mari de 200 Eomm3

pot prezice prezenta SM cu cea mai mare

specificitate (7705) şi sensibilitate (3978) Pentru diagnosticul SM calculul ariei AUC a

arătat faptul că determinarea numărului de Eo are valoarea unui test diagnostic cu acurateţe

redusă (AUC = 0 589) Comparacircnd valorile medii ale fibrinogenului am calculat o diferenţă

statistic semnificativă icircntre cele două loturi valoarea medie a fibrinogenului fiind mai mare icircn

lotul SM ((t-Test P lt 00001) Cu ajutorul curbei ROC am observat că valorile fibrinogenului

mai mari de 306 mgdl prezic sindromul metabolic cu o sensibilitate de 7511 şi specificitate

de 6056 Fibrinogenul a fost icircncadrat icircn categoria markerilor inflamatori cu acurateţe

redusă AUC avacircnd valoarea de 0690 Icircn loturile de studiu am calculat AUC corespunzătoare

criteriilor de diagnostic ale SM Am observat că icircn cazul scorului Harmonised I

sensibilitatea şi specificitatea sunt de 100 iar AUC este egală cu 1000 Pentru cele cinci

criterii de diagnostic AUC a avut valori icircntre 0636 (pentru variabila HDL-col) şi 0804

(pentru variabila CA) (figura 431)

AUC ES 95 CI

Scor SM Harmonised I 1000 00000 0997 - 1000

CA (cm) 0804 00133 0781 - 0825

TAD (mmHg) 0666 00169 0639 - 0692

TAS (mmHg) 0757 00148 0732 - 0780

Glicemie (mgdl) 0742 00160 0717 - 0766

Trigliceride (mgdl) 0756 00175 0732 - 0780

HDL- colesterol 0636 00183 0609 - 0662

Figura 431 Analiza AUC criterii de diagnostic ale SM

Studiind figura 432 se observă că valoarea AUC pentru markerii studiaţi este cuprinsă

icircntre 0589 (icircn cazul variabilei Eo) şi 0690 (icircn cazul fibrinogenului) Icircn contextul SM

acurateţea acestor markeri ai inflamaţiei cronice şi disfuncţiei endoteliale poate fi considerată

redusă deoarece AUClt07 pentru toţi markerii investigaţi (figura 431) Totuşi valorile ariilor

parametrilor reprezentaţi icircn figura 431 sunt apropiate de valorile AUC ale variabilelor TAD

şi HDL-col (figura 432) şi deci pot fi utilizaţi pentru completarea diagnosticului de SM

AUC ES 95 CI

Non-HDL-colesterol 0605 00171 0580 - 0630

Col totalHDL-col 0607 00163 0642 - 0691

Acid uric 0655 00161 0630 - 0679

Fibrinogen 0690 00206 0658 - 0720

Eozinofile 0589 00176 0564 - 0615

Figura 432 AUC markeri ai SM inflamaţiei cronice şi aterogenezei

Discuţii

Status-ul proinflamator din SM asociat cu insulinorezistenţa şi disfuncţia endotelială

constituie o verigă de legătură dintre inflamaţie şi procesele metabolice complexe icircnsoţindu-

se de deteriorarea funcţiilor vasculare şi creşterea riscului de evenimente cardiovasculare

majore (2858) Studiul efectuat a arătat o diferenţă icircntre vacircrstele subiecţilor din cele două

loturi vacircrsta pacienţilor cu SM fiind semnificativ mai mare (Plt0001) comparativ cu subiecţii

normali confirmacircnd faptul menţionat că vacircrsta reprezintă unul din stimulii care agravează

inflamaţia cronică Am arătat că valorile fibrinogenului sunt mai mari icircn SM comparativ cu

Scor Harmonised I

0 20 40 60 80 100

0

20

40

60

80

100

100-Specificitate

Sen

sib

ilit

ate

Criterii diagnostic SM

0 20 40 60 80 100

0

20

40

60

80

100

100-Specificitate

Sens

ibili

tate

CA

TAD

TAS

Glicemie

Trigliceride

HDL-C

0 20 40 60 80 100

0

20

40

60

80

100

100-Specificitate

Sensi

bilita

te

Non-HDL-C

Col T HDL-C

Acid uric

Fibrinogen

Eozinofile

lotul martor atacirct la bărbaţi cacirct şi la femei icircn concordanţă cu studiile anterioare Evaluarea

fibrinogenului este importantă nu numai icircn SM pentru definirea contextului proinflamator şi

protrombotic ci şi icircn predicţia cardiovasculară la subiecţii normali Studiind populaţiile

leucocitare am obţinut diferenţe semnificative icircn cazul Eo valoarea medie a acestora fiind

semnificativ mai mare icircn lotul cu SM comparativ cu lotul martor (P lt 0001 figura 425B)

Implicarea Eo icircn SM s-a conturat icircn ultimul deceniu aceste celule fiind implicate icircn recrutarea

macrofagelor din ţesutul adipos Experimental s-a constatat că o creştere a Eo apărută ca

urmare a infectării cu helminţi sau stimulare cu IL-5 este urmată de icircmbunătăţirea toleranţei la

glucoză (199) Controlul pe care icircl exercită Eo asupra activării macrofagelor ar putea fi cheia

intervenţiei asupra obezităţii icircn viitorul apropiat(165199) Hiperuricemia asociata frecvent cu

SM este cunoscut ca un factor independent de risc cardiovascular (192 202) In concordanţă

cu aceasta afirmaţie in studiul nostru am constatat ca nivelul seric al acidului uric a fost mai

crescut in lotul cu SM diferenţa semnificativă din punct de vedere statistic (P lt 00001)

Dislipidemia aterogenă din sindromul metabolic şi diabetul zaharat se caracterizează prin

creşterea trigliceridelor şi a Non-HDL-col scăderea HDL-col creşterea numărului de

particule LDL modificate (185190) La pacienţii cu SM am descris un profil aterogenetic

cu risc crescut de evenimente cardiovasculare majore

STUDIUL RECEPTORILOR ACTIVAŢI DE INDUCTORII PROLIFERĂRII

PEROXIZOMILOR-ALPHA IcircN LEUCOCITELE CIRCULANTE

Ipoteza de lucru

Studii experimentale efectuate au arătat că rolul PPARα icircn ateroscleroză derivă din

implicarea acestor receptori icircn limitarea inflamaţiei Plecacircnd de la acest fundament ne-am

propus evidenţierea receptorilor nucleari activaţi de inductorii proliferării peroxizomilor-

alpha (PPARα) prin citometrie de flux icircn leucocitele din sacircngele periferic alături de

evaluarea acestei metode icircn cuantificarea expresiei relative a PPARα ca test diagnostic

precoce al modificărilor metabolice SM Studiul expresiei relative a receptorilor PPARα a

plecat de la premisa că dacă SM se caracterizează printr-un status inflamator cronic nivelul

de expresie a PPARα icircn leucocitele circulante este mai scăzut la pacienţii cu SM comparativ

cu subiecţii normali Referitor la studiul receptorului CD36 am plecat de la presupunerea că

nivelul de expresie al acestui receptor icircn SM este crescut dat fiind importanţa acestui receptor

icircn inflamaţia aterosclerotică Avacircnd icircn vedere efectele receptorilor amintiţi icircn

insulinorezistenţă şi aterogeneză am considerat necesară evaluarea prezenţei receptorului

nuclear PPARα icircn paralel cu studiul receptorului bdquoscavengerrdquo CD-36 prin metoda citometriei

icircn flux Astfel icircn studiul efectuat mi-am propus şi investigarea existenţei unei legături icircntre

nivelul de expresie al receptorilor PPARα şi cel al receptorului CD-36 De asemenea ne-am

icircndreptat atenţia spre stabilirea unor asocieri icircntre componentele clinice şi biochimice ale

sindromului metabolic şi nivelul intensităţilor de fluorescenţă ale PPARα şi CD-36 ca măsură

a expresiei relative a acestor receptori

Material și metodă

Studiul receptorilor PPARα icircn contextul sindromului metabolic s-a desfăşurat icircn

perioada 1012014 -28022014 pe baza metodologiei studiilor de tip caz-martor Am urmărit

identificarea unor diferenţe icircntre expresia receptorilor PPARα la pacienţii cu SM comparativ

cu subiecţii sănătoşi diferenţe care ar putea fi utile icircn diagnosticul precoce al SMRecrutarea

pacienţilor s-a efectuat din pacienţii prezentaţi pentru consultaţie la Cabinetul Individual

ldquoCMI Dr Popa Elenardquo situat icircn strada Ion Creanga din Iaşi Pentru studiul receptorilor

PPARα icircn sindromul metabolic au fost selecţionaţi un număr de 57 de subiecţi 26 de subiecţi

cu SM (constituind lotul SM) şi 31 subiecţi fără SM constituind lotul de control (Lot Non-

SM) Pentru studiul SM pacienţii au fost recrutaţi din masa de populaţie arondată cabinetului

de MF fără istoric de SM diabet zaharat boală cardio-vasculară aflați la primul diagnostic

de SM evaluarea completă a acestora fiind urmată de includerea icircn programul de

management cardiovascular şi metabolic conform Ghidurilor Terapeutice aflate icircn vigoare

Lot SM a) criterii de includerevacircrsta peste 18 ani recrutarea pe baza semnării

Consimţămacircntului liber informatSM nou-diagnosticat pe baza prezenţei a minim trei criterii

de diagnostic pentru SM conform Harmonised I b) criterii de excluderevacircrstă sub 18 ani

refuzul semnării Consimţămacircntului liber informat femei icircn perioada de graviditate sau de

lactaţie SM anterior diagnosticat istoric de diabet zaharat boală cardiovasculară constituită

tratament cu agonişti PPARα (ie fibraţi etc)

Lot martor (Non-SM) a) criterii de includerevacircrsta peste 18 ani recrutarea pe baza

semnării Consimţămacircntului liber informat absenţa diagnosticului de SM b) criterii de

excludere vacircrstă sub 18 ani refuzul semnării Consimţămacircntului liber informat femei icircn

perioada de graviditate sau de lactaţie

Studiul receptorilor PPARα a inclus două subetape

A Studiul componentelor sindromului metabolic conform criteriilor Harmonised I

Evaluarea clinică a participanţilor s-a desfăşurat icircn cadrul Cabinetului de Medicină de

Familie iar determinările hematologice şi biochimice s-au efectuat icircn Laboratorul

Ambulatorului Clinic de Specialitate al Spitalului Clinic de Urgenţă bdquoSf Spiridonrdquo Iaşi

B Evaluarea icircn citometrie de flux a nivelului relativ de expresie a PPARα şi CD36

Studiul receptorilor PPARα s-a desfăşurat icircn Laboratorul de Biologie Moleculară al

Institutului Regional de Oncologie Iaşi prin metoda citometriei icircn flux (19) Nivelul relativ de

expresie al receptorilor nucleari PPARα a fost determinat icircn diferite tipuri de leucocite

circulante polimorfonucleare (PMN) limfocite (Ly) Mo(Mo) şi eozinofile(Eo) Am utilizat o

metodă de citometrie icircn flux optimizată ldquoin houserdquo elaborată icircn cadrul Laboratorului de

Biologie Moleculară al IRO Iaşi Icircn cursul procesului de optimizare am testat mai multe

concentraţii ale anticorpului anti-PPARα 1100 1500 11500 14500 iar icircn urma

determinărilor efectuate şi a analizei statistice concentraţia 1500 a fost considerată optimă

pentru desfăşurarea studiului (tabel XXIII figura 51)

Tabel XXIII Optimizarea concentraţiilor Ac anti-PPARα Diferenţa

mediilor

valorilor

medii

PMN

Diferenţa

mediilor

mediane-

lor

PMN

Diferenţa

mediilor

valorilor

medii

Ly

Diferenţa

mediilor

mediane-

lor

Ly

Diferenţa

mediilor

valorilor

medii

Mo

Diferenţa

mediilor

mediane-

lor

Mo

Diferenţă 0 1300 1600 100 100 700 750

normal - 1100 650 1050 1050 1350 450 900

patologic 1500 2850 2750 3800 3600 2850 2400

11500 -1050 800 3500 3300 2250 1800

14500 2200 2150 1300 1100 2950 2850

AOptimizare

BRepetabilitate

Figura 51 Optimizarea concentraţiei anticorpului anti-PPARα

Icircn concordanţă cu literatura de specialitate icircn cercetarea efectuată intensitatea medie

de fluorescenţă (MFI) a fost utilizată ca măsură pentru evaluarea expresiei celulare a

receptorilor PPARα (212) Un exemplu de analiză a probelor este reprezentat icircn figura 52

Figura 52 Exemplu de analiză flowcitometrică pentru receptorul nuclear PPARα Graficul din stacircnga reprezintă distribuţia leucocitelor iar cel din dreapta ilustrează distribuţia

intensităţii de fluorescenţă pentru populaţiile de celule selectate

Intensitatea Medie a Fluorescenţei (MFI) a CD36 ca o măsură a nivelului relativ de

expresie a acestor receptori la nivelul membranei Mo a fost detectată printr-o metodă

convenţională pentru marcare de suprafaţă şi evaluare pe bază de citometrie icircn flux folosind

aceleaşi probe de sacircnge cu EDTA cu focalizare pe Mo şi utilizacircnd CD14 ca marker specific

pentru Mo (figura 53)

Figura 53Analiza

flowcitometrică

pentru marcajul

CD14 - CD36

Rezultate

Icircn cele două loturi au fost incluşi icircn studiu un număr de 57 de participanţi care au fost

investigaţi din punct clinic şi paraclinic Vacircrsta subiecţilor incluşi icircn studiu a fost cuprinsă

icircntre 18 şi 79 ani iar vacircrsta medie calculată a avut valoarea de 4805 plusmn 1587 ani Pentru sexul

masculin vacircrsta medie este de 4925plusmn1617 ani iar pentru sexul feminin 4689 plusmn1 5ani

diferenţa obţinută icircntre vacircrstele pacienţilor fiind statistic nesemnificativă (P = 085)

Analizacircnd vacircrstele subiecţilor din cele două loturi am observat că vacircrsta medie a pacienţilor

cu SM (5476 plusmn 1183 ani) a fost semnificativ mai mare (t-test P = 0003) decacirct icircn lotul

martor (4258 plusmn 169 ani) Pentru diagnosticul sindromului metabolic am calculat scorul de

SM bazacircndu-ne pe criteriile Harmonised I Conform criteriilor diagnostice din cei 57 de

subiecţi investigaţi un număr de 26 participanţi (46) au fost incluşi icircn lotul cu SM (Lot

SM) iar 31 de subiecţi(54) nu au prezentat acest sindrom constituind lotul martor (Lot

Non-SM) Din punct de vedere al repartiţiei pe sexe nu au existat diferenţe statistic

semnificative raportul bărbaţifemei fiind de 0961 Din totalul celor 28 de bărbaţi incluşi icircn

studiu 4285 (12 bărbaţi) au icircntrunit cel puţin trei criterii diagnostice pentru SM fiind

incluşi icircn lotul SM Icircn acelaşi timp 14 femei reprezentacircnd 4827 din subiecţii de sex

feminin au icircntrunit condiţiile pentru includerea icircn lotul pacienţilor cu SM Valoarea medie

determinată pentru scorul de SM a arătat prezenţa unor valori semnificativ statistic mai mari

din punct (t-test P lt 00001) icircn lotul SM (769plusmn176) comparativ cu lotul martor (174 plusmn

184) Am studiat comparativ media valorilor măsurate ale criteriilor componentelor SM

Analiza statistică a arătat valori semnificativ statistic mai mari pentru CA TG glicemie TAS

şi TAD (plt0001) icircn lotul SM comparativ cu lotul normal Concomitent calculul statistica

evidenţiat o scăderea semnificativă a HDL-colesterolului icircn lotul cu SM comparativ cu

subiecţii din lotul martor (Non-SM) Aplicacircnd testul z am comparat ponderea pacienţilor

diagnosticaţi cu HTA dislipidemie şi tulburări ale metabolismului glucidic icircn lotul SM versus

lot Non-SM şi am constatat prezenţa acestor afecţiuni icircntr-un procent mai mare semnificativ

statistic icircn lotul SM ((plt0001)

Utilizacircnd testul t Student am calculat diferenţele statistice şi icircntre alți parametri

studiaţi care sunt factori de risc cardio-vascular dar care nu sunt componente ale SM Icircn lotul

cu SM valorile acidului uric fibrinogenului Col total Non-HDL-col şi LDL-col au fost

semnificativ mai mari comparativ cu lotul martor (tabel XXVI) Analizacircnd valorile medii ale

populaţiilor de leucocite am identificat doar pentru populaţia de Eo diferenţe statistice icircntre

cele două loturi numărul Eo icircn lotul SM fiind semnificativ mai mare decacirct icircn lotul martorTot

pentru caracterizarea celor două loturi am analizat prezenţa antecedentelor

heredocolaterale (AHC) de diabet zaharat boala cardiovasculară şi dislipidemie pentru toţi

subiecţii investigaţi Astfel existenţa AHC de HTA a fost declarată de 2580 din subiecţii

incluşi icircn lotul martor respectiv de 5384 din numărul pacienţilor cu SM Antecedentele

heredocolaterale de dislipidemie au fost prezente la 3461 din pacienţii cu SM icircn timp ce icircn

lotul martor anamneza a evidenţiat aceste antecedente la 3548 din subiecţi

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα

Icircn cercetarea desfăşurată am utilizat intensitatea medie de fluorescenţă (MFI) ca

măsură a nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn leucocitele studiate Pentru

populaţiile de leucocite analiza computerizată a probelor luate icircn studiu a furnizat valori

pentru MFI a receptorilor PPARα icircn funcţie de cantitatea de anticorpi anti-PPARα marcaţi cu

fluorocrom care se leagă de aceste celule şi apoi sunt captaţi de citometru (figura 59)

A Lot Non - SM

B Lot SM

Figura 59 Analiza flowcitometrică pentru receptorii PPARα icircn leucocite A lot normal B lot SM

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Mo

Analiza probelor efectuată conform protocolului de lucru descris a arătat prezenţa

PPARα icircn Mo recoltate din sacircngele tuturor subiecţilor incluşi icircn această cercetare Pentru toţi

participanţii investigaţi analiza MFI a Ac anti - PPARα icircn populaţia de Mo (Mo) a arătat un

interval de variaţie icircntre [786 395] Valoarea medie a nivelului de expresie relativă a PPARα

calculată pentru Mo a fost de 23210 plusmn7860 Pentru ambele loturi de studiu pacienţilor cu

SM testul Testul Shapiro-Wilk a arătat distribuţia normală a valorilor obţinute pentru nivelul

de expresie al PPARα icircn Mo

Tabel XXVIII Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn Mo

Lot SM Lot Non-SM

N 26 31

Media 22819 23538

SD 5819 7717

Mediana 22400 22600

Minimum 12800 78600

Maximum 35800 37900

Percentila 25 18300 18300

Percentila 75 26200 30350

Pentru pacienţii din lotul SM valoarea medie a MFI icircn Mo a fost de 22819 plusmn 5880 iar

pentru lotul martor s-a calculat o valoare medie a MFI a Ac anti-PPARα de 23538 plusmn 7717

Distribuţia statistică a frecvenţei valorilor MFI obţinute pentru nivelul de expresie a PPARα

icircn Mo subiecţilor din cele două loturi a fost reprezentată icircn figura 511

Figura 511 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti-PPARα icircn Mo

Sub forma unei diagrame de control Shewhart am reprezentat variaţia intensităţii medii de

fluorescenţă pentru anticorpii anti-PPARα icircn MoVariaţia nivelului de expresie relativă a

receptorilor PPARα icircn Mo subiecţilor studiaţi este ilustrată icircn fig 512 513

Figura 512 Lot SM Variaţia

expresiei relative a PPARα icircn Mo

Număr pacienţi

26

Minim 128

Maxim 358

Media 22819

DS 5819

25 din 26 valori ale MFI s-au icircncadrat

icircn intervalul Media plusmn 2DS

Figura 513 Lot Non-SM Variaţia

expresiei relative a PPARα icircn Mo

Număr pacienţi 31

Minimum 786

Maximum 379

Media 23538

DS 7717

Cu excepţia unei singure

determinări valorile calculate s-au

icircncadrat icircn Media plusmn 2DS

Utilizacircnd testul parametric t-Student pentru variabilele cu distribuţie normală am

comparat valoarea medie a intensităţii de fluorescenţă a Ac anti-PPARα icircn lotul cu SM versus

subiecţi fără SM (Lot Non-SM) Analiza statistică efectuată nu a identificat diferenţe icircntre

50 100 150 200 250 300 350 400 450

0

5

10

15

20

25

30

35

MFI anti-PPAR a

Frecv

enta

relati

va (

)

Lot SM

0 50 100 150 200 250 300 350 400 450 500

0

5

10

15

20

25

30

35

MFI anti-PPAR a

Frecv

enta

relati

va (

)

Lot martor

1 6 11 16 21 26 31

0

50

100

150

200

250

300

350

400

450

MFI

anti-

PPAR

a

2282

1106

3458

518

4046

Media

LCI

LCI

1 6 11 16 21 26 31 36

-100

0

100

200

300

400

500

MFI a

nti-PP

AR

a

2354

810

3897

39

4669LCS

LCI

Media

cele două loturi icircn ceea ce priveşte expresia PPARα la nivelul Mo circulante (t- Test P=

069)

Studiul receptorilor PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de AHC şi dislipidemie

Nivelul de expresie al receptorilor PPARα α icircn Mo tinde să fie mai scăzut la subiecţii

cu AHC de HTA comparativ subiecţii care nu au declarat AHC de HTA (P= 006 fig 515)

AHC HTA

Număr 22

Mediana 19950

Percentila 25 17800

Percentila 75 22700

AHC HTA absente

Număr 35

Mediana 24800

Percentila 25 19025

Percentila 75 31700

Figura 515 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Mo funcţie de AHC de HTA

Nu s-au calculat diferenţe semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor

PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de dislipidemie atunci cacircnd aceştia au fost comparaţi cu

subiecţii fără AHC de tulburări ale metabolismului lipidic (t- Test P= 020)

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn limfocite

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn populaţia de Ly a

demonstrat prezenţa receptorilor PPARα icircn Ly tuturor subiecţilor studiaţi Pentru toţi

participanţii investigaţi analiza MFI a Ac anti - PPARα icircn populaţia de Ly a relevat un

interval de variaţie icircntre [748 314] iar valoarea medie a MFI a fost de 18058 plusmn 5600

Pentru ambele loturi aplicarea testului Shapiro-Wilk a evidenţiat distribuţia normală a

valorilor determinate pentru nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Ly Pentru

pacienţii cu SM valoarea medie a MFI determinată pentru expresia PPARα icircn populaţia de

Ly a fost de 18178 plusmn 61 16 iar pentru lotul martor a fost de 16800 plusmn 5229

Tabel XXX Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn limfocite

Lot SM Lot Non-SM

N 26 31

Media 181781 179574

SD 611694 522907

Mediana 165000 168000

Minimum 81300 74800

Maximum 314000 301000

Percentila 25 13400 - 145750

Percentila 75 21800 21700

Distribuţia frecvenţei valorilor MFI a Ac anti-PPARα icircn Ly este redată icircn figura 518

Figura 518 Distribuţia frecvenţelor relative a MFI a Ac anti-PPARα icircn Ly

94 din determinările efectuate pentru determinarea nivelului de expresie relativă al

MFI

ant

iPPA

R

a_Mo

190

200

210

220

230

240

250

260

270

280

DA NU

AHC HTA

P=006

50 89 128 167 206 244 283 322 361 400

0

5

10

15

20

25

30

35

MFI anti-PPAR a

Frecv

enta

relati

va (

)

Lot SM

0 50 100 150 200 250 300 350

0

5

10

15

20

25

30

35

40

MFI anti-PPAR a

Frec

venta

relat

iva (

)

Lot Non-SM

receptorilor PPARα icircn limfocitele subiecţilor cu SM s-au icircncadrat icircn intervalul Media plusmn 2DS

Figura 5 19 Lot SM Variaţia expresiei

relative a PPARα icircn Ly

Număr pacienţi 26

Minimum 813

Maximum 31400

Media 18178

Deviaţia Standard 6116

25 valori s-au icircncadrat icircn Media plusmn 2DS

Pentru lotul Non-SM diagrama de control (figura 520) a arătat toate valorile

determinate pentru lotul Non-SM se icircncadrează icircntre LCS şi LCI

Figura 520 Lot Non -SM Variaţia

expresiei relative a PPARα icircn Ly

Număr pacienţi 31

Minimum 748

Maximum 30100

Media 179574

Deviaţia Standard 5229

96 din valori icircncadrate icircn Media plusmn 2DS

Aplicarea testului t-Student pentru valorile medii ale intensităţii de fluorescenţă ale

PPARα icircn Ly nu a arătat existenţa unei diferenţe statistic semnificative icircntre lotul cu SM şi

lotul martor(t- Test P= 088)

Analiza receptorilor PPARα icircn Ly subiecţilor cu AHC de HTA şi dislipidemie

Studiind populaţiile de Ly la subiecţii care au prezentat AHC de hipertensiune

arterială analiza flowcitometrică a relevat existenţa unor valori mai mici pentru MFI la aceşti

subiecţi comparativ cu cei fără AHC de HTA (fig 522) deşi scăderea observată nu a

icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică (t- Test P = 009)

AHC HTA

Număr 22

Mediana 16000

Percentila 25 12700

Percentila 75 17100

AHC HTA absenţe

Număr 35

Mediana 18700

Percentila 25 14900

Percentila 75 23175

Figura 522 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Ly funcţie de AHC de HTA

Nu am calculat diferenţe statistic semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor

PPARα icircn populaţiile de Ly ale subiecţilor la care am identificat AHC de dislipidemie

comparativ cu cei care nu au declarat antecedente familiale de dislipidemie (t- Test P= 051)

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn neutrofile (PMN)

Analiza flowcitometrică a evidenţiat prezenţa PPARα icircn PMN recoltate din sacircngele

venos al tuturor participanţilor la studiu Pentru toţi subiecţii investigaţi analiza MFI a Ac -

PPARα icircn populaţia de PMN a relevat un interval de variaţie de [163419] iar valoarea medie

a MFI pentru Ac anti-PPARα a fost de 26392 plusmn 7064 Testul Shapiro-Wilk a arătat o

distribuţie normală a valorilor intensităţii medii de fluorescenţă a anticorpilor anti-PPARα atacirct

icircn lotul pacienţilor cu SM cacirct şi icircn lotul martor

1 6 11 16 21 26 31

-50

0

50

100

150

200

250

300

350

400

MFI

anti-

PPAR

a

1818

595

3041

-17

3653

Media+2DS

Media- 2DS

1 6 11 16 21 26 31 36

0

50

100

150

200

250

300

350

MFI

ant

i-PPA

R

a

1796

750

2841

227

3364

Media+2DS

Media

Media- 2DS

MFI

anti-

PPAR

a Ly

130

140

150

160

170

180

190

200

210

DA NU

AHC HTA

P=009

Tabel XXXII Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn PMN

Lot SM Lot Non-SM

N 26 31

Media 26273 26480

SD 6915 7088

Mediana 25900 25500

Minimum 17200 16300

Maximum 39500 41900

Percentila 25 19800 19600

Percentila 75 30500 31500

Icircn cele două loturi distribuţia frecvenţei valorilor nivelului relativ de expresie a

receptorilor PPARα icircn PMN a fost reprezentată sub formă de histograme (fig 525)

Figura 525 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti-PPARα icircn PMN

Pentru cei 26 de pacienţi din lotul cu SM a valoarea medie a nivelului de expresie

relativă a receptorilor PPARα icircn PMN a fost de 26273 plusmn 6915 Studiind diagrama Shewhart

din figura 526 se observă că toate valorile obţinute pentru nivelul de expresie relativă

PPARα icircn PMN investigate se icircncadrează icircntre limitele definite de valorile medii plusmn 2DS

Figura 526 Lot SM

Variaţia expresiei relative a PPARα icircn

PMN

Număr pacienţi 26

Minimum 17200

Maximum 39500

Media 26273

Deviaţia Standard 6915

Valorile MFI icircncadrate icircn Media plusmn 2DS

Pentru lotul martor valoarea medie calculată a MFI a anticorpilor anti-PPARα a fost de

26480 plusmn 7088 peste 95 din valorile MFI fiind cuprinse icircn Media plusmn 2DS (figura 527)

Figura 527 Lot Non-SM Variaţia expresiei

relative a PPARα icircn PMN

Număr pacienţi 31

Minimum 16300

Maximum 41900

Media 26480

Deviaţia Standard 7088

30 valoriicircn Media plusmn 2DS

Pentru PMN analiza statistica nu a arătat existenţa unei diferenţe statistic semnificative icircntre

nivelul de expresie relativă a PPARα la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii din lotul

Non-SM (t- Test P= 090) Studiind populaţiile de PMN la subiecţii care au prezentat AHC

de HTA nu am calculat o diferenţă statistic semnificativă icircntre expresia receptorilor PPARα

la subiecţii cu istoric familial de hipertensiune arterială comparativ cu cei pentru care nu s-au

notat AHC de HTA (t- Test P= 013)De asemenea am identificat diferenţe icircntre nivelul de

expresie al PPARα icircn PMN subiecţilor care prezentau AHC de dislipidemie comparativ cu

cei fără AHC de dislipidemie (t- Test P= 017)

50 100 150 200 250 300 350 400 450 500

0

5

10

15

20

25

30

35

MFI anti-PPAR a

Frecve

nta rel

ativa (

)

Lot SM

50 100 150 200 250 300 350 400 450 500

0

5

10

15

20

25

30

MFI anti-PPAR a

Frecv

enta

relati

va (

)

Lot Non-SM

1 6 11 16 21 26 31

0

50

100

150

200

250

300

350

400

450

500

MFI

anti-

PPA

R

a

2627

1244

4010

553

4702

Media + 2DS

Media - 2 DS

Media

1 6 11 16 21 26 31 36

0

50

100

150

200

250

300

350

400

450

500

MFI

anti-

PPAR

a

2648

1230

4066

522

4774

Media+ 2DS

Media - 2DS

Media

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile Tabel XXXIV Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn Eo

Lot SM Lot Non-SM

N 26 31

Mediaplusmn SD 141057 plusmn 47604 172209 plusmn 37565

Mediana 142450 171300

Minimum 35000 68500

Maximum 233700 250600

Percentila 25 119300 153225

Percentila 75 169700 199550

Am studiat nivelul relativ de expresie a receptorilor PPARα icircn Eo iar rezultatele au

fost figurate sub forma de histograme (figura 532)

Figura 532 Distribuţia frecventelor relative ale valorilor MFI anti- PPARα icircn Eo

Din diagrama Shewhart (figura 533) se observă că toate valorile determinate pentru

nivelul de expresie relativă a PPARα icircn Eo pentru lotul SM s-au icircncadrat icircn [Media plusmn 3 DS]

peste 90 din determinări fiind cuprinse icircn [Media plusmn 2 DS] iar icircn [Media plusmn 1 DS] sunt

incluse peste 65 din valorile MFI

Figura 533 Lot SM

Variaţia expresiei relative a PPARα icircn Eo

Număr pacienţi 26

Minimum 35000

Maximum 233700

Media 141057

Deviaţia Standard 47604

24 valori icircncadrat eicircn [Media plusmn 2DS]

Pentru subiecţii incluşi icircn lotul martor analiza diagramei (figura 534) a arătat că

toate cele 31 de valori ale MFI pentru PPARα icircn Eo se icircncadrează icircn [Media plusmn 3DS] iar 30

dintre acestea se icircncadrează icircn [ Media plusmn 2 DS]

Figura 534 Lot Non -SM

Variaţia expresiei relative a PPARα icircn Eo

Număr pacienţi 31

Minimum 685

Maximum 2506

Media 172209

Deviaţia Standard 375 65

30 valori icircncadrate icircn [Media plusmn 2DS]

Comparacircnd subiecţii cu SM cu cei din lotul martor am observat o scădere

semnificativă statistic a MFI a Ac anti - PPARα icircn Eo pentru pacienţiir cu SM ( figura 535)

PPARα Eo Lot Non-SM

Număr 31

Mediana 171300

Percentila 25 152325

Percentila 75 199550

PPARα Eo Lot SM

Număr 26

Mediana 142450

Percentila 25 119300

Percentila 75 169700

Figura 5 35 Comparaţie icircntre nivelul de expresie a PPARα icircn Eo

0 500 1000 1500 2000 2500 3000

0

10

20

30

40

50

MFI anti-PPAR a

Frecvent

a relativa

()

Lot SM

400 800 1200 1600 2000 2400 2800

0

5

10

15

20

25

30

35

40

45

MFI anti-PPAR a

Frecenta

relativa

()

Lot Non-SM

1 6 11 16 21 26 31

-500

0

500

1000

1500

2000

2500

3000

MFI a

nti-PP

AR

a

14106

4765

23447

94

28117

Media + 2DS

Media- 2DS

LCI

LCS

1 6 11 16 21 26 31 36

500

1000

1500

2000

2500

3000

MFI an

ti-PPA

R a

17221

9708

24734

5951

28490

LCI

Media-2DS

Media

Media +2 DS

LCS

1200

1300

1400

1500

1600

1700

1800

1900

Lot SM Lot Non-SM

P=00072

Cu ajutorul curbei ROC am evaluat posibilitatea utilizării MFI a Ac anti - PPARα icircn

Eo ca marker pentru diagnosticul SM Valoarea MFI a Ac anti - PPARα icircn Eo care prezice cu

cea mai mare acurateţe prezenţa SM a fost de 1533 (punctul de ldquocut-offrdquo) pentru care am

calculat o sensibilitate de 5652 şi o specificitate de 7778 Calculul ariei AUC a furnizat

valoarea de 0663 şi deci determinarea parametrului MFI anti- PPARα icircn Eo are valoarea

unui test cu acurateţe redusatilde icircn diagnosticul SM Studiind expresia PPARα icircn Eo la subiecţii

care au prezentat AHC de HTA am observat o scădere semnificativă statistic (P = 00023) a

expresiei PPARα la subiecţii cu istoric familial de HTA comparativ cu subiecţii fatilderatilde AHC de

HTA (figura 537)

AHC HTA

Număr 22

Mediana 148800

Percentila 25 116425

Percentila 75 170750

AHC HTA absente

Număr 35

Mediana 170850

Percentila 25 143700

Percentila 75 195000

Figura 537 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Eo funcţie de AHC de HTA

Studiind subiecţii cu AHC declarate de dislipidemie nu am identificat diferenţe icircntre

nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Eo subiecţilor cu AHC de dislipidemie

comparativ cu cei care nu au declarat prezenţa AHC de dislipidemie (t - Test P = 067)

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor CD36

Am studiat expresia receptorilor CD36 icircn Mo subiecţilor incluşi icircn studiu

Lot Non - SM

BLot SM

Figura 539 Analiza flowcitometrica pentru receptorii CD36 icircn Mo

Pentru toţi participanţii la studiu valorile MFI au variat icircn intervalul [817 6933] iar

valoarea medie a MFI a Ac anti-CD36 a fost de 397133 plusmn 120902 Tabel XXXVII Statistică descriptivă pentru a CD36 icircn Mo

Lot SM Lot Non-SM

Media 429034 370377

Deviatia Standard 109051 125514

Mediana 411000 362800

Minimum 266400 81700

Maximum 693300 616800

Percentila 25 346200 273750

Percentila 75 469000 453300

Distribuţia frecvenţelor relative a MFI au fost prezentate sub formă histogramelor

Figura 541 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti - CD36 icircn Mo

MFI

ant

i-PPA

R a Eo

1000

1100

1200

1300

1400

1500

1600

1700

1800

1900

DA NU

AHC HTA

P=00023

1000 2000 3000 4000 5000 6000 7000 8000

0

5

10

15

20

25

MFI anti-CD36

Frecve

nta rela

tiva (

)

Lot SM

0 1778 3556 5333 7111

0

5

10

15

20

25

30

35

MFI anti-CD36

Frecve

nta rel

ativa (

)

Lot Non - SM

Referitor la lotul SM 92 din valorile MFI a Ac anti- CD36 s-au icircncadrat icircn

intervalul Media plusmn 2 DS (figura 542) iar pentru lotul martor peste 90 dintre acestea icircn

Media plusmn 2 DS (figura 543)

Figura 542 Lot SM

Variaţia MFI anti-CD36 icircn Mo

Număr pacienţi 26

Minimum 2664

Maximum 6933

Media 429034

Deviaţia Standard 109051

Figura 543 Lot Non -SM

Variaţia MFI anti- CD36 icircn Mo

Număr 31

Minimum 81700

Maximum 616800

Media 370377

Deviaţia Standard 125514

Comparacircnd subiecţii cu SM cu cei din lotul normal am constatat o tendinţă de creştere

a expresiei CD36 icircn lotul cu SM((t - Test P= 0067)

MFI anti - CD36 Lot Non-SM

Număr 31

Mediana 3628

Percentila 25 2737

Percentila 75 4533

MFI anti - CD36 Lot SM

Număr 26

Mediana 4110

Percentila 25 3462

Percentila 75 4690

Figura 544 Comparaţie icircntre cel două loturi privind MFI anti - CD36 icircn Mo

Referindu-ne la subiecţii cu AHC de HTA am observat o tendinţă de creştere a

valorilor MFI anti-CD36 comparativ cu cei care nu au avut AHC de HTA (t - Test P = 0 08)

AHC HTA

Număr 22

Mediana 442800

Percentila 25 355275

Percentila 75 519475

AHC HTA absenţe

Număr 35

Mediana 377400

Percentila 25 316900

Percentila 75 443400

Figura 545 Comparaţie icircntre expresia CD36 icircn Mo funcţie de AHC de HTA

Nu s-au calculat diferenţe semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor

PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de dislipidemie atunci cacircnd aceştia au fost comparaţi cu

subiecţii fără AHC de dislipidemie (t - Test P=031)

Corelaţii icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα si CD36

Studiind valorile intensităţii medii de fluorescenţă a Ac anti-PPARα icircn Mo Ly şi

PMN am observat că nivelul de expresie celularatilde a PPARα icircn Mo Ly şi PMN sunt corelate

puternic pozitiv atacirct icircn lotul SM cacirct şi icircn lotul martor(fig547 548)

1 6 11 16 21 26 31

0

1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

8000

Pacienti

MFI a

nti-CD

36

42903

21093

64714

10188

75619

LCI

Media

LCS1 6 11 16 21 26 31 36

-1000

0

1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

8000

MFI a

nti- C

D36

37038

11935

62141

-616

74692Media + 2 DS

Media

Media - 2 DS

3200

3400

3600

3800

4000

4200

4400

4600

4800

Lot SM Lot Non-SM

P = 00676

MFI

anti-

CD36

3400

3600

3800

4000

4200

4400

4600

4800

5000

DA NU

AHC HTA

P = 008

Figura 547 Studiul relatiilor dintre

receptorii PPARα icircn SM A Mo vs PMN B Mo vs Ly

C PMN vs Ly Graficul ilustrează coeficienţii r P dreapta de

regresie (linia centrala) intervalul de icircncredere

95 şi intervalul de predicţie 95

Figura 548 Corelaţii icircntre receptorii PPARα icircn lotul

martor

A Mo vs PMN

B Mo vs Ly

C PMN vs Ly

Tot pentru lotul SM cacircnd am evaluat relaţia dintre nivelul de expresie relativă a

receptorilor PPARα icircn Eo şi nivelul de expresie relativa a receptorilor CD 36 am obţinut o

corelaţie negativă (r = - 05 P = 001) (fig 549 A)

50 100 150 200 250 300 350 50

100

150

200

250

300

350

400

450

500

PPARα Ly

PPARα PMN

y = 56641 + 1159 x r = 086 P lt 0001

C

50 100 150 200 250 300 350 400 0

50

100

150

200

250

300

350

PPARα Mo

PPARα Ly

y = 36665 + 0607 x r = 090 P lt 0001

B

150 200 250 300 350 400 450 0

50 100 150 200 250 300 350 400 450 500

PPARα PMN

PPARα Mo

y = 2505 + 0879 x r = 081 P lt 0001

A

50 100 150 200 250 300 350

50 100 150 200 250 300 350 400 450 500

PPARα Ly

PPARα PMN

y = 95668 + 0919 x r = 081 P lt 0001

C

100 150 200 250 300 350 400

0

50

100

150

200

250

300

350

400

PPARα Mo

PPARα Ly

y = -7503 + 0829 x r = 079 P lt 0001

B

100 150 200 250 300 350 400

50

100

150

200

250

300

350

400

450

500

PPARα Mo

PPARα PMN

y = 61384 + 0882 r = 074 P lt 0001

A

Figura 549 Corelaţii icircntre expresia PPARα icircn Eo şi alte tipuri de receptori investigaţi A PPARα Eo şi CD 36 (Lot SM) B PPARα Eo şi PPARα Mo( Lot Non-SM)

Icircn lotul martor am identificat o asociere moderată pozitivă (r = 038 P = 0033) icircntre

nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Eo şi Mo (figura 549B) corelaţie absentă icircn

lotul pacienţilor cu SM

Corelaţii dintre receptorii studiaţi şi componentele sindromului metabolic

Icircn lotul de control analiza statistică a relevat faptul că icircntre circumferinţa

abdominală (CA ) şi nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Mo Ly şi PMN există o

corelaţie inversă adică scăderea expresiei PPARα la nivelul acestor populatii celulare ar fi

icircnsoţită de creşterea CA (figura 550

Figura 550Corelaţii dintre receptorii

PPARα si CA A Mo B Ly C PMN

La pacienţii cu SM am notat o corelatie moderată negativă statistic semnificativă

icircntre TG şi valorile MFI a Ac anti- PPARα icircn Mo şi Ly( fig 551)

150 200 250 300 350 400 450 50

60

70

80

90

100

110

PPARα PMN

CA r = - 040 P = 0024

C

50 100 150 200 250 300 350 50

60

70

80

90

100

110

PPARα Ly

CA r = - 046 P = 0009

B

50 100 150 200 250 300 350 400 50

60

70

80

90

100

110

PPARα Mo

CA r = - 042 P = 0017

A

50 100 150 200 250 300 350 400 500

1000

1500

2000

2500

3000

PPARα Mo

PPARα Eo

r = 038 P = 0033

B

0 500 1000 1500 2000 2500 1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

8000

PPARα Eo

CD36

r = 050 P = 0010

A

Figura 551 Lot SM Corelaţie icircntre expresia PPARα şi TG (A Mo B Ly)

Analizand corelatia dintre receptorii CD36 si valorile TA la pacientii cu SM am observat

o asociere pozitivă asteptată intre TAD si nivelul de expresie al receptorilor CD36 (fig 552)

Figura 552 Lot SM Corelaţii icircntre expresia

receptorilor CD36 şi valorile tensiunii arteriale

diastolice

Studiind corelaţiile dintre receptorii PPARα şi HDL-col la subiecţii din lotul martor am

notat o asociere pozitivă icircntre expresia PPARα icircn Mo şi Ly cu HDL-col (fig 553)

Figura 553 Lot martor Corelaţii icircntre HDL-col şi expresia PPARα icircn Mo(A) Ly(B)

Icircn lotul normal am evidenţiat corelaţii pozitive moderate dar semnificative statistic icircntre

CA şi valorile TAS (r = 062 P lt 0001) respectiv TAD (r = 050 P=0004) precum şi icircntre

CA şi glicemia subiecţilor normali (r = 052 P = 0003) Aceste date icircmpreună cu relaţia

invers proporţională identificată icircntre HDL-col şi CA (r = 050 P = 001) susţin validitatea

acestui studiu Icircn lotul subiecţilor cu SM am observat o corelaţie moderat pozitivă icircntre

expresia PPARα icircn populaţiiile de Mo şi Eo şi concentraţia a HDL-col (fig 554)

B

100 150 200 250 300 350 20

30

40

50

60

70

80

90

100

PPARα Ly

HDL-col-(mgdl)

r = 036 P = 0046

A

150 200 250 300 350 400 20

30

40

50

60

70

80

90

100

PPARα Mo

HDL-col-(mgd)l

r = 035 P = 005

70 75 80 85 90 95 100 1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

8000

TAD (mmHg)

CD36

r = 048 P = 0013

B

50 100 150 200 250 300 350 -100

0

100

200

300

400

500

PPARα Ly

TG(mgdl)

r = - 042 P = 003

A

50 100 150 200 250 300 350 400 -100

0

100

200

300

400

500

PPARα Mo

TG ( mgdl) r =- 0 43 P = 0027

Figura 554 Corelaţii icircn SM icircntre HDL-col şi expresia PPARα icircn Mo (A) şi Eo(B)

Corelaţii icircntre nivelul de expresie relativă a PPARα şi markeri ai disfuncţiei

endoteliale şi inflamaţiei cronice

Deşi nu a icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică am reţinut corelaţia invers

proporţională (r = - 0331 P = 006) dintre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα

icircn PMN şi concentraţia serică a Non-HDL-colesterolului

Studiind relaţiile dintre parametri icircn lotul de pacienţi cu SM am observat o corelaţie

moderată invers proporţională icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Eo şi

acidul uric seric (figura 555 A) corelaţie absentă la subiecţii fără SM

Figura 555 Lot SM corelaţia dintre expresia PPARα icircn Eo şi acidul uric (A) respectiv

PPARα şi fibrinogen (B)

Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P=008) am notat pentru

pacienţii cu SM corelaţia invers proporţională dintre expresia PPARα icircn Eo şi concentraţia

serică a fibrinogenului ( figura 555B)

V5 Discuţii

Icircn cadrul lucrării de doctorat am studiat nivelul de expresie relativă a PPARα icircn

leucocitele pacienţilor cu SM comparativ cu cea a subiecţilor normali Expresia PPARα a fost

studiată icircn paralel cu cea a CD36 glicoproteină exprimată pe suprafaţa a numeroase celule

din organismul uman inclusiv pe cea a Mo şi macrofagelor Prin funcţia sa de receptor pentru

particulele oxidate de LDL CD36 cunoscut ca bdquoscavenger receptorrdquo de clasa B sau

bdquotrombospodin receptorrdquo contribuie la dezvoltarea inflamaţiei de la nivel endotelial şi

formarea plăcii de ateroscleroză Referitor la studiul PPARα icircn Eo icircn sindromul metabolic

menţionăm că studiul nostru este primul care arată că nivelul de expresie a proteinei PPARα

icircn Eo măsurat prin citometrie icircn flux este semnificativ mai redus la pacienţii care sunt

diagnosticaţi cu acest sindrom De asemenea icircn lotul cu SM cercetat icircn cadrul studiului

receptorilor PPARα numărul Eo circulante a fost semnificativ mai crescut la pacienţii cu SM

B

0 500 1000 1500 2000 2500 200

250

300

350

400

450

PPARα Eo o

Fibrinogen mgdl

r =- 036 P = 008

0 500 1000 1500 2000 2500 1 2 3 4 5 6 7 8 9

10 11

PPARα Eo_

Acid uric(mgdl) r = 048 P = 0014 A

0 500 1000 1500 2000 2500 10

20

30

40

50

60

70

80

PPARα Eo

HDL(mgdl)

r = 044 P = 0024

B

100 150 200 250 300 350 400 10

20

30

40

50

60

70

80

PPARα Mo

HDL( mgdl)

r = 046 P = 0019

A

(P = 003) Aceste constatări conduc la ipoteza că Eo joacă un rol special icircn mecanismele

patogenice declanşate icircn sindromul metabolic şi că receptorii PPARα sunt importanţi icircn

implicarea Eo icircn obezitate şi insulinorezistenţă Creşterea numărului de Eo circulante este

urmată de eliberarea mediatorilor proinflamatori iar reducerea expresiei PPARα icircn Eo

determină perturbarea mecanismelor de control al inflamaţiei cu exacerbarea cascadei

proinflamatorii Consecutiv se agravează disfuncţia endotelială şi se accelerează progresia

leziunilor de ateroscleroză Extrapolacircnd aceste ipoteze putem spune că asocierea raportată

dintre boala ischemică coronariană şi Eo poate fi şi consecinţa exacerbării cascadei

proinflamatorii de la nivel vascular produsă datorită scăderii expresiei PPARα icircn Eo iar

creşterea numărului de Eo circulante poate reprezenta o adaptare a organismului uman care

icircncearcă să suplinească deficitul de receptori PPARα Analizacircnd curba ROC pentru

intensităţile medii de fluorescenţă determinate pentru anticorpii anti- PPARα icircn Eo am

obţinut pentru acest biomarker o sensibilitate a testului de 565 şi o specificitate de 778

pentru un punct de cut-off de 1533 ( figura 536 ) Deşi aria AUC (Aria under the curve) egală

cu 0663 icircncadrează acest test ca avacircnd o acurateţe redusă observăm că că această valoare

este apropiată de determinările AUC pentru alţi factori (fibrinogen raport de aterogenitate

acid uric non- HDL-colesterol) cunoscuţi ca fiind implicaţi icircn aterogeneză şi inflamaţia

cronică (figura 431) Aceste remarci alături de faptul că icircn studiul receptorilor PPARα icircn

leucocite am inclus subiecţi la primul diagnostic de SM creează premisa integrării

determinării expresiei relative a receptorilor PPARα icircn diagnosticul complex al sindromului

metabolic Putem spune că icircn final studiul expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofilele

circulante se dovedește a fi util icircn diagnosticul precoce la nivel molecular al SM permiţacircnd

identificarea timpurie a unor indivizi cu risc cardiometabolic crescut Astfel intervenţia

precoce asupra subiecţilor cu deficit de PPARα icircn Eo contribuie la managementul eficient al

afecţiunilor degenerative icircn care inflamaţia cronică icircndeplineşte un rol primordial Referitor

la populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările efectuate prin citometrie de flux nu au

arătat existenţa unor diferenţe statistice icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα

la subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali Rezultatele noastre pot fi

consecinţa caracteristicilor loturilor studiate (icircn studiul nostru au fost incluşi subiecţi recrutaţi

la primul diagnostic de SM şi icircn absenţa stimulării receptorilor PPARα cu droguri agoniste

PPARα) dar icircn acelaşi timp pot apare diferenţe datorită metodei utilizate (231 232 233)

Făcacircnd o paralelă cu un studiu publicat icircn 2013 icircn Europa (231) care a arătat creşterea

nivelului de expresie al PPARα icircn Ly şi Mo observăm că deşi numărul de subiecţi a fost

aproximativ egal (57 participanţi icircn studiul nostru 60 icircn studiul DAmore) subiecţii icircn studiul

amintit au fost recrutaţi dintr-o clinică cu profil medical la primul diagnostic de SM icircn timp

ce metoda utilizată a fost PCR (Polymerase Chain Reaction) mult mai fidelă decacirct citometria

icircn flux icircn studiul receptorilor nucleari De asemenea DAmore nu investighează expresia

PPARα icircn Eo şi PMN icircn cercetare fiind incluse doar celulele CD14+ (predominant Mo) şi

CD14- (predominant Ly) Deşi nu am obţinut diferenţe statistic semnificative icircntre cele două

loturi referitoare la nivelul de expresie relativă a PPARα icircn Mo Ly şi PMN am observat

corelaţii puternice semnificative statistic icircntre expresia receptorilor PPARα icircn aceste tipuri

celulare Rezultatele obţinute sugerează existenţa unui mecanism diferit molecular de control

icircn eozinofile care reglează cantitatea de proteină PPARα icircn eozinofile versus alte tipuri de

leucocite (la pacienţii cu SM) şi acest lucru este icircn concordanţă cu cercetările care descriu

expresia PPARα mRNA icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale

bronşice keratinocite) Studiind prin citometrie de flux nivelul de expresie relativă a

receptorului CD36 la nivelul Mo am arătat prezenţa acestuia icircn Mo tuturor subiecţilor

investigaţi Analizacircnd valorile intensităţii medii de fluorescenţă a CD36 icircn loturile studiate

am observat o tendinţă de creştere la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali

confirmacircnd implicarea receptorului CD36 icircn patogeneza acestuia Referitor la expresia

receptorului CD36 rezultatele obţinute sunt icircn consens cu studii anterioare care au arătat

creşterea expresiei CD36 la pacienţii cu SM şi diabet zaharat Astfel pe lacircngă diferenţa icircn

expresia CD36 s-au raportat şi corelaţii inverse icircntre expresia proteinei CD36 şi nivelul

adiponectinei Acelaşi studiu a evidenţiat o corelaţie pozitivă intre expresia CD36 cu expresia

receptorilor PPAR gamma relaţia cu PPARα nefiind investigată

Analiza de subgrup a relaţiilor dintre componentele SM și elementele moleculare

proinflamatorii studiate a relevat prezenţa unor asocieri semnificativ statistice icircntre acestea

Se argumentează astfel că veridicitatea studiului este susţinută de interdependenţele statistice

ale componentelor SM Determinarea coeficientului de corelaţie Icircn studiul nostru nivelul de

expresie relativă a PPARα s-a corelat moderat negativ (figura 550) cu CA a subiecţilor din

lotul normal pentru populaţiile celulare de Mo (r = - 0420 P = 001) Ly (r = - 046 P =

0009) şi PMN (r = - 040 P = 0024) date care sunt icircn concordanţă cu studiile care arată

rolul PPARα icircn furnizarea energiei prin beta-oxidarea acizilor graşi Icircn acelaşi timp icircn lotul

pacienţilor cu SM nu am identificat prezenţa unei asocieri icircntre nivelul de expresie relativă a

PPARα şi valoarea măsurată a CA Asocierea dintre expresia relativă a PPARα cu obezitatea

de tip central completează datele existente referitoare la reglarea homeostaziei energetice

conturacircnd un mecanism de control deficitar al aportului caloric al SM Icircn condiţiile icircn care

rezultatele obţinute prin metoda citometriei icircn flux nu au arătat existenţa unei corelaţii intre

expresia PPARα şi CA la pacienţii cu SM considerăm că ar fi necesar studiul

polimorfismului genei PPARA care ar putea aduce informaţii importante cu privire la

implicarea acestor receptori icircn apariţia obezităţii de tip central Subliniem acest lucru deoarece

obezitatea este o boală plurifactorială icircn care pe lacircngă factorii ereditari sunt implicaţi factori

de mediu psihologici şi sociali (245) Existenţa unei componente genetice a aterosclerozei

este legată şi de prezenţa unor variante ale genei PPARA asociate cu creşterea incidenţei bolii

cardiovasculare (82) şi a SM (249) Icircn studiul nostru am constatat o scădere statistic

semnificativă a nivelului expresiei relative a receptorilor PPARα icircn Eo la subiecţii cu

antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială comparativ cu subiecţii fără istoric

familial de hipertensiune (figura 537) Deşi diferenţele calculate icircntre loturile studiate nu au

icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică la subiecţii care au declarat prezenţa

antecedentelor familiale de hipertensiune arterială remarcăm o tendinţă de scădere a

intensităţii medii de fluorescenţă pentru Ac anti-PPARα la nivelul Mo (figura 515 P = 006

) icircn timp ce expresia relativă a CD36 icircnregistrează o creştere la acesti subiecţi (figura 545 P

= 008) Icircn contextul riscului cardiovascular foarte icircnalt al pacienţilor cu SM amintim şi

existenţa corelaţiei pozitive dintre valorile tensiunii arteriale diastolice şi expresia relativă a

receptorului CD36 (r = 0483 P = 0013) Această constatare este icircn consens cu studiile care

au arătat că forma solubilă circulantă a CD36 este asociată cu factorii de risc cardiovasculari

fiind propusă ca un marker precoce al aterosclerozei Activarea PPARα este asociată cu

modularea metabolismului lipidic iar agoniştii PPARα sunt utilizaţi icircn mod curent pentru

tratamentul dislipidemiei Sub acţiunea agoniştilor PPARα se obţine o icircmbunătăţire a funcţiei

endoteliale şi a parametrilor reologici funcţiile pleiotropice ale agoniştilor PPARα fiind

dovedite icircn trialuri clinice controlate Icircn populaţiile de Mo şi Ly la pacienţii cu SM

cercetarea noastră a evidenţiat o asociere negativă icircntre nivelul de expresie relativă a

receptorilor PPARα şi concentraţia TG serice (figura 551) Astfel scăderea expresiei

receptorilor PPARα este asociată cu creşterea nivelului TG serice contribuind la profilul

lipidic aterogen din SM Icircn conformitate cu literatura de specialitate icircn studiul efectuat prin

metoda citometriei icircn flux am găsit prezenţa asocierii icircntre nivelul de expresie al PPARα şi

HDL-colesterol Corelaţia pozitivă dintre nivelul de expresie relativă PPARα şi concentraţia

HDL-colesterolului a fost observată icircn lotul martor icircn populaţiile de Mo (r = 035 P = 005)

şi Ly ( r = 036 P = 004) (figura 553) susţinacircnd faptul că stimularea receptorilor PPARα

este legată de creşterea nivelului seric al lipoproteinelor cu densitate crescută La pacienţii cu

SM corelaţia dintre expresia PPARα şi HDL-colesterol a fost evidenţiată icircn populaţiile de Mo

(r = 046 P = 0019) şi eozinofile (r = 044 P = 0024) Se desprinde concluzia că icircn

sindromul metabolic scăderea concentraţiei HDL-colesterol este legată de diminuarea

nivelului de expresie relativă a receptorilor nucleari PPARα icircntărind afirmaţiile legate de

rolul acestor receptori icircn progresia bolilor cardiovasculare Studiind reactanţii de fază acută

analiza statistică a relevat o diferenţă semnificativă din punct de vedere statistic icircntre valorile

fibrinogenului la pacienţii cu SM atunci cacircnd au fost comparaţi cu subiecţii fără SM

(Capitolul IV4 P lt0 001 figura 427A) De asemenea icircn Capitolul V dedicat studiul

expresiei relative a receptorilor PPARα studiul valorilor fibrinogenului a arătat creşterea

acestui reactant de faza acută icircn lotul cu SM comparativ cu lotul martor (P lt0 0001) Icircn

studiul nostru am calculat o corelaţie invers proporţionala (r = - -036 fig 555B) icircntre

nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile şi concentraţia serică a

fibrinogenului Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P = 008) am reţinut

această asociere deoarece am demonstrat că nivelul de expresie relativă al receptorilor

PPARα icircn eozinofile este mai scăzut icircn sindromul metabolic iar sindromul metabolic este

caracterizat printr-un status inflamator cronic status caracterizat şi de creşterea concentraţiei

serice a fibrinogenului De asemenea notam ca această corelaţie negativă se află icircn

concordanţă cu studiile care arata că tratamentul cu agonişti PPARα (fibraţi) determina

scăderea nivelului seric al fibrinogenului contribuind la diminuarea inflamaţiei cronice din

sindromul metabolic şi icircn consecinţă amelioracircnd insulinorezistenţa

LIMITE ȘI DIFICULTĂȚI IcircN CERCETARE

Icircn cadrul Tezei de Doctorat am desfăşurat o cercetare care şi-a propus studierea

expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Recrutarea anamneza şi examinarea

clinică a subiecţilor au fost realizate icircn cadrul Cabinetului de Medicină de Familie CMI Popa

Elena din Iaşi iar determinările hematologice şi biochimice s-au efectuat icircn cadrul

Laboratorului Ambulatorului de Specialitate al Spitalului Universitar ldquoSfacircntul Spiridon din

Iaşi Icircn studiul epidemiologic şi al markerilor inflamatori al sindromului metabolic desfăşurat

au fost incluşi un număr de 1530 de participanţi pe baza liberului consimţămacircnt examinaţi icircn

perioada 01012013 - 31122013 Icircn continuare icircn perioada 1012014 - 28022014 pe baza

criteriilor de includere şi excludere icircn cele două loturi de studiu am investigat un număr de 57

de subiecţi prezentaţi la consultaţie icircn această perioadă şi care au icircndeplinit criteriile de

includere icircn cele două loturi (Lot SM şi Lot Control) constituite pentru evaluarea nivelului de

expresie a receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Explorarea nivelului de expresie

relativă a receptorilor PPARα s-a desfăşurat icircn cadrul Laboratorului de Biologie Moleculară

de pe platforma Institutului Regional de Oncologie Datorită resurselor proprii financiare

limitate trebuie să subliniez că aceasta cercetare nu ar fi fost posibilă fără contribuţia unor

cercetători din domeniul medical care m-au sprijinit necondiţionat atacirct icircn elaborarea

protocolului de lucru cacirct şi icircn efectuarea propriu-zisă a studiului Icircn acest sens menţionăm şi

faptul că pentru studiul receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic am utilizat aparatura

Laboratorului de Biologie Moleculară (care deserveşte icircntreaga Regiune a Moldovei) Pe

această cale mulţumesc personalului Laboratorului de Biologie Moleculară pentru ajutorul

acordat icircn desfăşurarea cercetării doctorale icircn condiţiile icircn care se observa creşterea

numărului de pacienţi care se adresează acestei platforme de cercetare Mulţumesc de

asemenea şi Doamnei Doctor Elena Butoi din cadrul Institutului de Biologie şi Patologie

Moleculară ldquoNicolae Simionescurdquo Bucureşti) pentru donaţia anticorpului secundar anti-

FITC Icircn consecinţă pentru recrutarea unui număr mai mare de participanţi ar fi fost necesară

icircn primul racircnd obţinerea unor resurse financiare suplimentare pentru achiziţia de aparatură şi

reactivi Totuşi numărul subiecţilor recrutaţi este apropiat de numărul subiecţilor raportaţi icircn

cadrul unor granturi de cercetare care aveau ca ţinta studiul expresiei receptorilor PPARα

(212 227 228 231) Rezultatele obţinute continua seria lucrărilor care arata importanta

studiului mecanismelor etiopatogenice ale sindromului metabolic patologie care se afla icircntr-o

continuă creştere La pacienţii cu SM pe lacircngă diminuarea nivelului de expresie a receptorilor

PPARα icircn eozinofile ne aşteptam şi la evidenţierea unor modificări icircn expresia PPARα şi icircn

populaţiile de Ly Mo şi PMN Acest fapt poate fi explicat de utilizarea unor celule provenite

de la pacienţi fără afectare cardiovasculară fără diabet zaharat şi necesită continuarea

studiului pe culturi celulare icircn condiţii de stimulare cu agonişti PPARα deziderat care

impune continuarea investigării expresiei PPARα printr-un grant de cercetare

ORIGINALITATEA ȘI CONTRIBUȚIILE INOVATIVE ALE TEZEI DE

DOCTORAT PERSPECTIVE DE CERCETARE

Evaluarea nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn leucocitele circulante

aduce noi perspective icircn studiul obezităţii şi sindromului metabolic Importanta studiului

expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic derivă din prevalenta crescută a

sindromului metabolic icircn populaţia cercetată la care se adaugă riscul cardiovascular foarte

icircnalt al acestor pacienţi cu implicaţii majore icircn sănătatea publică Rolul receptorilor PPARα

icircn inflamaţie şi aterogeneza este binecunoscut dar studiul nostru este primul care a arătat că

nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα este semnificativ mai scăzut in populatiile

de eozinofile la pacienţii cu SM Această concluzie coroborata cu existenţa unei stracircnse

asocieri intre expresia receptorilor PPARα la nivelul Mo limfocitelor şi PMNlor creeaza

ipoteza existenţei unui mecanism de control diferit al expresiei PPARα la nivelul

eozinofilelor Această cercetare aduce informaţii importante referitoare la mecanismele

proinflamatorii care stau la baza insulinorezistenţei şi riscului cardiometabolic şi impune

continuarea studiului acestor receptori nucleari prin citometrie icircn flux metodă care poate fi

aplicată şi la scara mai largă dacă sunt asigurate resursele materiale necesare cercetării

Cercetarea prin citometrie icircn flux poate fi completată de studiul polimorfismului genei

PPARA şi astfel se pot identifica timpuriu indivizii cu potenţial risc cardiometabolic crescut

Studiul receptorilor PPARα a stabilit conexiuni cu factori proinflamatori şi aterogenetici iar

continuarea cercetării poate aduce şi elemente noi de diagnostic precoce icircn sindromul

metabolic contribuind la icircmbunătăţirea prognosticului acestor pacienţi

CONCLUZII FINALE

1 Aplicarea scorului de SM alături de implementarea algoritmului electronic de diagnostic

contribuie la o prelucrare rapidă eficientă și standardizată a informaţiilor la nivelul

medicinei primare

2 Prevalenţa SM calculată astfel icircn cadrul studiului este crescută (2732) icircn concordanţă

cu datele raportate

3 Controlul factorilor de risc cardiometabolici incluşi icircn SM se poate realiza prin

managementul stilului de viaţă (scăderea greutăţii corporale prin combaterea

sedentarismului şi adoptarea unei diete antiaterogene şi hipocalorice) şi administrarea

terapiei medicamentoase

4 Este necesară adoptarea unei politici de sănătate publică pentru prevenirea creşterii icircn

populaţie a prevalenţei obezităţii şi a diabetului zaharat

5 Noi metode de cercetare icircn domeniul SM axate pe diagnosticarea precoce şi cuantificarea

eficientă a acestuia duce la diminuarea incidenței evenimentelor cardiovasculare majore

6 Sindromul metabolic se caracterizează printr-un status inflamator cronic

7 Valorile Non-HDL-colesterolului şi a raportului de aterogenitate sunt semnificativ mai

mari la pacienţii cu SM

8 Dintre reactanţii de faza acută am observat că valoarea medie a fibrinogenului este mai

crescută icircn lotul cu SM

9 Valorile eozinofilelor sunt crescute icircn sindromul metabolic iar explorarea relaţiei dintre

eozinofile şi obezitate constituie una din direcţiile de studiu actuale ale sindromului

metabolic

10 Evaluarea markerilor inflamatori icircn contextul sindromului metabolic este utilă icircn

evaluarea complexă a a factorilor de risc cardiometabolici

11 Prin metoda citometriei icircn flux am demonstrat prezenta Receptorilor Activaţi de

Inductorii Proliferării Peroxizomilor ndash Alpha (PPARα) icircn toate populaţiile de leucocite

studiate (Mo limfocite PMN eozinofile) atacirct icircn lotul pacienţilor cu SM cacirct şi icircn lotul

martor

12 Utilizacircnd intensitatea medie de fluorescenţă a anticorpilor anti- PPARα am arătat că

nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile este semnificativ mai redus

la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali

13 Acest studiu este primul care a demonstrat existenţa unei scăderi statistic semnificative a

nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofilele pacienţilor cu SM

confirmacircnd cercetările recente care au evidenţiat rolul eozinofilelor şi al receptorilor

PPARα icircn obezitate reglarea inflamaţiei cronice şi aterogeneza

14 Contrar aşteptărilor noastre icircn populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările

efectuate icircn cele două loturi de studiu (cu şi fără sindom metabolic) nu am evidenţiat

diferenţe statistic seminificative icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα la

subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali

15 Icircn populaţiile de Mo limfocite şi polimorfonucleare am observat corelaţii puternice

semnificativ statistic icircntre expresia PPARα icircn aceste tipuri celulare sugeracircnd existenţa

unui mecanism unic de control al inflamaţiei cronice la nivelul acestor celule probabil

diferit de cel din eozinofile

16 La subiecţii cu SM expresia relativă a PPARα icircn Eo este invers asociată cu expresia

receptorului CD36 (receptor al particulelor de ox - LDL şi propus ca un marker precoce al

aterosclerozei) dovedind rolul antiinflamator al receptorilor PPARα la nivel endotelial

17 La pacienţii cu antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială nivelul de

expresie al receptorilor PPARα icircn eozinofile şi Mo este diminuat comparativ cu subiecţii

fără antecedente familiale de hipertensiune arterială Putem spune că studiul efectuat de

noi aduce informaţii importante legate de geneză aterosclerozei şi hipertensiunii arteriale

18 Prin studiul asocierilor dintre receptorii PPARα şi componentele clinice ale sindromului

metabolic am arătat rolul acestor receptori icircn determinismul obezităţii de tip central

nivelul expresiei relative a receptorilor PPARα fiind invers proporţional cu circumferinţa

abdominală

19 Icircn acelaşi timp nivelul de expresie a PPARα icircn sindromul metabolic este asociat pozitiv

cu concentraţia serică a HDL-colesterolului şi invers asociat cu nivelul trigliceridelor

serice dovedind rolul acestor receptori icircn diminuarea procesului inflamator cronic de la

nivel vascular

20 La pacienţii cu SM scăderea expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofile este corelată cu

creşterea unor markeri ai sindromului inflamator cronic cardiometabolic (acid uric

fibrinogen) ilustracircnd importanta receptorilor icircn reglarea status-ului inflamator cronic din

sindromul metabolic

21 Utilizarea metodei flowcitometrice pentru studiul expresiei relative a receptorilor PPARα

icircn leucocite a adus informaţii importante cu privire la mecanismele moleculare de control

implicate icircn patogenia bolilor cardiometabolice icircn concordanţă cu cercetările care descriu

expresia PPAR icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale bronşice

keratinocite)

BIBLIOGRAFIE SELECTIVA

1 Kahn R Metabolic syndrome- what is the clinical usefulness Lancet 2008371(9628)1892-3

2 Reaven GM The metabolic syndrome is this diagnosis necessary Am J Clin Nutr 2006 83(6)1237-7

3 Grundy SM Pre-Diabetes Metabolic Syndrome and Cardiovascular Risk J Am Coll Cardiol 201259(7)

635-43

4 International Diabetes Federation IDF Diabetes Atlas 6th edn International Diabetes Federation Belgium

Brussels 20131-155

5 World Health Organization Global Status Report on Noncommunicable Diseases 2010 World Health

Organization Geneva Switzerland 20111-176

6 Coman AE Petrovanu R Sindromul metabolic in practica de ambulator Editura Pim Iaşi 2009 1-103

7 Grundy SM Becker D Clark LT et alThird Report of the National Cholesterol Education Program (NCEP)

Expert Panel on Detection Evaluation and Treatment of High Blood Cholesterol in Adults (Adult

Treatment Panel III) Final Report Circulation 2002106(25)3143-90

8 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J Metabolic syndrome- a new worldwide definition A Consensus Statement

from the International Diabetes Federation Diabet Med 2006 23(5)469-80

9 KG Alberti KG Eckel RH Grundy SM etal International Diabetes Federation task force on epidemiology

and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart Association World Heart

Federation International Atherosclerosis Society International Association for the study of obesity

Harmonizing the metabolic syndrome a joint interim statement of the International Diabetes Federation task

force on epidemiology and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart

Association World Heart Federation International Atherosclerosis society and International Association

for the study of obesity Circulation 2009120(16)1640-5

10 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J IDF Epidemiology Task Force The metabolic syndrome new

worldwide definition Lancet 2005 366 1059 - 62

11 Oleszczyk M Svab I Seifert B et al Primary healthcare in the developing part of Europe changes and

development in the former Eastern Bloc countries that joined the European Union following 2004 Med Sci

Monit 2009(15)78ndash84

12 Jung U J Choi M S Obesity and Its Metabolic Complications The Role of Adipokines and the

Relationship between Obesity Inflammation Insulin Resistance Dyslipidemia and Nonalcoholic Fatty

Liver Disease Int J Mol Sci 2014rsquo15(4) 6184-223

13 Vanden Heuvel JP Peters JM Peroxisome Proliferators In Ramos K (ed) Cellular and Molecular

Toxicology (Second Edition) Volume 2 New York Elsevier Science Inc 2010 145 - 67

14 Yessoufou A Wahli W Multifaceted roles of peroxisome proliferator-activated receptors (PPARs) at the

cellular and whole organism levels Swiss Med Wkl 2010140w13071 doi104414smw201013071

15 Azhar S Peroxisome proliferator-activated receptors metabolic syndrome and cardiovascular disease

Future Cardiology 20106(5)657-91

16 Andries G Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity

Diabetes and Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(Suppl)24-32

17 Zandbergen F Plutzky J PPARalpha in atherosclerosis and inflammation Biochim Biophys Acta

20071771(8)972-82

18 Straus DS Glass CK Anti-inflammatory actions of PPAR ligands new insights on cellular and molecular

mechanisms Trends Immunol 200728(12)551-8

19 Zlei M Zugun- Eloae F Carasevici E Citometrie icircn flux - Bază şi clinică Icircn Hinescu ME (ed) Citometrie icircn

flux - principii şi aplicaţii clinice Bucureşti Editura Viaţa Medicală Romacircnească 20111-128

20 Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity Diabetes and

Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(9)24-32

21 Woerly G Honda K Loyens M et al Peroxisome proliferator-activated receptors alpha and gamma down-

regulate allergic inflammation and eosinophil activation J Exp Med 2003198(3)411-21

22 Salle-Saumont D Brenuchon C Kanda A et al Peroxisome proliferator-activated receptor alpha regulates

skin inflammation and humoral response in atopic dermatitis J Clin Allergy Immunology 2008 21(4)962-8

23 Schote A Turner J Schiltz J et al Nuclear receptors in human immune cells expression and correlations

Mol Immunolog 200744(6)1436-45

24 DAmore S Vacca M Graziano G et al Nuclear receptors expression chart icircn peripheral blood

mononuclear cells identifies patients with Metabolic Syndrome Biochim Biophys Acta

20131832(12)2289-301

25 Uthurralt J Gordish-Dressman H Bradbury M T et al PPARalpha L162V underlies variation in serum

triglycerides and subcutaneous fat volume in young males BMC Med Genet 2007855

26 Hiukka A Leinonen ES Jauhiainen M et al Long-term effects of fenofibrate on VLDL and HDL

subspecies icircn participants with type 2 diabetes mellitus Diabetologia 2007 50(10)2067-75

27 Robins SJ Rubins HB Faas FH et alInsulin resistance and cardiovascular events with low HDL

cholesterol The Veterans Affairs HDL Intervention Trial (VA-HIT) Diabetes Care 2003 26(5)1513-7

28 Devaraj S Siegel D Jialal I Statin Therapy in Metabolic Syndrome and Hypertension Post-JUPITER

What is the Value of CRP Curr Atheroscler Rep 2011 13(1) 31ndash42

29 Imperatore G Riccardi G Iovino C et al Plasma Fibrinogen A New Factor of the Metabolic Syndrome A

population-based study Diabetes Care 19982 1(4)649-54

30 Krysiak R Gdula-Dymek A Bachowski R Okopien B Pleiotropic effects of atorvastatin and fenofibrate

in metabolic syndrome and different types of pre-diabete Diabetes Care 201033(10)2266-70

31 Hermans MP Impact of Fenofibrate on Type 2 Diabetes Patients with Features of the Metabolic Syndrome

Subgroup Analysis From FIELD Curr Cardiol Rev 20106(2)112-8

32 Silverstein R Inflammation atherosclerosis and arterial thrombosis Role of the scavenger receptor CD36

Cleveland Clinic Journal of Medicine 200976(Suppl 2)S27-S30

33 Hăncu N Obezitatea In Vereşiu IA (ed) Diabetul zaharat nutritia si bolile metabolice Volume 2 Editura

Echinox Cluj- Napoca 2010 1-15

Lista lucrări publicate

1 Elena Popa Maria Maidaniuc Agnes Bacusca Alamir Diaa Rodica Petrovanu Adorata Elena

Coman Disfuncţia endotelială ndash de la mecanisme moleculare la cuantifi care şi tratament icircn practica

medicală Practica Medicală 20149(3) 109-14

2 Elena Popa Agnes Bacusca Alamir Diaa Maria Maidaniuc Rodica Petrovanu Adorata Elena Coman

The function of insulin receptor (IRF) in evolution of obesity correlation with adipocytes diameters

Archives of the Balkan Medical Union 201449(3) 275-9

3 Elena Popa Florin Zugun-Eloae Mihaela Zlei Daniela Jitaru Oana Maria Pintilie Adorata Elena

Coman Maria Traian Didona Anca Ungureanu Eugen Carasevici - acceptata pentru numarul 42014

Flow cytometry analysis of PPAR-alpha receptors in metabolic syndrome) Revista Romană de

Medicină de Laborator(RRLM-D-14-00034R1- adeverinţa ataşată

Page 3: REZUMAT TEZĂ DE DOCTORAT - umfiasi.ro Doctorat/rezumat... · universitatea de medicinĂ Şi farmacie “grigore t. popa” iaŞi facultatea de medicinĂ rezumat tezĂ de doctorat

IV32 Obiectivele studiului 43

IV33 Lotul de studiu 43

IV34 Protocolul studiului epidemiologic al sindromului metabolic 44

IV35 Metode utilizate icircn cercetare 45

IV36 Analiza statistică 46

IV37 Rezultate 46

IV38 Discuţii 62

IV39 Concluzii 64

IV4 Studiul sindromlui inflamator cronic icircn cadrul sindromului metabolic 65

IV41 Scopul studiului 65

IV42 Obiectivele studiului 65

IV43Material şi metodă 65

IV44 Analiza statistică 65

IV45 Rezultate 66

IV46Discuţii 79

IV47 Concluzii 80

Capitolul V STUDIUL RECEPTORILOR ACTIVAŢI DE INDUCTORII PROLIFERĂRII

PEROXIZOMILOR-ALPHA IcircN LEUCOCITELE CIRCULANTE 81

V1 Ipoteza de lucru 81

V2 Material și metodă 82

V3 Analiza statistică 87

V4 Rezultate 87

V41 Analiza loturilor studiate 87

V42 Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα 91

V43 Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor CD36 106

V44 Studiul corelaţiilor icircn cele două loturi 111

V5 Discuţii 118

V6 Concluzii 128

VI LIMITE ȘI DIFICULTĂȚI IcircN CERCETARE 129

VII ORIGINALITATEA ȘI CONTRIBUȚIILE INOVATIVE ALE TEZEI DE

DOCTORAT PERSPECTIVE DE CERCETARE 130

VIII CONCLUZII FINALE 131

IX BIBLIOGRAFIE 133

X ANEXE 148

Fişa electronică de studiu Consimţămacircntul informat al pacientului Recoltarea probelor de sacircnge venos pentru studiul PPARα

Protocol marcare CD14 - CD36

Imagini PPARα - citometrie icircn flux

Imagini CD36 Lista lucrări publicate

LISTA ABREVIERI

CA - Circumferinţa abdominalăcm - CentimetriCRP - Proteina C reactivăCol - Colesteroldl - DecilitruEo - EozinofileHDL - High density lipoprotein (lipoproteine cu densitate icircnaltă)IDF - Federaţia Internaţională de DiabetIgE - ImunoglobulinăIMC- Indice de masă corporalăLy - LimfociteLDL- Low density lipoprotein (lipoproteine cu densitate joasă)mg - MiligramMo- MonociteNCEP-ATP III - Naţional Cholesterol Education Program Adult Treatment Panel IIIPPAR - Receptorii Activaţi de Inductorii Proliferarii Peroxizomilor (peroxizome proliferator -activated receptor)PMN - PolimorfonucleareSM - Sindrom metabolicTA - Tensiunea arterialăTAS - Tensiune arterială sistolicăTAD - Tensiune arterială diastolicăTG - Trigliceride

Teza cuprinde un număr de 118 de figuri 41 de tabele și 280 referințe bibliograficeNumerotarea tabelelor şi figurilor este identică cu cea din teză

SCOPUL ŞI MOTIVAŢIA STUDIULUI

Motivația cercetării

La nivel mondial sindromul metabolic (SM) reprezintă o importantă problemă de

sănătate publică reunind asocierea dintre obezitate abdominală şi factori de risc majori

cardiovasculari (hiperglicemia dislipidemia hipertensiunea arterială) (12) Se estimează că

SM afectează peste 25 din populaţia generală iar aproximativ două treimi din pacienţii cu

SM sunt predispuşi la un eveniment cardiovascular major (3) Icircn prezent se acţionează pe

două căi pentru controlul factorilor de risc cardiometabolici incluşi icircn SM managementul

stilului de viaţă (scăderea greutăţii corporale prin combaterea sedentarismului şi adoptarea

unei diete antiaterogene şi hipocalorice) şi administrarea terapiei medicamentoase Deşi atacirct

modificarea stilului de viață cacirct și terapia medicamentoasă vizează controlul factorilor de risc

cardiometabolici conform ghidurilor medicale adoptate atingerea ţintelor terapeutice este

greu de realizat (1011) Icircn aceste condiţii introducerea unor noi metode diagnostice şi

terapeutice bazate pe etiopatogenia SM ar putea icircmbunătăţi calitatea vieţii bolnavilor şi SM şi

ar conduce pe termen lung la creşterea speranţei medii de viaţă Cercetările actuale sunt

orientate spre descifrarea modului icircn care modificările metabolismului incluzacircnd rezistenţa la

insulină dislipidemia obezitatea abdominală pot accelera ateroscleroza privită ca o

complicaţie metabolică și indusă de inflamație (12) Icircn contextul studiului SM receptorii

nucleari activaţi de inductorii proliferării peroxizomilor-alpha-α (PPARα) atrag atenţia

datorită rolului deţinut icircn reglarea oxidării acizilor graşi metabolismul lipidelor şi

lipoproteinelor inflamaţie cronică şi aterogeneză (131415) Aceștia reprezintă astfel veriga

lipsă patogenică care leagă modificările metabolice de procesul inflamator cronic

autoicircntreținut care duce la disfuncția endotelială și aterogeneză Acţionacircnd ca factori de

transcripţie activarea PPARα determină scăderea nivelului seric al trigliceridelor şi HDL-col

şi protejează față de profilul lipidic aterogenetic prin modularea status-ului proinflamator şi

diminuarea insulinorezistenţei (1617) Rolul PPARα icircn reglarea metabolismului lipidic

balanţei energetice şi icircn diminuarea răspunsului proinflamator fac din aceşti receptori o

potenţială ţinta icircn tratamentul afecţiunilor icircn care rolul inflamaţiei cronice este bine cunoscut

Se descrie astfel o nouă posibilitate de icircmbunătăţire a prognosticului afecţiunilor cronice cu

impact major asupra sănătăţii publice incluzacircnd ateroscleroza diabetul zaharat boala cronică

obstructivă pulmonară maladia Parkinson demența Alzheimer şi nu icircn ultimul racircnd

neoplaziile (18)

Scopul studiului

Icircn cadrul Tezei de Doctorat mi-am propus realizarea unei cercetări referitoare la

rolul Receptorilor Activaţi de Inhibitorii Proliferării Peroxizomilor- alpha icircn contextul

sindromului metabolic alături de completarea datelor epidemiologice existente cu privire la

prevalenţa acestui sindrom icircn populaţia aflată icircn evidenţa unui Cabinet de Medicină de

Familie din oraşul Iaşi Ca urmare cercetarea efectuată a urmărit două aspecte1 studiul

epidemiologic al SM icircn populaţia unui Cabinet de Medicină de Familie urmată de

investigarea markerilor inflamatori prezenţi icircn SM 2 investigarea prezenţei și a nivelului de

expresie relativă a receptorilor PPARα icircn leucocitele circulante recoltate din sacircngele

subiecţilor studiaţi celule care exprimă aceşti receptori şi a căror rol icircn inflamaţie şi

aterogeneză este bine cunoscut

Considerații etice Studiul a primit avizul Comisiei de Etică a Universităţii de Medicină

şi Farmacierdquo Gr T Popardquo Iaşi Studiul a fost condus icircn conformitate cu Declaraţia de la

Helsinki actualizată

STUDIUL SINDROMULUI METABOLIC IcircN POPULAŢIA SELECTATĂ

Obiectivele studiului sindromului metabolic

a evaluarea din punct de vedere clinic şi biologic a sindromului metabolic

b identificarea tipului de SM icircn raport cu numărul de componente

c stabilirea prevalenţei sindromului metabolic icircn populaţia studiată

d studiul markerilor inflamatori prezenţi icircn SM

Studiul epidemiologic icircn populaţia selectată

Am efectuat un studiu epidemiologic transversal care şi-a propus stabilirea prevalenţei

sindromului metabolic şi a componentelor sale icircn populaţia icircnscrisă pe lista unui cabinet de

medicină de familie Studiul s-a desfăşurat pe parcursul a 12 luni icircn perioada 01012013ndash

31122013 icircn cadrul Cabinetului de Medicină de Familie CMI Popa Elena situat icircn strada

Ion Creanga nr 73 din Iaşi

Obiectivele studiului - evaluarea din punct de vedere clinic şi biologic a sindromului metabolic

- identificarea tipului de SM icircn raport cu numărul de componente

- stabilirea prevalenţei sindromului metabolic icircn populaţia studiată

Lotul de studiu a fost constituit din populaţia de ambele sexe cu vacircrsta cuprinsă icircntre

18 şi 91 ani icircnscrisă pe lista medicului de familie Subiecţii au fost invitaţi să participe la

studiu icircn luna naşterii realizacircnd astfel o programare a vizitelor pe parcursul a 12 luni

Criteriile de includere icircn lotul de studiu vacircrsta peste 18 ani capacitate de decizie

domiciliul stabil icircn Romacircnia participare pe baza consimţămacircntului liber informat Criteriile

de excludere vacircrstă sub 18 ani femei gravide sau care alăptează bolnavi icircn faza terminală

subiecţi care refuză semnarea consimţămacircntului informat Nu s-au formulat criterii care să

aducă discriminări legate de sex etnie sau rasă

Protocolul studiului epidemiologic al sindromului metabolic

Icircn cadrul studiului epidemiologic s-au realizat cacircte două vizite pentru fiecare participant La

prima vizită subiecţii au fost informaţi asupra studiului icircn cadrul cercetării doctorale şi au

semnat Consimţămacircntul liber informat Pentru fiecare participant s-a completat fişa de studiu

computerizată incluzacircnd date anamnestice şi clinice (talie greutate corporală perimetru

abdominal) La a doua vizită s-au recoltat probe biologice (sacircnge venos) de către o asistentă

specializată pentru următoarele determinări biochimice (glicemie colesterol total HDL-

colesterol LDL-colesterol trigliceride acid uric creatinină fibrinogen proteină C reactivă)

şi hematologice (hemoleucograma VSH) Pentru diagnosticarea SM am utilizat criteriile

de diagnostic Harmonised I (tabel VI) Am comparat prevalenţa SM conform criteriilor

Harmonised I cu prevalenţa obţinută prin aplicarea criteriilor IDF respectiv ATP III

Analiza statistică Pentru analiza parametrilor studiaţi icircn SM am realizat icircmpreună cu

firma Arhilog Soft un program icircn care sunt incluşi parametrii de diagnostic ai SM şi care

permite icircncadrarea pacienţilor funcţie de componentele SM icircn SM3 SM4 SM5 De

asemenea programul permite editarea şi arhivarea unei fişe de observaţie pentru fiecare

participant la studiu precum şi crearea unei baze de date compatibile cu programul Microsoft

Office Excel 97-2003

Menţionăm că acest program poate stoca

şi alţi parametri clinici şi paraclinici utilizaţi icircn evaluarea complexă a SM putacircnd fi ulterior

introdus ca un program de monitorizare a evoluţiei pacienţilor Pentru prelucrarea statistică a

parametrilor s-au folosit programele Microsoft Office Excel 97-2003 SPSS-10 (Statistical

Package for Social Sciences) şi aplicaţia Medcalc Statistical Software ndash 1333 Valoarea lui p

Figura 41 Program de

analiză a parametrilor SM

mai mică de 005 a fost considerată semnificativ statistic

Rezultate Analiza lotului de studiu s-a efectuat icircn funcţie de mediul de provenienţă sex vacircrstă şi

vacircrsta medie Caracteristicile clinice şi biochimice ale lotului studiat sunt reprezentate icircn

tabelul VIII

Tabel VIII Caracteristicile lotului studiat Media 95 CI SD Minimum Maximum

Vacircrsta (ani) 4751 4661 - 4841 1798 1800 9100

CA (cm) 8830 8764 - 8896 1316 5600 13400

IMC (kgm2) 2603 2578 - 2628 497 1900 4500

TAD (mmHg) 7529 74883 - 7571 827 6000 11500

TAS (mmHg) 11730 11650 - 11810 1590 9000 19000

Glicemie (mgdl) 9435 9328 - 9542 2138 7200 40000

HDL- col(mgdl) 4498 4427 - 4570 1422 2100 9200

TG(mgdl) 12269 11887 - 12651 7157 4800 87900

Determinarea scorului SM

Am aplicat criteriile de diagnostic şi am calculat scorul de SM pentru fiecare subiect (0-

absenţa criteriului 2- prezenţa criteriului) (fig44)

Figura 44 Frecvenţa scorului SM icircn

populaţia studiată conform criteriilor

SM Harmonised (A) IDF (B) ATP III

(C) Se observă că distribuţia scorurilor

SM conform criteriilor de diagnostic este

identică icircn cazul aplicării criteriilor

Harmonized I şi IDF

Scorul de SM a avut valori pare

cuprinse icircntre intervalul 0 - 10 pacienţii

cu SM avacircnd un scor mai mare sau egal

cu 6

Icircn lotul studiat am analizat prezenţa simultană a criteriilor Harmonised I de diagnostic şi

am constatat prezenţa SM la 389 subiecţi (204 femei şi 185 bărbaţi) reprezentacircnd 2542

(95CI 2296-2808) din totalul populaţiei studiate Raportul prevalenţelor specifice pe sexe

bărbaţifemei a fost de 103 (95 CI084 -126)Icircn concordanţă cu criteriile IDF am

identificat un număr de 325 pacienţi cu SM (175 femei şi 150 bărbaţi) iar prevalenţa SM icircn

populaţia studiată conform IDF a fost de 2124 (95 CI 1899ndash 2368) Raportul

prevalenţelor specifice la bărbaţi versus femei a fost de 0977 (95 CI 078 ndash122) Utilizacircnd

definiţia ATP III au fost identificaţi un număr de 229 subiecţi cu SM Prevalenţa SM a fost

C

0

100

200

300

400

500

600

700

Scor SM ATP III

Număr pacienţi

0 2 4 6 8 10

ATP III SM5 SM4 SM3 non SM

B

0 50

100 150 200 250 300 350 400 450

Scor SM IDF

Număr pacienţi

0 2 4 6 8 10

IDF SM5 SM4 SM3 non SM

A

0

50

100

150

200

250

300

350

400

450

Scor SM Harmonised I

Număr pacienţi

0 2 4 6 8 10

HARMONIZED I SM5 SM4 SM3 non SM

de 1497 (95CI 1309 ndash 1704) icircn populaţia studiată Au fost calculate prevalenţele pe

sexe şi au fost găsite valorile de 1343 (95CI 010 ndash 164) la bărbaţi respectiv 1632

(95 CI 1366 ndash 1934) la femei raportul dintre acestea fiind de 082 (95CI 062 ndash 107)

Pentru fiecare asociere dintre componentele SM diagnosticat conform criteriilor

Harmonised I am calculat prevalenţele icircn cadrul SM(tabel XVI)

Tabel XVI Prevalenţa asocierilor dintre componentele SM Număr

pacienţi

Ponderea icircn cadrul

pacienţilor cu SM

(95 CI)

Prevalenţa icircn

populaţia studiată

(95 CI)

SM cu trei componente (SM3)

241 6195 (5438ndash7029) 1575 (1383-

1787)

Obezitate centrală + hipertensiune arterială +

hipertrigliceridemie

45 1154 (844ndash1548) 294 (214-393)

Obezitate centrală + hipertensiune arterială + hipo-

HDLcolesterolemie

38 979 (691ndash1340) 248 (175-340)

Obezitate centrală + hipertrigliceridemie +

hipoHDL-colesterolemie

34

874 (605ndash1221) 222 (153-310)

Obezitate centrală + modificări ale metabolismului

glucidic + hipertensiune arterială

31 796 (541ndash1131) 202 (137-287)

Hipertensiune arterială + hiper-trigliceridemie +

hipoHDL- colesterolemie

26 668 (436 ndash979) 169 (111-249)

Modificări ale metabolismului glucidic +

hipertensiune arterială + hiper-trigliceridemie

21 539 (334-825) 137 (085-209)

Obezitate centrală + modificări ale metabolismului

glucidic + hipertrigliceridemie

15 385 (215-636) 098 (054-116)

Modificări ale metabolismului glucidic

hipertrigliceridemie + hipoHDL-colesterolemie

12 308 (159-538) 078 (040-137)

Modificări ale metabolismului glucidic +

hipertensiune arterială + hipoHDLcolesterolemie

10 257 (123ndash472) 065 (031-120)

Obezitate centrală + modificări ale metabolismului

glucidic + hipo-HDL-col

9 231 (105ndash439) 058 (026-111)

SM cu patru componente (SM4) 104 2674 (2184-239) 679 (555-823)

Obezitate centrală + modificări ale metabolismului

glucidic + hipertensiune arterială + hipoHDL-

colesterolemie

32 822 (562-1116) 209 (143-

295)

Obezitate centrală + hipertensiune arterială +

hipertrigliceridemie + hipoHDL-col

25 642 (415- 948) 163 (105-241)

Obezitate centrală + modificări ale metabolismului

glucidic + hipertri-gliceridemie + hipoHDL-

colesterolemie

12 308 (159-538) 078 (040-137)

Modificări ale metabolismului glucidic +

hipertensiune arterială + hipertri-gliceridemie +

hipoHDL-colesterolemie

6 154 (056- 335) 039 (014-085)

SM cu cinci componente (SM5) 44 1131 (822-1518) 287 (209-386)

Total (SM3 + SM4 + SM5) 389 100 2542(2296-

2808)

Analizacircnd componentele SM la cei 389 pacienţi diagnosticaţi cu SM conform criteriilor

Harmonised I am constatat că obezitatea centrală este cea mai bine reprezentată icircn SM dintre

aceste componente (8072 95CI 7644 - 8452) urmată de HTA (7892 95CI 7453

- 8287) hiperTG (6915 95 CI 6430-7371) hipo-HDL-col (6375 95 CI 5876-

6854) şi hiperglicemie (5681 95 CI5173- 6179)

Standardizarea prevalenţelor funcţie de vacircrstă şi sex Analiza statistică a relevat faptul

că prevalenţa SM creşte cu icircnaintarea icircn vacircrstă Dacă pentru vacircrsta cuprinsă icircntre 35-54 ani

prevalenţa la bărbaţi este semnificativ mai mare comparativ cu femeile (raport calculat B F -

183 P=0003) pentru celelalte grupe de vacircrsta nu s-au observat diferenţe semnificative icircntre

sexul feminin şi cel masculin Am observat că după instalarea menopauzei la femei

prevalenţa SM (corespunzătoare Harmonised I) la femei depăşeşte 50 iar la bărbaţi atinge

42 Utilizacircnd European Standard Population (175) am efectuat standardizarea funcţie de

vacircrstă şi sex a prevalenţelor bdquocruderdquo (brute) obţinute icircn populaţia studiată şi am calculat o

prevalenţă standardizată a SM de 2732 (95 CI 2460-3003) La sexul masculin

prevalenţa standardizată a SM a fost de 2760 (95 CI 2362 - 3157) iar la sexul feminin

am obţinut valoarea de 2854 (95 CI 2462 - 3245)

Discuţii

Studiul desfăşurat de noi a investigat prezenţa SM icircn populaţia unui Cabinet de Medicină

de Familie Icircn Europa prevalenţa SM este de aproximativ 25-30 Statele Unite Ale Americii

au raportat o prevalenţă a sindromului metabolic de 22 icircn populaţia cu vacircrsta peste 20 ani

pe cacircnd la vacircrstă mai mare de 60 ani s-a observat o prevalenţă de 44 (1419) Icircn studiul

efectuat am observat o prevalenţă standardizată de 2732 (95 CI 2460-3003) care este

icircn concordanţă cu prevalenţele raportate icircn Europa precum şi o creştere a ponderii SM icircn

populaţie icircn raport cu vacircrsta Am preferat utilizarea definiţiei Harmonised I pentru SM

deoarece cuprinde criterii adaptate pentru o abordare unitară a SM mărind astfel numărul

pacienţilor diagnosticaţi şi care vor urma tratament conform Ghidurilor de Practică Medicală

Limitările acestui studiu sunt legate de faptul că este concentrat doar pe populaţia asigurată şi

neasigurată aflată pe lista unui medic de familie din mediul urban Se pot efectua studii la

nivelul Cabinetelor Medicale de Medicină de Familie dar trebuie să se aplice pe un lot

reprezentativ urbanrural care să reprezinte populația acelei regiuni Utilizarea structurilor

populaționale atașate cabinetului de MF este utilă atacirct pentru cele clinice cacirct și pentru cele

epidemiologice deoarece surprinde populația studiată icircn mediul de viață cotidian Prevalenţa

mare a SM icircn populaţia studiată necesită aplicarea unei politici eficiente de sănătate publică

deoarece riscul producerii evenimentelor cardiovasculare majore poate fi redus semnificativ

printr-un control adecvat al componentelor SM (obezitate dislipidemii hipertensiune

arterială şi hiperglicemie

Studiul sindromului inflamator cronic icircn cadrul sindromului metabolic

Obiectivele studiului

- studierea markerilor inflamaţiei cronice şi aterogenezei la subiecţii cu şi fără SM

- evaluarea importanţei markerilor studiaţi ai inflamaţiei cronice icircn diagnosticul de

ambulator al sindromului metabolic

Material şi metodă

Icircn cercetarea inflamaţiei cronice din SM au fost incluşi 1530 subiecţi de ambele sexe cu

vacircrsta cuprinsă icircntre 18-91 ani icircnscrişi pe lista CMI Popa Elena Studiul s-a desfăşurat icircn

perioada 01012013ndash 31122013 Populaţia ţintă a fost identică cu cea din studiul

epidemiologic şi s-a desfăşurat concomitent cu studiul prevalentei SM Subiecţii au fost

icircmpărţiţi icircn două loturi lotul cu SM (Lot SM) şi lotul de control (fără SM)

Lot SM a) criterii de includerevacircrsta peste 18 ani recrutarea pe baza semnării

Consimţămacircntului liber informat SM diagnosticat pe baza criteriilor Harmonised I (14) b)

criterii de excluderevacircrstă sub 18 anirefuzul semnării Consimţămacircntului liber informat

femei icircn perioada de graviditate sau de lactaţie

Lot Control (fără SM) a) criterii de includerevacircrsta peste 18 anirecrutarea pe baza

semnării Consimţămacircntului liber informat absenţa sindromului metabolic b) criterii de

excluderevacircrstă sub 18 ani refuzul semnării Consimţămacircntului liber informatfemei icircn

perioada de graviditate sau de lactaţie

Rezultate

Lotul cu SM (Lot SM) a fost format din cei 389 pacienţi diagnosticaţi cu SM conform

criteriilor Harmonised I Lotul SM a fost alcătuit din 185 bărbaţi şi 204 femei raportul

bărbaţifemei fiind de 090 (95 CI073-112) Lotul de control (fără SM) a fost alcătuit

din cei 1141 participanţi care nu au icircntrunit criteriile de diagnostic ale sindromului metabolic

Din cei 1141 de subiecţi 530 au fost de sex masculin iar 611 de sex feminin raportul

bărbaţifemei fiind 087 (95 CI 077-097) Vacircrsta subiecţilor a fost semnificativ mai mare

icircn lotul pacienţilor cu SM (5976plusmn1322 ani) comparativ cu lotul martor (4333plusmn 1748 ani) (t-

Test Plt00001) Aşa cum ne-am aşteptat valorile medii ale componentelor clinice ale SM

(circumferinţa abdominală tensiunea arterială sistolică şi diastolică) au fost mai mari icircn lotul

pacienţilor cu SM (t-Test Plt0001 pentru fiecare dintre componente) Studiind parametrii

biochimici incluşi icircn diagnosticul SM valorile medii ale glicemiei şi TG au fost semnificativ

mai crescute icircn lotul SM (t-Test Plt00001 pentru ambele constante) Icircn acelaşi timp

valoarea medie determinată a HDL-col a fost semnificativ mai mare la subiecţii din lotul

martor ( t-Test Plt00001) SM se caracterizează printr-o dislipidemie aterogenă

caracterizată de creşterea TG scăderea HDL-col concomitent cu creşterea LDL-col creşterea

Non-HDL-col şi a raportului de aterogenitate (Col totalHDL-col) (185) Comparacircnd cele

două loturi am observat că valoarea medie a LDL-colesterolului determinată icircn lotul

pacienţilor cu SM a fost semnificativ mai mare faţă de subiecţii din lotul martor (t-Test P =

00002) Măsurarea Non-HDL-colesterolului a arătat prezenţa unei diferenţe semnificative

icircntre cele două loturi (figura 420 B) Astfel icircn concordanţă cu prezenţa dislipidemiei

aterogene valoarea medie a Non-HDL-col a fost semnificativ mai mare (t-Test Plt 00001) icircn

lotul cu SM comparativ cu lotul de control Icircn contextul inflamației cronice şi aterogenezei

din sindromul metabolic am evaluat sensibilitatea şi specificitatea Non-HDL-colesterolului

ca test diagnostic al SM Valoarea Non-HDL-colesterolului care prezice cu cea mai mare

acurateţe prezenţa SM a fost de 151 mgdl (punctul de ldquocut-offrdquo) pentru care am calculat o

sensibilitate de 64 27 şi o specificitate de 5872 Calculul ariei AUC a furnizat valoarea

de 0605 şi deci determinarea concentraţiei serice a parametrului Non-HDL-colesterolului are

valoarea unui marker cu acurateţe redusă Am studiat valorile raportului Col totalHDL-col icircn

cele două loturi şi am constatat că la pacienţii cu SM valoarea media a raportului de

aterogenitate este semnificativ mai mare faţă de valoarea raportului determinată icircn lotul

martor (t-Test Plt 00001) Pentru raportul de aterogenitate studiat analiza curbei ROC a

arătat că valorile mai mari decacirct punctul de ldquocut-offrdquo de 431 prezic prezenţa SM cu cea mai

mare sensibilitate (6381 ) şi specificitate (6582)Valoarea AUC pentru indicele de

aterogenitate a fost de 0667 şi icircn studiul SM acest indice poate fi considerat un marker cu

acurateţe redusă Valoarea medie determinată a acidului uric la subiecţii fără SM a fost

semnificativ mai mică decacirct icircn lotul SM (t-Test Plt 00001) Curba ROC a arătat că valorile

acidului mai mari de 43 mgdl prezic diagnosticul de SM cu cea mai mare sensibilitate

(8107) şi specificitate (5328) Pentru acidul uric AUC a avut valoarea de 0655 şi

icircncadrează determinarea acidului uric seric icircn racircndul testelor cu acurateţe redusă (187)

Comparacircnd populaţiile de leucocite (tabel XXI) valoarea medie determinată a

numărului de Eo a fost semnificativ mai mare icircn lotul cu SM comparativ cu lotul martor (t-

Test Plt0001) Analizacircnd curba ROC trasată pentru valorile numărului de Eo am observat

că valorile ldquocut-offrdquo mai mari de 200 Eomm3

pot prezice prezenta SM cu cea mai mare

specificitate (7705) şi sensibilitate (3978) Pentru diagnosticul SM calculul ariei AUC a

arătat faptul că determinarea numărului de Eo are valoarea unui test diagnostic cu acurateţe

redusă (AUC = 0 589) Comparacircnd valorile medii ale fibrinogenului am calculat o diferenţă

statistic semnificativă icircntre cele două loturi valoarea medie a fibrinogenului fiind mai mare icircn

lotul SM ((t-Test P lt 00001) Cu ajutorul curbei ROC am observat că valorile fibrinogenului

mai mari de 306 mgdl prezic sindromul metabolic cu o sensibilitate de 7511 şi specificitate

de 6056 Fibrinogenul a fost icircncadrat icircn categoria markerilor inflamatori cu acurateţe

redusă AUC avacircnd valoarea de 0690 Icircn loturile de studiu am calculat AUC corespunzătoare

criteriilor de diagnostic ale SM Am observat că icircn cazul scorului Harmonised I

sensibilitatea şi specificitatea sunt de 100 iar AUC este egală cu 1000 Pentru cele cinci

criterii de diagnostic AUC a avut valori icircntre 0636 (pentru variabila HDL-col) şi 0804

(pentru variabila CA) (figura 431)

AUC ES 95 CI

Scor SM Harmonised I 1000 00000 0997 - 1000

CA (cm) 0804 00133 0781 - 0825

TAD (mmHg) 0666 00169 0639 - 0692

TAS (mmHg) 0757 00148 0732 - 0780

Glicemie (mgdl) 0742 00160 0717 - 0766

Trigliceride (mgdl) 0756 00175 0732 - 0780

HDL- colesterol 0636 00183 0609 - 0662

Figura 431 Analiza AUC criterii de diagnostic ale SM

Studiind figura 432 se observă că valoarea AUC pentru markerii studiaţi este cuprinsă

icircntre 0589 (icircn cazul variabilei Eo) şi 0690 (icircn cazul fibrinogenului) Icircn contextul SM

acurateţea acestor markeri ai inflamaţiei cronice şi disfuncţiei endoteliale poate fi considerată

redusă deoarece AUClt07 pentru toţi markerii investigaţi (figura 431) Totuşi valorile ariilor

parametrilor reprezentaţi icircn figura 431 sunt apropiate de valorile AUC ale variabilelor TAD

şi HDL-col (figura 432) şi deci pot fi utilizaţi pentru completarea diagnosticului de SM

AUC ES 95 CI

Non-HDL-colesterol 0605 00171 0580 - 0630

Col totalHDL-col 0607 00163 0642 - 0691

Acid uric 0655 00161 0630 - 0679

Fibrinogen 0690 00206 0658 - 0720

Eozinofile 0589 00176 0564 - 0615

Figura 432 AUC markeri ai SM inflamaţiei cronice şi aterogenezei

Discuţii

Status-ul proinflamator din SM asociat cu insulinorezistenţa şi disfuncţia endotelială

constituie o verigă de legătură dintre inflamaţie şi procesele metabolice complexe icircnsoţindu-

se de deteriorarea funcţiilor vasculare şi creşterea riscului de evenimente cardiovasculare

majore (2858) Studiul efectuat a arătat o diferenţă icircntre vacircrstele subiecţilor din cele două

loturi vacircrsta pacienţilor cu SM fiind semnificativ mai mare (Plt0001) comparativ cu subiecţii

normali confirmacircnd faptul menţionat că vacircrsta reprezintă unul din stimulii care agravează

inflamaţia cronică Am arătat că valorile fibrinogenului sunt mai mari icircn SM comparativ cu

Scor Harmonised I

0 20 40 60 80 100

0

20

40

60

80

100

100-Specificitate

Sen

sib

ilit

ate

Criterii diagnostic SM

0 20 40 60 80 100

0

20

40

60

80

100

100-Specificitate

Sens

ibili

tate

CA

TAD

TAS

Glicemie

Trigliceride

HDL-C

0 20 40 60 80 100

0

20

40

60

80

100

100-Specificitate

Sensi

bilita

te

Non-HDL-C

Col T HDL-C

Acid uric

Fibrinogen

Eozinofile

lotul martor atacirct la bărbaţi cacirct şi la femei icircn concordanţă cu studiile anterioare Evaluarea

fibrinogenului este importantă nu numai icircn SM pentru definirea contextului proinflamator şi

protrombotic ci şi icircn predicţia cardiovasculară la subiecţii normali Studiind populaţiile

leucocitare am obţinut diferenţe semnificative icircn cazul Eo valoarea medie a acestora fiind

semnificativ mai mare icircn lotul cu SM comparativ cu lotul martor (P lt 0001 figura 425B)

Implicarea Eo icircn SM s-a conturat icircn ultimul deceniu aceste celule fiind implicate icircn recrutarea

macrofagelor din ţesutul adipos Experimental s-a constatat că o creştere a Eo apărută ca

urmare a infectării cu helminţi sau stimulare cu IL-5 este urmată de icircmbunătăţirea toleranţei la

glucoză (199) Controlul pe care icircl exercită Eo asupra activării macrofagelor ar putea fi cheia

intervenţiei asupra obezităţii icircn viitorul apropiat(165199) Hiperuricemia asociata frecvent cu

SM este cunoscut ca un factor independent de risc cardiovascular (192 202) In concordanţă

cu aceasta afirmaţie in studiul nostru am constatat ca nivelul seric al acidului uric a fost mai

crescut in lotul cu SM diferenţa semnificativă din punct de vedere statistic (P lt 00001)

Dislipidemia aterogenă din sindromul metabolic şi diabetul zaharat se caracterizează prin

creşterea trigliceridelor şi a Non-HDL-col scăderea HDL-col creşterea numărului de

particule LDL modificate (185190) La pacienţii cu SM am descris un profil aterogenetic

cu risc crescut de evenimente cardiovasculare majore

STUDIUL RECEPTORILOR ACTIVAŢI DE INDUCTORII PROLIFERĂRII

PEROXIZOMILOR-ALPHA IcircN LEUCOCITELE CIRCULANTE

Ipoteza de lucru

Studii experimentale efectuate au arătat că rolul PPARα icircn ateroscleroză derivă din

implicarea acestor receptori icircn limitarea inflamaţiei Plecacircnd de la acest fundament ne-am

propus evidenţierea receptorilor nucleari activaţi de inductorii proliferării peroxizomilor-

alpha (PPARα) prin citometrie de flux icircn leucocitele din sacircngele periferic alături de

evaluarea acestei metode icircn cuantificarea expresiei relative a PPARα ca test diagnostic

precoce al modificărilor metabolice SM Studiul expresiei relative a receptorilor PPARα a

plecat de la premisa că dacă SM se caracterizează printr-un status inflamator cronic nivelul

de expresie a PPARα icircn leucocitele circulante este mai scăzut la pacienţii cu SM comparativ

cu subiecţii normali Referitor la studiul receptorului CD36 am plecat de la presupunerea că

nivelul de expresie al acestui receptor icircn SM este crescut dat fiind importanţa acestui receptor

icircn inflamaţia aterosclerotică Avacircnd icircn vedere efectele receptorilor amintiţi icircn

insulinorezistenţă şi aterogeneză am considerat necesară evaluarea prezenţei receptorului

nuclear PPARα icircn paralel cu studiul receptorului bdquoscavengerrdquo CD-36 prin metoda citometriei

icircn flux Astfel icircn studiul efectuat mi-am propus şi investigarea existenţei unei legături icircntre

nivelul de expresie al receptorilor PPARα şi cel al receptorului CD-36 De asemenea ne-am

icircndreptat atenţia spre stabilirea unor asocieri icircntre componentele clinice şi biochimice ale

sindromului metabolic şi nivelul intensităţilor de fluorescenţă ale PPARα şi CD-36 ca măsură

a expresiei relative a acestor receptori

Material și metodă

Studiul receptorilor PPARα icircn contextul sindromului metabolic s-a desfăşurat icircn

perioada 1012014 -28022014 pe baza metodologiei studiilor de tip caz-martor Am urmărit

identificarea unor diferenţe icircntre expresia receptorilor PPARα la pacienţii cu SM comparativ

cu subiecţii sănătoşi diferenţe care ar putea fi utile icircn diagnosticul precoce al SMRecrutarea

pacienţilor s-a efectuat din pacienţii prezentaţi pentru consultaţie la Cabinetul Individual

ldquoCMI Dr Popa Elenardquo situat icircn strada Ion Creanga din Iaşi Pentru studiul receptorilor

PPARα icircn sindromul metabolic au fost selecţionaţi un număr de 57 de subiecţi 26 de subiecţi

cu SM (constituind lotul SM) şi 31 subiecţi fără SM constituind lotul de control (Lot Non-

SM) Pentru studiul SM pacienţii au fost recrutaţi din masa de populaţie arondată cabinetului

de MF fără istoric de SM diabet zaharat boală cardio-vasculară aflați la primul diagnostic

de SM evaluarea completă a acestora fiind urmată de includerea icircn programul de

management cardiovascular şi metabolic conform Ghidurilor Terapeutice aflate icircn vigoare

Lot SM a) criterii de includerevacircrsta peste 18 ani recrutarea pe baza semnării

Consimţămacircntului liber informatSM nou-diagnosticat pe baza prezenţei a minim trei criterii

de diagnostic pentru SM conform Harmonised I b) criterii de excluderevacircrstă sub 18 ani

refuzul semnării Consimţămacircntului liber informat femei icircn perioada de graviditate sau de

lactaţie SM anterior diagnosticat istoric de diabet zaharat boală cardiovasculară constituită

tratament cu agonişti PPARα (ie fibraţi etc)

Lot martor (Non-SM) a) criterii de includerevacircrsta peste 18 ani recrutarea pe baza

semnării Consimţămacircntului liber informat absenţa diagnosticului de SM b) criterii de

excludere vacircrstă sub 18 ani refuzul semnării Consimţămacircntului liber informat femei icircn

perioada de graviditate sau de lactaţie

Studiul receptorilor PPARα a inclus două subetape

A Studiul componentelor sindromului metabolic conform criteriilor Harmonised I

Evaluarea clinică a participanţilor s-a desfăşurat icircn cadrul Cabinetului de Medicină de

Familie iar determinările hematologice şi biochimice s-au efectuat icircn Laboratorul

Ambulatorului Clinic de Specialitate al Spitalului Clinic de Urgenţă bdquoSf Spiridonrdquo Iaşi

B Evaluarea icircn citometrie de flux a nivelului relativ de expresie a PPARα şi CD36

Studiul receptorilor PPARα s-a desfăşurat icircn Laboratorul de Biologie Moleculară al

Institutului Regional de Oncologie Iaşi prin metoda citometriei icircn flux (19) Nivelul relativ de

expresie al receptorilor nucleari PPARα a fost determinat icircn diferite tipuri de leucocite

circulante polimorfonucleare (PMN) limfocite (Ly) Mo(Mo) şi eozinofile(Eo) Am utilizat o

metodă de citometrie icircn flux optimizată ldquoin houserdquo elaborată icircn cadrul Laboratorului de

Biologie Moleculară al IRO Iaşi Icircn cursul procesului de optimizare am testat mai multe

concentraţii ale anticorpului anti-PPARα 1100 1500 11500 14500 iar icircn urma

determinărilor efectuate şi a analizei statistice concentraţia 1500 a fost considerată optimă

pentru desfăşurarea studiului (tabel XXIII figura 51)

Tabel XXIII Optimizarea concentraţiilor Ac anti-PPARα Diferenţa

mediilor

valorilor

medii

PMN

Diferenţa

mediilor

mediane-

lor

PMN

Diferenţa

mediilor

valorilor

medii

Ly

Diferenţa

mediilor

mediane-

lor

Ly

Diferenţa

mediilor

valorilor

medii

Mo

Diferenţa

mediilor

mediane-

lor

Mo

Diferenţă 0 1300 1600 100 100 700 750

normal - 1100 650 1050 1050 1350 450 900

patologic 1500 2850 2750 3800 3600 2850 2400

11500 -1050 800 3500 3300 2250 1800

14500 2200 2150 1300 1100 2950 2850

AOptimizare

BRepetabilitate

Figura 51 Optimizarea concentraţiei anticorpului anti-PPARα

Icircn concordanţă cu literatura de specialitate icircn cercetarea efectuată intensitatea medie

de fluorescenţă (MFI) a fost utilizată ca măsură pentru evaluarea expresiei celulare a

receptorilor PPARα (212) Un exemplu de analiză a probelor este reprezentat icircn figura 52

Figura 52 Exemplu de analiză flowcitometrică pentru receptorul nuclear PPARα Graficul din stacircnga reprezintă distribuţia leucocitelor iar cel din dreapta ilustrează distribuţia

intensităţii de fluorescenţă pentru populaţiile de celule selectate

Intensitatea Medie a Fluorescenţei (MFI) a CD36 ca o măsură a nivelului relativ de

expresie a acestor receptori la nivelul membranei Mo a fost detectată printr-o metodă

convenţională pentru marcare de suprafaţă şi evaluare pe bază de citometrie icircn flux folosind

aceleaşi probe de sacircnge cu EDTA cu focalizare pe Mo şi utilizacircnd CD14 ca marker specific

pentru Mo (figura 53)

Figura 53Analiza

flowcitometrică

pentru marcajul

CD14 - CD36

Rezultate

Icircn cele două loturi au fost incluşi icircn studiu un număr de 57 de participanţi care au fost

investigaţi din punct clinic şi paraclinic Vacircrsta subiecţilor incluşi icircn studiu a fost cuprinsă

icircntre 18 şi 79 ani iar vacircrsta medie calculată a avut valoarea de 4805 plusmn 1587 ani Pentru sexul

masculin vacircrsta medie este de 4925plusmn1617 ani iar pentru sexul feminin 4689 plusmn1 5ani

diferenţa obţinută icircntre vacircrstele pacienţilor fiind statistic nesemnificativă (P = 085)

Analizacircnd vacircrstele subiecţilor din cele două loturi am observat că vacircrsta medie a pacienţilor

cu SM (5476 plusmn 1183 ani) a fost semnificativ mai mare (t-test P = 0003) decacirct icircn lotul

martor (4258 plusmn 169 ani) Pentru diagnosticul sindromului metabolic am calculat scorul de

SM bazacircndu-ne pe criteriile Harmonised I Conform criteriilor diagnostice din cei 57 de

subiecţi investigaţi un număr de 26 participanţi (46) au fost incluşi icircn lotul cu SM (Lot

SM) iar 31 de subiecţi(54) nu au prezentat acest sindrom constituind lotul martor (Lot

Non-SM) Din punct de vedere al repartiţiei pe sexe nu au existat diferenţe statistic

semnificative raportul bărbaţifemei fiind de 0961 Din totalul celor 28 de bărbaţi incluşi icircn

studiu 4285 (12 bărbaţi) au icircntrunit cel puţin trei criterii diagnostice pentru SM fiind

incluşi icircn lotul SM Icircn acelaşi timp 14 femei reprezentacircnd 4827 din subiecţii de sex

feminin au icircntrunit condiţiile pentru includerea icircn lotul pacienţilor cu SM Valoarea medie

determinată pentru scorul de SM a arătat prezenţa unor valori semnificativ statistic mai mari

din punct (t-test P lt 00001) icircn lotul SM (769plusmn176) comparativ cu lotul martor (174 plusmn

184) Am studiat comparativ media valorilor măsurate ale criteriilor componentelor SM

Analiza statistică a arătat valori semnificativ statistic mai mari pentru CA TG glicemie TAS

şi TAD (plt0001) icircn lotul SM comparativ cu lotul normal Concomitent calculul statistica

evidenţiat o scăderea semnificativă a HDL-colesterolului icircn lotul cu SM comparativ cu

subiecţii din lotul martor (Non-SM) Aplicacircnd testul z am comparat ponderea pacienţilor

diagnosticaţi cu HTA dislipidemie şi tulburări ale metabolismului glucidic icircn lotul SM versus

lot Non-SM şi am constatat prezenţa acestor afecţiuni icircntr-un procent mai mare semnificativ

statistic icircn lotul SM ((plt0001)

Utilizacircnd testul t Student am calculat diferenţele statistice şi icircntre alți parametri

studiaţi care sunt factori de risc cardio-vascular dar care nu sunt componente ale SM Icircn lotul

cu SM valorile acidului uric fibrinogenului Col total Non-HDL-col şi LDL-col au fost

semnificativ mai mari comparativ cu lotul martor (tabel XXVI) Analizacircnd valorile medii ale

populaţiilor de leucocite am identificat doar pentru populaţia de Eo diferenţe statistice icircntre

cele două loturi numărul Eo icircn lotul SM fiind semnificativ mai mare decacirct icircn lotul martorTot

pentru caracterizarea celor două loturi am analizat prezenţa antecedentelor

heredocolaterale (AHC) de diabet zaharat boala cardiovasculară şi dislipidemie pentru toţi

subiecţii investigaţi Astfel existenţa AHC de HTA a fost declarată de 2580 din subiecţii

incluşi icircn lotul martor respectiv de 5384 din numărul pacienţilor cu SM Antecedentele

heredocolaterale de dislipidemie au fost prezente la 3461 din pacienţii cu SM icircn timp ce icircn

lotul martor anamneza a evidenţiat aceste antecedente la 3548 din subiecţi

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα

Icircn cercetarea desfăşurată am utilizat intensitatea medie de fluorescenţă (MFI) ca

măsură a nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn leucocitele studiate Pentru

populaţiile de leucocite analiza computerizată a probelor luate icircn studiu a furnizat valori

pentru MFI a receptorilor PPARα icircn funcţie de cantitatea de anticorpi anti-PPARα marcaţi cu

fluorocrom care se leagă de aceste celule şi apoi sunt captaţi de citometru (figura 59)

A Lot Non - SM

B Lot SM

Figura 59 Analiza flowcitometrică pentru receptorii PPARα icircn leucocite A lot normal B lot SM

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Mo

Analiza probelor efectuată conform protocolului de lucru descris a arătat prezenţa

PPARα icircn Mo recoltate din sacircngele tuturor subiecţilor incluşi icircn această cercetare Pentru toţi

participanţii investigaţi analiza MFI a Ac anti - PPARα icircn populaţia de Mo (Mo) a arătat un

interval de variaţie icircntre [786 395] Valoarea medie a nivelului de expresie relativă a PPARα

calculată pentru Mo a fost de 23210 plusmn7860 Pentru ambele loturi de studiu pacienţilor cu

SM testul Testul Shapiro-Wilk a arătat distribuţia normală a valorilor obţinute pentru nivelul

de expresie al PPARα icircn Mo

Tabel XXVIII Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn Mo

Lot SM Lot Non-SM

N 26 31

Media 22819 23538

SD 5819 7717

Mediana 22400 22600

Minimum 12800 78600

Maximum 35800 37900

Percentila 25 18300 18300

Percentila 75 26200 30350

Pentru pacienţii din lotul SM valoarea medie a MFI icircn Mo a fost de 22819 plusmn 5880 iar

pentru lotul martor s-a calculat o valoare medie a MFI a Ac anti-PPARα de 23538 plusmn 7717

Distribuţia statistică a frecvenţei valorilor MFI obţinute pentru nivelul de expresie a PPARα

icircn Mo subiecţilor din cele două loturi a fost reprezentată icircn figura 511

Figura 511 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti-PPARα icircn Mo

Sub forma unei diagrame de control Shewhart am reprezentat variaţia intensităţii medii de

fluorescenţă pentru anticorpii anti-PPARα icircn MoVariaţia nivelului de expresie relativă a

receptorilor PPARα icircn Mo subiecţilor studiaţi este ilustrată icircn fig 512 513

Figura 512 Lot SM Variaţia

expresiei relative a PPARα icircn Mo

Număr pacienţi

26

Minim 128

Maxim 358

Media 22819

DS 5819

25 din 26 valori ale MFI s-au icircncadrat

icircn intervalul Media plusmn 2DS

Figura 513 Lot Non-SM Variaţia

expresiei relative a PPARα icircn Mo

Număr pacienţi 31

Minimum 786

Maximum 379

Media 23538

DS 7717

Cu excepţia unei singure

determinări valorile calculate s-au

icircncadrat icircn Media plusmn 2DS

Utilizacircnd testul parametric t-Student pentru variabilele cu distribuţie normală am

comparat valoarea medie a intensităţii de fluorescenţă a Ac anti-PPARα icircn lotul cu SM versus

subiecţi fără SM (Lot Non-SM) Analiza statistică efectuată nu a identificat diferenţe icircntre

50 100 150 200 250 300 350 400 450

0

5

10

15

20

25

30

35

MFI anti-PPAR a

Frecv

enta

relati

va (

)

Lot SM

0 50 100 150 200 250 300 350 400 450 500

0

5

10

15

20

25

30

35

MFI anti-PPAR a

Frecv

enta

relati

va (

)

Lot martor

1 6 11 16 21 26 31

0

50

100

150

200

250

300

350

400

450

MFI

anti-

PPAR

a

2282

1106

3458

518

4046

Media

LCI

LCI

1 6 11 16 21 26 31 36

-100

0

100

200

300

400

500

MFI a

nti-PP

AR

a

2354

810

3897

39

4669LCS

LCI

Media

cele două loturi icircn ceea ce priveşte expresia PPARα la nivelul Mo circulante (t- Test P=

069)

Studiul receptorilor PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de AHC şi dislipidemie

Nivelul de expresie al receptorilor PPARα α icircn Mo tinde să fie mai scăzut la subiecţii

cu AHC de HTA comparativ subiecţii care nu au declarat AHC de HTA (P= 006 fig 515)

AHC HTA

Număr 22

Mediana 19950

Percentila 25 17800

Percentila 75 22700

AHC HTA absente

Număr 35

Mediana 24800

Percentila 25 19025

Percentila 75 31700

Figura 515 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Mo funcţie de AHC de HTA

Nu s-au calculat diferenţe semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor

PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de dislipidemie atunci cacircnd aceştia au fost comparaţi cu

subiecţii fără AHC de tulburări ale metabolismului lipidic (t- Test P= 020)

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn limfocite

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn populaţia de Ly a

demonstrat prezenţa receptorilor PPARα icircn Ly tuturor subiecţilor studiaţi Pentru toţi

participanţii investigaţi analiza MFI a Ac anti - PPARα icircn populaţia de Ly a relevat un

interval de variaţie icircntre [748 314] iar valoarea medie a MFI a fost de 18058 plusmn 5600

Pentru ambele loturi aplicarea testului Shapiro-Wilk a evidenţiat distribuţia normală a

valorilor determinate pentru nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Ly Pentru

pacienţii cu SM valoarea medie a MFI determinată pentru expresia PPARα icircn populaţia de

Ly a fost de 18178 plusmn 61 16 iar pentru lotul martor a fost de 16800 plusmn 5229

Tabel XXX Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn limfocite

Lot SM Lot Non-SM

N 26 31

Media 181781 179574

SD 611694 522907

Mediana 165000 168000

Minimum 81300 74800

Maximum 314000 301000

Percentila 25 13400 - 145750

Percentila 75 21800 21700

Distribuţia frecvenţei valorilor MFI a Ac anti-PPARα icircn Ly este redată icircn figura 518

Figura 518 Distribuţia frecvenţelor relative a MFI a Ac anti-PPARα icircn Ly

94 din determinările efectuate pentru determinarea nivelului de expresie relativă al

MFI

ant

iPPA

R

a_Mo

190

200

210

220

230

240

250

260

270

280

DA NU

AHC HTA

P=006

50 89 128 167 206 244 283 322 361 400

0

5

10

15

20

25

30

35

MFI anti-PPAR a

Frecv

enta

relati

va (

)

Lot SM

0 50 100 150 200 250 300 350

0

5

10

15

20

25

30

35

40

MFI anti-PPAR a

Frec

venta

relat

iva (

)

Lot Non-SM

receptorilor PPARα icircn limfocitele subiecţilor cu SM s-au icircncadrat icircn intervalul Media plusmn 2DS

Figura 5 19 Lot SM Variaţia expresiei

relative a PPARα icircn Ly

Număr pacienţi 26

Minimum 813

Maximum 31400

Media 18178

Deviaţia Standard 6116

25 valori s-au icircncadrat icircn Media plusmn 2DS

Pentru lotul Non-SM diagrama de control (figura 520) a arătat toate valorile

determinate pentru lotul Non-SM se icircncadrează icircntre LCS şi LCI

Figura 520 Lot Non -SM Variaţia

expresiei relative a PPARα icircn Ly

Număr pacienţi 31

Minimum 748

Maximum 30100

Media 179574

Deviaţia Standard 5229

96 din valori icircncadrate icircn Media plusmn 2DS

Aplicarea testului t-Student pentru valorile medii ale intensităţii de fluorescenţă ale

PPARα icircn Ly nu a arătat existenţa unei diferenţe statistic semnificative icircntre lotul cu SM şi

lotul martor(t- Test P= 088)

Analiza receptorilor PPARα icircn Ly subiecţilor cu AHC de HTA şi dislipidemie

Studiind populaţiile de Ly la subiecţii care au prezentat AHC de hipertensiune

arterială analiza flowcitometrică a relevat existenţa unor valori mai mici pentru MFI la aceşti

subiecţi comparativ cu cei fără AHC de HTA (fig 522) deşi scăderea observată nu a

icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică (t- Test P = 009)

AHC HTA

Număr 22

Mediana 16000

Percentila 25 12700

Percentila 75 17100

AHC HTA absenţe

Număr 35

Mediana 18700

Percentila 25 14900

Percentila 75 23175

Figura 522 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Ly funcţie de AHC de HTA

Nu am calculat diferenţe statistic semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor

PPARα icircn populaţiile de Ly ale subiecţilor la care am identificat AHC de dislipidemie

comparativ cu cei care nu au declarat antecedente familiale de dislipidemie (t- Test P= 051)

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn neutrofile (PMN)

Analiza flowcitometrică a evidenţiat prezenţa PPARα icircn PMN recoltate din sacircngele

venos al tuturor participanţilor la studiu Pentru toţi subiecţii investigaţi analiza MFI a Ac -

PPARα icircn populaţia de PMN a relevat un interval de variaţie de [163419] iar valoarea medie

a MFI pentru Ac anti-PPARα a fost de 26392 plusmn 7064 Testul Shapiro-Wilk a arătat o

distribuţie normală a valorilor intensităţii medii de fluorescenţă a anticorpilor anti-PPARα atacirct

icircn lotul pacienţilor cu SM cacirct şi icircn lotul martor

1 6 11 16 21 26 31

-50

0

50

100

150

200

250

300

350

400

MFI

anti-

PPAR

a

1818

595

3041

-17

3653

Media+2DS

Media- 2DS

1 6 11 16 21 26 31 36

0

50

100

150

200

250

300

350

MFI

ant

i-PPA

R

a

1796

750

2841

227

3364

Media+2DS

Media

Media- 2DS

MFI

anti-

PPAR

a Ly

130

140

150

160

170

180

190

200

210

DA NU

AHC HTA

P=009

Tabel XXXII Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn PMN

Lot SM Lot Non-SM

N 26 31

Media 26273 26480

SD 6915 7088

Mediana 25900 25500

Minimum 17200 16300

Maximum 39500 41900

Percentila 25 19800 19600

Percentila 75 30500 31500

Icircn cele două loturi distribuţia frecvenţei valorilor nivelului relativ de expresie a

receptorilor PPARα icircn PMN a fost reprezentată sub formă de histograme (fig 525)

Figura 525 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti-PPARα icircn PMN

Pentru cei 26 de pacienţi din lotul cu SM a valoarea medie a nivelului de expresie

relativă a receptorilor PPARα icircn PMN a fost de 26273 plusmn 6915 Studiind diagrama Shewhart

din figura 526 se observă că toate valorile obţinute pentru nivelul de expresie relativă

PPARα icircn PMN investigate se icircncadrează icircntre limitele definite de valorile medii plusmn 2DS

Figura 526 Lot SM

Variaţia expresiei relative a PPARα icircn

PMN

Număr pacienţi 26

Minimum 17200

Maximum 39500

Media 26273

Deviaţia Standard 6915

Valorile MFI icircncadrate icircn Media plusmn 2DS

Pentru lotul martor valoarea medie calculată a MFI a anticorpilor anti-PPARα a fost de

26480 plusmn 7088 peste 95 din valorile MFI fiind cuprinse icircn Media plusmn 2DS (figura 527)

Figura 527 Lot Non-SM Variaţia expresiei

relative a PPARα icircn PMN

Număr pacienţi 31

Minimum 16300

Maximum 41900

Media 26480

Deviaţia Standard 7088

30 valoriicircn Media plusmn 2DS

Pentru PMN analiza statistica nu a arătat existenţa unei diferenţe statistic semnificative icircntre

nivelul de expresie relativă a PPARα la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii din lotul

Non-SM (t- Test P= 090) Studiind populaţiile de PMN la subiecţii care au prezentat AHC

de HTA nu am calculat o diferenţă statistic semnificativă icircntre expresia receptorilor PPARα

la subiecţii cu istoric familial de hipertensiune arterială comparativ cu cei pentru care nu s-au

notat AHC de HTA (t- Test P= 013)De asemenea am identificat diferenţe icircntre nivelul de

expresie al PPARα icircn PMN subiecţilor care prezentau AHC de dislipidemie comparativ cu

cei fără AHC de dislipidemie (t- Test P= 017)

50 100 150 200 250 300 350 400 450 500

0

5

10

15

20

25

30

35

MFI anti-PPAR a

Frecve

nta rel

ativa (

)

Lot SM

50 100 150 200 250 300 350 400 450 500

0

5

10

15

20

25

30

MFI anti-PPAR a

Frecv

enta

relati

va (

)

Lot Non-SM

1 6 11 16 21 26 31

0

50

100

150

200

250

300

350

400

450

500

MFI

anti-

PPA

R

a

2627

1244

4010

553

4702

Media + 2DS

Media - 2 DS

Media

1 6 11 16 21 26 31 36

0

50

100

150

200

250

300

350

400

450

500

MFI

anti-

PPAR

a

2648

1230

4066

522

4774

Media+ 2DS

Media - 2DS

Media

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile Tabel XXXIV Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn Eo

Lot SM Lot Non-SM

N 26 31

Mediaplusmn SD 141057 plusmn 47604 172209 plusmn 37565

Mediana 142450 171300

Minimum 35000 68500

Maximum 233700 250600

Percentila 25 119300 153225

Percentila 75 169700 199550

Am studiat nivelul relativ de expresie a receptorilor PPARα icircn Eo iar rezultatele au

fost figurate sub forma de histograme (figura 532)

Figura 532 Distribuţia frecventelor relative ale valorilor MFI anti- PPARα icircn Eo

Din diagrama Shewhart (figura 533) se observă că toate valorile determinate pentru

nivelul de expresie relativă a PPARα icircn Eo pentru lotul SM s-au icircncadrat icircn [Media plusmn 3 DS]

peste 90 din determinări fiind cuprinse icircn [Media plusmn 2 DS] iar icircn [Media plusmn 1 DS] sunt

incluse peste 65 din valorile MFI

Figura 533 Lot SM

Variaţia expresiei relative a PPARα icircn Eo

Număr pacienţi 26

Minimum 35000

Maximum 233700

Media 141057

Deviaţia Standard 47604

24 valori icircncadrat eicircn [Media plusmn 2DS]

Pentru subiecţii incluşi icircn lotul martor analiza diagramei (figura 534) a arătat că

toate cele 31 de valori ale MFI pentru PPARα icircn Eo se icircncadrează icircn [Media plusmn 3DS] iar 30

dintre acestea se icircncadrează icircn [ Media plusmn 2 DS]

Figura 534 Lot Non -SM

Variaţia expresiei relative a PPARα icircn Eo

Număr pacienţi 31

Minimum 685

Maximum 2506

Media 172209

Deviaţia Standard 375 65

30 valori icircncadrate icircn [Media plusmn 2DS]

Comparacircnd subiecţii cu SM cu cei din lotul martor am observat o scădere

semnificativă statistic a MFI a Ac anti - PPARα icircn Eo pentru pacienţiir cu SM ( figura 535)

PPARα Eo Lot Non-SM

Număr 31

Mediana 171300

Percentila 25 152325

Percentila 75 199550

PPARα Eo Lot SM

Număr 26

Mediana 142450

Percentila 25 119300

Percentila 75 169700

Figura 5 35 Comparaţie icircntre nivelul de expresie a PPARα icircn Eo

0 500 1000 1500 2000 2500 3000

0

10

20

30

40

50

MFI anti-PPAR a

Frecvent

a relativa

()

Lot SM

400 800 1200 1600 2000 2400 2800

0

5

10

15

20

25

30

35

40

45

MFI anti-PPAR a

Frecenta

relativa

()

Lot Non-SM

1 6 11 16 21 26 31

-500

0

500

1000

1500

2000

2500

3000

MFI a

nti-PP

AR

a

14106

4765

23447

94

28117

Media + 2DS

Media- 2DS

LCI

LCS

1 6 11 16 21 26 31 36

500

1000

1500

2000

2500

3000

MFI an

ti-PPA

R a

17221

9708

24734

5951

28490

LCI

Media-2DS

Media

Media +2 DS

LCS

1200

1300

1400

1500

1600

1700

1800

1900

Lot SM Lot Non-SM

P=00072

Cu ajutorul curbei ROC am evaluat posibilitatea utilizării MFI a Ac anti - PPARα icircn

Eo ca marker pentru diagnosticul SM Valoarea MFI a Ac anti - PPARα icircn Eo care prezice cu

cea mai mare acurateţe prezenţa SM a fost de 1533 (punctul de ldquocut-offrdquo) pentru care am

calculat o sensibilitate de 5652 şi o specificitate de 7778 Calculul ariei AUC a furnizat

valoarea de 0663 şi deci determinarea parametrului MFI anti- PPARα icircn Eo are valoarea

unui test cu acurateţe redusatilde icircn diagnosticul SM Studiind expresia PPARα icircn Eo la subiecţii

care au prezentat AHC de HTA am observat o scădere semnificativă statistic (P = 00023) a

expresiei PPARα la subiecţii cu istoric familial de HTA comparativ cu subiecţii fatilderatilde AHC de

HTA (figura 537)

AHC HTA

Număr 22

Mediana 148800

Percentila 25 116425

Percentila 75 170750

AHC HTA absente

Număr 35

Mediana 170850

Percentila 25 143700

Percentila 75 195000

Figura 537 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Eo funcţie de AHC de HTA

Studiind subiecţii cu AHC declarate de dislipidemie nu am identificat diferenţe icircntre

nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Eo subiecţilor cu AHC de dislipidemie

comparativ cu cei care nu au declarat prezenţa AHC de dislipidemie (t - Test P = 067)

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor CD36

Am studiat expresia receptorilor CD36 icircn Mo subiecţilor incluşi icircn studiu

Lot Non - SM

BLot SM

Figura 539 Analiza flowcitometrica pentru receptorii CD36 icircn Mo

Pentru toţi participanţii la studiu valorile MFI au variat icircn intervalul [817 6933] iar

valoarea medie a MFI a Ac anti-CD36 a fost de 397133 plusmn 120902 Tabel XXXVII Statistică descriptivă pentru a CD36 icircn Mo

Lot SM Lot Non-SM

Media 429034 370377

Deviatia Standard 109051 125514

Mediana 411000 362800

Minimum 266400 81700

Maximum 693300 616800

Percentila 25 346200 273750

Percentila 75 469000 453300

Distribuţia frecvenţelor relative a MFI au fost prezentate sub formă histogramelor

Figura 541 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti - CD36 icircn Mo

MFI

ant

i-PPA

R a Eo

1000

1100

1200

1300

1400

1500

1600

1700

1800

1900

DA NU

AHC HTA

P=00023

1000 2000 3000 4000 5000 6000 7000 8000

0

5

10

15

20

25

MFI anti-CD36

Frecve

nta rela

tiva (

)

Lot SM

0 1778 3556 5333 7111

0

5

10

15

20

25

30

35

MFI anti-CD36

Frecve

nta rel

ativa (

)

Lot Non - SM

Referitor la lotul SM 92 din valorile MFI a Ac anti- CD36 s-au icircncadrat icircn

intervalul Media plusmn 2 DS (figura 542) iar pentru lotul martor peste 90 dintre acestea icircn

Media plusmn 2 DS (figura 543)

Figura 542 Lot SM

Variaţia MFI anti-CD36 icircn Mo

Număr pacienţi 26

Minimum 2664

Maximum 6933

Media 429034

Deviaţia Standard 109051

Figura 543 Lot Non -SM

Variaţia MFI anti- CD36 icircn Mo

Număr 31

Minimum 81700

Maximum 616800

Media 370377

Deviaţia Standard 125514

Comparacircnd subiecţii cu SM cu cei din lotul normal am constatat o tendinţă de creştere

a expresiei CD36 icircn lotul cu SM((t - Test P= 0067)

MFI anti - CD36 Lot Non-SM

Număr 31

Mediana 3628

Percentila 25 2737

Percentila 75 4533

MFI anti - CD36 Lot SM

Număr 26

Mediana 4110

Percentila 25 3462

Percentila 75 4690

Figura 544 Comparaţie icircntre cel două loturi privind MFI anti - CD36 icircn Mo

Referindu-ne la subiecţii cu AHC de HTA am observat o tendinţă de creştere a

valorilor MFI anti-CD36 comparativ cu cei care nu au avut AHC de HTA (t - Test P = 0 08)

AHC HTA

Număr 22

Mediana 442800

Percentila 25 355275

Percentila 75 519475

AHC HTA absenţe

Număr 35

Mediana 377400

Percentila 25 316900

Percentila 75 443400

Figura 545 Comparaţie icircntre expresia CD36 icircn Mo funcţie de AHC de HTA

Nu s-au calculat diferenţe semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor

PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de dislipidemie atunci cacircnd aceştia au fost comparaţi cu

subiecţii fără AHC de dislipidemie (t - Test P=031)

Corelaţii icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα si CD36

Studiind valorile intensităţii medii de fluorescenţă a Ac anti-PPARα icircn Mo Ly şi

PMN am observat că nivelul de expresie celularatilde a PPARα icircn Mo Ly şi PMN sunt corelate

puternic pozitiv atacirct icircn lotul SM cacirct şi icircn lotul martor(fig547 548)

1 6 11 16 21 26 31

0

1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

8000

Pacienti

MFI a

nti-CD

36

42903

21093

64714

10188

75619

LCI

Media

LCS1 6 11 16 21 26 31 36

-1000

0

1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

8000

MFI a

nti- C

D36

37038

11935

62141

-616

74692Media + 2 DS

Media

Media - 2 DS

3200

3400

3600

3800

4000

4200

4400

4600

4800

Lot SM Lot Non-SM

P = 00676

MFI

anti-

CD36

3400

3600

3800

4000

4200

4400

4600

4800

5000

DA NU

AHC HTA

P = 008

Figura 547 Studiul relatiilor dintre

receptorii PPARα icircn SM A Mo vs PMN B Mo vs Ly

C PMN vs Ly Graficul ilustrează coeficienţii r P dreapta de

regresie (linia centrala) intervalul de icircncredere

95 şi intervalul de predicţie 95

Figura 548 Corelaţii icircntre receptorii PPARα icircn lotul

martor

A Mo vs PMN

B Mo vs Ly

C PMN vs Ly

Tot pentru lotul SM cacircnd am evaluat relaţia dintre nivelul de expresie relativă a

receptorilor PPARα icircn Eo şi nivelul de expresie relativa a receptorilor CD 36 am obţinut o

corelaţie negativă (r = - 05 P = 001) (fig 549 A)

50 100 150 200 250 300 350 50

100

150

200

250

300

350

400

450

500

PPARα Ly

PPARα PMN

y = 56641 + 1159 x r = 086 P lt 0001

C

50 100 150 200 250 300 350 400 0

50

100

150

200

250

300

350

PPARα Mo

PPARα Ly

y = 36665 + 0607 x r = 090 P lt 0001

B

150 200 250 300 350 400 450 0

50 100 150 200 250 300 350 400 450 500

PPARα PMN

PPARα Mo

y = 2505 + 0879 x r = 081 P lt 0001

A

50 100 150 200 250 300 350

50 100 150 200 250 300 350 400 450 500

PPARα Ly

PPARα PMN

y = 95668 + 0919 x r = 081 P lt 0001

C

100 150 200 250 300 350 400

0

50

100

150

200

250

300

350

400

PPARα Mo

PPARα Ly

y = -7503 + 0829 x r = 079 P lt 0001

B

100 150 200 250 300 350 400

50

100

150

200

250

300

350

400

450

500

PPARα Mo

PPARα PMN

y = 61384 + 0882 r = 074 P lt 0001

A

Figura 549 Corelaţii icircntre expresia PPARα icircn Eo şi alte tipuri de receptori investigaţi A PPARα Eo şi CD 36 (Lot SM) B PPARα Eo şi PPARα Mo( Lot Non-SM)

Icircn lotul martor am identificat o asociere moderată pozitivă (r = 038 P = 0033) icircntre

nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Eo şi Mo (figura 549B) corelaţie absentă icircn

lotul pacienţilor cu SM

Corelaţii dintre receptorii studiaţi şi componentele sindromului metabolic

Icircn lotul de control analiza statistică a relevat faptul că icircntre circumferinţa

abdominală (CA ) şi nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Mo Ly şi PMN există o

corelaţie inversă adică scăderea expresiei PPARα la nivelul acestor populatii celulare ar fi

icircnsoţită de creşterea CA (figura 550

Figura 550Corelaţii dintre receptorii

PPARα si CA A Mo B Ly C PMN

La pacienţii cu SM am notat o corelatie moderată negativă statistic semnificativă

icircntre TG şi valorile MFI a Ac anti- PPARα icircn Mo şi Ly( fig 551)

150 200 250 300 350 400 450 50

60

70

80

90

100

110

PPARα PMN

CA r = - 040 P = 0024

C

50 100 150 200 250 300 350 50

60

70

80

90

100

110

PPARα Ly

CA r = - 046 P = 0009

B

50 100 150 200 250 300 350 400 50

60

70

80

90

100

110

PPARα Mo

CA r = - 042 P = 0017

A

50 100 150 200 250 300 350 400 500

1000

1500

2000

2500

3000

PPARα Mo

PPARα Eo

r = 038 P = 0033

B

0 500 1000 1500 2000 2500 1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

8000

PPARα Eo

CD36

r = 050 P = 0010

A

Figura 551 Lot SM Corelaţie icircntre expresia PPARα şi TG (A Mo B Ly)

Analizand corelatia dintre receptorii CD36 si valorile TA la pacientii cu SM am observat

o asociere pozitivă asteptată intre TAD si nivelul de expresie al receptorilor CD36 (fig 552)

Figura 552 Lot SM Corelaţii icircntre expresia

receptorilor CD36 şi valorile tensiunii arteriale

diastolice

Studiind corelaţiile dintre receptorii PPARα şi HDL-col la subiecţii din lotul martor am

notat o asociere pozitivă icircntre expresia PPARα icircn Mo şi Ly cu HDL-col (fig 553)

Figura 553 Lot martor Corelaţii icircntre HDL-col şi expresia PPARα icircn Mo(A) Ly(B)

Icircn lotul normal am evidenţiat corelaţii pozitive moderate dar semnificative statistic icircntre

CA şi valorile TAS (r = 062 P lt 0001) respectiv TAD (r = 050 P=0004) precum şi icircntre

CA şi glicemia subiecţilor normali (r = 052 P = 0003) Aceste date icircmpreună cu relaţia

invers proporţională identificată icircntre HDL-col şi CA (r = 050 P = 001) susţin validitatea

acestui studiu Icircn lotul subiecţilor cu SM am observat o corelaţie moderat pozitivă icircntre

expresia PPARα icircn populaţiiile de Mo şi Eo şi concentraţia a HDL-col (fig 554)

B

100 150 200 250 300 350 20

30

40

50

60

70

80

90

100

PPARα Ly

HDL-col-(mgdl)

r = 036 P = 0046

A

150 200 250 300 350 400 20

30

40

50

60

70

80

90

100

PPARα Mo

HDL-col-(mgd)l

r = 035 P = 005

70 75 80 85 90 95 100 1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

8000

TAD (mmHg)

CD36

r = 048 P = 0013

B

50 100 150 200 250 300 350 -100

0

100

200

300

400

500

PPARα Ly

TG(mgdl)

r = - 042 P = 003

A

50 100 150 200 250 300 350 400 -100

0

100

200

300

400

500

PPARα Mo

TG ( mgdl) r =- 0 43 P = 0027

Figura 554 Corelaţii icircn SM icircntre HDL-col şi expresia PPARα icircn Mo (A) şi Eo(B)

Corelaţii icircntre nivelul de expresie relativă a PPARα şi markeri ai disfuncţiei

endoteliale şi inflamaţiei cronice

Deşi nu a icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică am reţinut corelaţia invers

proporţională (r = - 0331 P = 006) dintre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα

icircn PMN şi concentraţia serică a Non-HDL-colesterolului

Studiind relaţiile dintre parametri icircn lotul de pacienţi cu SM am observat o corelaţie

moderată invers proporţională icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Eo şi

acidul uric seric (figura 555 A) corelaţie absentă la subiecţii fără SM

Figura 555 Lot SM corelaţia dintre expresia PPARα icircn Eo şi acidul uric (A) respectiv

PPARα şi fibrinogen (B)

Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P=008) am notat pentru

pacienţii cu SM corelaţia invers proporţională dintre expresia PPARα icircn Eo şi concentraţia

serică a fibrinogenului ( figura 555B)

V5 Discuţii

Icircn cadrul lucrării de doctorat am studiat nivelul de expresie relativă a PPARα icircn

leucocitele pacienţilor cu SM comparativ cu cea a subiecţilor normali Expresia PPARα a fost

studiată icircn paralel cu cea a CD36 glicoproteină exprimată pe suprafaţa a numeroase celule

din organismul uman inclusiv pe cea a Mo şi macrofagelor Prin funcţia sa de receptor pentru

particulele oxidate de LDL CD36 cunoscut ca bdquoscavenger receptorrdquo de clasa B sau

bdquotrombospodin receptorrdquo contribuie la dezvoltarea inflamaţiei de la nivel endotelial şi

formarea plăcii de ateroscleroză Referitor la studiul PPARα icircn Eo icircn sindromul metabolic

menţionăm că studiul nostru este primul care arată că nivelul de expresie a proteinei PPARα

icircn Eo măsurat prin citometrie icircn flux este semnificativ mai redus la pacienţii care sunt

diagnosticaţi cu acest sindrom De asemenea icircn lotul cu SM cercetat icircn cadrul studiului

receptorilor PPARα numărul Eo circulante a fost semnificativ mai crescut la pacienţii cu SM

B

0 500 1000 1500 2000 2500 200

250

300

350

400

450

PPARα Eo o

Fibrinogen mgdl

r =- 036 P = 008

0 500 1000 1500 2000 2500 1 2 3 4 5 6 7 8 9

10 11

PPARα Eo_

Acid uric(mgdl) r = 048 P = 0014 A

0 500 1000 1500 2000 2500 10

20

30

40

50

60

70

80

PPARα Eo

HDL(mgdl)

r = 044 P = 0024

B

100 150 200 250 300 350 400 10

20

30

40

50

60

70

80

PPARα Mo

HDL( mgdl)

r = 046 P = 0019

A

(P = 003) Aceste constatări conduc la ipoteza că Eo joacă un rol special icircn mecanismele

patogenice declanşate icircn sindromul metabolic şi că receptorii PPARα sunt importanţi icircn

implicarea Eo icircn obezitate şi insulinorezistenţă Creşterea numărului de Eo circulante este

urmată de eliberarea mediatorilor proinflamatori iar reducerea expresiei PPARα icircn Eo

determină perturbarea mecanismelor de control al inflamaţiei cu exacerbarea cascadei

proinflamatorii Consecutiv se agravează disfuncţia endotelială şi se accelerează progresia

leziunilor de ateroscleroză Extrapolacircnd aceste ipoteze putem spune că asocierea raportată

dintre boala ischemică coronariană şi Eo poate fi şi consecinţa exacerbării cascadei

proinflamatorii de la nivel vascular produsă datorită scăderii expresiei PPARα icircn Eo iar

creşterea numărului de Eo circulante poate reprezenta o adaptare a organismului uman care

icircncearcă să suplinească deficitul de receptori PPARα Analizacircnd curba ROC pentru

intensităţile medii de fluorescenţă determinate pentru anticorpii anti- PPARα icircn Eo am

obţinut pentru acest biomarker o sensibilitate a testului de 565 şi o specificitate de 778

pentru un punct de cut-off de 1533 ( figura 536 ) Deşi aria AUC (Aria under the curve) egală

cu 0663 icircncadrează acest test ca avacircnd o acurateţe redusă observăm că că această valoare

este apropiată de determinările AUC pentru alţi factori (fibrinogen raport de aterogenitate

acid uric non- HDL-colesterol) cunoscuţi ca fiind implicaţi icircn aterogeneză şi inflamaţia

cronică (figura 431) Aceste remarci alături de faptul că icircn studiul receptorilor PPARα icircn

leucocite am inclus subiecţi la primul diagnostic de SM creează premisa integrării

determinării expresiei relative a receptorilor PPARα icircn diagnosticul complex al sindromului

metabolic Putem spune că icircn final studiul expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofilele

circulante se dovedește a fi util icircn diagnosticul precoce la nivel molecular al SM permiţacircnd

identificarea timpurie a unor indivizi cu risc cardiometabolic crescut Astfel intervenţia

precoce asupra subiecţilor cu deficit de PPARα icircn Eo contribuie la managementul eficient al

afecţiunilor degenerative icircn care inflamaţia cronică icircndeplineşte un rol primordial Referitor

la populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările efectuate prin citometrie de flux nu au

arătat existenţa unor diferenţe statistice icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα

la subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali Rezultatele noastre pot fi

consecinţa caracteristicilor loturilor studiate (icircn studiul nostru au fost incluşi subiecţi recrutaţi

la primul diagnostic de SM şi icircn absenţa stimulării receptorilor PPARα cu droguri agoniste

PPARα) dar icircn acelaşi timp pot apare diferenţe datorită metodei utilizate (231 232 233)

Făcacircnd o paralelă cu un studiu publicat icircn 2013 icircn Europa (231) care a arătat creşterea

nivelului de expresie al PPARα icircn Ly şi Mo observăm că deşi numărul de subiecţi a fost

aproximativ egal (57 participanţi icircn studiul nostru 60 icircn studiul DAmore) subiecţii icircn studiul

amintit au fost recrutaţi dintr-o clinică cu profil medical la primul diagnostic de SM icircn timp

ce metoda utilizată a fost PCR (Polymerase Chain Reaction) mult mai fidelă decacirct citometria

icircn flux icircn studiul receptorilor nucleari De asemenea DAmore nu investighează expresia

PPARα icircn Eo şi PMN icircn cercetare fiind incluse doar celulele CD14+ (predominant Mo) şi

CD14- (predominant Ly) Deşi nu am obţinut diferenţe statistic semnificative icircntre cele două

loturi referitoare la nivelul de expresie relativă a PPARα icircn Mo Ly şi PMN am observat

corelaţii puternice semnificative statistic icircntre expresia receptorilor PPARα icircn aceste tipuri

celulare Rezultatele obţinute sugerează existenţa unui mecanism diferit molecular de control

icircn eozinofile care reglează cantitatea de proteină PPARα icircn eozinofile versus alte tipuri de

leucocite (la pacienţii cu SM) şi acest lucru este icircn concordanţă cu cercetările care descriu

expresia PPARα mRNA icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale

bronşice keratinocite) Studiind prin citometrie de flux nivelul de expresie relativă a

receptorului CD36 la nivelul Mo am arătat prezenţa acestuia icircn Mo tuturor subiecţilor

investigaţi Analizacircnd valorile intensităţii medii de fluorescenţă a CD36 icircn loturile studiate

am observat o tendinţă de creştere la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali

confirmacircnd implicarea receptorului CD36 icircn patogeneza acestuia Referitor la expresia

receptorului CD36 rezultatele obţinute sunt icircn consens cu studii anterioare care au arătat

creşterea expresiei CD36 la pacienţii cu SM şi diabet zaharat Astfel pe lacircngă diferenţa icircn

expresia CD36 s-au raportat şi corelaţii inverse icircntre expresia proteinei CD36 şi nivelul

adiponectinei Acelaşi studiu a evidenţiat o corelaţie pozitivă intre expresia CD36 cu expresia

receptorilor PPAR gamma relaţia cu PPARα nefiind investigată

Analiza de subgrup a relaţiilor dintre componentele SM și elementele moleculare

proinflamatorii studiate a relevat prezenţa unor asocieri semnificativ statistice icircntre acestea

Se argumentează astfel că veridicitatea studiului este susţinută de interdependenţele statistice

ale componentelor SM Determinarea coeficientului de corelaţie Icircn studiul nostru nivelul de

expresie relativă a PPARα s-a corelat moderat negativ (figura 550) cu CA a subiecţilor din

lotul normal pentru populaţiile celulare de Mo (r = - 0420 P = 001) Ly (r = - 046 P =

0009) şi PMN (r = - 040 P = 0024) date care sunt icircn concordanţă cu studiile care arată

rolul PPARα icircn furnizarea energiei prin beta-oxidarea acizilor graşi Icircn acelaşi timp icircn lotul

pacienţilor cu SM nu am identificat prezenţa unei asocieri icircntre nivelul de expresie relativă a

PPARα şi valoarea măsurată a CA Asocierea dintre expresia relativă a PPARα cu obezitatea

de tip central completează datele existente referitoare la reglarea homeostaziei energetice

conturacircnd un mecanism de control deficitar al aportului caloric al SM Icircn condiţiile icircn care

rezultatele obţinute prin metoda citometriei icircn flux nu au arătat existenţa unei corelaţii intre

expresia PPARα şi CA la pacienţii cu SM considerăm că ar fi necesar studiul

polimorfismului genei PPARA care ar putea aduce informaţii importante cu privire la

implicarea acestor receptori icircn apariţia obezităţii de tip central Subliniem acest lucru deoarece

obezitatea este o boală plurifactorială icircn care pe lacircngă factorii ereditari sunt implicaţi factori

de mediu psihologici şi sociali (245) Existenţa unei componente genetice a aterosclerozei

este legată şi de prezenţa unor variante ale genei PPARA asociate cu creşterea incidenţei bolii

cardiovasculare (82) şi a SM (249) Icircn studiul nostru am constatat o scădere statistic

semnificativă a nivelului expresiei relative a receptorilor PPARα icircn Eo la subiecţii cu

antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială comparativ cu subiecţii fără istoric

familial de hipertensiune (figura 537) Deşi diferenţele calculate icircntre loturile studiate nu au

icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică la subiecţii care au declarat prezenţa

antecedentelor familiale de hipertensiune arterială remarcăm o tendinţă de scădere a

intensităţii medii de fluorescenţă pentru Ac anti-PPARα la nivelul Mo (figura 515 P = 006

) icircn timp ce expresia relativă a CD36 icircnregistrează o creştere la acesti subiecţi (figura 545 P

= 008) Icircn contextul riscului cardiovascular foarte icircnalt al pacienţilor cu SM amintim şi

existenţa corelaţiei pozitive dintre valorile tensiunii arteriale diastolice şi expresia relativă a

receptorului CD36 (r = 0483 P = 0013) Această constatare este icircn consens cu studiile care

au arătat că forma solubilă circulantă a CD36 este asociată cu factorii de risc cardiovasculari

fiind propusă ca un marker precoce al aterosclerozei Activarea PPARα este asociată cu

modularea metabolismului lipidic iar agoniştii PPARα sunt utilizaţi icircn mod curent pentru

tratamentul dislipidemiei Sub acţiunea agoniştilor PPARα se obţine o icircmbunătăţire a funcţiei

endoteliale şi a parametrilor reologici funcţiile pleiotropice ale agoniştilor PPARα fiind

dovedite icircn trialuri clinice controlate Icircn populaţiile de Mo şi Ly la pacienţii cu SM

cercetarea noastră a evidenţiat o asociere negativă icircntre nivelul de expresie relativă a

receptorilor PPARα şi concentraţia TG serice (figura 551) Astfel scăderea expresiei

receptorilor PPARα este asociată cu creşterea nivelului TG serice contribuind la profilul

lipidic aterogen din SM Icircn conformitate cu literatura de specialitate icircn studiul efectuat prin

metoda citometriei icircn flux am găsit prezenţa asocierii icircntre nivelul de expresie al PPARα şi

HDL-colesterol Corelaţia pozitivă dintre nivelul de expresie relativă PPARα şi concentraţia

HDL-colesterolului a fost observată icircn lotul martor icircn populaţiile de Mo (r = 035 P = 005)

şi Ly ( r = 036 P = 004) (figura 553) susţinacircnd faptul că stimularea receptorilor PPARα

este legată de creşterea nivelului seric al lipoproteinelor cu densitate crescută La pacienţii cu

SM corelaţia dintre expresia PPARα şi HDL-colesterol a fost evidenţiată icircn populaţiile de Mo

(r = 046 P = 0019) şi eozinofile (r = 044 P = 0024) Se desprinde concluzia că icircn

sindromul metabolic scăderea concentraţiei HDL-colesterol este legată de diminuarea

nivelului de expresie relativă a receptorilor nucleari PPARα icircntărind afirmaţiile legate de

rolul acestor receptori icircn progresia bolilor cardiovasculare Studiind reactanţii de fază acută

analiza statistică a relevat o diferenţă semnificativă din punct de vedere statistic icircntre valorile

fibrinogenului la pacienţii cu SM atunci cacircnd au fost comparaţi cu subiecţii fără SM

(Capitolul IV4 P lt0 001 figura 427A) De asemenea icircn Capitolul V dedicat studiul

expresiei relative a receptorilor PPARα studiul valorilor fibrinogenului a arătat creşterea

acestui reactant de faza acută icircn lotul cu SM comparativ cu lotul martor (P lt0 0001) Icircn

studiul nostru am calculat o corelaţie invers proporţionala (r = - -036 fig 555B) icircntre

nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile şi concentraţia serică a

fibrinogenului Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P = 008) am reţinut

această asociere deoarece am demonstrat că nivelul de expresie relativă al receptorilor

PPARα icircn eozinofile este mai scăzut icircn sindromul metabolic iar sindromul metabolic este

caracterizat printr-un status inflamator cronic status caracterizat şi de creşterea concentraţiei

serice a fibrinogenului De asemenea notam ca această corelaţie negativă se află icircn

concordanţă cu studiile care arata că tratamentul cu agonişti PPARα (fibraţi) determina

scăderea nivelului seric al fibrinogenului contribuind la diminuarea inflamaţiei cronice din

sindromul metabolic şi icircn consecinţă amelioracircnd insulinorezistenţa

LIMITE ȘI DIFICULTĂȚI IcircN CERCETARE

Icircn cadrul Tezei de Doctorat am desfăşurat o cercetare care şi-a propus studierea

expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Recrutarea anamneza şi examinarea

clinică a subiecţilor au fost realizate icircn cadrul Cabinetului de Medicină de Familie CMI Popa

Elena din Iaşi iar determinările hematologice şi biochimice s-au efectuat icircn cadrul

Laboratorului Ambulatorului de Specialitate al Spitalului Universitar ldquoSfacircntul Spiridon din

Iaşi Icircn studiul epidemiologic şi al markerilor inflamatori al sindromului metabolic desfăşurat

au fost incluşi un număr de 1530 de participanţi pe baza liberului consimţămacircnt examinaţi icircn

perioada 01012013 - 31122013 Icircn continuare icircn perioada 1012014 - 28022014 pe baza

criteriilor de includere şi excludere icircn cele două loturi de studiu am investigat un număr de 57

de subiecţi prezentaţi la consultaţie icircn această perioadă şi care au icircndeplinit criteriile de

includere icircn cele două loturi (Lot SM şi Lot Control) constituite pentru evaluarea nivelului de

expresie a receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Explorarea nivelului de expresie

relativă a receptorilor PPARα s-a desfăşurat icircn cadrul Laboratorului de Biologie Moleculară

de pe platforma Institutului Regional de Oncologie Datorită resurselor proprii financiare

limitate trebuie să subliniez că aceasta cercetare nu ar fi fost posibilă fără contribuţia unor

cercetători din domeniul medical care m-au sprijinit necondiţionat atacirct icircn elaborarea

protocolului de lucru cacirct şi icircn efectuarea propriu-zisă a studiului Icircn acest sens menţionăm şi

faptul că pentru studiul receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic am utilizat aparatura

Laboratorului de Biologie Moleculară (care deserveşte icircntreaga Regiune a Moldovei) Pe

această cale mulţumesc personalului Laboratorului de Biologie Moleculară pentru ajutorul

acordat icircn desfăşurarea cercetării doctorale icircn condiţiile icircn care se observa creşterea

numărului de pacienţi care se adresează acestei platforme de cercetare Mulţumesc de

asemenea şi Doamnei Doctor Elena Butoi din cadrul Institutului de Biologie şi Patologie

Moleculară ldquoNicolae Simionescurdquo Bucureşti) pentru donaţia anticorpului secundar anti-

FITC Icircn consecinţă pentru recrutarea unui număr mai mare de participanţi ar fi fost necesară

icircn primul racircnd obţinerea unor resurse financiare suplimentare pentru achiziţia de aparatură şi

reactivi Totuşi numărul subiecţilor recrutaţi este apropiat de numărul subiecţilor raportaţi icircn

cadrul unor granturi de cercetare care aveau ca ţinta studiul expresiei receptorilor PPARα

(212 227 228 231) Rezultatele obţinute continua seria lucrărilor care arata importanta

studiului mecanismelor etiopatogenice ale sindromului metabolic patologie care se afla icircntr-o

continuă creştere La pacienţii cu SM pe lacircngă diminuarea nivelului de expresie a receptorilor

PPARα icircn eozinofile ne aşteptam şi la evidenţierea unor modificări icircn expresia PPARα şi icircn

populaţiile de Ly Mo şi PMN Acest fapt poate fi explicat de utilizarea unor celule provenite

de la pacienţi fără afectare cardiovasculară fără diabet zaharat şi necesită continuarea

studiului pe culturi celulare icircn condiţii de stimulare cu agonişti PPARα deziderat care

impune continuarea investigării expresiei PPARα printr-un grant de cercetare

ORIGINALITATEA ȘI CONTRIBUȚIILE INOVATIVE ALE TEZEI DE

DOCTORAT PERSPECTIVE DE CERCETARE

Evaluarea nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn leucocitele circulante

aduce noi perspective icircn studiul obezităţii şi sindromului metabolic Importanta studiului

expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic derivă din prevalenta crescută a

sindromului metabolic icircn populaţia cercetată la care se adaugă riscul cardiovascular foarte

icircnalt al acestor pacienţi cu implicaţii majore icircn sănătatea publică Rolul receptorilor PPARα

icircn inflamaţie şi aterogeneza este binecunoscut dar studiul nostru este primul care a arătat că

nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα este semnificativ mai scăzut in populatiile

de eozinofile la pacienţii cu SM Această concluzie coroborata cu existenţa unei stracircnse

asocieri intre expresia receptorilor PPARα la nivelul Mo limfocitelor şi PMNlor creeaza

ipoteza existenţei unui mecanism de control diferit al expresiei PPARα la nivelul

eozinofilelor Această cercetare aduce informaţii importante referitoare la mecanismele

proinflamatorii care stau la baza insulinorezistenţei şi riscului cardiometabolic şi impune

continuarea studiului acestor receptori nucleari prin citometrie icircn flux metodă care poate fi

aplicată şi la scara mai largă dacă sunt asigurate resursele materiale necesare cercetării

Cercetarea prin citometrie icircn flux poate fi completată de studiul polimorfismului genei

PPARA şi astfel se pot identifica timpuriu indivizii cu potenţial risc cardiometabolic crescut

Studiul receptorilor PPARα a stabilit conexiuni cu factori proinflamatori şi aterogenetici iar

continuarea cercetării poate aduce şi elemente noi de diagnostic precoce icircn sindromul

metabolic contribuind la icircmbunătăţirea prognosticului acestor pacienţi

CONCLUZII FINALE

1 Aplicarea scorului de SM alături de implementarea algoritmului electronic de diagnostic

contribuie la o prelucrare rapidă eficientă și standardizată a informaţiilor la nivelul

medicinei primare

2 Prevalenţa SM calculată astfel icircn cadrul studiului este crescută (2732) icircn concordanţă

cu datele raportate

3 Controlul factorilor de risc cardiometabolici incluşi icircn SM se poate realiza prin

managementul stilului de viaţă (scăderea greutăţii corporale prin combaterea

sedentarismului şi adoptarea unei diete antiaterogene şi hipocalorice) şi administrarea

terapiei medicamentoase

4 Este necesară adoptarea unei politici de sănătate publică pentru prevenirea creşterii icircn

populaţie a prevalenţei obezităţii şi a diabetului zaharat

5 Noi metode de cercetare icircn domeniul SM axate pe diagnosticarea precoce şi cuantificarea

eficientă a acestuia duce la diminuarea incidenței evenimentelor cardiovasculare majore

6 Sindromul metabolic se caracterizează printr-un status inflamator cronic

7 Valorile Non-HDL-colesterolului şi a raportului de aterogenitate sunt semnificativ mai

mari la pacienţii cu SM

8 Dintre reactanţii de faza acută am observat că valoarea medie a fibrinogenului este mai

crescută icircn lotul cu SM

9 Valorile eozinofilelor sunt crescute icircn sindromul metabolic iar explorarea relaţiei dintre

eozinofile şi obezitate constituie una din direcţiile de studiu actuale ale sindromului

metabolic

10 Evaluarea markerilor inflamatori icircn contextul sindromului metabolic este utilă icircn

evaluarea complexă a a factorilor de risc cardiometabolici

11 Prin metoda citometriei icircn flux am demonstrat prezenta Receptorilor Activaţi de

Inductorii Proliferării Peroxizomilor ndash Alpha (PPARα) icircn toate populaţiile de leucocite

studiate (Mo limfocite PMN eozinofile) atacirct icircn lotul pacienţilor cu SM cacirct şi icircn lotul

martor

12 Utilizacircnd intensitatea medie de fluorescenţă a anticorpilor anti- PPARα am arătat că

nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile este semnificativ mai redus

la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali

13 Acest studiu este primul care a demonstrat existenţa unei scăderi statistic semnificative a

nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofilele pacienţilor cu SM

confirmacircnd cercetările recente care au evidenţiat rolul eozinofilelor şi al receptorilor

PPARα icircn obezitate reglarea inflamaţiei cronice şi aterogeneza

14 Contrar aşteptărilor noastre icircn populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările

efectuate icircn cele două loturi de studiu (cu şi fără sindom metabolic) nu am evidenţiat

diferenţe statistic seminificative icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα la

subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali

15 Icircn populaţiile de Mo limfocite şi polimorfonucleare am observat corelaţii puternice

semnificativ statistic icircntre expresia PPARα icircn aceste tipuri celulare sugeracircnd existenţa

unui mecanism unic de control al inflamaţiei cronice la nivelul acestor celule probabil

diferit de cel din eozinofile

16 La subiecţii cu SM expresia relativă a PPARα icircn Eo este invers asociată cu expresia

receptorului CD36 (receptor al particulelor de ox - LDL şi propus ca un marker precoce al

aterosclerozei) dovedind rolul antiinflamator al receptorilor PPARα la nivel endotelial

17 La pacienţii cu antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială nivelul de

expresie al receptorilor PPARα icircn eozinofile şi Mo este diminuat comparativ cu subiecţii

fără antecedente familiale de hipertensiune arterială Putem spune că studiul efectuat de

noi aduce informaţii importante legate de geneză aterosclerozei şi hipertensiunii arteriale

18 Prin studiul asocierilor dintre receptorii PPARα şi componentele clinice ale sindromului

metabolic am arătat rolul acestor receptori icircn determinismul obezităţii de tip central

nivelul expresiei relative a receptorilor PPARα fiind invers proporţional cu circumferinţa

abdominală

19 Icircn acelaşi timp nivelul de expresie a PPARα icircn sindromul metabolic este asociat pozitiv

cu concentraţia serică a HDL-colesterolului şi invers asociat cu nivelul trigliceridelor

serice dovedind rolul acestor receptori icircn diminuarea procesului inflamator cronic de la

nivel vascular

20 La pacienţii cu SM scăderea expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofile este corelată cu

creşterea unor markeri ai sindromului inflamator cronic cardiometabolic (acid uric

fibrinogen) ilustracircnd importanta receptorilor icircn reglarea status-ului inflamator cronic din

sindromul metabolic

21 Utilizarea metodei flowcitometrice pentru studiul expresiei relative a receptorilor PPARα

icircn leucocite a adus informaţii importante cu privire la mecanismele moleculare de control

implicate icircn patogenia bolilor cardiometabolice icircn concordanţă cu cercetările care descriu

expresia PPAR icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale bronşice

keratinocite)

BIBLIOGRAFIE SELECTIVA

1 Kahn R Metabolic syndrome- what is the clinical usefulness Lancet 2008371(9628)1892-3

2 Reaven GM The metabolic syndrome is this diagnosis necessary Am J Clin Nutr 2006 83(6)1237-7

3 Grundy SM Pre-Diabetes Metabolic Syndrome and Cardiovascular Risk J Am Coll Cardiol 201259(7)

635-43

4 International Diabetes Federation IDF Diabetes Atlas 6th edn International Diabetes Federation Belgium

Brussels 20131-155

5 World Health Organization Global Status Report on Noncommunicable Diseases 2010 World Health

Organization Geneva Switzerland 20111-176

6 Coman AE Petrovanu R Sindromul metabolic in practica de ambulator Editura Pim Iaşi 2009 1-103

7 Grundy SM Becker D Clark LT et alThird Report of the National Cholesterol Education Program (NCEP)

Expert Panel on Detection Evaluation and Treatment of High Blood Cholesterol in Adults (Adult

Treatment Panel III) Final Report Circulation 2002106(25)3143-90

8 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J Metabolic syndrome- a new worldwide definition A Consensus Statement

from the International Diabetes Federation Diabet Med 2006 23(5)469-80

9 KG Alberti KG Eckel RH Grundy SM etal International Diabetes Federation task force on epidemiology

and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart Association World Heart

Federation International Atherosclerosis Society International Association for the study of obesity

Harmonizing the metabolic syndrome a joint interim statement of the International Diabetes Federation task

force on epidemiology and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart

Association World Heart Federation International Atherosclerosis society and International Association

for the study of obesity Circulation 2009120(16)1640-5

10 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J IDF Epidemiology Task Force The metabolic syndrome new

worldwide definition Lancet 2005 366 1059 - 62

11 Oleszczyk M Svab I Seifert B et al Primary healthcare in the developing part of Europe changes and

development in the former Eastern Bloc countries that joined the European Union following 2004 Med Sci

Monit 2009(15)78ndash84

12 Jung U J Choi M S Obesity and Its Metabolic Complications The Role of Adipokines and the

Relationship between Obesity Inflammation Insulin Resistance Dyslipidemia and Nonalcoholic Fatty

Liver Disease Int J Mol Sci 2014rsquo15(4) 6184-223

13 Vanden Heuvel JP Peters JM Peroxisome Proliferators In Ramos K (ed) Cellular and Molecular

Toxicology (Second Edition) Volume 2 New York Elsevier Science Inc 2010 145 - 67

14 Yessoufou A Wahli W Multifaceted roles of peroxisome proliferator-activated receptors (PPARs) at the

cellular and whole organism levels Swiss Med Wkl 2010140w13071 doi104414smw201013071

15 Azhar S Peroxisome proliferator-activated receptors metabolic syndrome and cardiovascular disease

Future Cardiology 20106(5)657-91

16 Andries G Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity

Diabetes and Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(Suppl)24-32

17 Zandbergen F Plutzky J PPARalpha in atherosclerosis and inflammation Biochim Biophys Acta

20071771(8)972-82

18 Straus DS Glass CK Anti-inflammatory actions of PPAR ligands new insights on cellular and molecular

mechanisms Trends Immunol 200728(12)551-8

19 Zlei M Zugun- Eloae F Carasevici E Citometrie icircn flux - Bază şi clinică Icircn Hinescu ME (ed) Citometrie icircn

flux - principii şi aplicaţii clinice Bucureşti Editura Viaţa Medicală Romacircnească 20111-128

20 Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity Diabetes and

Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(9)24-32

21 Woerly G Honda K Loyens M et al Peroxisome proliferator-activated receptors alpha and gamma down-

regulate allergic inflammation and eosinophil activation J Exp Med 2003198(3)411-21

22 Salle-Saumont D Brenuchon C Kanda A et al Peroxisome proliferator-activated receptor alpha regulates

skin inflammation and humoral response in atopic dermatitis J Clin Allergy Immunology 2008 21(4)962-8

23 Schote A Turner J Schiltz J et al Nuclear receptors in human immune cells expression and correlations

Mol Immunolog 200744(6)1436-45

24 DAmore S Vacca M Graziano G et al Nuclear receptors expression chart icircn peripheral blood

mononuclear cells identifies patients with Metabolic Syndrome Biochim Biophys Acta

20131832(12)2289-301

25 Uthurralt J Gordish-Dressman H Bradbury M T et al PPARalpha L162V underlies variation in serum

triglycerides and subcutaneous fat volume in young males BMC Med Genet 2007855

26 Hiukka A Leinonen ES Jauhiainen M et al Long-term effects of fenofibrate on VLDL and HDL

subspecies icircn participants with type 2 diabetes mellitus Diabetologia 2007 50(10)2067-75

27 Robins SJ Rubins HB Faas FH et alInsulin resistance and cardiovascular events with low HDL

cholesterol The Veterans Affairs HDL Intervention Trial (VA-HIT) Diabetes Care 2003 26(5)1513-7

28 Devaraj S Siegel D Jialal I Statin Therapy in Metabolic Syndrome and Hypertension Post-JUPITER

What is the Value of CRP Curr Atheroscler Rep 2011 13(1) 31ndash42

29 Imperatore G Riccardi G Iovino C et al Plasma Fibrinogen A New Factor of the Metabolic Syndrome A

population-based study Diabetes Care 19982 1(4)649-54

30 Krysiak R Gdula-Dymek A Bachowski R Okopien B Pleiotropic effects of atorvastatin and fenofibrate

in metabolic syndrome and different types of pre-diabete Diabetes Care 201033(10)2266-70

31 Hermans MP Impact of Fenofibrate on Type 2 Diabetes Patients with Features of the Metabolic Syndrome

Subgroup Analysis From FIELD Curr Cardiol Rev 20106(2)112-8

32 Silverstein R Inflammation atherosclerosis and arterial thrombosis Role of the scavenger receptor CD36

Cleveland Clinic Journal of Medicine 200976(Suppl 2)S27-S30

33 Hăncu N Obezitatea In Vereşiu IA (ed) Diabetul zaharat nutritia si bolile metabolice Volume 2 Editura

Echinox Cluj- Napoca 2010 1-15

Lista lucrări publicate

1 Elena Popa Maria Maidaniuc Agnes Bacusca Alamir Diaa Rodica Petrovanu Adorata Elena

Coman Disfuncţia endotelială ndash de la mecanisme moleculare la cuantifi care şi tratament icircn practica

medicală Practica Medicală 20149(3) 109-14

2 Elena Popa Agnes Bacusca Alamir Diaa Maria Maidaniuc Rodica Petrovanu Adorata Elena Coman

The function of insulin receptor (IRF) in evolution of obesity correlation with adipocytes diameters

Archives of the Balkan Medical Union 201449(3) 275-9

3 Elena Popa Florin Zugun-Eloae Mihaela Zlei Daniela Jitaru Oana Maria Pintilie Adorata Elena

Coman Maria Traian Didona Anca Ungureanu Eugen Carasevici - acceptata pentru numarul 42014

Flow cytometry analysis of PPAR-alpha receptors in metabolic syndrome) Revista Romană de

Medicină de Laborator(RRLM-D-14-00034R1- adeverinţa ataşată

Page 4: REZUMAT TEZĂ DE DOCTORAT - umfiasi.ro Doctorat/rezumat... · universitatea de medicinĂ Şi farmacie “grigore t. popa” iaŞi facultatea de medicinĂ rezumat tezĂ de doctorat

Fişa electronică de studiu Consimţămacircntul informat al pacientului Recoltarea probelor de sacircnge venos pentru studiul PPARα

Protocol marcare CD14 - CD36

Imagini PPARα - citometrie icircn flux

Imagini CD36 Lista lucrări publicate

LISTA ABREVIERI

CA - Circumferinţa abdominalăcm - CentimetriCRP - Proteina C reactivăCol - Colesteroldl - DecilitruEo - EozinofileHDL - High density lipoprotein (lipoproteine cu densitate icircnaltă)IDF - Federaţia Internaţională de DiabetIgE - ImunoglobulinăIMC- Indice de masă corporalăLy - LimfociteLDL- Low density lipoprotein (lipoproteine cu densitate joasă)mg - MiligramMo- MonociteNCEP-ATP III - Naţional Cholesterol Education Program Adult Treatment Panel IIIPPAR - Receptorii Activaţi de Inductorii Proliferarii Peroxizomilor (peroxizome proliferator -activated receptor)PMN - PolimorfonucleareSM - Sindrom metabolicTA - Tensiunea arterialăTAS - Tensiune arterială sistolicăTAD - Tensiune arterială diastolicăTG - Trigliceride

Teza cuprinde un număr de 118 de figuri 41 de tabele și 280 referințe bibliograficeNumerotarea tabelelor şi figurilor este identică cu cea din teză

SCOPUL ŞI MOTIVAŢIA STUDIULUI

Motivația cercetării

La nivel mondial sindromul metabolic (SM) reprezintă o importantă problemă de

sănătate publică reunind asocierea dintre obezitate abdominală şi factori de risc majori

cardiovasculari (hiperglicemia dislipidemia hipertensiunea arterială) (12) Se estimează că

SM afectează peste 25 din populaţia generală iar aproximativ două treimi din pacienţii cu

SM sunt predispuşi la un eveniment cardiovascular major (3) Icircn prezent se acţionează pe

două căi pentru controlul factorilor de risc cardiometabolici incluşi icircn SM managementul

stilului de viaţă (scăderea greutăţii corporale prin combaterea sedentarismului şi adoptarea

unei diete antiaterogene şi hipocalorice) şi administrarea terapiei medicamentoase Deşi atacirct

modificarea stilului de viață cacirct și terapia medicamentoasă vizează controlul factorilor de risc

cardiometabolici conform ghidurilor medicale adoptate atingerea ţintelor terapeutice este

greu de realizat (1011) Icircn aceste condiţii introducerea unor noi metode diagnostice şi

terapeutice bazate pe etiopatogenia SM ar putea icircmbunătăţi calitatea vieţii bolnavilor şi SM şi

ar conduce pe termen lung la creşterea speranţei medii de viaţă Cercetările actuale sunt

orientate spre descifrarea modului icircn care modificările metabolismului incluzacircnd rezistenţa la

insulină dislipidemia obezitatea abdominală pot accelera ateroscleroza privită ca o

complicaţie metabolică și indusă de inflamație (12) Icircn contextul studiului SM receptorii

nucleari activaţi de inductorii proliferării peroxizomilor-alpha-α (PPARα) atrag atenţia

datorită rolului deţinut icircn reglarea oxidării acizilor graşi metabolismul lipidelor şi

lipoproteinelor inflamaţie cronică şi aterogeneză (131415) Aceștia reprezintă astfel veriga

lipsă patogenică care leagă modificările metabolice de procesul inflamator cronic

autoicircntreținut care duce la disfuncția endotelială și aterogeneză Acţionacircnd ca factori de

transcripţie activarea PPARα determină scăderea nivelului seric al trigliceridelor şi HDL-col

şi protejează față de profilul lipidic aterogenetic prin modularea status-ului proinflamator şi

diminuarea insulinorezistenţei (1617) Rolul PPARα icircn reglarea metabolismului lipidic

balanţei energetice şi icircn diminuarea răspunsului proinflamator fac din aceşti receptori o

potenţială ţinta icircn tratamentul afecţiunilor icircn care rolul inflamaţiei cronice este bine cunoscut

Se descrie astfel o nouă posibilitate de icircmbunătăţire a prognosticului afecţiunilor cronice cu

impact major asupra sănătăţii publice incluzacircnd ateroscleroza diabetul zaharat boala cronică

obstructivă pulmonară maladia Parkinson demența Alzheimer şi nu icircn ultimul racircnd

neoplaziile (18)

Scopul studiului

Icircn cadrul Tezei de Doctorat mi-am propus realizarea unei cercetări referitoare la

rolul Receptorilor Activaţi de Inhibitorii Proliferării Peroxizomilor- alpha icircn contextul

sindromului metabolic alături de completarea datelor epidemiologice existente cu privire la

prevalenţa acestui sindrom icircn populaţia aflată icircn evidenţa unui Cabinet de Medicină de

Familie din oraşul Iaşi Ca urmare cercetarea efectuată a urmărit două aspecte1 studiul

epidemiologic al SM icircn populaţia unui Cabinet de Medicină de Familie urmată de

investigarea markerilor inflamatori prezenţi icircn SM 2 investigarea prezenţei și a nivelului de

expresie relativă a receptorilor PPARα icircn leucocitele circulante recoltate din sacircngele

subiecţilor studiaţi celule care exprimă aceşti receptori şi a căror rol icircn inflamaţie şi

aterogeneză este bine cunoscut

Considerații etice Studiul a primit avizul Comisiei de Etică a Universităţii de Medicină

şi Farmacierdquo Gr T Popardquo Iaşi Studiul a fost condus icircn conformitate cu Declaraţia de la

Helsinki actualizată

STUDIUL SINDROMULUI METABOLIC IcircN POPULAŢIA SELECTATĂ

Obiectivele studiului sindromului metabolic

a evaluarea din punct de vedere clinic şi biologic a sindromului metabolic

b identificarea tipului de SM icircn raport cu numărul de componente

c stabilirea prevalenţei sindromului metabolic icircn populaţia studiată

d studiul markerilor inflamatori prezenţi icircn SM

Studiul epidemiologic icircn populaţia selectată

Am efectuat un studiu epidemiologic transversal care şi-a propus stabilirea prevalenţei

sindromului metabolic şi a componentelor sale icircn populaţia icircnscrisă pe lista unui cabinet de

medicină de familie Studiul s-a desfăşurat pe parcursul a 12 luni icircn perioada 01012013ndash

31122013 icircn cadrul Cabinetului de Medicină de Familie CMI Popa Elena situat icircn strada

Ion Creanga nr 73 din Iaşi

Obiectivele studiului - evaluarea din punct de vedere clinic şi biologic a sindromului metabolic

- identificarea tipului de SM icircn raport cu numărul de componente

- stabilirea prevalenţei sindromului metabolic icircn populaţia studiată

Lotul de studiu a fost constituit din populaţia de ambele sexe cu vacircrsta cuprinsă icircntre

18 şi 91 ani icircnscrisă pe lista medicului de familie Subiecţii au fost invitaţi să participe la

studiu icircn luna naşterii realizacircnd astfel o programare a vizitelor pe parcursul a 12 luni

Criteriile de includere icircn lotul de studiu vacircrsta peste 18 ani capacitate de decizie

domiciliul stabil icircn Romacircnia participare pe baza consimţămacircntului liber informat Criteriile

de excludere vacircrstă sub 18 ani femei gravide sau care alăptează bolnavi icircn faza terminală

subiecţi care refuză semnarea consimţămacircntului informat Nu s-au formulat criterii care să

aducă discriminări legate de sex etnie sau rasă

Protocolul studiului epidemiologic al sindromului metabolic

Icircn cadrul studiului epidemiologic s-au realizat cacircte două vizite pentru fiecare participant La

prima vizită subiecţii au fost informaţi asupra studiului icircn cadrul cercetării doctorale şi au

semnat Consimţămacircntul liber informat Pentru fiecare participant s-a completat fişa de studiu

computerizată incluzacircnd date anamnestice şi clinice (talie greutate corporală perimetru

abdominal) La a doua vizită s-au recoltat probe biologice (sacircnge venos) de către o asistentă

specializată pentru următoarele determinări biochimice (glicemie colesterol total HDL-

colesterol LDL-colesterol trigliceride acid uric creatinină fibrinogen proteină C reactivă)

şi hematologice (hemoleucograma VSH) Pentru diagnosticarea SM am utilizat criteriile

de diagnostic Harmonised I (tabel VI) Am comparat prevalenţa SM conform criteriilor

Harmonised I cu prevalenţa obţinută prin aplicarea criteriilor IDF respectiv ATP III

Analiza statistică Pentru analiza parametrilor studiaţi icircn SM am realizat icircmpreună cu

firma Arhilog Soft un program icircn care sunt incluşi parametrii de diagnostic ai SM şi care

permite icircncadrarea pacienţilor funcţie de componentele SM icircn SM3 SM4 SM5 De

asemenea programul permite editarea şi arhivarea unei fişe de observaţie pentru fiecare

participant la studiu precum şi crearea unei baze de date compatibile cu programul Microsoft

Office Excel 97-2003

Menţionăm că acest program poate stoca

şi alţi parametri clinici şi paraclinici utilizaţi icircn evaluarea complexă a SM putacircnd fi ulterior

introdus ca un program de monitorizare a evoluţiei pacienţilor Pentru prelucrarea statistică a

parametrilor s-au folosit programele Microsoft Office Excel 97-2003 SPSS-10 (Statistical

Package for Social Sciences) şi aplicaţia Medcalc Statistical Software ndash 1333 Valoarea lui p

Figura 41 Program de

analiză a parametrilor SM

mai mică de 005 a fost considerată semnificativ statistic

Rezultate Analiza lotului de studiu s-a efectuat icircn funcţie de mediul de provenienţă sex vacircrstă şi

vacircrsta medie Caracteristicile clinice şi biochimice ale lotului studiat sunt reprezentate icircn

tabelul VIII

Tabel VIII Caracteristicile lotului studiat Media 95 CI SD Minimum Maximum

Vacircrsta (ani) 4751 4661 - 4841 1798 1800 9100

CA (cm) 8830 8764 - 8896 1316 5600 13400

IMC (kgm2) 2603 2578 - 2628 497 1900 4500

TAD (mmHg) 7529 74883 - 7571 827 6000 11500

TAS (mmHg) 11730 11650 - 11810 1590 9000 19000

Glicemie (mgdl) 9435 9328 - 9542 2138 7200 40000

HDL- col(mgdl) 4498 4427 - 4570 1422 2100 9200

TG(mgdl) 12269 11887 - 12651 7157 4800 87900

Determinarea scorului SM

Am aplicat criteriile de diagnostic şi am calculat scorul de SM pentru fiecare subiect (0-

absenţa criteriului 2- prezenţa criteriului) (fig44)

Figura 44 Frecvenţa scorului SM icircn

populaţia studiată conform criteriilor

SM Harmonised (A) IDF (B) ATP III

(C) Se observă că distribuţia scorurilor

SM conform criteriilor de diagnostic este

identică icircn cazul aplicării criteriilor

Harmonized I şi IDF

Scorul de SM a avut valori pare

cuprinse icircntre intervalul 0 - 10 pacienţii

cu SM avacircnd un scor mai mare sau egal

cu 6

Icircn lotul studiat am analizat prezenţa simultană a criteriilor Harmonised I de diagnostic şi

am constatat prezenţa SM la 389 subiecţi (204 femei şi 185 bărbaţi) reprezentacircnd 2542

(95CI 2296-2808) din totalul populaţiei studiate Raportul prevalenţelor specifice pe sexe

bărbaţifemei a fost de 103 (95 CI084 -126)Icircn concordanţă cu criteriile IDF am

identificat un număr de 325 pacienţi cu SM (175 femei şi 150 bărbaţi) iar prevalenţa SM icircn

populaţia studiată conform IDF a fost de 2124 (95 CI 1899ndash 2368) Raportul

prevalenţelor specifice la bărbaţi versus femei a fost de 0977 (95 CI 078 ndash122) Utilizacircnd

definiţia ATP III au fost identificaţi un număr de 229 subiecţi cu SM Prevalenţa SM a fost

C

0

100

200

300

400

500

600

700

Scor SM ATP III

Număr pacienţi

0 2 4 6 8 10

ATP III SM5 SM4 SM3 non SM

B

0 50

100 150 200 250 300 350 400 450

Scor SM IDF

Număr pacienţi

0 2 4 6 8 10

IDF SM5 SM4 SM3 non SM

A

0

50

100

150

200

250

300

350

400

450

Scor SM Harmonised I

Număr pacienţi

0 2 4 6 8 10

HARMONIZED I SM5 SM4 SM3 non SM

de 1497 (95CI 1309 ndash 1704) icircn populaţia studiată Au fost calculate prevalenţele pe

sexe şi au fost găsite valorile de 1343 (95CI 010 ndash 164) la bărbaţi respectiv 1632

(95 CI 1366 ndash 1934) la femei raportul dintre acestea fiind de 082 (95CI 062 ndash 107)

Pentru fiecare asociere dintre componentele SM diagnosticat conform criteriilor

Harmonised I am calculat prevalenţele icircn cadrul SM(tabel XVI)

Tabel XVI Prevalenţa asocierilor dintre componentele SM Număr

pacienţi

Ponderea icircn cadrul

pacienţilor cu SM

(95 CI)

Prevalenţa icircn

populaţia studiată

(95 CI)

SM cu trei componente (SM3)

241 6195 (5438ndash7029) 1575 (1383-

1787)

Obezitate centrală + hipertensiune arterială +

hipertrigliceridemie

45 1154 (844ndash1548) 294 (214-393)

Obezitate centrală + hipertensiune arterială + hipo-

HDLcolesterolemie

38 979 (691ndash1340) 248 (175-340)

Obezitate centrală + hipertrigliceridemie +

hipoHDL-colesterolemie

34

874 (605ndash1221) 222 (153-310)

Obezitate centrală + modificări ale metabolismului

glucidic + hipertensiune arterială

31 796 (541ndash1131) 202 (137-287)

Hipertensiune arterială + hiper-trigliceridemie +

hipoHDL- colesterolemie

26 668 (436 ndash979) 169 (111-249)

Modificări ale metabolismului glucidic +

hipertensiune arterială + hiper-trigliceridemie

21 539 (334-825) 137 (085-209)

Obezitate centrală + modificări ale metabolismului

glucidic + hipertrigliceridemie

15 385 (215-636) 098 (054-116)

Modificări ale metabolismului glucidic

hipertrigliceridemie + hipoHDL-colesterolemie

12 308 (159-538) 078 (040-137)

Modificări ale metabolismului glucidic +

hipertensiune arterială + hipoHDLcolesterolemie

10 257 (123ndash472) 065 (031-120)

Obezitate centrală + modificări ale metabolismului

glucidic + hipo-HDL-col

9 231 (105ndash439) 058 (026-111)

SM cu patru componente (SM4) 104 2674 (2184-239) 679 (555-823)

Obezitate centrală + modificări ale metabolismului

glucidic + hipertensiune arterială + hipoHDL-

colesterolemie

32 822 (562-1116) 209 (143-

295)

Obezitate centrală + hipertensiune arterială +

hipertrigliceridemie + hipoHDL-col

25 642 (415- 948) 163 (105-241)

Obezitate centrală + modificări ale metabolismului

glucidic + hipertri-gliceridemie + hipoHDL-

colesterolemie

12 308 (159-538) 078 (040-137)

Modificări ale metabolismului glucidic +

hipertensiune arterială + hipertri-gliceridemie +

hipoHDL-colesterolemie

6 154 (056- 335) 039 (014-085)

SM cu cinci componente (SM5) 44 1131 (822-1518) 287 (209-386)

Total (SM3 + SM4 + SM5) 389 100 2542(2296-

2808)

Analizacircnd componentele SM la cei 389 pacienţi diagnosticaţi cu SM conform criteriilor

Harmonised I am constatat că obezitatea centrală este cea mai bine reprezentată icircn SM dintre

aceste componente (8072 95CI 7644 - 8452) urmată de HTA (7892 95CI 7453

- 8287) hiperTG (6915 95 CI 6430-7371) hipo-HDL-col (6375 95 CI 5876-

6854) şi hiperglicemie (5681 95 CI5173- 6179)

Standardizarea prevalenţelor funcţie de vacircrstă şi sex Analiza statistică a relevat faptul

că prevalenţa SM creşte cu icircnaintarea icircn vacircrstă Dacă pentru vacircrsta cuprinsă icircntre 35-54 ani

prevalenţa la bărbaţi este semnificativ mai mare comparativ cu femeile (raport calculat B F -

183 P=0003) pentru celelalte grupe de vacircrsta nu s-au observat diferenţe semnificative icircntre

sexul feminin şi cel masculin Am observat că după instalarea menopauzei la femei

prevalenţa SM (corespunzătoare Harmonised I) la femei depăşeşte 50 iar la bărbaţi atinge

42 Utilizacircnd European Standard Population (175) am efectuat standardizarea funcţie de

vacircrstă şi sex a prevalenţelor bdquocruderdquo (brute) obţinute icircn populaţia studiată şi am calculat o

prevalenţă standardizată a SM de 2732 (95 CI 2460-3003) La sexul masculin

prevalenţa standardizată a SM a fost de 2760 (95 CI 2362 - 3157) iar la sexul feminin

am obţinut valoarea de 2854 (95 CI 2462 - 3245)

Discuţii

Studiul desfăşurat de noi a investigat prezenţa SM icircn populaţia unui Cabinet de Medicină

de Familie Icircn Europa prevalenţa SM este de aproximativ 25-30 Statele Unite Ale Americii

au raportat o prevalenţă a sindromului metabolic de 22 icircn populaţia cu vacircrsta peste 20 ani

pe cacircnd la vacircrstă mai mare de 60 ani s-a observat o prevalenţă de 44 (1419) Icircn studiul

efectuat am observat o prevalenţă standardizată de 2732 (95 CI 2460-3003) care este

icircn concordanţă cu prevalenţele raportate icircn Europa precum şi o creştere a ponderii SM icircn

populaţie icircn raport cu vacircrsta Am preferat utilizarea definiţiei Harmonised I pentru SM

deoarece cuprinde criterii adaptate pentru o abordare unitară a SM mărind astfel numărul

pacienţilor diagnosticaţi şi care vor urma tratament conform Ghidurilor de Practică Medicală

Limitările acestui studiu sunt legate de faptul că este concentrat doar pe populaţia asigurată şi

neasigurată aflată pe lista unui medic de familie din mediul urban Se pot efectua studii la

nivelul Cabinetelor Medicale de Medicină de Familie dar trebuie să se aplice pe un lot

reprezentativ urbanrural care să reprezinte populația acelei regiuni Utilizarea structurilor

populaționale atașate cabinetului de MF este utilă atacirct pentru cele clinice cacirct și pentru cele

epidemiologice deoarece surprinde populația studiată icircn mediul de viață cotidian Prevalenţa

mare a SM icircn populaţia studiată necesită aplicarea unei politici eficiente de sănătate publică

deoarece riscul producerii evenimentelor cardiovasculare majore poate fi redus semnificativ

printr-un control adecvat al componentelor SM (obezitate dislipidemii hipertensiune

arterială şi hiperglicemie

Studiul sindromului inflamator cronic icircn cadrul sindromului metabolic

Obiectivele studiului

- studierea markerilor inflamaţiei cronice şi aterogenezei la subiecţii cu şi fără SM

- evaluarea importanţei markerilor studiaţi ai inflamaţiei cronice icircn diagnosticul de

ambulator al sindromului metabolic

Material şi metodă

Icircn cercetarea inflamaţiei cronice din SM au fost incluşi 1530 subiecţi de ambele sexe cu

vacircrsta cuprinsă icircntre 18-91 ani icircnscrişi pe lista CMI Popa Elena Studiul s-a desfăşurat icircn

perioada 01012013ndash 31122013 Populaţia ţintă a fost identică cu cea din studiul

epidemiologic şi s-a desfăşurat concomitent cu studiul prevalentei SM Subiecţii au fost

icircmpărţiţi icircn două loturi lotul cu SM (Lot SM) şi lotul de control (fără SM)

Lot SM a) criterii de includerevacircrsta peste 18 ani recrutarea pe baza semnării

Consimţămacircntului liber informat SM diagnosticat pe baza criteriilor Harmonised I (14) b)

criterii de excluderevacircrstă sub 18 anirefuzul semnării Consimţămacircntului liber informat

femei icircn perioada de graviditate sau de lactaţie

Lot Control (fără SM) a) criterii de includerevacircrsta peste 18 anirecrutarea pe baza

semnării Consimţămacircntului liber informat absenţa sindromului metabolic b) criterii de

excluderevacircrstă sub 18 ani refuzul semnării Consimţămacircntului liber informatfemei icircn

perioada de graviditate sau de lactaţie

Rezultate

Lotul cu SM (Lot SM) a fost format din cei 389 pacienţi diagnosticaţi cu SM conform

criteriilor Harmonised I Lotul SM a fost alcătuit din 185 bărbaţi şi 204 femei raportul

bărbaţifemei fiind de 090 (95 CI073-112) Lotul de control (fără SM) a fost alcătuit

din cei 1141 participanţi care nu au icircntrunit criteriile de diagnostic ale sindromului metabolic

Din cei 1141 de subiecţi 530 au fost de sex masculin iar 611 de sex feminin raportul

bărbaţifemei fiind 087 (95 CI 077-097) Vacircrsta subiecţilor a fost semnificativ mai mare

icircn lotul pacienţilor cu SM (5976plusmn1322 ani) comparativ cu lotul martor (4333plusmn 1748 ani) (t-

Test Plt00001) Aşa cum ne-am aşteptat valorile medii ale componentelor clinice ale SM

(circumferinţa abdominală tensiunea arterială sistolică şi diastolică) au fost mai mari icircn lotul

pacienţilor cu SM (t-Test Plt0001 pentru fiecare dintre componente) Studiind parametrii

biochimici incluşi icircn diagnosticul SM valorile medii ale glicemiei şi TG au fost semnificativ

mai crescute icircn lotul SM (t-Test Plt00001 pentru ambele constante) Icircn acelaşi timp

valoarea medie determinată a HDL-col a fost semnificativ mai mare la subiecţii din lotul

martor ( t-Test Plt00001) SM se caracterizează printr-o dislipidemie aterogenă

caracterizată de creşterea TG scăderea HDL-col concomitent cu creşterea LDL-col creşterea

Non-HDL-col şi a raportului de aterogenitate (Col totalHDL-col) (185) Comparacircnd cele

două loturi am observat că valoarea medie a LDL-colesterolului determinată icircn lotul

pacienţilor cu SM a fost semnificativ mai mare faţă de subiecţii din lotul martor (t-Test P =

00002) Măsurarea Non-HDL-colesterolului a arătat prezenţa unei diferenţe semnificative

icircntre cele două loturi (figura 420 B) Astfel icircn concordanţă cu prezenţa dislipidemiei

aterogene valoarea medie a Non-HDL-col a fost semnificativ mai mare (t-Test Plt 00001) icircn

lotul cu SM comparativ cu lotul de control Icircn contextul inflamației cronice şi aterogenezei

din sindromul metabolic am evaluat sensibilitatea şi specificitatea Non-HDL-colesterolului

ca test diagnostic al SM Valoarea Non-HDL-colesterolului care prezice cu cea mai mare

acurateţe prezenţa SM a fost de 151 mgdl (punctul de ldquocut-offrdquo) pentru care am calculat o

sensibilitate de 64 27 şi o specificitate de 5872 Calculul ariei AUC a furnizat valoarea

de 0605 şi deci determinarea concentraţiei serice a parametrului Non-HDL-colesterolului are

valoarea unui marker cu acurateţe redusă Am studiat valorile raportului Col totalHDL-col icircn

cele două loturi şi am constatat că la pacienţii cu SM valoarea media a raportului de

aterogenitate este semnificativ mai mare faţă de valoarea raportului determinată icircn lotul

martor (t-Test Plt 00001) Pentru raportul de aterogenitate studiat analiza curbei ROC a

arătat că valorile mai mari decacirct punctul de ldquocut-offrdquo de 431 prezic prezenţa SM cu cea mai

mare sensibilitate (6381 ) şi specificitate (6582)Valoarea AUC pentru indicele de

aterogenitate a fost de 0667 şi icircn studiul SM acest indice poate fi considerat un marker cu

acurateţe redusă Valoarea medie determinată a acidului uric la subiecţii fără SM a fost

semnificativ mai mică decacirct icircn lotul SM (t-Test Plt 00001) Curba ROC a arătat că valorile

acidului mai mari de 43 mgdl prezic diagnosticul de SM cu cea mai mare sensibilitate

(8107) şi specificitate (5328) Pentru acidul uric AUC a avut valoarea de 0655 şi

icircncadrează determinarea acidului uric seric icircn racircndul testelor cu acurateţe redusă (187)

Comparacircnd populaţiile de leucocite (tabel XXI) valoarea medie determinată a

numărului de Eo a fost semnificativ mai mare icircn lotul cu SM comparativ cu lotul martor (t-

Test Plt0001) Analizacircnd curba ROC trasată pentru valorile numărului de Eo am observat

că valorile ldquocut-offrdquo mai mari de 200 Eomm3

pot prezice prezenta SM cu cea mai mare

specificitate (7705) şi sensibilitate (3978) Pentru diagnosticul SM calculul ariei AUC a

arătat faptul că determinarea numărului de Eo are valoarea unui test diagnostic cu acurateţe

redusă (AUC = 0 589) Comparacircnd valorile medii ale fibrinogenului am calculat o diferenţă

statistic semnificativă icircntre cele două loturi valoarea medie a fibrinogenului fiind mai mare icircn

lotul SM ((t-Test P lt 00001) Cu ajutorul curbei ROC am observat că valorile fibrinogenului

mai mari de 306 mgdl prezic sindromul metabolic cu o sensibilitate de 7511 şi specificitate

de 6056 Fibrinogenul a fost icircncadrat icircn categoria markerilor inflamatori cu acurateţe

redusă AUC avacircnd valoarea de 0690 Icircn loturile de studiu am calculat AUC corespunzătoare

criteriilor de diagnostic ale SM Am observat că icircn cazul scorului Harmonised I

sensibilitatea şi specificitatea sunt de 100 iar AUC este egală cu 1000 Pentru cele cinci

criterii de diagnostic AUC a avut valori icircntre 0636 (pentru variabila HDL-col) şi 0804

(pentru variabila CA) (figura 431)

AUC ES 95 CI

Scor SM Harmonised I 1000 00000 0997 - 1000

CA (cm) 0804 00133 0781 - 0825

TAD (mmHg) 0666 00169 0639 - 0692

TAS (mmHg) 0757 00148 0732 - 0780

Glicemie (mgdl) 0742 00160 0717 - 0766

Trigliceride (mgdl) 0756 00175 0732 - 0780

HDL- colesterol 0636 00183 0609 - 0662

Figura 431 Analiza AUC criterii de diagnostic ale SM

Studiind figura 432 se observă că valoarea AUC pentru markerii studiaţi este cuprinsă

icircntre 0589 (icircn cazul variabilei Eo) şi 0690 (icircn cazul fibrinogenului) Icircn contextul SM

acurateţea acestor markeri ai inflamaţiei cronice şi disfuncţiei endoteliale poate fi considerată

redusă deoarece AUClt07 pentru toţi markerii investigaţi (figura 431) Totuşi valorile ariilor

parametrilor reprezentaţi icircn figura 431 sunt apropiate de valorile AUC ale variabilelor TAD

şi HDL-col (figura 432) şi deci pot fi utilizaţi pentru completarea diagnosticului de SM

AUC ES 95 CI

Non-HDL-colesterol 0605 00171 0580 - 0630

Col totalHDL-col 0607 00163 0642 - 0691

Acid uric 0655 00161 0630 - 0679

Fibrinogen 0690 00206 0658 - 0720

Eozinofile 0589 00176 0564 - 0615

Figura 432 AUC markeri ai SM inflamaţiei cronice şi aterogenezei

Discuţii

Status-ul proinflamator din SM asociat cu insulinorezistenţa şi disfuncţia endotelială

constituie o verigă de legătură dintre inflamaţie şi procesele metabolice complexe icircnsoţindu-

se de deteriorarea funcţiilor vasculare şi creşterea riscului de evenimente cardiovasculare

majore (2858) Studiul efectuat a arătat o diferenţă icircntre vacircrstele subiecţilor din cele două

loturi vacircrsta pacienţilor cu SM fiind semnificativ mai mare (Plt0001) comparativ cu subiecţii

normali confirmacircnd faptul menţionat că vacircrsta reprezintă unul din stimulii care agravează

inflamaţia cronică Am arătat că valorile fibrinogenului sunt mai mari icircn SM comparativ cu

Scor Harmonised I

0 20 40 60 80 100

0

20

40

60

80

100

100-Specificitate

Sen

sib

ilit

ate

Criterii diagnostic SM

0 20 40 60 80 100

0

20

40

60

80

100

100-Specificitate

Sens

ibili

tate

CA

TAD

TAS

Glicemie

Trigliceride

HDL-C

0 20 40 60 80 100

0

20

40

60

80

100

100-Specificitate

Sensi

bilita

te

Non-HDL-C

Col T HDL-C

Acid uric

Fibrinogen

Eozinofile

lotul martor atacirct la bărbaţi cacirct şi la femei icircn concordanţă cu studiile anterioare Evaluarea

fibrinogenului este importantă nu numai icircn SM pentru definirea contextului proinflamator şi

protrombotic ci şi icircn predicţia cardiovasculară la subiecţii normali Studiind populaţiile

leucocitare am obţinut diferenţe semnificative icircn cazul Eo valoarea medie a acestora fiind

semnificativ mai mare icircn lotul cu SM comparativ cu lotul martor (P lt 0001 figura 425B)

Implicarea Eo icircn SM s-a conturat icircn ultimul deceniu aceste celule fiind implicate icircn recrutarea

macrofagelor din ţesutul adipos Experimental s-a constatat că o creştere a Eo apărută ca

urmare a infectării cu helminţi sau stimulare cu IL-5 este urmată de icircmbunătăţirea toleranţei la

glucoză (199) Controlul pe care icircl exercită Eo asupra activării macrofagelor ar putea fi cheia

intervenţiei asupra obezităţii icircn viitorul apropiat(165199) Hiperuricemia asociata frecvent cu

SM este cunoscut ca un factor independent de risc cardiovascular (192 202) In concordanţă

cu aceasta afirmaţie in studiul nostru am constatat ca nivelul seric al acidului uric a fost mai

crescut in lotul cu SM diferenţa semnificativă din punct de vedere statistic (P lt 00001)

Dislipidemia aterogenă din sindromul metabolic şi diabetul zaharat se caracterizează prin

creşterea trigliceridelor şi a Non-HDL-col scăderea HDL-col creşterea numărului de

particule LDL modificate (185190) La pacienţii cu SM am descris un profil aterogenetic

cu risc crescut de evenimente cardiovasculare majore

STUDIUL RECEPTORILOR ACTIVAŢI DE INDUCTORII PROLIFERĂRII

PEROXIZOMILOR-ALPHA IcircN LEUCOCITELE CIRCULANTE

Ipoteza de lucru

Studii experimentale efectuate au arătat că rolul PPARα icircn ateroscleroză derivă din

implicarea acestor receptori icircn limitarea inflamaţiei Plecacircnd de la acest fundament ne-am

propus evidenţierea receptorilor nucleari activaţi de inductorii proliferării peroxizomilor-

alpha (PPARα) prin citometrie de flux icircn leucocitele din sacircngele periferic alături de

evaluarea acestei metode icircn cuantificarea expresiei relative a PPARα ca test diagnostic

precoce al modificărilor metabolice SM Studiul expresiei relative a receptorilor PPARα a

plecat de la premisa că dacă SM se caracterizează printr-un status inflamator cronic nivelul

de expresie a PPARα icircn leucocitele circulante este mai scăzut la pacienţii cu SM comparativ

cu subiecţii normali Referitor la studiul receptorului CD36 am plecat de la presupunerea că

nivelul de expresie al acestui receptor icircn SM este crescut dat fiind importanţa acestui receptor

icircn inflamaţia aterosclerotică Avacircnd icircn vedere efectele receptorilor amintiţi icircn

insulinorezistenţă şi aterogeneză am considerat necesară evaluarea prezenţei receptorului

nuclear PPARα icircn paralel cu studiul receptorului bdquoscavengerrdquo CD-36 prin metoda citometriei

icircn flux Astfel icircn studiul efectuat mi-am propus şi investigarea existenţei unei legături icircntre

nivelul de expresie al receptorilor PPARα şi cel al receptorului CD-36 De asemenea ne-am

icircndreptat atenţia spre stabilirea unor asocieri icircntre componentele clinice şi biochimice ale

sindromului metabolic şi nivelul intensităţilor de fluorescenţă ale PPARα şi CD-36 ca măsură

a expresiei relative a acestor receptori

Material și metodă

Studiul receptorilor PPARα icircn contextul sindromului metabolic s-a desfăşurat icircn

perioada 1012014 -28022014 pe baza metodologiei studiilor de tip caz-martor Am urmărit

identificarea unor diferenţe icircntre expresia receptorilor PPARα la pacienţii cu SM comparativ

cu subiecţii sănătoşi diferenţe care ar putea fi utile icircn diagnosticul precoce al SMRecrutarea

pacienţilor s-a efectuat din pacienţii prezentaţi pentru consultaţie la Cabinetul Individual

ldquoCMI Dr Popa Elenardquo situat icircn strada Ion Creanga din Iaşi Pentru studiul receptorilor

PPARα icircn sindromul metabolic au fost selecţionaţi un număr de 57 de subiecţi 26 de subiecţi

cu SM (constituind lotul SM) şi 31 subiecţi fără SM constituind lotul de control (Lot Non-

SM) Pentru studiul SM pacienţii au fost recrutaţi din masa de populaţie arondată cabinetului

de MF fără istoric de SM diabet zaharat boală cardio-vasculară aflați la primul diagnostic

de SM evaluarea completă a acestora fiind urmată de includerea icircn programul de

management cardiovascular şi metabolic conform Ghidurilor Terapeutice aflate icircn vigoare

Lot SM a) criterii de includerevacircrsta peste 18 ani recrutarea pe baza semnării

Consimţămacircntului liber informatSM nou-diagnosticat pe baza prezenţei a minim trei criterii

de diagnostic pentru SM conform Harmonised I b) criterii de excluderevacircrstă sub 18 ani

refuzul semnării Consimţămacircntului liber informat femei icircn perioada de graviditate sau de

lactaţie SM anterior diagnosticat istoric de diabet zaharat boală cardiovasculară constituită

tratament cu agonişti PPARα (ie fibraţi etc)

Lot martor (Non-SM) a) criterii de includerevacircrsta peste 18 ani recrutarea pe baza

semnării Consimţămacircntului liber informat absenţa diagnosticului de SM b) criterii de

excludere vacircrstă sub 18 ani refuzul semnării Consimţămacircntului liber informat femei icircn

perioada de graviditate sau de lactaţie

Studiul receptorilor PPARα a inclus două subetape

A Studiul componentelor sindromului metabolic conform criteriilor Harmonised I

Evaluarea clinică a participanţilor s-a desfăşurat icircn cadrul Cabinetului de Medicină de

Familie iar determinările hematologice şi biochimice s-au efectuat icircn Laboratorul

Ambulatorului Clinic de Specialitate al Spitalului Clinic de Urgenţă bdquoSf Spiridonrdquo Iaşi

B Evaluarea icircn citometrie de flux a nivelului relativ de expresie a PPARα şi CD36

Studiul receptorilor PPARα s-a desfăşurat icircn Laboratorul de Biologie Moleculară al

Institutului Regional de Oncologie Iaşi prin metoda citometriei icircn flux (19) Nivelul relativ de

expresie al receptorilor nucleari PPARα a fost determinat icircn diferite tipuri de leucocite

circulante polimorfonucleare (PMN) limfocite (Ly) Mo(Mo) şi eozinofile(Eo) Am utilizat o

metodă de citometrie icircn flux optimizată ldquoin houserdquo elaborată icircn cadrul Laboratorului de

Biologie Moleculară al IRO Iaşi Icircn cursul procesului de optimizare am testat mai multe

concentraţii ale anticorpului anti-PPARα 1100 1500 11500 14500 iar icircn urma

determinărilor efectuate şi a analizei statistice concentraţia 1500 a fost considerată optimă

pentru desfăşurarea studiului (tabel XXIII figura 51)

Tabel XXIII Optimizarea concentraţiilor Ac anti-PPARα Diferenţa

mediilor

valorilor

medii

PMN

Diferenţa

mediilor

mediane-

lor

PMN

Diferenţa

mediilor

valorilor

medii

Ly

Diferenţa

mediilor

mediane-

lor

Ly

Diferenţa

mediilor

valorilor

medii

Mo

Diferenţa

mediilor

mediane-

lor

Mo

Diferenţă 0 1300 1600 100 100 700 750

normal - 1100 650 1050 1050 1350 450 900

patologic 1500 2850 2750 3800 3600 2850 2400

11500 -1050 800 3500 3300 2250 1800

14500 2200 2150 1300 1100 2950 2850

AOptimizare

BRepetabilitate

Figura 51 Optimizarea concentraţiei anticorpului anti-PPARα

Icircn concordanţă cu literatura de specialitate icircn cercetarea efectuată intensitatea medie

de fluorescenţă (MFI) a fost utilizată ca măsură pentru evaluarea expresiei celulare a

receptorilor PPARα (212) Un exemplu de analiză a probelor este reprezentat icircn figura 52

Figura 52 Exemplu de analiză flowcitometrică pentru receptorul nuclear PPARα Graficul din stacircnga reprezintă distribuţia leucocitelor iar cel din dreapta ilustrează distribuţia

intensităţii de fluorescenţă pentru populaţiile de celule selectate

Intensitatea Medie a Fluorescenţei (MFI) a CD36 ca o măsură a nivelului relativ de

expresie a acestor receptori la nivelul membranei Mo a fost detectată printr-o metodă

convenţională pentru marcare de suprafaţă şi evaluare pe bază de citometrie icircn flux folosind

aceleaşi probe de sacircnge cu EDTA cu focalizare pe Mo şi utilizacircnd CD14 ca marker specific

pentru Mo (figura 53)

Figura 53Analiza

flowcitometrică

pentru marcajul

CD14 - CD36

Rezultate

Icircn cele două loturi au fost incluşi icircn studiu un număr de 57 de participanţi care au fost

investigaţi din punct clinic şi paraclinic Vacircrsta subiecţilor incluşi icircn studiu a fost cuprinsă

icircntre 18 şi 79 ani iar vacircrsta medie calculată a avut valoarea de 4805 plusmn 1587 ani Pentru sexul

masculin vacircrsta medie este de 4925plusmn1617 ani iar pentru sexul feminin 4689 plusmn1 5ani

diferenţa obţinută icircntre vacircrstele pacienţilor fiind statistic nesemnificativă (P = 085)

Analizacircnd vacircrstele subiecţilor din cele două loturi am observat că vacircrsta medie a pacienţilor

cu SM (5476 plusmn 1183 ani) a fost semnificativ mai mare (t-test P = 0003) decacirct icircn lotul

martor (4258 plusmn 169 ani) Pentru diagnosticul sindromului metabolic am calculat scorul de

SM bazacircndu-ne pe criteriile Harmonised I Conform criteriilor diagnostice din cei 57 de

subiecţi investigaţi un număr de 26 participanţi (46) au fost incluşi icircn lotul cu SM (Lot

SM) iar 31 de subiecţi(54) nu au prezentat acest sindrom constituind lotul martor (Lot

Non-SM) Din punct de vedere al repartiţiei pe sexe nu au existat diferenţe statistic

semnificative raportul bărbaţifemei fiind de 0961 Din totalul celor 28 de bărbaţi incluşi icircn

studiu 4285 (12 bărbaţi) au icircntrunit cel puţin trei criterii diagnostice pentru SM fiind

incluşi icircn lotul SM Icircn acelaşi timp 14 femei reprezentacircnd 4827 din subiecţii de sex

feminin au icircntrunit condiţiile pentru includerea icircn lotul pacienţilor cu SM Valoarea medie

determinată pentru scorul de SM a arătat prezenţa unor valori semnificativ statistic mai mari

din punct (t-test P lt 00001) icircn lotul SM (769plusmn176) comparativ cu lotul martor (174 plusmn

184) Am studiat comparativ media valorilor măsurate ale criteriilor componentelor SM

Analiza statistică a arătat valori semnificativ statistic mai mari pentru CA TG glicemie TAS

şi TAD (plt0001) icircn lotul SM comparativ cu lotul normal Concomitent calculul statistica

evidenţiat o scăderea semnificativă a HDL-colesterolului icircn lotul cu SM comparativ cu

subiecţii din lotul martor (Non-SM) Aplicacircnd testul z am comparat ponderea pacienţilor

diagnosticaţi cu HTA dislipidemie şi tulburări ale metabolismului glucidic icircn lotul SM versus

lot Non-SM şi am constatat prezenţa acestor afecţiuni icircntr-un procent mai mare semnificativ

statistic icircn lotul SM ((plt0001)

Utilizacircnd testul t Student am calculat diferenţele statistice şi icircntre alți parametri

studiaţi care sunt factori de risc cardio-vascular dar care nu sunt componente ale SM Icircn lotul

cu SM valorile acidului uric fibrinogenului Col total Non-HDL-col şi LDL-col au fost

semnificativ mai mari comparativ cu lotul martor (tabel XXVI) Analizacircnd valorile medii ale

populaţiilor de leucocite am identificat doar pentru populaţia de Eo diferenţe statistice icircntre

cele două loturi numărul Eo icircn lotul SM fiind semnificativ mai mare decacirct icircn lotul martorTot

pentru caracterizarea celor două loturi am analizat prezenţa antecedentelor

heredocolaterale (AHC) de diabet zaharat boala cardiovasculară şi dislipidemie pentru toţi

subiecţii investigaţi Astfel existenţa AHC de HTA a fost declarată de 2580 din subiecţii

incluşi icircn lotul martor respectiv de 5384 din numărul pacienţilor cu SM Antecedentele

heredocolaterale de dislipidemie au fost prezente la 3461 din pacienţii cu SM icircn timp ce icircn

lotul martor anamneza a evidenţiat aceste antecedente la 3548 din subiecţi

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα

Icircn cercetarea desfăşurată am utilizat intensitatea medie de fluorescenţă (MFI) ca

măsură a nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn leucocitele studiate Pentru

populaţiile de leucocite analiza computerizată a probelor luate icircn studiu a furnizat valori

pentru MFI a receptorilor PPARα icircn funcţie de cantitatea de anticorpi anti-PPARα marcaţi cu

fluorocrom care se leagă de aceste celule şi apoi sunt captaţi de citometru (figura 59)

A Lot Non - SM

B Lot SM

Figura 59 Analiza flowcitometrică pentru receptorii PPARα icircn leucocite A lot normal B lot SM

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Mo

Analiza probelor efectuată conform protocolului de lucru descris a arătat prezenţa

PPARα icircn Mo recoltate din sacircngele tuturor subiecţilor incluşi icircn această cercetare Pentru toţi

participanţii investigaţi analiza MFI a Ac anti - PPARα icircn populaţia de Mo (Mo) a arătat un

interval de variaţie icircntre [786 395] Valoarea medie a nivelului de expresie relativă a PPARα

calculată pentru Mo a fost de 23210 plusmn7860 Pentru ambele loturi de studiu pacienţilor cu

SM testul Testul Shapiro-Wilk a arătat distribuţia normală a valorilor obţinute pentru nivelul

de expresie al PPARα icircn Mo

Tabel XXVIII Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn Mo

Lot SM Lot Non-SM

N 26 31

Media 22819 23538

SD 5819 7717

Mediana 22400 22600

Minimum 12800 78600

Maximum 35800 37900

Percentila 25 18300 18300

Percentila 75 26200 30350

Pentru pacienţii din lotul SM valoarea medie a MFI icircn Mo a fost de 22819 plusmn 5880 iar

pentru lotul martor s-a calculat o valoare medie a MFI a Ac anti-PPARα de 23538 plusmn 7717

Distribuţia statistică a frecvenţei valorilor MFI obţinute pentru nivelul de expresie a PPARα

icircn Mo subiecţilor din cele două loturi a fost reprezentată icircn figura 511

Figura 511 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti-PPARα icircn Mo

Sub forma unei diagrame de control Shewhart am reprezentat variaţia intensităţii medii de

fluorescenţă pentru anticorpii anti-PPARα icircn MoVariaţia nivelului de expresie relativă a

receptorilor PPARα icircn Mo subiecţilor studiaţi este ilustrată icircn fig 512 513

Figura 512 Lot SM Variaţia

expresiei relative a PPARα icircn Mo

Număr pacienţi

26

Minim 128

Maxim 358

Media 22819

DS 5819

25 din 26 valori ale MFI s-au icircncadrat

icircn intervalul Media plusmn 2DS

Figura 513 Lot Non-SM Variaţia

expresiei relative a PPARα icircn Mo

Număr pacienţi 31

Minimum 786

Maximum 379

Media 23538

DS 7717

Cu excepţia unei singure

determinări valorile calculate s-au

icircncadrat icircn Media plusmn 2DS

Utilizacircnd testul parametric t-Student pentru variabilele cu distribuţie normală am

comparat valoarea medie a intensităţii de fluorescenţă a Ac anti-PPARα icircn lotul cu SM versus

subiecţi fără SM (Lot Non-SM) Analiza statistică efectuată nu a identificat diferenţe icircntre

50 100 150 200 250 300 350 400 450

0

5

10

15

20

25

30

35

MFI anti-PPAR a

Frecv

enta

relati

va (

)

Lot SM

0 50 100 150 200 250 300 350 400 450 500

0

5

10

15

20

25

30

35

MFI anti-PPAR a

Frecv

enta

relati

va (

)

Lot martor

1 6 11 16 21 26 31

0

50

100

150

200

250

300

350

400

450

MFI

anti-

PPAR

a

2282

1106

3458

518

4046

Media

LCI

LCI

1 6 11 16 21 26 31 36

-100

0

100

200

300

400

500

MFI a

nti-PP

AR

a

2354

810

3897

39

4669LCS

LCI

Media

cele două loturi icircn ceea ce priveşte expresia PPARα la nivelul Mo circulante (t- Test P=

069)

Studiul receptorilor PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de AHC şi dislipidemie

Nivelul de expresie al receptorilor PPARα α icircn Mo tinde să fie mai scăzut la subiecţii

cu AHC de HTA comparativ subiecţii care nu au declarat AHC de HTA (P= 006 fig 515)

AHC HTA

Număr 22

Mediana 19950

Percentila 25 17800

Percentila 75 22700

AHC HTA absente

Număr 35

Mediana 24800

Percentila 25 19025

Percentila 75 31700

Figura 515 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Mo funcţie de AHC de HTA

Nu s-au calculat diferenţe semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor

PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de dislipidemie atunci cacircnd aceştia au fost comparaţi cu

subiecţii fără AHC de tulburări ale metabolismului lipidic (t- Test P= 020)

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn limfocite

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn populaţia de Ly a

demonstrat prezenţa receptorilor PPARα icircn Ly tuturor subiecţilor studiaţi Pentru toţi

participanţii investigaţi analiza MFI a Ac anti - PPARα icircn populaţia de Ly a relevat un

interval de variaţie icircntre [748 314] iar valoarea medie a MFI a fost de 18058 plusmn 5600

Pentru ambele loturi aplicarea testului Shapiro-Wilk a evidenţiat distribuţia normală a

valorilor determinate pentru nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Ly Pentru

pacienţii cu SM valoarea medie a MFI determinată pentru expresia PPARα icircn populaţia de

Ly a fost de 18178 plusmn 61 16 iar pentru lotul martor a fost de 16800 plusmn 5229

Tabel XXX Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn limfocite

Lot SM Lot Non-SM

N 26 31

Media 181781 179574

SD 611694 522907

Mediana 165000 168000

Minimum 81300 74800

Maximum 314000 301000

Percentila 25 13400 - 145750

Percentila 75 21800 21700

Distribuţia frecvenţei valorilor MFI a Ac anti-PPARα icircn Ly este redată icircn figura 518

Figura 518 Distribuţia frecvenţelor relative a MFI a Ac anti-PPARα icircn Ly

94 din determinările efectuate pentru determinarea nivelului de expresie relativă al

MFI

ant

iPPA

R

a_Mo

190

200

210

220

230

240

250

260

270

280

DA NU

AHC HTA

P=006

50 89 128 167 206 244 283 322 361 400

0

5

10

15

20

25

30

35

MFI anti-PPAR a

Frecv

enta

relati

va (

)

Lot SM

0 50 100 150 200 250 300 350

0

5

10

15

20

25

30

35

40

MFI anti-PPAR a

Frec

venta

relat

iva (

)

Lot Non-SM

receptorilor PPARα icircn limfocitele subiecţilor cu SM s-au icircncadrat icircn intervalul Media plusmn 2DS

Figura 5 19 Lot SM Variaţia expresiei

relative a PPARα icircn Ly

Număr pacienţi 26

Minimum 813

Maximum 31400

Media 18178

Deviaţia Standard 6116

25 valori s-au icircncadrat icircn Media plusmn 2DS

Pentru lotul Non-SM diagrama de control (figura 520) a arătat toate valorile

determinate pentru lotul Non-SM se icircncadrează icircntre LCS şi LCI

Figura 520 Lot Non -SM Variaţia

expresiei relative a PPARα icircn Ly

Număr pacienţi 31

Minimum 748

Maximum 30100

Media 179574

Deviaţia Standard 5229

96 din valori icircncadrate icircn Media plusmn 2DS

Aplicarea testului t-Student pentru valorile medii ale intensităţii de fluorescenţă ale

PPARα icircn Ly nu a arătat existenţa unei diferenţe statistic semnificative icircntre lotul cu SM şi

lotul martor(t- Test P= 088)

Analiza receptorilor PPARα icircn Ly subiecţilor cu AHC de HTA şi dislipidemie

Studiind populaţiile de Ly la subiecţii care au prezentat AHC de hipertensiune

arterială analiza flowcitometrică a relevat existenţa unor valori mai mici pentru MFI la aceşti

subiecţi comparativ cu cei fără AHC de HTA (fig 522) deşi scăderea observată nu a

icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică (t- Test P = 009)

AHC HTA

Număr 22

Mediana 16000

Percentila 25 12700

Percentila 75 17100

AHC HTA absenţe

Număr 35

Mediana 18700

Percentila 25 14900

Percentila 75 23175

Figura 522 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Ly funcţie de AHC de HTA

Nu am calculat diferenţe statistic semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor

PPARα icircn populaţiile de Ly ale subiecţilor la care am identificat AHC de dislipidemie

comparativ cu cei care nu au declarat antecedente familiale de dislipidemie (t- Test P= 051)

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn neutrofile (PMN)

Analiza flowcitometrică a evidenţiat prezenţa PPARα icircn PMN recoltate din sacircngele

venos al tuturor participanţilor la studiu Pentru toţi subiecţii investigaţi analiza MFI a Ac -

PPARα icircn populaţia de PMN a relevat un interval de variaţie de [163419] iar valoarea medie

a MFI pentru Ac anti-PPARα a fost de 26392 plusmn 7064 Testul Shapiro-Wilk a arătat o

distribuţie normală a valorilor intensităţii medii de fluorescenţă a anticorpilor anti-PPARα atacirct

icircn lotul pacienţilor cu SM cacirct şi icircn lotul martor

1 6 11 16 21 26 31

-50

0

50

100

150

200

250

300

350

400

MFI

anti-

PPAR

a

1818

595

3041

-17

3653

Media+2DS

Media- 2DS

1 6 11 16 21 26 31 36

0

50

100

150

200

250

300

350

MFI

ant

i-PPA

R

a

1796

750

2841

227

3364

Media+2DS

Media

Media- 2DS

MFI

anti-

PPAR

a Ly

130

140

150

160

170

180

190

200

210

DA NU

AHC HTA

P=009

Tabel XXXII Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn PMN

Lot SM Lot Non-SM

N 26 31

Media 26273 26480

SD 6915 7088

Mediana 25900 25500

Minimum 17200 16300

Maximum 39500 41900

Percentila 25 19800 19600

Percentila 75 30500 31500

Icircn cele două loturi distribuţia frecvenţei valorilor nivelului relativ de expresie a

receptorilor PPARα icircn PMN a fost reprezentată sub formă de histograme (fig 525)

Figura 525 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti-PPARα icircn PMN

Pentru cei 26 de pacienţi din lotul cu SM a valoarea medie a nivelului de expresie

relativă a receptorilor PPARα icircn PMN a fost de 26273 plusmn 6915 Studiind diagrama Shewhart

din figura 526 se observă că toate valorile obţinute pentru nivelul de expresie relativă

PPARα icircn PMN investigate se icircncadrează icircntre limitele definite de valorile medii plusmn 2DS

Figura 526 Lot SM

Variaţia expresiei relative a PPARα icircn

PMN

Număr pacienţi 26

Minimum 17200

Maximum 39500

Media 26273

Deviaţia Standard 6915

Valorile MFI icircncadrate icircn Media plusmn 2DS

Pentru lotul martor valoarea medie calculată a MFI a anticorpilor anti-PPARα a fost de

26480 plusmn 7088 peste 95 din valorile MFI fiind cuprinse icircn Media plusmn 2DS (figura 527)

Figura 527 Lot Non-SM Variaţia expresiei

relative a PPARα icircn PMN

Număr pacienţi 31

Minimum 16300

Maximum 41900

Media 26480

Deviaţia Standard 7088

30 valoriicircn Media plusmn 2DS

Pentru PMN analiza statistica nu a arătat existenţa unei diferenţe statistic semnificative icircntre

nivelul de expresie relativă a PPARα la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii din lotul

Non-SM (t- Test P= 090) Studiind populaţiile de PMN la subiecţii care au prezentat AHC

de HTA nu am calculat o diferenţă statistic semnificativă icircntre expresia receptorilor PPARα

la subiecţii cu istoric familial de hipertensiune arterială comparativ cu cei pentru care nu s-au

notat AHC de HTA (t- Test P= 013)De asemenea am identificat diferenţe icircntre nivelul de

expresie al PPARα icircn PMN subiecţilor care prezentau AHC de dislipidemie comparativ cu

cei fără AHC de dislipidemie (t- Test P= 017)

50 100 150 200 250 300 350 400 450 500

0

5

10

15

20

25

30

35

MFI anti-PPAR a

Frecve

nta rel

ativa (

)

Lot SM

50 100 150 200 250 300 350 400 450 500

0

5

10

15

20

25

30

MFI anti-PPAR a

Frecv

enta

relati

va (

)

Lot Non-SM

1 6 11 16 21 26 31

0

50

100

150

200

250

300

350

400

450

500

MFI

anti-

PPA

R

a

2627

1244

4010

553

4702

Media + 2DS

Media - 2 DS

Media

1 6 11 16 21 26 31 36

0

50

100

150

200

250

300

350

400

450

500

MFI

anti-

PPAR

a

2648

1230

4066

522

4774

Media+ 2DS

Media - 2DS

Media

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile Tabel XXXIV Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn Eo

Lot SM Lot Non-SM

N 26 31

Mediaplusmn SD 141057 plusmn 47604 172209 plusmn 37565

Mediana 142450 171300

Minimum 35000 68500

Maximum 233700 250600

Percentila 25 119300 153225

Percentila 75 169700 199550

Am studiat nivelul relativ de expresie a receptorilor PPARα icircn Eo iar rezultatele au

fost figurate sub forma de histograme (figura 532)

Figura 532 Distribuţia frecventelor relative ale valorilor MFI anti- PPARα icircn Eo

Din diagrama Shewhart (figura 533) se observă că toate valorile determinate pentru

nivelul de expresie relativă a PPARα icircn Eo pentru lotul SM s-au icircncadrat icircn [Media plusmn 3 DS]

peste 90 din determinări fiind cuprinse icircn [Media plusmn 2 DS] iar icircn [Media plusmn 1 DS] sunt

incluse peste 65 din valorile MFI

Figura 533 Lot SM

Variaţia expresiei relative a PPARα icircn Eo

Număr pacienţi 26

Minimum 35000

Maximum 233700

Media 141057

Deviaţia Standard 47604

24 valori icircncadrat eicircn [Media plusmn 2DS]

Pentru subiecţii incluşi icircn lotul martor analiza diagramei (figura 534) a arătat că

toate cele 31 de valori ale MFI pentru PPARα icircn Eo se icircncadrează icircn [Media plusmn 3DS] iar 30

dintre acestea se icircncadrează icircn [ Media plusmn 2 DS]

Figura 534 Lot Non -SM

Variaţia expresiei relative a PPARα icircn Eo

Număr pacienţi 31

Minimum 685

Maximum 2506

Media 172209

Deviaţia Standard 375 65

30 valori icircncadrate icircn [Media plusmn 2DS]

Comparacircnd subiecţii cu SM cu cei din lotul martor am observat o scădere

semnificativă statistic a MFI a Ac anti - PPARα icircn Eo pentru pacienţiir cu SM ( figura 535)

PPARα Eo Lot Non-SM

Număr 31

Mediana 171300

Percentila 25 152325

Percentila 75 199550

PPARα Eo Lot SM

Număr 26

Mediana 142450

Percentila 25 119300

Percentila 75 169700

Figura 5 35 Comparaţie icircntre nivelul de expresie a PPARα icircn Eo

0 500 1000 1500 2000 2500 3000

0

10

20

30

40

50

MFI anti-PPAR a

Frecvent

a relativa

()

Lot SM

400 800 1200 1600 2000 2400 2800

0

5

10

15

20

25

30

35

40

45

MFI anti-PPAR a

Frecenta

relativa

()

Lot Non-SM

1 6 11 16 21 26 31

-500

0

500

1000

1500

2000

2500

3000

MFI a

nti-PP

AR

a

14106

4765

23447

94

28117

Media + 2DS

Media- 2DS

LCI

LCS

1 6 11 16 21 26 31 36

500

1000

1500

2000

2500

3000

MFI an

ti-PPA

R a

17221

9708

24734

5951

28490

LCI

Media-2DS

Media

Media +2 DS

LCS

1200

1300

1400

1500

1600

1700

1800

1900

Lot SM Lot Non-SM

P=00072

Cu ajutorul curbei ROC am evaluat posibilitatea utilizării MFI a Ac anti - PPARα icircn

Eo ca marker pentru diagnosticul SM Valoarea MFI a Ac anti - PPARα icircn Eo care prezice cu

cea mai mare acurateţe prezenţa SM a fost de 1533 (punctul de ldquocut-offrdquo) pentru care am

calculat o sensibilitate de 5652 şi o specificitate de 7778 Calculul ariei AUC a furnizat

valoarea de 0663 şi deci determinarea parametrului MFI anti- PPARα icircn Eo are valoarea

unui test cu acurateţe redusatilde icircn diagnosticul SM Studiind expresia PPARα icircn Eo la subiecţii

care au prezentat AHC de HTA am observat o scădere semnificativă statistic (P = 00023) a

expresiei PPARα la subiecţii cu istoric familial de HTA comparativ cu subiecţii fatilderatilde AHC de

HTA (figura 537)

AHC HTA

Număr 22

Mediana 148800

Percentila 25 116425

Percentila 75 170750

AHC HTA absente

Număr 35

Mediana 170850

Percentila 25 143700

Percentila 75 195000

Figura 537 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Eo funcţie de AHC de HTA

Studiind subiecţii cu AHC declarate de dislipidemie nu am identificat diferenţe icircntre

nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Eo subiecţilor cu AHC de dislipidemie

comparativ cu cei care nu au declarat prezenţa AHC de dislipidemie (t - Test P = 067)

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor CD36

Am studiat expresia receptorilor CD36 icircn Mo subiecţilor incluşi icircn studiu

Lot Non - SM

BLot SM

Figura 539 Analiza flowcitometrica pentru receptorii CD36 icircn Mo

Pentru toţi participanţii la studiu valorile MFI au variat icircn intervalul [817 6933] iar

valoarea medie a MFI a Ac anti-CD36 a fost de 397133 plusmn 120902 Tabel XXXVII Statistică descriptivă pentru a CD36 icircn Mo

Lot SM Lot Non-SM

Media 429034 370377

Deviatia Standard 109051 125514

Mediana 411000 362800

Minimum 266400 81700

Maximum 693300 616800

Percentila 25 346200 273750

Percentila 75 469000 453300

Distribuţia frecvenţelor relative a MFI au fost prezentate sub formă histogramelor

Figura 541 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti - CD36 icircn Mo

MFI

ant

i-PPA

R a Eo

1000

1100

1200

1300

1400

1500

1600

1700

1800

1900

DA NU

AHC HTA

P=00023

1000 2000 3000 4000 5000 6000 7000 8000

0

5

10

15

20

25

MFI anti-CD36

Frecve

nta rela

tiva (

)

Lot SM

0 1778 3556 5333 7111

0

5

10

15

20

25

30

35

MFI anti-CD36

Frecve

nta rel

ativa (

)

Lot Non - SM

Referitor la lotul SM 92 din valorile MFI a Ac anti- CD36 s-au icircncadrat icircn

intervalul Media plusmn 2 DS (figura 542) iar pentru lotul martor peste 90 dintre acestea icircn

Media plusmn 2 DS (figura 543)

Figura 542 Lot SM

Variaţia MFI anti-CD36 icircn Mo

Număr pacienţi 26

Minimum 2664

Maximum 6933

Media 429034

Deviaţia Standard 109051

Figura 543 Lot Non -SM

Variaţia MFI anti- CD36 icircn Mo

Număr 31

Minimum 81700

Maximum 616800

Media 370377

Deviaţia Standard 125514

Comparacircnd subiecţii cu SM cu cei din lotul normal am constatat o tendinţă de creştere

a expresiei CD36 icircn lotul cu SM((t - Test P= 0067)

MFI anti - CD36 Lot Non-SM

Număr 31

Mediana 3628

Percentila 25 2737

Percentila 75 4533

MFI anti - CD36 Lot SM

Număr 26

Mediana 4110

Percentila 25 3462

Percentila 75 4690

Figura 544 Comparaţie icircntre cel două loturi privind MFI anti - CD36 icircn Mo

Referindu-ne la subiecţii cu AHC de HTA am observat o tendinţă de creştere a

valorilor MFI anti-CD36 comparativ cu cei care nu au avut AHC de HTA (t - Test P = 0 08)

AHC HTA

Număr 22

Mediana 442800

Percentila 25 355275

Percentila 75 519475

AHC HTA absenţe

Număr 35

Mediana 377400

Percentila 25 316900

Percentila 75 443400

Figura 545 Comparaţie icircntre expresia CD36 icircn Mo funcţie de AHC de HTA

Nu s-au calculat diferenţe semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor

PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de dislipidemie atunci cacircnd aceştia au fost comparaţi cu

subiecţii fără AHC de dislipidemie (t - Test P=031)

Corelaţii icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα si CD36

Studiind valorile intensităţii medii de fluorescenţă a Ac anti-PPARα icircn Mo Ly şi

PMN am observat că nivelul de expresie celularatilde a PPARα icircn Mo Ly şi PMN sunt corelate

puternic pozitiv atacirct icircn lotul SM cacirct şi icircn lotul martor(fig547 548)

1 6 11 16 21 26 31

0

1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

8000

Pacienti

MFI a

nti-CD

36

42903

21093

64714

10188

75619

LCI

Media

LCS1 6 11 16 21 26 31 36

-1000

0

1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

8000

MFI a

nti- C

D36

37038

11935

62141

-616

74692Media + 2 DS

Media

Media - 2 DS

3200

3400

3600

3800

4000

4200

4400

4600

4800

Lot SM Lot Non-SM

P = 00676

MFI

anti-

CD36

3400

3600

3800

4000

4200

4400

4600

4800

5000

DA NU

AHC HTA

P = 008

Figura 547 Studiul relatiilor dintre

receptorii PPARα icircn SM A Mo vs PMN B Mo vs Ly

C PMN vs Ly Graficul ilustrează coeficienţii r P dreapta de

regresie (linia centrala) intervalul de icircncredere

95 şi intervalul de predicţie 95

Figura 548 Corelaţii icircntre receptorii PPARα icircn lotul

martor

A Mo vs PMN

B Mo vs Ly

C PMN vs Ly

Tot pentru lotul SM cacircnd am evaluat relaţia dintre nivelul de expresie relativă a

receptorilor PPARα icircn Eo şi nivelul de expresie relativa a receptorilor CD 36 am obţinut o

corelaţie negativă (r = - 05 P = 001) (fig 549 A)

50 100 150 200 250 300 350 50

100

150

200

250

300

350

400

450

500

PPARα Ly

PPARα PMN

y = 56641 + 1159 x r = 086 P lt 0001

C

50 100 150 200 250 300 350 400 0

50

100

150

200

250

300

350

PPARα Mo

PPARα Ly

y = 36665 + 0607 x r = 090 P lt 0001

B

150 200 250 300 350 400 450 0

50 100 150 200 250 300 350 400 450 500

PPARα PMN

PPARα Mo

y = 2505 + 0879 x r = 081 P lt 0001

A

50 100 150 200 250 300 350

50 100 150 200 250 300 350 400 450 500

PPARα Ly

PPARα PMN

y = 95668 + 0919 x r = 081 P lt 0001

C

100 150 200 250 300 350 400

0

50

100

150

200

250

300

350

400

PPARα Mo

PPARα Ly

y = -7503 + 0829 x r = 079 P lt 0001

B

100 150 200 250 300 350 400

50

100

150

200

250

300

350

400

450

500

PPARα Mo

PPARα PMN

y = 61384 + 0882 r = 074 P lt 0001

A

Figura 549 Corelaţii icircntre expresia PPARα icircn Eo şi alte tipuri de receptori investigaţi A PPARα Eo şi CD 36 (Lot SM) B PPARα Eo şi PPARα Mo( Lot Non-SM)

Icircn lotul martor am identificat o asociere moderată pozitivă (r = 038 P = 0033) icircntre

nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Eo şi Mo (figura 549B) corelaţie absentă icircn

lotul pacienţilor cu SM

Corelaţii dintre receptorii studiaţi şi componentele sindromului metabolic

Icircn lotul de control analiza statistică a relevat faptul că icircntre circumferinţa

abdominală (CA ) şi nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Mo Ly şi PMN există o

corelaţie inversă adică scăderea expresiei PPARα la nivelul acestor populatii celulare ar fi

icircnsoţită de creşterea CA (figura 550

Figura 550Corelaţii dintre receptorii

PPARα si CA A Mo B Ly C PMN

La pacienţii cu SM am notat o corelatie moderată negativă statistic semnificativă

icircntre TG şi valorile MFI a Ac anti- PPARα icircn Mo şi Ly( fig 551)

150 200 250 300 350 400 450 50

60

70

80

90

100

110

PPARα PMN

CA r = - 040 P = 0024

C

50 100 150 200 250 300 350 50

60

70

80

90

100

110

PPARα Ly

CA r = - 046 P = 0009

B

50 100 150 200 250 300 350 400 50

60

70

80

90

100

110

PPARα Mo

CA r = - 042 P = 0017

A

50 100 150 200 250 300 350 400 500

1000

1500

2000

2500

3000

PPARα Mo

PPARα Eo

r = 038 P = 0033

B

0 500 1000 1500 2000 2500 1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

8000

PPARα Eo

CD36

r = 050 P = 0010

A

Figura 551 Lot SM Corelaţie icircntre expresia PPARα şi TG (A Mo B Ly)

Analizand corelatia dintre receptorii CD36 si valorile TA la pacientii cu SM am observat

o asociere pozitivă asteptată intre TAD si nivelul de expresie al receptorilor CD36 (fig 552)

Figura 552 Lot SM Corelaţii icircntre expresia

receptorilor CD36 şi valorile tensiunii arteriale

diastolice

Studiind corelaţiile dintre receptorii PPARα şi HDL-col la subiecţii din lotul martor am

notat o asociere pozitivă icircntre expresia PPARα icircn Mo şi Ly cu HDL-col (fig 553)

Figura 553 Lot martor Corelaţii icircntre HDL-col şi expresia PPARα icircn Mo(A) Ly(B)

Icircn lotul normal am evidenţiat corelaţii pozitive moderate dar semnificative statistic icircntre

CA şi valorile TAS (r = 062 P lt 0001) respectiv TAD (r = 050 P=0004) precum şi icircntre

CA şi glicemia subiecţilor normali (r = 052 P = 0003) Aceste date icircmpreună cu relaţia

invers proporţională identificată icircntre HDL-col şi CA (r = 050 P = 001) susţin validitatea

acestui studiu Icircn lotul subiecţilor cu SM am observat o corelaţie moderat pozitivă icircntre

expresia PPARα icircn populaţiiile de Mo şi Eo şi concentraţia a HDL-col (fig 554)

B

100 150 200 250 300 350 20

30

40

50

60

70

80

90

100

PPARα Ly

HDL-col-(mgdl)

r = 036 P = 0046

A

150 200 250 300 350 400 20

30

40

50

60

70

80

90

100

PPARα Mo

HDL-col-(mgd)l

r = 035 P = 005

70 75 80 85 90 95 100 1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

8000

TAD (mmHg)

CD36

r = 048 P = 0013

B

50 100 150 200 250 300 350 -100

0

100

200

300

400

500

PPARα Ly

TG(mgdl)

r = - 042 P = 003

A

50 100 150 200 250 300 350 400 -100

0

100

200

300

400

500

PPARα Mo

TG ( mgdl) r =- 0 43 P = 0027

Figura 554 Corelaţii icircn SM icircntre HDL-col şi expresia PPARα icircn Mo (A) şi Eo(B)

Corelaţii icircntre nivelul de expresie relativă a PPARα şi markeri ai disfuncţiei

endoteliale şi inflamaţiei cronice

Deşi nu a icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică am reţinut corelaţia invers

proporţională (r = - 0331 P = 006) dintre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα

icircn PMN şi concentraţia serică a Non-HDL-colesterolului

Studiind relaţiile dintre parametri icircn lotul de pacienţi cu SM am observat o corelaţie

moderată invers proporţională icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Eo şi

acidul uric seric (figura 555 A) corelaţie absentă la subiecţii fără SM

Figura 555 Lot SM corelaţia dintre expresia PPARα icircn Eo şi acidul uric (A) respectiv

PPARα şi fibrinogen (B)

Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P=008) am notat pentru

pacienţii cu SM corelaţia invers proporţională dintre expresia PPARα icircn Eo şi concentraţia

serică a fibrinogenului ( figura 555B)

V5 Discuţii

Icircn cadrul lucrării de doctorat am studiat nivelul de expresie relativă a PPARα icircn

leucocitele pacienţilor cu SM comparativ cu cea a subiecţilor normali Expresia PPARα a fost

studiată icircn paralel cu cea a CD36 glicoproteină exprimată pe suprafaţa a numeroase celule

din organismul uman inclusiv pe cea a Mo şi macrofagelor Prin funcţia sa de receptor pentru

particulele oxidate de LDL CD36 cunoscut ca bdquoscavenger receptorrdquo de clasa B sau

bdquotrombospodin receptorrdquo contribuie la dezvoltarea inflamaţiei de la nivel endotelial şi

formarea plăcii de ateroscleroză Referitor la studiul PPARα icircn Eo icircn sindromul metabolic

menţionăm că studiul nostru este primul care arată că nivelul de expresie a proteinei PPARα

icircn Eo măsurat prin citometrie icircn flux este semnificativ mai redus la pacienţii care sunt

diagnosticaţi cu acest sindrom De asemenea icircn lotul cu SM cercetat icircn cadrul studiului

receptorilor PPARα numărul Eo circulante a fost semnificativ mai crescut la pacienţii cu SM

B

0 500 1000 1500 2000 2500 200

250

300

350

400

450

PPARα Eo o

Fibrinogen mgdl

r =- 036 P = 008

0 500 1000 1500 2000 2500 1 2 3 4 5 6 7 8 9

10 11

PPARα Eo_

Acid uric(mgdl) r = 048 P = 0014 A

0 500 1000 1500 2000 2500 10

20

30

40

50

60

70

80

PPARα Eo

HDL(mgdl)

r = 044 P = 0024

B

100 150 200 250 300 350 400 10

20

30

40

50

60

70

80

PPARα Mo

HDL( mgdl)

r = 046 P = 0019

A

(P = 003) Aceste constatări conduc la ipoteza că Eo joacă un rol special icircn mecanismele

patogenice declanşate icircn sindromul metabolic şi că receptorii PPARα sunt importanţi icircn

implicarea Eo icircn obezitate şi insulinorezistenţă Creşterea numărului de Eo circulante este

urmată de eliberarea mediatorilor proinflamatori iar reducerea expresiei PPARα icircn Eo

determină perturbarea mecanismelor de control al inflamaţiei cu exacerbarea cascadei

proinflamatorii Consecutiv se agravează disfuncţia endotelială şi se accelerează progresia

leziunilor de ateroscleroză Extrapolacircnd aceste ipoteze putem spune că asocierea raportată

dintre boala ischemică coronariană şi Eo poate fi şi consecinţa exacerbării cascadei

proinflamatorii de la nivel vascular produsă datorită scăderii expresiei PPARα icircn Eo iar

creşterea numărului de Eo circulante poate reprezenta o adaptare a organismului uman care

icircncearcă să suplinească deficitul de receptori PPARα Analizacircnd curba ROC pentru

intensităţile medii de fluorescenţă determinate pentru anticorpii anti- PPARα icircn Eo am

obţinut pentru acest biomarker o sensibilitate a testului de 565 şi o specificitate de 778

pentru un punct de cut-off de 1533 ( figura 536 ) Deşi aria AUC (Aria under the curve) egală

cu 0663 icircncadrează acest test ca avacircnd o acurateţe redusă observăm că că această valoare

este apropiată de determinările AUC pentru alţi factori (fibrinogen raport de aterogenitate

acid uric non- HDL-colesterol) cunoscuţi ca fiind implicaţi icircn aterogeneză şi inflamaţia

cronică (figura 431) Aceste remarci alături de faptul că icircn studiul receptorilor PPARα icircn

leucocite am inclus subiecţi la primul diagnostic de SM creează premisa integrării

determinării expresiei relative a receptorilor PPARα icircn diagnosticul complex al sindromului

metabolic Putem spune că icircn final studiul expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofilele

circulante se dovedește a fi util icircn diagnosticul precoce la nivel molecular al SM permiţacircnd

identificarea timpurie a unor indivizi cu risc cardiometabolic crescut Astfel intervenţia

precoce asupra subiecţilor cu deficit de PPARα icircn Eo contribuie la managementul eficient al

afecţiunilor degenerative icircn care inflamaţia cronică icircndeplineşte un rol primordial Referitor

la populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările efectuate prin citometrie de flux nu au

arătat existenţa unor diferenţe statistice icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα

la subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali Rezultatele noastre pot fi

consecinţa caracteristicilor loturilor studiate (icircn studiul nostru au fost incluşi subiecţi recrutaţi

la primul diagnostic de SM şi icircn absenţa stimulării receptorilor PPARα cu droguri agoniste

PPARα) dar icircn acelaşi timp pot apare diferenţe datorită metodei utilizate (231 232 233)

Făcacircnd o paralelă cu un studiu publicat icircn 2013 icircn Europa (231) care a arătat creşterea

nivelului de expresie al PPARα icircn Ly şi Mo observăm că deşi numărul de subiecţi a fost

aproximativ egal (57 participanţi icircn studiul nostru 60 icircn studiul DAmore) subiecţii icircn studiul

amintit au fost recrutaţi dintr-o clinică cu profil medical la primul diagnostic de SM icircn timp

ce metoda utilizată a fost PCR (Polymerase Chain Reaction) mult mai fidelă decacirct citometria

icircn flux icircn studiul receptorilor nucleari De asemenea DAmore nu investighează expresia

PPARα icircn Eo şi PMN icircn cercetare fiind incluse doar celulele CD14+ (predominant Mo) şi

CD14- (predominant Ly) Deşi nu am obţinut diferenţe statistic semnificative icircntre cele două

loturi referitoare la nivelul de expresie relativă a PPARα icircn Mo Ly şi PMN am observat

corelaţii puternice semnificative statistic icircntre expresia receptorilor PPARα icircn aceste tipuri

celulare Rezultatele obţinute sugerează existenţa unui mecanism diferit molecular de control

icircn eozinofile care reglează cantitatea de proteină PPARα icircn eozinofile versus alte tipuri de

leucocite (la pacienţii cu SM) şi acest lucru este icircn concordanţă cu cercetările care descriu

expresia PPARα mRNA icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale

bronşice keratinocite) Studiind prin citometrie de flux nivelul de expresie relativă a

receptorului CD36 la nivelul Mo am arătat prezenţa acestuia icircn Mo tuturor subiecţilor

investigaţi Analizacircnd valorile intensităţii medii de fluorescenţă a CD36 icircn loturile studiate

am observat o tendinţă de creştere la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali

confirmacircnd implicarea receptorului CD36 icircn patogeneza acestuia Referitor la expresia

receptorului CD36 rezultatele obţinute sunt icircn consens cu studii anterioare care au arătat

creşterea expresiei CD36 la pacienţii cu SM şi diabet zaharat Astfel pe lacircngă diferenţa icircn

expresia CD36 s-au raportat şi corelaţii inverse icircntre expresia proteinei CD36 şi nivelul

adiponectinei Acelaşi studiu a evidenţiat o corelaţie pozitivă intre expresia CD36 cu expresia

receptorilor PPAR gamma relaţia cu PPARα nefiind investigată

Analiza de subgrup a relaţiilor dintre componentele SM și elementele moleculare

proinflamatorii studiate a relevat prezenţa unor asocieri semnificativ statistice icircntre acestea

Se argumentează astfel că veridicitatea studiului este susţinută de interdependenţele statistice

ale componentelor SM Determinarea coeficientului de corelaţie Icircn studiul nostru nivelul de

expresie relativă a PPARα s-a corelat moderat negativ (figura 550) cu CA a subiecţilor din

lotul normal pentru populaţiile celulare de Mo (r = - 0420 P = 001) Ly (r = - 046 P =

0009) şi PMN (r = - 040 P = 0024) date care sunt icircn concordanţă cu studiile care arată

rolul PPARα icircn furnizarea energiei prin beta-oxidarea acizilor graşi Icircn acelaşi timp icircn lotul

pacienţilor cu SM nu am identificat prezenţa unei asocieri icircntre nivelul de expresie relativă a

PPARα şi valoarea măsurată a CA Asocierea dintre expresia relativă a PPARα cu obezitatea

de tip central completează datele existente referitoare la reglarea homeostaziei energetice

conturacircnd un mecanism de control deficitar al aportului caloric al SM Icircn condiţiile icircn care

rezultatele obţinute prin metoda citometriei icircn flux nu au arătat existenţa unei corelaţii intre

expresia PPARα şi CA la pacienţii cu SM considerăm că ar fi necesar studiul

polimorfismului genei PPARA care ar putea aduce informaţii importante cu privire la

implicarea acestor receptori icircn apariţia obezităţii de tip central Subliniem acest lucru deoarece

obezitatea este o boală plurifactorială icircn care pe lacircngă factorii ereditari sunt implicaţi factori

de mediu psihologici şi sociali (245) Existenţa unei componente genetice a aterosclerozei

este legată şi de prezenţa unor variante ale genei PPARA asociate cu creşterea incidenţei bolii

cardiovasculare (82) şi a SM (249) Icircn studiul nostru am constatat o scădere statistic

semnificativă a nivelului expresiei relative a receptorilor PPARα icircn Eo la subiecţii cu

antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială comparativ cu subiecţii fără istoric

familial de hipertensiune (figura 537) Deşi diferenţele calculate icircntre loturile studiate nu au

icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică la subiecţii care au declarat prezenţa

antecedentelor familiale de hipertensiune arterială remarcăm o tendinţă de scădere a

intensităţii medii de fluorescenţă pentru Ac anti-PPARα la nivelul Mo (figura 515 P = 006

) icircn timp ce expresia relativă a CD36 icircnregistrează o creştere la acesti subiecţi (figura 545 P

= 008) Icircn contextul riscului cardiovascular foarte icircnalt al pacienţilor cu SM amintim şi

existenţa corelaţiei pozitive dintre valorile tensiunii arteriale diastolice şi expresia relativă a

receptorului CD36 (r = 0483 P = 0013) Această constatare este icircn consens cu studiile care

au arătat că forma solubilă circulantă a CD36 este asociată cu factorii de risc cardiovasculari

fiind propusă ca un marker precoce al aterosclerozei Activarea PPARα este asociată cu

modularea metabolismului lipidic iar agoniştii PPARα sunt utilizaţi icircn mod curent pentru

tratamentul dislipidemiei Sub acţiunea agoniştilor PPARα se obţine o icircmbunătăţire a funcţiei

endoteliale şi a parametrilor reologici funcţiile pleiotropice ale agoniştilor PPARα fiind

dovedite icircn trialuri clinice controlate Icircn populaţiile de Mo şi Ly la pacienţii cu SM

cercetarea noastră a evidenţiat o asociere negativă icircntre nivelul de expresie relativă a

receptorilor PPARα şi concentraţia TG serice (figura 551) Astfel scăderea expresiei

receptorilor PPARα este asociată cu creşterea nivelului TG serice contribuind la profilul

lipidic aterogen din SM Icircn conformitate cu literatura de specialitate icircn studiul efectuat prin

metoda citometriei icircn flux am găsit prezenţa asocierii icircntre nivelul de expresie al PPARα şi

HDL-colesterol Corelaţia pozitivă dintre nivelul de expresie relativă PPARα şi concentraţia

HDL-colesterolului a fost observată icircn lotul martor icircn populaţiile de Mo (r = 035 P = 005)

şi Ly ( r = 036 P = 004) (figura 553) susţinacircnd faptul că stimularea receptorilor PPARα

este legată de creşterea nivelului seric al lipoproteinelor cu densitate crescută La pacienţii cu

SM corelaţia dintre expresia PPARα şi HDL-colesterol a fost evidenţiată icircn populaţiile de Mo

(r = 046 P = 0019) şi eozinofile (r = 044 P = 0024) Se desprinde concluzia că icircn

sindromul metabolic scăderea concentraţiei HDL-colesterol este legată de diminuarea

nivelului de expresie relativă a receptorilor nucleari PPARα icircntărind afirmaţiile legate de

rolul acestor receptori icircn progresia bolilor cardiovasculare Studiind reactanţii de fază acută

analiza statistică a relevat o diferenţă semnificativă din punct de vedere statistic icircntre valorile

fibrinogenului la pacienţii cu SM atunci cacircnd au fost comparaţi cu subiecţii fără SM

(Capitolul IV4 P lt0 001 figura 427A) De asemenea icircn Capitolul V dedicat studiul

expresiei relative a receptorilor PPARα studiul valorilor fibrinogenului a arătat creşterea

acestui reactant de faza acută icircn lotul cu SM comparativ cu lotul martor (P lt0 0001) Icircn

studiul nostru am calculat o corelaţie invers proporţionala (r = - -036 fig 555B) icircntre

nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile şi concentraţia serică a

fibrinogenului Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P = 008) am reţinut

această asociere deoarece am demonstrat că nivelul de expresie relativă al receptorilor

PPARα icircn eozinofile este mai scăzut icircn sindromul metabolic iar sindromul metabolic este

caracterizat printr-un status inflamator cronic status caracterizat şi de creşterea concentraţiei

serice a fibrinogenului De asemenea notam ca această corelaţie negativă se află icircn

concordanţă cu studiile care arata că tratamentul cu agonişti PPARα (fibraţi) determina

scăderea nivelului seric al fibrinogenului contribuind la diminuarea inflamaţiei cronice din

sindromul metabolic şi icircn consecinţă amelioracircnd insulinorezistenţa

LIMITE ȘI DIFICULTĂȚI IcircN CERCETARE

Icircn cadrul Tezei de Doctorat am desfăşurat o cercetare care şi-a propus studierea

expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Recrutarea anamneza şi examinarea

clinică a subiecţilor au fost realizate icircn cadrul Cabinetului de Medicină de Familie CMI Popa

Elena din Iaşi iar determinările hematologice şi biochimice s-au efectuat icircn cadrul

Laboratorului Ambulatorului de Specialitate al Spitalului Universitar ldquoSfacircntul Spiridon din

Iaşi Icircn studiul epidemiologic şi al markerilor inflamatori al sindromului metabolic desfăşurat

au fost incluşi un număr de 1530 de participanţi pe baza liberului consimţămacircnt examinaţi icircn

perioada 01012013 - 31122013 Icircn continuare icircn perioada 1012014 - 28022014 pe baza

criteriilor de includere şi excludere icircn cele două loturi de studiu am investigat un număr de 57

de subiecţi prezentaţi la consultaţie icircn această perioadă şi care au icircndeplinit criteriile de

includere icircn cele două loturi (Lot SM şi Lot Control) constituite pentru evaluarea nivelului de

expresie a receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Explorarea nivelului de expresie

relativă a receptorilor PPARα s-a desfăşurat icircn cadrul Laboratorului de Biologie Moleculară

de pe platforma Institutului Regional de Oncologie Datorită resurselor proprii financiare

limitate trebuie să subliniez că aceasta cercetare nu ar fi fost posibilă fără contribuţia unor

cercetători din domeniul medical care m-au sprijinit necondiţionat atacirct icircn elaborarea

protocolului de lucru cacirct şi icircn efectuarea propriu-zisă a studiului Icircn acest sens menţionăm şi

faptul că pentru studiul receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic am utilizat aparatura

Laboratorului de Biologie Moleculară (care deserveşte icircntreaga Regiune a Moldovei) Pe

această cale mulţumesc personalului Laboratorului de Biologie Moleculară pentru ajutorul

acordat icircn desfăşurarea cercetării doctorale icircn condiţiile icircn care se observa creşterea

numărului de pacienţi care se adresează acestei platforme de cercetare Mulţumesc de

asemenea şi Doamnei Doctor Elena Butoi din cadrul Institutului de Biologie şi Patologie

Moleculară ldquoNicolae Simionescurdquo Bucureşti) pentru donaţia anticorpului secundar anti-

FITC Icircn consecinţă pentru recrutarea unui număr mai mare de participanţi ar fi fost necesară

icircn primul racircnd obţinerea unor resurse financiare suplimentare pentru achiziţia de aparatură şi

reactivi Totuşi numărul subiecţilor recrutaţi este apropiat de numărul subiecţilor raportaţi icircn

cadrul unor granturi de cercetare care aveau ca ţinta studiul expresiei receptorilor PPARα

(212 227 228 231) Rezultatele obţinute continua seria lucrărilor care arata importanta

studiului mecanismelor etiopatogenice ale sindromului metabolic patologie care se afla icircntr-o

continuă creştere La pacienţii cu SM pe lacircngă diminuarea nivelului de expresie a receptorilor

PPARα icircn eozinofile ne aşteptam şi la evidenţierea unor modificări icircn expresia PPARα şi icircn

populaţiile de Ly Mo şi PMN Acest fapt poate fi explicat de utilizarea unor celule provenite

de la pacienţi fără afectare cardiovasculară fără diabet zaharat şi necesită continuarea

studiului pe culturi celulare icircn condiţii de stimulare cu agonişti PPARα deziderat care

impune continuarea investigării expresiei PPARα printr-un grant de cercetare

ORIGINALITATEA ȘI CONTRIBUȚIILE INOVATIVE ALE TEZEI DE

DOCTORAT PERSPECTIVE DE CERCETARE

Evaluarea nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn leucocitele circulante

aduce noi perspective icircn studiul obezităţii şi sindromului metabolic Importanta studiului

expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic derivă din prevalenta crescută a

sindromului metabolic icircn populaţia cercetată la care se adaugă riscul cardiovascular foarte

icircnalt al acestor pacienţi cu implicaţii majore icircn sănătatea publică Rolul receptorilor PPARα

icircn inflamaţie şi aterogeneza este binecunoscut dar studiul nostru este primul care a arătat că

nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα este semnificativ mai scăzut in populatiile

de eozinofile la pacienţii cu SM Această concluzie coroborata cu existenţa unei stracircnse

asocieri intre expresia receptorilor PPARα la nivelul Mo limfocitelor şi PMNlor creeaza

ipoteza existenţei unui mecanism de control diferit al expresiei PPARα la nivelul

eozinofilelor Această cercetare aduce informaţii importante referitoare la mecanismele

proinflamatorii care stau la baza insulinorezistenţei şi riscului cardiometabolic şi impune

continuarea studiului acestor receptori nucleari prin citometrie icircn flux metodă care poate fi

aplicată şi la scara mai largă dacă sunt asigurate resursele materiale necesare cercetării

Cercetarea prin citometrie icircn flux poate fi completată de studiul polimorfismului genei

PPARA şi astfel se pot identifica timpuriu indivizii cu potenţial risc cardiometabolic crescut

Studiul receptorilor PPARα a stabilit conexiuni cu factori proinflamatori şi aterogenetici iar

continuarea cercetării poate aduce şi elemente noi de diagnostic precoce icircn sindromul

metabolic contribuind la icircmbunătăţirea prognosticului acestor pacienţi

CONCLUZII FINALE

1 Aplicarea scorului de SM alături de implementarea algoritmului electronic de diagnostic

contribuie la o prelucrare rapidă eficientă și standardizată a informaţiilor la nivelul

medicinei primare

2 Prevalenţa SM calculată astfel icircn cadrul studiului este crescută (2732) icircn concordanţă

cu datele raportate

3 Controlul factorilor de risc cardiometabolici incluşi icircn SM se poate realiza prin

managementul stilului de viaţă (scăderea greutăţii corporale prin combaterea

sedentarismului şi adoptarea unei diete antiaterogene şi hipocalorice) şi administrarea

terapiei medicamentoase

4 Este necesară adoptarea unei politici de sănătate publică pentru prevenirea creşterii icircn

populaţie a prevalenţei obezităţii şi a diabetului zaharat

5 Noi metode de cercetare icircn domeniul SM axate pe diagnosticarea precoce şi cuantificarea

eficientă a acestuia duce la diminuarea incidenței evenimentelor cardiovasculare majore

6 Sindromul metabolic se caracterizează printr-un status inflamator cronic

7 Valorile Non-HDL-colesterolului şi a raportului de aterogenitate sunt semnificativ mai

mari la pacienţii cu SM

8 Dintre reactanţii de faza acută am observat că valoarea medie a fibrinogenului este mai

crescută icircn lotul cu SM

9 Valorile eozinofilelor sunt crescute icircn sindromul metabolic iar explorarea relaţiei dintre

eozinofile şi obezitate constituie una din direcţiile de studiu actuale ale sindromului

metabolic

10 Evaluarea markerilor inflamatori icircn contextul sindromului metabolic este utilă icircn

evaluarea complexă a a factorilor de risc cardiometabolici

11 Prin metoda citometriei icircn flux am demonstrat prezenta Receptorilor Activaţi de

Inductorii Proliferării Peroxizomilor ndash Alpha (PPARα) icircn toate populaţiile de leucocite

studiate (Mo limfocite PMN eozinofile) atacirct icircn lotul pacienţilor cu SM cacirct şi icircn lotul

martor

12 Utilizacircnd intensitatea medie de fluorescenţă a anticorpilor anti- PPARα am arătat că

nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile este semnificativ mai redus

la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali

13 Acest studiu este primul care a demonstrat existenţa unei scăderi statistic semnificative a

nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofilele pacienţilor cu SM

confirmacircnd cercetările recente care au evidenţiat rolul eozinofilelor şi al receptorilor

PPARα icircn obezitate reglarea inflamaţiei cronice şi aterogeneza

14 Contrar aşteptărilor noastre icircn populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările

efectuate icircn cele două loturi de studiu (cu şi fără sindom metabolic) nu am evidenţiat

diferenţe statistic seminificative icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα la

subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali

15 Icircn populaţiile de Mo limfocite şi polimorfonucleare am observat corelaţii puternice

semnificativ statistic icircntre expresia PPARα icircn aceste tipuri celulare sugeracircnd existenţa

unui mecanism unic de control al inflamaţiei cronice la nivelul acestor celule probabil

diferit de cel din eozinofile

16 La subiecţii cu SM expresia relativă a PPARα icircn Eo este invers asociată cu expresia

receptorului CD36 (receptor al particulelor de ox - LDL şi propus ca un marker precoce al

aterosclerozei) dovedind rolul antiinflamator al receptorilor PPARα la nivel endotelial

17 La pacienţii cu antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială nivelul de

expresie al receptorilor PPARα icircn eozinofile şi Mo este diminuat comparativ cu subiecţii

fără antecedente familiale de hipertensiune arterială Putem spune că studiul efectuat de

noi aduce informaţii importante legate de geneză aterosclerozei şi hipertensiunii arteriale

18 Prin studiul asocierilor dintre receptorii PPARα şi componentele clinice ale sindromului

metabolic am arătat rolul acestor receptori icircn determinismul obezităţii de tip central

nivelul expresiei relative a receptorilor PPARα fiind invers proporţional cu circumferinţa

abdominală

19 Icircn acelaşi timp nivelul de expresie a PPARα icircn sindromul metabolic este asociat pozitiv

cu concentraţia serică a HDL-colesterolului şi invers asociat cu nivelul trigliceridelor

serice dovedind rolul acestor receptori icircn diminuarea procesului inflamator cronic de la

nivel vascular

20 La pacienţii cu SM scăderea expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofile este corelată cu

creşterea unor markeri ai sindromului inflamator cronic cardiometabolic (acid uric

fibrinogen) ilustracircnd importanta receptorilor icircn reglarea status-ului inflamator cronic din

sindromul metabolic

21 Utilizarea metodei flowcitometrice pentru studiul expresiei relative a receptorilor PPARα

icircn leucocite a adus informaţii importante cu privire la mecanismele moleculare de control

implicate icircn patogenia bolilor cardiometabolice icircn concordanţă cu cercetările care descriu

expresia PPAR icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale bronşice

keratinocite)

BIBLIOGRAFIE SELECTIVA

1 Kahn R Metabolic syndrome- what is the clinical usefulness Lancet 2008371(9628)1892-3

2 Reaven GM The metabolic syndrome is this diagnosis necessary Am J Clin Nutr 2006 83(6)1237-7

3 Grundy SM Pre-Diabetes Metabolic Syndrome and Cardiovascular Risk J Am Coll Cardiol 201259(7)

635-43

4 International Diabetes Federation IDF Diabetes Atlas 6th edn International Diabetes Federation Belgium

Brussels 20131-155

5 World Health Organization Global Status Report on Noncommunicable Diseases 2010 World Health

Organization Geneva Switzerland 20111-176

6 Coman AE Petrovanu R Sindromul metabolic in practica de ambulator Editura Pim Iaşi 2009 1-103

7 Grundy SM Becker D Clark LT et alThird Report of the National Cholesterol Education Program (NCEP)

Expert Panel on Detection Evaluation and Treatment of High Blood Cholesterol in Adults (Adult

Treatment Panel III) Final Report Circulation 2002106(25)3143-90

8 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J Metabolic syndrome- a new worldwide definition A Consensus Statement

from the International Diabetes Federation Diabet Med 2006 23(5)469-80

9 KG Alberti KG Eckel RH Grundy SM etal International Diabetes Federation task force on epidemiology

and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart Association World Heart

Federation International Atherosclerosis Society International Association for the study of obesity

Harmonizing the metabolic syndrome a joint interim statement of the International Diabetes Federation task

force on epidemiology and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart

Association World Heart Federation International Atherosclerosis society and International Association

for the study of obesity Circulation 2009120(16)1640-5

10 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J IDF Epidemiology Task Force The metabolic syndrome new

worldwide definition Lancet 2005 366 1059 - 62

11 Oleszczyk M Svab I Seifert B et al Primary healthcare in the developing part of Europe changes and

development in the former Eastern Bloc countries that joined the European Union following 2004 Med Sci

Monit 2009(15)78ndash84

12 Jung U J Choi M S Obesity and Its Metabolic Complications The Role of Adipokines and the

Relationship between Obesity Inflammation Insulin Resistance Dyslipidemia and Nonalcoholic Fatty

Liver Disease Int J Mol Sci 2014rsquo15(4) 6184-223

13 Vanden Heuvel JP Peters JM Peroxisome Proliferators In Ramos K (ed) Cellular and Molecular

Toxicology (Second Edition) Volume 2 New York Elsevier Science Inc 2010 145 - 67

14 Yessoufou A Wahli W Multifaceted roles of peroxisome proliferator-activated receptors (PPARs) at the

cellular and whole organism levels Swiss Med Wkl 2010140w13071 doi104414smw201013071

15 Azhar S Peroxisome proliferator-activated receptors metabolic syndrome and cardiovascular disease

Future Cardiology 20106(5)657-91

16 Andries G Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity

Diabetes and Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(Suppl)24-32

17 Zandbergen F Plutzky J PPARalpha in atherosclerosis and inflammation Biochim Biophys Acta

20071771(8)972-82

18 Straus DS Glass CK Anti-inflammatory actions of PPAR ligands new insights on cellular and molecular

mechanisms Trends Immunol 200728(12)551-8

19 Zlei M Zugun- Eloae F Carasevici E Citometrie icircn flux - Bază şi clinică Icircn Hinescu ME (ed) Citometrie icircn

flux - principii şi aplicaţii clinice Bucureşti Editura Viaţa Medicală Romacircnească 20111-128

20 Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity Diabetes and

Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(9)24-32

21 Woerly G Honda K Loyens M et al Peroxisome proliferator-activated receptors alpha and gamma down-

regulate allergic inflammation and eosinophil activation J Exp Med 2003198(3)411-21

22 Salle-Saumont D Brenuchon C Kanda A et al Peroxisome proliferator-activated receptor alpha regulates

skin inflammation and humoral response in atopic dermatitis J Clin Allergy Immunology 2008 21(4)962-8

23 Schote A Turner J Schiltz J et al Nuclear receptors in human immune cells expression and correlations

Mol Immunolog 200744(6)1436-45

24 DAmore S Vacca M Graziano G et al Nuclear receptors expression chart icircn peripheral blood

mononuclear cells identifies patients with Metabolic Syndrome Biochim Biophys Acta

20131832(12)2289-301

25 Uthurralt J Gordish-Dressman H Bradbury M T et al PPARalpha L162V underlies variation in serum

triglycerides and subcutaneous fat volume in young males BMC Med Genet 2007855

26 Hiukka A Leinonen ES Jauhiainen M et al Long-term effects of fenofibrate on VLDL and HDL

subspecies icircn participants with type 2 diabetes mellitus Diabetologia 2007 50(10)2067-75

27 Robins SJ Rubins HB Faas FH et alInsulin resistance and cardiovascular events with low HDL

cholesterol The Veterans Affairs HDL Intervention Trial (VA-HIT) Diabetes Care 2003 26(5)1513-7

28 Devaraj S Siegel D Jialal I Statin Therapy in Metabolic Syndrome and Hypertension Post-JUPITER

What is the Value of CRP Curr Atheroscler Rep 2011 13(1) 31ndash42

29 Imperatore G Riccardi G Iovino C et al Plasma Fibrinogen A New Factor of the Metabolic Syndrome A

population-based study Diabetes Care 19982 1(4)649-54

30 Krysiak R Gdula-Dymek A Bachowski R Okopien B Pleiotropic effects of atorvastatin and fenofibrate

in metabolic syndrome and different types of pre-diabete Diabetes Care 201033(10)2266-70

31 Hermans MP Impact of Fenofibrate on Type 2 Diabetes Patients with Features of the Metabolic Syndrome

Subgroup Analysis From FIELD Curr Cardiol Rev 20106(2)112-8

32 Silverstein R Inflammation atherosclerosis and arterial thrombosis Role of the scavenger receptor CD36

Cleveland Clinic Journal of Medicine 200976(Suppl 2)S27-S30

33 Hăncu N Obezitatea In Vereşiu IA (ed) Diabetul zaharat nutritia si bolile metabolice Volume 2 Editura

Echinox Cluj- Napoca 2010 1-15

Lista lucrări publicate

1 Elena Popa Maria Maidaniuc Agnes Bacusca Alamir Diaa Rodica Petrovanu Adorata Elena

Coman Disfuncţia endotelială ndash de la mecanisme moleculare la cuantifi care şi tratament icircn practica

medicală Practica Medicală 20149(3) 109-14

2 Elena Popa Agnes Bacusca Alamir Diaa Maria Maidaniuc Rodica Petrovanu Adorata Elena Coman

The function of insulin receptor (IRF) in evolution of obesity correlation with adipocytes diameters

Archives of the Balkan Medical Union 201449(3) 275-9

3 Elena Popa Florin Zugun-Eloae Mihaela Zlei Daniela Jitaru Oana Maria Pintilie Adorata Elena

Coman Maria Traian Didona Anca Ungureanu Eugen Carasevici - acceptata pentru numarul 42014

Flow cytometry analysis of PPAR-alpha receptors in metabolic syndrome) Revista Romană de

Medicină de Laborator(RRLM-D-14-00034R1- adeverinţa ataşată

Page 5: REZUMAT TEZĂ DE DOCTORAT - umfiasi.ro Doctorat/rezumat... · universitatea de medicinĂ Şi farmacie “grigore t. popa” iaŞi facultatea de medicinĂ rezumat tezĂ de doctorat

SCOPUL ŞI MOTIVAŢIA STUDIULUI

Motivația cercetării

La nivel mondial sindromul metabolic (SM) reprezintă o importantă problemă de

sănătate publică reunind asocierea dintre obezitate abdominală şi factori de risc majori

cardiovasculari (hiperglicemia dislipidemia hipertensiunea arterială) (12) Se estimează că

SM afectează peste 25 din populaţia generală iar aproximativ două treimi din pacienţii cu

SM sunt predispuşi la un eveniment cardiovascular major (3) Icircn prezent se acţionează pe

două căi pentru controlul factorilor de risc cardiometabolici incluşi icircn SM managementul

stilului de viaţă (scăderea greutăţii corporale prin combaterea sedentarismului şi adoptarea

unei diete antiaterogene şi hipocalorice) şi administrarea terapiei medicamentoase Deşi atacirct

modificarea stilului de viață cacirct și terapia medicamentoasă vizează controlul factorilor de risc

cardiometabolici conform ghidurilor medicale adoptate atingerea ţintelor terapeutice este

greu de realizat (1011) Icircn aceste condiţii introducerea unor noi metode diagnostice şi

terapeutice bazate pe etiopatogenia SM ar putea icircmbunătăţi calitatea vieţii bolnavilor şi SM şi

ar conduce pe termen lung la creşterea speranţei medii de viaţă Cercetările actuale sunt

orientate spre descifrarea modului icircn care modificările metabolismului incluzacircnd rezistenţa la

insulină dislipidemia obezitatea abdominală pot accelera ateroscleroza privită ca o

complicaţie metabolică și indusă de inflamație (12) Icircn contextul studiului SM receptorii

nucleari activaţi de inductorii proliferării peroxizomilor-alpha-α (PPARα) atrag atenţia

datorită rolului deţinut icircn reglarea oxidării acizilor graşi metabolismul lipidelor şi

lipoproteinelor inflamaţie cronică şi aterogeneză (131415) Aceștia reprezintă astfel veriga

lipsă patogenică care leagă modificările metabolice de procesul inflamator cronic

autoicircntreținut care duce la disfuncția endotelială și aterogeneză Acţionacircnd ca factori de

transcripţie activarea PPARα determină scăderea nivelului seric al trigliceridelor şi HDL-col

şi protejează față de profilul lipidic aterogenetic prin modularea status-ului proinflamator şi

diminuarea insulinorezistenţei (1617) Rolul PPARα icircn reglarea metabolismului lipidic

balanţei energetice şi icircn diminuarea răspunsului proinflamator fac din aceşti receptori o

potenţială ţinta icircn tratamentul afecţiunilor icircn care rolul inflamaţiei cronice este bine cunoscut

Se descrie astfel o nouă posibilitate de icircmbunătăţire a prognosticului afecţiunilor cronice cu

impact major asupra sănătăţii publice incluzacircnd ateroscleroza diabetul zaharat boala cronică

obstructivă pulmonară maladia Parkinson demența Alzheimer şi nu icircn ultimul racircnd

neoplaziile (18)

Scopul studiului

Icircn cadrul Tezei de Doctorat mi-am propus realizarea unei cercetări referitoare la

rolul Receptorilor Activaţi de Inhibitorii Proliferării Peroxizomilor- alpha icircn contextul

sindromului metabolic alături de completarea datelor epidemiologice existente cu privire la

prevalenţa acestui sindrom icircn populaţia aflată icircn evidenţa unui Cabinet de Medicină de

Familie din oraşul Iaşi Ca urmare cercetarea efectuată a urmărit două aspecte1 studiul

epidemiologic al SM icircn populaţia unui Cabinet de Medicină de Familie urmată de

investigarea markerilor inflamatori prezenţi icircn SM 2 investigarea prezenţei și a nivelului de

expresie relativă a receptorilor PPARα icircn leucocitele circulante recoltate din sacircngele

subiecţilor studiaţi celule care exprimă aceşti receptori şi a căror rol icircn inflamaţie şi

aterogeneză este bine cunoscut

Considerații etice Studiul a primit avizul Comisiei de Etică a Universităţii de Medicină

şi Farmacierdquo Gr T Popardquo Iaşi Studiul a fost condus icircn conformitate cu Declaraţia de la

Helsinki actualizată

STUDIUL SINDROMULUI METABOLIC IcircN POPULAŢIA SELECTATĂ

Obiectivele studiului sindromului metabolic

a evaluarea din punct de vedere clinic şi biologic a sindromului metabolic

b identificarea tipului de SM icircn raport cu numărul de componente

c stabilirea prevalenţei sindromului metabolic icircn populaţia studiată

d studiul markerilor inflamatori prezenţi icircn SM

Studiul epidemiologic icircn populaţia selectată

Am efectuat un studiu epidemiologic transversal care şi-a propus stabilirea prevalenţei

sindromului metabolic şi a componentelor sale icircn populaţia icircnscrisă pe lista unui cabinet de

medicină de familie Studiul s-a desfăşurat pe parcursul a 12 luni icircn perioada 01012013ndash

31122013 icircn cadrul Cabinetului de Medicină de Familie CMI Popa Elena situat icircn strada

Ion Creanga nr 73 din Iaşi

Obiectivele studiului - evaluarea din punct de vedere clinic şi biologic a sindromului metabolic

- identificarea tipului de SM icircn raport cu numărul de componente

- stabilirea prevalenţei sindromului metabolic icircn populaţia studiată

Lotul de studiu a fost constituit din populaţia de ambele sexe cu vacircrsta cuprinsă icircntre

18 şi 91 ani icircnscrisă pe lista medicului de familie Subiecţii au fost invitaţi să participe la

studiu icircn luna naşterii realizacircnd astfel o programare a vizitelor pe parcursul a 12 luni

Criteriile de includere icircn lotul de studiu vacircrsta peste 18 ani capacitate de decizie

domiciliul stabil icircn Romacircnia participare pe baza consimţămacircntului liber informat Criteriile

de excludere vacircrstă sub 18 ani femei gravide sau care alăptează bolnavi icircn faza terminală

subiecţi care refuză semnarea consimţămacircntului informat Nu s-au formulat criterii care să

aducă discriminări legate de sex etnie sau rasă

Protocolul studiului epidemiologic al sindromului metabolic

Icircn cadrul studiului epidemiologic s-au realizat cacircte două vizite pentru fiecare participant La

prima vizită subiecţii au fost informaţi asupra studiului icircn cadrul cercetării doctorale şi au

semnat Consimţămacircntul liber informat Pentru fiecare participant s-a completat fişa de studiu

computerizată incluzacircnd date anamnestice şi clinice (talie greutate corporală perimetru

abdominal) La a doua vizită s-au recoltat probe biologice (sacircnge venos) de către o asistentă

specializată pentru următoarele determinări biochimice (glicemie colesterol total HDL-

colesterol LDL-colesterol trigliceride acid uric creatinină fibrinogen proteină C reactivă)

şi hematologice (hemoleucograma VSH) Pentru diagnosticarea SM am utilizat criteriile

de diagnostic Harmonised I (tabel VI) Am comparat prevalenţa SM conform criteriilor

Harmonised I cu prevalenţa obţinută prin aplicarea criteriilor IDF respectiv ATP III

Analiza statistică Pentru analiza parametrilor studiaţi icircn SM am realizat icircmpreună cu

firma Arhilog Soft un program icircn care sunt incluşi parametrii de diagnostic ai SM şi care

permite icircncadrarea pacienţilor funcţie de componentele SM icircn SM3 SM4 SM5 De

asemenea programul permite editarea şi arhivarea unei fişe de observaţie pentru fiecare

participant la studiu precum şi crearea unei baze de date compatibile cu programul Microsoft

Office Excel 97-2003

Menţionăm că acest program poate stoca

şi alţi parametri clinici şi paraclinici utilizaţi icircn evaluarea complexă a SM putacircnd fi ulterior

introdus ca un program de monitorizare a evoluţiei pacienţilor Pentru prelucrarea statistică a

parametrilor s-au folosit programele Microsoft Office Excel 97-2003 SPSS-10 (Statistical

Package for Social Sciences) şi aplicaţia Medcalc Statistical Software ndash 1333 Valoarea lui p

Figura 41 Program de

analiză a parametrilor SM

mai mică de 005 a fost considerată semnificativ statistic

Rezultate Analiza lotului de studiu s-a efectuat icircn funcţie de mediul de provenienţă sex vacircrstă şi

vacircrsta medie Caracteristicile clinice şi biochimice ale lotului studiat sunt reprezentate icircn

tabelul VIII

Tabel VIII Caracteristicile lotului studiat Media 95 CI SD Minimum Maximum

Vacircrsta (ani) 4751 4661 - 4841 1798 1800 9100

CA (cm) 8830 8764 - 8896 1316 5600 13400

IMC (kgm2) 2603 2578 - 2628 497 1900 4500

TAD (mmHg) 7529 74883 - 7571 827 6000 11500

TAS (mmHg) 11730 11650 - 11810 1590 9000 19000

Glicemie (mgdl) 9435 9328 - 9542 2138 7200 40000

HDL- col(mgdl) 4498 4427 - 4570 1422 2100 9200

TG(mgdl) 12269 11887 - 12651 7157 4800 87900

Determinarea scorului SM

Am aplicat criteriile de diagnostic şi am calculat scorul de SM pentru fiecare subiect (0-

absenţa criteriului 2- prezenţa criteriului) (fig44)

Figura 44 Frecvenţa scorului SM icircn

populaţia studiată conform criteriilor

SM Harmonised (A) IDF (B) ATP III

(C) Se observă că distribuţia scorurilor

SM conform criteriilor de diagnostic este

identică icircn cazul aplicării criteriilor

Harmonized I şi IDF

Scorul de SM a avut valori pare

cuprinse icircntre intervalul 0 - 10 pacienţii

cu SM avacircnd un scor mai mare sau egal

cu 6

Icircn lotul studiat am analizat prezenţa simultană a criteriilor Harmonised I de diagnostic şi

am constatat prezenţa SM la 389 subiecţi (204 femei şi 185 bărbaţi) reprezentacircnd 2542

(95CI 2296-2808) din totalul populaţiei studiate Raportul prevalenţelor specifice pe sexe

bărbaţifemei a fost de 103 (95 CI084 -126)Icircn concordanţă cu criteriile IDF am

identificat un număr de 325 pacienţi cu SM (175 femei şi 150 bărbaţi) iar prevalenţa SM icircn

populaţia studiată conform IDF a fost de 2124 (95 CI 1899ndash 2368) Raportul

prevalenţelor specifice la bărbaţi versus femei a fost de 0977 (95 CI 078 ndash122) Utilizacircnd

definiţia ATP III au fost identificaţi un număr de 229 subiecţi cu SM Prevalenţa SM a fost

C

0

100

200

300

400

500

600

700

Scor SM ATP III

Număr pacienţi

0 2 4 6 8 10

ATP III SM5 SM4 SM3 non SM

B

0 50

100 150 200 250 300 350 400 450

Scor SM IDF

Număr pacienţi

0 2 4 6 8 10

IDF SM5 SM4 SM3 non SM

A

0

50

100

150

200

250

300

350

400

450

Scor SM Harmonised I

Număr pacienţi

0 2 4 6 8 10

HARMONIZED I SM5 SM4 SM3 non SM

de 1497 (95CI 1309 ndash 1704) icircn populaţia studiată Au fost calculate prevalenţele pe

sexe şi au fost găsite valorile de 1343 (95CI 010 ndash 164) la bărbaţi respectiv 1632

(95 CI 1366 ndash 1934) la femei raportul dintre acestea fiind de 082 (95CI 062 ndash 107)

Pentru fiecare asociere dintre componentele SM diagnosticat conform criteriilor

Harmonised I am calculat prevalenţele icircn cadrul SM(tabel XVI)

Tabel XVI Prevalenţa asocierilor dintre componentele SM Număr

pacienţi

Ponderea icircn cadrul

pacienţilor cu SM

(95 CI)

Prevalenţa icircn

populaţia studiată

(95 CI)

SM cu trei componente (SM3)

241 6195 (5438ndash7029) 1575 (1383-

1787)

Obezitate centrală + hipertensiune arterială +

hipertrigliceridemie

45 1154 (844ndash1548) 294 (214-393)

Obezitate centrală + hipertensiune arterială + hipo-

HDLcolesterolemie

38 979 (691ndash1340) 248 (175-340)

Obezitate centrală + hipertrigliceridemie +

hipoHDL-colesterolemie

34

874 (605ndash1221) 222 (153-310)

Obezitate centrală + modificări ale metabolismului

glucidic + hipertensiune arterială

31 796 (541ndash1131) 202 (137-287)

Hipertensiune arterială + hiper-trigliceridemie +

hipoHDL- colesterolemie

26 668 (436 ndash979) 169 (111-249)

Modificări ale metabolismului glucidic +

hipertensiune arterială + hiper-trigliceridemie

21 539 (334-825) 137 (085-209)

Obezitate centrală + modificări ale metabolismului

glucidic + hipertrigliceridemie

15 385 (215-636) 098 (054-116)

Modificări ale metabolismului glucidic

hipertrigliceridemie + hipoHDL-colesterolemie

12 308 (159-538) 078 (040-137)

Modificări ale metabolismului glucidic +

hipertensiune arterială + hipoHDLcolesterolemie

10 257 (123ndash472) 065 (031-120)

Obezitate centrală + modificări ale metabolismului

glucidic + hipo-HDL-col

9 231 (105ndash439) 058 (026-111)

SM cu patru componente (SM4) 104 2674 (2184-239) 679 (555-823)

Obezitate centrală + modificări ale metabolismului

glucidic + hipertensiune arterială + hipoHDL-

colesterolemie

32 822 (562-1116) 209 (143-

295)

Obezitate centrală + hipertensiune arterială +

hipertrigliceridemie + hipoHDL-col

25 642 (415- 948) 163 (105-241)

Obezitate centrală + modificări ale metabolismului

glucidic + hipertri-gliceridemie + hipoHDL-

colesterolemie

12 308 (159-538) 078 (040-137)

Modificări ale metabolismului glucidic +

hipertensiune arterială + hipertri-gliceridemie +

hipoHDL-colesterolemie

6 154 (056- 335) 039 (014-085)

SM cu cinci componente (SM5) 44 1131 (822-1518) 287 (209-386)

Total (SM3 + SM4 + SM5) 389 100 2542(2296-

2808)

Analizacircnd componentele SM la cei 389 pacienţi diagnosticaţi cu SM conform criteriilor

Harmonised I am constatat că obezitatea centrală este cea mai bine reprezentată icircn SM dintre

aceste componente (8072 95CI 7644 - 8452) urmată de HTA (7892 95CI 7453

- 8287) hiperTG (6915 95 CI 6430-7371) hipo-HDL-col (6375 95 CI 5876-

6854) şi hiperglicemie (5681 95 CI5173- 6179)

Standardizarea prevalenţelor funcţie de vacircrstă şi sex Analiza statistică a relevat faptul

că prevalenţa SM creşte cu icircnaintarea icircn vacircrstă Dacă pentru vacircrsta cuprinsă icircntre 35-54 ani

prevalenţa la bărbaţi este semnificativ mai mare comparativ cu femeile (raport calculat B F -

183 P=0003) pentru celelalte grupe de vacircrsta nu s-au observat diferenţe semnificative icircntre

sexul feminin şi cel masculin Am observat că după instalarea menopauzei la femei

prevalenţa SM (corespunzătoare Harmonised I) la femei depăşeşte 50 iar la bărbaţi atinge

42 Utilizacircnd European Standard Population (175) am efectuat standardizarea funcţie de

vacircrstă şi sex a prevalenţelor bdquocruderdquo (brute) obţinute icircn populaţia studiată şi am calculat o

prevalenţă standardizată a SM de 2732 (95 CI 2460-3003) La sexul masculin

prevalenţa standardizată a SM a fost de 2760 (95 CI 2362 - 3157) iar la sexul feminin

am obţinut valoarea de 2854 (95 CI 2462 - 3245)

Discuţii

Studiul desfăşurat de noi a investigat prezenţa SM icircn populaţia unui Cabinet de Medicină

de Familie Icircn Europa prevalenţa SM este de aproximativ 25-30 Statele Unite Ale Americii

au raportat o prevalenţă a sindromului metabolic de 22 icircn populaţia cu vacircrsta peste 20 ani

pe cacircnd la vacircrstă mai mare de 60 ani s-a observat o prevalenţă de 44 (1419) Icircn studiul

efectuat am observat o prevalenţă standardizată de 2732 (95 CI 2460-3003) care este

icircn concordanţă cu prevalenţele raportate icircn Europa precum şi o creştere a ponderii SM icircn

populaţie icircn raport cu vacircrsta Am preferat utilizarea definiţiei Harmonised I pentru SM

deoarece cuprinde criterii adaptate pentru o abordare unitară a SM mărind astfel numărul

pacienţilor diagnosticaţi şi care vor urma tratament conform Ghidurilor de Practică Medicală

Limitările acestui studiu sunt legate de faptul că este concentrat doar pe populaţia asigurată şi

neasigurată aflată pe lista unui medic de familie din mediul urban Se pot efectua studii la

nivelul Cabinetelor Medicale de Medicină de Familie dar trebuie să se aplice pe un lot

reprezentativ urbanrural care să reprezinte populația acelei regiuni Utilizarea structurilor

populaționale atașate cabinetului de MF este utilă atacirct pentru cele clinice cacirct și pentru cele

epidemiologice deoarece surprinde populația studiată icircn mediul de viață cotidian Prevalenţa

mare a SM icircn populaţia studiată necesită aplicarea unei politici eficiente de sănătate publică

deoarece riscul producerii evenimentelor cardiovasculare majore poate fi redus semnificativ

printr-un control adecvat al componentelor SM (obezitate dislipidemii hipertensiune

arterială şi hiperglicemie

Studiul sindromului inflamator cronic icircn cadrul sindromului metabolic

Obiectivele studiului

- studierea markerilor inflamaţiei cronice şi aterogenezei la subiecţii cu şi fără SM

- evaluarea importanţei markerilor studiaţi ai inflamaţiei cronice icircn diagnosticul de

ambulator al sindromului metabolic

Material şi metodă

Icircn cercetarea inflamaţiei cronice din SM au fost incluşi 1530 subiecţi de ambele sexe cu

vacircrsta cuprinsă icircntre 18-91 ani icircnscrişi pe lista CMI Popa Elena Studiul s-a desfăşurat icircn

perioada 01012013ndash 31122013 Populaţia ţintă a fost identică cu cea din studiul

epidemiologic şi s-a desfăşurat concomitent cu studiul prevalentei SM Subiecţii au fost

icircmpărţiţi icircn două loturi lotul cu SM (Lot SM) şi lotul de control (fără SM)

Lot SM a) criterii de includerevacircrsta peste 18 ani recrutarea pe baza semnării

Consimţămacircntului liber informat SM diagnosticat pe baza criteriilor Harmonised I (14) b)

criterii de excluderevacircrstă sub 18 anirefuzul semnării Consimţămacircntului liber informat

femei icircn perioada de graviditate sau de lactaţie

Lot Control (fără SM) a) criterii de includerevacircrsta peste 18 anirecrutarea pe baza

semnării Consimţămacircntului liber informat absenţa sindromului metabolic b) criterii de

excluderevacircrstă sub 18 ani refuzul semnării Consimţămacircntului liber informatfemei icircn

perioada de graviditate sau de lactaţie

Rezultate

Lotul cu SM (Lot SM) a fost format din cei 389 pacienţi diagnosticaţi cu SM conform

criteriilor Harmonised I Lotul SM a fost alcătuit din 185 bărbaţi şi 204 femei raportul

bărbaţifemei fiind de 090 (95 CI073-112) Lotul de control (fără SM) a fost alcătuit

din cei 1141 participanţi care nu au icircntrunit criteriile de diagnostic ale sindromului metabolic

Din cei 1141 de subiecţi 530 au fost de sex masculin iar 611 de sex feminin raportul

bărbaţifemei fiind 087 (95 CI 077-097) Vacircrsta subiecţilor a fost semnificativ mai mare

icircn lotul pacienţilor cu SM (5976plusmn1322 ani) comparativ cu lotul martor (4333plusmn 1748 ani) (t-

Test Plt00001) Aşa cum ne-am aşteptat valorile medii ale componentelor clinice ale SM

(circumferinţa abdominală tensiunea arterială sistolică şi diastolică) au fost mai mari icircn lotul

pacienţilor cu SM (t-Test Plt0001 pentru fiecare dintre componente) Studiind parametrii

biochimici incluşi icircn diagnosticul SM valorile medii ale glicemiei şi TG au fost semnificativ

mai crescute icircn lotul SM (t-Test Plt00001 pentru ambele constante) Icircn acelaşi timp

valoarea medie determinată a HDL-col a fost semnificativ mai mare la subiecţii din lotul

martor ( t-Test Plt00001) SM se caracterizează printr-o dislipidemie aterogenă

caracterizată de creşterea TG scăderea HDL-col concomitent cu creşterea LDL-col creşterea

Non-HDL-col şi a raportului de aterogenitate (Col totalHDL-col) (185) Comparacircnd cele

două loturi am observat că valoarea medie a LDL-colesterolului determinată icircn lotul

pacienţilor cu SM a fost semnificativ mai mare faţă de subiecţii din lotul martor (t-Test P =

00002) Măsurarea Non-HDL-colesterolului a arătat prezenţa unei diferenţe semnificative

icircntre cele două loturi (figura 420 B) Astfel icircn concordanţă cu prezenţa dislipidemiei

aterogene valoarea medie a Non-HDL-col a fost semnificativ mai mare (t-Test Plt 00001) icircn

lotul cu SM comparativ cu lotul de control Icircn contextul inflamației cronice şi aterogenezei

din sindromul metabolic am evaluat sensibilitatea şi specificitatea Non-HDL-colesterolului

ca test diagnostic al SM Valoarea Non-HDL-colesterolului care prezice cu cea mai mare

acurateţe prezenţa SM a fost de 151 mgdl (punctul de ldquocut-offrdquo) pentru care am calculat o

sensibilitate de 64 27 şi o specificitate de 5872 Calculul ariei AUC a furnizat valoarea

de 0605 şi deci determinarea concentraţiei serice a parametrului Non-HDL-colesterolului are

valoarea unui marker cu acurateţe redusă Am studiat valorile raportului Col totalHDL-col icircn

cele două loturi şi am constatat că la pacienţii cu SM valoarea media a raportului de

aterogenitate este semnificativ mai mare faţă de valoarea raportului determinată icircn lotul

martor (t-Test Plt 00001) Pentru raportul de aterogenitate studiat analiza curbei ROC a

arătat că valorile mai mari decacirct punctul de ldquocut-offrdquo de 431 prezic prezenţa SM cu cea mai

mare sensibilitate (6381 ) şi specificitate (6582)Valoarea AUC pentru indicele de

aterogenitate a fost de 0667 şi icircn studiul SM acest indice poate fi considerat un marker cu

acurateţe redusă Valoarea medie determinată a acidului uric la subiecţii fără SM a fost

semnificativ mai mică decacirct icircn lotul SM (t-Test Plt 00001) Curba ROC a arătat că valorile

acidului mai mari de 43 mgdl prezic diagnosticul de SM cu cea mai mare sensibilitate

(8107) şi specificitate (5328) Pentru acidul uric AUC a avut valoarea de 0655 şi

icircncadrează determinarea acidului uric seric icircn racircndul testelor cu acurateţe redusă (187)

Comparacircnd populaţiile de leucocite (tabel XXI) valoarea medie determinată a

numărului de Eo a fost semnificativ mai mare icircn lotul cu SM comparativ cu lotul martor (t-

Test Plt0001) Analizacircnd curba ROC trasată pentru valorile numărului de Eo am observat

că valorile ldquocut-offrdquo mai mari de 200 Eomm3

pot prezice prezenta SM cu cea mai mare

specificitate (7705) şi sensibilitate (3978) Pentru diagnosticul SM calculul ariei AUC a

arătat faptul că determinarea numărului de Eo are valoarea unui test diagnostic cu acurateţe

redusă (AUC = 0 589) Comparacircnd valorile medii ale fibrinogenului am calculat o diferenţă

statistic semnificativă icircntre cele două loturi valoarea medie a fibrinogenului fiind mai mare icircn

lotul SM ((t-Test P lt 00001) Cu ajutorul curbei ROC am observat că valorile fibrinogenului

mai mari de 306 mgdl prezic sindromul metabolic cu o sensibilitate de 7511 şi specificitate

de 6056 Fibrinogenul a fost icircncadrat icircn categoria markerilor inflamatori cu acurateţe

redusă AUC avacircnd valoarea de 0690 Icircn loturile de studiu am calculat AUC corespunzătoare

criteriilor de diagnostic ale SM Am observat că icircn cazul scorului Harmonised I

sensibilitatea şi specificitatea sunt de 100 iar AUC este egală cu 1000 Pentru cele cinci

criterii de diagnostic AUC a avut valori icircntre 0636 (pentru variabila HDL-col) şi 0804

(pentru variabila CA) (figura 431)

AUC ES 95 CI

Scor SM Harmonised I 1000 00000 0997 - 1000

CA (cm) 0804 00133 0781 - 0825

TAD (mmHg) 0666 00169 0639 - 0692

TAS (mmHg) 0757 00148 0732 - 0780

Glicemie (mgdl) 0742 00160 0717 - 0766

Trigliceride (mgdl) 0756 00175 0732 - 0780

HDL- colesterol 0636 00183 0609 - 0662

Figura 431 Analiza AUC criterii de diagnostic ale SM

Studiind figura 432 se observă că valoarea AUC pentru markerii studiaţi este cuprinsă

icircntre 0589 (icircn cazul variabilei Eo) şi 0690 (icircn cazul fibrinogenului) Icircn contextul SM

acurateţea acestor markeri ai inflamaţiei cronice şi disfuncţiei endoteliale poate fi considerată

redusă deoarece AUClt07 pentru toţi markerii investigaţi (figura 431) Totuşi valorile ariilor

parametrilor reprezentaţi icircn figura 431 sunt apropiate de valorile AUC ale variabilelor TAD

şi HDL-col (figura 432) şi deci pot fi utilizaţi pentru completarea diagnosticului de SM

AUC ES 95 CI

Non-HDL-colesterol 0605 00171 0580 - 0630

Col totalHDL-col 0607 00163 0642 - 0691

Acid uric 0655 00161 0630 - 0679

Fibrinogen 0690 00206 0658 - 0720

Eozinofile 0589 00176 0564 - 0615

Figura 432 AUC markeri ai SM inflamaţiei cronice şi aterogenezei

Discuţii

Status-ul proinflamator din SM asociat cu insulinorezistenţa şi disfuncţia endotelială

constituie o verigă de legătură dintre inflamaţie şi procesele metabolice complexe icircnsoţindu-

se de deteriorarea funcţiilor vasculare şi creşterea riscului de evenimente cardiovasculare

majore (2858) Studiul efectuat a arătat o diferenţă icircntre vacircrstele subiecţilor din cele două

loturi vacircrsta pacienţilor cu SM fiind semnificativ mai mare (Plt0001) comparativ cu subiecţii

normali confirmacircnd faptul menţionat că vacircrsta reprezintă unul din stimulii care agravează

inflamaţia cronică Am arătat că valorile fibrinogenului sunt mai mari icircn SM comparativ cu

Scor Harmonised I

0 20 40 60 80 100

0

20

40

60

80

100

100-Specificitate

Sen

sib

ilit

ate

Criterii diagnostic SM

0 20 40 60 80 100

0

20

40

60

80

100

100-Specificitate

Sens

ibili

tate

CA

TAD

TAS

Glicemie

Trigliceride

HDL-C

0 20 40 60 80 100

0

20

40

60

80

100

100-Specificitate

Sensi

bilita

te

Non-HDL-C

Col T HDL-C

Acid uric

Fibrinogen

Eozinofile

lotul martor atacirct la bărbaţi cacirct şi la femei icircn concordanţă cu studiile anterioare Evaluarea

fibrinogenului este importantă nu numai icircn SM pentru definirea contextului proinflamator şi

protrombotic ci şi icircn predicţia cardiovasculară la subiecţii normali Studiind populaţiile

leucocitare am obţinut diferenţe semnificative icircn cazul Eo valoarea medie a acestora fiind

semnificativ mai mare icircn lotul cu SM comparativ cu lotul martor (P lt 0001 figura 425B)

Implicarea Eo icircn SM s-a conturat icircn ultimul deceniu aceste celule fiind implicate icircn recrutarea

macrofagelor din ţesutul adipos Experimental s-a constatat că o creştere a Eo apărută ca

urmare a infectării cu helminţi sau stimulare cu IL-5 este urmată de icircmbunătăţirea toleranţei la

glucoză (199) Controlul pe care icircl exercită Eo asupra activării macrofagelor ar putea fi cheia

intervenţiei asupra obezităţii icircn viitorul apropiat(165199) Hiperuricemia asociata frecvent cu

SM este cunoscut ca un factor independent de risc cardiovascular (192 202) In concordanţă

cu aceasta afirmaţie in studiul nostru am constatat ca nivelul seric al acidului uric a fost mai

crescut in lotul cu SM diferenţa semnificativă din punct de vedere statistic (P lt 00001)

Dislipidemia aterogenă din sindromul metabolic şi diabetul zaharat se caracterizează prin

creşterea trigliceridelor şi a Non-HDL-col scăderea HDL-col creşterea numărului de

particule LDL modificate (185190) La pacienţii cu SM am descris un profil aterogenetic

cu risc crescut de evenimente cardiovasculare majore

STUDIUL RECEPTORILOR ACTIVAŢI DE INDUCTORII PROLIFERĂRII

PEROXIZOMILOR-ALPHA IcircN LEUCOCITELE CIRCULANTE

Ipoteza de lucru

Studii experimentale efectuate au arătat că rolul PPARα icircn ateroscleroză derivă din

implicarea acestor receptori icircn limitarea inflamaţiei Plecacircnd de la acest fundament ne-am

propus evidenţierea receptorilor nucleari activaţi de inductorii proliferării peroxizomilor-

alpha (PPARα) prin citometrie de flux icircn leucocitele din sacircngele periferic alături de

evaluarea acestei metode icircn cuantificarea expresiei relative a PPARα ca test diagnostic

precoce al modificărilor metabolice SM Studiul expresiei relative a receptorilor PPARα a

plecat de la premisa că dacă SM se caracterizează printr-un status inflamator cronic nivelul

de expresie a PPARα icircn leucocitele circulante este mai scăzut la pacienţii cu SM comparativ

cu subiecţii normali Referitor la studiul receptorului CD36 am plecat de la presupunerea că

nivelul de expresie al acestui receptor icircn SM este crescut dat fiind importanţa acestui receptor

icircn inflamaţia aterosclerotică Avacircnd icircn vedere efectele receptorilor amintiţi icircn

insulinorezistenţă şi aterogeneză am considerat necesară evaluarea prezenţei receptorului

nuclear PPARα icircn paralel cu studiul receptorului bdquoscavengerrdquo CD-36 prin metoda citometriei

icircn flux Astfel icircn studiul efectuat mi-am propus şi investigarea existenţei unei legături icircntre

nivelul de expresie al receptorilor PPARα şi cel al receptorului CD-36 De asemenea ne-am

icircndreptat atenţia spre stabilirea unor asocieri icircntre componentele clinice şi biochimice ale

sindromului metabolic şi nivelul intensităţilor de fluorescenţă ale PPARα şi CD-36 ca măsură

a expresiei relative a acestor receptori

Material și metodă

Studiul receptorilor PPARα icircn contextul sindromului metabolic s-a desfăşurat icircn

perioada 1012014 -28022014 pe baza metodologiei studiilor de tip caz-martor Am urmărit

identificarea unor diferenţe icircntre expresia receptorilor PPARα la pacienţii cu SM comparativ

cu subiecţii sănătoşi diferenţe care ar putea fi utile icircn diagnosticul precoce al SMRecrutarea

pacienţilor s-a efectuat din pacienţii prezentaţi pentru consultaţie la Cabinetul Individual

ldquoCMI Dr Popa Elenardquo situat icircn strada Ion Creanga din Iaşi Pentru studiul receptorilor

PPARα icircn sindromul metabolic au fost selecţionaţi un număr de 57 de subiecţi 26 de subiecţi

cu SM (constituind lotul SM) şi 31 subiecţi fără SM constituind lotul de control (Lot Non-

SM) Pentru studiul SM pacienţii au fost recrutaţi din masa de populaţie arondată cabinetului

de MF fără istoric de SM diabet zaharat boală cardio-vasculară aflați la primul diagnostic

de SM evaluarea completă a acestora fiind urmată de includerea icircn programul de

management cardiovascular şi metabolic conform Ghidurilor Terapeutice aflate icircn vigoare

Lot SM a) criterii de includerevacircrsta peste 18 ani recrutarea pe baza semnării

Consimţămacircntului liber informatSM nou-diagnosticat pe baza prezenţei a minim trei criterii

de diagnostic pentru SM conform Harmonised I b) criterii de excluderevacircrstă sub 18 ani

refuzul semnării Consimţămacircntului liber informat femei icircn perioada de graviditate sau de

lactaţie SM anterior diagnosticat istoric de diabet zaharat boală cardiovasculară constituită

tratament cu agonişti PPARα (ie fibraţi etc)

Lot martor (Non-SM) a) criterii de includerevacircrsta peste 18 ani recrutarea pe baza

semnării Consimţămacircntului liber informat absenţa diagnosticului de SM b) criterii de

excludere vacircrstă sub 18 ani refuzul semnării Consimţămacircntului liber informat femei icircn

perioada de graviditate sau de lactaţie

Studiul receptorilor PPARα a inclus două subetape

A Studiul componentelor sindromului metabolic conform criteriilor Harmonised I

Evaluarea clinică a participanţilor s-a desfăşurat icircn cadrul Cabinetului de Medicină de

Familie iar determinările hematologice şi biochimice s-au efectuat icircn Laboratorul

Ambulatorului Clinic de Specialitate al Spitalului Clinic de Urgenţă bdquoSf Spiridonrdquo Iaşi

B Evaluarea icircn citometrie de flux a nivelului relativ de expresie a PPARα şi CD36

Studiul receptorilor PPARα s-a desfăşurat icircn Laboratorul de Biologie Moleculară al

Institutului Regional de Oncologie Iaşi prin metoda citometriei icircn flux (19) Nivelul relativ de

expresie al receptorilor nucleari PPARα a fost determinat icircn diferite tipuri de leucocite

circulante polimorfonucleare (PMN) limfocite (Ly) Mo(Mo) şi eozinofile(Eo) Am utilizat o

metodă de citometrie icircn flux optimizată ldquoin houserdquo elaborată icircn cadrul Laboratorului de

Biologie Moleculară al IRO Iaşi Icircn cursul procesului de optimizare am testat mai multe

concentraţii ale anticorpului anti-PPARα 1100 1500 11500 14500 iar icircn urma

determinărilor efectuate şi a analizei statistice concentraţia 1500 a fost considerată optimă

pentru desfăşurarea studiului (tabel XXIII figura 51)

Tabel XXIII Optimizarea concentraţiilor Ac anti-PPARα Diferenţa

mediilor

valorilor

medii

PMN

Diferenţa

mediilor

mediane-

lor

PMN

Diferenţa

mediilor

valorilor

medii

Ly

Diferenţa

mediilor

mediane-

lor

Ly

Diferenţa

mediilor

valorilor

medii

Mo

Diferenţa

mediilor

mediane-

lor

Mo

Diferenţă 0 1300 1600 100 100 700 750

normal - 1100 650 1050 1050 1350 450 900

patologic 1500 2850 2750 3800 3600 2850 2400

11500 -1050 800 3500 3300 2250 1800

14500 2200 2150 1300 1100 2950 2850

AOptimizare

BRepetabilitate

Figura 51 Optimizarea concentraţiei anticorpului anti-PPARα

Icircn concordanţă cu literatura de specialitate icircn cercetarea efectuată intensitatea medie

de fluorescenţă (MFI) a fost utilizată ca măsură pentru evaluarea expresiei celulare a

receptorilor PPARα (212) Un exemplu de analiză a probelor este reprezentat icircn figura 52

Figura 52 Exemplu de analiză flowcitometrică pentru receptorul nuclear PPARα Graficul din stacircnga reprezintă distribuţia leucocitelor iar cel din dreapta ilustrează distribuţia

intensităţii de fluorescenţă pentru populaţiile de celule selectate

Intensitatea Medie a Fluorescenţei (MFI) a CD36 ca o măsură a nivelului relativ de

expresie a acestor receptori la nivelul membranei Mo a fost detectată printr-o metodă

convenţională pentru marcare de suprafaţă şi evaluare pe bază de citometrie icircn flux folosind

aceleaşi probe de sacircnge cu EDTA cu focalizare pe Mo şi utilizacircnd CD14 ca marker specific

pentru Mo (figura 53)

Figura 53Analiza

flowcitometrică

pentru marcajul

CD14 - CD36

Rezultate

Icircn cele două loturi au fost incluşi icircn studiu un număr de 57 de participanţi care au fost

investigaţi din punct clinic şi paraclinic Vacircrsta subiecţilor incluşi icircn studiu a fost cuprinsă

icircntre 18 şi 79 ani iar vacircrsta medie calculată a avut valoarea de 4805 plusmn 1587 ani Pentru sexul

masculin vacircrsta medie este de 4925plusmn1617 ani iar pentru sexul feminin 4689 plusmn1 5ani

diferenţa obţinută icircntre vacircrstele pacienţilor fiind statistic nesemnificativă (P = 085)

Analizacircnd vacircrstele subiecţilor din cele două loturi am observat că vacircrsta medie a pacienţilor

cu SM (5476 plusmn 1183 ani) a fost semnificativ mai mare (t-test P = 0003) decacirct icircn lotul

martor (4258 plusmn 169 ani) Pentru diagnosticul sindromului metabolic am calculat scorul de

SM bazacircndu-ne pe criteriile Harmonised I Conform criteriilor diagnostice din cei 57 de

subiecţi investigaţi un număr de 26 participanţi (46) au fost incluşi icircn lotul cu SM (Lot

SM) iar 31 de subiecţi(54) nu au prezentat acest sindrom constituind lotul martor (Lot

Non-SM) Din punct de vedere al repartiţiei pe sexe nu au existat diferenţe statistic

semnificative raportul bărbaţifemei fiind de 0961 Din totalul celor 28 de bărbaţi incluşi icircn

studiu 4285 (12 bărbaţi) au icircntrunit cel puţin trei criterii diagnostice pentru SM fiind

incluşi icircn lotul SM Icircn acelaşi timp 14 femei reprezentacircnd 4827 din subiecţii de sex

feminin au icircntrunit condiţiile pentru includerea icircn lotul pacienţilor cu SM Valoarea medie

determinată pentru scorul de SM a arătat prezenţa unor valori semnificativ statistic mai mari

din punct (t-test P lt 00001) icircn lotul SM (769plusmn176) comparativ cu lotul martor (174 plusmn

184) Am studiat comparativ media valorilor măsurate ale criteriilor componentelor SM

Analiza statistică a arătat valori semnificativ statistic mai mari pentru CA TG glicemie TAS

şi TAD (plt0001) icircn lotul SM comparativ cu lotul normal Concomitent calculul statistica

evidenţiat o scăderea semnificativă a HDL-colesterolului icircn lotul cu SM comparativ cu

subiecţii din lotul martor (Non-SM) Aplicacircnd testul z am comparat ponderea pacienţilor

diagnosticaţi cu HTA dislipidemie şi tulburări ale metabolismului glucidic icircn lotul SM versus

lot Non-SM şi am constatat prezenţa acestor afecţiuni icircntr-un procent mai mare semnificativ

statistic icircn lotul SM ((plt0001)

Utilizacircnd testul t Student am calculat diferenţele statistice şi icircntre alți parametri

studiaţi care sunt factori de risc cardio-vascular dar care nu sunt componente ale SM Icircn lotul

cu SM valorile acidului uric fibrinogenului Col total Non-HDL-col şi LDL-col au fost

semnificativ mai mari comparativ cu lotul martor (tabel XXVI) Analizacircnd valorile medii ale

populaţiilor de leucocite am identificat doar pentru populaţia de Eo diferenţe statistice icircntre

cele două loturi numărul Eo icircn lotul SM fiind semnificativ mai mare decacirct icircn lotul martorTot

pentru caracterizarea celor două loturi am analizat prezenţa antecedentelor

heredocolaterale (AHC) de diabet zaharat boala cardiovasculară şi dislipidemie pentru toţi

subiecţii investigaţi Astfel existenţa AHC de HTA a fost declarată de 2580 din subiecţii

incluşi icircn lotul martor respectiv de 5384 din numărul pacienţilor cu SM Antecedentele

heredocolaterale de dislipidemie au fost prezente la 3461 din pacienţii cu SM icircn timp ce icircn

lotul martor anamneza a evidenţiat aceste antecedente la 3548 din subiecţi

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα

Icircn cercetarea desfăşurată am utilizat intensitatea medie de fluorescenţă (MFI) ca

măsură a nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn leucocitele studiate Pentru

populaţiile de leucocite analiza computerizată a probelor luate icircn studiu a furnizat valori

pentru MFI a receptorilor PPARα icircn funcţie de cantitatea de anticorpi anti-PPARα marcaţi cu

fluorocrom care se leagă de aceste celule şi apoi sunt captaţi de citometru (figura 59)

A Lot Non - SM

B Lot SM

Figura 59 Analiza flowcitometrică pentru receptorii PPARα icircn leucocite A lot normal B lot SM

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Mo

Analiza probelor efectuată conform protocolului de lucru descris a arătat prezenţa

PPARα icircn Mo recoltate din sacircngele tuturor subiecţilor incluşi icircn această cercetare Pentru toţi

participanţii investigaţi analiza MFI a Ac anti - PPARα icircn populaţia de Mo (Mo) a arătat un

interval de variaţie icircntre [786 395] Valoarea medie a nivelului de expresie relativă a PPARα

calculată pentru Mo a fost de 23210 plusmn7860 Pentru ambele loturi de studiu pacienţilor cu

SM testul Testul Shapiro-Wilk a arătat distribuţia normală a valorilor obţinute pentru nivelul

de expresie al PPARα icircn Mo

Tabel XXVIII Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn Mo

Lot SM Lot Non-SM

N 26 31

Media 22819 23538

SD 5819 7717

Mediana 22400 22600

Minimum 12800 78600

Maximum 35800 37900

Percentila 25 18300 18300

Percentila 75 26200 30350

Pentru pacienţii din lotul SM valoarea medie a MFI icircn Mo a fost de 22819 plusmn 5880 iar

pentru lotul martor s-a calculat o valoare medie a MFI a Ac anti-PPARα de 23538 plusmn 7717

Distribuţia statistică a frecvenţei valorilor MFI obţinute pentru nivelul de expresie a PPARα

icircn Mo subiecţilor din cele două loturi a fost reprezentată icircn figura 511

Figura 511 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti-PPARα icircn Mo

Sub forma unei diagrame de control Shewhart am reprezentat variaţia intensităţii medii de

fluorescenţă pentru anticorpii anti-PPARα icircn MoVariaţia nivelului de expresie relativă a

receptorilor PPARα icircn Mo subiecţilor studiaţi este ilustrată icircn fig 512 513

Figura 512 Lot SM Variaţia

expresiei relative a PPARα icircn Mo

Număr pacienţi

26

Minim 128

Maxim 358

Media 22819

DS 5819

25 din 26 valori ale MFI s-au icircncadrat

icircn intervalul Media plusmn 2DS

Figura 513 Lot Non-SM Variaţia

expresiei relative a PPARα icircn Mo

Număr pacienţi 31

Minimum 786

Maximum 379

Media 23538

DS 7717

Cu excepţia unei singure

determinări valorile calculate s-au

icircncadrat icircn Media plusmn 2DS

Utilizacircnd testul parametric t-Student pentru variabilele cu distribuţie normală am

comparat valoarea medie a intensităţii de fluorescenţă a Ac anti-PPARα icircn lotul cu SM versus

subiecţi fără SM (Lot Non-SM) Analiza statistică efectuată nu a identificat diferenţe icircntre

50 100 150 200 250 300 350 400 450

0

5

10

15

20

25

30

35

MFI anti-PPAR a

Frecv

enta

relati

va (

)

Lot SM

0 50 100 150 200 250 300 350 400 450 500

0

5

10

15

20

25

30

35

MFI anti-PPAR a

Frecv

enta

relati

va (

)

Lot martor

1 6 11 16 21 26 31

0

50

100

150

200

250

300

350

400

450

MFI

anti-

PPAR

a

2282

1106

3458

518

4046

Media

LCI

LCI

1 6 11 16 21 26 31 36

-100

0

100

200

300

400

500

MFI a

nti-PP

AR

a

2354

810

3897

39

4669LCS

LCI

Media

cele două loturi icircn ceea ce priveşte expresia PPARα la nivelul Mo circulante (t- Test P=

069)

Studiul receptorilor PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de AHC şi dislipidemie

Nivelul de expresie al receptorilor PPARα α icircn Mo tinde să fie mai scăzut la subiecţii

cu AHC de HTA comparativ subiecţii care nu au declarat AHC de HTA (P= 006 fig 515)

AHC HTA

Număr 22

Mediana 19950

Percentila 25 17800

Percentila 75 22700

AHC HTA absente

Număr 35

Mediana 24800

Percentila 25 19025

Percentila 75 31700

Figura 515 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Mo funcţie de AHC de HTA

Nu s-au calculat diferenţe semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor

PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de dislipidemie atunci cacircnd aceştia au fost comparaţi cu

subiecţii fără AHC de tulburări ale metabolismului lipidic (t- Test P= 020)

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn limfocite

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn populaţia de Ly a

demonstrat prezenţa receptorilor PPARα icircn Ly tuturor subiecţilor studiaţi Pentru toţi

participanţii investigaţi analiza MFI a Ac anti - PPARα icircn populaţia de Ly a relevat un

interval de variaţie icircntre [748 314] iar valoarea medie a MFI a fost de 18058 plusmn 5600

Pentru ambele loturi aplicarea testului Shapiro-Wilk a evidenţiat distribuţia normală a

valorilor determinate pentru nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Ly Pentru

pacienţii cu SM valoarea medie a MFI determinată pentru expresia PPARα icircn populaţia de

Ly a fost de 18178 plusmn 61 16 iar pentru lotul martor a fost de 16800 plusmn 5229

Tabel XXX Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn limfocite

Lot SM Lot Non-SM

N 26 31

Media 181781 179574

SD 611694 522907

Mediana 165000 168000

Minimum 81300 74800

Maximum 314000 301000

Percentila 25 13400 - 145750

Percentila 75 21800 21700

Distribuţia frecvenţei valorilor MFI a Ac anti-PPARα icircn Ly este redată icircn figura 518

Figura 518 Distribuţia frecvenţelor relative a MFI a Ac anti-PPARα icircn Ly

94 din determinările efectuate pentru determinarea nivelului de expresie relativă al

MFI

ant

iPPA

R

a_Mo

190

200

210

220

230

240

250

260

270

280

DA NU

AHC HTA

P=006

50 89 128 167 206 244 283 322 361 400

0

5

10

15

20

25

30

35

MFI anti-PPAR a

Frecv

enta

relati

va (

)

Lot SM

0 50 100 150 200 250 300 350

0

5

10

15

20

25

30

35

40

MFI anti-PPAR a

Frec

venta

relat

iva (

)

Lot Non-SM

receptorilor PPARα icircn limfocitele subiecţilor cu SM s-au icircncadrat icircn intervalul Media plusmn 2DS

Figura 5 19 Lot SM Variaţia expresiei

relative a PPARα icircn Ly

Număr pacienţi 26

Minimum 813

Maximum 31400

Media 18178

Deviaţia Standard 6116

25 valori s-au icircncadrat icircn Media plusmn 2DS

Pentru lotul Non-SM diagrama de control (figura 520) a arătat toate valorile

determinate pentru lotul Non-SM se icircncadrează icircntre LCS şi LCI

Figura 520 Lot Non -SM Variaţia

expresiei relative a PPARα icircn Ly

Număr pacienţi 31

Minimum 748

Maximum 30100

Media 179574

Deviaţia Standard 5229

96 din valori icircncadrate icircn Media plusmn 2DS

Aplicarea testului t-Student pentru valorile medii ale intensităţii de fluorescenţă ale

PPARα icircn Ly nu a arătat existenţa unei diferenţe statistic semnificative icircntre lotul cu SM şi

lotul martor(t- Test P= 088)

Analiza receptorilor PPARα icircn Ly subiecţilor cu AHC de HTA şi dislipidemie

Studiind populaţiile de Ly la subiecţii care au prezentat AHC de hipertensiune

arterială analiza flowcitometrică a relevat existenţa unor valori mai mici pentru MFI la aceşti

subiecţi comparativ cu cei fără AHC de HTA (fig 522) deşi scăderea observată nu a

icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică (t- Test P = 009)

AHC HTA

Număr 22

Mediana 16000

Percentila 25 12700

Percentila 75 17100

AHC HTA absenţe

Număr 35

Mediana 18700

Percentila 25 14900

Percentila 75 23175

Figura 522 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Ly funcţie de AHC de HTA

Nu am calculat diferenţe statistic semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor

PPARα icircn populaţiile de Ly ale subiecţilor la care am identificat AHC de dislipidemie

comparativ cu cei care nu au declarat antecedente familiale de dislipidemie (t- Test P= 051)

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn neutrofile (PMN)

Analiza flowcitometrică a evidenţiat prezenţa PPARα icircn PMN recoltate din sacircngele

venos al tuturor participanţilor la studiu Pentru toţi subiecţii investigaţi analiza MFI a Ac -

PPARα icircn populaţia de PMN a relevat un interval de variaţie de [163419] iar valoarea medie

a MFI pentru Ac anti-PPARα a fost de 26392 plusmn 7064 Testul Shapiro-Wilk a arătat o

distribuţie normală a valorilor intensităţii medii de fluorescenţă a anticorpilor anti-PPARα atacirct

icircn lotul pacienţilor cu SM cacirct şi icircn lotul martor

1 6 11 16 21 26 31

-50

0

50

100

150

200

250

300

350

400

MFI

anti-

PPAR

a

1818

595

3041

-17

3653

Media+2DS

Media- 2DS

1 6 11 16 21 26 31 36

0

50

100

150

200

250

300

350

MFI

ant

i-PPA

R

a

1796

750

2841

227

3364

Media+2DS

Media

Media- 2DS

MFI

anti-

PPAR

a Ly

130

140

150

160

170

180

190

200

210

DA NU

AHC HTA

P=009

Tabel XXXII Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn PMN

Lot SM Lot Non-SM

N 26 31

Media 26273 26480

SD 6915 7088

Mediana 25900 25500

Minimum 17200 16300

Maximum 39500 41900

Percentila 25 19800 19600

Percentila 75 30500 31500

Icircn cele două loturi distribuţia frecvenţei valorilor nivelului relativ de expresie a

receptorilor PPARα icircn PMN a fost reprezentată sub formă de histograme (fig 525)

Figura 525 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti-PPARα icircn PMN

Pentru cei 26 de pacienţi din lotul cu SM a valoarea medie a nivelului de expresie

relativă a receptorilor PPARα icircn PMN a fost de 26273 plusmn 6915 Studiind diagrama Shewhart

din figura 526 se observă că toate valorile obţinute pentru nivelul de expresie relativă

PPARα icircn PMN investigate se icircncadrează icircntre limitele definite de valorile medii plusmn 2DS

Figura 526 Lot SM

Variaţia expresiei relative a PPARα icircn

PMN

Număr pacienţi 26

Minimum 17200

Maximum 39500

Media 26273

Deviaţia Standard 6915

Valorile MFI icircncadrate icircn Media plusmn 2DS

Pentru lotul martor valoarea medie calculată a MFI a anticorpilor anti-PPARα a fost de

26480 plusmn 7088 peste 95 din valorile MFI fiind cuprinse icircn Media plusmn 2DS (figura 527)

Figura 527 Lot Non-SM Variaţia expresiei

relative a PPARα icircn PMN

Număr pacienţi 31

Minimum 16300

Maximum 41900

Media 26480

Deviaţia Standard 7088

30 valoriicircn Media plusmn 2DS

Pentru PMN analiza statistica nu a arătat existenţa unei diferenţe statistic semnificative icircntre

nivelul de expresie relativă a PPARα la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii din lotul

Non-SM (t- Test P= 090) Studiind populaţiile de PMN la subiecţii care au prezentat AHC

de HTA nu am calculat o diferenţă statistic semnificativă icircntre expresia receptorilor PPARα

la subiecţii cu istoric familial de hipertensiune arterială comparativ cu cei pentru care nu s-au

notat AHC de HTA (t- Test P= 013)De asemenea am identificat diferenţe icircntre nivelul de

expresie al PPARα icircn PMN subiecţilor care prezentau AHC de dislipidemie comparativ cu

cei fără AHC de dislipidemie (t- Test P= 017)

50 100 150 200 250 300 350 400 450 500

0

5

10

15

20

25

30

35

MFI anti-PPAR a

Frecve

nta rel

ativa (

)

Lot SM

50 100 150 200 250 300 350 400 450 500

0

5

10

15

20

25

30

MFI anti-PPAR a

Frecv

enta

relati

va (

)

Lot Non-SM

1 6 11 16 21 26 31

0

50

100

150

200

250

300

350

400

450

500

MFI

anti-

PPA

R

a

2627

1244

4010

553

4702

Media + 2DS

Media - 2 DS

Media

1 6 11 16 21 26 31 36

0

50

100

150

200

250

300

350

400

450

500

MFI

anti-

PPAR

a

2648

1230

4066

522

4774

Media+ 2DS

Media - 2DS

Media

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile Tabel XXXIV Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn Eo

Lot SM Lot Non-SM

N 26 31

Mediaplusmn SD 141057 plusmn 47604 172209 plusmn 37565

Mediana 142450 171300

Minimum 35000 68500

Maximum 233700 250600

Percentila 25 119300 153225

Percentila 75 169700 199550

Am studiat nivelul relativ de expresie a receptorilor PPARα icircn Eo iar rezultatele au

fost figurate sub forma de histograme (figura 532)

Figura 532 Distribuţia frecventelor relative ale valorilor MFI anti- PPARα icircn Eo

Din diagrama Shewhart (figura 533) se observă că toate valorile determinate pentru

nivelul de expresie relativă a PPARα icircn Eo pentru lotul SM s-au icircncadrat icircn [Media plusmn 3 DS]

peste 90 din determinări fiind cuprinse icircn [Media plusmn 2 DS] iar icircn [Media plusmn 1 DS] sunt

incluse peste 65 din valorile MFI

Figura 533 Lot SM

Variaţia expresiei relative a PPARα icircn Eo

Număr pacienţi 26

Minimum 35000

Maximum 233700

Media 141057

Deviaţia Standard 47604

24 valori icircncadrat eicircn [Media plusmn 2DS]

Pentru subiecţii incluşi icircn lotul martor analiza diagramei (figura 534) a arătat că

toate cele 31 de valori ale MFI pentru PPARα icircn Eo se icircncadrează icircn [Media plusmn 3DS] iar 30

dintre acestea se icircncadrează icircn [ Media plusmn 2 DS]

Figura 534 Lot Non -SM

Variaţia expresiei relative a PPARα icircn Eo

Număr pacienţi 31

Minimum 685

Maximum 2506

Media 172209

Deviaţia Standard 375 65

30 valori icircncadrate icircn [Media plusmn 2DS]

Comparacircnd subiecţii cu SM cu cei din lotul martor am observat o scădere

semnificativă statistic a MFI a Ac anti - PPARα icircn Eo pentru pacienţiir cu SM ( figura 535)

PPARα Eo Lot Non-SM

Număr 31

Mediana 171300

Percentila 25 152325

Percentila 75 199550

PPARα Eo Lot SM

Număr 26

Mediana 142450

Percentila 25 119300

Percentila 75 169700

Figura 5 35 Comparaţie icircntre nivelul de expresie a PPARα icircn Eo

0 500 1000 1500 2000 2500 3000

0

10

20

30

40

50

MFI anti-PPAR a

Frecvent

a relativa

()

Lot SM

400 800 1200 1600 2000 2400 2800

0

5

10

15

20

25

30

35

40

45

MFI anti-PPAR a

Frecenta

relativa

()

Lot Non-SM

1 6 11 16 21 26 31

-500

0

500

1000

1500

2000

2500

3000

MFI a

nti-PP

AR

a

14106

4765

23447

94

28117

Media + 2DS

Media- 2DS

LCI

LCS

1 6 11 16 21 26 31 36

500

1000

1500

2000

2500

3000

MFI an

ti-PPA

R a

17221

9708

24734

5951

28490

LCI

Media-2DS

Media

Media +2 DS

LCS

1200

1300

1400

1500

1600

1700

1800

1900

Lot SM Lot Non-SM

P=00072

Cu ajutorul curbei ROC am evaluat posibilitatea utilizării MFI a Ac anti - PPARα icircn

Eo ca marker pentru diagnosticul SM Valoarea MFI a Ac anti - PPARα icircn Eo care prezice cu

cea mai mare acurateţe prezenţa SM a fost de 1533 (punctul de ldquocut-offrdquo) pentru care am

calculat o sensibilitate de 5652 şi o specificitate de 7778 Calculul ariei AUC a furnizat

valoarea de 0663 şi deci determinarea parametrului MFI anti- PPARα icircn Eo are valoarea

unui test cu acurateţe redusatilde icircn diagnosticul SM Studiind expresia PPARα icircn Eo la subiecţii

care au prezentat AHC de HTA am observat o scădere semnificativă statistic (P = 00023) a

expresiei PPARα la subiecţii cu istoric familial de HTA comparativ cu subiecţii fatilderatilde AHC de

HTA (figura 537)

AHC HTA

Număr 22

Mediana 148800

Percentila 25 116425

Percentila 75 170750

AHC HTA absente

Număr 35

Mediana 170850

Percentila 25 143700

Percentila 75 195000

Figura 537 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Eo funcţie de AHC de HTA

Studiind subiecţii cu AHC declarate de dislipidemie nu am identificat diferenţe icircntre

nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Eo subiecţilor cu AHC de dislipidemie

comparativ cu cei care nu au declarat prezenţa AHC de dislipidemie (t - Test P = 067)

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor CD36

Am studiat expresia receptorilor CD36 icircn Mo subiecţilor incluşi icircn studiu

Lot Non - SM

BLot SM

Figura 539 Analiza flowcitometrica pentru receptorii CD36 icircn Mo

Pentru toţi participanţii la studiu valorile MFI au variat icircn intervalul [817 6933] iar

valoarea medie a MFI a Ac anti-CD36 a fost de 397133 plusmn 120902 Tabel XXXVII Statistică descriptivă pentru a CD36 icircn Mo

Lot SM Lot Non-SM

Media 429034 370377

Deviatia Standard 109051 125514

Mediana 411000 362800

Minimum 266400 81700

Maximum 693300 616800

Percentila 25 346200 273750

Percentila 75 469000 453300

Distribuţia frecvenţelor relative a MFI au fost prezentate sub formă histogramelor

Figura 541 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti - CD36 icircn Mo

MFI

ant

i-PPA

R a Eo

1000

1100

1200

1300

1400

1500

1600

1700

1800

1900

DA NU

AHC HTA

P=00023

1000 2000 3000 4000 5000 6000 7000 8000

0

5

10

15

20

25

MFI anti-CD36

Frecve

nta rela

tiva (

)

Lot SM

0 1778 3556 5333 7111

0

5

10

15

20

25

30

35

MFI anti-CD36

Frecve

nta rel

ativa (

)

Lot Non - SM

Referitor la lotul SM 92 din valorile MFI a Ac anti- CD36 s-au icircncadrat icircn

intervalul Media plusmn 2 DS (figura 542) iar pentru lotul martor peste 90 dintre acestea icircn

Media plusmn 2 DS (figura 543)

Figura 542 Lot SM

Variaţia MFI anti-CD36 icircn Mo

Număr pacienţi 26

Minimum 2664

Maximum 6933

Media 429034

Deviaţia Standard 109051

Figura 543 Lot Non -SM

Variaţia MFI anti- CD36 icircn Mo

Număr 31

Minimum 81700

Maximum 616800

Media 370377

Deviaţia Standard 125514

Comparacircnd subiecţii cu SM cu cei din lotul normal am constatat o tendinţă de creştere

a expresiei CD36 icircn lotul cu SM((t - Test P= 0067)

MFI anti - CD36 Lot Non-SM

Număr 31

Mediana 3628

Percentila 25 2737

Percentila 75 4533

MFI anti - CD36 Lot SM

Număr 26

Mediana 4110

Percentila 25 3462

Percentila 75 4690

Figura 544 Comparaţie icircntre cel două loturi privind MFI anti - CD36 icircn Mo

Referindu-ne la subiecţii cu AHC de HTA am observat o tendinţă de creştere a

valorilor MFI anti-CD36 comparativ cu cei care nu au avut AHC de HTA (t - Test P = 0 08)

AHC HTA

Număr 22

Mediana 442800

Percentila 25 355275

Percentila 75 519475

AHC HTA absenţe

Număr 35

Mediana 377400

Percentila 25 316900

Percentila 75 443400

Figura 545 Comparaţie icircntre expresia CD36 icircn Mo funcţie de AHC de HTA

Nu s-au calculat diferenţe semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor

PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de dislipidemie atunci cacircnd aceştia au fost comparaţi cu

subiecţii fără AHC de dislipidemie (t - Test P=031)

Corelaţii icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα si CD36

Studiind valorile intensităţii medii de fluorescenţă a Ac anti-PPARα icircn Mo Ly şi

PMN am observat că nivelul de expresie celularatilde a PPARα icircn Mo Ly şi PMN sunt corelate

puternic pozitiv atacirct icircn lotul SM cacirct şi icircn lotul martor(fig547 548)

1 6 11 16 21 26 31

0

1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

8000

Pacienti

MFI a

nti-CD

36

42903

21093

64714

10188

75619

LCI

Media

LCS1 6 11 16 21 26 31 36

-1000

0

1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

8000

MFI a

nti- C

D36

37038

11935

62141

-616

74692Media + 2 DS

Media

Media - 2 DS

3200

3400

3600

3800

4000

4200

4400

4600

4800

Lot SM Lot Non-SM

P = 00676

MFI

anti-

CD36

3400

3600

3800

4000

4200

4400

4600

4800

5000

DA NU

AHC HTA

P = 008

Figura 547 Studiul relatiilor dintre

receptorii PPARα icircn SM A Mo vs PMN B Mo vs Ly

C PMN vs Ly Graficul ilustrează coeficienţii r P dreapta de

regresie (linia centrala) intervalul de icircncredere

95 şi intervalul de predicţie 95

Figura 548 Corelaţii icircntre receptorii PPARα icircn lotul

martor

A Mo vs PMN

B Mo vs Ly

C PMN vs Ly

Tot pentru lotul SM cacircnd am evaluat relaţia dintre nivelul de expresie relativă a

receptorilor PPARα icircn Eo şi nivelul de expresie relativa a receptorilor CD 36 am obţinut o

corelaţie negativă (r = - 05 P = 001) (fig 549 A)

50 100 150 200 250 300 350 50

100

150

200

250

300

350

400

450

500

PPARα Ly

PPARα PMN

y = 56641 + 1159 x r = 086 P lt 0001

C

50 100 150 200 250 300 350 400 0

50

100

150

200

250

300

350

PPARα Mo

PPARα Ly

y = 36665 + 0607 x r = 090 P lt 0001

B

150 200 250 300 350 400 450 0

50 100 150 200 250 300 350 400 450 500

PPARα PMN

PPARα Mo

y = 2505 + 0879 x r = 081 P lt 0001

A

50 100 150 200 250 300 350

50 100 150 200 250 300 350 400 450 500

PPARα Ly

PPARα PMN

y = 95668 + 0919 x r = 081 P lt 0001

C

100 150 200 250 300 350 400

0

50

100

150

200

250

300

350

400

PPARα Mo

PPARα Ly

y = -7503 + 0829 x r = 079 P lt 0001

B

100 150 200 250 300 350 400

50

100

150

200

250

300

350

400

450

500

PPARα Mo

PPARα PMN

y = 61384 + 0882 r = 074 P lt 0001

A

Figura 549 Corelaţii icircntre expresia PPARα icircn Eo şi alte tipuri de receptori investigaţi A PPARα Eo şi CD 36 (Lot SM) B PPARα Eo şi PPARα Mo( Lot Non-SM)

Icircn lotul martor am identificat o asociere moderată pozitivă (r = 038 P = 0033) icircntre

nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Eo şi Mo (figura 549B) corelaţie absentă icircn

lotul pacienţilor cu SM

Corelaţii dintre receptorii studiaţi şi componentele sindromului metabolic

Icircn lotul de control analiza statistică a relevat faptul că icircntre circumferinţa

abdominală (CA ) şi nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Mo Ly şi PMN există o

corelaţie inversă adică scăderea expresiei PPARα la nivelul acestor populatii celulare ar fi

icircnsoţită de creşterea CA (figura 550

Figura 550Corelaţii dintre receptorii

PPARα si CA A Mo B Ly C PMN

La pacienţii cu SM am notat o corelatie moderată negativă statistic semnificativă

icircntre TG şi valorile MFI a Ac anti- PPARα icircn Mo şi Ly( fig 551)

150 200 250 300 350 400 450 50

60

70

80

90

100

110

PPARα PMN

CA r = - 040 P = 0024

C

50 100 150 200 250 300 350 50

60

70

80

90

100

110

PPARα Ly

CA r = - 046 P = 0009

B

50 100 150 200 250 300 350 400 50

60

70

80

90

100

110

PPARα Mo

CA r = - 042 P = 0017

A

50 100 150 200 250 300 350 400 500

1000

1500

2000

2500

3000

PPARα Mo

PPARα Eo

r = 038 P = 0033

B

0 500 1000 1500 2000 2500 1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

8000

PPARα Eo

CD36

r = 050 P = 0010

A

Figura 551 Lot SM Corelaţie icircntre expresia PPARα şi TG (A Mo B Ly)

Analizand corelatia dintre receptorii CD36 si valorile TA la pacientii cu SM am observat

o asociere pozitivă asteptată intre TAD si nivelul de expresie al receptorilor CD36 (fig 552)

Figura 552 Lot SM Corelaţii icircntre expresia

receptorilor CD36 şi valorile tensiunii arteriale

diastolice

Studiind corelaţiile dintre receptorii PPARα şi HDL-col la subiecţii din lotul martor am

notat o asociere pozitivă icircntre expresia PPARα icircn Mo şi Ly cu HDL-col (fig 553)

Figura 553 Lot martor Corelaţii icircntre HDL-col şi expresia PPARα icircn Mo(A) Ly(B)

Icircn lotul normal am evidenţiat corelaţii pozitive moderate dar semnificative statistic icircntre

CA şi valorile TAS (r = 062 P lt 0001) respectiv TAD (r = 050 P=0004) precum şi icircntre

CA şi glicemia subiecţilor normali (r = 052 P = 0003) Aceste date icircmpreună cu relaţia

invers proporţională identificată icircntre HDL-col şi CA (r = 050 P = 001) susţin validitatea

acestui studiu Icircn lotul subiecţilor cu SM am observat o corelaţie moderat pozitivă icircntre

expresia PPARα icircn populaţiiile de Mo şi Eo şi concentraţia a HDL-col (fig 554)

B

100 150 200 250 300 350 20

30

40

50

60

70

80

90

100

PPARα Ly

HDL-col-(mgdl)

r = 036 P = 0046

A

150 200 250 300 350 400 20

30

40

50

60

70

80

90

100

PPARα Mo

HDL-col-(mgd)l

r = 035 P = 005

70 75 80 85 90 95 100 1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

8000

TAD (mmHg)

CD36

r = 048 P = 0013

B

50 100 150 200 250 300 350 -100

0

100

200

300

400

500

PPARα Ly

TG(mgdl)

r = - 042 P = 003

A

50 100 150 200 250 300 350 400 -100

0

100

200

300

400

500

PPARα Mo

TG ( mgdl) r =- 0 43 P = 0027

Figura 554 Corelaţii icircn SM icircntre HDL-col şi expresia PPARα icircn Mo (A) şi Eo(B)

Corelaţii icircntre nivelul de expresie relativă a PPARα şi markeri ai disfuncţiei

endoteliale şi inflamaţiei cronice

Deşi nu a icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică am reţinut corelaţia invers

proporţională (r = - 0331 P = 006) dintre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα

icircn PMN şi concentraţia serică a Non-HDL-colesterolului

Studiind relaţiile dintre parametri icircn lotul de pacienţi cu SM am observat o corelaţie

moderată invers proporţională icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Eo şi

acidul uric seric (figura 555 A) corelaţie absentă la subiecţii fără SM

Figura 555 Lot SM corelaţia dintre expresia PPARα icircn Eo şi acidul uric (A) respectiv

PPARα şi fibrinogen (B)

Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P=008) am notat pentru

pacienţii cu SM corelaţia invers proporţională dintre expresia PPARα icircn Eo şi concentraţia

serică a fibrinogenului ( figura 555B)

V5 Discuţii

Icircn cadrul lucrării de doctorat am studiat nivelul de expresie relativă a PPARα icircn

leucocitele pacienţilor cu SM comparativ cu cea a subiecţilor normali Expresia PPARα a fost

studiată icircn paralel cu cea a CD36 glicoproteină exprimată pe suprafaţa a numeroase celule

din organismul uman inclusiv pe cea a Mo şi macrofagelor Prin funcţia sa de receptor pentru

particulele oxidate de LDL CD36 cunoscut ca bdquoscavenger receptorrdquo de clasa B sau

bdquotrombospodin receptorrdquo contribuie la dezvoltarea inflamaţiei de la nivel endotelial şi

formarea plăcii de ateroscleroză Referitor la studiul PPARα icircn Eo icircn sindromul metabolic

menţionăm că studiul nostru este primul care arată că nivelul de expresie a proteinei PPARα

icircn Eo măsurat prin citometrie icircn flux este semnificativ mai redus la pacienţii care sunt

diagnosticaţi cu acest sindrom De asemenea icircn lotul cu SM cercetat icircn cadrul studiului

receptorilor PPARα numărul Eo circulante a fost semnificativ mai crescut la pacienţii cu SM

B

0 500 1000 1500 2000 2500 200

250

300

350

400

450

PPARα Eo o

Fibrinogen mgdl

r =- 036 P = 008

0 500 1000 1500 2000 2500 1 2 3 4 5 6 7 8 9

10 11

PPARα Eo_

Acid uric(mgdl) r = 048 P = 0014 A

0 500 1000 1500 2000 2500 10

20

30

40

50

60

70

80

PPARα Eo

HDL(mgdl)

r = 044 P = 0024

B

100 150 200 250 300 350 400 10

20

30

40

50

60

70

80

PPARα Mo

HDL( mgdl)

r = 046 P = 0019

A

(P = 003) Aceste constatări conduc la ipoteza că Eo joacă un rol special icircn mecanismele

patogenice declanşate icircn sindromul metabolic şi că receptorii PPARα sunt importanţi icircn

implicarea Eo icircn obezitate şi insulinorezistenţă Creşterea numărului de Eo circulante este

urmată de eliberarea mediatorilor proinflamatori iar reducerea expresiei PPARα icircn Eo

determină perturbarea mecanismelor de control al inflamaţiei cu exacerbarea cascadei

proinflamatorii Consecutiv se agravează disfuncţia endotelială şi se accelerează progresia

leziunilor de ateroscleroză Extrapolacircnd aceste ipoteze putem spune că asocierea raportată

dintre boala ischemică coronariană şi Eo poate fi şi consecinţa exacerbării cascadei

proinflamatorii de la nivel vascular produsă datorită scăderii expresiei PPARα icircn Eo iar

creşterea numărului de Eo circulante poate reprezenta o adaptare a organismului uman care

icircncearcă să suplinească deficitul de receptori PPARα Analizacircnd curba ROC pentru

intensităţile medii de fluorescenţă determinate pentru anticorpii anti- PPARα icircn Eo am

obţinut pentru acest biomarker o sensibilitate a testului de 565 şi o specificitate de 778

pentru un punct de cut-off de 1533 ( figura 536 ) Deşi aria AUC (Aria under the curve) egală

cu 0663 icircncadrează acest test ca avacircnd o acurateţe redusă observăm că că această valoare

este apropiată de determinările AUC pentru alţi factori (fibrinogen raport de aterogenitate

acid uric non- HDL-colesterol) cunoscuţi ca fiind implicaţi icircn aterogeneză şi inflamaţia

cronică (figura 431) Aceste remarci alături de faptul că icircn studiul receptorilor PPARα icircn

leucocite am inclus subiecţi la primul diagnostic de SM creează premisa integrării

determinării expresiei relative a receptorilor PPARα icircn diagnosticul complex al sindromului

metabolic Putem spune că icircn final studiul expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofilele

circulante se dovedește a fi util icircn diagnosticul precoce la nivel molecular al SM permiţacircnd

identificarea timpurie a unor indivizi cu risc cardiometabolic crescut Astfel intervenţia

precoce asupra subiecţilor cu deficit de PPARα icircn Eo contribuie la managementul eficient al

afecţiunilor degenerative icircn care inflamaţia cronică icircndeplineşte un rol primordial Referitor

la populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările efectuate prin citometrie de flux nu au

arătat existenţa unor diferenţe statistice icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα

la subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali Rezultatele noastre pot fi

consecinţa caracteristicilor loturilor studiate (icircn studiul nostru au fost incluşi subiecţi recrutaţi

la primul diagnostic de SM şi icircn absenţa stimulării receptorilor PPARα cu droguri agoniste

PPARα) dar icircn acelaşi timp pot apare diferenţe datorită metodei utilizate (231 232 233)

Făcacircnd o paralelă cu un studiu publicat icircn 2013 icircn Europa (231) care a arătat creşterea

nivelului de expresie al PPARα icircn Ly şi Mo observăm că deşi numărul de subiecţi a fost

aproximativ egal (57 participanţi icircn studiul nostru 60 icircn studiul DAmore) subiecţii icircn studiul

amintit au fost recrutaţi dintr-o clinică cu profil medical la primul diagnostic de SM icircn timp

ce metoda utilizată a fost PCR (Polymerase Chain Reaction) mult mai fidelă decacirct citometria

icircn flux icircn studiul receptorilor nucleari De asemenea DAmore nu investighează expresia

PPARα icircn Eo şi PMN icircn cercetare fiind incluse doar celulele CD14+ (predominant Mo) şi

CD14- (predominant Ly) Deşi nu am obţinut diferenţe statistic semnificative icircntre cele două

loturi referitoare la nivelul de expresie relativă a PPARα icircn Mo Ly şi PMN am observat

corelaţii puternice semnificative statistic icircntre expresia receptorilor PPARα icircn aceste tipuri

celulare Rezultatele obţinute sugerează existenţa unui mecanism diferit molecular de control

icircn eozinofile care reglează cantitatea de proteină PPARα icircn eozinofile versus alte tipuri de

leucocite (la pacienţii cu SM) şi acest lucru este icircn concordanţă cu cercetările care descriu

expresia PPARα mRNA icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale

bronşice keratinocite) Studiind prin citometrie de flux nivelul de expresie relativă a

receptorului CD36 la nivelul Mo am arătat prezenţa acestuia icircn Mo tuturor subiecţilor

investigaţi Analizacircnd valorile intensităţii medii de fluorescenţă a CD36 icircn loturile studiate

am observat o tendinţă de creştere la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali

confirmacircnd implicarea receptorului CD36 icircn patogeneza acestuia Referitor la expresia

receptorului CD36 rezultatele obţinute sunt icircn consens cu studii anterioare care au arătat

creşterea expresiei CD36 la pacienţii cu SM şi diabet zaharat Astfel pe lacircngă diferenţa icircn

expresia CD36 s-au raportat şi corelaţii inverse icircntre expresia proteinei CD36 şi nivelul

adiponectinei Acelaşi studiu a evidenţiat o corelaţie pozitivă intre expresia CD36 cu expresia

receptorilor PPAR gamma relaţia cu PPARα nefiind investigată

Analiza de subgrup a relaţiilor dintre componentele SM și elementele moleculare

proinflamatorii studiate a relevat prezenţa unor asocieri semnificativ statistice icircntre acestea

Se argumentează astfel că veridicitatea studiului este susţinută de interdependenţele statistice

ale componentelor SM Determinarea coeficientului de corelaţie Icircn studiul nostru nivelul de

expresie relativă a PPARα s-a corelat moderat negativ (figura 550) cu CA a subiecţilor din

lotul normal pentru populaţiile celulare de Mo (r = - 0420 P = 001) Ly (r = - 046 P =

0009) şi PMN (r = - 040 P = 0024) date care sunt icircn concordanţă cu studiile care arată

rolul PPARα icircn furnizarea energiei prin beta-oxidarea acizilor graşi Icircn acelaşi timp icircn lotul

pacienţilor cu SM nu am identificat prezenţa unei asocieri icircntre nivelul de expresie relativă a

PPARα şi valoarea măsurată a CA Asocierea dintre expresia relativă a PPARα cu obezitatea

de tip central completează datele existente referitoare la reglarea homeostaziei energetice

conturacircnd un mecanism de control deficitar al aportului caloric al SM Icircn condiţiile icircn care

rezultatele obţinute prin metoda citometriei icircn flux nu au arătat existenţa unei corelaţii intre

expresia PPARα şi CA la pacienţii cu SM considerăm că ar fi necesar studiul

polimorfismului genei PPARA care ar putea aduce informaţii importante cu privire la

implicarea acestor receptori icircn apariţia obezităţii de tip central Subliniem acest lucru deoarece

obezitatea este o boală plurifactorială icircn care pe lacircngă factorii ereditari sunt implicaţi factori

de mediu psihologici şi sociali (245) Existenţa unei componente genetice a aterosclerozei

este legată şi de prezenţa unor variante ale genei PPARA asociate cu creşterea incidenţei bolii

cardiovasculare (82) şi a SM (249) Icircn studiul nostru am constatat o scădere statistic

semnificativă a nivelului expresiei relative a receptorilor PPARα icircn Eo la subiecţii cu

antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială comparativ cu subiecţii fără istoric

familial de hipertensiune (figura 537) Deşi diferenţele calculate icircntre loturile studiate nu au

icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică la subiecţii care au declarat prezenţa

antecedentelor familiale de hipertensiune arterială remarcăm o tendinţă de scădere a

intensităţii medii de fluorescenţă pentru Ac anti-PPARα la nivelul Mo (figura 515 P = 006

) icircn timp ce expresia relativă a CD36 icircnregistrează o creştere la acesti subiecţi (figura 545 P

= 008) Icircn contextul riscului cardiovascular foarte icircnalt al pacienţilor cu SM amintim şi

existenţa corelaţiei pozitive dintre valorile tensiunii arteriale diastolice şi expresia relativă a

receptorului CD36 (r = 0483 P = 0013) Această constatare este icircn consens cu studiile care

au arătat că forma solubilă circulantă a CD36 este asociată cu factorii de risc cardiovasculari

fiind propusă ca un marker precoce al aterosclerozei Activarea PPARα este asociată cu

modularea metabolismului lipidic iar agoniştii PPARα sunt utilizaţi icircn mod curent pentru

tratamentul dislipidemiei Sub acţiunea agoniştilor PPARα se obţine o icircmbunătăţire a funcţiei

endoteliale şi a parametrilor reologici funcţiile pleiotropice ale agoniştilor PPARα fiind

dovedite icircn trialuri clinice controlate Icircn populaţiile de Mo şi Ly la pacienţii cu SM

cercetarea noastră a evidenţiat o asociere negativă icircntre nivelul de expresie relativă a

receptorilor PPARα şi concentraţia TG serice (figura 551) Astfel scăderea expresiei

receptorilor PPARα este asociată cu creşterea nivelului TG serice contribuind la profilul

lipidic aterogen din SM Icircn conformitate cu literatura de specialitate icircn studiul efectuat prin

metoda citometriei icircn flux am găsit prezenţa asocierii icircntre nivelul de expresie al PPARα şi

HDL-colesterol Corelaţia pozitivă dintre nivelul de expresie relativă PPARα şi concentraţia

HDL-colesterolului a fost observată icircn lotul martor icircn populaţiile de Mo (r = 035 P = 005)

şi Ly ( r = 036 P = 004) (figura 553) susţinacircnd faptul că stimularea receptorilor PPARα

este legată de creşterea nivelului seric al lipoproteinelor cu densitate crescută La pacienţii cu

SM corelaţia dintre expresia PPARα şi HDL-colesterol a fost evidenţiată icircn populaţiile de Mo

(r = 046 P = 0019) şi eozinofile (r = 044 P = 0024) Se desprinde concluzia că icircn

sindromul metabolic scăderea concentraţiei HDL-colesterol este legată de diminuarea

nivelului de expresie relativă a receptorilor nucleari PPARα icircntărind afirmaţiile legate de

rolul acestor receptori icircn progresia bolilor cardiovasculare Studiind reactanţii de fază acută

analiza statistică a relevat o diferenţă semnificativă din punct de vedere statistic icircntre valorile

fibrinogenului la pacienţii cu SM atunci cacircnd au fost comparaţi cu subiecţii fără SM

(Capitolul IV4 P lt0 001 figura 427A) De asemenea icircn Capitolul V dedicat studiul

expresiei relative a receptorilor PPARα studiul valorilor fibrinogenului a arătat creşterea

acestui reactant de faza acută icircn lotul cu SM comparativ cu lotul martor (P lt0 0001) Icircn

studiul nostru am calculat o corelaţie invers proporţionala (r = - -036 fig 555B) icircntre

nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile şi concentraţia serică a

fibrinogenului Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P = 008) am reţinut

această asociere deoarece am demonstrat că nivelul de expresie relativă al receptorilor

PPARα icircn eozinofile este mai scăzut icircn sindromul metabolic iar sindromul metabolic este

caracterizat printr-un status inflamator cronic status caracterizat şi de creşterea concentraţiei

serice a fibrinogenului De asemenea notam ca această corelaţie negativă se află icircn

concordanţă cu studiile care arata că tratamentul cu agonişti PPARα (fibraţi) determina

scăderea nivelului seric al fibrinogenului contribuind la diminuarea inflamaţiei cronice din

sindromul metabolic şi icircn consecinţă amelioracircnd insulinorezistenţa

LIMITE ȘI DIFICULTĂȚI IcircN CERCETARE

Icircn cadrul Tezei de Doctorat am desfăşurat o cercetare care şi-a propus studierea

expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Recrutarea anamneza şi examinarea

clinică a subiecţilor au fost realizate icircn cadrul Cabinetului de Medicină de Familie CMI Popa

Elena din Iaşi iar determinările hematologice şi biochimice s-au efectuat icircn cadrul

Laboratorului Ambulatorului de Specialitate al Spitalului Universitar ldquoSfacircntul Spiridon din

Iaşi Icircn studiul epidemiologic şi al markerilor inflamatori al sindromului metabolic desfăşurat

au fost incluşi un număr de 1530 de participanţi pe baza liberului consimţămacircnt examinaţi icircn

perioada 01012013 - 31122013 Icircn continuare icircn perioada 1012014 - 28022014 pe baza

criteriilor de includere şi excludere icircn cele două loturi de studiu am investigat un număr de 57

de subiecţi prezentaţi la consultaţie icircn această perioadă şi care au icircndeplinit criteriile de

includere icircn cele două loturi (Lot SM şi Lot Control) constituite pentru evaluarea nivelului de

expresie a receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Explorarea nivelului de expresie

relativă a receptorilor PPARα s-a desfăşurat icircn cadrul Laboratorului de Biologie Moleculară

de pe platforma Institutului Regional de Oncologie Datorită resurselor proprii financiare

limitate trebuie să subliniez că aceasta cercetare nu ar fi fost posibilă fără contribuţia unor

cercetători din domeniul medical care m-au sprijinit necondiţionat atacirct icircn elaborarea

protocolului de lucru cacirct şi icircn efectuarea propriu-zisă a studiului Icircn acest sens menţionăm şi

faptul că pentru studiul receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic am utilizat aparatura

Laboratorului de Biologie Moleculară (care deserveşte icircntreaga Regiune a Moldovei) Pe

această cale mulţumesc personalului Laboratorului de Biologie Moleculară pentru ajutorul

acordat icircn desfăşurarea cercetării doctorale icircn condiţiile icircn care se observa creşterea

numărului de pacienţi care se adresează acestei platforme de cercetare Mulţumesc de

asemenea şi Doamnei Doctor Elena Butoi din cadrul Institutului de Biologie şi Patologie

Moleculară ldquoNicolae Simionescurdquo Bucureşti) pentru donaţia anticorpului secundar anti-

FITC Icircn consecinţă pentru recrutarea unui număr mai mare de participanţi ar fi fost necesară

icircn primul racircnd obţinerea unor resurse financiare suplimentare pentru achiziţia de aparatură şi

reactivi Totuşi numărul subiecţilor recrutaţi este apropiat de numărul subiecţilor raportaţi icircn

cadrul unor granturi de cercetare care aveau ca ţinta studiul expresiei receptorilor PPARα

(212 227 228 231) Rezultatele obţinute continua seria lucrărilor care arata importanta

studiului mecanismelor etiopatogenice ale sindromului metabolic patologie care se afla icircntr-o

continuă creştere La pacienţii cu SM pe lacircngă diminuarea nivelului de expresie a receptorilor

PPARα icircn eozinofile ne aşteptam şi la evidenţierea unor modificări icircn expresia PPARα şi icircn

populaţiile de Ly Mo şi PMN Acest fapt poate fi explicat de utilizarea unor celule provenite

de la pacienţi fără afectare cardiovasculară fără diabet zaharat şi necesită continuarea

studiului pe culturi celulare icircn condiţii de stimulare cu agonişti PPARα deziderat care

impune continuarea investigării expresiei PPARα printr-un grant de cercetare

ORIGINALITATEA ȘI CONTRIBUȚIILE INOVATIVE ALE TEZEI DE

DOCTORAT PERSPECTIVE DE CERCETARE

Evaluarea nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn leucocitele circulante

aduce noi perspective icircn studiul obezităţii şi sindromului metabolic Importanta studiului

expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic derivă din prevalenta crescută a

sindromului metabolic icircn populaţia cercetată la care se adaugă riscul cardiovascular foarte

icircnalt al acestor pacienţi cu implicaţii majore icircn sănătatea publică Rolul receptorilor PPARα

icircn inflamaţie şi aterogeneza este binecunoscut dar studiul nostru este primul care a arătat că

nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα este semnificativ mai scăzut in populatiile

de eozinofile la pacienţii cu SM Această concluzie coroborata cu existenţa unei stracircnse

asocieri intre expresia receptorilor PPARα la nivelul Mo limfocitelor şi PMNlor creeaza

ipoteza existenţei unui mecanism de control diferit al expresiei PPARα la nivelul

eozinofilelor Această cercetare aduce informaţii importante referitoare la mecanismele

proinflamatorii care stau la baza insulinorezistenţei şi riscului cardiometabolic şi impune

continuarea studiului acestor receptori nucleari prin citometrie icircn flux metodă care poate fi

aplicată şi la scara mai largă dacă sunt asigurate resursele materiale necesare cercetării

Cercetarea prin citometrie icircn flux poate fi completată de studiul polimorfismului genei

PPARA şi astfel se pot identifica timpuriu indivizii cu potenţial risc cardiometabolic crescut

Studiul receptorilor PPARα a stabilit conexiuni cu factori proinflamatori şi aterogenetici iar

continuarea cercetării poate aduce şi elemente noi de diagnostic precoce icircn sindromul

metabolic contribuind la icircmbunătăţirea prognosticului acestor pacienţi

CONCLUZII FINALE

1 Aplicarea scorului de SM alături de implementarea algoritmului electronic de diagnostic

contribuie la o prelucrare rapidă eficientă și standardizată a informaţiilor la nivelul

medicinei primare

2 Prevalenţa SM calculată astfel icircn cadrul studiului este crescută (2732) icircn concordanţă

cu datele raportate

3 Controlul factorilor de risc cardiometabolici incluşi icircn SM se poate realiza prin

managementul stilului de viaţă (scăderea greutăţii corporale prin combaterea

sedentarismului şi adoptarea unei diete antiaterogene şi hipocalorice) şi administrarea

terapiei medicamentoase

4 Este necesară adoptarea unei politici de sănătate publică pentru prevenirea creşterii icircn

populaţie a prevalenţei obezităţii şi a diabetului zaharat

5 Noi metode de cercetare icircn domeniul SM axate pe diagnosticarea precoce şi cuantificarea

eficientă a acestuia duce la diminuarea incidenței evenimentelor cardiovasculare majore

6 Sindromul metabolic se caracterizează printr-un status inflamator cronic

7 Valorile Non-HDL-colesterolului şi a raportului de aterogenitate sunt semnificativ mai

mari la pacienţii cu SM

8 Dintre reactanţii de faza acută am observat că valoarea medie a fibrinogenului este mai

crescută icircn lotul cu SM

9 Valorile eozinofilelor sunt crescute icircn sindromul metabolic iar explorarea relaţiei dintre

eozinofile şi obezitate constituie una din direcţiile de studiu actuale ale sindromului

metabolic

10 Evaluarea markerilor inflamatori icircn contextul sindromului metabolic este utilă icircn

evaluarea complexă a a factorilor de risc cardiometabolici

11 Prin metoda citometriei icircn flux am demonstrat prezenta Receptorilor Activaţi de

Inductorii Proliferării Peroxizomilor ndash Alpha (PPARα) icircn toate populaţiile de leucocite

studiate (Mo limfocite PMN eozinofile) atacirct icircn lotul pacienţilor cu SM cacirct şi icircn lotul

martor

12 Utilizacircnd intensitatea medie de fluorescenţă a anticorpilor anti- PPARα am arătat că

nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile este semnificativ mai redus

la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali

13 Acest studiu este primul care a demonstrat existenţa unei scăderi statistic semnificative a

nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofilele pacienţilor cu SM

confirmacircnd cercetările recente care au evidenţiat rolul eozinofilelor şi al receptorilor

PPARα icircn obezitate reglarea inflamaţiei cronice şi aterogeneza

14 Contrar aşteptărilor noastre icircn populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările

efectuate icircn cele două loturi de studiu (cu şi fără sindom metabolic) nu am evidenţiat

diferenţe statistic seminificative icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα la

subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali

15 Icircn populaţiile de Mo limfocite şi polimorfonucleare am observat corelaţii puternice

semnificativ statistic icircntre expresia PPARα icircn aceste tipuri celulare sugeracircnd existenţa

unui mecanism unic de control al inflamaţiei cronice la nivelul acestor celule probabil

diferit de cel din eozinofile

16 La subiecţii cu SM expresia relativă a PPARα icircn Eo este invers asociată cu expresia

receptorului CD36 (receptor al particulelor de ox - LDL şi propus ca un marker precoce al

aterosclerozei) dovedind rolul antiinflamator al receptorilor PPARα la nivel endotelial

17 La pacienţii cu antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială nivelul de

expresie al receptorilor PPARα icircn eozinofile şi Mo este diminuat comparativ cu subiecţii

fără antecedente familiale de hipertensiune arterială Putem spune că studiul efectuat de

noi aduce informaţii importante legate de geneză aterosclerozei şi hipertensiunii arteriale

18 Prin studiul asocierilor dintre receptorii PPARα şi componentele clinice ale sindromului

metabolic am arătat rolul acestor receptori icircn determinismul obezităţii de tip central

nivelul expresiei relative a receptorilor PPARα fiind invers proporţional cu circumferinţa

abdominală

19 Icircn acelaşi timp nivelul de expresie a PPARα icircn sindromul metabolic este asociat pozitiv

cu concentraţia serică a HDL-colesterolului şi invers asociat cu nivelul trigliceridelor

serice dovedind rolul acestor receptori icircn diminuarea procesului inflamator cronic de la

nivel vascular

20 La pacienţii cu SM scăderea expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofile este corelată cu

creşterea unor markeri ai sindromului inflamator cronic cardiometabolic (acid uric

fibrinogen) ilustracircnd importanta receptorilor icircn reglarea status-ului inflamator cronic din

sindromul metabolic

21 Utilizarea metodei flowcitometrice pentru studiul expresiei relative a receptorilor PPARα

icircn leucocite a adus informaţii importante cu privire la mecanismele moleculare de control

implicate icircn patogenia bolilor cardiometabolice icircn concordanţă cu cercetările care descriu

expresia PPAR icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale bronşice

keratinocite)

BIBLIOGRAFIE SELECTIVA

1 Kahn R Metabolic syndrome- what is the clinical usefulness Lancet 2008371(9628)1892-3

2 Reaven GM The metabolic syndrome is this diagnosis necessary Am J Clin Nutr 2006 83(6)1237-7

3 Grundy SM Pre-Diabetes Metabolic Syndrome and Cardiovascular Risk J Am Coll Cardiol 201259(7)

635-43

4 International Diabetes Federation IDF Diabetes Atlas 6th edn International Diabetes Federation Belgium

Brussels 20131-155

5 World Health Organization Global Status Report on Noncommunicable Diseases 2010 World Health

Organization Geneva Switzerland 20111-176

6 Coman AE Petrovanu R Sindromul metabolic in practica de ambulator Editura Pim Iaşi 2009 1-103

7 Grundy SM Becker D Clark LT et alThird Report of the National Cholesterol Education Program (NCEP)

Expert Panel on Detection Evaluation and Treatment of High Blood Cholesterol in Adults (Adult

Treatment Panel III) Final Report Circulation 2002106(25)3143-90

8 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J Metabolic syndrome- a new worldwide definition A Consensus Statement

from the International Diabetes Federation Diabet Med 2006 23(5)469-80

9 KG Alberti KG Eckel RH Grundy SM etal International Diabetes Federation task force on epidemiology

and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart Association World Heart

Federation International Atherosclerosis Society International Association for the study of obesity

Harmonizing the metabolic syndrome a joint interim statement of the International Diabetes Federation task

force on epidemiology and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart

Association World Heart Federation International Atherosclerosis society and International Association

for the study of obesity Circulation 2009120(16)1640-5

10 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J IDF Epidemiology Task Force The metabolic syndrome new

worldwide definition Lancet 2005 366 1059 - 62

11 Oleszczyk M Svab I Seifert B et al Primary healthcare in the developing part of Europe changes and

development in the former Eastern Bloc countries that joined the European Union following 2004 Med Sci

Monit 2009(15)78ndash84

12 Jung U J Choi M S Obesity and Its Metabolic Complications The Role of Adipokines and the

Relationship between Obesity Inflammation Insulin Resistance Dyslipidemia and Nonalcoholic Fatty

Liver Disease Int J Mol Sci 2014rsquo15(4) 6184-223

13 Vanden Heuvel JP Peters JM Peroxisome Proliferators In Ramos K (ed) Cellular and Molecular

Toxicology (Second Edition) Volume 2 New York Elsevier Science Inc 2010 145 - 67

14 Yessoufou A Wahli W Multifaceted roles of peroxisome proliferator-activated receptors (PPARs) at the

cellular and whole organism levels Swiss Med Wkl 2010140w13071 doi104414smw201013071

15 Azhar S Peroxisome proliferator-activated receptors metabolic syndrome and cardiovascular disease

Future Cardiology 20106(5)657-91

16 Andries G Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity

Diabetes and Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(Suppl)24-32

17 Zandbergen F Plutzky J PPARalpha in atherosclerosis and inflammation Biochim Biophys Acta

20071771(8)972-82

18 Straus DS Glass CK Anti-inflammatory actions of PPAR ligands new insights on cellular and molecular

mechanisms Trends Immunol 200728(12)551-8

19 Zlei M Zugun- Eloae F Carasevici E Citometrie icircn flux - Bază şi clinică Icircn Hinescu ME (ed) Citometrie icircn

flux - principii şi aplicaţii clinice Bucureşti Editura Viaţa Medicală Romacircnească 20111-128

20 Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity Diabetes and

Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(9)24-32

21 Woerly G Honda K Loyens M et al Peroxisome proliferator-activated receptors alpha and gamma down-

regulate allergic inflammation and eosinophil activation J Exp Med 2003198(3)411-21

22 Salle-Saumont D Brenuchon C Kanda A et al Peroxisome proliferator-activated receptor alpha regulates

skin inflammation and humoral response in atopic dermatitis J Clin Allergy Immunology 2008 21(4)962-8

23 Schote A Turner J Schiltz J et al Nuclear receptors in human immune cells expression and correlations

Mol Immunolog 200744(6)1436-45

24 DAmore S Vacca M Graziano G et al Nuclear receptors expression chart icircn peripheral blood

mononuclear cells identifies patients with Metabolic Syndrome Biochim Biophys Acta

20131832(12)2289-301

25 Uthurralt J Gordish-Dressman H Bradbury M T et al PPARalpha L162V underlies variation in serum

triglycerides and subcutaneous fat volume in young males BMC Med Genet 2007855

26 Hiukka A Leinonen ES Jauhiainen M et al Long-term effects of fenofibrate on VLDL and HDL

subspecies icircn participants with type 2 diabetes mellitus Diabetologia 2007 50(10)2067-75

27 Robins SJ Rubins HB Faas FH et alInsulin resistance and cardiovascular events with low HDL

cholesterol The Veterans Affairs HDL Intervention Trial (VA-HIT) Diabetes Care 2003 26(5)1513-7

28 Devaraj S Siegel D Jialal I Statin Therapy in Metabolic Syndrome and Hypertension Post-JUPITER

What is the Value of CRP Curr Atheroscler Rep 2011 13(1) 31ndash42

29 Imperatore G Riccardi G Iovino C et al Plasma Fibrinogen A New Factor of the Metabolic Syndrome A

population-based study Diabetes Care 19982 1(4)649-54

30 Krysiak R Gdula-Dymek A Bachowski R Okopien B Pleiotropic effects of atorvastatin and fenofibrate

in metabolic syndrome and different types of pre-diabete Diabetes Care 201033(10)2266-70

31 Hermans MP Impact of Fenofibrate on Type 2 Diabetes Patients with Features of the Metabolic Syndrome

Subgroup Analysis From FIELD Curr Cardiol Rev 20106(2)112-8

32 Silverstein R Inflammation atherosclerosis and arterial thrombosis Role of the scavenger receptor CD36

Cleveland Clinic Journal of Medicine 200976(Suppl 2)S27-S30

33 Hăncu N Obezitatea In Vereşiu IA (ed) Diabetul zaharat nutritia si bolile metabolice Volume 2 Editura

Echinox Cluj- Napoca 2010 1-15

Lista lucrări publicate

1 Elena Popa Maria Maidaniuc Agnes Bacusca Alamir Diaa Rodica Petrovanu Adorata Elena

Coman Disfuncţia endotelială ndash de la mecanisme moleculare la cuantifi care şi tratament icircn practica

medicală Practica Medicală 20149(3) 109-14

2 Elena Popa Agnes Bacusca Alamir Diaa Maria Maidaniuc Rodica Petrovanu Adorata Elena Coman

The function of insulin receptor (IRF) in evolution of obesity correlation with adipocytes diameters

Archives of the Balkan Medical Union 201449(3) 275-9

3 Elena Popa Florin Zugun-Eloae Mihaela Zlei Daniela Jitaru Oana Maria Pintilie Adorata Elena

Coman Maria Traian Didona Anca Ungureanu Eugen Carasevici - acceptata pentru numarul 42014

Flow cytometry analysis of PPAR-alpha receptors in metabolic syndrome) Revista Romană de

Medicină de Laborator(RRLM-D-14-00034R1- adeverinţa ataşată

Page 6: REZUMAT TEZĂ DE DOCTORAT - umfiasi.ro Doctorat/rezumat... · universitatea de medicinĂ Şi farmacie “grigore t. popa” iaŞi facultatea de medicinĂ rezumat tezĂ de doctorat

b identificarea tipului de SM icircn raport cu numărul de componente

c stabilirea prevalenţei sindromului metabolic icircn populaţia studiată

d studiul markerilor inflamatori prezenţi icircn SM

Studiul epidemiologic icircn populaţia selectată

Am efectuat un studiu epidemiologic transversal care şi-a propus stabilirea prevalenţei

sindromului metabolic şi a componentelor sale icircn populaţia icircnscrisă pe lista unui cabinet de

medicină de familie Studiul s-a desfăşurat pe parcursul a 12 luni icircn perioada 01012013ndash

31122013 icircn cadrul Cabinetului de Medicină de Familie CMI Popa Elena situat icircn strada

Ion Creanga nr 73 din Iaşi

Obiectivele studiului - evaluarea din punct de vedere clinic şi biologic a sindromului metabolic

- identificarea tipului de SM icircn raport cu numărul de componente

- stabilirea prevalenţei sindromului metabolic icircn populaţia studiată

Lotul de studiu a fost constituit din populaţia de ambele sexe cu vacircrsta cuprinsă icircntre

18 şi 91 ani icircnscrisă pe lista medicului de familie Subiecţii au fost invitaţi să participe la

studiu icircn luna naşterii realizacircnd astfel o programare a vizitelor pe parcursul a 12 luni

Criteriile de includere icircn lotul de studiu vacircrsta peste 18 ani capacitate de decizie

domiciliul stabil icircn Romacircnia participare pe baza consimţămacircntului liber informat Criteriile

de excludere vacircrstă sub 18 ani femei gravide sau care alăptează bolnavi icircn faza terminală

subiecţi care refuză semnarea consimţămacircntului informat Nu s-au formulat criterii care să

aducă discriminări legate de sex etnie sau rasă

Protocolul studiului epidemiologic al sindromului metabolic

Icircn cadrul studiului epidemiologic s-au realizat cacircte două vizite pentru fiecare participant La

prima vizită subiecţii au fost informaţi asupra studiului icircn cadrul cercetării doctorale şi au

semnat Consimţămacircntul liber informat Pentru fiecare participant s-a completat fişa de studiu

computerizată incluzacircnd date anamnestice şi clinice (talie greutate corporală perimetru

abdominal) La a doua vizită s-au recoltat probe biologice (sacircnge venos) de către o asistentă

specializată pentru următoarele determinări biochimice (glicemie colesterol total HDL-

colesterol LDL-colesterol trigliceride acid uric creatinină fibrinogen proteină C reactivă)

şi hematologice (hemoleucograma VSH) Pentru diagnosticarea SM am utilizat criteriile

de diagnostic Harmonised I (tabel VI) Am comparat prevalenţa SM conform criteriilor

Harmonised I cu prevalenţa obţinută prin aplicarea criteriilor IDF respectiv ATP III

Analiza statistică Pentru analiza parametrilor studiaţi icircn SM am realizat icircmpreună cu

firma Arhilog Soft un program icircn care sunt incluşi parametrii de diagnostic ai SM şi care

permite icircncadrarea pacienţilor funcţie de componentele SM icircn SM3 SM4 SM5 De

asemenea programul permite editarea şi arhivarea unei fişe de observaţie pentru fiecare

participant la studiu precum şi crearea unei baze de date compatibile cu programul Microsoft

Office Excel 97-2003

Menţionăm că acest program poate stoca

şi alţi parametri clinici şi paraclinici utilizaţi icircn evaluarea complexă a SM putacircnd fi ulterior

introdus ca un program de monitorizare a evoluţiei pacienţilor Pentru prelucrarea statistică a

parametrilor s-au folosit programele Microsoft Office Excel 97-2003 SPSS-10 (Statistical

Package for Social Sciences) şi aplicaţia Medcalc Statistical Software ndash 1333 Valoarea lui p

Figura 41 Program de

analiză a parametrilor SM

mai mică de 005 a fost considerată semnificativ statistic

Rezultate Analiza lotului de studiu s-a efectuat icircn funcţie de mediul de provenienţă sex vacircrstă şi

vacircrsta medie Caracteristicile clinice şi biochimice ale lotului studiat sunt reprezentate icircn

tabelul VIII

Tabel VIII Caracteristicile lotului studiat Media 95 CI SD Minimum Maximum

Vacircrsta (ani) 4751 4661 - 4841 1798 1800 9100

CA (cm) 8830 8764 - 8896 1316 5600 13400

IMC (kgm2) 2603 2578 - 2628 497 1900 4500

TAD (mmHg) 7529 74883 - 7571 827 6000 11500

TAS (mmHg) 11730 11650 - 11810 1590 9000 19000

Glicemie (mgdl) 9435 9328 - 9542 2138 7200 40000

HDL- col(mgdl) 4498 4427 - 4570 1422 2100 9200

TG(mgdl) 12269 11887 - 12651 7157 4800 87900

Determinarea scorului SM

Am aplicat criteriile de diagnostic şi am calculat scorul de SM pentru fiecare subiect (0-

absenţa criteriului 2- prezenţa criteriului) (fig44)

Figura 44 Frecvenţa scorului SM icircn

populaţia studiată conform criteriilor

SM Harmonised (A) IDF (B) ATP III

(C) Se observă că distribuţia scorurilor

SM conform criteriilor de diagnostic este

identică icircn cazul aplicării criteriilor

Harmonized I şi IDF

Scorul de SM a avut valori pare

cuprinse icircntre intervalul 0 - 10 pacienţii

cu SM avacircnd un scor mai mare sau egal

cu 6

Icircn lotul studiat am analizat prezenţa simultană a criteriilor Harmonised I de diagnostic şi

am constatat prezenţa SM la 389 subiecţi (204 femei şi 185 bărbaţi) reprezentacircnd 2542

(95CI 2296-2808) din totalul populaţiei studiate Raportul prevalenţelor specifice pe sexe

bărbaţifemei a fost de 103 (95 CI084 -126)Icircn concordanţă cu criteriile IDF am

identificat un număr de 325 pacienţi cu SM (175 femei şi 150 bărbaţi) iar prevalenţa SM icircn

populaţia studiată conform IDF a fost de 2124 (95 CI 1899ndash 2368) Raportul

prevalenţelor specifice la bărbaţi versus femei a fost de 0977 (95 CI 078 ndash122) Utilizacircnd

definiţia ATP III au fost identificaţi un număr de 229 subiecţi cu SM Prevalenţa SM a fost

C

0

100

200

300

400

500

600

700

Scor SM ATP III

Număr pacienţi

0 2 4 6 8 10

ATP III SM5 SM4 SM3 non SM

B

0 50

100 150 200 250 300 350 400 450

Scor SM IDF

Număr pacienţi

0 2 4 6 8 10

IDF SM5 SM4 SM3 non SM

A

0

50

100

150

200

250

300

350

400

450

Scor SM Harmonised I

Număr pacienţi

0 2 4 6 8 10

HARMONIZED I SM5 SM4 SM3 non SM

de 1497 (95CI 1309 ndash 1704) icircn populaţia studiată Au fost calculate prevalenţele pe

sexe şi au fost găsite valorile de 1343 (95CI 010 ndash 164) la bărbaţi respectiv 1632

(95 CI 1366 ndash 1934) la femei raportul dintre acestea fiind de 082 (95CI 062 ndash 107)

Pentru fiecare asociere dintre componentele SM diagnosticat conform criteriilor

Harmonised I am calculat prevalenţele icircn cadrul SM(tabel XVI)

Tabel XVI Prevalenţa asocierilor dintre componentele SM Număr

pacienţi

Ponderea icircn cadrul

pacienţilor cu SM

(95 CI)

Prevalenţa icircn

populaţia studiată

(95 CI)

SM cu trei componente (SM3)

241 6195 (5438ndash7029) 1575 (1383-

1787)

Obezitate centrală + hipertensiune arterială +

hipertrigliceridemie

45 1154 (844ndash1548) 294 (214-393)

Obezitate centrală + hipertensiune arterială + hipo-

HDLcolesterolemie

38 979 (691ndash1340) 248 (175-340)

Obezitate centrală + hipertrigliceridemie +

hipoHDL-colesterolemie

34

874 (605ndash1221) 222 (153-310)

Obezitate centrală + modificări ale metabolismului

glucidic + hipertensiune arterială

31 796 (541ndash1131) 202 (137-287)

Hipertensiune arterială + hiper-trigliceridemie +

hipoHDL- colesterolemie

26 668 (436 ndash979) 169 (111-249)

Modificări ale metabolismului glucidic +

hipertensiune arterială + hiper-trigliceridemie

21 539 (334-825) 137 (085-209)

Obezitate centrală + modificări ale metabolismului

glucidic + hipertrigliceridemie

15 385 (215-636) 098 (054-116)

Modificări ale metabolismului glucidic

hipertrigliceridemie + hipoHDL-colesterolemie

12 308 (159-538) 078 (040-137)

Modificări ale metabolismului glucidic +

hipertensiune arterială + hipoHDLcolesterolemie

10 257 (123ndash472) 065 (031-120)

Obezitate centrală + modificări ale metabolismului

glucidic + hipo-HDL-col

9 231 (105ndash439) 058 (026-111)

SM cu patru componente (SM4) 104 2674 (2184-239) 679 (555-823)

Obezitate centrală + modificări ale metabolismului

glucidic + hipertensiune arterială + hipoHDL-

colesterolemie

32 822 (562-1116) 209 (143-

295)

Obezitate centrală + hipertensiune arterială +

hipertrigliceridemie + hipoHDL-col

25 642 (415- 948) 163 (105-241)

Obezitate centrală + modificări ale metabolismului

glucidic + hipertri-gliceridemie + hipoHDL-

colesterolemie

12 308 (159-538) 078 (040-137)

Modificări ale metabolismului glucidic +

hipertensiune arterială + hipertri-gliceridemie +

hipoHDL-colesterolemie

6 154 (056- 335) 039 (014-085)

SM cu cinci componente (SM5) 44 1131 (822-1518) 287 (209-386)

Total (SM3 + SM4 + SM5) 389 100 2542(2296-

2808)

Analizacircnd componentele SM la cei 389 pacienţi diagnosticaţi cu SM conform criteriilor

Harmonised I am constatat că obezitatea centrală este cea mai bine reprezentată icircn SM dintre

aceste componente (8072 95CI 7644 - 8452) urmată de HTA (7892 95CI 7453

- 8287) hiperTG (6915 95 CI 6430-7371) hipo-HDL-col (6375 95 CI 5876-

6854) şi hiperglicemie (5681 95 CI5173- 6179)

Standardizarea prevalenţelor funcţie de vacircrstă şi sex Analiza statistică a relevat faptul

că prevalenţa SM creşte cu icircnaintarea icircn vacircrstă Dacă pentru vacircrsta cuprinsă icircntre 35-54 ani

prevalenţa la bărbaţi este semnificativ mai mare comparativ cu femeile (raport calculat B F -

183 P=0003) pentru celelalte grupe de vacircrsta nu s-au observat diferenţe semnificative icircntre

sexul feminin şi cel masculin Am observat că după instalarea menopauzei la femei

prevalenţa SM (corespunzătoare Harmonised I) la femei depăşeşte 50 iar la bărbaţi atinge

42 Utilizacircnd European Standard Population (175) am efectuat standardizarea funcţie de

vacircrstă şi sex a prevalenţelor bdquocruderdquo (brute) obţinute icircn populaţia studiată şi am calculat o

prevalenţă standardizată a SM de 2732 (95 CI 2460-3003) La sexul masculin

prevalenţa standardizată a SM a fost de 2760 (95 CI 2362 - 3157) iar la sexul feminin

am obţinut valoarea de 2854 (95 CI 2462 - 3245)

Discuţii

Studiul desfăşurat de noi a investigat prezenţa SM icircn populaţia unui Cabinet de Medicină

de Familie Icircn Europa prevalenţa SM este de aproximativ 25-30 Statele Unite Ale Americii

au raportat o prevalenţă a sindromului metabolic de 22 icircn populaţia cu vacircrsta peste 20 ani

pe cacircnd la vacircrstă mai mare de 60 ani s-a observat o prevalenţă de 44 (1419) Icircn studiul

efectuat am observat o prevalenţă standardizată de 2732 (95 CI 2460-3003) care este

icircn concordanţă cu prevalenţele raportate icircn Europa precum şi o creştere a ponderii SM icircn

populaţie icircn raport cu vacircrsta Am preferat utilizarea definiţiei Harmonised I pentru SM

deoarece cuprinde criterii adaptate pentru o abordare unitară a SM mărind astfel numărul

pacienţilor diagnosticaţi şi care vor urma tratament conform Ghidurilor de Practică Medicală

Limitările acestui studiu sunt legate de faptul că este concentrat doar pe populaţia asigurată şi

neasigurată aflată pe lista unui medic de familie din mediul urban Se pot efectua studii la

nivelul Cabinetelor Medicale de Medicină de Familie dar trebuie să se aplice pe un lot

reprezentativ urbanrural care să reprezinte populația acelei regiuni Utilizarea structurilor

populaționale atașate cabinetului de MF este utilă atacirct pentru cele clinice cacirct și pentru cele

epidemiologice deoarece surprinde populația studiată icircn mediul de viață cotidian Prevalenţa

mare a SM icircn populaţia studiată necesită aplicarea unei politici eficiente de sănătate publică

deoarece riscul producerii evenimentelor cardiovasculare majore poate fi redus semnificativ

printr-un control adecvat al componentelor SM (obezitate dislipidemii hipertensiune

arterială şi hiperglicemie

Studiul sindromului inflamator cronic icircn cadrul sindromului metabolic

Obiectivele studiului

- studierea markerilor inflamaţiei cronice şi aterogenezei la subiecţii cu şi fără SM

- evaluarea importanţei markerilor studiaţi ai inflamaţiei cronice icircn diagnosticul de

ambulator al sindromului metabolic

Material şi metodă

Icircn cercetarea inflamaţiei cronice din SM au fost incluşi 1530 subiecţi de ambele sexe cu

vacircrsta cuprinsă icircntre 18-91 ani icircnscrişi pe lista CMI Popa Elena Studiul s-a desfăşurat icircn

perioada 01012013ndash 31122013 Populaţia ţintă a fost identică cu cea din studiul

epidemiologic şi s-a desfăşurat concomitent cu studiul prevalentei SM Subiecţii au fost

icircmpărţiţi icircn două loturi lotul cu SM (Lot SM) şi lotul de control (fără SM)

Lot SM a) criterii de includerevacircrsta peste 18 ani recrutarea pe baza semnării

Consimţămacircntului liber informat SM diagnosticat pe baza criteriilor Harmonised I (14) b)

criterii de excluderevacircrstă sub 18 anirefuzul semnării Consimţămacircntului liber informat

femei icircn perioada de graviditate sau de lactaţie

Lot Control (fără SM) a) criterii de includerevacircrsta peste 18 anirecrutarea pe baza

semnării Consimţămacircntului liber informat absenţa sindromului metabolic b) criterii de

excluderevacircrstă sub 18 ani refuzul semnării Consimţămacircntului liber informatfemei icircn

perioada de graviditate sau de lactaţie

Rezultate

Lotul cu SM (Lot SM) a fost format din cei 389 pacienţi diagnosticaţi cu SM conform

criteriilor Harmonised I Lotul SM a fost alcătuit din 185 bărbaţi şi 204 femei raportul

bărbaţifemei fiind de 090 (95 CI073-112) Lotul de control (fără SM) a fost alcătuit

din cei 1141 participanţi care nu au icircntrunit criteriile de diagnostic ale sindromului metabolic

Din cei 1141 de subiecţi 530 au fost de sex masculin iar 611 de sex feminin raportul

bărbaţifemei fiind 087 (95 CI 077-097) Vacircrsta subiecţilor a fost semnificativ mai mare

icircn lotul pacienţilor cu SM (5976plusmn1322 ani) comparativ cu lotul martor (4333plusmn 1748 ani) (t-

Test Plt00001) Aşa cum ne-am aşteptat valorile medii ale componentelor clinice ale SM

(circumferinţa abdominală tensiunea arterială sistolică şi diastolică) au fost mai mari icircn lotul

pacienţilor cu SM (t-Test Plt0001 pentru fiecare dintre componente) Studiind parametrii

biochimici incluşi icircn diagnosticul SM valorile medii ale glicemiei şi TG au fost semnificativ

mai crescute icircn lotul SM (t-Test Plt00001 pentru ambele constante) Icircn acelaşi timp

valoarea medie determinată a HDL-col a fost semnificativ mai mare la subiecţii din lotul

martor ( t-Test Plt00001) SM se caracterizează printr-o dislipidemie aterogenă

caracterizată de creşterea TG scăderea HDL-col concomitent cu creşterea LDL-col creşterea

Non-HDL-col şi a raportului de aterogenitate (Col totalHDL-col) (185) Comparacircnd cele

două loturi am observat că valoarea medie a LDL-colesterolului determinată icircn lotul

pacienţilor cu SM a fost semnificativ mai mare faţă de subiecţii din lotul martor (t-Test P =

00002) Măsurarea Non-HDL-colesterolului a arătat prezenţa unei diferenţe semnificative

icircntre cele două loturi (figura 420 B) Astfel icircn concordanţă cu prezenţa dislipidemiei

aterogene valoarea medie a Non-HDL-col a fost semnificativ mai mare (t-Test Plt 00001) icircn

lotul cu SM comparativ cu lotul de control Icircn contextul inflamației cronice şi aterogenezei

din sindromul metabolic am evaluat sensibilitatea şi specificitatea Non-HDL-colesterolului

ca test diagnostic al SM Valoarea Non-HDL-colesterolului care prezice cu cea mai mare

acurateţe prezenţa SM a fost de 151 mgdl (punctul de ldquocut-offrdquo) pentru care am calculat o

sensibilitate de 64 27 şi o specificitate de 5872 Calculul ariei AUC a furnizat valoarea

de 0605 şi deci determinarea concentraţiei serice a parametrului Non-HDL-colesterolului are

valoarea unui marker cu acurateţe redusă Am studiat valorile raportului Col totalHDL-col icircn

cele două loturi şi am constatat că la pacienţii cu SM valoarea media a raportului de

aterogenitate este semnificativ mai mare faţă de valoarea raportului determinată icircn lotul

martor (t-Test Plt 00001) Pentru raportul de aterogenitate studiat analiza curbei ROC a

arătat că valorile mai mari decacirct punctul de ldquocut-offrdquo de 431 prezic prezenţa SM cu cea mai

mare sensibilitate (6381 ) şi specificitate (6582)Valoarea AUC pentru indicele de

aterogenitate a fost de 0667 şi icircn studiul SM acest indice poate fi considerat un marker cu

acurateţe redusă Valoarea medie determinată a acidului uric la subiecţii fără SM a fost

semnificativ mai mică decacirct icircn lotul SM (t-Test Plt 00001) Curba ROC a arătat că valorile

acidului mai mari de 43 mgdl prezic diagnosticul de SM cu cea mai mare sensibilitate

(8107) şi specificitate (5328) Pentru acidul uric AUC a avut valoarea de 0655 şi

icircncadrează determinarea acidului uric seric icircn racircndul testelor cu acurateţe redusă (187)

Comparacircnd populaţiile de leucocite (tabel XXI) valoarea medie determinată a

numărului de Eo a fost semnificativ mai mare icircn lotul cu SM comparativ cu lotul martor (t-

Test Plt0001) Analizacircnd curba ROC trasată pentru valorile numărului de Eo am observat

că valorile ldquocut-offrdquo mai mari de 200 Eomm3

pot prezice prezenta SM cu cea mai mare

specificitate (7705) şi sensibilitate (3978) Pentru diagnosticul SM calculul ariei AUC a

arătat faptul că determinarea numărului de Eo are valoarea unui test diagnostic cu acurateţe

redusă (AUC = 0 589) Comparacircnd valorile medii ale fibrinogenului am calculat o diferenţă

statistic semnificativă icircntre cele două loturi valoarea medie a fibrinogenului fiind mai mare icircn

lotul SM ((t-Test P lt 00001) Cu ajutorul curbei ROC am observat că valorile fibrinogenului

mai mari de 306 mgdl prezic sindromul metabolic cu o sensibilitate de 7511 şi specificitate

de 6056 Fibrinogenul a fost icircncadrat icircn categoria markerilor inflamatori cu acurateţe

redusă AUC avacircnd valoarea de 0690 Icircn loturile de studiu am calculat AUC corespunzătoare

criteriilor de diagnostic ale SM Am observat că icircn cazul scorului Harmonised I

sensibilitatea şi specificitatea sunt de 100 iar AUC este egală cu 1000 Pentru cele cinci

criterii de diagnostic AUC a avut valori icircntre 0636 (pentru variabila HDL-col) şi 0804

(pentru variabila CA) (figura 431)

AUC ES 95 CI

Scor SM Harmonised I 1000 00000 0997 - 1000

CA (cm) 0804 00133 0781 - 0825

TAD (mmHg) 0666 00169 0639 - 0692

TAS (mmHg) 0757 00148 0732 - 0780

Glicemie (mgdl) 0742 00160 0717 - 0766

Trigliceride (mgdl) 0756 00175 0732 - 0780

HDL- colesterol 0636 00183 0609 - 0662

Figura 431 Analiza AUC criterii de diagnostic ale SM

Studiind figura 432 se observă că valoarea AUC pentru markerii studiaţi este cuprinsă

icircntre 0589 (icircn cazul variabilei Eo) şi 0690 (icircn cazul fibrinogenului) Icircn contextul SM

acurateţea acestor markeri ai inflamaţiei cronice şi disfuncţiei endoteliale poate fi considerată

redusă deoarece AUClt07 pentru toţi markerii investigaţi (figura 431) Totuşi valorile ariilor

parametrilor reprezentaţi icircn figura 431 sunt apropiate de valorile AUC ale variabilelor TAD

şi HDL-col (figura 432) şi deci pot fi utilizaţi pentru completarea diagnosticului de SM

AUC ES 95 CI

Non-HDL-colesterol 0605 00171 0580 - 0630

Col totalHDL-col 0607 00163 0642 - 0691

Acid uric 0655 00161 0630 - 0679

Fibrinogen 0690 00206 0658 - 0720

Eozinofile 0589 00176 0564 - 0615

Figura 432 AUC markeri ai SM inflamaţiei cronice şi aterogenezei

Discuţii

Status-ul proinflamator din SM asociat cu insulinorezistenţa şi disfuncţia endotelială

constituie o verigă de legătură dintre inflamaţie şi procesele metabolice complexe icircnsoţindu-

se de deteriorarea funcţiilor vasculare şi creşterea riscului de evenimente cardiovasculare

majore (2858) Studiul efectuat a arătat o diferenţă icircntre vacircrstele subiecţilor din cele două

loturi vacircrsta pacienţilor cu SM fiind semnificativ mai mare (Plt0001) comparativ cu subiecţii

normali confirmacircnd faptul menţionat că vacircrsta reprezintă unul din stimulii care agravează

inflamaţia cronică Am arătat că valorile fibrinogenului sunt mai mari icircn SM comparativ cu

Scor Harmonised I

0 20 40 60 80 100

0

20

40

60

80

100

100-Specificitate

Sen

sib

ilit

ate

Criterii diagnostic SM

0 20 40 60 80 100

0

20

40

60

80

100

100-Specificitate

Sens

ibili

tate

CA

TAD

TAS

Glicemie

Trigliceride

HDL-C

0 20 40 60 80 100

0

20

40

60

80

100

100-Specificitate

Sensi

bilita

te

Non-HDL-C

Col T HDL-C

Acid uric

Fibrinogen

Eozinofile

lotul martor atacirct la bărbaţi cacirct şi la femei icircn concordanţă cu studiile anterioare Evaluarea

fibrinogenului este importantă nu numai icircn SM pentru definirea contextului proinflamator şi

protrombotic ci şi icircn predicţia cardiovasculară la subiecţii normali Studiind populaţiile

leucocitare am obţinut diferenţe semnificative icircn cazul Eo valoarea medie a acestora fiind

semnificativ mai mare icircn lotul cu SM comparativ cu lotul martor (P lt 0001 figura 425B)

Implicarea Eo icircn SM s-a conturat icircn ultimul deceniu aceste celule fiind implicate icircn recrutarea

macrofagelor din ţesutul adipos Experimental s-a constatat că o creştere a Eo apărută ca

urmare a infectării cu helminţi sau stimulare cu IL-5 este urmată de icircmbunătăţirea toleranţei la

glucoză (199) Controlul pe care icircl exercită Eo asupra activării macrofagelor ar putea fi cheia

intervenţiei asupra obezităţii icircn viitorul apropiat(165199) Hiperuricemia asociata frecvent cu

SM este cunoscut ca un factor independent de risc cardiovascular (192 202) In concordanţă

cu aceasta afirmaţie in studiul nostru am constatat ca nivelul seric al acidului uric a fost mai

crescut in lotul cu SM diferenţa semnificativă din punct de vedere statistic (P lt 00001)

Dislipidemia aterogenă din sindromul metabolic şi diabetul zaharat se caracterizează prin

creşterea trigliceridelor şi a Non-HDL-col scăderea HDL-col creşterea numărului de

particule LDL modificate (185190) La pacienţii cu SM am descris un profil aterogenetic

cu risc crescut de evenimente cardiovasculare majore

STUDIUL RECEPTORILOR ACTIVAŢI DE INDUCTORII PROLIFERĂRII

PEROXIZOMILOR-ALPHA IcircN LEUCOCITELE CIRCULANTE

Ipoteza de lucru

Studii experimentale efectuate au arătat că rolul PPARα icircn ateroscleroză derivă din

implicarea acestor receptori icircn limitarea inflamaţiei Plecacircnd de la acest fundament ne-am

propus evidenţierea receptorilor nucleari activaţi de inductorii proliferării peroxizomilor-

alpha (PPARα) prin citometrie de flux icircn leucocitele din sacircngele periferic alături de

evaluarea acestei metode icircn cuantificarea expresiei relative a PPARα ca test diagnostic

precoce al modificărilor metabolice SM Studiul expresiei relative a receptorilor PPARα a

plecat de la premisa că dacă SM se caracterizează printr-un status inflamator cronic nivelul

de expresie a PPARα icircn leucocitele circulante este mai scăzut la pacienţii cu SM comparativ

cu subiecţii normali Referitor la studiul receptorului CD36 am plecat de la presupunerea că

nivelul de expresie al acestui receptor icircn SM este crescut dat fiind importanţa acestui receptor

icircn inflamaţia aterosclerotică Avacircnd icircn vedere efectele receptorilor amintiţi icircn

insulinorezistenţă şi aterogeneză am considerat necesară evaluarea prezenţei receptorului

nuclear PPARα icircn paralel cu studiul receptorului bdquoscavengerrdquo CD-36 prin metoda citometriei

icircn flux Astfel icircn studiul efectuat mi-am propus şi investigarea existenţei unei legături icircntre

nivelul de expresie al receptorilor PPARα şi cel al receptorului CD-36 De asemenea ne-am

icircndreptat atenţia spre stabilirea unor asocieri icircntre componentele clinice şi biochimice ale

sindromului metabolic şi nivelul intensităţilor de fluorescenţă ale PPARα şi CD-36 ca măsură

a expresiei relative a acestor receptori

Material și metodă

Studiul receptorilor PPARα icircn contextul sindromului metabolic s-a desfăşurat icircn

perioada 1012014 -28022014 pe baza metodologiei studiilor de tip caz-martor Am urmărit

identificarea unor diferenţe icircntre expresia receptorilor PPARα la pacienţii cu SM comparativ

cu subiecţii sănătoşi diferenţe care ar putea fi utile icircn diagnosticul precoce al SMRecrutarea

pacienţilor s-a efectuat din pacienţii prezentaţi pentru consultaţie la Cabinetul Individual

ldquoCMI Dr Popa Elenardquo situat icircn strada Ion Creanga din Iaşi Pentru studiul receptorilor

PPARα icircn sindromul metabolic au fost selecţionaţi un număr de 57 de subiecţi 26 de subiecţi

cu SM (constituind lotul SM) şi 31 subiecţi fără SM constituind lotul de control (Lot Non-

SM) Pentru studiul SM pacienţii au fost recrutaţi din masa de populaţie arondată cabinetului

de MF fără istoric de SM diabet zaharat boală cardio-vasculară aflați la primul diagnostic

de SM evaluarea completă a acestora fiind urmată de includerea icircn programul de

management cardiovascular şi metabolic conform Ghidurilor Terapeutice aflate icircn vigoare

Lot SM a) criterii de includerevacircrsta peste 18 ani recrutarea pe baza semnării

Consimţămacircntului liber informatSM nou-diagnosticat pe baza prezenţei a minim trei criterii

de diagnostic pentru SM conform Harmonised I b) criterii de excluderevacircrstă sub 18 ani

refuzul semnării Consimţămacircntului liber informat femei icircn perioada de graviditate sau de

lactaţie SM anterior diagnosticat istoric de diabet zaharat boală cardiovasculară constituită

tratament cu agonişti PPARα (ie fibraţi etc)

Lot martor (Non-SM) a) criterii de includerevacircrsta peste 18 ani recrutarea pe baza

semnării Consimţămacircntului liber informat absenţa diagnosticului de SM b) criterii de

excludere vacircrstă sub 18 ani refuzul semnării Consimţămacircntului liber informat femei icircn

perioada de graviditate sau de lactaţie

Studiul receptorilor PPARα a inclus două subetape

A Studiul componentelor sindromului metabolic conform criteriilor Harmonised I

Evaluarea clinică a participanţilor s-a desfăşurat icircn cadrul Cabinetului de Medicină de

Familie iar determinările hematologice şi biochimice s-au efectuat icircn Laboratorul

Ambulatorului Clinic de Specialitate al Spitalului Clinic de Urgenţă bdquoSf Spiridonrdquo Iaşi

B Evaluarea icircn citometrie de flux a nivelului relativ de expresie a PPARα şi CD36

Studiul receptorilor PPARα s-a desfăşurat icircn Laboratorul de Biologie Moleculară al

Institutului Regional de Oncologie Iaşi prin metoda citometriei icircn flux (19) Nivelul relativ de

expresie al receptorilor nucleari PPARα a fost determinat icircn diferite tipuri de leucocite

circulante polimorfonucleare (PMN) limfocite (Ly) Mo(Mo) şi eozinofile(Eo) Am utilizat o

metodă de citometrie icircn flux optimizată ldquoin houserdquo elaborată icircn cadrul Laboratorului de

Biologie Moleculară al IRO Iaşi Icircn cursul procesului de optimizare am testat mai multe

concentraţii ale anticorpului anti-PPARα 1100 1500 11500 14500 iar icircn urma

determinărilor efectuate şi a analizei statistice concentraţia 1500 a fost considerată optimă

pentru desfăşurarea studiului (tabel XXIII figura 51)

Tabel XXIII Optimizarea concentraţiilor Ac anti-PPARα Diferenţa

mediilor

valorilor

medii

PMN

Diferenţa

mediilor

mediane-

lor

PMN

Diferenţa

mediilor

valorilor

medii

Ly

Diferenţa

mediilor

mediane-

lor

Ly

Diferenţa

mediilor

valorilor

medii

Mo

Diferenţa

mediilor

mediane-

lor

Mo

Diferenţă 0 1300 1600 100 100 700 750

normal - 1100 650 1050 1050 1350 450 900

patologic 1500 2850 2750 3800 3600 2850 2400

11500 -1050 800 3500 3300 2250 1800

14500 2200 2150 1300 1100 2950 2850

AOptimizare

BRepetabilitate

Figura 51 Optimizarea concentraţiei anticorpului anti-PPARα

Icircn concordanţă cu literatura de specialitate icircn cercetarea efectuată intensitatea medie

de fluorescenţă (MFI) a fost utilizată ca măsură pentru evaluarea expresiei celulare a

receptorilor PPARα (212) Un exemplu de analiză a probelor este reprezentat icircn figura 52

Figura 52 Exemplu de analiză flowcitometrică pentru receptorul nuclear PPARα Graficul din stacircnga reprezintă distribuţia leucocitelor iar cel din dreapta ilustrează distribuţia

intensităţii de fluorescenţă pentru populaţiile de celule selectate

Intensitatea Medie a Fluorescenţei (MFI) a CD36 ca o măsură a nivelului relativ de

expresie a acestor receptori la nivelul membranei Mo a fost detectată printr-o metodă

convenţională pentru marcare de suprafaţă şi evaluare pe bază de citometrie icircn flux folosind

aceleaşi probe de sacircnge cu EDTA cu focalizare pe Mo şi utilizacircnd CD14 ca marker specific

pentru Mo (figura 53)

Figura 53Analiza

flowcitometrică

pentru marcajul

CD14 - CD36

Rezultate

Icircn cele două loturi au fost incluşi icircn studiu un număr de 57 de participanţi care au fost

investigaţi din punct clinic şi paraclinic Vacircrsta subiecţilor incluşi icircn studiu a fost cuprinsă

icircntre 18 şi 79 ani iar vacircrsta medie calculată a avut valoarea de 4805 plusmn 1587 ani Pentru sexul

masculin vacircrsta medie este de 4925plusmn1617 ani iar pentru sexul feminin 4689 plusmn1 5ani

diferenţa obţinută icircntre vacircrstele pacienţilor fiind statistic nesemnificativă (P = 085)

Analizacircnd vacircrstele subiecţilor din cele două loturi am observat că vacircrsta medie a pacienţilor

cu SM (5476 plusmn 1183 ani) a fost semnificativ mai mare (t-test P = 0003) decacirct icircn lotul

martor (4258 plusmn 169 ani) Pentru diagnosticul sindromului metabolic am calculat scorul de

SM bazacircndu-ne pe criteriile Harmonised I Conform criteriilor diagnostice din cei 57 de

subiecţi investigaţi un număr de 26 participanţi (46) au fost incluşi icircn lotul cu SM (Lot

SM) iar 31 de subiecţi(54) nu au prezentat acest sindrom constituind lotul martor (Lot

Non-SM) Din punct de vedere al repartiţiei pe sexe nu au existat diferenţe statistic

semnificative raportul bărbaţifemei fiind de 0961 Din totalul celor 28 de bărbaţi incluşi icircn

studiu 4285 (12 bărbaţi) au icircntrunit cel puţin trei criterii diagnostice pentru SM fiind

incluşi icircn lotul SM Icircn acelaşi timp 14 femei reprezentacircnd 4827 din subiecţii de sex

feminin au icircntrunit condiţiile pentru includerea icircn lotul pacienţilor cu SM Valoarea medie

determinată pentru scorul de SM a arătat prezenţa unor valori semnificativ statistic mai mari

din punct (t-test P lt 00001) icircn lotul SM (769plusmn176) comparativ cu lotul martor (174 plusmn

184) Am studiat comparativ media valorilor măsurate ale criteriilor componentelor SM

Analiza statistică a arătat valori semnificativ statistic mai mari pentru CA TG glicemie TAS

şi TAD (plt0001) icircn lotul SM comparativ cu lotul normal Concomitent calculul statistica

evidenţiat o scăderea semnificativă a HDL-colesterolului icircn lotul cu SM comparativ cu

subiecţii din lotul martor (Non-SM) Aplicacircnd testul z am comparat ponderea pacienţilor

diagnosticaţi cu HTA dislipidemie şi tulburări ale metabolismului glucidic icircn lotul SM versus

lot Non-SM şi am constatat prezenţa acestor afecţiuni icircntr-un procent mai mare semnificativ

statistic icircn lotul SM ((plt0001)

Utilizacircnd testul t Student am calculat diferenţele statistice şi icircntre alți parametri

studiaţi care sunt factori de risc cardio-vascular dar care nu sunt componente ale SM Icircn lotul

cu SM valorile acidului uric fibrinogenului Col total Non-HDL-col şi LDL-col au fost

semnificativ mai mari comparativ cu lotul martor (tabel XXVI) Analizacircnd valorile medii ale

populaţiilor de leucocite am identificat doar pentru populaţia de Eo diferenţe statistice icircntre

cele două loturi numărul Eo icircn lotul SM fiind semnificativ mai mare decacirct icircn lotul martorTot

pentru caracterizarea celor două loturi am analizat prezenţa antecedentelor

heredocolaterale (AHC) de diabet zaharat boala cardiovasculară şi dislipidemie pentru toţi

subiecţii investigaţi Astfel existenţa AHC de HTA a fost declarată de 2580 din subiecţii

incluşi icircn lotul martor respectiv de 5384 din numărul pacienţilor cu SM Antecedentele

heredocolaterale de dislipidemie au fost prezente la 3461 din pacienţii cu SM icircn timp ce icircn

lotul martor anamneza a evidenţiat aceste antecedente la 3548 din subiecţi

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα

Icircn cercetarea desfăşurată am utilizat intensitatea medie de fluorescenţă (MFI) ca

măsură a nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn leucocitele studiate Pentru

populaţiile de leucocite analiza computerizată a probelor luate icircn studiu a furnizat valori

pentru MFI a receptorilor PPARα icircn funcţie de cantitatea de anticorpi anti-PPARα marcaţi cu

fluorocrom care se leagă de aceste celule şi apoi sunt captaţi de citometru (figura 59)

A Lot Non - SM

B Lot SM

Figura 59 Analiza flowcitometrică pentru receptorii PPARα icircn leucocite A lot normal B lot SM

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Mo

Analiza probelor efectuată conform protocolului de lucru descris a arătat prezenţa

PPARα icircn Mo recoltate din sacircngele tuturor subiecţilor incluşi icircn această cercetare Pentru toţi

participanţii investigaţi analiza MFI a Ac anti - PPARα icircn populaţia de Mo (Mo) a arătat un

interval de variaţie icircntre [786 395] Valoarea medie a nivelului de expresie relativă a PPARα

calculată pentru Mo a fost de 23210 plusmn7860 Pentru ambele loturi de studiu pacienţilor cu

SM testul Testul Shapiro-Wilk a arătat distribuţia normală a valorilor obţinute pentru nivelul

de expresie al PPARα icircn Mo

Tabel XXVIII Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn Mo

Lot SM Lot Non-SM

N 26 31

Media 22819 23538

SD 5819 7717

Mediana 22400 22600

Minimum 12800 78600

Maximum 35800 37900

Percentila 25 18300 18300

Percentila 75 26200 30350

Pentru pacienţii din lotul SM valoarea medie a MFI icircn Mo a fost de 22819 plusmn 5880 iar

pentru lotul martor s-a calculat o valoare medie a MFI a Ac anti-PPARα de 23538 plusmn 7717

Distribuţia statistică a frecvenţei valorilor MFI obţinute pentru nivelul de expresie a PPARα

icircn Mo subiecţilor din cele două loturi a fost reprezentată icircn figura 511

Figura 511 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti-PPARα icircn Mo

Sub forma unei diagrame de control Shewhart am reprezentat variaţia intensităţii medii de

fluorescenţă pentru anticorpii anti-PPARα icircn MoVariaţia nivelului de expresie relativă a

receptorilor PPARα icircn Mo subiecţilor studiaţi este ilustrată icircn fig 512 513

Figura 512 Lot SM Variaţia

expresiei relative a PPARα icircn Mo

Număr pacienţi

26

Minim 128

Maxim 358

Media 22819

DS 5819

25 din 26 valori ale MFI s-au icircncadrat

icircn intervalul Media plusmn 2DS

Figura 513 Lot Non-SM Variaţia

expresiei relative a PPARα icircn Mo

Număr pacienţi 31

Minimum 786

Maximum 379

Media 23538

DS 7717

Cu excepţia unei singure

determinări valorile calculate s-au

icircncadrat icircn Media plusmn 2DS

Utilizacircnd testul parametric t-Student pentru variabilele cu distribuţie normală am

comparat valoarea medie a intensităţii de fluorescenţă a Ac anti-PPARα icircn lotul cu SM versus

subiecţi fără SM (Lot Non-SM) Analiza statistică efectuată nu a identificat diferenţe icircntre

50 100 150 200 250 300 350 400 450

0

5

10

15

20

25

30

35

MFI anti-PPAR a

Frecv

enta

relati

va (

)

Lot SM

0 50 100 150 200 250 300 350 400 450 500

0

5

10

15

20

25

30

35

MFI anti-PPAR a

Frecv

enta

relati

va (

)

Lot martor

1 6 11 16 21 26 31

0

50

100

150

200

250

300

350

400

450

MFI

anti-

PPAR

a

2282

1106

3458

518

4046

Media

LCI

LCI

1 6 11 16 21 26 31 36

-100

0

100

200

300

400

500

MFI a

nti-PP

AR

a

2354

810

3897

39

4669LCS

LCI

Media

cele două loturi icircn ceea ce priveşte expresia PPARα la nivelul Mo circulante (t- Test P=

069)

Studiul receptorilor PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de AHC şi dislipidemie

Nivelul de expresie al receptorilor PPARα α icircn Mo tinde să fie mai scăzut la subiecţii

cu AHC de HTA comparativ subiecţii care nu au declarat AHC de HTA (P= 006 fig 515)

AHC HTA

Număr 22

Mediana 19950

Percentila 25 17800

Percentila 75 22700

AHC HTA absente

Număr 35

Mediana 24800

Percentila 25 19025

Percentila 75 31700

Figura 515 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Mo funcţie de AHC de HTA

Nu s-au calculat diferenţe semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor

PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de dislipidemie atunci cacircnd aceştia au fost comparaţi cu

subiecţii fără AHC de tulburări ale metabolismului lipidic (t- Test P= 020)

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn limfocite

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn populaţia de Ly a

demonstrat prezenţa receptorilor PPARα icircn Ly tuturor subiecţilor studiaţi Pentru toţi

participanţii investigaţi analiza MFI a Ac anti - PPARα icircn populaţia de Ly a relevat un

interval de variaţie icircntre [748 314] iar valoarea medie a MFI a fost de 18058 plusmn 5600

Pentru ambele loturi aplicarea testului Shapiro-Wilk a evidenţiat distribuţia normală a

valorilor determinate pentru nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Ly Pentru

pacienţii cu SM valoarea medie a MFI determinată pentru expresia PPARα icircn populaţia de

Ly a fost de 18178 plusmn 61 16 iar pentru lotul martor a fost de 16800 plusmn 5229

Tabel XXX Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn limfocite

Lot SM Lot Non-SM

N 26 31

Media 181781 179574

SD 611694 522907

Mediana 165000 168000

Minimum 81300 74800

Maximum 314000 301000

Percentila 25 13400 - 145750

Percentila 75 21800 21700

Distribuţia frecvenţei valorilor MFI a Ac anti-PPARα icircn Ly este redată icircn figura 518

Figura 518 Distribuţia frecvenţelor relative a MFI a Ac anti-PPARα icircn Ly

94 din determinările efectuate pentru determinarea nivelului de expresie relativă al

MFI

ant

iPPA

R

a_Mo

190

200

210

220

230

240

250

260

270

280

DA NU

AHC HTA

P=006

50 89 128 167 206 244 283 322 361 400

0

5

10

15

20

25

30

35

MFI anti-PPAR a

Frecv

enta

relati

va (

)

Lot SM

0 50 100 150 200 250 300 350

0

5

10

15

20

25

30

35

40

MFI anti-PPAR a

Frec

venta

relat

iva (

)

Lot Non-SM

receptorilor PPARα icircn limfocitele subiecţilor cu SM s-au icircncadrat icircn intervalul Media plusmn 2DS

Figura 5 19 Lot SM Variaţia expresiei

relative a PPARα icircn Ly

Număr pacienţi 26

Minimum 813

Maximum 31400

Media 18178

Deviaţia Standard 6116

25 valori s-au icircncadrat icircn Media plusmn 2DS

Pentru lotul Non-SM diagrama de control (figura 520) a arătat toate valorile

determinate pentru lotul Non-SM se icircncadrează icircntre LCS şi LCI

Figura 520 Lot Non -SM Variaţia

expresiei relative a PPARα icircn Ly

Număr pacienţi 31

Minimum 748

Maximum 30100

Media 179574

Deviaţia Standard 5229

96 din valori icircncadrate icircn Media plusmn 2DS

Aplicarea testului t-Student pentru valorile medii ale intensităţii de fluorescenţă ale

PPARα icircn Ly nu a arătat existenţa unei diferenţe statistic semnificative icircntre lotul cu SM şi

lotul martor(t- Test P= 088)

Analiza receptorilor PPARα icircn Ly subiecţilor cu AHC de HTA şi dislipidemie

Studiind populaţiile de Ly la subiecţii care au prezentat AHC de hipertensiune

arterială analiza flowcitometrică a relevat existenţa unor valori mai mici pentru MFI la aceşti

subiecţi comparativ cu cei fără AHC de HTA (fig 522) deşi scăderea observată nu a

icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică (t- Test P = 009)

AHC HTA

Număr 22

Mediana 16000

Percentila 25 12700

Percentila 75 17100

AHC HTA absenţe

Număr 35

Mediana 18700

Percentila 25 14900

Percentila 75 23175

Figura 522 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Ly funcţie de AHC de HTA

Nu am calculat diferenţe statistic semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor

PPARα icircn populaţiile de Ly ale subiecţilor la care am identificat AHC de dislipidemie

comparativ cu cei care nu au declarat antecedente familiale de dislipidemie (t- Test P= 051)

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn neutrofile (PMN)

Analiza flowcitometrică a evidenţiat prezenţa PPARα icircn PMN recoltate din sacircngele

venos al tuturor participanţilor la studiu Pentru toţi subiecţii investigaţi analiza MFI a Ac -

PPARα icircn populaţia de PMN a relevat un interval de variaţie de [163419] iar valoarea medie

a MFI pentru Ac anti-PPARα a fost de 26392 plusmn 7064 Testul Shapiro-Wilk a arătat o

distribuţie normală a valorilor intensităţii medii de fluorescenţă a anticorpilor anti-PPARα atacirct

icircn lotul pacienţilor cu SM cacirct şi icircn lotul martor

1 6 11 16 21 26 31

-50

0

50

100

150

200

250

300

350

400

MFI

anti-

PPAR

a

1818

595

3041

-17

3653

Media+2DS

Media- 2DS

1 6 11 16 21 26 31 36

0

50

100

150

200

250

300

350

MFI

ant

i-PPA

R

a

1796

750

2841

227

3364

Media+2DS

Media

Media- 2DS

MFI

anti-

PPAR

a Ly

130

140

150

160

170

180

190

200

210

DA NU

AHC HTA

P=009

Tabel XXXII Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn PMN

Lot SM Lot Non-SM

N 26 31

Media 26273 26480

SD 6915 7088

Mediana 25900 25500

Minimum 17200 16300

Maximum 39500 41900

Percentila 25 19800 19600

Percentila 75 30500 31500

Icircn cele două loturi distribuţia frecvenţei valorilor nivelului relativ de expresie a

receptorilor PPARα icircn PMN a fost reprezentată sub formă de histograme (fig 525)

Figura 525 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti-PPARα icircn PMN

Pentru cei 26 de pacienţi din lotul cu SM a valoarea medie a nivelului de expresie

relativă a receptorilor PPARα icircn PMN a fost de 26273 plusmn 6915 Studiind diagrama Shewhart

din figura 526 se observă că toate valorile obţinute pentru nivelul de expresie relativă

PPARα icircn PMN investigate se icircncadrează icircntre limitele definite de valorile medii plusmn 2DS

Figura 526 Lot SM

Variaţia expresiei relative a PPARα icircn

PMN

Număr pacienţi 26

Minimum 17200

Maximum 39500

Media 26273

Deviaţia Standard 6915

Valorile MFI icircncadrate icircn Media plusmn 2DS

Pentru lotul martor valoarea medie calculată a MFI a anticorpilor anti-PPARα a fost de

26480 plusmn 7088 peste 95 din valorile MFI fiind cuprinse icircn Media plusmn 2DS (figura 527)

Figura 527 Lot Non-SM Variaţia expresiei

relative a PPARα icircn PMN

Număr pacienţi 31

Minimum 16300

Maximum 41900

Media 26480

Deviaţia Standard 7088

30 valoriicircn Media plusmn 2DS

Pentru PMN analiza statistica nu a arătat existenţa unei diferenţe statistic semnificative icircntre

nivelul de expresie relativă a PPARα la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii din lotul

Non-SM (t- Test P= 090) Studiind populaţiile de PMN la subiecţii care au prezentat AHC

de HTA nu am calculat o diferenţă statistic semnificativă icircntre expresia receptorilor PPARα

la subiecţii cu istoric familial de hipertensiune arterială comparativ cu cei pentru care nu s-au

notat AHC de HTA (t- Test P= 013)De asemenea am identificat diferenţe icircntre nivelul de

expresie al PPARα icircn PMN subiecţilor care prezentau AHC de dislipidemie comparativ cu

cei fără AHC de dislipidemie (t- Test P= 017)

50 100 150 200 250 300 350 400 450 500

0

5

10

15

20

25

30

35

MFI anti-PPAR a

Frecve

nta rel

ativa (

)

Lot SM

50 100 150 200 250 300 350 400 450 500

0

5

10

15

20

25

30

MFI anti-PPAR a

Frecv

enta

relati

va (

)

Lot Non-SM

1 6 11 16 21 26 31

0

50

100

150

200

250

300

350

400

450

500

MFI

anti-

PPA

R

a

2627

1244

4010

553

4702

Media + 2DS

Media - 2 DS

Media

1 6 11 16 21 26 31 36

0

50

100

150

200

250

300

350

400

450

500

MFI

anti-

PPAR

a

2648

1230

4066

522

4774

Media+ 2DS

Media - 2DS

Media

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile Tabel XXXIV Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn Eo

Lot SM Lot Non-SM

N 26 31

Mediaplusmn SD 141057 plusmn 47604 172209 plusmn 37565

Mediana 142450 171300

Minimum 35000 68500

Maximum 233700 250600

Percentila 25 119300 153225

Percentila 75 169700 199550

Am studiat nivelul relativ de expresie a receptorilor PPARα icircn Eo iar rezultatele au

fost figurate sub forma de histograme (figura 532)

Figura 532 Distribuţia frecventelor relative ale valorilor MFI anti- PPARα icircn Eo

Din diagrama Shewhart (figura 533) se observă că toate valorile determinate pentru

nivelul de expresie relativă a PPARα icircn Eo pentru lotul SM s-au icircncadrat icircn [Media plusmn 3 DS]

peste 90 din determinări fiind cuprinse icircn [Media plusmn 2 DS] iar icircn [Media plusmn 1 DS] sunt

incluse peste 65 din valorile MFI

Figura 533 Lot SM

Variaţia expresiei relative a PPARα icircn Eo

Număr pacienţi 26

Minimum 35000

Maximum 233700

Media 141057

Deviaţia Standard 47604

24 valori icircncadrat eicircn [Media plusmn 2DS]

Pentru subiecţii incluşi icircn lotul martor analiza diagramei (figura 534) a arătat că

toate cele 31 de valori ale MFI pentru PPARα icircn Eo se icircncadrează icircn [Media plusmn 3DS] iar 30

dintre acestea se icircncadrează icircn [ Media plusmn 2 DS]

Figura 534 Lot Non -SM

Variaţia expresiei relative a PPARα icircn Eo

Număr pacienţi 31

Minimum 685

Maximum 2506

Media 172209

Deviaţia Standard 375 65

30 valori icircncadrate icircn [Media plusmn 2DS]

Comparacircnd subiecţii cu SM cu cei din lotul martor am observat o scădere

semnificativă statistic a MFI a Ac anti - PPARα icircn Eo pentru pacienţiir cu SM ( figura 535)

PPARα Eo Lot Non-SM

Număr 31

Mediana 171300

Percentila 25 152325

Percentila 75 199550

PPARα Eo Lot SM

Număr 26

Mediana 142450

Percentila 25 119300

Percentila 75 169700

Figura 5 35 Comparaţie icircntre nivelul de expresie a PPARα icircn Eo

0 500 1000 1500 2000 2500 3000

0

10

20

30

40

50

MFI anti-PPAR a

Frecvent

a relativa

()

Lot SM

400 800 1200 1600 2000 2400 2800

0

5

10

15

20

25

30

35

40

45

MFI anti-PPAR a

Frecenta

relativa

()

Lot Non-SM

1 6 11 16 21 26 31

-500

0

500

1000

1500

2000

2500

3000

MFI a

nti-PP

AR

a

14106

4765

23447

94

28117

Media + 2DS

Media- 2DS

LCI

LCS

1 6 11 16 21 26 31 36

500

1000

1500

2000

2500

3000

MFI an

ti-PPA

R a

17221

9708

24734

5951

28490

LCI

Media-2DS

Media

Media +2 DS

LCS

1200

1300

1400

1500

1600

1700

1800

1900

Lot SM Lot Non-SM

P=00072

Cu ajutorul curbei ROC am evaluat posibilitatea utilizării MFI a Ac anti - PPARα icircn

Eo ca marker pentru diagnosticul SM Valoarea MFI a Ac anti - PPARα icircn Eo care prezice cu

cea mai mare acurateţe prezenţa SM a fost de 1533 (punctul de ldquocut-offrdquo) pentru care am

calculat o sensibilitate de 5652 şi o specificitate de 7778 Calculul ariei AUC a furnizat

valoarea de 0663 şi deci determinarea parametrului MFI anti- PPARα icircn Eo are valoarea

unui test cu acurateţe redusatilde icircn diagnosticul SM Studiind expresia PPARα icircn Eo la subiecţii

care au prezentat AHC de HTA am observat o scădere semnificativă statistic (P = 00023) a

expresiei PPARα la subiecţii cu istoric familial de HTA comparativ cu subiecţii fatilderatilde AHC de

HTA (figura 537)

AHC HTA

Număr 22

Mediana 148800

Percentila 25 116425

Percentila 75 170750

AHC HTA absente

Număr 35

Mediana 170850

Percentila 25 143700

Percentila 75 195000

Figura 537 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Eo funcţie de AHC de HTA

Studiind subiecţii cu AHC declarate de dislipidemie nu am identificat diferenţe icircntre

nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Eo subiecţilor cu AHC de dislipidemie

comparativ cu cei care nu au declarat prezenţa AHC de dislipidemie (t - Test P = 067)

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor CD36

Am studiat expresia receptorilor CD36 icircn Mo subiecţilor incluşi icircn studiu

Lot Non - SM

BLot SM

Figura 539 Analiza flowcitometrica pentru receptorii CD36 icircn Mo

Pentru toţi participanţii la studiu valorile MFI au variat icircn intervalul [817 6933] iar

valoarea medie a MFI a Ac anti-CD36 a fost de 397133 plusmn 120902 Tabel XXXVII Statistică descriptivă pentru a CD36 icircn Mo

Lot SM Lot Non-SM

Media 429034 370377

Deviatia Standard 109051 125514

Mediana 411000 362800

Minimum 266400 81700

Maximum 693300 616800

Percentila 25 346200 273750

Percentila 75 469000 453300

Distribuţia frecvenţelor relative a MFI au fost prezentate sub formă histogramelor

Figura 541 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti - CD36 icircn Mo

MFI

ant

i-PPA

R a Eo

1000

1100

1200

1300

1400

1500

1600

1700

1800

1900

DA NU

AHC HTA

P=00023

1000 2000 3000 4000 5000 6000 7000 8000

0

5

10

15

20

25

MFI anti-CD36

Frecve

nta rela

tiva (

)

Lot SM

0 1778 3556 5333 7111

0

5

10

15

20

25

30

35

MFI anti-CD36

Frecve

nta rel

ativa (

)

Lot Non - SM

Referitor la lotul SM 92 din valorile MFI a Ac anti- CD36 s-au icircncadrat icircn

intervalul Media plusmn 2 DS (figura 542) iar pentru lotul martor peste 90 dintre acestea icircn

Media plusmn 2 DS (figura 543)

Figura 542 Lot SM

Variaţia MFI anti-CD36 icircn Mo

Număr pacienţi 26

Minimum 2664

Maximum 6933

Media 429034

Deviaţia Standard 109051

Figura 543 Lot Non -SM

Variaţia MFI anti- CD36 icircn Mo

Număr 31

Minimum 81700

Maximum 616800

Media 370377

Deviaţia Standard 125514

Comparacircnd subiecţii cu SM cu cei din lotul normal am constatat o tendinţă de creştere

a expresiei CD36 icircn lotul cu SM((t - Test P= 0067)

MFI anti - CD36 Lot Non-SM

Număr 31

Mediana 3628

Percentila 25 2737

Percentila 75 4533

MFI anti - CD36 Lot SM

Număr 26

Mediana 4110

Percentila 25 3462

Percentila 75 4690

Figura 544 Comparaţie icircntre cel două loturi privind MFI anti - CD36 icircn Mo

Referindu-ne la subiecţii cu AHC de HTA am observat o tendinţă de creştere a

valorilor MFI anti-CD36 comparativ cu cei care nu au avut AHC de HTA (t - Test P = 0 08)

AHC HTA

Număr 22

Mediana 442800

Percentila 25 355275

Percentila 75 519475

AHC HTA absenţe

Număr 35

Mediana 377400

Percentila 25 316900

Percentila 75 443400

Figura 545 Comparaţie icircntre expresia CD36 icircn Mo funcţie de AHC de HTA

Nu s-au calculat diferenţe semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor

PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de dislipidemie atunci cacircnd aceştia au fost comparaţi cu

subiecţii fără AHC de dislipidemie (t - Test P=031)

Corelaţii icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα si CD36

Studiind valorile intensităţii medii de fluorescenţă a Ac anti-PPARα icircn Mo Ly şi

PMN am observat că nivelul de expresie celularatilde a PPARα icircn Mo Ly şi PMN sunt corelate

puternic pozitiv atacirct icircn lotul SM cacirct şi icircn lotul martor(fig547 548)

1 6 11 16 21 26 31

0

1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

8000

Pacienti

MFI a

nti-CD

36

42903

21093

64714

10188

75619

LCI

Media

LCS1 6 11 16 21 26 31 36

-1000

0

1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

8000

MFI a

nti- C

D36

37038

11935

62141

-616

74692Media + 2 DS

Media

Media - 2 DS

3200

3400

3600

3800

4000

4200

4400

4600

4800

Lot SM Lot Non-SM

P = 00676

MFI

anti-

CD36

3400

3600

3800

4000

4200

4400

4600

4800

5000

DA NU

AHC HTA

P = 008

Figura 547 Studiul relatiilor dintre

receptorii PPARα icircn SM A Mo vs PMN B Mo vs Ly

C PMN vs Ly Graficul ilustrează coeficienţii r P dreapta de

regresie (linia centrala) intervalul de icircncredere

95 şi intervalul de predicţie 95

Figura 548 Corelaţii icircntre receptorii PPARα icircn lotul

martor

A Mo vs PMN

B Mo vs Ly

C PMN vs Ly

Tot pentru lotul SM cacircnd am evaluat relaţia dintre nivelul de expresie relativă a

receptorilor PPARα icircn Eo şi nivelul de expresie relativa a receptorilor CD 36 am obţinut o

corelaţie negativă (r = - 05 P = 001) (fig 549 A)

50 100 150 200 250 300 350 50

100

150

200

250

300

350

400

450

500

PPARα Ly

PPARα PMN

y = 56641 + 1159 x r = 086 P lt 0001

C

50 100 150 200 250 300 350 400 0

50

100

150

200

250

300

350

PPARα Mo

PPARα Ly

y = 36665 + 0607 x r = 090 P lt 0001

B

150 200 250 300 350 400 450 0

50 100 150 200 250 300 350 400 450 500

PPARα PMN

PPARα Mo

y = 2505 + 0879 x r = 081 P lt 0001

A

50 100 150 200 250 300 350

50 100 150 200 250 300 350 400 450 500

PPARα Ly

PPARα PMN

y = 95668 + 0919 x r = 081 P lt 0001

C

100 150 200 250 300 350 400

0

50

100

150

200

250

300

350

400

PPARα Mo

PPARα Ly

y = -7503 + 0829 x r = 079 P lt 0001

B

100 150 200 250 300 350 400

50

100

150

200

250

300

350

400

450

500

PPARα Mo

PPARα PMN

y = 61384 + 0882 r = 074 P lt 0001

A

Figura 549 Corelaţii icircntre expresia PPARα icircn Eo şi alte tipuri de receptori investigaţi A PPARα Eo şi CD 36 (Lot SM) B PPARα Eo şi PPARα Mo( Lot Non-SM)

Icircn lotul martor am identificat o asociere moderată pozitivă (r = 038 P = 0033) icircntre

nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Eo şi Mo (figura 549B) corelaţie absentă icircn

lotul pacienţilor cu SM

Corelaţii dintre receptorii studiaţi şi componentele sindromului metabolic

Icircn lotul de control analiza statistică a relevat faptul că icircntre circumferinţa

abdominală (CA ) şi nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Mo Ly şi PMN există o

corelaţie inversă adică scăderea expresiei PPARα la nivelul acestor populatii celulare ar fi

icircnsoţită de creşterea CA (figura 550

Figura 550Corelaţii dintre receptorii

PPARα si CA A Mo B Ly C PMN

La pacienţii cu SM am notat o corelatie moderată negativă statistic semnificativă

icircntre TG şi valorile MFI a Ac anti- PPARα icircn Mo şi Ly( fig 551)

150 200 250 300 350 400 450 50

60

70

80

90

100

110

PPARα PMN

CA r = - 040 P = 0024

C

50 100 150 200 250 300 350 50

60

70

80

90

100

110

PPARα Ly

CA r = - 046 P = 0009

B

50 100 150 200 250 300 350 400 50

60

70

80

90

100

110

PPARα Mo

CA r = - 042 P = 0017

A

50 100 150 200 250 300 350 400 500

1000

1500

2000

2500

3000

PPARα Mo

PPARα Eo

r = 038 P = 0033

B

0 500 1000 1500 2000 2500 1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

8000

PPARα Eo

CD36

r = 050 P = 0010

A

Figura 551 Lot SM Corelaţie icircntre expresia PPARα şi TG (A Mo B Ly)

Analizand corelatia dintre receptorii CD36 si valorile TA la pacientii cu SM am observat

o asociere pozitivă asteptată intre TAD si nivelul de expresie al receptorilor CD36 (fig 552)

Figura 552 Lot SM Corelaţii icircntre expresia

receptorilor CD36 şi valorile tensiunii arteriale

diastolice

Studiind corelaţiile dintre receptorii PPARα şi HDL-col la subiecţii din lotul martor am

notat o asociere pozitivă icircntre expresia PPARα icircn Mo şi Ly cu HDL-col (fig 553)

Figura 553 Lot martor Corelaţii icircntre HDL-col şi expresia PPARα icircn Mo(A) Ly(B)

Icircn lotul normal am evidenţiat corelaţii pozitive moderate dar semnificative statistic icircntre

CA şi valorile TAS (r = 062 P lt 0001) respectiv TAD (r = 050 P=0004) precum şi icircntre

CA şi glicemia subiecţilor normali (r = 052 P = 0003) Aceste date icircmpreună cu relaţia

invers proporţională identificată icircntre HDL-col şi CA (r = 050 P = 001) susţin validitatea

acestui studiu Icircn lotul subiecţilor cu SM am observat o corelaţie moderat pozitivă icircntre

expresia PPARα icircn populaţiiile de Mo şi Eo şi concentraţia a HDL-col (fig 554)

B

100 150 200 250 300 350 20

30

40

50

60

70

80

90

100

PPARα Ly

HDL-col-(mgdl)

r = 036 P = 0046

A

150 200 250 300 350 400 20

30

40

50

60

70

80

90

100

PPARα Mo

HDL-col-(mgd)l

r = 035 P = 005

70 75 80 85 90 95 100 1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

8000

TAD (mmHg)

CD36

r = 048 P = 0013

B

50 100 150 200 250 300 350 -100

0

100

200

300

400

500

PPARα Ly

TG(mgdl)

r = - 042 P = 003

A

50 100 150 200 250 300 350 400 -100

0

100

200

300

400

500

PPARα Mo

TG ( mgdl) r =- 0 43 P = 0027

Figura 554 Corelaţii icircn SM icircntre HDL-col şi expresia PPARα icircn Mo (A) şi Eo(B)

Corelaţii icircntre nivelul de expresie relativă a PPARα şi markeri ai disfuncţiei

endoteliale şi inflamaţiei cronice

Deşi nu a icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică am reţinut corelaţia invers

proporţională (r = - 0331 P = 006) dintre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα

icircn PMN şi concentraţia serică a Non-HDL-colesterolului

Studiind relaţiile dintre parametri icircn lotul de pacienţi cu SM am observat o corelaţie

moderată invers proporţională icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Eo şi

acidul uric seric (figura 555 A) corelaţie absentă la subiecţii fără SM

Figura 555 Lot SM corelaţia dintre expresia PPARα icircn Eo şi acidul uric (A) respectiv

PPARα şi fibrinogen (B)

Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P=008) am notat pentru

pacienţii cu SM corelaţia invers proporţională dintre expresia PPARα icircn Eo şi concentraţia

serică a fibrinogenului ( figura 555B)

V5 Discuţii

Icircn cadrul lucrării de doctorat am studiat nivelul de expresie relativă a PPARα icircn

leucocitele pacienţilor cu SM comparativ cu cea a subiecţilor normali Expresia PPARα a fost

studiată icircn paralel cu cea a CD36 glicoproteină exprimată pe suprafaţa a numeroase celule

din organismul uman inclusiv pe cea a Mo şi macrofagelor Prin funcţia sa de receptor pentru

particulele oxidate de LDL CD36 cunoscut ca bdquoscavenger receptorrdquo de clasa B sau

bdquotrombospodin receptorrdquo contribuie la dezvoltarea inflamaţiei de la nivel endotelial şi

formarea plăcii de ateroscleroză Referitor la studiul PPARα icircn Eo icircn sindromul metabolic

menţionăm că studiul nostru este primul care arată că nivelul de expresie a proteinei PPARα

icircn Eo măsurat prin citometrie icircn flux este semnificativ mai redus la pacienţii care sunt

diagnosticaţi cu acest sindrom De asemenea icircn lotul cu SM cercetat icircn cadrul studiului

receptorilor PPARα numărul Eo circulante a fost semnificativ mai crescut la pacienţii cu SM

B

0 500 1000 1500 2000 2500 200

250

300

350

400

450

PPARα Eo o

Fibrinogen mgdl

r =- 036 P = 008

0 500 1000 1500 2000 2500 1 2 3 4 5 6 7 8 9

10 11

PPARα Eo_

Acid uric(mgdl) r = 048 P = 0014 A

0 500 1000 1500 2000 2500 10

20

30

40

50

60

70

80

PPARα Eo

HDL(mgdl)

r = 044 P = 0024

B

100 150 200 250 300 350 400 10

20

30

40

50

60

70

80

PPARα Mo

HDL( mgdl)

r = 046 P = 0019

A

(P = 003) Aceste constatări conduc la ipoteza că Eo joacă un rol special icircn mecanismele

patogenice declanşate icircn sindromul metabolic şi că receptorii PPARα sunt importanţi icircn

implicarea Eo icircn obezitate şi insulinorezistenţă Creşterea numărului de Eo circulante este

urmată de eliberarea mediatorilor proinflamatori iar reducerea expresiei PPARα icircn Eo

determină perturbarea mecanismelor de control al inflamaţiei cu exacerbarea cascadei

proinflamatorii Consecutiv se agravează disfuncţia endotelială şi se accelerează progresia

leziunilor de ateroscleroză Extrapolacircnd aceste ipoteze putem spune că asocierea raportată

dintre boala ischemică coronariană şi Eo poate fi şi consecinţa exacerbării cascadei

proinflamatorii de la nivel vascular produsă datorită scăderii expresiei PPARα icircn Eo iar

creşterea numărului de Eo circulante poate reprezenta o adaptare a organismului uman care

icircncearcă să suplinească deficitul de receptori PPARα Analizacircnd curba ROC pentru

intensităţile medii de fluorescenţă determinate pentru anticorpii anti- PPARα icircn Eo am

obţinut pentru acest biomarker o sensibilitate a testului de 565 şi o specificitate de 778

pentru un punct de cut-off de 1533 ( figura 536 ) Deşi aria AUC (Aria under the curve) egală

cu 0663 icircncadrează acest test ca avacircnd o acurateţe redusă observăm că că această valoare

este apropiată de determinările AUC pentru alţi factori (fibrinogen raport de aterogenitate

acid uric non- HDL-colesterol) cunoscuţi ca fiind implicaţi icircn aterogeneză şi inflamaţia

cronică (figura 431) Aceste remarci alături de faptul că icircn studiul receptorilor PPARα icircn

leucocite am inclus subiecţi la primul diagnostic de SM creează premisa integrării

determinării expresiei relative a receptorilor PPARα icircn diagnosticul complex al sindromului

metabolic Putem spune că icircn final studiul expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofilele

circulante se dovedește a fi util icircn diagnosticul precoce la nivel molecular al SM permiţacircnd

identificarea timpurie a unor indivizi cu risc cardiometabolic crescut Astfel intervenţia

precoce asupra subiecţilor cu deficit de PPARα icircn Eo contribuie la managementul eficient al

afecţiunilor degenerative icircn care inflamaţia cronică icircndeplineşte un rol primordial Referitor

la populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările efectuate prin citometrie de flux nu au

arătat existenţa unor diferenţe statistice icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα

la subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali Rezultatele noastre pot fi

consecinţa caracteristicilor loturilor studiate (icircn studiul nostru au fost incluşi subiecţi recrutaţi

la primul diagnostic de SM şi icircn absenţa stimulării receptorilor PPARα cu droguri agoniste

PPARα) dar icircn acelaşi timp pot apare diferenţe datorită metodei utilizate (231 232 233)

Făcacircnd o paralelă cu un studiu publicat icircn 2013 icircn Europa (231) care a arătat creşterea

nivelului de expresie al PPARα icircn Ly şi Mo observăm că deşi numărul de subiecţi a fost

aproximativ egal (57 participanţi icircn studiul nostru 60 icircn studiul DAmore) subiecţii icircn studiul

amintit au fost recrutaţi dintr-o clinică cu profil medical la primul diagnostic de SM icircn timp

ce metoda utilizată a fost PCR (Polymerase Chain Reaction) mult mai fidelă decacirct citometria

icircn flux icircn studiul receptorilor nucleari De asemenea DAmore nu investighează expresia

PPARα icircn Eo şi PMN icircn cercetare fiind incluse doar celulele CD14+ (predominant Mo) şi

CD14- (predominant Ly) Deşi nu am obţinut diferenţe statistic semnificative icircntre cele două

loturi referitoare la nivelul de expresie relativă a PPARα icircn Mo Ly şi PMN am observat

corelaţii puternice semnificative statistic icircntre expresia receptorilor PPARα icircn aceste tipuri

celulare Rezultatele obţinute sugerează existenţa unui mecanism diferit molecular de control

icircn eozinofile care reglează cantitatea de proteină PPARα icircn eozinofile versus alte tipuri de

leucocite (la pacienţii cu SM) şi acest lucru este icircn concordanţă cu cercetările care descriu

expresia PPARα mRNA icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale

bronşice keratinocite) Studiind prin citometrie de flux nivelul de expresie relativă a

receptorului CD36 la nivelul Mo am arătat prezenţa acestuia icircn Mo tuturor subiecţilor

investigaţi Analizacircnd valorile intensităţii medii de fluorescenţă a CD36 icircn loturile studiate

am observat o tendinţă de creştere la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali

confirmacircnd implicarea receptorului CD36 icircn patogeneza acestuia Referitor la expresia

receptorului CD36 rezultatele obţinute sunt icircn consens cu studii anterioare care au arătat

creşterea expresiei CD36 la pacienţii cu SM şi diabet zaharat Astfel pe lacircngă diferenţa icircn

expresia CD36 s-au raportat şi corelaţii inverse icircntre expresia proteinei CD36 şi nivelul

adiponectinei Acelaşi studiu a evidenţiat o corelaţie pozitivă intre expresia CD36 cu expresia

receptorilor PPAR gamma relaţia cu PPARα nefiind investigată

Analiza de subgrup a relaţiilor dintre componentele SM și elementele moleculare

proinflamatorii studiate a relevat prezenţa unor asocieri semnificativ statistice icircntre acestea

Se argumentează astfel că veridicitatea studiului este susţinută de interdependenţele statistice

ale componentelor SM Determinarea coeficientului de corelaţie Icircn studiul nostru nivelul de

expresie relativă a PPARα s-a corelat moderat negativ (figura 550) cu CA a subiecţilor din

lotul normal pentru populaţiile celulare de Mo (r = - 0420 P = 001) Ly (r = - 046 P =

0009) şi PMN (r = - 040 P = 0024) date care sunt icircn concordanţă cu studiile care arată

rolul PPARα icircn furnizarea energiei prin beta-oxidarea acizilor graşi Icircn acelaşi timp icircn lotul

pacienţilor cu SM nu am identificat prezenţa unei asocieri icircntre nivelul de expresie relativă a

PPARα şi valoarea măsurată a CA Asocierea dintre expresia relativă a PPARα cu obezitatea

de tip central completează datele existente referitoare la reglarea homeostaziei energetice

conturacircnd un mecanism de control deficitar al aportului caloric al SM Icircn condiţiile icircn care

rezultatele obţinute prin metoda citometriei icircn flux nu au arătat existenţa unei corelaţii intre

expresia PPARα şi CA la pacienţii cu SM considerăm că ar fi necesar studiul

polimorfismului genei PPARA care ar putea aduce informaţii importante cu privire la

implicarea acestor receptori icircn apariţia obezităţii de tip central Subliniem acest lucru deoarece

obezitatea este o boală plurifactorială icircn care pe lacircngă factorii ereditari sunt implicaţi factori

de mediu psihologici şi sociali (245) Existenţa unei componente genetice a aterosclerozei

este legată şi de prezenţa unor variante ale genei PPARA asociate cu creşterea incidenţei bolii

cardiovasculare (82) şi a SM (249) Icircn studiul nostru am constatat o scădere statistic

semnificativă a nivelului expresiei relative a receptorilor PPARα icircn Eo la subiecţii cu

antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială comparativ cu subiecţii fără istoric

familial de hipertensiune (figura 537) Deşi diferenţele calculate icircntre loturile studiate nu au

icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică la subiecţii care au declarat prezenţa

antecedentelor familiale de hipertensiune arterială remarcăm o tendinţă de scădere a

intensităţii medii de fluorescenţă pentru Ac anti-PPARα la nivelul Mo (figura 515 P = 006

) icircn timp ce expresia relativă a CD36 icircnregistrează o creştere la acesti subiecţi (figura 545 P

= 008) Icircn contextul riscului cardiovascular foarte icircnalt al pacienţilor cu SM amintim şi

existenţa corelaţiei pozitive dintre valorile tensiunii arteriale diastolice şi expresia relativă a

receptorului CD36 (r = 0483 P = 0013) Această constatare este icircn consens cu studiile care

au arătat că forma solubilă circulantă a CD36 este asociată cu factorii de risc cardiovasculari

fiind propusă ca un marker precoce al aterosclerozei Activarea PPARα este asociată cu

modularea metabolismului lipidic iar agoniştii PPARα sunt utilizaţi icircn mod curent pentru

tratamentul dislipidemiei Sub acţiunea agoniştilor PPARα se obţine o icircmbunătăţire a funcţiei

endoteliale şi a parametrilor reologici funcţiile pleiotropice ale agoniştilor PPARα fiind

dovedite icircn trialuri clinice controlate Icircn populaţiile de Mo şi Ly la pacienţii cu SM

cercetarea noastră a evidenţiat o asociere negativă icircntre nivelul de expresie relativă a

receptorilor PPARα şi concentraţia TG serice (figura 551) Astfel scăderea expresiei

receptorilor PPARα este asociată cu creşterea nivelului TG serice contribuind la profilul

lipidic aterogen din SM Icircn conformitate cu literatura de specialitate icircn studiul efectuat prin

metoda citometriei icircn flux am găsit prezenţa asocierii icircntre nivelul de expresie al PPARα şi

HDL-colesterol Corelaţia pozitivă dintre nivelul de expresie relativă PPARα şi concentraţia

HDL-colesterolului a fost observată icircn lotul martor icircn populaţiile de Mo (r = 035 P = 005)

şi Ly ( r = 036 P = 004) (figura 553) susţinacircnd faptul că stimularea receptorilor PPARα

este legată de creşterea nivelului seric al lipoproteinelor cu densitate crescută La pacienţii cu

SM corelaţia dintre expresia PPARα şi HDL-colesterol a fost evidenţiată icircn populaţiile de Mo

(r = 046 P = 0019) şi eozinofile (r = 044 P = 0024) Se desprinde concluzia că icircn

sindromul metabolic scăderea concentraţiei HDL-colesterol este legată de diminuarea

nivelului de expresie relativă a receptorilor nucleari PPARα icircntărind afirmaţiile legate de

rolul acestor receptori icircn progresia bolilor cardiovasculare Studiind reactanţii de fază acută

analiza statistică a relevat o diferenţă semnificativă din punct de vedere statistic icircntre valorile

fibrinogenului la pacienţii cu SM atunci cacircnd au fost comparaţi cu subiecţii fără SM

(Capitolul IV4 P lt0 001 figura 427A) De asemenea icircn Capitolul V dedicat studiul

expresiei relative a receptorilor PPARα studiul valorilor fibrinogenului a arătat creşterea

acestui reactant de faza acută icircn lotul cu SM comparativ cu lotul martor (P lt0 0001) Icircn

studiul nostru am calculat o corelaţie invers proporţionala (r = - -036 fig 555B) icircntre

nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile şi concentraţia serică a

fibrinogenului Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P = 008) am reţinut

această asociere deoarece am demonstrat că nivelul de expresie relativă al receptorilor

PPARα icircn eozinofile este mai scăzut icircn sindromul metabolic iar sindromul metabolic este

caracterizat printr-un status inflamator cronic status caracterizat şi de creşterea concentraţiei

serice a fibrinogenului De asemenea notam ca această corelaţie negativă se află icircn

concordanţă cu studiile care arata că tratamentul cu agonişti PPARα (fibraţi) determina

scăderea nivelului seric al fibrinogenului contribuind la diminuarea inflamaţiei cronice din

sindromul metabolic şi icircn consecinţă amelioracircnd insulinorezistenţa

LIMITE ȘI DIFICULTĂȚI IcircN CERCETARE

Icircn cadrul Tezei de Doctorat am desfăşurat o cercetare care şi-a propus studierea

expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Recrutarea anamneza şi examinarea

clinică a subiecţilor au fost realizate icircn cadrul Cabinetului de Medicină de Familie CMI Popa

Elena din Iaşi iar determinările hematologice şi biochimice s-au efectuat icircn cadrul

Laboratorului Ambulatorului de Specialitate al Spitalului Universitar ldquoSfacircntul Spiridon din

Iaşi Icircn studiul epidemiologic şi al markerilor inflamatori al sindromului metabolic desfăşurat

au fost incluşi un număr de 1530 de participanţi pe baza liberului consimţămacircnt examinaţi icircn

perioada 01012013 - 31122013 Icircn continuare icircn perioada 1012014 - 28022014 pe baza

criteriilor de includere şi excludere icircn cele două loturi de studiu am investigat un număr de 57

de subiecţi prezentaţi la consultaţie icircn această perioadă şi care au icircndeplinit criteriile de

includere icircn cele două loturi (Lot SM şi Lot Control) constituite pentru evaluarea nivelului de

expresie a receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Explorarea nivelului de expresie

relativă a receptorilor PPARα s-a desfăşurat icircn cadrul Laboratorului de Biologie Moleculară

de pe platforma Institutului Regional de Oncologie Datorită resurselor proprii financiare

limitate trebuie să subliniez că aceasta cercetare nu ar fi fost posibilă fără contribuţia unor

cercetători din domeniul medical care m-au sprijinit necondiţionat atacirct icircn elaborarea

protocolului de lucru cacirct şi icircn efectuarea propriu-zisă a studiului Icircn acest sens menţionăm şi

faptul că pentru studiul receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic am utilizat aparatura

Laboratorului de Biologie Moleculară (care deserveşte icircntreaga Regiune a Moldovei) Pe

această cale mulţumesc personalului Laboratorului de Biologie Moleculară pentru ajutorul

acordat icircn desfăşurarea cercetării doctorale icircn condiţiile icircn care se observa creşterea

numărului de pacienţi care se adresează acestei platforme de cercetare Mulţumesc de

asemenea şi Doamnei Doctor Elena Butoi din cadrul Institutului de Biologie şi Patologie

Moleculară ldquoNicolae Simionescurdquo Bucureşti) pentru donaţia anticorpului secundar anti-

FITC Icircn consecinţă pentru recrutarea unui număr mai mare de participanţi ar fi fost necesară

icircn primul racircnd obţinerea unor resurse financiare suplimentare pentru achiziţia de aparatură şi

reactivi Totuşi numărul subiecţilor recrutaţi este apropiat de numărul subiecţilor raportaţi icircn

cadrul unor granturi de cercetare care aveau ca ţinta studiul expresiei receptorilor PPARα

(212 227 228 231) Rezultatele obţinute continua seria lucrărilor care arata importanta

studiului mecanismelor etiopatogenice ale sindromului metabolic patologie care se afla icircntr-o

continuă creştere La pacienţii cu SM pe lacircngă diminuarea nivelului de expresie a receptorilor

PPARα icircn eozinofile ne aşteptam şi la evidenţierea unor modificări icircn expresia PPARα şi icircn

populaţiile de Ly Mo şi PMN Acest fapt poate fi explicat de utilizarea unor celule provenite

de la pacienţi fără afectare cardiovasculară fără diabet zaharat şi necesită continuarea

studiului pe culturi celulare icircn condiţii de stimulare cu agonişti PPARα deziderat care

impune continuarea investigării expresiei PPARα printr-un grant de cercetare

ORIGINALITATEA ȘI CONTRIBUȚIILE INOVATIVE ALE TEZEI DE

DOCTORAT PERSPECTIVE DE CERCETARE

Evaluarea nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn leucocitele circulante

aduce noi perspective icircn studiul obezităţii şi sindromului metabolic Importanta studiului

expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic derivă din prevalenta crescută a

sindromului metabolic icircn populaţia cercetată la care se adaugă riscul cardiovascular foarte

icircnalt al acestor pacienţi cu implicaţii majore icircn sănătatea publică Rolul receptorilor PPARα

icircn inflamaţie şi aterogeneza este binecunoscut dar studiul nostru este primul care a arătat că

nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα este semnificativ mai scăzut in populatiile

de eozinofile la pacienţii cu SM Această concluzie coroborata cu existenţa unei stracircnse

asocieri intre expresia receptorilor PPARα la nivelul Mo limfocitelor şi PMNlor creeaza

ipoteza existenţei unui mecanism de control diferit al expresiei PPARα la nivelul

eozinofilelor Această cercetare aduce informaţii importante referitoare la mecanismele

proinflamatorii care stau la baza insulinorezistenţei şi riscului cardiometabolic şi impune

continuarea studiului acestor receptori nucleari prin citometrie icircn flux metodă care poate fi

aplicată şi la scara mai largă dacă sunt asigurate resursele materiale necesare cercetării

Cercetarea prin citometrie icircn flux poate fi completată de studiul polimorfismului genei

PPARA şi astfel se pot identifica timpuriu indivizii cu potenţial risc cardiometabolic crescut

Studiul receptorilor PPARα a stabilit conexiuni cu factori proinflamatori şi aterogenetici iar

continuarea cercetării poate aduce şi elemente noi de diagnostic precoce icircn sindromul

metabolic contribuind la icircmbunătăţirea prognosticului acestor pacienţi

CONCLUZII FINALE

1 Aplicarea scorului de SM alături de implementarea algoritmului electronic de diagnostic

contribuie la o prelucrare rapidă eficientă și standardizată a informaţiilor la nivelul

medicinei primare

2 Prevalenţa SM calculată astfel icircn cadrul studiului este crescută (2732) icircn concordanţă

cu datele raportate

3 Controlul factorilor de risc cardiometabolici incluşi icircn SM se poate realiza prin

managementul stilului de viaţă (scăderea greutăţii corporale prin combaterea

sedentarismului şi adoptarea unei diete antiaterogene şi hipocalorice) şi administrarea

terapiei medicamentoase

4 Este necesară adoptarea unei politici de sănătate publică pentru prevenirea creşterii icircn

populaţie a prevalenţei obezităţii şi a diabetului zaharat

5 Noi metode de cercetare icircn domeniul SM axate pe diagnosticarea precoce şi cuantificarea

eficientă a acestuia duce la diminuarea incidenței evenimentelor cardiovasculare majore

6 Sindromul metabolic se caracterizează printr-un status inflamator cronic

7 Valorile Non-HDL-colesterolului şi a raportului de aterogenitate sunt semnificativ mai

mari la pacienţii cu SM

8 Dintre reactanţii de faza acută am observat că valoarea medie a fibrinogenului este mai

crescută icircn lotul cu SM

9 Valorile eozinofilelor sunt crescute icircn sindromul metabolic iar explorarea relaţiei dintre

eozinofile şi obezitate constituie una din direcţiile de studiu actuale ale sindromului

metabolic

10 Evaluarea markerilor inflamatori icircn contextul sindromului metabolic este utilă icircn

evaluarea complexă a a factorilor de risc cardiometabolici

11 Prin metoda citometriei icircn flux am demonstrat prezenta Receptorilor Activaţi de

Inductorii Proliferării Peroxizomilor ndash Alpha (PPARα) icircn toate populaţiile de leucocite

studiate (Mo limfocite PMN eozinofile) atacirct icircn lotul pacienţilor cu SM cacirct şi icircn lotul

martor

12 Utilizacircnd intensitatea medie de fluorescenţă a anticorpilor anti- PPARα am arătat că

nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile este semnificativ mai redus

la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali

13 Acest studiu este primul care a demonstrat existenţa unei scăderi statistic semnificative a

nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofilele pacienţilor cu SM

confirmacircnd cercetările recente care au evidenţiat rolul eozinofilelor şi al receptorilor

PPARα icircn obezitate reglarea inflamaţiei cronice şi aterogeneza

14 Contrar aşteptărilor noastre icircn populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările

efectuate icircn cele două loturi de studiu (cu şi fără sindom metabolic) nu am evidenţiat

diferenţe statistic seminificative icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα la

subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali

15 Icircn populaţiile de Mo limfocite şi polimorfonucleare am observat corelaţii puternice

semnificativ statistic icircntre expresia PPARα icircn aceste tipuri celulare sugeracircnd existenţa

unui mecanism unic de control al inflamaţiei cronice la nivelul acestor celule probabil

diferit de cel din eozinofile

16 La subiecţii cu SM expresia relativă a PPARα icircn Eo este invers asociată cu expresia

receptorului CD36 (receptor al particulelor de ox - LDL şi propus ca un marker precoce al

aterosclerozei) dovedind rolul antiinflamator al receptorilor PPARα la nivel endotelial

17 La pacienţii cu antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială nivelul de

expresie al receptorilor PPARα icircn eozinofile şi Mo este diminuat comparativ cu subiecţii

fără antecedente familiale de hipertensiune arterială Putem spune că studiul efectuat de

noi aduce informaţii importante legate de geneză aterosclerozei şi hipertensiunii arteriale

18 Prin studiul asocierilor dintre receptorii PPARα şi componentele clinice ale sindromului

metabolic am arătat rolul acestor receptori icircn determinismul obezităţii de tip central

nivelul expresiei relative a receptorilor PPARα fiind invers proporţional cu circumferinţa

abdominală

19 Icircn acelaşi timp nivelul de expresie a PPARα icircn sindromul metabolic este asociat pozitiv

cu concentraţia serică a HDL-colesterolului şi invers asociat cu nivelul trigliceridelor

serice dovedind rolul acestor receptori icircn diminuarea procesului inflamator cronic de la

nivel vascular

20 La pacienţii cu SM scăderea expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofile este corelată cu

creşterea unor markeri ai sindromului inflamator cronic cardiometabolic (acid uric

fibrinogen) ilustracircnd importanta receptorilor icircn reglarea status-ului inflamator cronic din

sindromul metabolic

21 Utilizarea metodei flowcitometrice pentru studiul expresiei relative a receptorilor PPARα

icircn leucocite a adus informaţii importante cu privire la mecanismele moleculare de control

implicate icircn patogenia bolilor cardiometabolice icircn concordanţă cu cercetările care descriu

expresia PPAR icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale bronşice

keratinocite)

BIBLIOGRAFIE SELECTIVA

1 Kahn R Metabolic syndrome- what is the clinical usefulness Lancet 2008371(9628)1892-3

2 Reaven GM The metabolic syndrome is this diagnosis necessary Am J Clin Nutr 2006 83(6)1237-7

3 Grundy SM Pre-Diabetes Metabolic Syndrome and Cardiovascular Risk J Am Coll Cardiol 201259(7)

635-43

4 International Diabetes Federation IDF Diabetes Atlas 6th edn International Diabetes Federation Belgium

Brussels 20131-155

5 World Health Organization Global Status Report on Noncommunicable Diseases 2010 World Health

Organization Geneva Switzerland 20111-176

6 Coman AE Petrovanu R Sindromul metabolic in practica de ambulator Editura Pim Iaşi 2009 1-103

7 Grundy SM Becker D Clark LT et alThird Report of the National Cholesterol Education Program (NCEP)

Expert Panel on Detection Evaluation and Treatment of High Blood Cholesterol in Adults (Adult

Treatment Panel III) Final Report Circulation 2002106(25)3143-90

8 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J Metabolic syndrome- a new worldwide definition A Consensus Statement

from the International Diabetes Federation Diabet Med 2006 23(5)469-80

9 KG Alberti KG Eckel RH Grundy SM etal International Diabetes Federation task force on epidemiology

and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart Association World Heart

Federation International Atherosclerosis Society International Association for the study of obesity

Harmonizing the metabolic syndrome a joint interim statement of the International Diabetes Federation task

force on epidemiology and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart

Association World Heart Federation International Atherosclerosis society and International Association

for the study of obesity Circulation 2009120(16)1640-5

10 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J IDF Epidemiology Task Force The metabolic syndrome new

worldwide definition Lancet 2005 366 1059 - 62

11 Oleszczyk M Svab I Seifert B et al Primary healthcare in the developing part of Europe changes and

development in the former Eastern Bloc countries that joined the European Union following 2004 Med Sci

Monit 2009(15)78ndash84

12 Jung U J Choi M S Obesity and Its Metabolic Complications The Role of Adipokines and the

Relationship between Obesity Inflammation Insulin Resistance Dyslipidemia and Nonalcoholic Fatty

Liver Disease Int J Mol Sci 2014rsquo15(4) 6184-223

13 Vanden Heuvel JP Peters JM Peroxisome Proliferators In Ramos K (ed) Cellular and Molecular

Toxicology (Second Edition) Volume 2 New York Elsevier Science Inc 2010 145 - 67

14 Yessoufou A Wahli W Multifaceted roles of peroxisome proliferator-activated receptors (PPARs) at the

cellular and whole organism levels Swiss Med Wkl 2010140w13071 doi104414smw201013071

15 Azhar S Peroxisome proliferator-activated receptors metabolic syndrome and cardiovascular disease

Future Cardiology 20106(5)657-91

16 Andries G Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity

Diabetes and Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(Suppl)24-32

17 Zandbergen F Plutzky J PPARalpha in atherosclerosis and inflammation Biochim Biophys Acta

20071771(8)972-82

18 Straus DS Glass CK Anti-inflammatory actions of PPAR ligands new insights on cellular and molecular

mechanisms Trends Immunol 200728(12)551-8

19 Zlei M Zugun- Eloae F Carasevici E Citometrie icircn flux - Bază şi clinică Icircn Hinescu ME (ed) Citometrie icircn

flux - principii şi aplicaţii clinice Bucureşti Editura Viaţa Medicală Romacircnească 20111-128

20 Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity Diabetes and

Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(9)24-32

21 Woerly G Honda K Loyens M et al Peroxisome proliferator-activated receptors alpha and gamma down-

regulate allergic inflammation and eosinophil activation J Exp Med 2003198(3)411-21

22 Salle-Saumont D Brenuchon C Kanda A et al Peroxisome proliferator-activated receptor alpha regulates

skin inflammation and humoral response in atopic dermatitis J Clin Allergy Immunology 2008 21(4)962-8

23 Schote A Turner J Schiltz J et al Nuclear receptors in human immune cells expression and correlations

Mol Immunolog 200744(6)1436-45

24 DAmore S Vacca M Graziano G et al Nuclear receptors expression chart icircn peripheral blood

mononuclear cells identifies patients with Metabolic Syndrome Biochim Biophys Acta

20131832(12)2289-301

25 Uthurralt J Gordish-Dressman H Bradbury M T et al PPARalpha L162V underlies variation in serum

triglycerides and subcutaneous fat volume in young males BMC Med Genet 2007855

26 Hiukka A Leinonen ES Jauhiainen M et al Long-term effects of fenofibrate on VLDL and HDL

subspecies icircn participants with type 2 diabetes mellitus Diabetologia 2007 50(10)2067-75

27 Robins SJ Rubins HB Faas FH et alInsulin resistance and cardiovascular events with low HDL

cholesterol The Veterans Affairs HDL Intervention Trial (VA-HIT) Diabetes Care 2003 26(5)1513-7

28 Devaraj S Siegel D Jialal I Statin Therapy in Metabolic Syndrome and Hypertension Post-JUPITER

What is the Value of CRP Curr Atheroscler Rep 2011 13(1) 31ndash42

29 Imperatore G Riccardi G Iovino C et al Plasma Fibrinogen A New Factor of the Metabolic Syndrome A

population-based study Diabetes Care 19982 1(4)649-54

30 Krysiak R Gdula-Dymek A Bachowski R Okopien B Pleiotropic effects of atorvastatin and fenofibrate

in metabolic syndrome and different types of pre-diabete Diabetes Care 201033(10)2266-70

31 Hermans MP Impact of Fenofibrate on Type 2 Diabetes Patients with Features of the Metabolic Syndrome

Subgroup Analysis From FIELD Curr Cardiol Rev 20106(2)112-8

32 Silverstein R Inflammation atherosclerosis and arterial thrombosis Role of the scavenger receptor CD36

Cleveland Clinic Journal of Medicine 200976(Suppl 2)S27-S30

33 Hăncu N Obezitatea In Vereşiu IA (ed) Diabetul zaharat nutritia si bolile metabolice Volume 2 Editura

Echinox Cluj- Napoca 2010 1-15

Lista lucrări publicate

1 Elena Popa Maria Maidaniuc Agnes Bacusca Alamir Diaa Rodica Petrovanu Adorata Elena

Coman Disfuncţia endotelială ndash de la mecanisme moleculare la cuantifi care şi tratament icircn practica

medicală Practica Medicală 20149(3) 109-14

2 Elena Popa Agnes Bacusca Alamir Diaa Maria Maidaniuc Rodica Petrovanu Adorata Elena Coman

The function of insulin receptor (IRF) in evolution of obesity correlation with adipocytes diameters

Archives of the Balkan Medical Union 201449(3) 275-9

3 Elena Popa Florin Zugun-Eloae Mihaela Zlei Daniela Jitaru Oana Maria Pintilie Adorata Elena

Coman Maria Traian Didona Anca Ungureanu Eugen Carasevici - acceptata pentru numarul 42014

Flow cytometry analysis of PPAR-alpha receptors in metabolic syndrome) Revista Romană de

Medicină de Laborator(RRLM-D-14-00034R1- adeverinţa ataşată

Page 7: REZUMAT TEZĂ DE DOCTORAT - umfiasi.ro Doctorat/rezumat... · universitatea de medicinĂ Şi farmacie “grigore t. popa” iaŞi facultatea de medicinĂ rezumat tezĂ de doctorat

mai mică de 005 a fost considerată semnificativ statistic

Rezultate Analiza lotului de studiu s-a efectuat icircn funcţie de mediul de provenienţă sex vacircrstă şi

vacircrsta medie Caracteristicile clinice şi biochimice ale lotului studiat sunt reprezentate icircn

tabelul VIII

Tabel VIII Caracteristicile lotului studiat Media 95 CI SD Minimum Maximum

Vacircrsta (ani) 4751 4661 - 4841 1798 1800 9100

CA (cm) 8830 8764 - 8896 1316 5600 13400

IMC (kgm2) 2603 2578 - 2628 497 1900 4500

TAD (mmHg) 7529 74883 - 7571 827 6000 11500

TAS (mmHg) 11730 11650 - 11810 1590 9000 19000

Glicemie (mgdl) 9435 9328 - 9542 2138 7200 40000

HDL- col(mgdl) 4498 4427 - 4570 1422 2100 9200

TG(mgdl) 12269 11887 - 12651 7157 4800 87900

Determinarea scorului SM

Am aplicat criteriile de diagnostic şi am calculat scorul de SM pentru fiecare subiect (0-

absenţa criteriului 2- prezenţa criteriului) (fig44)

Figura 44 Frecvenţa scorului SM icircn

populaţia studiată conform criteriilor

SM Harmonised (A) IDF (B) ATP III

(C) Se observă că distribuţia scorurilor

SM conform criteriilor de diagnostic este

identică icircn cazul aplicării criteriilor

Harmonized I şi IDF

Scorul de SM a avut valori pare

cuprinse icircntre intervalul 0 - 10 pacienţii

cu SM avacircnd un scor mai mare sau egal

cu 6

Icircn lotul studiat am analizat prezenţa simultană a criteriilor Harmonised I de diagnostic şi

am constatat prezenţa SM la 389 subiecţi (204 femei şi 185 bărbaţi) reprezentacircnd 2542

(95CI 2296-2808) din totalul populaţiei studiate Raportul prevalenţelor specifice pe sexe

bărbaţifemei a fost de 103 (95 CI084 -126)Icircn concordanţă cu criteriile IDF am

identificat un număr de 325 pacienţi cu SM (175 femei şi 150 bărbaţi) iar prevalenţa SM icircn

populaţia studiată conform IDF a fost de 2124 (95 CI 1899ndash 2368) Raportul

prevalenţelor specifice la bărbaţi versus femei a fost de 0977 (95 CI 078 ndash122) Utilizacircnd

definiţia ATP III au fost identificaţi un număr de 229 subiecţi cu SM Prevalenţa SM a fost

C

0

100

200

300

400

500

600

700

Scor SM ATP III

Număr pacienţi

0 2 4 6 8 10

ATP III SM5 SM4 SM3 non SM

B

0 50

100 150 200 250 300 350 400 450

Scor SM IDF

Număr pacienţi

0 2 4 6 8 10

IDF SM5 SM4 SM3 non SM

A

0

50

100

150

200

250

300

350

400

450

Scor SM Harmonised I

Număr pacienţi

0 2 4 6 8 10

HARMONIZED I SM5 SM4 SM3 non SM

de 1497 (95CI 1309 ndash 1704) icircn populaţia studiată Au fost calculate prevalenţele pe

sexe şi au fost găsite valorile de 1343 (95CI 010 ndash 164) la bărbaţi respectiv 1632

(95 CI 1366 ndash 1934) la femei raportul dintre acestea fiind de 082 (95CI 062 ndash 107)

Pentru fiecare asociere dintre componentele SM diagnosticat conform criteriilor

Harmonised I am calculat prevalenţele icircn cadrul SM(tabel XVI)

Tabel XVI Prevalenţa asocierilor dintre componentele SM Număr

pacienţi

Ponderea icircn cadrul

pacienţilor cu SM

(95 CI)

Prevalenţa icircn

populaţia studiată

(95 CI)

SM cu trei componente (SM3)

241 6195 (5438ndash7029) 1575 (1383-

1787)

Obezitate centrală + hipertensiune arterială +

hipertrigliceridemie

45 1154 (844ndash1548) 294 (214-393)

Obezitate centrală + hipertensiune arterială + hipo-

HDLcolesterolemie

38 979 (691ndash1340) 248 (175-340)

Obezitate centrală + hipertrigliceridemie +

hipoHDL-colesterolemie

34

874 (605ndash1221) 222 (153-310)

Obezitate centrală + modificări ale metabolismului

glucidic + hipertensiune arterială

31 796 (541ndash1131) 202 (137-287)

Hipertensiune arterială + hiper-trigliceridemie +

hipoHDL- colesterolemie

26 668 (436 ndash979) 169 (111-249)

Modificări ale metabolismului glucidic +

hipertensiune arterială + hiper-trigliceridemie

21 539 (334-825) 137 (085-209)

Obezitate centrală + modificări ale metabolismului

glucidic + hipertrigliceridemie

15 385 (215-636) 098 (054-116)

Modificări ale metabolismului glucidic

hipertrigliceridemie + hipoHDL-colesterolemie

12 308 (159-538) 078 (040-137)

Modificări ale metabolismului glucidic +

hipertensiune arterială + hipoHDLcolesterolemie

10 257 (123ndash472) 065 (031-120)

Obezitate centrală + modificări ale metabolismului

glucidic + hipo-HDL-col

9 231 (105ndash439) 058 (026-111)

SM cu patru componente (SM4) 104 2674 (2184-239) 679 (555-823)

Obezitate centrală + modificări ale metabolismului

glucidic + hipertensiune arterială + hipoHDL-

colesterolemie

32 822 (562-1116) 209 (143-

295)

Obezitate centrală + hipertensiune arterială +

hipertrigliceridemie + hipoHDL-col

25 642 (415- 948) 163 (105-241)

Obezitate centrală + modificări ale metabolismului

glucidic + hipertri-gliceridemie + hipoHDL-

colesterolemie

12 308 (159-538) 078 (040-137)

Modificări ale metabolismului glucidic +

hipertensiune arterială + hipertri-gliceridemie +

hipoHDL-colesterolemie

6 154 (056- 335) 039 (014-085)

SM cu cinci componente (SM5) 44 1131 (822-1518) 287 (209-386)

Total (SM3 + SM4 + SM5) 389 100 2542(2296-

2808)

Analizacircnd componentele SM la cei 389 pacienţi diagnosticaţi cu SM conform criteriilor

Harmonised I am constatat că obezitatea centrală este cea mai bine reprezentată icircn SM dintre

aceste componente (8072 95CI 7644 - 8452) urmată de HTA (7892 95CI 7453

- 8287) hiperTG (6915 95 CI 6430-7371) hipo-HDL-col (6375 95 CI 5876-

6854) şi hiperglicemie (5681 95 CI5173- 6179)

Standardizarea prevalenţelor funcţie de vacircrstă şi sex Analiza statistică a relevat faptul

că prevalenţa SM creşte cu icircnaintarea icircn vacircrstă Dacă pentru vacircrsta cuprinsă icircntre 35-54 ani

prevalenţa la bărbaţi este semnificativ mai mare comparativ cu femeile (raport calculat B F -

183 P=0003) pentru celelalte grupe de vacircrsta nu s-au observat diferenţe semnificative icircntre

sexul feminin şi cel masculin Am observat că după instalarea menopauzei la femei

prevalenţa SM (corespunzătoare Harmonised I) la femei depăşeşte 50 iar la bărbaţi atinge

42 Utilizacircnd European Standard Population (175) am efectuat standardizarea funcţie de

vacircrstă şi sex a prevalenţelor bdquocruderdquo (brute) obţinute icircn populaţia studiată şi am calculat o

prevalenţă standardizată a SM de 2732 (95 CI 2460-3003) La sexul masculin

prevalenţa standardizată a SM a fost de 2760 (95 CI 2362 - 3157) iar la sexul feminin

am obţinut valoarea de 2854 (95 CI 2462 - 3245)

Discuţii

Studiul desfăşurat de noi a investigat prezenţa SM icircn populaţia unui Cabinet de Medicină

de Familie Icircn Europa prevalenţa SM este de aproximativ 25-30 Statele Unite Ale Americii

au raportat o prevalenţă a sindromului metabolic de 22 icircn populaţia cu vacircrsta peste 20 ani

pe cacircnd la vacircrstă mai mare de 60 ani s-a observat o prevalenţă de 44 (1419) Icircn studiul

efectuat am observat o prevalenţă standardizată de 2732 (95 CI 2460-3003) care este

icircn concordanţă cu prevalenţele raportate icircn Europa precum şi o creştere a ponderii SM icircn

populaţie icircn raport cu vacircrsta Am preferat utilizarea definiţiei Harmonised I pentru SM

deoarece cuprinde criterii adaptate pentru o abordare unitară a SM mărind astfel numărul

pacienţilor diagnosticaţi şi care vor urma tratament conform Ghidurilor de Practică Medicală

Limitările acestui studiu sunt legate de faptul că este concentrat doar pe populaţia asigurată şi

neasigurată aflată pe lista unui medic de familie din mediul urban Se pot efectua studii la

nivelul Cabinetelor Medicale de Medicină de Familie dar trebuie să se aplice pe un lot

reprezentativ urbanrural care să reprezinte populația acelei regiuni Utilizarea structurilor

populaționale atașate cabinetului de MF este utilă atacirct pentru cele clinice cacirct și pentru cele

epidemiologice deoarece surprinde populația studiată icircn mediul de viață cotidian Prevalenţa

mare a SM icircn populaţia studiată necesită aplicarea unei politici eficiente de sănătate publică

deoarece riscul producerii evenimentelor cardiovasculare majore poate fi redus semnificativ

printr-un control adecvat al componentelor SM (obezitate dislipidemii hipertensiune

arterială şi hiperglicemie

Studiul sindromului inflamator cronic icircn cadrul sindromului metabolic

Obiectivele studiului

- studierea markerilor inflamaţiei cronice şi aterogenezei la subiecţii cu şi fără SM

- evaluarea importanţei markerilor studiaţi ai inflamaţiei cronice icircn diagnosticul de

ambulator al sindromului metabolic

Material şi metodă

Icircn cercetarea inflamaţiei cronice din SM au fost incluşi 1530 subiecţi de ambele sexe cu

vacircrsta cuprinsă icircntre 18-91 ani icircnscrişi pe lista CMI Popa Elena Studiul s-a desfăşurat icircn

perioada 01012013ndash 31122013 Populaţia ţintă a fost identică cu cea din studiul

epidemiologic şi s-a desfăşurat concomitent cu studiul prevalentei SM Subiecţii au fost

icircmpărţiţi icircn două loturi lotul cu SM (Lot SM) şi lotul de control (fără SM)

Lot SM a) criterii de includerevacircrsta peste 18 ani recrutarea pe baza semnării

Consimţămacircntului liber informat SM diagnosticat pe baza criteriilor Harmonised I (14) b)

criterii de excluderevacircrstă sub 18 anirefuzul semnării Consimţămacircntului liber informat

femei icircn perioada de graviditate sau de lactaţie

Lot Control (fără SM) a) criterii de includerevacircrsta peste 18 anirecrutarea pe baza

semnării Consimţămacircntului liber informat absenţa sindromului metabolic b) criterii de

excluderevacircrstă sub 18 ani refuzul semnării Consimţămacircntului liber informatfemei icircn

perioada de graviditate sau de lactaţie

Rezultate

Lotul cu SM (Lot SM) a fost format din cei 389 pacienţi diagnosticaţi cu SM conform

criteriilor Harmonised I Lotul SM a fost alcătuit din 185 bărbaţi şi 204 femei raportul

bărbaţifemei fiind de 090 (95 CI073-112) Lotul de control (fără SM) a fost alcătuit

din cei 1141 participanţi care nu au icircntrunit criteriile de diagnostic ale sindromului metabolic

Din cei 1141 de subiecţi 530 au fost de sex masculin iar 611 de sex feminin raportul

bărbaţifemei fiind 087 (95 CI 077-097) Vacircrsta subiecţilor a fost semnificativ mai mare

icircn lotul pacienţilor cu SM (5976plusmn1322 ani) comparativ cu lotul martor (4333plusmn 1748 ani) (t-

Test Plt00001) Aşa cum ne-am aşteptat valorile medii ale componentelor clinice ale SM

(circumferinţa abdominală tensiunea arterială sistolică şi diastolică) au fost mai mari icircn lotul

pacienţilor cu SM (t-Test Plt0001 pentru fiecare dintre componente) Studiind parametrii

biochimici incluşi icircn diagnosticul SM valorile medii ale glicemiei şi TG au fost semnificativ

mai crescute icircn lotul SM (t-Test Plt00001 pentru ambele constante) Icircn acelaşi timp

valoarea medie determinată a HDL-col a fost semnificativ mai mare la subiecţii din lotul

martor ( t-Test Plt00001) SM se caracterizează printr-o dislipidemie aterogenă

caracterizată de creşterea TG scăderea HDL-col concomitent cu creşterea LDL-col creşterea

Non-HDL-col şi a raportului de aterogenitate (Col totalHDL-col) (185) Comparacircnd cele

două loturi am observat că valoarea medie a LDL-colesterolului determinată icircn lotul

pacienţilor cu SM a fost semnificativ mai mare faţă de subiecţii din lotul martor (t-Test P =

00002) Măsurarea Non-HDL-colesterolului a arătat prezenţa unei diferenţe semnificative

icircntre cele două loturi (figura 420 B) Astfel icircn concordanţă cu prezenţa dislipidemiei

aterogene valoarea medie a Non-HDL-col a fost semnificativ mai mare (t-Test Plt 00001) icircn

lotul cu SM comparativ cu lotul de control Icircn contextul inflamației cronice şi aterogenezei

din sindromul metabolic am evaluat sensibilitatea şi specificitatea Non-HDL-colesterolului

ca test diagnostic al SM Valoarea Non-HDL-colesterolului care prezice cu cea mai mare

acurateţe prezenţa SM a fost de 151 mgdl (punctul de ldquocut-offrdquo) pentru care am calculat o

sensibilitate de 64 27 şi o specificitate de 5872 Calculul ariei AUC a furnizat valoarea

de 0605 şi deci determinarea concentraţiei serice a parametrului Non-HDL-colesterolului are

valoarea unui marker cu acurateţe redusă Am studiat valorile raportului Col totalHDL-col icircn

cele două loturi şi am constatat că la pacienţii cu SM valoarea media a raportului de

aterogenitate este semnificativ mai mare faţă de valoarea raportului determinată icircn lotul

martor (t-Test Plt 00001) Pentru raportul de aterogenitate studiat analiza curbei ROC a

arătat că valorile mai mari decacirct punctul de ldquocut-offrdquo de 431 prezic prezenţa SM cu cea mai

mare sensibilitate (6381 ) şi specificitate (6582)Valoarea AUC pentru indicele de

aterogenitate a fost de 0667 şi icircn studiul SM acest indice poate fi considerat un marker cu

acurateţe redusă Valoarea medie determinată a acidului uric la subiecţii fără SM a fost

semnificativ mai mică decacirct icircn lotul SM (t-Test Plt 00001) Curba ROC a arătat că valorile

acidului mai mari de 43 mgdl prezic diagnosticul de SM cu cea mai mare sensibilitate

(8107) şi specificitate (5328) Pentru acidul uric AUC a avut valoarea de 0655 şi

icircncadrează determinarea acidului uric seric icircn racircndul testelor cu acurateţe redusă (187)

Comparacircnd populaţiile de leucocite (tabel XXI) valoarea medie determinată a

numărului de Eo a fost semnificativ mai mare icircn lotul cu SM comparativ cu lotul martor (t-

Test Plt0001) Analizacircnd curba ROC trasată pentru valorile numărului de Eo am observat

că valorile ldquocut-offrdquo mai mari de 200 Eomm3

pot prezice prezenta SM cu cea mai mare

specificitate (7705) şi sensibilitate (3978) Pentru diagnosticul SM calculul ariei AUC a

arătat faptul că determinarea numărului de Eo are valoarea unui test diagnostic cu acurateţe

redusă (AUC = 0 589) Comparacircnd valorile medii ale fibrinogenului am calculat o diferenţă

statistic semnificativă icircntre cele două loturi valoarea medie a fibrinogenului fiind mai mare icircn

lotul SM ((t-Test P lt 00001) Cu ajutorul curbei ROC am observat că valorile fibrinogenului

mai mari de 306 mgdl prezic sindromul metabolic cu o sensibilitate de 7511 şi specificitate

de 6056 Fibrinogenul a fost icircncadrat icircn categoria markerilor inflamatori cu acurateţe

redusă AUC avacircnd valoarea de 0690 Icircn loturile de studiu am calculat AUC corespunzătoare

criteriilor de diagnostic ale SM Am observat că icircn cazul scorului Harmonised I

sensibilitatea şi specificitatea sunt de 100 iar AUC este egală cu 1000 Pentru cele cinci

criterii de diagnostic AUC a avut valori icircntre 0636 (pentru variabila HDL-col) şi 0804

(pentru variabila CA) (figura 431)

AUC ES 95 CI

Scor SM Harmonised I 1000 00000 0997 - 1000

CA (cm) 0804 00133 0781 - 0825

TAD (mmHg) 0666 00169 0639 - 0692

TAS (mmHg) 0757 00148 0732 - 0780

Glicemie (mgdl) 0742 00160 0717 - 0766

Trigliceride (mgdl) 0756 00175 0732 - 0780

HDL- colesterol 0636 00183 0609 - 0662

Figura 431 Analiza AUC criterii de diagnostic ale SM

Studiind figura 432 se observă că valoarea AUC pentru markerii studiaţi este cuprinsă

icircntre 0589 (icircn cazul variabilei Eo) şi 0690 (icircn cazul fibrinogenului) Icircn contextul SM

acurateţea acestor markeri ai inflamaţiei cronice şi disfuncţiei endoteliale poate fi considerată

redusă deoarece AUClt07 pentru toţi markerii investigaţi (figura 431) Totuşi valorile ariilor

parametrilor reprezentaţi icircn figura 431 sunt apropiate de valorile AUC ale variabilelor TAD

şi HDL-col (figura 432) şi deci pot fi utilizaţi pentru completarea diagnosticului de SM

AUC ES 95 CI

Non-HDL-colesterol 0605 00171 0580 - 0630

Col totalHDL-col 0607 00163 0642 - 0691

Acid uric 0655 00161 0630 - 0679

Fibrinogen 0690 00206 0658 - 0720

Eozinofile 0589 00176 0564 - 0615

Figura 432 AUC markeri ai SM inflamaţiei cronice şi aterogenezei

Discuţii

Status-ul proinflamator din SM asociat cu insulinorezistenţa şi disfuncţia endotelială

constituie o verigă de legătură dintre inflamaţie şi procesele metabolice complexe icircnsoţindu-

se de deteriorarea funcţiilor vasculare şi creşterea riscului de evenimente cardiovasculare

majore (2858) Studiul efectuat a arătat o diferenţă icircntre vacircrstele subiecţilor din cele două

loturi vacircrsta pacienţilor cu SM fiind semnificativ mai mare (Plt0001) comparativ cu subiecţii

normali confirmacircnd faptul menţionat că vacircrsta reprezintă unul din stimulii care agravează

inflamaţia cronică Am arătat că valorile fibrinogenului sunt mai mari icircn SM comparativ cu

Scor Harmonised I

0 20 40 60 80 100

0

20

40

60

80

100

100-Specificitate

Sen

sib

ilit

ate

Criterii diagnostic SM

0 20 40 60 80 100

0

20

40

60

80

100

100-Specificitate

Sens

ibili

tate

CA

TAD

TAS

Glicemie

Trigliceride

HDL-C

0 20 40 60 80 100

0

20

40

60

80

100

100-Specificitate

Sensi

bilita

te

Non-HDL-C

Col T HDL-C

Acid uric

Fibrinogen

Eozinofile

lotul martor atacirct la bărbaţi cacirct şi la femei icircn concordanţă cu studiile anterioare Evaluarea

fibrinogenului este importantă nu numai icircn SM pentru definirea contextului proinflamator şi

protrombotic ci şi icircn predicţia cardiovasculară la subiecţii normali Studiind populaţiile

leucocitare am obţinut diferenţe semnificative icircn cazul Eo valoarea medie a acestora fiind

semnificativ mai mare icircn lotul cu SM comparativ cu lotul martor (P lt 0001 figura 425B)

Implicarea Eo icircn SM s-a conturat icircn ultimul deceniu aceste celule fiind implicate icircn recrutarea

macrofagelor din ţesutul adipos Experimental s-a constatat că o creştere a Eo apărută ca

urmare a infectării cu helminţi sau stimulare cu IL-5 este urmată de icircmbunătăţirea toleranţei la

glucoză (199) Controlul pe care icircl exercită Eo asupra activării macrofagelor ar putea fi cheia

intervenţiei asupra obezităţii icircn viitorul apropiat(165199) Hiperuricemia asociata frecvent cu

SM este cunoscut ca un factor independent de risc cardiovascular (192 202) In concordanţă

cu aceasta afirmaţie in studiul nostru am constatat ca nivelul seric al acidului uric a fost mai

crescut in lotul cu SM diferenţa semnificativă din punct de vedere statistic (P lt 00001)

Dislipidemia aterogenă din sindromul metabolic şi diabetul zaharat se caracterizează prin

creşterea trigliceridelor şi a Non-HDL-col scăderea HDL-col creşterea numărului de

particule LDL modificate (185190) La pacienţii cu SM am descris un profil aterogenetic

cu risc crescut de evenimente cardiovasculare majore

STUDIUL RECEPTORILOR ACTIVAŢI DE INDUCTORII PROLIFERĂRII

PEROXIZOMILOR-ALPHA IcircN LEUCOCITELE CIRCULANTE

Ipoteza de lucru

Studii experimentale efectuate au arătat că rolul PPARα icircn ateroscleroză derivă din

implicarea acestor receptori icircn limitarea inflamaţiei Plecacircnd de la acest fundament ne-am

propus evidenţierea receptorilor nucleari activaţi de inductorii proliferării peroxizomilor-

alpha (PPARα) prin citometrie de flux icircn leucocitele din sacircngele periferic alături de

evaluarea acestei metode icircn cuantificarea expresiei relative a PPARα ca test diagnostic

precoce al modificărilor metabolice SM Studiul expresiei relative a receptorilor PPARα a

plecat de la premisa că dacă SM se caracterizează printr-un status inflamator cronic nivelul

de expresie a PPARα icircn leucocitele circulante este mai scăzut la pacienţii cu SM comparativ

cu subiecţii normali Referitor la studiul receptorului CD36 am plecat de la presupunerea că

nivelul de expresie al acestui receptor icircn SM este crescut dat fiind importanţa acestui receptor

icircn inflamaţia aterosclerotică Avacircnd icircn vedere efectele receptorilor amintiţi icircn

insulinorezistenţă şi aterogeneză am considerat necesară evaluarea prezenţei receptorului

nuclear PPARα icircn paralel cu studiul receptorului bdquoscavengerrdquo CD-36 prin metoda citometriei

icircn flux Astfel icircn studiul efectuat mi-am propus şi investigarea existenţei unei legături icircntre

nivelul de expresie al receptorilor PPARα şi cel al receptorului CD-36 De asemenea ne-am

icircndreptat atenţia spre stabilirea unor asocieri icircntre componentele clinice şi biochimice ale

sindromului metabolic şi nivelul intensităţilor de fluorescenţă ale PPARα şi CD-36 ca măsură

a expresiei relative a acestor receptori

Material și metodă

Studiul receptorilor PPARα icircn contextul sindromului metabolic s-a desfăşurat icircn

perioada 1012014 -28022014 pe baza metodologiei studiilor de tip caz-martor Am urmărit

identificarea unor diferenţe icircntre expresia receptorilor PPARα la pacienţii cu SM comparativ

cu subiecţii sănătoşi diferenţe care ar putea fi utile icircn diagnosticul precoce al SMRecrutarea

pacienţilor s-a efectuat din pacienţii prezentaţi pentru consultaţie la Cabinetul Individual

ldquoCMI Dr Popa Elenardquo situat icircn strada Ion Creanga din Iaşi Pentru studiul receptorilor

PPARα icircn sindromul metabolic au fost selecţionaţi un număr de 57 de subiecţi 26 de subiecţi

cu SM (constituind lotul SM) şi 31 subiecţi fără SM constituind lotul de control (Lot Non-

SM) Pentru studiul SM pacienţii au fost recrutaţi din masa de populaţie arondată cabinetului

de MF fără istoric de SM diabet zaharat boală cardio-vasculară aflați la primul diagnostic

de SM evaluarea completă a acestora fiind urmată de includerea icircn programul de

management cardiovascular şi metabolic conform Ghidurilor Terapeutice aflate icircn vigoare

Lot SM a) criterii de includerevacircrsta peste 18 ani recrutarea pe baza semnării

Consimţămacircntului liber informatSM nou-diagnosticat pe baza prezenţei a minim trei criterii

de diagnostic pentru SM conform Harmonised I b) criterii de excluderevacircrstă sub 18 ani

refuzul semnării Consimţămacircntului liber informat femei icircn perioada de graviditate sau de

lactaţie SM anterior diagnosticat istoric de diabet zaharat boală cardiovasculară constituită

tratament cu agonişti PPARα (ie fibraţi etc)

Lot martor (Non-SM) a) criterii de includerevacircrsta peste 18 ani recrutarea pe baza

semnării Consimţămacircntului liber informat absenţa diagnosticului de SM b) criterii de

excludere vacircrstă sub 18 ani refuzul semnării Consimţămacircntului liber informat femei icircn

perioada de graviditate sau de lactaţie

Studiul receptorilor PPARα a inclus două subetape

A Studiul componentelor sindromului metabolic conform criteriilor Harmonised I

Evaluarea clinică a participanţilor s-a desfăşurat icircn cadrul Cabinetului de Medicină de

Familie iar determinările hematologice şi biochimice s-au efectuat icircn Laboratorul

Ambulatorului Clinic de Specialitate al Spitalului Clinic de Urgenţă bdquoSf Spiridonrdquo Iaşi

B Evaluarea icircn citometrie de flux a nivelului relativ de expresie a PPARα şi CD36

Studiul receptorilor PPARα s-a desfăşurat icircn Laboratorul de Biologie Moleculară al

Institutului Regional de Oncologie Iaşi prin metoda citometriei icircn flux (19) Nivelul relativ de

expresie al receptorilor nucleari PPARα a fost determinat icircn diferite tipuri de leucocite

circulante polimorfonucleare (PMN) limfocite (Ly) Mo(Mo) şi eozinofile(Eo) Am utilizat o

metodă de citometrie icircn flux optimizată ldquoin houserdquo elaborată icircn cadrul Laboratorului de

Biologie Moleculară al IRO Iaşi Icircn cursul procesului de optimizare am testat mai multe

concentraţii ale anticorpului anti-PPARα 1100 1500 11500 14500 iar icircn urma

determinărilor efectuate şi a analizei statistice concentraţia 1500 a fost considerată optimă

pentru desfăşurarea studiului (tabel XXIII figura 51)

Tabel XXIII Optimizarea concentraţiilor Ac anti-PPARα Diferenţa

mediilor

valorilor

medii

PMN

Diferenţa

mediilor

mediane-

lor

PMN

Diferenţa

mediilor

valorilor

medii

Ly

Diferenţa

mediilor

mediane-

lor

Ly

Diferenţa

mediilor

valorilor

medii

Mo

Diferenţa

mediilor

mediane-

lor

Mo

Diferenţă 0 1300 1600 100 100 700 750

normal - 1100 650 1050 1050 1350 450 900

patologic 1500 2850 2750 3800 3600 2850 2400

11500 -1050 800 3500 3300 2250 1800

14500 2200 2150 1300 1100 2950 2850

AOptimizare

BRepetabilitate

Figura 51 Optimizarea concentraţiei anticorpului anti-PPARα

Icircn concordanţă cu literatura de specialitate icircn cercetarea efectuată intensitatea medie

de fluorescenţă (MFI) a fost utilizată ca măsură pentru evaluarea expresiei celulare a

receptorilor PPARα (212) Un exemplu de analiză a probelor este reprezentat icircn figura 52

Figura 52 Exemplu de analiză flowcitometrică pentru receptorul nuclear PPARα Graficul din stacircnga reprezintă distribuţia leucocitelor iar cel din dreapta ilustrează distribuţia

intensităţii de fluorescenţă pentru populaţiile de celule selectate

Intensitatea Medie a Fluorescenţei (MFI) a CD36 ca o măsură a nivelului relativ de

expresie a acestor receptori la nivelul membranei Mo a fost detectată printr-o metodă

convenţională pentru marcare de suprafaţă şi evaluare pe bază de citometrie icircn flux folosind

aceleaşi probe de sacircnge cu EDTA cu focalizare pe Mo şi utilizacircnd CD14 ca marker specific

pentru Mo (figura 53)

Figura 53Analiza

flowcitometrică

pentru marcajul

CD14 - CD36

Rezultate

Icircn cele două loturi au fost incluşi icircn studiu un număr de 57 de participanţi care au fost

investigaţi din punct clinic şi paraclinic Vacircrsta subiecţilor incluşi icircn studiu a fost cuprinsă

icircntre 18 şi 79 ani iar vacircrsta medie calculată a avut valoarea de 4805 plusmn 1587 ani Pentru sexul

masculin vacircrsta medie este de 4925plusmn1617 ani iar pentru sexul feminin 4689 plusmn1 5ani

diferenţa obţinută icircntre vacircrstele pacienţilor fiind statistic nesemnificativă (P = 085)

Analizacircnd vacircrstele subiecţilor din cele două loturi am observat că vacircrsta medie a pacienţilor

cu SM (5476 plusmn 1183 ani) a fost semnificativ mai mare (t-test P = 0003) decacirct icircn lotul

martor (4258 plusmn 169 ani) Pentru diagnosticul sindromului metabolic am calculat scorul de

SM bazacircndu-ne pe criteriile Harmonised I Conform criteriilor diagnostice din cei 57 de

subiecţi investigaţi un număr de 26 participanţi (46) au fost incluşi icircn lotul cu SM (Lot

SM) iar 31 de subiecţi(54) nu au prezentat acest sindrom constituind lotul martor (Lot

Non-SM) Din punct de vedere al repartiţiei pe sexe nu au existat diferenţe statistic

semnificative raportul bărbaţifemei fiind de 0961 Din totalul celor 28 de bărbaţi incluşi icircn

studiu 4285 (12 bărbaţi) au icircntrunit cel puţin trei criterii diagnostice pentru SM fiind

incluşi icircn lotul SM Icircn acelaşi timp 14 femei reprezentacircnd 4827 din subiecţii de sex

feminin au icircntrunit condiţiile pentru includerea icircn lotul pacienţilor cu SM Valoarea medie

determinată pentru scorul de SM a arătat prezenţa unor valori semnificativ statistic mai mari

din punct (t-test P lt 00001) icircn lotul SM (769plusmn176) comparativ cu lotul martor (174 plusmn

184) Am studiat comparativ media valorilor măsurate ale criteriilor componentelor SM

Analiza statistică a arătat valori semnificativ statistic mai mari pentru CA TG glicemie TAS

şi TAD (plt0001) icircn lotul SM comparativ cu lotul normal Concomitent calculul statistica

evidenţiat o scăderea semnificativă a HDL-colesterolului icircn lotul cu SM comparativ cu

subiecţii din lotul martor (Non-SM) Aplicacircnd testul z am comparat ponderea pacienţilor

diagnosticaţi cu HTA dislipidemie şi tulburări ale metabolismului glucidic icircn lotul SM versus

lot Non-SM şi am constatat prezenţa acestor afecţiuni icircntr-un procent mai mare semnificativ

statistic icircn lotul SM ((plt0001)

Utilizacircnd testul t Student am calculat diferenţele statistice şi icircntre alți parametri

studiaţi care sunt factori de risc cardio-vascular dar care nu sunt componente ale SM Icircn lotul

cu SM valorile acidului uric fibrinogenului Col total Non-HDL-col şi LDL-col au fost

semnificativ mai mari comparativ cu lotul martor (tabel XXVI) Analizacircnd valorile medii ale

populaţiilor de leucocite am identificat doar pentru populaţia de Eo diferenţe statistice icircntre

cele două loturi numărul Eo icircn lotul SM fiind semnificativ mai mare decacirct icircn lotul martorTot

pentru caracterizarea celor două loturi am analizat prezenţa antecedentelor

heredocolaterale (AHC) de diabet zaharat boala cardiovasculară şi dislipidemie pentru toţi

subiecţii investigaţi Astfel existenţa AHC de HTA a fost declarată de 2580 din subiecţii

incluşi icircn lotul martor respectiv de 5384 din numărul pacienţilor cu SM Antecedentele

heredocolaterale de dislipidemie au fost prezente la 3461 din pacienţii cu SM icircn timp ce icircn

lotul martor anamneza a evidenţiat aceste antecedente la 3548 din subiecţi

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα

Icircn cercetarea desfăşurată am utilizat intensitatea medie de fluorescenţă (MFI) ca

măsură a nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn leucocitele studiate Pentru

populaţiile de leucocite analiza computerizată a probelor luate icircn studiu a furnizat valori

pentru MFI a receptorilor PPARα icircn funcţie de cantitatea de anticorpi anti-PPARα marcaţi cu

fluorocrom care se leagă de aceste celule şi apoi sunt captaţi de citometru (figura 59)

A Lot Non - SM

B Lot SM

Figura 59 Analiza flowcitometrică pentru receptorii PPARα icircn leucocite A lot normal B lot SM

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Mo

Analiza probelor efectuată conform protocolului de lucru descris a arătat prezenţa

PPARα icircn Mo recoltate din sacircngele tuturor subiecţilor incluşi icircn această cercetare Pentru toţi

participanţii investigaţi analiza MFI a Ac anti - PPARα icircn populaţia de Mo (Mo) a arătat un

interval de variaţie icircntre [786 395] Valoarea medie a nivelului de expresie relativă a PPARα

calculată pentru Mo a fost de 23210 plusmn7860 Pentru ambele loturi de studiu pacienţilor cu

SM testul Testul Shapiro-Wilk a arătat distribuţia normală a valorilor obţinute pentru nivelul

de expresie al PPARα icircn Mo

Tabel XXVIII Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn Mo

Lot SM Lot Non-SM

N 26 31

Media 22819 23538

SD 5819 7717

Mediana 22400 22600

Minimum 12800 78600

Maximum 35800 37900

Percentila 25 18300 18300

Percentila 75 26200 30350

Pentru pacienţii din lotul SM valoarea medie a MFI icircn Mo a fost de 22819 plusmn 5880 iar

pentru lotul martor s-a calculat o valoare medie a MFI a Ac anti-PPARα de 23538 plusmn 7717

Distribuţia statistică a frecvenţei valorilor MFI obţinute pentru nivelul de expresie a PPARα

icircn Mo subiecţilor din cele două loturi a fost reprezentată icircn figura 511

Figura 511 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti-PPARα icircn Mo

Sub forma unei diagrame de control Shewhart am reprezentat variaţia intensităţii medii de

fluorescenţă pentru anticorpii anti-PPARα icircn MoVariaţia nivelului de expresie relativă a

receptorilor PPARα icircn Mo subiecţilor studiaţi este ilustrată icircn fig 512 513

Figura 512 Lot SM Variaţia

expresiei relative a PPARα icircn Mo

Număr pacienţi

26

Minim 128

Maxim 358

Media 22819

DS 5819

25 din 26 valori ale MFI s-au icircncadrat

icircn intervalul Media plusmn 2DS

Figura 513 Lot Non-SM Variaţia

expresiei relative a PPARα icircn Mo

Număr pacienţi 31

Minimum 786

Maximum 379

Media 23538

DS 7717

Cu excepţia unei singure

determinări valorile calculate s-au

icircncadrat icircn Media plusmn 2DS

Utilizacircnd testul parametric t-Student pentru variabilele cu distribuţie normală am

comparat valoarea medie a intensităţii de fluorescenţă a Ac anti-PPARα icircn lotul cu SM versus

subiecţi fără SM (Lot Non-SM) Analiza statistică efectuată nu a identificat diferenţe icircntre

50 100 150 200 250 300 350 400 450

0

5

10

15

20

25

30

35

MFI anti-PPAR a

Frecv

enta

relati

va (

)

Lot SM

0 50 100 150 200 250 300 350 400 450 500

0

5

10

15

20

25

30

35

MFI anti-PPAR a

Frecv

enta

relati

va (

)

Lot martor

1 6 11 16 21 26 31

0

50

100

150

200

250

300

350

400

450

MFI

anti-

PPAR

a

2282

1106

3458

518

4046

Media

LCI

LCI

1 6 11 16 21 26 31 36

-100

0

100

200

300

400

500

MFI a

nti-PP

AR

a

2354

810

3897

39

4669LCS

LCI

Media

cele două loturi icircn ceea ce priveşte expresia PPARα la nivelul Mo circulante (t- Test P=

069)

Studiul receptorilor PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de AHC şi dislipidemie

Nivelul de expresie al receptorilor PPARα α icircn Mo tinde să fie mai scăzut la subiecţii

cu AHC de HTA comparativ subiecţii care nu au declarat AHC de HTA (P= 006 fig 515)

AHC HTA

Număr 22

Mediana 19950

Percentila 25 17800

Percentila 75 22700

AHC HTA absente

Număr 35

Mediana 24800

Percentila 25 19025

Percentila 75 31700

Figura 515 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Mo funcţie de AHC de HTA

Nu s-au calculat diferenţe semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor

PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de dislipidemie atunci cacircnd aceştia au fost comparaţi cu

subiecţii fără AHC de tulburări ale metabolismului lipidic (t- Test P= 020)

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn limfocite

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn populaţia de Ly a

demonstrat prezenţa receptorilor PPARα icircn Ly tuturor subiecţilor studiaţi Pentru toţi

participanţii investigaţi analiza MFI a Ac anti - PPARα icircn populaţia de Ly a relevat un

interval de variaţie icircntre [748 314] iar valoarea medie a MFI a fost de 18058 plusmn 5600

Pentru ambele loturi aplicarea testului Shapiro-Wilk a evidenţiat distribuţia normală a

valorilor determinate pentru nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Ly Pentru

pacienţii cu SM valoarea medie a MFI determinată pentru expresia PPARα icircn populaţia de

Ly a fost de 18178 plusmn 61 16 iar pentru lotul martor a fost de 16800 plusmn 5229

Tabel XXX Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn limfocite

Lot SM Lot Non-SM

N 26 31

Media 181781 179574

SD 611694 522907

Mediana 165000 168000

Minimum 81300 74800

Maximum 314000 301000

Percentila 25 13400 - 145750

Percentila 75 21800 21700

Distribuţia frecvenţei valorilor MFI a Ac anti-PPARα icircn Ly este redată icircn figura 518

Figura 518 Distribuţia frecvenţelor relative a MFI a Ac anti-PPARα icircn Ly

94 din determinările efectuate pentru determinarea nivelului de expresie relativă al

MFI

ant

iPPA

R

a_Mo

190

200

210

220

230

240

250

260

270

280

DA NU

AHC HTA

P=006

50 89 128 167 206 244 283 322 361 400

0

5

10

15

20

25

30

35

MFI anti-PPAR a

Frecv

enta

relati

va (

)

Lot SM

0 50 100 150 200 250 300 350

0

5

10

15

20

25

30

35

40

MFI anti-PPAR a

Frec

venta

relat

iva (

)

Lot Non-SM

receptorilor PPARα icircn limfocitele subiecţilor cu SM s-au icircncadrat icircn intervalul Media plusmn 2DS

Figura 5 19 Lot SM Variaţia expresiei

relative a PPARα icircn Ly

Număr pacienţi 26

Minimum 813

Maximum 31400

Media 18178

Deviaţia Standard 6116

25 valori s-au icircncadrat icircn Media plusmn 2DS

Pentru lotul Non-SM diagrama de control (figura 520) a arătat toate valorile

determinate pentru lotul Non-SM se icircncadrează icircntre LCS şi LCI

Figura 520 Lot Non -SM Variaţia

expresiei relative a PPARα icircn Ly

Număr pacienţi 31

Minimum 748

Maximum 30100

Media 179574

Deviaţia Standard 5229

96 din valori icircncadrate icircn Media plusmn 2DS

Aplicarea testului t-Student pentru valorile medii ale intensităţii de fluorescenţă ale

PPARα icircn Ly nu a arătat existenţa unei diferenţe statistic semnificative icircntre lotul cu SM şi

lotul martor(t- Test P= 088)

Analiza receptorilor PPARα icircn Ly subiecţilor cu AHC de HTA şi dislipidemie

Studiind populaţiile de Ly la subiecţii care au prezentat AHC de hipertensiune

arterială analiza flowcitometrică a relevat existenţa unor valori mai mici pentru MFI la aceşti

subiecţi comparativ cu cei fără AHC de HTA (fig 522) deşi scăderea observată nu a

icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică (t- Test P = 009)

AHC HTA

Număr 22

Mediana 16000

Percentila 25 12700

Percentila 75 17100

AHC HTA absenţe

Număr 35

Mediana 18700

Percentila 25 14900

Percentila 75 23175

Figura 522 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Ly funcţie de AHC de HTA

Nu am calculat diferenţe statistic semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor

PPARα icircn populaţiile de Ly ale subiecţilor la care am identificat AHC de dislipidemie

comparativ cu cei care nu au declarat antecedente familiale de dislipidemie (t- Test P= 051)

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn neutrofile (PMN)

Analiza flowcitometrică a evidenţiat prezenţa PPARα icircn PMN recoltate din sacircngele

venos al tuturor participanţilor la studiu Pentru toţi subiecţii investigaţi analiza MFI a Ac -

PPARα icircn populaţia de PMN a relevat un interval de variaţie de [163419] iar valoarea medie

a MFI pentru Ac anti-PPARα a fost de 26392 plusmn 7064 Testul Shapiro-Wilk a arătat o

distribuţie normală a valorilor intensităţii medii de fluorescenţă a anticorpilor anti-PPARα atacirct

icircn lotul pacienţilor cu SM cacirct şi icircn lotul martor

1 6 11 16 21 26 31

-50

0

50

100

150

200

250

300

350

400

MFI

anti-

PPAR

a

1818

595

3041

-17

3653

Media+2DS

Media- 2DS

1 6 11 16 21 26 31 36

0

50

100

150

200

250

300

350

MFI

ant

i-PPA

R

a

1796

750

2841

227

3364

Media+2DS

Media

Media- 2DS

MFI

anti-

PPAR

a Ly

130

140

150

160

170

180

190

200

210

DA NU

AHC HTA

P=009

Tabel XXXII Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn PMN

Lot SM Lot Non-SM

N 26 31

Media 26273 26480

SD 6915 7088

Mediana 25900 25500

Minimum 17200 16300

Maximum 39500 41900

Percentila 25 19800 19600

Percentila 75 30500 31500

Icircn cele două loturi distribuţia frecvenţei valorilor nivelului relativ de expresie a

receptorilor PPARα icircn PMN a fost reprezentată sub formă de histograme (fig 525)

Figura 525 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti-PPARα icircn PMN

Pentru cei 26 de pacienţi din lotul cu SM a valoarea medie a nivelului de expresie

relativă a receptorilor PPARα icircn PMN a fost de 26273 plusmn 6915 Studiind diagrama Shewhart

din figura 526 se observă că toate valorile obţinute pentru nivelul de expresie relativă

PPARα icircn PMN investigate se icircncadrează icircntre limitele definite de valorile medii plusmn 2DS

Figura 526 Lot SM

Variaţia expresiei relative a PPARα icircn

PMN

Număr pacienţi 26

Minimum 17200

Maximum 39500

Media 26273

Deviaţia Standard 6915

Valorile MFI icircncadrate icircn Media plusmn 2DS

Pentru lotul martor valoarea medie calculată a MFI a anticorpilor anti-PPARα a fost de

26480 plusmn 7088 peste 95 din valorile MFI fiind cuprinse icircn Media plusmn 2DS (figura 527)

Figura 527 Lot Non-SM Variaţia expresiei

relative a PPARα icircn PMN

Număr pacienţi 31

Minimum 16300

Maximum 41900

Media 26480

Deviaţia Standard 7088

30 valoriicircn Media plusmn 2DS

Pentru PMN analiza statistica nu a arătat existenţa unei diferenţe statistic semnificative icircntre

nivelul de expresie relativă a PPARα la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii din lotul

Non-SM (t- Test P= 090) Studiind populaţiile de PMN la subiecţii care au prezentat AHC

de HTA nu am calculat o diferenţă statistic semnificativă icircntre expresia receptorilor PPARα

la subiecţii cu istoric familial de hipertensiune arterială comparativ cu cei pentru care nu s-au

notat AHC de HTA (t- Test P= 013)De asemenea am identificat diferenţe icircntre nivelul de

expresie al PPARα icircn PMN subiecţilor care prezentau AHC de dislipidemie comparativ cu

cei fără AHC de dislipidemie (t- Test P= 017)

50 100 150 200 250 300 350 400 450 500

0

5

10

15

20

25

30

35

MFI anti-PPAR a

Frecve

nta rel

ativa (

)

Lot SM

50 100 150 200 250 300 350 400 450 500

0

5

10

15

20

25

30

MFI anti-PPAR a

Frecv

enta

relati

va (

)

Lot Non-SM

1 6 11 16 21 26 31

0

50

100

150

200

250

300

350

400

450

500

MFI

anti-

PPA

R

a

2627

1244

4010

553

4702

Media + 2DS

Media - 2 DS

Media

1 6 11 16 21 26 31 36

0

50

100

150

200

250

300

350

400

450

500

MFI

anti-

PPAR

a

2648

1230

4066

522

4774

Media+ 2DS

Media - 2DS

Media

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile Tabel XXXIV Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn Eo

Lot SM Lot Non-SM

N 26 31

Mediaplusmn SD 141057 plusmn 47604 172209 plusmn 37565

Mediana 142450 171300

Minimum 35000 68500

Maximum 233700 250600

Percentila 25 119300 153225

Percentila 75 169700 199550

Am studiat nivelul relativ de expresie a receptorilor PPARα icircn Eo iar rezultatele au

fost figurate sub forma de histograme (figura 532)

Figura 532 Distribuţia frecventelor relative ale valorilor MFI anti- PPARα icircn Eo

Din diagrama Shewhart (figura 533) se observă că toate valorile determinate pentru

nivelul de expresie relativă a PPARα icircn Eo pentru lotul SM s-au icircncadrat icircn [Media plusmn 3 DS]

peste 90 din determinări fiind cuprinse icircn [Media plusmn 2 DS] iar icircn [Media plusmn 1 DS] sunt

incluse peste 65 din valorile MFI

Figura 533 Lot SM

Variaţia expresiei relative a PPARα icircn Eo

Număr pacienţi 26

Minimum 35000

Maximum 233700

Media 141057

Deviaţia Standard 47604

24 valori icircncadrat eicircn [Media plusmn 2DS]

Pentru subiecţii incluşi icircn lotul martor analiza diagramei (figura 534) a arătat că

toate cele 31 de valori ale MFI pentru PPARα icircn Eo se icircncadrează icircn [Media plusmn 3DS] iar 30

dintre acestea se icircncadrează icircn [ Media plusmn 2 DS]

Figura 534 Lot Non -SM

Variaţia expresiei relative a PPARα icircn Eo

Număr pacienţi 31

Minimum 685

Maximum 2506

Media 172209

Deviaţia Standard 375 65

30 valori icircncadrate icircn [Media plusmn 2DS]

Comparacircnd subiecţii cu SM cu cei din lotul martor am observat o scădere

semnificativă statistic a MFI a Ac anti - PPARα icircn Eo pentru pacienţiir cu SM ( figura 535)

PPARα Eo Lot Non-SM

Număr 31

Mediana 171300

Percentila 25 152325

Percentila 75 199550

PPARα Eo Lot SM

Număr 26

Mediana 142450

Percentila 25 119300

Percentila 75 169700

Figura 5 35 Comparaţie icircntre nivelul de expresie a PPARα icircn Eo

0 500 1000 1500 2000 2500 3000

0

10

20

30

40

50

MFI anti-PPAR a

Frecvent

a relativa

()

Lot SM

400 800 1200 1600 2000 2400 2800

0

5

10

15

20

25

30

35

40

45

MFI anti-PPAR a

Frecenta

relativa

()

Lot Non-SM

1 6 11 16 21 26 31

-500

0

500

1000

1500

2000

2500

3000

MFI a

nti-PP

AR

a

14106

4765

23447

94

28117

Media + 2DS

Media- 2DS

LCI

LCS

1 6 11 16 21 26 31 36

500

1000

1500

2000

2500

3000

MFI an

ti-PPA

R a

17221

9708

24734

5951

28490

LCI

Media-2DS

Media

Media +2 DS

LCS

1200

1300

1400

1500

1600

1700

1800

1900

Lot SM Lot Non-SM

P=00072

Cu ajutorul curbei ROC am evaluat posibilitatea utilizării MFI a Ac anti - PPARα icircn

Eo ca marker pentru diagnosticul SM Valoarea MFI a Ac anti - PPARα icircn Eo care prezice cu

cea mai mare acurateţe prezenţa SM a fost de 1533 (punctul de ldquocut-offrdquo) pentru care am

calculat o sensibilitate de 5652 şi o specificitate de 7778 Calculul ariei AUC a furnizat

valoarea de 0663 şi deci determinarea parametrului MFI anti- PPARα icircn Eo are valoarea

unui test cu acurateţe redusatilde icircn diagnosticul SM Studiind expresia PPARα icircn Eo la subiecţii

care au prezentat AHC de HTA am observat o scădere semnificativă statistic (P = 00023) a

expresiei PPARα la subiecţii cu istoric familial de HTA comparativ cu subiecţii fatilderatilde AHC de

HTA (figura 537)

AHC HTA

Număr 22

Mediana 148800

Percentila 25 116425

Percentila 75 170750

AHC HTA absente

Număr 35

Mediana 170850

Percentila 25 143700

Percentila 75 195000

Figura 537 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Eo funcţie de AHC de HTA

Studiind subiecţii cu AHC declarate de dislipidemie nu am identificat diferenţe icircntre

nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Eo subiecţilor cu AHC de dislipidemie

comparativ cu cei care nu au declarat prezenţa AHC de dislipidemie (t - Test P = 067)

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor CD36

Am studiat expresia receptorilor CD36 icircn Mo subiecţilor incluşi icircn studiu

Lot Non - SM

BLot SM

Figura 539 Analiza flowcitometrica pentru receptorii CD36 icircn Mo

Pentru toţi participanţii la studiu valorile MFI au variat icircn intervalul [817 6933] iar

valoarea medie a MFI a Ac anti-CD36 a fost de 397133 plusmn 120902 Tabel XXXVII Statistică descriptivă pentru a CD36 icircn Mo

Lot SM Lot Non-SM

Media 429034 370377

Deviatia Standard 109051 125514

Mediana 411000 362800

Minimum 266400 81700

Maximum 693300 616800

Percentila 25 346200 273750

Percentila 75 469000 453300

Distribuţia frecvenţelor relative a MFI au fost prezentate sub formă histogramelor

Figura 541 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti - CD36 icircn Mo

MFI

ant

i-PPA

R a Eo

1000

1100

1200

1300

1400

1500

1600

1700

1800

1900

DA NU

AHC HTA

P=00023

1000 2000 3000 4000 5000 6000 7000 8000

0

5

10

15

20

25

MFI anti-CD36

Frecve

nta rela

tiva (

)

Lot SM

0 1778 3556 5333 7111

0

5

10

15

20

25

30

35

MFI anti-CD36

Frecve

nta rel

ativa (

)

Lot Non - SM

Referitor la lotul SM 92 din valorile MFI a Ac anti- CD36 s-au icircncadrat icircn

intervalul Media plusmn 2 DS (figura 542) iar pentru lotul martor peste 90 dintre acestea icircn

Media plusmn 2 DS (figura 543)

Figura 542 Lot SM

Variaţia MFI anti-CD36 icircn Mo

Număr pacienţi 26

Minimum 2664

Maximum 6933

Media 429034

Deviaţia Standard 109051

Figura 543 Lot Non -SM

Variaţia MFI anti- CD36 icircn Mo

Număr 31

Minimum 81700

Maximum 616800

Media 370377

Deviaţia Standard 125514

Comparacircnd subiecţii cu SM cu cei din lotul normal am constatat o tendinţă de creştere

a expresiei CD36 icircn lotul cu SM((t - Test P= 0067)

MFI anti - CD36 Lot Non-SM

Număr 31

Mediana 3628

Percentila 25 2737

Percentila 75 4533

MFI anti - CD36 Lot SM

Număr 26

Mediana 4110

Percentila 25 3462

Percentila 75 4690

Figura 544 Comparaţie icircntre cel două loturi privind MFI anti - CD36 icircn Mo

Referindu-ne la subiecţii cu AHC de HTA am observat o tendinţă de creştere a

valorilor MFI anti-CD36 comparativ cu cei care nu au avut AHC de HTA (t - Test P = 0 08)

AHC HTA

Număr 22

Mediana 442800

Percentila 25 355275

Percentila 75 519475

AHC HTA absenţe

Număr 35

Mediana 377400

Percentila 25 316900

Percentila 75 443400

Figura 545 Comparaţie icircntre expresia CD36 icircn Mo funcţie de AHC de HTA

Nu s-au calculat diferenţe semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor

PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de dislipidemie atunci cacircnd aceştia au fost comparaţi cu

subiecţii fără AHC de dislipidemie (t - Test P=031)

Corelaţii icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα si CD36

Studiind valorile intensităţii medii de fluorescenţă a Ac anti-PPARα icircn Mo Ly şi

PMN am observat că nivelul de expresie celularatilde a PPARα icircn Mo Ly şi PMN sunt corelate

puternic pozitiv atacirct icircn lotul SM cacirct şi icircn lotul martor(fig547 548)

1 6 11 16 21 26 31

0

1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

8000

Pacienti

MFI a

nti-CD

36

42903

21093

64714

10188

75619

LCI

Media

LCS1 6 11 16 21 26 31 36

-1000

0

1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

8000

MFI a

nti- C

D36

37038

11935

62141

-616

74692Media + 2 DS

Media

Media - 2 DS

3200

3400

3600

3800

4000

4200

4400

4600

4800

Lot SM Lot Non-SM

P = 00676

MFI

anti-

CD36

3400

3600

3800

4000

4200

4400

4600

4800

5000

DA NU

AHC HTA

P = 008

Figura 547 Studiul relatiilor dintre

receptorii PPARα icircn SM A Mo vs PMN B Mo vs Ly

C PMN vs Ly Graficul ilustrează coeficienţii r P dreapta de

regresie (linia centrala) intervalul de icircncredere

95 şi intervalul de predicţie 95

Figura 548 Corelaţii icircntre receptorii PPARα icircn lotul

martor

A Mo vs PMN

B Mo vs Ly

C PMN vs Ly

Tot pentru lotul SM cacircnd am evaluat relaţia dintre nivelul de expresie relativă a

receptorilor PPARα icircn Eo şi nivelul de expresie relativa a receptorilor CD 36 am obţinut o

corelaţie negativă (r = - 05 P = 001) (fig 549 A)

50 100 150 200 250 300 350 50

100

150

200

250

300

350

400

450

500

PPARα Ly

PPARα PMN

y = 56641 + 1159 x r = 086 P lt 0001

C

50 100 150 200 250 300 350 400 0

50

100

150

200

250

300

350

PPARα Mo

PPARα Ly

y = 36665 + 0607 x r = 090 P lt 0001

B

150 200 250 300 350 400 450 0

50 100 150 200 250 300 350 400 450 500

PPARα PMN

PPARα Mo

y = 2505 + 0879 x r = 081 P lt 0001

A

50 100 150 200 250 300 350

50 100 150 200 250 300 350 400 450 500

PPARα Ly

PPARα PMN

y = 95668 + 0919 x r = 081 P lt 0001

C

100 150 200 250 300 350 400

0

50

100

150

200

250

300

350

400

PPARα Mo

PPARα Ly

y = -7503 + 0829 x r = 079 P lt 0001

B

100 150 200 250 300 350 400

50

100

150

200

250

300

350

400

450

500

PPARα Mo

PPARα PMN

y = 61384 + 0882 r = 074 P lt 0001

A

Figura 549 Corelaţii icircntre expresia PPARα icircn Eo şi alte tipuri de receptori investigaţi A PPARα Eo şi CD 36 (Lot SM) B PPARα Eo şi PPARα Mo( Lot Non-SM)

Icircn lotul martor am identificat o asociere moderată pozitivă (r = 038 P = 0033) icircntre

nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Eo şi Mo (figura 549B) corelaţie absentă icircn

lotul pacienţilor cu SM

Corelaţii dintre receptorii studiaţi şi componentele sindromului metabolic

Icircn lotul de control analiza statistică a relevat faptul că icircntre circumferinţa

abdominală (CA ) şi nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Mo Ly şi PMN există o

corelaţie inversă adică scăderea expresiei PPARα la nivelul acestor populatii celulare ar fi

icircnsoţită de creşterea CA (figura 550

Figura 550Corelaţii dintre receptorii

PPARα si CA A Mo B Ly C PMN

La pacienţii cu SM am notat o corelatie moderată negativă statistic semnificativă

icircntre TG şi valorile MFI a Ac anti- PPARα icircn Mo şi Ly( fig 551)

150 200 250 300 350 400 450 50

60

70

80

90

100

110

PPARα PMN

CA r = - 040 P = 0024

C

50 100 150 200 250 300 350 50

60

70

80

90

100

110

PPARα Ly

CA r = - 046 P = 0009

B

50 100 150 200 250 300 350 400 50

60

70

80

90

100

110

PPARα Mo

CA r = - 042 P = 0017

A

50 100 150 200 250 300 350 400 500

1000

1500

2000

2500

3000

PPARα Mo

PPARα Eo

r = 038 P = 0033

B

0 500 1000 1500 2000 2500 1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

8000

PPARα Eo

CD36

r = 050 P = 0010

A

Figura 551 Lot SM Corelaţie icircntre expresia PPARα şi TG (A Mo B Ly)

Analizand corelatia dintre receptorii CD36 si valorile TA la pacientii cu SM am observat

o asociere pozitivă asteptată intre TAD si nivelul de expresie al receptorilor CD36 (fig 552)

Figura 552 Lot SM Corelaţii icircntre expresia

receptorilor CD36 şi valorile tensiunii arteriale

diastolice

Studiind corelaţiile dintre receptorii PPARα şi HDL-col la subiecţii din lotul martor am

notat o asociere pozitivă icircntre expresia PPARα icircn Mo şi Ly cu HDL-col (fig 553)

Figura 553 Lot martor Corelaţii icircntre HDL-col şi expresia PPARα icircn Mo(A) Ly(B)

Icircn lotul normal am evidenţiat corelaţii pozitive moderate dar semnificative statistic icircntre

CA şi valorile TAS (r = 062 P lt 0001) respectiv TAD (r = 050 P=0004) precum şi icircntre

CA şi glicemia subiecţilor normali (r = 052 P = 0003) Aceste date icircmpreună cu relaţia

invers proporţională identificată icircntre HDL-col şi CA (r = 050 P = 001) susţin validitatea

acestui studiu Icircn lotul subiecţilor cu SM am observat o corelaţie moderat pozitivă icircntre

expresia PPARα icircn populaţiiile de Mo şi Eo şi concentraţia a HDL-col (fig 554)

B

100 150 200 250 300 350 20

30

40

50

60

70

80

90

100

PPARα Ly

HDL-col-(mgdl)

r = 036 P = 0046

A

150 200 250 300 350 400 20

30

40

50

60

70

80

90

100

PPARα Mo

HDL-col-(mgd)l

r = 035 P = 005

70 75 80 85 90 95 100 1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

8000

TAD (mmHg)

CD36

r = 048 P = 0013

B

50 100 150 200 250 300 350 -100

0

100

200

300

400

500

PPARα Ly

TG(mgdl)

r = - 042 P = 003

A

50 100 150 200 250 300 350 400 -100

0

100

200

300

400

500

PPARα Mo

TG ( mgdl) r =- 0 43 P = 0027

Figura 554 Corelaţii icircn SM icircntre HDL-col şi expresia PPARα icircn Mo (A) şi Eo(B)

Corelaţii icircntre nivelul de expresie relativă a PPARα şi markeri ai disfuncţiei

endoteliale şi inflamaţiei cronice

Deşi nu a icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică am reţinut corelaţia invers

proporţională (r = - 0331 P = 006) dintre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα

icircn PMN şi concentraţia serică a Non-HDL-colesterolului

Studiind relaţiile dintre parametri icircn lotul de pacienţi cu SM am observat o corelaţie

moderată invers proporţională icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Eo şi

acidul uric seric (figura 555 A) corelaţie absentă la subiecţii fără SM

Figura 555 Lot SM corelaţia dintre expresia PPARα icircn Eo şi acidul uric (A) respectiv

PPARα şi fibrinogen (B)

Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P=008) am notat pentru

pacienţii cu SM corelaţia invers proporţională dintre expresia PPARα icircn Eo şi concentraţia

serică a fibrinogenului ( figura 555B)

V5 Discuţii

Icircn cadrul lucrării de doctorat am studiat nivelul de expresie relativă a PPARα icircn

leucocitele pacienţilor cu SM comparativ cu cea a subiecţilor normali Expresia PPARα a fost

studiată icircn paralel cu cea a CD36 glicoproteină exprimată pe suprafaţa a numeroase celule

din organismul uman inclusiv pe cea a Mo şi macrofagelor Prin funcţia sa de receptor pentru

particulele oxidate de LDL CD36 cunoscut ca bdquoscavenger receptorrdquo de clasa B sau

bdquotrombospodin receptorrdquo contribuie la dezvoltarea inflamaţiei de la nivel endotelial şi

formarea plăcii de ateroscleroză Referitor la studiul PPARα icircn Eo icircn sindromul metabolic

menţionăm că studiul nostru este primul care arată că nivelul de expresie a proteinei PPARα

icircn Eo măsurat prin citometrie icircn flux este semnificativ mai redus la pacienţii care sunt

diagnosticaţi cu acest sindrom De asemenea icircn lotul cu SM cercetat icircn cadrul studiului

receptorilor PPARα numărul Eo circulante a fost semnificativ mai crescut la pacienţii cu SM

B

0 500 1000 1500 2000 2500 200

250

300

350

400

450

PPARα Eo o

Fibrinogen mgdl

r =- 036 P = 008

0 500 1000 1500 2000 2500 1 2 3 4 5 6 7 8 9

10 11

PPARα Eo_

Acid uric(mgdl) r = 048 P = 0014 A

0 500 1000 1500 2000 2500 10

20

30

40

50

60

70

80

PPARα Eo

HDL(mgdl)

r = 044 P = 0024

B

100 150 200 250 300 350 400 10

20

30

40

50

60

70

80

PPARα Mo

HDL( mgdl)

r = 046 P = 0019

A

(P = 003) Aceste constatări conduc la ipoteza că Eo joacă un rol special icircn mecanismele

patogenice declanşate icircn sindromul metabolic şi că receptorii PPARα sunt importanţi icircn

implicarea Eo icircn obezitate şi insulinorezistenţă Creşterea numărului de Eo circulante este

urmată de eliberarea mediatorilor proinflamatori iar reducerea expresiei PPARα icircn Eo

determină perturbarea mecanismelor de control al inflamaţiei cu exacerbarea cascadei

proinflamatorii Consecutiv se agravează disfuncţia endotelială şi se accelerează progresia

leziunilor de ateroscleroză Extrapolacircnd aceste ipoteze putem spune că asocierea raportată

dintre boala ischemică coronariană şi Eo poate fi şi consecinţa exacerbării cascadei

proinflamatorii de la nivel vascular produsă datorită scăderii expresiei PPARα icircn Eo iar

creşterea numărului de Eo circulante poate reprezenta o adaptare a organismului uman care

icircncearcă să suplinească deficitul de receptori PPARα Analizacircnd curba ROC pentru

intensităţile medii de fluorescenţă determinate pentru anticorpii anti- PPARα icircn Eo am

obţinut pentru acest biomarker o sensibilitate a testului de 565 şi o specificitate de 778

pentru un punct de cut-off de 1533 ( figura 536 ) Deşi aria AUC (Aria under the curve) egală

cu 0663 icircncadrează acest test ca avacircnd o acurateţe redusă observăm că că această valoare

este apropiată de determinările AUC pentru alţi factori (fibrinogen raport de aterogenitate

acid uric non- HDL-colesterol) cunoscuţi ca fiind implicaţi icircn aterogeneză şi inflamaţia

cronică (figura 431) Aceste remarci alături de faptul că icircn studiul receptorilor PPARα icircn

leucocite am inclus subiecţi la primul diagnostic de SM creează premisa integrării

determinării expresiei relative a receptorilor PPARα icircn diagnosticul complex al sindromului

metabolic Putem spune că icircn final studiul expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofilele

circulante se dovedește a fi util icircn diagnosticul precoce la nivel molecular al SM permiţacircnd

identificarea timpurie a unor indivizi cu risc cardiometabolic crescut Astfel intervenţia

precoce asupra subiecţilor cu deficit de PPARα icircn Eo contribuie la managementul eficient al

afecţiunilor degenerative icircn care inflamaţia cronică icircndeplineşte un rol primordial Referitor

la populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările efectuate prin citometrie de flux nu au

arătat existenţa unor diferenţe statistice icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα

la subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali Rezultatele noastre pot fi

consecinţa caracteristicilor loturilor studiate (icircn studiul nostru au fost incluşi subiecţi recrutaţi

la primul diagnostic de SM şi icircn absenţa stimulării receptorilor PPARα cu droguri agoniste

PPARα) dar icircn acelaşi timp pot apare diferenţe datorită metodei utilizate (231 232 233)

Făcacircnd o paralelă cu un studiu publicat icircn 2013 icircn Europa (231) care a arătat creşterea

nivelului de expresie al PPARα icircn Ly şi Mo observăm că deşi numărul de subiecţi a fost

aproximativ egal (57 participanţi icircn studiul nostru 60 icircn studiul DAmore) subiecţii icircn studiul

amintit au fost recrutaţi dintr-o clinică cu profil medical la primul diagnostic de SM icircn timp

ce metoda utilizată a fost PCR (Polymerase Chain Reaction) mult mai fidelă decacirct citometria

icircn flux icircn studiul receptorilor nucleari De asemenea DAmore nu investighează expresia

PPARα icircn Eo şi PMN icircn cercetare fiind incluse doar celulele CD14+ (predominant Mo) şi

CD14- (predominant Ly) Deşi nu am obţinut diferenţe statistic semnificative icircntre cele două

loturi referitoare la nivelul de expresie relativă a PPARα icircn Mo Ly şi PMN am observat

corelaţii puternice semnificative statistic icircntre expresia receptorilor PPARα icircn aceste tipuri

celulare Rezultatele obţinute sugerează existenţa unui mecanism diferit molecular de control

icircn eozinofile care reglează cantitatea de proteină PPARα icircn eozinofile versus alte tipuri de

leucocite (la pacienţii cu SM) şi acest lucru este icircn concordanţă cu cercetările care descriu

expresia PPARα mRNA icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale

bronşice keratinocite) Studiind prin citometrie de flux nivelul de expresie relativă a

receptorului CD36 la nivelul Mo am arătat prezenţa acestuia icircn Mo tuturor subiecţilor

investigaţi Analizacircnd valorile intensităţii medii de fluorescenţă a CD36 icircn loturile studiate

am observat o tendinţă de creştere la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali

confirmacircnd implicarea receptorului CD36 icircn patogeneza acestuia Referitor la expresia

receptorului CD36 rezultatele obţinute sunt icircn consens cu studii anterioare care au arătat

creşterea expresiei CD36 la pacienţii cu SM şi diabet zaharat Astfel pe lacircngă diferenţa icircn

expresia CD36 s-au raportat şi corelaţii inverse icircntre expresia proteinei CD36 şi nivelul

adiponectinei Acelaşi studiu a evidenţiat o corelaţie pozitivă intre expresia CD36 cu expresia

receptorilor PPAR gamma relaţia cu PPARα nefiind investigată

Analiza de subgrup a relaţiilor dintre componentele SM și elementele moleculare

proinflamatorii studiate a relevat prezenţa unor asocieri semnificativ statistice icircntre acestea

Se argumentează astfel că veridicitatea studiului este susţinută de interdependenţele statistice

ale componentelor SM Determinarea coeficientului de corelaţie Icircn studiul nostru nivelul de

expresie relativă a PPARα s-a corelat moderat negativ (figura 550) cu CA a subiecţilor din

lotul normal pentru populaţiile celulare de Mo (r = - 0420 P = 001) Ly (r = - 046 P =

0009) şi PMN (r = - 040 P = 0024) date care sunt icircn concordanţă cu studiile care arată

rolul PPARα icircn furnizarea energiei prin beta-oxidarea acizilor graşi Icircn acelaşi timp icircn lotul

pacienţilor cu SM nu am identificat prezenţa unei asocieri icircntre nivelul de expresie relativă a

PPARα şi valoarea măsurată a CA Asocierea dintre expresia relativă a PPARα cu obezitatea

de tip central completează datele existente referitoare la reglarea homeostaziei energetice

conturacircnd un mecanism de control deficitar al aportului caloric al SM Icircn condiţiile icircn care

rezultatele obţinute prin metoda citometriei icircn flux nu au arătat existenţa unei corelaţii intre

expresia PPARα şi CA la pacienţii cu SM considerăm că ar fi necesar studiul

polimorfismului genei PPARA care ar putea aduce informaţii importante cu privire la

implicarea acestor receptori icircn apariţia obezităţii de tip central Subliniem acest lucru deoarece

obezitatea este o boală plurifactorială icircn care pe lacircngă factorii ereditari sunt implicaţi factori

de mediu psihologici şi sociali (245) Existenţa unei componente genetice a aterosclerozei

este legată şi de prezenţa unor variante ale genei PPARA asociate cu creşterea incidenţei bolii

cardiovasculare (82) şi a SM (249) Icircn studiul nostru am constatat o scădere statistic

semnificativă a nivelului expresiei relative a receptorilor PPARα icircn Eo la subiecţii cu

antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială comparativ cu subiecţii fără istoric

familial de hipertensiune (figura 537) Deşi diferenţele calculate icircntre loturile studiate nu au

icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică la subiecţii care au declarat prezenţa

antecedentelor familiale de hipertensiune arterială remarcăm o tendinţă de scădere a

intensităţii medii de fluorescenţă pentru Ac anti-PPARα la nivelul Mo (figura 515 P = 006

) icircn timp ce expresia relativă a CD36 icircnregistrează o creştere la acesti subiecţi (figura 545 P

= 008) Icircn contextul riscului cardiovascular foarte icircnalt al pacienţilor cu SM amintim şi

existenţa corelaţiei pozitive dintre valorile tensiunii arteriale diastolice şi expresia relativă a

receptorului CD36 (r = 0483 P = 0013) Această constatare este icircn consens cu studiile care

au arătat că forma solubilă circulantă a CD36 este asociată cu factorii de risc cardiovasculari

fiind propusă ca un marker precoce al aterosclerozei Activarea PPARα este asociată cu

modularea metabolismului lipidic iar agoniştii PPARα sunt utilizaţi icircn mod curent pentru

tratamentul dislipidemiei Sub acţiunea agoniştilor PPARα se obţine o icircmbunătăţire a funcţiei

endoteliale şi a parametrilor reologici funcţiile pleiotropice ale agoniştilor PPARα fiind

dovedite icircn trialuri clinice controlate Icircn populaţiile de Mo şi Ly la pacienţii cu SM

cercetarea noastră a evidenţiat o asociere negativă icircntre nivelul de expresie relativă a

receptorilor PPARα şi concentraţia TG serice (figura 551) Astfel scăderea expresiei

receptorilor PPARα este asociată cu creşterea nivelului TG serice contribuind la profilul

lipidic aterogen din SM Icircn conformitate cu literatura de specialitate icircn studiul efectuat prin

metoda citometriei icircn flux am găsit prezenţa asocierii icircntre nivelul de expresie al PPARα şi

HDL-colesterol Corelaţia pozitivă dintre nivelul de expresie relativă PPARα şi concentraţia

HDL-colesterolului a fost observată icircn lotul martor icircn populaţiile de Mo (r = 035 P = 005)

şi Ly ( r = 036 P = 004) (figura 553) susţinacircnd faptul că stimularea receptorilor PPARα

este legată de creşterea nivelului seric al lipoproteinelor cu densitate crescută La pacienţii cu

SM corelaţia dintre expresia PPARα şi HDL-colesterol a fost evidenţiată icircn populaţiile de Mo

(r = 046 P = 0019) şi eozinofile (r = 044 P = 0024) Se desprinde concluzia că icircn

sindromul metabolic scăderea concentraţiei HDL-colesterol este legată de diminuarea

nivelului de expresie relativă a receptorilor nucleari PPARα icircntărind afirmaţiile legate de

rolul acestor receptori icircn progresia bolilor cardiovasculare Studiind reactanţii de fază acută

analiza statistică a relevat o diferenţă semnificativă din punct de vedere statistic icircntre valorile

fibrinogenului la pacienţii cu SM atunci cacircnd au fost comparaţi cu subiecţii fără SM

(Capitolul IV4 P lt0 001 figura 427A) De asemenea icircn Capitolul V dedicat studiul

expresiei relative a receptorilor PPARα studiul valorilor fibrinogenului a arătat creşterea

acestui reactant de faza acută icircn lotul cu SM comparativ cu lotul martor (P lt0 0001) Icircn

studiul nostru am calculat o corelaţie invers proporţionala (r = - -036 fig 555B) icircntre

nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile şi concentraţia serică a

fibrinogenului Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P = 008) am reţinut

această asociere deoarece am demonstrat că nivelul de expresie relativă al receptorilor

PPARα icircn eozinofile este mai scăzut icircn sindromul metabolic iar sindromul metabolic este

caracterizat printr-un status inflamator cronic status caracterizat şi de creşterea concentraţiei

serice a fibrinogenului De asemenea notam ca această corelaţie negativă se află icircn

concordanţă cu studiile care arata că tratamentul cu agonişti PPARα (fibraţi) determina

scăderea nivelului seric al fibrinogenului contribuind la diminuarea inflamaţiei cronice din

sindromul metabolic şi icircn consecinţă amelioracircnd insulinorezistenţa

LIMITE ȘI DIFICULTĂȚI IcircN CERCETARE

Icircn cadrul Tezei de Doctorat am desfăşurat o cercetare care şi-a propus studierea

expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Recrutarea anamneza şi examinarea

clinică a subiecţilor au fost realizate icircn cadrul Cabinetului de Medicină de Familie CMI Popa

Elena din Iaşi iar determinările hematologice şi biochimice s-au efectuat icircn cadrul

Laboratorului Ambulatorului de Specialitate al Spitalului Universitar ldquoSfacircntul Spiridon din

Iaşi Icircn studiul epidemiologic şi al markerilor inflamatori al sindromului metabolic desfăşurat

au fost incluşi un număr de 1530 de participanţi pe baza liberului consimţămacircnt examinaţi icircn

perioada 01012013 - 31122013 Icircn continuare icircn perioada 1012014 - 28022014 pe baza

criteriilor de includere şi excludere icircn cele două loturi de studiu am investigat un număr de 57

de subiecţi prezentaţi la consultaţie icircn această perioadă şi care au icircndeplinit criteriile de

includere icircn cele două loturi (Lot SM şi Lot Control) constituite pentru evaluarea nivelului de

expresie a receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Explorarea nivelului de expresie

relativă a receptorilor PPARα s-a desfăşurat icircn cadrul Laboratorului de Biologie Moleculară

de pe platforma Institutului Regional de Oncologie Datorită resurselor proprii financiare

limitate trebuie să subliniez că aceasta cercetare nu ar fi fost posibilă fără contribuţia unor

cercetători din domeniul medical care m-au sprijinit necondiţionat atacirct icircn elaborarea

protocolului de lucru cacirct şi icircn efectuarea propriu-zisă a studiului Icircn acest sens menţionăm şi

faptul că pentru studiul receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic am utilizat aparatura

Laboratorului de Biologie Moleculară (care deserveşte icircntreaga Regiune a Moldovei) Pe

această cale mulţumesc personalului Laboratorului de Biologie Moleculară pentru ajutorul

acordat icircn desfăşurarea cercetării doctorale icircn condiţiile icircn care se observa creşterea

numărului de pacienţi care se adresează acestei platforme de cercetare Mulţumesc de

asemenea şi Doamnei Doctor Elena Butoi din cadrul Institutului de Biologie şi Patologie

Moleculară ldquoNicolae Simionescurdquo Bucureşti) pentru donaţia anticorpului secundar anti-

FITC Icircn consecinţă pentru recrutarea unui număr mai mare de participanţi ar fi fost necesară

icircn primul racircnd obţinerea unor resurse financiare suplimentare pentru achiziţia de aparatură şi

reactivi Totuşi numărul subiecţilor recrutaţi este apropiat de numărul subiecţilor raportaţi icircn

cadrul unor granturi de cercetare care aveau ca ţinta studiul expresiei receptorilor PPARα

(212 227 228 231) Rezultatele obţinute continua seria lucrărilor care arata importanta

studiului mecanismelor etiopatogenice ale sindromului metabolic patologie care se afla icircntr-o

continuă creştere La pacienţii cu SM pe lacircngă diminuarea nivelului de expresie a receptorilor

PPARα icircn eozinofile ne aşteptam şi la evidenţierea unor modificări icircn expresia PPARα şi icircn

populaţiile de Ly Mo şi PMN Acest fapt poate fi explicat de utilizarea unor celule provenite

de la pacienţi fără afectare cardiovasculară fără diabet zaharat şi necesită continuarea

studiului pe culturi celulare icircn condiţii de stimulare cu agonişti PPARα deziderat care

impune continuarea investigării expresiei PPARα printr-un grant de cercetare

ORIGINALITATEA ȘI CONTRIBUȚIILE INOVATIVE ALE TEZEI DE

DOCTORAT PERSPECTIVE DE CERCETARE

Evaluarea nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn leucocitele circulante

aduce noi perspective icircn studiul obezităţii şi sindromului metabolic Importanta studiului

expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic derivă din prevalenta crescută a

sindromului metabolic icircn populaţia cercetată la care se adaugă riscul cardiovascular foarte

icircnalt al acestor pacienţi cu implicaţii majore icircn sănătatea publică Rolul receptorilor PPARα

icircn inflamaţie şi aterogeneza este binecunoscut dar studiul nostru este primul care a arătat că

nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα este semnificativ mai scăzut in populatiile

de eozinofile la pacienţii cu SM Această concluzie coroborata cu existenţa unei stracircnse

asocieri intre expresia receptorilor PPARα la nivelul Mo limfocitelor şi PMNlor creeaza

ipoteza existenţei unui mecanism de control diferit al expresiei PPARα la nivelul

eozinofilelor Această cercetare aduce informaţii importante referitoare la mecanismele

proinflamatorii care stau la baza insulinorezistenţei şi riscului cardiometabolic şi impune

continuarea studiului acestor receptori nucleari prin citometrie icircn flux metodă care poate fi

aplicată şi la scara mai largă dacă sunt asigurate resursele materiale necesare cercetării

Cercetarea prin citometrie icircn flux poate fi completată de studiul polimorfismului genei

PPARA şi astfel se pot identifica timpuriu indivizii cu potenţial risc cardiometabolic crescut

Studiul receptorilor PPARα a stabilit conexiuni cu factori proinflamatori şi aterogenetici iar

continuarea cercetării poate aduce şi elemente noi de diagnostic precoce icircn sindromul

metabolic contribuind la icircmbunătăţirea prognosticului acestor pacienţi

CONCLUZII FINALE

1 Aplicarea scorului de SM alături de implementarea algoritmului electronic de diagnostic

contribuie la o prelucrare rapidă eficientă și standardizată a informaţiilor la nivelul

medicinei primare

2 Prevalenţa SM calculată astfel icircn cadrul studiului este crescută (2732) icircn concordanţă

cu datele raportate

3 Controlul factorilor de risc cardiometabolici incluşi icircn SM se poate realiza prin

managementul stilului de viaţă (scăderea greutăţii corporale prin combaterea

sedentarismului şi adoptarea unei diete antiaterogene şi hipocalorice) şi administrarea

terapiei medicamentoase

4 Este necesară adoptarea unei politici de sănătate publică pentru prevenirea creşterii icircn

populaţie a prevalenţei obezităţii şi a diabetului zaharat

5 Noi metode de cercetare icircn domeniul SM axate pe diagnosticarea precoce şi cuantificarea

eficientă a acestuia duce la diminuarea incidenței evenimentelor cardiovasculare majore

6 Sindromul metabolic se caracterizează printr-un status inflamator cronic

7 Valorile Non-HDL-colesterolului şi a raportului de aterogenitate sunt semnificativ mai

mari la pacienţii cu SM

8 Dintre reactanţii de faza acută am observat că valoarea medie a fibrinogenului este mai

crescută icircn lotul cu SM

9 Valorile eozinofilelor sunt crescute icircn sindromul metabolic iar explorarea relaţiei dintre

eozinofile şi obezitate constituie una din direcţiile de studiu actuale ale sindromului

metabolic

10 Evaluarea markerilor inflamatori icircn contextul sindromului metabolic este utilă icircn

evaluarea complexă a a factorilor de risc cardiometabolici

11 Prin metoda citometriei icircn flux am demonstrat prezenta Receptorilor Activaţi de

Inductorii Proliferării Peroxizomilor ndash Alpha (PPARα) icircn toate populaţiile de leucocite

studiate (Mo limfocite PMN eozinofile) atacirct icircn lotul pacienţilor cu SM cacirct şi icircn lotul

martor

12 Utilizacircnd intensitatea medie de fluorescenţă a anticorpilor anti- PPARα am arătat că

nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile este semnificativ mai redus

la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali

13 Acest studiu este primul care a demonstrat existenţa unei scăderi statistic semnificative a

nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofilele pacienţilor cu SM

confirmacircnd cercetările recente care au evidenţiat rolul eozinofilelor şi al receptorilor

PPARα icircn obezitate reglarea inflamaţiei cronice şi aterogeneza

14 Contrar aşteptărilor noastre icircn populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările

efectuate icircn cele două loturi de studiu (cu şi fără sindom metabolic) nu am evidenţiat

diferenţe statistic seminificative icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα la

subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali

15 Icircn populaţiile de Mo limfocite şi polimorfonucleare am observat corelaţii puternice

semnificativ statistic icircntre expresia PPARα icircn aceste tipuri celulare sugeracircnd existenţa

unui mecanism unic de control al inflamaţiei cronice la nivelul acestor celule probabil

diferit de cel din eozinofile

16 La subiecţii cu SM expresia relativă a PPARα icircn Eo este invers asociată cu expresia

receptorului CD36 (receptor al particulelor de ox - LDL şi propus ca un marker precoce al

aterosclerozei) dovedind rolul antiinflamator al receptorilor PPARα la nivel endotelial

17 La pacienţii cu antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială nivelul de

expresie al receptorilor PPARα icircn eozinofile şi Mo este diminuat comparativ cu subiecţii

fără antecedente familiale de hipertensiune arterială Putem spune că studiul efectuat de

noi aduce informaţii importante legate de geneză aterosclerozei şi hipertensiunii arteriale

18 Prin studiul asocierilor dintre receptorii PPARα şi componentele clinice ale sindromului

metabolic am arătat rolul acestor receptori icircn determinismul obezităţii de tip central

nivelul expresiei relative a receptorilor PPARα fiind invers proporţional cu circumferinţa

abdominală

19 Icircn acelaşi timp nivelul de expresie a PPARα icircn sindromul metabolic este asociat pozitiv

cu concentraţia serică a HDL-colesterolului şi invers asociat cu nivelul trigliceridelor

serice dovedind rolul acestor receptori icircn diminuarea procesului inflamator cronic de la

nivel vascular

20 La pacienţii cu SM scăderea expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofile este corelată cu

creşterea unor markeri ai sindromului inflamator cronic cardiometabolic (acid uric

fibrinogen) ilustracircnd importanta receptorilor icircn reglarea status-ului inflamator cronic din

sindromul metabolic

21 Utilizarea metodei flowcitometrice pentru studiul expresiei relative a receptorilor PPARα

icircn leucocite a adus informaţii importante cu privire la mecanismele moleculare de control

implicate icircn patogenia bolilor cardiometabolice icircn concordanţă cu cercetările care descriu

expresia PPAR icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale bronşice

keratinocite)

BIBLIOGRAFIE SELECTIVA

1 Kahn R Metabolic syndrome- what is the clinical usefulness Lancet 2008371(9628)1892-3

2 Reaven GM The metabolic syndrome is this diagnosis necessary Am J Clin Nutr 2006 83(6)1237-7

3 Grundy SM Pre-Diabetes Metabolic Syndrome and Cardiovascular Risk J Am Coll Cardiol 201259(7)

635-43

4 International Diabetes Federation IDF Diabetes Atlas 6th edn International Diabetes Federation Belgium

Brussels 20131-155

5 World Health Organization Global Status Report on Noncommunicable Diseases 2010 World Health

Organization Geneva Switzerland 20111-176

6 Coman AE Petrovanu R Sindromul metabolic in practica de ambulator Editura Pim Iaşi 2009 1-103

7 Grundy SM Becker D Clark LT et alThird Report of the National Cholesterol Education Program (NCEP)

Expert Panel on Detection Evaluation and Treatment of High Blood Cholesterol in Adults (Adult

Treatment Panel III) Final Report Circulation 2002106(25)3143-90

8 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J Metabolic syndrome- a new worldwide definition A Consensus Statement

from the International Diabetes Federation Diabet Med 2006 23(5)469-80

9 KG Alberti KG Eckel RH Grundy SM etal International Diabetes Federation task force on epidemiology

and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart Association World Heart

Federation International Atherosclerosis Society International Association for the study of obesity

Harmonizing the metabolic syndrome a joint interim statement of the International Diabetes Federation task

force on epidemiology and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart

Association World Heart Federation International Atherosclerosis society and International Association

for the study of obesity Circulation 2009120(16)1640-5

10 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J IDF Epidemiology Task Force The metabolic syndrome new

worldwide definition Lancet 2005 366 1059 - 62

11 Oleszczyk M Svab I Seifert B et al Primary healthcare in the developing part of Europe changes and

development in the former Eastern Bloc countries that joined the European Union following 2004 Med Sci

Monit 2009(15)78ndash84

12 Jung U J Choi M S Obesity and Its Metabolic Complications The Role of Adipokines and the

Relationship between Obesity Inflammation Insulin Resistance Dyslipidemia and Nonalcoholic Fatty

Liver Disease Int J Mol Sci 2014rsquo15(4) 6184-223

13 Vanden Heuvel JP Peters JM Peroxisome Proliferators In Ramos K (ed) Cellular and Molecular

Toxicology (Second Edition) Volume 2 New York Elsevier Science Inc 2010 145 - 67

14 Yessoufou A Wahli W Multifaceted roles of peroxisome proliferator-activated receptors (PPARs) at the

cellular and whole organism levels Swiss Med Wkl 2010140w13071 doi104414smw201013071

15 Azhar S Peroxisome proliferator-activated receptors metabolic syndrome and cardiovascular disease

Future Cardiology 20106(5)657-91

16 Andries G Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity

Diabetes and Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(Suppl)24-32

17 Zandbergen F Plutzky J PPARalpha in atherosclerosis and inflammation Biochim Biophys Acta

20071771(8)972-82

18 Straus DS Glass CK Anti-inflammatory actions of PPAR ligands new insights on cellular and molecular

mechanisms Trends Immunol 200728(12)551-8

19 Zlei M Zugun- Eloae F Carasevici E Citometrie icircn flux - Bază şi clinică Icircn Hinescu ME (ed) Citometrie icircn

flux - principii şi aplicaţii clinice Bucureşti Editura Viaţa Medicală Romacircnească 20111-128

20 Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity Diabetes and

Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(9)24-32

21 Woerly G Honda K Loyens M et al Peroxisome proliferator-activated receptors alpha and gamma down-

regulate allergic inflammation and eosinophil activation J Exp Med 2003198(3)411-21

22 Salle-Saumont D Brenuchon C Kanda A et al Peroxisome proliferator-activated receptor alpha regulates

skin inflammation and humoral response in atopic dermatitis J Clin Allergy Immunology 2008 21(4)962-8

23 Schote A Turner J Schiltz J et al Nuclear receptors in human immune cells expression and correlations

Mol Immunolog 200744(6)1436-45

24 DAmore S Vacca M Graziano G et al Nuclear receptors expression chart icircn peripheral blood

mononuclear cells identifies patients with Metabolic Syndrome Biochim Biophys Acta

20131832(12)2289-301

25 Uthurralt J Gordish-Dressman H Bradbury M T et al PPARalpha L162V underlies variation in serum

triglycerides and subcutaneous fat volume in young males BMC Med Genet 2007855

26 Hiukka A Leinonen ES Jauhiainen M et al Long-term effects of fenofibrate on VLDL and HDL

subspecies icircn participants with type 2 diabetes mellitus Diabetologia 2007 50(10)2067-75

27 Robins SJ Rubins HB Faas FH et alInsulin resistance and cardiovascular events with low HDL

cholesterol The Veterans Affairs HDL Intervention Trial (VA-HIT) Diabetes Care 2003 26(5)1513-7

28 Devaraj S Siegel D Jialal I Statin Therapy in Metabolic Syndrome and Hypertension Post-JUPITER

What is the Value of CRP Curr Atheroscler Rep 2011 13(1) 31ndash42

29 Imperatore G Riccardi G Iovino C et al Plasma Fibrinogen A New Factor of the Metabolic Syndrome A

population-based study Diabetes Care 19982 1(4)649-54

30 Krysiak R Gdula-Dymek A Bachowski R Okopien B Pleiotropic effects of atorvastatin and fenofibrate

in metabolic syndrome and different types of pre-diabete Diabetes Care 201033(10)2266-70

31 Hermans MP Impact of Fenofibrate on Type 2 Diabetes Patients with Features of the Metabolic Syndrome

Subgroup Analysis From FIELD Curr Cardiol Rev 20106(2)112-8

32 Silverstein R Inflammation atherosclerosis and arterial thrombosis Role of the scavenger receptor CD36

Cleveland Clinic Journal of Medicine 200976(Suppl 2)S27-S30

33 Hăncu N Obezitatea In Vereşiu IA (ed) Diabetul zaharat nutritia si bolile metabolice Volume 2 Editura

Echinox Cluj- Napoca 2010 1-15

Lista lucrări publicate

1 Elena Popa Maria Maidaniuc Agnes Bacusca Alamir Diaa Rodica Petrovanu Adorata Elena

Coman Disfuncţia endotelială ndash de la mecanisme moleculare la cuantifi care şi tratament icircn practica

medicală Practica Medicală 20149(3) 109-14

2 Elena Popa Agnes Bacusca Alamir Diaa Maria Maidaniuc Rodica Petrovanu Adorata Elena Coman

The function of insulin receptor (IRF) in evolution of obesity correlation with adipocytes diameters

Archives of the Balkan Medical Union 201449(3) 275-9

3 Elena Popa Florin Zugun-Eloae Mihaela Zlei Daniela Jitaru Oana Maria Pintilie Adorata Elena

Coman Maria Traian Didona Anca Ungureanu Eugen Carasevici - acceptata pentru numarul 42014

Flow cytometry analysis of PPAR-alpha receptors in metabolic syndrome) Revista Romană de

Medicină de Laborator(RRLM-D-14-00034R1- adeverinţa ataşată

Page 8: REZUMAT TEZĂ DE DOCTORAT - umfiasi.ro Doctorat/rezumat... · universitatea de medicinĂ Şi farmacie “grigore t. popa” iaŞi facultatea de medicinĂ rezumat tezĂ de doctorat

de 1497 (95CI 1309 ndash 1704) icircn populaţia studiată Au fost calculate prevalenţele pe

sexe şi au fost găsite valorile de 1343 (95CI 010 ndash 164) la bărbaţi respectiv 1632

(95 CI 1366 ndash 1934) la femei raportul dintre acestea fiind de 082 (95CI 062 ndash 107)

Pentru fiecare asociere dintre componentele SM diagnosticat conform criteriilor

Harmonised I am calculat prevalenţele icircn cadrul SM(tabel XVI)

Tabel XVI Prevalenţa asocierilor dintre componentele SM Număr

pacienţi

Ponderea icircn cadrul

pacienţilor cu SM

(95 CI)

Prevalenţa icircn

populaţia studiată

(95 CI)

SM cu trei componente (SM3)

241 6195 (5438ndash7029) 1575 (1383-

1787)

Obezitate centrală + hipertensiune arterială +

hipertrigliceridemie

45 1154 (844ndash1548) 294 (214-393)

Obezitate centrală + hipertensiune arterială + hipo-

HDLcolesterolemie

38 979 (691ndash1340) 248 (175-340)

Obezitate centrală + hipertrigliceridemie +

hipoHDL-colesterolemie

34

874 (605ndash1221) 222 (153-310)

Obezitate centrală + modificări ale metabolismului

glucidic + hipertensiune arterială

31 796 (541ndash1131) 202 (137-287)

Hipertensiune arterială + hiper-trigliceridemie +

hipoHDL- colesterolemie

26 668 (436 ndash979) 169 (111-249)

Modificări ale metabolismului glucidic +

hipertensiune arterială + hiper-trigliceridemie

21 539 (334-825) 137 (085-209)

Obezitate centrală + modificări ale metabolismului

glucidic + hipertrigliceridemie

15 385 (215-636) 098 (054-116)

Modificări ale metabolismului glucidic

hipertrigliceridemie + hipoHDL-colesterolemie

12 308 (159-538) 078 (040-137)

Modificări ale metabolismului glucidic +

hipertensiune arterială + hipoHDLcolesterolemie

10 257 (123ndash472) 065 (031-120)

Obezitate centrală + modificări ale metabolismului

glucidic + hipo-HDL-col

9 231 (105ndash439) 058 (026-111)

SM cu patru componente (SM4) 104 2674 (2184-239) 679 (555-823)

Obezitate centrală + modificări ale metabolismului

glucidic + hipertensiune arterială + hipoHDL-

colesterolemie

32 822 (562-1116) 209 (143-

295)

Obezitate centrală + hipertensiune arterială +

hipertrigliceridemie + hipoHDL-col

25 642 (415- 948) 163 (105-241)

Obezitate centrală + modificări ale metabolismului

glucidic + hipertri-gliceridemie + hipoHDL-

colesterolemie

12 308 (159-538) 078 (040-137)

Modificări ale metabolismului glucidic +

hipertensiune arterială + hipertri-gliceridemie +

hipoHDL-colesterolemie

6 154 (056- 335) 039 (014-085)

SM cu cinci componente (SM5) 44 1131 (822-1518) 287 (209-386)

Total (SM3 + SM4 + SM5) 389 100 2542(2296-

2808)

Analizacircnd componentele SM la cei 389 pacienţi diagnosticaţi cu SM conform criteriilor

Harmonised I am constatat că obezitatea centrală este cea mai bine reprezentată icircn SM dintre

aceste componente (8072 95CI 7644 - 8452) urmată de HTA (7892 95CI 7453

- 8287) hiperTG (6915 95 CI 6430-7371) hipo-HDL-col (6375 95 CI 5876-

6854) şi hiperglicemie (5681 95 CI5173- 6179)

Standardizarea prevalenţelor funcţie de vacircrstă şi sex Analiza statistică a relevat faptul

că prevalenţa SM creşte cu icircnaintarea icircn vacircrstă Dacă pentru vacircrsta cuprinsă icircntre 35-54 ani

prevalenţa la bărbaţi este semnificativ mai mare comparativ cu femeile (raport calculat B F -

183 P=0003) pentru celelalte grupe de vacircrsta nu s-au observat diferenţe semnificative icircntre

sexul feminin şi cel masculin Am observat că după instalarea menopauzei la femei

prevalenţa SM (corespunzătoare Harmonised I) la femei depăşeşte 50 iar la bărbaţi atinge

42 Utilizacircnd European Standard Population (175) am efectuat standardizarea funcţie de

vacircrstă şi sex a prevalenţelor bdquocruderdquo (brute) obţinute icircn populaţia studiată şi am calculat o

prevalenţă standardizată a SM de 2732 (95 CI 2460-3003) La sexul masculin

prevalenţa standardizată a SM a fost de 2760 (95 CI 2362 - 3157) iar la sexul feminin

am obţinut valoarea de 2854 (95 CI 2462 - 3245)

Discuţii

Studiul desfăşurat de noi a investigat prezenţa SM icircn populaţia unui Cabinet de Medicină

de Familie Icircn Europa prevalenţa SM este de aproximativ 25-30 Statele Unite Ale Americii

au raportat o prevalenţă a sindromului metabolic de 22 icircn populaţia cu vacircrsta peste 20 ani

pe cacircnd la vacircrstă mai mare de 60 ani s-a observat o prevalenţă de 44 (1419) Icircn studiul

efectuat am observat o prevalenţă standardizată de 2732 (95 CI 2460-3003) care este

icircn concordanţă cu prevalenţele raportate icircn Europa precum şi o creştere a ponderii SM icircn

populaţie icircn raport cu vacircrsta Am preferat utilizarea definiţiei Harmonised I pentru SM

deoarece cuprinde criterii adaptate pentru o abordare unitară a SM mărind astfel numărul

pacienţilor diagnosticaţi şi care vor urma tratament conform Ghidurilor de Practică Medicală

Limitările acestui studiu sunt legate de faptul că este concentrat doar pe populaţia asigurată şi

neasigurată aflată pe lista unui medic de familie din mediul urban Se pot efectua studii la

nivelul Cabinetelor Medicale de Medicină de Familie dar trebuie să se aplice pe un lot

reprezentativ urbanrural care să reprezinte populația acelei regiuni Utilizarea structurilor

populaționale atașate cabinetului de MF este utilă atacirct pentru cele clinice cacirct și pentru cele

epidemiologice deoarece surprinde populația studiată icircn mediul de viață cotidian Prevalenţa

mare a SM icircn populaţia studiată necesită aplicarea unei politici eficiente de sănătate publică

deoarece riscul producerii evenimentelor cardiovasculare majore poate fi redus semnificativ

printr-un control adecvat al componentelor SM (obezitate dislipidemii hipertensiune

arterială şi hiperglicemie

Studiul sindromului inflamator cronic icircn cadrul sindromului metabolic

Obiectivele studiului

- studierea markerilor inflamaţiei cronice şi aterogenezei la subiecţii cu şi fără SM

- evaluarea importanţei markerilor studiaţi ai inflamaţiei cronice icircn diagnosticul de

ambulator al sindromului metabolic

Material şi metodă

Icircn cercetarea inflamaţiei cronice din SM au fost incluşi 1530 subiecţi de ambele sexe cu

vacircrsta cuprinsă icircntre 18-91 ani icircnscrişi pe lista CMI Popa Elena Studiul s-a desfăşurat icircn

perioada 01012013ndash 31122013 Populaţia ţintă a fost identică cu cea din studiul

epidemiologic şi s-a desfăşurat concomitent cu studiul prevalentei SM Subiecţii au fost

icircmpărţiţi icircn două loturi lotul cu SM (Lot SM) şi lotul de control (fără SM)

Lot SM a) criterii de includerevacircrsta peste 18 ani recrutarea pe baza semnării

Consimţămacircntului liber informat SM diagnosticat pe baza criteriilor Harmonised I (14) b)

criterii de excluderevacircrstă sub 18 anirefuzul semnării Consimţămacircntului liber informat

femei icircn perioada de graviditate sau de lactaţie

Lot Control (fără SM) a) criterii de includerevacircrsta peste 18 anirecrutarea pe baza

semnării Consimţămacircntului liber informat absenţa sindromului metabolic b) criterii de

excluderevacircrstă sub 18 ani refuzul semnării Consimţămacircntului liber informatfemei icircn

perioada de graviditate sau de lactaţie

Rezultate

Lotul cu SM (Lot SM) a fost format din cei 389 pacienţi diagnosticaţi cu SM conform

criteriilor Harmonised I Lotul SM a fost alcătuit din 185 bărbaţi şi 204 femei raportul

bărbaţifemei fiind de 090 (95 CI073-112) Lotul de control (fără SM) a fost alcătuit

din cei 1141 participanţi care nu au icircntrunit criteriile de diagnostic ale sindromului metabolic

Din cei 1141 de subiecţi 530 au fost de sex masculin iar 611 de sex feminin raportul

bărbaţifemei fiind 087 (95 CI 077-097) Vacircrsta subiecţilor a fost semnificativ mai mare

icircn lotul pacienţilor cu SM (5976plusmn1322 ani) comparativ cu lotul martor (4333plusmn 1748 ani) (t-

Test Plt00001) Aşa cum ne-am aşteptat valorile medii ale componentelor clinice ale SM

(circumferinţa abdominală tensiunea arterială sistolică şi diastolică) au fost mai mari icircn lotul

pacienţilor cu SM (t-Test Plt0001 pentru fiecare dintre componente) Studiind parametrii

biochimici incluşi icircn diagnosticul SM valorile medii ale glicemiei şi TG au fost semnificativ

mai crescute icircn lotul SM (t-Test Plt00001 pentru ambele constante) Icircn acelaşi timp

valoarea medie determinată a HDL-col a fost semnificativ mai mare la subiecţii din lotul

martor ( t-Test Plt00001) SM se caracterizează printr-o dislipidemie aterogenă

caracterizată de creşterea TG scăderea HDL-col concomitent cu creşterea LDL-col creşterea

Non-HDL-col şi a raportului de aterogenitate (Col totalHDL-col) (185) Comparacircnd cele

două loturi am observat că valoarea medie a LDL-colesterolului determinată icircn lotul

pacienţilor cu SM a fost semnificativ mai mare faţă de subiecţii din lotul martor (t-Test P =

00002) Măsurarea Non-HDL-colesterolului a arătat prezenţa unei diferenţe semnificative

icircntre cele două loturi (figura 420 B) Astfel icircn concordanţă cu prezenţa dislipidemiei

aterogene valoarea medie a Non-HDL-col a fost semnificativ mai mare (t-Test Plt 00001) icircn

lotul cu SM comparativ cu lotul de control Icircn contextul inflamației cronice şi aterogenezei

din sindromul metabolic am evaluat sensibilitatea şi specificitatea Non-HDL-colesterolului

ca test diagnostic al SM Valoarea Non-HDL-colesterolului care prezice cu cea mai mare

acurateţe prezenţa SM a fost de 151 mgdl (punctul de ldquocut-offrdquo) pentru care am calculat o

sensibilitate de 64 27 şi o specificitate de 5872 Calculul ariei AUC a furnizat valoarea

de 0605 şi deci determinarea concentraţiei serice a parametrului Non-HDL-colesterolului are

valoarea unui marker cu acurateţe redusă Am studiat valorile raportului Col totalHDL-col icircn

cele două loturi şi am constatat că la pacienţii cu SM valoarea media a raportului de

aterogenitate este semnificativ mai mare faţă de valoarea raportului determinată icircn lotul

martor (t-Test Plt 00001) Pentru raportul de aterogenitate studiat analiza curbei ROC a

arătat că valorile mai mari decacirct punctul de ldquocut-offrdquo de 431 prezic prezenţa SM cu cea mai

mare sensibilitate (6381 ) şi specificitate (6582)Valoarea AUC pentru indicele de

aterogenitate a fost de 0667 şi icircn studiul SM acest indice poate fi considerat un marker cu

acurateţe redusă Valoarea medie determinată a acidului uric la subiecţii fără SM a fost

semnificativ mai mică decacirct icircn lotul SM (t-Test Plt 00001) Curba ROC a arătat că valorile

acidului mai mari de 43 mgdl prezic diagnosticul de SM cu cea mai mare sensibilitate

(8107) şi specificitate (5328) Pentru acidul uric AUC a avut valoarea de 0655 şi

icircncadrează determinarea acidului uric seric icircn racircndul testelor cu acurateţe redusă (187)

Comparacircnd populaţiile de leucocite (tabel XXI) valoarea medie determinată a

numărului de Eo a fost semnificativ mai mare icircn lotul cu SM comparativ cu lotul martor (t-

Test Plt0001) Analizacircnd curba ROC trasată pentru valorile numărului de Eo am observat

că valorile ldquocut-offrdquo mai mari de 200 Eomm3

pot prezice prezenta SM cu cea mai mare

specificitate (7705) şi sensibilitate (3978) Pentru diagnosticul SM calculul ariei AUC a

arătat faptul că determinarea numărului de Eo are valoarea unui test diagnostic cu acurateţe

redusă (AUC = 0 589) Comparacircnd valorile medii ale fibrinogenului am calculat o diferenţă

statistic semnificativă icircntre cele două loturi valoarea medie a fibrinogenului fiind mai mare icircn

lotul SM ((t-Test P lt 00001) Cu ajutorul curbei ROC am observat că valorile fibrinogenului

mai mari de 306 mgdl prezic sindromul metabolic cu o sensibilitate de 7511 şi specificitate

de 6056 Fibrinogenul a fost icircncadrat icircn categoria markerilor inflamatori cu acurateţe

redusă AUC avacircnd valoarea de 0690 Icircn loturile de studiu am calculat AUC corespunzătoare

criteriilor de diagnostic ale SM Am observat că icircn cazul scorului Harmonised I

sensibilitatea şi specificitatea sunt de 100 iar AUC este egală cu 1000 Pentru cele cinci

criterii de diagnostic AUC a avut valori icircntre 0636 (pentru variabila HDL-col) şi 0804

(pentru variabila CA) (figura 431)

AUC ES 95 CI

Scor SM Harmonised I 1000 00000 0997 - 1000

CA (cm) 0804 00133 0781 - 0825

TAD (mmHg) 0666 00169 0639 - 0692

TAS (mmHg) 0757 00148 0732 - 0780

Glicemie (mgdl) 0742 00160 0717 - 0766

Trigliceride (mgdl) 0756 00175 0732 - 0780

HDL- colesterol 0636 00183 0609 - 0662

Figura 431 Analiza AUC criterii de diagnostic ale SM

Studiind figura 432 se observă că valoarea AUC pentru markerii studiaţi este cuprinsă

icircntre 0589 (icircn cazul variabilei Eo) şi 0690 (icircn cazul fibrinogenului) Icircn contextul SM

acurateţea acestor markeri ai inflamaţiei cronice şi disfuncţiei endoteliale poate fi considerată

redusă deoarece AUClt07 pentru toţi markerii investigaţi (figura 431) Totuşi valorile ariilor

parametrilor reprezentaţi icircn figura 431 sunt apropiate de valorile AUC ale variabilelor TAD

şi HDL-col (figura 432) şi deci pot fi utilizaţi pentru completarea diagnosticului de SM

AUC ES 95 CI

Non-HDL-colesterol 0605 00171 0580 - 0630

Col totalHDL-col 0607 00163 0642 - 0691

Acid uric 0655 00161 0630 - 0679

Fibrinogen 0690 00206 0658 - 0720

Eozinofile 0589 00176 0564 - 0615

Figura 432 AUC markeri ai SM inflamaţiei cronice şi aterogenezei

Discuţii

Status-ul proinflamator din SM asociat cu insulinorezistenţa şi disfuncţia endotelială

constituie o verigă de legătură dintre inflamaţie şi procesele metabolice complexe icircnsoţindu-

se de deteriorarea funcţiilor vasculare şi creşterea riscului de evenimente cardiovasculare

majore (2858) Studiul efectuat a arătat o diferenţă icircntre vacircrstele subiecţilor din cele două

loturi vacircrsta pacienţilor cu SM fiind semnificativ mai mare (Plt0001) comparativ cu subiecţii

normali confirmacircnd faptul menţionat că vacircrsta reprezintă unul din stimulii care agravează

inflamaţia cronică Am arătat că valorile fibrinogenului sunt mai mari icircn SM comparativ cu

Scor Harmonised I

0 20 40 60 80 100

0

20

40

60

80

100

100-Specificitate

Sen

sib

ilit

ate

Criterii diagnostic SM

0 20 40 60 80 100

0

20

40

60

80

100

100-Specificitate

Sens

ibili

tate

CA

TAD

TAS

Glicemie

Trigliceride

HDL-C

0 20 40 60 80 100

0

20

40

60

80

100

100-Specificitate

Sensi

bilita

te

Non-HDL-C

Col T HDL-C

Acid uric

Fibrinogen

Eozinofile

lotul martor atacirct la bărbaţi cacirct şi la femei icircn concordanţă cu studiile anterioare Evaluarea

fibrinogenului este importantă nu numai icircn SM pentru definirea contextului proinflamator şi

protrombotic ci şi icircn predicţia cardiovasculară la subiecţii normali Studiind populaţiile

leucocitare am obţinut diferenţe semnificative icircn cazul Eo valoarea medie a acestora fiind

semnificativ mai mare icircn lotul cu SM comparativ cu lotul martor (P lt 0001 figura 425B)

Implicarea Eo icircn SM s-a conturat icircn ultimul deceniu aceste celule fiind implicate icircn recrutarea

macrofagelor din ţesutul adipos Experimental s-a constatat că o creştere a Eo apărută ca

urmare a infectării cu helminţi sau stimulare cu IL-5 este urmată de icircmbunătăţirea toleranţei la

glucoză (199) Controlul pe care icircl exercită Eo asupra activării macrofagelor ar putea fi cheia

intervenţiei asupra obezităţii icircn viitorul apropiat(165199) Hiperuricemia asociata frecvent cu

SM este cunoscut ca un factor independent de risc cardiovascular (192 202) In concordanţă

cu aceasta afirmaţie in studiul nostru am constatat ca nivelul seric al acidului uric a fost mai

crescut in lotul cu SM diferenţa semnificativă din punct de vedere statistic (P lt 00001)

Dislipidemia aterogenă din sindromul metabolic şi diabetul zaharat se caracterizează prin

creşterea trigliceridelor şi a Non-HDL-col scăderea HDL-col creşterea numărului de

particule LDL modificate (185190) La pacienţii cu SM am descris un profil aterogenetic

cu risc crescut de evenimente cardiovasculare majore

STUDIUL RECEPTORILOR ACTIVAŢI DE INDUCTORII PROLIFERĂRII

PEROXIZOMILOR-ALPHA IcircN LEUCOCITELE CIRCULANTE

Ipoteza de lucru

Studii experimentale efectuate au arătat că rolul PPARα icircn ateroscleroză derivă din

implicarea acestor receptori icircn limitarea inflamaţiei Plecacircnd de la acest fundament ne-am

propus evidenţierea receptorilor nucleari activaţi de inductorii proliferării peroxizomilor-

alpha (PPARα) prin citometrie de flux icircn leucocitele din sacircngele periferic alături de

evaluarea acestei metode icircn cuantificarea expresiei relative a PPARα ca test diagnostic

precoce al modificărilor metabolice SM Studiul expresiei relative a receptorilor PPARα a

plecat de la premisa că dacă SM se caracterizează printr-un status inflamator cronic nivelul

de expresie a PPARα icircn leucocitele circulante este mai scăzut la pacienţii cu SM comparativ

cu subiecţii normali Referitor la studiul receptorului CD36 am plecat de la presupunerea că

nivelul de expresie al acestui receptor icircn SM este crescut dat fiind importanţa acestui receptor

icircn inflamaţia aterosclerotică Avacircnd icircn vedere efectele receptorilor amintiţi icircn

insulinorezistenţă şi aterogeneză am considerat necesară evaluarea prezenţei receptorului

nuclear PPARα icircn paralel cu studiul receptorului bdquoscavengerrdquo CD-36 prin metoda citometriei

icircn flux Astfel icircn studiul efectuat mi-am propus şi investigarea existenţei unei legături icircntre

nivelul de expresie al receptorilor PPARα şi cel al receptorului CD-36 De asemenea ne-am

icircndreptat atenţia spre stabilirea unor asocieri icircntre componentele clinice şi biochimice ale

sindromului metabolic şi nivelul intensităţilor de fluorescenţă ale PPARα şi CD-36 ca măsură

a expresiei relative a acestor receptori

Material și metodă

Studiul receptorilor PPARα icircn contextul sindromului metabolic s-a desfăşurat icircn

perioada 1012014 -28022014 pe baza metodologiei studiilor de tip caz-martor Am urmărit

identificarea unor diferenţe icircntre expresia receptorilor PPARα la pacienţii cu SM comparativ

cu subiecţii sănătoşi diferenţe care ar putea fi utile icircn diagnosticul precoce al SMRecrutarea

pacienţilor s-a efectuat din pacienţii prezentaţi pentru consultaţie la Cabinetul Individual

ldquoCMI Dr Popa Elenardquo situat icircn strada Ion Creanga din Iaşi Pentru studiul receptorilor

PPARα icircn sindromul metabolic au fost selecţionaţi un număr de 57 de subiecţi 26 de subiecţi

cu SM (constituind lotul SM) şi 31 subiecţi fără SM constituind lotul de control (Lot Non-

SM) Pentru studiul SM pacienţii au fost recrutaţi din masa de populaţie arondată cabinetului

de MF fără istoric de SM diabet zaharat boală cardio-vasculară aflați la primul diagnostic

de SM evaluarea completă a acestora fiind urmată de includerea icircn programul de

management cardiovascular şi metabolic conform Ghidurilor Terapeutice aflate icircn vigoare

Lot SM a) criterii de includerevacircrsta peste 18 ani recrutarea pe baza semnării

Consimţămacircntului liber informatSM nou-diagnosticat pe baza prezenţei a minim trei criterii

de diagnostic pentru SM conform Harmonised I b) criterii de excluderevacircrstă sub 18 ani

refuzul semnării Consimţămacircntului liber informat femei icircn perioada de graviditate sau de

lactaţie SM anterior diagnosticat istoric de diabet zaharat boală cardiovasculară constituită

tratament cu agonişti PPARα (ie fibraţi etc)

Lot martor (Non-SM) a) criterii de includerevacircrsta peste 18 ani recrutarea pe baza

semnării Consimţămacircntului liber informat absenţa diagnosticului de SM b) criterii de

excludere vacircrstă sub 18 ani refuzul semnării Consimţămacircntului liber informat femei icircn

perioada de graviditate sau de lactaţie

Studiul receptorilor PPARα a inclus două subetape

A Studiul componentelor sindromului metabolic conform criteriilor Harmonised I

Evaluarea clinică a participanţilor s-a desfăşurat icircn cadrul Cabinetului de Medicină de

Familie iar determinările hematologice şi biochimice s-au efectuat icircn Laboratorul

Ambulatorului Clinic de Specialitate al Spitalului Clinic de Urgenţă bdquoSf Spiridonrdquo Iaşi

B Evaluarea icircn citometrie de flux a nivelului relativ de expresie a PPARα şi CD36

Studiul receptorilor PPARα s-a desfăşurat icircn Laboratorul de Biologie Moleculară al

Institutului Regional de Oncologie Iaşi prin metoda citometriei icircn flux (19) Nivelul relativ de

expresie al receptorilor nucleari PPARα a fost determinat icircn diferite tipuri de leucocite

circulante polimorfonucleare (PMN) limfocite (Ly) Mo(Mo) şi eozinofile(Eo) Am utilizat o

metodă de citometrie icircn flux optimizată ldquoin houserdquo elaborată icircn cadrul Laboratorului de

Biologie Moleculară al IRO Iaşi Icircn cursul procesului de optimizare am testat mai multe

concentraţii ale anticorpului anti-PPARα 1100 1500 11500 14500 iar icircn urma

determinărilor efectuate şi a analizei statistice concentraţia 1500 a fost considerată optimă

pentru desfăşurarea studiului (tabel XXIII figura 51)

Tabel XXIII Optimizarea concentraţiilor Ac anti-PPARα Diferenţa

mediilor

valorilor

medii

PMN

Diferenţa

mediilor

mediane-

lor

PMN

Diferenţa

mediilor

valorilor

medii

Ly

Diferenţa

mediilor

mediane-

lor

Ly

Diferenţa

mediilor

valorilor

medii

Mo

Diferenţa

mediilor

mediane-

lor

Mo

Diferenţă 0 1300 1600 100 100 700 750

normal - 1100 650 1050 1050 1350 450 900

patologic 1500 2850 2750 3800 3600 2850 2400

11500 -1050 800 3500 3300 2250 1800

14500 2200 2150 1300 1100 2950 2850

AOptimizare

BRepetabilitate

Figura 51 Optimizarea concentraţiei anticorpului anti-PPARα

Icircn concordanţă cu literatura de specialitate icircn cercetarea efectuată intensitatea medie

de fluorescenţă (MFI) a fost utilizată ca măsură pentru evaluarea expresiei celulare a

receptorilor PPARα (212) Un exemplu de analiză a probelor este reprezentat icircn figura 52

Figura 52 Exemplu de analiză flowcitometrică pentru receptorul nuclear PPARα Graficul din stacircnga reprezintă distribuţia leucocitelor iar cel din dreapta ilustrează distribuţia

intensităţii de fluorescenţă pentru populaţiile de celule selectate

Intensitatea Medie a Fluorescenţei (MFI) a CD36 ca o măsură a nivelului relativ de

expresie a acestor receptori la nivelul membranei Mo a fost detectată printr-o metodă

convenţională pentru marcare de suprafaţă şi evaluare pe bază de citometrie icircn flux folosind

aceleaşi probe de sacircnge cu EDTA cu focalizare pe Mo şi utilizacircnd CD14 ca marker specific

pentru Mo (figura 53)

Figura 53Analiza

flowcitometrică

pentru marcajul

CD14 - CD36

Rezultate

Icircn cele două loturi au fost incluşi icircn studiu un număr de 57 de participanţi care au fost

investigaţi din punct clinic şi paraclinic Vacircrsta subiecţilor incluşi icircn studiu a fost cuprinsă

icircntre 18 şi 79 ani iar vacircrsta medie calculată a avut valoarea de 4805 plusmn 1587 ani Pentru sexul

masculin vacircrsta medie este de 4925plusmn1617 ani iar pentru sexul feminin 4689 plusmn1 5ani

diferenţa obţinută icircntre vacircrstele pacienţilor fiind statistic nesemnificativă (P = 085)

Analizacircnd vacircrstele subiecţilor din cele două loturi am observat că vacircrsta medie a pacienţilor

cu SM (5476 plusmn 1183 ani) a fost semnificativ mai mare (t-test P = 0003) decacirct icircn lotul

martor (4258 plusmn 169 ani) Pentru diagnosticul sindromului metabolic am calculat scorul de

SM bazacircndu-ne pe criteriile Harmonised I Conform criteriilor diagnostice din cei 57 de

subiecţi investigaţi un număr de 26 participanţi (46) au fost incluşi icircn lotul cu SM (Lot

SM) iar 31 de subiecţi(54) nu au prezentat acest sindrom constituind lotul martor (Lot

Non-SM) Din punct de vedere al repartiţiei pe sexe nu au existat diferenţe statistic

semnificative raportul bărbaţifemei fiind de 0961 Din totalul celor 28 de bărbaţi incluşi icircn

studiu 4285 (12 bărbaţi) au icircntrunit cel puţin trei criterii diagnostice pentru SM fiind

incluşi icircn lotul SM Icircn acelaşi timp 14 femei reprezentacircnd 4827 din subiecţii de sex

feminin au icircntrunit condiţiile pentru includerea icircn lotul pacienţilor cu SM Valoarea medie

determinată pentru scorul de SM a arătat prezenţa unor valori semnificativ statistic mai mari

din punct (t-test P lt 00001) icircn lotul SM (769plusmn176) comparativ cu lotul martor (174 plusmn

184) Am studiat comparativ media valorilor măsurate ale criteriilor componentelor SM

Analiza statistică a arătat valori semnificativ statistic mai mari pentru CA TG glicemie TAS

şi TAD (plt0001) icircn lotul SM comparativ cu lotul normal Concomitent calculul statistica

evidenţiat o scăderea semnificativă a HDL-colesterolului icircn lotul cu SM comparativ cu

subiecţii din lotul martor (Non-SM) Aplicacircnd testul z am comparat ponderea pacienţilor

diagnosticaţi cu HTA dislipidemie şi tulburări ale metabolismului glucidic icircn lotul SM versus

lot Non-SM şi am constatat prezenţa acestor afecţiuni icircntr-un procent mai mare semnificativ

statistic icircn lotul SM ((plt0001)

Utilizacircnd testul t Student am calculat diferenţele statistice şi icircntre alți parametri

studiaţi care sunt factori de risc cardio-vascular dar care nu sunt componente ale SM Icircn lotul

cu SM valorile acidului uric fibrinogenului Col total Non-HDL-col şi LDL-col au fost

semnificativ mai mari comparativ cu lotul martor (tabel XXVI) Analizacircnd valorile medii ale

populaţiilor de leucocite am identificat doar pentru populaţia de Eo diferenţe statistice icircntre

cele două loturi numărul Eo icircn lotul SM fiind semnificativ mai mare decacirct icircn lotul martorTot

pentru caracterizarea celor două loturi am analizat prezenţa antecedentelor

heredocolaterale (AHC) de diabet zaharat boala cardiovasculară şi dislipidemie pentru toţi

subiecţii investigaţi Astfel existenţa AHC de HTA a fost declarată de 2580 din subiecţii

incluşi icircn lotul martor respectiv de 5384 din numărul pacienţilor cu SM Antecedentele

heredocolaterale de dislipidemie au fost prezente la 3461 din pacienţii cu SM icircn timp ce icircn

lotul martor anamneza a evidenţiat aceste antecedente la 3548 din subiecţi

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα

Icircn cercetarea desfăşurată am utilizat intensitatea medie de fluorescenţă (MFI) ca

măsură a nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn leucocitele studiate Pentru

populaţiile de leucocite analiza computerizată a probelor luate icircn studiu a furnizat valori

pentru MFI a receptorilor PPARα icircn funcţie de cantitatea de anticorpi anti-PPARα marcaţi cu

fluorocrom care se leagă de aceste celule şi apoi sunt captaţi de citometru (figura 59)

A Lot Non - SM

B Lot SM

Figura 59 Analiza flowcitometrică pentru receptorii PPARα icircn leucocite A lot normal B lot SM

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Mo

Analiza probelor efectuată conform protocolului de lucru descris a arătat prezenţa

PPARα icircn Mo recoltate din sacircngele tuturor subiecţilor incluşi icircn această cercetare Pentru toţi

participanţii investigaţi analiza MFI a Ac anti - PPARα icircn populaţia de Mo (Mo) a arătat un

interval de variaţie icircntre [786 395] Valoarea medie a nivelului de expresie relativă a PPARα

calculată pentru Mo a fost de 23210 plusmn7860 Pentru ambele loturi de studiu pacienţilor cu

SM testul Testul Shapiro-Wilk a arătat distribuţia normală a valorilor obţinute pentru nivelul

de expresie al PPARα icircn Mo

Tabel XXVIII Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn Mo

Lot SM Lot Non-SM

N 26 31

Media 22819 23538

SD 5819 7717

Mediana 22400 22600

Minimum 12800 78600

Maximum 35800 37900

Percentila 25 18300 18300

Percentila 75 26200 30350

Pentru pacienţii din lotul SM valoarea medie a MFI icircn Mo a fost de 22819 plusmn 5880 iar

pentru lotul martor s-a calculat o valoare medie a MFI a Ac anti-PPARα de 23538 plusmn 7717

Distribuţia statistică a frecvenţei valorilor MFI obţinute pentru nivelul de expresie a PPARα

icircn Mo subiecţilor din cele două loturi a fost reprezentată icircn figura 511

Figura 511 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti-PPARα icircn Mo

Sub forma unei diagrame de control Shewhart am reprezentat variaţia intensităţii medii de

fluorescenţă pentru anticorpii anti-PPARα icircn MoVariaţia nivelului de expresie relativă a

receptorilor PPARα icircn Mo subiecţilor studiaţi este ilustrată icircn fig 512 513

Figura 512 Lot SM Variaţia

expresiei relative a PPARα icircn Mo

Număr pacienţi

26

Minim 128

Maxim 358

Media 22819

DS 5819

25 din 26 valori ale MFI s-au icircncadrat

icircn intervalul Media plusmn 2DS

Figura 513 Lot Non-SM Variaţia

expresiei relative a PPARα icircn Mo

Număr pacienţi 31

Minimum 786

Maximum 379

Media 23538

DS 7717

Cu excepţia unei singure

determinări valorile calculate s-au

icircncadrat icircn Media plusmn 2DS

Utilizacircnd testul parametric t-Student pentru variabilele cu distribuţie normală am

comparat valoarea medie a intensităţii de fluorescenţă a Ac anti-PPARα icircn lotul cu SM versus

subiecţi fără SM (Lot Non-SM) Analiza statistică efectuată nu a identificat diferenţe icircntre

50 100 150 200 250 300 350 400 450

0

5

10

15

20

25

30

35

MFI anti-PPAR a

Frecv

enta

relati

va (

)

Lot SM

0 50 100 150 200 250 300 350 400 450 500

0

5

10

15

20

25

30

35

MFI anti-PPAR a

Frecv

enta

relati

va (

)

Lot martor

1 6 11 16 21 26 31

0

50

100

150

200

250

300

350

400

450

MFI

anti-

PPAR

a

2282

1106

3458

518

4046

Media

LCI

LCI

1 6 11 16 21 26 31 36

-100

0

100

200

300

400

500

MFI a

nti-PP

AR

a

2354

810

3897

39

4669LCS

LCI

Media

cele două loturi icircn ceea ce priveşte expresia PPARα la nivelul Mo circulante (t- Test P=

069)

Studiul receptorilor PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de AHC şi dislipidemie

Nivelul de expresie al receptorilor PPARα α icircn Mo tinde să fie mai scăzut la subiecţii

cu AHC de HTA comparativ subiecţii care nu au declarat AHC de HTA (P= 006 fig 515)

AHC HTA

Număr 22

Mediana 19950

Percentila 25 17800

Percentila 75 22700

AHC HTA absente

Număr 35

Mediana 24800

Percentila 25 19025

Percentila 75 31700

Figura 515 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Mo funcţie de AHC de HTA

Nu s-au calculat diferenţe semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor

PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de dislipidemie atunci cacircnd aceştia au fost comparaţi cu

subiecţii fără AHC de tulburări ale metabolismului lipidic (t- Test P= 020)

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn limfocite

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn populaţia de Ly a

demonstrat prezenţa receptorilor PPARα icircn Ly tuturor subiecţilor studiaţi Pentru toţi

participanţii investigaţi analiza MFI a Ac anti - PPARα icircn populaţia de Ly a relevat un

interval de variaţie icircntre [748 314] iar valoarea medie a MFI a fost de 18058 plusmn 5600

Pentru ambele loturi aplicarea testului Shapiro-Wilk a evidenţiat distribuţia normală a

valorilor determinate pentru nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Ly Pentru

pacienţii cu SM valoarea medie a MFI determinată pentru expresia PPARα icircn populaţia de

Ly a fost de 18178 plusmn 61 16 iar pentru lotul martor a fost de 16800 plusmn 5229

Tabel XXX Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn limfocite

Lot SM Lot Non-SM

N 26 31

Media 181781 179574

SD 611694 522907

Mediana 165000 168000

Minimum 81300 74800

Maximum 314000 301000

Percentila 25 13400 - 145750

Percentila 75 21800 21700

Distribuţia frecvenţei valorilor MFI a Ac anti-PPARα icircn Ly este redată icircn figura 518

Figura 518 Distribuţia frecvenţelor relative a MFI a Ac anti-PPARα icircn Ly

94 din determinările efectuate pentru determinarea nivelului de expresie relativă al

MFI

ant

iPPA

R

a_Mo

190

200

210

220

230

240

250

260

270

280

DA NU

AHC HTA

P=006

50 89 128 167 206 244 283 322 361 400

0

5

10

15

20

25

30

35

MFI anti-PPAR a

Frecv

enta

relati

va (

)

Lot SM

0 50 100 150 200 250 300 350

0

5

10

15

20

25

30

35

40

MFI anti-PPAR a

Frec

venta

relat

iva (

)

Lot Non-SM

receptorilor PPARα icircn limfocitele subiecţilor cu SM s-au icircncadrat icircn intervalul Media plusmn 2DS

Figura 5 19 Lot SM Variaţia expresiei

relative a PPARα icircn Ly

Număr pacienţi 26

Minimum 813

Maximum 31400

Media 18178

Deviaţia Standard 6116

25 valori s-au icircncadrat icircn Media plusmn 2DS

Pentru lotul Non-SM diagrama de control (figura 520) a arătat toate valorile

determinate pentru lotul Non-SM se icircncadrează icircntre LCS şi LCI

Figura 520 Lot Non -SM Variaţia

expresiei relative a PPARα icircn Ly

Număr pacienţi 31

Minimum 748

Maximum 30100

Media 179574

Deviaţia Standard 5229

96 din valori icircncadrate icircn Media plusmn 2DS

Aplicarea testului t-Student pentru valorile medii ale intensităţii de fluorescenţă ale

PPARα icircn Ly nu a arătat existenţa unei diferenţe statistic semnificative icircntre lotul cu SM şi

lotul martor(t- Test P= 088)

Analiza receptorilor PPARα icircn Ly subiecţilor cu AHC de HTA şi dislipidemie

Studiind populaţiile de Ly la subiecţii care au prezentat AHC de hipertensiune

arterială analiza flowcitometrică a relevat existenţa unor valori mai mici pentru MFI la aceşti

subiecţi comparativ cu cei fără AHC de HTA (fig 522) deşi scăderea observată nu a

icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică (t- Test P = 009)

AHC HTA

Număr 22

Mediana 16000

Percentila 25 12700

Percentila 75 17100

AHC HTA absenţe

Număr 35

Mediana 18700

Percentila 25 14900

Percentila 75 23175

Figura 522 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Ly funcţie de AHC de HTA

Nu am calculat diferenţe statistic semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor

PPARα icircn populaţiile de Ly ale subiecţilor la care am identificat AHC de dislipidemie

comparativ cu cei care nu au declarat antecedente familiale de dislipidemie (t- Test P= 051)

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn neutrofile (PMN)

Analiza flowcitometrică a evidenţiat prezenţa PPARα icircn PMN recoltate din sacircngele

venos al tuturor participanţilor la studiu Pentru toţi subiecţii investigaţi analiza MFI a Ac -

PPARα icircn populaţia de PMN a relevat un interval de variaţie de [163419] iar valoarea medie

a MFI pentru Ac anti-PPARα a fost de 26392 plusmn 7064 Testul Shapiro-Wilk a arătat o

distribuţie normală a valorilor intensităţii medii de fluorescenţă a anticorpilor anti-PPARα atacirct

icircn lotul pacienţilor cu SM cacirct şi icircn lotul martor

1 6 11 16 21 26 31

-50

0

50

100

150

200

250

300

350

400

MFI

anti-

PPAR

a

1818

595

3041

-17

3653

Media+2DS

Media- 2DS

1 6 11 16 21 26 31 36

0

50

100

150

200

250

300

350

MFI

ant

i-PPA

R

a

1796

750

2841

227

3364

Media+2DS

Media

Media- 2DS

MFI

anti-

PPAR

a Ly

130

140

150

160

170

180

190

200

210

DA NU

AHC HTA

P=009

Tabel XXXII Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn PMN

Lot SM Lot Non-SM

N 26 31

Media 26273 26480

SD 6915 7088

Mediana 25900 25500

Minimum 17200 16300

Maximum 39500 41900

Percentila 25 19800 19600

Percentila 75 30500 31500

Icircn cele două loturi distribuţia frecvenţei valorilor nivelului relativ de expresie a

receptorilor PPARα icircn PMN a fost reprezentată sub formă de histograme (fig 525)

Figura 525 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti-PPARα icircn PMN

Pentru cei 26 de pacienţi din lotul cu SM a valoarea medie a nivelului de expresie

relativă a receptorilor PPARα icircn PMN a fost de 26273 plusmn 6915 Studiind diagrama Shewhart

din figura 526 se observă că toate valorile obţinute pentru nivelul de expresie relativă

PPARα icircn PMN investigate se icircncadrează icircntre limitele definite de valorile medii plusmn 2DS

Figura 526 Lot SM

Variaţia expresiei relative a PPARα icircn

PMN

Număr pacienţi 26

Minimum 17200

Maximum 39500

Media 26273

Deviaţia Standard 6915

Valorile MFI icircncadrate icircn Media plusmn 2DS

Pentru lotul martor valoarea medie calculată a MFI a anticorpilor anti-PPARα a fost de

26480 plusmn 7088 peste 95 din valorile MFI fiind cuprinse icircn Media plusmn 2DS (figura 527)

Figura 527 Lot Non-SM Variaţia expresiei

relative a PPARα icircn PMN

Număr pacienţi 31

Minimum 16300

Maximum 41900

Media 26480

Deviaţia Standard 7088

30 valoriicircn Media plusmn 2DS

Pentru PMN analiza statistica nu a arătat existenţa unei diferenţe statistic semnificative icircntre

nivelul de expresie relativă a PPARα la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii din lotul

Non-SM (t- Test P= 090) Studiind populaţiile de PMN la subiecţii care au prezentat AHC

de HTA nu am calculat o diferenţă statistic semnificativă icircntre expresia receptorilor PPARα

la subiecţii cu istoric familial de hipertensiune arterială comparativ cu cei pentru care nu s-au

notat AHC de HTA (t- Test P= 013)De asemenea am identificat diferenţe icircntre nivelul de

expresie al PPARα icircn PMN subiecţilor care prezentau AHC de dislipidemie comparativ cu

cei fără AHC de dislipidemie (t- Test P= 017)

50 100 150 200 250 300 350 400 450 500

0

5

10

15

20

25

30

35

MFI anti-PPAR a

Frecve

nta rel

ativa (

)

Lot SM

50 100 150 200 250 300 350 400 450 500

0

5

10

15

20

25

30

MFI anti-PPAR a

Frecv

enta

relati

va (

)

Lot Non-SM

1 6 11 16 21 26 31

0

50

100

150

200

250

300

350

400

450

500

MFI

anti-

PPA

R

a

2627

1244

4010

553

4702

Media + 2DS

Media - 2 DS

Media

1 6 11 16 21 26 31 36

0

50

100

150

200

250

300

350

400

450

500

MFI

anti-

PPAR

a

2648

1230

4066

522

4774

Media+ 2DS

Media - 2DS

Media

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile Tabel XXXIV Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn Eo

Lot SM Lot Non-SM

N 26 31

Mediaplusmn SD 141057 plusmn 47604 172209 plusmn 37565

Mediana 142450 171300

Minimum 35000 68500

Maximum 233700 250600

Percentila 25 119300 153225

Percentila 75 169700 199550

Am studiat nivelul relativ de expresie a receptorilor PPARα icircn Eo iar rezultatele au

fost figurate sub forma de histograme (figura 532)

Figura 532 Distribuţia frecventelor relative ale valorilor MFI anti- PPARα icircn Eo

Din diagrama Shewhart (figura 533) se observă că toate valorile determinate pentru

nivelul de expresie relativă a PPARα icircn Eo pentru lotul SM s-au icircncadrat icircn [Media plusmn 3 DS]

peste 90 din determinări fiind cuprinse icircn [Media plusmn 2 DS] iar icircn [Media plusmn 1 DS] sunt

incluse peste 65 din valorile MFI

Figura 533 Lot SM

Variaţia expresiei relative a PPARα icircn Eo

Număr pacienţi 26

Minimum 35000

Maximum 233700

Media 141057

Deviaţia Standard 47604

24 valori icircncadrat eicircn [Media plusmn 2DS]

Pentru subiecţii incluşi icircn lotul martor analiza diagramei (figura 534) a arătat că

toate cele 31 de valori ale MFI pentru PPARα icircn Eo se icircncadrează icircn [Media plusmn 3DS] iar 30

dintre acestea se icircncadrează icircn [ Media plusmn 2 DS]

Figura 534 Lot Non -SM

Variaţia expresiei relative a PPARα icircn Eo

Număr pacienţi 31

Minimum 685

Maximum 2506

Media 172209

Deviaţia Standard 375 65

30 valori icircncadrate icircn [Media plusmn 2DS]

Comparacircnd subiecţii cu SM cu cei din lotul martor am observat o scădere

semnificativă statistic a MFI a Ac anti - PPARα icircn Eo pentru pacienţiir cu SM ( figura 535)

PPARα Eo Lot Non-SM

Număr 31

Mediana 171300

Percentila 25 152325

Percentila 75 199550

PPARα Eo Lot SM

Număr 26

Mediana 142450

Percentila 25 119300

Percentila 75 169700

Figura 5 35 Comparaţie icircntre nivelul de expresie a PPARα icircn Eo

0 500 1000 1500 2000 2500 3000

0

10

20

30

40

50

MFI anti-PPAR a

Frecvent

a relativa

()

Lot SM

400 800 1200 1600 2000 2400 2800

0

5

10

15

20

25

30

35

40

45

MFI anti-PPAR a

Frecenta

relativa

()

Lot Non-SM

1 6 11 16 21 26 31

-500

0

500

1000

1500

2000

2500

3000

MFI a

nti-PP

AR

a

14106

4765

23447

94

28117

Media + 2DS

Media- 2DS

LCI

LCS

1 6 11 16 21 26 31 36

500

1000

1500

2000

2500

3000

MFI an

ti-PPA

R a

17221

9708

24734

5951

28490

LCI

Media-2DS

Media

Media +2 DS

LCS

1200

1300

1400

1500

1600

1700

1800

1900

Lot SM Lot Non-SM

P=00072

Cu ajutorul curbei ROC am evaluat posibilitatea utilizării MFI a Ac anti - PPARα icircn

Eo ca marker pentru diagnosticul SM Valoarea MFI a Ac anti - PPARα icircn Eo care prezice cu

cea mai mare acurateţe prezenţa SM a fost de 1533 (punctul de ldquocut-offrdquo) pentru care am

calculat o sensibilitate de 5652 şi o specificitate de 7778 Calculul ariei AUC a furnizat

valoarea de 0663 şi deci determinarea parametrului MFI anti- PPARα icircn Eo are valoarea

unui test cu acurateţe redusatilde icircn diagnosticul SM Studiind expresia PPARα icircn Eo la subiecţii

care au prezentat AHC de HTA am observat o scădere semnificativă statistic (P = 00023) a

expresiei PPARα la subiecţii cu istoric familial de HTA comparativ cu subiecţii fatilderatilde AHC de

HTA (figura 537)

AHC HTA

Număr 22

Mediana 148800

Percentila 25 116425

Percentila 75 170750

AHC HTA absente

Număr 35

Mediana 170850

Percentila 25 143700

Percentila 75 195000

Figura 537 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Eo funcţie de AHC de HTA

Studiind subiecţii cu AHC declarate de dislipidemie nu am identificat diferenţe icircntre

nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Eo subiecţilor cu AHC de dislipidemie

comparativ cu cei care nu au declarat prezenţa AHC de dislipidemie (t - Test P = 067)

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor CD36

Am studiat expresia receptorilor CD36 icircn Mo subiecţilor incluşi icircn studiu

Lot Non - SM

BLot SM

Figura 539 Analiza flowcitometrica pentru receptorii CD36 icircn Mo

Pentru toţi participanţii la studiu valorile MFI au variat icircn intervalul [817 6933] iar

valoarea medie a MFI a Ac anti-CD36 a fost de 397133 plusmn 120902 Tabel XXXVII Statistică descriptivă pentru a CD36 icircn Mo

Lot SM Lot Non-SM

Media 429034 370377

Deviatia Standard 109051 125514

Mediana 411000 362800

Minimum 266400 81700

Maximum 693300 616800

Percentila 25 346200 273750

Percentila 75 469000 453300

Distribuţia frecvenţelor relative a MFI au fost prezentate sub formă histogramelor

Figura 541 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti - CD36 icircn Mo

MFI

ant

i-PPA

R a Eo

1000

1100

1200

1300

1400

1500

1600

1700

1800

1900

DA NU

AHC HTA

P=00023

1000 2000 3000 4000 5000 6000 7000 8000

0

5

10

15

20

25

MFI anti-CD36

Frecve

nta rela

tiva (

)

Lot SM

0 1778 3556 5333 7111

0

5

10

15

20

25

30

35

MFI anti-CD36

Frecve

nta rel

ativa (

)

Lot Non - SM

Referitor la lotul SM 92 din valorile MFI a Ac anti- CD36 s-au icircncadrat icircn

intervalul Media plusmn 2 DS (figura 542) iar pentru lotul martor peste 90 dintre acestea icircn

Media plusmn 2 DS (figura 543)

Figura 542 Lot SM

Variaţia MFI anti-CD36 icircn Mo

Număr pacienţi 26

Minimum 2664

Maximum 6933

Media 429034

Deviaţia Standard 109051

Figura 543 Lot Non -SM

Variaţia MFI anti- CD36 icircn Mo

Număr 31

Minimum 81700

Maximum 616800

Media 370377

Deviaţia Standard 125514

Comparacircnd subiecţii cu SM cu cei din lotul normal am constatat o tendinţă de creştere

a expresiei CD36 icircn lotul cu SM((t - Test P= 0067)

MFI anti - CD36 Lot Non-SM

Număr 31

Mediana 3628

Percentila 25 2737

Percentila 75 4533

MFI anti - CD36 Lot SM

Număr 26

Mediana 4110

Percentila 25 3462

Percentila 75 4690

Figura 544 Comparaţie icircntre cel două loturi privind MFI anti - CD36 icircn Mo

Referindu-ne la subiecţii cu AHC de HTA am observat o tendinţă de creştere a

valorilor MFI anti-CD36 comparativ cu cei care nu au avut AHC de HTA (t - Test P = 0 08)

AHC HTA

Număr 22

Mediana 442800

Percentila 25 355275

Percentila 75 519475

AHC HTA absenţe

Număr 35

Mediana 377400

Percentila 25 316900

Percentila 75 443400

Figura 545 Comparaţie icircntre expresia CD36 icircn Mo funcţie de AHC de HTA

Nu s-au calculat diferenţe semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor

PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de dislipidemie atunci cacircnd aceştia au fost comparaţi cu

subiecţii fără AHC de dislipidemie (t - Test P=031)

Corelaţii icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα si CD36

Studiind valorile intensităţii medii de fluorescenţă a Ac anti-PPARα icircn Mo Ly şi

PMN am observat că nivelul de expresie celularatilde a PPARα icircn Mo Ly şi PMN sunt corelate

puternic pozitiv atacirct icircn lotul SM cacirct şi icircn lotul martor(fig547 548)

1 6 11 16 21 26 31

0

1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

8000

Pacienti

MFI a

nti-CD

36

42903

21093

64714

10188

75619

LCI

Media

LCS1 6 11 16 21 26 31 36

-1000

0

1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

8000

MFI a

nti- C

D36

37038

11935

62141

-616

74692Media + 2 DS

Media

Media - 2 DS

3200

3400

3600

3800

4000

4200

4400

4600

4800

Lot SM Lot Non-SM

P = 00676

MFI

anti-

CD36

3400

3600

3800

4000

4200

4400

4600

4800

5000

DA NU

AHC HTA

P = 008

Figura 547 Studiul relatiilor dintre

receptorii PPARα icircn SM A Mo vs PMN B Mo vs Ly

C PMN vs Ly Graficul ilustrează coeficienţii r P dreapta de

regresie (linia centrala) intervalul de icircncredere

95 şi intervalul de predicţie 95

Figura 548 Corelaţii icircntre receptorii PPARα icircn lotul

martor

A Mo vs PMN

B Mo vs Ly

C PMN vs Ly

Tot pentru lotul SM cacircnd am evaluat relaţia dintre nivelul de expresie relativă a

receptorilor PPARα icircn Eo şi nivelul de expresie relativa a receptorilor CD 36 am obţinut o

corelaţie negativă (r = - 05 P = 001) (fig 549 A)

50 100 150 200 250 300 350 50

100

150

200

250

300

350

400

450

500

PPARα Ly

PPARα PMN

y = 56641 + 1159 x r = 086 P lt 0001

C

50 100 150 200 250 300 350 400 0

50

100

150

200

250

300

350

PPARα Mo

PPARα Ly

y = 36665 + 0607 x r = 090 P lt 0001

B

150 200 250 300 350 400 450 0

50 100 150 200 250 300 350 400 450 500

PPARα PMN

PPARα Mo

y = 2505 + 0879 x r = 081 P lt 0001

A

50 100 150 200 250 300 350

50 100 150 200 250 300 350 400 450 500

PPARα Ly

PPARα PMN

y = 95668 + 0919 x r = 081 P lt 0001

C

100 150 200 250 300 350 400

0

50

100

150

200

250

300

350

400

PPARα Mo

PPARα Ly

y = -7503 + 0829 x r = 079 P lt 0001

B

100 150 200 250 300 350 400

50

100

150

200

250

300

350

400

450

500

PPARα Mo

PPARα PMN

y = 61384 + 0882 r = 074 P lt 0001

A

Figura 549 Corelaţii icircntre expresia PPARα icircn Eo şi alte tipuri de receptori investigaţi A PPARα Eo şi CD 36 (Lot SM) B PPARα Eo şi PPARα Mo( Lot Non-SM)

Icircn lotul martor am identificat o asociere moderată pozitivă (r = 038 P = 0033) icircntre

nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Eo şi Mo (figura 549B) corelaţie absentă icircn

lotul pacienţilor cu SM

Corelaţii dintre receptorii studiaţi şi componentele sindromului metabolic

Icircn lotul de control analiza statistică a relevat faptul că icircntre circumferinţa

abdominală (CA ) şi nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Mo Ly şi PMN există o

corelaţie inversă adică scăderea expresiei PPARα la nivelul acestor populatii celulare ar fi

icircnsoţită de creşterea CA (figura 550

Figura 550Corelaţii dintre receptorii

PPARα si CA A Mo B Ly C PMN

La pacienţii cu SM am notat o corelatie moderată negativă statistic semnificativă

icircntre TG şi valorile MFI a Ac anti- PPARα icircn Mo şi Ly( fig 551)

150 200 250 300 350 400 450 50

60

70

80

90

100

110

PPARα PMN

CA r = - 040 P = 0024

C

50 100 150 200 250 300 350 50

60

70

80

90

100

110

PPARα Ly

CA r = - 046 P = 0009

B

50 100 150 200 250 300 350 400 50

60

70

80

90

100

110

PPARα Mo

CA r = - 042 P = 0017

A

50 100 150 200 250 300 350 400 500

1000

1500

2000

2500

3000

PPARα Mo

PPARα Eo

r = 038 P = 0033

B

0 500 1000 1500 2000 2500 1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

8000

PPARα Eo

CD36

r = 050 P = 0010

A

Figura 551 Lot SM Corelaţie icircntre expresia PPARα şi TG (A Mo B Ly)

Analizand corelatia dintre receptorii CD36 si valorile TA la pacientii cu SM am observat

o asociere pozitivă asteptată intre TAD si nivelul de expresie al receptorilor CD36 (fig 552)

Figura 552 Lot SM Corelaţii icircntre expresia

receptorilor CD36 şi valorile tensiunii arteriale

diastolice

Studiind corelaţiile dintre receptorii PPARα şi HDL-col la subiecţii din lotul martor am

notat o asociere pozitivă icircntre expresia PPARα icircn Mo şi Ly cu HDL-col (fig 553)

Figura 553 Lot martor Corelaţii icircntre HDL-col şi expresia PPARα icircn Mo(A) Ly(B)

Icircn lotul normal am evidenţiat corelaţii pozitive moderate dar semnificative statistic icircntre

CA şi valorile TAS (r = 062 P lt 0001) respectiv TAD (r = 050 P=0004) precum şi icircntre

CA şi glicemia subiecţilor normali (r = 052 P = 0003) Aceste date icircmpreună cu relaţia

invers proporţională identificată icircntre HDL-col şi CA (r = 050 P = 001) susţin validitatea

acestui studiu Icircn lotul subiecţilor cu SM am observat o corelaţie moderat pozitivă icircntre

expresia PPARα icircn populaţiiile de Mo şi Eo şi concentraţia a HDL-col (fig 554)

B

100 150 200 250 300 350 20

30

40

50

60

70

80

90

100

PPARα Ly

HDL-col-(mgdl)

r = 036 P = 0046

A

150 200 250 300 350 400 20

30

40

50

60

70

80

90

100

PPARα Mo

HDL-col-(mgd)l

r = 035 P = 005

70 75 80 85 90 95 100 1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

8000

TAD (mmHg)

CD36

r = 048 P = 0013

B

50 100 150 200 250 300 350 -100

0

100

200

300

400

500

PPARα Ly

TG(mgdl)

r = - 042 P = 003

A

50 100 150 200 250 300 350 400 -100

0

100

200

300

400

500

PPARα Mo

TG ( mgdl) r =- 0 43 P = 0027

Figura 554 Corelaţii icircn SM icircntre HDL-col şi expresia PPARα icircn Mo (A) şi Eo(B)

Corelaţii icircntre nivelul de expresie relativă a PPARα şi markeri ai disfuncţiei

endoteliale şi inflamaţiei cronice

Deşi nu a icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică am reţinut corelaţia invers

proporţională (r = - 0331 P = 006) dintre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα

icircn PMN şi concentraţia serică a Non-HDL-colesterolului

Studiind relaţiile dintre parametri icircn lotul de pacienţi cu SM am observat o corelaţie

moderată invers proporţională icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Eo şi

acidul uric seric (figura 555 A) corelaţie absentă la subiecţii fără SM

Figura 555 Lot SM corelaţia dintre expresia PPARα icircn Eo şi acidul uric (A) respectiv

PPARα şi fibrinogen (B)

Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P=008) am notat pentru

pacienţii cu SM corelaţia invers proporţională dintre expresia PPARα icircn Eo şi concentraţia

serică a fibrinogenului ( figura 555B)

V5 Discuţii

Icircn cadrul lucrării de doctorat am studiat nivelul de expresie relativă a PPARα icircn

leucocitele pacienţilor cu SM comparativ cu cea a subiecţilor normali Expresia PPARα a fost

studiată icircn paralel cu cea a CD36 glicoproteină exprimată pe suprafaţa a numeroase celule

din organismul uman inclusiv pe cea a Mo şi macrofagelor Prin funcţia sa de receptor pentru

particulele oxidate de LDL CD36 cunoscut ca bdquoscavenger receptorrdquo de clasa B sau

bdquotrombospodin receptorrdquo contribuie la dezvoltarea inflamaţiei de la nivel endotelial şi

formarea plăcii de ateroscleroză Referitor la studiul PPARα icircn Eo icircn sindromul metabolic

menţionăm că studiul nostru este primul care arată că nivelul de expresie a proteinei PPARα

icircn Eo măsurat prin citometrie icircn flux este semnificativ mai redus la pacienţii care sunt

diagnosticaţi cu acest sindrom De asemenea icircn lotul cu SM cercetat icircn cadrul studiului

receptorilor PPARα numărul Eo circulante a fost semnificativ mai crescut la pacienţii cu SM

B

0 500 1000 1500 2000 2500 200

250

300

350

400

450

PPARα Eo o

Fibrinogen mgdl

r =- 036 P = 008

0 500 1000 1500 2000 2500 1 2 3 4 5 6 7 8 9

10 11

PPARα Eo_

Acid uric(mgdl) r = 048 P = 0014 A

0 500 1000 1500 2000 2500 10

20

30

40

50

60

70

80

PPARα Eo

HDL(mgdl)

r = 044 P = 0024

B

100 150 200 250 300 350 400 10

20

30

40

50

60

70

80

PPARα Mo

HDL( mgdl)

r = 046 P = 0019

A

(P = 003) Aceste constatări conduc la ipoteza că Eo joacă un rol special icircn mecanismele

patogenice declanşate icircn sindromul metabolic şi că receptorii PPARα sunt importanţi icircn

implicarea Eo icircn obezitate şi insulinorezistenţă Creşterea numărului de Eo circulante este

urmată de eliberarea mediatorilor proinflamatori iar reducerea expresiei PPARα icircn Eo

determină perturbarea mecanismelor de control al inflamaţiei cu exacerbarea cascadei

proinflamatorii Consecutiv se agravează disfuncţia endotelială şi se accelerează progresia

leziunilor de ateroscleroză Extrapolacircnd aceste ipoteze putem spune că asocierea raportată

dintre boala ischemică coronariană şi Eo poate fi şi consecinţa exacerbării cascadei

proinflamatorii de la nivel vascular produsă datorită scăderii expresiei PPARα icircn Eo iar

creşterea numărului de Eo circulante poate reprezenta o adaptare a organismului uman care

icircncearcă să suplinească deficitul de receptori PPARα Analizacircnd curba ROC pentru

intensităţile medii de fluorescenţă determinate pentru anticorpii anti- PPARα icircn Eo am

obţinut pentru acest biomarker o sensibilitate a testului de 565 şi o specificitate de 778

pentru un punct de cut-off de 1533 ( figura 536 ) Deşi aria AUC (Aria under the curve) egală

cu 0663 icircncadrează acest test ca avacircnd o acurateţe redusă observăm că că această valoare

este apropiată de determinările AUC pentru alţi factori (fibrinogen raport de aterogenitate

acid uric non- HDL-colesterol) cunoscuţi ca fiind implicaţi icircn aterogeneză şi inflamaţia

cronică (figura 431) Aceste remarci alături de faptul că icircn studiul receptorilor PPARα icircn

leucocite am inclus subiecţi la primul diagnostic de SM creează premisa integrării

determinării expresiei relative a receptorilor PPARα icircn diagnosticul complex al sindromului

metabolic Putem spune că icircn final studiul expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofilele

circulante se dovedește a fi util icircn diagnosticul precoce la nivel molecular al SM permiţacircnd

identificarea timpurie a unor indivizi cu risc cardiometabolic crescut Astfel intervenţia

precoce asupra subiecţilor cu deficit de PPARα icircn Eo contribuie la managementul eficient al

afecţiunilor degenerative icircn care inflamaţia cronică icircndeplineşte un rol primordial Referitor

la populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările efectuate prin citometrie de flux nu au

arătat existenţa unor diferenţe statistice icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα

la subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali Rezultatele noastre pot fi

consecinţa caracteristicilor loturilor studiate (icircn studiul nostru au fost incluşi subiecţi recrutaţi

la primul diagnostic de SM şi icircn absenţa stimulării receptorilor PPARα cu droguri agoniste

PPARα) dar icircn acelaşi timp pot apare diferenţe datorită metodei utilizate (231 232 233)

Făcacircnd o paralelă cu un studiu publicat icircn 2013 icircn Europa (231) care a arătat creşterea

nivelului de expresie al PPARα icircn Ly şi Mo observăm că deşi numărul de subiecţi a fost

aproximativ egal (57 participanţi icircn studiul nostru 60 icircn studiul DAmore) subiecţii icircn studiul

amintit au fost recrutaţi dintr-o clinică cu profil medical la primul diagnostic de SM icircn timp

ce metoda utilizată a fost PCR (Polymerase Chain Reaction) mult mai fidelă decacirct citometria

icircn flux icircn studiul receptorilor nucleari De asemenea DAmore nu investighează expresia

PPARα icircn Eo şi PMN icircn cercetare fiind incluse doar celulele CD14+ (predominant Mo) şi

CD14- (predominant Ly) Deşi nu am obţinut diferenţe statistic semnificative icircntre cele două

loturi referitoare la nivelul de expresie relativă a PPARα icircn Mo Ly şi PMN am observat

corelaţii puternice semnificative statistic icircntre expresia receptorilor PPARα icircn aceste tipuri

celulare Rezultatele obţinute sugerează existenţa unui mecanism diferit molecular de control

icircn eozinofile care reglează cantitatea de proteină PPARα icircn eozinofile versus alte tipuri de

leucocite (la pacienţii cu SM) şi acest lucru este icircn concordanţă cu cercetările care descriu

expresia PPARα mRNA icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale

bronşice keratinocite) Studiind prin citometrie de flux nivelul de expresie relativă a

receptorului CD36 la nivelul Mo am arătat prezenţa acestuia icircn Mo tuturor subiecţilor

investigaţi Analizacircnd valorile intensităţii medii de fluorescenţă a CD36 icircn loturile studiate

am observat o tendinţă de creştere la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali

confirmacircnd implicarea receptorului CD36 icircn patogeneza acestuia Referitor la expresia

receptorului CD36 rezultatele obţinute sunt icircn consens cu studii anterioare care au arătat

creşterea expresiei CD36 la pacienţii cu SM şi diabet zaharat Astfel pe lacircngă diferenţa icircn

expresia CD36 s-au raportat şi corelaţii inverse icircntre expresia proteinei CD36 şi nivelul

adiponectinei Acelaşi studiu a evidenţiat o corelaţie pozitivă intre expresia CD36 cu expresia

receptorilor PPAR gamma relaţia cu PPARα nefiind investigată

Analiza de subgrup a relaţiilor dintre componentele SM și elementele moleculare

proinflamatorii studiate a relevat prezenţa unor asocieri semnificativ statistice icircntre acestea

Se argumentează astfel că veridicitatea studiului este susţinută de interdependenţele statistice

ale componentelor SM Determinarea coeficientului de corelaţie Icircn studiul nostru nivelul de

expresie relativă a PPARα s-a corelat moderat negativ (figura 550) cu CA a subiecţilor din

lotul normal pentru populaţiile celulare de Mo (r = - 0420 P = 001) Ly (r = - 046 P =

0009) şi PMN (r = - 040 P = 0024) date care sunt icircn concordanţă cu studiile care arată

rolul PPARα icircn furnizarea energiei prin beta-oxidarea acizilor graşi Icircn acelaşi timp icircn lotul

pacienţilor cu SM nu am identificat prezenţa unei asocieri icircntre nivelul de expresie relativă a

PPARα şi valoarea măsurată a CA Asocierea dintre expresia relativă a PPARα cu obezitatea

de tip central completează datele existente referitoare la reglarea homeostaziei energetice

conturacircnd un mecanism de control deficitar al aportului caloric al SM Icircn condiţiile icircn care

rezultatele obţinute prin metoda citometriei icircn flux nu au arătat existenţa unei corelaţii intre

expresia PPARα şi CA la pacienţii cu SM considerăm că ar fi necesar studiul

polimorfismului genei PPARA care ar putea aduce informaţii importante cu privire la

implicarea acestor receptori icircn apariţia obezităţii de tip central Subliniem acest lucru deoarece

obezitatea este o boală plurifactorială icircn care pe lacircngă factorii ereditari sunt implicaţi factori

de mediu psihologici şi sociali (245) Existenţa unei componente genetice a aterosclerozei

este legată şi de prezenţa unor variante ale genei PPARA asociate cu creşterea incidenţei bolii

cardiovasculare (82) şi a SM (249) Icircn studiul nostru am constatat o scădere statistic

semnificativă a nivelului expresiei relative a receptorilor PPARα icircn Eo la subiecţii cu

antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială comparativ cu subiecţii fără istoric

familial de hipertensiune (figura 537) Deşi diferenţele calculate icircntre loturile studiate nu au

icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică la subiecţii care au declarat prezenţa

antecedentelor familiale de hipertensiune arterială remarcăm o tendinţă de scădere a

intensităţii medii de fluorescenţă pentru Ac anti-PPARα la nivelul Mo (figura 515 P = 006

) icircn timp ce expresia relativă a CD36 icircnregistrează o creştere la acesti subiecţi (figura 545 P

= 008) Icircn contextul riscului cardiovascular foarte icircnalt al pacienţilor cu SM amintim şi

existenţa corelaţiei pozitive dintre valorile tensiunii arteriale diastolice şi expresia relativă a

receptorului CD36 (r = 0483 P = 0013) Această constatare este icircn consens cu studiile care

au arătat că forma solubilă circulantă a CD36 este asociată cu factorii de risc cardiovasculari

fiind propusă ca un marker precoce al aterosclerozei Activarea PPARα este asociată cu

modularea metabolismului lipidic iar agoniştii PPARα sunt utilizaţi icircn mod curent pentru

tratamentul dislipidemiei Sub acţiunea agoniştilor PPARα se obţine o icircmbunătăţire a funcţiei

endoteliale şi a parametrilor reologici funcţiile pleiotropice ale agoniştilor PPARα fiind

dovedite icircn trialuri clinice controlate Icircn populaţiile de Mo şi Ly la pacienţii cu SM

cercetarea noastră a evidenţiat o asociere negativă icircntre nivelul de expresie relativă a

receptorilor PPARα şi concentraţia TG serice (figura 551) Astfel scăderea expresiei

receptorilor PPARα este asociată cu creşterea nivelului TG serice contribuind la profilul

lipidic aterogen din SM Icircn conformitate cu literatura de specialitate icircn studiul efectuat prin

metoda citometriei icircn flux am găsit prezenţa asocierii icircntre nivelul de expresie al PPARα şi

HDL-colesterol Corelaţia pozitivă dintre nivelul de expresie relativă PPARα şi concentraţia

HDL-colesterolului a fost observată icircn lotul martor icircn populaţiile de Mo (r = 035 P = 005)

şi Ly ( r = 036 P = 004) (figura 553) susţinacircnd faptul că stimularea receptorilor PPARα

este legată de creşterea nivelului seric al lipoproteinelor cu densitate crescută La pacienţii cu

SM corelaţia dintre expresia PPARα şi HDL-colesterol a fost evidenţiată icircn populaţiile de Mo

(r = 046 P = 0019) şi eozinofile (r = 044 P = 0024) Se desprinde concluzia că icircn

sindromul metabolic scăderea concentraţiei HDL-colesterol este legată de diminuarea

nivelului de expresie relativă a receptorilor nucleari PPARα icircntărind afirmaţiile legate de

rolul acestor receptori icircn progresia bolilor cardiovasculare Studiind reactanţii de fază acută

analiza statistică a relevat o diferenţă semnificativă din punct de vedere statistic icircntre valorile

fibrinogenului la pacienţii cu SM atunci cacircnd au fost comparaţi cu subiecţii fără SM

(Capitolul IV4 P lt0 001 figura 427A) De asemenea icircn Capitolul V dedicat studiul

expresiei relative a receptorilor PPARα studiul valorilor fibrinogenului a arătat creşterea

acestui reactant de faza acută icircn lotul cu SM comparativ cu lotul martor (P lt0 0001) Icircn

studiul nostru am calculat o corelaţie invers proporţionala (r = - -036 fig 555B) icircntre

nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile şi concentraţia serică a

fibrinogenului Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P = 008) am reţinut

această asociere deoarece am demonstrat că nivelul de expresie relativă al receptorilor

PPARα icircn eozinofile este mai scăzut icircn sindromul metabolic iar sindromul metabolic este

caracterizat printr-un status inflamator cronic status caracterizat şi de creşterea concentraţiei

serice a fibrinogenului De asemenea notam ca această corelaţie negativă se află icircn

concordanţă cu studiile care arata că tratamentul cu agonişti PPARα (fibraţi) determina

scăderea nivelului seric al fibrinogenului contribuind la diminuarea inflamaţiei cronice din

sindromul metabolic şi icircn consecinţă amelioracircnd insulinorezistenţa

LIMITE ȘI DIFICULTĂȚI IcircN CERCETARE

Icircn cadrul Tezei de Doctorat am desfăşurat o cercetare care şi-a propus studierea

expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Recrutarea anamneza şi examinarea

clinică a subiecţilor au fost realizate icircn cadrul Cabinetului de Medicină de Familie CMI Popa

Elena din Iaşi iar determinările hematologice şi biochimice s-au efectuat icircn cadrul

Laboratorului Ambulatorului de Specialitate al Spitalului Universitar ldquoSfacircntul Spiridon din

Iaşi Icircn studiul epidemiologic şi al markerilor inflamatori al sindromului metabolic desfăşurat

au fost incluşi un număr de 1530 de participanţi pe baza liberului consimţămacircnt examinaţi icircn

perioada 01012013 - 31122013 Icircn continuare icircn perioada 1012014 - 28022014 pe baza

criteriilor de includere şi excludere icircn cele două loturi de studiu am investigat un număr de 57

de subiecţi prezentaţi la consultaţie icircn această perioadă şi care au icircndeplinit criteriile de

includere icircn cele două loturi (Lot SM şi Lot Control) constituite pentru evaluarea nivelului de

expresie a receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Explorarea nivelului de expresie

relativă a receptorilor PPARα s-a desfăşurat icircn cadrul Laboratorului de Biologie Moleculară

de pe platforma Institutului Regional de Oncologie Datorită resurselor proprii financiare

limitate trebuie să subliniez că aceasta cercetare nu ar fi fost posibilă fără contribuţia unor

cercetători din domeniul medical care m-au sprijinit necondiţionat atacirct icircn elaborarea

protocolului de lucru cacirct şi icircn efectuarea propriu-zisă a studiului Icircn acest sens menţionăm şi

faptul că pentru studiul receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic am utilizat aparatura

Laboratorului de Biologie Moleculară (care deserveşte icircntreaga Regiune a Moldovei) Pe

această cale mulţumesc personalului Laboratorului de Biologie Moleculară pentru ajutorul

acordat icircn desfăşurarea cercetării doctorale icircn condiţiile icircn care se observa creşterea

numărului de pacienţi care se adresează acestei platforme de cercetare Mulţumesc de

asemenea şi Doamnei Doctor Elena Butoi din cadrul Institutului de Biologie şi Patologie

Moleculară ldquoNicolae Simionescurdquo Bucureşti) pentru donaţia anticorpului secundar anti-

FITC Icircn consecinţă pentru recrutarea unui număr mai mare de participanţi ar fi fost necesară

icircn primul racircnd obţinerea unor resurse financiare suplimentare pentru achiziţia de aparatură şi

reactivi Totuşi numărul subiecţilor recrutaţi este apropiat de numărul subiecţilor raportaţi icircn

cadrul unor granturi de cercetare care aveau ca ţinta studiul expresiei receptorilor PPARα

(212 227 228 231) Rezultatele obţinute continua seria lucrărilor care arata importanta

studiului mecanismelor etiopatogenice ale sindromului metabolic patologie care se afla icircntr-o

continuă creştere La pacienţii cu SM pe lacircngă diminuarea nivelului de expresie a receptorilor

PPARα icircn eozinofile ne aşteptam şi la evidenţierea unor modificări icircn expresia PPARα şi icircn

populaţiile de Ly Mo şi PMN Acest fapt poate fi explicat de utilizarea unor celule provenite

de la pacienţi fără afectare cardiovasculară fără diabet zaharat şi necesită continuarea

studiului pe culturi celulare icircn condiţii de stimulare cu agonişti PPARα deziderat care

impune continuarea investigării expresiei PPARα printr-un grant de cercetare

ORIGINALITATEA ȘI CONTRIBUȚIILE INOVATIVE ALE TEZEI DE

DOCTORAT PERSPECTIVE DE CERCETARE

Evaluarea nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn leucocitele circulante

aduce noi perspective icircn studiul obezităţii şi sindromului metabolic Importanta studiului

expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic derivă din prevalenta crescută a

sindromului metabolic icircn populaţia cercetată la care se adaugă riscul cardiovascular foarte

icircnalt al acestor pacienţi cu implicaţii majore icircn sănătatea publică Rolul receptorilor PPARα

icircn inflamaţie şi aterogeneza este binecunoscut dar studiul nostru este primul care a arătat că

nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα este semnificativ mai scăzut in populatiile

de eozinofile la pacienţii cu SM Această concluzie coroborata cu existenţa unei stracircnse

asocieri intre expresia receptorilor PPARα la nivelul Mo limfocitelor şi PMNlor creeaza

ipoteza existenţei unui mecanism de control diferit al expresiei PPARα la nivelul

eozinofilelor Această cercetare aduce informaţii importante referitoare la mecanismele

proinflamatorii care stau la baza insulinorezistenţei şi riscului cardiometabolic şi impune

continuarea studiului acestor receptori nucleari prin citometrie icircn flux metodă care poate fi

aplicată şi la scara mai largă dacă sunt asigurate resursele materiale necesare cercetării

Cercetarea prin citometrie icircn flux poate fi completată de studiul polimorfismului genei

PPARA şi astfel se pot identifica timpuriu indivizii cu potenţial risc cardiometabolic crescut

Studiul receptorilor PPARα a stabilit conexiuni cu factori proinflamatori şi aterogenetici iar

continuarea cercetării poate aduce şi elemente noi de diagnostic precoce icircn sindromul

metabolic contribuind la icircmbunătăţirea prognosticului acestor pacienţi

CONCLUZII FINALE

1 Aplicarea scorului de SM alături de implementarea algoritmului electronic de diagnostic

contribuie la o prelucrare rapidă eficientă și standardizată a informaţiilor la nivelul

medicinei primare

2 Prevalenţa SM calculată astfel icircn cadrul studiului este crescută (2732) icircn concordanţă

cu datele raportate

3 Controlul factorilor de risc cardiometabolici incluşi icircn SM se poate realiza prin

managementul stilului de viaţă (scăderea greutăţii corporale prin combaterea

sedentarismului şi adoptarea unei diete antiaterogene şi hipocalorice) şi administrarea

terapiei medicamentoase

4 Este necesară adoptarea unei politici de sănătate publică pentru prevenirea creşterii icircn

populaţie a prevalenţei obezităţii şi a diabetului zaharat

5 Noi metode de cercetare icircn domeniul SM axate pe diagnosticarea precoce şi cuantificarea

eficientă a acestuia duce la diminuarea incidenței evenimentelor cardiovasculare majore

6 Sindromul metabolic se caracterizează printr-un status inflamator cronic

7 Valorile Non-HDL-colesterolului şi a raportului de aterogenitate sunt semnificativ mai

mari la pacienţii cu SM

8 Dintre reactanţii de faza acută am observat că valoarea medie a fibrinogenului este mai

crescută icircn lotul cu SM

9 Valorile eozinofilelor sunt crescute icircn sindromul metabolic iar explorarea relaţiei dintre

eozinofile şi obezitate constituie una din direcţiile de studiu actuale ale sindromului

metabolic

10 Evaluarea markerilor inflamatori icircn contextul sindromului metabolic este utilă icircn

evaluarea complexă a a factorilor de risc cardiometabolici

11 Prin metoda citometriei icircn flux am demonstrat prezenta Receptorilor Activaţi de

Inductorii Proliferării Peroxizomilor ndash Alpha (PPARα) icircn toate populaţiile de leucocite

studiate (Mo limfocite PMN eozinofile) atacirct icircn lotul pacienţilor cu SM cacirct şi icircn lotul

martor

12 Utilizacircnd intensitatea medie de fluorescenţă a anticorpilor anti- PPARα am arătat că

nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile este semnificativ mai redus

la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali

13 Acest studiu este primul care a demonstrat existenţa unei scăderi statistic semnificative a

nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofilele pacienţilor cu SM

confirmacircnd cercetările recente care au evidenţiat rolul eozinofilelor şi al receptorilor

PPARα icircn obezitate reglarea inflamaţiei cronice şi aterogeneza

14 Contrar aşteptărilor noastre icircn populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările

efectuate icircn cele două loturi de studiu (cu şi fără sindom metabolic) nu am evidenţiat

diferenţe statistic seminificative icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα la

subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali

15 Icircn populaţiile de Mo limfocite şi polimorfonucleare am observat corelaţii puternice

semnificativ statistic icircntre expresia PPARα icircn aceste tipuri celulare sugeracircnd existenţa

unui mecanism unic de control al inflamaţiei cronice la nivelul acestor celule probabil

diferit de cel din eozinofile

16 La subiecţii cu SM expresia relativă a PPARα icircn Eo este invers asociată cu expresia

receptorului CD36 (receptor al particulelor de ox - LDL şi propus ca un marker precoce al

aterosclerozei) dovedind rolul antiinflamator al receptorilor PPARα la nivel endotelial

17 La pacienţii cu antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială nivelul de

expresie al receptorilor PPARα icircn eozinofile şi Mo este diminuat comparativ cu subiecţii

fără antecedente familiale de hipertensiune arterială Putem spune că studiul efectuat de

noi aduce informaţii importante legate de geneză aterosclerozei şi hipertensiunii arteriale

18 Prin studiul asocierilor dintre receptorii PPARα şi componentele clinice ale sindromului

metabolic am arătat rolul acestor receptori icircn determinismul obezităţii de tip central

nivelul expresiei relative a receptorilor PPARα fiind invers proporţional cu circumferinţa

abdominală

19 Icircn acelaşi timp nivelul de expresie a PPARα icircn sindromul metabolic este asociat pozitiv

cu concentraţia serică a HDL-colesterolului şi invers asociat cu nivelul trigliceridelor

serice dovedind rolul acestor receptori icircn diminuarea procesului inflamator cronic de la

nivel vascular

20 La pacienţii cu SM scăderea expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofile este corelată cu

creşterea unor markeri ai sindromului inflamator cronic cardiometabolic (acid uric

fibrinogen) ilustracircnd importanta receptorilor icircn reglarea status-ului inflamator cronic din

sindromul metabolic

21 Utilizarea metodei flowcitometrice pentru studiul expresiei relative a receptorilor PPARα

icircn leucocite a adus informaţii importante cu privire la mecanismele moleculare de control

implicate icircn patogenia bolilor cardiometabolice icircn concordanţă cu cercetările care descriu

expresia PPAR icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale bronşice

keratinocite)

BIBLIOGRAFIE SELECTIVA

1 Kahn R Metabolic syndrome- what is the clinical usefulness Lancet 2008371(9628)1892-3

2 Reaven GM The metabolic syndrome is this diagnosis necessary Am J Clin Nutr 2006 83(6)1237-7

3 Grundy SM Pre-Diabetes Metabolic Syndrome and Cardiovascular Risk J Am Coll Cardiol 201259(7)

635-43

4 International Diabetes Federation IDF Diabetes Atlas 6th edn International Diabetes Federation Belgium

Brussels 20131-155

5 World Health Organization Global Status Report on Noncommunicable Diseases 2010 World Health

Organization Geneva Switzerland 20111-176

6 Coman AE Petrovanu R Sindromul metabolic in practica de ambulator Editura Pim Iaşi 2009 1-103

7 Grundy SM Becker D Clark LT et alThird Report of the National Cholesterol Education Program (NCEP)

Expert Panel on Detection Evaluation and Treatment of High Blood Cholesterol in Adults (Adult

Treatment Panel III) Final Report Circulation 2002106(25)3143-90

8 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J Metabolic syndrome- a new worldwide definition A Consensus Statement

from the International Diabetes Federation Diabet Med 2006 23(5)469-80

9 KG Alberti KG Eckel RH Grundy SM etal International Diabetes Federation task force on epidemiology

and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart Association World Heart

Federation International Atherosclerosis Society International Association for the study of obesity

Harmonizing the metabolic syndrome a joint interim statement of the International Diabetes Federation task

force on epidemiology and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart

Association World Heart Federation International Atherosclerosis society and International Association

for the study of obesity Circulation 2009120(16)1640-5

10 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J IDF Epidemiology Task Force The metabolic syndrome new

worldwide definition Lancet 2005 366 1059 - 62

11 Oleszczyk M Svab I Seifert B et al Primary healthcare in the developing part of Europe changes and

development in the former Eastern Bloc countries that joined the European Union following 2004 Med Sci

Monit 2009(15)78ndash84

12 Jung U J Choi M S Obesity and Its Metabolic Complications The Role of Adipokines and the

Relationship between Obesity Inflammation Insulin Resistance Dyslipidemia and Nonalcoholic Fatty

Liver Disease Int J Mol Sci 2014rsquo15(4) 6184-223

13 Vanden Heuvel JP Peters JM Peroxisome Proliferators In Ramos K (ed) Cellular and Molecular

Toxicology (Second Edition) Volume 2 New York Elsevier Science Inc 2010 145 - 67

14 Yessoufou A Wahli W Multifaceted roles of peroxisome proliferator-activated receptors (PPARs) at the

cellular and whole organism levels Swiss Med Wkl 2010140w13071 doi104414smw201013071

15 Azhar S Peroxisome proliferator-activated receptors metabolic syndrome and cardiovascular disease

Future Cardiology 20106(5)657-91

16 Andries G Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity

Diabetes and Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(Suppl)24-32

17 Zandbergen F Plutzky J PPARalpha in atherosclerosis and inflammation Biochim Biophys Acta

20071771(8)972-82

18 Straus DS Glass CK Anti-inflammatory actions of PPAR ligands new insights on cellular and molecular

mechanisms Trends Immunol 200728(12)551-8

19 Zlei M Zugun- Eloae F Carasevici E Citometrie icircn flux - Bază şi clinică Icircn Hinescu ME (ed) Citometrie icircn

flux - principii şi aplicaţii clinice Bucureşti Editura Viaţa Medicală Romacircnească 20111-128

20 Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity Diabetes and

Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(9)24-32

21 Woerly G Honda K Loyens M et al Peroxisome proliferator-activated receptors alpha and gamma down-

regulate allergic inflammation and eosinophil activation J Exp Med 2003198(3)411-21

22 Salle-Saumont D Brenuchon C Kanda A et al Peroxisome proliferator-activated receptor alpha regulates

skin inflammation and humoral response in atopic dermatitis J Clin Allergy Immunology 2008 21(4)962-8

23 Schote A Turner J Schiltz J et al Nuclear receptors in human immune cells expression and correlations

Mol Immunolog 200744(6)1436-45

24 DAmore S Vacca M Graziano G et al Nuclear receptors expression chart icircn peripheral blood

mononuclear cells identifies patients with Metabolic Syndrome Biochim Biophys Acta

20131832(12)2289-301

25 Uthurralt J Gordish-Dressman H Bradbury M T et al PPARalpha L162V underlies variation in serum

triglycerides and subcutaneous fat volume in young males BMC Med Genet 2007855

26 Hiukka A Leinonen ES Jauhiainen M et al Long-term effects of fenofibrate on VLDL and HDL

subspecies icircn participants with type 2 diabetes mellitus Diabetologia 2007 50(10)2067-75

27 Robins SJ Rubins HB Faas FH et alInsulin resistance and cardiovascular events with low HDL

cholesterol The Veterans Affairs HDL Intervention Trial (VA-HIT) Diabetes Care 2003 26(5)1513-7

28 Devaraj S Siegel D Jialal I Statin Therapy in Metabolic Syndrome and Hypertension Post-JUPITER

What is the Value of CRP Curr Atheroscler Rep 2011 13(1) 31ndash42

29 Imperatore G Riccardi G Iovino C et al Plasma Fibrinogen A New Factor of the Metabolic Syndrome A

population-based study Diabetes Care 19982 1(4)649-54

30 Krysiak R Gdula-Dymek A Bachowski R Okopien B Pleiotropic effects of atorvastatin and fenofibrate

in metabolic syndrome and different types of pre-diabete Diabetes Care 201033(10)2266-70

31 Hermans MP Impact of Fenofibrate on Type 2 Diabetes Patients with Features of the Metabolic Syndrome

Subgroup Analysis From FIELD Curr Cardiol Rev 20106(2)112-8

32 Silverstein R Inflammation atherosclerosis and arterial thrombosis Role of the scavenger receptor CD36

Cleveland Clinic Journal of Medicine 200976(Suppl 2)S27-S30

33 Hăncu N Obezitatea In Vereşiu IA (ed) Diabetul zaharat nutritia si bolile metabolice Volume 2 Editura

Echinox Cluj- Napoca 2010 1-15

Lista lucrări publicate

1 Elena Popa Maria Maidaniuc Agnes Bacusca Alamir Diaa Rodica Petrovanu Adorata Elena

Coman Disfuncţia endotelială ndash de la mecanisme moleculare la cuantifi care şi tratament icircn practica

medicală Practica Medicală 20149(3) 109-14

2 Elena Popa Agnes Bacusca Alamir Diaa Maria Maidaniuc Rodica Petrovanu Adorata Elena Coman

The function of insulin receptor (IRF) in evolution of obesity correlation with adipocytes diameters

Archives of the Balkan Medical Union 201449(3) 275-9

3 Elena Popa Florin Zugun-Eloae Mihaela Zlei Daniela Jitaru Oana Maria Pintilie Adorata Elena

Coman Maria Traian Didona Anca Ungureanu Eugen Carasevici - acceptata pentru numarul 42014

Flow cytometry analysis of PPAR-alpha receptors in metabolic syndrome) Revista Romană de

Medicină de Laborator(RRLM-D-14-00034R1- adeverinţa ataşată

Page 9: REZUMAT TEZĂ DE DOCTORAT - umfiasi.ro Doctorat/rezumat... · universitatea de medicinĂ Şi farmacie “grigore t. popa” iaŞi facultatea de medicinĂ rezumat tezĂ de doctorat

183 P=0003) pentru celelalte grupe de vacircrsta nu s-au observat diferenţe semnificative icircntre

sexul feminin şi cel masculin Am observat că după instalarea menopauzei la femei

prevalenţa SM (corespunzătoare Harmonised I) la femei depăşeşte 50 iar la bărbaţi atinge

42 Utilizacircnd European Standard Population (175) am efectuat standardizarea funcţie de

vacircrstă şi sex a prevalenţelor bdquocruderdquo (brute) obţinute icircn populaţia studiată şi am calculat o

prevalenţă standardizată a SM de 2732 (95 CI 2460-3003) La sexul masculin

prevalenţa standardizată a SM a fost de 2760 (95 CI 2362 - 3157) iar la sexul feminin

am obţinut valoarea de 2854 (95 CI 2462 - 3245)

Discuţii

Studiul desfăşurat de noi a investigat prezenţa SM icircn populaţia unui Cabinet de Medicină

de Familie Icircn Europa prevalenţa SM este de aproximativ 25-30 Statele Unite Ale Americii

au raportat o prevalenţă a sindromului metabolic de 22 icircn populaţia cu vacircrsta peste 20 ani

pe cacircnd la vacircrstă mai mare de 60 ani s-a observat o prevalenţă de 44 (1419) Icircn studiul

efectuat am observat o prevalenţă standardizată de 2732 (95 CI 2460-3003) care este

icircn concordanţă cu prevalenţele raportate icircn Europa precum şi o creştere a ponderii SM icircn

populaţie icircn raport cu vacircrsta Am preferat utilizarea definiţiei Harmonised I pentru SM

deoarece cuprinde criterii adaptate pentru o abordare unitară a SM mărind astfel numărul

pacienţilor diagnosticaţi şi care vor urma tratament conform Ghidurilor de Practică Medicală

Limitările acestui studiu sunt legate de faptul că este concentrat doar pe populaţia asigurată şi

neasigurată aflată pe lista unui medic de familie din mediul urban Se pot efectua studii la

nivelul Cabinetelor Medicale de Medicină de Familie dar trebuie să se aplice pe un lot

reprezentativ urbanrural care să reprezinte populația acelei regiuni Utilizarea structurilor

populaționale atașate cabinetului de MF este utilă atacirct pentru cele clinice cacirct și pentru cele

epidemiologice deoarece surprinde populația studiată icircn mediul de viață cotidian Prevalenţa

mare a SM icircn populaţia studiată necesită aplicarea unei politici eficiente de sănătate publică

deoarece riscul producerii evenimentelor cardiovasculare majore poate fi redus semnificativ

printr-un control adecvat al componentelor SM (obezitate dislipidemii hipertensiune

arterială şi hiperglicemie

Studiul sindromului inflamator cronic icircn cadrul sindromului metabolic

Obiectivele studiului

- studierea markerilor inflamaţiei cronice şi aterogenezei la subiecţii cu şi fără SM

- evaluarea importanţei markerilor studiaţi ai inflamaţiei cronice icircn diagnosticul de

ambulator al sindromului metabolic

Material şi metodă

Icircn cercetarea inflamaţiei cronice din SM au fost incluşi 1530 subiecţi de ambele sexe cu

vacircrsta cuprinsă icircntre 18-91 ani icircnscrişi pe lista CMI Popa Elena Studiul s-a desfăşurat icircn

perioada 01012013ndash 31122013 Populaţia ţintă a fost identică cu cea din studiul

epidemiologic şi s-a desfăşurat concomitent cu studiul prevalentei SM Subiecţii au fost

icircmpărţiţi icircn două loturi lotul cu SM (Lot SM) şi lotul de control (fără SM)

Lot SM a) criterii de includerevacircrsta peste 18 ani recrutarea pe baza semnării

Consimţămacircntului liber informat SM diagnosticat pe baza criteriilor Harmonised I (14) b)

criterii de excluderevacircrstă sub 18 anirefuzul semnării Consimţămacircntului liber informat

femei icircn perioada de graviditate sau de lactaţie

Lot Control (fără SM) a) criterii de includerevacircrsta peste 18 anirecrutarea pe baza

semnării Consimţămacircntului liber informat absenţa sindromului metabolic b) criterii de

excluderevacircrstă sub 18 ani refuzul semnării Consimţămacircntului liber informatfemei icircn

perioada de graviditate sau de lactaţie

Rezultate

Lotul cu SM (Lot SM) a fost format din cei 389 pacienţi diagnosticaţi cu SM conform

criteriilor Harmonised I Lotul SM a fost alcătuit din 185 bărbaţi şi 204 femei raportul

bărbaţifemei fiind de 090 (95 CI073-112) Lotul de control (fără SM) a fost alcătuit

din cei 1141 participanţi care nu au icircntrunit criteriile de diagnostic ale sindromului metabolic

Din cei 1141 de subiecţi 530 au fost de sex masculin iar 611 de sex feminin raportul

bărbaţifemei fiind 087 (95 CI 077-097) Vacircrsta subiecţilor a fost semnificativ mai mare

icircn lotul pacienţilor cu SM (5976plusmn1322 ani) comparativ cu lotul martor (4333plusmn 1748 ani) (t-

Test Plt00001) Aşa cum ne-am aşteptat valorile medii ale componentelor clinice ale SM

(circumferinţa abdominală tensiunea arterială sistolică şi diastolică) au fost mai mari icircn lotul

pacienţilor cu SM (t-Test Plt0001 pentru fiecare dintre componente) Studiind parametrii

biochimici incluşi icircn diagnosticul SM valorile medii ale glicemiei şi TG au fost semnificativ

mai crescute icircn lotul SM (t-Test Plt00001 pentru ambele constante) Icircn acelaşi timp

valoarea medie determinată a HDL-col a fost semnificativ mai mare la subiecţii din lotul

martor ( t-Test Plt00001) SM se caracterizează printr-o dislipidemie aterogenă

caracterizată de creşterea TG scăderea HDL-col concomitent cu creşterea LDL-col creşterea

Non-HDL-col şi a raportului de aterogenitate (Col totalHDL-col) (185) Comparacircnd cele

două loturi am observat că valoarea medie a LDL-colesterolului determinată icircn lotul

pacienţilor cu SM a fost semnificativ mai mare faţă de subiecţii din lotul martor (t-Test P =

00002) Măsurarea Non-HDL-colesterolului a arătat prezenţa unei diferenţe semnificative

icircntre cele două loturi (figura 420 B) Astfel icircn concordanţă cu prezenţa dislipidemiei

aterogene valoarea medie a Non-HDL-col a fost semnificativ mai mare (t-Test Plt 00001) icircn

lotul cu SM comparativ cu lotul de control Icircn contextul inflamației cronice şi aterogenezei

din sindromul metabolic am evaluat sensibilitatea şi specificitatea Non-HDL-colesterolului

ca test diagnostic al SM Valoarea Non-HDL-colesterolului care prezice cu cea mai mare

acurateţe prezenţa SM a fost de 151 mgdl (punctul de ldquocut-offrdquo) pentru care am calculat o

sensibilitate de 64 27 şi o specificitate de 5872 Calculul ariei AUC a furnizat valoarea

de 0605 şi deci determinarea concentraţiei serice a parametrului Non-HDL-colesterolului are

valoarea unui marker cu acurateţe redusă Am studiat valorile raportului Col totalHDL-col icircn

cele două loturi şi am constatat că la pacienţii cu SM valoarea media a raportului de

aterogenitate este semnificativ mai mare faţă de valoarea raportului determinată icircn lotul

martor (t-Test Plt 00001) Pentru raportul de aterogenitate studiat analiza curbei ROC a

arătat că valorile mai mari decacirct punctul de ldquocut-offrdquo de 431 prezic prezenţa SM cu cea mai

mare sensibilitate (6381 ) şi specificitate (6582)Valoarea AUC pentru indicele de

aterogenitate a fost de 0667 şi icircn studiul SM acest indice poate fi considerat un marker cu

acurateţe redusă Valoarea medie determinată a acidului uric la subiecţii fără SM a fost

semnificativ mai mică decacirct icircn lotul SM (t-Test Plt 00001) Curba ROC a arătat că valorile

acidului mai mari de 43 mgdl prezic diagnosticul de SM cu cea mai mare sensibilitate

(8107) şi specificitate (5328) Pentru acidul uric AUC a avut valoarea de 0655 şi

icircncadrează determinarea acidului uric seric icircn racircndul testelor cu acurateţe redusă (187)

Comparacircnd populaţiile de leucocite (tabel XXI) valoarea medie determinată a

numărului de Eo a fost semnificativ mai mare icircn lotul cu SM comparativ cu lotul martor (t-

Test Plt0001) Analizacircnd curba ROC trasată pentru valorile numărului de Eo am observat

că valorile ldquocut-offrdquo mai mari de 200 Eomm3

pot prezice prezenta SM cu cea mai mare

specificitate (7705) şi sensibilitate (3978) Pentru diagnosticul SM calculul ariei AUC a

arătat faptul că determinarea numărului de Eo are valoarea unui test diagnostic cu acurateţe

redusă (AUC = 0 589) Comparacircnd valorile medii ale fibrinogenului am calculat o diferenţă

statistic semnificativă icircntre cele două loturi valoarea medie a fibrinogenului fiind mai mare icircn

lotul SM ((t-Test P lt 00001) Cu ajutorul curbei ROC am observat că valorile fibrinogenului

mai mari de 306 mgdl prezic sindromul metabolic cu o sensibilitate de 7511 şi specificitate

de 6056 Fibrinogenul a fost icircncadrat icircn categoria markerilor inflamatori cu acurateţe

redusă AUC avacircnd valoarea de 0690 Icircn loturile de studiu am calculat AUC corespunzătoare

criteriilor de diagnostic ale SM Am observat că icircn cazul scorului Harmonised I

sensibilitatea şi specificitatea sunt de 100 iar AUC este egală cu 1000 Pentru cele cinci

criterii de diagnostic AUC a avut valori icircntre 0636 (pentru variabila HDL-col) şi 0804

(pentru variabila CA) (figura 431)

AUC ES 95 CI

Scor SM Harmonised I 1000 00000 0997 - 1000

CA (cm) 0804 00133 0781 - 0825

TAD (mmHg) 0666 00169 0639 - 0692

TAS (mmHg) 0757 00148 0732 - 0780

Glicemie (mgdl) 0742 00160 0717 - 0766

Trigliceride (mgdl) 0756 00175 0732 - 0780

HDL- colesterol 0636 00183 0609 - 0662

Figura 431 Analiza AUC criterii de diagnostic ale SM

Studiind figura 432 se observă că valoarea AUC pentru markerii studiaţi este cuprinsă

icircntre 0589 (icircn cazul variabilei Eo) şi 0690 (icircn cazul fibrinogenului) Icircn contextul SM

acurateţea acestor markeri ai inflamaţiei cronice şi disfuncţiei endoteliale poate fi considerată

redusă deoarece AUClt07 pentru toţi markerii investigaţi (figura 431) Totuşi valorile ariilor

parametrilor reprezentaţi icircn figura 431 sunt apropiate de valorile AUC ale variabilelor TAD

şi HDL-col (figura 432) şi deci pot fi utilizaţi pentru completarea diagnosticului de SM

AUC ES 95 CI

Non-HDL-colesterol 0605 00171 0580 - 0630

Col totalHDL-col 0607 00163 0642 - 0691

Acid uric 0655 00161 0630 - 0679

Fibrinogen 0690 00206 0658 - 0720

Eozinofile 0589 00176 0564 - 0615

Figura 432 AUC markeri ai SM inflamaţiei cronice şi aterogenezei

Discuţii

Status-ul proinflamator din SM asociat cu insulinorezistenţa şi disfuncţia endotelială

constituie o verigă de legătură dintre inflamaţie şi procesele metabolice complexe icircnsoţindu-

se de deteriorarea funcţiilor vasculare şi creşterea riscului de evenimente cardiovasculare

majore (2858) Studiul efectuat a arătat o diferenţă icircntre vacircrstele subiecţilor din cele două

loturi vacircrsta pacienţilor cu SM fiind semnificativ mai mare (Plt0001) comparativ cu subiecţii

normali confirmacircnd faptul menţionat că vacircrsta reprezintă unul din stimulii care agravează

inflamaţia cronică Am arătat că valorile fibrinogenului sunt mai mari icircn SM comparativ cu

Scor Harmonised I

0 20 40 60 80 100

0

20

40

60

80

100

100-Specificitate

Sen

sib

ilit

ate

Criterii diagnostic SM

0 20 40 60 80 100

0

20

40

60

80

100

100-Specificitate

Sens

ibili

tate

CA

TAD

TAS

Glicemie

Trigliceride

HDL-C

0 20 40 60 80 100

0

20

40

60

80

100

100-Specificitate

Sensi

bilita

te

Non-HDL-C

Col T HDL-C

Acid uric

Fibrinogen

Eozinofile

lotul martor atacirct la bărbaţi cacirct şi la femei icircn concordanţă cu studiile anterioare Evaluarea

fibrinogenului este importantă nu numai icircn SM pentru definirea contextului proinflamator şi

protrombotic ci şi icircn predicţia cardiovasculară la subiecţii normali Studiind populaţiile

leucocitare am obţinut diferenţe semnificative icircn cazul Eo valoarea medie a acestora fiind

semnificativ mai mare icircn lotul cu SM comparativ cu lotul martor (P lt 0001 figura 425B)

Implicarea Eo icircn SM s-a conturat icircn ultimul deceniu aceste celule fiind implicate icircn recrutarea

macrofagelor din ţesutul adipos Experimental s-a constatat că o creştere a Eo apărută ca

urmare a infectării cu helminţi sau stimulare cu IL-5 este urmată de icircmbunătăţirea toleranţei la

glucoză (199) Controlul pe care icircl exercită Eo asupra activării macrofagelor ar putea fi cheia

intervenţiei asupra obezităţii icircn viitorul apropiat(165199) Hiperuricemia asociata frecvent cu

SM este cunoscut ca un factor independent de risc cardiovascular (192 202) In concordanţă

cu aceasta afirmaţie in studiul nostru am constatat ca nivelul seric al acidului uric a fost mai

crescut in lotul cu SM diferenţa semnificativă din punct de vedere statistic (P lt 00001)

Dislipidemia aterogenă din sindromul metabolic şi diabetul zaharat se caracterizează prin

creşterea trigliceridelor şi a Non-HDL-col scăderea HDL-col creşterea numărului de

particule LDL modificate (185190) La pacienţii cu SM am descris un profil aterogenetic

cu risc crescut de evenimente cardiovasculare majore

STUDIUL RECEPTORILOR ACTIVAŢI DE INDUCTORII PROLIFERĂRII

PEROXIZOMILOR-ALPHA IcircN LEUCOCITELE CIRCULANTE

Ipoteza de lucru

Studii experimentale efectuate au arătat că rolul PPARα icircn ateroscleroză derivă din

implicarea acestor receptori icircn limitarea inflamaţiei Plecacircnd de la acest fundament ne-am

propus evidenţierea receptorilor nucleari activaţi de inductorii proliferării peroxizomilor-

alpha (PPARα) prin citometrie de flux icircn leucocitele din sacircngele periferic alături de

evaluarea acestei metode icircn cuantificarea expresiei relative a PPARα ca test diagnostic

precoce al modificărilor metabolice SM Studiul expresiei relative a receptorilor PPARα a

plecat de la premisa că dacă SM se caracterizează printr-un status inflamator cronic nivelul

de expresie a PPARα icircn leucocitele circulante este mai scăzut la pacienţii cu SM comparativ

cu subiecţii normali Referitor la studiul receptorului CD36 am plecat de la presupunerea că

nivelul de expresie al acestui receptor icircn SM este crescut dat fiind importanţa acestui receptor

icircn inflamaţia aterosclerotică Avacircnd icircn vedere efectele receptorilor amintiţi icircn

insulinorezistenţă şi aterogeneză am considerat necesară evaluarea prezenţei receptorului

nuclear PPARα icircn paralel cu studiul receptorului bdquoscavengerrdquo CD-36 prin metoda citometriei

icircn flux Astfel icircn studiul efectuat mi-am propus şi investigarea existenţei unei legături icircntre

nivelul de expresie al receptorilor PPARα şi cel al receptorului CD-36 De asemenea ne-am

icircndreptat atenţia spre stabilirea unor asocieri icircntre componentele clinice şi biochimice ale

sindromului metabolic şi nivelul intensităţilor de fluorescenţă ale PPARα şi CD-36 ca măsură

a expresiei relative a acestor receptori

Material și metodă

Studiul receptorilor PPARα icircn contextul sindromului metabolic s-a desfăşurat icircn

perioada 1012014 -28022014 pe baza metodologiei studiilor de tip caz-martor Am urmărit

identificarea unor diferenţe icircntre expresia receptorilor PPARα la pacienţii cu SM comparativ

cu subiecţii sănătoşi diferenţe care ar putea fi utile icircn diagnosticul precoce al SMRecrutarea

pacienţilor s-a efectuat din pacienţii prezentaţi pentru consultaţie la Cabinetul Individual

ldquoCMI Dr Popa Elenardquo situat icircn strada Ion Creanga din Iaşi Pentru studiul receptorilor

PPARα icircn sindromul metabolic au fost selecţionaţi un număr de 57 de subiecţi 26 de subiecţi

cu SM (constituind lotul SM) şi 31 subiecţi fără SM constituind lotul de control (Lot Non-

SM) Pentru studiul SM pacienţii au fost recrutaţi din masa de populaţie arondată cabinetului

de MF fără istoric de SM diabet zaharat boală cardio-vasculară aflați la primul diagnostic

de SM evaluarea completă a acestora fiind urmată de includerea icircn programul de

management cardiovascular şi metabolic conform Ghidurilor Terapeutice aflate icircn vigoare

Lot SM a) criterii de includerevacircrsta peste 18 ani recrutarea pe baza semnării

Consimţămacircntului liber informatSM nou-diagnosticat pe baza prezenţei a minim trei criterii

de diagnostic pentru SM conform Harmonised I b) criterii de excluderevacircrstă sub 18 ani

refuzul semnării Consimţămacircntului liber informat femei icircn perioada de graviditate sau de

lactaţie SM anterior diagnosticat istoric de diabet zaharat boală cardiovasculară constituită

tratament cu agonişti PPARα (ie fibraţi etc)

Lot martor (Non-SM) a) criterii de includerevacircrsta peste 18 ani recrutarea pe baza

semnării Consimţămacircntului liber informat absenţa diagnosticului de SM b) criterii de

excludere vacircrstă sub 18 ani refuzul semnării Consimţămacircntului liber informat femei icircn

perioada de graviditate sau de lactaţie

Studiul receptorilor PPARα a inclus două subetape

A Studiul componentelor sindromului metabolic conform criteriilor Harmonised I

Evaluarea clinică a participanţilor s-a desfăşurat icircn cadrul Cabinetului de Medicină de

Familie iar determinările hematologice şi biochimice s-au efectuat icircn Laboratorul

Ambulatorului Clinic de Specialitate al Spitalului Clinic de Urgenţă bdquoSf Spiridonrdquo Iaşi

B Evaluarea icircn citometrie de flux a nivelului relativ de expresie a PPARα şi CD36

Studiul receptorilor PPARα s-a desfăşurat icircn Laboratorul de Biologie Moleculară al

Institutului Regional de Oncologie Iaşi prin metoda citometriei icircn flux (19) Nivelul relativ de

expresie al receptorilor nucleari PPARα a fost determinat icircn diferite tipuri de leucocite

circulante polimorfonucleare (PMN) limfocite (Ly) Mo(Mo) şi eozinofile(Eo) Am utilizat o

metodă de citometrie icircn flux optimizată ldquoin houserdquo elaborată icircn cadrul Laboratorului de

Biologie Moleculară al IRO Iaşi Icircn cursul procesului de optimizare am testat mai multe

concentraţii ale anticorpului anti-PPARα 1100 1500 11500 14500 iar icircn urma

determinărilor efectuate şi a analizei statistice concentraţia 1500 a fost considerată optimă

pentru desfăşurarea studiului (tabel XXIII figura 51)

Tabel XXIII Optimizarea concentraţiilor Ac anti-PPARα Diferenţa

mediilor

valorilor

medii

PMN

Diferenţa

mediilor

mediane-

lor

PMN

Diferenţa

mediilor

valorilor

medii

Ly

Diferenţa

mediilor

mediane-

lor

Ly

Diferenţa

mediilor

valorilor

medii

Mo

Diferenţa

mediilor

mediane-

lor

Mo

Diferenţă 0 1300 1600 100 100 700 750

normal - 1100 650 1050 1050 1350 450 900

patologic 1500 2850 2750 3800 3600 2850 2400

11500 -1050 800 3500 3300 2250 1800

14500 2200 2150 1300 1100 2950 2850

AOptimizare

BRepetabilitate

Figura 51 Optimizarea concentraţiei anticorpului anti-PPARα

Icircn concordanţă cu literatura de specialitate icircn cercetarea efectuată intensitatea medie

de fluorescenţă (MFI) a fost utilizată ca măsură pentru evaluarea expresiei celulare a

receptorilor PPARα (212) Un exemplu de analiză a probelor este reprezentat icircn figura 52

Figura 52 Exemplu de analiză flowcitometrică pentru receptorul nuclear PPARα Graficul din stacircnga reprezintă distribuţia leucocitelor iar cel din dreapta ilustrează distribuţia

intensităţii de fluorescenţă pentru populaţiile de celule selectate

Intensitatea Medie a Fluorescenţei (MFI) a CD36 ca o măsură a nivelului relativ de

expresie a acestor receptori la nivelul membranei Mo a fost detectată printr-o metodă

convenţională pentru marcare de suprafaţă şi evaluare pe bază de citometrie icircn flux folosind

aceleaşi probe de sacircnge cu EDTA cu focalizare pe Mo şi utilizacircnd CD14 ca marker specific

pentru Mo (figura 53)

Figura 53Analiza

flowcitometrică

pentru marcajul

CD14 - CD36

Rezultate

Icircn cele două loturi au fost incluşi icircn studiu un număr de 57 de participanţi care au fost

investigaţi din punct clinic şi paraclinic Vacircrsta subiecţilor incluşi icircn studiu a fost cuprinsă

icircntre 18 şi 79 ani iar vacircrsta medie calculată a avut valoarea de 4805 plusmn 1587 ani Pentru sexul

masculin vacircrsta medie este de 4925plusmn1617 ani iar pentru sexul feminin 4689 plusmn1 5ani

diferenţa obţinută icircntre vacircrstele pacienţilor fiind statistic nesemnificativă (P = 085)

Analizacircnd vacircrstele subiecţilor din cele două loturi am observat că vacircrsta medie a pacienţilor

cu SM (5476 plusmn 1183 ani) a fost semnificativ mai mare (t-test P = 0003) decacirct icircn lotul

martor (4258 plusmn 169 ani) Pentru diagnosticul sindromului metabolic am calculat scorul de

SM bazacircndu-ne pe criteriile Harmonised I Conform criteriilor diagnostice din cei 57 de

subiecţi investigaţi un număr de 26 participanţi (46) au fost incluşi icircn lotul cu SM (Lot

SM) iar 31 de subiecţi(54) nu au prezentat acest sindrom constituind lotul martor (Lot

Non-SM) Din punct de vedere al repartiţiei pe sexe nu au existat diferenţe statistic

semnificative raportul bărbaţifemei fiind de 0961 Din totalul celor 28 de bărbaţi incluşi icircn

studiu 4285 (12 bărbaţi) au icircntrunit cel puţin trei criterii diagnostice pentru SM fiind

incluşi icircn lotul SM Icircn acelaşi timp 14 femei reprezentacircnd 4827 din subiecţii de sex

feminin au icircntrunit condiţiile pentru includerea icircn lotul pacienţilor cu SM Valoarea medie

determinată pentru scorul de SM a arătat prezenţa unor valori semnificativ statistic mai mari

din punct (t-test P lt 00001) icircn lotul SM (769plusmn176) comparativ cu lotul martor (174 plusmn

184) Am studiat comparativ media valorilor măsurate ale criteriilor componentelor SM

Analiza statistică a arătat valori semnificativ statistic mai mari pentru CA TG glicemie TAS

şi TAD (plt0001) icircn lotul SM comparativ cu lotul normal Concomitent calculul statistica

evidenţiat o scăderea semnificativă a HDL-colesterolului icircn lotul cu SM comparativ cu

subiecţii din lotul martor (Non-SM) Aplicacircnd testul z am comparat ponderea pacienţilor

diagnosticaţi cu HTA dislipidemie şi tulburări ale metabolismului glucidic icircn lotul SM versus

lot Non-SM şi am constatat prezenţa acestor afecţiuni icircntr-un procent mai mare semnificativ

statistic icircn lotul SM ((plt0001)

Utilizacircnd testul t Student am calculat diferenţele statistice şi icircntre alți parametri

studiaţi care sunt factori de risc cardio-vascular dar care nu sunt componente ale SM Icircn lotul

cu SM valorile acidului uric fibrinogenului Col total Non-HDL-col şi LDL-col au fost

semnificativ mai mari comparativ cu lotul martor (tabel XXVI) Analizacircnd valorile medii ale

populaţiilor de leucocite am identificat doar pentru populaţia de Eo diferenţe statistice icircntre

cele două loturi numărul Eo icircn lotul SM fiind semnificativ mai mare decacirct icircn lotul martorTot

pentru caracterizarea celor două loturi am analizat prezenţa antecedentelor

heredocolaterale (AHC) de diabet zaharat boala cardiovasculară şi dislipidemie pentru toţi

subiecţii investigaţi Astfel existenţa AHC de HTA a fost declarată de 2580 din subiecţii

incluşi icircn lotul martor respectiv de 5384 din numărul pacienţilor cu SM Antecedentele

heredocolaterale de dislipidemie au fost prezente la 3461 din pacienţii cu SM icircn timp ce icircn

lotul martor anamneza a evidenţiat aceste antecedente la 3548 din subiecţi

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα

Icircn cercetarea desfăşurată am utilizat intensitatea medie de fluorescenţă (MFI) ca

măsură a nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn leucocitele studiate Pentru

populaţiile de leucocite analiza computerizată a probelor luate icircn studiu a furnizat valori

pentru MFI a receptorilor PPARα icircn funcţie de cantitatea de anticorpi anti-PPARα marcaţi cu

fluorocrom care se leagă de aceste celule şi apoi sunt captaţi de citometru (figura 59)

A Lot Non - SM

B Lot SM

Figura 59 Analiza flowcitometrică pentru receptorii PPARα icircn leucocite A lot normal B lot SM

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Mo

Analiza probelor efectuată conform protocolului de lucru descris a arătat prezenţa

PPARα icircn Mo recoltate din sacircngele tuturor subiecţilor incluşi icircn această cercetare Pentru toţi

participanţii investigaţi analiza MFI a Ac anti - PPARα icircn populaţia de Mo (Mo) a arătat un

interval de variaţie icircntre [786 395] Valoarea medie a nivelului de expresie relativă a PPARα

calculată pentru Mo a fost de 23210 plusmn7860 Pentru ambele loturi de studiu pacienţilor cu

SM testul Testul Shapiro-Wilk a arătat distribuţia normală a valorilor obţinute pentru nivelul

de expresie al PPARα icircn Mo

Tabel XXVIII Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn Mo

Lot SM Lot Non-SM

N 26 31

Media 22819 23538

SD 5819 7717

Mediana 22400 22600

Minimum 12800 78600

Maximum 35800 37900

Percentila 25 18300 18300

Percentila 75 26200 30350

Pentru pacienţii din lotul SM valoarea medie a MFI icircn Mo a fost de 22819 plusmn 5880 iar

pentru lotul martor s-a calculat o valoare medie a MFI a Ac anti-PPARα de 23538 plusmn 7717

Distribuţia statistică a frecvenţei valorilor MFI obţinute pentru nivelul de expresie a PPARα

icircn Mo subiecţilor din cele două loturi a fost reprezentată icircn figura 511

Figura 511 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti-PPARα icircn Mo

Sub forma unei diagrame de control Shewhart am reprezentat variaţia intensităţii medii de

fluorescenţă pentru anticorpii anti-PPARα icircn MoVariaţia nivelului de expresie relativă a

receptorilor PPARα icircn Mo subiecţilor studiaţi este ilustrată icircn fig 512 513

Figura 512 Lot SM Variaţia

expresiei relative a PPARα icircn Mo

Număr pacienţi

26

Minim 128

Maxim 358

Media 22819

DS 5819

25 din 26 valori ale MFI s-au icircncadrat

icircn intervalul Media plusmn 2DS

Figura 513 Lot Non-SM Variaţia

expresiei relative a PPARα icircn Mo

Număr pacienţi 31

Minimum 786

Maximum 379

Media 23538

DS 7717

Cu excepţia unei singure

determinări valorile calculate s-au

icircncadrat icircn Media plusmn 2DS

Utilizacircnd testul parametric t-Student pentru variabilele cu distribuţie normală am

comparat valoarea medie a intensităţii de fluorescenţă a Ac anti-PPARα icircn lotul cu SM versus

subiecţi fără SM (Lot Non-SM) Analiza statistică efectuată nu a identificat diferenţe icircntre

50 100 150 200 250 300 350 400 450

0

5

10

15

20

25

30

35

MFI anti-PPAR a

Frecv

enta

relati

va (

)

Lot SM

0 50 100 150 200 250 300 350 400 450 500

0

5

10

15

20

25

30

35

MFI anti-PPAR a

Frecv

enta

relati

va (

)

Lot martor

1 6 11 16 21 26 31

0

50

100

150

200

250

300

350

400

450

MFI

anti-

PPAR

a

2282

1106

3458

518

4046

Media

LCI

LCI

1 6 11 16 21 26 31 36

-100

0

100

200

300

400

500

MFI a

nti-PP

AR

a

2354

810

3897

39

4669LCS

LCI

Media

cele două loturi icircn ceea ce priveşte expresia PPARα la nivelul Mo circulante (t- Test P=

069)

Studiul receptorilor PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de AHC şi dislipidemie

Nivelul de expresie al receptorilor PPARα α icircn Mo tinde să fie mai scăzut la subiecţii

cu AHC de HTA comparativ subiecţii care nu au declarat AHC de HTA (P= 006 fig 515)

AHC HTA

Număr 22

Mediana 19950

Percentila 25 17800

Percentila 75 22700

AHC HTA absente

Număr 35

Mediana 24800

Percentila 25 19025

Percentila 75 31700

Figura 515 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Mo funcţie de AHC de HTA

Nu s-au calculat diferenţe semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor

PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de dislipidemie atunci cacircnd aceştia au fost comparaţi cu

subiecţii fără AHC de tulburări ale metabolismului lipidic (t- Test P= 020)

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn limfocite

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn populaţia de Ly a

demonstrat prezenţa receptorilor PPARα icircn Ly tuturor subiecţilor studiaţi Pentru toţi

participanţii investigaţi analiza MFI a Ac anti - PPARα icircn populaţia de Ly a relevat un

interval de variaţie icircntre [748 314] iar valoarea medie a MFI a fost de 18058 plusmn 5600

Pentru ambele loturi aplicarea testului Shapiro-Wilk a evidenţiat distribuţia normală a

valorilor determinate pentru nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Ly Pentru

pacienţii cu SM valoarea medie a MFI determinată pentru expresia PPARα icircn populaţia de

Ly a fost de 18178 plusmn 61 16 iar pentru lotul martor a fost de 16800 plusmn 5229

Tabel XXX Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn limfocite

Lot SM Lot Non-SM

N 26 31

Media 181781 179574

SD 611694 522907

Mediana 165000 168000

Minimum 81300 74800

Maximum 314000 301000

Percentila 25 13400 - 145750

Percentila 75 21800 21700

Distribuţia frecvenţei valorilor MFI a Ac anti-PPARα icircn Ly este redată icircn figura 518

Figura 518 Distribuţia frecvenţelor relative a MFI a Ac anti-PPARα icircn Ly

94 din determinările efectuate pentru determinarea nivelului de expresie relativă al

MFI

ant

iPPA

R

a_Mo

190

200

210

220

230

240

250

260

270

280

DA NU

AHC HTA

P=006

50 89 128 167 206 244 283 322 361 400

0

5

10

15

20

25

30

35

MFI anti-PPAR a

Frecv

enta

relati

va (

)

Lot SM

0 50 100 150 200 250 300 350

0

5

10

15

20

25

30

35

40

MFI anti-PPAR a

Frec

venta

relat

iva (

)

Lot Non-SM

receptorilor PPARα icircn limfocitele subiecţilor cu SM s-au icircncadrat icircn intervalul Media plusmn 2DS

Figura 5 19 Lot SM Variaţia expresiei

relative a PPARα icircn Ly

Număr pacienţi 26

Minimum 813

Maximum 31400

Media 18178

Deviaţia Standard 6116

25 valori s-au icircncadrat icircn Media plusmn 2DS

Pentru lotul Non-SM diagrama de control (figura 520) a arătat toate valorile

determinate pentru lotul Non-SM se icircncadrează icircntre LCS şi LCI

Figura 520 Lot Non -SM Variaţia

expresiei relative a PPARα icircn Ly

Număr pacienţi 31

Minimum 748

Maximum 30100

Media 179574

Deviaţia Standard 5229

96 din valori icircncadrate icircn Media plusmn 2DS

Aplicarea testului t-Student pentru valorile medii ale intensităţii de fluorescenţă ale

PPARα icircn Ly nu a arătat existenţa unei diferenţe statistic semnificative icircntre lotul cu SM şi

lotul martor(t- Test P= 088)

Analiza receptorilor PPARα icircn Ly subiecţilor cu AHC de HTA şi dislipidemie

Studiind populaţiile de Ly la subiecţii care au prezentat AHC de hipertensiune

arterială analiza flowcitometrică a relevat existenţa unor valori mai mici pentru MFI la aceşti

subiecţi comparativ cu cei fără AHC de HTA (fig 522) deşi scăderea observată nu a

icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică (t- Test P = 009)

AHC HTA

Număr 22

Mediana 16000

Percentila 25 12700

Percentila 75 17100

AHC HTA absenţe

Număr 35

Mediana 18700

Percentila 25 14900

Percentila 75 23175

Figura 522 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Ly funcţie de AHC de HTA

Nu am calculat diferenţe statistic semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor

PPARα icircn populaţiile de Ly ale subiecţilor la care am identificat AHC de dislipidemie

comparativ cu cei care nu au declarat antecedente familiale de dislipidemie (t- Test P= 051)

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn neutrofile (PMN)

Analiza flowcitometrică a evidenţiat prezenţa PPARα icircn PMN recoltate din sacircngele

venos al tuturor participanţilor la studiu Pentru toţi subiecţii investigaţi analiza MFI a Ac -

PPARα icircn populaţia de PMN a relevat un interval de variaţie de [163419] iar valoarea medie

a MFI pentru Ac anti-PPARα a fost de 26392 plusmn 7064 Testul Shapiro-Wilk a arătat o

distribuţie normală a valorilor intensităţii medii de fluorescenţă a anticorpilor anti-PPARα atacirct

icircn lotul pacienţilor cu SM cacirct şi icircn lotul martor

1 6 11 16 21 26 31

-50

0

50

100

150

200

250

300

350

400

MFI

anti-

PPAR

a

1818

595

3041

-17

3653

Media+2DS

Media- 2DS

1 6 11 16 21 26 31 36

0

50

100

150

200

250

300

350

MFI

ant

i-PPA

R

a

1796

750

2841

227

3364

Media+2DS

Media

Media- 2DS

MFI

anti-

PPAR

a Ly

130

140

150

160

170

180

190

200

210

DA NU

AHC HTA

P=009

Tabel XXXII Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn PMN

Lot SM Lot Non-SM

N 26 31

Media 26273 26480

SD 6915 7088

Mediana 25900 25500

Minimum 17200 16300

Maximum 39500 41900

Percentila 25 19800 19600

Percentila 75 30500 31500

Icircn cele două loturi distribuţia frecvenţei valorilor nivelului relativ de expresie a

receptorilor PPARα icircn PMN a fost reprezentată sub formă de histograme (fig 525)

Figura 525 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti-PPARα icircn PMN

Pentru cei 26 de pacienţi din lotul cu SM a valoarea medie a nivelului de expresie

relativă a receptorilor PPARα icircn PMN a fost de 26273 plusmn 6915 Studiind diagrama Shewhart

din figura 526 se observă că toate valorile obţinute pentru nivelul de expresie relativă

PPARα icircn PMN investigate se icircncadrează icircntre limitele definite de valorile medii plusmn 2DS

Figura 526 Lot SM

Variaţia expresiei relative a PPARα icircn

PMN

Număr pacienţi 26

Minimum 17200

Maximum 39500

Media 26273

Deviaţia Standard 6915

Valorile MFI icircncadrate icircn Media plusmn 2DS

Pentru lotul martor valoarea medie calculată a MFI a anticorpilor anti-PPARα a fost de

26480 plusmn 7088 peste 95 din valorile MFI fiind cuprinse icircn Media plusmn 2DS (figura 527)

Figura 527 Lot Non-SM Variaţia expresiei

relative a PPARα icircn PMN

Număr pacienţi 31

Minimum 16300

Maximum 41900

Media 26480

Deviaţia Standard 7088

30 valoriicircn Media plusmn 2DS

Pentru PMN analiza statistica nu a arătat existenţa unei diferenţe statistic semnificative icircntre

nivelul de expresie relativă a PPARα la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii din lotul

Non-SM (t- Test P= 090) Studiind populaţiile de PMN la subiecţii care au prezentat AHC

de HTA nu am calculat o diferenţă statistic semnificativă icircntre expresia receptorilor PPARα

la subiecţii cu istoric familial de hipertensiune arterială comparativ cu cei pentru care nu s-au

notat AHC de HTA (t- Test P= 013)De asemenea am identificat diferenţe icircntre nivelul de

expresie al PPARα icircn PMN subiecţilor care prezentau AHC de dislipidemie comparativ cu

cei fără AHC de dislipidemie (t- Test P= 017)

50 100 150 200 250 300 350 400 450 500

0

5

10

15

20

25

30

35

MFI anti-PPAR a

Frecve

nta rel

ativa (

)

Lot SM

50 100 150 200 250 300 350 400 450 500

0

5

10

15

20

25

30

MFI anti-PPAR a

Frecv

enta

relati

va (

)

Lot Non-SM

1 6 11 16 21 26 31

0

50

100

150

200

250

300

350

400

450

500

MFI

anti-

PPA

R

a

2627

1244

4010

553

4702

Media + 2DS

Media - 2 DS

Media

1 6 11 16 21 26 31 36

0

50

100

150

200

250

300

350

400

450

500

MFI

anti-

PPAR

a

2648

1230

4066

522

4774

Media+ 2DS

Media - 2DS

Media

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile Tabel XXXIV Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn Eo

Lot SM Lot Non-SM

N 26 31

Mediaplusmn SD 141057 plusmn 47604 172209 plusmn 37565

Mediana 142450 171300

Minimum 35000 68500

Maximum 233700 250600

Percentila 25 119300 153225

Percentila 75 169700 199550

Am studiat nivelul relativ de expresie a receptorilor PPARα icircn Eo iar rezultatele au

fost figurate sub forma de histograme (figura 532)

Figura 532 Distribuţia frecventelor relative ale valorilor MFI anti- PPARα icircn Eo

Din diagrama Shewhart (figura 533) se observă că toate valorile determinate pentru

nivelul de expresie relativă a PPARα icircn Eo pentru lotul SM s-au icircncadrat icircn [Media plusmn 3 DS]

peste 90 din determinări fiind cuprinse icircn [Media plusmn 2 DS] iar icircn [Media plusmn 1 DS] sunt

incluse peste 65 din valorile MFI

Figura 533 Lot SM

Variaţia expresiei relative a PPARα icircn Eo

Număr pacienţi 26

Minimum 35000

Maximum 233700

Media 141057

Deviaţia Standard 47604

24 valori icircncadrat eicircn [Media plusmn 2DS]

Pentru subiecţii incluşi icircn lotul martor analiza diagramei (figura 534) a arătat că

toate cele 31 de valori ale MFI pentru PPARα icircn Eo se icircncadrează icircn [Media plusmn 3DS] iar 30

dintre acestea se icircncadrează icircn [ Media plusmn 2 DS]

Figura 534 Lot Non -SM

Variaţia expresiei relative a PPARα icircn Eo

Număr pacienţi 31

Minimum 685

Maximum 2506

Media 172209

Deviaţia Standard 375 65

30 valori icircncadrate icircn [Media plusmn 2DS]

Comparacircnd subiecţii cu SM cu cei din lotul martor am observat o scădere

semnificativă statistic a MFI a Ac anti - PPARα icircn Eo pentru pacienţiir cu SM ( figura 535)

PPARα Eo Lot Non-SM

Număr 31

Mediana 171300

Percentila 25 152325

Percentila 75 199550

PPARα Eo Lot SM

Număr 26

Mediana 142450

Percentila 25 119300

Percentila 75 169700

Figura 5 35 Comparaţie icircntre nivelul de expresie a PPARα icircn Eo

0 500 1000 1500 2000 2500 3000

0

10

20

30

40

50

MFI anti-PPAR a

Frecvent

a relativa

()

Lot SM

400 800 1200 1600 2000 2400 2800

0

5

10

15

20

25

30

35

40

45

MFI anti-PPAR a

Frecenta

relativa

()

Lot Non-SM

1 6 11 16 21 26 31

-500

0

500

1000

1500

2000

2500

3000

MFI a

nti-PP

AR

a

14106

4765

23447

94

28117

Media + 2DS

Media- 2DS

LCI

LCS

1 6 11 16 21 26 31 36

500

1000

1500

2000

2500

3000

MFI an

ti-PPA

R a

17221

9708

24734

5951

28490

LCI

Media-2DS

Media

Media +2 DS

LCS

1200

1300

1400

1500

1600

1700

1800

1900

Lot SM Lot Non-SM

P=00072

Cu ajutorul curbei ROC am evaluat posibilitatea utilizării MFI a Ac anti - PPARα icircn

Eo ca marker pentru diagnosticul SM Valoarea MFI a Ac anti - PPARα icircn Eo care prezice cu

cea mai mare acurateţe prezenţa SM a fost de 1533 (punctul de ldquocut-offrdquo) pentru care am

calculat o sensibilitate de 5652 şi o specificitate de 7778 Calculul ariei AUC a furnizat

valoarea de 0663 şi deci determinarea parametrului MFI anti- PPARα icircn Eo are valoarea

unui test cu acurateţe redusatilde icircn diagnosticul SM Studiind expresia PPARα icircn Eo la subiecţii

care au prezentat AHC de HTA am observat o scădere semnificativă statistic (P = 00023) a

expresiei PPARα la subiecţii cu istoric familial de HTA comparativ cu subiecţii fatilderatilde AHC de

HTA (figura 537)

AHC HTA

Număr 22

Mediana 148800

Percentila 25 116425

Percentila 75 170750

AHC HTA absente

Număr 35

Mediana 170850

Percentila 25 143700

Percentila 75 195000

Figura 537 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Eo funcţie de AHC de HTA

Studiind subiecţii cu AHC declarate de dislipidemie nu am identificat diferenţe icircntre

nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Eo subiecţilor cu AHC de dislipidemie

comparativ cu cei care nu au declarat prezenţa AHC de dislipidemie (t - Test P = 067)

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor CD36

Am studiat expresia receptorilor CD36 icircn Mo subiecţilor incluşi icircn studiu

Lot Non - SM

BLot SM

Figura 539 Analiza flowcitometrica pentru receptorii CD36 icircn Mo

Pentru toţi participanţii la studiu valorile MFI au variat icircn intervalul [817 6933] iar

valoarea medie a MFI a Ac anti-CD36 a fost de 397133 plusmn 120902 Tabel XXXVII Statistică descriptivă pentru a CD36 icircn Mo

Lot SM Lot Non-SM

Media 429034 370377

Deviatia Standard 109051 125514

Mediana 411000 362800

Minimum 266400 81700

Maximum 693300 616800

Percentila 25 346200 273750

Percentila 75 469000 453300

Distribuţia frecvenţelor relative a MFI au fost prezentate sub formă histogramelor

Figura 541 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti - CD36 icircn Mo

MFI

ant

i-PPA

R a Eo

1000

1100

1200

1300

1400

1500

1600

1700

1800

1900

DA NU

AHC HTA

P=00023

1000 2000 3000 4000 5000 6000 7000 8000

0

5

10

15

20

25

MFI anti-CD36

Frecve

nta rela

tiva (

)

Lot SM

0 1778 3556 5333 7111

0

5

10

15

20

25

30

35

MFI anti-CD36

Frecve

nta rel

ativa (

)

Lot Non - SM

Referitor la lotul SM 92 din valorile MFI a Ac anti- CD36 s-au icircncadrat icircn

intervalul Media plusmn 2 DS (figura 542) iar pentru lotul martor peste 90 dintre acestea icircn

Media plusmn 2 DS (figura 543)

Figura 542 Lot SM

Variaţia MFI anti-CD36 icircn Mo

Număr pacienţi 26

Minimum 2664

Maximum 6933

Media 429034

Deviaţia Standard 109051

Figura 543 Lot Non -SM

Variaţia MFI anti- CD36 icircn Mo

Număr 31

Minimum 81700

Maximum 616800

Media 370377

Deviaţia Standard 125514

Comparacircnd subiecţii cu SM cu cei din lotul normal am constatat o tendinţă de creştere

a expresiei CD36 icircn lotul cu SM((t - Test P= 0067)

MFI anti - CD36 Lot Non-SM

Număr 31

Mediana 3628

Percentila 25 2737

Percentila 75 4533

MFI anti - CD36 Lot SM

Număr 26

Mediana 4110

Percentila 25 3462

Percentila 75 4690

Figura 544 Comparaţie icircntre cel două loturi privind MFI anti - CD36 icircn Mo

Referindu-ne la subiecţii cu AHC de HTA am observat o tendinţă de creştere a

valorilor MFI anti-CD36 comparativ cu cei care nu au avut AHC de HTA (t - Test P = 0 08)

AHC HTA

Număr 22

Mediana 442800

Percentila 25 355275

Percentila 75 519475

AHC HTA absenţe

Număr 35

Mediana 377400

Percentila 25 316900

Percentila 75 443400

Figura 545 Comparaţie icircntre expresia CD36 icircn Mo funcţie de AHC de HTA

Nu s-au calculat diferenţe semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor

PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de dislipidemie atunci cacircnd aceştia au fost comparaţi cu

subiecţii fără AHC de dislipidemie (t - Test P=031)

Corelaţii icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα si CD36

Studiind valorile intensităţii medii de fluorescenţă a Ac anti-PPARα icircn Mo Ly şi

PMN am observat că nivelul de expresie celularatilde a PPARα icircn Mo Ly şi PMN sunt corelate

puternic pozitiv atacirct icircn lotul SM cacirct şi icircn lotul martor(fig547 548)

1 6 11 16 21 26 31

0

1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

8000

Pacienti

MFI a

nti-CD

36

42903

21093

64714

10188

75619

LCI

Media

LCS1 6 11 16 21 26 31 36

-1000

0

1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

8000

MFI a

nti- C

D36

37038

11935

62141

-616

74692Media + 2 DS

Media

Media - 2 DS

3200

3400

3600

3800

4000

4200

4400

4600

4800

Lot SM Lot Non-SM

P = 00676

MFI

anti-

CD36

3400

3600

3800

4000

4200

4400

4600

4800

5000

DA NU

AHC HTA

P = 008

Figura 547 Studiul relatiilor dintre

receptorii PPARα icircn SM A Mo vs PMN B Mo vs Ly

C PMN vs Ly Graficul ilustrează coeficienţii r P dreapta de

regresie (linia centrala) intervalul de icircncredere

95 şi intervalul de predicţie 95

Figura 548 Corelaţii icircntre receptorii PPARα icircn lotul

martor

A Mo vs PMN

B Mo vs Ly

C PMN vs Ly

Tot pentru lotul SM cacircnd am evaluat relaţia dintre nivelul de expresie relativă a

receptorilor PPARα icircn Eo şi nivelul de expresie relativa a receptorilor CD 36 am obţinut o

corelaţie negativă (r = - 05 P = 001) (fig 549 A)

50 100 150 200 250 300 350 50

100

150

200

250

300

350

400

450

500

PPARα Ly

PPARα PMN

y = 56641 + 1159 x r = 086 P lt 0001

C

50 100 150 200 250 300 350 400 0

50

100

150

200

250

300

350

PPARα Mo

PPARα Ly

y = 36665 + 0607 x r = 090 P lt 0001

B

150 200 250 300 350 400 450 0

50 100 150 200 250 300 350 400 450 500

PPARα PMN

PPARα Mo

y = 2505 + 0879 x r = 081 P lt 0001

A

50 100 150 200 250 300 350

50 100 150 200 250 300 350 400 450 500

PPARα Ly

PPARα PMN

y = 95668 + 0919 x r = 081 P lt 0001

C

100 150 200 250 300 350 400

0

50

100

150

200

250

300

350

400

PPARα Mo

PPARα Ly

y = -7503 + 0829 x r = 079 P lt 0001

B

100 150 200 250 300 350 400

50

100

150

200

250

300

350

400

450

500

PPARα Mo

PPARα PMN

y = 61384 + 0882 r = 074 P lt 0001

A

Figura 549 Corelaţii icircntre expresia PPARα icircn Eo şi alte tipuri de receptori investigaţi A PPARα Eo şi CD 36 (Lot SM) B PPARα Eo şi PPARα Mo( Lot Non-SM)

Icircn lotul martor am identificat o asociere moderată pozitivă (r = 038 P = 0033) icircntre

nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Eo şi Mo (figura 549B) corelaţie absentă icircn

lotul pacienţilor cu SM

Corelaţii dintre receptorii studiaţi şi componentele sindromului metabolic

Icircn lotul de control analiza statistică a relevat faptul că icircntre circumferinţa

abdominală (CA ) şi nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Mo Ly şi PMN există o

corelaţie inversă adică scăderea expresiei PPARα la nivelul acestor populatii celulare ar fi

icircnsoţită de creşterea CA (figura 550

Figura 550Corelaţii dintre receptorii

PPARα si CA A Mo B Ly C PMN

La pacienţii cu SM am notat o corelatie moderată negativă statistic semnificativă

icircntre TG şi valorile MFI a Ac anti- PPARα icircn Mo şi Ly( fig 551)

150 200 250 300 350 400 450 50

60

70

80

90

100

110

PPARα PMN

CA r = - 040 P = 0024

C

50 100 150 200 250 300 350 50

60

70

80

90

100

110

PPARα Ly

CA r = - 046 P = 0009

B

50 100 150 200 250 300 350 400 50

60

70

80

90

100

110

PPARα Mo

CA r = - 042 P = 0017

A

50 100 150 200 250 300 350 400 500

1000

1500

2000

2500

3000

PPARα Mo

PPARα Eo

r = 038 P = 0033

B

0 500 1000 1500 2000 2500 1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

8000

PPARα Eo

CD36

r = 050 P = 0010

A

Figura 551 Lot SM Corelaţie icircntre expresia PPARα şi TG (A Mo B Ly)

Analizand corelatia dintre receptorii CD36 si valorile TA la pacientii cu SM am observat

o asociere pozitivă asteptată intre TAD si nivelul de expresie al receptorilor CD36 (fig 552)

Figura 552 Lot SM Corelaţii icircntre expresia

receptorilor CD36 şi valorile tensiunii arteriale

diastolice

Studiind corelaţiile dintre receptorii PPARα şi HDL-col la subiecţii din lotul martor am

notat o asociere pozitivă icircntre expresia PPARα icircn Mo şi Ly cu HDL-col (fig 553)

Figura 553 Lot martor Corelaţii icircntre HDL-col şi expresia PPARα icircn Mo(A) Ly(B)

Icircn lotul normal am evidenţiat corelaţii pozitive moderate dar semnificative statistic icircntre

CA şi valorile TAS (r = 062 P lt 0001) respectiv TAD (r = 050 P=0004) precum şi icircntre

CA şi glicemia subiecţilor normali (r = 052 P = 0003) Aceste date icircmpreună cu relaţia

invers proporţională identificată icircntre HDL-col şi CA (r = 050 P = 001) susţin validitatea

acestui studiu Icircn lotul subiecţilor cu SM am observat o corelaţie moderat pozitivă icircntre

expresia PPARα icircn populaţiiile de Mo şi Eo şi concentraţia a HDL-col (fig 554)

B

100 150 200 250 300 350 20

30

40

50

60

70

80

90

100

PPARα Ly

HDL-col-(mgdl)

r = 036 P = 0046

A

150 200 250 300 350 400 20

30

40

50

60

70

80

90

100

PPARα Mo

HDL-col-(mgd)l

r = 035 P = 005

70 75 80 85 90 95 100 1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

8000

TAD (mmHg)

CD36

r = 048 P = 0013

B

50 100 150 200 250 300 350 -100

0

100

200

300

400

500

PPARα Ly

TG(mgdl)

r = - 042 P = 003

A

50 100 150 200 250 300 350 400 -100

0

100

200

300

400

500

PPARα Mo

TG ( mgdl) r =- 0 43 P = 0027

Figura 554 Corelaţii icircn SM icircntre HDL-col şi expresia PPARα icircn Mo (A) şi Eo(B)

Corelaţii icircntre nivelul de expresie relativă a PPARα şi markeri ai disfuncţiei

endoteliale şi inflamaţiei cronice

Deşi nu a icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică am reţinut corelaţia invers

proporţională (r = - 0331 P = 006) dintre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα

icircn PMN şi concentraţia serică a Non-HDL-colesterolului

Studiind relaţiile dintre parametri icircn lotul de pacienţi cu SM am observat o corelaţie

moderată invers proporţională icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Eo şi

acidul uric seric (figura 555 A) corelaţie absentă la subiecţii fără SM

Figura 555 Lot SM corelaţia dintre expresia PPARα icircn Eo şi acidul uric (A) respectiv

PPARα şi fibrinogen (B)

Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P=008) am notat pentru

pacienţii cu SM corelaţia invers proporţională dintre expresia PPARα icircn Eo şi concentraţia

serică a fibrinogenului ( figura 555B)

V5 Discuţii

Icircn cadrul lucrării de doctorat am studiat nivelul de expresie relativă a PPARα icircn

leucocitele pacienţilor cu SM comparativ cu cea a subiecţilor normali Expresia PPARα a fost

studiată icircn paralel cu cea a CD36 glicoproteină exprimată pe suprafaţa a numeroase celule

din organismul uman inclusiv pe cea a Mo şi macrofagelor Prin funcţia sa de receptor pentru

particulele oxidate de LDL CD36 cunoscut ca bdquoscavenger receptorrdquo de clasa B sau

bdquotrombospodin receptorrdquo contribuie la dezvoltarea inflamaţiei de la nivel endotelial şi

formarea plăcii de ateroscleroză Referitor la studiul PPARα icircn Eo icircn sindromul metabolic

menţionăm că studiul nostru este primul care arată că nivelul de expresie a proteinei PPARα

icircn Eo măsurat prin citometrie icircn flux este semnificativ mai redus la pacienţii care sunt

diagnosticaţi cu acest sindrom De asemenea icircn lotul cu SM cercetat icircn cadrul studiului

receptorilor PPARα numărul Eo circulante a fost semnificativ mai crescut la pacienţii cu SM

B

0 500 1000 1500 2000 2500 200

250

300

350

400

450

PPARα Eo o

Fibrinogen mgdl

r =- 036 P = 008

0 500 1000 1500 2000 2500 1 2 3 4 5 6 7 8 9

10 11

PPARα Eo_

Acid uric(mgdl) r = 048 P = 0014 A

0 500 1000 1500 2000 2500 10

20

30

40

50

60

70

80

PPARα Eo

HDL(mgdl)

r = 044 P = 0024

B

100 150 200 250 300 350 400 10

20

30

40

50

60

70

80

PPARα Mo

HDL( mgdl)

r = 046 P = 0019

A

(P = 003) Aceste constatări conduc la ipoteza că Eo joacă un rol special icircn mecanismele

patogenice declanşate icircn sindromul metabolic şi că receptorii PPARα sunt importanţi icircn

implicarea Eo icircn obezitate şi insulinorezistenţă Creşterea numărului de Eo circulante este

urmată de eliberarea mediatorilor proinflamatori iar reducerea expresiei PPARα icircn Eo

determină perturbarea mecanismelor de control al inflamaţiei cu exacerbarea cascadei

proinflamatorii Consecutiv se agravează disfuncţia endotelială şi se accelerează progresia

leziunilor de ateroscleroză Extrapolacircnd aceste ipoteze putem spune că asocierea raportată

dintre boala ischemică coronariană şi Eo poate fi şi consecinţa exacerbării cascadei

proinflamatorii de la nivel vascular produsă datorită scăderii expresiei PPARα icircn Eo iar

creşterea numărului de Eo circulante poate reprezenta o adaptare a organismului uman care

icircncearcă să suplinească deficitul de receptori PPARα Analizacircnd curba ROC pentru

intensităţile medii de fluorescenţă determinate pentru anticorpii anti- PPARα icircn Eo am

obţinut pentru acest biomarker o sensibilitate a testului de 565 şi o specificitate de 778

pentru un punct de cut-off de 1533 ( figura 536 ) Deşi aria AUC (Aria under the curve) egală

cu 0663 icircncadrează acest test ca avacircnd o acurateţe redusă observăm că că această valoare

este apropiată de determinările AUC pentru alţi factori (fibrinogen raport de aterogenitate

acid uric non- HDL-colesterol) cunoscuţi ca fiind implicaţi icircn aterogeneză şi inflamaţia

cronică (figura 431) Aceste remarci alături de faptul că icircn studiul receptorilor PPARα icircn

leucocite am inclus subiecţi la primul diagnostic de SM creează premisa integrării

determinării expresiei relative a receptorilor PPARα icircn diagnosticul complex al sindromului

metabolic Putem spune că icircn final studiul expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofilele

circulante se dovedește a fi util icircn diagnosticul precoce la nivel molecular al SM permiţacircnd

identificarea timpurie a unor indivizi cu risc cardiometabolic crescut Astfel intervenţia

precoce asupra subiecţilor cu deficit de PPARα icircn Eo contribuie la managementul eficient al

afecţiunilor degenerative icircn care inflamaţia cronică icircndeplineşte un rol primordial Referitor

la populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările efectuate prin citometrie de flux nu au

arătat existenţa unor diferenţe statistice icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα

la subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali Rezultatele noastre pot fi

consecinţa caracteristicilor loturilor studiate (icircn studiul nostru au fost incluşi subiecţi recrutaţi

la primul diagnostic de SM şi icircn absenţa stimulării receptorilor PPARα cu droguri agoniste

PPARα) dar icircn acelaşi timp pot apare diferenţe datorită metodei utilizate (231 232 233)

Făcacircnd o paralelă cu un studiu publicat icircn 2013 icircn Europa (231) care a arătat creşterea

nivelului de expresie al PPARα icircn Ly şi Mo observăm că deşi numărul de subiecţi a fost

aproximativ egal (57 participanţi icircn studiul nostru 60 icircn studiul DAmore) subiecţii icircn studiul

amintit au fost recrutaţi dintr-o clinică cu profil medical la primul diagnostic de SM icircn timp

ce metoda utilizată a fost PCR (Polymerase Chain Reaction) mult mai fidelă decacirct citometria

icircn flux icircn studiul receptorilor nucleari De asemenea DAmore nu investighează expresia

PPARα icircn Eo şi PMN icircn cercetare fiind incluse doar celulele CD14+ (predominant Mo) şi

CD14- (predominant Ly) Deşi nu am obţinut diferenţe statistic semnificative icircntre cele două

loturi referitoare la nivelul de expresie relativă a PPARα icircn Mo Ly şi PMN am observat

corelaţii puternice semnificative statistic icircntre expresia receptorilor PPARα icircn aceste tipuri

celulare Rezultatele obţinute sugerează existenţa unui mecanism diferit molecular de control

icircn eozinofile care reglează cantitatea de proteină PPARα icircn eozinofile versus alte tipuri de

leucocite (la pacienţii cu SM) şi acest lucru este icircn concordanţă cu cercetările care descriu

expresia PPARα mRNA icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale

bronşice keratinocite) Studiind prin citometrie de flux nivelul de expresie relativă a

receptorului CD36 la nivelul Mo am arătat prezenţa acestuia icircn Mo tuturor subiecţilor

investigaţi Analizacircnd valorile intensităţii medii de fluorescenţă a CD36 icircn loturile studiate

am observat o tendinţă de creştere la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali

confirmacircnd implicarea receptorului CD36 icircn patogeneza acestuia Referitor la expresia

receptorului CD36 rezultatele obţinute sunt icircn consens cu studii anterioare care au arătat

creşterea expresiei CD36 la pacienţii cu SM şi diabet zaharat Astfel pe lacircngă diferenţa icircn

expresia CD36 s-au raportat şi corelaţii inverse icircntre expresia proteinei CD36 şi nivelul

adiponectinei Acelaşi studiu a evidenţiat o corelaţie pozitivă intre expresia CD36 cu expresia

receptorilor PPAR gamma relaţia cu PPARα nefiind investigată

Analiza de subgrup a relaţiilor dintre componentele SM și elementele moleculare

proinflamatorii studiate a relevat prezenţa unor asocieri semnificativ statistice icircntre acestea

Se argumentează astfel că veridicitatea studiului este susţinută de interdependenţele statistice

ale componentelor SM Determinarea coeficientului de corelaţie Icircn studiul nostru nivelul de

expresie relativă a PPARα s-a corelat moderat negativ (figura 550) cu CA a subiecţilor din

lotul normal pentru populaţiile celulare de Mo (r = - 0420 P = 001) Ly (r = - 046 P =

0009) şi PMN (r = - 040 P = 0024) date care sunt icircn concordanţă cu studiile care arată

rolul PPARα icircn furnizarea energiei prin beta-oxidarea acizilor graşi Icircn acelaşi timp icircn lotul

pacienţilor cu SM nu am identificat prezenţa unei asocieri icircntre nivelul de expresie relativă a

PPARα şi valoarea măsurată a CA Asocierea dintre expresia relativă a PPARα cu obezitatea

de tip central completează datele existente referitoare la reglarea homeostaziei energetice

conturacircnd un mecanism de control deficitar al aportului caloric al SM Icircn condiţiile icircn care

rezultatele obţinute prin metoda citometriei icircn flux nu au arătat existenţa unei corelaţii intre

expresia PPARα şi CA la pacienţii cu SM considerăm că ar fi necesar studiul

polimorfismului genei PPARA care ar putea aduce informaţii importante cu privire la

implicarea acestor receptori icircn apariţia obezităţii de tip central Subliniem acest lucru deoarece

obezitatea este o boală plurifactorială icircn care pe lacircngă factorii ereditari sunt implicaţi factori

de mediu psihologici şi sociali (245) Existenţa unei componente genetice a aterosclerozei

este legată şi de prezenţa unor variante ale genei PPARA asociate cu creşterea incidenţei bolii

cardiovasculare (82) şi a SM (249) Icircn studiul nostru am constatat o scădere statistic

semnificativă a nivelului expresiei relative a receptorilor PPARα icircn Eo la subiecţii cu

antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială comparativ cu subiecţii fără istoric

familial de hipertensiune (figura 537) Deşi diferenţele calculate icircntre loturile studiate nu au

icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică la subiecţii care au declarat prezenţa

antecedentelor familiale de hipertensiune arterială remarcăm o tendinţă de scădere a

intensităţii medii de fluorescenţă pentru Ac anti-PPARα la nivelul Mo (figura 515 P = 006

) icircn timp ce expresia relativă a CD36 icircnregistrează o creştere la acesti subiecţi (figura 545 P

= 008) Icircn contextul riscului cardiovascular foarte icircnalt al pacienţilor cu SM amintim şi

existenţa corelaţiei pozitive dintre valorile tensiunii arteriale diastolice şi expresia relativă a

receptorului CD36 (r = 0483 P = 0013) Această constatare este icircn consens cu studiile care

au arătat că forma solubilă circulantă a CD36 este asociată cu factorii de risc cardiovasculari

fiind propusă ca un marker precoce al aterosclerozei Activarea PPARα este asociată cu

modularea metabolismului lipidic iar agoniştii PPARα sunt utilizaţi icircn mod curent pentru

tratamentul dislipidemiei Sub acţiunea agoniştilor PPARα se obţine o icircmbunătăţire a funcţiei

endoteliale şi a parametrilor reologici funcţiile pleiotropice ale agoniştilor PPARα fiind

dovedite icircn trialuri clinice controlate Icircn populaţiile de Mo şi Ly la pacienţii cu SM

cercetarea noastră a evidenţiat o asociere negativă icircntre nivelul de expresie relativă a

receptorilor PPARα şi concentraţia TG serice (figura 551) Astfel scăderea expresiei

receptorilor PPARα este asociată cu creşterea nivelului TG serice contribuind la profilul

lipidic aterogen din SM Icircn conformitate cu literatura de specialitate icircn studiul efectuat prin

metoda citometriei icircn flux am găsit prezenţa asocierii icircntre nivelul de expresie al PPARα şi

HDL-colesterol Corelaţia pozitivă dintre nivelul de expresie relativă PPARα şi concentraţia

HDL-colesterolului a fost observată icircn lotul martor icircn populaţiile de Mo (r = 035 P = 005)

şi Ly ( r = 036 P = 004) (figura 553) susţinacircnd faptul că stimularea receptorilor PPARα

este legată de creşterea nivelului seric al lipoproteinelor cu densitate crescută La pacienţii cu

SM corelaţia dintre expresia PPARα şi HDL-colesterol a fost evidenţiată icircn populaţiile de Mo

(r = 046 P = 0019) şi eozinofile (r = 044 P = 0024) Se desprinde concluzia că icircn

sindromul metabolic scăderea concentraţiei HDL-colesterol este legată de diminuarea

nivelului de expresie relativă a receptorilor nucleari PPARα icircntărind afirmaţiile legate de

rolul acestor receptori icircn progresia bolilor cardiovasculare Studiind reactanţii de fază acută

analiza statistică a relevat o diferenţă semnificativă din punct de vedere statistic icircntre valorile

fibrinogenului la pacienţii cu SM atunci cacircnd au fost comparaţi cu subiecţii fără SM

(Capitolul IV4 P lt0 001 figura 427A) De asemenea icircn Capitolul V dedicat studiul

expresiei relative a receptorilor PPARα studiul valorilor fibrinogenului a arătat creşterea

acestui reactant de faza acută icircn lotul cu SM comparativ cu lotul martor (P lt0 0001) Icircn

studiul nostru am calculat o corelaţie invers proporţionala (r = - -036 fig 555B) icircntre

nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile şi concentraţia serică a

fibrinogenului Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P = 008) am reţinut

această asociere deoarece am demonstrat că nivelul de expresie relativă al receptorilor

PPARα icircn eozinofile este mai scăzut icircn sindromul metabolic iar sindromul metabolic este

caracterizat printr-un status inflamator cronic status caracterizat şi de creşterea concentraţiei

serice a fibrinogenului De asemenea notam ca această corelaţie negativă se află icircn

concordanţă cu studiile care arata că tratamentul cu agonişti PPARα (fibraţi) determina

scăderea nivelului seric al fibrinogenului contribuind la diminuarea inflamaţiei cronice din

sindromul metabolic şi icircn consecinţă amelioracircnd insulinorezistenţa

LIMITE ȘI DIFICULTĂȚI IcircN CERCETARE

Icircn cadrul Tezei de Doctorat am desfăşurat o cercetare care şi-a propus studierea

expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Recrutarea anamneza şi examinarea

clinică a subiecţilor au fost realizate icircn cadrul Cabinetului de Medicină de Familie CMI Popa

Elena din Iaşi iar determinările hematologice şi biochimice s-au efectuat icircn cadrul

Laboratorului Ambulatorului de Specialitate al Spitalului Universitar ldquoSfacircntul Spiridon din

Iaşi Icircn studiul epidemiologic şi al markerilor inflamatori al sindromului metabolic desfăşurat

au fost incluşi un număr de 1530 de participanţi pe baza liberului consimţămacircnt examinaţi icircn

perioada 01012013 - 31122013 Icircn continuare icircn perioada 1012014 - 28022014 pe baza

criteriilor de includere şi excludere icircn cele două loturi de studiu am investigat un număr de 57

de subiecţi prezentaţi la consultaţie icircn această perioadă şi care au icircndeplinit criteriile de

includere icircn cele două loturi (Lot SM şi Lot Control) constituite pentru evaluarea nivelului de

expresie a receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Explorarea nivelului de expresie

relativă a receptorilor PPARα s-a desfăşurat icircn cadrul Laboratorului de Biologie Moleculară

de pe platforma Institutului Regional de Oncologie Datorită resurselor proprii financiare

limitate trebuie să subliniez că aceasta cercetare nu ar fi fost posibilă fără contribuţia unor

cercetători din domeniul medical care m-au sprijinit necondiţionat atacirct icircn elaborarea

protocolului de lucru cacirct şi icircn efectuarea propriu-zisă a studiului Icircn acest sens menţionăm şi

faptul că pentru studiul receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic am utilizat aparatura

Laboratorului de Biologie Moleculară (care deserveşte icircntreaga Regiune a Moldovei) Pe

această cale mulţumesc personalului Laboratorului de Biologie Moleculară pentru ajutorul

acordat icircn desfăşurarea cercetării doctorale icircn condiţiile icircn care se observa creşterea

numărului de pacienţi care se adresează acestei platforme de cercetare Mulţumesc de

asemenea şi Doamnei Doctor Elena Butoi din cadrul Institutului de Biologie şi Patologie

Moleculară ldquoNicolae Simionescurdquo Bucureşti) pentru donaţia anticorpului secundar anti-

FITC Icircn consecinţă pentru recrutarea unui număr mai mare de participanţi ar fi fost necesară

icircn primul racircnd obţinerea unor resurse financiare suplimentare pentru achiziţia de aparatură şi

reactivi Totuşi numărul subiecţilor recrutaţi este apropiat de numărul subiecţilor raportaţi icircn

cadrul unor granturi de cercetare care aveau ca ţinta studiul expresiei receptorilor PPARα

(212 227 228 231) Rezultatele obţinute continua seria lucrărilor care arata importanta

studiului mecanismelor etiopatogenice ale sindromului metabolic patologie care se afla icircntr-o

continuă creştere La pacienţii cu SM pe lacircngă diminuarea nivelului de expresie a receptorilor

PPARα icircn eozinofile ne aşteptam şi la evidenţierea unor modificări icircn expresia PPARα şi icircn

populaţiile de Ly Mo şi PMN Acest fapt poate fi explicat de utilizarea unor celule provenite

de la pacienţi fără afectare cardiovasculară fără diabet zaharat şi necesită continuarea

studiului pe culturi celulare icircn condiţii de stimulare cu agonişti PPARα deziderat care

impune continuarea investigării expresiei PPARα printr-un grant de cercetare

ORIGINALITATEA ȘI CONTRIBUȚIILE INOVATIVE ALE TEZEI DE

DOCTORAT PERSPECTIVE DE CERCETARE

Evaluarea nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn leucocitele circulante

aduce noi perspective icircn studiul obezităţii şi sindromului metabolic Importanta studiului

expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic derivă din prevalenta crescută a

sindromului metabolic icircn populaţia cercetată la care se adaugă riscul cardiovascular foarte

icircnalt al acestor pacienţi cu implicaţii majore icircn sănătatea publică Rolul receptorilor PPARα

icircn inflamaţie şi aterogeneza este binecunoscut dar studiul nostru este primul care a arătat că

nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα este semnificativ mai scăzut in populatiile

de eozinofile la pacienţii cu SM Această concluzie coroborata cu existenţa unei stracircnse

asocieri intre expresia receptorilor PPARα la nivelul Mo limfocitelor şi PMNlor creeaza

ipoteza existenţei unui mecanism de control diferit al expresiei PPARα la nivelul

eozinofilelor Această cercetare aduce informaţii importante referitoare la mecanismele

proinflamatorii care stau la baza insulinorezistenţei şi riscului cardiometabolic şi impune

continuarea studiului acestor receptori nucleari prin citometrie icircn flux metodă care poate fi

aplicată şi la scara mai largă dacă sunt asigurate resursele materiale necesare cercetării

Cercetarea prin citometrie icircn flux poate fi completată de studiul polimorfismului genei

PPARA şi astfel se pot identifica timpuriu indivizii cu potenţial risc cardiometabolic crescut

Studiul receptorilor PPARα a stabilit conexiuni cu factori proinflamatori şi aterogenetici iar

continuarea cercetării poate aduce şi elemente noi de diagnostic precoce icircn sindromul

metabolic contribuind la icircmbunătăţirea prognosticului acestor pacienţi

CONCLUZII FINALE

1 Aplicarea scorului de SM alături de implementarea algoritmului electronic de diagnostic

contribuie la o prelucrare rapidă eficientă și standardizată a informaţiilor la nivelul

medicinei primare

2 Prevalenţa SM calculată astfel icircn cadrul studiului este crescută (2732) icircn concordanţă

cu datele raportate

3 Controlul factorilor de risc cardiometabolici incluşi icircn SM se poate realiza prin

managementul stilului de viaţă (scăderea greutăţii corporale prin combaterea

sedentarismului şi adoptarea unei diete antiaterogene şi hipocalorice) şi administrarea

terapiei medicamentoase

4 Este necesară adoptarea unei politici de sănătate publică pentru prevenirea creşterii icircn

populaţie a prevalenţei obezităţii şi a diabetului zaharat

5 Noi metode de cercetare icircn domeniul SM axate pe diagnosticarea precoce şi cuantificarea

eficientă a acestuia duce la diminuarea incidenței evenimentelor cardiovasculare majore

6 Sindromul metabolic se caracterizează printr-un status inflamator cronic

7 Valorile Non-HDL-colesterolului şi a raportului de aterogenitate sunt semnificativ mai

mari la pacienţii cu SM

8 Dintre reactanţii de faza acută am observat că valoarea medie a fibrinogenului este mai

crescută icircn lotul cu SM

9 Valorile eozinofilelor sunt crescute icircn sindromul metabolic iar explorarea relaţiei dintre

eozinofile şi obezitate constituie una din direcţiile de studiu actuale ale sindromului

metabolic

10 Evaluarea markerilor inflamatori icircn contextul sindromului metabolic este utilă icircn

evaluarea complexă a a factorilor de risc cardiometabolici

11 Prin metoda citometriei icircn flux am demonstrat prezenta Receptorilor Activaţi de

Inductorii Proliferării Peroxizomilor ndash Alpha (PPARα) icircn toate populaţiile de leucocite

studiate (Mo limfocite PMN eozinofile) atacirct icircn lotul pacienţilor cu SM cacirct şi icircn lotul

martor

12 Utilizacircnd intensitatea medie de fluorescenţă a anticorpilor anti- PPARα am arătat că

nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile este semnificativ mai redus

la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali

13 Acest studiu este primul care a demonstrat existenţa unei scăderi statistic semnificative a

nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofilele pacienţilor cu SM

confirmacircnd cercetările recente care au evidenţiat rolul eozinofilelor şi al receptorilor

PPARα icircn obezitate reglarea inflamaţiei cronice şi aterogeneza

14 Contrar aşteptărilor noastre icircn populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările

efectuate icircn cele două loturi de studiu (cu şi fără sindom metabolic) nu am evidenţiat

diferenţe statistic seminificative icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα la

subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali

15 Icircn populaţiile de Mo limfocite şi polimorfonucleare am observat corelaţii puternice

semnificativ statistic icircntre expresia PPARα icircn aceste tipuri celulare sugeracircnd existenţa

unui mecanism unic de control al inflamaţiei cronice la nivelul acestor celule probabil

diferit de cel din eozinofile

16 La subiecţii cu SM expresia relativă a PPARα icircn Eo este invers asociată cu expresia

receptorului CD36 (receptor al particulelor de ox - LDL şi propus ca un marker precoce al

aterosclerozei) dovedind rolul antiinflamator al receptorilor PPARα la nivel endotelial

17 La pacienţii cu antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială nivelul de

expresie al receptorilor PPARα icircn eozinofile şi Mo este diminuat comparativ cu subiecţii

fără antecedente familiale de hipertensiune arterială Putem spune că studiul efectuat de

noi aduce informaţii importante legate de geneză aterosclerozei şi hipertensiunii arteriale

18 Prin studiul asocierilor dintre receptorii PPARα şi componentele clinice ale sindromului

metabolic am arătat rolul acestor receptori icircn determinismul obezităţii de tip central

nivelul expresiei relative a receptorilor PPARα fiind invers proporţional cu circumferinţa

abdominală

19 Icircn acelaşi timp nivelul de expresie a PPARα icircn sindromul metabolic este asociat pozitiv

cu concentraţia serică a HDL-colesterolului şi invers asociat cu nivelul trigliceridelor

serice dovedind rolul acestor receptori icircn diminuarea procesului inflamator cronic de la

nivel vascular

20 La pacienţii cu SM scăderea expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofile este corelată cu

creşterea unor markeri ai sindromului inflamator cronic cardiometabolic (acid uric

fibrinogen) ilustracircnd importanta receptorilor icircn reglarea status-ului inflamator cronic din

sindromul metabolic

21 Utilizarea metodei flowcitometrice pentru studiul expresiei relative a receptorilor PPARα

icircn leucocite a adus informaţii importante cu privire la mecanismele moleculare de control

implicate icircn patogenia bolilor cardiometabolice icircn concordanţă cu cercetările care descriu

expresia PPAR icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale bronşice

keratinocite)

BIBLIOGRAFIE SELECTIVA

1 Kahn R Metabolic syndrome- what is the clinical usefulness Lancet 2008371(9628)1892-3

2 Reaven GM The metabolic syndrome is this diagnosis necessary Am J Clin Nutr 2006 83(6)1237-7

3 Grundy SM Pre-Diabetes Metabolic Syndrome and Cardiovascular Risk J Am Coll Cardiol 201259(7)

635-43

4 International Diabetes Federation IDF Diabetes Atlas 6th edn International Diabetes Federation Belgium

Brussels 20131-155

5 World Health Organization Global Status Report on Noncommunicable Diseases 2010 World Health

Organization Geneva Switzerland 20111-176

6 Coman AE Petrovanu R Sindromul metabolic in practica de ambulator Editura Pim Iaşi 2009 1-103

7 Grundy SM Becker D Clark LT et alThird Report of the National Cholesterol Education Program (NCEP)

Expert Panel on Detection Evaluation and Treatment of High Blood Cholesterol in Adults (Adult

Treatment Panel III) Final Report Circulation 2002106(25)3143-90

8 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J Metabolic syndrome- a new worldwide definition A Consensus Statement

from the International Diabetes Federation Diabet Med 2006 23(5)469-80

9 KG Alberti KG Eckel RH Grundy SM etal International Diabetes Federation task force on epidemiology

and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart Association World Heart

Federation International Atherosclerosis Society International Association for the study of obesity

Harmonizing the metabolic syndrome a joint interim statement of the International Diabetes Federation task

force on epidemiology and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart

Association World Heart Federation International Atherosclerosis society and International Association

for the study of obesity Circulation 2009120(16)1640-5

10 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J IDF Epidemiology Task Force The metabolic syndrome new

worldwide definition Lancet 2005 366 1059 - 62

11 Oleszczyk M Svab I Seifert B et al Primary healthcare in the developing part of Europe changes and

development in the former Eastern Bloc countries that joined the European Union following 2004 Med Sci

Monit 2009(15)78ndash84

12 Jung U J Choi M S Obesity and Its Metabolic Complications The Role of Adipokines and the

Relationship between Obesity Inflammation Insulin Resistance Dyslipidemia and Nonalcoholic Fatty

Liver Disease Int J Mol Sci 2014rsquo15(4) 6184-223

13 Vanden Heuvel JP Peters JM Peroxisome Proliferators In Ramos K (ed) Cellular and Molecular

Toxicology (Second Edition) Volume 2 New York Elsevier Science Inc 2010 145 - 67

14 Yessoufou A Wahli W Multifaceted roles of peroxisome proliferator-activated receptors (PPARs) at the

cellular and whole organism levels Swiss Med Wkl 2010140w13071 doi104414smw201013071

15 Azhar S Peroxisome proliferator-activated receptors metabolic syndrome and cardiovascular disease

Future Cardiology 20106(5)657-91

16 Andries G Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity

Diabetes and Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(Suppl)24-32

17 Zandbergen F Plutzky J PPARalpha in atherosclerosis and inflammation Biochim Biophys Acta

20071771(8)972-82

18 Straus DS Glass CK Anti-inflammatory actions of PPAR ligands new insights on cellular and molecular

mechanisms Trends Immunol 200728(12)551-8

19 Zlei M Zugun- Eloae F Carasevici E Citometrie icircn flux - Bază şi clinică Icircn Hinescu ME (ed) Citometrie icircn

flux - principii şi aplicaţii clinice Bucureşti Editura Viaţa Medicală Romacircnească 20111-128

20 Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity Diabetes and

Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(9)24-32

21 Woerly G Honda K Loyens M et al Peroxisome proliferator-activated receptors alpha and gamma down-

regulate allergic inflammation and eosinophil activation J Exp Med 2003198(3)411-21

22 Salle-Saumont D Brenuchon C Kanda A et al Peroxisome proliferator-activated receptor alpha regulates

skin inflammation and humoral response in atopic dermatitis J Clin Allergy Immunology 2008 21(4)962-8

23 Schote A Turner J Schiltz J et al Nuclear receptors in human immune cells expression and correlations

Mol Immunolog 200744(6)1436-45

24 DAmore S Vacca M Graziano G et al Nuclear receptors expression chart icircn peripheral blood

mononuclear cells identifies patients with Metabolic Syndrome Biochim Biophys Acta

20131832(12)2289-301

25 Uthurralt J Gordish-Dressman H Bradbury M T et al PPARalpha L162V underlies variation in serum

triglycerides and subcutaneous fat volume in young males BMC Med Genet 2007855

26 Hiukka A Leinonen ES Jauhiainen M et al Long-term effects of fenofibrate on VLDL and HDL

subspecies icircn participants with type 2 diabetes mellitus Diabetologia 2007 50(10)2067-75

27 Robins SJ Rubins HB Faas FH et alInsulin resistance and cardiovascular events with low HDL

cholesterol The Veterans Affairs HDL Intervention Trial (VA-HIT) Diabetes Care 2003 26(5)1513-7

28 Devaraj S Siegel D Jialal I Statin Therapy in Metabolic Syndrome and Hypertension Post-JUPITER

What is the Value of CRP Curr Atheroscler Rep 2011 13(1) 31ndash42

29 Imperatore G Riccardi G Iovino C et al Plasma Fibrinogen A New Factor of the Metabolic Syndrome A

population-based study Diabetes Care 19982 1(4)649-54

30 Krysiak R Gdula-Dymek A Bachowski R Okopien B Pleiotropic effects of atorvastatin and fenofibrate

in metabolic syndrome and different types of pre-diabete Diabetes Care 201033(10)2266-70

31 Hermans MP Impact of Fenofibrate on Type 2 Diabetes Patients with Features of the Metabolic Syndrome

Subgroup Analysis From FIELD Curr Cardiol Rev 20106(2)112-8

32 Silverstein R Inflammation atherosclerosis and arterial thrombosis Role of the scavenger receptor CD36

Cleveland Clinic Journal of Medicine 200976(Suppl 2)S27-S30

33 Hăncu N Obezitatea In Vereşiu IA (ed) Diabetul zaharat nutritia si bolile metabolice Volume 2 Editura

Echinox Cluj- Napoca 2010 1-15

Lista lucrări publicate

1 Elena Popa Maria Maidaniuc Agnes Bacusca Alamir Diaa Rodica Petrovanu Adorata Elena

Coman Disfuncţia endotelială ndash de la mecanisme moleculare la cuantifi care şi tratament icircn practica

medicală Practica Medicală 20149(3) 109-14

2 Elena Popa Agnes Bacusca Alamir Diaa Maria Maidaniuc Rodica Petrovanu Adorata Elena Coman

The function of insulin receptor (IRF) in evolution of obesity correlation with adipocytes diameters

Archives of the Balkan Medical Union 201449(3) 275-9

3 Elena Popa Florin Zugun-Eloae Mihaela Zlei Daniela Jitaru Oana Maria Pintilie Adorata Elena

Coman Maria Traian Didona Anca Ungureanu Eugen Carasevici - acceptata pentru numarul 42014

Flow cytometry analysis of PPAR-alpha receptors in metabolic syndrome) Revista Romană de

Medicină de Laborator(RRLM-D-14-00034R1- adeverinţa ataşată

Page 10: REZUMAT TEZĂ DE DOCTORAT - umfiasi.ro Doctorat/rezumat... · universitatea de medicinĂ Şi farmacie “grigore t. popa” iaŞi facultatea de medicinĂ rezumat tezĂ de doctorat

criteriilor Harmonised I Lotul SM a fost alcătuit din 185 bărbaţi şi 204 femei raportul

bărbaţifemei fiind de 090 (95 CI073-112) Lotul de control (fără SM) a fost alcătuit

din cei 1141 participanţi care nu au icircntrunit criteriile de diagnostic ale sindromului metabolic

Din cei 1141 de subiecţi 530 au fost de sex masculin iar 611 de sex feminin raportul

bărbaţifemei fiind 087 (95 CI 077-097) Vacircrsta subiecţilor a fost semnificativ mai mare

icircn lotul pacienţilor cu SM (5976plusmn1322 ani) comparativ cu lotul martor (4333plusmn 1748 ani) (t-

Test Plt00001) Aşa cum ne-am aşteptat valorile medii ale componentelor clinice ale SM

(circumferinţa abdominală tensiunea arterială sistolică şi diastolică) au fost mai mari icircn lotul

pacienţilor cu SM (t-Test Plt0001 pentru fiecare dintre componente) Studiind parametrii

biochimici incluşi icircn diagnosticul SM valorile medii ale glicemiei şi TG au fost semnificativ

mai crescute icircn lotul SM (t-Test Plt00001 pentru ambele constante) Icircn acelaşi timp

valoarea medie determinată a HDL-col a fost semnificativ mai mare la subiecţii din lotul

martor ( t-Test Plt00001) SM se caracterizează printr-o dislipidemie aterogenă

caracterizată de creşterea TG scăderea HDL-col concomitent cu creşterea LDL-col creşterea

Non-HDL-col şi a raportului de aterogenitate (Col totalHDL-col) (185) Comparacircnd cele

două loturi am observat că valoarea medie a LDL-colesterolului determinată icircn lotul

pacienţilor cu SM a fost semnificativ mai mare faţă de subiecţii din lotul martor (t-Test P =

00002) Măsurarea Non-HDL-colesterolului a arătat prezenţa unei diferenţe semnificative

icircntre cele două loturi (figura 420 B) Astfel icircn concordanţă cu prezenţa dislipidemiei

aterogene valoarea medie a Non-HDL-col a fost semnificativ mai mare (t-Test Plt 00001) icircn

lotul cu SM comparativ cu lotul de control Icircn contextul inflamației cronice şi aterogenezei

din sindromul metabolic am evaluat sensibilitatea şi specificitatea Non-HDL-colesterolului

ca test diagnostic al SM Valoarea Non-HDL-colesterolului care prezice cu cea mai mare

acurateţe prezenţa SM a fost de 151 mgdl (punctul de ldquocut-offrdquo) pentru care am calculat o

sensibilitate de 64 27 şi o specificitate de 5872 Calculul ariei AUC a furnizat valoarea

de 0605 şi deci determinarea concentraţiei serice a parametrului Non-HDL-colesterolului are

valoarea unui marker cu acurateţe redusă Am studiat valorile raportului Col totalHDL-col icircn

cele două loturi şi am constatat că la pacienţii cu SM valoarea media a raportului de

aterogenitate este semnificativ mai mare faţă de valoarea raportului determinată icircn lotul

martor (t-Test Plt 00001) Pentru raportul de aterogenitate studiat analiza curbei ROC a

arătat că valorile mai mari decacirct punctul de ldquocut-offrdquo de 431 prezic prezenţa SM cu cea mai

mare sensibilitate (6381 ) şi specificitate (6582)Valoarea AUC pentru indicele de

aterogenitate a fost de 0667 şi icircn studiul SM acest indice poate fi considerat un marker cu

acurateţe redusă Valoarea medie determinată a acidului uric la subiecţii fără SM a fost

semnificativ mai mică decacirct icircn lotul SM (t-Test Plt 00001) Curba ROC a arătat că valorile

acidului mai mari de 43 mgdl prezic diagnosticul de SM cu cea mai mare sensibilitate

(8107) şi specificitate (5328) Pentru acidul uric AUC a avut valoarea de 0655 şi

icircncadrează determinarea acidului uric seric icircn racircndul testelor cu acurateţe redusă (187)

Comparacircnd populaţiile de leucocite (tabel XXI) valoarea medie determinată a

numărului de Eo a fost semnificativ mai mare icircn lotul cu SM comparativ cu lotul martor (t-

Test Plt0001) Analizacircnd curba ROC trasată pentru valorile numărului de Eo am observat

că valorile ldquocut-offrdquo mai mari de 200 Eomm3

pot prezice prezenta SM cu cea mai mare

specificitate (7705) şi sensibilitate (3978) Pentru diagnosticul SM calculul ariei AUC a

arătat faptul că determinarea numărului de Eo are valoarea unui test diagnostic cu acurateţe

redusă (AUC = 0 589) Comparacircnd valorile medii ale fibrinogenului am calculat o diferenţă

statistic semnificativă icircntre cele două loturi valoarea medie a fibrinogenului fiind mai mare icircn

lotul SM ((t-Test P lt 00001) Cu ajutorul curbei ROC am observat că valorile fibrinogenului

mai mari de 306 mgdl prezic sindromul metabolic cu o sensibilitate de 7511 şi specificitate

de 6056 Fibrinogenul a fost icircncadrat icircn categoria markerilor inflamatori cu acurateţe

redusă AUC avacircnd valoarea de 0690 Icircn loturile de studiu am calculat AUC corespunzătoare

criteriilor de diagnostic ale SM Am observat că icircn cazul scorului Harmonised I

sensibilitatea şi specificitatea sunt de 100 iar AUC este egală cu 1000 Pentru cele cinci

criterii de diagnostic AUC a avut valori icircntre 0636 (pentru variabila HDL-col) şi 0804

(pentru variabila CA) (figura 431)

AUC ES 95 CI

Scor SM Harmonised I 1000 00000 0997 - 1000

CA (cm) 0804 00133 0781 - 0825

TAD (mmHg) 0666 00169 0639 - 0692

TAS (mmHg) 0757 00148 0732 - 0780

Glicemie (mgdl) 0742 00160 0717 - 0766

Trigliceride (mgdl) 0756 00175 0732 - 0780

HDL- colesterol 0636 00183 0609 - 0662

Figura 431 Analiza AUC criterii de diagnostic ale SM

Studiind figura 432 se observă că valoarea AUC pentru markerii studiaţi este cuprinsă

icircntre 0589 (icircn cazul variabilei Eo) şi 0690 (icircn cazul fibrinogenului) Icircn contextul SM

acurateţea acestor markeri ai inflamaţiei cronice şi disfuncţiei endoteliale poate fi considerată

redusă deoarece AUClt07 pentru toţi markerii investigaţi (figura 431) Totuşi valorile ariilor

parametrilor reprezentaţi icircn figura 431 sunt apropiate de valorile AUC ale variabilelor TAD

şi HDL-col (figura 432) şi deci pot fi utilizaţi pentru completarea diagnosticului de SM

AUC ES 95 CI

Non-HDL-colesterol 0605 00171 0580 - 0630

Col totalHDL-col 0607 00163 0642 - 0691

Acid uric 0655 00161 0630 - 0679

Fibrinogen 0690 00206 0658 - 0720

Eozinofile 0589 00176 0564 - 0615

Figura 432 AUC markeri ai SM inflamaţiei cronice şi aterogenezei

Discuţii

Status-ul proinflamator din SM asociat cu insulinorezistenţa şi disfuncţia endotelială

constituie o verigă de legătură dintre inflamaţie şi procesele metabolice complexe icircnsoţindu-

se de deteriorarea funcţiilor vasculare şi creşterea riscului de evenimente cardiovasculare

majore (2858) Studiul efectuat a arătat o diferenţă icircntre vacircrstele subiecţilor din cele două

loturi vacircrsta pacienţilor cu SM fiind semnificativ mai mare (Plt0001) comparativ cu subiecţii

normali confirmacircnd faptul menţionat că vacircrsta reprezintă unul din stimulii care agravează

inflamaţia cronică Am arătat că valorile fibrinogenului sunt mai mari icircn SM comparativ cu

Scor Harmonised I

0 20 40 60 80 100

0

20

40

60

80

100

100-Specificitate

Sen

sib

ilit

ate

Criterii diagnostic SM

0 20 40 60 80 100

0

20

40

60

80

100

100-Specificitate

Sens

ibili

tate

CA

TAD

TAS

Glicemie

Trigliceride

HDL-C

0 20 40 60 80 100

0

20

40

60

80

100

100-Specificitate

Sensi

bilita

te

Non-HDL-C

Col T HDL-C

Acid uric

Fibrinogen

Eozinofile

lotul martor atacirct la bărbaţi cacirct şi la femei icircn concordanţă cu studiile anterioare Evaluarea

fibrinogenului este importantă nu numai icircn SM pentru definirea contextului proinflamator şi

protrombotic ci şi icircn predicţia cardiovasculară la subiecţii normali Studiind populaţiile

leucocitare am obţinut diferenţe semnificative icircn cazul Eo valoarea medie a acestora fiind

semnificativ mai mare icircn lotul cu SM comparativ cu lotul martor (P lt 0001 figura 425B)

Implicarea Eo icircn SM s-a conturat icircn ultimul deceniu aceste celule fiind implicate icircn recrutarea

macrofagelor din ţesutul adipos Experimental s-a constatat că o creştere a Eo apărută ca

urmare a infectării cu helminţi sau stimulare cu IL-5 este urmată de icircmbunătăţirea toleranţei la

glucoză (199) Controlul pe care icircl exercită Eo asupra activării macrofagelor ar putea fi cheia

intervenţiei asupra obezităţii icircn viitorul apropiat(165199) Hiperuricemia asociata frecvent cu

SM este cunoscut ca un factor independent de risc cardiovascular (192 202) In concordanţă

cu aceasta afirmaţie in studiul nostru am constatat ca nivelul seric al acidului uric a fost mai

crescut in lotul cu SM diferenţa semnificativă din punct de vedere statistic (P lt 00001)

Dislipidemia aterogenă din sindromul metabolic şi diabetul zaharat se caracterizează prin

creşterea trigliceridelor şi a Non-HDL-col scăderea HDL-col creşterea numărului de

particule LDL modificate (185190) La pacienţii cu SM am descris un profil aterogenetic

cu risc crescut de evenimente cardiovasculare majore

STUDIUL RECEPTORILOR ACTIVAŢI DE INDUCTORII PROLIFERĂRII

PEROXIZOMILOR-ALPHA IcircN LEUCOCITELE CIRCULANTE

Ipoteza de lucru

Studii experimentale efectuate au arătat că rolul PPARα icircn ateroscleroză derivă din

implicarea acestor receptori icircn limitarea inflamaţiei Plecacircnd de la acest fundament ne-am

propus evidenţierea receptorilor nucleari activaţi de inductorii proliferării peroxizomilor-

alpha (PPARα) prin citometrie de flux icircn leucocitele din sacircngele periferic alături de

evaluarea acestei metode icircn cuantificarea expresiei relative a PPARα ca test diagnostic

precoce al modificărilor metabolice SM Studiul expresiei relative a receptorilor PPARα a

plecat de la premisa că dacă SM se caracterizează printr-un status inflamator cronic nivelul

de expresie a PPARα icircn leucocitele circulante este mai scăzut la pacienţii cu SM comparativ

cu subiecţii normali Referitor la studiul receptorului CD36 am plecat de la presupunerea că

nivelul de expresie al acestui receptor icircn SM este crescut dat fiind importanţa acestui receptor

icircn inflamaţia aterosclerotică Avacircnd icircn vedere efectele receptorilor amintiţi icircn

insulinorezistenţă şi aterogeneză am considerat necesară evaluarea prezenţei receptorului

nuclear PPARα icircn paralel cu studiul receptorului bdquoscavengerrdquo CD-36 prin metoda citometriei

icircn flux Astfel icircn studiul efectuat mi-am propus şi investigarea existenţei unei legături icircntre

nivelul de expresie al receptorilor PPARα şi cel al receptorului CD-36 De asemenea ne-am

icircndreptat atenţia spre stabilirea unor asocieri icircntre componentele clinice şi biochimice ale

sindromului metabolic şi nivelul intensităţilor de fluorescenţă ale PPARα şi CD-36 ca măsură

a expresiei relative a acestor receptori

Material și metodă

Studiul receptorilor PPARα icircn contextul sindromului metabolic s-a desfăşurat icircn

perioada 1012014 -28022014 pe baza metodologiei studiilor de tip caz-martor Am urmărit

identificarea unor diferenţe icircntre expresia receptorilor PPARα la pacienţii cu SM comparativ

cu subiecţii sănătoşi diferenţe care ar putea fi utile icircn diagnosticul precoce al SMRecrutarea

pacienţilor s-a efectuat din pacienţii prezentaţi pentru consultaţie la Cabinetul Individual

ldquoCMI Dr Popa Elenardquo situat icircn strada Ion Creanga din Iaşi Pentru studiul receptorilor

PPARα icircn sindromul metabolic au fost selecţionaţi un număr de 57 de subiecţi 26 de subiecţi

cu SM (constituind lotul SM) şi 31 subiecţi fără SM constituind lotul de control (Lot Non-

SM) Pentru studiul SM pacienţii au fost recrutaţi din masa de populaţie arondată cabinetului

de MF fără istoric de SM diabet zaharat boală cardio-vasculară aflați la primul diagnostic

de SM evaluarea completă a acestora fiind urmată de includerea icircn programul de

management cardiovascular şi metabolic conform Ghidurilor Terapeutice aflate icircn vigoare

Lot SM a) criterii de includerevacircrsta peste 18 ani recrutarea pe baza semnării

Consimţămacircntului liber informatSM nou-diagnosticat pe baza prezenţei a minim trei criterii

de diagnostic pentru SM conform Harmonised I b) criterii de excluderevacircrstă sub 18 ani

refuzul semnării Consimţămacircntului liber informat femei icircn perioada de graviditate sau de

lactaţie SM anterior diagnosticat istoric de diabet zaharat boală cardiovasculară constituită

tratament cu agonişti PPARα (ie fibraţi etc)

Lot martor (Non-SM) a) criterii de includerevacircrsta peste 18 ani recrutarea pe baza

semnării Consimţămacircntului liber informat absenţa diagnosticului de SM b) criterii de

excludere vacircrstă sub 18 ani refuzul semnării Consimţămacircntului liber informat femei icircn

perioada de graviditate sau de lactaţie

Studiul receptorilor PPARα a inclus două subetape

A Studiul componentelor sindromului metabolic conform criteriilor Harmonised I

Evaluarea clinică a participanţilor s-a desfăşurat icircn cadrul Cabinetului de Medicină de

Familie iar determinările hematologice şi biochimice s-au efectuat icircn Laboratorul

Ambulatorului Clinic de Specialitate al Spitalului Clinic de Urgenţă bdquoSf Spiridonrdquo Iaşi

B Evaluarea icircn citometrie de flux a nivelului relativ de expresie a PPARα şi CD36

Studiul receptorilor PPARα s-a desfăşurat icircn Laboratorul de Biologie Moleculară al

Institutului Regional de Oncologie Iaşi prin metoda citometriei icircn flux (19) Nivelul relativ de

expresie al receptorilor nucleari PPARα a fost determinat icircn diferite tipuri de leucocite

circulante polimorfonucleare (PMN) limfocite (Ly) Mo(Mo) şi eozinofile(Eo) Am utilizat o

metodă de citometrie icircn flux optimizată ldquoin houserdquo elaborată icircn cadrul Laboratorului de

Biologie Moleculară al IRO Iaşi Icircn cursul procesului de optimizare am testat mai multe

concentraţii ale anticorpului anti-PPARα 1100 1500 11500 14500 iar icircn urma

determinărilor efectuate şi a analizei statistice concentraţia 1500 a fost considerată optimă

pentru desfăşurarea studiului (tabel XXIII figura 51)

Tabel XXIII Optimizarea concentraţiilor Ac anti-PPARα Diferenţa

mediilor

valorilor

medii

PMN

Diferenţa

mediilor

mediane-

lor

PMN

Diferenţa

mediilor

valorilor

medii

Ly

Diferenţa

mediilor

mediane-

lor

Ly

Diferenţa

mediilor

valorilor

medii

Mo

Diferenţa

mediilor

mediane-

lor

Mo

Diferenţă 0 1300 1600 100 100 700 750

normal - 1100 650 1050 1050 1350 450 900

patologic 1500 2850 2750 3800 3600 2850 2400

11500 -1050 800 3500 3300 2250 1800

14500 2200 2150 1300 1100 2950 2850

AOptimizare

BRepetabilitate

Figura 51 Optimizarea concentraţiei anticorpului anti-PPARα

Icircn concordanţă cu literatura de specialitate icircn cercetarea efectuată intensitatea medie

de fluorescenţă (MFI) a fost utilizată ca măsură pentru evaluarea expresiei celulare a

receptorilor PPARα (212) Un exemplu de analiză a probelor este reprezentat icircn figura 52

Figura 52 Exemplu de analiză flowcitometrică pentru receptorul nuclear PPARα Graficul din stacircnga reprezintă distribuţia leucocitelor iar cel din dreapta ilustrează distribuţia

intensităţii de fluorescenţă pentru populaţiile de celule selectate

Intensitatea Medie a Fluorescenţei (MFI) a CD36 ca o măsură a nivelului relativ de

expresie a acestor receptori la nivelul membranei Mo a fost detectată printr-o metodă

convenţională pentru marcare de suprafaţă şi evaluare pe bază de citometrie icircn flux folosind

aceleaşi probe de sacircnge cu EDTA cu focalizare pe Mo şi utilizacircnd CD14 ca marker specific

pentru Mo (figura 53)

Figura 53Analiza

flowcitometrică

pentru marcajul

CD14 - CD36

Rezultate

Icircn cele două loturi au fost incluşi icircn studiu un număr de 57 de participanţi care au fost

investigaţi din punct clinic şi paraclinic Vacircrsta subiecţilor incluşi icircn studiu a fost cuprinsă

icircntre 18 şi 79 ani iar vacircrsta medie calculată a avut valoarea de 4805 plusmn 1587 ani Pentru sexul

masculin vacircrsta medie este de 4925plusmn1617 ani iar pentru sexul feminin 4689 plusmn1 5ani

diferenţa obţinută icircntre vacircrstele pacienţilor fiind statistic nesemnificativă (P = 085)

Analizacircnd vacircrstele subiecţilor din cele două loturi am observat că vacircrsta medie a pacienţilor

cu SM (5476 plusmn 1183 ani) a fost semnificativ mai mare (t-test P = 0003) decacirct icircn lotul

martor (4258 plusmn 169 ani) Pentru diagnosticul sindromului metabolic am calculat scorul de

SM bazacircndu-ne pe criteriile Harmonised I Conform criteriilor diagnostice din cei 57 de

subiecţi investigaţi un număr de 26 participanţi (46) au fost incluşi icircn lotul cu SM (Lot

SM) iar 31 de subiecţi(54) nu au prezentat acest sindrom constituind lotul martor (Lot

Non-SM) Din punct de vedere al repartiţiei pe sexe nu au existat diferenţe statistic

semnificative raportul bărbaţifemei fiind de 0961 Din totalul celor 28 de bărbaţi incluşi icircn

studiu 4285 (12 bărbaţi) au icircntrunit cel puţin trei criterii diagnostice pentru SM fiind

incluşi icircn lotul SM Icircn acelaşi timp 14 femei reprezentacircnd 4827 din subiecţii de sex

feminin au icircntrunit condiţiile pentru includerea icircn lotul pacienţilor cu SM Valoarea medie

determinată pentru scorul de SM a arătat prezenţa unor valori semnificativ statistic mai mari

din punct (t-test P lt 00001) icircn lotul SM (769plusmn176) comparativ cu lotul martor (174 plusmn

184) Am studiat comparativ media valorilor măsurate ale criteriilor componentelor SM

Analiza statistică a arătat valori semnificativ statistic mai mari pentru CA TG glicemie TAS

şi TAD (plt0001) icircn lotul SM comparativ cu lotul normal Concomitent calculul statistica

evidenţiat o scăderea semnificativă a HDL-colesterolului icircn lotul cu SM comparativ cu

subiecţii din lotul martor (Non-SM) Aplicacircnd testul z am comparat ponderea pacienţilor

diagnosticaţi cu HTA dislipidemie şi tulburări ale metabolismului glucidic icircn lotul SM versus

lot Non-SM şi am constatat prezenţa acestor afecţiuni icircntr-un procent mai mare semnificativ

statistic icircn lotul SM ((plt0001)

Utilizacircnd testul t Student am calculat diferenţele statistice şi icircntre alți parametri

studiaţi care sunt factori de risc cardio-vascular dar care nu sunt componente ale SM Icircn lotul

cu SM valorile acidului uric fibrinogenului Col total Non-HDL-col şi LDL-col au fost

semnificativ mai mari comparativ cu lotul martor (tabel XXVI) Analizacircnd valorile medii ale

populaţiilor de leucocite am identificat doar pentru populaţia de Eo diferenţe statistice icircntre

cele două loturi numărul Eo icircn lotul SM fiind semnificativ mai mare decacirct icircn lotul martorTot

pentru caracterizarea celor două loturi am analizat prezenţa antecedentelor

heredocolaterale (AHC) de diabet zaharat boala cardiovasculară şi dislipidemie pentru toţi

subiecţii investigaţi Astfel existenţa AHC de HTA a fost declarată de 2580 din subiecţii

incluşi icircn lotul martor respectiv de 5384 din numărul pacienţilor cu SM Antecedentele

heredocolaterale de dislipidemie au fost prezente la 3461 din pacienţii cu SM icircn timp ce icircn

lotul martor anamneza a evidenţiat aceste antecedente la 3548 din subiecţi

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα

Icircn cercetarea desfăşurată am utilizat intensitatea medie de fluorescenţă (MFI) ca

măsură a nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn leucocitele studiate Pentru

populaţiile de leucocite analiza computerizată a probelor luate icircn studiu a furnizat valori

pentru MFI a receptorilor PPARα icircn funcţie de cantitatea de anticorpi anti-PPARα marcaţi cu

fluorocrom care se leagă de aceste celule şi apoi sunt captaţi de citometru (figura 59)

A Lot Non - SM

B Lot SM

Figura 59 Analiza flowcitometrică pentru receptorii PPARα icircn leucocite A lot normal B lot SM

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Mo

Analiza probelor efectuată conform protocolului de lucru descris a arătat prezenţa

PPARα icircn Mo recoltate din sacircngele tuturor subiecţilor incluşi icircn această cercetare Pentru toţi

participanţii investigaţi analiza MFI a Ac anti - PPARα icircn populaţia de Mo (Mo) a arătat un

interval de variaţie icircntre [786 395] Valoarea medie a nivelului de expresie relativă a PPARα

calculată pentru Mo a fost de 23210 plusmn7860 Pentru ambele loturi de studiu pacienţilor cu

SM testul Testul Shapiro-Wilk a arătat distribuţia normală a valorilor obţinute pentru nivelul

de expresie al PPARα icircn Mo

Tabel XXVIII Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn Mo

Lot SM Lot Non-SM

N 26 31

Media 22819 23538

SD 5819 7717

Mediana 22400 22600

Minimum 12800 78600

Maximum 35800 37900

Percentila 25 18300 18300

Percentila 75 26200 30350

Pentru pacienţii din lotul SM valoarea medie a MFI icircn Mo a fost de 22819 plusmn 5880 iar

pentru lotul martor s-a calculat o valoare medie a MFI a Ac anti-PPARα de 23538 plusmn 7717

Distribuţia statistică a frecvenţei valorilor MFI obţinute pentru nivelul de expresie a PPARα

icircn Mo subiecţilor din cele două loturi a fost reprezentată icircn figura 511

Figura 511 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti-PPARα icircn Mo

Sub forma unei diagrame de control Shewhart am reprezentat variaţia intensităţii medii de

fluorescenţă pentru anticorpii anti-PPARα icircn MoVariaţia nivelului de expresie relativă a

receptorilor PPARα icircn Mo subiecţilor studiaţi este ilustrată icircn fig 512 513

Figura 512 Lot SM Variaţia

expresiei relative a PPARα icircn Mo

Număr pacienţi

26

Minim 128

Maxim 358

Media 22819

DS 5819

25 din 26 valori ale MFI s-au icircncadrat

icircn intervalul Media plusmn 2DS

Figura 513 Lot Non-SM Variaţia

expresiei relative a PPARα icircn Mo

Număr pacienţi 31

Minimum 786

Maximum 379

Media 23538

DS 7717

Cu excepţia unei singure

determinări valorile calculate s-au

icircncadrat icircn Media plusmn 2DS

Utilizacircnd testul parametric t-Student pentru variabilele cu distribuţie normală am

comparat valoarea medie a intensităţii de fluorescenţă a Ac anti-PPARα icircn lotul cu SM versus

subiecţi fără SM (Lot Non-SM) Analiza statistică efectuată nu a identificat diferenţe icircntre

50 100 150 200 250 300 350 400 450

0

5

10

15

20

25

30

35

MFI anti-PPAR a

Frecv

enta

relati

va (

)

Lot SM

0 50 100 150 200 250 300 350 400 450 500

0

5

10

15

20

25

30

35

MFI anti-PPAR a

Frecv

enta

relati

va (

)

Lot martor

1 6 11 16 21 26 31

0

50

100

150

200

250

300

350

400

450

MFI

anti-

PPAR

a

2282

1106

3458

518

4046

Media

LCI

LCI

1 6 11 16 21 26 31 36

-100

0

100

200

300

400

500

MFI a

nti-PP

AR

a

2354

810

3897

39

4669LCS

LCI

Media

cele două loturi icircn ceea ce priveşte expresia PPARα la nivelul Mo circulante (t- Test P=

069)

Studiul receptorilor PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de AHC şi dislipidemie

Nivelul de expresie al receptorilor PPARα α icircn Mo tinde să fie mai scăzut la subiecţii

cu AHC de HTA comparativ subiecţii care nu au declarat AHC de HTA (P= 006 fig 515)

AHC HTA

Număr 22

Mediana 19950

Percentila 25 17800

Percentila 75 22700

AHC HTA absente

Număr 35

Mediana 24800

Percentila 25 19025

Percentila 75 31700

Figura 515 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Mo funcţie de AHC de HTA

Nu s-au calculat diferenţe semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor

PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de dislipidemie atunci cacircnd aceştia au fost comparaţi cu

subiecţii fără AHC de tulburări ale metabolismului lipidic (t- Test P= 020)

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn limfocite

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn populaţia de Ly a

demonstrat prezenţa receptorilor PPARα icircn Ly tuturor subiecţilor studiaţi Pentru toţi

participanţii investigaţi analiza MFI a Ac anti - PPARα icircn populaţia de Ly a relevat un

interval de variaţie icircntre [748 314] iar valoarea medie a MFI a fost de 18058 plusmn 5600

Pentru ambele loturi aplicarea testului Shapiro-Wilk a evidenţiat distribuţia normală a

valorilor determinate pentru nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Ly Pentru

pacienţii cu SM valoarea medie a MFI determinată pentru expresia PPARα icircn populaţia de

Ly a fost de 18178 plusmn 61 16 iar pentru lotul martor a fost de 16800 plusmn 5229

Tabel XXX Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn limfocite

Lot SM Lot Non-SM

N 26 31

Media 181781 179574

SD 611694 522907

Mediana 165000 168000

Minimum 81300 74800

Maximum 314000 301000

Percentila 25 13400 - 145750

Percentila 75 21800 21700

Distribuţia frecvenţei valorilor MFI a Ac anti-PPARα icircn Ly este redată icircn figura 518

Figura 518 Distribuţia frecvenţelor relative a MFI a Ac anti-PPARα icircn Ly

94 din determinările efectuate pentru determinarea nivelului de expresie relativă al

MFI

ant

iPPA

R

a_Mo

190

200

210

220

230

240

250

260

270

280

DA NU

AHC HTA

P=006

50 89 128 167 206 244 283 322 361 400

0

5

10

15

20

25

30

35

MFI anti-PPAR a

Frecv

enta

relati

va (

)

Lot SM

0 50 100 150 200 250 300 350

0

5

10

15

20

25

30

35

40

MFI anti-PPAR a

Frec

venta

relat

iva (

)

Lot Non-SM

receptorilor PPARα icircn limfocitele subiecţilor cu SM s-au icircncadrat icircn intervalul Media plusmn 2DS

Figura 5 19 Lot SM Variaţia expresiei

relative a PPARα icircn Ly

Număr pacienţi 26

Minimum 813

Maximum 31400

Media 18178

Deviaţia Standard 6116

25 valori s-au icircncadrat icircn Media plusmn 2DS

Pentru lotul Non-SM diagrama de control (figura 520) a arătat toate valorile

determinate pentru lotul Non-SM se icircncadrează icircntre LCS şi LCI

Figura 520 Lot Non -SM Variaţia

expresiei relative a PPARα icircn Ly

Număr pacienţi 31

Minimum 748

Maximum 30100

Media 179574

Deviaţia Standard 5229

96 din valori icircncadrate icircn Media plusmn 2DS

Aplicarea testului t-Student pentru valorile medii ale intensităţii de fluorescenţă ale

PPARα icircn Ly nu a arătat existenţa unei diferenţe statistic semnificative icircntre lotul cu SM şi

lotul martor(t- Test P= 088)

Analiza receptorilor PPARα icircn Ly subiecţilor cu AHC de HTA şi dislipidemie

Studiind populaţiile de Ly la subiecţii care au prezentat AHC de hipertensiune

arterială analiza flowcitometrică a relevat existenţa unor valori mai mici pentru MFI la aceşti

subiecţi comparativ cu cei fără AHC de HTA (fig 522) deşi scăderea observată nu a

icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică (t- Test P = 009)

AHC HTA

Număr 22

Mediana 16000

Percentila 25 12700

Percentila 75 17100

AHC HTA absenţe

Număr 35

Mediana 18700

Percentila 25 14900

Percentila 75 23175

Figura 522 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Ly funcţie de AHC de HTA

Nu am calculat diferenţe statistic semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor

PPARα icircn populaţiile de Ly ale subiecţilor la care am identificat AHC de dislipidemie

comparativ cu cei care nu au declarat antecedente familiale de dislipidemie (t- Test P= 051)

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn neutrofile (PMN)

Analiza flowcitometrică a evidenţiat prezenţa PPARα icircn PMN recoltate din sacircngele

venos al tuturor participanţilor la studiu Pentru toţi subiecţii investigaţi analiza MFI a Ac -

PPARα icircn populaţia de PMN a relevat un interval de variaţie de [163419] iar valoarea medie

a MFI pentru Ac anti-PPARα a fost de 26392 plusmn 7064 Testul Shapiro-Wilk a arătat o

distribuţie normală a valorilor intensităţii medii de fluorescenţă a anticorpilor anti-PPARα atacirct

icircn lotul pacienţilor cu SM cacirct şi icircn lotul martor

1 6 11 16 21 26 31

-50

0

50

100

150

200

250

300

350

400

MFI

anti-

PPAR

a

1818

595

3041

-17

3653

Media+2DS

Media- 2DS

1 6 11 16 21 26 31 36

0

50

100

150

200

250

300

350

MFI

ant

i-PPA

R

a

1796

750

2841

227

3364

Media+2DS

Media

Media- 2DS

MFI

anti-

PPAR

a Ly

130

140

150

160

170

180

190

200

210

DA NU

AHC HTA

P=009

Tabel XXXII Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn PMN

Lot SM Lot Non-SM

N 26 31

Media 26273 26480

SD 6915 7088

Mediana 25900 25500

Minimum 17200 16300

Maximum 39500 41900

Percentila 25 19800 19600

Percentila 75 30500 31500

Icircn cele două loturi distribuţia frecvenţei valorilor nivelului relativ de expresie a

receptorilor PPARα icircn PMN a fost reprezentată sub formă de histograme (fig 525)

Figura 525 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti-PPARα icircn PMN

Pentru cei 26 de pacienţi din lotul cu SM a valoarea medie a nivelului de expresie

relativă a receptorilor PPARα icircn PMN a fost de 26273 plusmn 6915 Studiind diagrama Shewhart

din figura 526 se observă că toate valorile obţinute pentru nivelul de expresie relativă

PPARα icircn PMN investigate se icircncadrează icircntre limitele definite de valorile medii plusmn 2DS

Figura 526 Lot SM

Variaţia expresiei relative a PPARα icircn

PMN

Număr pacienţi 26

Minimum 17200

Maximum 39500

Media 26273

Deviaţia Standard 6915

Valorile MFI icircncadrate icircn Media plusmn 2DS

Pentru lotul martor valoarea medie calculată a MFI a anticorpilor anti-PPARα a fost de

26480 plusmn 7088 peste 95 din valorile MFI fiind cuprinse icircn Media plusmn 2DS (figura 527)

Figura 527 Lot Non-SM Variaţia expresiei

relative a PPARα icircn PMN

Număr pacienţi 31

Minimum 16300

Maximum 41900

Media 26480

Deviaţia Standard 7088

30 valoriicircn Media plusmn 2DS

Pentru PMN analiza statistica nu a arătat existenţa unei diferenţe statistic semnificative icircntre

nivelul de expresie relativă a PPARα la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii din lotul

Non-SM (t- Test P= 090) Studiind populaţiile de PMN la subiecţii care au prezentat AHC

de HTA nu am calculat o diferenţă statistic semnificativă icircntre expresia receptorilor PPARα

la subiecţii cu istoric familial de hipertensiune arterială comparativ cu cei pentru care nu s-au

notat AHC de HTA (t- Test P= 013)De asemenea am identificat diferenţe icircntre nivelul de

expresie al PPARα icircn PMN subiecţilor care prezentau AHC de dislipidemie comparativ cu

cei fără AHC de dislipidemie (t- Test P= 017)

50 100 150 200 250 300 350 400 450 500

0

5

10

15

20

25

30

35

MFI anti-PPAR a

Frecve

nta rel

ativa (

)

Lot SM

50 100 150 200 250 300 350 400 450 500

0

5

10

15

20

25

30

MFI anti-PPAR a

Frecv

enta

relati

va (

)

Lot Non-SM

1 6 11 16 21 26 31

0

50

100

150

200

250

300

350

400

450

500

MFI

anti-

PPA

R

a

2627

1244

4010

553

4702

Media + 2DS

Media - 2 DS

Media

1 6 11 16 21 26 31 36

0

50

100

150

200

250

300

350

400

450

500

MFI

anti-

PPAR

a

2648

1230

4066

522

4774

Media+ 2DS

Media - 2DS

Media

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile Tabel XXXIV Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn Eo

Lot SM Lot Non-SM

N 26 31

Mediaplusmn SD 141057 plusmn 47604 172209 plusmn 37565

Mediana 142450 171300

Minimum 35000 68500

Maximum 233700 250600

Percentila 25 119300 153225

Percentila 75 169700 199550

Am studiat nivelul relativ de expresie a receptorilor PPARα icircn Eo iar rezultatele au

fost figurate sub forma de histograme (figura 532)

Figura 532 Distribuţia frecventelor relative ale valorilor MFI anti- PPARα icircn Eo

Din diagrama Shewhart (figura 533) se observă că toate valorile determinate pentru

nivelul de expresie relativă a PPARα icircn Eo pentru lotul SM s-au icircncadrat icircn [Media plusmn 3 DS]

peste 90 din determinări fiind cuprinse icircn [Media plusmn 2 DS] iar icircn [Media plusmn 1 DS] sunt

incluse peste 65 din valorile MFI

Figura 533 Lot SM

Variaţia expresiei relative a PPARα icircn Eo

Număr pacienţi 26

Minimum 35000

Maximum 233700

Media 141057

Deviaţia Standard 47604

24 valori icircncadrat eicircn [Media plusmn 2DS]

Pentru subiecţii incluşi icircn lotul martor analiza diagramei (figura 534) a arătat că

toate cele 31 de valori ale MFI pentru PPARα icircn Eo se icircncadrează icircn [Media plusmn 3DS] iar 30

dintre acestea se icircncadrează icircn [ Media plusmn 2 DS]

Figura 534 Lot Non -SM

Variaţia expresiei relative a PPARα icircn Eo

Număr pacienţi 31

Minimum 685

Maximum 2506

Media 172209

Deviaţia Standard 375 65

30 valori icircncadrate icircn [Media plusmn 2DS]

Comparacircnd subiecţii cu SM cu cei din lotul martor am observat o scădere

semnificativă statistic a MFI a Ac anti - PPARα icircn Eo pentru pacienţiir cu SM ( figura 535)

PPARα Eo Lot Non-SM

Număr 31

Mediana 171300

Percentila 25 152325

Percentila 75 199550

PPARα Eo Lot SM

Număr 26

Mediana 142450

Percentila 25 119300

Percentila 75 169700

Figura 5 35 Comparaţie icircntre nivelul de expresie a PPARα icircn Eo

0 500 1000 1500 2000 2500 3000

0

10

20

30

40

50

MFI anti-PPAR a

Frecvent

a relativa

()

Lot SM

400 800 1200 1600 2000 2400 2800

0

5

10

15

20

25

30

35

40

45

MFI anti-PPAR a

Frecenta

relativa

()

Lot Non-SM

1 6 11 16 21 26 31

-500

0

500

1000

1500

2000

2500

3000

MFI a

nti-PP

AR

a

14106

4765

23447

94

28117

Media + 2DS

Media- 2DS

LCI

LCS

1 6 11 16 21 26 31 36

500

1000

1500

2000

2500

3000

MFI an

ti-PPA

R a

17221

9708

24734

5951

28490

LCI

Media-2DS

Media

Media +2 DS

LCS

1200

1300

1400

1500

1600

1700

1800

1900

Lot SM Lot Non-SM

P=00072

Cu ajutorul curbei ROC am evaluat posibilitatea utilizării MFI a Ac anti - PPARα icircn

Eo ca marker pentru diagnosticul SM Valoarea MFI a Ac anti - PPARα icircn Eo care prezice cu

cea mai mare acurateţe prezenţa SM a fost de 1533 (punctul de ldquocut-offrdquo) pentru care am

calculat o sensibilitate de 5652 şi o specificitate de 7778 Calculul ariei AUC a furnizat

valoarea de 0663 şi deci determinarea parametrului MFI anti- PPARα icircn Eo are valoarea

unui test cu acurateţe redusatilde icircn diagnosticul SM Studiind expresia PPARα icircn Eo la subiecţii

care au prezentat AHC de HTA am observat o scădere semnificativă statistic (P = 00023) a

expresiei PPARα la subiecţii cu istoric familial de HTA comparativ cu subiecţii fatilderatilde AHC de

HTA (figura 537)

AHC HTA

Număr 22

Mediana 148800

Percentila 25 116425

Percentila 75 170750

AHC HTA absente

Număr 35

Mediana 170850

Percentila 25 143700

Percentila 75 195000

Figura 537 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Eo funcţie de AHC de HTA

Studiind subiecţii cu AHC declarate de dislipidemie nu am identificat diferenţe icircntre

nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Eo subiecţilor cu AHC de dislipidemie

comparativ cu cei care nu au declarat prezenţa AHC de dislipidemie (t - Test P = 067)

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor CD36

Am studiat expresia receptorilor CD36 icircn Mo subiecţilor incluşi icircn studiu

Lot Non - SM

BLot SM

Figura 539 Analiza flowcitometrica pentru receptorii CD36 icircn Mo

Pentru toţi participanţii la studiu valorile MFI au variat icircn intervalul [817 6933] iar

valoarea medie a MFI a Ac anti-CD36 a fost de 397133 plusmn 120902 Tabel XXXVII Statistică descriptivă pentru a CD36 icircn Mo

Lot SM Lot Non-SM

Media 429034 370377

Deviatia Standard 109051 125514

Mediana 411000 362800

Minimum 266400 81700

Maximum 693300 616800

Percentila 25 346200 273750

Percentila 75 469000 453300

Distribuţia frecvenţelor relative a MFI au fost prezentate sub formă histogramelor

Figura 541 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti - CD36 icircn Mo

MFI

ant

i-PPA

R a Eo

1000

1100

1200

1300

1400

1500

1600

1700

1800

1900

DA NU

AHC HTA

P=00023

1000 2000 3000 4000 5000 6000 7000 8000

0

5

10

15

20

25

MFI anti-CD36

Frecve

nta rela

tiva (

)

Lot SM

0 1778 3556 5333 7111

0

5

10

15

20

25

30

35

MFI anti-CD36

Frecve

nta rel

ativa (

)

Lot Non - SM

Referitor la lotul SM 92 din valorile MFI a Ac anti- CD36 s-au icircncadrat icircn

intervalul Media plusmn 2 DS (figura 542) iar pentru lotul martor peste 90 dintre acestea icircn

Media plusmn 2 DS (figura 543)

Figura 542 Lot SM

Variaţia MFI anti-CD36 icircn Mo

Număr pacienţi 26

Minimum 2664

Maximum 6933

Media 429034

Deviaţia Standard 109051

Figura 543 Lot Non -SM

Variaţia MFI anti- CD36 icircn Mo

Număr 31

Minimum 81700

Maximum 616800

Media 370377

Deviaţia Standard 125514

Comparacircnd subiecţii cu SM cu cei din lotul normal am constatat o tendinţă de creştere

a expresiei CD36 icircn lotul cu SM((t - Test P= 0067)

MFI anti - CD36 Lot Non-SM

Număr 31

Mediana 3628

Percentila 25 2737

Percentila 75 4533

MFI anti - CD36 Lot SM

Număr 26

Mediana 4110

Percentila 25 3462

Percentila 75 4690

Figura 544 Comparaţie icircntre cel două loturi privind MFI anti - CD36 icircn Mo

Referindu-ne la subiecţii cu AHC de HTA am observat o tendinţă de creştere a

valorilor MFI anti-CD36 comparativ cu cei care nu au avut AHC de HTA (t - Test P = 0 08)

AHC HTA

Număr 22

Mediana 442800

Percentila 25 355275

Percentila 75 519475

AHC HTA absenţe

Număr 35

Mediana 377400

Percentila 25 316900

Percentila 75 443400

Figura 545 Comparaţie icircntre expresia CD36 icircn Mo funcţie de AHC de HTA

Nu s-au calculat diferenţe semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor

PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de dislipidemie atunci cacircnd aceştia au fost comparaţi cu

subiecţii fără AHC de dislipidemie (t - Test P=031)

Corelaţii icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα si CD36

Studiind valorile intensităţii medii de fluorescenţă a Ac anti-PPARα icircn Mo Ly şi

PMN am observat că nivelul de expresie celularatilde a PPARα icircn Mo Ly şi PMN sunt corelate

puternic pozitiv atacirct icircn lotul SM cacirct şi icircn lotul martor(fig547 548)

1 6 11 16 21 26 31

0

1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

8000

Pacienti

MFI a

nti-CD

36

42903

21093

64714

10188

75619

LCI

Media

LCS1 6 11 16 21 26 31 36

-1000

0

1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

8000

MFI a

nti- C

D36

37038

11935

62141

-616

74692Media + 2 DS

Media

Media - 2 DS

3200

3400

3600

3800

4000

4200

4400

4600

4800

Lot SM Lot Non-SM

P = 00676

MFI

anti-

CD36

3400

3600

3800

4000

4200

4400

4600

4800

5000

DA NU

AHC HTA

P = 008

Figura 547 Studiul relatiilor dintre

receptorii PPARα icircn SM A Mo vs PMN B Mo vs Ly

C PMN vs Ly Graficul ilustrează coeficienţii r P dreapta de

regresie (linia centrala) intervalul de icircncredere

95 şi intervalul de predicţie 95

Figura 548 Corelaţii icircntre receptorii PPARα icircn lotul

martor

A Mo vs PMN

B Mo vs Ly

C PMN vs Ly

Tot pentru lotul SM cacircnd am evaluat relaţia dintre nivelul de expresie relativă a

receptorilor PPARα icircn Eo şi nivelul de expresie relativa a receptorilor CD 36 am obţinut o

corelaţie negativă (r = - 05 P = 001) (fig 549 A)

50 100 150 200 250 300 350 50

100

150

200

250

300

350

400

450

500

PPARα Ly

PPARα PMN

y = 56641 + 1159 x r = 086 P lt 0001

C

50 100 150 200 250 300 350 400 0

50

100

150

200

250

300

350

PPARα Mo

PPARα Ly

y = 36665 + 0607 x r = 090 P lt 0001

B

150 200 250 300 350 400 450 0

50 100 150 200 250 300 350 400 450 500

PPARα PMN

PPARα Mo

y = 2505 + 0879 x r = 081 P lt 0001

A

50 100 150 200 250 300 350

50 100 150 200 250 300 350 400 450 500

PPARα Ly

PPARα PMN

y = 95668 + 0919 x r = 081 P lt 0001

C

100 150 200 250 300 350 400

0

50

100

150

200

250

300

350

400

PPARα Mo

PPARα Ly

y = -7503 + 0829 x r = 079 P lt 0001

B

100 150 200 250 300 350 400

50

100

150

200

250

300

350

400

450

500

PPARα Mo

PPARα PMN

y = 61384 + 0882 r = 074 P lt 0001

A

Figura 549 Corelaţii icircntre expresia PPARα icircn Eo şi alte tipuri de receptori investigaţi A PPARα Eo şi CD 36 (Lot SM) B PPARα Eo şi PPARα Mo( Lot Non-SM)

Icircn lotul martor am identificat o asociere moderată pozitivă (r = 038 P = 0033) icircntre

nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Eo şi Mo (figura 549B) corelaţie absentă icircn

lotul pacienţilor cu SM

Corelaţii dintre receptorii studiaţi şi componentele sindromului metabolic

Icircn lotul de control analiza statistică a relevat faptul că icircntre circumferinţa

abdominală (CA ) şi nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Mo Ly şi PMN există o

corelaţie inversă adică scăderea expresiei PPARα la nivelul acestor populatii celulare ar fi

icircnsoţită de creşterea CA (figura 550

Figura 550Corelaţii dintre receptorii

PPARα si CA A Mo B Ly C PMN

La pacienţii cu SM am notat o corelatie moderată negativă statistic semnificativă

icircntre TG şi valorile MFI a Ac anti- PPARα icircn Mo şi Ly( fig 551)

150 200 250 300 350 400 450 50

60

70

80

90

100

110

PPARα PMN

CA r = - 040 P = 0024

C

50 100 150 200 250 300 350 50

60

70

80

90

100

110

PPARα Ly

CA r = - 046 P = 0009

B

50 100 150 200 250 300 350 400 50

60

70

80

90

100

110

PPARα Mo

CA r = - 042 P = 0017

A

50 100 150 200 250 300 350 400 500

1000

1500

2000

2500

3000

PPARα Mo

PPARα Eo

r = 038 P = 0033

B

0 500 1000 1500 2000 2500 1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

8000

PPARα Eo

CD36

r = 050 P = 0010

A

Figura 551 Lot SM Corelaţie icircntre expresia PPARα şi TG (A Mo B Ly)

Analizand corelatia dintre receptorii CD36 si valorile TA la pacientii cu SM am observat

o asociere pozitivă asteptată intre TAD si nivelul de expresie al receptorilor CD36 (fig 552)

Figura 552 Lot SM Corelaţii icircntre expresia

receptorilor CD36 şi valorile tensiunii arteriale

diastolice

Studiind corelaţiile dintre receptorii PPARα şi HDL-col la subiecţii din lotul martor am

notat o asociere pozitivă icircntre expresia PPARα icircn Mo şi Ly cu HDL-col (fig 553)

Figura 553 Lot martor Corelaţii icircntre HDL-col şi expresia PPARα icircn Mo(A) Ly(B)

Icircn lotul normal am evidenţiat corelaţii pozitive moderate dar semnificative statistic icircntre

CA şi valorile TAS (r = 062 P lt 0001) respectiv TAD (r = 050 P=0004) precum şi icircntre

CA şi glicemia subiecţilor normali (r = 052 P = 0003) Aceste date icircmpreună cu relaţia

invers proporţională identificată icircntre HDL-col şi CA (r = 050 P = 001) susţin validitatea

acestui studiu Icircn lotul subiecţilor cu SM am observat o corelaţie moderat pozitivă icircntre

expresia PPARα icircn populaţiiile de Mo şi Eo şi concentraţia a HDL-col (fig 554)

B

100 150 200 250 300 350 20

30

40

50

60

70

80

90

100

PPARα Ly

HDL-col-(mgdl)

r = 036 P = 0046

A

150 200 250 300 350 400 20

30

40

50

60

70

80

90

100

PPARα Mo

HDL-col-(mgd)l

r = 035 P = 005

70 75 80 85 90 95 100 1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

8000

TAD (mmHg)

CD36

r = 048 P = 0013

B

50 100 150 200 250 300 350 -100

0

100

200

300

400

500

PPARα Ly

TG(mgdl)

r = - 042 P = 003

A

50 100 150 200 250 300 350 400 -100

0

100

200

300

400

500

PPARα Mo

TG ( mgdl) r =- 0 43 P = 0027

Figura 554 Corelaţii icircn SM icircntre HDL-col şi expresia PPARα icircn Mo (A) şi Eo(B)

Corelaţii icircntre nivelul de expresie relativă a PPARα şi markeri ai disfuncţiei

endoteliale şi inflamaţiei cronice

Deşi nu a icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică am reţinut corelaţia invers

proporţională (r = - 0331 P = 006) dintre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα

icircn PMN şi concentraţia serică a Non-HDL-colesterolului

Studiind relaţiile dintre parametri icircn lotul de pacienţi cu SM am observat o corelaţie

moderată invers proporţională icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Eo şi

acidul uric seric (figura 555 A) corelaţie absentă la subiecţii fără SM

Figura 555 Lot SM corelaţia dintre expresia PPARα icircn Eo şi acidul uric (A) respectiv

PPARα şi fibrinogen (B)

Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P=008) am notat pentru

pacienţii cu SM corelaţia invers proporţională dintre expresia PPARα icircn Eo şi concentraţia

serică a fibrinogenului ( figura 555B)

V5 Discuţii

Icircn cadrul lucrării de doctorat am studiat nivelul de expresie relativă a PPARα icircn

leucocitele pacienţilor cu SM comparativ cu cea a subiecţilor normali Expresia PPARα a fost

studiată icircn paralel cu cea a CD36 glicoproteină exprimată pe suprafaţa a numeroase celule

din organismul uman inclusiv pe cea a Mo şi macrofagelor Prin funcţia sa de receptor pentru

particulele oxidate de LDL CD36 cunoscut ca bdquoscavenger receptorrdquo de clasa B sau

bdquotrombospodin receptorrdquo contribuie la dezvoltarea inflamaţiei de la nivel endotelial şi

formarea plăcii de ateroscleroză Referitor la studiul PPARα icircn Eo icircn sindromul metabolic

menţionăm că studiul nostru este primul care arată că nivelul de expresie a proteinei PPARα

icircn Eo măsurat prin citometrie icircn flux este semnificativ mai redus la pacienţii care sunt

diagnosticaţi cu acest sindrom De asemenea icircn lotul cu SM cercetat icircn cadrul studiului

receptorilor PPARα numărul Eo circulante a fost semnificativ mai crescut la pacienţii cu SM

B

0 500 1000 1500 2000 2500 200

250

300

350

400

450

PPARα Eo o

Fibrinogen mgdl

r =- 036 P = 008

0 500 1000 1500 2000 2500 1 2 3 4 5 6 7 8 9

10 11

PPARα Eo_

Acid uric(mgdl) r = 048 P = 0014 A

0 500 1000 1500 2000 2500 10

20

30

40

50

60

70

80

PPARα Eo

HDL(mgdl)

r = 044 P = 0024

B

100 150 200 250 300 350 400 10

20

30

40

50

60

70

80

PPARα Mo

HDL( mgdl)

r = 046 P = 0019

A

(P = 003) Aceste constatări conduc la ipoteza că Eo joacă un rol special icircn mecanismele

patogenice declanşate icircn sindromul metabolic şi că receptorii PPARα sunt importanţi icircn

implicarea Eo icircn obezitate şi insulinorezistenţă Creşterea numărului de Eo circulante este

urmată de eliberarea mediatorilor proinflamatori iar reducerea expresiei PPARα icircn Eo

determină perturbarea mecanismelor de control al inflamaţiei cu exacerbarea cascadei

proinflamatorii Consecutiv se agravează disfuncţia endotelială şi se accelerează progresia

leziunilor de ateroscleroză Extrapolacircnd aceste ipoteze putem spune că asocierea raportată

dintre boala ischemică coronariană şi Eo poate fi şi consecinţa exacerbării cascadei

proinflamatorii de la nivel vascular produsă datorită scăderii expresiei PPARα icircn Eo iar

creşterea numărului de Eo circulante poate reprezenta o adaptare a organismului uman care

icircncearcă să suplinească deficitul de receptori PPARα Analizacircnd curba ROC pentru

intensităţile medii de fluorescenţă determinate pentru anticorpii anti- PPARα icircn Eo am

obţinut pentru acest biomarker o sensibilitate a testului de 565 şi o specificitate de 778

pentru un punct de cut-off de 1533 ( figura 536 ) Deşi aria AUC (Aria under the curve) egală

cu 0663 icircncadrează acest test ca avacircnd o acurateţe redusă observăm că că această valoare

este apropiată de determinările AUC pentru alţi factori (fibrinogen raport de aterogenitate

acid uric non- HDL-colesterol) cunoscuţi ca fiind implicaţi icircn aterogeneză şi inflamaţia

cronică (figura 431) Aceste remarci alături de faptul că icircn studiul receptorilor PPARα icircn

leucocite am inclus subiecţi la primul diagnostic de SM creează premisa integrării

determinării expresiei relative a receptorilor PPARα icircn diagnosticul complex al sindromului

metabolic Putem spune că icircn final studiul expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofilele

circulante se dovedește a fi util icircn diagnosticul precoce la nivel molecular al SM permiţacircnd

identificarea timpurie a unor indivizi cu risc cardiometabolic crescut Astfel intervenţia

precoce asupra subiecţilor cu deficit de PPARα icircn Eo contribuie la managementul eficient al

afecţiunilor degenerative icircn care inflamaţia cronică icircndeplineşte un rol primordial Referitor

la populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările efectuate prin citometrie de flux nu au

arătat existenţa unor diferenţe statistice icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα

la subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali Rezultatele noastre pot fi

consecinţa caracteristicilor loturilor studiate (icircn studiul nostru au fost incluşi subiecţi recrutaţi

la primul diagnostic de SM şi icircn absenţa stimulării receptorilor PPARα cu droguri agoniste

PPARα) dar icircn acelaşi timp pot apare diferenţe datorită metodei utilizate (231 232 233)

Făcacircnd o paralelă cu un studiu publicat icircn 2013 icircn Europa (231) care a arătat creşterea

nivelului de expresie al PPARα icircn Ly şi Mo observăm că deşi numărul de subiecţi a fost

aproximativ egal (57 participanţi icircn studiul nostru 60 icircn studiul DAmore) subiecţii icircn studiul

amintit au fost recrutaţi dintr-o clinică cu profil medical la primul diagnostic de SM icircn timp

ce metoda utilizată a fost PCR (Polymerase Chain Reaction) mult mai fidelă decacirct citometria

icircn flux icircn studiul receptorilor nucleari De asemenea DAmore nu investighează expresia

PPARα icircn Eo şi PMN icircn cercetare fiind incluse doar celulele CD14+ (predominant Mo) şi

CD14- (predominant Ly) Deşi nu am obţinut diferenţe statistic semnificative icircntre cele două

loturi referitoare la nivelul de expresie relativă a PPARα icircn Mo Ly şi PMN am observat

corelaţii puternice semnificative statistic icircntre expresia receptorilor PPARα icircn aceste tipuri

celulare Rezultatele obţinute sugerează existenţa unui mecanism diferit molecular de control

icircn eozinofile care reglează cantitatea de proteină PPARα icircn eozinofile versus alte tipuri de

leucocite (la pacienţii cu SM) şi acest lucru este icircn concordanţă cu cercetările care descriu

expresia PPARα mRNA icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale

bronşice keratinocite) Studiind prin citometrie de flux nivelul de expresie relativă a

receptorului CD36 la nivelul Mo am arătat prezenţa acestuia icircn Mo tuturor subiecţilor

investigaţi Analizacircnd valorile intensităţii medii de fluorescenţă a CD36 icircn loturile studiate

am observat o tendinţă de creştere la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali

confirmacircnd implicarea receptorului CD36 icircn patogeneza acestuia Referitor la expresia

receptorului CD36 rezultatele obţinute sunt icircn consens cu studii anterioare care au arătat

creşterea expresiei CD36 la pacienţii cu SM şi diabet zaharat Astfel pe lacircngă diferenţa icircn

expresia CD36 s-au raportat şi corelaţii inverse icircntre expresia proteinei CD36 şi nivelul

adiponectinei Acelaşi studiu a evidenţiat o corelaţie pozitivă intre expresia CD36 cu expresia

receptorilor PPAR gamma relaţia cu PPARα nefiind investigată

Analiza de subgrup a relaţiilor dintre componentele SM și elementele moleculare

proinflamatorii studiate a relevat prezenţa unor asocieri semnificativ statistice icircntre acestea

Se argumentează astfel că veridicitatea studiului este susţinută de interdependenţele statistice

ale componentelor SM Determinarea coeficientului de corelaţie Icircn studiul nostru nivelul de

expresie relativă a PPARα s-a corelat moderat negativ (figura 550) cu CA a subiecţilor din

lotul normal pentru populaţiile celulare de Mo (r = - 0420 P = 001) Ly (r = - 046 P =

0009) şi PMN (r = - 040 P = 0024) date care sunt icircn concordanţă cu studiile care arată

rolul PPARα icircn furnizarea energiei prin beta-oxidarea acizilor graşi Icircn acelaşi timp icircn lotul

pacienţilor cu SM nu am identificat prezenţa unei asocieri icircntre nivelul de expresie relativă a

PPARα şi valoarea măsurată a CA Asocierea dintre expresia relativă a PPARα cu obezitatea

de tip central completează datele existente referitoare la reglarea homeostaziei energetice

conturacircnd un mecanism de control deficitar al aportului caloric al SM Icircn condiţiile icircn care

rezultatele obţinute prin metoda citometriei icircn flux nu au arătat existenţa unei corelaţii intre

expresia PPARα şi CA la pacienţii cu SM considerăm că ar fi necesar studiul

polimorfismului genei PPARA care ar putea aduce informaţii importante cu privire la

implicarea acestor receptori icircn apariţia obezităţii de tip central Subliniem acest lucru deoarece

obezitatea este o boală plurifactorială icircn care pe lacircngă factorii ereditari sunt implicaţi factori

de mediu psihologici şi sociali (245) Existenţa unei componente genetice a aterosclerozei

este legată şi de prezenţa unor variante ale genei PPARA asociate cu creşterea incidenţei bolii

cardiovasculare (82) şi a SM (249) Icircn studiul nostru am constatat o scădere statistic

semnificativă a nivelului expresiei relative a receptorilor PPARα icircn Eo la subiecţii cu

antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială comparativ cu subiecţii fără istoric

familial de hipertensiune (figura 537) Deşi diferenţele calculate icircntre loturile studiate nu au

icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică la subiecţii care au declarat prezenţa

antecedentelor familiale de hipertensiune arterială remarcăm o tendinţă de scădere a

intensităţii medii de fluorescenţă pentru Ac anti-PPARα la nivelul Mo (figura 515 P = 006

) icircn timp ce expresia relativă a CD36 icircnregistrează o creştere la acesti subiecţi (figura 545 P

= 008) Icircn contextul riscului cardiovascular foarte icircnalt al pacienţilor cu SM amintim şi

existenţa corelaţiei pozitive dintre valorile tensiunii arteriale diastolice şi expresia relativă a

receptorului CD36 (r = 0483 P = 0013) Această constatare este icircn consens cu studiile care

au arătat că forma solubilă circulantă a CD36 este asociată cu factorii de risc cardiovasculari

fiind propusă ca un marker precoce al aterosclerozei Activarea PPARα este asociată cu

modularea metabolismului lipidic iar agoniştii PPARα sunt utilizaţi icircn mod curent pentru

tratamentul dislipidemiei Sub acţiunea agoniştilor PPARα se obţine o icircmbunătăţire a funcţiei

endoteliale şi a parametrilor reologici funcţiile pleiotropice ale agoniştilor PPARα fiind

dovedite icircn trialuri clinice controlate Icircn populaţiile de Mo şi Ly la pacienţii cu SM

cercetarea noastră a evidenţiat o asociere negativă icircntre nivelul de expresie relativă a

receptorilor PPARα şi concentraţia TG serice (figura 551) Astfel scăderea expresiei

receptorilor PPARα este asociată cu creşterea nivelului TG serice contribuind la profilul

lipidic aterogen din SM Icircn conformitate cu literatura de specialitate icircn studiul efectuat prin

metoda citometriei icircn flux am găsit prezenţa asocierii icircntre nivelul de expresie al PPARα şi

HDL-colesterol Corelaţia pozitivă dintre nivelul de expresie relativă PPARα şi concentraţia

HDL-colesterolului a fost observată icircn lotul martor icircn populaţiile de Mo (r = 035 P = 005)

şi Ly ( r = 036 P = 004) (figura 553) susţinacircnd faptul că stimularea receptorilor PPARα

este legată de creşterea nivelului seric al lipoproteinelor cu densitate crescută La pacienţii cu

SM corelaţia dintre expresia PPARα şi HDL-colesterol a fost evidenţiată icircn populaţiile de Mo

(r = 046 P = 0019) şi eozinofile (r = 044 P = 0024) Se desprinde concluzia că icircn

sindromul metabolic scăderea concentraţiei HDL-colesterol este legată de diminuarea

nivelului de expresie relativă a receptorilor nucleari PPARα icircntărind afirmaţiile legate de

rolul acestor receptori icircn progresia bolilor cardiovasculare Studiind reactanţii de fază acută

analiza statistică a relevat o diferenţă semnificativă din punct de vedere statistic icircntre valorile

fibrinogenului la pacienţii cu SM atunci cacircnd au fost comparaţi cu subiecţii fără SM

(Capitolul IV4 P lt0 001 figura 427A) De asemenea icircn Capitolul V dedicat studiul

expresiei relative a receptorilor PPARα studiul valorilor fibrinogenului a arătat creşterea

acestui reactant de faza acută icircn lotul cu SM comparativ cu lotul martor (P lt0 0001) Icircn

studiul nostru am calculat o corelaţie invers proporţionala (r = - -036 fig 555B) icircntre

nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile şi concentraţia serică a

fibrinogenului Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P = 008) am reţinut

această asociere deoarece am demonstrat că nivelul de expresie relativă al receptorilor

PPARα icircn eozinofile este mai scăzut icircn sindromul metabolic iar sindromul metabolic este

caracterizat printr-un status inflamator cronic status caracterizat şi de creşterea concentraţiei

serice a fibrinogenului De asemenea notam ca această corelaţie negativă se află icircn

concordanţă cu studiile care arata că tratamentul cu agonişti PPARα (fibraţi) determina

scăderea nivelului seric al fibrinogenului contribuind la diminuarea inflamaţiei cronice din

sindromul metabolic şi icircn consecinţă amelioracircnd insulinorezistenţa

LIMITE ȘI DIFICULTĂȚI IcircN CERCETARE

Icircn cadrul Tezei de Doctorat am desfăşurat o cercetare care şi-a propus studierea

expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Recrutarea anamneza şi examinarea

clinică a subiecţilor au fost realizate icircn cadrul Cabinetului de Medicină de Familie CMI Popa

Elena din Iaşi iar determinările hematologice şi biochimice s-au efectuat icircn cadrul

Laboratorului Ambulatorului de Specialitate al Spitalului Universitar ldquoSfacircntul Spiridon din

Iaşi Icircn studiul epidemiologic şi al markerilor inflamatori al sindromului metabolic desfăşurat

au fost incluşi un număr de 1530 de participanţi pe baza liberului consimţămacircnt examinaţi icircn

perioada 01012013 - 31122013 Icircn continuare icircn perioada 1012014 - 28022014 pe baza

criteriilor de includere şi excludere icircn cele două loturi de studiu am investigat un număr de 57

de subiecţi prezentaţi la consultaţie icircn această perioadă şi care au icircndeplinit criteriile de

includere icircn cele două loturi (Lot SM şi Lot Control) constituite pentru evaluarea nivelului de

expresie a receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Explorarea nivelului de expresie

relativă a receptorilor PPARα s-a desfăşurat icircn cadrul Laboratorului de Biologie Moleculară

de pe platforma Institutului Regional de Oncologie Datorită resurselor proprii financiare

limitate trebuie să subliniez că aceasta cercetare nu ar fi fost posibilă fără contribuţia unor

cercetători din domeniul medical care m-au sprijinit necondiţionat atacirct icircn elaborarea

protocolului de lucru cacirct şi icircn efectuarea propriu-zisă a studiului Icircn acest sens menţionăm şi

faptul că pentru studiul receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic am utilizat aparatura

Laboratorului de Biologie Moleculară (care deserveşte icircntreaga Regiune a Moldovei) Pe

această cale mulţumesc personalului Laboratorului de Biologie Moleculară pentru ajutorul

acordat icircn desfăşurarea cercetării doctorale icircn condiţiile icircn care se observa creşterea

numărului de pacienţi care se adresează acestei platforme de cercetare Mulţumesc de

asemenea şi Doamnei Doctor Elena Butoi din cadrul Institutului de Biologie şi Patologie

Moleculară ldquoNicolae Simionescurdquo Bucureşti) pentru donaţia anticorpului secundar anti-

FITC Icircn consecinţă pentru recrutarea unui număr mai mare de participanţi ar fi fost necesară

icircn primul racircnd obţinerea unor resurse financiare suplimentare pentru achiziţia de aparatură şi

reactivi Totuşi numărul subiecţilor recrutaţi este apropiat de numărul subiecţilor raportaţi icircn

cadrul unor granturi de cercetare care aveau ca ţinta studiul expresiei receptorilor PPARα

(212 227 228 231) Rezultatele obţinute continua seria lucrărilor care arata importanta

studiului mecanismelor etiopatogenice ale sindromului metabolic patologie care se afla icircntr-o

continuă creştere La pacienţii cu SM pe lacircngă diminuarea nivelului de expresie a receptorilor

PPARα icircn eozinofile ne aşteptam şi la evidenţierea unor modificări icircn expresia PPARα şi icircn

populaţiile de Ly Mo şi PMN Acest fapt poate fi explicat de utilizarea unor celule provenite

de la pacienţi fără afectare cardiovasculară fără diabet zaharat şi necesită continuarea

studiului pe culturi celulare icircn condiţii de stimulare cu agonişti PPARα deziderat care

impune continuarea investigării expresiei PPARα printr-un grant de cercetare

ORIGINALITATEA ȘI CONTRIBUȚIILE INOVATIVE ALE TEZEI DE

DOCTORAT PERSPECTIVE DE CERCETARE

Evaluarea nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn leucocitele circulante

aduce noi perspective icircn studiul obezităţii şi sindromului metabolic Importanta studiului

expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic derivă din prevalenta crescută a

sindromului metabolic icircn populaţia cercetată la care se adaugă riscul cardiovascular foarte

icircnalt al acestor pacienţi cu implicaţii majore icircn sănătatea publică Rolul receptorilor PPARα

icircn inflamaţie şi aterogeneza este binecunoscut dar studiul nostru este primul care a arătat că

nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα este semnificativ mai scăzut in populatiile

de eozinofile la pacienţii cu SM Această concluzie coroborata cu existenţa unei stracircnse

asocieri intre expresia receptorilor PPARα la nivelul Mo limfocitelor şi PMNlor creeaza

ipoteza existenţei unui mecanism de control diferit al expresiei PPARα la nivelul

eozinofilelor Această cercetare aduce informaţii importante referitoare la mecanismele

proinflamatorii care stau la baza insulinorezistenţei şi riscului cardiometabolic şi impune

continuarea studiului acestor receptori nucleari prin citometrie icircn flux metodă care poate fi

aplicată şi la scara mai largă dacă sunt asigurate resursele materiale necesare cercetării

Cercetarea prin citometrie icircn flux poate fi completată de studiul polimorfismului genei

PPARA şi astfel se pot identifica timpuriu indivizii cu potenţial risc cardiometabolic crescut

Studiul receptorilor PPARα a stabilit conexiuni cu factori proinflamatori şi aterogenetici iar

continuarea cercetării poate aduce şi elemente noi de diagnostic precoce icircn sindromul

metabolic contribuind la icircmbunătăţirea prognosticului acestor pacienţi

CONCLUZII FINALE

1 Aplicarea scorului de SM alături de implementarea algoritmului electronic de diagnostic

contribuie la o prelucrare rapidă eficientă și standardizată a informaţiilor la nivelul

medicinei primare

2 Prevalenţa SM calculată astfel icircn cadrul studiului este crescută (2732) icircn concordanţă

cu datele raportate

3 Controlul factorilor de risc cardiometabolici incluşi icircn SM se poate realiza prin

managementul stilului de viaţă (scăderea greutăţii corporale prin combaterea

sedentarismului şi adoptarea unei diete antiaterogene şi hipocalorice) şi administrarea

terapiei medicamentoase

4 Este necesară adoptarea unei politici de sănătate publică pentru prevenirea creşterii icircn

populaţie a prevalenţei obezităţii şi a diabetului zaharat

5 Noi metode de cercetare icircn domeniul SM axate pe diagnosticarea precoce şi cuantificarea

eficientă a acestuia duce la diminuarea incidenței evenimentelor cardiovasculare majore

6 Sindromul metabolic se caracterizează printr-un status inflamator cronic

7 Valorile Non-HDL-colesterolului şi a raportului de aterogenitate sunt semnificativ mai

mari la pacienţii cu SM

8 Dintre reactanţii de faza acută am observat că valoarea medie a fibrinogenului este mai

crescută icircn lotul cu SM

9 Valorile eozinofilelor sunt crescute icircn sindromul metabolic iar explorarea relaţiei dintre

eozinofile şi obezitate constituie una din direcţiile de studiu actuale ale sindromului

metabolic

10 Evaluarea markerilor inflamatori icircn contextul sindromului metabolic este utilă icircn

evaluarea complexă a a factorilor de risc cardiometabolici

11 Prin metoda citometriei icircn flux am demonstrat prezenta Receptorilor Activaţi de

Inductorii Proliferării Peroxizomilor ndash Alpha (PPARα) icircn toate populaţiile de leucocite

studiate (Mo limfocite PMN eozinofile) atacirct icircn lotul pacienţilor cu SM cacirct şi icircn lotul

martor

12 Utilizacircnd intensitatea medie de fluorescenţă a anticorpilor anti- PPARα am arătat că

nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile este semnificativ mai redus

la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali

13 Acest studiu este primul care a demonstrat existenţa unei scăderi statistic semnificative a

nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofilele pacienţilor cu SM

confirmacircnd cercetările recente care au evidenţiat rolul eozinofilelor şi al receptorilor

PPARα icircn obezitate reglarea inflamaţiei cronice şi aterogeneza

14 Contrar aşteptărilor noastre icircn populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările

efectuate icircn cele două loturi de studiu (cu şi fără sindom metabolic) nu am evidenţiat

diferenţe statistic seminificative icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα la

subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali

15 Icircn populaţiile de Mo limfocite şi polimorfonucleare am observat corelaţii puternice

semnificativ statistic icircntre expresia PPARα icircn aceste tipuri celulare sugeracircnd existenţa

unui mecanism unic de control al inflamaţiei cronice la nivelul acestor celule probabil

diferit de cel din eozinofile

16 La subiecţii cu SM expresia relativă a PPARα icircn Eo este invers asociată cu expresia

receptorului CD36 (receptor al particulelor de ox - LDL şi propus ca un marker precoce al

aterosclerozei) dovedind rolul antiinflamator al receptorilor PPARα la nivel endotelial

17 La pacienţii cu antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială nivelul de

expresie al receptorilor PPARα icircn eozinofile şi Mo este diminuat comparativ cu subiecţii

fără antecedente familiale de hipertensiune arterială Putem spune că studiul efectuat de

noi aduce informaţii importante legate de geneză aterosclerozei şi hipertensiunii arteriale

18 Prin studiul asocierilor dintre receptorii PPARα şi componentele clinice ale sindromului

metabolic am arătat rolul acestor receptori icircn determinismul obezităţii de tip central

nivelul expresiei relative a receptorilor PPARα fiind invers proporţional cu circumferinţa

abdominală

19 Icircn acelaşi timp nivelul de expresie a PPARα icircn sindromul metabolic este asociat pozitiv

cu concentraţia serică a HDL-colesterolului şi invers asociat cu nivelul trigliceridelor

serice dovedind rolul acestor receptori icircn diminuarea procesului inflamator cronic de la

nivel vascular

20 La pacienţii cu SM scăderea expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofile este corelată cu

creşterea unor markeri ai sindromului inflamator cronic cardiometabolic (acid uric

fibrinogen) ilustracircnd importanta receptorilor icircn reglarea status-ului inflamator cronic din

sindromul metabolic

21 Utilizarea metodei flowcitometrice pentru studiul expresiei relative a receptorilor PPARα

icircn leucocite a adus informaţii importante cu privire la mecanismele moleculare de control

implicate icircn patogenia bolilor cardiometabolice icircn concordanţă cu cercetările care descriu

expresia PPAR icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale bronşice

keratinocite)

BIBLIOGRAFIE SELECTIVA

1 Kahn R Metabolic syndrome- what is the clinical usefulness Lancet 2008371(9628)1892-3

2 Reaven GM The metabolic syndrome is this diagnosis necessary Am J Clin Nutr 2006 83(6)1237-7

3 Grundy SM Pre-Diabetes Metabolic Syndrome and Cardiovascular Risk J Am Coll Cardiol 201259(7)

635-43

4 International Diabetes Federation IDF Diabetes Atlas 6th edn International Diabetes Federation Belgium

Brussels 20131-155

5 World Health Organization Global Status Report on Noncommunicable Diseases 2010 World Health

Organization Geneva Switzerland 20111-176

6 Coman AE Petrovanu R Sindromul metabolic in practica de ambulator Editura Pim Iaşi 2009 1-103

7 Grundy SM Becker D Clark LT et alThird Report of the National Cholesterol Education Program (NCEP)

Expert Panel on Detection Evaluation and Treatment of High Blood Cholesterol in Adults (Adult

Treatment Panel III) Final Report Circulation 2002106(25)3143-90

8 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J Metabolic syndrome- a new worldwide definition A Consensus Statement

from the International Diabetes Federation Diabet Med 2006 23(5)469-80

9 KG Alberti KG Eckel RH Grundy SM etal International Diabetes Federation task force on epidemiology

and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart Association World Heart

Federation International Atherosclerosis Society International Association for the study of obesity

Harmonizing the metabolic syndrome a joint interim statement of the International Diabetes Federation task

force on epidemiology and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart

Association World Heart Federation International Atherosclerosis society and International Association

for the study of obesity Circulation 2009120(16)1640-5

10 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J IDF Epidemiology Task Force The metabolic syndrome new

worldwide definition Lancet 2005 366 1059 - 62

11 Oleszczyk M Svab I Seifert B et al Primary healthcare in the developing part of Europe changes and

development in the former Eastern Bloc countries that joined the European Union following 2004 Med Sci

Monit 2009(15)78ndash84

12 Jung U J Choi M S Obesity and Its Metabolic Complications The Role of Adipokines and the

Relationship between Obesity Inflammation Insulin Resistance Dyslipidemia and Nonalcoholic Fatty

Liver Disease Int J Mol Sci 2014rsquo15(4) 6184-223

13 Vanden Heuvel JP Peters JM Peroxisome Proliferators In Ramos K (ed) Cellular and Molecular

Toxicology (Second Edition) Volume 2 New York Elsevier Science Inc 2010 145 - 67

14 Yessoufou A Wahli W Multifaceted roles of peroxisome proliferator-activated receptors (PPARs) at the

cellular and whole organism levels Swiss Med Wkl 2010140w13071 doi104414smw201013071

15 Azhar S Peroxisome proliferator-activated receptors metabolic syndrome and cardiovascular disease

Future Cardiology 20106(5)657-91

16 Andries G Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity

Diabetes and Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(Suppl)24-32

17 Zandbergen F Plutzky J PPARalpha in atherosclerosis and inflammation Biochim Biophys Acta

20071771(8)972-82

18 Straus DS Glass CK Anti-inflammatory actions of PPAR ligands new insights on cellular and molecular

mechanisms Trends Immunol 200728(12)551-8

19 Zlei M Zugun- Eloae F Carasevici E Citometrie icircn flux - Bază şi clinică Icircn Hinescu ME (ed) Citometrie icircn

flux - principii şi aplicaţii clinice Bucureşti Editura Viaţa Medicală Romacircnească 20111-128

20 Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity Diabetes and

Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(9)24-32

21 Woerly G Honda K Loyens M et al Peroxisome proliferator-activated receptors alpha and gamma down-

regulate allergic inflammation and eosinophil activation J Exp Med 2003198(3)411-21

22 Salle-Saumont D Brenuchon C Kanda A et al Peroxisome proliferator-activated receptor alpha regulates

skin inflammation and humoral response in atopic dermatitis J Clin Allergy Immunology 2008 21(4)962-8

23 Schote A Turner J Schiltz J et al Nuclear receptors in human immune cells expression and correlations

Mol Immunolog 200744(6)1436-45

24 DAmore S Vacca M Graziano G et al Nuclear receptors expression chart icircn peripheral blood

mononuclear cells identifies patients with Metabolic Syndrome Biochim Biophys Acta

20131832(12)2289-301

25 Uthurralt J Gordish-Dressman H Bradbury M T et al PPARalpha L162V underlies variation in serum

triglycerides and subcutaneous fat volume in young males BMC Med Genet 2007855

26 Hiukka A Leinonen ES Jauhiainen M et al Long-term effects of fenofibrate on VLDL and HDL

subspecies icircn participants with type 2 diabetes mellitus Diabetologia 2007 50(10)2067-75

27 Robins SJ Rubins HB Faas FH et alInsulin resistance and cardiovascular events with low HDL

cholesterol The Veterans Affairs HDL Intervention Trial (VA-HIT) Diabetes Care 2003 26(5)1513-7

28 Devaraj S Siegel D Jialal I Statin Therapy in Metabolic Syndrome and Hypertension Post-JUPITER

What is the Value of CRP Curr Atheroscler Rep 2011 13(1) 31ndash42

29 Imperatore G Riccardi G Iovino C et al Plasma Fibrinogen A New Factor of the Metabolic Syndrome A

population-based study Diabetes Care 19982 1(4)649-54

30 Krysiak R Gdula-Dymek A Bachowski R Okopien B Pleiotropic effects of atorvastatin and fenofibrate

in metabolic syndrome and different types of pre-diabete Diabetes Care 201033(10)2266-70

31 Hermans MP Impact of Fenofibrate on Type 2 Diabetes Patients with Features of the Metabolic Syndrome

Subgroup Analysis From FIELD Curr Cardiol Rev 20106(2)112-8

32 Silverstein R Inflammation atherosclerosis and arterial thrombosis Role of the scavenger receptor CD36

Cleveland Clinic Journal of Medicine 200976(Suppl 2)S27-S30

33 Hăncu N Obezitatea In Vereşiu IA (ed) Diabetul zaharat nutritia si bolile metabolice Volume 2 Editura

Echinox Cluj- Napoca 2010 1-15

Lista lucrări publicate

1 Elena Popa Maria Maidaniuc Agnes Bacusca Alamir Diaa Rodica Petrovanu Adorata Elena

Coman Disfuncţia endotelială ndash de la mecanisme moleculare la cuantifi care şi tratament icircn practica

medicală Practica Medicală 20149(3) 109-14

2 Elena Popa Agnes Bacusca Alamir Diaa Maria Maidaniuc Rodica Petrovanu Adorata Elena Coman

The function of insulin receptor (IRF) in evolution of obesity correlation with adipocytes diameters

Archives of the Balkan Medical Union 201449(3) 275-9

3 Elena Popa Florin Zugun-Eloae Mihaela Zlei Daniela Jitaru Oana Maria Pintilie Adorata Elena

Coman Maria Traian Didona Anca Ungureanu Eugen Carasevici - acceptata pentru numarul 42014

Flow cytometry analysis of PPAR-alpha receptors in metabolic syndrome) Revista Romană de

Medicină de Laborator(RRLM-D-14-00034R1- adeverinţa ataşată

Page 11: REZUMAT TEZĂ DE DOCTORAT - umfiasi.ro Doctorat/rezumat... · universitatea de medicinĂ Şi farmacie “grigore t. popa” iaŞi facultatea de medicinĂ rezumat tezĂ de doctorat

criteriilor de diagnostic ale SM Am observat că icircn cazul scorului Harmonised I

sensibilitatea şi specificitatea sunt de 100 iar AUC este egală cu 1000 Pentru cele cinci

criterii de diagnostic AUC a avut valori icircntre 0636 (pentru variabila HDL-col) şi 0804

(pentru variabila CA) (figura 431)

AUC ES 95 CI

Scor SM Harmonised I 1000 00000 0997 - 1000

CA (cm) 0804 00133 0781 - 0825

TAD (mmHg) 0666 00169 0639 - 0692

TAS (mmHg) 0757 00148 0732 - 0780

Glicemie (mgdl) 0742 00160 0717 - 0766

Trigliceride (mgdl) 0756 00175 0732 - 0780

HDL- colesterol 0636 00183 0609 - 0662

Figura 431 Analiza AUC criterii de diagnostic ale SM

Studiind figura 432 se observă că valoarea AUC pentru markerii studiaţi este cuprinsă

icircntre 0589 (icircn cazul variabilei Eo) şi 0690 (icircn cazul fibrinogenului) Icircn contextul SM

acurateţea acestor markeri ai inflamaţiei cronice şi disfuncţiei endoteliale poate fi considerată

redusă deoarece AUClt07 pentru toţi markerii investigaţi (figura 431) Totuşi valorile ariilor

parametrilor reprezentaţi icircn figura 431 sunt apropiate de valorile AUC ale variabilelor TAD

şi HDL-col (figura 432) şi deci pot fi utilizaţi pentru completarea diagnosticului de SM

AUC ES 95 CI

Non-HDL-colesterol 0605 00171 0580 - 0630

Col totalHDL-col 0607 00163 0642 - 0691

Acid uric 0655 00161 0630 - 0679

Fibrinogen 0690 00206 0658 - 0720

Eozinofile 0589 00176 0564 - 0615

Figura 432 AUC markeri ai SM inflamaţiei cronice şi aterogenezei

Discuţii

Status-ul proinflamator din SM asociat cu insulinorezistenţa şi disfuncţia endotelială

constituie o verigă de legătură dintre inflamaţie şi procesele metabolice complexe icircnsoţindu-

se de deteriorarea funcţiilor vasculare şi creşterea riscului de evenimente cardiovasculare

majore (2858) Studiul efectuat a arătat o diferenţă icircntre vacircrstele subiecţilor din cele două

loturi vacircrsta pacienţilor cu SM fiind semnificativ mai mare (Plt0001) comparativ cu subiecţii

normali confirmacircnd faptul menţionat că vacircrsta reprezintă unul din stimulii care agravează

inflamaţia cronică Am arătat că valorile fibrinogenului sunt mai mari icircn SM comparativ cu

Scor Harmonised I

0 20 40 60 80 100

0

20

40

60

80

100

100-Specificitate

Sen

sib

ilit

ate

Criterii diagnostic SM

0 20 40 60 80 100

0

20

40

60

80

100

100-Specificitate

Sens

ibili

tate

CA

TAD

TAS

Glicemie

Trigliceride

HDL-C

0 20 40 60 80 100

0

20

40

60

80

100

100-Specificitate

Sensi

bilita

te

Non-HDL-C

Col T HDL-C

Acid uric

Fibrinogen

Eozinofile

lotul martor atacirct la bărbaţi cacirct şi la femei icircn concordanţă cu studiile anterioare Evaluarea

fibrinogenului este importantă nu numai icircn SM pentru definirea contextului proinflamator şi

protrombotic ci şi icircn predicţia cardiovasculară la subiecţii normali Studiind populaţiile

leucocitare am obţinut diferenţe semnificative icircn cazul Eo valoarea medie a acestora fiind

semnificativ mai mare icircn lotul cu SM comparativ cu lotul martor (P lt 0001 figura 425B)

Implicarea Eo icircn SM s-a conturat icircn ultimul deceniu aceste celule fiind implicate icircn recrutarea

macrofagelor din ţesutul adipos Experimental s-a constatat că o creştere a Eo apărută ca

urmare a infectării cu helminţi sau stimulare cu IL-5 este urmată de icircmbunătăţirea toleranţei la

glucoză (199) Controlul pe care icircl exercită Eo asupra activării macrofagelor ar putea fi cheia

intervenţiei asupra obezităţii icircn viitorul apropiat(165199) Hiperuricemia asociata frecvent cu

SM este cunoscut ca un factor independent de risc cardiovascular (192 202) In concordanţă

cu aceasta afirmaţie in studiul nostru am constatat ca nivelul seric al acidului uric a fost mai

crescut in lotul cu SM diferenţa semnificativă din punct de vedere statistic (P lt 00001)

Dislipidemia aterogenă din sindromul metabolic şi diabetul zaharat se caracterizează prin

creşterea trigliceridelor şi a Non-HDL-col scăderea HDL-col creşterea numărului de

particule LDL modificate (185190) La pacienţii cu SM am descris un profil aterogenetic

cu risc crescut de evenimente cardiovasculare majore

STUDIUL RECEPTORILOR ACTIVAŢI DE INDUCTORII PROLIFERĂRII

PEROXIZOMILOR-ALPHA IcircN LEUCOCITELE CIRCULANTE

Ipoteza de lucru

Studii experimentale efectuate au arătat că rolul PPARα icircn ateroscleroză derivă din

implicarea acestor receptori icircn limitarea inflamaţiei Plecacircnd de la acest fundament ne-am

propus evidenţierea receptorilor nucleari activaţi de inductorii proliferării peroxizomilor-

alpha (PPARα) prin citometrie de flux icircn leucocitele din sacircngele periferic alături de

evaluarea acestei metode icircn cuantificarea expresiei relative a PPARα ca test diagnostic

precoce al modificărilor metabolice SM Studiul expresiei relative a receptorilor PPARα a

plecat de la premisa că dacă SM se caracterizează printr-un status inflamator cronic nivelul

de expresie a PPARα icircn leucocitele circulante este mai scăzut la pacienţii cu SM comparativ

cu subiecţii normali Referitor la studiul receptorului CD36 am plecat de la presupunerea că

nivelul de expresie al acestui receptor icircn SM este crescut dat fiind importanţa acestui receptor

icircn inflamaţia aterosclerotică Avacircnd icircn vedere efectele receptorilor amintiţi icircn

insulinorezistenţă şi aterogeneză am considerat necesară evaluarea prezenţei receptorului

nuclear PPARα icircn paralel cu studiul receptorului bdquoscavengerrdquo CD-36 prin metoda citometriei

icircn flux Astfel icircn studiul efectuat mi-am propus şi investigarea existenţei unei legături icircntre

nivelul de expresie al receptorilor PPARα şi cel al receptorului CD-36 De asemenea ne-am

icircndreptat atenţia spre stabilirea unor asocieri icircntre componentele clinice şi biochimice ale

sindromului metabolic şi nivelul intensităţilor de fluorescenţă ale PPARα şi CD-36 ca măsură

a expresiei relative a acestor receptori

Material și metodă

Studiul receptorilor PPARα icircn contextul sindromului metabolic s-a desfăşurat icircn

perioada 1012014 -28022014 pe baza metodologiei studiilor de tip caz-martor Am urmărit

identificarea unor diferenţe icircntre expresia receptorilor PPARα la pacienţii cu SM comparativ

cu subiecţii sănătoşi diferenţe care ar putea fi utile icircn diagnosticul precoce al SMRecrutarea

pacienţilor s-a efectuat din pacienţii prezentaţi pentru consultaţie la Cabinetul Individual

ldquoCMI Dr Popa Elenardquo situat icircn strada Ion Creanga din Iaşi Pentru studiul receptorilor

PPARα icircn sindromul metabolic au fost selecţionaţi un număr de 57 de subiecţi 26 de subiecţi

cu SM (constituind lotul SM) şi 31 subiecţi fără SM constituind lotul de control (Lot Non-

SM) Pentru studiul SM pacienţii au fost recrutaţi din masa de populaţie arondată cabinetului

de MF fără istoric de SM diabet zaharat boală cardio-vasculară aflați la primul diagnostic

de SM evaluarea completă a acestora fiind urmată de includerea icircn programul de

management cardiovascular şi metabolic conform Ghidurilor Terapeutice aflate icircn vigoare

Lot SM a) criterii de includerevacircrsta peste 18 ani recrutarea pe baza semnării

Consimţămacircntului liber informatSM nou-diagnosticat pe baza prezenţei a minim trei criterii

de diagnostic pentru SM conform Harmonised I b) criterii de excluderevacircrstă sub 18 ani

refuzul semnării Consimţămacircntului liber informat femei icircn perioada de graviditate sau de

lactaţie SM anterior diagnosticat istoric de diabet zaharat boală cardiovasculară constituită

tratament cu agonişti PPARα (ie fibraţi etc)

Lot martor (Non-SM) a) criterii de includerevacircrsta peste 18 ani recrutarea pe baza

semnării Consimţămacircntului liber informat absenţa diagnosticului de SM b) criterii de

excludere vacircrstă sub 18 ani refuzul semnării Consimţămacircntului liber informat femei icircn

perioada de graviditate sau de lactaţie

Studiul receptorilor PPARα a inclus două subetape

A Studiul componentelor sindromului metabolic conform criteriilor Harmonised I

Evaluarea clinică a participanţilor s-a desfăşurat icircn cadrul Cabinetului de Medicină de

Familie iar determinările hematologice şi biochimice s-au efectuat icircn Laboratorul

Ambulatorului Clinic de Specialitate al Spitalului Clinic de Urgenţă bdquoSf Spiridonrdquo Iaşi

B Evaluarea icircn citometrie de flux a nivelului relativ de expresie a PPARα şi CD36

Studiul receptorilor PPARα s-a desfăşurat icircn Laboratorul de Biologie Moleculară al

Institutului Regional de Oncologie Iaşi prin metoda citometriei icircn flux (19) Nivelul relativ de

expresie al receptorilor nucleari PPARα a fost determinat icircn diferite tipuri de leucocite

circulante polimorfonucleare (PMN) limfocite (Ly) Mo(Mo) şi eozinofile(Eo) Am utilizat o

metodă de citometrie icircn flux optimizată ldquoin houserdquo elaborată icircn cadrul Laboratorului de

Biologie Moleculară al IRO Iaşi Icircn cursul procesului de optimizare am testat mai multe

concentraţii ale anticorpului anti-PPARα 1100 1500 11500 14500 iar icircn urma

determinărilor efectuate şi a analizei statistice concentraţia 1500 a fost considerată optimă

pentru desfăşurarea studiului (tabel XXIII figura 51)

Tabel XXIII Optimizarea concentraţiilor Ac anti-PPARα Diferenţa

mediilor

valorilor

medii

PMN

Diferenţa

mediilor

mediane-

lor

PMN

Diferenţa

mediilor

valorilor

medii

Ly

Diferenţa

mediilor

mediane-

lor

Ly

Diferenţa

mediilor

valorilor

medii

Mo

Diferenţa

mediilor

mediane-

lor

Mo

Diferenţă 0 1300 1600 100 100 700 750

normal - 1100 650 1050 1050 1350 450 900

patologic 1500 2850 2750 3800 3600 2850 2400

11500 -1050 800 3500 3300 2250 1800

14500 2200 2150 1300 1100 2950 2850

AOptimizare

BRepetabilitate

Figura 51 Optimizarea concentraţiei anticorpului anti-PPARα

Icircn concordanţă cu literatura de specialitate icircn cercetarea efectuată intensitatea medie

de fluorescenţă (MFI) a fost utilizată ca măsură pentru evaluarea expresiei celulare a

receptorilor PPARα (212) Un exemplu de analiză a probelor este reprezentat icircn figura 52

Figura 52 Exemplu de analiză flowcitometrică pentru receptorul nuclear PPARα Graficul din stacircnga reprezintă distribuţia leucocitelor iar cel din dreapta ilustrează distribuţia

intensităţii de fluorescenţă pentru populaţiile de celule selectate

Intensitatea Medie a Fluorescenţei (MFI) a CD36 ca o măsură a nivelului relativ de

expresie a acestor receptori la nivelul membranei Mo a fost detectată printr-o metodă

convenţională pentru marcare de suprafaţă şi evaluare pe bază de citometrie icircn flux folosind

aceleaşi probe de sacircnge cu EDTA cu focalizare pe Mo şi utilizacircnd CD14 ca marker specific

pentru Mo (figura 53)

Figura 53Analiza

flowcitometrică

pentru marcajul

CD14 - CD36

Rezultate

Icircn cele două loturi au fost incluşi icircn studiu un număr de 57 de participanţi care au fost

investigaţi din punct clinic şi paraclinic Vacircrsta subiecţilor incluşi icircn studiu a fost cuprinsă

icircntre 18 şi 79 ani iar vacircrsta medie calculată a avut valoarea de 4805 plusmn 1587 ani Pentru sexul

masculin vacircrsta medie este de 4925plusmn1617 ani iar pentru sexul feminin 4689 plusmn1 5ani

diferenţa obţinută icircntre vacircrstele pacienţilor fiind statistic nesemnificativă (P = 085)

Analizacircnd vacircrstele subiecţilor din cele două loturi am observat că vacircrsta medie a pacienţilor

cu SM (5476 plusmn 1183 ani) a fost semnificativ mai mare (t-test P = 0003) decacirct icircn lotul

martor (4258 plusmn 169 ani) Pentru diagnosticul sindromului metabolic am calculat scorul de

SM bazacircndu-ne pe criteriile Harmonised I Conform criteriilor diagnostice din cei 57 de

subiecţi investigaţi un număr de 26 participanţi (46) au fost incluşi icircn lotul cu SM (Lot

SM) iar 31 de subiecţi(54) nu au prezentat acest sindrom constituind lotul martor (Lot

Non-SM) Din punct de vedere al repartiţiei pe sexe nu au existat diferenţe statistic

semnificative raportul bărbaţifemei fiind de 0961 Din totalul celor 28 de bărbaţi incluşi icircn

studiu 4285 (12 bărbaţi) au icircntrunit cel puţin trei criterii diagnostice pentru SM fiind

incluşi icircn lotul SM Icircn acelaşi timp 14 femei reprezentacircnd 4827 din subiecţii de sex

feminin au icircntrunit condiţiile pentru includerea icircn lotul pacienţilor cu SM Valoarea medie

determinată pentru scorul de SM a arătat prezenţa unor valori semnificativ statistic mai mari

din punct (t-test P lt 00001) icircn lotul SM (769plusmn176) comparativ cu lotul martor (174 plusmn

184) Am studiat comparativ media valorilor măsurate ale criteriilor componentelor SM

Analiza statistică a arătat valori semnificativ statistic mai mari pentru CA TG glicemie TAS

şi TAD (plt0001) icircn lotul SM comparativ cu lotul normal Concomitent calculul statistica

evidenţiat o scăderea semnificativă a HDL-colesterolului icircn lotul cu SM comparativ cu

subiecţii din lotul martor (Non-SM) Aplicacircnd testul z am comparat ponderea pacienţilor

diagnosticaţi cu HTA dislipidemie şi tulburări ale metabolismului glucidic icircn lotul SM versus

lot Non-SM şi am constatat prezenţa acestor afecţiuni icircntr-un procent mai mare semnificativ

statistic icircn lotul SM ((plt0001)

Utilizacircnd testul t Student am calculat diferenţele statistice şi icircntre alți parametri

studiaţi care sunt factori de risc cardio-vascular dar care nu sunt componente ale SM Icircn lotul

cu SM valorile acidului uric fibrinogenului Col total Non-HDL-col şi LDL-col au fost

semnificativ mai mari comparativ cu lotul martor (tabel XXVI) Analizacircnd valorile medii ale

populaţiilor de leucocite am identificat doar pentru populaţia de Eo diferenţe statistice icircntre

cele două loturi numărul Eo icircn lotul SM fiind semnificativ mai mare decacirct icircn lotul martorTot

pentru caracterizarea celor două loturi am analizat prezenţa antecedentelor

heredocolaterale (AHC) de diabet zaharat boala cardiovasculară şi dislipidemie pentru toţi

subiecţii investigaţi Astfel existenţa AHC de HTA a fost declarată de 2580 din subiecţii

incluşi icircn lotul martor respectiv de 5384 din numărul pacienţilor cu SM Antecedentele

heredocolaterale de dislipidemie au fost prezente la 3461 din pacienţii cu SM icircn timp ce icircn

lotul martor anamneza a evidenţiat aceste antecedente la 3548 din subiecţi

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα

Icircn cercetarea desfăşurată am utilizat intensitatea medie de fluorescenţă (MFI) ca

măsură a nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn leucocitele studiate Pentru

populaţiile de leucocite analiza computerizată a probelor luate icircn studiu a furnizat valori

pentru MFI a receptorilor PPARα icircn funcţie de cantitatea de anticorpi anti-PPARα marcaţi cu

fluorocrom care se leagă de aceste celule şi apoi sunt captaţi de citometru (figura 59)

A Lot Non - SM

B Lot SM

Figura 59 Analiza flowcitometrică pentru receptorii PPARα icircn leucocite A lot normal B lot SM

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Mo

Analiza probelor efectuată conform protocolului de lucru descris a arătat prezenţa

PPARα icircn Mo recoltate din sacircngele tuturor subiecţilor incluşi icircn această cercetare Pentru toţi

participanţii investigaţi analiza MFI a Ac anti - PPARα icircn populaţia de Mo (Mo) a arătat un

interval de variaţie icircntre [786 395] Valoarea medie a nivelului de expresie relativă a PPARα

calculată pentru Mo a fost de 23210 plusmn7860 Pentru ambele loturi de studiu pacienţilor cu

SM testul Testul Shapiro-Wilk a arătat distribuţia normală a valorilor obţinute pentru nivelul

de expresie al PPARα icircn Mo

Tabel XXVIII Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn Mo

Lot SM Lot Non-SM

N 26 31

Media 22819 23538

SD 5819 7717

Mediana 22400 22600

Minimum 12800 78600

Maximum 35800 37900

Percentila 25 18300 18300

Percentila 75 26200 30350

Pentru pacienţii din lotul SM valoarea medie a MFI icircn Mo a fost de 22819 plusmn 5880 iar

pentru lotul martor s-a calculat o valoare medie a MFI a Ac anti-PPARα de 23538 plusmn 7717

Distribuţia statistică a frecvenţei valorilor MFI obţinute pentru nivelul de expresie a PPARα

icircn Mo subiecţilor din cele două loturi a fost reprezentată icircn figura 511

Figura 511 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti-PPARα icircn Mo

Sub forma unei diagrame de control Shewhart am reprezentat variaţia intensităţii medii de

fluorescenţă pentru anticorpii anti-PPARα icircn MoVariaţia nivelului de expresie relativă a

receptorilor PPARα icircn Mo subiecţilor studiaţi este ilustrată icircn fig 512 513

Figura 512 Lot SM Variaţia

expresiei relative a PPARα icircn Mo

Număr pacienţi

26

Minim 128

Maxim 358

Media 22819

DS 5819

25 din 26 valori ale MFI s-au icircncadrat

icircn intervalul Media plusmn 2DS

Figura 513 Lot Non-SM Variaţia

expresiei relative a PPARα icircn Mo

Număr pacienţi 31

Minimum 786

Maximum 379

Media 23538

DS 7717

Cu excepţia unei singure

determinări valorile calculate s-au

icircncadrat icircn Media plusmn 2DS

Utilizacircnd testul parametric t-Student pentru variabilele cu distribuţie normală am

comparat valoarea medie a intensităţii de fluorescenţă a Ac anti-PPARα icircn lotul cu SM versus

subiecţi fără SM (Lot Non-SM) Analiza statistică efectuată nu a identificat diferenţe icircntre

50 100 150 200 250 300 350 400 450

0

5

10

15

20

25

30

35

MFI anti-PPAR a

Frecv

enta

relati

va (

)

Lot SM

0 50 100 150 200 250 300 350 400 450 500

0

5

10

15

20

25

30

35

MFI anti-PPAR a

Frecv

enta

relati

va (

)

Lot martor

1 6 11 16 21 26 31

0

50

100

150

200

250

300

350

400

450

MFI

anti-

PPAR

a

2282

1106

3458

518

4046

Media

LCI

LCI

1 6 11 16 21 26 31 36

-100

0

100

200

300

400

500

MFI a

nti-PP

AR

a

2354

810

3897

39

4669LCS

LCI

Media

cele două loturi icircn ceea ce priveşte expresia PPARα la nivelul Mo circulante (t- Test P=

069)

Studiul receptorilor PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de AHC şi dislipidemie

Nivelul de expresie al receptorilor PPARα α icircn Mo tinde să fie mai scăzut la subiecţii

cu AHC de HTA comparativ subiecţii care nu au declarat AHC de HTA (P= 006 fig 515)

AHC HTA

Număr 22

Mediana 19950

Percentila 25 17800

Percentila 75 22700

AHC HTA absente

Număr 35

Mediana 24800

Percentila 25 19025

Percentila 75 31700

Figura 515 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Mo funcţie de AHC de HTA

Nu s-au calculat diferenţe semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor

PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de dislipidemie atunci cacircnd aceştia au fost comparaţi cu

subiecţii fără AHC de tulburări ale metabolismului lipidic (t- Test P= 020)

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn limfocite

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn populaţia de Ly a

demonstrat prezenţa receptorilor PPARα icircn Ly tuturor subiecţilor studiaţi Pentru toţi

participanţii investigaţi analiza MFI a Ac anti - PPARα icircn populaţia de Ly a relevat un

interval de variaţie icircntre [748 314] iar valoarea medie a MFI a fost de 18058 plusmn 5600

Pentru ambele loturi aplicarea testului Shapiro-Wilk a evidenţiat distribuţia normală a

valorilor determinate pentru nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Ly Pentru

pacienţii cu SM valoarea medie a MFI determinată pentru expresia PPARα icircn populaţia de

Ly a fost de 18178 plusmn 61 16 iar pentru lotul martor a fost de 16800 plusmn 5229

Tabel XXX Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn limfocite

Lot SM Lot Non-SM

N 26 31

Media 181781 179574

SD 611694 522907

Mediana 165000 168000

Minimum 81300 74800

Maximum 314000 301000

Percentila 25 13400 - 145750

Percentila 75 21800 21700

Distribuţia frecvenţei valorilor MFI a Ac anti-PPARα icircn Ly este redată icircn figura 518

Figura 518 Distribuţia frecvenţelor relative a MFI a Ac anti-PPARα icircn Ly

94 din determinările efectuate pentru determinarea nivelului de expresie relativă al

MFI

ant

iPPA

R

a_Mo

190

200

210

220

230

240

250

260

270

280

DA NU

AHC HTA

P=006

50 89 128 167 206 244 283 322 361 400

0

5

10

15

20

25

30

35

MFI anti-PPAR a

Frecv

enta

relati

va (

)

Lot SM

0 50 100 150 200 250 300 350

0

5

10

15

20

25

30

35

40

MFI anti-PPAR a

Frec

venta

relat

iva (

)

Lot Non-SM

receptorilor PPARα icircn limfocitele subiecţilor cu SM s-au icircncadrat icircn intervalul Media plusmn 2DS

Figura 5 19 Lot SM Variaţia expresiei

relative a PPARα icircn Ly

Număr pacienţi 26

Minimum 813

Maximum 31400

Media 18178

Deviaţia Standard 6116

25 valori s-au icircncadrat icircn Media plusmn 2DS

Pentru lotul Non-SM diagrama de control (figura 520) a arătat toate valorile

determinate pentru lotul Non-SM se icircncadrează icircntre LCS şi LCI

Figura 520 Lot Non -SM Variaţia

expresiei relative a PPARα icircn Ly

Număr pacienţi 31

Minimum 748

Maximum 30100

Media 179574

Deviaţia Standard 5229

96 din valori icircncadrate icircn Media plusmn 2DS

Aplicarea testului t-Student pentru valorile medii ale intensităţii de fluorescenţă ale

PPARα icircn Ly nu a arătat existenţa unei diferenţe statistic semnificative icircntre lotul cu SM şi

lotul martor(t- Test P= 088)

Analiza receptorilor PPARα icircn Ly subiecţilor cu AHC de HTA şi dislipidemie

Studiind populaţiile de Ly la subiecţii care au prezentat AHC de hipertensiune

arterială analiza flowcitometrică a relevat existenţa unor valori mai mici pentru MFI la aceşti

subiecţi comparativ cu cei fără AHC de HTA (fig 522) deşi scăderea observată nu a

icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică (t- Test P = 009)

AHC HTA

Număr 22

Mediana 16000

Percentila 25 12700

Percentila 75 17100

AHC HTA absenţe

Număr 35

Mediana 18700

Percentila 25 14900

Percentila 75 23175

Figura 522 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Ly funcţie de AHC de HTA

Nu am calculat diferenţe statistic semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor

PPARα icircn populaţiile de Ly ale subiecţilor la care am identificat AHC de dislipidemie

comparativ cu cei care nu au declarat antecedente familiale de dislipidemie (t- Test P= 051)

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn neutrofile (PMN)

Analiza flowcitometrică a evidenţiat prezenţa PPARα icircn PMN recoltate din sacircngele

venos al tuturor participanţilor la studiu Pentru toţi subiecţii investigaţi analiza MFI a Ac -

PPARα icircn populaţia de PMN a relevat un interval de variaţie de [163419] iar valoarea medie

a MFI pentru Ac anti-PPARα a fost de 26392 plusmn 7064 Testul Shapiro-Wilk a arătat o

distribuţie normală a valorilor intensităţii medii de fluorescenţă a anticorpilor anti-PPARα atacirct

icircn lotul pacienţilor cu SM cacirct şi icircn lotul martor

1 6 11 16 21 26 31

-50

0

50

100

150

200

250

300

350

400

MFI

anti-

PPAR

a

1818

595

3041

-17

3653

Media+2DS

Media- 2DS

1 6 11 16 21 26 31 36

0

50

100

150

200

250

300

350

MFI

ant

i-PPA

R

a

1796

750

2841

227

3364

Media+2DS

Media

Media- 2DS

MFI

anti-

PPAR

a Ly

130

140

150

160

170

180

190

200

210

DA NU

AHC HTA

P=009

Tabel XXXII Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn PMN

Lot SM Lot Non-SM

N 26 31

Media 26273 26480

SD 6915 7088

Mediana 25900 25500

Minimum 17200 16300

Maximum 39500 41900

Percentila 25 19800 19600

Percentila 75 30500 31500

Icircn cele două loturi distribuţia frecvenţei valorilor nivelului relativ de expresie a

receptorilor PPARα icircn PMN a fost reprezentată sub formă de histograme (fig 525)

Figura 525 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti-PPARα icircn PMN

Pentru cei 26 de pacienţi din lotul cu SM a valoarea medie a nivelului de expresie

relativă a receptorilor PPARα icircn PMN a fost de 26273 plusmn 6915 Studiind diagrama Shewhart

din figura 526 se observă că toate valorile obţinute pentru nivelul de expresie relativă

PPARα icircn PMN investigate se icircncadrează icircntre limitele definite de valorile medii plusmn 2DS

Figura 526 Lot SM

Variaţia expresiei relative a PPARα icircn

PMN

Număr pacienţi 26

Minimum 17200

Maximum 39500

Media 26273

Deviaţia Standard 6915

Valorile MFI icircncadrate icircn Media plusmn 2DS

Pentru lotul martor valoarea medie calculată a MFI a anticorpilor anti-PPARα a fost de

26480 plusmn 7088 peste 95 din valorile MFI fiind cuprinse icircn Media plusmn 2DS (figura 527)

Figura 527 Lot Non-SM Variaţia expresiei

relative a PPARα icircn PMN

Număr pacienţi 31

Minimum 16300

Maximum 41900

Media 26480

Deviaţia Standard 7088

30 valoriicircn Media plusmn 2DS

Pentru PMN analiza statistica nu a arătat existenţa unei diferenţe statistic semnificative icircntre

nivelul de expresie relativă a PPARα la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii din lotul

Non-SM (t- Test P= 090) Studiind populaţiile de PMN la subiecţii care au prezentat AHC

de HTA nu am calculat o diferenţă statistic semnificativă icircntre expresia receptorilor PPARα

la subiecţii cu istoric familial de hipertensiune arterială comparativ cu cei pentru care nu s-au

notat AHC de HTA (t- Test P= 013)De asemenea am identificat diferenţe icircntre nivelul de

expresie al PPARα icircn PMN subiecţilor care prezentau AHC de dislipidemie comparativ cu

cei fără AHC de dislipidemie (t- Test P= 017)

50 100 150 200 250 300 350 400 450 500

0

5

10

15

20

25

30

35

MFI anti-PPAR a

Frecve

nta rel

ativa (

)

Lot SM

50 100 150 200 250 300 350 400 450 500

0

5

10

15

20

25

30

MFI anti-PPAR a

Frecv

enta

relati

va (

)

Lot Non-SM

1 6 11 16 21 26 31

0

50

100

150

200

250

300

350

400

450

500

MFI

anti-

PPA

R

a

2627

1244

4010

553

4702

Media + 2DS

Media - 2 DS

Media

1 6 11 16 21 26 31 36

0

50

100

150

200

250

300

350

400

450

500

MFI

anti-

PPAR

a

2648

1230

4066

522

4774

Media+ 2DS

Media - 2DS

Media

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile Tabel XXXIV Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn Eo

Lot SM Lot Non-SM

N 26 31

Mediaplusmn SD 141057 plusmn 47604 172209 plusmn 37565

Mediana 142450 171300

Minimum 35000 68500

Maximum 233700 250600

Percentila 25 119300 153225

Percentila 75 169700 199550

Am studiat nivelul relativ de expresie a receptorilor PPARα icircn Eo iar rezultatele au

fost figurate sub forma de histograme (figura 532)

Figura 532 Distribuţia frecventelor relative ale valorilor MFI anti- PPARα icircn Eo

Din diagrama Shewhart (figura 533) se observă că toate valorile determinate pentru

nivelul de expresie relativă a PPARα icircn Eo pentru lotul SM s-au icircncadrat icircn [Media plusmn 3 DS]

peste 90 din determinări fiind cuprinse icircn [Media plusmn 2 DS] iar icircn [Media plusmn 1 DS] sunt

incluse peste 65 din valorile MFI

Figura 533 Lot SM

Variaţia expresiei relative a PPARα icircn Eo

Număr pacienţi 26

Minimum 35000

Maximum 233700

Media 141057

Deviaţia Standard 47604

24 valori icircncadrat eicircn [Media plusmn 2DS]

Pentru subiecţii incluşi icircn lotul martor analiza diagramei (figura 534) a arătat că

toate cele 31 de valori ale MFI pentru PPARα icircn Eo se icircncadrează icircn [Media plusmn 3DS] iar 30

dintre acestea se icircncadrează icircn [ Media plusmn 2 DS]

Figura 534 Lot Non -SM

Variaţia expresiei relative a PPARα icircn Eo

Număr pacienţi 31

Minimum 685

Maximum 2506

Media 172209

Deviaţia Standard 375 65

30 valori icircncadrate icircn [Media plusmn 2DS]

Comparacircnd subiecţii cu SM cu cei din lotul martor am observat o scădere

semnificativă statistic a MFI a Ac anti - PPARα icircn Eo pentru pacienţiir cu SM ( figura 535)

PPARα Eo Lot Non-SM

Număr 31

Mediana 171300

Percentila 25 152325

Percentila 75 199550

PPARα Eo Lot SM

Număr 26

Mediana 142450

Percentila 25 119300

Percentila 75 169700

Figura 5 35 Comparaţie icircntre nivelul de expresie a PPARα icircn Eo

0 500 1000 1500 2000 2500 3000

0

10

20

30

40

50

MFI anti-PPAR a

Frecvent

a relativa

()

Lot SM

400 800 1200 1600 2000 2400 2800

0

5

10

15

20

25

30

35

40

45

MFI anti-PPAR a

Frecenta

relativa

()

Lot Non-SM

1 6 11 16 21 26 31

-500

0

500

1000

1500

2000

2500

3000

MFI a

nti-PP

AR

a

14106

4765

23447

94

28117

Media + 2DS

Media- 2DS

LCI

LCS

1 6 11 16 21 26 31 36

500

1000

1500

2000

2500

3000

MFI an

ti-PPA

R a

17221

9708

24734

5951

28490

LCI

Media-2DS

Media

Media +2 DS

LCS

1200

1300

1400

1500

1600

1700

1800

1900

Lot SM Lot Non-SM

P=00072

Cu ajutorul curbei ROC am evaluat posibilitatea utilizării MFI a Ac anti - PPARα icircn

Eo ca marker pentru diagnosticul SM Valoarea MFI a Ac anti - PPARα icircn Eo care prezice cu

cea mai mare acurateţe prezenţa SM a fost de 1533 (punctul de ldquocut-offrdquo) pentru care am

calculat o sensibilitate de 5652 şi o specificitate de 7778 Calculul ariei AUC a furnizat

valoarea de 0663 şi deci determinarea parametrului MFI anti- PPARα icircn Eo are valoarea

unui test cu acurateţe redusatilde icircn diagnosticul SM Studiind expresia PPARα icircn Eo la subiecţii

care au prezentat AHC de HTA am observat o scădere semnificativă statistic (P = 00023) a

expresiei PPARα la subiecţii cu istoric familial de HTA comparativ cu subiecţii fatilderatilde AHC de

HTA (figura 537)

AHC HTA

Număr 22

Mediana 148800

Percentila 25 116425

Percentila 75 170750

AHC HTA absente

Număr 35

Mediana 170850

Percentila 25 143700

Percentila 75 195000

Figura 537 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Eo funcţie de AHC de HTA

Studiind subiecţii cu AHC declarate de dislipidemie nu am identificat diferenţe icircntre

nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Eo subiecţilor cu AHC de dislipidemie

comparativ cu cei care nu au declarat prezenţa AHC de dislipidemie (t - Test P = 067)

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor CD36

Am studiat expresia receptorilor CD36 icircn Mo subiecţilor incluşi icircn studiu

Lot Non - SM

BLot SM

Figura 539 Analiza flowcitometrica pentru receptorii CD36 icircn Mo

Pentru toţi participanţii la studiu valorile MFI au variat icircn intervalul [817 6933] iar

valoarea medie a MFI a Ac anti-CD36 a fost de 397133 plusmn 120902 Tabel XXXVII Statistică descriptivă pentru a CD36 icircn Mo

Lot SM Lot Non-SM

Media 429034 370377

Deviatia Standard 109051 125514

Mediana 411000 362800

Minimum 266400 81700

Maximum 693300 616800

Percentila 25 346200 273750

Percentila 75 469000 453300

Distribuţia frecvenţelor relative a MFI au fost prezentate sub formă histogramelor

Figura 541 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti - CD36 icircn Mo

MFI

ant

i-PPA

R a Eo

1000

1100

1200

1300

1400

1500

1600

1700

1800

1900

DA NU

AHC HTA

P=00023

1000 2000 3000 4000 5000 6000 7000 8000

0

5

10

15

20

25

MFI anti-CD36

Frecve

nta rela

tiva (

)

Lot SM

0 1778 3556 5333 7111

0

5

10

15

20

25

30

35

MFI anti-CD36

Frecve

nta rel

ativa (

)

Lot Non - SM

Referitor la lotul SM 92 din valorile MFI a Ac anti- CD36 s-au icircncadrat icircn

intervalul Media plusmn 2 DS (figura 542) iar pentru lotul martor peste 90 dintre acestea icircn

Media plusmn 2 DS (figura 543)

Figura 542 Lot SM

Variaţia MFI anti-CD36 icircn Mo

Număr pacienţi 26

Minimum 2664

Maximum 6933

Media 429034

Deviaţia Standard 109051

Figura 543 Lot Non -SM

Variaţia MFI anti- CD36 icircn Mo

Număr 31

Minimum 81700

Maximum 616800

Media 370377

Deviaţia Standard 125514

Comparacircnd subiecţii cu SM cu cei din lotul normal am constatat o tendinţă de creştere

a expresiei CD36 icircn lotul cu SM((t - Test P= 0067)

MFI anti - CD36 Lot Non-SM

Număr 31

Mediana 3628

Percentila 25 2737

Percentila 75 4533

MFI anti - CD36 Lot SM

Număr 26

Mediana 4110

Percentila 25 3462

Percentila 75 4690

Figura 544 Comparaţie icircntre cel două loturi privind MFI anti - CD36 icircn Mo

Referindu-ne la subiecţii cu AHC de HTA am observat o tendinţă de creştere a

valorilor MFI anti-CD36 comparativ cu cei care nu au avut AHC de HTA (t - Test P = 0 08)

AHC HTA

Număr 22

Mediana 442800

Percentila 25 355275

Percentila 75 519475

AHC HTA absenţe

Număr 35

Mediana 377400

Percentila 25 316900

Percentila 75 443400

Figura 545 Comparaţie icircntre expresia CD36 icircn Mo funcţie de AHC de HTA

Nu s-au calculat diferenţe semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor

PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de dislipidemie atunci cacircnd aceştia au fost comparaţi cu

subiecţii fără AHC de dislipidemie (t - Test P=031)

Corelaţii icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα si CD36

Studiind valorile intensităţii medii de fluorescenţă a Ac anti-PPARα icircn Mo Ly şi

PMN am observat că nivelul de expresie celularatilde a PPARα icircn Mo Ly şi PMN sunt corelate

puternic pozitiv atacirct icircn lotul SM cacirct şi icircn lotul martor(fig547 548)

1 6 11 16 21 26 31

0

1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

8000

Pacienti

MFI a

nti-CD

36

42903

21093

64714

10188

75619

LCI

Media

LCS1 6 11 16 21 26 31 36

-1000

0

1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

8000

MFI a

nti- C

D36

37038

11935

62141

-616

74692Media + 2 DS

Media

Media - 2 DS

3200

3400

3600

3800

4000

4200

4400

4600

4800

Lot SM Lot Non-SM

P = 00676

MFI

anti-

CD36

3400

3600

3800

4000

4200

4400

4600

4800

5000

DA NU

AHC HTA

P = 008

Figura 547 Studiul relatiilor dintre

receptorii PPARα icircn SM A Mo vs PMN B Mo vs Ly

C PMN vs Ly Graficul ilustrează coeficienţii r P dreapta de

regresie (linia centrala) intervalul de icircncredere

95 şi intervalul de predicţie 95

Figura 548 Corelaţii icircntre receptorii PPARα icircn lotul

martor

A Mo vs PMN

B Mo vs Ly

C PMN vs Ly

Tot pentru lotul SM cacircnd am evaluat relaţia dintre nivelul de expresie relativă a

receptorilor PPARα icircn Eo şi nivelul de expresie relativa a receptorilor CD 36 am obţinut o

corelaţie negativă (r = - 05 P = 001) (fig 549 A)

50 100 150 200 250 300 350 50

100

150

200

250

300

350

400

450

500

PPARα Ly

PPARα PMN

y = 56641 + 1159 x r = 086 P lt 0001

C

50 100 150 200 250 300 350 400 0

50

100

150

200

250

300

350

PPARα Mo

PPARα Ly

y = 36665 + 0607 x r = 090 P lt 0001

B

150 200 250 300 350 400 450 0

50 100 150 200 250 300 350 400 450 500

PPARα PMN

PPARα Mo

y = 2505 + 0879 x r = 081 P lt 0001

A

50 100 150 200 250 300 350

50 100 150 200 250 300 350 400 450 500

PPARα Ly

PPARα PMN

y = 95668 + 0919 x r = 081 P lt 0001

C

100 150 200 250 300 350 400

0

50

100

150

200

250

300

350

400

PPARα Mo

PPARα Ly

y = -7503 + 0829 x r = 079 P lt 0001

B

100 150 200 250 300 350 400

50

100

150

200

250

300

350

400

450

500

PPARα Mo

PPARα PMN

y = 61384 + 0882 r = 074 P lt 0001

A

Figura 549 Corelaţii icircntre expresia PPARα icircn Eo şi alte tipuri de receptori investigaţi A PPARα Eo şi CD 36 (Lot SM) B PPARα Eo şi PPARα Mo( Lot Non-SM)

Icircn lotul martor am identificat o asociere moderată pozitivă (r = 038 P = 0033) icircntre

nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Eo şi Mo (figura 549B) corelaţie absentă icircn

lotul pacienţilor cu SM

Corelaţii dintre receptorii studiaţi şi componentele sindromului metabolic

Icircn lotul de control analiza statistică a relevat faptul că icircntre circumferinţa

abdominală (CA ) şi nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Mo Ly şi PMN există o

corelaţie inversă adică scăderea expresiei PPARα la nivelul acestor populatii celulare ar fi

icircnsoţită de creşterea CA (figura 550

Figura 550Corelaţii dintre receptorii

PPARα si CA A Mo B Ly C PMN

La pacienţii cu SM am notat o corelatie moderată negativă statistic semnificativă

icircntre TG şi valorile MFI a Ac anti- PPARα icircn Mo şi Ly( fig 551)

150 200 250 300 350 400 450 50

60

70

80

90

100

110

PPARα PMN

CA r = - 040 P = 0024

C

50 100 150 200 250 300 350 50

60

70

80

90

100

110

PPARα Ly

CA r = - 046 P = 0009

B

50 100 150 200 250 300 350 400 50

60

70

80

90

100

110

PPARα Mo

CA r = - 042 P = 0017

A

50 100 150 200 250 300 350 400 500

1000

1500

2000

2500

3000

PPARα Mo

PPARα Eo

r = 038 P = 0033

B

0 500 1000 1500 2000 2500 1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

8000

PPARα Eo

CD36

r = 050 P = 0010

A

Figura 551 Lot SM Corelaţie icircntre expresia PPARα şi TG (A Mo B Ly)

Analizand corelatia dintre receptorii CD36 si valorile TA la pacientii cu SM am observat

o asociere pozitivă asteptată intre TAD si nivelul de expresie al receptorilor CD36 (fig 552)

Figura 552 Lot SM Corelaţii icircntre expresia

receptorilor CD36 şi valorile tensiunii arteriale

diastolice

Studiind corelaţiile dintre receptorii PPARα şi HDL-col la subiecţii din lotul martor am

notat o asociere pozitivă icircntre expresia PPARα icircn Mo şi Ly cu HDL-col (fig 553)

Figura 553 Lot martor Corelaţii icircntre HDL-col şi expresia PPARα icircn Mo(A) Ly(B)

Icircn lotul normal am evidenţiat corelaţii pozitive moderate dar semnificative statistic icircntre

CA şi valorile TAS (r = 062 P lt 0001) respectiv TAD (r = 050 P=0004) precum şi icircntre

CA şi glicemia subiecţilor normali (r = 052 P = 0003) Aceste date icircmpreună cu relaţia

invers proporţională identificată icircntre HDL-col şi CA (r = 050 P = 001) susţin validitatea

acestui studiu Icircn lotul subiecţilor cu SM am observat o corelaţie moderat pozitivă icircntre

expresia PPARα icircn populaţiiile de Mo şi Eo şi concentraţia a HDL-col (fig 554)

B

100 150 200 250 300 350 20

30

40

50

60

70

80

90

100

PPARα Ly

HDL-col-(mgdl)

r = 036 P = 0046

A

150 200 250 300 350 400 20

30

40

50

60

70

80

90

100

PPARα Mo

HDL-col-(mgd)l

r = 035 P = 005

70 75 80 85 90 95 100 1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

8000

TAD (mmHg)

CD36

r = 048 P = 0013

B

50 100 150 200 250 300 350 -100

0

100

200

300

400

500

PPARα Ly

TG(mgdl)

r = - 042 P = 003

A

50 100 150 200 250 300 350 400 -100

0

100

200

300

400

500

PPARα Mo

TG ( mgdl) r =- 0 43 P = 0027

Figura 554 Corelaţii icircn SM icircntre HDL-col şi expresia PPARα icircn Mo (A) şi Eo(B)

Corelaţii icircntre nivelul de expresie relativă a PPARα şi markeri ai disfuncţiei

endoteliale şi inflamaţiei cronice

Deşi nu a icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică am reţinut corelaţia invers

proporţională (r = - 0331 P = 006) dintre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα

icircn PMN şi concentraţia serică a Non-HDL-colesterolului

Studiind relaţiile dintre parametri icircn lotul de pacienţi cu SM am observat o corelaţie

moderată invers proporţională icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Eo şi

acidul uric seric (figura 555 A) corelaţie absentă la subiecţii fără SM

Figura 555 Lot SM corelaţia dintre expresia PPARα icircn Eo şi acidul uric (A) respectiv

PPARα şi fibrinogen (B)

Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P=008) am notat pentru

pacienţii cu SM corelaţia invers proporţională dintre expresia PPARα icircn Eo şi concentraţia

serică a fibrinogenului ( figura 555B)

V5 Discuţii

Icircn cadrul lucrării de doctorat am studiat nivelul de expresie relativă a PPARα icircn

leucocitele pacienţilor cu SM comparativ cu cea a subiecţilor normali Expresia PPARα a fost

studiată icircn paralel cu cea a CD36 glicoproteină exprimată pe suprafaţa a numeroase celule

din organismul uman inclusiv pe cea a Mo şi macrofagelor Prin funcţia sa de receptor pentru

particulele oxidate de LDL CD36 cunoscut ca bdquoscavenger receptorrdquo de clasa B sau

bdquotrombospodin receptorrdquo contribuie la dezvoltarea inflamaţiei de la nivel endotelial şi

formarea plăcii de ateroscleroză Referitor la studiul PPARα icircn Eo icircn sindromul metabolic

menţionăm că studiul nostru este primul care arată că nivelul de expresie a proteinei PPARα

icircn Eo măsurat prin citometrie icircn flux este semnificativ mai redus la pacienţii care sunt

diagnosticaţi cu acest sindrom De asemenea icircn lotul cu SM cercetat icircn cadrul studiului

receptorilor PPARα numărul Eo circulante a fost semnificativ mai crescut la pacienţii cu SM

B

0 500 1000 1500 2000 2500 200

250

300

350

400

450

PPARα Eo o

Fibrinogen mgdl

r =- 036 P = 008

0 500 1000 1500 2000 2500 1 2 3 4 5 6 7 8 9

10 11

PPARα Eo_

Acid uric(mgdl) r = 048 P = 0014 A

0 500 1000 1500 2000 2500 10

20

30

40

50

60

70

80

PPARα Eo

HDL(mgdl)

r = 044 P = 0024

B

100 150 200 250 300 350 400 10

20

30

40

50

60

70

80

PPARα Mo

HDL( mgdl)

r = 046 P = 0019

A

(P = 003) Aceste constatări conduc la ipoteza că Eo joacă un rol special icircn mecanismele

patogenice declanşate icircn sindromul metabolic şi că receptorii PPARα sunt importanţi icircn

implicarea Eo icircn obezitate şi insulinorezistenţă Creşterea numărului de Eo circulante este

urmată de eliberarea mediatorilor proinflamatori iar reducerea expresiei PPARα icircn Eo

determină perturbarea mecanismelor de control al inflamaţiei cu exacerbarea cascadei

proinflamatorii Consecutiv se agravează disfuncţia endotelială şi se accelerează progresia

leziunilor de ateroscleroză Extrapolacircnd aceste ipoteze putem spune că asocierea raportată

dintre boala ischemică coronariană şi Eo poate fi şi consecinţa exacerbării cascadei

proinflamatorii de la nivel vascular produsă datorită scăderii expresiei PPARα icircn Eo iar

creşterea numărului de Eo circulante poate reprezenta o adaptare a organismului uman care

icircncearcă să suplinească deficitul de receptori PPARα Analizacircnd curba ROC pentru

intensităţile medii de fluorescenţă determinate pentru anticorpii anti- PPARα icircn Eo am

obţinut pentru acest biomarker o sensibilitate a testului de 565 şi o specificitate de 778

pentru un punct de cut-off de 1533 ( figura 536 ) Deşi aria AUC (Aria under the curve) egală

cu 0663 icircncadrează acest test ca avacircnd o acurateţe redusă observăm că că această valoare

este apropiată de determinările AUC pentru alţi factori (fibrinogen raport de aterogenitate

acid uric non- HDL-colesterol) cunoscuţi ca fiind implicaţi icircn aterogeneză şi inflamaţia

cronică (figura 431) Aceste remarci alături de faptul că icircn studiul receptorilor PPARα icircn

leucocite am inclus subiecţi la primul diagnostic de SM creează premisa integrării

determinării expresiei relative a receptorilor PPARα icircn diagnosticul complex al sindromului

metabolic Putem spune că icircn final studiul expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofilele

circulante se dovedește a fi util icircn diagnosticul precoce la nivel molecular al SM permiţacircnd

identificarea timpurie a unor indivizi cu risc cardiometabolic crescut Astfel intervenţia

precoce asupra subiecţilor cu deficit de PPARα icircn Eo contribuie la managementul eficient al

afecţiunilor degenerative icircn care inflamaţia cronică icircndeplineşte un rol primordial Referitor

la populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările efectuate prin citometrie de flux nu au

arătat existenţa unor diferenţe statistice icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα

la subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali Rezultatele noastre pot fi

consecinţa caracteristicilor loturilor studiate (icircn studiul nostru au fost incluşi subiecţi recrutaţi

la primul diagnostic de SM şi icircn absenţa stimulării receptorilor PPARα cu droguri agoniste

PPARα) dar icircn acelaşi timp pot apare diferenţe datorită metodei utilizate (231 232 233)

Făcacircnd o paralelă cu un studiu publicat icircn 2013 icircn Europa (231) care a arătat creşterea

nivelului de expresie al PPARα icircn Ly şi Mo observăm că deşi numărul de subiecţi a fost

aproximativ egal (57 participanţi icircn studiul nostru 60 icircn studiul DAmore) subiecţii icircn studiul

amintit au fost recrutaţi dintr-o clinică cu profil medical la primul diagnostic de SM icircn timp

ce metoda utilizată a fost PCR (Polymerase Chain Reaction) mult mai fidelă decacirct citometria

icircn flux icircn studiul receptorilor nucleari De asemenea DAmore nu investighează expresia

PPARα icircn Eo şi PMN icircn cercetare fiind incluse doar celulele CD14+ (predominant Mo) şi

CD14- (predominant Ly) Deşi nu am obţinut diferenţe statistic semnificative icircntre cele două

loturi referitoare la nivelul de expresie relativă a PPARα icircn Mo Ly şi PMN am observat

corelaţii puternice semnificative statistic icircntre expresia receptorilor PPARα icircn aceste tipuri

celulare Rezultatele obţinute sugerează existenţa unui mecanism diferit molecular de control

icircn eozinofile care reglează cantitatea de proteină PPARα icircn eozinofile versus alte tipuri de

leucocite (la pacienţii cu SM) şi acest lucru este icircn concordanţă cu cercetările care descriu

expresia PPARα mRNA icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale

bronşice keratinocite) Studiind prin citometrie de flux nivelul de expresie relativă a

receptorului CD36 la nivelul Mo am arătat prezenţa acestuia icircn Mo tuturor subiecţilor

investigaţi Analizacircnd valorile intensităţii medii de fluorescenţă a CD36 icircn loturile studiate

am observat o tendinţă de creştere la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali

confirmacircnd implicarea receptorului CD36 icircn patogeneza acestuia Referitor la expresia

receptorului CD36 rezultatele obţinute sunt icircn consens cu studii anterioare care au arătat

creşterea expresiei CD36 la pacienţii cu SM şi diabet zaharat Astfel pe lacircngă diferenţa icircn

expresia CD36 s-au raportat şi corelaţii inverse icircntre expresia proteinei CD36 şi nivelul

adiponectinei Acelaşi studiu a evidenţiat o corelaţie pozitivă intre expresia CD36 cu expresia

receptorilor PPAR gamma relaţia cu PPARα nefiind investigată

Analiza de subgrup a relaţiilor dintre componentele SM și elementele moleculare

proinflamatorii studiate a relevat prezenţa unor asocieri semnificativ statistice icircntre acestea

Se argumentează astfel că veridicitatea studiului este susţinută de interdependenţele statistice

ale componentelor SM Determinarea coeficientului de corelaţie Icircn studiul nostru nivelul de

expresie relativă a PPARα s-a corelat moderat negativ (figura 550) cu CA a subiecţilor din

lotul normal pentru populaţiile celulare de Mo (r = - 0420 P = 001) Ly (r = - 046 P =

0009) şi PMN (r = - 040 P = 0024) date care sunt icircn concordanţă cu studiile care arată

rolul PPARα icircn furnizarea energiei prin beta-oxidarea acizilor graşi Icircn acelaşi timp icircn lotul

pacienţilor cu SM nu am identificat prezenţa unei asocieri icircntre nivelul de expresie relativă a

PPARα şi valoarea măsurată a CA Asocierea dintre expresia relativă a PPARα cu obezitatea

de tip central completează datele existente referitoare la reglarea homeostaziei energetice

conturacircnd un mecanism de control deficitar al aportului caloric al SM Icircn condiţiile icircn care

rezultatele obţinute prin metoda citometriei icircn flux nu au arătat existenţa unei corelaţii intre

expresia PPARα şi CA la pacienţii cu SM considerăm că ar fi necesar studiul

polimorfismului genei PPARA care ar putea aduce informaţii importante cu privire la

implicarea acestor receptori icircn apariţia obezităţii de tip central Subliniem acest lucru deoarece

obezitatea este o boală plurifactorială icircn care pe lacircngă factorii ereditari sunt implicaţi factori

de mediu psihologici şi sociali (245) Existenţa unei componente genetice a aterosclerozei

este legată şi de prezenţa unor variante ale genei PPARA asociate cu creşterea incidenţei bolii

cardiovasculare (82) şi a SM (249) Icircn studiul nostru am constatat o scădere statistic

semnificativă a nivelului expresiei relative a receptorilor PPARα icircn Eo la subiecţii cu

antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială comparativ cu subiecţii fără istoric

familial de hipertensiune (figura 537) Deşi diferenţele calculate icircntre loturile studiate nu au

icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică la subiecţii care au declarat prezenţa

antecedentelor familiale de hipertensiune arterială remarcăm o tendinţă de scădere a

intensităţii medii de fluorescenţă pentru Ac anti-PPARα la nivelul Mo (figura 515 P = 006

) icircn timp ce expresia relativă a CD36 icircnregistrează o creştere la acesti subiecţi (figura 545 P

= 008) Icircn contextul riscului cardiovascular foarte icircnalt al pacienţilor cu SM amintim şi

existenţa corelaţiei pozitive dintre valorile tensiunii arteriale diastolice şi expresia relativă a

receptorului CD36 (r = 0483 P = 0013) Această constatare este icircn consens cu studiile care

au arătat că forma solubilă circulantă a CD36 este asociată cu factorii de risc cardiovasculari

fiind propusă ca un marker precoce al aterosclerozei Activarea PPARα este asociată cu

modularea metabolismului lipidic iar agoniştii PPARα sunt utilizaţi icircn mod curent pentru

tratamentul dislipidemiei Sub acţiunea agoniştilor PPARα se obţine o icircmbunătăţire a funcţiei

endoteliale şi a parametrilor reologici funcţiile pleiotropice ale agoniştilor PPARα fiind

dovedite icircn trialuri clinice controlate Icircn populaţiile de Mo şi Ly la pacienţii cu SM

cercetarea noastră a evidenţiat o asociere negativă icircntre nivelul de expresie relativă a

receptorilor PPARα şi concentraţia TG serice (figura 551) Astfel scăderea expresiei

receptorilor PPARα este asociată cu creşterea nivelului TG serice contribuind la profilul

lipidic aterogen din SM Icircn conformitate cu literatura de specialitate icircn studiul efectuat prin

metoda citometriei icircn flux am găsit prezenţa asocierii icircntre nivelul de expresie al PPARα şi

HDL-colesterol Corelaţia pozitivă dintre nivelul de expresie relativă PPARα şi concentraţia

HDL-colesterolului a fost observată icircn lotul martor icircn populaţiile de Mo (r = 035 P = 005)

şi Ly ( r = 036 P = 004) (figura 553) susţinacircnd faptul că stimularea receptorilor PPARα

este legată de creşterea nivelului seric al lipoproteinelor cu densitate crescută La pacienţii cu

SM corelaţia dintre expresia PPARα şi HDL-colesterol a fost evidenţiată icircn populaţiile de Mo

(r = 046 P = 0019) şi eozinofile (r = 044 P = 0024) Se desprinde concluzia că icircn

sindromul metabolic scăderea concentraţiei HDL-colesterol este legată de diminuarea

nivelului de expresie relativă a receptorilor nucleari PPARα icircntărind afirmaţiile legate de

rolul acestor receptori icircn progresia bolilor cardiovasculare Studiind reactanţii de fază acută

analiza statistică a relevat o diferenţă semnificativă din punct de vedere statistic icircntre valorile

fibrinogenului la pacienţii cu SM atunci cacircnd au fost comparaţi cu subiecţii fără SM

(Capitolul IV4 P lt0 001 figura 427A) De asemenea icircn Capitolul V dedicat studiul

expresiei relative a receptorilor PPARα studiul valorilor fibrinogenului a arătat creşterea

acestui reactant de faza acută icircn lotul cu SM comparativ cu lotul martor (P lt0 0001) Icircn

studiul nostru am calculat o corelaţie invers proporţionala (r = - -036 fig 555B) icircntre

nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile şi concentraţia serică a

fibrinogenului Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P = 008) am reţinut

această asociere deoarece am demonstrat că nivelul de expresie relativă al receptorilor

PPARα icircn eozinofile este mai scăzut icircn sindromul metabolic iar sindromul metabolic este

caracterizat printr-un status inflamator cronic status caracterizat şi de creşterea concentraţiei

serice a fibrinogenului De asemenea notam ca această corelaţie negativă se află icircn

concordanţă cu studiile care arata că tratamentul cu agonişti PPARα (fibraţi) determina

scăderea nivelului seric al fibrinogenului contribuind la diminuarea inflamaţiei cronice din

sindromul metabolic şi icircn consecinţă amelioracircnd insulinorezistenţa

LIMITE ȘI DIFICULTĂȚI IcircN CERCETARE

Icircn cadrul Tezei de Doctorat am desfăşurat o cercetare care şi-a propus studierea

expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Recrutarea anamneza şi examinarea

clinică a subiecţilor au fost realizate icircn cadrul Cabinetului de Medicină de Familie CMI Popa

Elena din Iaşi iar determinările hematologice şi biochimice s-au efectuat icircn cadrul

Laboratorului Ambulatorului de Specialitate al Spitalului Universitar ldquoSfacircntul Spiridon din

Iaşi Icircn studiul epidemiologic şi al markerilor inflamatori al sindromului metabolic desfăşurat

au fost incluşi un număr de 1530 de participanţi pe baza liberului consimţămacircnt examinaţi icircn

perioada 01012013 - 31122013 Icircn continuare icircn perioada 1012014 - 28022014 pe baza

criteriilor de includere şi excludere icircn cele două loturi de studiu am investigat un număr de 57

de subiecţi prezentaţi la consultaţie icircn această perioadă şi care au icircndeplinit criteriile de

includere icircn cele două loturi (Lot SM şi Lot Control) constituite pentru evaluarea nivelului de

expresie a receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Explorarea nivelului de expresie

relativă a receptorilor PPARα s-a desfăşurat icircn cadrul Laboratorului de Biologie Moleculară

de pe platforma Institutului Regional de Oncologie Datorită resurselor proprii financiare

limitate trebuie să subliniez că aceasta cercetare nu ar fi fost posibilă fără contribuţia unor

cercetători din domeniul medical care m-au sprijinit necondiţionat atacirct icircn elaborarea

protocolului de lucru cacirct şi icircn efectuarea propriu-zisă a studiului Icircn acest sens menţionăm şi

faptul că pentru studiul receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic am utilizat aparatura

Laboratorului de Biologie Moleculară (care deserveşte icircntreaga Regiune a Moldovei) Pe

această cale mulţumesc personalului Laboratorului de Biologie Moleculară pentru ajutorul

acordat icircn desfăşurarea cercetării doctorale icircn condiţiile icircn care se observa creşterea

numărului de pacienţi care se adresează acestei platforme de cercetare Mulţumesc de

asemenea şi Doamnei Doctor Elena Butoi din cadrul Institutului de Biologie şi Patologie

Moleculară ldquoNicolae Simionescurdquo Bucureşti) pentru donaţia anticorpului secundar anti-

FITC Icircn consecinţă pentru recrutarea unui număr mai mare de participanţi ar fi fost necesară

icircn primul racircnd obţinerea unor resurse financiare suplimentare pentru achiziţia de aparatură şi

reactivi Totuşi numărul subiecţilor recrutaţi este apropiat de numărul subiecţilor raportaţi icircn

cadrul unor granturi de cercetare care aveau ca ţinta studiul expresiei receptorilor PPARα

(212 227 228 231) Rezultatele obţinute continua seria lucrărilor care arata importanta

studiului mecanismelor etiopatogenice ale sindromului metabolic patologie care se afla icircntr-o

continuă creştere La pacienţii cu SM pe lacircngă diminuarea nivelului de expresie a receptorilor

PPARα icircn eozinofile ne aşteptam şi la evidenţierea unor modificări icircn expresia PPARα şi icircn

populaţiile de Ly Mo şi PMN Acest fapt poate fi explicat de utilizarea unor celule provenite

de la pacienţi fără afectare cardiovasculară fără diabet zaharat şi necesită continuarea

studiului pe culturi celulare icircn condiţii de stimulare cu agonişti PPARα deziderat care

impune continuarea investigării expresiei PPARα printr-un grant de cercetare

ORIGINALITATEA ȘI CONTRIBUȚIILE INOVATIVE ALE TEZEI DE

DOCTORAT PERSPECTIVE DE CERCETARE

Evaluarea nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn leucocitele circulante

aduce noi perspective icircn studiul obezităţii şi sindromului metabolic Importanta studiului

expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic derivă din prevalenta crescută a

sindromului metabolic icircn populaţia cercetată la care se adaugă riscul cardiovascular foarte

icircnalt al acestor pacienţi cu implicaţii majore icircn sănătatea publică Rolul receptorilor PPARα

icircn inflamaţie şi aterogeneza este binecunoscut dar studiul nostru este primul care a arătat că

nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα este semnificativ mai scăzut in populatiile

de eozinofile la pacienţii cu SM Această concluzie coroborata cu existenţa unei stracircnse

asocieri intre expresia receptorilor PPARα la nivelul Mo limfocitelor şi PMNlor creeaza

ipoteza existenţei unui mecanism de control diferit al expresiei PPARα la nivelul

eozinofilelor Această cercetare aduce informaţii importante referitoare la mecanismele

proinflamatorii care stau la baza insulinorezistenţei şi riscului cardiometabolic şi impune

continuarea studiului acestor receptori nucleari prin citometrie icircn flux metodă care poate fi

aplicată şi la scara mai largă dacă sunt asigurate resursele materiale necesare cercetării

Cercetarea prin citometrie icircn flux poate fi completată de studiul polimorfismului genei

PPARA şi astfel se pot identifica timpuriu indivizii cu potenţial risc cardiometabolic crescut

Studiul receptorilor PPARα a stabilit conexiuni cu factori proinflamatori şi aterogenetici iar

continuarea cercetării poate aduce şi elemente noi de diagnostic precoce icircn sindromul

metabolic contribuind la icircmbunătăţirea prognosticului acestor pacienţi

CONCLUZII FINALE

1 Aplicarea scorului de SM alături de implementarea algoritmului electronic de diagnostic

contribuie la o prelucrare rapidă eficientă și standardizată a informaţiilor la nivelul

medicinei primare

2 Prevalenţa SM calculată astfel icircn cadrul studiului este crescută (2732) icircn concordanţă

cu datele raportate

3 Controlul factorilor de risc cardiometabolici incluşi icircn SM se poate realiza prin

managementul stilului de viaţă (scăderea greutăţii corporale prin combaterea

sedentarismului şi adoptarea unei diete antiaterogene şi hipocalorice) şi administrarea

terapiei medicamentoase

4 Este necesară adoptarea unei politici de sănătate publică pentru prevenirea creşterii icircn

populaţie a prevalenţei obezităţii şi a diabetului zaharat

5 Noi metode de cercetare icircn domeniul SM axate pe diagnosticarea precoce şi cuantificarea

eficientă a acestuia duce la diminuarea incidenței evenimentelor cardiovasculare majore

6 Sindromul metabolic se caracterizează printr-un status inflamator cronic

7 Valorile Non-HDL-colesterolului şi a raportului de aterogenitate sunt semnificativ mai

mari la pacienţii cu SM

8 Dintre reactanţii de faza acută am observat că valoarea medie a fibrinogenului este mai

crescută icircn lotul cu SM

9 Valorile eozinofilelor sunt crescute icircn sindromul metabolic iar explorarea relaţiei dintre

eozinofile şi obezitate constituie una din direcţiile de studiu actuale ale sindromului

metabolic

10 Evaluarea markerilor inflamatori icircn contextul sindromului metabolic este utilă icircn

evaluarea complexă a a factorilor de risc cardiometabolici

11 Prin metoda citometriei icircn flux am demonstrat prezenta Receptorilor Activaţi de

Inductorii Proliferării Peroxizomilor ndash Alpha (PPARα) icircn toate populaţiile de leucocite

studiate (Mo limfocite PMN eozinofile) atacirct icircn lotul pacienţilor cu SM cacirct şi icircn lotul

martor

12 Utilizacircnd intensitatea medie de fluorescenţă a anticorpilor anti- PPARα am arătat că

nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile este semnificativ mai redus

la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali

13 Acest studiu este primul care a demonstrat existenţa unei scăderi statistic semnificative a

nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofilele pacienţilor cu SM

confirmacircnd cercetările recente care au evidenţiat rolul eozinofilelor şi al receptorilor

PPARα icircn obezitate reglarea inflamaţiei cronice şi aterogeneza

14 Contrar aşteptărilor noastre icircn populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările

efectuate icircn cele două loturi de studiu (cu şi fără sindom metabolic) nu am evidenţiat

diferenţe statistic seminificative icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα la

subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali

15 Icircn populaţiile de Mo limfocite şi polimorfonucleare am observat corelaţii puternice

semnificativ statistic icircntre expresia PPARα icircn aceste tipuri celulare sugeracircnd existenţa

unui mecanism unic de control al inflamaţiei cronice la nivelul acestor celule probabil

diferit de cel din eozinofile

16 La subiecţii cu SM expresia relativă a PPARα icircn Eo este invers asociată cu expresia

receptorului CD36 (receptor al particulelor de ox - LDL şi propus ca un marker precoce al

aterosclerozei) dovedind rolul antiinflamator al receptorilor PPARα la nivel endotelial

17 La pacienţii cu antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială nivelul de

expresie al receptorilor PPARα icircn eozinofile şi Mo este diminuat comparativ cu subiecţii

fără antecedente familiale de hipertensiune arterială Putem spune că studiul efectuat de

noi aduce informaţii importante legate de geneză aterosclerozei şi hipertensiunii arteriale

18 Prin studiul asocierilor dintre receptorii PPARα şi componentele clinice ale sindromului

metabolic am arătat rolul acestor receptori icircn determinismul obezităţii de tip central

nivelul expresiei relative a receptorilor PPARα fiind invers proporţional cu circumferinţa

abdominală

19 Icircn acelaşi timp nivelul de expresie a PPARα icircn sindromul metabolic este asociat pozitiv

cu concentraţia serică a HDL-colesterolului şi invers asociat cu nivelul trigliceridelor

serice dovedind rolul acestor receptori icircn diminuarea procesului inflamator cronic de la

nivel vascular

20 La pacienţii cu SM scăderea expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofile este corelată cu

creşterea unor markeri ai sindromului inflamator cronic cardiometabolic (acid uric

fibrinogen) ilustracircnd importanta receptorilor icircn reglarea status-ului inflamator cronic din

sindromul metabolic

21 Utilizarea metodei flowcitometrice pentru studiul expresiei relative a receptorilor PPARα

icircn leucocite a adus informaţii importante cu privire la mecanismele moleculare de control

implicate icircn patogenia bolilor cardiometabolice icircn concordanţă cu cercetările care descriu

expresia PPAR icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale bronşice

keratinocite)

BIBLIOGRAFIE SELECTIVA

1 Kahn R Metabolic syndrome- what is the clinical usefulness Lancet 2008371(9628)1892-3

2 Reaven GM The metabolic syndrome is this diagnosis necessary Am J Clin Nutr 2006 83(6)1237-7

3 Grundy SM Pre-Diabetes Metabolic Syndrome and Cardiovascular Risk J Am Coll Cardiol 201259(7)

635-43

4 International Diabetes Federation IDF Diabetes Atlas 6th edn International Diabetes Federation Belgium

Brussels 20131-155

5 World Health Organization Global Status Report on Noncommunicable Diseases 2010 World Health

Organization Geneva Switzerland 20111-176

6 Coman AE Petrovanu R Sindromul metabolic in practica de ambulator Editura Pim Iaşi 2009 1-103

7 Grundy SM Becker D Clark LT et alThird Report of the National Cholesterol Education Program (NCEP)

Expert Panel on Detection Evaluation and Treatment of High Blood Cholesterol in Adults (Adult

Treatment Panel III) Final Report Circulation 2002106(25)3143-90

8 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J Metabolic syndrome- a new worldwide definition A Consensus Statement

from the International Diabetes Federation Diabet Med 2006 23(5)469-80

9 KG Alberti KG Eckel RH Grundy SM etal International Diabetes Federation task force on epidemiology

and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart Association World Heart

Federation International Atherosclerosis Society International Association for the study of obesity

Harmonizing the metabolic syndrome a joint interim statement of the International Diabetes Federation task

force on epidemiology and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart

Association World Heart Federation International Atherosclerosis society and International Association

for the study of obesity Circulation 2009120(16)1640-5

10 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J IDF Epidemiology Task Force The metabolic syndrome new

worldwide definition Lancet 2005 366 1059 - 62

11 Oleszczyk M Svab I Seifert B et al Primary healthcare in the developing part of Europe changes and

development in the former Eastern Bloc countries that joined the European Union following 2004 Med Sci

Monit 2009(15)78ndash84

12 Jung U J Choi M S Obesity and Its Metabolic Complications The Role of Adipokines and the

Relationship between Obesity Inflammation Insulin Resistance Dyslipidemia and Nonalcoholic Fatty

Liver Disease Int J Mol Sci 2014rsquo15(4) 6184-223

13 Vanden Heuvel JP Peters JM Peroxisome Proliferators In Ramos K (ed) Cellular and Molecular

Toxicology (Second Edition) Volume 2 New York Elsevier Science Inc 2010 145 - 67

14 Yessoufou A Wahli W Multifaceted roles of peroxisome proliferator-activated receptors (PPARs) at the

cellular and whole organism levels Swiss Med Wkl 2010140w13071 doi104414smw201013071

15 Azhar S Peroxisome proliferator-activated receptors metabolic syndrome and cardiovascular disease

Future Cardiology 20106(5)657-91

16 Andries G Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity

Diabetes and Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(Suppl)24-32

17 Zandbergen F Plutzky J PPARalpha in atherosclerosis and inflammation Biochim Biophys Acta

20071771(8)972-82

18 Straus DS Glass CK Anti-inflammatory actions of PPAR ligands new insights on cellular and molecular

mechanisms Trends Immunol 200728(12)551-8

19 Zlei M Zugun- Eloae F Carasevici E Citometrie icircn flux - Bază şi clinică Icircn Hinescu ME (ed) Citometrie icircn

flux - principii şi aplicaţii clinice Bucureşti Editura Viaţa Medicală Romacircnească 20111-128

20 Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity Diabetes and

Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(9)24-32

21 Woerly G Honda K Loyens M et al Peroxisome proliferator-activated receptors alpha and gamma down-

regulate allergic inflammation and eosinophil activation J Exp Med 2003198(3)411-21

22 Salle-Saumont D Brenuchon C Kanda A et al Peroxisome proliferator-activated receptor alpha regulates

skin inflammation and humoral response in atopic dermatitis J Clin Allergy Immunology 2008 21(4)962-8

23 Schote A Turner J Schiltz J et al Nuclear receptors in human immune cells expression and correlations

Mol Immunolog 200744(6)1436-45

24 DAmore S Vacca M Graziano G et al Nuclear receptors expression chart icircn peripheral blood

mononuclear cells identifies patients with Metabolic Syndrome Biochim Biophys Acta

20131832(12)2289-301

25 Uthurralt J Gordish-Dressman H Bradbury M T et al PPARalpha L162V underlies variation in serum

triglycerides and subcutaneous fat volume in young males BMC Med Genet 2007855

26 Hiukka A Leinonen ES Jauhiainen M et al Long-term effects of fenofibrate on VLDL and HDL

subspecies icircn participants with type 2 diabetes mellitus Diabetologia 2007 50(10)2067-75

27 Robins SJ Rubins HB Faas FH et alInsulin resistance and cardiovascular events with low HDL

cholesterol The Veterans Affairs HDL Intervention Trial (VA-HIT) Diabetes Care 2003 26(5)1513-7

28 Devaraj S Siegel D Jialal I Statin Therapy in Metabolic Syndrome and Hypertension Post-JUPITER

What is the Value of CRP Curr Atheroscler Rep 2011 13(1) 31ndash42

29 Imperatore G Riccardi G Iovino C et al Plasma Fibrinogen A New Factor of the Metabolic Syndrome A

population-based study Diabetes Care 19982 1(4)649-54

30 Krysiak R Gdula-Dymek A Bachowski R Okopien B Pleiotropic effects of atorvastatin and fenofibrate

in metabolic syndrome and different types of pre-diabete Diabetes Care 201033(10)2266-70

31 Hermans MP Impact of Fenofibrate on Type 2 Diabetes Patients with Features of the Metabolic Syndrome

Subgroup Analysis From FIELD Curr Cardiol Rev 20106(2)112-8

32 Silverstein R Inflammation atherosclerosis and arterial thrombosis Role of the scavenger receptor CD36

Cleveland Clinic Journal of Medicine 200976(Suppl 2)S27-S30

33 Hăncu N Obezitatea In Vereşiu IA (ed) Diabetul zaharat nutritia si bolile metabolice Volume 2 Editura

Echinox Cluj- Napoca 2010 1-15

Lista lucrări publicate

1 Elena Popa Maria Maidaniuc Agnes Bacusca Alamir Diaa Rodica Petrovanu Adorata Elena

Coman Disfuncţia endotelială ndash de la mecanisme moleculare la cuantifi care şi tratament icircn practica

medicală Practica Medicală 20149(3) 109-14

2 Elena Popa Agnes Bacusca Alamir Diaa Maria Maidaniuc Rodica Petrovanu Adorata Elena Coman

The function of insulin receptor (IRF) in evolution of obesity correlation with adipocytes diameters

Archives of the Balkan Medical Union 201449(3) 275-9

3 Elena Popa Florin Zugun-Eloae Mihaela Zlei Daniela Jitaru Oana Maria Pintilie Adorata Elena

Coman Maria Traian Didona Anca Ungureanu Eugen Carasevici - acceptata pentru numarul 42014

Flow cytometry analysis of PPAR-alpha receptors in metabolic syndrome) Revista Romană de

Medicină de Laborator(RRLM-D-14-00034R1- adeverinţa ataşată

Page 12: REZUMAT TEZĂ DE DOCTORAT - umfiasi.ro Doctorat/rezumat... · universitatea de medicinĂ Şi farmacie “grigore t. popa” iaŞi facultatea de medicinĂ rezumat tezĂ de doctorat

lotul martor atacirct la bărbaţi cacirct şi la femei icircn concordanţă cu studiile anterioare Evaluarea

fibrinogenului este importantă nu numai icircn SM pentru definirea contextului proinflamator şi

protrombotic ci şi icircn predicţia cardiovasculară la subiecţii normali Studiind populaţiile

leucocitare am obţinut diferenţe semnificative icircn cazul Eo valoarea medie a acestora fiind

semnificativ mai mare icircn lotul cu SM comparativ cu lotul martor (P lt 0001 figura 425B)

Implicarea Eo icircn SM s-a conturat icircn ultimul deceniu aceste celule fiind implicate icircn recrutarea

macrofagelor din ţesutul adipos Experimental s-a constatat că o creştere a Eo apărută ca

urmare a infectării cu helminţi sau stimulare cu IL-5 este urmată de icircmbunătăţirea toleranţei la

glucoză (199) Controlul pe care icircl exercită Eo asupra activării macrofagelor ar putea fi cheia

intervenţiei asupra obezităţii icircn viitorul apropiat(165199) Hiperuricemia asociata frecvent cu

SM este cunoscut ca un factor independent de risc cardiovascular (192 202) In concordanţă

cu aceasta afirmaţie in studiul nostru am constatat ca nivelul seric al acidului uric a fost mai

crescut in lotul cu SM diferenţa semnificativă din punct de vedere statistic (P lt 00001)

Dislipidemia aterogenă din sindromul metabolic şi diabetul zaharat se caracterizează prin

creşterea trigliceridelor şi a Non-HDL-col scăderea HDL-col creşterea numărului de

particule LDL modificate (185190) La pacienţii cu SM am descris un profil aterogenetic

cu risc crescut de evenimente cardiovasculare majore

STUDIUL RECEPTORILOR ACTIVAŢI DE INDUCTORII PROLIFERĂRII

PEROXIZOMILOR-ALPHA IcircN LEUCOCITELE CIRCULANTE

Ipoteza de lucru

Studii experimentale efectuate au arătat că rolul PPARα icircn ateroscleroză derivă din

implicarea acestor receptori icircn limitarea inflamaţiei Plecacircnd de la acest fundament ne-am

propus evidenţierea receptorilor nucleari activaţi de inductorii proliferării peroxizomilor-

alpha (PPARα) prin citometrie de flux icircn leucocitele din sacircngele periferic alături de

evaluarea acestei metode icircn cuantificarea expresiei relative a PPARα ca test diagnostic

precoce al modificărilor metabolice SM Studiul expresiei relative a receptorilor PPARα a

plecat de la premisa că dacă SM se caracterizează printr-un status inflamator cronic nivelul

de expresie a PPARα icircn leucocitele circulante este mai scăzut la pacienţii cu SM comparativ

cu subiecţii normali Referitor la studiul receptorului CD36 am plecat de la presupunerea că

nivelul de expresie al acestui receptor icircn SM este crescut dat fiind importanţa acestui receptor

icircn inflamaţia aterosclerotică Avacircnd icircn vedere efectele receptorilor amintiţi icircn

insulinorezistenţă şi aterogeneză am considerat necesară evaluarea prezenţei receptorului

nuclear PPARα icircn paralel cu studiul receptorului bdquoscavengerrdquo CD-36 prin metoda citometriei

icircn flux Astfel icircn studiul efectuat mi-am propus şi investigarea existenţei unei legături icircntre

nivelul de expresie al receptorilor PPARα şi cel al receptorului CD-36 De asemenea ne-am

icircndreptat atenţia spre stabilirea unor asocieri icircntre componentele clinice şi biochimice ale

sindromului metabolic şi nivelul intensităţilor de fluorescenţă ale PPARα şi CD-36 ca măsură

a expresiei relative a acestor receptori

Material și metodă

Studiul receptorilor PPARα icircn contextul sindromului metabolic s-a desfăşurat icircn

perioada 1012014 -28022014 pe baza metodologiei studiilor de tip caz-martor Am urmărit

identificarea unor diferenţe icircntre expresia receptorilor PPARα la pacienţii cu SM comparativ

cu subiecţii sănătoşi diferenţe care ar putea fi utile icircn diagnosticul precoce al SMRecrutarea

pacienţilor s-a efectuat din pacienţii prezentaţi pentru consultaţie la Cabinetul Individual

ldquoCMI Dr Popa Elenardquo situat icircn strada Ion Creanga din Iaşi Pentru studiul receptorilor

PPARα icircn sindromul metabolic au fost selecţionaţi un număr de 57 de subiecţi 26 de subiecţi

cu SM (constituind lotul SM) şi 31 subiecţi fără SM constituind lotul de control (Lot Non-

SM) Pentru studiul SM pacienţii au fost recrutaţi din masa de populaţie arondată cabinetului

de MF fără istoric de SM diabet zaharat boală cardio-vasculară aflați la primul diagnostic

de SM evaluarea completă a acestora fiind urmată de includerea icircn programul de

management cardiovascular şi metabolic conform Ghidurilor Terapeutice aflate icircn vigoare

Lot SM a) criterii de includerevacircrsta peste 18 ani recrutarea pe baza semnării

Consimţămacircntului liber informatSM nou-diagnosticat pe baza prezenţei a minim trei criterii

de diagnostic pentru SM conform Harmonised I b) criterii de excluderevacircrstă sub 18 ani

refuzul semnării Consimţămacircntului liber informat femei icircn perioada de graviditate sau de

lactaţie SM anterior diagnosticat istoric de diabet zaharat boală cardiovasculară constituită

tratament cu agonişti PPARα (ie fibraţi etc)

Lot martor (Non-SM) a) criterii de includerevacircrsta peste 18 ani recrutarea pe baza

semnării Consimţămacircntului liber informat absenţa diagnosticului de SM b) criterii de

excludere vacircrstă sub 18 ani refuzul semnării Consimţămacircntului liber informat femei icircn

perioada de graviditate sau de lactaţie

Studiul receptorilor PPARα a inclus două subetape

A Studiul componentelor sindromului metabolic conform criteriilor Harmonised I

Evaluarea clinică a participanţilor s-a desfăşurat icircn cadrul Cabinetului de Medicină de

Familie iar determinările hematologice şi biochimice s-au efectuat icircn Laboratorul

Ambulatorului Clinic de Specialitate al Spitalului Clinic de Urgenţă bdquoSf Spiridonrdquo Iaşi

B Evaluarea icircn citometrie de flux a nivelului relativ de expresie a PPARα şi CD36

Studiul receptorilor PPARα s-a desfăşurat icircn Laboratorul de Biologie Moleculară al

Institutului Regional de Oncologie Iaşi prin metoda citometriei icircn flux (19) Nivelul relativ de

expresie al receptorilor nucleari PPARα a fost determinat icircn diferite tipuri de leucocite

circulante polimorfonucleare (PMN) limfocite (Ly) Mo(Mo) şi eozinofile(Eo) Am utilizat o

metodă de citometrie icircn flux optimizată ldquoin houserdquo elaborată icircn cadrul Laboratorului de

Biologie Moleculară al IRO Iaşi Icircn cursul procesului de optimizare am testat mai multe

concentraţii ale anticorpului anti-PPARα 1100 1500 11500 14500 iar icircn urma

determinărilor efectuate şi a analizei statistice concentraţia 1500 a fost considerată optimă

pentru desfăşurarea studiului (tabel XXIII figura 51)

Tabel XXIII Optimizarea concentraţiilor Ac anti-PPARα Diferenţa

mediilor

valorilor

medii

PMN

Diferenţa

mediilor

mediane-

lor

PMN

Diferenţa

mediilor

valorilor

medii

Ly

Diferenţa

mediilor

mediane-

lor

Ly

Diferenţa

mediilor

valorilor

medii

Mo

Diferenţa

mediilor

mediane-

lor

Mo

Diferenţă 0 1300 1600 100 100 700 750

normal - 1100 650 1050 1050 1350 450 900

patologic 1500 2850 2750 3800 3600 2850 2400

11500 -1050 800 3500 3300 2250 1800

14500 2200 2150 1300 1100 2950 2850

AOptimizare

BRepetabilitate

Figura 51 Optimizarea concentraţiei anticorpului anti-PPARα

Icircn concordanţă cu literatura de specialitate icircn cercetarea efectuată intensitatea medie

de fluorescenţă (MFI) a fost utilizată ca măsură pentru evaluarea expresiei celulare a

receptorilor PPARα (212) Un exemplu de analiză a probelor este reprezentat icircn figura 52

Figura 52 Exemplu de analiză flowcitometrică pentru receptorul nuclear PPARα Graficul din stacircnga reprezintă distribuţia leucocitelor iar cel din dreapta ilustrează distribuţia

intensităţii de fluorescenţă pentru populaţiile de celule selectate

Intensitatea Medie a Fluorescenţei (MFI) a CD36 ca o măsură a nivelului relativ de

expresie a acestor receptori la nivelul membranei Mo a fost detectată printr-o metodă

convenţională pentru marcare de suprafaţă şi evaluare pe bază de citometrie icircn flux folosind

aceleaşi probe de sacircnge cu EDTA cu focalizare pe Mo şi utilizacircnd CD14 ca marker specific

pentru Mo (figura 53)

Figura 53Analiza

flowcitometrică

pentru marcajul

CD14 - CD36

Rezultate

Icircn cele două loturi au fost incluşi icircn studiu un număr de 57 de participanţi care au fost

investigaţi din punct clinic şi paraclinic Vacircrsta subiecţilor incluşi icircn studiu a fost cuprinsă

icircntre 18 şi 79 ani iar vacircrsta medie calculată a avut valoarea de 4805 plusmn 1587 ani Pentru sexul

masculin vacircrsta medie este de 4925plusmn1617 ani iar pentru sexul feminin 4689 plusmn1 5ani

diferenţa obţinută icircntre vacircrstele pacienţilor fiind statistic nesemnificativă (P = 085)

Analizacircnd vacircrstele subiecţilor din cele două loturi am observat că vacircrsta medie a pacienţilor

cu SM (5476 plusmn 1183 ani) a fost semnificativ mai mare (t-test P = 0003) decacirct icircn lotul

martor (4258 plusmn 169 ani) Pentru diagnosticul sindromului metabolic am calculat scorul de

SM bazacircndu-ne pe criteriile Harmonised I Conform criteriilor diagnostice din cei 57 de

subiecţi investigaţi un număr de 26 participanţi (46) au fost incluşi icircn lotul cu SM (Lot

SM) iar 31 de subiecţi(54) nu au prezentat acest sindrom constituind lotul martor (Lot

Non-SM) Din punct de vedere al repartiţiei pe sexe nu au existat diferenţe statistic

semnificative raportul bărbaţifemei fiind de 0961 Din totalul celor 28 de bărbaţi incluşi icircn

studiu 4285 (12 bărbaţi) au icircntrunit cel puţin trei criterii diagnostice pentru SM fiind

incluşi icircn lotul SM Icircn acelaşi timp 14 femei reprezentacircnd 4827 din subiecţii de sex

feminin au icircntrunit condiţiile pentru includerea icircn lotul pacienţilor cu SM Valoarea medie

determinată pentru scorul de SM a arătat prezenţa unor valori semnificativ statistic mai mari

din punct (t-test P lt 00001) icircn lotul SM (769plusmn176) comparativ cu lotul martor (174 plusmn

184) Am studiat comparativ media valorilor măsurate ale criteriilor componentelor SM

Analiza statistică a arătat valori semnificativ statistic mai mari pentru CA TG glicemie TAS

şi TAD (plt0001) icircn lotul SM comparativ cu lotul normal Concomitent calculul statistica

evidenţiat o scăderea semnificativă a HDL-colesterolului icircn lotul cu SM comparativ cu

subiecţii din lotul martor (Non-SM) Aplicacircnd testul z am comparat ponderea pacienţilor

diagnosticaţi cu HTA dislipidemie şi tulburări ale metabolismului glucidic icircn lotul SM versus

lot Non-SM şi am constatat prezenţa acestor afecţiuni icircntr-un procent mai mare semnificativ

statistic icircn lotul SM ((plt0001)

Utilizacircnd testul t Student am calculat diferenţele statistice şi icircntre alți parametri

studiaţi care sunt factori de risc cardio-vascular dar care nu sunt componente ale SM Icircn lotul

cu SM valorile acidului uric fibrinogenului Col total Non-HDL-col şi LDL-col au fost

semnificativ mai mari comparativ cu lotul martor (tabel XXVI) Analizacircnd valorile medii ale

populaţiilor de leucocite am identificat doar pentru populaţia de Eo diferenţe statistice icircntre

cele două loturi numărul Eo icircn lotul SM fiind semnificativ mai mare decacirct icircn lotul martorTot

pentru caracterizarea celor două loturi am analizat prezenţa antecedentelor

heredocolaterale (AHC) de diabet zaharat boala cardiovasculară şi dislipidemie pentru toţi

subiecţii investigaţi Astfel existenţa AHC de HTA a fost declarată de 2580 din subiecţii

incluşi icircn lotul martor respectiv de 5384 din numărul pacienţilor cu SM Antecedentele

heredocolaterale de dislipidemie au fost prezente la 3461 din pacienţii cu SM icircn timp ce icircn

lotul martor anamneza a evidenţiat aceste antecedente la 3548 din subiecţi

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα

Icircn cercetarea desfăşurată am utilizat intensitatea medie de fluorescenţă (MFI) ca

măsură a nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn leucocitele studiate Pentru

populaţiile de leucocite analiza computerizată a probelor luate icircn studiu a furnizat valori

pentru MFI a receptorilor PPARα icircn funcţie de cantitatea de anticorpi anti-PPARα marcaţi cu

fluorocrom care se leagă de aceste celule şi apoi sunt captaţi de citometru (figura 59)

A Lot Non - SM

B Lot SM

Figura 59 Analiza flowcitometrică pentru receptorii PPARα icircn leucocite A lot normal B lot SM

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Mo

Analiza probelor efectuată conform protocolului de lucru descris a arătat prezenţa

PPARα icircn Mo recoltate din sacircngele tuturor subiecţilor incluşi icircn această cercetare Pentru toţi

participanţii investigaţi analiza MFI a Ac anti - PPARα icircn populaţia de Mo (Mo) a arătat un

interval de variaţie icircntre [786 395] Valoarea medie a nivelului de expresie relativă a PPARα

calculată pentru Mo a fost de 23210 plusmn7860 Pentru ambele loturi de studiu pacienţilor cu

SM testul Testul Shapiro-Wilk a arătat distribuţia normală a valorilor obţinute pentru nivelul

de expresie al PPARα icircn Mo

Tabel XXVIII Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn Mo

Lot SM Lot Non-SM

N 26 31

Media 22819 23538

SD 5819 7717

Mediana 22400 22600

Minimum 12800 78600

Maximum 35800 37900

Percentila 25 18300 18300

Percentila 75 26200 30350

Pentru pacienţii din lotul SM valoarea medie a MFI icircn Mo a fost de 22819 plusmn 5880 iar

pentru lotul martor s-a calculat o valoare medie a MFI a Ac anti-PPARα de 23538 plusmn 7717

Distribuţia statistică a frecvenţei valorilor MFI obţinute pentru nivelul de expresie a PPARα

icircn Mo subiecţilor din cele două loturi a fost reprezentată icircn figura 511

Figura 511 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti-PPARα icircn Mo

Sub forma unei diagrame de control Shewhart am reprezentat variaţia intensităţii medii de

fluorescenţă pentru anticorpii anti-PPARα icircn MoVariaţia nivelului de expresie relativă a

receptorilor PPARα icircn Mo subiecţilor studiaţi este ilustrată icircn fig 512 513

Figura 512 Lot SM Variaţia

expresiei relative a PPARα icircn Mo

Număr pacienţi

26

Minim 128

Maxim 358

Media 22819

DS 5819

25 din 26 valori ale MFI s-au icircncadrat

icircn intervalul Media plusmn 2DS

Figura 513 Lot Non-SM Variaţia

expresiei relative a PPARα icircn Mo

Număr pacienţi 31

Minimum 786

Maximum 379

Media 23538

DS 7717

Cu excepţia unei singure

determinări valorile calculate s-au

icircncadrat icircn Media plusmn 2DS

Utilizacircnd testul parametric t-Student pentru variabilele cu distribuţie normală am

comparat valoarea medie a intensităţii de fluorescenţă a Ac anti-PPARα icircn lotul cu SM versus

subiecţi fără SM (Lot Non-SM) Analiza statistică efectuată nu a identificat diferenţe icircntre

50 100 150 200 250 300 350 400 450

0

5

10

15

20

25

30

35

MFI anti-PPAR a

Frecv

enta

relati

va (

)

Lot SM

0 50 100 150 200 250 300 350 400 450 500

0

5

10

15

20

25

30

35

MFI anti-PPAR a

Frecv

enta

relati

va (

)

Lot martor

1 6 11 16 21 26 31

0

50

100

150

200

250

300

350

400

450

MFI

anti-

PPAR

a

2282

1106

3458

518

4046

Media

LCI

LCI

1 6 11 16 21 26 31 36

-100

0

100

200

300

400

500

MFI a

nti-PP

AR

a

2354

810

3897

39

4669LCS

LCI

Media

cele două loturi icircn ceea ce priveşte expresia PPARα la nivelul Mo circulante (t- Test P=

069)

Studiul receptorilor PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de AHC şi dislipidemie

Nivelul de expresie al receptorilor PPARα α icircn Mo tinde să fie mai scăzut la subiecţii

cu AHC de HTA comparativ subiecţii care nu au declarat AHC de HTA (P= 006 fig 515)

AHC HTA

Număr 22

Mediana 19950

Percentila 25 17800

Percentila 75 22700

AHC HTA absente

Număr 35

Mediana 24800

Percentila 25 19025

Percentila 75 31700

Figura 515 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Mo funcţie de AHC de HTA

Nu s-au calculat diferenţe semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor

PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de dislipidemie atunci cacircnd aceştia au fost comparaţi cu

subiecţii fără AHC de tulburări ale metabolismului lipidic (t- Test P= 020)

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn limfocite

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn populaţia de Ly a

demonstrat prezenţa receptorilor PPARα icircn Ly tuturor subiecţilor studiaţi Pentru toţi

participanţii investigaţi analiza MFI a Ac anti - PPARα icircn populaţia de Ly a relevat un

interval de variaţie icircntre [748 314] iar valoarea medie a MFI a fost de 18058 plusmn 5600

Pentru ambele loturi aplicarea testului Shapiro-Wilk a evidenţiat distribuţia normală a

valorilor determinate pentru nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Ly Pentru

pacienţii cu SM valoarea medie a MFI determinată pentru expresia PPARα icircn populaţia de

Ly a fost de 18178 plusmn 61 16 iar pentru lotul martor a fost de 16800 plusmn 5229

Tabel XXX Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn limfocite

Lot SM Lot Non-SM

N 26 31

Media 181781 179574

SD 611694 522907

Mediana 165000 168000

Minimum 81300 74800

Maximum 314000 301000

Percentila 25 13400 - 145750

Percentila 75 21800 21700

Distribuţia frecvenţei valorilor MFI a Ac anti-PPARα icircn Ly este redată icircn figura 518

Figura 518 Distribuţia frecvenţelor relative a MFI a Ac anti-PPARα icircn Ly

94 din determinările efectuate pentru determinarea nivelului de expresie relativă al

MFI

ant

iPPA

R

a_Mo

190

200

210

220

230

240

250

260

270

280

DA NU

AHC HTA

P=006

50 89 128 167 206 244 283 322 361 400

0

5

10

15

20

25

30

35

MFI anti-PPAR a

Frecv

enta

relati

va (

)

Lot SM

0 50 100 150 200 250 300 350

0

5

10

15

20

25

30

35

40

MFI anti-PPAR a

Frec

venta

relat

iva (

)

Lot Non-SM

receptorilor PPARα icircn limfocitele subiecţilor cu SM s-au icircncadrat icircn intervalul Media plusmn 2DS

Figura 5 19 Lot SM Variaţia expresiei

relative a PPARα icircn Ly

Număr pacienţi 26

Minimum 813

Maximum 31400

Media 18178

Deviaţia Standard 6116

25 valori s-au icircncadrat icircn Media plusmn 2DS

Pentru lotul Non-SM diagrama de control (figura 520) a arătat toate valorile

determinate pentru lotul Non-SM se icircncadrează icircntre LCS şi LCI

Figura 520 Lot Non -SM Variaţia

expresiei relative a PPARα icircn Ly

Număr pacienţi 31

Minimum 748

Maximum 30100

Media 179574

Deviaţia Standard 5229

96 din valori icircncadrate icircn Media plusmn 2DS

Aplicarea testului t-Student pentru valorile medii ale intensităţii de fluorescenţă ale

PPARα icircn Ly nu a arătat existenţa unei diferenţe statistic semnificative icircntre lotul cu SM şi

lotul martor(t- Test P= 088)

Analiza receptorilor PPARα icircn Ly subiecţilor cu AHC de HTA şi dislipidemie

Studiind populaţiile de Ly la subiecţii care au prezentat AHC de hipertensiune

arterială analiza flowcitometrică a relevat existenţa unor valori mai mici pentru MFI la aceşti

subiecţi comparativ cu cei fără AHC de HTA (fig 522) deşi scăderea observată nu a

icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică (t- Test P = 009)

AHC HTA

Număr 22

Mediana 16000

Percentila 25 12700

Percentila 75 17100

AHC HTA absenţe

Număr 35

Mediana 18700

Percentila 25 14900

Percentila 75 23175

Figura 522 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Ly funcţie de AHC de HTA

Nu am calculat diferenţe statistic semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor

PPARα icircn populaţiile de Ly ale subiecţilor la care am identificat AHC de dislipidemie

comparativ cu cei care nu au declarat antecedente familiale de dislipidemie (t- Test P= 051)

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn neutrofile (PMN)

Analiza flowcitometrică a evidenţiat prezenţa PPARα icircn PMN recoltate din sacircngele

venos al tuturor participanţilor la studiu Pentru toţi subiecţii investigaţi analiza MFI a Ac -

PPARα icircn populaţia de PMN a relevat un interval de variaţie de [163419] iar valoarea medie

a MFI pentru Ac anti-PPARα a fost de 26392 plusmn 7064 Testul Shapiro-Wilk a arătat o

distribuţie normală a valorilor intensităţii medii de fluorescenţă a anticorpilor anti-PPARα atacirct

icircn lotul pacienţilor cu SM cacirct şi icircn lotul martor

1 6 11 16 21 26 31

-50

0

50

100

150

200

250

300

350

400

MFI

anti-

PPAR

a

1818

595

3041

-17

3653

Media+2DS

Media- 2DS

1 6 11 16 21 26 31 36

0

50

100

150

200

250

300

350

MFI

ant

i-PPA

R

a

1796

750

2841

227

3364

Media+2DS

Media

Media- 2DS

MFI

anti-

PPAR

a Ly

130

140

150

160

170

180

190

200

210

DA NU

AHC HTA

P=009

Tabel XXXII Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn PMN

Lot SM Lot Non-SM

N 26 31

Media 26273 26480

SD 6915 7088

Mediana 25900 25500

Minimum 17200 16300

Maximum 39500 41900

Percentila 25 19800 19600

Percentila 75 30500 31500

Icircn cele două loturi distribuţia frecvenţei valorilor nivelului relativ de expresie a

receptorilor PPARα icircn PMN a fost reprezentată sub formă de histograme (fig 525)

Figura 525 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti-PPARα icircn PMN

Pentru cei 26 de pacienţi din lotul cu SM a valoarea medie a nivelului de expresie

relativă a receptorilor PPARα icircn PMN a fost de 26273 plusmn 6915 Studiind diagrama Shewhart

din figura 526 se observă că toate valorile obţinute pentru nivelul de expresie relativă

PPARα icircn PMN investigate se icircncadrează icircntre limitele definite de valorile medii plusmn 2DS

Figura 526 Lot SM

Variaţia expresiei relative a PPARα icircn

PMN

Număr pacienţi 26

Minimum 17200

Maximum 39500

Media 26273

Deviaţia Standard 6915

Valorile MFI icircncadrate icircn Media plusmn 2DS

Pentru lotul martor valoarea medie calculată a MFI a anticorpilor anti-PPARα a fost de

26480 plusmn 7088 peste 95 din valorile MFI fiind cuprinse icircn Media plusmn 2DS (figura 527)

Figura 527 Lot Non-SM Variaţia expresiei

relative a PPARα icircn PMN

Număr pacienţi 31

Minimum 16300

Maximum 41900

Media 26480

Deviaţia Standard 7088

30 valoriicircn Media plusmn 2DS

Pentru PMN analiza statistica nu a arătat existenţa unei diferenţe statistic semnificative icircntre

nivelul de expresie relativă a PPARα la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii din lotul

Non-SM (t- Test P= 090) Studiind populaţiile de PMN la subiecţii care au prezentat AHC

de HTA nu am calculat o diferenţă statistic semnificativă icircntre expresia receptorilor PPARα

la subiecţii cu istoric familial de hipertensiune arterială comparativ cu cei pentru care nu s-au

notat AHC de HTA (t- Test P= 013)De asemenea am identificat diferenţe icircntre nivelul de

expresie al PPARα icircn PMN subiecţilor care prezentau AHC de dislipidemie comparativ cu

cei fără AHC de dislipidemie (t- Test P= 017)

50 100 150 200 250 300 350 400 450 500

0

5

10

15

20

25

30

35

MFI anti-PPAR a

Frecve

nta rel

ativa (

)

Lot SM

50 100 150 200 250 300 350 400 450 500

0

5

10

15

20

25

30

MFI anti-PPAR a

Frecv

enta

relati

va (

)

Lot Non-SM

1 6 11 16 21 26 31

0

50

100

150

200

250

300

350

400

450

500

MFI

anti-

PPA

R

a

2627

1244

4010

553

4702

Media + 2DS

Media - 2 DS

Media

1 6 11 16 21 26 31 36

0

50

100

150

200

250

300

350

400

450

500

MFI

anti-

PPAR

a

2648

1230

4066

522

4774

Media+ 2DS

Media - 2DS

Media

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile Tabel XXXIV Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn Eo

Lot SM Lot Non-SM

N 26 31

Mediaplusmn SD 141057 plusmn 47604 172209 plusmn 37565

Mediana 142450 171300

Minimum 35000 68500

Maximum 233700 250600

Percentila 25 119300 153225

Percentila 75 169700 199550

Am studiat nivelul relativ de expresie a receptorilor PPARα icircn Eo iar rezultatele au

fost figurate sub forma de histograme (figura 532)

Figura 532 Distribuţia frecventelor relative ale valorilor MFI anti- PPARα icircn Eo

Din diagrama Shewhart (figura 533) se observă că toate valorile determinate pentru

nivelul de expresie relativă a PPARα icircn Eo pentru lotul SM s-au icircncadrat icircn [Media plusmn 3 DS]

peste 90 din determinări fiind cuprinse icircn [Media plusmn 2 DS] iar icircn [Media plusmn 1 DS] sunt

incluse peste 65 din valorile MFI

Figura 533 Lot SM

Variaţia expresiei relative a PPARα icircn Eo

Număr pacienţi 26

Minimum 35000

Maximum 233700

Media 141057

Deviaţia Standard 47604

24 valori icircncadrat eicircn [Media plusmn 2DS]

Pentru subiecţii incluşi icircn lotul martor analiza diagramei (figura 534) a arătat că

toate cele 31 de valori ale MFI pentru PPARα icircn Eo se icircncadrează icircn [Media plusmn 3DS] iar 30

dintre acestea se icircncadrează icircn [ Media plusmn 2 DS]

Figura 534 Lot Non -SM

Variaţia expresiei relative a PPARα icircn Eo

Număr pacienţi 31

Minimum 685

Maximum 2506

Media 172209

Deviaţia Standard 375 65

30 valori icircncadrate icircn [Media plusmn 2DS]

Comparacircnd subiecţii cu SM cu cei din lotul martor am observat o scădere

semnificativă statistic a MFI a Ac anti - PPARα icircn Eo pentru pacienţiir cu SM ( figura 535)

PPARα Eo Lot Non-SM

Număr 31

Mediana 171300

Percentila 25 152325

Percentila 75 199550

PPARα Eo Lot SM

Număr 26

Mediana 142450

Percentila 25 119300

Percentila 75 169700

Figura 5 35 Comparaţie icircntre nivelul de expresie a PPARα icircn Eo

0 500 1000 1500 2000 2500 3000

0

10

20

30

40

50

MFI anti-PPAR a

Frecvent

a relativa

()

Lot SM

400 800 1200 1600 2000 2400 2800

0

5

10

15

20

25

30

35

40

45

MFI anti-PPAR a

Frecenta

relativa

()

Lot Non-SM

1 6 11 16 21 26 31

-500

0

500

1000

1500

2000

2500

3000

MFI a

nti-PP

AR

a

14106

4765

23447

94

28117

Media + 2DS

Media- 2DS

LCI

LCS

1 6 11 16 21 26 31 36

500

1000

1500

2000

2500

3000

MFI an

ti-PPA

R a

17221

9708

24734

5951

28490

LCI

Media-2DS

Media

Media +2 DS

LCS

1200

1300

1400

1500

1600

1700

1800

1900

Lot SM Lot Non-SM

P=00072

Cu ajutorul curbei ROC am evaluat posibilitatea utilizării MFI a Ac anti - PPARα icircn

Eo ca marker pentru diagnosticul SM Valoarea MFI a Ac anti - PPARα icircn Eo care prezice cu

cea mai mare acurateţe prezenţa SM a fost de 1533 (punctul de ldquocut-offrdquo) pentru care am

calculat o sensibilitate de 5652 şi o specificitate de 7778 Calculul ariei AUC a furnizat

valoarea de 0663 şi deci determinarea parametrului MFI anti- PPARα icircn Eo are valoarea

unui test cu acurateţe redusatilde icircn diagnosticul SM Studiind expresia PPARα icircn Eo la subiecţii

care au prezentat AHC de HTA am observat o scădere semnificativă statistic (P = 00023) a

expresiei PPARα la subiecţii cu istoric familial de HTA comparativ cu subiecţii fatilderatilde AHC de

HTA (figura 537)

AHC HTA

Număr 22

Mediana 148800

Percentila 25 116425

Percentila 75 170750

AHC HTA absente

Număr 35

Mediana 170850

Percentila 25 143700

Percentila 75 195000

Figura 537 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Eo funcţie de AHC de HTA

Studiind subiecţii cu AHC declarate de dislipidemie nu am identificat diferenţe icircntre

nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Eo subiecţilor cu AHC de dislipidemie

comparativ cu cei care nu au declarat prezenţa AHC de dislipidemie (t - Test P = 067)

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor CD36

Am studiat expresia receptorilor CD36 icircn Mo subiecţilor incluşi icircn studiu

Lot Non - SM

BLot SM

Figura 539 Analiza flowcitometrica pentru receptorii CD36 icircn Mo

Pentru toţi participanţii la studiu valorile MFI au variat icircn intervalul [817 6933] iar

valoarea medie a MFI a Ac anti-CD36 a fost de 397133 plusmn 120902 Tabel XXXVII Statistică descriptivă pentru a CD36 icircn Mo

Lot SM Lot Non-SM

Media 429034 370377

Deviatia Standard 109051 125514

Mediana 411000 362800

Minimum 266400 81700

Maximum 693300 616800

Percentila 25 346200 273750

Percentila 75 469000 453300

Distribuţia frecvenţelor relative a MFI au fost prezentate sub formă histogramelor

Figura 541 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti - CD36 icircn Mo

MFI

ant

i-PPA

R a Eo

1000

1100

1200

1300

1400

1500

1600

1700

1800

1900

DA NU

AHC HTA

P=00023

1000 2000 3000 4000 5000 6000 7000 8000

0

5

10

15

20

25

MFI anti-CD36

Frecve

nta rela

tiva (

)

Lot SM

0 1778 3556 5333 7111

0

5

10

15

20

25

30

35

MFI anti-CD36

Frecve

nta rel

ativa (

)

Lot Non - SM

Referitor la lotul SM 92 din valorile MFI a Ac anti- CD36 s-au icircncadrat icircn

intervalul Media plusmn 2 DS (figura 542) iar pentru lotul martor peste 90 dintre acestea icircn

Media plusmn 2 DS (figura 543)

Figura 542 Lot SM

Variaţia MFI anti-CD36 icircn Mo

Număr pacienţi 26

Minimum 2664

Maximum 6933

Media 429034

Deviaţia Standard 109051

Figura 543 Lot Non -SM

Variaţia MFI anti- CD36 icircn Mo

Număr 31

Minimum 81700

Maximum 616800

Media 370377

Deviaţia Standard 125514

Comparacircnd subiecţii cu SM cu cei din lotul normal am constatat o tendinţă de creştere

a expresiei CD36 icircn lotul cu SM((t - Test P= 0067)

MFI anti - CD36 Lot Non-SM

Număr 31

Mediana 3628

Percentila 25 2737

Percentila 75 4533

MFI anti - CD36 Lot SM

Număr 26

Mediana 4110

Percentila 25 3462

Percentila 75 4690

Figura 544 Comparaţie icircntre cel două loturi privind MFI anti - CD36 icircn Mo

Referindu-ne la subiecţii cu AHC de HTA am observat o tendinţă de creştere a

valorilor MFI anti-CD36 comparativ cu cei care nu au avut AHC de HTA (t - Test P = 0 08)

AHC HTA

Număr 22

Mediana 442800

Percentila 25 355275

Percentila 75 519475

AHC HTA absenţe

Număr 35

Mediana 377400

Percentila 25 316900

Percentila 75 443400

Figura 545 Comparaţie icircntre expresia CD36 icircn Mo funcţie de AHC de HTA

Nu s-au calculat diferenţe semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor

PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de dislipidemie atunci cacircnd aceştia au fost comparaţi cu

subiecţii fără AHC de dislipidemie (t - Test P=031)

Corelaţii icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα si CD36

Studiind valorile intensităţii medii de fluorescenţă a Ac anti-PPARα icircn Mo Ly şi

PMN am observat că nivelul de expresie celularatilde a PPARα icircn Mo Ly şi PMN sunt corelate

puternic pozitiv atacirct icircn lotul SM cacirct şi icircn lotul martor(fig547 548)

1 6 11 16 21 26 31

0

1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

8000

Pacienti

MFI a

nti-CD

36

42903

21093

64714

10188

75619

LCI

Media

LCS1 6 11 16 21 26 31 36

-1000

0

1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

8000

MFI a

nti- C

D36

37038

11935

62141

-616

74692Media + 2 DS

Media

Media - 2 DS

3200

3400

3600

3800

4000

4200

4400

4600

4800

Lot SM Lot Non-SM

P = 00676

MFI

anti-

CD36

3400

3600

3800

4000

4200

4400

4600

4800

5000

DA NU

AHC HTA

P = 008

Figura 547 Studiul relatiilor dintre

receptorii PPARα icircn SM A Mo vs PMN B Mo vs Ly

C PMN vs Ly Graficul ilustrează coeficienţii r P dreapta de

regresie (linia centrala) intervalul de icircncredere

95 şi intervalul de predicţie 95

Figura 548 Corelaţii icircntre receptorii PPARα icircn lotul

martor

A Mo vs PMN

B Mo vs Ly

C PMN vs Ly

Tot pentru lotul SM cacircnd am evaluat relaţia dintre nivelul de expresie relativă a

receptorilor PPARα icircn Eo şi nivelul de expresie relativa a receptorilor CD 36 am obţinut o

corelaţie negativă (r = - 05 P = 001) (fig 549 A)

50 100 150 200 250 300 350 50

100

150

200

250

300

350

400

450

500

PPARα Ly

PPARα PMN

y = 56641 + 1159 x r = 086 P lt 0001

C

50 100 150 200 250 300 350 400 0

50

100

150

200

250

300

350

PPARα Mo

PPARα Ly

y = 36665 + 0607 x r = 090 P lt 0001

B

150 200 250 300 350 400 450 0

50 100 150 200 250 300 350 400 450 500

PPARα PMN

PPARα Mo

y = 2505 + 0879 x r = 081 P lt 0001

A

50 100 150 200 250 300 350

50 100 150 200 250 300 350 400 450 500

PPARα Ly

PPARα PMN

y = 95668 + 0919 x r = 081 P lt 0001

C

100 150 200 250 300 350 400

0

50

100

150

200

250

300

350

400

PPARα Mo

PPARα Ly

y = -7503 + 0829 x r = 079 P lt 0001

B

100 150 200 250 300 350 400

50

100

150

200

250

300

350

400

450

500

PPARα Mo

PPARα PMN

y = 61384 + 0882 r = 074 P lt 0001

A

Figura 549 Corelaţii icircntre expresia PPARα icircn Eo şi alte tipuri de receptori investigaţi A PPARα Eo şi CD 36 (Lot SM) B PPARα Eo şi PPARα Mo( Lot Non-SM)

Icircn lotul martor am identificat o asociere moderată pozitivă (r = 038 P = 0033) icircntre

nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Eo şi Mo (figura 549B) corelaţie absentă icircn

lotul pacienţilor cu SM

Corelaţii dintre receptorii studiaţi şi componentele sindromului metabolic

Icircn lotul de control analiza statistică a relevat faptul că icircntre circumferinţa

abdominală (CA ) şi nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Mo Ly şi PMN există o

corelaţie inversă adică scăderea expresiei PPARα la nivelul acestor populatii celulare ar fi

icircnsoţită de creşterea CA (figura 550

Figura 550Corelaţii dintre receptorii

PPARα si CA A Mo B Ly C PMN

La pacienţii cu SM am notat o corelatie moderată negativă statistic semnificativă

icircntre TG şi valorile MFI a Ac anti- PPARα icircn Mo şi Ly( fig 551)

150 200 250 300 350 400 450 50

60

70

80

90

100

110

PPARα PMN

CA r = - 040 P = 0024

C

50 100 150 200 250 300 350 50

60

70

80

90

100

110

PPARα Ly

CA r = - 046 P = 0009

B

50 100 150 200 250 300 350 400 50

60

70

80

90

100

110

PPARα Mo

CA r = - 042 P = 0017

A

50 100 150 200 250 300 350 400 500

1000

1500

2000

2500

3000

PPARα Mo

PPARα Eo

r = 038 P = 0033

B

0 500 1000 1500 2000 2500 1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

8000

PPARα Eo

CD36

r = 050 P = 0010

A

Figura 551 Lot SM Corelaţie icircntre expresia PPARα şi TG (A Mo B Ly)

Analizand corelatia dintre receptorii CD36 si valorile TA la pacientii cu SM am observat

o asociere pozitivă asteptată intre TAD si nivelul de expresie al receptorilor CD36 (fig 552)

Figura 552 Lot SM Corelaţii icircntre expresia

receptorilor CD36 şi valorile tensiunii arteriale

diastolice

Studiind corelaţiile dintre receptorii PPARα şi HDL-col la subiecţii din lotul martor am

notat o asociere pozitivă icircntre expresia PPARα icircn Mo şi Ly cu HDL-col (fig 553)

Figura 553 Lot martor Corelaţii icircntre HDL-col şi expresia PPARα icircn Mo(A) Ly(B)

Icircn lotul normal am evidenţiat corelaţii pozitive moderate dar semnificative statistic icircntre

CA şi valorile TAS (r = 062 P lt 0001) respectiv TAD (r = 050 P=0004) precum şi icircntre

CA şi glicemia subiecţilor normali (r = 052 P = 0003) Aceste date icircmpreună cu relaţia

invers proporţională identificată icircntre HDL-col şi CA (r = 050 P = 001) susţin validitatea

acestui studiu Icircn lotul subiecţilor cu SM am observat o corelaţie moderat pozitivă icircntre

expresia PPARα icircn populaţiiile de Mo şi Eo şi concentraţia a HDL-col (fig 554)

B

100 150 200 250 300 350 20

30

40

50

60

70

80

90

100

PPARα Ly

HDL-col-(mgdl)

r = 036 P = 0046

A

150 200 250 300 350 400 20

30

40

50

60

70

80

90

100

PPARα Mo

HDL-col-(mgd)l

r = 035 P = 005

70 75 80 85 90 95 100 1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

8000

TAD (mmHg)

CD36

r = 048 P = 0013

B

50 100 150 200 250 300 350 -100

0

100

200

300

400

500

PPARα Ly

TG(mgdl)

r = - 042 P = 003

A

50 100 150 200 250 300 350 400 -100

0

100

200

300

400

500

PPARα Mo

TG ( mgdl) r =- 0 43 P = 0027

Figura 554 Corelaţii icircn SM icircntre HDL-col şi expresia PPARα icircn Mo (A) şi Eo(B)

Corelaţii icircntre nivelul de expresie relativă a PPARα şi markeri ai disfuncţiei

endoteliale şi inflamaţiei cronice

Deşi nu a icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică am reţinut corelaţia invers

proporţională (r = - 0331 P = 006) dintre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα

icircn PMN şi concentraţia serică a Non-HDL-colesterolului

Studiind relaţiile dintre parametri icircn lotul de pacienţi cu SM am observat o corelaţie

moderată invers proporţională icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Eo şi

acidul uric seric (figura 555 A) corelaţie absentă la subiecţii fără SM

Figura 555 Lot SM corelaţia dintre expresia PPARα icircn Eo şi acidul uric (A) respectiv

PPARα şi fibrinogen (B)

Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P=008) am notat pentru

pacienţii cu SM corelaţia invers proporţională dintre expresia PPARα icircn Eo şi concentraţia

serică a fibrinogenului ( figura 555B)

V5 Discuţii

Icircn cadrul lucrării de doctorat am studiat nivelul de expresie relativă a PPARα icircn

leucocitele pacienţilor cu SM comparativ cu cea a subiecţilor normali Expresia PPARα a fost

studiată icircn paralel cu cea a CD36 glicoproteină exprimată pe suprafaţa a numeroase celule

din organismul uman inclusiv pe cea a Mo şi macrofagelor Prin funcţia sa de receptor pentru

particulele oxidate de LDL CD36 cunoscut ca bdquoscavenger receptorrdquo de clasa B sau

bdquotrombospodin receptorrdquo contribuie la dezvoltarea inflamaţiei de la nivel endotelial şi

formarea plăcii de ateroscleroză Referitor la studiul PPARα icircn Eo icircn sindromul metabolic

menţionăm că studiul nostru este primul care arată că nivelul de expresie a proteinei PPARα

icircn Eo măsurat prin citometrie icircn flux este semnificativ mai redus la pacienţii care sunt

diagnosticaţi cu acest sindrom De asemenea icircn lotul cu SM cercetat icircn cadrul studiului

receptorilor PPARα numărul Eo circulante a fost semnificativ mai crescut la pacienţii cu SM

B

0 500 1000 1500 2000 2500 200

250

300

350

400

450

PPARα Eo o

Fibrinogen mgdl

r =- 036 P = 008

0 500 1000 1500 2000 2500 1 2 3 4 5 6 7 8 9

10 11

PPARα Eo_

Acid uric(mgdl) r = 048 P = 0014 A

0 500 1000 1500 2000 2500 10

20

30

40

50

60

70

80

PPARα Eo

HDL(mgdl)

r = 044 P = 0024

B

100 150 200 250 300 350 400 10

20

30

40

50

60

70

80

PPARα Mo

HDL( mgdl)

r = 046 P = 0019

A

(P = 003) Aceste constatări conduc la ipoteza că Eo joacă un rol special icircn mecanismele

patogenice declanşate icircn sindromul metabolic şi că receptorii PPARα sunt importanţi icircn

implicarea Eo icircn obezitate şi insulinorezistenţă Creşterea numărului de Eo circulante este

urmată de eliberarea mediatorilor proinflamatori iar reducerea expresiei PPARα icircn Eo

determină perturbarea mecanismelor de control al inflamaţiei cu exacerbarea cascadei

proinflamatorii Consecutiv se agravează disfuncţia endotelială şi se accelerează progresia

leziunilor de ateroscleroză Extrapolacircnd aceste ipoteze putem spune că asocierea raportată

dintre boala ischemică coronariană şi Eo poate fi şi consecinţa exacerbării cascadei

proinflamatorii de la nivel vascular produsă datorită scăderii expresiei PPARα icircn Eo iar

creşterea numărului de Eo circulante poate reprezenta o adaptare a organismului uman care

icircncearcă să suplinească deficitul de receptori PPARα Analizacircnd curba ROC pentru

intensităţile medii de fluorescenţă determinate pentru anticorpii anti- PPARα icircn Eo am

obţinut pentru acest biomarker o sensibilitate a testului de 565 şi o specificitate de 778

pentru un punct de cut-off de 1533 ( figura 536 ) Deşi aria AUC (Aria under the curve) egală

cu 0663 icircncadrează acest test ca avacircnd o acurateţe redusă observăm că că această valoare

este apropiată de determinările AUC pentru alţi factori (fibrinogen raport de aterogenitate

acid uric non- HDL-colesterol) cunoscuţi ca fiind implicaţi icircn aterogeneză şi inflamaţia

cronică (figura 431) Aceste remarci alături de faptul că icircn studiul receptorilor PPARα icircn

leucocite am inclus subiecţi la primul diagnostic de SM creează premisa integrării

determinării expresiei relative a receptorilor PPARα icircn diagnosticul complex al sindromului

metabolic Putem spune că icircn final studiul expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofilele

circulante se dovedește a fi util icircn diagnosticul precoce la nivel molecular al SM permiţacircnd

identificarea timpurie a unor indivizi cu risc cardiometabolic crescut Astfel intervenţia

precoce asupra subiecţilor cu deficit de PPARα icircn Eo contribuie la managementul eficient al

afecţiunilor degenerative icircn care inflamaţia cronică icircndeplineşte un rol primordial Referitor

la populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările efectuate prin citometrie de flux nu au

arătat existenţa unor diferenţe statistice icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα

la subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali Rezultatele noastre pot fi

consecinţa caracteristicilor loturilor studiate (icircn studiul nostru au fost incluşi subiecţi recrutaţi

la primul diagnostic de SM şi icircn absenţa stimulării receptorilor PPARα cu droguri agoniste

PPARα) dar icircn acelaşi timp pot apare diferenţe datorită metodei utilizate (231 232 233)

Făcacircnd o paralelă cu un studiu publicat icircn 2013 icircn Europa (231) care a arătat creşterea

nivelului de expresie al PPARα icircn Ly şi Mo observăm că deşi numărul de subiecţi a fost

aproximativ egal (57 participanţi icircn studiul nostru 60 icircn studiul DAmore) subiecţii icircn studiul

amintit au fost recrutaţi dintr-o clinică cu profil medical la primul diagnostic de SM icircn timp

ce metoda utilizată a fost PCR (Polymerase Chain Reaction) mult mai fidelă decacirct citometria

icircn flux icircn studiul receptorilor nucleari De asemenea DAmore nu investighează expresia

PPARα icircn Eo şi PMN icircn cercetare fiind incluse doar celulele CD14+ (predominant Mo) şi

CD14- (predominant Ly) Deşi nu am obţinut diferenţe statistic semnificative icircntre cele două

loturi referitoare la nivelul de expresie relativă a PPARα icircn Mo Ly şi PMN am observat

corelaţii puternice semnificative statistic icircntre expresia receptorilor PPARα icircn aceste tipuri

celulare Rezultatele obţinute sugerează existenţa unui mecanism diferit molecular de control

icircn eozinofile care reglează cantitatea de proteină PPARα icircn eozinofile versus alte tipuri de

leucocite (la pacienţii cu SM) şi acest lucru este icircn concordanţă cu cercetările care descriu

expresia PPARα mRNA icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale

bronşice keratinocite) Studiind prin citometrie de flux nivelul de expresie relativă a

receptorului CD36 la nivelul Mo am arătat prezenţa acestuia icircn Mo tuturor subiecţilor

investigaţi Analizacircnd valorile intensităţii medii de fluorescenţă a CD36 icircn loturile studiate

am observat o tendinţă de creştere la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali

confirmacircnd implicarea receptorului CD36 icircn patogeneza acestuia Referitor la expresia

receptorului CD36 rezultatele obţinute sunt icircn consens cu studii anterioare care au arătat

creşterea expresiei CD36 la pacienţii cu SM şi diabet zaharat Astfel pe lacircngă diferenţa icircn

expresia CD36 s-au raportat şi corelaţii inverse icircntre expresia proteinei CD36 şi nivelul

adiponectinei Acelaşi studiu a evidenţiat o corelaţie pozitivă intre expresia CD36 cu expresia

receptorilor PPAR gamma relaţia cu PPARα nefiind investigată

Analiza de subgrup a relaţiilor dintre componentele SM și elementele moleculare

proinflamatorii studiate a relevat prezenţa unor asocieri semnificativ statistice icircntre acestea

Se argumentează astfel că veridicitatea studiului este susţinută de interdependenţele statistice

ale componentelor SM Determinarea coeficientului de corelaţie Icircn studiul nostru nivelul de

expresie relativă a PPARα s-a corelat moderat negativ (figura 550) cu CA a subiecţilor din

lotul normal pentru populaţiile celulare de Mo (r = - 0420 P = 001) Ly (r = - 046 P =

0009) şi PMN (r = - 040 P = 0024) date care sunt icircn concordanţă cu studiile care arată

rolul PPARα icircn furnizarea energiei prin beta-oxidarea acizilor graşi Icircn acelaşi timp icircn lotul

pacienţilor cu SM nu am identificat prezenţa unei asocieri icircntre nivelul de expresie relativă a

PPARα şi valoarea măsurată a CA Asocierea dintre expresia relativă a PPARα cu obezitatea

de tip central completează datele existente referitoare la reglarea homeostaziei energetice

conturacircnd un mecanism de control deficitar al aportului caloric al SM Icircn condiţiile icircn care

rezultatele obţinute prin metoda citometriei icircn flux nu au arătat existenţa unei corelaţii intre

expresia PPARα şi CA la pacienţii cu SM considerăm că ar fi necesar studiul

polimorfismului genei PPARA care ar putea aduce informaţii importante cu privire la

implicarea acestor receptori icircn apariţia obezităţii de tip central Subliniem acest lucru deoarece

obezitatea este o boală plurifactorială icircn care pe lacircngă factorii ereditari sunt implicaţi factori

de mediu psihologici şi sociali (245) Existenţa unei componente genetice a aterosclerozei

este legată şi de prezenţa unor variante ale genei PPARA asociate cu creşterea incidenţei bolii

cardiovasculare (82) şi a SM (249) Icircn studiul nostru am constatat o scădere statistic

semnificativă a nivelului expresiei relative a receptorilor PPARα icircn Eo la subiecţii cu

antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială comparativ cu subiecţii fără istoric

familial de hipertensiune (figura 537) Deşi diferenţele calculate icircntre loturile studiate nu au

icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică la subiecţii care au declarat prezenţa

antecedentelor familiale de hipertensiune arterială remarcăm o tendinţă de scădere a

intensităţii medii de fluorescenţă pentru Ac anti-PPARα la nivelul Mo (figura 515 P = 006

) icircn timp ce expresia relativă a CD36 icircnregistrează o creştere la acesti subiecţi (figura 545 P

= 008) Icircn contextul riscului cardiovascular foarte icircnalt al pacienţilor cu SM amintim şi

existenţa corelaţiei pozitive dintre valorile tensiunii arteriale diastolice şi expresia relativă a

receptorului CD36 (r = 0483 P = 0013) Această constatare este icircn consens cu studiile care

au arătat că forma solubilă circulantă a CD36 este asociată cu factorii de risc cardiovasculari

fiind propusă ca un marker precoce al aterosclerozei Activarea PPARα este asociată cu

modularea metabolismului lipidic iar agoniştii PPARα sunt utilizaţi icircn mod curent pentru

tratamentul dislipidemiei Sub acţiunea agoniştilor PPARα se obţine o icircmbunătăţire a funcţiei

endoteliale şi a parametrilor reologici funcţiile pleiotropice ale agoniştilor PPARα fiind

dovedite icircn trialuri clinice controlate Icircn populaţiile de Mo şi Ly la pacienţii cu SM

cercetarea noastră a evidenţiat o asociere negativă icircntre nivelul de expresie relativă a

receptorilor PPARα şi concentraţia TG serice (figura 551) Astfel scăderea expresiei

receptorilor PPARα este asociată cu creşterea nivelului TG serice contribuind la profilul

lipidic aterogen din SM Icircn conformitate cu literatura de specialitate icircn studiul efectuat prin

metoda citometriei icircn flux am găsit prezenţa asocierii icircntre nivelul de expresie al PPARα şi

HDL-colesterol Corelaţia pozitivă dintre nivelul de expresie relativă PPARα şi concentraţia

HDL-colesterolului a fost observată icircn lotul martor icircn populaţiile de Mo (r = 035 P = 005)

şi Ly ( r = 036 P = 004) (figura 553) susţinacircnd faptul că stimularea receptorilor PPARα

este legată de creşterea nivelului seric al lipoproteinelor cu densitate crescută La pacienţii cu

SM corelaţia dintre expresia PPARα şi HDL-colesterol a fost evidenţiată icircn populaţiile de Mo

(r = 046 P = 0019) şi eozinofile (r = 044 P = 0024) Se desprinde concluzia că icircn

sindromul metabolic scăderea concentraţiei HDL-colesterol este legată de diminuarea

nivelului de expresie relativă a receptorilor nucleari PPARα icircntărind afirmaţiile legate de

rolul acestor receptori icircn progresia bolilor cardiovasculare Studiind reactanţii de fază acută

analiza statistică a relevat o diferenţă semnificativă din punct de vedere statistic icircntre valorile

fibrinogenului la pacienţii cu SM atunci cacircnd au fost comparaţi cu subiecţii fără SM

(Capitolul IV4 P lt0 001 figura 427A) De asemenea icircn Capitolul V dedicat studiul

expresiei relative a receptorilor PPARα studiul valorilor fibrinogenului a arătat creşterea

acestui reactant de faza acută icircn lotul cu SM comparativ cu lotul martor (P lt0 0001) Icircn

studiul nostru am calculat o corelaţie invers proporţionala (r = - -036 fig 555B) icircntre

nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile şi concentraţia serică a

fibrinogenului Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P = 008) am reţinut

această asociere deoarece am demonstrat că nivelul de expresie relativă al receptorilor

PPARα icircn eozinofile este mai scăzut icircn sindromul metabolic iar sindromul metabolic este

caracterizat printr-un status inflamator cronic status caracterizat şi de creşterea concentraţiei

serice a fibrinogenului De asemenea notam ca această corelaţie negativă se află icircn

concordanţă cu studiile care arata că tratamentul cu agonişti PPARα (fibraţi) determina

scăderea nivelului seric al fibrinogenului contribuind la diminuarea inflamaţiei cronice din

sindromul metabolic şi icircn consecinţă amelioracircnd insulinorezistenţa

LIMITE ȘI DIFICULTĂȚI IcircN CERCETARE

Icircn cadrul Tezei de Doctorat am desfăşurat o cercetare care şi-a propus studierea

expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Recrutarea anamneza şi examinarea

clinică a subiecţilor au fost realizate icircn cadrul Cabinetului de Medicină de Familie CMI Popa

Elena din Iaşi iar determinările hematologice şi biochimice s-au efectuat icircn cadrul

Laboratorului Ambulatorului de Specialitate al Spitalului Universitar ldquoSfacircntul Spiridon din

Iaşi Icircn studiul epidemiologic şi al markerilor inflamatori al sindromului metabolic desfăşurat

au fost incluşi un număr de 1530 de participanţi pe baza liberului consimţămacircnt examinaţi icircn

perioada 01012013 - 31122013 Icircn continuare icircn perioada 1012014 - 28022014 pe baza

criteriilor de includere şi excludere icircn cele două loturi de studiu am investigat un număr de 57

de subiecţi prezentaţi la consultaţie icircn această perioadă şi care au icircndeplinit criteriile de

includere icircn cele două loturi (Lot SM şi Lot Control) constituite pentru evaluarea nivelului de

expresie a receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Explorarea nivelului de expresie

relativă a receptorilor PPARα s-a desfăşurat icircn cadrul Laboratorului de Biologie Moleculară

de pe platforma Institutului Regional de Oncologie Datorită resurselor proprii financiare

limitate trebuie să subliniez că aceasta cercetare nu ar fi fost posibilă fără contribuţia unor

cercetători din domeniul medical care m-au sprijinit necondiţionat atacirct icircn elaborarea

protocolului de lucru cacirct şi icircn efectuarea propriu-zisă a studiului Icircn acest sens menţionăm şi

faptul că pentru studiul receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic am utilizat aparatura

Laboratorului de Biologie Moleculară (care deserveşte icircntreaga Regiune a Moldovei) Pe

această cale mulţumesc personalului Laboratorului de Biologie Moleculară pentru ajutorul

acordat icircn desfăşurarea cercetării doctorale icircn condiţiile icircn care se observa creşterea

numărului de pacienţi care se adresează acestei platforme de cercetare Mulţumesc de

asemenea şi Doamnei Doctor Elena Butoi din cadrul Institutului de Biologie şi Patologie

Moleculară ldquoNicolae Simionescurdquo Bucureşti) pentru donaţia anticorpului secundar anti-

FITC Icircn consecinţă pentru recrutarea unui număr mai mare de participanţi ar fi fost necesară

icircn primul racircnd obţinerea unor resurse financiare suplimentare pentru achiziţia de aparatură şi

reactivi Totuşi numărul subiecţilor recrutaţi este apropiat de numărul subiecţilor raportaţi icircn

cadrul unor granturi de cercetare care aveau ca ţinta studiul expresiei receptorilor PPARα

(212 227 228 231) Rezultatele obţinute continua seria lucrărilor care arata importanta

studiului mecanismelor etiopatogenice ale sindromului metabolic patologie care se afla icircntr-o

continuă creştere La pacienţii cu SM pe lacircngă diminuarea nivelului de expresie a receptorilor

PPARα icircn eozinofile ne aşteptam şi la evidenţierea unor modificări icircn expresia PPARα şi icircn

populaţiile de Ly Mo şi PMN Acest fapt poate fi explicat de utilizarea unor celule provenite

de la pacienţi fără afectare cardiovasculară fără diabet zaharat şi necesită continuarea

studiului pe culturi celulare icircn condiţii de stimulare cu agonişti PPARα deziderat care

impune continuarea investigării expresiei PPARα printr-un grant de cercetare

ORIGINALITATEA ȘI CONTRIBUȚIILE INOVATIVE ALE TEZEI DE

DOCTORAT PERSPECTIVE DE CERCETARE

Evaluarea nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn leucocitele circulante

aduce noi perspective icircn studiul obezităţii şi sindromului metabolic Importanta studiului

expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic derivă din prevalenta crescută a

sindromului metabolic icircn populaţia cercetată la care se adaugă riscul cardiovascular foarte

icircnalt al acestor pacienţi cu implicaţii majore icircn sănătatea publică Rolul receptorilor PPARα

icircn inflamaţie şi aterogeneza este binecunoscut dar studiul nostru este primul care a arătat că

nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα este semnificativ mai scăzut in populatiile

de eozinofile la pacienţii cu SM Această concluzie coroborata cu existenţa unei stracircnse

asocieri intre expresia receptorilor PPARα la nivelul Mo limfocitelor şi PMNlor creeaza

ipoteza existenţei unui mecanism de control diferit al expresiei PPARα la nivelul

eozinofilelor Această cercetare aduce informaţii importante referitoare la mecanismele

proinflamatorii care stau la baza insulinorezistenţei şi riscului cardiometabolic şi impune

continuarea studiului acestor receptori nucleari prin citometrie icircn flux metodă care poate fi

aplicată şi la scara mai largă dacă sunt asigurate resursele materiale necesare cercetării

Cercetarea prin citometrie icircn flux poate fi completată de studiul polimorfismului genei

PPARA şi astfel se pot identifica timpuriu indivizii cu potenţial risc cardiometabolic crescut

Studiul receptorilor PPARα a stabilit conexiuni cu factori proinflamatori şi aterogenetici iar

continuarea cercetării poate aduce şi elemente noi de diagnostic precoce icircn sindromul

metabolic contribuind la icircmbunătăţirea prognosticului acestor pacienţi

CONCLUZII FINALE

1 Aplicarea scorului de SM alături de implementarea algoritmului electronic de diagnostic

contribuie la o prelucrare rapidă eficientă și standardizată a informaţiilor la nivelul

medicinei primare

2 Prevalenţa SM calculată astfel icircn cadrul studiului este crescută (2732) icircn concordanţă

cu datele raportate

3 Controlul factorilor de risc cardiometabolici incluşi icircn SM se poate realiza prin

managementul stilului de viaţă (scăderea greutăţii corporale prin combaterea

sedentarismului şi adoptarea unei diete antiaterogene şi hipocalorice) şi administrarea

terapiei medicamentoase

4 Este necesară adoptarea unei politici de sănătate publică pentru prevenirea creşterii icircn

populaţie a prevalenţei obezităţii şi a diabetului zaharat

5 Noi metode de cercetare icircn domeniul SM axate pe diagnosticarea precoce şi cuantificarea

eficientă a acestuia duce la diminuarea incidenței evenimentelor cardiovasculare majore

6 Sindromul metabolic se caracterizează printr-un status inflamator cronic

7 Valorile Non-HDL-colesterolului şi a raportului de aterogenitate sunt semnificativ mai

mari la pacienţii cu SM

8 Dintre reactanţii de faza acută am observat că valoarea medie a fibrinogenului este mai

crescută icircn lotul cu SM

9 Valorile eozinofilelor sunt crescute icircn sindromul metabolic iar explorarea relaţiei dintre

eozinofile şi obezitate constituie una din direcţiile de studiu actuale ale sindromului

metabolic

10 Evaluarea markerilor inflamatori icircn contextul sindromului metabolic este utilă icircn

evaluarea complexă a a factorilor de risc cardiometabolici

11 Prin metoda citometriei icircn flux am demonstrat prezenta Receptorilor Activaţi de

Inductorii Proliferării Peroxizomilor ndash Alpha (PPARα) icircn toate populaţiile de leucocite

studiate (Mo limfocite PMN eozinofile) atacirct icircn lotul pacienţilor cu SM cacirct şi icircn lotul

martor

12 Utilizacircnd intensitatea medie de fluorescenţă a anticorpilor anti- PPARα am arătat că

nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile este semnificativ mai redus

la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali

13 Acest studiu este primul care a demonstrat existenţa unei scăderi statistic semnificative a

nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofilele pacienţilor cu SM

confirmacircnd cercetările recente care au evidenţiat rolul eozinofilelor şi al receptorilor

PPARα icircn obezitate reglarea inflamaţiei cronice şi aterogeneza

14 Contrar aşteptărilor noastre icircn populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările

efectuate icircn cele două loturi de studiu (cu şi fără sindom metabolic) nu am evidenţiat

diferenţe statistic seminificative icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα la

subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali

15 Icircn populaţiile de Mo limfocite şi polimorfonucleare am observat corelaţii puternice

semnificativ statistic icircntre expresia PPARα icircn aceste tipuri celulare sugeracircnd existenţa

unui mecanism unic de control al inflamaţiei cronice la nivelul acestor celule probabil

diferit de cel din eozinofile

16 La subiecţii cu SM expresia relativă a PPARα icircn Eo este invers asociată cu expresia

receptorului CD36 (receptor al particulelor de ox - LDL şi propus ca un marker precoce al

aterosclerozei) dovedind rolul antiinflamator al receptorilor PPARα la nivel endotelial

17 La pacienţii cu antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială nivelul de

expresie al receptorilor PPARα icircn eozinofile şi Mo este diminuat comparativ cu subiecţii

fără antecedente familiale de hipertensiune arterială Putem spune că studiul efectuat de

noi aduce informaţii importante legate de geneză aterosclerozei şi hipertensiunii arteriale

18 Prin studiul asocierilor dintre receptorii PPARα şi componentele clinice ale sindromului

metabolic am arătat rolul acestor receptori icircn determinismul obezităţii de tip central

nivelul expresiei relative a receptorilor PPARα fiind invers proporţional cu circumferinţa

abdominală

19 Icircn acelaşi timp nivelul de expresie a PPARα icircn sindromul metabolic este asociat pozitiv

cu concentraţia serică a HDL-colesterolului şi invers asociat cu nivelul trigliceridelor

serice dovedind rolul acestor receptori icircn diminuarea procesului inflamator cronic de la

nivel vascular

20 La pacienţii cu SM scăderea expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofile este corelată cu

creşterea unor markeri ai sindromului inflamator cronic cardiometabolic (acid uric

fibrinogen) ilustracircnd importanta receptorilor icircn reglarea status-ului inflamator cronic din

sindromul metabolic

21 Utilizarea metodei flowcitometrice pentru studiul expresiei relative a receptorilor PPARα

icircn leucocite a adus informaţii importante cu privire la mecanismele moleculare de control

implicate icircn patogenia bolilor cardiometabolice icircn concordanţă cu cercetările care descriu

expresia PPAR icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale bronşice

keratinocite)

BIBLIOGRAFIE SELECTIVA

1 Kahn R Metabolic syndrome- what is the clinical usefulness Lancet 2008371(9628)1892-3

2 Reaven GM The metabolic syndrome is this diagnosis necessary Am J Clin Nutr 2006 83(6)1237-7

3 Grundy SM Pre-Diabetes Metabolic Syndrome and Cardiovascular Risk J Am Coll Cardiol 201259(7)

635-43

4 International Diabetes Federation IDF Diabetes Atlas 6th edn International Diabetes Federation Belgium

Brussels 20131-155

5 World Health Organization Global Status Report on Noncommunicable Diseases 2010 World Health

Organization Geneva Switzerland 20111-176

6 Coman AE Petrovanu R Sindromul metabolic in practica de ambulator Editura Pim Iaşi 2009 1-103

7 Grundy SM Becker D Clark LT et alThird Report of the National Cholesterol Education Program (NCEP)

Expert Panel on Detection Evaluation and Treatment of High Blood Cholesterol in Adults (Adult

Treatment Panel III) Final Report Circulation 2002106(25)3143-90

8 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J Metabolic syndrome- a new worldwide definition A Consensus Statement

from the International Diabetes Federation Diabet Med 2006 23(5)469-80

9 KG Alberti KG Eckel RH Grundy SM etal International Diabetes Federation task force on epidemiology

and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart Association World Heart

Federation International Atherosclerosis Society International Association for the study of obesity

Harmonizing the metabolic syndrome a joint interim statement of the International Diabetes Federation task

force on epidemiology and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart

Association World Heart Federation International Atherosclerosis society and International Association

for the study of obesity Circulation 2009120(16)1640-5

10 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J IDF Epidemiology Task Force The metabolic syndrome new

worldwide definition Lancet 2005 366 1059 - 62

11 Oleszczyk M Svab I Seifert B et al Primary healthcare in the developing part of Europe changes and

development in the former Eastern Bloc countries that joined the European Union following 2004 Med Sci

Monit 2009(15)78ndash84

12 Jung U J Choi M S Obesity and Its Metabolic Complications The Role of Adipokines and the

Relationship between Obesity Inflammation Insulin Resistance Dyslipidemia and Nonalcoholic Fatty

Liver Disease Int J Mol Sci 2014rsquo15(4) 6184-223

13 Vanden Heuvel JP Peters JM Peroxisome Proliferators In Ramos K (ed) Cellular and Molecular

Toxicology (Second Edition) Volume 2 New York Elsevier Science Inc 2010 145 - 67

14 Yessoufou A Wahli W Multifaceted roles of peroxisome proliferator-activated receptors (PPARs) at the

cellular and whole organism levels Swiss Med Wkl 2010140w13071 doi104414smw201013071

15 Azhar S Peroxisome proliferator-activated receptors metabolic syndrome and cardiovascular disease

Future Cardiology 20106(5)657-91

16 Andries G Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity

Diabetes and Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(Suppl)24-32

17 Zandbergen F Plutzky J PPARalpha in atherosclerosis and inflammation Biochim Biophys Acta

20071771(8)972-82

18 Straus DS Glass CK Anti-inflammatory actions of PPAR ligands new insights on cellular and molecular

mechanisms Trends Immunol 200728(12)551-8

19 Zlei M Zugun- Eloae F Carasevici E Citometrie icircn flux - Bază şi clinică Icircn Hinescu ME (ed) Citometrie icircn

flux - principii şi aplicaţii clinice Bucureşti Editura Viaţa Medicală Romacircnească 20111-128

20 Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity Diabetes and

Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(9)24-32

21 Woerly G Honda K Loyens M et al Peroxisome proliferator-activated receptors alpha and gamma down-

regulate allergic inflammation and eosinophil activation J Exp Med 2003198(3)411-21

22 Salle-Saumont D Brenuchon C Kanda A et al Peroxisome proliferator-activated receptor alpha regulates

skin inflammation and humoral response in atopic dermatitis J Clin Allergy Immunology 2008 21(4)962-8

23 Schote A Turner J Schiltz J et al Nuclear receptors in human immune cells expression and correlations

Mol Immunolog 200744(6)1436-45

24 DAmore S Vacca M Graziano G et al Nuclear receptors expression chart icircn peripheral blood

mononuclear cells identifies patients with Metabolic Syndrome Biochim Biophys Acta

20131832(12)2289-301

25 Uthurralt J Gordish-Dressman H Bradbury M T et al PPARalpha L162V underlies variation in serum

triglycerides and subcutaneous fat volume in young males BMC Med Genet 2007855

26 Hiukka A Leinonen ES Jauhiainen M et al Long-term effects of fenofibrate on VLDL and HDL

subspecies icircn participants with type 2 diabetes mellitus Diabetologia 2007 50(10)2067-75

27 Robins SJ Rubins HB Faas FH et alInsulin resistance and cardiovascular events with low HDL

cholesterol The Veterans Affairs HDL Intervention Trial (VA-HIT) Diabetes Care 2003 26(5)1513-7

28 Devaraj S Siegel D Jialal I Statin Therapy in Metabolic Syndrome and Hypertension Post-JUPITER

What is the Value of CRP Curr Atheroscler Rep 2011 13(1) 31ndash42

29 Imperatore G Riccardi G Iovino C et al Plasma Fibrinogen A New Factor of the Metabolic Syndrome A

population-based study Diabetes Care 19982 1(4)649-54

30 Krysiak R Gdula-Dymek A Bachowski R Okopien B Pleiotropic effects of atorvastatin and fenofibrate

in metabolic syndrome and different types of pre-diabete Diabetes Care 201033(10)2266-70

31 Hermans MP Impact of Fenofibrate on Type 2 Diabetes Patients with Features of the Metabolic Syndrome

Subgroup Analysis From FIELD Curr Cardiol Rev 20106(2)112-8

32 Silverstein R Inflammation atherosclerosis and arterial thrombosis Role of the scavenger receptor CD36

Cleveland Clinic Journal of Medicine 200976(Suppl 2)S27-S30

33 Hăncu N Obezitatea In Vereşiu IA (ed) Diabetul zaharat nutritia si bolile metabolice Volume 2 Editura

Echinox Cluj- Napoca 2010 1-15

Lista lucrări publicate

1 Elena Popa Maria Maidaniuc Agnes Bacusca Alamir Diaa Rodica Petrovanu Adorata Elena

Coman Disfuncţia endotelială ndash de la mecanisme moleculare la cuantifi care şi tratament icircn practica

medicală Practica Medicală 20149(3) 109-14

2 Elena Popa Agnes Bacusca Alamir Diaa Maria Maidaniuc Rodica Petrovanu Adorata Elena Coman

The function of insulin receptor (IRF) in evolution of obesity correlation with adipocytes diameters

Archives of the Balkan Medical Union 201449(3) 275-9

3 Elena Popa Florin Zugun-Eloae Mihaela Zlei Daniela Jitaru Oana Maria Pintilie Adorata Elena

Coman Maria Traian Didona Anca Ungureanu Eugen Carasevici - acceptata pentru numarul 42014

Flow cytometry analysis of PPAR-alpha receptors in metabolic syndrome) Revista Romană de

Medicină de Laborator(RRLM-D-14-00034R1- adeverinţa ataşată

Page 13: REZUMAT TEZĂ DE DOCTORAT - umfiasi.ro Doctorat/rezumat... · universitatea de medicinĂ Şi farmacie “grigore t. popa” iaŞi facultatea de medicinĂ rezumat tezĂ de doctorat

SM) Pentru studiul SM pacienţii au fost recrutaţi din masa de populaţie arondată cabinetului

de MF fără istoric de SM diabet zaharat boală cardio-vasculară aflați la primul diagnostic

de SM evaluarea completă a acestora fiind urmată de includerea icircn programul de

management cardiovascular şi metabolic conform Ghidurilor Terapeutice aflate icircn vigoare

Lot SM a) criterii de includerevacircrsta peste 18 ani recrutarea pe baza semnării

Consimţămacircntului liber informatSM nou-diagnosticat pe baza prezenţei a minim trei criterii

de diagnostic pentru SM conform Harmonised I b) criterii de excluderevacircrstă sub 18 ani

refuzul semnării Consimţămacircntului liber informat femei icircn perioada de graviditate sau de

lactaţie SM anterior diagnosticat istoric de diabet zaharat boală cardiovasculară constituită

tratament cu agonişti PPARα (ie fibraţi etc)

Lot martor (Non-SM) a) criterii de includerevacircrsta peste 18 ani recrutarea pe baza

semnării Consimţămacircntului liber informat absenţa diagnosticului de SM b) criterii de

excludere vacircrstă sub 18 ani refuzul semnării Consimţămacircntului liber informat femei icircn

perioada de graviditate sau de lactaţie

Studiul receptorilor PPARα a inclus două subetape

A Studiul componentelor sindromului metabolic conform criteriilor Harmonised I

Evaluarea clinică a participanţilor s-a desfăşurat icircn cadrul Cabinetului de Medicină de

Familie iar determinările hematologice şi biochimice s-au efectuat icircn Laboratorul

Ambulatorului Clinic de Specialitate al Spitalului Clinic de Urgenţă bdquoSf Spiridonrdquo Iaşi

B Evaluarea icircn citometrie de flux a nivelului relativ de expresie a PPARα şi CD36

Studiul receptorilor PPARα s-a desfăşurat icircn Laboratorul de Biologie Moleculară al

Institutului Regional de Oncologie Iaşi prin metoda citometriei icircn flux (19) Nivelul relativ de

expresie al receptorilor nucleari PPARα a fost determinat icircn diferite tipuri de leucocite

circulante polimorfonucleare (PMN) limfocite (Ly) Mo(Mo) şi eozinofile(Eo) Am utilizat o

metodă de citometrie icircn flux optimizată ldquoin houserdquo elaborată icircn cadrul Laboratorului de

Biologie Moleculară al IRO Iaşi Icircn cursul procesului de optimizare am testat mai multe

concentraţii ale anticorpului anti-PPARα 1100 1500 11500 14500 iar icircn urma

determinărilor efectuate şi a analizei statistice concentraţia 1500 a fost considerată optimă

pentru desfăşurarea studiului (tabel XXIII figura 51)

Tabel XXIII Optimizarea concentraţiilor Ac anti-PPARα Diferenţa

mediilor

valorilor

medii

PMN

Diferenţa

mediilor

mediane-

lor

PMN

Diferenţa

mediilor

valorilor

medii

Ly

Diferenţa

mediilor

mediane-

lor

Ly

Diferenţa

mediilor

valorilor

medii

Mo

Diferenţa

mediilor

mediane-

lor

Mo

Diferenţă 0 1300 1600 100 100 700 750

normal - 1100 650 1050 1050 1350 450 900

patologic 1500 2850 2750 3800 3600 2850 2400

11500 -1050 800 3500 3300 2250 1800

14500 2200 2150 1300 1100 2950 2850

AOptimizare

BRepetabilitate

Figura 51 Optimizarea concentraţiei anticorpului anti-PPARα

Icircn concordanţă cu literatura de specialitate icircn cercetarea efectuată intensitatea medie

de fluorescenţă (MFI) a fost utilizată ca măsură pentru evaluarea expresiei celulare a

receptorilor PPARα (212) Un exemplu de analiză a probelor este reprezentat icircn figura 52

Figura 52 Exemplu de analiză flowcitometrică pentru receptorul nuclear PPARα Graficul din stacircnga reprezintă distribuţia leucocitelor iar cel din dreapta ilustrează distribuţia

intensităţii de fluorescenţă pentru populaţiile de celule selectate

Intensitatea Medie a Fluorescenţei (MFI) a CD36 ca o măsură a nivelului relativ de

expresie a acestor receptori la nivelul membranei Mo a fost detectată printr-o metodă

convenţională pentru marcare de suprafaţă şi evaluare pe bază de citometrie icircn flux folosind

aceleaşi probe de sacircnge cu EDTA cu focalizare pe Mo şi utilizacircnd CD14 ca marker specific

pentru Mo (figura 53)

Figura 53Analiza

flowcitometrică

pentru marcajul

CD14 - CD36

Rezultate

Icircn cele două loturi au fost incluşi icircn studiu un număr de 57 de participanţi care au fost

investigaţi din punct clinic şi paraclinic Vacircrsta subiecţilor incluşi icircn studiu a fost cuprinsă

icircntre 18 şi 79 ani iar vacircrsta medie calculată a avut valoarea de 4805 plusmn 1587 ani Pentru sexul

masculin vacircrsta medie este de 4925plusmn1617 ani iar pentru sexul feminin 4689 plusmn1 5ani

diferenţa obţinută icircntre vacircrstele pacienţilor fiind statistic nesemnificativă (P = 085)

Analizacircnd vacircrstele subiecţilor din cele două loturi am observat că vacircrsta medie a pacienţilor

cu SM (5476 plusmn 1183 ani) a fost semnificativ mai mare (t-test P = 0003) decacirct icircn lotul

martor (4258 plusmn 169 ani) Pentru diagnosticul sindromului metabolic am calculat scorul de

SM bazacircndu-ne pe criteriile Harmonised I Conform criteriilor diagnostice din cei 57 de

subiecţi investigaţi un număr de 26 participanţi (46) au fost incluşi icircn lotul cu SM (Lot

SM) iar 31 de subiecţi(54) nu au prezentat acest sindrom constituind lotul martor (Lot

Non-SM) Din punct de vedere al repartiţiei pe sexe nu au existat diferenţe statistic

semnificative raportul bărbaţifemei fiind de 0961 Din totalul celor 28 de bărbaţi incluşi icircn

studiu 4285 (12 bărbaţi) au icircntrunit cel puţin trei criterii diagnostice pentru SM fiind

incluşi icircn lotul SM Icircn acelaşi timp 14 femei reprezentacircnd 4827 din subiecţii de sex

feminin au icircntrunit condiţiile pentru includerea icircn lotul pacienţilor cu SM Valoarea medie

determinată pentru scorul de SM a arătat prezenţa unor valori semnificativ statistic mai mari

din punct (t-test P lt 00001) icircn lotul SM (769plusmn176) comparativ cu lotul martor (174 plusmn

184) Am studiat comparativ media valorilor măsurate ale criteriilor componentelor SM

Analiza statistică a arătat valori semnificativ statistic mai mari pentru CA TG glicemie TAS

şi TAD (plt0001) icircn lotul SM comparativ cu lotul normal Concomitent calculul statistica

evidenţiat o scăderea semnificativă a HDL-colesterolului icircn lotul cu SM comparativ cu

subiecţii din lotul martor (Non-SM) Aplicacircnd testul z am comparat ponderea pacienţilor

diagnosticaţi cu HTA dislipidemie şi tulburări ale metabolismului glucidic icircn lotul SM versus

lot Non-SM şi am constatat prezenţa acestor afecţiuni icircntr-un procent mai mare semnificativ

statistic icircn lotul SM ((plt0001)

Utilizacircnd testul t Student am calculat diferenţele statistice şi icircntre alți parametri

studiaţi care sunt factori de risc cardio-vascular dar care nu sunt componente ale SM Icircn lotul

cu SM valorile acidului uric fibrinogenului Col total Non-HDL-col şi LDL-col au fost

semnificativ mai mari comparativ cu lotul martor (tabel XXVI) Analizacircnd valorile medii ale

populaţiilor de leucocite am identificat doar pentru populaţia de Eo diferenţe statistice icircntre

cele două loturi numărul Eo icircn lotul SM fiind semnificativ mai mare decacirct icircn lotul martorTot

pentru caracterizarea celor două loturi am analizat prezenţa antecedentelor

heredocolaterale (AHC) de diabet zaharat boala cardiovasculară şi dislipidemie pentru toţi

subiecţii investigaţi Astfel existenţa AHC de HTA a fost declarată de 2580 din subiecţii

incluşi icircn lotul martor respectiv de 5384 din numărul pacienţilor cu SM Antecedentele

heredocolaterale de dislipidemie au fost prezente la 3461 din pacienţii cu SM icircn timp ce icircn

lotul martor anamneza a evidenţiat aceste antecedente la 3548 din subiecţi

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα

Icircn cercetarea desfăşurată am utilizat intensitatea medie de fluorescenţă (MFI) ca

măsură a nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn leucocitele studiate Pentru

populaţiile de leucocite analiza computerizată a probelor luate icircn studiu a furnizat valori

pentru MFI a receptorilor PPARα icircn funcţie de cantitatea de anticorpi anti-PPARα marcaţi cu

fluorocrom care se leagă de aceste celule şi apoi sunt captaţi de citometru (figura 59)

A Lot Non - SM

B Lot SM

Figura 59 Analiza flowcitometrică pentru receptorii PPARα icircn leucocite A lot normal B lot SM

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Mo

Analiza probelor efectuată conform protocolului de lucru descris a arătat prezenţa

PPARα icircn Mo recoltate din sacircngele tuturor subiecţilor incluşi icircn această cercetare Pentru toţi

participanţii investigaţi analiza MFI a Ac anti - PPARα icircn populaţia de Mo (Mo) a arătat un

interval de variaţie icircntre [786 395] Valoarea medie a nivelului de expresie relativă a PPARα

calculată pentru Mo a fost de 23210 plusmn7860 Pentru ambele loturi de studiu pacienţilor cu

SM testul Testul Shapiro-Wilk a arătat distribuţia normală a valorilor obţinute pentru nivelul

de expresie al PPARα icircn Mo

Tabel XXVIII Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn Mo

Lot SM Lot Non-SM

N 26 31

Media 22819 23538

SD 5819 7717

Mediana 22400 22600

Minimum 12800 78600

Maximum 35800 37900

Percentila 25 18300 18300

Percentila 75 26200 30350

Pentru pacienţii din lotul SM valoarea medie a MFI icircn Mo a fost de 22819 plusmn 5880 iar

pentru lotul martor s-a calculat o valoare medie a MFI a Ac anti-PPARα de 23538 plusmn 7717

Distribuţia statistică a frecvenţei valorilor MFI obţinute pentru nivelul de expresie a PPARα

icircn Mo subiecţilor din cele două loturi a fost reprezentată icircn figura 511

Figura 511 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti-PPARα icircn Mo

Sub forma unei diagrame de control Shewhart am reprezentat variaţia intensităţii medii de

fluorescenţă pentru anticorpii anti-PPARα icircn MoVariaţia nivelului de expresie relativă a

receptorilor PPARα icircn Mo subiecţilor studiaţi este ilustrată icircn fig 512 513

Figura 512 Lot SM Variaţia

expresiei relative a PPARα icircn Mo

Număr pacienţi

26

Minim 128

Maxim 358

Media 22819

DS 5819

25 din 26 valori ale MFI s-au icircncadrat

icircn intervalul Media plusmn 2DS

Figura 513 Lot Non-SM Variaţia

expresiei relative a PPARα icircn Mo

Număr pacienţi 31

Minimum 786

Maximum 379

Media 23538

DS 7717

Cu excepţia unei singure

determinări valorile calculate s-au

icircncadrat icircn Media plusmn 2DS

Utilizacircnd testul parametric t-Student pentru variabilele cu distribuţie normală am

comparat valoarea medie a intensităţii de fluorescenţă a Ac anti-PPARα icircn lotul cu SM versus

subiecţi fără SM (Lot Non-SM) Analiza statistică efectuată nu a identificat diferenţe icircntre

50 100 150 200 250 300 350 400 450

0

5

10

15

20

25

30

35

MFI anti-PPAR a

Frecv

enta

relati

va (

)

Lot SM

0 50 100 150 200 250 300 350 400 450 500

0

5

10

15

20

25

30

35

MFI anti-PPAR a

Frecv

enta

relati

va (

)

Lot martor

1 6 11 16 21 26 31

0

50

100

150

200

250

300

350

400

450

MFI

anti-

PPAR

a

2282

1106

3458

518

4046

Media

LCI

LCI

1 6 11 16 21 26 31 36

-100

0

100

200

300

400

500

MFI a

nti-PP

AR

a

2354

810

3897

39

4669LCS

LCI

Media

cele două loturi icircn ceea ce priveşte expresia PPARα la nivelul Mo circulante (t- Test P=

069)

Studiul receptorilor PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de AHC şi dislipidemie

Nivelul de expresie al receptorilor PPARα α icircn Mo tinde să fie mai scăzut la subiecţii

cu AHC de HTA comparativ subiecţii care nu au declarat AHC de HTA (P= 006 fig 515)

AHC HTA

Număr 22

Mediana 19950

Percentila 25 17800

Percentila 75 22700

AHC HTA absente

Număr 35

Mediana 24800

Percentila 25 19025

Percentila 75 31700

Figura 515 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Mo funcţie de AHC de HTA

Nu s-au calculat diferenţe semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor

PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de dislipidemie atunci cacircnd aceştia au fost comparaţi cu

subiecţii fără AHC de tulburări ale metabolismului lipidic (t- Test P= 020)

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn limfocite

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn populaţia de Ly a

demonstrat prezenţa receptorilor PPARα icircn Ly tuturor subiecţilor studiaţi Pentru toţi

participanţii investigaţi analiza MFI a Ac anti - PPARα icircn populaţia de Ly a relevat un

interval de variaţie icircntre [748 314] iar valoarea medie a MFI a fost de 18058 plusmn 5600

Pentru ambele loturi aplicarea testului Shapiro-Wilk a evidenţiat distribuţia normală a

valorilor determinate pentru nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Ly Pentru

pacienţii cu SM valoarea medie a MFI determinată pentru expresia PPARα icircn populaţia de

Ly a fost de 18178 plusmn 61 16 iar pentru lotul martor a fost de 16800 plusmn 5229

Tabel XXX Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn limfocite

Lot SM Lot Non-SM

N 26 31

Media 181781 179574

SD 611694 522907

Mediana 165000 168000

Minimum 81300 74800

Maximum 314000 301000

Percentila 25 13400 - 145750

Percentila 75 21800 21700

Distribuţia frecvenţei valorilor MFI a Ac anti-PPARα icircn Ly este redată icircn figura 518

Figura 518 Distribuţia frecvenţelor relative a MFI a Ac anti-PPARα icircn Ly

94 din determinările efectuate pentru determinarea nivelului de expresie relativă al

MFI

ant

iPPA

R

a_Mo

190

200

210

220

230

240

250

260

270

280

DA NU

AHC HTA

P=006

50 89 128 167 206 244 283 322 361 400

0

5

10

15

20

25

30

35

MFI anti-PPAR a

Frecv

enta

relati

va (

)

Lot SM

0 50 100 150 200 250 300 350

0

5

10

15

20

25

30

35

40

MFI anti-PPAR a

Frec

venta

relat

iva (

)

Lot Non-SM

receptorilor PPARα icircn limfocitele subiecţilor cu SM s-au icircncadrat icircn intervalul Media plusmn 2DS

Figura 5 19 Lot SM Variaţia expresiei

relative a PPARα icircn Ly

Număr pacienţi 26

Minimum 813

Maximum 31400

Media 18178

Deviaţia Standard 6116

25 valori s-au icircncadrat icircn Media plusmn 2DS

Pentru lotul Non-SM diagrama de control (figura 520) a arătat toate valorile

determinate pentru lotul Non-SM se icircncadrează icircntre LCS şi LCI

Figura 520 Lot Non -SM Variaţia

expresiei relative a PPARα icircn Ly

Număr pacienţi 31

Minimum 748

Maximum 30100

Media 179574

Deviaţia Standard 5229

96 din valori icircncadrate icircn Media plusmn 2DS

Aplicarea testului t-Student pentru valorile medii ale intensităţii de fluorescenţă ale

PPARα icircn Ly nu a arătat existenţa unei diferenţe statistic semnificative icircntre lotul cu SM şi

lotul martor(t- Test P= 088)

Analiza receptorilor PPARα icircn Ly subiecţilor cu AHC de HTA şi dislipidemie

Studiind populaţiile de Ly la subiecţii care au prezentat AHC de hipertensiune

arterială analiza flowcitometrică a relevat existenţa unor valori mai mici pentru MFI la aceşti

subiecţi comparativ cu cei fără AHC de HTA (fig 522) deşi scăderea observată nu a

icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică (t- Test P = 009)

AHC HTA

Număr 22

Mediana 16000

Percentila 25 12700

Percentila 75 17100

AHC HTA absenţe

Număr 35

Mediana 18700

Percentila 25 14900

Percentila 75 23175

Figura 522 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Ly funcţie de AHC de HTA

Nu am calculat diferenţe statistic semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor

PPARα icircn populaţiile de Ly ale subiecţilor la care am identificat AHC de dislipidemie

comparativ cu cei care nu au declarat antecedente familiale de dislipidemie (t- Test P= 051)

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn neutrofile (PMN)

Analiza flowcitometrică a evidenţiat prezenţa PPARα icircn PMN recoltate din sacircngele

venos al tuturor participanţilor la studiu Pentru toţi subiecţii investigaţi analiza MFI a Ac -

PPARα icircn populaţia de PMN a relevat un interval de variaţie de [163419] iar valoarea medie

a MFI pentru Ac anti-PPARα a fost de 26392 plusmn 7064 Testul Shapiro-Wilk a arătat o

distribuţie normală a valorilor intensităţii medii de fluorescenţă a anticorpilor anti-PPARα atacirct

icircn lotul pacienţilor cu SM cacirct şi icircn lotul martor

1 6 11 16 21 26 31

-50

0

50

100

150

200

250

300

350

400

MFI

anti-

PPAR

a

1818

595

3041

-17

3653

Media+2DS

Media- 2DS

1 6 11 16 21 26 31 36

0

50

100

150

200

250

300

350

MFI

ant

i-PPA

R

a

1796

750

2841

227

3364

Media+2DS

Media

Media- 2DS

MFI

anti-

PPAR

a Ly

130

140

150

160

170

180

190

200

210

DA NU

AHC HTA

P=009

Tabel XXXII Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn PMN

Lot SM Lot Non-SM

N 26 31

Media 26273 26480

SD 6915 7088

Mediana 25900 25500

Minimum 17200 16300

Maximum 39500 41900

Percentila 25 19800 19600

Percentila 75 30500 31500

Icircn cele două loturi distribuţia frecvenţei valorilor nivelului relativ de expresie a

receptorilor PPARα icircn PMN a fost reprezentată sub formă de histograme (fig 525)

Figura 525 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti-PPARα icircn PMN

Pentru cei 26 de pacienţi din lotul cu SM a valoarea medie a nivelului de expresie

relativă a receptorilor PPARα icircn PMN a fost de 26273 plusmn 6915 Studiind diagrama Shewhart

din figura 526 se observă că toate valorile obţinute pentru nivelul de expresie relativă

PPARα icircn PMN investigate se icircncadrează icircntre limitele definite de valorile medii plusmn 2DS

Figura 526 Lot SM

Variaţia expresiei relative a PPARα icircn

PMN

Număr pacienţi 26

Minimum 17200

Maximum 39500

Media 26273

Deviaţia Standard 6915

Valorile MFI icircncadrate icircn Media plusmn 2DS

Pentru lotul martor valoarea medie calculată a MFI a anticorpilor anti-PPARα a fost de

26480 plusmn 7088 peste 95 din valorile MFI fiind cuprinse icircn Media plusmn 2DS (figura 527)

Figura 527 Lot Non-SM Variaţia expresiei

relative a PPARα icircn PMN

Număr pacienţi 31

Minimum 16300

Maximum 41900

Media 26480

Deviaţia Standard 7088

30 valoriicircn Media plusmn 2DS

Pentru PMN analiza statistica nu a arătat existenţa unei diferenţe statistic semnificative icircntre

nivelul de expresie relativă a PPARα la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii din lotul

Non-SM (t- Test P= 090) Studiind populaţiile de PMN la subiecţii care au prezentat AHC

de HTA nu am calculat o diferenţă statistic semnificativă icircntre expresia receptorilor PPARα

la subiecţii cu istoric familial de hipertensiune arterială comparativ cu cei pentru care nu s-au

notat AHC de HTA (t- Test P= 013)De asemenea am identificat diferenţe icircntre nivelul de

expresie al PPARα icircn PMN subiecţilor care prezentau AHC de dislipidemie comparativ cu

cei fără AHC de dislipidemie (t- Test P= 017)

50 100 150 200 250 300 350 400 450 500

0

5

10

15

20

25

30

35

MFI anti-PPAR a

Frecve

nta rel

ativa (

)

Lot SM

50 100 150 200 250 300 350 400 450 500

0

5

10

15

20

25

30

MFI anti-PPAR a

Frecv

enta

relati

va (

)

Lot Non-SM

1 6 11 16 21 26 31

0

50

100

150

200

250

300

350

400

450

500

MFI

anti-

PPA

R

a

2627

1244

4010

553

4702

Media + 2DS

Media - 2 DS

Media

1 6 11 16 21 26 31 36

0

50

100

150

200

250

300

350

400

450

500

MFI

anti-

PPAR

a

2648

1230

4066

522

4774

Media+ 2DS

Media - 2DS

Media

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile Tabel XXXIV Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn Eo

Lot SM Lot Non-SM

N 26 31

Mediaplusmn SD 141057 plusmn 47604 172209 plusmn 37565

Mediana 142450 171300

Minimum 35000 68500

Maximum 233700 250600

Percentila 25 119300 153225

Percentila 75 169700 199550

Am studiat nivelul relativ de expresie a receptorilor PPARα icircn Eo iar rezultatele au

fost figurate sub forma de histograme (figura 532)

Figura 532 Distribuţia frecventelor relative ale valorilor MFI anti- PPARα icircn Eo

Din diagrama Shewhart (figura 533) se observă că toate valorile determinate pentru

nivelul de expresie relativă a PPARα icircn Eo pentru lotul SM s-au icircncadrat icircn [Media plusmn 3 DS]

peste 90 din determinări fiind cuprinse icircn [Media plusmn 2 DS] iar icircn [Media plusmn 1 DS] sunt

incluse peste 65 din valorile MFI

Figura 533 Lot SM

Variaţia expresiei relative a PPARα icircn Eo

Număr pacienţi 26

Minimum 35000

Maximum 233700

Media 141057

Deviaţia Standard 47604

24 valori icircncadrat eicircn [Media plusmn 2DS]

Pentru subiecţii incluşi icircn lotul martor analiza diagramei (figura 534) a arătat că

toate cele 31 de valori ale MFI pentru PPARα icircn Eo se icircncadrează icircn [Media plusmn 3DS] iar 30

dintre acestea se icircncadrează icircn [ Media plusmn 2 DS]

Figura 534 Lot Non -SM

Variaţia expresiei relative a PPARα icircn Eo

Număr pacienţi 31

Minimum 685

Maximum 2506

Media 172209

Deviaţia Standard 375 65

30 valori icircncadrate icircn [Media plusmn 2DS]

Comparacircnd subiecţii cu SM cu cei din lotul martor am observat o scădere

semnificativă statistic a MFI a Ac anti - PPARα icircn Eo pentru pacienţiir cu SM ( figura 535)

PPARα Eo Lot Non-SM

Număr 31

Mediana 171300

Percentila 25 152325

Percentila 75 199550

PPARα Eo Lot SM

Număr 26

Mediana 142450

Percentila 25 119300

Percentila 75 169700

Figura 5 35 Comparaţie icircntre nivelul de expresie a PPARα icircn Eo

0 500 1000 1500 2000 2500 3000

0

10

20

30

40

50

MFI anti-PPAR a

Frecvent

a relativa

()

Lot SM

400 800 1200 1600 2000 2400 2800

0

5

10

15

20

25

30

35

40

45

MFI anti-PPAR a

Frecenta

relativa

()

Lot Non-SM

1 6 11 16 21 26 31

-500

0

500

1000

1500

2000

2500

3000

MFI a

nti-PP

AR

a

14106

4765

23447

94

28117

Media + 2DS

Media- 2DS

LCI

LCS

1 6 11 16 21 26 31 36

500

1000

1500

2000

2500

3000

MFI an

ti-PPA

R a

17221

9708

24734

5951

28490

LCI

Media-2DS

Media

Media +2 DS

LCS

1200

1300

1400

1500

1600

1700

1800

1900

Lot SM Lot Non-SM

P=00072

Cu ajutorul curbei ROC am evaluat posibilitatea utilizării MFI a Ac anti - PPARα icircn

Eo ca marker pentru diagnosticul SM Valoarea MFI a Ac anti - PPARα icircn Eo care prezice cu

cea mai mare acurateţe prezenţa SM a fost de 1533 (punctul de ldquocut-offrdquo) pentru care am

calculat o sensibilitate de 5652 şi o specificitate de 7778 Calculul ariei AUC a furnizat

valoarea de 0663 şi deci determinarea parametrului MFI anti- PPARα icircn Eo are valoarea

unui test cu acurateţe redusatilde icircn diagnosticul SM Studiind expresia PPARα icircn Eo la subiecţii

care au prezentat AHC de HTA am observat o scădere semnificativă statistic (P = 00023) a

expresiei PPARα la subiecţii cu istoric familial de HTA comparativ cu subiecţii fatilderatilde AHC de

HTA (figura 537)

AHC HTA

Număr 22

Mediana 148800

Percentila 25 116425

Percentila 75 170750

AHC HTA absente

Număr 35

Mediana 170850

Percentila 25 143700

Percentila 75 195000

Figura 537 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Eo funcţie de AHC de HTA

Studiind subiecţii cu AHC declarate de dislipidemie nu am identificat diferenţe icircntre

nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Eo subiecţilor cu AHC de dislipidemie

comparativ cu cei care nu au declarat prezenţa AHC de dislipidemie (t - Test P = 067)

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor CD36

Am studiat expresia receptorilor CD36 icircn Mo subiecţilor incluşi icircn studiu

Lot Non - SM

BLot SM

Figura 539 Analiza flowcitometrica pentru receptorii CD36 icircn Mo

Pentru toţi participanţii la studiu valorile MFI au variat icircn intervalul [817 6933] iar

valoarea medie a MFI a Ac anti-CD36 a fost de 397133 plusmn 120902 Tabel XXXVII Statistică descriptivă pentru a CD36 icircn Mo

Lot SM Lot Non-SM

Media 429034 370377

Deviatia Standard 109051 125514

Mediana 411000 362800

Minimum 266400 81700

Maximum 693300 616800

Percentila 25 346200 273750

Percentila 75 469000 453300

Distribuţia frecvenţelor relative a MFI au fost prezentate sub formă histogramelor

Figura 541 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti - CD36 icircn Mo

MFI

ant

i-PPA

R a Eo

1000

1100

1200

1300

1400

1500

1600

1700

1800

1900

DA NU

AHC HTA

P=00023

1000 2000 3000 4000 5000 6000 7000 8000

0

5

10

15

20

25

MFI anti-CD36

Frecve

nta rela

tiva (

)

Lot SM

0 1778 3556 5333 7111

0

5

10

15

20

25

30

35

MFI anti-CD36

Frecve

nta rel

ativa (

)

Lot Non - SM

Referitor la lotul SM 92 din valorile MFI a Ac anti- CD36 s-au icircncadrat icircn

intervalul Media plusmn 2 DS (figura 542) iar pentru lotul martor peste 90 dintre acestea icircn

Media plusmn 2 DS (figura 543)

Figura 542 Lot SM

Variaţia MFI anti-CD36 icircn Mo

Număr pacienţi 26

Minimum 2664

Maximum 6933

Media 429034

Deviaţia Standard 109051

Figura 543 Lot Non -SM

Variaţia MFI anti- CD36 icircn Mo

Număr 31

Minimum 81700

Maximum 616800

Media 370377

Deviaţia Standard 125514

Comparacircnd subiecţii cu SM cu cei din lotul normal am constatat o tendinţă de creştere

a expresiei CD36 icircn lotul cu SM((t - Test P= 0067)

MFI anti - CD36 Lot Non-SM

Număr 31

Mediana 3628

Percentila 25 2737

Percentila 75 4533

MFI anti - CD36 Lot SM

Număr 26

Mediana 4110

Percentila 25 3462

Percentila 75 4690

Figura 544 Comparaţie icircntre cel două loturi privind MFI anti - CD36 icircn Mo

Referindu-ne la subiecţii cu AHC de HTA am observat o tendinţă de creştere a

valorilor MFI anti-CD36 comparativ cu cei care nu au avut AHC de HTA (t - Test P = 0 08)

AHC HTA

Număr 22

Mediana 442800

Percentila 25 355275

Percentila 75 519475

AHC HTA absenţe

Număr 35

Mediana 377400

Percentila 25 316900

Percentila 75 443400

Figura 545 Comparaţie icircntre expresia CD36 icircn Mo funcţie de AHC de HTA

Nu s-au calculat diferenţe semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor

PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de dislipidemie atunci cacircnd aceştia au fost comparaţi cu

subiecţii fără AHC de dislipidemie (t - Test P=031)

Corelaţii icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα si CD36

Studiind valorile intensităţii medii de fluorescenţă a Ac anti-PPARα icircn Mo Ly şi

PMN am observat că nivelul de expresie celularatilde a PPARα icircn Mo Ly şi PMN sunt corelate

puternic pozitiv atacirct icircn lotul SM cacirct şi icircn lotul martor(fig547 548)

1 6 11 16 21 26 31

0

1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

8000

Pacienti

MFI a

nti-CD

36

42903

21093

64714

10188

75619

LCI

Media

LCS1 6 11 16 21 26 31 36

-1000

0

1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

8000

MFI a

nti- C

D36

37038

11935

62141

-616

74692Media + 2 DS

Media

Media - 2 DS

3200

3400

3600

3800

4000

4200

4400

4600

4800

Lot SM Lot Non-SM

P = 00676

MFI

anti-

CD36

3400

3600

3800

4000

4200

4400

4600

4800

5000

DA NU

AHC HTA

P = 008

Figura 547 Studiul relatiilor dintre

receptorii PPARα icircn SM A Mo vs PMN B Mo vs Ly

C PMN vs Ly Graficul ilustrează coeficienţii r P dreapta de

regresie (linia centrala) intervalul de icircncredere

95 şi intervalul de predicţie 95

Figura 548 Corelaţii icircntre receptorii PPARα icircn lotul

martor

A Mo vs PMN

B Mo vs Ly

C PMN vs Ly

Tot pentru lotul SM cacircnd am evaluat relaţia dintre nivelul de expresie relativă a

receptorilor PPARα icircn Eo şi nivelul de expresie relativa a receptorilor CD 36 am obţinut o

corelaţie negativă (r = - 05 P = 001) (fig 549 A)

50 100 150 200 250 300 350 50

100

150

200

250

300

350

400

450

500

PPARα Ly

PPARα PMN

y = 56641 + 1159 x r = 086 P lt 0001

C

50 100 150 200 250 300 350 400 0

50

100

150

200

250

300

350

PPARα Mo

PPARα Ly

y = 36665 + 0607 x r = 090 P lt 0001

B

150 200 250 300 350 400 450 0

50 100 150 200 250 300 350 400 450 500

PPARα PMN

PPARα Mo

y = 2505 + 0879 x r = 081 P lt 0001

A

50 100 150 200 250 300 350

50 100 150 200 250 300 350 400 450 500

PPARα Ly

PPARα PMN

y = 95668 + 0919 x r = 081 P lt 0001

C

100 150 200 250 300 350 400

0

50

100

150

200

250

300

350

400

PPARα Mo

PPARα Ly

y = -7503 + 0829 x r = 079 P lt 0001

B

100 150 200 250 300 350 400

50

100

150

200

250

300

350

400

450

500

PPARα Mo

PPARα PMN

y = 61384 + 0882 r = 074 P lt 0001

A

Figura 549 Corelaţii icircntre expresia PPARα icircn Eo şi alte tipuri de receptori investigaţi A PPARα Eo şi CD 36 (Lot SM) B PPARα Eo şi PPARα Mo( Lot Non-SM)

Icircn lotul martor am identificat o asociere moderată pozitivă (r = 038 P = 0033) icircntre

nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Eo şi Mo (figura 549B) corelaţie absentă icircn

lotul pacienţilor cu SM

Corelaţii dintre receptorii studiaţi şi componentele sindromului metabolic

Icircn lotul de control analiza statistică a relevat faptul că icircntre circumferinţa

abdominală (CA ) şi nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Mo Ly şi PMN există o

corelaţie inversă adică scăderea expresiei PPARα la nivelul acestor populatii celulare ar fi

icircnsoţită de creşterea CA (figura 550

Figura 550Corelaţii dintre receptorii

PPARα si CA A Mo B Ly C PMN

La pacienţii cu SM am notat o corelatie moderată negativă statistic semnificativă

icircntre TG şi valorile MFI a Ac anti- PPARα icircn Mo şi Ly( fig 551)

150 200 250 300 350 400 450 50

60

70

80

90

100

110

PPARα PMN

CA r = - 040 P = 0024

C

50 100 150 200 250 300 350 50

60

70

80

90

100

110

PPARα Ly

CA r = - 046 P = 0009

B

50 100 150 200 250 300 350 400 50

60

70

80

90

100

110

PPARα Mo

CA r = - 042 P = 0017

A

50 100 150 200 250 300 350 400 500

1000

1500

2000

2500

3000

PPARα Mo

PPARα Eo

r = 038 P = 0033

B

0 500 1000 1500 2000 2500 1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

8000

PPARα Eo

CD36

r = 050 P = 0010

A

Figura 551 Lot SM Corelaţie icircntre expresia PPARα şi TG (A Mo B Ly)

Analizand corelatia dintre receptorii CD36 si valorile TA la pacientii cu SM am observat

o asociere pozitivă asteptată intre TAD si nivelul de expresie al receptorilor CD36 (fig 552)

Figura 552 Lot SM Corelaţii icircntre expresia

receptorilor CD36 şi valorile tensiunii arteriale

diastolice

Studiind corelaţiile dintre receptorii PPARα şi HDL-col la subiecţii din lotul martor am

notat o asociere pozitivă icircntre expresia PPARα icircn Mo şi Ly cu HDL-col (fig 553)

Figura 553 Lot martor Corelaţii icircntre HDL-col şi expresia PPARα icircn Mo(A) Ly(B)

Icircn lotul normal am evidenţiat corelaţii pozitive moderate dar semnificative statistic icircntre

CA şi valorile TAS (r = 062 P lt 0001) respectiv TAD (r = 050 P=0004) precum şi icircntre

CA şi glicemia subiecţilor normali (r = 052 P = 0003) Aceste date icircmpreună cu relaţia

invers proporţională identificată icircntre HDL-col şi CA (r = 050 P = 001) susţin validitatea

acestui studiu Icircn lotul subiecţilor cu SM am observat o corelaţie moderat pozitivă icircntre

expresia PPARα icircn populaţiiile de Mo şi Eo şi concentraţia a HDL-col (fig 554)

B

100 150 200 250 300 350 20

30

40

50

60

70

80

90

100

PPARα Ly

HDL-col-(mgdl)

r = 036 P = 0046

A

150 200 250 300 350 400 20

30

40

50

60

70

80

90

100

PPARα Mo

HDL-col-(mgd)l

r = 035 P = 005

70 75 80 85 90 95 100 1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

8000

TAD (mmHg)

CD36

r = 048 P = 0013

B

50 100 150 200 250 300 350 -100

0

100

200

300

400

500

PPARα Ly

TG(mgdl)

r = - 042 P = 003

A

50 100 150 200 250 300 350 400 -100

0

100

200

300

400

500

PPARα Mo

TG ( mgdl) r =- 0 43 P = 0027

Figura 554 Corelaţii icircn SM icircntre HDL-col şi expresia PPARα icircn Mo (A) şi Eo(B)

Corelaţii icircntre nivelul de expresie relativă a PPARα şi markeri ai disfuncţiei

endoteliale şi inflamaţiei cronice

Deşi nu a icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică am reţinut corelaţia invers

proporţională (r = - 0331 P = 006) dintre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα

icircn PMN şi concentraţia serică a Non-HDL-colesterolului

Studiind relaţiile dintre parametri icircn lotul de pacienţi cu SM am observat o corelaţie

moderată invers proporţională icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Eo şi

acidul uric seric (figura 555 A) corelaţie absentă la subiecţii fără SM

Figura 555 Lot SM corelaţia dintre expresia PPARα icircn Eo şi acidul uric (A) respectiv

PPARα şi fibrinogen (B)

Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P=008) am notat pentru

pacienţii cu SM corelaţia invers proporţională dintre expresia PPARα icircn Eo şi concentraţia

serică a fibrinogenului ( figura 555B)

V5 Discuţii

Icircn cadrul lucrării de doctorat am studiat nivelul de expresie relativă a PPARα icircn

leucocitele pacienţilor cu SM comparativ cu cea a subiecţilor normali Expresia PPARα a fost

studiată icircn paralel cu cea a CD36 glicoproteină exprimată pe suprafaţa a numeroase celule

din organismul uman inclusiv pe cea a Mo şi macrofagelor Prin funcţia sa de receptor pentru

particulele oxidate de LDL CD36 cunoscut ca bdquoscavenger receptorrdquo de clasa B sau

bdquotrombospodin receptorrdquo contribuie la dezvoltarea inflamaţiei de la nivel endotelial şi

formarea plăcii de ateroscleroză Referitor la studiul PPARα icircn Eo icircn sindromul metabolic

menţionăm că studiul nostru este primul care arată că nivelul de expresie a proteinei PPARα

icircn Eo măsurat prin citometrie icircn flux este semnificativ mai redus la pacienţii care sunt

diagnosticaţi cu acest sindrom De asemenea icircn lotul cu SM cercetat icircn cadrul studiului

receptorilor PPARα numărul Eo circulante a fost semnificativ mai crescut la pacienţii cu SM

B

0 500 1000 1500 2000 2500 200

250

300

350

400

450

PPARα Eo o

Fibrinogen mgdl

r =- 036 P = 008

0 500 1000 1500 2000 2500 1 2 3 4 5 6 7 8 9

10 11

PPARα Eo_

Acid uric(mgdl) r = 048 P = 0014 A

0 500 1000 1500 2000 2500 10

20

30

40

50

60

70

80

PPARα Eo

HDL(mgdl)

r = 044 P = 0024

B

100 150 200 250 300 350 400 10

20

30

40

50

60

70

80

PPARα Mo

HDL( mgdl)

r = 046 P = 0019

A

(P = 003) Aceste constatări conduc la ipoteza că Eo joacă un rol special icircn mecanismele

patogenice declanşate icircn sindromul metabolic şi că receptorii PPARα sunt importanţi icircn

implicarea Eo icircn obezitate şi insulinorezistenţă Creşterea numărului de Eo circulante este

urmată de eliberarea mediatorilor proinflamatori iar reducerea expresiei PPARα icircn Eo

determină perturbarea mecanismelor de control al inflamaţiei cu exacerbarea cascadei

proinflamatorii Consecutiv se agravează disfuncţia endotelială şi se accelerează progresia

leziunilor de ateroscleroză Extrapolacircnd aceste ipoteze putem spune că asocierea raportată

dintre boala ischemică coronariană şi Eo poate fi şi consecinţa exacerbării cascadei

proinflamatorii de la nivel vascular produsă datorită scăderii expresiei PPARα icircn Eo iar

creşterea numărului de Eo circulante poate reprezenta o adaptare a organismului uman care

icircncearcă să suplinească deficitul de receptori PPARα Analizacircnd curba ROC pentru

intensităţile medii de fluorescenţă determinate pentru anticorpii anti- PPARα icircn Eo am

obţinut pentru acest biomarker o sensibilitate a testului de 565 şi o specificitate de 778

pentru un punct de cut-off de 1533 ( figura 536 ) Deşi aria AUC (Aria under the curve) egală

cu 0663 icircncadrează acest test ca avacircnd o acurateţe redusă observăm că că această valoare

este apropiată de determinările AUC pentru alţi factori (fibrinogen raport de aterogenitate

acid uric non- HDL-colesterol) cunoscuţi ca fiind implicaţi icircn aterogeneză şi inflamaţia

cronică (figura 431) Aceste remarci alături de faptul că icircn studiul receptorilor PPARα icircn

leucocite am inclus subiecţi la primul diagnostic de SM creează premisa integrării

determinării expresiei relative a receptorilor PPARα icircn diagnosticul complex al sindromului

metabolic Putem spune că icircn final studiul expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofilele

circulante se dovedește a fi util icircn diagnosticul precoce la nivel molecular al SM permiţacircnd

identificarea timpurie a unor indivizi cu risc cardiometabolic crescut Astfel intervenţia

precoce asupra subiecţilor cu deficit de PPARα icircn Eo contribuie la managementul eficient al

afecţiunilor degenerative icircn care inflamaţia cronică icircndeplineşte un rol primordial Referitor

la populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările efectuate prin citometrie de flux nu au

arătat existenţa unor diferenţe statistice icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα

la subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali Rezultatele noastre pot fi

consecinţa caracteristicilor loturilor studiate (icircn studiul nostru au fost incluşi subiecţi recrutaţi

la primul diagnostic de SM şi icircn absenţa stimulării receptorilor PPARα cu droguri agoniste

PPARα) dar icircn acelaşi timp pot apare diferenţe datorită metodei utilizate (231 232 233)

Făcacircnd o paralelă cu un studiu publicat icircn 2013 icircn Europa (231) care a arătat creşterea

nivelului de expresie al PPARα icircn Ly şi Mo observăm că deşi numărul de subiecţi a fost

aproximativ egal (57 participanţi icircn studiul nostru 60 icircn studiul DAmore) subiecţii icircn studiul

amintit au fost recrutaţi dintr-o clinică cu profil medical la primul diagnostic de SM icircn timp

ce metoda utilizată a fost PCR (Polymerase Chain Reaction) mult mai fidelă decacirct citometria

icircn flux icircn studiul receptorilor nucleari De asemenea DAmore nu investighează expresia

PPARα icircn Eo şi PMN icircn cercetare fiind incluse doar celulele CD14+ (predominant Mo) şi

CD14- (predominant Ly) Deşi nu am obţinut diferenţe statistic semnificative icircntre cele două

loturi referitoare la nivelul de expresie relativă a PPARα icircn Mo Ly şi PMN am observat

corelaţii puternice semnificative statistic icircntre expresia receptorilor PPARα icircn aceste tipuri

celulare Rezultatele obţinute sugerează existenţa unui mecanism diferit molecular de control

icircn eozinofile care reglează cantitatea de proteină PPARα icircn eozinofile versus alte tipuri de

leucocite (la pacienţii cu SM) şi acest lucru este icircn concordanţă cu cercetările care descriu

expresia PPARα mRNA icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale

bronşice keratinocite) Studiind prin citometrie de flux nivelul de expresie relativă a

receptorului CD36 la nivelul Mo am arătat prezenţa acestuia icircn Mo tuturor subiecţilor

investigaţi Analizacircnd valorile intensităţii medii de fluorescenţă a CD36 icircn loturile studiate

am observat o tendinţă de creştere la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali

confirmacircnd implicarea receptorului CD36 icircn patogeneza acestuia Referitor la expresia

receptorului CD36 rezultatele obţinute sunt icircn consens cu studii anterioare care au arătat

creşterea expresiei CD36 la pacienţii cu SM şi diabet zaharat Astfel pe lacircngă diferenţa icircn

expresia CD36 s-au raportat şi corelaţii inverse icircntre expresia proteinei CD36 şi nivelul

adiponectinei Acelaşi studiu a evidenţiat o corelaţie pozitivă intre expresia CD36 cu expresia

receptorilor PPAR gamma relaţia cu PPARα nefiind investigată

Analiza de subgrup a relaţiilor dintre componentele SM și elementele moleculare

proinflamatorii studiate a relevat prezenţa unor asocieri semnificativ statistice icircntre acestea

Se argumentează astfel că veridicitatea studiului este susţinută de interdependenţele statistice

ale componentelor SM Determinarea coeficientului de corelaţie Icircn studiul nostru nivelul de

expresie relativă a PPARα s-a corelat moderat negativ (figura 550) cu CA a subiecţilor din

lotul normal pentru populaţiile celulare de Mo (r = - 0420 P = 001) Ly (r = - 046 P =

0009) şi PMN (r = - 040 P = 0024) date care sunt icircn concordanţă cu studiile care arată

rolul PPARα icircn furnizarea energiei prin beta-oxidarea acizilor graşi Icircn acelaşi timp icircn lotul

pacienţilor cu SM nu am identificat prezenţa unei asocieri icircntre nivelul de expresie relativă a

PPARα şi valoarea măsurată a CA Asocierea dintre expresia relativă a PPARα cu obezitatea

de tip central completează datele existente referitoare la reglarea homeostaziei energetice

conturacircnd un mecanism de control deficitar al aportului caloric al SM Icircn condiţiile icircn care

rezultatele obţinute prin metoda citometriei icircn flux nu au arătat existenţa unei corelaţii intre

expresia PPARα şi CA la pacienţii cu SM considerăm că ar fi necesar studiul

polimorfismului genei PPARA care ar putea aduce informaţii importante cu privire la

implicarea acestor receptori icircn apariţia obezităţii de tip central Subliniem acest lucru deoarece

obezitatea este o boală plurifactorială icircn care pe lacircngă factorii ereditari sunt implicaţi factori

de mediu psihologici şi sociali (245) Existenţa unei componente genetice a aterosclerozei

este legată şi de prezenţa unor variante ale genei PPARA asociate cu creşterea incidenţei bolii

cardiovasculare (82) şi a SM (249) Icircn studiul nostru am constatat o scădere statistic

semnificativă a nivelului expresiei relative a receptorilor PPARα icircn Eo la subiecţii cu

antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială comparativ cu subiecţii fără istoric

familial de hipertensiune (figura 537) Deşi diferenţele calculate icircntre loturile studiate nu au

icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică la subiecţii care au declarat prezenţa

antecedentelor familiale de hipertensiune arterială remarcăm o tendinţă de scădere a

intensităţii medii de fluorescenţă pentru Ac anti-PPARα la nivelul Mo (figura 515 P = 006

) icircn timp ce expresia relativă a CD36 icircnregistrează o creştere la acesti subiecţi (figura 545 P

= 008) Icircn contextul riscului cardiovascular foarte icircnalt al pacienţilor cu SM amintim şi

existenţa corelaţiei pozitive dintre valorile tensiunii arteriale diastolice şi expresia relativă a

receptorului CD36 (r = 0483 P = 0013) Această constatare este icircn consens cu studiile care

au arătat că forma solubilă circulantă a CD36 este asociată cu factorii de risc cardiovasculari

fiind propusă ca un marker precoce al aterosclerozei Activarea PPARα este asociată cu

modularea metabolismului lipidic iar agoniştii PPARα sunt utilizaţi icircn mod curent pentru

tratamentul dislipidemiei Sub acţiunea agoniştilor PPARα se obţine o icircmbunătăţire a funcţiei

endoteliale şi a parametrilor reologici funcţiile pleiotropice ale agoniştilor PPARα fiind

dovedite icircn trialuri clinice controlate Icircn populaţiile de Mo şi Ly la pacienţii cu SM

cercetarea noastră a evidenţiat o asociere negativă icircntre nivelul de expresie relativă a

receptorilor PPARα şi concentraţia TG serice (figura 551) Astfel scăderea expresiei

receptorilor PPARα este asociată cu creşterea nivelului TG serice contribuind la profilul

lipidic aterogen din SM Icircn conformitate cu literatura de specialitate icircn studiul efectuat prin

metoda citometriei icircn flux am găsit prezenţa asocierii icircntre nivelul de expresie al PPARα şi

HDL-colesterol Corelaţia pozitivă dintre nivelul de expresie relativă PPARα şi concentraţia

HDL-colesterolului a fost observată icircn lotul martor icircn populaţiile de Mo (r = 035 P = 005)

şi Ly ( r = 036 P = 004) (figura 553) susţinacircnd faptul că stimularea receptorilor PPARα

este legată de creşterea nivelului seric al lipoproteinelor cu densitate crescută La pacienţii cu

SM corelaţia dintre expresia PPARα şi HDL-colesterol a fost evidenţiată icircn populaţiile de Mo

(r = 046 P = 0019) şi eozinofile (r = 044 P = 0024) Se desprinde concluzia că icircn

sindromul metabolic scăderea concentraţiei HDL-colesterol este legată de diminuarea

nivelului de expresie relativă a receptorilor nucleari PPARα icircntărind afirmaţiile legate de

rolul acestor receptori icircn progresia bolilor cardiovasculare Studiind reactanţii de fază acută

analiza statistică a relevat o diferenţă semnificativă din punct de vedere statistic icircntre valorile

fibrinogenului la pacienţii cu SM atunci cacircnd au fost comparaţi cu subiecţii fără SM

(Capitolul IV4 P lt0 001 figura 427A) De asemenea icircn Capitolul V dedicat studiul

expresiei relative a receptorilor PPARα studiul valorilor fibrinogenului a arătat creşterea

acestui reactant de faza acută icircn lotul cu SM comparativ cu lotul martor (P lt0 0001) Icircn

studiul nostru am calculat o corelaţie invers proporţionala (r = - -036 fig 555B) icircntre

nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile şi concentraţia serică a

fibrinogenului Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P = 008) am reţinut

această asociere deoarece am demonstrat că nivelul de expresie relativă al receptorilor

PPARα icircn eozinofile este mai scăzut icircn sindromul metabolic iar sindromul metabolic este

caracterizat printr-un status inflamator cronic status caracterizat şi de creşterea concentraţiei

serice a fibrinogenului De asemenea notam ca această corelaţie negativă se află icircn

concordanţă cu studiile care arata că tratamentul cu agonişti PPARα (fibraţi) determina

scăderea nivelului seric al fibrinogenului contribuind la diminuarea inflamaţiei cronice din

sindromul metabolic şi icircn consecinţă amelioracircnd insulinorezistenţa

LIMITE ȘI DIFICULTĂȚI IcircN CERCETARE

Icircn cadrul Tezei de Doctorat am desfăşurat o cercetare care şi-a propus studierea

expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Recrutarea anamneza şi examinarea

clinică a subiecţilor au fost realizate icircn cadrul Cabinetului de Medicină de Familie CMI Popa

Elena din Iaşi iar determinările hematologice şi biochimice s-au efectuat icircn cadrul

Laboratorului Ambulatorului de Specialitate al Spitalului Universitar ldquoSfacircntul Spiridon din

Iaşi Icircn studiul epidemiologic şi al markerilor inflamatori al sindromului metabolic desfăşurat

au fost incluşi un număr de 1530 de participanţi pe baza liberului consimţămacircnt examinaţi icircn

perioada 01012013 - 31122013 Icircn continuare icircn perioada 1012014 - 28022014 pe baza

criteriilor de includere şi excludere icircn cele două loturi de studiu am investigat un număr de 57

de subiecţi prezentaţi la consultaţie icircn această perioadă şi care au icircndeplinit criteriile de

includere icircn cele două loturi (Lot SM şi Lot Control) constituite pentru evaluarea nivelului de

expresie a receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Explorarea nivelului de expresie

relativă a receptorilor PPARα s-a desfăşurat icircn cadrul Laboratorului de Biologie Moleculară

de pe platforma Institutului Regional de Oncologie Datorită resurselor proprii financiare

limitate trebuie să subliniez că aceasta cercetare nu ar fi fost posibilă fără contribuţia unor

cercetători din domeniul medical care m-au sprijinit necondiţionat atacirct icircn elaborarea

protocolului de lucru cacirct şi icircn efectuarea propriu-zisă a studiului Icircn acest sens menţionăm şi

faptul că pentru studiul receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic am utilizat aparatura

Laboratorului de Biologie Moleculară (care deserveşte icircntreaga Regiune a Moldovei) Pe

această cale mulţumesc personalului Laboratorului de Biologie Moleculară pentru ajutorul

acordat icircn desfăşurarea cercetării doctorale icircn condiţiile icircn care se observa creşterea

numărului de pacienţi care se adresează acestei platforme de cercetare Mulţumesc de

asemenea şi Doamnei Doctor Elena Butoi din cadrul Institutului de Biologie şi Patologie

Moleculară ldquoNicolae Simionescurdquo Bucureşti) pentru donaţia anticorpului secundar anti-

FITC Icircn consecinţă pentru recrutarea unui număr mai mare de participanţi ar fi fost necesară

icircn primul racircnd obţinerea unor resurse financiare suplimentare pentru achiziţia de aparatură şi

reactivi Totuşi numărul subiecţilor recrutaţi este apropiat de numărul subiecţilor raportaţi icircn

cadrul unor granturi de cercetare care aveau ca ţinta studiul expresiei receptorilor PPARα

(212 227 228 231) Rezultatele obţinute continua seria lucrărilor care arata importanta

studiului mecanismelor etiopatogenice ale sindromului metabolic patologie care se afla icircntr-o

continuă creştere La pacienţii cu SM pe lacircngă diminuarea nivelului de expresie a receptorilor

PPARα icircn eozinofile ne aşteptam şi la evidenţierea unor modificări icircn expresia PPARα şi icircn

populaţiile de Ly Mo şi PMN Acest fapt poate fi explicat de utilizarea unor celule provenite

de la pacienţi fără afectare cardiovasculară fără diabet zaharat şi necesită continuarea

studiului pe culturi celulare icircn condiţii de stimulare cu agonişti PPARα deziderat care

impune continuarea investigării expresiei PPARα printr-un grant de cercetare

ORIGINALITATEA ȘI CONTRIBUȚIILE INOVATIVE ALE TEZEI DE

DOCTORAT PERSPECTIVE DE CERCETARE

Evaluarea nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn leucocitele circulante

aduce noi perspective icircn studiul obezităţii şi sindromului metabolic Importanta studiului

expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic derivă din prevalenta crescută a

sindromului metabolic icircn populaţia cercetată la care se adaugă riscul cardiovascular foarte

icircnalt al acestor pacienţi cu implicaţii majore icircn sănătatea publică Rolul receptorilor PPARα

icircn inflamaţie şi aterogeneza este binecunoscut dar studiul nostru este primul care a arătat că

nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα este semnificativ mai scăzut in populatiile

de eozinofile la pacienţii cu SM Această concluzie coroborata cu existenţa unei stracircnse

asocieri intre expresia receptorilor PPARα la nivelul Mo limfocitelor şi PMNlor creeaza

ipoteza existenţei unui mecanism de control diferit al expresiei PPARα la nivelul

eozinofilelor Această cercetare aduce informaţii importante referitoare la mecanismele

proinflamatorii care stau la baza insulinorezistenţei şi riscului cardiometabolic şi impune

continuarea studiului acestor receptori nucleari prin citometrie icircn flux metodă care poate fi

aplicată şi la scara mai largă dacă sunt asigurate resursele materiale necesare cercetării

Cercetarea prin citometrie icircn flux poate fi completată de studiul polimorfismului genei

PPARA şi astfel se pot identifica timpuriu indivizii cu potenţial risc cardiometabolic crescut

Studiul receptorilor PPARα a stabilit conexiuni cu factori proinflamatori şi aterogenetici iar

continuarea cercetării poate aduce şi elemente noi de diagnostic precoce icircn sindromul

metabolic contribuind la icircmbunătăţirea prognosticului acestor pacienţi

CONCLUZII FINALE

1 Aplicarea scorului de SM alături de implementarea algoritmului electronic de diagnostic

contribuie la o prelucrare rapidă eficientă și standardizată a informaţiilor la nivelul

medicinei primare

2 Prevalenţa SM calculată astfel icircn cadrul studiului este crescută (2732) icircn concordanţă

cu datele raportate

3 Controlul factorilor de risc cardiometabolici incluşi icircn SM se poate realiza prin

managementul stilului de viaţă (scăderea greutăţii corporale prin combaterea

sedentarismului şi adoptarea unei diete antiaterogene şi hipocalorice) şi administrarea

terapiei medicamentoase

4 Este necesară adoptarea unei politici de sănătate publică pentru prevenirea creşterii icircn

populaţie a prevalenţei obezităţii şi a diabetului zaharat

5 Noi metode de cercetare icircn domeniul SM axate pe diagnosticarea precoce şi cuantificarea

eficientă a acestuia duce la diminuarea incidenței evenimentelor cardiovasculare majore

6 Sindromul metabolic se caracterizează printr-un status inflamator cronic

7 Valorile Non-HDL-colesterolului şi a raportului de aterogenitate sunt semnificativ mai

mari la pacienţii cu SM

8 Dintre reactanţii de faza acută am observat că valoarea medie a fibrinogenului este mai

crescută icircn lotul cu SM

9 Valorile eozinofilelor sunt crescute icircn sindromul metabolic iar explorarea relaţiei dintre

eozinofile şi obezitate constituie una din direcţiile de studiu actuale ale sindromului

metabolic

10 Evaluarea markerilor inflamatori icircn contextul sindromului metabolic este utilă icircn

evaluarea complexă a a factorilor de risc cardiometabolici

11 Prin metoda citometriei icircn flux am demonstrat prezenta Receptorilor Activaţi de

Inductorii Proliferării Peroxizomilor ndash Alpha (PPARα) icircn toate populaţiile de leucocite

studiate (Mo limfocite PMN eozinofile) atacirct icircn lotul pacienţilor cu SM cacirct şi icircn lotul

martor

12 Utilizacircnd intensitatea medie de fluorescenţă a anticorpilor anti- PPARα am arătat că

nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile este semnificativ mai redus

la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali

13 Acest studiu este primul care a demonstrat existenţa unei scăderi statistic semnificative a

nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofilele pacienţilor cu SM

confirmacircnd cercetările recente care au evidenţiat rolul eozinofilelor şi al receptorilor

PPARα icircn obezitate reglarea inflamaţiei cronice şi aterogeneza

14 Contrar aşteptărilor noastre icircn populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările

efectuate icircn cele două loturi de studiu (cu şi fără sindom metabolic) nu am evidenţiat

diferenţe statistic seminificative icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα la

subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali

15 Icircn populaţiile de Mo limfocite şi polimorfonucleare am observat corelaţii puternice

semnificativ statistic icircntre expresia PPARα icircn aceste tipuri celulare sugeracircnd existenţa

unui mecanism unic de control al inflamaţiei cronice la nivelul acestor celule probabil

diferit de cel din eozinofile

16 La subiecţii cu SM expresia relativă a PPARα icircn Eo este invers asociată cu expresia

receptorului CD36 (receptor al particulelor de ox - LDL şi propus ca un marker precoce al

aterosclerozei) dovedind rolul antiinflamator al receptorilor PPARα la nivel endotelial

17 La pacienţii cu antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială nivelul de

expresie al receptorilor PPARα icircn eozinofile şi Mo este diminuat comparativ cu subiecţii

fără antecedente familiale de hipertensiune arterială Putem spune că studiul efectuat de

noi aduce informaţii importante legate de geneză aterosclerozei şi hipertensiunii arteriale

18 Prin studiul asocierilor dintre receptorii PPARα şi componentele clinice ale sindromului

metabolic am arătat rolul acestor receptori icircn determinismul obezităţii de tip central

nivelul expresiei relative a receptorilor PPARα fiind invers proporţional cu circumferinţa

abdominală

19 Icircn acelaşi timp nivelul de expresie a PPARα icircn sindromul metabolic este asociat pozitiv

cu concentraţia serică a HDL-colesterolului şi invers asociat cu nivelul trigliceridelor

serice dovedind rolul acestor receptori icircn diminuarea procesului inflamator cronic de la

nivel vascular

20 La pacienţii cu SM scăderea expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofile este corelată cu

creşterea unor markeri ai sindromului inflamator cronic cardiometabolic (acid uric

fibrinogen) ilustracircnd importanta receptorilor icircn reglarea status-ului inflamator cronic din

sindromul metabolic

21 Utilizarea metodei flowcitometrice pentru studiul expresiei relative a receptorilor PPARα

icircn leucocite a adus informaţii importante cu privire la mecanismele moleculare de control

implicate icircn patogenia bolilor cardiometabolice icircn concordanţă cu cercetările care descriu

expresia PPAR icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale bronşice

keratinocite)

BIBLIOGRAFIE SELECTIVA

1 Kahn R Metabolic syndrome- what is the clinical usefulness Lancet 2008371(9628)1892-3

2 Reaven GM The metabolic syndrome is this diagnosis necessary Am J Clin Nutr 2006 83(6)1237-7

3 Grundy SM Pre-Diabetes Metabolic Syndrome and Cardiovascular Risk J Am Coll Cardiol 201259(7)

635-43

4 International Diabetes Federation IDF Diabetes Atlas 6th edn International Diabetes Federation Belgium

Brussels 20131-155

5 World Health Organization Global Status Report on Noncommunicable Diseases 2010 World Health

Organization Geneva Switzerland 20111-176

6 Coman AE Petrovanu R Sindromul metabolic in practica de ambulator Editura Pim Iaşi 2009 1-103

7 Grundy SM Becker D Clark LT et alThird Report of the National Cholesterol Education Program (NCEP)

Expert Panel on Detection Evaluation and Treatment of High Blood Cholesterol in Adults (Adult

Treatment Panel III) Final Report Circulation 2002106(25)3143-90

8 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J Metabolic syndrome- a new worldwide definition A Consensus Statement

from the International Diabetes Federation Diabet Med 2006 23(5)469-80

9 KG Alberti KG Eckel RH Grundy SM etal International Diabetes Federation task force on epidemiology

and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart Association World Heart

Federation International Atherosclerosis Society International Association for the study of obesity

Harmonizing the metabolic syndrome a joint interim statement of the International Diabetes Federation task

force on epidemiology and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart

Association World Heart Federation International Atherosclerosis society and International Association

for the study of obesity Circulation 2009120(16)1640-5

10 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J IDF Epidemiology Task Force The metabolic syndrome new

worldwide definition Lancet 2005 366 1059 - 62

11 Oleszczyk M Svab I Seifert B et al Primary healthcare in the developing part of Europe changes and

development in the former Eastern Bloc countries that joined the European Union following 2004 Med Sci

Monit 2009(15)78ndash84

12 Jung U J Choi M S Obesity and Its Metabolic Complications The Role of Adipokines and the

Relationship between Obesity Inflammation Insulin Resistance Dyslipidemia and Nonalcoholic Fatty

Liver Disease Int J Mol Sci 2014rsquo15(4) 6184-223

13 Vanden Heuvel JP Peters JM Peroxisome Proliferators In Ramos K (ed) Cellular and Molecular

Toxicology (Second Edition) Volume 2 New York Elsevier Science Inc 2010 145 - 67

14 Yessoufou A Wahli W Multifaceted roles of peroxisome proliferator-activated receptors (PPARs) at the

cellular and whole organism levels Swiss Med Wkl 2010140w13071 doi104414smw201013071

15 Azhar S Peroxisome proliferator-activated receptors metabolic syndrome and cardiovascular disease

Future Cardiology 20106(5)657-91

16 Andries G Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity

Diabetes and Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(Suppl)24-32

17 Zandbergen F Plutzky J PPARalpha in atherosclerosis and inflammation Biochim Biophys Acta

20071771(8)972-82

18 Straus DS Glass CK Anti-inflammatory actions of PPAR ligands new insights on cellular and molecular

mechanisms Trends Immunol 200728(12)551-8

19 Zlei M Zugun- Eloae F Carasevici E Citometrie icircn flux - Bază şi clinică Icircn Hinescu ME (ed) Citometrie icircn

flux - principii şi aplicaţii clinice Bucureşti Editura Viaţa Medicală Romacircnească 20111-128

20 Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity Diabetes and

Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(9)24-32

21 Woerly G Honda K Loyens M et al Peroxisome proliferator-activated receptors alpha and gamma down-

regulate allergic inflammation and eosinophil activation J Exp Med 2003198(3)411-21

22 Salle-Saumont D Brenuchon C Kanda A et al Peroxisome proliferator-activated receptor alpha regulates

skin inflammation and humoral response in atopic dermatitis J Clin Allergy Immunology 2008 21(4)962-8

23 Schote A Turner J Schiltz J et al Nuclear receptors in human immune cells expression and correlations

Mol Immunolog 200744(6)1436-45

24 DAmore S Vacca M Graziano G et al Nuclear receptors expression chart icircn peripheral blood

mononuclear cells identifies patients with Metabolic Syndrome Biochim Biophys Acta

20131832(12)2289-301

25 Uthurralt J Gordish-Dressman H Bradbury M T et al PPARalpha L162V underlies variation in serum

triglycerides and subcutaneous fat volume in young males BMC Med Genet 2007855

26 Hiukka A Leinonen ES Jauhiainen M et al Long-term effects of fenofibrate on VLDL and HDL

subspecies icircn participants with type 2 diabetes mellitus Diabetologia 2007 50(10)2067-75

27 Robins SJ Rubins HB Faas FH et alInsulin resistance and cardiovascular events with low HDL

cholesterol The Veterans Affairs HDL Intervention Trial (VA-HIT) Diabetes Care 2003 26(5)1513-7

28 Devaraj S Siegel D Jialal I Statin Therapy in Metabolic Syndrome and Hypertension Post-JUPITER

What is the Value of CRP Curr Atheroscler Rep 2011 13(1) 31ndash42

29 Imperatore G Riccardi G Iovino C et al Plasma Fibrinogen A New Factor of the Metabolic Syndrome A

population-based study Diabetes Care 19982 1(4)649-54

30 Krysiak R Gdula-Dymek A Bachowski R Okopien B Pleiotropic effects of atorvastatin and fenofibrate

in metabolic syndrome and different types of pre-diabete Diabetes Care 201033(10)2266-70

31 Hermans MP Impact of Fenofibrate on Type 2 Diabetes Patients with Features of the Metabolic Syndrome

Subgroup Analysis From FIELD Curr Cardiol Rev 20106(2)112-8

32 Silverstein R Inflammation atherosclerosis and arterial thrombosis Role of the scavenger receptor CD36

Cleveland Clinic Journal of Medicine 200976(Suppl 2)S27-S30

33 Hăncu N Obezitatea In Vereşiu IA (ed) Diabetul zaharat nutritia si bolile metabolice Volume 2 Editura

Echinox Cluj- Napoca 2010 1-15

Lista lucrări publicate

1 Elena Popa Maria Maidaniuc Agnes Bacusca Alamir Diaa Rodica Petrovanu Adorata Elena

Coman Disfuncţia endotelială ndash de la mecanisme moleculare la cuantifi care şi tratament icircn practica

medicală Practica Medicală 20149(3) 109-14

2 Elena Popa Agnes Bacusca Alamir Diaa Maria Maidaniuc Rodica Petrovanu Adorata Elena Coman

The function of insulin receptor (IRF) in evolution of obesity correlation with adipocytes diameters

Archives of the Balkan Medical Union 201449(3) 275-9

3 Elena Popa Florin Zugun-Eloae Mihaela Zlei Daniela Jitaru Oana Maria Pintilie Adorata Elena

Coman Maria Traian Didona Anca Ungureanu Eugen Carasevici - acceptata pentru numarul 42014

Flow cytometry analysis of PPAR-alpha receptors in metabolic syndrome) Revista Romană de

Medicină de Laborator(RRLM-D-14-00034R1- adeverinţa ataşată

Page 14: REZUMAT TEZĂ DE DOCTORAT - umfiasi.ro Doctorat/rezumat... · universitatea de medicinĂ Şi farmacie “grigore t. popa” iaŞi facultatea de medicinĂ rezumat tezĂ de doctorat

Figura 51 Optimizarea concentraţiei anticorpului anti-PPARα

Icircn concordanţă cu literatura de specialitate icircn cercetarea efectuată intensitatea medie

de fluorescenţă (MFI) a fost utilizată ca măsură pentru evaluarea expresiei celulare a

receptorilor PPARα (212) Un exemplu de analiză a probelor este reprezentat icircn figura 52

Figura 52 Exemplu de analiză flowcitometrică pentru receptorul nuclear PPARα Graficul din stacircnga reprezintă distribuţia leucocitelor iar cel din dreapta ilustrează distribuţia

intensităţii de fluorescenţă pentru populaţiile de celule selectate

Intensitatea Medie a Fluorescenţei (MFI) a CD36 ca o măsură a nivelului relativ de

expresie a acestor receptori la nivelul membranei Mo a fost detectată printr-o metodă

convenţională pentru marcare de suprafaţă şi evaluare pe bază de citometrie icircn flux folosind

aceleaşi probe de sacircnge cu EDTA cu focalizare pe Mo şi utilizacircnd CD14 ca marker specific

pentru Mo (figura 53)

Figura 53Analiza

flowcitometrică

pentru marcajul

CD14 - CD36

Rezultate

Icircn cele două loturi au fost incluşi icircn studiu un număr de 57 de participanţi care au fost

investigaţi din punct clinic şi paraclinic Vacircrsta subiecţilor incluşi icircn studiu a fost cuprinsă

icircntre 18 şi 79 ani iar vacircrsta medie calculată a avut valoarea de 4805 plusmn 1587 ani Pentru sexul

masculin vacircrsta medie este de 4925plusmn1617 ani iar pentru sexul feminin 4689 plusmn1 5ani

diferenţa obţinută icircntre vacircrstele pacienţilor fiind statistic nesemnificativă (P = 085)

Analizacircnd vacircrstele subiecţilor din cele două loturi am observat că vacircrsta medie a pacienţilor

cu SM (5476 plusmn 1183 ani) a fost semnificativ mai mare (t-test P = 0003) decacirct icircn lotul

martor (4258 plusmn 169 ani) Pentru diagnosticul sindromului metabolic am calculat scorul de

SM bazacircndu-ne pe criteriile Harmonised I Conform criteriilor diagnostice din cei 57 de

subiecţi investigaţi un număr de 26 participanţi (46) au fost incluşi icircn lotul cu SM (Lot

SM) iar 31 de subiecţi(54) nu au prezentat acest sindrom constituind lotul martor (Lot

Non-SM) Din punct de vedere al repartiţiei pe sexe nu au existat diferenţe statistic

semnificative raportul bărbaţifemei fiind de 0961 Din totalul celor 28 de bărbaţi incluşi icircn

studiu 4285 (12 bărbaţi) au icircntrunit cel puţin trei criterii diagnostice pentru SM fiind

incluşi icircn lotul SM Icircn acelaşi timp 14 femei reprezentacircnd 4827 din subiecţii de sex

feminin au icircntrunit condiţiile pentru includerea icircn lotul pacienţilor cu SM Valoarea medie

determinată pentru scorul de SM a arătat prezenţa unor valori semnificativ statistic mai mari

din punct (t-test P lt 00001) icircn lotul SM (769plusmn176) comparativ cu lotul martor (174 plusmn

184) Am studiat comparativ media valorilor măsurate ale criteriilor componentelor SM

Analiza statistică a arătat valori semnificativ statistic mai mari pentru CA TG glicemie TAS

şi TAD (plt0001) icircn lotul SM comparativ cu lotul normal Concomitent calculul statistica

evidenţiat o scăderea semnificativă a HDL-colesterolului icircn lotul cu SM comparativ cu

subiecţii din lotul martor (Non-SM) Aplicacircnd testul z am comparat ponderea pacienţilor

diagnosticaţi cu HTA dislipidemie şi tulburări ale metabolismului glucidic icircn lotul SM versus

lot Non-SM şi am constatat prezenţa acestor afecţiuni icircntr-un procent mai mare semnificativ

statistic icircn lotul SM ((plt0001)

Utilizacircnd testul t Student am calculat diferenţele statistice şi icircntre alți parametri

studiaţi care sunt factori de risc cardio-vascular dar care nu sunt componente ale SM Icircn lotul

cu SM valorile acidului uric fibrinogenului Col total Non-HDL-col şi LDL-col au fost

semnificativ mai mari comparativ cu lotul martor (tabel XXVI) Analizacircnd valorile medii ale

populaţiilor de leucocite am identificat doar pentru populaţia de Eo diferenţe statistice icircntre

cele două loturi numărul Eo icircn lotul SM fiind semnificativ mai mare decacirct icircn lotul martorTot

pentru caracterizarea celor două loturi am analizat prezenţa antecedentelor

heredocolaterale (AHC) de diabet zaharat boala cardiovasculară şi dislipidemie pentru toţi

subiecţii investigaţi Astfel existenţa AHC de HTA a fost declarată de 2580 din subiecţii

incluşi icircn lotul martor respectiv de 5384 din numărul pacienţilor cu SM Antecedentele

heredocolaterale de dislipidemie au fost prezente la 3461 din pacienţii cu SM icircn timp ce icircn

lotul martor anamneza a evidenţiat aceste antecedente la 3548 din subiecţi

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα

Icircn cercetarea desfăşurată am utilizat intensitatea medie de fluorescenţă (MFI) ca

măsură a nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn leucocitele studiate Pentru

populaţiile de leucocite analiza computerizată a probelor luate icircn studiu a furnizat valori

pentru MFI a receptorilor PPARα icircn funcţie de cantitatea de anticorpi anti-PPARα marcaţi cu

fluorocrom care se leagă de aceste celule şi apoi sunt captaţi de citometru (figura 59)

A Lot Non - SM

B Lot SM

Figura 59 Analiza flowcitometrică pentru receptorii PPARα icircn leucocite A lot normal B lot SM

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Mo

Analiza probelor efectuată conform protocolului de lucru descris a arătat prezenţa

PPARα icircn Mo recoltate din sacircngele tuturor subiecţilor incluşi icircn această cercetare Pentru toţi

participanţii investigaţi analiza MFI a Ac anti - PPARα icircn populaţia de Mo (Mo) a arătat un

interval de variaţie icircntre [786 395] Valoarea medie a nivelului de expresie relativă a PPARα

calculată pentru Mo a fost de 23210 plusmn7860 Pentru ambele loturi de studiu pacienţilor cu

SM testul Testul Shapiro-Wilk a arătat distribuţia normală a valorilor obţinute pentru nivelul

de expresie al PPARα icircn Mo

Tabel XXVIII Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn Mo

Lot SM Lot Non-SM

N 26 31

Media 22819 23538

SD 5819 7717

Mediana 22400 22600

Minimum 12800 78600

Maximum 35800 37900

Percentila 25 18300 18300

Percentila 75 26200 30350

Pentru pacienţii din lotul SM valoarea medie a MFI icircn Mo a fost de 22819 plusmn 5880 iar

pentru lotul martor s-a calculat o valoare medie a MFI a Ac anti-PPARα de 23538 plusmn 7717

Distribuţia statistică a frecvenţei valorilor MFI obţinute pentru nivelul de expresie a PPARα

icircn Mo subiecţilor din cele două loturi a fost reprezentată icircn figura 511

Figura 511 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti-PPARα icircn Mo

Sub forma unei diagrame de control Shewhart am reprezentat variaţia intensităţii medii de

fluorescenţă pentru anticorpii anti-PPARα icircn MoVariaţia nivelului de expresie relativă a

receptorilor PPARα icircn Mo subiecţilor studiaţi este ilustrată icircn fig 512 513

Figura 512 Lot SM Variaţia

expresiei relative a PPARα icircn Mo

Număr pacienţi

26

Minim 128

Maxim 358

Media 22819

DS 5819

25 din 26 valori ale MFI s-au icircncadrat

icircn intervalul Media plusmn 2DS

Figura 513 Lot Non-SM Variaţia

expresiei relative a PPARα icircn Mo

Număr pacienţi 31

Minimum 786

Maximum 379

Media 23538

DS 7717

Cu excepţia unei singure

determinări valorile calculate s-au

icircncadrat icircn Media plusmn 2DS

Utilizacircnd testul parametric t-Student pentru variabilele cu distribuţie normală am

comparat valoarea medie a intensităţii de fluorescenţă a Ac anti-PPARα icircn lotul cu SM versus

subiecţi fără SM (Lot Non-SM) Analiza statistică efectuată nu a identificat diferenţe icircntre

50 100 150 200 250 300 350 400 450

0

5

10

15

20

25

30

35

MFI anti-PPAR a

Frecv

enta

relati

va (

)

Lot SM

0 50 100 150 200 250 300 350 400 450 500

0

5

10

15

20

25

30

35

MFI anti-PPAR a

Frecv

enta

relati

va (

)

Lot martor

1 6 11 16 21 26 31

0

50

100

150

200

250

300

350

400

450

MFI

anti-

PPAR

a

2282

1106

3458

518

4046

Media

LCI

LCI

1 6 11 16 21 26 31 36

-100

0

100

200

300

400

500

MFI a

nti-PP

AR

a

2354

810

3897

39

4669LCS

LCI

Media

cele două loturi icircn ceea ce priveşte expresia PPARα la nivelul Mo circulante (t- Test P=

069)

Studiul receptorilor PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de AHC şi dislipidemie

Nivelul de expresie al receptorilor PPARα α icircn Mo tinde să fie mai scăzut la subiecţii

cu AHC de HTA comparativ subiecţii care nu au declarat AHC de HTA (P= 006 fig 515)

AHC HTA

Număr 22

Mediana 19950

Percentila 25 17800

Percentila 75 22700

AHC HTA absente

Număr 35

Mediana 24800

Percentila 25 19025

Percentila 75 31700

Figura 515 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Mo funcţie de AHC de HTA

Nu s-au calculat diferenţe semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor

PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de dislipidemie atunci cacircnd aceştia au fost comparaţi cu

subiecţii fără AHC de tulburări ale metabolismului lipidic (t- Test P= 020)

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn limfocite

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn populaţia de Ly a

demonstrat prezenţa receptorilor PPARα icircn Ly tuturor subiecţilor studiaţi Pentru toţi

participanţii investigaţi analiza MFI a Ac anti - PPARα icircn populaţia de Ly a relevat un

interval de variaţie icircntre [748 314] iar valoarea medie a MFI a fost de 18058 plusmn 5600

Pentru ambele loturi aplicarea testului Shapiro-Wilk a evidenţiat distribuţia normală a

valorilor determinate pentru nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Ly Pentru

pacienţii cu SM valoarea medie a MFI determinată pentru expresia PPARα icircn populaţia de

Ly a fost de 18178 plusmn 61 16 iar pentru lotul martor a fost de 16800 plusmn 5229

Tabel XXX Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn limfocite

Lot SM Lot Non-SM

N 26 31

Media 181781 179574

SD 611694 522907

Mediana 165000 168000

Minimum 81300 74800

Maximum 314000 301000

Percentila 25 13400 - 145750

Percentila 75 21800 21700

Distribuţia frecvenţei valorilor MFI a Ac anti-PPARα icircn Ly este redată icircn figura 518

Figura 518 Distribuţia frecvenţelor relative a MFI a Ac anti-PPARα icircn Ly

94 din determinările efectuate pentru determinarea nivelului de expresie relativă al

MFI

ant

iPPA

R

a_Mo

190

200

210

220

230

240

250

260

270

280

DA NU

AHC HTA

P=006

50 89 128 167 206 244 283 322 361 400

0

5

10

15

20

25

30

35

MFI anti-PPAR a

Frecv

enta

relati

va (

)

Lot SM

0 50 100 150 200 250 300 350

0

5

10

15

20

25

30

35

40

MFI anti-PPAR a

Frec

venta

relat

iva (

)

Lot Non-SM

receptorilor PPARα icircn limfocitele subiecţilor cu SM s-au icircncadrat icircn intervalul Media plusmn 2DS

Figura 5 19 Lot SM Variaţia expresiei

relative a PPARα icircn Ly

Număr pacienţi 26

Minimum 813

Maximum 31400

Media 18178

Deviaţia Standard 6116

25 valori s-au icircncadrat icircn Media plusmn 2DS

Pentru lotul Non-SM diagrama de control (figura 520) a arătat toate valorile

determinate pentru lotul Non-SM se icircncadrează icircntre LCS şi LCI

Figura 520 Lot Non -SM Variaţia

expresiei relative a PPARα icircn Ly

Număr pacienţi 31

Minimum 748

Maximum 30100

Media 179574

Deviaţia Standard 5229

96 din valori icircncadrate icircn Media plusmn 2DS

Aplicarea testului t-Student pentru valorile medii ale intensităţii de fluorescenţă ale

PPARα icircn Ly nu a arătat existenţa unei diferenţe statistic semnificative icircntre lotul cu SM şi

lotul martor(t- Test P= 088)

Analiza receptorilor PPARα icircn Ly subiecţilor cu AHC de HTA şi dislipidemie

Studiind populaţiile de Ly la subiecţii care au prezentat AHC de hipertensiune

arterială analiza flowcitometrică a relevat existenţa unor valori mai mici pentru MFI la aceşti

subiecţi comparativ cu cei fără AHC de HTA (fig 522) deşi scăderea observată nu a

icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică (t- Test P = 009)

AHC HTA

Număr 22

Mediana 16000

Percentila 25 12700

Percentila 75 17100

AHC HTA absenţe

Număr 35

Mediana 18700

Percentila 25 14900

Percentila 75 23175

Figura 522 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Ly funcţie de AHC de HTA

Nu am calculat diferenţe statistic semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor

PPARα icircn populaţiile de Ly ale subiecţilor la care am identificat AHC de dislipidemie

comparativ cu cei care nu au declarat antecedente familiale de dislipidemie (t- Test P= 051)

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn neutrofile (PMN)

Analiza flowcitometrică a evidenţiat prezenţa PPARα icircn PMN recoltate din sacircngele

venos al tuturor participanţilor la studiu Pentru toţi subiecţii investigaţi analiza MFI a Ac -

PPARα icircn populaţia de PMN a relevat un interval de variaţie de [163419] iar valoarea medie

a MFI pentru Ac anti-PPARα a fost de 26392 plusmn 7064 Testul Shapiro-Wilk a arătat o

distribuţie normală a valorilor intensităţii medii de fluorescenţă a anticorpilor anti-PPARα atacirct

icircn lotul pacienţilor cu SM cacirct şi icircn lotul martor

1 6 11 16 21 26 31

-50

0

50

100

150

200

250

300

350

400

MFI

anti-

PPAR

a

1818

595

3041

-17

3653

Media+2DS

Media- 2DS

1 6 11 16 21 26 31 36

0

50

100

150

200

250

300

350

MFI

ant

i-PPA

R

a

1796

750

2841

227

3364

Media+2DS

Media

Media- 2DS

MFI

anti-

PPAR

a Ly

130

140

150

160

170

180

190

200

210

DA NU

AHC HTA

P=009

Tabel XXXII Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn PMN

Lot SM Lot Non-SM

N 26 31

Media 26273 26480

SD 6915 7088

Mediana 25900 25500

Minimum 17200 16300

Maximum 39500 41900

Percentila 25 19800 19600

Percentila 75 30500 31500

Icircn cele două loturi distribuţia frecvenţei valorilor nivelului relativ de expresie a

receptorilor PPARα icircn PMN a fost reprezentată sub formă de histograme (fig 525)

Figura 525 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti-PPARα icircn PMN

Pentru cei 26 de pacienţi din lotul cu SM a valoarea medie a nivelului de expresie

relativă a receptorilor PPARα icircn PMN a fost de 26273 plusmn 6915 Studiind diagrama Shewhart

din figura 526 se observă că toate valorile obţinute pentru nivelul de expresie relativă

PPARα icircn PMN investigate se icircncadrează icircntre limitele definite de valorile medii plusmn 2DS

Figura 526 Lot SM

Variaţia expresiei relative a PPARα icircn

PMN

Număr pacienţi 26

Minimum 17200

Maximum 39500

Media 26273

Deviaţia Standard 6915

Valorile MFI icircncadrate icircn Media plusmn 2DS

Pentru lotul martor valoarea medie calculată a MFI a anticorpilor anti-PPARα a fost de

26480 plusmn 7088 peste 95 din valorile MFI fiind cuprinse icircn Media plusmn 2DS (figura 527)

Figura 527 Lot Non-SM Variaţia expresiei

relative a PPARα icircn PMN

Număr pacienţi 31

Minimum 16300

Maximum 41900

Media 26480

Deviaţia Standard 7088

30 valoriicircn Media plusmn 2DS

Pentru PMN analiza statistica nu a arătat existenţa unei diferenţe statistic semnificative icircntre

nivelul de expresie relativă a PPARα la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii din lotul

Non-SM (t- Test P= 090) Studiind populaţiile de PMN la subiecţii care au prezentat AHC

de HTA nu am calculat o diferenţă statistic semnificativă icircntre expresia receptorilor PPARα

la subiecţii cu istoric familial de hipertensiune arterială comparativ cu cei pentru care nu s-au

notat AHC de HTA (t- Test P= 013)De asemenea am identificat diferenţe icircntre nivelul de

expresie al PPARα icircn PMN subiecţilor care prezentau AHC de dislipidemie comparativ cu

cei fără AHC de dislipidemie (t- Test P= 017)

50 100 150 200 250 300 350 400 450 500

0

5

10

15

20

25

30

35

MFI anti-PPAR a

Frecve

nta rel

ativa (

)

Lot SM

50 100 150 200 250 300 350 400 450 500

0

5

10

15

20

25

30

MFI anti-PPAR a

Frecv

enta

relati

va (

)

Lot Non-SM

1 6 11 16 21 26 31

0

50

100

150

200

250

300

350

400

450

500

MFI

anti-

PPA

R

a

2627

1244

4010

553

4702

Media + 2DS

Media - 2 DS

Media

1 6 11 16 21 26 31 36

0

50

100

150

200

250

300

350

400

450

500

MFI

anti-

PPAR

a

2648

1230

4066

522

4774

Media+ 2DS

Media - 2DS

Media

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile Tabel XXXIV Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn Eo

Lot SM Lot Non-SM

N 26 31

Mediaplusmn SD 141057 plusmn 47604 172209 plusmn 37565

Mediana 142450 171300

Minimum 35000 68500

Maximum 233700 250600

Percentila 25 119300 153225

Percentila 75 169700 199550

Am studiat nivelul relativ de expresie a receptorilor PPARα icircn Eo iar rezultatele au

fost figurate sub forma de histograme (figura 532)

Figura 532 Distribuţia frecventelor relative ale valorilor MFI anti- PPARα icircn Eo

Din diagrama Shewhart (figura 533) se observă că toate valorile determinate pentru

nivelul de expresie relativă a PPARα icircn Eo pentru lotul SM s-au icircncadrat icircn [Media plusmn 3 DS]

peste 90 din determinări fiind cuprinse icircn [Media plusmn 2 DS] iar icircn [Media plusmn 1 DS] sunt

incluse peste 65 din valorile MFI

Figura 533 Lot SM

Variaţia expresiei relative a PPARα icircn Eo

Număr pacienţi 26

Minimum 35000

Maximum 233700

Media 141057

Deviaţia Standard 47604

24 valori icircncadrat eicircn [Media plusmn 2DS]

Pentru subiecţii incluşi icircn lotul martor analiza diagramei (figura 534) a arătat că

toate cele 31 de valori ale MFI pentru PPARα icircn Eo se icircncadrează icircn [Media plusmn 3DS] iar 30

dintre acestea se icircncadrează icircn [ Media plusmn 2 DS]

Figura 534 Lot Non -SM

Variaţia expresiei relative a PPARα icircn Eo

Număr pacienţi 31

Minimum 685

Maximum 2506

Media 172209

Deviaţia Standard 375 65

30 valori icircncadrate icircn [Media plusmn 2DS]

Comparacircnd subiecţii cu SM cu cei din lotul martor am observat o scădere

semnificativă statistic a MFI a Ac anti - PPARα icircn Eo pentru pacienţiir cu SM ( figura 535)

PPARα Eo Lot Non-SM

Număr 31

Mediana 171300

Percentila 25 152325

Percentila 75 199550

PPARα Eo Lot SM

Număr 26

Mediana 142450

Percentila 25 119300

Percentila 75 169700

Figura 5 35 Comparaţie icircntre nivelul de expresie a PPARα icircn Eo

0 500 1000 1500 2000 2500 3000

0

10

20

30

40

50

MFI anti-PPAR a

Frecvent

a relativa

()

Lot SM

400 800 1200 1600 2000 2400 2800

0

5

10

15

20

25

30

35

40

45

MFI anti-PPAR a

Frecenta

relativa

()

Lot Non-SM

1 6 11 16 21 26 31

-500

0

500

1000

1500

2000

2500

3000

MFI a

nti-PP

AR

a

14106

4765

23447

94

28117

Media + 2DS

Media- 2DS

LCI

LCS

1 6 11 16 21 26 31 36

500

1000

1500

2000

2500

3000

MFI an

ti-PPA

R a

17221

9708

24734

5951

28490

LCI

Media-2DS

Media

Media +2 DS

LCS

1200

1300

1400

1500

1600

1700

1800

1900

Lot SM Lot Non-SM

P=00072

Cu ajutorul curbei ROC am evaluat posibilitatea utilizării MFI a Ac anti - PPARα icircn

Eo ca marker pentru diagnosticul SM Valoarea MFI a Ac anti - PPARα icircn Eo care prezice cu

cea mai mare acurateţe prezenţa SM a fost de 1533 (punctul de ldquocut-offrdquo) pentru care am

calculat o sensibilitate de 5652 şi o specificitate de 7778 Calculul ariei AUC a furnizat

valoarea de 0663 şi deci determinarea parametrului MFI anti- PPARα icircn Eo are valoarea

unui test cu acurateţe redusatilde icircn diagnosticul SM Studiind expresia PPARα icircn Eo la subiecţii

care au prezentat AHC de HTA am observat o scădere semnificativă statistic (P = 00023) a

expresiei PPARα la subiecţii cu istoric familial de HTA comparativ cu subiecţii fatilderatilde AHC de

HTA (figura 537)

AHC HTA

Număr 22

Mediana 148800

Percentila 25 116425

Percentila 75 170750

AHC HTA absente

Număr 35

Mediana 170850

Percentila 25 143700

Percentila 75 195000

Figura 537 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Eo funcţie de AHC de HTA

Studiind subiecţii cu AHC declarate de dislipidemie nu am identificat diferenţe icircntre

nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Eo subiecţilor cu AHC de dislipidemie

comparativ cu cei care nu au declarat prezenţa AHC de dislipidemie (t - Test P = 067)

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor CD36

Am studiat expresia receptorilor CD36 icircn Mo subiecţilor incluşi icircn studiu

Lot Non - SM

BLot SM

Figura 539 Analiza flowcitometrica pentru receptorii CD36 icircn Mo

Pentru toţi participanţii la studiu valorile MFI au variat icircn intervalul [817 6933] iar

valoarea medie a MFI a Ac anti-CD36 a fost de 397133 plusmn 120902 Tabel XXXVII Statistică descriptivă pentru a CD36 icircn Mo

Lot SM Lot Non-SM

Media 429034 370377

Deviatia Standard 109051 125514

Mediana 411000 362800

Minimum 266400 81700

Maximum 693300 616800

Percentila 25 346200 273750

Percentila 75 469000 453300

Distribuţia frecvenţelor relative a MFI au fost prezentate sub formă histogramelor

Figura 541 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti - CD36 icircn Mo

MFI

ant

i-PPA

R a Eo

1000

1100

1200

1300

1400

1500

1600

1700

1800

1900

DA NU

AHC HTA

P=00023

1000 2000 3000 4000 5000 6000 7000 8000

0

5

10

15

20

25

MFI anti-CD36

Frecve

nta rela

tiva (

)

Lot SM

0 1778 3556 5333 7111

0

5

10

15

20

25

30

35

MFI anti-CD36

Frecve

nta rel

ativa (

)

Lot Non - SM

Referitor la lotul SM 92 din valorile MFI a Ac anti- CD36 s-au icircncadrat icircn

intervalul Media plusmn 2 DS (figura 542) iar pentru lotul martor peste 90 dintre acestea icircn

Media plusmn 2 DS (figura 543)

Figura 542 Lot SM

Variaţia MFI anti-CD36 icircn Mo

Număr pacienţi 26

Minimum 2664

Maximum 6933

Media 429034

Deviaţia Standard 109051

Figura 543 Lot Non -SM

Variaţia MFI anti- CD36 icircn Mo

Număr 31

Minimum 81700

Maximum 616800

Media 370377

Deviaţia Standard 125514

Comparacircnd subiecţii cu SM cu cei din lotul normal am constatat o tendinţă de creştere

a expresiei CD36 icircn lotul cu SM((t - Test P= 0067)

MFI anti - CD36 Lot Non-SM

Număr 31

Mediana 3628

Percentila 25 2737

Percentila 75 4533

MFI anti - CD36 Lot SM

Număr 26

Mediana 4110

Percentila 25 3462

Percentila 75 4690

Figura 544 Comparaţie icircntre cel două loturi privind MFI anti - CD36 icircn Mo

Referindu-ne la subiecţii cu AHC de HTA am observat o tendinţă de creştere a

valorilor MFI anti-CD36 comparativ cu cei care nu au avut AHC de HTA (t - Test P = 0 08)

AHC HTA

Număr 22

Mediana 442800

Percentila 25 355275

Percentila 75 519475

AHC HTA absenţe

Număr 35

Mediana 377400

Percentila 25 316900

Percentila 75 443400

Figura 545 Comparaţie icircntre expresia CD36 icircn Mo funcţie de AHC de HTA

Nu s-au calculat diferenţe semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor

PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de dislipidemie atunci cacircnd aceştia au fost comparaţi cu

subiecţii fără AHC de dislipidemie (t - Test P=031)

Corelaţii icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα si CD36

Studiind valorile intensităţii medii de fluorescenţă a Ac anti-PPARα icircn Mo Ly şi

PMN am observat că nivelul de expresie celularatilde a PPARα icircn Mo Ly şi PMN sunt corelate

puternic pozitiv atacirct icircn lotul SM cacirct şi icircn lotul martor(fig547 548)

1 6 11 16 21 26 31

0

1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

8000

Pacienti

MFI a

nti-CD

36

42903

21093

64714

10188

75619

LCI

Media

LCS1 6 11 16 21 26 31 36

-1000

0

1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

8000

MFI a

nti- C

D36

37038

11935

62141

-616

74692Media + 2 DS

Media

Media - 2 DS

3200

3400

3600

3800

4000

4200

4400

4600

4800

Lot SM Lot Non-SM

P = 00676

MFI

anti-

CD36

3400

3600

3800

4000

4200

4400

4600

4800

5000

DA NU

AHC HTA

P = 008

Figura 547 Studiul relatiilor dintre

receptorii PPARα icircn SM A Mo vs PMN B Mo vs Ly

C PMN vs Ly Graficul ilustrează coeficienţii r P dreapta de

regresie (linia centrala) intervalul de icircncredere

95 şi intervalul de predicţie 95

Figura 548 Corelaţii icircntre receptorii PPARα icircn lotul

martor

A Mo vs PMN

B Mo vs Ly

C PMN vs Ly

Tot pentru lotul SM cacircnd am evaluat relaţia dintre nivelul de expresie relativă a

receptorilor PPARα icircn Eo şi nivelul de expresie relativa a receptorilor CD 36 am obţinut o

corelaţie negativă (r = - 05 P = 001) (fig 549 A)

50 100 150 200 250 300 350 50

100

150

200

250

300

350

400

450

500

PPARα Ly

PPARα PMN

y = 56641 + 1159 x r = 086 P lt 0001

C

50 100 150 200 250 300 350 400 0

50

100

150

200

250

300

350

PPARα Mo

PPARα Ly

y = 36665 + 0607 x r = 090 P lt 0001

B

150 200 250 300 350 400 450 0

50 100 150 200 250 300 350 400 450 500

PPARα PMN

PPARα Mo

y = 2505 + 0879 x r = 081 P lt 0001

A

50 100 150 200 250 300 350

50 100 150 200 250 300 350 400 450 500

PPARα Ly

PPARα PMN

y = 95668 + 0919 x r = 081 P lt 0001

C

100 150 200 250 300 350 400

0

50

100

150

200

250

300

350

400

PPARα Mo

PPARα Ly

y = -7503 + 0829 x r = 079 P lt 0001

B

100 150 200 250 300 350 400

50

100

150

200

250

300

350

400

450

500

PPARα Mo

PPARα PMN

y = 61384 + 0882 r = 074 P lt 0001

A

Figura 549 Corelaţii icircntre expresia PPARα icircn Eo şi alte tipuri de receptori investigaţi A PPARα Eo şi CD 36 (Lot SM) B PPARα Eo şi PPARα Mo( Lot Non-SM)

Icircn lotul martor am identificat o asociere moderată pozitivă (r = 038 P = 0033) icircntre

nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Eo şi Mo (figura 549B) corelaţie absentă icircn

lotul pacienţilor cu SM

Corelaţii dintre receptorii studiaţi şi componentele sindromului metabolic

Icircn lotul de control analiza statistică a relevat faptul că icircntre circumferinţa

abdominală (CA ) şi nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Mo Ly şi PMN există o

corelaţie inversă adică scăderea expresiei PPARα la nivelul acestor populatii celulare ar fi

icircnsoţită de creşterea CA (figura 550

Figura 550Corelaţii dintre receptorii

PPARα si CA A Mo B Ly C PMN

La pacienţii cu SM am notat o corelatie moderată negativă statistic semnificativă

icircntre TG şi valorile MFI a Ac anti- PPARα icircn Mo şi Ly( fig 551)

150 200 250 300 350 400 450 50

60

70

80

90

100

110

PPARα PMN

CA r = - 040 P = 0024

C

50 100 150 200 250 300 350 50

60

70

80

90

100

110

PPARα Ly

CA r = - 046 P = 0009

B

50 100 150 200 250 300 350 400 50

60

70

80

90

100

110

PPARα Mo

CA r = - 042 P = 0017

A

50 100 150 200 250 300 350 400 500

1000

1500

2000

2500

3000

PPARα Mo

PPARα Eo

r = 038 P = 0033

B

0 500 1000 1500 2000 2500 1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

8000

PPARα Eo

CD36

r = 050 P = 0010

A

Figura 551 Lot SM Corelaţie icircntre expresia PPARα şi TG (A Mo B Ly)

Analizand corelatia dintre receptorii CD36 si valorile TA la pacientii cu SM am observat

o asociere pozitivă asteptată intre TAD si nivelul de expresie al receptorilor CD36 (fig 552)

Figura 552 Lot SM Corelaţii icircntre expresia

receptorilor CD36 şi valorile tensiunii arteriale

diastolice

Studiind corelaţiile dintre receptorii PPARα şi HDL-col la subiecţii din lotul martor am

notat o asociere pozitivă icircntre expresia PPARα icircn Mo şi Ly cu HDL-col (fig 553)

Figura 553 Lot martor Corelaţii icircntre HDL-col şi expresia PPARα icircn Mo(A) Ly(B)

Icircn lotul normal am evidenţiat corelaţii pozitive moderate dar semnificative statistic icircntre

CA şi valorile TAS (r = 062 P lt 0001) respectiv TAD (r = 050 P=0004) precum şi icircntre

CA şi glicemia subiecţilor normali (r = 052 P = 0003) Aceste date icircmpreună cu relaţia

invers proporţională identificată icircntre HDL-col şi CA (r = 050 P = 001) susţin validitatea

acestui studiu Icircn lotul subiecţilor cu SM am observat o corelaţie moderat pozitivă icircntre

expresia PPARα icircn populaţiiile de Mo şi Eo şi concentraţia a HDL-col (fig 554)

B

100 150 200 250 300 350 20

30

40

50

60

70

80

90

100

PPARα Ly

HDL-col-(mgdl)

r = 036 P = 0046

A

150 200 250 300 350 400 20

30

40

50

60

70

80

90

100

PPARα Mo

HDL-col-(mgd)l

r = 035 P = 005

70 75 80 85 90 95 100 1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

8000

TAD (mmHg)

CD36

r = 048 P = 0013

B

50 100 150 200 250 300 350 -100

0

100

200

300

400

500

PPARα Ly

TG(mgdl)

r = - 042 P = 003

A

50 100 150 200 250 300 350 400 -100

0

100

200

300

400

500

PPARα Mo

TG ( mgdl) r =- 0 43 P = 0027

Figura 554 Corelaţii icircn SM icircntre HDL-col şi expresia PPARα icircn Mo (A) şi Eo(B)

Corelaţii icircntre nivelul de expresie relativă a PPARα şi markeri ai disfuncţiei

endoteliale şi inflamaţiei cronice

Deşi nu a icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică am reţinut corelaţia invers

proporţională (r = - 0331 P = 006) dintre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα

icircn PMN şi concentraţia serică a Non-HDL-colesterolului

Studiind relaţiile dintre parametri icircn lotul de pacienţi cu SM am observat o corelaţie

moderată invers proporţională icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Eo şi

acidul uric seric (figura 555 A) corelaţie absentă la subiecţii fără SM

Figura 555 Lot SM corelaţia dintre expresia PPARα icircn Eo şi acidul uric (A) respectiv

PPARα şi fibrinogen (B)

Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P=008) am notat pentru

pacienţii cu SM corelaţia invers proporţională dintre expresia PPARα icircn Eo şi concentraţia

serică a fibrinogenului ( figura 555B)

V5 Discuţii

Icircn cadrul lucrării de doctorat am studiat nivelul de expresie relativă a PPARα icircn

leucocitele pacienţilor cu SM comparativ cu cea a subiecţilor normali Expresia PPARα a fost

studiată icircn paralel cu cea a CD36 glicoproteină exprimată pe suprafaţa a numeroase celule

din organismul uman inclusiv pe cea a Mo şi macrofagelor Prin funcţia sa de receptor pentru

particulele oxidate de LDL CD36 cunoscut ca bdquoscavenger receptorrdquo de clasa B sau

bdquotrombospodin receptorrdquo contribuie la dezvoltarea inflamaţiei de la nivel endotelial şi

formarea plăcii de ateroscleroză Referitor la studiul PPARα icircn Eo icircn sindromul metabolic

menţionăm că studiul nostru este primul care arată că nivelul de expresie a proteinei PPARα

icircn Eo măsurat prin citometrie icircn flux este semnificativ mai redus la pacienţii care sunt

diagnosticaţi cu acest sindrom De asemenea icircn lotul cu SM cercetat icircn cadrul studiului

receptorilor PPARα numărul Eo circulante a fost semnificativ mai crescut la pacienţii cu SM

B

0 500 1000 1500 2000 2500 200

250

300

350

400

450

PPARα Eo o

Fibrinogen mgdl

r =- 036 P = 008

0 500 1000 1500 2000 2500 1 2 3 4 5 6 7 8 9

10 11

PPARα Eo_

Acid uric(mgdl) r = 048 P = 0014 A

0 500 1000 1500 2000 2500 10

20

30

40

50

60

70

80

PPARα Eo

HDL(mgdl)

r = 044 P = 0024

B

100 150 200 250 300 350 400 10

20

30

40

50

60

70

80

PPARα Mo

HDL( mgdl)

r = 046 P = 0019

A

(P = 003) Aceste constatări conduc la ipoteza că Eo joacă un rol special icircn mecanismele

patogenice declanşate icircn sindromul metabolic şi că receptorii PPARα sunt importanţi icircn

implicarea Eo icircn obezitate şi insulinorezistenţă Creşterea numărului de Eo circulante este

urmată de eliberarea mediatorilor proinflamatori iar reducerea expresiei PPARα icircn Eo

determină perturbarea mecanismelor de control al inflamaţiei cu exacerbarea cascadei

proinflamatorii Consecutiv se agravează disfuncţia endotelială şi se accelerează progresia

leziunilor de ateroscleroză Extrapolacircnd aceste ipoteze putem spune că asocierea raportată

dintre boala ischemică coronariană şi Eo poate fi şi consecinţa exacerbării cascadei

proinflamatorii de la nivel vascular produsă datorită scăderii expresiei PPARα icircn Eo iar

creşterea numărului de Eo circulante poate reprezenta o adaptare a organismului uman care

icircncearcă să suplinească deficitul de receptori PPARα Analizacircnd curba ROC pentru

intensităţile medii de fluorescenţă determinate pentru anticorpii anti- PPARα icircn Eo am

obţinut pentru acest biomarker o sensibilitate a testului de 565 şi o specificitate de 778

pentru un punct de cut-off de 1533 ( figura 536 ) Deşi aria AUC (Aria under the curve) egală

cu 0663 icircncadrează acest test ca avacircnd o acurateţe redusă observăm că că această valoare

este apropiată de determinările AUC pentru alţi factori (fibrinogen raport de aterogenitate

acid uric non- HDL-colesterol) cunoscuţi ca fiind implicaţi icircn aterogeneză şi inflamaţia

cronică (figura 431) Aceste remarci alături de faptul că icircn studiul receptorilor PPARα icircn

leucocite am inclus subiecţi la primul diagnostic de SM creează premisa integrării

determinării expresiei relative a receptorilor PPARα icircn diagnosticul complex al sindromului

metabolic Putem spune că icircn final studiul expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofilele

circulante se dovedește a fi util icircn diagnosticul precoce la nivel molecular al SM permiţacircnd

identificarea timpurie a unor indivizi cu risc cardiometabolic crescut Astfel intervenţia

precoce asupra subiecţilor cu deficit de PPARα icircn Eo contribuie la managementul eficient al

afecţiunilor degenerative icircn care inflamaţia cronică icircndeplineşte un rol primordial Referitor

la populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările efectuate prin citometrie de flux nu au

arătat existenţa unor diferenţe statistice icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα

la subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali Rezultatele noastre pot fi

consecinţa caracteristicilor loturilor studiate (icircn studiul nostru au fost incluşi subiecţi recrutaţi

la primul diagnostic de SM şi icircn absenţa stimulării receptorilor PPARα cu droguri agoniste

PPARα) dar icircn acelaşi timp pot apare diferenţe datorită metodei utilizate (231 232 233)

Făcacircnd o paralelă cu un studiu publicat icircn 2013 icircn Europa (231) care a arătat creşterea

nivelului de expresie al PPARα icircn Ly şi Mo observăm că deşi numărul de subiecţi a fost

aproximativ egal (57 participanţi icircn studiul nostru 60 icircn studiul DAmore) subiecţii icircn studiul

amintit au fost recrutaţi dintr-o clinică cu profil medical la primul diagnostic de SM icircn timp

ce metoda utilizată a fost PCR (Polymerase Chain Reaction) mult mai fidelă decacirct citometria

icircn flux icircn studiul receptorilor nucleari De asemenea DAmore nu investighează expresia

PPARα icircn Eo şi PMN icircn cercetare fiind incluse doar celulele CD14+ (predominant Mo) şi

CD14- (predominant Ly) Deşi nu am obţinut diferenţe statistic semnificative icircntre cele două

loturi referitoare la nivelul de expresie relativă a PPARα icircn Mo Ly şi PMN am observat

corelaţii puternice semnificative statistic icircntre expresia receptorilor PPARα icircn aceste tipuri

celulare Rezultatele obţinute sugerează existenţa unui mecanism diferit molecular de control

icircn eozinofile care reglează cantitatea de proteină PPARα icircn eozinofile versus alte tipuri de

leucocite (la pacienţii cu SM) şi acest lucru este icircn concordanţă cu cercetările care descriu

expresia PPARα mRNA icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale

bronşice keratinocite) Studiind prin citometrie de flux nivelul de expresie relativă a

receptorului CD36 la nivelul Mo am arătat prezenţa acestuia icircn Mo tuturor subiecţilor

investigaţi Analizacircnd valorile intensităţii medii de fluorescenţă a CD36 icircn loturile studiate

am observat o tendinţă de creştere la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali

confirmacircnd implicarea receptorului CD36 icircn patogeneza acestuia Referitor la expresia

receptorului CD36 rezultatele obţinute sunt icircn consens cu studii anterioare care au arătat

creşterea expresiei CD36 la pacienţii cu SM şi diabet zaharat Astfel pe lacircngă diferenţa icircn

expresia CD36 s-au raportat şi corelaţii inverse icircntre expresia proteinei CD36 şi nivelul

adiponectinei Acelaşi studiu a evidenţiat o corelaţie pozitivă intre expresia CD36 cu expresia

receptorilor PPAR gamma relaţia cu PPARα nefiind investigată

Analiza de subgrup a relaţiilor dintre componentele SM și elementele moleculare

proinflamatorii studiate a relevat prezenţa unor asocieri semnificativ statistice icircntre acestea

Se argumentează astfel că veridicitatea studiului este susţinută de interdependenţele statistice

ale componentelor SM Determinarea coeficientului de corelaţie Icircn studiul nostru nivelul de

expresie relativă a PPARα s-a corelat moderat negativ (figura 550) cu CA a subiecţilor din

lotul normal pentru populaţiile celulare de Mo (r = - 0420 P = 001) Ly (r = - 046 P =

0009) şi PMN (r = - 040 P = 0024) date care sunt icircn concordanţă cu studiile care arată

rolul PPARα icircn furnizarea energiei prin beta-oxidarea acizilor graşi Icircn acelaşi timp icircn lotul

pacienţilor cu SM nu am identificat prezenţa unei asocieri icircntre nivelul de expresie relativă a

PPARα şi valoarea măsurată a CA Asocierea dintre expresia relativă a PPARα cu obezitatea

de tip central completează datele existente referitoare la reglarea homeostaziei energetice

conturacircnd un mecanism de control deficitar al aportului caloric al SM Icircn condiţiile icircn care

rezultatele obţinute prin metoda citometriei icircn flux nu au arătat existenţa unei corelaţii intre

expresia PPARα şi CA la pacienţii cu SM considerăm că ar fi necesar studiul

polimorfismului genei PPARA care ar putea aduce informaţii importante cu privire la

implicarea acestor receptori icircn apariţia obezităţii de tip central Subliniem acest lucru deoarece

obezitatea este o boală plurifactorială icircn care pe lacircngă factorii ereditari sunt implicaţi factori

de mediu psihologici şi sociali (245) Existenţa unei componente genetice a aterosclerozei

este legată şi de prezenţa unor variante ale genei PPARA asociate cu creşterea incidenţei bolii

cardiovasculare (82) şi a SM (249) Icircn studiul nostru am constatat o scădere statistic

semnificativă a nivelului expresiei relative a receptorilor PPARα icircn Eo la subiecţii cu

antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială comparativ cu subiecţii fără istoric

familial de hipertensiune (figura 537) Deşi diferenţele calculate icircntre loturile studiate nu au

icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică la subiecţii care au declarat prezenţa

antecedentelor familiale de hipertensiune arterială remarcăm o tendinţă de scădere a

intensităţii medii de fluorescenţă pentru Ac anti-PPARα la nivelul Mo (figura 515 P = 006

) icircn timp ce expresia relativă a CD36 icircnregistrează o creştere la acesti subiecţi (figura 545 P

= 008) Icircn contextul riscului cardiovascular foarte icircnalt al pacienţilor cu SM amintim şi

existenţa corelaţiei pozitive dintre valorile tensiunii arteriale diastolice şi expresia relativă a

receptorului CD36 (r = 0483 P = 0013) Această constatare este icircn consens cu studiile care

au arătat că forma solubilă circulantă a CD36 este asociată cu factorii de risc cardiovasculari

fiind propusă ca un marker precoce al aterosclerozei Activarea PPARα este asociată cu

modularea metabolismului lipidic iar agoniştii PPARα sunt utilizaţi icircn mod curent pentru

tratamentul dislipidemiei Sub acţiunea agoniştilor PPARα se obţine o icircmbunătăţire a funcţiei

endoteliale şi a parametrilor reologici funcţiile pleiotropice ale agoniştilor PPARα fiind

dovedite icircn trialuri clinice controlate Icircn populaţiile de Mo şi Ly la pacienţii cu SM

cercetarea noastră a evidenţiat o asociere negativă icircntre nivelul de expresie relativă a

receptorilor PPARα şi concentraţia TG serice (figura 551) Astfel scăderea expresiei

receptorilor PPARα este asociată cu creşterea nivelului TG serice contribuind la profilul

lipidic aterogen din SM Icircn conformitate cu literatura de specialitate icircn studiul efectuat prin

metoda citometriei icircn flux am găsit prezenţa asocierii icircntre nivelul de expresie al PPARα şi

HDL-colesterol Corelaţia pozitivă dintre nivelul de expresie relativă PPARα şi concentraţia

HDL-colesterolului a fost observată icircn lotul martor icircn populaţiile de Mo (r = 035 P = 005)

şi Ly ( r = 036 P = 004) (figura 553) susţinacircnd faptul că stimularea receptorilor PPARα

este legată de creşterea nivelului seric al lipoproteinelor cu densitate crescută La pacienţii cu

SM corelaţia dintre expresia PPARα şi HDL-colesterol a fost evidenţiată icircn populaţiile de Mo

(r = 046 P = 0019) şi eozinofile (r = 044 P = 0024) Se desprinde concluzia că icircn

sindromul metabolic scăderea concentraţiei HDL-colesterol este legată de diminuarea

nivelului de expresie relativă a receptorilor nucleari PPARα icircntărind afirmaţiile legate de

rolul acestor receptori icircn progresia bolilor cardiovasculare Studiind reactanţii de fază acută

analiza statistică a relevat o diferenţă semnificativă din punct de vedere statistic icircntre valorile

fibrinogenului la pacienţii cu SM atunci cacircnd au fost comparaţi cu subiecţii fără SM

(Capitolul IV4 P lt0 001 figura 427A) De asemenea icircn Capitolul V dedicat studiul

expresiei relative a receptorilor PPARα studiul valorilor fibrinogenului a arătat creşterea

acestui reactant de faza acută icircn lotul cu SM comparativ cu lotul martor (P lt0 0001) Icircn

studiul nostru am calculat o corelaţie invers proporţionala (r = - -036 fig 555B) icircntre

nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile şi concentraţia serică a

fibrinogenului Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P = 008) am reţinut

această asociere deoarece am demonstrat că nivelul de expresie relativă al receptorilor

PPARα icircn eozinofile este mai scăzut icircn sindromul metabolic iar sindromul metabolic este

caracterizat printr-un status inflamator cronic status caracterizat şi de creşterea concentraţiei

serice a fibrinogenului De asemenea notam ca această corelaţie negativă se află icircn

concordanţă cu studiile care arata că tratamentul cu agonişti PPARα (fibraţi) determina

scăderea nivelului seric al fibrinogenului contribuind la diminuarea inflamaţiei cronice din

sindromul metabolic şi icircn consecinţă amelioracircnd insulinorezistenţa

LIMITE ȘI DIFICULTĂȚI IcircN CERCETARE

Icircn cadrul Tezei de Doctorat am desfăşurat o cercetare care şi-a propus studierea

expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Recrutarea anamneza şi examinarea

clinică a subiecţilor au fost realizate icircn cadrul Cabinetului de Medicină de Familie CMI Popa

Elena din Iaşi iar determinările hematologice şi biochimice s-au efectuat icircn cadrul

Laboratorului Ambulatorului de Specialitate al Spitalului Universitar ldquoSfacircntul Spiridon din

Iaşi Icircn studiul epidemiologic şi al markerilor inflamatori al sindromului metabolic desfăşurat

au fost incluşi un număr de 1530 de participanţi pe baza liberului consimţămacircnt examinaţi icircn

perioada 01012013 - 31122013 Icircn continuare icircn perioada 1012014 - 28022014 pe baza

criteriilor de includere şi excludere icircn cele două loturi de studiu am investigat un număr de 57

de subiecţi prezentaţi la consultaţie icircn această perioadă şi care au icircndeplinit criteriile de

includere icircn cele două loturi (Lot SM şi Lot Control) constituite pentru evaluarea nivelului de

expresie a receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Explorarea nivelului de expresie

relativă a receptorilor PPARα s-a desfăşurat icircn cadrul Laboratorului de Biologie Moleculară

de pe platforma Institutului Regional de Oncologie Datorită resurselor proprii financiare

limitate trebuie să subliniez că aceasta cercetare nu ar fi fost posibilă fără contribuţia unor

cercetători din domeniul medical care m-au sprijinit necondiţionat atacirct icircn elaborarea

protocolului de lucru cacirct şi icircn efectuarea propriu-zisă a studiului Icircn acest sens menţionăm şi

faptul că pentru studiul receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic am utilizat aparatura

Laboratorului de Biologie Moleculară (care deserveşte icircntreaga Regiune a Moldovei) Pe

această cale mulţumesc personalului Laboratorului de Biologie Moleculară pentru ajutorul

acordat icircn desfăşurarea cercetării doctorale icircn condiţiile icircn care se observa creşterea

numărului de pacienţi care se adresează acestei platforme de cercetare Mulţumesc de

asemenea şi Doamnei Doctor Elena Butoi din cadrul Institutului de Biologie şi Patologie

Moleculară ldquoNicolae Simionescurdquo Bucureşti) pentru donaţia anticorpului secundar anti-

FITC Icircn consecinţă pentru recrutarea unui număr mai mare de participanţi ar fi fost necesară

icircn primul racircnd obţinerea unor resurse financiare suplimentare pentru achiziţia de aparatură şi

reactivi Totuşi numărul subiecţilor recrutaţi este apropiat de numărul subiecţilor raportaţi icircn

cadrul unor granturi de cercetare care aveau ca ţinta studiul expresiei receptorilor PPARα

(212 227 228 231) Rezultatele obţinute continua seria lucrărilor care arata importanta

studiului mecanismelor etiopatogenice ale sindromului metabolic patologie care se afla icircntr-o

continuă creştere La pacienţii cu SM pe lacircngă diminuarea nivelului de expresie a receptorilor

PPARα icircn eozinofile ne aşteptam şi la evidenţierea unor modificări icircn expresia PPARα şi icircn

populaţiile de Ly Mo şi PMN Acest fapt poate fi explicat de utilizarea unor celule provenite

de la pacienţi fără afectare cardiovasculară fără diabet zaharat şi necesită continuarea

studiului pe culturi celulare icircn condiţii de stimulare cu agonişti PPARα deziderat care

impune continuarea investigării expresiei PPARα printr-un grant de cercetare

ORIGINALITATEA ȘI CONTRIBUȚIILE INOVATIVE ALE TEZEI DE

DOCTORAT PERSPECTIVE DE CERCETARE

Evaluarea nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn leucocitele circulante

aduce noi perspective icircn studiul obezităţii şi sindromului metabolic Importanta studiului

expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic derivă din prevalenta crescută a

sindromului metabolic icircn populaţia cercetată la care se adaugă riscul cardiovascular foarte

icircnalt al acestor pacienţi cu implicaţii majore icircn sănătatea publică Rolul receptorilor PPARα

icircn inflamaţie şi aterogeneza este binecunoscut dar studiul nostru este primul care a arătat că

nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα este semnificativ mai scăzut in populatiile

de eozinofile la pacienţii cu SM Această concluzie coroborata cu existenţa unei stracircnse

asocieri intre expresia receptorilor PPARα la nivelul Mo limfocitelor şi PMNlor creeaza

ipoteza existenţei unui mecanism de control diferit al expresiei PPARα la nivelul

eozinofilelor Această cercetare aduce informaţii importante referitoare la mecanismele

proinflamatorii care stau la baza insulinorezistenţei şi riscului cardiometabolic şi impune

continuarea studiului acestor receptori nucleari prin citometrie icircn flux metodă care poate fi

aplicată şi la scara mai largă dacă sunt asigurate resursele materiale necesare cercetării

Cercetarea prin citometrie icircn flux poate fi completată de studiul polimorfismului genei

PPARA şi astfel se pot identifica timpuriu indivizii cu potenţial risc cardiometabolic crescut

Studiul receptorilor PPARα a stabilit conexiuni cu factori proinflamatori şi aterogenetici iar

continuarea cercetării poate aduce şi elemente noi de diagnostic precoce icircn sindromul

metabolic contribuind la icircmbunătăţirea prognosticului acestor pacienţi

CONCLUZII FINALE

1 Aplicarea scorului de SM alături de implementarea algoritmului electronic de diagnostic

contribuie la o prelucrare rapidă eficientă și standardizată a informaţiilor la nivelul

medicinei primare

2 Prevalenţa SM calculată astfel icircn cadrul studiului este crescută (2732) icircn concordanţă

cu datele raportate

3 Controlul factorilor de risc cardiometabolici incluşi icircn SM se poate realiza prin

managementul stilului de viaţă (scăderea greutăţii corporale prin combaterea

sedentarismului şi adoptarea unei diete antiaterogene şi hipocalorice) şi administrarea

terapiei medicamentoase

4 Este necesară adoptarea unei politici de sănătate publică pentru prevenirea creşterii icircn

populaţie a prevalenţei obezităţii şi a diabetului zaharat

5 Noi metode de cercetare icircn domeniul SM axate pe diagnosticarea precoce şi cuantificarea

eficientă a acestuia duce la diminuarea incidenței evenimentelor cardiovasculare majore

6 Sindromul metabolic se caracterizează printr-un status inflamator cronic

7 Valorile Non-HDL-colesterolului şi a raportului de aterogenitate sunt semnificativ mai

mari la pacienţii cu SM

8 Dintre reactanţii de faza acută am observat că valoarea medie a fibrinogenului este mai

crescută icircn lotul cu SM

9 Valorile eozinofilelor sunt crescute icircn sindromul metabolic iar explorarea relaţiei dintre

eozinofile şi obezitate constituie una din direcţiile de studiu actuale ale sindromului

metabolic

10 Evaluarea markerilor inflamatori icircn contextul sindromului metabolic este utilă icircn

evaluarea complexă a a factorilor de risc cardiometabolici

11 Prin metoda citometriei icircn flux am demonstrat prezenta Receptorilor Activaţi de

Inductorii Proliferării Peroxizomilor ndash Alpha (PPARα) icircn toate populaţiile de leucocite

studiate (Mo limfocite PMN eozinofile) atacirct icircn lotul pacienţilor cu SM cacirct şi icircn lotul

martor

12 Utilizacircnd intensitatea medie de fluorescenţă a anticorpilor anti- PPARα am arătat că

nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile este semnificativ mai redus

la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali

13 Acest studiu este primul care a demonstrat existenţa unei scăderi statistic semnificative a

nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofilele pacienţilor cu SM

confirmacircnd cercetările recente care au evidenţiat rolul eozinofilelor şi al receptorilor

PPARα icircn obezitate reglarea inflamaţiei cronice şi aterogeneza

14 Contrar aşteptărilor noastre icircn populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările

efectuate icircn cele două loturi de studiu (cu şi fără sindom metabolic) nu am evidenţiat

diferenţe statistic seminificative icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα la

subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali

15 Icircn populaţiile de Mo limfocite şi polimorfonucleare am observat corelaţii puternice

semnificativ statistic icircntre expresia PPARα icircn aceste tipuri celulare sugeracircnd existenţa

unui mecanism unic de control al inflamaţiei cronice la nivelul acestor celule probabil

diferit de cel din eozinofile

16 La subiecţii cu SM expresia relativă a PPARα icircn Eo este invers asociată cu expresia

receptorului CD36 (receptor al particulelor de ox - LDL şi propus ca un marker precoce al

aterosclerozei) dovedind rolul antiinflamator al receptorilor PPARα la nivel endotelial

17 La pacienţii cu antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială nivelul de

expresie al receptorilor PPARα icircn eozinofile şi Mo este diminuat comparativ cu subiecţii

fără antecedente familiale de hipertensiune arterială Putem spune că studiul efectuat de

noi aduce informaţii importante legate de geneză aterosclerozei şi hipertensiunii arteriale

18 Prin studiul asocierilor dintre receptorii PPARα şi componentele clinice ale sindromului

metabolic am arătat rolul acestor receptori icircn determinismul obezităţii de tip central

nivelul expresiei relative a receptorilor PPARα fiind invers proporţional cu circumferinţa

abdominală

19 Icircn acelaşi timp nivelul de expresie a PPARα icircn sindromul metabolic este asociat pozitiv

cu concentraţia serică a HDL-colesterolului şi invers asociat cu nivelul trigliceridelor

serice dovedind rolul acestor receptori icircn diminuarea procesului inflamator cronic de la

nivel vascular

20 La pacienţii cu SM scăderea expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofile este corelată cu

creşterea unor markeri ai sindromului inflamator cronic cardiometabolic (acid uric

fibrinogen) ilustracircnd importanta receptorilor icircn reglarea status-ului inflamator cronic din

sindromul metabolic

21 Utilizarea metodei flowcitometrice pentru studiul expresiei relative a receptorilor PPARα

icircn leucocite a adus informaţii importante cu privire la mecanismele moleculare de control

implicate icircn patogenia bolilor cardiometabolice icircn concordanţă cu cercetările care descriu

expresia PPAR icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale bronşice

keratinocite)

BIBLIOGRAFIE SELECTIVA

1 Kahn R Metabolic syndrome- what is the clinical usefulness Lancet 2008371(9628)1892-3

2 Reaven GM The metabolic syndrome is this diagnosis necessary Am J Clin Nutr 2006 83(6)1237-7

3 Grundy SM Pre-Diabetes Metabolic Syndrome and Cardiovascular Risk J Am Coll Cardiol 201259(7)

635-43

4 International Diabetes Federation IDF Diabetes Atlas 6th edn International Diabetes Federation Belgium

Brussels 20131-155

5 World Health Organization Global Status Report on Noncommunicable Diseases 2010 World Health

Organization Geneva Switzerland 20111-176

6 Coman AE Petrovanu R Sindromul metabolic in practica de ambulator Editura Pim Iaşi 2009 1-103

7 Grundy SM Becker D Clark LT et alThird Report of the National Cholesterol Education Program (NCEP)

Expert Panel on Detection Evaluation and Treatment of High Blood Cholesterol in Adults (Adult

Treatment Panel III) Final Report Circulation 2002106(25)3143-90

8 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J Metabolic syndrome- a new worldwide definition A Consensus Statement

from the International Diabetes Federation Diabet Med 2006 23(5)469-80

9 KG Alberti KG Eckel RH Grundy SM etal International Diabetes Federation task force on epidemiology

and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart Association World Heart

Federation International Atherosclerosis Society International Association for the study of obesity

Harmonizing the metabolic syndrome a joint interim statement of the International Diabetes Federation task

force on epidemiology and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart

Association World Heart Federation International Atherosclerosis society and International Association

for the study of obesity Circulation 2009120(16)1640-5

10 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J IDF Epidemiology Task Force The metabolic syndrome new

worldwide definition Lancet 2005 366 1059 - 62

11 Oleszczyk M Svab I Seifert B et al Primary healthcare in the developing part of Europe changes and

development in the former Eastern Bloc countries that joined the European Union following 2004 Med Sci

Monit 2009(15)78ndash84

12 Jung U J Choi M S Obesity and Its Metabolic Complications The Role of Adipokines and the

Relationship between Obesity Inflammation Insulin Resistance Dyslipidemia and Nonalcoholic Fatty

Liver Disease Int J Mol Sci 2014rsquo15(4) 6184-223

13 Vanden Heuvel JP Peters JM Peroxisome Proliferators In Ramos K (ed) Cellular and Molecular

Toxicology (Second Edition) Volume 2 New York Elsevier Science Inc 2010 145 - 67

14 Yessoufou A Wahli W Multifaceted roles of peroxisome proliferator-activated receptors (PPARs) at the

cellular and whole organism levels Swiss Med Wkl 2010140w13071 doi104414smw201013071

15 Azhar S Peroxisome proliferator-activated receptors metabolic syndrome and cardiovascular disease

Future Cardiology 20106(5)657-91

16 Andries G Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity

Diabetes and Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(Suppl)24-32

17 Zandbergen F Plutzky J PPARalpha in atherosclerosis and inflammation Biochim Biophys Acta

20071771(8)972-82

18 Straus DS Glass CK Anti-inflammatory actions of PPAR ligands new insights on cellular and molecular

mechanisms Trends Immunol 200728(12)551-8

19 Zlei M Zugun- Eloae F Carasevici E Citometrie icircn flux - Bază şi clinică Icircn Hinescu ME (ed) Citometrie icircn

flux - principii şi aplicaţii clinice Bucureşti Editura Viaţa Medicală Romacircnească 20111-128

20 Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity Diabetes and

Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(9)24-32

21 Woerly G Honda K Loyens M et al Peroxisome proliferator-activated receptors alpha and gamma down-

regulate allergic inflammation and eosinophil activation J Exp Med 2003198(3)411-21

22 Salle-Saumont D Brenuchon C Kanda A et al Peroxisome proliferator-activated receptor alpha regulates

skin inflammation and humoral response in atopic dermatitis J Clin Allergy Immunology 2008 21(4)962-8

23 Schote A Turner J Schiltz J et al Nuclear receptors in human immune cells expression and correlations

Mol Immunolog 200744(6)1436-45

24 DAmore S Vacca M Graziano G et al Nuclear receptors expression chart icircn peripheral blood

mononuclear cells identifies patients with Metabolic Syndrome Biochim Biophys Acta

20131832(12)2289-301

25 Uthurralt J Gordish-Dressman H Bradbury M T et al PPARalpha L162V underlies variation in serum

triglycerides and subcutaneous fat volume in young males BMC Med Genet 2007855

26 Hiukka A Leinonen ES Jauhiainen M et al Long-term effects of fenofibrate on VLDL and HDL

subspecies icircn participants with type 2 diabetes mellitus Diabetologia 2007 50(10)2067-75

27 Robins SJ Rubins HB Faas FH et alInsulin resistance and cardiovascular events with low HDL

cholesterol The Veterans Affairs HDL Intervention Trial (VA-HIT) Diabetes Care 2003 26(5)1513-7

28 Devaraj S Siegel D Jialal I Statin Therapy in Metabolic Syndrome and Hypertension Post-JUPITER

What is the Value of CRP Curr Atheroscler Rep 2011 13(1) 31ndash42

29 Imperatore G Riccardi G Iovino C et al Plasma Fibrinogen A New Factor of the Metabolic Syndrome A

population-based study Diabetes Care 19982 1(4)649-54

30 Krysiak R Gdula-Dymek A Bachowski R Okopien B Pleiotropic effects of atorvastatin and fenofibrate

in metabolic syndrome and different types of pre-diabete Diabetes Care 201033(10)2266-70

31 Hermans MP Impact of Fenofibrate on Type 2 Diabetes Patients with Features of the Metabolic Syndrome

Subgroup Analysis From FIELD Curr Cardiol Rev 20106(2)112-8

32 Silverstein R Inflammation atherosclerosis and arterial thrombosis Role of the scavenger receptor CD36

Cleveland Clinic Journal of Medicine 200976(Suppl 2)S27-S30

33 Hăncu N Obezitatea In Vereşiu IA (ed) Diabetul zaharat nutritia si bolile metabolice Volume 2 Editura

Echinox Cluj- Napoca 2010 1-15

Lista lucrări publicate

1 Elena Popa Maria Maidaniuc Agnes Bacusca Alamir Diaa Rodica Petrovanu Adorata Elena

Coman Disfuncţia endotelială ndash de la mecanisme moleculare la cuantifi care şi tratament icircn practica

medicală Practica Medicală 20149(3) 109-14

2 Elena Popa Agnes Bacusca Alamir Diaa Maria Maidaniuc Rodica Petrovanu Adorata Elena Coman

The function of insulin receptor (IRF) in evolution of obesity correlation with adipocytes diameters

Archives of the Balkan Medical Union 201449(3) 275-9

3 Elena Popa Florin Zugun-Eloae Mihaela Zlei Daniela Jitaru Oana Maria Pintilie Adorata Elena

Coman Maria Traian Didona Anca Ungureanu Eugen Carasevici - acceptata pentru numarul 42014

Flow cytometry analysis of PPAR-alpha receptors in metabolic syndrome) Revista Romană de

Medicină de Laborator(RRLM-D-14-00034R1- adeverinţa ataşată

Page 15: REZUMAT TEZĂ DE DOCTORAT - umfiasi.ro Doctorat/rezumat... · universitatea de medicinĂ Şi farmacie “grigore t. popa” iaŞi facultatea de medicinĂ rezumat tezĂ de doctorat

studiu 4285 (12 bărbaţi) au icircntrunit cel puţin trei criterii diagnostice pentru SM fiind

incluşi icircn lotul SM Icircn acelaşi timp 14 femei reprezentacircnd 4827 din subiecţii de sex

feminin au icircntrunit condiţiile pentru includerea icircn lotul pacienţilor cu SM Valoarea medie

determinată pentru scorul de SM a arătat prezenţa unor valori semnificativ statistic mai mari

din punct (t-test P lt 00001) icircn lotul SM (769plusmn176) comparativ cu lotul martor (174 plusmn

184) Am studiat comparativ media valorilor măsurate ale criteriilor componentelor SM

Analiza statistică a arătat valori semnificativ statistic mai mari pentru CA TG glicemie TAS

şi TAD (plt0001) icircn lotul SM comparativ cu lotul normal Concomitent calculul statistica

evidenţiat o scăderea semnificativă a HDL-colesterolului icircn lotul cu SM comparativ cu

subiecţii din lotul martor (Non-SM) Aplicacircnd testul z am comparat ponderea pacienţilor

diagnosticaţi cu HTA dislipidemie şi tulburări ale metabolismului glucidic icircn lotul SM versus

lot Non-SM şi am constatat prezenţa acestor afecţiuni icircntr-un procent mai mare semnificativ

statistic icircn lotul SM ((plt0001)

Utilizacircnd testul t Student am calculat diferenţele statistice şi icircntre alți parametri

studiaţi care sunt factori de risc cardio-vascular dar care nu sunt componente ale SM Icircn lotul

cu SM valorile acidului uric fibrinogenului Col total Non-HDL-col şi LDL-col au fost

semnificativ mai mari comparativ cu lotul martor (tabel XXVI) Analizacircnd valorile medii ale

populaţiilor de leucocite am identificat doar pentru populaţia de Eo diferenţe statistice icircntre

cele două loturi numărul Eo icircn lotul SM fiind semnificativ mai mare decacirct icircn lotul martorTot

pentru caracterizarea celor două loturi am analizat prezenţa antecedentelor

heredocolaterale (AHC) de diabet zaharat boala cardiovasculară şi dislipidemie pentru toţi

subiecţii investigaţi Astfel existenţa AHC de HTA a fost declarată de 2580 din subiecţii

incluşi icircn lotul martor respectiv de 5384 din numărul pacienţilor cu SM Antecedentele

heredocolaterale de dislipidemie au fost prezente la 3461 din pacienţii cu SM icircn timp ce icircn

lotul martor anamneza a evidenţiat aceste antecedente la 3548 din subiecţi

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα

Icircn cercetarea desfăşurată am utilizat intensitatea medie de fluorescenţă (MFI) ca

măsură a nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn leucocitele studiate Pentru

populaţiile de leucocite analiza computerizată a probelor luate icircn studiu a furnizat valori

pentru MFI a receptorilor PPARα icircn funcţie de cantitatea de anticorpi anti-PPARα marcaţi cu

fluorocrom care se leagă de aceste celule şi apoi sunt captaţi de citometru (figura 59)

A Lot Non - SM

B Lot SM

Figura 59 Analiza flowcitometrică pentru receptorii PPARα icircn leucocite A lot normal B lot SM

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Mo

Analiza probelor efectuată conform protocolului de lucru descris a arătat prezenţa

PPARα icircn Mo recoltate din sacircngele tuturor subiecţilor incluşi icircn această cercetare Pentru toţi

participanţii investigaţi analiza MFI a Ac anti - PPARα icircn populaţia de Mo (Mo) a arătat un

interval de variaţie icircntre [786 395] Valoarea medie a nivelului de expresie relativă a PPARα

calculată pentru Mo a fost de 23210 plusmn7860 Pentru ambele loturi de studiu pacienţilor cu

SM testul Testul Shapiro-Wilk a arătat distribuţia normală a valorilor obţinute pentru nivelul

de expresie al PPARα icircn Mo

Tabel XXVIII Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn Mo

Lot SM Lot Non-SM

N 26 31

Media 22819 23538

SD 5819 7717

Mediana 22400 22600

Minimum 12800 78600

Maximum 35800 37900

Percentila 25 18300 18300

Percentila 75 26200 30350

Pentru pacienţii din lotul SM valoarea medie a MFI icircn Mo a fost de 22819 plusmn 5880 iar

pentru lotul martor s-a calculat o valoare medie a MFI a Ac anti-PPARα de 23538 plusmn 7717

Distribuţia statistică a frecvenţei valorilor MFI obţinute pentru nivelul de expresie a PPARα

icircn Mo subiecţilor din cele două loturi a fost reprezentată icircn figura 511

Figura 511 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti-PPARα icircn Mo

Sub forma unei diagrame de control Shewhart am reprezentat variaţia intensităţii medii de

fluorescenţă pentru anticorpii anti-PPARα icircn MoVariaţia nivelului de expresie relativă a

receptorilor PPARα icircn Mo subiecţilor studiaţi este ilustrată icircn fig 512 513

Figura 512 Lot SM Variaţia

expresiei relative a PPARα icircn Mo

Număr pacienţi

26

Minim 128

Maxim 358

Media 22819

DS 5819

25 din 26 valori ale MFI s-au icircncadrat

icircn intervalul Media plusmn 2DS

Figura 513 Lot Non-SM Variaţia

expresiei relative a PPARα icircn Mo

Număr pacienţi 31

Minimum 786

Maximum 379

Media 23538

DS 7717

Cu excepţia unei singure

determinări valorile calculate s-au

icircncadrat icircn Media plusmn 2DS

Utilizacircnd testul parametric t-Student pentru variabilele cu distribuţie normală am

comparat valoarea medie a intensităţii de fluorescenţă a Ac anti-PPARα icircn lotul cu SM versus

subiecţi fără SM (Lot Non-SM) Analiza statistică efectuată nu a identificat diferenţe icircntre

50 100 150 200 250 300 350 400 450

0

5

10

15

20

25

30

35

MFI anti-PPAR a

Frecv

enta

relati

va (

)

Lot SM

0 50 100 150 200 250 300 350 400 450 500

0

5

10

15

20

25

30

35

MFI anti-PPAR a

Frecv

enta

relati

va (

)

Lot martor

1 6 11 16 21 26 31

0

50

100

150

200

250

300

350

400

450

MFI

anti-

PPAR

a

2282

1106

3458

518

4046

Media

LCI

LCI

1 6 11 16 21 26 31 36

-100

0

100

200

300

400

500

MFI a

nti-PP

AR

a

2354

810

3897

39

4669LCS

LCI

Media

cele două loturi icircn ceea ce priveşte expresia PPARα la nivelul Mo circulante (t- Test P=

069)

Studiul receptorilor PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de AHC şi dislipidemie

Nivelul de expresie al receptorilor PPARα α icircn Mo tinde să fie mai scăzut la subiecţii

cu AHC de HTA comparativ subiecţii care nu au declarat AHC de HTA (P= 006 fig 515)

AHC HTA

Număr 22

Mediana 19950

Percentila 25 17800

Percentila 75 22700

AHC HTA absente

Număr 35

Mediana 24800

Percentila 25 19025

Percentila 75 31700

Figura 515 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Mo funcţie de AHC de HTA

Nu s-au calculat diferenţe semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor

PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de dislipidemie atunci cacircnd aceştia au fost comparaţi cu

subiecţii fără AHC de tulburări ale metabolismului lipidic (t- Test P= 020)

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn limfocite

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn populaţia de Ly a

demonstrat prezenţa receptorilor PPARα icircn Ly tuturor subiecţilor studiaţi Pentru toţi

participanţii investigaţi analiza MFI a Ac anti - PPARα icircn populaţia de Ly a relevat un

interval de variaţie icircntre [748 314] iar valoarea medie a MFI a fost de 18058 plusmn 5600

Pentru ambele loturi aplicarea testului Shapiro-Wilk a evidenţiat distribuţia normală a

valorilor determinate pentru nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Ly Pentru

pacienţii cu SM valoarea medie a MFI determinată pentru expresia PPARα icircn populaţia de

Ly a fost de 18178 plusmn 61 16 iar pentru lotul martor a fost de 16800 plusmn 5229

Tabel XXX Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn limfocite

Lot SM Lot Non-SM

N 26 31

Media 181781 179574

SD 611694 522907

Mediana 165000 168000

Minimum 81300 74800

Maximum 314000 301000

Percentila 25 13400 - 145750

Percentila 75 21800 21700

Distribuţia frecvenţei valorilor MFI a Ac anti-PPARα icircn Ly este redată icircn figura 518

Figura 518 Distribuţia frecvenţelor relative a MFI a Ac anti-PPARα icircn Ly

94 din determinările efectuate pentru determinarea nivelului de expresie relativă al

MFI

ant

iPPA

R

a_Mo

190

200

210

220

230

240

250

260

270

280

DA NU

AHC HTA

P=006

50 89 128 167 206 244 283 322 361 400

0

5

10

15

20

25

30

35

MFI anti-PPAR a

Frecv

enta

relati

va (

)

Lot SM

0 50 100 150 200 250 300 350

0

5

10

15

20

25

30

35

40

MFI anti-PPAR a

Frec

venta

relat

iva (

)

Lot Non-SM

receptorilor PPARα icircn limfocitele subiecţilor cu SM s-au icircncadrat icircn intervalul Media plusmn 2DS

Figura 5 19 Lot SM Variaţia expresiei

relative a PPARα icircn Ly

Număr pacienţi 26

Minimum 813

Maximum 31400

Media 18178

Deviaţia Standard 6116

25 valori s-au icircncadrat icircn Media plusmn 2DS

Pentru lotul Non-SM diagrama de control (figura 520) a arătat toate valorile

determinate pentru lotul Non-SM se icircncadrează icircntre LCS şi LCI

Figura 520 Lot Non -SM Variaţia

expresiei relative a PPARα icircn Ly

Număr pacienţi 31

Minimum 748

Maximum 30100

Media 179574

Deviaţia Standard 5229

96 din valori icircncadrate icircn Media plusmn 2DS

Aplicarea testului t-Student pentru valorile medii ale intensităţii de fluorescenţă ale

PPARα icircn Ly nu a arătat existenţa unei diferenţe statistic semnificative icircntre lotul cu SM şi

lotul martor(t- Test P= 088)

Analiza receptorilor PPARα icircn Ly subiecţilor cu AHC de HTA şi dislipidemie

Studiind populaţiile de Ly la subiecţii care au prezentat AHC de hipertensiune

arterială analiza flowcitometrică a relevat existenţa unor valori mai mici pentru MFI la aceşti

subiecţi comparativ cu cei fără AHC de HTA (fig 522) deşi scăderea observată nu a

icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică (t- Test P = 009)

AHC HTA

Număr 22

Mediana 16000

Percentila 25 12700

Percentila 75 17100

AHC HTA absenţe

Număr 35

Mediana 18700

Percentila 25 14900

Percentila 75 23175

Figura 522 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Ly funcţie de AHC de HTA

Nu am calculat diferenţe statistic semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor

PPARα icircn populaţiile de Ly ale subiecţilor la care am identificat AHC de dislipidemie

comparativ cu cei care nu au declarat antecedente familiale de dislipidemie (t- Test P= 051)

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn neutrofile (PMN)

Analiza flowcitometrică a evidenţiat prezenţa PPARα icircn PMN recoltate din sacircngele

venos al tuturor participanţilor la studiu Pentru toţi subiecţii investigaţi analiza MFI a Ac -

PPARα icircn populaţia de PMN a relevat un interval de variaţie de [163419] iar valoarea medie

a MFI pentru Ac anti-PPARα a fost de 26392 plusmn 7064 Testul Shapiro-Wilk a arătat o

distribuţie normală a valorilor intensităţii medii de fluorescenţă a anticorpilor anti-PPARα atacirct

icircn lotul pacienţilor cu SM cacirct şi icircn lotul martor

1 6 11 16 21 26 31

-50

0

50

100

150

200

250

300

350

400

MFI

anti-

PPAR

a

1818

595

3041

-17

3653

Media+2DS

Media- 2DS

1 6 11 16 21 26 31 36

0

50

100

150

200

250

300

350

MFI

ant

i-PPA

R

a

1796

750

2841

227

3364

Media+2DS

Media

Media- 2DS

MFI

anti-

PPAR

a Ly

130

140

150

160

170

180

190

200

210

DA NU

AHC HTA

P=009

Tabel XXXII Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn PMN

Lot SM Lot Non-SM

N 26 31

Media 26273 26480

SD 6915 7088

Mediana 25900 25500

Minimum 17200 16300

Maximum 39500 41900

Percentila 25 19800 19600

Percentila 75 30500 31500

Icircn cele două loturi distribuţia frecvenţei valorilor nivelului relativ de expresie a

receptorilor PPARα icircn PMN a fost reprezentată sub formă de histograme (fig 525)

Figura 525 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti-PPARα icircn PMN

Pentru cei 26 de pacienţi din lotul cu SM a valoarea medie a nivelului de expresie

relativă a receptorilor PPARα icircn PMN a fost de 26273 plusmn 6915 Studiind diagrama Shewhart

din figura 526 se observă că toate valorile obţinute pentru nivelul de expresie relativă

PPARα icircn PMN investigate se icircncadrează icircntre limitele definite de valorile medii plusmn 2DS

Figura 526 Lot SM

Variaţia expresiei relative a PPARα icircn

PMN

Număr pacienţi 26

Minimum 17200

Maximum 39500

Media 26273

Deviaţia Standard 6915

Valorile MFI icircncadrate icircn Media plusmn 2DS

Pentru lotul martor valoarea medie calculată a MFI a anticorpilor anti-PPARα a fost de

26480 plusmn 7088 peste 95 din valorile MFI fiind cuprinse icircn Media plusmn 2DS (figura 527)

Figura 527 Lot Non-SM Variaţia expresiei

relative a PPARα icircn PMN

Număr pacienţi 31

Minimum 16300

Maximum 41900

Media 26480

Deviaţia Standard 7088

30 valoriicircn Media plusmn 2DS

Pentru PMN analiza statistica nu a arătat existenţa unei diferenţe statistic semnificative icircntre

nivelul de expresie relativă a PPARα la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii din lotul

Non-SM (t- Test P= 090) Studiind populaţiile de PMN la subiecţii care au prezentat AHC

de HTA nu am calculat o diferenţă statistic semnificativă icircntre expresia receptorilor PPARα

la subiecţii cu istoric familial de hipertensiune arterială comparativ cu cei pentru care nu s-au

notat AHC de HTA (t- Test P= 013)De asemenea am identificat diferenţe icircntre nivelul de

expresie al PPARα icircn PMN subiecţilor care prezentau AHC de dislipidemie comparativ cu

cei fără AHC de dislipidemie (t- Test P= 017)

50 100 150 200 250 300 350 400 450 500

0

5

10

15

20

25

30

35

MFI anti-PPAR a

Frecve

nta rel

ativa (

)

Lot SM

50 100 150 200 250 300 350 400 450 500

0

5

10

15

20

25

30

MFI anti-PPAR a

Frecv

enta

relati

va (

)

Lot Non-SM

1 6 11 16 21 26 31

0

50

100

150

200

250

300

350

400

450

500

MFI

anti-

PPA

R

a

2627

1244

4010

553

4702

Media + 2DS

Media - 2 DS

Media

1 6 11 16 21 26 31 36

0

50

100

150

200

250

300

350

400

450

500

MFI

anti-

PPAR

a

2648

1230

4066

522

4774

Media+ 2DS

Media - 2DS

Media

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile Tabel XXXIV Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn Eo

Lot SM Lot Non-SM

N 26 31

Mediaplusmn SD 141057 plusmn 47604 172209 plusmn 37565

Mediana 142450 171300

Minimum 35000 68500

Maximum 233700 250600

Percentila 25 119300 153225

Percentila 75 169700 199550

Am studiat nivelul relativ de expresie a receptorilor PPARα icircn Eo iar rezultatele au

fost figurate sub forma de histograme (figura 532)

Figura 532 Distribuţia frecventelor relative ale valorilor MFI anti- PPARα icircn Eo

Din diagrama Shewhart (figura 533) se observă că toate valorile determinate pentru

nivelul de expresie relativă a PPARα icircn Eo pentru lotul SM s-au icircncadrat icircn [Media plusmn 3 DS]

peste 90 din determinări fiind cuprinse icircn [Media plusmn 2 DS] iar icircn [Media plusmn 1 DS] sunt

incluse peste 65 din valorile MFI

Figura 533 Lot SM

Variaţia expresiei relative a PPARα icircn Eo

Număr pacienţi 26

Minimum 35000

Maximum 233700

Media 141057

Deviaţia Standard 47604

24 valori icircncadrat eicircn [Media plusmn 2DS]

Pentru subiecţii incluşi icircn lotul martor analiza diagramei (figura 534) a arătat că

toate cele 31 de valori ale MFI pentru PPARα icircn Eo se icircncadrează icircn [Media plusmn 3DS] iar 30

dintre acestea se icircncadrează icircn [ Media plusmn 2 DS]

Figura 534 Lot Non -SM

Variaţia expresiei relative a PPARα icircn Eo

Număr pacienţi 31

Minimum 685

Maximum 2506

Media 172209

Deviaţia Standard 375 65

30 valori icircncadrate icircn [Media plusmn 2DS]

Comparacircnd subiecţii cu SM cu cei din lotul martor am observat o scădere

semnificativă statistic a MFI a Ac anti - PPARα icircn Eo pentru pacienţiir cu SM ( figura 535)

PPARα Eo Lot Non-SM

Număr 31

Mediana 171300

Percentila 25 152325

Percentila 75 199550

PPARα Eo Lot SM

Număr 26

Mediana 142450

Percentila 25 119300

Percentila 75 169700

Figura 5 35 Comparaţie icircntre nivelul de expresie a PPARα icircn Eo

0 500 1000 1500 2000 2500 3000

0

10

20

30

40

50

MFI anti-PPAR a

Frecvent

a relativa

()

Lot SM

400 800 1200 1600 2000 2400 2800

0

5

10

15

20

25

30

35

40

45

MFI anti-PPAR a

Frecenta

relativa

()

Lot Non-SM

1 6 11 16 21 26 31

-500

0

500

1000

1500

2000

2500

3000

MFI a

nti-PP

AR

a

14106

4765

23447

94

28117

Media + 2DS

Media- 2DS

LCI

LCS

1 6 11 16 21 26 31 36

500

1000

1500

2000

2500

3000

MFI an

ti-PPA

R a

17221

9708

24734

5951

28490

LCI

Media-2DS

Media

Media +2 DS

LCS

1200

1300

1400

1500

1600

1700

1800

1900

Lot SM Lot Non-SM

P=00072

Cu ajutorul curbei ROC am evaluat posibilitatea utilizării MFI a Ac anti - PPARα icircn

Eo ca marker pentru diagnosticul SM Valoarea MFI a Ac anti - PPARα icircn Eo care prezice cu

cea mai mare acurateţe prezenţa SM a fost de 1533 (punctul de ldquocut-offrdquo) pentru care am

calculat o sensibilitate de 5652 şi o specificitate de 7778 Calculul ariei AUC a furnizat

valoarea de 0663 şi deci determinarea parametrului MFI anti- PPARα icircn Eo are valoarea

unui test cu acurateţe redusatilde icircn diagnosticul SM Studiind expresia PPARα icircn Eo la subiecţii

care au prezentat AHC de HTA am observat o scădere semnificativă statistic (P = 00023) a

expresiei PPARα la subiecţii cu istoric familial de HTA comparativ cu subiecţii fatilderatilde AHC de

HTA (figura 537)

AHC HTA

Număr 22

Mediana 148800

Percentila 25 116425

Percentila 75 170750

AHC HTA absente

Număr 35

Mediana 170850

Percentila 25 143700

Percentila 75 195000

Figura 537 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Eo funcţie de AHC de HTA

Studiind subiecţii cu AHC declarate de dislipidemie nu am identificat diferenţe icircntre

nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Eo subiecţilor cu AHC de dislipidemie

comparativ cu cei care nu au declarat prezenţa AHC de dislipidemie (t - Test P = 067)

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor CD36

Am studiat expresia receptorilor CD36 icircn Mo subiecţilor incluşi icircn studiu

Lot Non - SM

BLot SM

Figura 539 Analiza flowcitometrica pentru receptorii CD36 icircn Mo

Pentru toţi participanţii la studiu valorile MFI au variat icircn intervalul [817 6933] iar

valoarea medie a MFI a Ac anti-CD36 a fost de 397133 plusmn 120902 Tabel XXXVII Statistică descriptivă pentru a CD36 icircn Mo

Lot SM Lot Non-SM

Media 429034 370377

Deviatia Standard 109051 125514

Mediana 411000 362800

Minimum 266400 81700

Maximum 693300 616800

Percentila 25 346200 273750

Percentila 75 469000 453300

Distribuţia frecvenţelor relative a MFI au fost prezentate sub formă histogramelor

Figura 541 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti - CD36 icircn Mo

MFI

ant

i-PPA

R a Eo

1000

1100

1200

1300

1400

1500

1600

1700

1800

1900

DA NU

AHC HTA

P=00023

1000 2000 3000 4000 5000 6000 7000 8000

0

5

10

15

20

25

MFI anti-CD36

Frecve

nta rela

tiva (

)

Lot SM

0 1778 3556 5333 7111

0

5

10

15

20

25

30

35

MFI anti-CD36

Frecve

nta rel

ativa (

)

Lot Non - SM

Referitor la lotul SM 92 din valorile MFI a Ac anti- CD36 s-au icircncadrat icircn

intervalul Media plusmn 2 DS (figura 542) iar pentru lotul martor peste 90 dintre acestea icircn

Media plusmn 2 DS (figura 543)

Figura 542 Lot SM

Variaţia MFI anti-CD36 icircn Mo

Număr pacienţi 26

Minimum 2664

Maximum 6933

Media 429034

Deviaţia Standard 109051

Figura 543 Lot Non -SM

Variaţia MFI anti- CD36 icircn Mo

Număr 31

Minimum 81700

Maximum 616800

Media 370377

Deviaţia Standard 125514

Comparacircnd subiecţii cu SM cu cei din lotul normal am constatat o tendinţă de creştere

a expresiei CD36 icircn lotul cu SM((t - Test P= 0067)

MFI anti - CD36 Lot Non-SM

Număr 31

Mediana 3628

Percentila 25 2737

Percentila 75 4533

MFI anti - CD36 Lot SM

Număr 26

Mediana 4110

Percentila 25 3462

Percentila 75 4690

Figura 544 Comparaţie icircntre cel două loturi privind MFI anti - CD36 icircn Mo

Referindu-ne la subiecţii cu AHC de HTA am observat o tendinţă de creştere a

valorilor MFI anti-CD36 comparativ cu cei care nu au avut AHC de HTA (t - Test P = 0 08)

AHC HTA

Număr 22

Mediana 442800

Percentila 25 355275

Percentila 75 519475

AHC HTA absenţe

Număr 35

Mediana 377400

Percentila 25 316900

Percentila 75 443400

Figura 545 Comparaţie icircntre expresia CD36 icircn Mo funcţie de AHC de HTA

Nu s-au calculat diferenţe semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor

PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de dislipidemie atunci cacircnd aceştia au fost comparaţi cu

subiecţii fără AHC de dislipidemie (t - Test P=031)

Corelaţii icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα si CD36

Studiind valorile intensităţii medii de fluorescenţă a Ac anti-PPARα icircn Mo Ly şi

PMN am observat că nivelul de expresie celularatilde a PPARα icircn Mo Ly şi PMN sunt corelate

puternic pozitiv atacirct icircn lotul SM cacirct şi icircn lotul martor(fig547 548)

1 6 11 16 21 26 31

0

1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

8000

Pacienti

MFI a

nti-CD

36

42903

21093

64714

10188

75619

LCI

Media

LCS1 6 11 16 21 26 31 36

-1000

0

1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

8000

MFI a

nti- C

D36

37038

11935

62141

-616

74692Media + 2 DS

Media

Media - 2 DS

3200

3400

3600

3800

4000

4200

4400

4600

4800

Lot SM Lot Non-SM

P = 00676

MFI

anti-

CD36

3400

3600

3800

4000

4200

4400

4600

4800

5000

DA NU

AHC HTA

P = 008

Figura 547 Studiul relatiilor dintre

receptorii PPARα icircn SM A Mo vs PMN B Mo vs Ly

C PMN vs Ly Graficul ilustrează coeficienţii r P dreapta de

regresie (linia centrala) intervalul de icircncredere

95 şi intervalul de predicţie 95

Figura 548 Corelaţii icircntre receptorii PPARα icircn lotul

martor

A Mo vs PMN

B Mo vs Ly

C PMN vs Ly

Tot pentru lotul SM cacircnd am evaluat relaţia dintre nivelul de expresie relativă a

receptorilor PPARα icircn Eo şi nivelul de expresie relativa a receptorilor CD 36 am obţinut o

corelaţie negativă (r = - 05 P = 001) (fig 549 A)

50 100 150 200 250 300 350 50

100

150

200

250

300

350

400

450

500

PPARα Ly

PPARα PMN

y = 56641 + 1159 x r = 086 P lt 0001

C

50 100 150 200 250 300 350 400 0

50

100

150

200

250

300

350

PPARα Mo

PPARα Ly

y = 36665 + 0607 x r = 090 P lt 0001

B

150 200 250 300 350 400 450 0

50 100 150 200 250 300 350 400 450 500

PPARα PMN

PPARα Mo

y = 2505 + 0879 x r = 081 P lt 0001

A

50 100 150 200 250 300 350

50 100 150 200 250 300 350 400 450 500

PPARα Ly

PPARα PMN

y = 95668 + 0919 x r = 081 P lt 0001

C

100 150 200 250 300 350 400

0

50

100

150

200

250

300

350

400

PPARα Mo

PPARα Ly

y = -7503 + 0829 x r = 079 P lt 0001

B

100 150 200 250 300 350 400

50

100

150

200

250

300

350

400

450

500

PPARα Mo

PPARα PMN

y = 61384 + 0882 r = 074 P lt 0001

A

Figura 549 Corelaţii icircntre expresia PPARα icircn Eo şi alte tipuri de receptori investigaţi A PPARα Eo şi CD 36 (Lot SM) B PPARα Eo şi PPARα Mo( Lot Non-SM)

Icircn lotul martor am identificat o asociere moderată pozitivă (r = 038 P = 0033) icircntre

nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Eo şi Mo (figura 549B) corelaţie absentă icircn

lotul pacienţilor cu SM

Corelaţii dintre receptorii studiaţi şi componentele sindromului metabolic

Icircn lotul de control analiza statistică a relevat faptul că icircntre circumferinţa

abdominală (CA ) şi nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Mo Ly şi PMN există o

corelaţie inversă adică scăderea expresiei PPARα la nivelul acestor populatii celulare ar fi

icircnsoţită de creşterea CA (figura 550

Figura 550Corelaţii dintre receptorii

PPARα si CA A Mo B Ly C PMN

La pacienţii cu SM am notat o corelatie moderată negativă statistic semnificativă

icircntre TG şi valorile MFI a Ac anti- PPARα icircn Mo şi Ly( fig 551)

150 200 250 300 350 400 450 50

60

70

80

90

100

110

PPARα PMN

CA r = - 040 P = 0024

C

50 100 150 200 250 300 350 50

60

70

80

90

100

110

PPARα Ly

CA r = - 046 P = 0009

B

50 100 150 200 250 300 350 400 50

60

70

80

90

100

110

PPARα Mo

CA r = - 042 P = 0017

A

50 100 150 200 250 300 350 400 500

1000

1500

2000

2500

3000

PPARα Mo

PPARα Eo

r = 038 P = 0033

B

0 500 1000 1500 2000 2500 1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

8000

PPARα Eo

CD36

r = 050 P = 0010

A

Figura 551 Lot SM Corelaţie icircntre expresia PPARα şi TG (A Mo B Ly)

Analizand corelatia dintre receptorii CD36 si valorile TA la pacientii cu SM am observat

o asociere pozitivă asteptată intre TAD si nivelul de expresie al receptorilor CD36 (fig 552)

Figura 552 Lot SM Corelaţii icircntre expresia

receptorilor CD36 şi valorile tensiunii arteriale

diastolice

Studiind corelaţiile dintre receptorii PPARα şi HDL-col la subiecţii din lotul martor am

notat o asociere pozitivă icircntre expresia PPARα icircn Mo şi Ly cu HDL-col (fig 553)

Figura 553 Lot martor Corelaţii icircntre HDL-col şi expresia PPARα icircn Mo(A) Ly(B)

Icircn lotul normal am evidenţiat corelaţii pozitive moderate dar semnificative statistic icircntre

CA şi valorile TAS (r = 062 P lt 0001) respectiv TAD (r = 050 P=0004) precum şi icircntre

CA şi glicemia subiecţilor normali (r = 052 P = 0003) Aceste date icircmpreună cu relaţia

invers proporţională identificată icircntre HDL-col şi CA (r = 050 P = 001) susţin validitatea

acestui studiu Icircn lotul subiecţilor cu SM am observat o corelaţie moderat pozitivă icircntre

expresia PPARα icircn populaţiiile de Mo şi Eo şi concentraţia a HDL-col (fig 554)

B

100 150 200 250 300 350 20

30

40

50

60

70

80

90

100

PPARα Ly

HDL-col-(mgdl)

r = 036 P = 0046

A

150 200 250 300 350 400 20

30

40

50

60

70

80

90

100

PPARα Mo

HDL-col-(mgd)l

r = 035 P = 005

70 75 80 85 90 95 100 1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

8000

TAD (mmHg)

CD36

r = 048 P = 0013

B

50 100 150 200 250 300 350 -100

0

100

200

300

400

500

PPARα Ly

TG(mgdl)

r = - 042 P = 003

A

50 100 150 200 250 300 350 400 -100

0

100

200

300

400

500

PPARα Mo

TG ( mgdl) r =- 0 43 P = 0027

Figura 554 Corelaţii icircn SM icircntre HDL-col şi expresia PPARα icircn Mo (A) şi Eo(B)

Corelaţii icircntre nivelul de expresie relativă a PPARα şi markeri ai disfuncţiei

endoteliale şi inflamaţiei cronice

Deşi nu a icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică am reţinut corelaţia invers

proporţională (r = - 0331 P = 006) dintre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα

icircn PMN şi concentraţia serică a Non-HDL-colesterolului

Studiind relaţiile dintre parametri icircn lotul de pacienţi cu SM am observat o corelaţie

moderată invers proporţională icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Eo şi

acidul uric seric (figura 555 A) corelaţie absentă la subiecţii fără SM

Figura 555 Lot SM corelaţia dintre expresia PPARα icircn Eo şi acidul uric (A) respectiv

PPARα şi fibrinogen (B)

Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P=008) am notat pentru

pacienţii cu SM corelaţia invers proporţională dintre expresia PPARα icircn Eo şi concentraţia

serică a fibrinogenului ( figura 555B)

V5 Discuţii

Icircn cadrul lucrării de doctorat am studiat nivelul de expresie relativă a PPARα icircn

leucocitele pacienţilor cu SM comparativ cu cea a subiecţilor normali Expresia PPARα a fost

studiată icircn paralel cu cea a CD36 glicoproteină exprimată pe suprafaţa a numeroase celule

din organismul uman inclusiv pe cea a Mo şi macrofagelor Prin funcţia sa de receptor pentru

particulele oxidate de LDL CD36 cunoscut ca bdquoscavenger receptorrdquo de clasa B sau

bdquotrombospodin receptorrdquo contribuie la dezvoltarea inflamaţiei de la nivel endotelial şi

formarea plăcii de ateroscleroză Referitor la studiul PPARα icircn Eo icircn sindromul metabolic

menţionăm că studiul nostru este primul care arată că nivelul de expresie a proteinei PPARα

icircn Eo măsurat prin citometrie icircn flux este semnificativ mai redus la pacienţii care sunt

diagnosticaţi cu acest sindrom De asemenea icircn lotul cu SM cercetat icircn cadrul studiului

receptorilor PPARα numărul Eo circulante a fost semnificativ mai crescut la pacienţii cu SM

B

0 500 1000 1500 2000 2500 200

250

300

350

400

450

PPARα Eo o

Fibrinogen mgdl

r =- 036 P = 008

0 500 1000 1500 2000 2500 1 2 3 4 5 6 7 8 9

10 11

PPARα Eo_

Acid uric(mgdl) r = 048 P = 0014 A

0 500 1000 1500 2000 2500 10

20

30

40

50

60

70

80

PPARα Eo

HDL(mgdl)

r = 044 P = 0024

B

100 150 200 250 300 350 400 10

20

30

40

50

60

70

80

PPARα Mo

HDL( mgdl)

r = 046 P = 0019

A

(P = 003) Aceste constatări conduc la ipoteza că Eo joacă un rol special icircn mecanismele

patogenice declanşate icircn sindromul metabolic şi că receptorii PPARα sunt importanţi icircn

implicarea Eo icircn obezitate şi insulinorezistenţă Creşterea numărului de Eo circulante este

urmată de eliberarea mediatorilor proinflamatori iar reducerea expresiei PPARα icircn Eo

determină perturbarea mecanismelor de control al inflamaţiei cu exacerbarea cascadei

proinflamatorii Consecutiv se agravează disfuncţia endotelială şi se accelerează progresia

leziunilor de ateroscleroză Extrapolacircnd aceste ipoteze putem spune că asocierea raportată

dintre boala ischemică coronariană şi Eo poate fi şi consecinţa exacerbării cascadei

proinflamatorii de la nivel vascular produsă datorită scăderii expresiei PPARα icircn Eo iar

creşterea numărului de Eo circulante poate reprezenta o adaptare a organismului uman care

icircncearcă să suplinească deficitul de receptori PPARα Analizacircnd curba ROC pentru

intensităţile medii de fluorescenţă determinate pentru anticorpii anti- PPARα icircn Eo am

obţinut pentru acest biomarker o sensibilitate a testului de 565 şi o specificitate de 778

pentru un punct de cut-off de 1533 ( figura 536 ) Deşi aria AUC (Aria under the curve) egală

cu 0663 icircncadrează acest test ca avacircnd o acurateţe redusă observăm că că această valoare

este apropiată de determinările AUC pentru alţi factori (fibrinogen raport de aterogenitate

acid uric non- HDL-colesterol) cunoscuţi ca fiind implicaţi icircn aterogeneză şi inflamaţia

cronică (figura 431) Aceste remarci alături de faptul că icircn studiul receptorilor PPARα icircn

leucocite am inclus subiecţi la primul diagnostic de SM creează premisa integrării

determinării expresiei relative a receptorilor PPARα icircn diagnosticul complex al sindromului

metabolic Putem spune că icircn final studiul expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofilele

circulante se dovedește a fi util icircn diagnosticul precoce la nivel molecular al SM permiţacircnd

identificarea timpurie a unor indivizi cu risc cardiometabolic crescut Astfel intervenţia

precoce asupra subiecţilor cu deficit de PPARα icircn Eo contribuie la managementul eficient al

afecţiunilor degenerative icircn care inflamaţia cronică icircndeplineşte un rol primordial Referitor

la populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările efectuate prin citometrie de flux nu au

arătat existenţa unor diferenţe statistice icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα

la subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali Rezultatele noastre pot fi

consecinţa caracteristicilor loturilor studiate (icircn studiul nostru au fost incluşi subiecţi recrutaţi

la primul diagnostic de SM şi icircn absenţa stimulării receptorilor PPARα cu droguri agoniste

PPARα) dar icircn acelaşi timp pot apare diferenţe datorită metodei utilizate (231 232 233)

Făcacircnd o paralelă cu un studiu publicat icircn 2013 icircn Europa (231) care a arătat creşterea

nivelului de expresie al PPARα icircn Ly şi Mo observăm că deşi numărul de subiecţi a fost

aproximativ egal (57 participanţi icircn studiul nostru 60 icircn studiul DAmore) subiecţii icircn studiul

amintit au fost recrutaţi dintr-o clinică cu profil medical la primul diagnostic de SM icircn timp

ce metoda utilizată a fost PCR (Polymerase Chain Reaction) mult mai fidelă decacirct citometria

icircn flux icircn studiul receptorilor nucleari De asemenea DAmore nu investighează expresia

PPARα icircn Eo şi PMN icircn cercetare fiind incluse doar celulele CD14+ (predominant Mo) şi

CD14- (predominant Ly) Deşi nu am obţinut diferenţe statistic semnificative icircntre cele două

loturi referitoare la nivelul de expresie relativă a PPARα icircn Mo Ly şi PMN am observat

corelaţii puternice semnificative statistic icircntre expresia receptorilor PPARα icircn aceste tipuri

celulare Rezultatele obţinute sugerează existenţa unui mecanism diferit molecular de control

icircn eozinofile care reglează cantitatea de proteină PPARα icircn eozinofile versus alte tipuri de

leucocite (la pacienţii cu SM) şi acest lucru este icircn concordanţă cu cercetările care descriu

expresia PPARα mRNA icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale

bronşice keratinocite) Studiind prin citometrie de flux nivelul de expresie relativă a

receptorului CD36 la nivelul Mo am arătat prezenţa acestuia icircn Mo tuturor subiecţilor

investigaţi Analizacircnd valorile intensităţii medii de fluorescenţă a CD36 icircn loturile studiate

am observat o tendinţă de creştere la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali

confirmacircnd implicarea receptorului CD36 icircn patogeneza acestuia Referitor la expresia

receptorului CD36 rezultatele obţinute sunt icircn consens cu studii anterioare care au arătat

creşterea expresiei CD36 la pacienţii cu SM şi diabet zaharat Astfel pe lacircngă diferenţa icircn

expresia CD36 s-au raportat şi corelaţii inverse icircntre expresia proteinei CD36 şi nivelul

adiponectinei Acelaşi studiu a evidenţiat o corelaţie pozitivă intre expresia CD36 cu expresia

receptorilor PPAR gamma relaţia cu PPARα nefiind investigată

Analiza de subgrup a relaţiilor dintre componentele SM și elementele moleculare

proinflamatorii studiate a relevat prezenţa unor asocieri semnificativ statistice icircntre acestea

Se argumentează astfel că veridicitatea studiului este susţinută de interdependenţele statistice

ale componentelor SM Determinarea coeficientului de corelaţie Icircn studiul nostru nivelul de

expresie relativă a PPARα s-a corelat moderat negativ (figura 550) cu CA a subiecţilor din

lotul normal pentru populaţiile celulare de Mo (r = - 0420 P = 001) Ly (r = - 046 P =

0009) şi PMN (r = - 040 P = 0024) date care sunt icircn concordanţă cu studiile care arată

rolul PPARα icircn furnizarea energiei prin beta-oxidarea acizilor graşi Icircn acelaşi timp icircn lotul

pacienţilor cu SM nu am identificat prezenţa unei asocieri icircntre nivelul de expresie relativă a

PPARα şi valoarea măsurată a CA Asocierea dintre expresia relativă a PPARα cu obezitatea

de tip central completează datele existente referitoare la reglarea homeostaziei energetice

conturacircnd un mecanism de control deficitar al aportului caloric al SM Icircn condiţiile icircn care

rezultatele obţinute prin metoda citometriei icircn flux nu au arătat existenţa unei corelaţii intre

expresia PPARα şi CA la pacienţii cu SM considerăm că ar fi necesar studiul

polimorfismului genei PPARA care ar putea aduce informaţii importante cu privire la

implicarea acestor receptori icircn apariţia obezităţii de tip central Subliniem acest lucru deoarece

obezitatea este o boală plurifactorială icircn care pe lacircngă factorii ereditari sunt implicaţi factori

de mediu psihologici şi sociali (245) Existenţa unei componente genetice a aterosclerozei

este legată şi de prezenţa unor variante ale genei PPARA asociate cu creşterea incidenţei bolii

cardiovasculare (82) şi a SM (249) Icircn studiul nostru am constatat o scădere statistic

semnificativă a nivelului expresiei relative a receptorilor PPARα icircn Eo la subiecţii cu

antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială comparativ cu subiecţii fără istoric

familial de hipertensiune (figura 537) Deşi diferenţele calculate icircntre loturile studiate nu au

icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică la subiecţii care au declarat prezenţa

antecedentelor familiale de hipertensiune arterială remarcăm o tendinţă de scădere a

intensităţii medii de fluorescenţă pentru Ac anti-PPARα la nivelul Mo (figura 515 P = 006

) icircn timp ce expresia relativă a CD36 icircnregistrează o creştere la acesti subiecţi (figura 545 P

= 008) Icircn contextul riscului cardiovascular foarte icircnalt al pacienţilor cu SM amintim şi

existenţa corelaţiei pozitive dintre valorile tensiunii arteriale diastolice şi expresia relativă a

receptorului CD36 (r = 0483 P = 0013) Această constatare este icircn consens cu studiile care

au arătat că forma solubilă circulantă a CD36 este asociată cu factorii de risc cardiovasculari

fiind propusă ca un marker precoce al aterosclerozei Activarea PPARα este asociată cu

modularea metabolismului lipidic iar agoniştii PPARα sunt utilizaţi icircn mod curent pentru

tratamentul dislipidemiei Sub acţiunea agoniştilor PPARα se obţine o icircmbunătăţire a funcţiei

endoteliale şi a parametrilor reologici funcţiile pleiotropice ale agoniştilor PPARα fiind

dovedite icircn trialuri clinice controlate Icircn populaţiile de Mo şi Ly la pacienţii cu SM

cercetarea noastră a evidenţiat o asociere negativă icircntre nivelul de expresie relativă a

receptorilor PPARα şi concentraţia TG serice (figura 551) Astfel scăderea expresiei

receptorilor PPARα este asociată cu creşterea nivelului TG serice contribuind la profilul

lipidic aterogen din SM Icircn conformitate cu literatura de specialitate icircn studiul efectuat prin

metoda citometriei icircn flux am găsit prezenţa asocierii icircntre nivelul de expresie al PPARα şi

HDL-colesterol Corelaţia pozitivă dintre nivelul de expresie relativă PPARα şi concentraţia

HDL-colesterolului a fost observată icircn lotul martor icircn populaţiile de Mo (r = 035 P = 005)

şi Ly ( r = 036 P = 004) (figura 553) susţinacircnd faptul că stimularea receptorilor PPARα

este legată de creşterea nivelului seric al lipoproteinelor cu densitate crescută La pacienţii cu

SM corelaţia dintre expresia PPARα şi HDL-colesterol a fost evidenţiată icircn populaţiile de Mo

(r = 046 P = 0019) şi eozinofile (r = 044 P = 0024) Se desprinde concluzia că icircn

sindromul metabolic scăderea concentraţiei HDL-colesterol este legată de diminuarea

nivelului de expresie relativă a receptorilor nucleari PPARα icircntărind afirmaţiile legate de

rolul acestor receptori icircn progresia bolilor cardiovasculare Studiind reactanţii de fază acută

analiza statistică a relevat o diferenţă semnificativă din punct de vedere statistic icircntre valorile

fibrinogenului la pacienţii cu SM atunci cacircnd au fost comparaţi cu subiecţii fără SM

(Capitolul IV4 P lt0 001 figura 427A) De asemenea icircn Capitolul V dedicat studiul

expresiei relative a receptorilor PPARα studiul valorilor fibrinogenului a arătat creşterea

acestui reactant de faza acută icircn lotul cu SM comparativ cu lotul martor (P lt0 0001) Icircn

studiul nostru am calculat o corelaţie invers proporţionala (r = - -036 fig 555B) icircntre

nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile şi concentraţia serică a

fibrinogenului Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P = 008) am reţinut

această asociere deoarece am demonstrat că nivelul de expresie relativă al receptorilor

PPARα icircn eozinofile este mai scăzut icircn sindromul metabolic iar sindromul metabolic este

caracterizat printr-un status inflamator cronic status caracterizat şi de creşterea concentraţiei

serice a fibrinogenului De asemenea notam ca această corelaţie negativă se află icircn

concordanţă cu studiile care arata că tratamentul cu agonişti PPARα (fibraţi) determina

scăderea nivelului seric al fibrinogenului contribuind la diminuarea inflamaţiei cronice din

sindromul metabolic şi icircn consecinţă amelioracircnd insulinorezistenţa

LIMITE ȘI DIFICULTĂȚI IcircN CERCETARE

Icircn cadrul Tezei de Doctorat am desfăşurat o cercetare care şi-a propus studierea

expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Recrutarea anamneza şi examinarea

clinică a subiecţilor au fost realizate icircn cadrul Cabinetului de Medicină de Familie CMI Popa

Elena din Iaşi iar determinările hematologice şi biochimice s-au efectuat icircn cadrul

Laboratorului Ambulatorului de Specialitate al Spitalului Universitar ldquoSfacircntul Spiridon din

Iaşi Icircn studiul epidemiologic şi al markerilor inflamatori al sindromului metabolic desfăşurat

au fost incluşi un număr de 1530 de participanţi pe baza liberului consimţămacircnt examinaţi icircn

perioada 01012013 - 31122013 Icircn continuare icircn perioada 1012014 - 28022014 pe baza

criteriilor de includere şi excludere icircn cele două loturi de studiu am investigat un număr de 57

de subiecţi prezentaţi la consultaţie icircn această perioadă şi care au icircndeplinit criteriile de

includere icircn cele două loturi (Lot SM şi Lot Control) constituite pentru evaluarea nivelului de

expresie a receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Explorarea nivelului de expresie

relativă a receptorilor PPARα s-a desfăşurat icircn cadrul Laboratorului de Biologie Moleculară

de pe platforma Institutului Regional de Oncologie Datorită resurselor proprii financiare

limitate trebuie să subliniez că aceasta cercetare nu ar fi fost posibilă fără contribuţia unor

cercetători din domeniul medical care m-au sprijinit necondiţionat atacirct icircn elaborarea

protocolului de lucru cacirct şi icircn efectuarea propriu-zisă a studiului Icircn acest sens menţionăm şi

faptul că pentru studiul receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic am utilizat aparatura

Laboratorului de Biologie Moleculară (care deserveşte icircntreaga Regiune a Moldovei) Pe

această cale mulţumesc personalului Laboratorului de Biologie Moleculară pentru ajutorul

acordat icircn desfăşurarea cercetării doctorale icircn condiţiile icircn care se observa creşterea

numărului de pacienţi care se adresează acestei platforme de cercetare Mulţumesc de

asemenea şi Doamnei Doctor Elena Butoi din cadrul Institutului de Biologie şi Patologie

Moleculară ldquoNicolae Simionescurdquo Bucureşti) pentru donaţia anticorpului secundar anti-

FITC Icircn consecinţă pentru recrutarea unui număr mai mare de participanţi ar fi fost necesară

icircn primul racircnd obţinerea unor resurse financiare suplimentare pentru achiziţia de aparatură şi

reactivi Totuşi numărul subiecţilor recrutaţi este apropiat de numărul subiecţilor raportaţi icircn

cadrul unor granturi de cercetare care aveau ca ţinta studiul expresiei receptorilor PPARα

(212 227 228 231) Rezultatele obţinute continua seria lucrărilor care arata importanta

studiului mecanismelor etiopatogenice ale sindromului metabolic patologie care se afla icircntr-o

continuă creştere La pacienţii cu SM pe lacircngă diminuarea nivelului de expresie a receptorilor

PPARα icircn eozinofile ne aşteptam şi la evidenţierea unor modificări icircn expresia PPARα şi icircn

populaţiile de Ly Mo şi PMN Acest fapt poate fi explicat de utilizarea unor celule provenite

de la pacienţi fără afectare cardiovasculară fără diabet zaharat şi necesită continuarea

studiului pe culturi celulare icircn condiţii de stimulare cu agonişti PPARα deziderat care

impune continuarea investigării expresiei PPARα printr-un grant de cercetare

ORIGINALITATEA ȘI CONTRIBUȚIILE INOVATIVE ALE TEZEI DE

DOCTORAT PERSPECTIVE DE CERCETARE

Evaluarea nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn leucocitele circulante

aduce noi perspective icircn studiul obezităţii şi sindromului metabolic Importanta studiului

expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic derivă din prevalenta crescută a

sindromului metabolic icircn populaţia cercetată la care se adaugă riscul cardiovascular foarte

icircnalt al acestor pacienţi cu implicaţii majore icircn sănătatea publică Rolul receptorilor PPARα

icircn inflamaţie şi aterogeneza este binecunoscut dar studiul nostru este primul care a arătat că

nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα este semnificativ mai scăzut in populatiile

de eozinofile la pacienţii cu SM Această concluzie coroborata cu existenţa unei stracircnse

asocieri intre expresia receptorilor PPARα la nivelul Mo limfocitelor şi PMNlor creeaza

ipoteza existenţei unui mecanism de control diferit al expresiei PPARα la nivelul

eozinofilelor Această cercetare aduce informaţii importante referitoare la mecanismele

proinflamatorii care stau la baza insulinorezistenţei şi riscului cardiometabolic şi impune

continuarea studiului acestor receptori nucleari prin citometrie icircn flux metodă care poate fi

aplicată şi la scara mai largă dacă sunt asigurate resursele materiale necesare cercetării

Cercetarea prin citometrie icircn flux poate fi completată de studiul polimorfismului genei

PPARA şi astfel se pot identifica timpuriu indivizii cu potenţial risc cardiometabolic crescut

Studiul receptorilor PPARα a stabilit conexiuni cu factori proinflamatori şi aterogenetici iar

continuarea cercetării poate aduce şi elemente noi de diagnostic precoce icircn sindromul

metabolic contribuind la icircmbunătăţirea prognosticului acestor pacienţi

CONCLUZII FINALE

1 Aplicarea scorului de SM alături de implementarea algoritmului electronic de diagnostic

contribuie la o prelucrare rapidă eficientă și standardizată a informaţiilor la nivelul

medicinei primare

2 Prevalenţa SM calculată astfel icircn cadrul studiului este crescută (2732) icircn concordanţă

cu datele raportate

3 Controlul factorilor de risc cardiometabolici incluşi icircn SM se poate realiza prin

managementul stilului de viaţă (scăderea greutăţii corporale prin combaterea

sedentarismului şi adoptarea unei diete antiaterogene şi hipocalorice) şi administrarea

terapiei medicamentoase

4 Este necesară adoptarea unei politici de sănătate publică pentru prevenirea creşterii icircn

populaţie a prevalenţei obezităţii şi a diabetului zaharat

5 Noi metode de cercetare icircn domeniul SM axate pe diagnosticarea precoce şi cuantificarea

eficientă a acestuia duce la diminuarea incidenței evenimentelor cardiovasculare majore

6 Sindromul metabolic se caracterizează printr-un status inflamator cronic

7 Valorile Non-HDL-colesterolului şi a raportului de aterogenitate sunt semnificativ mai

mari la pacienţii cu SM

8 Dintre reactanţii de faza acută am observat că valoarea medie a fibrinogenului este mai

crescută icircn lotul cu SM

9 Valorile eozinofilelor sunt crescute icircn sindromul metabolic iar explorarea relaţiei dintre

eozinofile şi obezitate constituie una din direcţiile de studiu actuale ale sindromului

metabolic

10 Evaluarea markerilor inflamatori icircn contextul sindromului metabolic este utilă icircn

evaluarea complexă a a factorilor de risc cardiometabolici

11 Prin metoda citometriei icircn flux am demonstrat prezenta Receptorilor Activaţi de

Inductorii Proliferării Peroxizomilor ndash Alpha (PPARα) icircn toate populaţiile de leucocite

studiate (Mo limfocite PMN eozinofile) atacirct icircn lotul pacienţilor cu SM cacirct şi icircn lotul

martor

12 Utilizacircnd intensitatea medie de fluorescenţă a anticorpilor anti- PPARα am arătat că

nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile este semnificativ mai redus

la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali

13 Acest studiu este primul care a demonstrat existenţa unei scăderi statistic semnificative a

nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofilele pacienţilor cu SM

confirmacircnd cercetările recente care au evidenţiat rolul eozinofilelor şi al receptorilor

PPARα icircn obezitate reglarea inflamaţiei cronice şi aterogeneza

14 Contrar aşteptărilor noastre icircn populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările

efectuate icircn cele două loturi de studiu (cu şi fără sindom metabolic) nu am evidenţiat

diferenţe statistic seminificative icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα la

subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali

15 Icircn populaţiile de Mo limfocite şi polimorfonucleare am observat corelaţii puternice

semnificativ statistic icircntre expresia PPARα icircn aceste tipuri celulare sugeracircnd existenţa

unui mecanism unic de control al inflamaţiei cronice la nivelul acestor celule probabil

diferit de cel din eozinofile

16 La subiecţii cu SM expresia relativă a PPARα icircn Eo este invers asociată cu expresia

receptorului CD36 (receptor al particulelor de ox - LDL şi propus ca un marker precoce al

aterosclerozei) dovedind rolul antiinflamator al receptorilor PPARα la nivel endotelial

17 La pacienţii cu antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială nivelul de

expresie al receptorilor PPARα icircn eozinofile şi Mo este diminuat comparativ cu subiecţii

fără antecedente familiale de hipertensiune arterială Putem spune că studiul efectuat de

noi aduce informaţii importante legate de geneză aterosclerozei şi hipertensiunii arteriale

18 Prin studiul asocierilor dintre receptorii PPARα şi componentele clinice ale sindromului

metabolic am arătat rolul acestor receptori icircn determinismul obezităţii de tip central

nivelul expresiei relative a receptorilor PPARα fiind invers proporţional cu circumferinţa

abdominală

19 Icircn acelaşi timp nivelul de expresie a PPARα icircn sindromul metabolic este asociat pozitiv

cu concentraţia serică a HDL-colesterolului şi invers asociat cu nivelul trigliceridelor

serice dovedind rolul acestor receptori icircn diminuarea procesului inflamator cronic de la

nivel vascular

20 La pacienţii cu SM scăderea expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofile este corelată cu

creşterea unor markeri ai sindromului inflamator cronic cardiometabolic (acid uric

fibrinogen) ilustracircnd importanta receptorilor icircn reglarea status-ului inflamator cronic din

sindromul metabolic

21 Utilizarea metodei flowcitometrice pentru studiul expresiei relative a receptorilor PPARα

icircn leucocite a adus informaţii importante cu privire la mecanismele moleculare de control

implicate icircn patogenia bolilor cardiometabolice icircn concordanţă cu cercetările care descriu

expresia PPAR icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale bronşice

keratinocite)

BIBLIOGRAFIE SELECTIVA

1 Kahn R Metabolic syndrome- what is the clinical usefulness Lancet 2008371(9628)1892-3

2 Reaven GM The metabolic syndrome is this diagnosis necessary Am J Clin Nutr 2006 83(6)1237-7

3 Grundy SM Pre-Diabetes Metabolic Syndrome and Cardiovascular Risk J Am Coll Cardiol 201259(7)

635-43

4 International Diabetes Federation IDF Diabetes Atlas 6th edn International Diabetes Federation Belgium

Brussels 20131-155

5 World Health Organization Global Status Report on Noncommunicable Diseases 2010 World Health

Organization Geneva Switzerland 20111-176

6 Coman AE Petrovanu R Sindromul metabolic in practica de ambulator Editura Pim Iaşi 2009 1-103

7 Grundy SM Becker D Clark LT et alThird Report of the National Cholesterol Education Program (NCEP)

Expert Panel on Detection Evaluation and Treatment of High Blood Cholesterol in Adults (Adult

Treatment Panel III) Final Report Circulation 2002106(25)3143-90

8 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J Metabolic syndrome- a new worldwide definition A Consensus Statement

from the International Diabetes Federation Diabet Med 2006 23(5)469-80

9 KG Alberti KG Eckel RH Grundy SM etal International Diabetes Federation task force on epidemiology

and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart Association World Heart

Federation International Atherosclerosis Society International Association for the study of obesity

Harmonizing the metabolic syndrome a joint interim statement of the International Diabetes Federation task

force on epidemiology and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart

Association World Heart Federation International Atherosclerosis society and International Association

for the study of obesity Circulation 2009120(16)1640-5

10 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J IDF Epidemiology Task Force The metabolic syndrome new

worldwide definition Lancet 2005 366 1059 - 62

11 Oleszczyk M Svab I Seifert B et al Primary healthcare in the developing part of Europe changes and

development in the former Eastern Bloc countries that joined the European Union following 2004 Med Sci

Monit 2009(15)78ndash84

12 Jung U J Choi M S Obesity and Its Metabolic Complications The Role of Adipokines and the

Relationship between Obesity Inflammation Insulin Resistance Dyslipidemia and Nonalcoholic Fatty

Liver Disease Int J Mol Sci 2014rsquo15(4) 6184-223

13 Vanden Heuvel JP Peters JM Peroxisome Proliferators In Ramos K (ed) Cellular and Molecular

Toxicology (Second Edition) Volume 2 New York Elsevier Science Inc 2010 145 - 67

14 Yessoufou A Wahli W Multifaceted roles of peroxisome proliferator-activated receptors (PPARs) at the

cellular and whole organism levels Swiss Med Wkl 2010140w13071 doi104414smw201013071

15 Azhar S Peroxisome proliferator-activated receptors metabolic syndrome and cardiovascular disease

Future Cardiology 20106(5)657-91

16 Andries G Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity

Diabetes and Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(Suppl)24-32

17 Zandbergen F Plutzky J PPARalpha in atherosclerosis and inflammation Biochim Biophys Acta

20071771(8)972-82

18 Straus DS Glass CK Anti-inflammatory actions of PPAR ligands new insights on cellular and molecular

mechanisms Trends Immunol 200728(12)551-8

19 Zlei M Zugun- Eloae F Carasevici E Citometrie icircn flux - Bază şi clinică Icircn Hinescu ME (ed) Citometrie icircn

flux - principii şi aplicaţii clinice Bucureşti Editura Viaţa Medicală Romacircnească 20111-128

20 Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity Diabetes and

Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(9)24-32

21 Woerly G Honda K Loyens M et al Peroxisome proliferator-activated receptors alpha and gamma down-

regulate allergic inflammation and eosinophil activation J Exp Med 2003198(3)411-21

22 Salle-Saumont D Brenuchon C Kanda A et al Peroxisome proliferator-activated receptor alpha regulates

skin inflammation and humoral response in atopic dermatitis J Clin Allergy Immunology 2008 21(4)962-8

23 Schote A Turner J Schiltz J et al Nuclear receptors in human immune cells expression and correlations

Mol Immunolog 200744(6)1436-45

24 DAmore S Vacca M Graziano G et al Nuclear receptors expression chart icircn peripheral blood

mononuclear cells identifies patients with Metabolic Syndrome Biochim Biophys Acta

20131832(12)2289-301

25 Uthurralt J Gordish-Dressman H Bradbury M T et al PPARalpha L162V underlies variation in serum

triglycerides and subcutaneous fat volume in young males BMC Med Genet 2007855

26 Hiukka A Leinonen ES Jauhiainen M et al Long-term effects of fenofibrate on VLDL and HDL

subspecies icircn participants with type 2 diabetes mellitus Diabetologia 2007 50(10)2067-75

27 Robins SJ Rubins HB Faas FH et alInsulin resistance and cardiovascular events with low HDL

cholesterol The Veterans Affairs HDL Intervention Trial (VA-HIT) Diabetes Care 2003 26(5)1513-7

28 Devaraj S Siegel D Jialal I Statin Therapy in Metabolic Syndrome and Hypertension Post-JUPITER

What is the Value of CRP Curr Atheroscler Rep 2011 13(1) 31ndash42

29 Imperatore G Riccardi G Iovino C et al Plasma Fibrinogen A New Factor of the Metabolic Syndrome A

population-based study Diabetes Care 19982 1(4)649-54

30 Krysiak R Gdula-Dymek A Bachowski R Okopien B Pleiotropic effects of atorvastatin and fenofibrate

in metabolic syndrome and different types of pre-diabete Diabetes Care 201033(10)2266-70

31 Hermans MP Impact of Fenofibrate on Type 2 Diabetes Patients with Features of the Metabolic Syndrome

Subgroup Analysis From FIELD Curr Cardiol Rev 20106(2)112-8

32 Silverstein R Inflammation atherosclerosis and arterial thrombosis Role of the scavenger receptor CD36

Cleveland Clinic Journal of Medicine 200976(Suppl 2)S27-S30

33 Hăncu N Obezitatea In Vereşiu IA (ed) Diabetul zaharat nutritia si bolile metabolice Volume 2 Editura

Echinox Cluj- Napoca 2010 1-15

Lista lucrări publicate

1 Elena Popa Maria Maidaniuc Agnes Bacusca Alamir Diaa Rodica Petrovanu Adorata Elena

Coman Disfuncţia endotelială ndash de la mecanisme moleculare la cuantifi care şi tratament icircn practica

medicală Practica Medicală 20149(3) 109-14

2 Elena Popa Agnes Bacusca Alamir Diaa Maria Maidaniuc Rodica Petrovanu Adorata Elena Coman

The function of insulin receptor (IRF) in evolution of obesity correlation with adipocytes diameters

Archives of the Balkan Medical Union 201449(3) 275-9

3 Elena Popa Florin Zugun-Eloae Mihaela Zlei Daniela Jitaru Oana Maria Pintilie Adorata Elena

Coman Maria Traian Didona Anca Ungureanu Eugen Carasevici - acceptata pentru numarul 42014

Flow cytometry analysis of PPAR-alpha receptors in metabolic syndrome) Revista Romană de

Medicină de Laborator(RRLM-D-14-00034R1- adeverinţa ataşată

Page 16: REZUMAT TEZĂ DE DOCTORAT - umfiasi.ro Doctorat/rezumat... · universitatea de medicinĂ Şi farmacie “grigore t. popa” iaŞi facultatea de medicinĂ rezumat tezĂ de doctorat

participanţii investigaţi analiza MFI a Ac anti - PPARα icircn populaţia de Mo (Mo) a arătat un

interval de variaţie icircntre [786 395] Valoarea medie a nivelului de expresie relativă a PPARα

calculată pentru Mo a fost de 23210 plusmn7860 Pentru ambele loturi de studiu pacienţilor cu

SM testul Testul Shapiro-Wilk a arătat distribuţia normală a valorilor obţinute pentru nivelul

de expresie al PPARα icircn Mo

Tabel XXVIII Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn Mo

Lot SM Lot Non-SM

N 26 31

Media 22819 23538

SD 5819 7717

Mediana 22400 22600

Minimum 12800 78600

Maximum 35800 37900

Percentila 25 18300 18300

Percentila 75 26200 30350

Pentru pacienţii din lotul SM valoarea medie a MFI icircn Mo a fost de 22819 plusmn 5880 iar

pentru lotul martor s-a calculat o valoare medie a MFI a Ac anti-PPARα de 23538 plusmn 7717

Distribuţia statistică a frecvenţei valorilor MFI obţinute pentru nivelul de expresie a PPARα

icircn Mo subiecţilor din cele două loturi a fost reprezentată icircn figura 511

Figura 511 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti-PPARα icircn Mo

Sub forma unei diagrame de control Shewhart am reprezentat variaţia intensităţii medii de

fluorescenţă pentru anticorpii anti-PPARα icircn MoVariaţia nivelului de expresie relativă a

receptorilor PPARα icircn Mo subiecţilor studiaţi este ilustrată icircn fig 512 513

Figura 512 Lot SM Variaţia

expresiei relative a PPARα icircn Mo

Număr pacienţi

26

Minim 128

Maxim 358

Media 22819

DS 5819

25 din 26 valori ale MFI s-au icircncadrat

icircn intervalul Media plusmn 2DS

Figura 513 Lot Non-SM Variaţia

expresiei relative a PPARα icircn Mo

Număr pacienţi 31

Minimum 786

Maximum 379

Media 23538

DS 7717

Cu excepţia unei singure

determinări valorile calculate s-au

icircncadrat icircn Media plusmn 2DS

Utilizacircnd testul parametric t-Student pentru variabilele cu distribuţie normală am

comparat valoarea medie a intensităţii de fluorescenţă a Ac anti-PPARα icircn lotul cu SM versus

subiecţi fără SM (Lot Non-SM) Analiza statistică efectuată nu a identificat diferenţe icircntre

50 100 150 200 250 300 350 400 450

0

5

10

15

20

25

30

35

MFI anti-PPAR a

Frecv

enta

relati

va (

)

Lot SM

0 50 100 150 200 250 300 350 400 450 500

0

5

10

15

20

25

30

35

MFI anti-PPAR a

Frecv

enta

relati

va (

)

Lot martor

1 6 11 16 21 26 31

0

50

100

150

200

250

300

350

400

450

MFI

anti-

PPAR

a

2282

1106

3458

518

4046

Media

LCI

LCI

1 6 11 16 21 26 31 36

-100

0

100

200

300

400

500

MFI a

nti-PP

AR

a

2354

810

3897

39

4669LCS

LCI

Media

cele două loturi icircn ceea ce priveşte expresia PPARα la nivelul Mo circulante (t- Test P=

069)

Studiul receptorilor PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de AHC şi dislipidemie

Nivelul de expresie al receptorilor PPARα α icircn Mo tinde să fie mai scăzut la subiecţii

cu AHC de HTA comparativ subiecţii care nu au declarat AHC de HTA (P= 006 fig 515)

AHC HTA

Număr 22

Mediana 19950

Percentila 25 17800

Percentila 75 22700

AHC HTA absente

Număr 35

Mediana 24800

Percentila 25 19025

Percentila 75 31700

Figura 515 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Mo funcţie de AHC de HTA

Nu s-au calculat diferenţe semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor

PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de dislipidemie atunci cacircnd aceştia au fost comparaţi cu

subiecţii fără AHC de tulburări ale metabolismului lipidic (t- Test P= 020)

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn limfocite

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn populaţia de Ly a

demonstrat prezenţa receptorilor PPARα icircn Ly tuturor subiecţilor studiaţi Pentru toţi

participanţii investigaţi analiza MFI a Ac anti - PPARα icircn populaţia de Ly a relevat un

interval de variaţie icircntre [748 314] iar valoarea medie a MFI a fost de 18058 plusmn 5600

Pentru ambele loturi aplicarea testului Shapiro-Wilk a evidenţiat distribuţia normală a

valorilor determinate pentru nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Ly Pentru

pacienţii cu SM valoarea medie a MFI determinată pentru expresia PPARα icircn populaţia de

Ly a fost de 18178 plusmn 61 16 iar pentru lotul martor a fost de 16800 plusmn 5229

Tabel XXX Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn limfocite

Lot SM Lot Non-SM

N 26 31

Media 181781 179574

SD 611694 522907

Mediana 165000 168000

Minimum 81300 74800

Maximum 314000 301000

Percentila 25 13400 - 145750

Percentila 75 21800 21700

Distribuţia frecvenţei valorilor MFI a Ac anti-PPARα icircn Ly este redată icircn figura 518

Figura 518 Distribuţia frecvenţelor relative a MFI a Ac anti-PPARα icircn Ly

94 din determinările efectuate pentru determinarea nivelului de expresie relativă al

MFI

ant

iPPA

R

a_Mo

190

200

210

220

230

240

250

260

270

280

DA NU

AHC HTA

P=006

50 89 128 167 206 244 283 322 361 400

0

5

10

15

20

25

30

35

MFI anti-PPAR a

Frecv

enta

relati

va (

)

Lot SM

0 50 100 150 200 250 300 350

0

5

10

15

20

25

30

35

40

MFI anti-PPAR a

Frec

venta

relat

iva (

)

Lot Non-SM

receptorilor PPARα icircn limfocitele subiecţilor cu SM s-au icircncadrat icircn intervalul Media plusmn 2DS

Figura 5 19 Lot SM Variaţia expresiei

relative a PPARα icircn Ly

Număr pacienţi 26

Minimum 813

Maximum 31400

Media 18178

Deviaţia Standard 6116

25 valori s-au icircncadrat icircn Media plusmn 2DS

Pentru lotul Non-SM diagrama de control (figura 520) a arătat toate valorile

determinate pentru lotul Non-SM se icircncadrează icircntre LCS şi LCI

Figura 520 Lot Non -SM Variaţia

expresiei relative a PPARα icircn Ly

Număr pacienţi 31

Minimum 748

Maximum 30100

Media 179574

Deviaţia Standard 5229

96 din valori icircncadrate icircn Media plusmn 2DS

Aplicarea testului t-Student pentru valorile medii ale intensităţii de fluorescenţă ale

PPARα icircn Ly nu a arătat existenţa unei diferenţe statistic semnificative icircntre lotul cu SM şi

lotul martor(t- Test P= 088)

Analiza receptorilor PPARα icircn Ly subiecţilor cu AHC de HTA şi dislipidemie

Studiind populaţiile de Ly la subiecţii care au prezentat AHC de hipertensiune

arterială analiza flowcitometrică a relevat existenţa unor valori mai mici pentru MFI la aceşti

subiecţi comparativ cu cei fără AHC de HTA (fig 522) deşi scăderea observată nu a

icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică (t- Test P = 009)

AHC HTA

Număr 22

Mediana 16000

Percentila 25 12700

Percentila 75 17100

AHC HTA absenţe

Număr 35

Mediana 18700

Percentila 25 14900

Percentila 75 23175

Figura 522 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Ly funcţie de AHC de HTA

Nu am calculat diferenţe statistic semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor

PPARα icircn populaţiile de Ly ale subiecţilor la care am identificat AHC de dislipidemie

comparativ cu cei care nu au declarat antecedente familiale de dislipidemie (t- Test P= 051)

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn neutrofile (PMN)

Analiza flowcitometrică a evidenţiat prezenţa PPARα icircn PMN recoltate din sacircngele

venos al tuturor participanţilor la studiu Pentru toţi subiecţii investigaţi analiza MFI a Ac -

PPARα icircn populaţia de PMN a relevat un interval de variaţie de [163419] iar valoarea medie

a MFI pentru Ac anti-PPARα a fost de 26392 plusmn 7064 Testul Shapiro-Wilk a arătat o

distribuţie normală a valorilor intensităţii medii de fluorescenţă a anticorpilor anti-PPARα atacirct

icircn lotul pacienţilor cu SM cacirct şi icircn lotul martor

1 6 11 16 21 26 31

-50

0

50

100

150

200

250

300

350

400

MFI

anti-

PPAR

a

1818

595

3041

-17

3653

Media+2DS

Media- 2DS

1 6 11 16 21 26 31 36

0

50

100

150

200

250

300

350

MFI

ant

i-PPA

R

a

1796

750

2841

227

3364

Media+2DS

Media

Media- 2DS

MFI

anti-

PPAR

a Ly

130

140

150

160

170

180

190

200

210

DA NU

AHC HTA

P=009

Tabel XXXII Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn PMN

Lot SM Lot Non-SM

N 26 31

Media 26273 26480

SD 6915 7088

Mediana 25900 25500

Minimum 17200 16300

Maximum 39500 41900

Percentila 25 19800 19600

Percentila 75 30500 31500

Icircn cele două loturi distribuţia frecvenţei valorilor nivelului relativ de expresie a

receptorilor PPARα icircn PMN a fost reprezentată sub formă de histograme (fig 525)

Figura 525 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti-PPARα icircn PMN

Pentru cei 26 de pacienţi din lotul cu SM a valoarea medie a nivelului de expresie

relativă a receptorilor PPARα icircn PMN a fost de 26273 plusmn 6915 Studiind diagrama Shewhart

din figura 526 se observă că toate valorile obţinute pentru nivelul de expresie relativă

PPARα icircn PMN investigate se icircncadrează icircntre limitele definite de valorile medii plusmn 2DS

Figura 526 Lot SM

Variaţia expresiei relative a PPARα icircn

PMN

Număr pacienţi 26

Minimum 17200

Maximum 39500

Media 26273

Deviaţia Standard 6915

Valorile MFI icircncadrate icircn Media plusmn 2DS

Pentru lotul martor valoarea medie calculată a MFI a anticorpilor anti-PPARα a fost de

26480 plusmn 7088 peste 95 din valorile MFI fiind cuprinse icircn Media plusmn 2DS (figura 527)

Figura 527 Lot Non-SM Variaţia expresiei

relative a PPARα icircn PMN

Număr pacienţi 31

Minimum 16300

Maximum 41900

Media 26480

Deviaţia Standard 7088

30 valoriicircn Media plusmn 2DS

Pentru PMN analiza statistica nu a arătat existenţa unei diferenţe statistic semnificative icircntre

nivelul de expresie relativă a PPARα la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii din lotul

Non-SM (t- Test P= 090) Studiind populaţiile de PMN la subiecţii care au prezentat AHC

de HTA nu am calculat o diferenţă statistic semnificativă icircntre expresia receptorilor PPARα

la subiecţii cu istoric familial de hipertensiune arterială comparativ cu cei pentru care nu s-au

notat AHC de HTA (t- Test P= 013)De asemenea am identificat diferenţe icircntre nivelul de

expresie al PPARα icircn PMN subiecţilor care prezentau AHC de dislipidemie comparativ cu

cei fără AHC de dislipidemie (t- Test P= 017)

50 100 150 200 250 300 350 400 450 500

0

5

10

15

20

25

30

35

MFI anti-PPAR a

Frecve

nta rel

ativa (

)

Lot SM

50 100 150 200 250 300 350 400 450 500

0

5

10

15

20

25

30

MFI anti-PPAR a

Frecv

enta

relati

va (

)

Lot Non-SM

1 6 11 16 21 26 31

0

50

100

150

200

250

300

350

400

450

500

MFI

anti-

PPA

R

a

2627

1244

4010

553

4702

Media + 2DS

Media - 2 DS

Media

1 6 11 16 21 26 31 36

0

50

100

150

200

250

300

350

400

450

500

MFI

anti-

PPAR

a

2648

1230

4066

522

4774

Media+ 2DS

Media - 2DS

Media

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile Tabel XXXIV Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn Eo

Lot SM Lot Non-SM

N 26 31

Mediaplusmn SD 141057 plusmn 47604 172209 plusmn 37565

Mediana 142450 171300

Minimum 35000 68500

Maximum 233700 250600

Percentila 25 119300 153225

Percentila 75 169700 199550

Am studiat nivelul relativ de expresie a receptorilor PPARα icircn Eo iar rezultatele au

fost figurate sub forma de histograme (figura 532)

Figura 532 Distribuţia frecventelor relative ale valorilor MFI anti- PPARα icircn Eo

Din diagrama Shewhart (figura 533) se observă că toate valorile determinate pentru

nivelul de expresie relativă a PPARα icircn Eo pentru lotul SM s-au icircncadrat icircn [Media plusmn 3 DS]

peste 90 din determinări fiind cuprinse icircn [Media plusmn 2 DS] iar icircn [Media plusmn 1 DS] sunt

incluse peste 65 din valorile MFI

Figura 533 Lot SM

Variaţia expresiei relative a PPARα icircn Eo

Număr pacienţi 26

Minimum 35000

Maximum 233700

Media 141057

Deviaţia Standard 47604

24 valori icircncadrat eicircn [Media plusmn 2DS]

Pentru subiecţii incluşi icircn lotul martor analiza diagramei (figura 534) a arătat că

toate cele 31 de valori ale MFI pentru PPARα icircn Eo se icircncadrează icircn [Media plusmn 3DS] iar 30

dintre acestea se icircncadrează icircn [ Media plusmn 2 DS]

Figura 534 Lot Non -SM

Variaţia expresiei relative a PPARα icircn Eo

Număr pacienţi 31

Minimum 685

Maximum 2506

Media 172209

Deviaţia Standard 375 65

30 valori icircncadrate icircn [Media plusmn 2DS]

Comparacircnd subiecţii cu SM cu cei din lotul martor am observat o scădere

semnificativă statistic a MFI a Ac anti - PPARα icircn Eo pentru pacienţiir cu SM ( figura 535)

PPARα Eo Lot Non-SM

Număr 31

Mediana 171300

Percentila 25 152325

Percentila 75 199550

PPARα Eo Lot SM

Număr 26

Mediana 142450

Percentila 25 119300

Percentila 75 169700

Figura 5 35 Comparaţie icircntre nivelul de expresie a PPARα icircn Eo

0 500 1000 1500 2000 2500 3000

0

10

20

30

40

50

MFI anti-PPAR a

Frecvent

a relativa

()

Lot SM

400 800 1200 1600 2000 2400 2800

0

5

10

15

20

25

30

35

40

45

MFI anti-PPAR a

Frecenta

relativa

()

Lot Non-SM

1 6 11 16 21 26 31

-500

0

500

1000

1500

2000

2500

3000

MFI a

nti-PP

AR

a

14106

4765

23447

94

28117

Media + 2DS

Media- 2DS

LCI

LCS

1 6 11 16 21 26 31 36

500

1000

1500

2000

2500

3000

MFI an

ti-PPA

R a

17221

9708

24734

5951

28490

LCI

Media-2DS

Media

Media +2 DS

LCS

1200

1300

1400

1500

1600

1700

1800

1900

Lot SM Lot Non-SM

P=00072

Cu ajutorul curbei ROC am evaluat posibilitatea utilizării MFI a Ac anti - PPARα icircn

Eo ca marker pentru diagnosticul SM Valoarea MFI a Ac anti - PPARα icircn Eo care prezice cu

cea mai mare acurateţe prezenţa SM a fost de 1533 (punctul de ldquocut-offrdquo) pentru care am

calculat o sensibilitate de 5652 şi o specificitate de 7778 Calculul ariei AUC a furnizat

valoarea de 0663 şi deci determinarea parametrului MFI anti- PPARα icircn Eo are valoarea

unui test cu acurateţe redusatilde icircn diagnosticul SM Studiind expresia PPARα icircn Eo la subiecţii

care au prezentat AHC de HTA am observat o scădere semnificativă statistic (P = 00023) a

expresiei PPARα la subiecţii cu istoric familial de HTA comparativ cu subiecţii fatilderatilde AHC de

HTA (figura 537)

AHC HTA

Număr 22

Mediana 148800

Percentila 25 116425

Percentila 75 170750

AHC HTA absente

Număr 35

Mediana 170850

Percentila 25 143700

Percentila 75 195000

Figura 537 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Eo funcţie de AHC de HTA

Studiind subiecţii cu AHC declarate de dislipidemie nu am identificat diferenţe icircntre

nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Eo subiecţilor cu AHC de dislipidemie

comparativ cu cei care nu au declarat prezenţa AHC de dislipidemie (t - Test P = 067)

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor CD36

Am studiat expresia receptorilor CD36 icircn Mo subiecţilor incluşi icircn studiu

Lot Non - SM

BLot SM

Figura 539 Analiza flowcitometrica pentru receptorii CD36 icircn Mo

Pentru toţi participanţii la studiu valorile MFI au variat icircn intervalul [817 6933] iar

valoarea medie a MFI a Ac anti-CD36 a fost de 397133 plusmn 120902 Tabel XXXVII Statistică descriptivă pentru a CD36 icircn Mo

Lot SM Lot Non-SM

Media 429034 370377

Deviatia Standard 109051 125514

Mediana 411000 362800

Minimum 266400 81700

Maximum 693300 616800

Percentila 25 346200 273750

Percentila 75 469000 453300

Distribuţia frecvenţelor relative a MFI au fost prezentate sub formă histogramelor

Figura 541 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti - CD36 icircn Mo

MFI

ant

i-PPA

R a Eo

1000

1100

1200

1300

1400

1500

1600

1700

1800

1900

DA NU

AHC HTA

P=00023

1000 2000 3000 4000 5000 6000 7000 8000

0

5

10

15

20

25

MFI anti-CD36

Frecve

nta rela

tiva (

)

Lot SM

0 1778 3556 5333 7111

0

5

10

15

20

25

30

35

MFI anti-CD36

Frecve

nta rel

ativa (

)

Lot Non - SM

Referitor la lotul SM 92 din valorile MFI a Ac anti- CD36 s-au icircncadrat icircn

intervalul Media plusmn 2 DS (figura 542) iar pentru lotul martor peste 90 dintre acestea icircn

Media plusmn 2 DS (figura 543)

Figura 542 Lot SM

Variaţia MFI anti-CD36 icircn Mo

Număr pacienţi 26

Minimum 2664

Maximum 6933

Media 429034

Deviaţia Standard 109051

Figura 543 Lot Non -SM

Variaţia MFI anti- CD36 icircn Mo

Număr 31

Minimum 81700

Maximum 616800

Media 370377

Deviaţia Standard 125514

Comparacircnd subiecţii cu SM cu cei din lotul normal am constatat o tendinţă de creştere

a expresiei CD36 icircn lotul cu SM((t - Test P= 0067)

MFI anti - CD36 Lot Non-SM

Număr 31

Mediana 3628

Percentila 25 2737

Percentila 75 4533

MFI anti - CD36 Lot SM

Număr 26

Mediana 4110

Percentila 25 3462

Percentila 75 4690

Figura 544 Comparaţie icircntre cel două loturi privind MFI anti - CD36 icircn Mo

Referindu-ne la subiecţii cu AHC de HTA am observat o tendinţă de creştere a

valorilor MFI anti-CD36 comparativ cu cei care nu au avut AHC de HTA (t - Test P = 0 08)

AHC HTA

Număr 22

Mediana 442800

Percentila 25 355275

Percentila 75 519475

AHC HTA absenţe

Număr 35

Mediana 377400

Percentila 25 316900

Percentila 75 443400

Figura 545 Comparaţie icircntre expresia CD36 icircn Mo funcţie de AHC de HTA

Nu s-au calculat diferenţe semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor

PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de dislipidemie atunci cacircnd aceştia au fost comparaţi cu

subiecţii fără AHC de dislipidemie (t - Test P=031)

Corelaţii icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα si CD36

Studiind valorile intensităţii medii de fluorescenţă a Ac anti-PPARα icircn Mo Ly şi

PMN am observat că nivelul de expresie celularatilde a PPARα icircn Mo Ly şi PMN sunt corelate

puternic pozitiv atacirct icircn lotul SM cacirct şi icircn lotul martor(fig547 548)

1 6 11 16 21 26 31

0

1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

8000

Pacienti

MFI a

nti-CD

36

42903

21093

64714

10188

75619

LCI

Media

LCS1 6 11 16 21 26 31 36

-1000

0

1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

8000

MFI a

nti- C

D36

37038

11935

62141

-616

74692Media + 2 DS

Media

Media - 2 DS

3200

3400

3600

3800

4000

4200

4400

4600

4800

Lot SM Lot Non-SM

P = 00676

MFI

anti-

CD36

3400

3600

3800

4000

4200

4400

4600

4800

5000

DA NU

AHC HTA

P = 008

Figura 547 Studiul relatiilor dintre

receptorii PPARα icircn SM A Mo vs PMN B Mo vs Ly

C PMN vs Ly Graficul ilustrează coeficienţii r P dreapta de

regresie (linia centrala) intervalul de icircncredere

95 şi intervalul de predicţie 95

Figura 548 Corelaţii icircntre receptorii PPARα icircn lotul

martor

A Mo vs PMN

B Mo vs Ly

C PMN vs Ly

Tot pentru lotul SM cacircnd am evaluat relaţia dintre nivelul de expresie relativă a

receptorilor PPARα icircn Eo şi nivelul de expresie relativa a receptorilor CD 36 am obţinut o

corelaţie negativă (r = - 05 P = 001) (fig 549 A)

50 100 150 200 250 300 350 50

100

150

200

250

300

350

400

450

500

PPARα Ly

PPARα PMN

y = 56641 + 1159 x r = 086 P lt 0001

C

50 100 150 200 250 300 350 400 0

50

100

150

200

250

300

350

PPARα Mo

PPARα Ly

y = 36665 + 0607 x r = 090 P lt 0001

B

150 200 250 300 350 400 450 0

50 100 150 200 250 300 350 400 450 500

PPARα PMN

PPARα Mo

y = 2505 + 0879 x r = 081 P lt 0001

A

50 100 150 200 250 300 350

50 100 150 200 250 300 350 400 450 500

PPARα Ly

PPARα PMN

y = 95668 + 0919 x r = 081 P lt 0001

C

100 150 200 250 300 350 400

0

50

100

150

200

250

300

350

400

PPARα Mo

PPARα Ly

y = -7503 + 0829 x r = 079 P lt 0001

B

100 150 200 250 300 350 400

50

100

150

200

250

300

350

400

450

500

PPARα Mo

PPARα PMN

y = 61384 + 0882 r = 074 P lt 0001

A

Figura 549 Corelaţii icircntre expresia PPARα icircn Eo şi alte tipuri de receptori investigaţi A PPARα Eo şi CD 36 (Lot SM) B PPARα Eo şi PPARα Mo( Lot Non-SM)

Icircn lotul martor am identificat o asociere moderată pozitivă (r = 038 P = 0033) icircntre

nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Eo şi Mo (figura 549B) corelaţie absentă icircn

lotul pacienţilor cu SM

Corelaţii dintre receptorii studiaţi şi componentele sindromului metabolic

Icircn lotul de control analiza statistică a relevat faptul că icircntre circumferinţa

abdominală (CA ) şi nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Mo Ly şi PMN există o

corelaţie inversă adică scăderea expresiei PPARα la nivelul acestor populatii celulare ar fi

icircnsoţită de creşterea CA (figura 550

Figura 550Corelaţii dintre receptorii

PPARα si CA A Mo B Ly C PMN

La pacienţii cu SM am notat o corelatie moderată negativă statistic semnificativă

icircntre TG şi valorile MFI a Ac anti- PPARα icircn Mo şi Ly( fig 551)

150 200 250 300 350 400 450 50

60

70

80

90

100

110

PPARα PMN

CA r = - 040 P = 0024

C

50 100 150 200 250 300 350 50

60

70

80

90

100

110

PPARα Ly

CA r = - 046 P = 0009

B

50 100 150 200 250 300 350 400 50

60

70

80

90

100

110

PPARα Mo

CA r = - 042 P = 0017

A

50 100 150 200 250 300 350 400 500

1000

1500

2000

2500

3000

PPARα Mo

PPARα Eo

r = 038 P = 0033

B

0 500 1000 1500 2000 2500 1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

8000

PPARα Eo

CD36

r = 050 P = 0010

A

Figura 551 Lot SM Corelaţie icircntre expresia PPARα şi TG (A Mo B Ly)

Analizand corelatia dintre receptorii CD36 si valorile TA la pacientii cu SM am observat

o asociere pozitivă asteptată intre TAD si nivelul de expresie al receptorilor CD36 (fig 552)

Figura 552 Lot SM Corelaţii icircntre expresia

receptorilor CD36 şi valorile tensiunii arteriale

diastolice

Studiind corelaţiile dintre receptorii PPARα şi HDL-col la subiecţii din lotul martor am

notat o asociere pozitivă icircntre expresia PPARα icircn Mo şi Ly cu HDL-col (fig 553)

Figura 553 Lot martor Corelaţii icircntre HDL-col şi expresia PPARα icircn Mo(A) Ly(B)

Icircn lotul normal am evidenţiat corelaţii pozitive moderate dar semnificative statistic icircntre

CA şi valorile TAS (r = 062 P lt 0001) respectiv TAD (r = 050 P=0004) precum şi icircntre

CA şi glicemia subiecţilor normali (r = 052 P = 0003) Aceste date icircmpreună cu relaţia

invers proporţională identificată icircntre HDL-col şi CA (r = 050 P = 001) susţin validitatea

acestui studiu Icircn lotul subiecţilor cu SM am observat o corelaţie moderat pozitivă icircntre

expresia PPARα icircn populaţiiile de Mo şi Eo şi concentraţia a HDL-col (fig 554)

B

100 150 200 250 300 350 20

30

40

50

60

70

80

90

100

PPARα Ly

HDL-col-(mgdl)

r = 036 P = 0046

A

150 200 250 300 350 400 20

30

40

50

60

70

80

90

100

PPARα Mo

HDL-col-(mgd)l

r = 035 P = 005

70 75 80 85 90 95 100 1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

8000

TAD (mmHg)

CD36

r = 048 P = 0013

B

50 100 150 200 250 300 350 -100

0

100

200

300

400

500

PPARα Ly

TG(mgdl)

r = - 042 P = 003

A

50 100 150 200 250 300 350 400 -100

0

100

200

300

400

500

PPARα Mo

TG ( mgdl) r =- 0 43 P = 0027

Figura 554 Corelaţii icircn SM icircntre HDL-col şi expresia PPARα icircn Mo (A) şi Eo(B)

Corelaţii icircntre nivelul de expresie relativă a PPARα şi markeri ai disfuncţiei

endoteliale şi inflamaţiei cronice

Deşi nu a icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică am reţinut corelaţia invers

proporţională (r = - 0331 P = 006) dintre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα

icircn PMN şi concentraţia serică a Non-HDL-colesterolului

Studiind relaţiile dintre parametri icircn lotul de pacienţi cu SM am observat o corelaţie

moderată invers proporţională icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Eo şi

acidul uric seric (figura 555 A) corelaţie absentă la subiecţii fără SM

Figura 555 Lot SM corelaţia dintre expresia PPARα icircn Eo şi acidul uric (A) respectiv

PPARα şi fibrinogen (B)

Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P=008) am notat pentru

pacienţii cu SM corelaţia invers proporţională dintre expresia PPARα icircn Eo şi concentraţia

serică a fibrinogenului ( figura 555B)

V5 Discuţii

Icircn cadrul lucrării de doctorat am studiat nivelul de expresie relativă a PPARα icircn

leucocitele pacienţilor cu SM comparativ cu cea a subiecţilor normali Expresia PPARα a fost

studiată icircn paralel cu cea a CD36 glicoproteină exprimată pe suprafaţa a numeroase celule

din organismul uman inclusiv pe cea a Mo şi macrofagelor Prin funcţia sa de receptor pentru

particulele oxidate de LDL CD36 cunoscut ca bdquoscavenger receptorrdquo de clasa B sau

bdquotrombospodin receptorrdquo contribuie la dezvoltarea inflamaţiei de la nivel endotelial şi

formarea plăcii de ateroscleroză Referitor la studiul PPARα icircn Eo icircn sindromul metabolic

menţionăm că studiul nostru este primul care arată că nivelul de expresie a proteinei PPARα

icircn Eo măsurat prin citometrie icircn flux este semnificativ mai redus la pacienţii care sunt

diagnosticaţi cu acest sindrom De asemenea icircn lotul cu SM cercetat icircn cadrul studiului

receptorilor PPARα numărul Eo circulante a fost semnificativ mai crescut la pacienţii cu SM

B

0 500 1000 1500 2000 2500 200

250

300

350

400

450

PPARα Eo o

Fibrinogen mgdl

r =- 036 P = 008

0 500 1000 1500 2000 2500 1 2 3 4 5 6 7 8 9

10 11

PPARα Eo_

Acid uric(mgdl) r = 048 P = 0014 A

0 500 1000 1500 2000 2500 10

20

30

40

50

60

70

80

PPARα Eo

HDL(mgdl)

r = 044 P = 0024

B

100 150 200 250 300 350 400 10

20

30

40

50

60

70

80

PPARα Mo

HDL( mgdl)

r = 046 P = 0019

A

(P = 003) Aceste constatări conduc la ipoteza că Eo joacă un rol special icircn mecanismele

patogenice declanşate icircn sindromul metabolic şi că receptorii PPARα sunt importanţi icircn

implicarea Eo icircn obezitate şi insulinorezistenţă Creşterea numărului de Eo circulante este

urmată de eliberarea mediatorilor proinflamatori iar reducerea expresiei PPARα icircn Eo

determină perturbarea mecanismelor de control al inflamaţiei cu exacerbarea cascadei

proinflamatorii Consecutiv se agravează disfuncţia endotelială şi se accelerează progresia

leziunilor de ateroscleroză Extrapolacircnd aceste ipoteze putem spune că asocierea raportată

dintre boala ischemică coronariană şi Eo poate fi şi consecinţa exacerbării cascadei

proinflamatorii de la nivel vascular produsă datorită scăderii expresiei PPARα icircn Eo iar

creşterea numărului de Eo circulante poate reprezenta o adaptare a organismului uman care

icircncearcă să suplinească deficitul de receptori PPARα Analizacircnd curba ROC pentru

intensităţile medii de fluorescenţă determinate pentru anticorpii anti- PPARα icircn Eo am

obţinut pentru acest biomarker o sensibilitate a testului de 565 şi o specificitate de 778

pentru un punct de cut-off de 1533 ( figura 536 ) Deşi aria AUC (Aria under the curve) egală

cu 0663 icircncadrează acest test ca avacircnd o acurateţe redusă observăm că că această valoare

este apropiată de determinările AUC pentru alţi factori (fibrinogen raport de aterogenitate

acid uric non- HDL-colesterol) cunoscuţi ca fiind implicaţi icircn aterogeneză şi inflamaţia

cronică (figura 431) Aceste remarci alături de faptul că icircn studiul receptorilor PPARα icircn

leucocite am inclus subiecţi la primul diagnostic de SM creează premisa integrării

determinării expresiei relative a receptorilor PPARα icircn diagnosticul complex al sindromului

metabolic Putem spune că icircn final studiul expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofilele

circulante se dovedește a fi util icircn diagnosticul precoce la nivel molecular al SM permiţacircnd

identificarea timpurie a unor indivizi cu risc cardiometabolic crescut Astfel intervenţia

precoce asupra subiecţilor cu deficit de PPARα icircn Eo contribuie la managementul eficient al

afecţiunilor degenerative icircn care inflamaţia cronică icircndeplineşte un rol primordial Referitor

la populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările efectuate prin citometrie de flux nu au

arătat existenţa unor diferenţe statistice icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα

la subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali Rezultatele noastre pot fi

consecinţa caracteristicilor loturilor studiate (icircn studiul nostru au fost incluşi subiecţi recrutaţi

la primul diagnostic de SM şi icircn absenţa stimulării receptorilor PPARα cu droguri agoniste

PPARα) dar icircn acelaşi timp pot apare diferenţe datorită metodei utilizate (231 232 233)

Făcacircnd o paralelă cu un studiu publicat icircn 2013 icircn Europa (231) care a arătat creşterea

nivelului de expresie al PPARα icircn Ly şi Mo observăm că deşi numărul de subiecţi a fost

aproximativ egal (57 participanţi icircn studiul nostru 60 icircn studiul DAmore) subiecţii icircn studiul

amintit au fost recrutaţi dintr-o clinică cu profil medical la primul diagnostic de SM icircn timp

ce metoda utilizată a fost PCR (Polymerase Chain Reaction) mult mai fidelă decacirct citometria

icircn flux icircn studiul receptorilor nucleari De asemenea DAmore nu investighează expresia

PPARα icircn Eo şi PMN icircn cercetare fiind incluse doar celulele CD14+ (predominant Mo) şi

CD14- (predominant Ly) Deşi nu am obţinut diferenţe statistic semnificative icircntre cele două

loturi referitoare la nivelul de expresie relativă a PPARα icircn Mo Ly şi PMN am observat

corelaţii puternice semnificative statistic icircntre expresia receptorilor PPARα icircn aceste tipuri

celulare Rezultatele obţinute sugerează existenţa unui mecanism diferit molecular de control

icircn eozinofile care reglează cantitatea de proteină PPARα icircn eozinofile versus alte tipuri de

leucocite (la pacienţii cu SM) şi acest lucru este icircn concordanţă cu cercetările care descriu

expresia PPARα mRNA icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale

bronşice keratinocite) Studiind prin citometrie de flux nivelul de expresie relativă a

receptorului CD36 la nivelul Mo am arătat prezenţa acestuia icircn Mo tuturor subiecţilor

investigaţi Analizacircnd valorile intensităţii medii de fluorescenţă a CD36 icircn loturile studiate

am observat o tendinţă de creştere la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali

confirmacircnd implicarea receptorului CD36 icircn patogeneza acestuia Referitor la expresia

receptorului CD36 rezultatele obţinute sunt icircn consens cu studii anterioare care au arătat

creşterea expresiei CD36 la pacienţii cu SM şi diabet zaharat Astfel pe lacircngă diferenţa icircn

expresia CD36 s-au raportat şi corelaţii inverse icircntre expresia proteinei CD36 şi nivelul

adiponectinei Acelaşi studiu a evidenţiat o corelaţie pozitivă intre expresia CD36 cu expresia

receptorilor PPAR gamma relaţia cu PPARα nefiind investigată

Analiza de subgrup a relaţiilor dintre componentele SM și elementele moleculare

proinflamatorii studiate a relevat prezenţa unor asocieri semnificativ statistice icircntre acestea

Se argumentează astfel că veridicitatea studiului este susţinută de interdependenţele statistice

ale componentelor SM Determinarea coeficientului de corelaţie Icircn studiul nostru nivelul de

expresie relativă a PPARα s-a corelat moderat negativ (figura 550) cu CA a subiecţilor din

lotul normal pentru populaţiile celulare de Mo (r = - 0420 P = 001) Ly (r = - 046 P =

0009) şi PMN (r = - 040 P = 0024) date care sunt icircn concordanţă cu studiile care arată

rolul PPARα icircn furnizarea energiei prin beta-oxidarea acizilor graşi Icircn acelaşi timp icircn lotul

pacienţilor cu SM nu am identificat prezenţa unei asocieri icircntre nivelul de expresie relativă a

PPARα şi valoarea măsurată a CA Asocierea dintre expresia relativă a PPARα cu obezitatea

de tip central completează datele existente referitoare la reglarea homeostaziei energetice

conturacircnd un mecanism de control deficitar al aportului caloric al SM Icircn condiţiile icircn care

rezultatele obţinute prin metoda citometriei icircn flux nu au arătat existenţa unei corelaţii intre

expresia PPARα şi CA la pacienţii cu SM considerăm că ar fi necesar studiul

polimorfismului genei PPARA care ar putea aduce informaţii importante cu privire la

implicarea acestor receptori icircn apariţia obezităţii de tip central Subliniem acest lucru deoarece

obezitatea este o boală plurifactorială icircn care pe lacircngă factorii ereditari sunt implicaţi factori

de mediu psihologici şi sociali (245) Existenţa unei componente genetice a aterosclerozei

este legată şi de prezenţa unor variante ale genei PPARA asociate cu creşterea incidenţei bolii

cardiovasculare (82) şi a SM (249) Icircn studiul nostru am constatat o scădere statistic

semnificativă a nivelului expresiei relative a receptorilor PPARα icircn Eo la subiecţii cu

antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială comparativ cu subiecţii fără istoric

familial de hipertensiune (figura 537) Deşi diferenţele calculate icircntre loturile studiate nu au

icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică la subiecţii care au declarat prezenţa

antecedentelor familiale de hipertensiune arterială remarcăm o tendinţă de scădere a

intensităţii medii de fluorescenţă pentru Ac anti-PPARα la nivelul Mo (figura 515 P = 006

) icircn timp ce expresia relativă a CD36 icircnregistrează o creştere la acesti subiecţi (figura 545 P

= 008) Icircn contextul riscului cardiovascular foarte icircnalt al pacienţilor cu SM amintim şi

existenţa corelaţiei pozitive dintre valorile tensiunii arteriale diastolice şi expresia relativă a

receptorului CD36 (r = 0483 P = 0013) Această constatare este icircn consens cu studiile care

au arătat că forma solubilă circulantă a CD36 este asociată cu factorii de risc cardiovasculari

fiind propusă ca un marker precoce al aterosclerozei Activarea PPARα este asociată cu

modularea metabolismului lipidic iar agoniştii PPARα sunt utilizaţi icircn mod curent pentru

tratamentul dislipidemiei Sub acţiunea agoniştilor PPARα se obţine o icircmbunătăţire a funcţiei

endoteliale şi a parametrilor reologici funcţiile pleiotropice ale agoniştilor PPARα fiind

dovedite icircn trialuri clinice controlate Icircn populaţiile de Mo şi Ly la pacienţii cu SM

cercetarea noastră a evidenţiat o asociere negativă icircntre nivelul de expresie relativă a

receptorilor PPARα şi concentraţia TG serice (figura 551) Astfel scăderea expresiei

receptorilor PPARα este asociată cu creşterea nivelului TG serice contribuind la profilul

lipidic aterogen din SM Icircn conformitate cu literatura de specialitate icircn studiul efectuat prin

metoda citometriei icircn flux am găsit prezenţa asocierii icircntre nivelul de expresie al PPARα şi

HDL-colesterol Corelaţia pozitivă dintre nivelul de expresie relativă PPARα şi concentraţia

HDL-colesterolului a fost observată icircn lotul martor icircn populaţiile de Mo (r = 035 P = 005)

şi Ly ( r = 036 P = 004) (figura 553) susţinacircnd faptul că stimularea receptorilor PPARα

este legată de creşterea nivelului seric al lipoproteinelor cu densitate crescută La pacienţii cu

SM corelaţia dintre expresia PPARα şi HDL-colesterol a fost evidenţiată icircn populaţiile de Mo

(r = 046 P = 0019) şi eozinofile (r = 044 P = 0024) Se desprinde concluzia că icircn

sindromul metabolic scăderea concentraţiei HDL-colesterol este legată de diminuarea

nivelului de expresie relativă a receptorilor nucleari PPARα icircntărind afirmaţiile legate de

rolul acestor receptori icircn progresia bolilor cardiovasculare Studiind reactanţii de fază acută

analiza statistică a relevat o diferenţă semnificativă din punct de vedere statistic icircntre valorile

fibrinogenului la pacienţii cu SM atunci cacircnd au fost comparaţi cu subiecţii fără SM

(Capitolul IV4 P lt0 001 figura 427A) De asemenea icircn Capitolul V dedicat studiul

expresiei relative a receptorilor PPARα studiul valorilor fibrinogenului a arătat creşterea

acestui reactant de faza acută icircn lotul cu SM comparativ cu lotul martor (P lt0 0001) Icircn

studiul nostru am calculat o corelaţie invers proporţionala (r = - -036 fig 555B) icircntre

nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile şi concentraţia serică a

fibrinogenului Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P = 008) am reţinut

această asociere deoarece am demonstrat că nivelul de expresie relativă al receptorilor

PPARα icircn eozinofile este mai scăzut icircn sindromul metabolic iar sindromul metabolic este

caracterizat printr-un status inflamator cronic status caracterizat şi de creşterea concentraţiei

serice a fibrinogenului De asemenea notam ca această corelaţie negativă se află icircn

concordanţă cu studiile care arata că tratamentul cu agonişti PPARα (fibraţi) determina

scăderea nivelului seric al fibrinogenului contribuind la diminuarea inflamaţiei cronice din

sindromul metabolic şi icircn consecinţă amelioracircnd insulinorezistenţa

LIMITE ȘI DIFICULTĂȚI IcircN CERCETARE

Icircn cadrul Tezei de Doctorat am desfăşurat o cercetare care şi-a propus studierea

expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Recrutarea anamneza şi examinarea

clinică a subiecţilor au fost realizate icircn cadrul Cabinetului de Medicină de Familie CMI Popa

Elena din Iaşi iar determinările hematologice şi biochimice s-au efectuat icircn cadrul

Laboratorului Ambulatorului de Specialitate al Spitalului Universitar ldquoSfacircntul Spiridon din

Iaşi Icircn studiul epidemiologic şi al markerilor inflamatori al sindromului metabolic desfăşurat

au fost incluşi un număr de 1530 de participanţi pe baza liberului consimţămacircnt examinaţi icircn

perioada 01012013 - 31122013 Icircn continuare icircn perioada 1012014 - 28022014 pe baza

criteriilor de includere şi excludere icircn cele două loturi de studiu am investigat un număr de 57

de subiecţi prezentaţi la consultaţie icircn această perioadă şi care au icircndeplinit criteriile de

includere icircn cele două loturi (Lot SM şi Lot Control) constituite pentru evaluarea nivelului de

expresie a receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Explorarea nivelului de expresie

relativă a receptorilor PPARα s-a desfăşurat icircn cadrul Laboratorului de Biologie Moleculară

de pe platforma Institutului Regional de Oncologie Datorită resurselor proprii financiare

limitate trebuie să subliniez că aceasta cercetare nu ar fi fost posibilă fără contribuţia unor

cercetători din domeniul medical care m-au sprijinit necondiţionat atacirct icircn elaborarea

protocolului de lucru cacirct şi icircn efectuarea propriu-zisă a studiului Icircn acest sens menţionăm şi

faptul că pentru studiul receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic am utilizat aparatura

Laboratorului de Biologie Moleculară (care deserveşte icircntreaga Regiune a Moldovei) Pe

această cale mulţumesc personalului Laboratorului de Biologie Moleculară pentru ajutorul

acordat icircn desfăşurarea cercetării doctorale icircn condiţiile icircn care se observa creşterea

numărului de pacienţi care se adresează acestei platforme de cercetare Mulţumesc de

asemenea şi Doamnei Doctor Elena Butoi din cadrul Institutului de Biologie şi Patologie

Moleculară ldquoNicolae Simionescurdquo Bucureşti) pentru donaţia anticorpului secundar anti-

FITC Icircn consecinţă pentru recrutarea unui număr mai mare de participanţi ar fi fost necesară

icircn primul racircnd obţinerea unor resurse financiare suplimentare pentru achiziţia de aparatură şi

reactivi Totuşi numărul subiecţilor recrutaţi este apropiat de numărul subiecţilor raportaţi icircn

cadrul unor granturi de cercetare care aveau ca ţinta studiul expresiei receptorilor PPARα

(212 227 228 231) Rezultatele obţinute continua seria lucrărilor care arata importanta

studiului mecanismelor etiopatogenice ale sindromului metabolic patologie care se afla icircntr-o

continuă creştere La pacienţii cu SM pe lacircngă diminuarea nivelului de expresie a receptorilor

PPARα icircn eozinofile ne aşteptam şi la evidenţierea unor modificări icircn expresia PPARα şi icircn

populaţiile de Ly Mo şi PMN Acest fapt poate fi explicat de utilizarea unor celule provenite

de la pacienţi fără afectare cardiovasculară fără diabet zaharat şi necesită continuarea

studiului pe culturi celulare icircn condiţii de stimulare cu agonişti PPARα deziderat care

impune continuarea investigării expresiei PPARα printr-un grant de cercetare

ORIGINALITATEA ȘI CONTRIBUȚIILE INOVATIVE ALE TEZEI DE

DOCTORAT PERSPECTIVE DE CERCETARE

Evaluarea nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn leucocitele circulante

aduce noi perspective icircn studiul obezităţii şi sindromului metabolic Importanta studiului

expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic derivă din prevalenta crescută a

sindromului metabolic icircn populaţia cercetată la care se adaugă riscul cardiovascular foarte

icircnalt al acestor pacienţi cu implicaţii majore icircn sănătatea publică Rolul receptorilor PPARα

icircn inflamaţie şi aterogeneza este binecunoscut dar studiul nostru este primul care a arătat că

nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα este semnificativ mai scăzut in populatiile

de eozinofile la pacienţii cu SM Această concluzie coroborata cu existenţa unei stracircnse

asocieri intre expresia receptorilor PPARα la nivelul Mo limfocitelor şi PMNlor creeaza

ipoteza existenţei unui mecanism de control diferit al expresiei PPARα la nivelul

eozinofilelor Această cercetare aduce informaţii importante referitoare la mecanismele

proinflamatorii care stau la baza insulinorezistenţei şi riscului cardiometabolic şi impune

continuarea studiului acestor receptori nucleari prin citometrie icircn flux metodă care poate fi

aplicată şi la scara mai largă dacă sunt asigurate resursele materiale necesare cercetării

Cercetarea prin citometrie icircn flux poate fi completată de studiul polimorfismului genei

PPARA şi astfel se pot identifica timpuriu indivizii cu potenţial risc cardiometabolic crescut

Studiul receptorilor PPARα a stabilit conexiuni cu factori proinflamatori şi aterogenetici iar

continuarea cercetării poate aduce şi elemente noi de diagnostic precoce icircn sindromul

metabolic contribuind la icircmbunătăţirea prognosticului acestor pacienţi

CONCLUZII FINALE

1 Aplicarea scorului de SM alături de implementarea algoritmului electronic de diagnostic

contribuie la o prelucrare rapidă eficientă și standardizată a informaţiilor la nivelul

medicinei primare

2 Prevalenţa SM calculată astfel icircn cadrul studiului este crescută (2732) icircn concordanţă

cu datele raportate

3 Controlul factorilor de risc cardiometabolici incluşi icircn SM se poate realiza prin

managementul stilului de viaţă (scăderea greutăţii corporale prin combaterea

sedentarismului şi adoptarea unei diete antiaterogene şi hipocalorice) şi administrarea

terapiei medicamentoase

4 Este necesară adoptarea unei politici de sănătate publică pentru prevenirea creşterii icircn

populaţie a prevalenţei obezităţii şi a diabetului zaharat

5 Noi metode de cercetare icircn domeniul SM axate pe diagnosticarea precoce şi cuantificarea

eficientă a acestuia duce la diminuarea incidenței evenimentelor cardiovasculare majore

6 Sindromul metabolic se caracterizează printr-un status inflamator cronic

7 Valorile Non-HDL-colesterolului şi a raportului de aterogenitate sunt semnificativ mai

mari la pacienţii cu SM

8 Dintre reactanţii de faza acută am observat că valoarea medie a fibrinogenului este mai

crescută icircn lotul cu SM

9 Valorile eozinofilelor sunt crescute icircn sindromul metabolic iar explorarea relaţiei dintre

eozinofile şi obezitate constituie una din direcţiile de studiu actuale ale sindromului

metabolic

10 Evaluarea markerilor inflamatori icircn contextul sindromului metabolic este utilă icircn

evaluarea complexă a a factorilor de risc cardiometabolici

11 Prin metoda citometriei icircn flux am demonstrat prezenta Receptorilor Activaţi de

Inductorii Proliferării Peroxizomilor ndash Alpha (PPARα) icircn toate populaţiile de leucocite

studiate (Mo limfocite PMN eozinofile) atacirct icircn lotul pacienţilor cu SM cacirct şi icircn lotul

martor

12 Utilizacircnd intensitatea medie de fluorescenţă a anticorpilor anti- PPARα am arătat că

nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile este semnificativ mai redus

la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali

13 Acest studiu este primul care a demonstrat existenţa unei scăderi statistic semnificative a

nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofilele pacienţilor cu SM

confirmacircnd cercetările recente care au evidenţiat rolul eozinofilelor şi al receptorilor

PPARα icircn obezitate reglarea inflamaţiei cronice şi aterogeneza

14 Contrar aşteptărilor noastre icircn populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările

efectuate icircn cele două loturi de studiu (cu şi fără sindom metabolic) nu am evidenţiat

diferenţe statistic seminificative icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα la

subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali

15 Icircn populaţiile de Mo limfocite şi polimorfonucleare am observat corelaţii puternice

semnificativ statistic icircntre expresia PPARα icircn aceste tipuri celulare sugeracircnd existenţa

unui mecanism unic de control al inflamaţiei cronice la nivelul acestor celule probabil

diferit de cel din eozinofile

16 La subiecţii cu SM expresia relativă a PPARα icircn Eo este invers asociată cu expresia

receptorului CD36 (receptor al particulelor de ox - LDL şi propus ca un marker precoce al

aterosclerozei) dovedind rolul antiinflamator al receptorilor PPARα la nivel endotelial

17 La pacienţii cu antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială nivelul de

expresie al receptorilor PPARα icircn eozinofile şi Mo este diminuat comparativ cu subiecţii

fără antecedente familiale de hipertensiune arterială Putem spune că studiul efectuat de

noi aduce informaţii importante legate de geneză aterosclerozei şi hipertensiunii arteriale

18 Prin studiul asocierilor dintre receptorii PPARα şi componentele clinice ale sindromului

metabolic am arătat rolul acestor receptori icircn determinismul obezităţii de tip central

nivelul expresiei relative a receptorilor PPARα fiind invers proporţional cu circumferinţa

abdominală

19 Icircn acelaşi timp nivelul de expresie a PPARα icircn sindromul metabolic este asociat pozitiv

cu concentraţia serică a HDL-colesterolului şi invers asociat cu nivelul trigliceridelor

serice dovedind rolul acestor receptori icircn diminuarea procesului inflamator cronic de la

nivel vascular

20 La pacienţii cu SM scăderea expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofile este corelată cu

creşterea unor markeri ai sindromului inflamator cronic cardiometabolic (acid uric

fibrinogen) ilustracircnd importanta receptorilor icircn reglarea status-ului inflamator cronic din

sindromul metabolic

21 Utilizarea metodei flowcitometrice pentru studiul expresiei relative a receptorilor PPARα

icircn leucocite a adus informaţii importante cu privire la mecanismele moleculare de control

implicate icircn patogenia bolilor cardiometabolice icircn concordanţă cu cercetările care descriu

expresia PPAR icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale bronşice

keratinocite)

BIBLIOGRAFIE SELECTIVA

1 Kahn R Metabolic syndrome- what is the clinical usefulness Lancet 2008371(9628)1892-3

2 Reaven GM The metabolic syndrome is this diagnosis necessary Am J Clin Nutr 2006 83(6)1237-7

3 Grundy SM Pre-Diabetes Metabolic Syndrome and Cardiovascular Risk J Am Coll Cardiol 201259(7)

635-43

4 International Diabetes Federation IDF Diabetes Atlas 6th edn International Diabetes Federation Belgium

Brussels 20131-155

5 World Health Organization Global Status Report on Noncommunicable Diseases 2010 World Health

Organization Geneva Switzerland 20111-176

6 Coman AE Petrovanu R Sindromul metabolic in practica de ambulator Editura Pim Iaşi 2009 1-103

7 Grundy SM Becker D Clark LT et alThird Report of the National Cholesterol Education Program (NCEP)

Expert Panel on Detection Evaluation and Treatment of High Blood Cholesterol in Adults (Adult

Treatment Panel III) Final Report Circulation 2002106(25)3143-90

8 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J Metabolic syndrome- a new worldwide definition A Consensus Statement

from the International Diabetes Federation Diabet Med 2006 23(5)469-80

9 KG Alberti KG Eckel RH Grundy SM etal International Diabetes Federation task force on epidemiology

and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart Association World Heart

Federation International Atherosclerosis Society International Association for the study of obesity

Harmonizing the metabolic syndrome a joint interim statement of the International Diabetes Federation task

force on epidemiology and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart

Association World Heart Federation International Atherosclerosis society and International Association

for the study of obesity Circulation 2009120(16)1640-5

10 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J IDF Epidemiology Task Force The metabolic syndrome new

worldwide definition Lancet 2005 366 1059 - 62

11 Oleszczyk M Svab I Seifert B et al Primary healthcare in the developing part of Europe changes and

development in the former Eastern Bloc countries that joined the European Union following 2004 Med Sci

Monit 2009(15)78ndash84

12 Jung U J Choi M S Obesity and Its Metabolic Complications The Role of Adipokines and the

Relationship between Obesity Inflammation Insulin Resistance Dyslipidemia and Nonalcoholic Fatty

Liver Disease Int J Mol Sci 2014rsquo15(4) 6184-223

13 Vanden Heuvel JP Peters JM Peroxisome Proliferators In Ramos K (ed) Cellular and Molecular

Toxicology (Second Edition) Volume 2 New York Elsevier Science Inc 2010 145 - 67

14 Yessoufou A Wahli W Multifaceted roles of peroxisome proliferator-activated receptors (PPARs) at the

cellular and whole organism levels Swiss Med Wkl 2010140w13071 doi104414smw201013071

15 Azhar S Peroxisome proliferator-activated receptors metabolic syndrome and cardiovascular disease

Future Cardiology 20106(5)657-91

16 Andries G Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity

Diabetes and Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(Suppl)24-32

17 Zandbergen F Plutzky J PPARalpha in atherosclerosis and inflammation Biochim Biophys Acta

20071771(8)972-82

18 Straus DS Glass CK Anti-inflammatory actions of PPAR ligands new insights on cellular and molecular

mechanisms Trends Immunol 200728(12)551-8

19 Zlei M Zugun- Eloae F Carasevici E Citometrie icircn flux - Bază şi clinică Icircn Hinescu ME (ed) Citometrie icircn

flux - principii şi aplicaţii clinice Bucureşti Editura Viaţa Medicală Romacircnească 20111-128

20 Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity Diabetes and

Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(9)24-32

21 Woerly G Honda K Loyens M et al Peroxisome proliferator-activated receptors alpha and gamma down-

regulate allergic inflammation and eosinophil activation J Exp Med 2003198(3)411-21

22 Salle-Saumont D Brenuchon C Kanda A et al Peroxisome proliferator-activated receptor alpha regulates

skin inflammation and humoral response in atopic dermatitis J Clin Allergy Immunology 2008 21(4)962-8

23 Schote A Turner J Schiltz J et al Nuclear receptors in human immune cells expression and correlations

Mol Immunolog 200744(6)1436-45

24 DAmore S Vacca M Graziano G et al Nuclear receptors expression chart icircn peripheral blood

mononuclear cells identifies patients with Metabolic Syndrome Biochim Biophys Acta

20131832(12)2289-301

25 Uthurralt J Gordish-Dressman H Bradbury M T et al PPARalpha L162V underlies variation in serum

triglycerides and subcutaneous fat volume in young males BMC Med Genet 2007855

26 Hiukka A Leinonen ES Jauhiainen M et al Long-term effects of fenofibrate on VLDL and HDL

subspecies icircn participants with type 2 diabetes mellitus Diabetologia 2007 50(10)2067-75

27 Robins SJ Rubins HB Faas FH et alInsulin resistance and cardiovascular events with low HDL

cholesterol The Veterans Affairs HDL Intervention Trial (VA-HIT) Diabetes Care 2003 26(5)1513-7

28 Devaraj S Siegel D Jialal I Statin Therapy in Metabolic Syndrome and Hypertension Post-JUPITER

What is the Value of CRP Curr Atheroscler Rep 2011 13(1) 31ndash42

29 Imperatore G Riccardi G Iovino C et al Plasma Fibrinogen A New Factor of the Metabolic Syndrome A

population-based study Diabetes Care 19982 1(4)649-54

30 Krysiak R Gdula-Dymek A Bachowski R Okopien B Pleiotropic effects of atorvastatin and fenofibrate

in metabolic syndrome and different types of pre-diabete Diabetes Care 201033(10)2266-70

31 Hermans MP Impact of Fenofibrate on Type 2 Diabetes Patients with Features of the Metabolic Syndrome

Subgroup Analysis From FIELD Curr Cardiol Rev 20106(2)112-8

32 Silverstein R Inflammation atherosclerosis and arterial thrombosis Role of the scavenger receptor CD36

Cleveland Clinic Journal of Medicine 200976(Suppl 2)S27-S30

33 Hăncu N Obezitatea In Vereşiu IA (ed) Diabetul zaharat nutritia si bolile metabolice Volume 2 Editura

Echinox Cluj- Napoca 2010 1-15

Lista lucrări publicate

1 Elena Popa Maria Maidaniuc Agnes Bacusca Alamir Diaa Rodica Petrovanu Adorata Elena

Coman Disfuncţia endotelială ndash de la mecanisme moleculare la cuantifi care şi tratament icircn practica

medicală Practica Medicală 20149(3) 109-14

2 Elena Popa Agnes Bacusca Alamir Diaa Maria Maidaniuc Rodica Petrovanu Adorata Elena Coman

The function of insulin receptor (IRF) in evolution of obesity correlation with adipocytes diameters

Archives of the Balkan Medical Union 201449(3) 275-9

3 Elena Popa Florin Zugun-Eloae Mihaela Zlei Daniela Jitaru Oana Maria Pintilie Adorata Elena

Coman Maria Traian Didona Anca Ungureanu Eugen Carasevici - acceptata pentru numarul 42014

Flow cytometry analysis of PPAR-alpha receptors in metabolic syndrome) Revista Romană de

Medicină de Laborator(RRLM-D-14-00034R1- adeverinţa ataşată

Page 17: REZUMAT TEZĂ DE DOCTORAT - umfiasi.ro Doctorat/rezumat... · universitatea de medicinĂ Şi farmacie “grigore t. popa” iaŞi facultatea de medicinĂ rezumat tezĂ de doctorat

cele două loturi icircn ceea ce priveşte expresia PPARα la nivelul Mo circulante (t- Test P=

069)

Studiul receptorilor PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de AHC şi dislipidemie

Nivelul de expresie al receptorilor PPARα α icircn Mo tinde să fie mai scăzut la subiecţii

cu AHC de HTA comparativ subiecţii care nu au declarat AHC de HTA (P= 006 fig 515)

AHC HTA

Număr 22

Mediana 19950

Percentila 25 17800

Percentila 75 22700

AHC HTA absente

Număr 35

Mediana 24800

Percentila 25 19025

Percentila 75 31700

Figura 515 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Mo funcţie de AHC de HTA

Nu s-au calculat diferenţe semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor

PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de dislipidemie atunci cacircnd aceştia au fost comparaţi cu

subiecţii fără AHC de tulburări ale metabolismului lipidic (t- Test P= 020)

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn limfocite

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn populaţia de Ly a

demonstrat prezenţa receptorilor PPARα icircn Ly tuturor subiecţilor studiaţi Pentru toţi

participanţii investigaţi analiza MFI a Ac anti - PPARα icircn populaţia de Ly a relevat un

interval de variaţie icircntre [748 314] iar valoarea medie a MFI a fost de 18058 plusmn 5600

Pentru ambele loturi aplicarea testului Shapiro-Wilk a evidenţiat distribuţia normală a

valorilor determinate pentru nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Ly Pentru

pacienţii cu SM valoarea medie a MFI determinată pentru expresia PPARα icircn populaţia de

Ly a fost de 18178 plusmn 61 16 iar pentru lotul martor a fost de 16800 plusmn 5229

Tabel XXX Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn limfocite

Lot SM Lot Non-SM

N 26 31

Media 181781 179574

SD 611694 522907

Mediana 165000 168000

Minimum 81300 74800

Maximum 314000 301000

Percentila 25 13400 - 145750

Percentila 75 21800 21700

Distribuţia frecvenţei valorilor MFI a Ac anti-PPARα icircn Ly este redată icircn figura 518

Figura 518 Distribuţia frecvenţelor relative a MFI a Ac anti-PPARα icircn Ly

94 din determinările efectuate pentru determinarea nivelului de expresie relativă al

MFI

ant

iPPA

R

a_Mo

190

200

210

220

230

240

250

260

270

280

DA NU

AHC HTA

P=006

50 89 128 167 206 244 283 322 361 400

0

5

10

15

20

25

30

35

MFI anti-PPAR a

Frecv

enta

relati

va (

)

Lot SM

0 50 100 150 200 250 300 350

0

5

10

15

20

25

30

35

40

MFI anti-PPAR a

Frec

venta

relat

iva (

)

Lot Non-SM

receptorilor PPARα icircn limfocitele subiecţilor cu SM s-au icircncadrat icircn intervalul Media plusmn 2DS

Figura 5 19 Lot SM Variaţia expresiei

relative a PPARα icircn Ly

Număr pacienţi 26

Minimum 813

Maximum 31400

Media 18178

Deviaţia Standard 6116

25 valori s-au icircncadrat icircn Media plusmn 2DS

Pentru lotul Non-SM diagrama de control (figura 520) a arătat toate valorile

determinate pentru lotul Non-SM se icircncadrează icircntre LCS şi LCI

Figura 520 Lot Non -SM Variaţia

expresiei relative a PPARα icircn Ly

Număr pacienţi 31

Minimum 748

Maximum 30100

Media 179574

Deviaţia Standard 5229

96 din valori icircncadrate icircn Media plusmn 2DS

Aplicarea testului t-Student pentru valorile medii ale intensităţii de fluorescenţă ale

PPARα icircn Ly nu a arătat existenţa unei diferenţe statistic semnificative icircntre lotul cu SM şi

lotul martor(t- Test P= 088)

Analiza receptorilor PPARα icircn Ly subiecţilor cu AHC de HTA şi dislipidemie

Studiind populaţiile de Ly la subiecţii care au prezentat AHC de hipertensiune

arterială analiza flowcitometrică a relevat existenţa unor valori mai mici pentru MFI la aceşti

subiecţi comparativ cu cei fără AHC de HTA (fig 522) deşi scăderea observată nu a

icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică (t- Test P = 009)

AHC HTA

Număr 22

Mediana 16000

Percentila 25 12700

Percentila 75 17100

AHC HTA absenţe

Număr 35

Mediana 18700

Percentila 25 14900

Percentila 75 23175

Figura 522 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Ly funcţie de AHC de HTA

Nu am calculat diferenţe statistic semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor

PPARα icircn populaţiile de Ly ale subiecţilor la care am identificat AHC de dislipidemie

comparativ cu cei care nu au declarat antecedente familiale de dislipidemie (t- Test P= 051)

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn neutrofile (PMN)

Analiza flowcitometrică a evidenţiat prezenţa PPARα icircn PMN recoltate din sacircngele

venos al tuturor participanţilor la studiu Pentru toţi subiecţii investigaţi analiza MFI a Ac -

PPARα icircn populaţia de PMN a relevat un interval de variaţie de [163419] iar valoarea medie

a MFI pentru Ac anti-PPARα a fost de 26392 plusmn 7064 Testul Shapiro-Wilk a arătat o

distribuţie normală a valorilor intensităţii medii de fluorescenţă a anticorpilor anti-PPARα atacirct

icircn lotul pacienţilor cu SM cacirct şi icircn lotul martor

1 6 11 16 21 26 31

-50

0

50

100

150

200

250

300

350

400

MFI

anti-

PPAR

a

1818

595

3041

-17

3653

Media+2DS

Media- 2DS

1 6 11 16 21 26 31 36

0

50

100

150

200

250

300

350

MFI

ant

i-PPA

R

a

1796

750

2841

227

3364

Media+2DS

Media

Media- 2DS

MFI

anti-

PPAR

a Ly

130

140

150

160

170

180

190

200

210

DA NU

AHC HTA

P=009

Tabel XXXII Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn PMN

Lot SM Lot Non-SM

N 26 31

Media 26273 26480

SD 6915 7088

Mediana 25900 25500

Minimum 17200 16300

Maximum 39500 41900

Percentila 25 19800 19600

Percentila 75 30500 31500

Icircn cele două loturi distribuţia frecvenţei valorilor nivelului relativ de expresie a

receptorilor PPARα icircn PMN a fost reprezentată sub formă de histograme (fig 525)

Figura 525 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti-PPARα icircn PMN

Pentru cei 26 de pacienţi din lotul cu SM a valoarea medie a nivelului de expresie

relativă a receptorilor PPARα icircn PMN a fost de 26273 plusmn 6915 Studiind diagrama Shewhart

din figura 526 se observă că toate valorile obţinute pentru nivelul de expresie relativă

PPARα icircn PMN investigate se icircncadrează icircntre limitele definite de valorile medii plusmn 2DS

Figura 526 Lot SM

Variaţia expresiei relative a PPARα icircn

PMN

Număr pacienţi 26

Minimum 17200

Maximum 39500

Media 26273

Deviaţia Standard 6915

Valorile MFI icircncadrate icircn Media plusmn 2DS

Pentru lotul martor valoarea medie calculată a MFI a anticorpilor anti-PPARα a fost de

26480 plusmn 7088 peste 95 din valorile MFI fiind cuprinse icircn Media plusmn 2DS (figura 527)

Figura 527 Lot Non-SM Variaţia expresiei

relative a PPARα icircn PMN

Număr pacienţi 31

Minimum 16300

Maximum 41900

Media 26480

Deviaţia Standard 7088

30 valoriicircn Media plusmn 2DS

Pentru PMN analiza statistica nu a arătat existenţa unei diferenţe statistic semnificative icircntre

nivelul de expresie relativă a PPARα la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii din lotul

Non-SM (t- Test P= 090) Studiind populaţiile de PMN la subiecţii care au prezentat AHC

de HTA nu am calculat o diferenţă statistic semnificativă icircntre expresia receptorilor PPARα

la subiecţii cu istoric familial de hipertensiune arterială comparativ cu cei pentru care nu s-au

notat AHC de HTA (t- Test P= 013)De asemenea am identificat diferenţe icircntre nivelul de

expresie al PPARα icircn PMN subiecţilor care prezentau AHC de dislipidemie comparativ cu

cei fără AHC de dislipidemie (t- Test P= 017)

50 100 150 200 250 300 350 400 450 500

0

5

10

15

20

25

30

35

MFI anti-PPAR a

Frecve

nta rel

ativa (

)

Lot SM

50 100 150 200 250 300 350 400 450 500

0

5

10

15

20

25

30

MFI anti-PPAR a

Frecv

enta

relati

va (

)

Lot Non-SM

1 6 11 16 21 26 31

0

50

100

150

200

250

300

350

400

450

500

MFI

anti-

PPA

R

a

2627

1244

4010

553

4702

Media + 2DS

Media - 2 DS

Media

1 6 11 16 21 26 31 36

0

50

100

150

200

250

300

350

400

450

500

MFI

anti-

PPAR

a

2648

1230

4066

522

4774

Media+ 2DS

Media - 2DS

Media

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile Tabel XXXIV Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn Eo

Lot SM Lot Non-SM

N 26 31

Mediaplusmn SD 141057 plusmn 47604 172209 plusmn 37565

Mediana 142450 171300

Minimum 35000 68500

Maximum 233700 250600

Percentila 25 119300 153225

Percentila 75 169700 199550

Am studiat nivelul relativ de expresie a receptorilor PPARα icircn Eo iar rezultatele au

fost figurate sub forma de histograme (figura 532)

Figura 532 Distribuţia frecventelor relative ale valorilor MFI anti- PPARα icircn Eo

Din diagrama Shewhart (figura 533) se observă că toate valorile determinate pentru

nivelul de expresie relativă a PPARα icircn Eo pentru lotul SM s-au icircncadrat icircn [Media plusmn 3 DS]

peste 90 din determinări fiind cuprinse icircn [Media plusmn 2 DS] iar icircn [Media plusmn 1 DS] sunt

incluse peste 65 din valorile MFI

Figura 533 Lot SM

Variaţia expresiei relative a PPARα icircn Eo

Număr pacienţi 26

Minimum 35000

Maximum 233700

Media 141057

Deviaţia Standard 47604

24 valori icircncadrat eicircn [Media plusmn 2DS]

Pentru subiecţii incluşi icircn lotul martor analiza diagramei (figura 534) a arătat că

toate cele 31 de valori ale MFI pentru PPARα icircn Eo se icircncadrează icircn [Media plusmn 3DS] iar 30

dintre acestea se icircncadrează icircn [ Media plusmn 2 DS]

Figura 534 Lot Non -SM

Variaţia expresiei relative a PPARα icircn Eo

Număr pacienţi 31

Minimum 685

Maximum 2506

Media 172209

Deviaţia Standard 375 65

30 valori icircncadrate icircn [Media plusmn 2DS]

Comparacircnd subiecţii cu SM cu cei din lotul martor am observat o scădere

semnificativă statistic a MFI a Ac anti - PPARα icircn Eo pentru pacienţiir cu SM ( figura 535)

PPARα Eo Lot Non-SM

Număr 31

Mediana 171300

Percentila 25 152325

Percentila 75 199550

PPARα Eo Lot SM

Număr 26

Mediana 142450

Percentila 25 119300

Percentila 75 169700

Figura 5 35 Comparaţie icircntre nivelul de expresie a PPARα icircn Eo

0 500 1000 1500 2000 2500 3000

0

10

20

30

40

50

MFI anti-PPAR a

Frecvent

a relativa

()

Lot SM

400 800 1200 1600 2000 2400 2800

0

5

10

15

20

25

30

35

40

45

MFI anti-PPAR a

Frecenta

relativa

()

Lot Non-SM

1 6 11 16 21 26 31

-500

0

500

1000

1500

2000

2500

3000

MFI a

nti-PP

AR

a

14106

4765

23447

94

28117

Media + 2DS

Media- 2DS

LCI

LCS

1 6 11 16 21 26 31 36

500

1000

1500

2000

2500

3000

MFI an

ti-PPA

R a

17221

9708

24734

5951

28490

LCI

Media-2DS

Media

Media +2 DS

LCS

1200

1300

1400

1500

1600

1700

1800

1900

Lot SM Lot Non-SM

P=00072

Cu ajutorul curbei ROC am evaluat posibilitatea utilizării MFI a Ac anti - PPARα icircn

Eo ca marker pentru diagnosticul SM Valoarea MFI a Ac anti - PPARα icircn Eo care prezice cu

cea mai mare acurateţe prezenţa SM a fost de 1533 (punctul de ldquocut-offrdquo) pentru care am

calculat o sensibilitate de 5652 şi o specificitate de 7778 Calculul ariei AUC a furnizat

valoarea de 0663 şi deci determinarea parametrului MFI anti- PPARα icircn Eo are valoarea

unui test cu acurateţe redusatilde icircn diagnosticul SM Studiind expresia PPARα icircn Eo la subiecţii

care au prezentat AHC de HTA am observat o scădere semnificativă statistic (P = 00023) a

expresiei PPARα la subiecţii cu istoric familial de HTA comparativ cu subiecţii fatilderatilde AHC de

HTA (figura 537)

AHC HTA

Număr 22

Mediana 148800

Percentila 25 116425

Percentila 75 170750

AHC HTA absente

Număr 35

Mediana 170850

Percentila 25 143700

Percentila 75 195000

Figura 537 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Eo funcţie de AHC de HTA

Studiind subiecţii cu AHC declarate de dislipidemie nu am identificat diferenţe icircntre

nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Eo subiecţilor cu AHC de dislipidemie

comparativ cu cei care nu au declarat prezenţa AHC de dislipidemie (t - Test P = 067)

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor CD36

Am studiat expresia receptorilor CD36 icircn Mo subiecţilor incluşi icircn studiu

Lot Non - SM

BLot SM

Figura 539 Analiza flowcitometrica pentru receptorii CD36 icircn Mo

Pentru toţi participanţii la studiu valorile MFI au variat icircn intervalul [817 6933] iar

valoarea medie a MFI a Ac anti-CD36 a fost de 397133 plusmn 120902 Tabel XXXVII Statistică descriptivă pentru a CD36 icircn Mo

Lot SM Lot Non-SM

Media 429034 370377

Deviatia Standard 109051 125514

Mediana 411000 362800

Minimum 266400 81700

Maximum 693300 616800

Percentila 25 346200 273750

Percentila 75 469000 453300

Distribuţia frecvenţelor relative a MFI au fost prezentate sub formă histogramelor

Figura 541 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti - CD36 icircn Mo

MFI

ant

i-PPA

R a Eo

1000

1100

1200

1300

1400

1500

1600

1700

1800

1900

DA NU

AHC HTA

P=00023

1000 2000 3000 4000 5000 6000 7000 8000

0

5

10

15

20

25

MFI anti-CD36

Frecve

nta rela

tiva (

)

Lot SM

0 1778 3556 5333 7111

0

5

10

15

20

25

30

35

MFI anti-CD36

Frecve

nta rel

ativa (

)

Lot Non - SM

Referitor la lotul SM 92 din valorile MFI a Ac anti- CD36 s-au icircncadrat icircn

intervalul Media plusmn 2 DS (figura 542) iar pentru lotul martor peste 90 dintre acestea icircn

Media plusmn 2 DS (figura 543)

Figura 542 Lot SM

Variaţia MFI anti-CD36 icircn Mo

Număr pacienţi 26

Minimum 2664

Maximum 6933

Media 429034

Deviaţia Standard 109051

Figura 543 Lot Non -SM

Variaţia MFI anti- CD36 icircn Mo

Număr 31

Minimum 81700

Maximum 616800

Media 370377

Deviaţia Standard 125514

Comparacircnd subiecţii cu SM cu cei din lotul normal am constatat o tendinţă de creştere

a expresiei CD36 icircn lotul cu SM((t - Test P= 0067)

MFI anti - CD36 Lot Non-SM

Număr 31

Mediana 3628

Percentila 25 2737

Percentila 75 4533

MFI anti - CD36 Lot SM

Număr 26

Mediana 4110

Percentila 25 3462

Percentila 75 4690

Figura 544 Comparaţie icircntre cel două loturi privind MFI anti - CD36 icircn Mo

Referindu-ne la subiecţii cu AHC de HTA am observat o tendinţă de creştere a

valorilor MFI anti-CD36 comparativ cu cei care nu au avut AHC de HTA (t - Test P = 0 08)

AHC HTA

Număr 22

Mediana 442800

Percentila 25 355275

Percentila 75 519475

AHC HTA absenţe

Număr 35

Mediana 377400

Percentila 25 316900

Percentila 75 443400

Figura 545 Comparaţie icircntre expresia CD36 icircn Mo funcţie de AHC de HTA

Nu s-au calculat diferenţe semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor

PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de dislipidemie atunci cacircnd aceştia au fost comparaţi cu

subiecţii fără AHC de dislipidemie (t - Test P=031)

Corelaţii icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα si CD36

Studiind valorile intensităţii medii de fluorescenţă a Ac anti-PPARα icircn Mo Ly şi

PMN am observat că nivelul de expresie celularatilde a PPARα icircn Mo Ly şi PMN sunt corelate

puternic pozitiv atacirct icircn lotul SM cacirct şi icircn lotul martor(fig547 548)

1 6 11 16 21 26 31

0

1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

8000

Pacienti

MFI a

nti-CD

36

42903

21093

64714

10188

75619

LCI

Media

LCS1 6 11 16 21 26 31 36

-1000

0

1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

8000

MFI a

nti- C

D36

37038

11935

62141

-616

74692Media + 2 DS

Media

Media - 2 DS

3200

3400

3600

3800

4000

4200

4400

4600

4800

Lot SM Lot Non-SM

P = 00676

MFI

anti-

CD36

3400

3600

3800

4000

4200

4400

4600

4800

5000

DA NU

AHC HTA

P = 008

Figura 547 Studiul relatiilor dintre

receptorii PPARα icircn SM A Mo vs PMN B Mo vs Ly

C PMN vs Ly Graficul ilustrează coeficienţii r P dreapta de

regresie (linia centrala) intervalul de icircncredere

95 şi intervalul de predicţie 95

Figura 548 Corelaţii icircntre receptorii PPARα icircn lotul

martor

A Mo vs PMN

B Mo vs Ly

C PMN vs Ly

Tot pentru lotul SM cacircnd am evaluat relaţia dintre nivelul de expresie relativă a

receptorilor PPARα icircn Eo şi nivelul de expresie relativa a receptorilor CD 36 am obţinut o

corelaţie negativă (r = - 05 P = 001) (fig 549 A)

50 100 150 200 250 300 350 50

100

150

200

250

300

350

400

450

500

PPARα Ly

PPARα PMN

y = 56641 + 1159 x r = 086 P lt 0001

C

50 100 150 200 250 300 350 400 0

50

100

150

200

250

300

350

PPARα Mo

PPARα Ly

y = 36665 + 0607 x r = 090 P lt 0001

B

150 200 250 300 350 400 450 0

50 100 150 200 250 300 350 400 450 500

PPARα PMN

PPARα Mo

y = 2505 + 0879 x r = 081 P lt 0001

A

50 100 150 200 250 300 350

50 100 150 200 250 300 350 400 450 500

PPARα Ly

PPARα PMN

y = 95668 + 0919 x r = 081 P lt 0001

C

100 150 200 250 300 350 400

0

50

100

150

200

250

300

350

400

PPARα Mo

PPARα Ly

y = -7503 + 0829 x r = 079 P lt 0001

B

100 150 200 250 300 350 400

50

100

150

200

250

300

350

400

450

500

PPARα Mo

PPARα PMN

y = 61384 + 0882 r = 074 P lt 0001

A

Figura 549 Corelaţii icircntre expresia PPARα icircn Eo şi alte tipuri de receptori investigaţi A PPARα Eo şi CD 36 (Lot SM) B PPARα Eo şi PPARα Mo( Lot Non-SM)

Icircn lotul martor am identificat o asociere moderată pozitivă (r = 038 P = 0033) icircntre

nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Eo şi Mo (figura 549B) corelaţie absentă icircn

lotul pacienţilor cu SM

Corelaţii dintre receptorii studiaţi şi componentele sindromului metabolic

Icircn lotul de control analiza statistică a relevat faptul că icircntre circumferinţa

abdominală (CA ) şi nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Mo Ly şi PMN există o

corelaţie inversă adică scăderea expresiei PPARα la nivelul acestor populatii celulare ar fi

icircnsoţită de creşterea CA (figura 550

Figura 550Corelaţii dintre receptorii

PPARα si CA A Mo B Ly C PMN

La pacienţii cu SM am notat o corelatie moderată negativă statistic semnificativă

icircntre TG şi valorile MFI a Ac anti- PPARα icircn Mo şi Ly( fig 551)

150 200 250 300 350 400 450 50

60

70

80

90

100

110

PPARα PMN

CA r = - 040 P = 0024

C

50 100 150 200 250 300 350 50

60

70

80

90

100

110

PPARα Ly

CA r = - 046 P = 0009

B

50 100 150 200 250 300 350 400 50

60

70

80

90

100

110

PPARα Mo

CA r = - 042 P = 0017

A

50 100 150 200 250 300 350 400 500

1000

1500

2000

2500

3000

PPARα Mo

PPARα Eo

r = 038 P = 0033

B

0 500 1000 1500 2000 2500 1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

8000

PPARα Eo

CD36

r = 050 P = 0010

A

Figura 551 Lot SM Corelaţie icircntre expresia PPARα şi TG (A Mo B Ly)

Analizand corelatia dintre receptorii CD36 si valorile TA la pacientii cu SM am observat

o asociere pozitivă asteptată intre TAD si nivelul de expresie al receptorilor CD36 (fig 552)

Figura 552 Lot SM Corelaţii icircntre expresia

receptorilor CD36 şi valorile tensiunii arteriale

diastolice

Studiind corelaţiile dintre receptorii PPARα şi HDL-col la subiecţii din lotul martor am

notat o asociere pozitivă icircntre expresia PPARα icircn Mo şi Ly cu HDL-col (fig 553)

Figura 553 Lot martor Corelaţii icircntre HDL-col şi expresia PPARα icircn Mo(A) Ly(B)

Icircn lotul normal am evidenţiat corelaţii pozitive moderate dar semnificative statistic icircntre

CA şi valorile TAS (r = 062 P lt 0001) respectiv TAD (r = 050 P=0004) precum şi icircntre

CA şi glicemia subiecţilor normali (r = 052 P = 0003) Aceste date icircmpreună cu relaţia

invers proporţională identificată icircntre HDL-col şi CA (r = 050 P = 001) susţin validitatea

acestui studiu Icircn lotul subiecţilor cu SM am observat o corelaţie moderat pozitivă icircntre

expresia PPARα icircn populaţiiile de Mo şi Eo şi concentraţia a HDL-col (fig 554)

B

100 150 200 250 300 350 20

30

40

50

60

70

80

90

100

PPARα Ly

HDL-col-(mgdl)

r = 036 P = 0046

A

150 200 250 300 350 400 20

30

40

50

60

70

80

90

100

PPARα Mo

HDL-col-(mgd)l

r = 035 P = 005

70 75 80 85 90 95 100 1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

8000

TAD (mmHg)

CD36

r = 048 P = 0013

B

50 100 150 200 250 300 350 -100

0

100

200

300

400

500

PPARα Ly

TG(mgdl)

r = - 042 P = 003

A

50 100 150 200 250 300 350 400 -100

0

100

200

300

400

500

PPARα Mo

TG ( mgdl) r =- 0 43 P = 0027

Figura 554 Corelaţii icircn SM icircntre HDL-col şi expresia PPARα icircn Mo (A) şi Eo(B)

Corelaţii icircntre nivelul de expresie relativă a PPARα şi markeri ai disfuncţiei

endoteliale şi inflamaţiei cronice

Deşi nu a icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică am reţinut corelaţia invers

proporţională (r = - 0331 P = 006) dintre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα

icircn PMN şi concentraţia serică a Non-HDL-colesterolului

Studiind relaţiile dintre parametri icircn lotul de pacienţi cu SM am observat o corelaţie

moderată invers proporţională icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Eo şi

acidul uric seric (figura 555 A) corelaţie absentă la subiecţii fără SM

Figura 555 Lot SM corelaţia dintre expresia PPARα icircn Eo şi acidul uric (A) respectiv

PPARα şi fibrinogen (B)

Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P=008) am notat pentru

pacienţii cu SM corelaţia invers proporţională dintre expresia PPARα icircn Eo şi concentraţia

serică a fibrinogenului ( figura 555B)

V5 Discuţii

Icircn cadrul lucrării de doctorat am studiat nivelul de expresie relativă a PPARα icircn

leucocitele pacienţilor cu SM comparativ cu cea a subiecţilor normali Expresia PPARα a fost

studiată icircn paralel cu cea a CD36 glicoproteină exprimată pe suprafaţa a numeroase celule

din organismul uman inclusiv pe cea a Mo şi macrofagelor Prin funcţia sa de receptor pentru

particulele oxidate de LDL CD36 cunoscut ca bdquoscavenger receptorrdquo de clasa B sau

bdquotrombospodin receptorrdquo contribuie la dezvoltarea inflamaţiei de la nivel endotelial şi

formarea plăcii de ateroscleroză Referitor la studiul PPARα icircn Eo icircn sindromul metabolic

menţionăm că studiul nostru este primul care arată că nivelul de expresie a proteinei PPARα

icircn Eo măsurat prin citometrie icircn flux este semnificativ mai redus la pacienţii care sunt

diagnosticaţi cu acest sindrom De asemenea icircn lotul cu SM cercetat icircn cadrul studiului

receptorilor PPARα numărul Eo circulante a fost semnificativ mai crescut la pacienţii cu SM

B

0 500 1000 1500 2000 2500 200

250

300

350

400

450

PPARα Eo o

Fibrinogen mgdl

r =- 036 P = 008

0 500 1000 1500 2000 2500 1 2 3 4 5 6 7 8 9

10 11

PPARα Eo_

Acid uric(mgdl) r = 048 P = 0014 A

0 500 1000 1500 2000 2500 10

20

30

40

50

60

70

80

PPARα Eo

HDL(mgdl)

r = 044 P = 0024

B

100 150 200 250 300 350 400 10

20

30

40

50

60

70

80

PPARα Mo

HDL( mgdl)

r = 046 P = 0019

A

(P = 003) Aceste constatări conduc la ipoteza că Eo joacă un rol special icircn mecanismele

patogenice declanşate icircn sindromul metabolic şi că receptorii PPARα sunt importanţi icircn

implicarea Eo icircn obezitate şi insulinorezistenţă Creşterea numărului de Eo circulante este

urmată de eliberarea mediatorilor proinflamatori iar reducerea expresiei PPARα icircn Eo

determină perturbarea mecanismelor de control al inflamaţiei cu exacerbarea cascadei

proinflamatorii Consecutiv se agravează disfuncţia endotelială şi se accelerează progresia

leziunilor de ateroscleroză Extrapolacircnd aceste ipoteze putem spune că asocierea raportată

dintre boala ischemică coronariană şi Eo poate fi şi consecinţa exacerbării cascadei

proinflamatorii de la nivel vascular produsă datorită scăderii expresiei PPARα icircn Eo iar

creşterea numărului de Eo circulante poate reprezenta o adaptare a organismului uman care

icircncearcă să suplinească deficitul de receptori PPARα Analizacircnd curba ROC pentru

intensităţile medii de fluorescenţă determinate pentru anticorpii anti- PPARα icircn Eo am

obţinut pentru acest biomarker o sensibilitate a testului de 565 şi o specificitate de 778

pentru un punct de cut-off de 1533 ( figura 536 ) Deşi aria AUC (Aria under the curve) egală

cu 0663 icircncadrează acest test ca avacircnd o acurateţe redusă observăm că că această valoare

este apropiată de determinările AUC pentru alţi factori (fibrinogen raport de aterogenitate

acid uric non- HDL-colesterol) cunoscuţi ca fiind implicaţi icircn aterogeneză şi inflamaţia

cronică (figura 431) Aceste remarci alături de faptul că icircn studiul receptorilor PPARα icircn

leucocite am inclus subiecţi la primul diagnostic de SM creează premisa integrării

determinării expresiei relative a receptorilor PPARα icircn diagnosticul complex al sindromului

metabolic Putem spune că icircn final studiul expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofilele

circulante se dovedește a fi util icircn diagnosticul precoce la nivel molecular al SM permiţacircnd

identificarea timpurie a unor indivizi cu risc cardiometabolic crescut Astfel intervenţia

precoce asupra subiecţilor cu deficit de PPARα icircn Eo contribuie la managementul eficient al

afecţiunilor degenerative icircn care inflamaţia cronică icircndeplineşte un rol primordial Referitor

la populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările efectuate prin citometrie de flux nu au

arătat existenţa unor diferenţe statistice icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα

la subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali Rezultatele noastre pot fi

consecinţa caracteristicilor loturilor studiate (icircn studiul nostru au fost incluşi subiecţi recrutaţi

la primul diagnostic de SM şi icircn absenţa stimulării receptorilor PPARα cu droguri agoniste

PPARα) dar icircn acelaşi timp pot apare diferenţe datorită metodei utilizate (231 232 233)

Făcacircnd o paralelă cu un studiu publicat icircn 2013 icircn Europa (231) care a arătat creşterea

nivelului de expresie al PPARα icircn Ly şi Mo observăm că deşi numărul de subiecţi a fost

aproximativ egal (57 participanţi icircn studiul nostru 60 icircn studiul DAmore) subiecţii icircn studiul

amintit au fost recrutaţi dintr-o clinică cu profil medical la primul diagnostic de SM icircn timp

ce metoda utilizată a fost PCR (Polymerase Chain Reaction) mult mai fidelă decacirct citometria

icircn flux icircn studiul receptorilor nucleari De asemenea DAmore nu investighează expresia

PPARα icircn Eo şi PMN icircn cercetare fiind incluse doar celulele CD14+ (predominant Mo) şi

CD14- (predominant Ly) Deşi nu am obţinut diferenţe statistic semnificative icircntre cele două

loturi referitoare la nivelul de expresie relativă a PPARα icircn Mo Ly şi PMN am observat

corelaţii puternice semnificative statistic icircntre expresia receptorilor PPARα icircn aceste tipuri

celulare Rezultatele obţinute sugerează existenţa unui mecanism diferit molecular de control

icircn eozinofile care reglează cantitatea de proteină PPARα icircn eozinofile versus alte tipuri de

leucocite (la pacienţii cu SM) şi acest lucru este icircn concordanţă cu cercetările care descriu

expresia PPARα mRNA icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale

bronşice keratinocite) Studiind prin citometrie de flux nivelul de expresie relativă a

receptorului CD36 la nivelul Mo am arătat prezenţa acestuia icircn Mo tuturor subiecţilor

investigaţi Analizacircnd valorile intensităţii medii de fluorescenţă a CD36 icircn loturile studiate

am observat o tendinţă de creştere la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali

confirmacircnd implicarea receptorului CD36 icircn patogeneza acestuia Referitor la expresia

receptorului CD36 rezultatele obţinute sunt icircn consens cu studii anterioare care au arătat

creşterea expresiei CD36 la pacienţii cu SM şi diabet zaharat Astfel pe lacircngă diferenţa icircn

expresia CD36 s-au raportat şi corelaţii inverse icircntre expresia proteinei CD36 şi nivelul

adiponectinei Acelaşi studiu a evidenţiat o corelaţie pozitivă intre expresia CD36 cu expresia

receptorilor PPAR gamma relaţia cu PPARα nefiind investigată

Analiza de subgrup a relaţiilor dintre componentele SM și elementele moleculare

proinflamatorii studiate a relevat prezenţa unor asocieri semnificativ statistice icircntre acestea

Se argumentează astfel că veridicitatea studiului este susţinută de interdependenţele statistice

ale componentelor SM Determinarea coeficientului de corelaţie Icircn studiul nostru nivelul de

expresie relativă a PPARα s-a corelat moderat negativ (figura 550) cu CA a subiecţilor din

lotul normal pentru populaţiile celulare de Mo (r = - 0420 P = 001) Ly (r = - 046 P =

0009) şi PMN (r = - 040 P = 0024) date care sunt icircn concordanţă cu studiile care arată

rolul PPARα icircn furnizarea energiei prin beta-oxidarea acizilor graşi Icircn acelaşi timp icircn lotul

pacienţilor cu SM nu am identificat prezenţa unei asocieri icircntre nivelul de expresie relativă a

PPARα şi valoarea măsurată a CA Asocierea dintre expresia relativă a PPARα cu obezitatea

de tip central completează datele existente referitoare la reglarea homeostaziei energetice

conturacircnd un mecanism de control deficitar al aportului caloric al SM Icircn condiţiile icircn care

rezultatele obţinute prin metoda citometriei icircn flux nu au arătat existenţa unei corelaţii intre

expresia PPARα şi CA la pacienţii cu SM considerăm că ar fi necesar studiul

polimorfismului genei PPARA care ar putea aduce informaţii importante cu privire la

implicarea acestor receptori icircn apariţia obezităţii de tip central Subliniem acest lucru deoarece

obezitatea este o boală plurifactorială icircn care pe lacircngă factorii ereditari sunt implicaţi factori

de mediu psihologici şi sociali (245) Existenţa unei componente genetice a aterosclerozei

este legată şi de prezenţa unor variante ale genei PPARA asociate cu creşterea incidenţei bolii

cardiovasculare (82) şi a SM (249) Icircn studiul nostru am constatat o scădere statistic

semnificativă a nivelului expresiei relative a receptorilor PPARα icircn Eo la subiecţii cu

antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială comparativ cu subiecţii fără istoric

familial de hipertensiune (figura 537) Deşi diferenţele calculate icircntre loturile studiate nu au

icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică la subiecţii care au declarat prezenţa

antecedentelor familiale de hipertensiune arterială remarcăm o tendinţă de scădere a

intensităţii medii de fluorescenţă pentru Ac anti-PPARα la nivelul Mo (figura 515 P = 006

) icircn timp ce expresia relativă a CD36 icircnregistrează o creştere la acesti subiecţi (figura 545 P

= 008) Icircn contextul riscului cardiovascular foarte icircnalt al pacienţilor cu SM amintim şi

existenţa corelaţiei pozitive dintre valorile tensiunii arteriale diastolice şi expresia relativă a

receptorului CD36 (r = 0483 P = 0013) Această constatare este icircn consens cu studiile care

au arătat că forma solubilă circulantă a CD36 este asociată cu factorii de risc cardiovasculari

fiind propusă ca un marker precoce al aterosclerozei Activarea PPARα este asociată cu

modularea metabolismului lipidic iar agoniştii PPARα sunt utilizaţi icircn mod curent pentru

tratamentul dislipidemiei Sub acţiunea agoniştilor PPARα se obţine o icircmbunătăţire a funcţiei

endoteliale şi a parametrilor reologici funcţiile pleiotropice ale agoniştilor PPARα fiind

dovedite icircn trialuri clinice controlate Icircn populaţiile de Mo şi Ly la pacienţii cu SM

cercetarea noastră a evidenţiat o asociere negativă icircntre nivelul de expresie relativă a

receptorilor PPARα şi concentraţia TG serice (figura 551) Astfel scăderea expresiei

receptorilor PPARα este asociată cu creşterea nivelului TG serice contribuind la profilul

lipidic aterogen din SM Icircn conformitate cu literatura de specialitate icircn studiul efectuat prin

metoda citometriei icircn flux am găsit prezenţa asocierii icircntre nivelul de expresie al PPARα şi

HDL-colesterol Corelaţia pozitivă dintre nivelul de expresie relativă PPARα şi concentraţia

HDL-colesterolului a fost observată icircn lotul martor icircn populaţiile de Mo (r = 035 P = 005)

şi Ly ( r = 036 P = 004) (figura 553) susţinacircnd faptul că stimularea receptorilor PPARα

este legată de creşterea nivelului seric al lipoproteinelor cu densitate crescută La pacienţii cu

SM corelaţia dintre expresia PPARα şi HDL-colesterol a fost evidenţiată icircn populaţiile de Mo

(r = 046 P = 0019) şi eozinofile (r = 044 P = 0024) Se desprinde concluzia că icircn

sindromul metabolic scăderea concentraţiei HDL-colesterol este legată de diminuarea

nivelului de expresie relativă a receptorilor nucleari PPARα icircntărind afirmaţiile legate de

rolul acestor receptori icircn progresia bolilor cardiovasculare Studiind reactanţii de fază acută

analiza statistică a relevat o diferenţă semnificativă din punct de vedere statistic icircntre valorile

fibrinogenului la pacienţii cu SM atunci cacircnd au fost comparaţi cu subiecţii fără SM

(Capitolul IV4 P lt0 001 figura 427A) De asemenea icircn Capitolul V dedicat studiul

expresiei relative a receptorilor PPARα studiul valorilor fibrinogenului a arătat creşterea

acestui reactant de faza acută icircn lotul cu SM comparativ cu lotul martor (P lt0 0001) Icircn

studiul nostru am calculat o corelaţie invers proporţionala (r = - -036 fig 555B) icircntre

nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile şi concentraţia serică a

fibrinogenului Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P = 008) am reţinut

această asociere deoarece am demonstrat că nivelul de expresie relativă al receptorilor

PPARα icircn eozinofile este mai scăzut icircn sindromul metabolic iar sindromul metabolic este

caracterizat printr-un status inflamator cronic status caracterizat şi de creşterea concentraţiei

serice a fibrinogenului De asemenea notam ca această corelaţie negativă se află icircn

concordanţă cu studiile care arata că tratamentul cu agonişti PPARα (fibraţi) determina

scăderea nivelului seric al fibrinogenului contribuind la diminuarea inflamaţiei cronice din

sindromul metabolic şi icircn consecinţă amelioracircnd insulinorezistenţa

LIMITE ȘI DIFICULTĂȚI IcircN CERCETARE

Icircn cadrul Tezei de Doctorat am desfăşurat o cercetare care şi-a propus studierea

expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Recrutarea anamneza şi examinarea

clinică a subiecţilor au fost realizate icircn cadrul Cabinetului de Medicină de Familie CMI Popa

Elena din Iaşi iar determinările hematologice şi biochimice s-au efectuat icircn cadrul

Laboratorului Ambulatorului de Specialitate al Spitalului Universitar ldquoSfacircntul Spiridon din

Iaşi Icircn studiul epidemiologic şi al markerilor inflamatori al sindromului metabolic desfăşurat

au fost incluşi un număr de 1530 de participanţi pe baza liberului consimţămacircnt examinaţi icircn

perioada 01012013 - 31122013 Icircn continuare icircn perioada 1012014 - 28022014 pe baza

criteriilor de includere şi excludere icircn cele două loturi de studiu am investigat un număr de 57

de subiecţi prezentaţi la consultaţie icircn această perioadă şi care au icircndeplinit criteriile de

includere icircn cele două loturi (Lot SM şi Lot Control) constituite pentru evaluarea nivelului de

expresie a receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Explorarea nivelului de expresie

relativă a receptorilor PPARα s-a desfăşurat icircn cadrul Laboratorului de Biologie Moleculară

de pe platforma Institutului Regional de Oncologie Datorită resurselor proprii financiare

limitate trebuie să subliniez că aceasta cercetare nu ar fi fost posibilă fără contribuţia unor

cercetători din domeniul medical care m-au sprijinit necondiţionat atacirct icircn elaborarea

protocolului de lucru cacirct şi icircn efectuarea propriu-zisă a studiului Icircn acest sens menţionăm şi

faptul că pentru studiul receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic am utilizat aparatura

Laboratorului de Biologie Moleculară (care deserveşte icircntreaga Regiune a Moldovei) Pe

această cale mulţumesc personalului Laboratorului de Biologie Moleculară pentru ajutorul

acordat icircn desfăşurarea cercetării doctorale icircn condiţiile icircn care se observa creşterea

numărului de pacienţi care se adresează acestei platforme de cercetare Mulţumesc de

asemenea şi Doamnei Doctor Elena Butoi din cadrul Institutului de Biologie şi Patologie

Moleculară ldquoNicolae Simionescurdquo Bucureşti) pentru donaţia anticorpului secundar anti-

FITC Icircn consecinţă pentru recrutarea unui număr mai mare de participanţi ar fi fost necesară

icircn primul racircnd obţinerea unor resurse financiare suplimentare pentru achiziţia de aparatură şi

reactivi Totuşi numărul subiecţilor recrutaţi este apropiat de numărul subiecţilor raportaţi icircn

cadrul unor granturi de cercetare care aveau ca ţinta studiul expresiei receptorilor PPARα

(212 227 228 231) Rezultatele obţinute continua seria lucrărilor care arata importanta

studiului mecanismelor etiopatogenice ale sindromului metabolic patologie care se afla icircntr-o

continuă creştere La pacienţii cu SM pe lacircngă diminuarea nivelului de expresie a receptorilor

PPARα icircn eozinofile ne aşteptam şi la evidenţierea unor modificări icircn expresia PPARα şi icircn

populaţiile de Ly Mo şi PMN Acest fapt poate fi explicat de utilizarea unor celule provenite

de la pacienţi fără afectare cardiovasculară fără diabet zaharat şi necesită continuarea

studiului pe culturi celulare icircn condiţii de stimulare cu agonişti PPARα deziderat care

impune continuarea investigării expresiei PPARα printr-un grant de cercetare

ORIGINALITATEA ȘI CONTRIBUȚIILE INOVATIVE ALE TEZEI DE

DOCTORAT PERSPECTIVE DE CERCETARE

Evaluarea nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn leucocitele circulante

aduce noi perspective icircn studiul obezităţii şi sindromului metabolic Importanta studiului

expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic derivă din prevalenta crescută a

sindromului metabolic icircn populaţia cercetată la care se adaugă riscul cardiovascular foarte

icircnalt al acestor pacienţi cu implicaţii majore icircn sănătatea publică Rolul receptorilor PPARα

icircn inflamaţie şi aterogeneza este binecunoscut dar studiul nostru este primul care a arătat că

nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα este semnificativ mai scăzut in populatiile

de eozinofile la pacienţii cu SM Această concluzie coroborata cu existenţa unei stracircnse

asocieri intre expresia receptorilor PPARα la nivelul Mo limfocitelor şi PMNlor creeaza

ipoteza existenţei unui mecanism de control diferit al expresiei PPARα la nivelul

eozinofilelor Această cercetare aduce informaţii importante referitoare la mecanismele

proinflamatorii care stau la baza insulinorezistenţei şi riscului cardiometabolic şi impune

continuarea studiului acestor receptori nucleari prin citometrie icircn flux metodă care poate fi

aplicată şi la scara mai largă dacă sunt asigurate resursele materiale necesare cercetării

Cercetarea prin citometrie icircn flux poate fi completată de studiul polimorfismului genei

PPARA şi astfel se pot identifica timpuriu indivizii cu potenţial risc cardiometabolic crescut

Studiul receptorilor PPARα a stabilit conexiuni cu factori proinflamatori şi aterogenetici iar

continuarea cercetării poate aduce şi elemente noi de diagnostic precoce icircn sindromul

metabolic contribuind la icircmbunătăţirea prognosticului acestor pacienţi

CONCLUZII FINALE

1 Aplicarea scorului de SM alături de implementarea algoritmului electronic de diagnostic

contribuie la o prelucrare rapidă eficientă și standardizată a informaţiilor la nivelul

medicinei primare

2 Prevalenţa SM calculată astfel icircn cadrul studiului este crescută (2732) icircn concordanţă

cu datele raportate

3 Controlul factorilor de risc cardiometabolici incluşi icircn SM se poate realiza prin

managementul stilului de viaţă (scăderea greutăţii corporale prin combaterea

sedentarismului şi adoptarea unei diete antiaterogene şi hipocalorice) şi administrarea

terapiei medicamentoase

4 Este necesară adoptarea unei politici de sănătate publică pentru prevenirea creşterii icircn

populaţie a prevalenţei obezităţii şi a diabetului zaharat

5 Noi metode de cercetare icircn domeniul SM axate pe diagnosticarea precoce şi cuantificarea

eficientă a acestuia duce la diminuarea incidenței evenimentelor cardiovasculare majore

6 Sindromul metabolic se caracterizează printr-un status inflamator cronic

7 Valorile Non-HDL-colesterolului şi a raportului de aterogenitate sunt semnificativ mai

mari la pacienţii cu SM

8 Dintre reactanţii de faza acută am observat că valoarea medie a fibrinogenului este mai

crescută icircn lotul cu SM

9 Valorile eozinofilelor sunt crescute icircn sindromul metabolic iar explorarea relaţiei dintre

eozinofile şi obezitate constituie una din direcţiile de studiu actuale ale sindromului

metabolic

10 Evaluarea markerilor inflamatori icircn contextul sindromului metabolic este utilă icircn

evaluarea complexă a a factorilor de risc cardiometabolici

11 Prin metoda citometriei icircn flux am demonstrat prezenta Receptorilor Activaţi de

Inductorii Proliferării Peroxizomilor ndash Alpha (PPARα) icircn toate populaţiile de leucocite

studiate (Mo limfocite PMN eozinofile) atacirct icircn lotul pacienţilor cu SM cacirct şi icircn lotul

martor

12 Utilizacircnd intensitatea medie de fluorescenţă a anticorpilor anti- PPARα am arătat că

nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile este semnificativ mai redus

la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali

13 Acest studiu este primul care a demonstrat existenţa unei scăderi statistic semnificative a

nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofilele pacienţilor cu SM

confirmacircnd cercetările recente care au evidenţiat rolul eozinofilelor şi al receptorilor

PPARα icircn obezitate reglarea inflamaţiei cronice şi aterogeneza

14 Contrar aşteptărilor noastre icircn populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările

efectuate icircn cele două loturi de studiu (cu şi fără sindom metabolic) nu am evidenţiat

diferenţe statistic seminificative icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα la

subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali

15 Icircn populaţiile de Mo limfocite şi polimorfonucleare am observat corelaţii puternice

semnificativ statistic icircntre expresia PPARα icircn aceste tipuri celulare sugeracircnd existenţa

unui mecanism unic de control al inflamaţiei cronice la nivelul acestor celule probabil

diferit de cel din eozinofile

16 La subiecţii cu SM expresia relativă a PPARα icircn Eo este invers asociată cu expresia

receptorului CD36 (receptor al particulelor de ox - LDL şi propus ca un marker precoce al

aterosclerozei) dovedind rolul antiinflamator al receptorilor PPARα la nivel endotelial

17 La pacienţii cu antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială nivelul de

expresie al receptorilor PPARα icircn eozinofile şi Mo este diminuat comparativ cu subiecţii

fără antecedente familiale de hipertensiune arterială Putem spune că studiul efectuat de

noi aduce informaţii importante legate de geneză aterosclerozei şi hipertensiunii arteriale

18 Prin studiul asocierilor dintre receptorii PPARα şi componentele clinice ale sindromului

metabolic am arătat rolul acestor receptori icircn determinismul obezităţii de tip central

nivelul expresiei relative a receptorilor PPARα fiind invers proporţional cu circumferinţa

abdominală

19 Icircn acelaşi timp nivelul de expresie a PPARα icircn sindromul metabolic este asociat pozitiv

cu concentraţia serică a HDL-colesterolului şi invers asociat cu nivelul trigliceridelor

serice dovedind rolul acestor receptori icircn diminuarea procesului inflamator cronic de la

nivel vascular

20 La pacienţii cu SM scăderea expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofile este corelată cu

creşterea unor markeri ai sindromului inflamator cronic cardiometabolic (acid uric

fibrinogen) ilustracircnd importanta receptorilor icircn reglarea status-ului inflamator cronic din

sindromul metabolic

21 Utilizarea metodei flowcitometrice pentru studiul expresiei relative a receptorilor PPARα

icircn leucocite a adus informaţii importante cu privire la mecanismele moleculare de control

implicate icircn patogenia bolilor cardiometabolice icircn concordanţă cu cercetările care descriu

expresia PPAR icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale bronşice

keratinocite)

BIBLIOGRAFIE SELECTIVA

1 Kahn R Metabolic syndrome- what is the clinical usefulness Lancet 2008371(9628)1892-3

2 Reaven GM The metabolic syndrome is this diagnosis necessary Am J Clin Nutr 2006 83(6)1237-7

3 Grundy SM Pre-Diabetes Metabolic Syndrome and Cardiovascular Risk J Am Coll Cardiol 201259(7)

635-43

4 International Diabetes Federation IDF Diabetes Atlas 6th edn International Diabetes Federation Belgium

Brussels 20131-155

5 World Health Organization Global Status Report on Noncommunicable Diseases 2010 World Health

Organization Geneva Switzerland 20111-176

6 Coman AE Petrovanu R Sindromul metabolic in practica de ambulator Editura Pim Iaşi 2009 1-103

7 Grundy SM Becker D Clark LT et alThird Report of the National Cholesterol Education Program (NCEP)

Expert Panel on Detection Evaluation and Treatment of High Blood Cholesterol in Adults (Adult

Treatment Panel III) Final Report Circulation 2002106(25)3143-90

8 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J Metabolic syndrome- a new worldwide definition A Consensus Statement

from the International Diabetes Federation Diabet Med 2006 23(5)469-80

9 KG Alberti KG Eckel RH Grundy SM etal International Diabetes Federation task force on epidemiology

and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart Association World Heart

Federation International Atherosclerosis Society International Association for the study of obesity

Harmonizing the metabolic syndrome a joint interim statement of the International Diabetes Federation task

force on epidemiology and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart

Association World Heart Federation International Atherosclerosis society and International Association

for the study of obesity Circulation 2009120(16)1640-5

10 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J IDF Epidemiology Task Force The metabolic syndrome new

worldwide definition Lancet 2005 366 1059 - 62

11 Oleszczyk M Svab I Seifert B et al Primary healthcare in the developing part of Europe changes and

development in the former Eastern Bloc countries that joined the European Union following 2004 Med Sci

Monit 2009(15)78ndash84

12 Jung U J Choi M S Obesity and Its Metabolic Complications The Role of Adipokines and the

Relationship between Obesity Inflammation Insulin Resistance Dyslipidemia and Nonalcoholic Fatty

Liver Disease Int J Mol Sci 2014rsquo15(4) 6184-223

13 Vanden Heuvel JP Peters JM Peroxisome Proliferators In Ramos K (ed) Cellular and Molecular

Toxicology (Second Edition) Volume 2 New York Elsevier Science Inc 2010 145 - 67

14 Yessoufou A Wahli W Multifaceted roles of peroxisome proliferator-activated receptors (PPARs) at the

cellular and whole organism levels Swiss Med Wkl 2010140w13071 doi104414smw201013071

15 Azhar S Peroxisome proliferator-activated receptors metabolic syndrome and cardiovascular disease

Future Cardiology 20106(5)657-91

16 Andries G Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity

Diabetes and Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(Suppl)24-32

17 Zandbergen F Plutzky J PPARalpha in atherosclerosis and inflammation Biochim Biophys Acta

20071771(8)972-82

18 Straus DS Glass CK Anti-inflammatory actions of PPAR ligands new insights on cellular and molecular

mechanisms Trends Immunol 200728(12)551-8

19 Zlei M Zugun- Eloae F Carasevici E Citometrie icircn flux - Bază şi clinică Icircn Hinescu ME (ed) Citometrie icircn

flux - principii şi aplicaţii clinice Bucureşti Editura Viaţa Medicală Romacircnească 20111-128

20 Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity Diabetes and

Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(9)24-32

21 Woerly G Honda K Loyens M et al Peroxisome proliferator-activated receptors alpha and gamma down-

regulate allergic inflammation and eosinophil activation J Exp Med 2003198(3)411-21

22 Salle-Saumont D Brenuchon C Kanda A et al Peroxisome proliferator-activated receptor alpha regulates

skin inflammation and humoral response in atopic dermatitis J Clin Allergy Immunology 2008 21(4)962-8

23 Schote A Turner J Schiltz J et al Nuclear receptors in human immune cells expression and correlations

Mol Immunolog 200744(6)1436-45

24 DAmore S Vacca M Graziano G et al Nuclear receptors expression chart icircn peripheral blood

mononuclear cells identifies patients with Metabolic Syndrome Biochim Biophys Acta

20131832(12)2289-301

25 Uthurralt J Gordish-Dressman H Bradbury M T et al PPARalpha L162V underlies variation in serum

triglycerides and subcutaneous fat volume in young males BMC Med Genet 2007855

26 Hiukka A Leinonen ES Jauhiainen M et al Long-term effects of fenofibrate on VLDL and HDL

subspecies icircn participants with type 2 diabetes mellitus Diabetologia 2007 50(10)2067-75

27 Robins SJ Rubins HB Faas FH et alInsulin resistance and cardiovascular events with low HDL

cholesterol The Veterans Affairs HDL Intervention Trial (VA-HIT) Diabetes Care 2003 26(5)1513-7

28 Devaraj S Siegel D Jialal I Statin Therapy in Metabolic Syndrome and Hypertension Post-JUPITER

What is the Value of CRP Curr Atheroscler Rep 2011 13(1) 31ndash42

29 Imperatore G Riccardi G Iovino C et al Plasma Fibrinogen A New Factor of the Metabolic Syndrome A

population-based study Diabetes Care 19982 1(4)649-54

30 Krysiak R Gdula-Dymek A Bachowski R Okopien B Pleiotropic effects of atorvastatin and fenofibrate

in metabolic syndrome and different types of pre-diabete Diabetes Care 201033(10)2266-70

31 Hermans MP Impact of Fenofibrate on Type 2 Diabetes Patients with Features of the Metabolic Syndrome

Subgroup Analysis From FIELD Curr Cardiol Rev 20106(2)112-8

32 Silverstein R Inflammation atherosclerosis and arterial thrombosis Role of the scavenger receptor CD36

Cleveland Clinic Journal of Medicine 200976(Suppl 2)S27-S30

33 Hăncu N Obezitatea In Vereşiu IA (ed) Diabetul zaharat nutritia si bolile metabolice Volume 2 Editura

Echinox Cluj- Napoca 2010 1-15

Lista lucrări publicate

1 Elena Popa Maria Maidaniuc Agnes Bacusca Alamir Diaa Rodica Petrovanu Adorata Elena

Coman Disfuncţia endotelială ndash de la mecanisme moleculare la cuantifi care şi tratament icircn practica

medicală Practica Medicală 20149(3) 109-14

2 Elena Popa Agnes Bacusca Alamir Diaa Maria Maidaniuc Rodica Petrovanu Adorata Elena Coman

The function of insulin receptor (IRF) in evolution of obesity correlation with adipocytes diameters

Archives of the Balkan Medical Union 201449(3) 275-9

3 Elena Popa Florin Zugun-Eloae Mihaela Zlei Daniela Jitaru Oana Maria Pintilie Adorata Elena

Coman Maria Traian Didona Anca Ungureanu Eugen Carasevici - acceptata pentru numarul 42014

Flow cytometry analysis of PPAR-alpha receptors in metabolic syndrome) Revista Romană de

Medicină de Laborator(RRLM-D-14-00034R1- adeverinţa ataşată

Page 18: REZUMAT TEZĂ DE DOCTORAT - umfiasi.ro Doctorat/rezumat... · universitatea de medicinĂ Şi farmacie “grigore t. popa” iaŞi facultatea de medicinĂ rezumat tezĂ de doctorat

receptorilor PPARα icircn limfocitele subiecţilor cu SM s-au icircncadrat icircn intervalul Media plusmn 2DS

Figura 5 19 Lot SM Variaţia expresiei

relative a PPARα icircn Ly

Număr pacienţi 26

Minimum 813

Maximum 31400

Media 18178

Deviaţia Standard 6116

25 valori s-au icircncadrat icircn Media plusmn 2DS

Pentru lotul Non-SM diagrama de control (figura 520) a arătat toate valorile

determinate pentru lotul Non-SM se icircncadrează icircntre LCS şi LCI

Figura 520 Lot Non -SM Variaţia

expresiei relative a PPARα icircn Ly

Număr pacienţi 31

Minimum 748

Maximum 30100

Media 179574

Deviaţia Standard 5229

96 din valori icircncadrate icircn Media plusmn 2DS

Aplicarea testului t-Student pentru valorile medii ale intensităţii de fluorescenţă ale

PPARα icircn Ly nu a arătat existenţa unei diferenţe statistic semnificative icircntre lotul cu SM şi

lotul martor(t- Test P= 088)

Analiza receptorilor PPARα icircn Ly subiecţilor cu AHC de HTA şi dislipidemie

Studiind populaţiile de Ly la subiecţii care au prezentat AHC de hipertensiune

arterială analiza flowcitometrică a relevat existenţa unor valori mai mici pentru MFI la aceşti

subiecţi comparativ cu cei fără AHC de HTA (fig 522) deşi scăderea observată nu a

icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică (t- Test P = 009)

AHC HTA

Număr 22

Mediana 16000

Percentila 25 12700

Percentila 75 17100

AHC HTA absenţe

Număr 35

Mediana 18700

Percentila 25 14900

Percentila 75 23175

Figura 522 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Ly funcţie de AHC de HTA

Nu am calculat diferenţe statistic semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor

PPARα icircn populaţiile de Ly ale subiecţilor la care am identificat AHC de dislipidemie

comparativ cu cei care nu au declarat antecedente familiale de dislipidemie (t- Test P= 051)

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn neutrofile (PMN)

Analiza flowcitometrică a evidenţiat prezenţa PPARα icircn PMN recoltate din sacircngele

venos al tuturor participanţilor la studiu Pentru toţi subiecţii investigaţi analiza MFI a Ac -

PPARα icircn populaţia de PMN a relevat un interval de variaţie de [163419] iar valoarea medie

a MFI pentru Ac anti-PPARα a fost de 26392 plusmn 7064 Testul Shapiro-Wilk a arătat o

distribuţie normală a valorilor intensităţii medii de fluorescenţă a anticorpilor anti-PPARα atacirct

icircn lotul pacienţilor cu SM cacirct şi icircn lotul martor

1 6 11 16 21 26 31

-50

0

50

100

150

200

250

300

350

400

MFI

anti-

PPAR

a

1818

595

3041

-17

3653

Media+2DS

Media- 2DS

1 6 11 16 21 26 31 36

0

50

100

150

200

250

300

350

MFI

ant

i-PPA

R

a

1796

750

2841

227

3364

Media+2DS

Media

Media- 2DS

MFI

anti-

PPAR

a Ly

130

140

150

160

170

180

190

200

210

DA NU

AHC HTA

P=009

Tabel XXXII Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn PMN

Lot SM Lot Non-SM

N 26 31

Media 26273 26480

SD 6915 7088

Mediana 25900 25500

Minimum 17200 16300

Maximum 39500 41900

Percentila 25 19800 19600

Percentila 75 30500 31500

Icircn cele două loturi distribuţia frecvenţei valorilor nivelului relativ de expresie a

receptorilor PPARα icircn PMN a fost reprezentată sub formă de histograme (fig 525)

Figura 525 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti-PPARα icircn PMN

Pentru cei 26 de pacienţi din lotul cu SM a valoarea medie a nivelului de expresie

relativă a receptorilor PPARα icircn PMN a fost de 26273 plusmn 6915 Studiind diagrama Shewhart

din figura 526 se observă că toate valorile obţinute pentru nivelul de expresie relativă

PPARα icircn PMN investigate se icircncadrează icircntre limitele definite de valorile medii plusmn 2DS

Figura 526 Lot SM

Variaţia expresiei relative a PPARα icircn

PMN

Număr pacienţi 26

Minimum 17200

Maximum 39500

Media 26273

Deviaţia Standard 6915

Valorile MFI icircncadrate icircn Media plusmn 2DS

Pentru lotul martor valoarea medie calculată a MFI a anticorpilor anti-PPARα a fost de

26480 plusmn 7088 peste 95 din valorile MFI fiind cuprinse icircn Media plusmn 2DS (figura 527)

Figura 527 Lot Non-SM Variaţia expresiei

relative a PPARα icircn PMN

Număr pacienţi 31

Minimum 16300

Maximum 41900

Media 26480

Deviaţia Standard 7088

30 valoriicircn Media plusmn 2DS

Pentru PMN analiza statistica nu a arătat existenţa unei diferenţe statistic semnificative icircntre

nivelul de expresie relativă a PPARα la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii din lotul

Non-SM (t- Test P= 090) Studiind populaţiile de PMN la subiecţii care au prezentat AHC

de HTA nu am calculat o diferenţă statistic semnificativă icircntre expresia receptorilor PPARα

la subiecţii cu istoric familial de hipertensiune arterială comparativ cu cei pentru care nu s-au

notat AHC de HTA (t- Test P= 013)De asemenea am identificat diferenţe icircntre nivelul de

expresie al PPARα icircn PMN subiecţilor care prezentau AHC de dislipidemie comparativ cu

cei fără AHC de dislipidemie (t- Test P= 017)

50 100 150 200 250 300 350 400 450 500

0

5

10

15

20

25

30

35

MFI anti-PPAR a

Frecve

nta rel

ativa (

)

Lot SM

50 100 150 200 250 300 350 400 450 500

0

5

10

15

20

25

30

MFI anti-PPAR a

Frecv

enta

relati

va (

)

Lot Non-SM

1 6 11 16 21 26 31

0

50

100

150

200

250

300

350

400

450

500

MFI

anti-

PPA

R

a

2627

1244

4010

553

4702

Media + 2DS

Media - 2 DS

Media

1 6 11 16 21 26 31 36

0

50

100

150

200

250

300

350

400

450

500

MFI

anti-

PPAR

a

2648

1230

4066

522

4774

Media+ 2DS

Media - 2DS

Media

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile Tabel XXXIV Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn Eo

Lot SM Lot Non-SM

N 26 31

Mediaplusmn SD 141057 plusmn 47604 172209 plusmn 37565

Mediana 142450 171300

Minimum 35000 68500

Maximum 233700 250600

Percentila 25 119300 153225

Percentila 75 169700 199550

Am studiat nivelul relativ de expresie a receptorilor PPARα icircn Eo iar rezultatele au

fost figurate sub forma de histograme (figura 532)

Figura 532 Distribuţia frecventelor relative ale valorilor MFI anti- PPARα icircn Eo

Din diagrama Shewhart (figura 533) se observă că toate valorile determinate pentru

nivelul de expresie relativă a PPARα icircn Eo pentru lotul SM s-au icircncadrat icircn [Media plusmn 3 DS]

peste 90 din determinări fiind cuprinse icircn [Media plusmn 2 DS] iar icircn [Media plusmn 1 DS] sunt

incluse peste 65 din valorile MFI

Figura 533 Lot SM

Variaţia expresiei relative a PPARα icircn Eo

Număr pacienţi 26

Minimum 35000

Maximum 233700

Media 141057

Deviaţia Standard 47604

24 valori icircncadrat eicircn [Media plusmn 2DS]

Pentru subiecţii incluşi icircn lotul martor analiza diagramei (figura 534) a arătat că

toate cele 31 de valori ale MFI pentru PPARα icircn Eo se icircncadrează icircn [Media plusmn 3DS] iar 30

dintre acestea se icircncadrează icircn [ Media plusmn 2 DS]

Figura 534 Lot Non -SM

Variaţia expresiei relative a PPARα icircn Eo

Număr pacienţi 31

Minimum 685

Maximum 2506

Media 172209

Deviaţia Standard 375 65

30 valori icircncadrate icircn [Media plusmn 2DS]

Comparacircnd subiecţii cu SM cu cei din lotul martor am observat o scădere

semnificativă statistic a MFI a Ac anti - PPARα icircn Eo pentru pacienţiir cu SM ( figura 535)

PPARα Eo Lot Non-SM

Număr 31

Mediana 171300

Percentila 25 152325

Percentila 75 199550

PPARα Eo Lot SM

Număr 26

Mediana 142450

Percentila 25 119300

Percentila 75 169700

Figura 5 35 Comparaţie icircntre nivelul de expresie a PPARα icircn Eo

0 500 1000 1500 2000 2500 3000

0

10

20

30

40

50

MFI anti-PPAR a

Frecvent

a relativa

()

Lot SM

400 800 1200 1600 2000 2400 2800

0

5

10

15

20

25

30

35

40

45

MFI anti-PPAR a

Frecenta

relativa

()

Lot Non-SM

1 6 11 16 21 26 31

-500

0

500

1000

1500

2000

2500

3000

MFI a

nti-PP

AR

a

14106

4765

23447

94

28117

Media + 2DS

Media- 2DS

LCI

LCS

1 6 11 16 21 26 31 36

500

1000

1500

2000

2500

3000

MFI an

ti-PPA

R a

17221

9708

24734

5951

28490

LCI

Media-2DS

Media

Media +2 DS

LCS

1200

1300

1400

1500

1600

1700

1800

1900

Lot SM Lot Non-SM

P=00072

Cu ajutorul curbei ROC am evaluat posibilitatea utilizării MFI a Ac anti - PPARα icircn

Eo ca marker pentru diagnosticul SM Valoarea MFI a Ac anti - PPARα icircn Eo care prezice cu

cea mai mare acurateţe prezenţa SM a fost de 1533 (punctul de ldquocut-offrdquo) pentru care am

calculat o sensibilitate de 5652 şi o specificitate de 7778 Calculul ariei AUC a furnizat

valoarea de 0663 şi deci determinarea parametrului MFI anti- PPARα icircn Eo are valoarea

unui test cu acurateţe redusatilde icircn diagnosticul SM Studiind expresia PPARα icircn Eo la subiecţii

care au prezentat AHC de HTA am observat o scădere semnificativă statistic (P = 00023) a

expresiei PPARα la subiecţii cu istoric familial de HTA comparativ cu subiecţii fatilderatilde AHC de

HTA (figura 537)

AHC HTA

Număr 22

Mediana 148800

Percentila 25 116425

Percentila 75 170750

AHC HTA absente

Număr 35

Mediana 170850

Percentila 25 143700

Percentila 75 195000

Figura 537 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Eo funcţie de AHC de HTA

Studiind subiecţii cu AHC declarate de dislipidemie nu am identificat diferenţe icircntre

nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Eo subiecţilor cu AHC de dislipidemie

comparativ cu cei care nu au declarat prezenţa AHC de dislipidemie (t - Test P = 067)

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor CD36

Am studiat expresia receptorilor CD36 icircn Mo subiecţilor incluşi icircn studiu

Lot Non - SM

BLot SM

Figura 539 Analiza flowcitometrica pentru receptorii CD36 icircn Mo

Pentru toţi participanţii la studiu valorile MFI au variat icircn intervalul [817 6933] iar

valoarea medie a MFI a Ac anti-CD36 a fost de 397133 plusmn 120902 Tabel XXXVII Statistică descriptivă pentru a CD36 icircn Mo

Lot SM Lot Non-SM

Media 429034 370377

Deviatia Standard 109051 125514

Mediana 411000 362800

Minimum 266400 81700

Maximum 693300 616800

Percentila 25 346200 273750

Percentila 75 469000 453300

Distribuţia frecvenţelor relative a MFI au fost prezentate sub formă histogramelor

Figura 541 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti - CD36 icircn Mo

MFI

ant

i-PPA

R a Eo

1000

1100

1200

1300

1400

1500

1600

1700

1800

1900

DA NU

AHC HTA

P=00023

1000 2000 3000 4000 5000 6000 7000 8000

0

5

10

15

20

25

MFI anti-CD36

Frecve

nta rela

tiva (

)

Lot SM

0 1778 3556 5333 7111

0

5

10

15

20

25

30

35

MFI anti-CD36

Frecve

nta rel

ativa (

)

Lot Non - SM

Referitor la lotul SM 92 din valorile MFI a Ac anti- CD36 s-au icircncadrat icircn

intervalul Media plusmn 2 DS (figura 542) iar pentru lotul martor peste 90 dintre acestea icircn

Media plusmn 2 DS (figura 543)

Figura 542 Lot SM

Variaţia MFI anti-CD36 icircn Mo

Număr pacienţi 26

Minimum 2664

Maximum 6933

Media 429034

Deviaţia Standard 109051

Figura 543 Lot Non -SM

Variaţia MFI anti- CD36 icircn Mo

Număr 31

Minimum 81700

Maximum 616800

Media 370377

Deviaţia Standard 125514

Comparacircnd subiecţii cu SM cu cei din lotul normal am constatat o tendinţă de creştere

a expresiei CD36 icircn lotul cu SM((t - Test P= 0067)

MFI anti - CD36 Lot Non-SM

Număr 31

Mediana 3628

Percentila 25 2737

Percentila 75 4533

MFI anti - CD36 Lot SM

Număr 26

Mediana 4110

Percentila 25 3462

Percentila 75 4690

Figura 544 Comparaţie icircntre cel două loturi privind MFI anti - CD36 icircn Mo

Referindu-ne la subiecţii cu AHC de HTA am observat o tendinţă de creştere a

valorilor MFI anti-CD36 comparativ cu cei care nu au avut AHC de HTA (t - Test P = 0 08)

AHC HTA

Număr 22

Mediana 442800

Percentila 25 355275

Percentila 75 519475

AHC HTA absenţe

Număr 35

Mediana 377400

Percentila 25 316900

Percentila 75 443400

Figura 545 Comparaţie icircntre expresia CD36 icircn Mo funcţie de AHC de HTA

Nu s-au calculat diferenţe semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor

PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de dislipidemie atunci cacircnd aceştia au fost comparaţi cu

subiecţii fără AHC de dislipidemie (t - Test P=031)

Corelaţii icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα si CD36

Studiind valorile intensităţii medii de fluorescenţă a Ac anti-PPARα icircn Mo Ly şi

PMN am observat că nivelul de expresie celularatilde a PPARα icircn Mo Ly şi PMN sunt corelate

puternic pozitiv atacirct icircn lotul SM cacirct şi icircn lotul martor(fig547 548)

1 6 11 16 21 26 31

0

1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

8000

Pacienti

MFI a

nti-CD

36

42903

21093

64714

10188

75619

LCI

Media

LCS1 6 11 16 21 26 31 36

-1000

0

1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

8000

MFI a

nti- C

D36

37038

11935

62141

-616

74692Media + 2 DS

Media

Media - 2 DS

3200

3400

3600

3800

4000

4200

4400

4600

4800

Lot SM Lot Non-SM

P = 00676

MFI

anti-

CD36

3400

3600

3800

4000

4200

4400

4600

4800

5000

DA NU

AHC HTA

P = 008

Figura 547 Studiul relatiilor dintre

receptorii PPARα icircn SM A Mo vs PMN B Mo vs Ly

C PMN vs Ly Graficul ilustrează coeficienţii r P dreapta de

regresie (linia centrala) intervalul de icircncredere

95 şi intervalul de predicţie 95

Figura 548 Corelaţii icircntre receptorii PPARα icircn lotul

martor

A Mo vs PMN

B Mo vs Ly

C PMN vs Ly

Tot pentru lotul SM cacircnd am evaluat relaţia dintre nivelul de expresie relativă a

receptorilor PPARα icircn Eo şi nivelul de expresie relativa a receptorilor CD 36 am obţinut o

corelaţie negativă (r = - 05 P = 001) (fig 549 A)

50 100 150 200 250 300 350 50

100

150

200

250

300

350

400

450

500

PPARα Ly

PPARα PMN

y = 56641 + 1159 x r = 086 P lt 0001

C

50 100 150 200 250 300 350 400 0

50

100

150

200

250

300

350

PPARα Mo

PPARα Ly

y = 36665 + 0607 x r = 090 P lt 0001

B

150 200 250 300 350 400 450 0

50 100 150 200 250 300 350 400 450 500

PPARα PMN

PPARα Mo

y = 2505 + 0879 x r = 081 P lt 0001

A

50 100 150 200 250 300 350

50 100 150 200 250 300 350 400 450 500

PPARα Ly

PPARα PMN

y = 95668 + 0919 x r = 081 P lt 0001

C

100 150 200 250 300 350 400

0

50

100

150

200

250

300

350

400

PPARα Mo

PPARα Ly

y = -7503 + 0829 x r = 079 P lt 0001

B

100 150 200 250 300 350 400

50

100

150

200

250

300

350

400

450

500

PPARα Mo

PPARα PMN

y = 61384 + 0882 r = 074 P lt 0001

A

Figura 549 Corelaţii icircntre expresia PPARα icircn Eo şi alte tipuri de receptori investigaţi A PPARα Eo şi CD 36 (Lot SM) B PPARα Eo şi PPARα Mo( Lot Non-SM)

Icircn lotul martor am identificat o asociere moderată pozitivă (r = 038 P = 0033) icircntre

nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Eo şi Mo (figura 549B) corelaţie absentă icircn

lotul pacienţilor cu SM

Corelaţii dintre receptorii studiaţi şi componentele sindromului metabolic

Icircn lotul de control analiza statistică a relevat faptul că icircntre circumferinţa

abdominală (CA ) şi nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Mo Ly şi PMN există o

corelaţie inversă adică scăderea expresiei PPARα la nivelul acestor populatii celulare ar fi

icircnsoţită de creşterea CA (figura 550

Figura 550Corelaţii dintre receptorii

PPARα si CA A Mo B Ly C PMN

La pacienţii cu SM am notat o corelatie moderată negativă statistic semnificativă

icircntre TG şi valorile MFI a Ac anti- PPARα icircn Mo şi Ly( fig 551)

150 200 250 300 350 400 450 50

60

70

80

90

100

110

PPARα PMN

CA r = - 040 P = 0024

C

50 100 150 200 250 300 350 50

60

70

80

90

100

110

PPARα Ly

CA r = - 046 P = 0009

B

50 100 150 200 250 300 350 400 50

60

70

80

90

100

110

PPARα Mo

CA r = - 042 P = 0017

A

50 100 150 200 250 300 350 400 500

1000

1500

2000

2500

3000

PPARα Mo

PPARα Eo

r = 038 P = 0033

B

0 500 1000 1500 2000 2500 1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

8000

PPARα Eo

CD36

r = 050 P = 0010

A

Figura 551 Lot SM Corelaţie icircntre expresia PPARα şi TG (A Mo B Ly)

Analizand corelatia dintre receptorii CD36 si valorile TA la pacientii cu SM am observat

o asociere pozitivă asteptată intre TAD si nivelul de expresie al receptorilor CD36 (fig 552)

Figura 552 Lot SM Corelaţii icircntre expresia

receptorilor CD36 şi valorile tensiunii arteriale

diastolice

Studiind corelaţiile dintre receptorii PPARα şi HDL-col la subiecţii din lotul martor am

notat o asociere pozitivă icircntre expresia PPARα icircn Mo şi Ly cu HDL-col (fig 553)

Figura 553 Lot martor Corelaţii icircntre HDL-col şi expresia PPARα icircn Mo(A) Ly(B)

Icircn lotul normal am evidenţiat corelaţii pozitive moderate dar semnificative statistic icircntre

CA şi valorile TAS (r = 062 P lt 0001) respectiv TAD (r = 050 P=0004) precum şi icircntre

CA şi glicemia subiecţilor normali (r = 052 P = 0003) Aceste date icircmpreună cu relaţia

invers proporţională identificată icircntre HDL-col şi CA (r = 050 P = 001) susţin validitatea

acestui studiu Icircn lotul subiecţilor cu SM am observat o corelaţie moderat pozitivă icircntre

expresia PPARα icircn populaţiiile de Mo şi Eo şi concentraţia a HDL-col (fig 554)

B

100 150 200 250 300 350 20

30

40

50

60

70

80

90

100

PPARα Ly

HDL-col-(mgdl)

r = 036 P = 0046

A

150 200 250 300 350 400 20

30

40

50

60

70

80

90

100

PPARα Mo

HDL-col-(mgd)l

r = 035 P = 005

70 75 80 85 90 95 100 1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

8000

TAD (mmHg)

CD36

r = 048 P = 0013

B

50 100 150 200 250 300 350 -100

0

100

200

300

400

500

PPARα Ly

TG(mgdl)

r = - 042 P = 003

A

50 100 150 200 250 300 350 400 -100

0

100

200

300

400

500

PPARα Mo

TG ( mgdl) r =- 0 43 P = 0027

Figura 554 Corelaţii icircn SM icircntre HDL-col şi expresia PPARα icircn Mo (A) şi Eo(B)

Corelaţii icircntre nivelul de expresie relativă a PPARα şi markeri ai disfuncţiei

endoteliale şi inflamaţiei cronice

Deşi nu a icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică am reţinut corelaţia invers

proporţională (r = - 0331 P = 006) dintre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα

icircn PMN şi concentraţia serică a Non-HDL-colesterolului

Studiind relaţiile dintre parametri icircn lotul de pacienţi cu SM am observat o corelaţie

moderată invers proporţională icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Eo şi

acidul uric seric (figura 555 A) corelaţie absentă la subiecţii fără SM

Figura 555 Lot SM corelaţia dintre expresia PPARα icircn Eo şi acidul uric (A) respectiv

PPARα şi fibrinogen (B)

Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P=008) am notat pentru

pacienţii cu SM corelaţia invers proporţională dintre expresia PPARα icircn Eo şi concentraţia

serică a fibrinogenului ( figura 555B)

V5 Discuţii

Icircn cadrul lucrării de doctorat am studiat nivelul de expresie relativă a PPARα icircn

leucocitele pacienţilor cu SM comparativ cu cea a subiecţilor normali Expresia PPARα a fost

studiată icircn paralel cu cea a CD36 glicoproteină exprimată pe suprafaţa a numeroase celule

din organismul uman inclusiv pe cea a Mo şi macrofagelor Prin funcţia sa de receptor pentru

particulele oxidate de LDL CD36 cunoscut ca bdquoscavenger receptorrdquo de clasa B sau

bdquotrombospodin receptorrdquo contribuie la dezvoltarea inflamaţiei de la nivel endotelial şi

formarea plăcii de ateroscleroză Referitor la studiul PPARα icircn Eo icircn sindromul metabolic

menţionăm că studiul nostru este primul care arată că nivelul de expresie a proteinei PPARα

icircn Eo măsurat prin citometrie icircn flux este semnificativ mai redus la pacienţii care sunt

diagnosticaţi cu acest sindrom De asemenea icircn lotul cu SM cercetat icircn cadrul studiului

receptorilor PPARα numărul Eo circulante a fost semnificativ mai crescut la pacienţii cu SM

B

0 500 1000 1500 2000 2500 200

250

300

350

400

450

PPARα Eo o

Fibrinogen mgdl

r =- 036 P = 008

0 500 1000 1500 2000 2500 1 2 3 4 5 6 7 8 9

10 11

PPARα Eo_

Acid uric(mgdl) r = 048 P = 0014 A

0 500 1000 1500 2000 2500 10

20

30

40

50

60

70

80

PPARα Eo

HDL(mgdl)

r = 044 P = 0024

B

100 150 200 250 300 350 400 10

20

30

40

50

60

70

80

PPARα Mo

HDL( mgdl)

r = 046 P = 0019

A

(P = 003) Aceste constatări conduc la ipoteza că Eo joacă un rol special icircn mecanismele

patogenice declanşate icircn sindromul metabolic şi că receptorii PPARα sunt importanţi icircn

implicarea Eo icircn obezitate şi insulinorezistenţă Creşterea numărului de Eo circulante este

urmată de eliberarea mediatorilor proinflamatori iar reducerea expresiei PPARα icircn Eo

determină perturbarea mecanismelor de control al inflamaţiei cu exacerbarea cascadei

proinflamatorii Consecutiv se agravează disfuncţia endotelială şi se accelerează progresia

leziunilor de ateroscleroză Extrapolacircnd aceste ipoteze putem spune că asocierea raportată

dintre boala ischemică coronariană şi Eo poate fi şi consecinţa exacerbării cascadei

proinflamatorii de la nivel vascular produsă datorită scăderii expresiei PPARα icircn Eo iar

creşterea numărului de Eo circulante poate reprezenta o adaptare a organismului uman care

icircncearcă să suplinească deficitul de receptori PPARα Analizacircnd curba ROC pentru

intensităţile medii de fluorescenţă determinate pentru anticorpii anti- PPARα icircn Eo am

obţinut pentru acest biomarker o sensibilitate a testului de 565 şi o specificitate de 778

pentru un punct de cut-off de 1533 ( figura 536 ) Deşi aria AUC (Aria under the curve) egală

cu 0663 icircncadrează acest test ca avacircnd o acurateţe redusă observăm că că această valoare

este apropiată de determinările AUC pentru alţi factori (fibrinogen raport de aterogenitate

acid uric non- HDL-colesterol) cunoscuţi ca fiind implicaţi icircn aterogeneză şi inflamaţia

cronică (figura 431) Aceste remarci alături de faptul că icircn studiul receptorilor PPARα icircn

leucocite am inclus subiecţi la primul diagnostic de SM creează premisa integrării

determinării expresiei relative a receptorilor PPARα icircn diagnosticul complex al sindromului

metabolic Putem spune că icircn final studiul expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofilele

circulante se dovedește a fi util icircn diagnosticul precoce la nivel molecular al SM permiţacircnd

identificarea timpurie a unor indivizi cu risc cardiometabolic crescut Astfel intervenţia

precoce asupra subiecţilor cu deficit de PPARα icircn Eo contribuie la managementul eficient al

afecţiunilor degenerative icircn care inflamaţia cronică icircndeplineşte un rol primordial Referitor

la populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările efectuate prin citometrie de flux nu au

arătat existenţa unor diferenţe statistice icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα

la subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali Rezultatele noastre pot fi

consecinţa caracteristicilor loturilor studiate (icircn studiul nostru au fost incluşi subiecţi recrutaţi

la primul diagnostic de SM şi icircn absenţa stimulării receptorilor PPARα cu droguri agoniste

PPARα) dar icircn acelaşi timp pot apare diferenţe datorită metodei utilizate (231 232 233)

Făcacircnd o paralelă cu un studiu publicat icircn 2013 icircn Europa (231) care a arătat creşterea

nivelului de expresie al PPARα icircn Ly şi Mo observăm că deşi numărul de subiecţi a fost

aproximativ egal (57 participanţi icircn studiul nostru 60 icircn studiul DAmore) subiecţii icircn studiul

amintit au fost recrutaţi dintr-o clinică cu profil medical la primul diagnostic de SM icircn timp

ce metoda utilizată a fost PCR (Polymerase Chain Reaction) mult mai fidelă decacirct citometria

icircn flux icircn studiul receptorilor nucleari De asemenea DAmore nu investighează expresia

PPARα icircn Eo şi PMN icircn cercetare fiind incluse doar celulele CD14+ (predominant Mo) şi

CD14- (predominant Ly) Deşi nu am obţinut diferenţe statistic semnificative icircntre cele două

loturi referitoare la nivelul de expresie relativă a PPARα icircn Mo Ly şi PMN am observat

corelaţii puternice semnificative statistic icircntre expresia receptorilor PPARα icircn aceste tipuri

celulare Rezultatele obţinute sugerează existenţa unui mecanism diferit molecular de control

icircn eozinofile care reglează cantitatea de proteină PPARα icircn eozinofile versus alte tipuri de

leucocite (la pacienţii cu SM) şi acest lucru este icircn concordanţă cu cercetările care descriu

expresia PPARα mRNA icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale

bronşice keratinocite) Studiind prin citometrie de flux nivelul de expresie relativă a

receptorului CD36 la nivelul Mo am arătat prezenţa acestuia icircn Mo tuturor subiecţilor

investigaţi Analizacircnd valorile intensităţii medii de fluorescenţă a CD36 icircn loturile studiate

am observat o tendinţă de creştere la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali

confirmacircnd implicarea receptorului CD36 icircn patogeneza acestuia Referitor la expresia

receptorului CD36 rezultatele obţinute sunt icircn consens cu studii anterioare care au arătat

creşterea expresiei CD36 la pacienţii cu SM şi diabet zaharat Astfel pe lacircngă diferenţa icircn

expresia CD36 s-au raportat şi corelaţii inverse icircntre expresia proteinei CD36 şi nivelul

adiponectinei Acelaşi studiu a evidenţiat o corelaţie pozitivă intre expresia CD36 cu expresia

receptorilor PPAR gamma relaţia cu PPARα nefiind investigată

Analiza de subgrup a relaţiilor dintre componentele SM și elementele moleculare

proinflamatorii studiate a relevat prezenţa unor asocieri semnificativ statistice icircntre acestea

Se argumentează astfel că veridicitatea studiului este susţinută de interdependenţele statistice

ale componentelor SM Determinarea coeficientului de corelaţie Icircn studiul nostru nivelul de

expresie relativă a PPARα s-a corelat moderat negativ (figura 550) cu CA a subiecţilor din

lotul normal pentru populaţiile celulare de Mo (r = - 0420 P = 001) Ly (r = - 046 P =

0009) şi PMN (r = - 040 P = 0024) date care sunt icircn concordanţă cu studiile care arată

rolul PPARα icircn furnizarea energiei prin beta-oxidarea acizilor graşi Icircn acelaşi timp icircn lotul

pacienţilor cu SM nu am identificat prezenţa unei asocieri icircntre nivelul de expresie relativă a

PPARα şi valoarea măsurată a CA Asocierea dintre expresia relativă a PPARα cu obezitatea

de tip central completează datele existente referitoare la reglarea homeostaziei energetice

conturacircnd un mecanism de control deficitar al aportului caloric al SM Icircn condiţiile icircn care

rezultatele obţinute prin metoda citometriei icircn flux nu au arătat existenţa unei corelaţii intre

expresia PPARα şi CA la pacienţii cu SM considerăm că ar fi necesar studiul

polimorfismului genei PPARA care ar putea aduce informaţii importante cu privire la

implicarea acestor receptori icircn apariţia obezităţii de tip central Subliniem acest lucru deoarece

obezitatea este o boală plurifactorială icircn care pe lacircngă factorii ereditari sunt implicaţi factori

de mediu psihologici şi sociali (245) Existenţa unei componente genetice a aterosclerozei

este legată şi de prezenţa unor variante ale genei PPARA asociate cu creşterea incidenţei bolii

cardiovasculare (82) şi a SM (249) Icircn studiul nostru am constatat o scădere statistic

semnificativă a nivelului expresiei relative a receptorilor PPARα icircn Eo la subiecţii cu

antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială comparativ cu subiecţii fără istoric

familial de hipertensiune (figura 537) Deşi diferenţele calculate icircntre loturile studiate nu au

icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică la subiecţii care au declarat prezenţa

antecedentelor familiale de hipertensiune arterială remarcăm o tendinţă de scădere a

intensităţii medii de fluorescenţă pentru Ac anti-PPARα la nivelul Mo (figura 515 P = 006

) icircn timp ce expresia relativă a CD36 icircnregistrează o creştere la acesti subiecţi (figura 545 P

= 008) Icircn contextul riscului cardiovascular foarte icircnalt al pacienţilor cu SM amintim şi

existenţa corelaţiei pozitive dintre valorile tensiunii arteriale diastolice şi expresia relativă a

receptorului CD36 (r = 0483 P = 0013) Această constatare este icircn consens cu studiile care

au arătat că forma solubilă circulantă a CD36 este asociată cu factorii de risc cardiovasculari

fiind propusă ca un marker precoce al aterosclerozei Activarea PPARα este asociată cu

modularea metabolismului lipidic iar agoniştii PPARα sunt utilizaţi icircn mod curent pentru

tratamentul dislipidemiei Sub acţiunea agoniştilor PPARα se obţine o icircmbunătăţire a funcţiei

endoteliale şi a parametrilor reologici funcţiile pleiotropice ale agoniştilor PPARα fiind

dovedite icircn trialuri clinice controlate Icircn populaţiile de Mo şi Ly la pacienţii cu SM

cercetarea noastră a evidenţiat o asociere negativă icircntre nivelul de expresie relativă a

receptorilor PPARα şi concentraţia TG serice (figura 551) Astfel scăderea expresiei

receptorilor PPARα este asociată cu creşterea nivelului TG serice contribuind la profilul

lipidic aterogen din SM Icircn conformitate cu literatura de specialitate icircn studiul efectuat prin

metoda citometriei icircn flux am găsit prezenţa asocierii icircntre nivelul de expresie al PPARα şi

HDL-colesterol Corelaţia pozitivă dintre nivelul de expresie relativă PPARα şi concentraţia

HDL-colesterolului a fost observată icircn lotul martor icircn populaţiile de Mo (r = 035 P = 005)

şi Ly ( r = 036 P = 004) (figura 553) susţinacircnd faptul că stimularea receptorilor PPARα

este legată de creşterea nivelului seric al lipoproteinelor cu densitate crescută La pacienţii cu

SM corelaţia dintre expresia PPARα şi HDL-colesterol a fost evidenţiată icircn populaţiile de Mo

(r = 046 P = 0019) şi eozinofile (r = 044 P = 0024) Se desprinde concluzia că icircn

sindromul metabolic scăderea concentraţiei HDL-colesterol este legată de diminuarea

nivelului de expresie relativă a receptorilor nucleari PPARα icircntărind afirmaţiile legate de

rolul acestor receptori icircn progresia bolilor cardiovasculare Studiind reactanţii de fază acută

analiza statistică a relevat o diferenţă semnificativă din punct de vedere statistic icircntre valorile

fibrinogenului la pacienţii cu SM atunci cacircnd au fost comparaţi cu subiecţii fără SM

(Capitolul IV4 P lt0 001 figura 427A) De asemenea icircn Capitolul V dedicat studiul

expresiei relative a receptorilor PPARα studiul valorilor fibrinogenului a arătat creşterea

acestui reactant de faza acută icircn lotul cu SM comparativ cu lotul martor (P lt0 0001) Icircn

studiul nostru am calculat o corelaţie invers proporţionala (r = - -036 fig 555B) icircntre

nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile şi concentraţia serică a

fibrinogenului Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P = 008) am reţinut

această asociere deoarece am demonstrat că nivelul de expresie relativă al receptorilor

PPARα icircn eozinofile este mai scăzut icircn sindromul metabolic iar sindromul metabolic este

caracterizat printr-un status inflamator cronic status caracterizat şi de creşterea concentraţiei

serice a fibrinogenului De asemenea notam ca această corelaţie negativă se află icircn

concordanţă cu studiile care arata că tratamentul cu agonişti PPARα (fibraţi) determina

scăderea nivelului seric al fibrinogenului contribuind la diminuarea inflamaţiei cronice din

sindromul metabolic şi icircn consecinţă amelioracircnd insulinorezistenţa

LIMITE ȘI DIFICULTĂȚI IcircN CERCETARE

Icircn cadrul Tezei de Doctorat am desfăşurat o cercetare care şi-a propus studierea

expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Recrutarea anamneza şi examinarea

clinică a subiecţilor au fost realizate icircn cadrul Cabinetului de Medicină de Familie CMI Popa

Elena din Iaşi iar determinările hematologice şi biochimice s-au efectuat icircn cadrul

Laboratorului Ambulatorului de Specialitate al Spitalului Universitar ldquoSfacircntul Spiridon din

Iaşi Icircn studiul epidemiologic şi al markerilor inflamatori al sindromului metabolic desfăşurat

au fost incluşi un număr de 1530 de participanţi pe baza liberului consimţămacircnt examinaţi icircn

perioada 01012013 - 31122013 Icircn continuare icircn perioada 1012014 - 28022014 pe baza

criteriilor de includere şi excludere icircn cele două loturi de studiu am investigat un număr de 57

de subiecţi prezentaţi la consultaţie icircn această perioadă şi care au icircndeplinit criteriile de

includere icircn cele două loturi (Lot SM şi Lot Control) constituite pentru evaluarea nivelului de

expresie a receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Explorarea nivelului de expresie

relativă a receptorilor PPARα s-a desfăşurat icircn cadrul Laboratorului de Biologie Moleculară

de pe platforma Institutului Regional de Oncologie Datorită resurselor proprii financiare

limitate trebuie să subliniez că aceasta cercetare nu ar fi fost posibilă fără contribuţia unor

cercetători din domeniul medical care m-au sprijinit necondiţionat atacirct icircn elaborarea

protocolului de lucru cacirct şi icircn efectuarea propriu-zisă a studiului Icircn acest sens menţionăm şi

faptul că pentru studiul receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic am utilizat aparatura

Laboratorului de Biologie Moleculară (care deserveşte icircntreaga Regiune a Moldovei) Pe

această cale mulţumesc personalului Laboratorului de Biologie Moleculară pentru ajutorul

acordat icircn desfăşurarea cercetării doctorale icircn condiţiile icircn care se observa creşterea

numărului de pacienţi care se adresează acestei platforme de cercetare Mulţumesc de

asemenea şi Doamnei Doctor Elena Butoi din cadrul Institutului de Biologie şi Patologie

Moleculară ldquoNicolae Simionescurdquo Bucureşti) pentru donaţia anticorpului secundar anti-

FITC Icircn consecinţă pentru recrutarea unui număr mai mare de participanţi ar fi fost necesară

icircn primul racircnd obţinerea unor resurse financiare suplimentare pentru achiziţia de aparatură şi

reactivi Totuşi numărul subiecţilor recrutaţi este apropiat de numărul subiecţilor raportaţi icircn

cadrul unor granturi de cercetare care aveau ca ţinta studiul expresiei receptorilor PPARα

(212 227 228 231) Rezultatele obţinute continua seria lucrărilor care arata importanta

studiului mecanismelor etiopatogenice ale sindromului metabolic patologie care se afla icircntr-o

continuă creştere La pacienţii cu SM pe lacircngă diminuarea nivelului de expresie a receptorilor

PPARα icircn eozinofile ne aşteptam şi la evidenţierea unor modificări icircn expresia PPARα şi icircn

populaţiile de Ly Mo şi PMN Acest fapt poate fi explicat de utilizarea unor celule provenite

de la pacienţi fără afectare cardiovasculară fără diabet zaharat şi necesită continuarea

studiului pe culturi celulare icircn condiţii de stimulare cu agonişti PPARα deziderat care

impune continuarea investigării expresiei PPARα printr-un grant de cercetare

ORIGINALITATEA ȘI CONTRIBUȚIILE INOVATIVE ALE TEZEI DE

DOCTORAT PERSPECTIVE DE CERCETARE

Evaluarea nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn leucocitele circulante

aduce noi perspective icircn studiul obezităţii şi sindromului metabolic Importanta studiului

expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic derivă din prevalenta crescută a

sindromului metabolic icircn populaţia cercetată la care se adaugă riscul cardiovascular foarte

icircnalt al acestor pacienţi cu implicaţii majore icircn sănătatea publică Rolul receptorilor PPARα

icircn inflamaţie şi aterogeneza este binecunoscut dar studiul nostru este primul care a arătat că

nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα este semnificativ mai scăzut in populatiile

de eozinofile la pacienţii cu SM Această concluzie coroborata cu existenţa unei stracircnse

asocieri intre expresia receptorilor PPARα la nivelul Mo limfocitelor şi PMNlor creeaza

ipoteza existenţei unui mecanism de control diferit al expresiei PPARα la nivelul

eozinofilelor Această cercetare aduce informaţii importante referitoare la mecanismele

proinflamatorii care stau la baza insulinorezistenţei şi riscului cardiometabolic şi impune

continuarea studiului acestor receptori nucleari prin citometrie icircn flux metodă care poate fi

aplicată şi la scara mai largă dacă sunt asigurate resursele materiale necesare cercetării

Cercetarea prin citometrie icircn flux poate fi completată de studiul polimorfismului genei

PPARA şi astfel se pot identifica timpuriu indivizii cu potenţial risc cardiometabolic crescut

Studiul receptorilor PPARα a stabilit conexiuni cu factori proinflamatori şi aterogenetici iar

continuarea cercetării poate aduce şi elemente noi de diagnostic precoce icircn sindromul

metabolic contribuind la icircmbunătăţirea prognosticului acestor pacienţi

CONCLUZII FINALE

1 Aplicarea scorului de SM alături de implementarea algoritmului electronic de diagnostic

contribuie la o prelucrare rapidă eficientă și standardizată a informaţiilor la nivelul

medicinei primare

2 Prevalenţa SM calculată astfel icircn cadrul studiului este crescută (2732) icircn concordanţă

cu datele raportate

3 Controlul factorilor de risc cardiometabolici incluşi icircn SM se poate realiza prin

managementul stilului de viaţă (scăderea greutăţii corporale prin combaterea

sedentarismului şi adoptarea unei diete antiaterogene şi hipocalorice) şi administrarea

terapiei medicamentoase

4 Este necesară adoptarea unei politici de sănătate publică pentru prevenirea creşterii icircn

populaţie a prevalenţei obezităţii şi a diabetului zaharat

5 Noi metode de cercetare icircn domeniul SM axate pe diagnosticarea precoce şi cuantificarea

eficientă a acestuia duce la diminuarea incidenței evenimentelor cardiovasculare majore

6 Sindromul metabolic se caracterizează printr-un status inflamator cronic

7 Valorile Non-HDL-colesterolului şi a raportului de aterogenitate sunt semnificativ mai

mari la pacienţii cu SM

8 Dintre reactanţii de faza acută am observat că valoarea medie a fibrinogenului este mai

crescută icircn lotul cu SM

9 Valorile eozinofilelor sunt crescute icircn sindromul metabolic iar explorarea relaţiei dintre

eozinofile şi obezitate constituie una din direcţiile de studiu actuale ale sindromului

metabolic

10 Evaluarea markerilor inflamatori icircn contextul sindromului metabolic este utilă icircn

evaluarea complexă a a factorilor de risc cardiometabolici

11 Prin metoda citometriei icircn flux am demonstrat prezenta Receptorilor Activaţi de

Inductorii Proliferării Peroxizomilor ndash Alpha (PPARα) icircn toate populaţiile de leucocite

studiate (Mo limfocite PMN eozinofile) atacirct icircn lotul pacienţilor cu SM cacirct şi icircn lotul

martor

12 Utilizacircnd intensitatea medie de fluorescenţă a anticorpilor anti- PPARα am arătat că

nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile este semnificativ mai redus

la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali

13 Acest studiu este primul care a demonstrat existenţa unei scăderi statistic semnificative a

nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofilele pacienţilor cu SM

confirmacircnd cercetările recente care au evidenţiat rolul eozinofilelor şi al receptorilor

PPARα icircn obezitate reglarea inflamaţiei cronice şi aterogeneza

14 Contrar aşteptărilor noastre icircn populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările

efectuate icircn cele două loturi de studiu (cu şi fără sindom metabolic) nu am evidenţiat

diferenţe statistic seminificative icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα la

subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali

15 Icircn populaţiile de Mo limfocite şi polimorfonucleare am observat corelaţii puternice

semnificativ statistic icircntre expresia PPARα icircn aceste tipuri celulare sugeracircnd existenţa

unui mecanism unic de control al inflamaţiei cronice la nivelul acestor celule probabil

diferit de cel din eozinofile

16 La subiecţii cu SM expresia relativă a PPARα icircn Eo este invers asociată cu expresia

receptorului CD36 (receptor al particulelor de ox - LDL şi propus ca un marker precoce al

aterosclerozei) dovedind rolul antiinflamator al receptorilor PPARα la nivel endotelial

17 La pacienţii cu antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială nivelul de

expresie al receptorilor PPARα icircn eozinofile şi Mo este diminuat comparativ cu subiecţii

fără antecedente familiale de hipertensiune arterială Putem spune că studiul efectuat de

noi aduce informaţii importante legate de geneză aterosclerozei şi hipertensiunii arteriale

18 Prin studiul asocierilor dintre receptorii PPARα şi componentele clinice ale sindromului

metabolic am arătat rolul acestor receptori icircn determinismul obezităţii de tip central

nivelul expresiei relative a receptorilor PPARα fiind invers proporţional cu circumferinţa

abdominală

19 Icircn acelaşi timp nivelul de expresie a PPARα icircn sindromul metabolic este asociat pozitiv

cu concentraţia serică a HDL-colesterolului şi invers asociat cu nivelul trigliceridelor

serice dovedind rolul acestor receptori icircn diminuarea procesului inflamator cronic de la

nivel vascular

20 La pacienţii cu SM scăderea expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofile este corelată cu

creşterea unor markeri ai sindromului inflamator cronic cardiometabolic (acid uric

fibrinogen) ilustracircnd importanta receptorilor icircn reglarea status-ului inflamator cronic din

sindromul metabolic

21 Utilizarea metodei flowcitometrice pentru studiul expresiei relative a receptorilor PPARα

icircn leucocite a adus informaţii importante cu privire la mecanismele moleculare de control

implicate icircn patogenia bolilor cardiometabolice icircn concordanţă cu cercetările care descriu

expresia PPAR icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale bronşice

keratinocite)

BIBLIOGRAFIE SELECTIVA

1 Kahn R Metabolic syndrome- what is the clinical usefulness Lancet 2008371(9628)1892-3

2 Reaven GM The metabolic syndrome is this diagnosis necessary Am J Clin Nutr 2006 83(6)1237-7

3 Grundy SM Pre-Diabetes Metabolic Syndrome and Cardiovascular Risk J Am Coll Cardiol 201259(7)

635-43

4 International Diabetes Federation IDF Diabetes Atlas 6th edn International Diabetes Federation Belgium

Brussels 20131-155

5 World Health Organization Global Status Report on Noncommunicable Diseases 2010 World Health

Organization Geneva Switzerland 20111-176

6 Coman AE Petrovanu R Sindromul metabolic in practica de ambulator Editura Pim Iaşi 2009 1-103

7 Grundy SM Becker D Clark LT et alThird Report of the National Cholesterol Education Program (NCEP)

Expert Panel on Detection Evaluation and Treatment of High Blood Cholesterol in Adults (Adult

Treatment Panel III) Final Report Circulation 2002106(25)3143-90

8 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J Metabolic syndrome- a new worldwide definition A Consensus Statement

from the International Diabetes Federation Diabet Med 2006 23(5)469-80

9 KG Alberti KG Eckel RH Grundy SM etal International Diabetes Federation task force on epidemiology

and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart Association World Heart

Federation International Atherosclerosis Society International Association for the study of obesity

Harmonizing the metabolic syndrome a joint interim statement of the International Diabetes Federation task

force on epidemiology and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart

Association World Heart Federation International Atherosclerosis society and International Association

for the study of obesity Circulation 2009120(16)1640-5

10 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J IDF Epidemiology Task Force The metabolic syndrome new

worldwide definition Lancet 2005 366 1059 - 62

11 Oleszczyk M Svab I Seifert B et al Primary healthcare in the developing part of Europe changes and

development in the former Eastern Bloc countries that joined the European Union following 2004 Med Sci

Monit 2009(15)78ndash84

12 Jung U J Choi M S Obesity and Its Metabolic Complications The Role of Adipokines and the

Relationship between Obesity Inflammation Insulin Resistance Dyslipidemia and Nonalcoholic Fatty

Liver Disease Int J Mol Sci 2014rsquo15(4) 6184-223

13 Vanden Heuvel JP Peters JM Peroxisome Proliferators In Ramos K (ed) Cellular and Molecular

Toxicology (Second Edition) Volume 2 New York Elsevier Science Inc 2010 145 - 67

14 Yessoufou A Wahli W Multifaceted roles of peroxisome proliferator-activated receptors (PPARs) at the

cellular and whole organism levels Swiss Med Wkl 2010140w13071 doi104414smw201013071

15 Azhar S Peroxisome proliferator-activated receptors metabolic syndrome and cardiovascular disease

Future Cardiology 20106(5)657-91

16 Andries G Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity

Diabetes and Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(Suppl)24-32

17 Zandbergen F Plutzky J PPARalpha in atherosclerosis and inflammation Biochim Biophys Acta

20071771(8)972-82

18 Straus DS Glass CK Anti-inflammatory actions of PPAR ligands new insights on cellular and molecular

mechanisms Trends Immunol 200728(12)551-8

19 Zlei M Zugun- Eloae F Carasevici E Citometrie icircn flux - Bază şi clinică Icircn Hinescu ME (ed) Citometrie icircn

flux - principii şi aplicaţii clinice Bucureşti Editura Viaţa Medicală Romacircnească 20111-128

20 Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity Diabetes and

Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(9)24-32

21 Woerly G Honda K Loyens M et al Peroxisome proliferator-activated receptors alpha and gamma down-

regulate allergic inflammation and eosinophil activation J Exp Med 2003198(3)411-21

22 Salle-Saumont D Brenuchon C Kanda A et al Peroxisome proliferator-activated receptor alpha regulates

skin inflammation and humoral response in atopic dermatitis J Clin Allergy Immunology 2008 21(4)962-8

23 Schote A Turner J Schiltz J et al Nuclear receptors in human immune cells expression and correlations

Mol Immunolog 200744(6)1436-45

24 DAmore S Vacca M Graziano G et al Nuclear receptors expression chart icircn peripheral blood

mononuclear cells identifies patients with Metabolic Syndrome Biochim Biophys Acta

20131832(12)2289-301

25 Uthurralt J Gordish-Dressman H Bradbury M T et al PPARalpha L162V underlies variation in serum

triglycerides and subcutaneous fat volume in young males BMC Med Genet 2007855

26 Hiukka A Leinonen ES Jauhiainen M et al Long-term effects of fenofibrate on VLDL and HDL

subspecies icircn participants with type 2 diabetes mellitus Diabetologia 2007 50(10)2067-75

27 Robins SJ Rubins HB Faas FH et alInsulin resistance and cardiovascular events with low HDL

cholesterol The Veterans Affairs HDL Intervention Trial (VA-HIT) Diabetes Care 2003 26(5)1513-7

28 Devaraj S Siegel D Jialal I Statin Therapy in Metabolic Syndrome and Hypertension Post-JUPITER

What is the Value of CRP Curr Atheroscler Rep 2011 13(1) 31ndash42

29 Imperatore G Riccardi G Iovino C et al Plasma Fibrinogen A New Factor of the Metabolic Syndrome A

population-based study Diabetes Care 19982 1(4)649-54

30 Krysiak R Gdula-Dymek A Bachowski R Okopien B Pleiotropic effects of atorvastatin and fenofibrate

in metabolic syndrome and different types of pre-diabete Diabetes Care 201033(10)2266-70

31 Hermans MP Impact of Fenofibrate on Type 2 Diabetes Patients with Features of the Metabolic Syndrome

Subgroup Analysis From FIELD Curr Cardiol Rev 20106(2)112-8

32 Silverstein R Inflammation atherosclerosis and arterial thrombosis Role of the scavenger receptor CD36

Cleveland Clinic Journal of Medicine 200976(Suppl 2)S27-S30

33 Hăncu N Obezitatea In Vereşiu IA (ed) Diabetul zaharat nutritia si bolile metabolice Volume 2 Editura

Echinox Cluj- Napoca 2010 1-15

Lista lucrări publicate

1 Elena Popa Maria Maidaniuc Agnes Bacusca Alamir Diaa Rodica Petrovanu Adorata Elena

Coman Disfuncţia endotelială ndash de la mecanisme moleculare la cuantifi care şi tratament icircn practica

medicală Practica Medicală 20149(3) 109-14

2 Elena Popa Agnes Bacusca Alamir Diaa Maria Maidaniuc Rodica Petrovanu Adorata Elena Coman

The function of insulin receptor (IRF) in evolution of obesity correlation with adipocytes diameters

Archives of the Balkan Medical Union 201449(3) 275-9

3 Elena Popa Florin Zugun-Eloae Mihaela Zlei Daniela Jitaru Oana Maria Pintilie Adorata Elena

Coman Maria Traian Didona Anca Ungureanu Eugen Carasevici - acceptata pentru numarul 42014

Flow cytometry analysis of PPAR-alpha receptors in metabolic syndrome) Revista Romană de

Medicină de Laborator(RRLM-D-14-00034R1- adeverinţa ataşată

Page 19: REZUMAT TEZĂ DE DOCTORAT - umfiasi.ro Doctorat/rezumat... · universitatea de medicinĂ Şi farmacie “grigore t. popa” iaŞi facultatea de medicinĂ rezumat tezĂ de doctorat

Tabel XXXII Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn PMN

Lot SM Lot Non-SM

N 26 31

Media 26273 26480

SD 6915 7088

Mediana 25900 25500

Minimum 17200 16300

Maximum 39500 41900

Percentila 25 19800 19600

Percentila 75 30500 31500

Icircn cele două loturi distribuţia frecvenţei valorilor nivelului relativ de expresie a

receptorilor PPARα icircn PMN a fost reprezentată sub formă de histograme (fig 525)

Figura 525 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti-PPARα icircn PMN

Pentru cei 26 de pacienţi din lotul cu SM a valoarea medie a nivelului de expresie

relativă a receptorilor PPARα icircn PMN a fost de 26273 plusmn 6915 Studiind diagrama Shewhart

din figura 526 se observă că toate valorile obţinute pentru nivelul de expresie relativă

PPARα icircn PMN investigate se icircncadrează icircntre limitele definite de valorile medii plusmn 2DS

Figura 526 Lot SM

Variaţia expresiei relative a PPARα icircn

PMN

Număr pacienţi 26

Minimum 17200

Maximum 39500

Media 26273

Deviaţia Standard 6915

Valorile MFI icircncadrate icircn Media plusmn 2DS

Pentru lotul martor valoarea medie calculată a MFI a anticorpilor anti-PPARα a fost de

26480 plusmn 7088 peste 95 din valorile MFI fiind cuprinse icircn Media plusmn 2DS (figura 527)

Figura 527 Lot Non-SM Variaţia expresiei

relative a PPARα icircn PMN

Număr pacienţi 31

Minimum 16300

Maximum 41900

Media 26480

Deviaţia Standard 7088

30 valoriicircn Media plusmn 2DS

Pentru PMN analiza statistica nu a arătat existenţa unei diferenţe statistic semnificative icircntre

nivelul de expresie relativă a PPARα la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii din lotul

Non-SM (t- Test P= 090) Studiind populaţiile de PMN la subiecţii care au prezentat AHC

de HTA nu am calculat o diferenţă statistic semnificativă icircntre expresia receptorilor PPARα

la subiecţii cu istoric familial de hipertensiune arterială comparativ cu cei pentru care nu s-au

notat AHC de HTA (t- Test P= 013)De asemenea am identificat diferenţe icircntre nivelul de

expresie al PPARα icircn PMN subiecţilor care prezentau AHC de dislipidemie comparativ cu

cei fără AHC de dislipidemie (t- Test P= 017)

50 100 150 200 250 300 350 400 450 500

0

5

10

15

20

25

30

35

MFI anti-PPAR a

Frecve

nta rel

ativa (

)

Lot SM

50 100 150 200 250 300 350 400 450 500

0

5

10

15

20

25

30

MFI anti-PPAR a

Frecv

enta

relati

va (

)

Lot Non-SM

1 6 11 16 21 26 31

0

50

100

150

200

250

300

350

400

450

500

MFI

anti-

PPA

R

a

2627

1244

4010

553

4702

Media + 2DS

Media - 2 DS

Media

1 6 11 16 21 26 31 36

0

50

100

150

200

250

300

350

400

450

500

MFI

anti-

PPAR

a

2648

1230

4066

522

4774

Media+ 2DS

Media - 2DS

Media

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile Tabel XXXIV Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn Eo

Lot SM Lot Non-SM

N 26 31

Mediaplusmn SD 141057 plusmn 47604 172209 plusmn 37565

Mediana 142450 171300

Minimum 35000 68500

Maximum 233700 250600

Percentila 25 119300 153225

Percentila 75 169700 199550

Am studiat nivelul relativ de expresie a receptorilor PPARα icircn Eo iar rezultatele au

fost figurate sub forma de histograme (figura 532)

Figura 532 Distribuţia frecventelor relative ale valorilor MFI anti- PPARα icircn Eo

Din diagrama Shewhart (figura 533) se observă că toate valorile determinate pentru

nivelul de expresie relativă a PPARα icircn Eo pentru lotul SM s-au icircncadrat icircn [Media plusmn 3 DS]

peste 90 din determinări fiind cuprinse icircn [Media plusmn 2 DS] iar icircn [Media plusmn 1 DS] sunt

incluse peste 65 din valorile MFI

Figura 533 Lot SM

Variaţia expresiei relative a PPARα icircn Eo

Număr pacienţi 26

Minimum 35000

Maximum 233700

Media 141057

Deviaţia Standard 47604

24 valori icircncadrat eicircn [Media plusmn 2DS]

Pentru subiecţii incluşi icircn lotul martor analiza diagramei (figura 534) a arătat că

toate cele 31 de valori ale MFI pentru PPARα icircn Eo se icircncadrează icircn [Media plusmn 3DS] iar 30

dintre acestea se icircncadrează icircn [ Media plusmn 2 DS]

Figura 534 Lot Non -SM

Variaţia expresiei relative a PPARα icircn Eo

Număr pacienţi 31

Minimum 685

Maximum 2506

Media 172209

Deviaţia Standard 375 65

30 valori icircncadrate icircn [Media plusmn 2DS]

Comparacircnd subiecţii cu SM cu cei din lotul martor am observat o scădere

semnificativă statistic a MFI a Ac anti - PPARα icircn Eo pentru pacienţiir cu SM ( figura 535)

PPARα Eo Lot Non-SM

Număr 31

Mediana 171300

Percentila 25 152325

Percentila 75 199550

PPARα Eo Lot SM

Număr 26

Mediana 142450

Percentila 25 119300

Percentila 75 169700

Figura 5 35 Comparaţie icircntre nivelul de expresie a PPARα icircn Eo

0 500 1000 1500 2000 2500 3000

0

10

20

30

40

50

MFI anti-PPAR a

Frecvent

a relativa

()

Lot SM

400 800 1200 1600 2000 2400 2800

0

5

10

15

20

25

30

35

40

45

MFI anti-PPAR a

Frecenta

relativa

()

Lot Non-SM

1 6 11 16 21 26 31

-500

0

500

1000

1500

2000

2500

3000

MFI a

nti-PP

AR

a

14106

4765

23447

94

28117

Media + 2DS

Media- 2DS

LCI

LCS

1 6 11 16 21 26 31 36

500

1000

1500

2000

2500

3000

MFI an

ti-PPA

R a

17221

9708

24734

5951

28490

LCI

Media-2DS

Media

Media +2 DS

LCS

1200

1300

1400

1500

1600

1700

1800

1900

Lot SM Lot Non-SM

P=00072

Cu ajutorul curbei ROC am evaluat posibilitatea utilizării MFI a Ac anti - PPARα icircn

Eo ca marker pentru diagnosticul SM Valoarea MFI a Ac anti - PPARα icircn Eo care prezice cu

cea mai mare acurateţe prezenţa SM a fost de 1533 (punctul de ldquocut-offrdquo) pentru care am

calculat o sensibilitate de 5652 şi o specificitate de 7778 Calculul ariei AUC a furnizat

valoarea de 0663 şi deci determinarea parametrului MFI anti- PPARα icircn Eo are valoarea

unui test cu acurateţe redusatilde icircn diagnosticul SM Studiind expresia PPARα icircn Eo la subiecţii

care au prezentat AHC de HTA am observat o scădere semnificativă statistic (P = 00023) a

expresiei PPARα la subiecţii cu istoric familial de HTA comparativ cu subiecţii fatilderatilde AHC de

HTA (figura 537)

AHC HTA

Număr 22

Mediana 148800

Percentila 25 116425

Percentila 75 170750

AHC HTA absente

Număr 35

Mediana 170850

Percentila 25 143700

Percentila 75 195000

Figura 537 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Eo funcţie de AHC de HTA

Studiind subiecţii cu AHC declarate de dislipidemie nu am identificat diferenţe icircntre

nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Eo subiecţilor cu AHC de dislipidemie

comparativ cu cei care nu au declarat prezenţa AHC de dislipidemie (t - Test P = 067)

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor CD36

Am studiat expresia receptorilor CD36 icircn Mo subiecţilor incluşi icircn studiu

Lot Non - SM

BLot SM

Figura 539 Analiza flowcitometrica pentru receptorii CD36 icircn Mo

Pentru toţi participanţii la studiu valorile MFI au variat icircn intervalul [817 6933] iar

valoarea medie a MFI a Ac anti-CD36 a fost de 397133 plusmn 120902 Tabel XXXVII Statistică descriptivă pentru a CD36 icircn Mo

Lot SM Lot Non-SM

Media 429034 370377

Deviatia Standard 109051 125514

Mediana 411000 362800

Minimum 266400 81700

Maximum 693300 616800

Percentila 25 346200 273750

Percentila 75 469000 453300

Distribuţia frecvenţelor relative a MFI au fost prezentate sub formă histogramelor

Figura 541 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti - CD36 icircn Mo

MFI

ant

i-PPA

R a Eo

1000

1100

1200

1300

1400

1500

1600

1700

1800

1900

DA NU

AHC HTA

P=00023

1000 2000 3000 4000 5000 6000 7000 8000

0

5

10

15

20

25

MFI anti-CD36

Frecve

nta rela

tiva (

)

Lot SM

0 1778 3556 5333 7111

0

5

10

15

20

25

30

35

MFI anti-CD36

Frecve

nta rel

ativa (

)

Lot Non - SM

Referitor la lotul SM 92 din valorile MFI a Ac anti- CD36 s-au icircncadrat icircn

intervalul Media plusmn 2 DS (figura 542) iar pentru lotul martor peste 90 dintre acestea icircn

Media plusmn 2 DS (figura 543)

Figura 542 Lot SM

Variaţia MFI anti-CD36 icircn Mo

Număr pacienţi 26

Minimum 2664

Maximum 6933

Media 429034

Deviaţia Standard 109051

Figura 543 Lot Non -SM

Variaţia MFI anti- CD36 icircn Mo

Număr 31

Minimum 81700

Maximum 616800

Media 370377

Deviaţia Standard 125514

Comparacircnd subiecţii cu SM cu cei din lotul normal am constatat o tendinţă de creştere

a expresiei CD36 icircn lotul cu SM((t - Test P= 0067)

MFI anti - CD36 Lot Non-SM

Număr 31

Mediana 3628

Percentila 25 2737

Percentila 75 4533

MFI anti - CD36 Lot SM

Număr 26

Mediana 4110

Percentila 25 3462

Percentila 75 4690

Figura 544 Comparaţie icircntre cel două loturi privind MFI anti - CD36 icircn Mo

Referindu-ne la subiecţii cu AHC de HTA am observat o tendinţă de creştere a

valorilor MFI anti-CD36 comparativ cu cei care nu au avut AHC de HTA (t - Test P = 0 08)

AHC HTA

Număr 22

Mediana 442800

Percentila 25 355275

Percentila 75 519475

AHC HTA absenţe

Număr 35

Mediana 377400

Percentila 25 316900

Percentila 75 443400

Figura 545 Comparaţie icircntre expresia CD36 icircn Mo funcţie de AHC de HTA

Nu s-au calculat diferenţe semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor

PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de dislipidemie atunci cacircnd aceştia au fost comparaţi cu

subiecţii fără AHC de dislipidemie (t - Test P=031)

Corelaţii icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα si CD36

Studiind valorile intensităţii medii de fluorescenţă a Ac anti-PPARα icircn Mo Ly şi

PMN am observat că nivelul de expresie celularatilde a PPARα icircn Mo Ly şi PMN sunt corelate

puternic pozitiv atacirct icircn lotul SM cacirct şi icircn lotul martor(fig547 548)

1 6 11 16 21 26 31

0

1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

8000

Pacienti

MFI a

nti-CD

36

42903

21093

64714

10188

75619

LCI

Media

LCS1 6 11 16 21 26 31 36

-1000

0

1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

8000

MFI a

nti- C

D36

37038

11935

62141

-616

74692Media + 2 DS

Media

Media - 2 DS

3200

3400

3600

3800

4000

4200

4400

4600

4800

Lot SM Lot Non-SM

P = 00676

MFI

anti-

CD36

3400

3600

3800

4000

4200

4400

4600

4800

5000

DA NU

AHC HTA

P = 008

Figura 547 Studiul relatiilor dintre

receptorii PPARα icircn SM A Mo vs PMN B Mo vs Ly

C PMN vs Ly Graficul ilustrează coeficienţii r P dreapta de

regresie (linia centrala) intervalul de icircncredere

95 şi intervalul de predicţie 95

Figura 548 Corelaţii icircntre receptorii PPARα icircn lotul

martor

A Mo vs PMN

B Mo vs Ly

C PMN vs Ly

Tot pentru lotul SM cacircnd am evaluat relaţia dintre nivelul de expresie relativă a

receptorilor PPARα icircn Eo şi nivelul de expresie relativa a receptorilor CD 36 am obţinut o

corelaţie negativă (r = - 05 P = 001) (fig 549 A)

50 100 150 200 250 300 350 50

100

150

200

250

300

350

400

450

500

PPARα Ly

PPARα PMN

y = 56641 + 1159 x r = 086 P lt 0001

C

50 100 150 200 250 300 350 400 0

50

100

150

200

250

300

350

PPARα Mo

PPARα Ly

y = 36665 + 0607 x r = 090 P lt 0001

B

150 200 250 300 350 400 450 0

50 100 150 200 250 300 350 400 450 500

PPARα PMN

PPARα Mo

y = 2505 + 0879 x r = 081 P lt 0001

A

50 100 150 200 250 300 350

50 100 150 200 250 300 350 400 450 500

PPARα Ly

PPARα PMN

y = 95668 + 0919 x r = 081 P lt 0001

C

100 150 200 250 300 350 400

0

50

100

150

200

250

300

350

400

PPARα Mo

PPARα Ly

y = -7503 + 0829 x r = 079 P lt 0001

B

100 150 200 250 300 350 400

50

100

150

200

250

300

350

400

450

500

PPARα Mo

PPARα PMN

y = 61384 + 0882 r = 074 P lt 0001

A

Figura 549 Corelaţii icircntre expresia PPARα icircn Eo şi alte tipuri de receptori investigaţi A PPARα Eo şi CD 36 (Lot SM) B PPARα Eo şi PPARα Mo( Lot Non-SM)

Icircn lotul martor am identificat o asociere moderată pozitivă (r = 038 P = 0033) icircntre

nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Eo şi Mo (figura 549B) corelaţie absentă icircn

lotul pacienţilor cu SM

Corelaţii dintre receptorii studiaţi şi componentele sindromului metabolic

Icircn lotul de control analiza statistică a relevat faptul că icircntre circumferinţa

abdominală (CA ) şi nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Mo Ly şi PMN există o

corelaţie inversă adică scăderea expresiei PPARα la nivelul acestor populatii celulare ar fi

icircnsoţită de creşterea CA (figura 550

Figura 550Corelaţii dintre receptorii

PPARα si CA A Mo B Ly C PMN

La pacienţii cu SM am notat o corelatie moderată negativă statistic semnificativă

icircntre TG şi valorile MFI a Ac anti- PPARα icircn Mo şi Ly( fig 551)

150 200 250 300 350 400 450 50

60

70

80

90

100

110

PPARα PMN

CA r = - 040 P = 0024

C

50 100 150 200 250 300 350 50

60

70

80

90

100

110

PPARα Ly

CA r = - 046 P = 0009

B

50 100 150 200 250 300 350 400 50

60

70

80

90

100

110

PPARα Mo

CA r = - 042 P = 0017

A

50 100 150 200 250 300 350 400 500

1000

1500

2000

2500

3000

PPARα Mo

PPARα Eo

r = 038 P = 0033

B

0 500 1000 1500 2000 2500 1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

8000

PPARα Eo

CD36

r = 050 P = 0010

A

Figura 551 Lot SM Corelaţie icircntre expresia PPARα şi TG (A Mo B Ly)

Analizand corelatia dintre receptorii CD36 si valorile TA la pacientii cu SM am observat

o asociere pozitivă asteptată intre TAD si nivelul de expresie al receptorilor CD36 (fig 552)

Figura 552 Lot SM Corelaţii icircntre expresia

receptorilor CD36 şi valorile tensiunii arteriale

diastolice

Studiind corelaţiile dintre receptorii PPARα şi HDL-col la subiecţii din lotul martor am

notat o asociere pozitivă icircntre expresia PPARα icircn Mo şi Ly cu HDL-col (fig 553)

Figura 553 Lot martor Corelaţii icircntre HDL-col şi expresia PPARα icircn Mo(A) Ly(B)

Icircn lotul normal am evidenţiat corelaţii pozitive moderate dar semnificative statistic icircntre

CA şi valorile TAS (r = 062 P lt 0001) respectiv TAD (r = 050 P=0004) precum şi icircntre

CA şi glicemia subiecţilor normali (r = 052 P = 0003) Aceste date icircmpreună cu relaţia

invers proporţională identificată icircntre HDL-col şi CA (r = 050 P = 001) susţin validitatea

acestui studiu Icircn lotul subiecţilor cu SM am observat o corelaţie moderat pozitivă icircntre

expresia PPARα icircn populaţiiile de Mo şi Eo şi concentraţia a HDL-col (fig 554)

B

100 150 200 250 300 350 20

30

40

50

60

70

80

90

100

PPARα Ly

HDL-col-(mgdl)

r = 036 P = 0046

A

150 200 250 300 350 400 20

30

40

50

60

70

80

90

100

PPARα Mo

HDL-col-(mgd)l

r = 035 P = 005

70 75 80 85 90 95 100 1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

8000

TAD (mmHg)

CD36

r = 048 P = 0013

B

50 100 150 200 250 300 350 -100

0

100

200

300

400

500

PPARα Ly

TG(mgdl)

r = - 042 P = 003

A

50 100 150 200 250 300 350 400 -100

0

100

200

300

400

500

PPARα Mo

TG ( mgdl) r =- 0 43 P = 0027

Figura 554 Corelaţii icircn SM icircntre HDL-col şi expresia PPARα icircn Mo (A) şi Eo(B)

Corelaţii icircntre nivelul de expresie relativă a PPARα şi markeri ai disfuncţiei

endoteliale şi inflamaţiei cronice

Deşi nu a icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică am reţinut corelaţia invers

proporţională (r = - 0331 P = 006) dintre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα

icircn PMN şi concentraţia serică a Non-HDL-colesterolului

Studiind relaţiile dintre parametri icircn lotul de pacienţi cu SM am observat o corelaţie

moderată invers proporţională icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Eo şi

acidul uric seric (figura 555 A) corelaţie absentă la subiecţii fără SM

Figura 555 Lot SM corelaţia dintre expresia PPARα icircn Eo şi acidul uric (A) respectiv

PPARα şi fibrinogen (B)

Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P=008) am notat pentru

pacienţii cu SM corelaţia invers proporţională dintre expresia PPARα icircn Eo şi concentraţia

serică a fibrinogenului ( figura 555B)

V5 Discuţii

Icircn cadrul lucrării de doctorat am studiat nivelul de expresie relativă a PPARα icircn

leucocitele pacienţilor cu SM comparativ cu cea a subiecţilor normali Expresia PPARα a fost

studiată icircn paralel cu cea a CD36 glicoproteină exprimată pe suprafaţa a numeroase celule

din organismul uman inclusiv pe cea a Mo şi macrofagelor Prin funcţia sa de receptor pentru

particulele oxidate de LDL CD36 cunoscut ca bdquoscavenger receptorrdquo de clasa B sau

bdquotrombospodin receptorrdquo contribuie la dezvoltarea inflamaţiei de la nivel endotelial şi

formarea plăcii de ateroscleroză Referitor la studiul PPARα icircn Eo icircn sindromul metabolic

menţionăm că studiul nostru este primul care arată că nivelul de expresie a proteinei PPARα

icircn Eo măsurat prin citometrie icircn flux este semnificativ mai redus la pacienţii care sunt

diagnosticaţi cu acest sindrom De asemenea icircn lotul cu SM cercetat icircn cadrul studiului

receptorilor PPARα numărul Eo circulante a fost semnificativ mai crescut la pacienţii cu SM

B

0 500 1000 1500 2000 2500 200

250

300

350

400

450

PPARα Eo o

Fibrinogen mgdl

r =- 036 P = 008

0 500 1000 1500 2000 2500 1 2 3 4 5 6 7 8 9

10 11

PPARα Eo_

Acid uric(mgdl) r = 048 P = 0014 A

0 500 1000 1500 2000 2500 10

20

30

40

50

60

70

80

PPARα Eo

HDL(mgdl)

r = 044 P = 0024

B

100 150 200 250 300 350 400 10

20

30

40

50

60

70

80

PPARα Mo

HDL( mgdl)

r = 046 P = 0019

A

(P = 003) Aceste constatări conduc la ipoteza că Eo joacă un rol special icircn mecanismele

patogenice declanşate icircn sindromul metabolic şi că receptorii PPARα sunt importanţi icircn

implicarea Eo icircn obezitate şi insulinorezistenţă Creşterea numărului de Eo circulante este

urmată de eliberarea mediatorilor proinflamatori iar reducerea expresiei PPARα icircn Eo

determină perturbarea mecanismelor de control al inflamaţiei cu exacerbarea cascadei

proinflamatorii Consecutiv se agravează disfuncţia endotelială şi se accelerează progresia

leziunilor de ateroscleroză Extrapolacircnd aceste ipoteze putem spune că asocierea raportată

dintre boala ischemică coronariană şi Eo poate fi şi consecinţa exacerbării cascadei

proinflamatorii de la nivel vascular produsă datorită scăderii expresiei PPARα icircn Eo iar

creşterea numărului de Eo circulante poate reprezenta o adaptare a organismului uman care

icircncearcă să suplinească deficitul de receptori PPARα Analizacircnd curba ROC pentru

intensităţile medii de fluorescenţă determinate pentru anticorpii anti- PPARα icircn Eo am

obţinut pentru acest biomarker o sensibilitate a testului de 565 şi o specificitate de 778

pentru un punct de cut-off de 1533 ( figura 536 ) Deşi aria AUC (Aria under the curve) egală

cu 0663 icircncadrează acest test ca avacircnd o acurateţe redusă observăm că că această valoare

este apropiată de determinările AUC pentru alţi factori (fibrinogen raport de aterogenitate

acid uric non- HDL-colesterol) cunoscuţi ca fiind implicaţi icircn aterogeneză şi inflamaţia

cronică (figura 431) Aceste remarci alături de faptul că icircn studiul receptorilor PPARα icircn

leucocite am inclus subiecţi la primul diagnostic de SM creează premisa integrării

determinării expresiei relative a receptorilor PPARα icircn diagnosticul complex al sindromului

metabolic Putem spune că icircn final studiul expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofilele

circulante se dovedește a fi util icircn diagnosticul precoce la nivel molecular al SM permiţacircnd

identificarea timpurie a unor indivizi cu risc cardiometabolic crescut Astfel intervenţia

precoce asupra subiecţilor cu deficit de PPARα icircn Eo contribuie la managementul eficient al

afecţiunilor degenerative icircn care inflamaţia cronică icircndeplineşte un rol primordial Referitor

la populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările efectuate prin citometrie de flux nu au

arătat existenţa unor diferenţe statistice icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα

la subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali Rezultatele noastre pot fi

consecinţa caracteristicilor loturilor studiate (icircn studiul nostru au fost incluşi subiecţi recrutaţi

la primul diagnostic de SM şi icircn absenţa stimulării receptorilor PPARα cu droguri agoniste

PPARα) dar icircn acelaşi timp pot apare diferenţe datorită metodei utilizate (231 232 233)

Făcacircnd o paralelă cu un studiu publicat icircn 2013 icircn Europa (231) care a arătat creşterea

nivelului de expresie al PPARα icircn Ly şi Mo observăm că deşi numărul de subiecţi a fost

aproximativ egal (57 participanţi icircn studiul nostru 60 icircn studiul DAmore) subiecţii icircn studiul

amintit au fost recrutaţi dintr-o clinică cu profil medical la primul diagnostic de SM icircn timp

ce metoda utilizată a fost PCR (Polymerase Chain Reaction) mult mai fidelă decacirct citometria

icircn flux icircn studiul receptorilor nucleari De asemenea DAmore nu investighează expresia

PPARα icircn Eo şi PMN icircn cercetare fiind incluse doar celulele CD14+ (predominant Mo) şi

CD14- (predominant Ly) Deşi nu am obţinut diferenţe statistic semnificative icircntre cele două

loturi referitoare la nivelul de expresie relativă a PPARα icircn Mo Ly şi PMN am observat

corelaţii puternice semnificative statistic icircntre expresia receptorilor PPARα icircn aceste tipuri

celulare Rezultatele obţinute sugerează existenţa unui mecanism diferit molecular de control

icircn eozinofile care reglează cantitatea de proteină PPARα icircn eozinofile versus alte tipuri de

leucocite (la pacienţii cu SM) şi acest lucru este icircn concordanţă cu cercetările care descriu

expresia PPARα mRNA icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale

bronşice keratinocite) Studiind prin citometrie de flux nivelul de expresie relativă a

receptorului CD36 la nivelul Mo am arătat prezenţa acestuia icircn Mo tuturor subiecţilor

investigaţi Analizacircnd valorile intensităţii medii de fluorescenţă a CD36 icircn loturile studiate

am observat o tendinţă de creştere la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali

confirmacircnd implicarea receptorului CD36 icircn patogeneza acestuia Referitor la expresia

receptorului CD36 rezultatele obţinute sunt icircn consens cu studii anterioare care au arătat

creşterea expresiei CD36 la pacienţii cu SM şi diabet zaharat Astfel pe lacircngă diferenţa icircn

expresia CD36 s-au raportat şi corelaţii inverse icircntre expresia proteinei CD36 şi nivelul

adiponectinei Acelaşi studiu a evidenţiat o corelaţie pozitivă intre expresia CD36 cu expresia

receptorilor PPAR gamma relaţia cu PPARα nefiind investigată

Analiza de subgrup a relaţiilor dintre componentele SM și elementele moleculare

proinflamatorii studiate a relevat prezenţa unor asocieri semnificativ statistice icircntre acestea

Se argumentează astfel că veridicitatea studiului este susţinută de interdependenţele statistice

ale componentelor SM Determinarea coeficientului de corelaţie Icircn studiul nostru nivelul de

expresie relativă a PPARα s-a corelat moderat negativ (figura 550) cu CA a subiecţilor din

lotul normal pentru populaţiile celulare de Mo (r = - 0420 P = 001) Ly (r = - 046 P =

0009) şi PMN (r = - 040 P = 0024) date care sunt icircn concordanţă cu studiile care arată

rolul PPARα icircn furnizarea energiei prin beta-oxidarea acizilor graşi Icircn acelaşi timp icircn lotul

pacienţilor cu SM nu am identificat prezenţa unei asocieri icircntre nivelul de expresie relativă a

PPARα şi valoarea măsurată a CA Asocierea dintre expresia relativă a PPARα cu obezitatea

de tip central completează datele existente referitoare la reglarea homeostaziei energetice

conturacircnd un mecanism de control deficitar al aportului caloric al SM Icircn condiţiile icircn care

rezultatele obţinute prin metoda citometriei icircn flux nu au arătat existenţa unei corelaţii intre

expresia PPARα şi CA la pacienţii cu SM considerăm că ar fi necesar studiul

polimorfismului genei PPARA care ar putea aduce informaţii importante cu privire la

implicarea acestor receptori icircn apariţia obezităţii de tip central Subliniem acest lucru deoarece

obezitatea este o boală plurifactorială icircn care pe lacircngă factorii ereditari sunt implicaţi factori

de mediu psihologici şi sociali (245) Existenţa unei componente genetice a aterosclerozei

este legată şi de prezenţa unor variante ale genei PPARA asociate cu creşterea incidenţei bolii

cardiovasculare (82) şi a SM (249) Icircn studiul nostru am constatat o scădere statistic

semnificativă a nivelului expresiei relative a receptorilor PPARα icircn Eo la subiecţii cu

antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială comparativ cu subiecţii fără istoric

familial de hipertensiune (figura 537) Deşi diferenţele calculate icircntre loturile studiate nu au

icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică la subiecţii care au declarat prezenţa

antecedentelor familiale de hipertensiune arterială remarcăm o tendinţă de scădere a

intensităţii medii de fluorescenţă pentru Ac anti-PPARα la nivelul Mo (figura 515 P = 006

) icircn timp ce expresia relativă a CD36 icircnregistrează o creştere la acesti subiecţi (figura 545 P

= 008) Icircn contextul riscului cardiovascular foarte icircnalt al pacienţilor cu SM amintim şi

existenţa corelaţiei pozitive dintre valorile tensiunii arteriale diastolice şi expresia relativă a

receptorului CD36 (r = 0483 P = 0013) Această constatare este icircn consens cu studiile care

au arătat că forma solubilă circulantă a CD36 este asociată cu factorii de risc cardiovasculari

fiind propusă ca un marker precoce al aterosclerozei Activarea PPARα este asociată cu

modularea metabolismului lipidic iar agoniştii PPARα sunt utilizaţi icircn mod curent pentru

tratamentul dislipidemiei Sub acţiunea agoniştilor PPARα se obţine o icircmbunătăţire a funcţiei

endoteliale şi a parametrilor reologici funcţiile pleiotropice ale agoniştilor PPARα fiind

dovedite icircn trialuri clinice controlate Icircn populaţiile de Mo şi Ly la pacienţii cu SM

cercetarea noastră a evidenţiat o asociere negativă icircntre nivelul de expresie relativă a

receptorilor PPARα şi concentraţia TG serice (figura 551) Astfel scăderea expresiei

receptorilor PPARα este asociată cu creşterea nivelului TG serice contribuind la profilul

lipidic aterogen din SM Icircn conformitate cu literatura de specialitate icircn studiul efectuat prin

metoda citometriei icircn flux am găsit prezenţa asocierii icircntre nivelul de expresie al PPARα şi

HDL-colesterol Corelaţia pozitivă dintre nivelul de expresie relativă PPARα şi concentraţia

HDL-colesterolului a fost observată icircn lotul martor icircn populaţiile de Mo (r = 035 P = 005)

şi Ly ( r = 036 P = 004) (figura 553) susţinacircnd faptul că stimularea receptorilor PPARα

este legată de creşterea nivelului seric al lipoproteinelor cu densitate crescută La pacienţii cu

SM corelaţia dintre expresia PPARα şi HDL-colesterol a fost evidenţiată icircn populaţiile de Mo

(r = 046 P = 0019) şi eozinofile (r = 044 P = 0024) Se desprinde concluzia că icircn

sindromul metabolic scăderea concentraţiei HDL-colesterol este legată de diminuarea

nivelului de expresie relativă a receptorilor nucleari PPARα icircntărind afirmaţiile legate de

rolul acestor receptori icircn progresia bolilor cardiovasculare Studiind reactanţii de fază acută

analiza statistică a relevat o diferenţă semnificativă din punct de vedere statistic icircntre valorile

fibrinogenului la pacienţii cu SM atunci cacircnd au fost comparaţi cu subiecţii fără SM

(Capitolul IV4 P lt0 001 figura 427A) De asemenea icircn Capitolul V dedicat studiul

expresiei relative a receptorilor PPARα studiul valorilor fibrinogenului a arătat creşterea

acestui reactant de faza acută icircn lotul cu SM comparativ cu lotul martor (P lt0 0001) Icircn

studiul nostru am calculat o corelaţie invers proporţionala (r = - -036 fig 555B) icircntre

nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile şi concentraţia serică a

fibrinogenului Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P = 008) am reţinut

această asociere deoarece am demonstrat că nivelul de expresie relativă al receptorilor

PPARα icircn eozinofile este mai scăzut icircn sindromul metabolic iar sindromul metabolic este

caracterizat printr-un status inflamator cronic status caracterizat şi de creşterea concentraţiei

serice a fibrinogenului De asemenea notam ca această corelaţie negativă se află icircn

concordanţă cu studiile care arata că tratamentul cu agonişti PPARα (fibraţi) determina

scăderea nivelului seric al fibrinogenului contribuind la diminuarea inflamaţiei cronice din

sindromul metabolic şi icircn consecinţă amelioracircnd insulinorezistenţa

LIMITE ȘI DIFICULTĂȚI IcircN CERCETARE

Icircn cadrul Tezei de Doctorat am desfăşurat o cercetare care şi-a propus studierea

expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Recrutarea anamneza şi examinarea

clinică a subiecţilor au fost realizate icircn cadrul Cabinetului de Medicină de Familie CMI Popa

Elena din Iaşi iar determinările hematologice şi biochimice s-au efectuat icircn cadrul

Laboratorului Ambulatorului de Specialitate al Spitalului Universitar ldquoSfacircntul Spiridon din

Iaşi Icircn studiul epidemiologic şi al markerilor inflamatori al sindromului metabolic desfăşurat

au fost incluşi un număr de 1530 de participanţi pe baza liberului consimţămacircnt examinaţi icircn

perioada 01012013 - 31122013 Icircn continuare icircn perioada 1012014 - 28022014 pe baza

criteriilor de includere şi excludere icircn cele două loturi de studiu am investigat un număr de 57

de subiecţi prezentaţi la consultaţie icircn această perioadă şi care au icircndeplinit criteriile de

includere icircn cele două loturi (Lot SM şi Lot Control) constituite pentru evaluarea nivelului de

expresie a receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Explorarea nivelului de expresie

relativă a receptorilor PPARα s-a desfăşurat icircn cadrul Laboratorului de Biologie Moleculară

de pe platforma Institutului Regional de Oncologie Datorită resurselor proprii financiare

limitate trebuie să subliniez că aceasta cercetare nu ar fi fost posibilă fără contribuţia unor

cercetători din domeniul medical care m-au sprijinit necondiţionat atacirct icircn elaborarea

protocolului de lucru cacirct şi icircn efectuarea propriu-zisă a studiului Icircn acest sens menţionăm şi

faptul că pentru studiul receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic am utilizat aparatura

Laboratorului de Biologie Moleculară (care deserveşte icircntreaga Regiune a Moldovei) Pe

această cale mulţumesc personalului Laboratorului de Biologie Moleculară pentru ajutorul

acordat icircn desfăşurarea cercetării doctorale icircn condiţiile icircn care se observa creşterea

numărului de pacienţi care se adresează acestei platforme de cercetare Mulţumesc de

asemenea şi Doamnei Doctor Elena Butoi din cadrul Institutului de Biologie şi Patologie

Moleculară ldquoNicolae Simionescurdquo Bucureşti) pentru donaţia anticorpului secundar anti-

FITC Icircn consecinţă pentru recrutarea unui număr mai mare de participanţi ar fi fost necesară

icircn primul racircnd obţinerea unor resurse financiare suplimentare pentru achiziţia de aparatură şi

reactivi Totuşi numărul subiecţilor recrutaţi este apropiat de numărul subiecţilor raportaţi icircn

cadrul unor granturi de cercetare care aveau ca ţinta studiul expresiei receptorilor PPARα

(212 227 228 231) Rezultatele obţinute continua seria lucrărilor care arata importanta

studiului mecanismelor etiopatogenice ale sindromului metabolic patologie care se afla icircntr-o

continuă creştere La pacienţii cu SM pe lacircngă diminuarea nivelului de expresie a receptorilor

PPARα icircn eozinofile ne aşteptam şi la evidenţierea unor modificări icircn expresia PPARα şi icircn

populaţiile de Ly Mo şi PMN Acest fapt poate fi explicat de utilizarea unor celule provenite

de la pacienţi fără afectare cardiovasculară fără diabet zaharat şi necesită continuarea

studiului pe culturi celulare icircn condiţii de stimulare cu agonişti PPARα deziderat care

impune continuarea investigării expresiei PPARα printr-un grant de cercetare

ORIGINALITATEA ȘI CONTRIBUȚIILE INOVATIVE ALE TEZEI DE

DOCTORAT PERSPECTIVE DE CERCETARE

Evaluarea nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn leucocitele circulante

aduce noi perspective icircn studiul obezităţii şi sindromului metabolic Importanta studiului

expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic derivă din prevalenta crescută a

sindromului metabolic icircn populaţia cercetată la care se adaugă riscul cardiovascular foarte

icircnalt al acestor pacienţi cu implicaţii majore icircn sănătatea publică Rolul receptorilor PPARα

icircn inflamaţie şi aterogeneza este binecunoscut dar studiul nostru este primul care a arătat că

nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα este semnificativ mai scăzut in populatiile

de eozinofile la pacienţii cu SM Această concluzie coroborata cu existenţa unei stracircnse

asocieri intre expresia receptorilor PPARα la nivelul Mo limfocitelor şi PMNlor creeaza

ipoteza existenţei unui mecanism de control diferit al expresiei PPARα la nivelul

eozinofilelor Această cercetare aduce informaţii importante referitoare la mecanismele

proinflamatorii care stau la baza insulinorezistenţei şi riscului cardiometabolic şi impune

continuarea studiului acestor receptori nucleari prin citometrie icircn flux metodă care poate fi

aplicată şi la scara mai largă dacă sunt asigurate resursele materiale necesare cercetării

Cercetarea prin citometrie icircn flux poate fi completată de studiul polimorfismului genei

PPARA şi astfel se pot identifica timpuriu indivizii cu potenţial risc cardiometabolic crescut

Studiul receptorilor PPARα a stabilit conexiuni cu factori proinflamatori şi aterogenetici iar

continuarea cercetării poate aduce şi elemente noi de diagnostic precoce icircn sindromul

metabolic contribuind la icircmbunătăţirea prognosticului acestor pacienţi

CONCLUZII FINALE

1 Aplicarea scorului de SM alături de implementarea algoritmului electronic de diagnostic

contribuie la o prelucrare rapidă eficientă și standardizată a informaţiilor la nivelul

medicinei primare

2 Prevalenţa SM calculată astfel icircn cadrul studiului este crescută (2732) icircn concordanţă

cu datele raportate

3 Controlul factorilor de risc cardiometabolici incluşi icircn SM se poate realiza prin

managementul stilului de viaţă (scăderea greutăţii corporale prin combaterea

sedentarismului şi adoptarea unei diete antiaterogene şi hipocalorice) şi administrarea

terapiei medicamentoase

4 Este necesară adoptarea unei politici de sănătate publică pentru prevenirea creşterii icircn

populaţie a prevalenţei obezităţii şi a diabetului zaharat

5 Noi metode de cercetare icircn domeniul SM axate pe diagnosticarea precoce şi cuantificarea

eficientă a acestuia duce la diminuarea incidenței evenimentelor cardiovasculare majore

6 Sindromul metabolic se caracterizează printr-un status inflamator cronic

7 Valorile Non-HDL-colesterolului şi a raportului de aterogenitate sunt semnificativ mai

mari la pacienţii cu SM

8 Dintre reactanţii de faza acută am observat că valoarea medie a fibrinogenului este mai

crescută icircn lotul cu SM

9 Valorile eozinofilelor sunt crescute icircn sindromul metabolic iar explorarea relaţiei dintre

eozinofile şi obezitate constituie una din direcţiile de studiu actuale ale sindromului

metabolic

10 Evaluarea markerilor inflamatori icircn contextul sindromului metabolic este utilă icircn

evaluarea complexă a a factorilor de risc cardiometabolici

11 Prin metoda citometriei icircn flux am demonstrat prezenta Receptorilor Activaţi de

Inductorii Proliferării Peroxizomilor ndash Alpha (PPARα) icircn toate populaţiile de leucocite

studiate (Mo limfocite PMN eozinofile) atacirct icircn lotul pacienţilor cu SM cacirct şi icircn lotul

martor

12 Utilizacircnd intensitatea medie de fluorescenţă a anticorpilor anti- PPARα am arătat că

nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile este semnificativ mai redus

la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali

13 Acest studiu este primul care a demonstrat existenţa unei scăderi statistic semnificative a

nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofilele pacienţilor cu SM

confirmacircnd cercetările recente care au evidenţiat rolul eozinofilelor şi al receptorilor

PPARα icircn obezitate reglarea inflamaţiei cronice şi aterogeneza

14 Contrar aşteptărilor noastre icircn populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările

efectuate icircn cele două loturi de studiu (cu şi fără sindom metabolic) nu am evidenţiat

diferenţe statistic seminificative icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα la

subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali

15 Icircn populaţiile de Mo limfocite şi polimorfonucleare am observat corelaţii puternice

semnificativ statistic icircntre expresia PPARα icircn aceste tipuri celulare sugeracircnd existenţa

unui mecanism unic de control al inflamaţiei cronice la nivelul acestor celule probabil

diferit de cel din eozinofile

16 La subiecţii cu SM expresia relativă a PPARα icircn Eo este invers asociată cu expresia

receptorului CD36 (receptor al particulelor de ox - LDL şi propus ca un marker precoce al

aterosclerozei) dovedind rolul antiinflamator al receptorilor PPARα la nivel endotelial

17 La pacienţii cu antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială nivelul de

expresie al receptorilor PPARα icircn eozinofile şi Mo este diminuat comparativ cu subiecţii

fără antecedente familiale de hipertensiune arterială Putem spune că studiul efectuat de

noi aduce informaţii importante legate de geneză aterosclerozei şi hipertensiunii arteriale

18 Prin studiul asocierilor dintre receptorii PPARα şi componentele clinice ale sindromului

metabolic am arătat rolul acestor receptori icircn determinismul obezităţii de tip central

nivelul expresiei relative a receptorilor PPARα fiind invers proporţional cu circumferinţa

abdominală

19 Icircn acelaşi timp nivelul de expresie a PPARα icircn sindromul metabolic este asociat pozitiv

cu concentraţia serică a HDL-colesterolului şi invers asociat cu nivelul trigliceridelor

serice dovedind rolul acestor receptori icircn diminuarea procesului inflamator cronic de la

nivel vascular

20 La pacienţii cu SM scăderea expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofile este corelată cu

creşterea unor markeri ai sindromului inflamator cronic cardiometabolic (acid uric

fibrinogen) ilustracircnd importanta receptorilor icircn reglarea status-ului inflamator cronic din

sindromul metabolic

21 Utilizarea metodei flowcitometrice pentru studiul expresiei relative a receptorilor PPARα

icircn leucocite a adus informaţii importante cu privire la mecanismele moleculare de control

implicate icircn patogenia bolilor cardiometabolice icircn concordanţă cu cercetările care descriu

expresia PPAR icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale bronşice

keratinocite)

BIBLIOGRAFIE SELECTIVA

1 Kahn R Metabolic syndrome- what is the clinical usefulness Lancet 2008371(9628)1892-3

2 Reaven GM The metabolic syndrome is this diagnosis necessary Am J Clin Nutr 2006 83(6)1237-7

3 Grundy SM Pre-Diabetes Metabolic Syndrome and Cardiovascular Risk J Am Coll Cardiol 201259(7)

635-43

4 International Diabetes Federation IDF Diabetes Atlas 6th edn International Diabetes Federation Belgium

Brussels 20131-155

5 World Health Organization Global Status Report on Noncommunicable Diseases 2010 World Health

Organization Geneva Switzerland 20111-176

6 Coman AE Petrovanu R Sindromul metabolic in practica de ambulator Editura Pim Iaşi 2009 1-103

7 Grundy SM Becker D Clark LT et alThird Report of the National Cholesterol Education Program (NCEP)

Expert Panel on Detection Evaluation and Treatment of High Blood Cholesterol in Adults (Adult

Treatment Panel III) Final Report Circulation 2002106(25)3143-90

8 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J Metabolic syndrome- a new worldwide definition A Consensus Statement

from the International Diabetes Federation Diabet Med 2006 23(5)469-80

9 KG Alberti KG Eckel RH Grundy SM etal International Diabetes Federation task force on epidemiology

and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart Association World Heart

Federation International Atherosclerosis Society International Association for the study of obesity

Harmonizing the metabolic syndrome a joint interim statement of the International Diabetes Federation task

force on epidemiology and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart

Association World Heart Federation International Atherosclerosis society and International Association

for the study of obesity Circulation 2009120(16)1640-5

10 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J IDF Epidemiology Task Force The metabolic syndrome new

worldwide definition Lancet 2005 366 1059 - 62

11 Oleszczyk M Svab I Seifert B et al Primary healthcare in the developing part of Europe changes and

development in the former Eastern Bloc countries that joined the European Union following 2004 Med Sci

Monit 2009(15)78ndash84

12 Jung U J Choi M S Obesity and Its Metabolic Complications The Role of Adipokines and the

Relationship between Obesity Inflammation Insulin Resistance Dyslipidemia and Nonalcoholic Fatty

Liver Disease Int J Mol Sci 2014rsquo15(4) 6184-223

13 Vanden Heuvel JP Peters JM Peroxisome Proliferators In Ramos K (ed) Cellular and Molecular

Toxicology (Second Edition) Volume 2 New York Elsevier Science Inc 2010 145 - 67

14 Yessoufou A Wahli W Multifaceted roles of peroxisome proliferator-activated receptors (PPARs) at the

cellular and whole organism levels Swiss Med Wkl 2010140w13071 doi104414smw201013071

15 Azhar S Peroxisome proliferator-activated receptors metabolic syndrome and cardiovascular disease

Future Cardiology 20106(5)657-91

16 Andries G Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity

Diabetes and Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(Suppl)24-32

17 Zandbergen F Plutzky J PPARalpha in atherosclerosis and inflammation Biochim Biophys Acta

20071771(8)972-82

18 Straus DS Glass CK Anti-inflammatory actions of PPAR ligands new insights on cellular and molecular

mechanisms Trends Immunol 200728(12)551-8

19 Zlei M Zugun- Eloae F Carasevici E Citometrie icircn flux - Bază şi clinică Icircn Hinescu ME (ed) Citometrie icircn

flux - principii şi aplicaţii clinice Bucureşti Editura Viaţa Medicală Romacircnească 20111-128

20 Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity Diabetes and

Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(9)24-32

21 Woerly G Honda K Loyens M et al Peroxisome proliferator-activated receptors alpha and gamma down-

regulate allergic inflammation and eosinophil activation J Exp Med 2003198(3)411-21

22 Salle-Saumont D Brenuchon C Kanda A et al Peroxisome proliferator-activated receptor alpha regulates

skin inflammation and humoral response in atopic dermatitis J Clin Allergy Immunology 2008 21(4)962-8

23 Schote A Turner J Schiltz J et al Nuclear receptors in human immune cells expression and correlations

Mol Immunolog 200744(6)1436-45

24 DAmore S Vacca M Graziano G et al Nuclear receptors expression chart icircn peripheral blood

mononuclear cells identifies patients with Metabolic Syndrome Biochim Biophys Acta

20131832(12)2289-301

25 Uthurralt J Gordish-Dressman H Bradbury M T et al PPARalpha L162V underlies variation in serum

triglycerides and subcutaneous fat volume in young males BMC Med Genet 2007855

26 Hiukka A Leinonen ES Jauhiainen M et al Long-term effects of fenofibrate on VLDL and HDL

subspecies icircn participants with type 2 diabetes mellitus Diabetologia 2007 50(10)2067-75

27 Robins SJ Rubins HB Faas FH et alInsulin resistance and cardiovascular events with low HDL

cholesterol The Veterans Affairs HDL Intervention Trial (VA-HIT) Diabetes Care 2003 26(5)1513-7

28 Devaraj S Siegel D Jialal I Statin Therapy in Metabolic Syndrome and Hypertension Post-JUPITER

What is the Value of CRP Curr Atheroscler Rep 2011 13(1) 31ndash42

29 Imperatore G Riccardi G Iovino C et al Plasma Fibrinogen A New Factor of the Metabolic Syndrome A

population-based study Diabetes Care 19982 1(4)649-54

30 Krysiak R Gdula-Dymek A Bachowski R Okopien B Pleiotropic effects of atorvastatin and fenofibrate

in metabolic syndrome and different types of pre-diabete Diabetes Care 201033(10)2266-70

31 Hermans MP Impact of Fenofibrate on Type 2 Diabetes Patients with Features of the Metabolic Syndrome

Subgroup Analysis From FIELD Curr Cardiol Rev 20106(2)112-8

32 Silverstein R Inflammation atherosclerosis and arterial thrombosis Role of the scavenger receptor CD36

Cleveland Clinic Journal of Medicine 200976(Suppl 2)S27-S30

33 Hăncu N Obezitatea In Vereşiu IA (ed) Diabetul zaharat nutritia si bolile metabolice Volume 2 Editura

Echinox Cluj- Napoca 2010 1-15

Lista lucrări publicate

1 Elena Popa Maria Maidaniuc Agnes Bacusca Alamir Diaa Rodica Petrovanu Adorata Elena

Coman Disfuncţia endotelială ndash de la mecanisme moleculare la cuantifi care şi tratament icircn practica

medicală Practica Medicală 20149(3) 109-14

2 Elena Popa Agnes Bacusca Alamir Diaa Maria Maidaniuc Rodica Petrovanu Adorata Elena Coman

The function of insulin receptor (IRF) in evolution of obesity correlation with adipocytes diameters

Archives of the Balkan Medical Union 201449(3) 275-9

3 Elena Popa Florin Zugun-Eloae Mihaela Zlei Daniela Jitaru Oana Maria Pintilie Adorata Elena

Coman Maria Traian Didona Anca Ungureanu Eugen Carasevici - acceptata pentru numarul 42014

Flow cytometry analysis of PPAR-alpha receptors in metabolic syndrome) Revista Romană de

Medicină de Laborator(RRLM-D-14-00034R1- adeverinţa ataşată

Page 20: REZUMAT TEZĂ DE DOCTORAT - umfiasi.ro Doctorat/rezumat... · universitatea de medicinĂ Şi farmacie “grigore t. popa” iaŞi facultatea de medicinĂ rezumat tezĂ de doctorat

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile Tabel XXXIV Statistica descriptivă a nivelului de expresie relativă a PPARα icircn Eo

Lot SM Lot Non-SM

N 26 31

Mediaplusmn SD 141057 plusmn 47604 172209 plusmn 37565

Mediana 142450 171300

Minimum 35000 68500

Maximum 233700 250600

Percentila 25 119300 153225

Percentila 75 169700 199550

Am studiat nivelul relativ de expresie a receptorilor PPARα icircn Eo iar rezultatele au

fost figurate sub forma de histograme (figura 532)

Figura 532 Distribuţia frecventelor relative ale valorilor MFI anti- PPARα icircn Eo

Din diagrama Shewhart (figura 533) se observă că toate valorile determinate pentru

nivelul de expresie relativă a PPARα icircn Eo pentru lotul SM s-au icircncadrat icircn [Media plusmn 3 DS]

peste 90 din determinări fiind cuprinse icircn [Media plusmn 2 DS] iar icircn [Media plusmn 1 DS] sunt

incluse peste 65 din valorile MFI

Figura 533 Lot SM

Variaţia expresiei relative a PPARα icircn Eo

Număr pacienţi 26

Minimum 35000

Maximum 233700

Media 141057

Deviaţia Standard 47604

24 valori icircncadrat eicircn [Media plusmn 2DS]

Pentru subiecţii incluşi icircn lotul martor analiza diagramei (figura 534) a arătat că

toate cele 31 de valori ale MFI pentru PPARα icircn Eo se icircncadrează icircn [Media plusmn 3DS] iar 30

dintre acestea se icircncadrează icircn [ Media plusmn 2 DS]

Figura 534 Lot Non -SM

Variaţia expresiei relative a PPARα icircn Eo

Număr pacienţi 31

Minimum 685

Maximum 2506

Media 172209

Deviaţia Standard 375 65

30 valori icircncadrate icircn [Media plusmn 2DS]

Comparacircnd subiecţii cu SM cu cei din lotul martor am observat o scădere

semnificativă statistic a MFI a Ac anti - PPARα icircn Eo pentru pacienţiir cu SM ( figura 535)

PPARα Eo Lot Non-SM

Număr 31

Mediana 171300

Percentila 25 152325

Percentila 75 199550

PPARα Eo Lot SM

Număr 26

Mediana 142450

Percentila 25 119300

Percentila 75 169700

Figura 5 35 Comparaţie icircntre nivelul de expresie a PPARα icircn Eo

0 500 1000 1500 2000 2500 3000

0

10

20

30

40

50

MFI anti-PPAR a

Frecvent

a relativa

()

Lot SM

400 800 1200 1600 2000 2400 2800

0

5

10

15

20

25

30

35

40

45

MFI anti-PPAR a

Frecenta

relativa

()

Lot Non-SM

1 6 11 16 21 26 31

-500

0

500

1000

1500

2000

2500

3000

MFI a

nti-PP

AR

a

14106

4765

23447

94

28117

Media + 2DS

Media- 2DS

LCI

LCS

1 6 11 16 21 26 31 36

500

1000

1500

2000

2500

3000

MFI an

ti-PPA

R a

17221

9708

24734

5951

28490

LCI

Media-2DS

Media

Media +2 DS

LCS

1200

1300

1400

1500

1600

1700

1800

1900

Lot SM Lot Non-SM

P=00072

Cu ajutorul curbei ROC am evaluat posibilitatea utilizării MFI a Ac anti - PPARα icircn

Eo ca marker pentru diagnosticul SM Valoarea MFI a Ac anti - PPARα icircn Eo care prezice cu

cea mai mare acurateţe prezenţa SM a fost de 1533 (punctul de ldquocut-offrdquo) pentru care am

calculat o sensibilitate de 5652 şi o specificitate de 7778 Calculul ariei AUC a furnizat

valoarea de 0663 şi deci determinarea parametrului MFI anti- PPARα icircn Eo are valoarea

unui test cu acurateţe redusatilde icircn diagnosticul SM Studiind expresia PPARα icircn Eo la subiecţii

care au prezentat AHC de HTA am observat o scădere semnificativă statistic (P = 00023) a

expresiei PPARα la subiecţii cu istoric familial de HTA comparativ cu subiecţii fatilderatilde AHC de

HTA (figura 537)

AHC HTA

Număr 22

Mediana 148800

Percentila 25 116425

Percentila 75 170750

AHC HTA absente

Număr 35

Mediana 170850

Percentila 25 143700

Percentila 75 195000

Figura 537 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Eo funcţie de AHC de HTA

Studiind subiecţii cu AHC declarate de dislipidemie nu am identificat diferenţe icircntre

nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Eo subiecţilor cu AHC de dislipidemie

comparativ cu cei care nu au declarat prezenţa AHC de dislipidemie (t - Test P = 067)

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor CD36

Am studiat expresia receptorilor CD36 icircn Mo subiecţilor incluşi icircn studiu

Lot Non - SM

BLot SM

Figura 539 Analiza flowcitometrica pentru receptorii CD36 icircn Mo

Pentru toţi participanţii la studiu valorile MFI au variat icircn intervalul [817 6933] iar

valoarea medie a MFI a Ac anti-CD36 a fost de 397133 plusmn 120902 Tabel XXXVII Statistică descriptivă pentru a CD36 icircn Mo

Lot SM Lot Non-SM

Media 429034 370377

Deviatia Standard 109051 125514

Mediana 411000 362800

Minimum 266400 81700

Maximum 693300 616800

Percentila 25 346200 273750

Percentila 75 469000 453300

Distribuţia frecvenţelor relative a MFI au fost prezentate sub formă histogramelor

Figura 541 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti - CD36 icircn Mo

MFI

ant

i-PPA

R a Eo

1000

1100

1200

1300

1400

1500

1600

1700

1800

1900

DA NU

AHC HTA

P=00023

1000 2000 3000 4000 5000 6000 7000 8000

0

5

10

15

20

25

MFI anti-CD36

Frecve

nta rela

tiva (

)

Lot SM

0 1778 3556 5333 7111

0

5

10

15

20

25

30

35

MFI anti-CD36

Frecve

nta rel

ativa (

)

Lot Non - SM

Referitor la lotul SM 92 din valorile MFI a Ac anti- CD36 s-au icircncadrat icircn

intervalul Media plusmn 2 DS (figura 542) iar pentru lotul martor peste 90 dintre acestea icircn

Media plusmn 2 DS (figura 543)

Figura 542 Lot SM

Variaţia MFI anti-CD36 icircn Mo

Număr pacienţi 26

Minimum 2664

Maximum 6933

Media 429034

Deviaţia Standard 109051

Figura 543 Lot Non -SM

Variaţia MFI anti- CD36 icircn Mo

Număr 31

Minimum 81700

Maximum 616800

Media 370377

Deviaţia Standard 125514

Comparacircnd subiecţii cu SM cu cei din lotul normal am constatat o tendinţă de creştere

a expresiei CD36 icircn lotul cu SM((t - Test P= 0067)

MFI anti - CD36 Lot Non-SM

Număr 31

Mediana 3628

Percentila 25 2737

Percentila 75 4533

MFI anti - CD36 Lot SM

Număr 26

Mediana 4110

Percentila 25 3462

Percentila 75 4690

Figura 544 Comparaţie icircntre cel două loturi privind MFI anti - CD36 icircn Mo

Referindu-ne la subiecţii cu AHC de HTA am observat o tendinţă de creştere a

valorilor MFI anti-CD36 comparativ cu cei care nu au avut AHC de HTA (t - Test P = 0 08)

AHC HTA

Număr 22

Mediana 442800

Percentila 25 355275

Percentila 75 519475

AHC HTA absenţe

Număr 35

Mediana 377400

Percentila 25 316900

Percentila 75 443400

Figura 545 Comparaţie icircntre expresia CD36 icircn Mo funcţie de AHC de HTA

Nu s-au calculat diferenţe semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor

PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de dislipidemie atunci cacircnd aceştia au fost comparaţi cu

subiecţii fără AHC de dislipidemie (t - Test P=031)

Corelaţii icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα si CD36

Studiind valorile intensităţii medii de fluorescenţă a Ac anti-PPARα icircn Mo Ly şi

PMN am observat că nivelul de expresie celularatilde a PPARα icircn Mo Ly şi PMN sunt corelate

puternic pozitiv atacirct icircn lotul SM cacirct şi icircn lotul martor(fig547 548)

1 6 11 16 21 26 31

0

1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

8000

Pacienti

MFI a

nti-CD

36

42903

21093

64714

10188

75619

LCI

Media

LCS1 6 11 16 21 26 31 36

-1000

0

1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

8000

MFI a

nti- C

D36

37038

11935

62141

-616

74692Media + 2 DS

Media

Media - 2 DS

3200

3400

3600

3800

4000

4200

4400

4600

4800

Lot SM Lot Non-SM

P = 00676

MFI

anti-

CD36

3400

3600

3800

4000

4200

4400

4600

4800

5000

DA NU

AHC HTA

P = 008

Figura 547 Studiul relatiilor dintre

receptorii PPARα icircn SM A Mo vs PMN B Mo vs Ly

C PMN vs Ly Graficul ilustrează coeficienţii r P dreapta de

regresie (linia centrala) intervalul de icircncredere

95 şi intervalul de predicţie 95

Figura 548 Corelaţii icircntre receptorii PPARα icircn lotul

martor

A Mo vs PMN

B Mo vs Ly

C PMN vs Ly

Tot pentru lotul SM cacircnd am evaluat relaţia dintre nivelul de expresie relativă a

receptorilor PPARα icircn Eo şi nivelul de expresie relativa a receptorilor CD 36 am obţinut o

corelaţie negativă (r = - 05 P = 001) (fig 549 A)

50 100 150 200 250 300 350 50

100

150

200

250

300

350

400

450

500

PPARα Ly

PPARα PMN

y = 56641 + 1159 x r = 086 P lt 0001

C

50 100 150 200 250 300 350 400 0

50

100

150

200

250

300

350

PPARα Mo

PPARα Ly

y = 36665 + 0607 x r = 090 P lt 0001

B

150 200 250 300 350 400 450 0

50 100 150 200 250 300 350 400 450 500

PPARα PMN

PPARα Mo

y = 2505 + 0879 x r = 081 P lt 0001

A

50 100 150 200 250 300 350

50 100 150 200 250 300 350 400 450 500

PPARα Ly

PPARα PMN

y = 95668 + 0919 x r = 081 P lt 0001

C

100 150 200 250 300 350 400

0

50

100

150

200

250

300

350

400

PPARα Mo

PPARα Ly

y = -7503 + 0829 x r = 079 P lt 0001

B

100 150 200 250 300 350 400

50

100

150

200

250

300

350

400

450

500

PPARα Mo

PPARα PMN

y = 61384 + 0882 r = 074 P lt 0001

A

Figura 549 Corelaţii icircntre expresia PPARα icircn Eo şi alte tipuri de receptori investigaţi A PPARα Eo şi CD 36 (Lot SM) B PPARα Eo şi PPARα Mo( Lot Non-SM)

Icircn lotul martor am identificat o asociere moderată pozitivă (r = 038 P = 0033) icircntre

nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Eo şi Mo (figura 549B) corelaţie absentă icircn

lotul pacienţilor cu SM

Corelaţii dintre receptorii studiaţi şi componentele sindromului metabolic

Icircn lotul de control analiza statistică a relevat faptul că icircntre circumferinţa

abdominală (CA ) şi nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Mo Ly şi PMN există o

corelaţie inversă adică scăderea expresiei PPARα la nivelul acestor populatii celulare ar fi

icircnsoţită de creşterea CA (figura 550

Figura 550Corelaţii dintre receptorii

PPARα si CA A Mo B Ly C PMN

La pacienţii cu SM am notat o corelatie moderată negativă statistic semnificativă

icircntre TG şi valorile MFI a Ac anti- PPARα icircn Mo şi Ly( fig 551)

150 200 250 300 350 400 450 50

60

70

80

90

100

110

PPARα PMN

CA r = - 040 P = 0024

C

50 100 150 200 250 300 350 50

60

70

80

90

100

110

PPARα Ly

CA r = - 046 P = 0009

B

50 100 150 200 250 300 350 400 50

60

70

80

90

100

110

PPARα Mo

CA r = - 042 P = 0017

A

50 100 150 200 250 300 350 400 500

1000

1500

2000

2500

3000

PPARα Mo

PPARα Eo

r = 038 P = 0033

B

0 500 1000 1500 2000 2500 1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

8000

PPARα Eo

CD36

r = 050 P = 0010

A

Figura 551 Lot SM Corelaţie icircntre expresia PPARα şi TG (A Mo B Ly)

Analizand corelatia dintre receptorii CD36 si valorile TA la pacientii cu SM am observat

o asociere pozitivă asteptată intre TAD si nivelul de expresie al receptorilor CD36 (fig 552)

Figura 552 Lot SM Corelaţii icircntre expresia

receptorilor CD36 şi valorile tensiunii arteriale

diastolice

Studiind corelaţiile dintre receptorii PPARα şi HDL-col la subiecţii din lotul martor am

notat o asociere pozitivă icircntre expresia PPARα icircn Mo şi Ly cu HDL-col (fig 553)

Figura 553 Lot martor Corelaţii icircntre HDL-col şi expresia PPARα icircn Mo(A) Ly(B)

Icircn lotul normal am evidenţiat corelaţii pozitive moderate dar semnificative statistic icircntre

CA şi valorile TAS (r = 062 P lt 0001) respectiv TAD (r = 050 P=0004) precum şi icircntre

CA şi glicemia subiecţilor normali (r = 052 P = 0003) Aceste date icircmpreună cu relaţia

invers proporţională identificată icircntre HDL-col şi CA (r = 050 P = 001) susţin validitatea

acestui studiu Icircn lotul subiecţilor cu SM am observat o corelaţie moderat pozitivă icircntre

expresia PPARα icircn populaţiiile de Mo şi Eo şi concentraţia a HDL-col (fig 554)

B

100 150 200 250 300 350 20

30

40

50

60

70

80

90

100

PPARα Ly

HDL-col-(mgdl)

r = 036 P = 0046

A

150 200 250 300 350 400 20

30

40

50

60

70

80

90

100

PPARα Mo

HDL-col-(mgd)l

r = 035 P = 005

70 75 80 85 90 95 100 1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

8000

TAD (mmHg)

CD36

r = 048 P = 0013

B

50 100 150 200 250 300 350 -100

0

100

200

300

400

500

PPARα Ly

TG(mgdl)

r = - 042 P = 003

A

50 100 150 200 250 300 350 400 -100

0

100

200

300

400

500

PPARα Mo

TG ( mgdl) r =- 0 43 P = 0027

Figura 554 Corelaţii icircn SM icircntre HDL-col şi expresia PPARα icircn Mo (A) şi Eo(B)

Corelaţii icircntre nivelul de expresie relativă a PPARα şi markeri ai disfuncţiei

endoteliale şi inflamaţiei cronice

Deşi nu a icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică am reţinut corelaţia invers

proporţională (r = - 0331 P = 006) dintre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα

icircn PMN şi concentraţia serică a Non-HDL-colesterolului

Studiind relaţiile dintre parametri icircn lotul de pacienţi cu SM am observat o corelaţie

moderată invers proporţională icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Eo şi

acidul uric seric (figura 555 A) corelaţie absentă la subiecţii fără SM

Figura 555 Lot SM corelaţia dintre expresia PPARα icircn Eo şi acidul uric (A) respectiv

PPARα şi fibrinogen (B)

Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P=008) am notat pentru

pacienţii cu SM corelaţia invers proporţională dintre expresia PPARα icircn Eo şi concentraţia

serică a fibrinogenului ( figura 555B)

V5 Discuţii

Icircn cadrul lucrării de doctorat am studiat nivelul de expresie relativă a PPARα icircn

leucocitele pacienţilor cu SM comparativ cu cea a subiecţilor normali Expresia PPARα a fost

studiată icircn paralel cu cea a CD36 glicoproteină exprimată pe suprafaţa a numeroase celule

din organismul uman inclusiv pe cea a Mo şi macrofagelor Prin funcţia sa de receptor pentru

particulele oxidate de LDL CD36 cunoscut ca bdquoscavenger receptorrdquo de clasa B sau

bdquotrombospodin receptorrdquo contribuie la dezvoltarea inflamaţiei de la nivel endotelial şi

formarea plăcii de ateroscleroză Referitor la studiul PPARα icircn Eo icircn sindromul metabolic

menţionăm că studiul nostru este primul care arată că nivelul de expresie a proteinei PPARα

icircn Eo măsurat prin citometrie icircn flux este semnificativ mai redus la pacienţii care sunt

diagnosticaţi cu acest sindrom De asemenea icircn lotul cu SM cercetat icircn cadrul studiului

receptorilor PPARα numărul Eo circulante a fost semnificativ mai crescut la pacienţii cu SM

B

0 500 1000 1500 2000 2500 200

250

300

350

400

450

PPARα Eo o

Fibrinogen mgdl

r =- 036 P = 008

0 500 1000 1500 2000 2500 1 2 3 4 5 6 7 8 9

10 11

PPARα Eo_

Acid uric(mgdl) r = 048 P = 0014 A

0 500 1000 1500 2000 2500 10

20

30

40

50

60

70

80

PPARα Eo

HDL(mgdl)

r = 044 P = 0024

B

100 150 200 250 300 350 400 10

20

30

40

50

60

70

80

PPARα Mo

HDL( mgdl)

r = 046 P = 0019

A

(P = 003) Aceste constatări conduc la ipoteza că Eo joacă un rol special icircn mecanismele

patogenice declanşate icircn sindromul metabolic şi că receptorii PPARα sunt importanţi icircn

implicarea Eo icircn obezitate şi insulinorezistenţă Creşterea numărului de Eo circulante este

urmată de eliberarea mediatorilor proinflamatori iar reducerea expresiei PPARα icircn Eo

determină perturbarea mecanismelor de control al inflamaţiei cu exacerbarea cascadei

proinflamatorii Consecutiv se agravează disfuncţia endotelială şi se accelerează progresia

leziunilor de ateroscleroză Extrapolacircnd aceste ipoteze putem spune că asocierea raportată

dintre boala ischemică coronariană şi Eo poate fi şi consecinţa exacerbării cascadei

proinflamatorii de la nivel vascular produsă datorită scăderii expresiei PPARα icircn Eo iar

creşterea numărului de Eo circulante poate reprezenta o adaptare a organismului uman care

icircncearcă să suplinească deficitul de receptori PPARα Analizacircnd curba ROC pentru

intensităţile medii de fluorescenţă determinate pentru anticorpii anti- PPARα icircn Eo am

obţinut pentru acest biomarker o sensibilitate a testului de 565 şi o specificitate de 778

pentru un punct de cut-off de 1533 ( figura 536 ) Deşi aria AUC (Aria under the curve) egală

cu 0663 icircncadrează acest test ca avacircnd o acurateţe redusă observăm că că această valoare

este apropiată de determinările AUC pentru alţi factori (fibrinogen raport de aterogenitate

acid uric non- HDL-colesterol) cunoscuţi ca fiind implicaţi icircn aterogeneză şi inflamaţia

cronică (figura 431) Aceste remarci alături de faptul că icircn studiul receptorilor PPARα icircn

leucocite am inclus subiecţi la primul diagnostic de SM creează premisa integrării

determinării expresiei relative a receptorilor PPARα icircn diagnosticul complex al sindromului

metabolic Putem spune că icircn final studiul expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofilele

circulante se dovedește a fi util icircn diagnosticul precoce la nivel molecular al SM permiţacircnd

identificarea timpurie a unor indivizi cu risc cardiometabolic crescut Astfel intervenţia

precoce asupra subiecţilor cu deficit de PPARα icircn Eo contribuie la managementul eficient al

afecţiunilor degenerative icircn care inflamaţia cronică icircndeplineşte un rol primordial Referitor

la populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările efectuate prin citometrie de flux nu au

arătat existenţa unor diferenţe statistice icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα

la subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali Rezultatele noastre pot fi

consecinţa caracteristicilor loturilor studiate (icircn studiul nostru au fost incluşi subiecţi recrutaţi

la primul diagnostic de SM şi icircn absenţa stimulării receptorilor PPARα cu droguri agoniste

PPARα) dar icircn acelaşi timp pot apare diferenţe datorită metodei utilizate (231 232 233)

Făcacircnd o paralelă cu un studiu publicat icircn 2013 icircn Europa (231) care a arătat creşterea

nivelului de expresie al PPARα icircn Ly şi Mo observăm că deşi numărul de subiecţi a fost

aproximativ egal (57 participanţi icircn studiul nostru 60 icircn studiul DAmore) subiecţii icircn studiul

amintit au fost recrutaţi dintr-o clinică cu profil medical la primul diagnostic de SM icircn timp

ce metoda utilizată a fost PCR (Polymerase Chain Reaction) mult mai fidelă decacirct citometria

icircn flux icircn studiul receptorilor nucleari De asemenea DAmore nu investighează expresia

PPARα icircn Eo şi PMN icircn cercetare fiind incluse doar celulele CD14+ (predominant Mo) şi

CD14- (predominant Ly) Deşi nu am obţinut diferenţe statistic semnificative icircntre cele două

loturi referitoare la nivelul de expresie relativă a PPARα icircn Mo Ly şi PMN am observat

corelaţii puternice semnificative statistic icircntre expresia receptorilor PPARα icircn aceste tipuri

celulare Rezultatele obţinute sugerează existenţa unui mecanism diferit molecular de control

icircn eozinofile care reglează cantitatea de proteină PPARα icircn eozinofile versus alte tipuri de

leucocite (la pacienţii cu SM) şi acest lucru este icircn concordanţă cu cercetările care descriu

expresia PPARα mRNA icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale

bronşice keratinocite) Studiind prin citometrie de flux nivelul de expresie relativă a

receptorului CD36 la nivelul Mo am arătat prezenţa acestuia icircn Mo tuturor subiecţilor

investigaţi Analizacircnd valorile intensităţii medii de fluorescenţă a CD36 icircn loturile studiate

am observat o tendinţă de creştere la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali

confirmacircnd implicarea receptorului CD36 icircn patogeneza acestuia Referitor la expresia

receptorului CD36 rezultatele obţinute sunt icircn consens cu studii anterioare care au arătat

creşterea expresiei CD36 la pacienţii cu SM şi diabet zaharat Astfel pe lacircngă diferenţa icircn

expresia CD36 s-au raportat şi corelaţii inverse icircntre expresia proteinei CD36 şi nivelul

adiponectinei Acelaşi studiu a evidenţiat o corelaţie pozitivă intre expresia CD36 cu expresia

receptorilor PPAR gamma relaţia cu PPARα nefiind investigată

Analiza de subgrup a relaţiilor dintre componentele SM și elementele moleculare

proinflamatorii studiate a relevat prezenţa unor asocieri semnificativ statistice icircntre acestea

Se argumentează astfel că veridicitatea studiului este susţinută de interdependenţele statistice

ale componentelor SM Determinarea coeficientului de corelaţie Icircn studiul nostru nivelul de

expresie relativă a PPARα s-a corelat moderat negativ (figura 550) cu CA a subiecţilor din

lotul normal pentru populaţiile celulare de Mo (r = - 0420 P = 001) Ly (r = - 046 P =

0009) şi PMN (r = - 040 P = 0024) date care sunt icircn concordanţă cu studiile care arată

rolul PPARα icircn furnizarea energiei prin beta-oxidarea acizilor graşi Icircn acelaşi timp icircn lotul

pacienţilor cu SM nu am identificat prezenţa unei asocieri icircntre nivelul de expresie relativă a

PPARα şi valoarea măsurată a CA Asocierea dintre expresia relativă a PPARα cu obezitatea

de tip central completează datele existente referitoare la reglarea homeostaziei energetice

conturacircnd un mecanism de control deficitar al aportului caloric al SM Icircn condiţiile icircn care

rezultatele obţinute prin metoda citometriei icircn flux nu au arătat existenţa unei corelaţii intre

expresia PPARα şi CA la pacienţii cu SM considerăm că ar fi necesar studiul

polimorfismului genei PPARA care ar putea aduce informaţii importante cu privire la

implicarea acestor receptori icircn apariţia obezităţii de tip central Subliniem acest lucru deoarece

obezitatea este o boală plurifactorială icircn care pe lacircngă factorii ereditari sunt implicaţi factori

de mediu psihologici şi sociali (245) Existenţa unei componente genetice a aterosclerozei

este legată şi de prezenţa unor variante ale genei PPARA asociate cu creşterea incidenţei bolii

cardiovasculare (82) şi a SM (249) Icircn studiul nostru am constatat o scădere statistic

semnificativă a nivelului expresiei relative a receptorilor PPARα icircn Eo la subiecţii cu

antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială comparativ cu subiecţii fără istoric

familial de hipertensiune (figura 537) Deşi diferenţele calculate icircntre loturile studiate nu au

icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică la subiecţii care au declarat prezenţa

antecedentelor familiale de hipertensiune arterială remarcăm o tendinţă de scădere a

intensităţii medii de fluorescenţă pentru Ac anti-PPARα la nivelul Mo (figura 515 P = 006

) icircn timp ce expresia relativă a CD36 icircnregistrează o creştere la acesti subiecţi (figura 545 P

= 008) Icircn contextul riscului cardiovascular foarte icircnalt al pacienţilor cu SM amintim şi

existenţa corelaţiei pozitive dintre valorile tensiunii arteriale diastolice şi expresia relativă a

receptorului CD36 (r = 0483 P = 0013) Această constatare este icircn consens cu studiile care

au arătat că forma solubilă circulantă a CD36 este asociată cu factorii de risc cardiovasculari

fiind propusă ca un marker precoce al aterosclerozei Activarea PPARα este asociată cu

modularea metabolismului lipidic iar agoniştii PPARα sunt utilizaţi icircn mod curent pentru

tratamentul dislipidemiei Sub acţiunea agoniştilor PPARα se obţine o icircmbunătăţire a funcţiei

endoteliale şi a parametrilor reologici funcţiile pleiotropice ale agoniştilor PPARα fiind

dovedite icircn trialuri clinice controlate Icircn populaţiile de Mo şi Ly la pacienţii cu SM

cercetarea noastră a evidenţiat o asociere negativă icircntre nivelul de expresie relativă a

receptorilor PPARα şi concentraţia TG serice (figura 551) Astfel scăderea expresiei

receptorilor PPARα este asociată cu creşterea nivelului TG serice contribuind la profilul

lipidic aterogen din SM Icircn conformitate cu literatura de specialitate icircn studiul efectuat prin

metoda citometriei icircn flux am găsit prezenţa asocierii icircntre nivelul de expresie al PPARα şi

HDL-colesterol Corelaţia pozitivă dintre nivelul de expresie relativă PPARα şi concentraţia

HDL-colesterolului a fost observată icircn lotul martor icircn populaţiile de Mo (r = 035 P = 005)

şi Ly ( r = 036 P = 004) (figura 553) susţinacircnd faptul că stimularea receptorilor PPARα

este legată de creşterea nivelului seric al lipoproteinelor cu densitate crescută La pacienţii cu

SM corelaţia dintre expresia PPARα şi HDL-colesterol a fost evidenţiată icircn populaţiile de Mo

(r = 046 P = 0019) şi eozinofile (r = 044 P = 0024) Se desprinde concluzia că icircn

sindromul metabolic scăderea concentraţiei HDL-colesterol este legată de diminuarea

nivelului de expresie relativă a receptorilor nucleari PPARα icircntărind afirmaţiile legate de

rolul acestor receptori icircn progresia bolilor cardiovasculare Studiind reactanţii de fază acută

analiza statistică a relevat o diferenţă semnificativă din punct de vedere statistic icircntre valorile

fibrinogenului la pacienţii cu SM atunci cacircnd au fost comparaţi cu subiecţii fără SM

(Capitolul IV4 P lt0 001 figura 427A) De asemenea icircn Capitolul V dedicat studiul

expresiei relative a receptorilor PPARα studiul valorilor fibrinogenului a arătat creşterea

acestui reactant de faza acută icircn lotul cu SM comparativ cu lotul martor (P lt0 0001) Icircn

studiul nostru am calculat o corelaţie invers proporţionala (r = - -036 fig 555B) icircntre

nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile şi concentraţia serică a

fibrinogenului Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P = 008) am reţinut

această asociere deoarece am demonstrat că nivelul de expresie relativă al receptorilor

PPARα icircn eozinofile este mai scăzut icircn sindromul metabolic iar sindromul metabolic este

caracterizat printr-un status inflamator cronic status caracterizat şi de creşterea concentraţiei

serice a fibrinogenului De asemenea notam ca această corelaţie negativă se află icircn

concordanţă cu studiile care arata că tratamentul cu agonişti PPARα (fibraţi) determina

scăderea nivelului seric al fibrinogenului contribuind la diminuarea inflamaţiei cronice din

sindromul metabolic şi icircn consecinţă amelioracircnd insulinorezistenţa

LIMITE ȘI DIFICULTĂȚI IcircN CERCETARE

Icircn cadrul Tezei de Doctorat am desfăşurat o cercetare care şi-a propus studierea

expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Recrutarea anamneza şi examinarea

clinică a subiecţilor au fost realizate icircn cadrul Cabinetului de Medicină de Familie CMI Popa

Elena din Iaşi iar determinările hematologice şi biochimice s-au efectuat icircn cadrul

Laboratorului Ambulatorului de Specialitate al Spitalului Universitar ldquoSfacircntul Spiridon din

Iaşi Icircn studiul epidemiologic şi al markerilor inflamatori al sindromului metabolic desfăşurat

au fost incluşi un număr de 1530 de participanţi pe baza liberului consimţămacircnt examinaţi icircn

perioada 01012013 - 31122013 Icircn continuare icircn perioada 1012014 - 28022014 pe baza

criteriilor de includere şi excludere icircn cele două loturi de studiu am investigat un număr de 57

de subiecţi prezentaţi la consultaţie icircn această perioadă şi care au icircndeplinit criteriile de

includere icircn cele două loturi (Lot SM şi Lot Control) constituite pentru evaluarea nivelului de

expresie a receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Explorarea nivelului de expresie

relativă a receptorilor PPARα s-a desfăşurat icircn cadrul Laboratorului de Biologie Moleculară

de pe platforma Institutului Regional de Oncologie Datorită resurselor proprii financiare

limitate trebuie să subliniez că aceasta cercetare nu ar fi fost posibilă fără contribuţia unor

cercetători din domeniul medical care m-au sprijinit necondiţionat atacirct icircn elaborarea

protocolului de lucru cacirct şi icircn efectuarea propriu-zisă a studiului Icircn acest sens menţionăm şi

faptul că pentru studiul receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic am utilizat aparatura

Laboratorului de Biologie Moleculară (care deserveşte icircntreaga Regiune a Moldovei) Pe

această cale mulţumesc personalului Laboratorului de Biologie Moleculară pentru ajutorul

acordat icircn desfăşurarea cercetării doctorale icircn condiţiile icircn care se observa creşterea

numărului de pacienţi care se adresează acestei platforme de cercetare Mulţumesc de

asemenea şi Doamnei Doctor Elena Butoi din cadrul Institutului de Biologie şi Patologie

Moleculară ldquoNicolae Simionescurdquo Bucureşti) pentru donaţia anticorpului secundar anti-

FITC Icircn consecinţă pentru recrutarea unui număr mai mare de participanţi ar fi fost necesară

icircn primul racircnd obţinerea unor resurse financiare suplimentare pentru achiziţia de aparatură şi

reactivi Totuşi numărul subiecţilor recrutaţi este apropiat de numărul subiecţilor raportaţi icircn

cadrul unor granturi de cercetare care aveau ca ţinta studiul expresiei receptorilor PPARα

(212 227 228 231) Rezultatele obţinute continua seria lucrărilor care arata importanta

studiului mecanismelor etiopatogenice ale sindromului metabolic patologie care se afla icircntr-o

continuă creştere La pacienţii cu SM pe lacircngă diminuarea nivelului de expresie a receptorilor

PPARα icircn eozinofile ne aşteptam şi la evidenţierea unor modificări icircn expresia PPARα şi icircn

populaţiile de Ly Mo şi PMN Acest fapt poate fi explicat de utilizarea unor celule provenite

de la pacienţi fără afectare cardiovasculară fără diabet zaharat şi necesită continuarea

studiului pe culturi celulare icircn condiţii de stimulare cu agonişti PPARα deziderat care

impune continuarea investigării expresiei PPARα printr-un grant de cercetare

ORIGINALITATEA ȘI CONTRIBUȚIILE INOVATIVE ALE TEZEI DE

DOCTORAT PERSPECTIVE DE CERCETARE

Evaluarea nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn leucocitele circulante

aduce noi perspective icircn studiul obezităţii şi sindromului metabolic Importanta studiului

expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic derivă din prevalenta crescută a

sindromului metabolic icircn populaţia cercetată la care se adaugă riscul cardiovascular foarte

icircnalt al acestor pacienţi cu implicaţii majore icircn sănătatea publică Rolul receptorilor PPARα

icircn inflamaţie şi aterogeneza este binecunoscut dar studiul nostru este primul care a arătat că

nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα este semnificativ mai scăzut in populatiile

de eozinofile la pacienţii cu SM Această concluzie coroborata cu existenţa unei stracircnse

asocieri intre expresia receptorilor PPARα la nivelul Mo limfocitelor şi PMNlor creeaza

ipoteza existenţei unui mecanism de control diferit al expresiei PPARα la nivelul

eozinofilelor Această cercetare aduce informaţii importante referitoare la mecanismele

proinflamatorii care stau la baza insulinorezistenţei şi riscului cardiometabolic şi impune

continuarea studiului acestor receptori nucleari prin citometrie icircn flux metodă care poate fi

aplicată şi la scara mai largă dacă sunt asigurate resursele materiale necesare cercetării

Cercetarea prin citometrie icircn flux poate fi completată de studiul polimorfismului genei

PPARA şi astfel se pot identifica timpuriu indivizii cu potenţial risc cardiometabolic crescut

Studiul receptorilor PPARα a stabilit conexiuni cu factori proinflamatori şi aterogenetici iar

continuarea cercetării poate aduce şi elemente noi de diagnostic precoce icircn sindromul

metabolic contribuind la icircmbunătăţirea prognosticului acestor pacienţi

CONCLUZII FINALE

1 Aplicarea scorului de SM alături de implementarea algoritmului electronic de diagnostic

contribuie la o prelucrare rapidă eficientă și standardizată a informaţiilor la nivelul

medicinei primare

2 Prevalenţa SM calculată astfel icircn cadrul studiului este crescută (2732) icircn concordanţă

cu datele raportate

3 Controlul factorilor de risc cardiometabolici incluşi icircn SM se poate realiza prin

managementul stilului de viaţă (scăderea greutăţii corporale prin combaterea

sedentarismului şi adoptarea unei diete antiaterogene şi hipocalorice) şi administrarea

terapiei medicamentoase

4 Este necesară adoptarea unei politici de sănătate publică pentru prevenirea creşterii icircn

populaţie a prevalenţei obezităţii şi a diabetului zaharat

5 Noi metode de cercetare icircn domeniul SM axate pe diagnosticarea precoce şi cuantificarea

eficientă a acestuia duce la diminuarea incidenței evenimentelor cardiovasculare majore

6 Sindromul metabolic se caracterizează printr-un status inflamator cronic

7 Valorile Non-HDL-colesterolului şi a raportului de aterogenitate sunt semnificativ mai

mari la pacienţii cu SM

8 Dintre reactanţii de faza acută am observat că valoarea medie a fibrinogenului este mai

crescută icircn lotul cu SM

9 Valorile eozinofilelor sunt crescute icircn sindromul metabolic iar explorarea relaţiei dintre

eozinofile şi obezitate constituie una din direcţiile de studiu actuale ale sindromului

metabolic

10 Evaluarea markerilor inflamatori icircn contextul sindromului metabolic este utilă icircn

evaluarea complexă a a factorilor de risc cardiometabolici

11 Prin metoda citometriei icircn flux am demonstrat prezenta Receptorilor Activaţi de

Inductorii Proliferării Peroxizomilor ndash Alpha (PPARα) icircn toate populaţiile de leucocite

studiate (Mo limfocite PMN eozinofile) atacirct icircn lotul pacienţilor cu SM cacirct şi icircn lotul

martor

12 Utilizacircnd intensitatea medie de fluorescenţă a anticorpilor anti- PPARα am arătat că

nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile este semnificativ mai redus

la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali

13 Acest studiu este primul care a demonstrat existenţa unei scăderi statistic semnificative a

nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofilele pacienţilor cu SM

confirmacircnd cercetările recente care au evidenţiat rolul eozinofilelor şi al receptorilor

PPARα icircn obezitate reglarea inflamaţiei cronice şi aterogeneza

14 Contrar aşteptărilor noastre icircn populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările

efectuate icircn cele două loturi de studiu (cu şi fără sindom metabolic) nu am evidenţiat

diferenţe statistic seminificative icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα la

subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali

15 Icircn populaţiile de Mo limfocite şi polimorfonucleare am observat corelaţii puternice

semnificativ statistic icircntre expresia PPARα icircn aceste tipuri celulare sugeracircnd existenţa

unui mecanism unic de control al inflamaţiei cronice la nivelul acestor celule probabil

diferit de cel din eozinofile

16 La subiecţii cu SM expresia relativă a PPARα icircn Eo este invers asociată cu expresia

receptorului CD36 (receptor al particulelor de ox - LDL şi propus ca un marker precoce al

aterosclerozei) dovedind rolul antiinflamator al receptorilor PPARα la nivel endotelial

17 La pacienţii cu antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială nivelul de

expresie al receptorilor PPARα icircn eozinofile şi Mo este diminuat comparativ cu subiecţii

fără antecedente familiale de hipertensiune arterială Putem spune că studiul efectuat de

noi aduce informaţii importante legate de geneză aterosclerozei şi hipertensiunii arteriale

18 Prin studiul asocierilor dintre receptorii PPARα şi componentele clinice ale sindromului

metabolic am arătat rolul acestor receptori icircn determinismul obezităţii de tip central

nivelul expresiei relative a receptorilor PPARα fiind invers proporţional cu circumferinţa

abdominală

19 Icircn acelaşi timp nivelul de expresie a PPARα icircn sindromul metabolic este asociat pozitiv

cu concentraţia serică a HDL-colesterolului şi invers asociat cu nivelul trigliceridelor

serice dovedind rolul acestor receptori icircn diminuarea procesului inflamator cronic de la

nivel vascular

20 La pacienţii cu SM scăderea expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofile este corelată cu

creşterea unor markeri ai sindromului inflamator cronic cardiometabolic (acid uric

fibrinogen) ilustracircnd importanta receptorilor icircn reglarea status-ului inflamator cronic din

sindromul metabolic

21 Utilizarea metodei flowcitometrice pentru studiul expresiei relative a receptorilor PPARα

icircn leucocite a adus informaţii importante cu privire la mecanismele moleculare de control

implicate icircn patogenia bolilor cardiometabolice icircn concordanţă cu cercetările care descriu

expresia PPAR icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale bronşice

keratinocite)

BIBLIOGRAFIE SELECTIVA

1 Kahn R Metabolic syndrome- what is the clinical usefulness Lancet 2008371(9628)1892-3

2 Reaven GM The metabolic syndrome is this diagnosis necessary Am J Clin Nutr 2006 83(6)1237-7

3 Grundy SM Pre-Diabetes Metabolic Syndrome and Cardiovascular Risk J Am Coll Cardiol 201259(7)

635-43

4 International Diabetes Federation IDF Diabetes Atlas 6th edn International Diabetes Federation Belgium

Brussels 20131-155

5 World Health Organization Global Status Report on Noncommunicable Diseases 2010 World Health

Organization Geneva Switzerland 20111-176

6 Coman AE Petrovanu R Sindromul metabolic in practica de ambulator Editura Pim Iaşi 2009 1-103

7 Grundy SM Becker D Clark LT et alThird Report of the National Cholesterol Education Program (NCEP)

Expert Panel on Detection Evaluation and Treatment of High Blood Cholesterol in Adults (Adult

Treatment Panel III) Final Report Circulation 2002106(25)3143-90

8 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J Metabolic syndrome- a new worldwide definition A Consensus Statement

from the International Diabetes Federation Diabet Med 2006 23(5)469-80

9 KG Alberti KG Eckel RH Grundy SM etal International Diabetes Federation task force on epidemiology

and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart Association World Heart

Federation International Atherosclerosis Society International Association for the study of obesity

Harmonizing the metabolic syndrome a joint interim statement of the International Diabetes Federation task

force on epidemiology and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart

Association World Heart Federation International Atherosclerosis society and International Association

for the study of obesity Circulation 2009120(16)1640-5

10 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J IDF Epidemiology Task Force The metabolic syndrome new

worldwide definition Lancet 2005 366 1059 - 62

11 Oleszczyk M Svab I Seifert B et al Primary healthcare in the developing part of Europe changes and

development in the former Eastern Bloc countries that joined the European Union following 2004 Med Sci

Monit 2009(15)78ndash84

12 Jung U J Choi M S Obesity and Its Metabolic Complications The Role of Adipokines and the

Relationship between Obesity Inflammation Insulin Resistance Dyslipidemia and Nonalcoholic Fatty

Liver Disease Int J Mol Sci 2014rsquo15(4) 6184-223

13 Vanden Heuvel JP Peters JM Peroxisome Proliferators In Ramos K (ed) Cellular and Molecular

Toxicology (Second Edition) Volume 2 New York Elsevier Science Inc 2010 145 - 67

14 Yessoufou A Wahli W Multifaceted roles of peroxisome proliferator-activated receptors (PPARs) at the

cellular and whole organism levels Swiss Med Wkl 2010140w13071 doi104414smw201013071

15 Azhar S Peroxisome proliferator-activated receptors metabolic syndrome and cardiovascular disease

Future Cardiology 20106(5)657-91

16 Andries G Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity

Diabetes and Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(Suppl)24-32

17 Zandbergen F Plutzky J PPARalpha in atherosclerosis and inflammation Biochim Biophys Acta

20071771(8)972-82

18 Straus DS Glass CK Anti-inflammatory actions of PPAR ligands new insights on cellular and molecular

mechanisms Trends Immunol 200728(12)551-8

19 Zlei M Zugun- Eloae F Carasevici E Citometrie icircn flux - Bază şi clinică Icircn Hinescu ME (ed) Citometrie icircn

flux - principii şi aplicaţii clinice Bucureşti Editura Viaţa Medicală Romacircnească 20111-128

20 Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity Diabetes and

Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(9)24-32

21 Woerly G Honda K Loyens M et al Peroxisome proliferator-activated receptors alpha and gamma down-

regulate allergic inflammation and eosinophil activation J Exp Med 2003198(3)411-21

22 Salle-Saumont D Brenuchon C Kanda A et al Peroxisome proliferator-activated receptor alpha regulates

skin inflammation and humoral response in atopic dermatitis J Clin Allergy Immunology 2008 21(4)962-8

23 Schote A Turner J Schiltz J et al Nuclear receptors in human immune cells expression and correlations

Mol Immunolog 200744(6)1436-45

24 DAmore S Vacca M Graziano G et al Nuclear receptors expression chart icircn peripheral blood

mononuclear cells identifies patients with Metabolic Syndrome Biochim Biophys Acta

20131832(12)2289-301

25 Uthurralt J Gordish-Dressman H Bradbury M T et al PPARalpha L162V underlies variation in serum

triglycerides and subcutaneous fat volume in young males BMC Med Genet 2007855

26 Hiukka A Leinonen ES Jauhiainen M et al Long-term effects of fenofibrate on VLDL and HDL

subspecies icircn participants with type 2 diabetes mellitus Diabetologia 2007 50(10)2067-75

27 Robins SJ Rubins HB Faas FH et alInsulin resistance and cardiovascular events with low HDL

cholesterol The Veterans Affairs HDL Intervention Trial (VA-HIT) Diabetes Care 2003 26(5)1513-7

28 Devaraj S Siegel D Jialal I Statin Therapy in Metabolic Syndrome and Hypertension Post-JUPITER

What is the Value of CRP Curr Atheroscler Rep 2011 13(1) 31ndash42

29 Imperatore G Riccardi G Iovino C et al Plasma Fibrinogen A New Factor of the Metabolic Syndrome A

population-based study Diabetes Care 19982 1(4)649-54

30 Krysiak R Gdula-Dymek A Bachowski R Okopien B Pleiotropic effects of atorvastatin and fenofibrate

in metabolic syndrome and different types of pre-diabete Diabetes Care 201033(10)2266-70

31 Hermans MP Impact of Fenofibrate on Type 2 Diabetes Patients with Features of the Metabolic Syndrome

Subgroup Analysis From FIELD Curr Cardiol Rev 20106(2)112-8

32 Silverstein R Inflammation atherosclerosis and arterial thrombosis Role of the scavenger receptor CD36

Cleveland Clinic Journal of Medicine 200976(Suppl 2)S27-S30

33 Hăncu N Obezitatea In Vereşiu IA (ed) Diabetul zaharat nutritia si bolile metabolice Volume 2 Editura

Echinox Cluj- Napoca 2010 1-15

Lista lucrări publicate

1 Elena Popa Maria Maidaniuc Agnes Bacusca Alamir Diaa Rodica Petrovanu Adorata Elena

Coman Disfuncţia endotelială ndash de la mecanisme moleculare la cuantifi care şi tratament icircn practica

medicală Practica Medicală 20149(3) 109-14

2 Elena Popa Agnes Bacusca Alamir Diaa Maria Maidaniuc Rodica Petrovanu Adorata Elena Coman

The function of insulin receptor (IRF) in evolution of obesity correlation with adipocytes diameters

Archives of the Balkan Medical Union 201449(3) 275-9

3 Elena Popa Florin Zugun-Eloae Mihaela Zlei Daniela Jitaru Oana Maria Pintilie Adorata Elena

Coman Maria Traian Didona Anca Ungureanu Eugen Carasevici - acceptata pentru numarul 42014

Flow cytometry analysis of PPAR-alpha receptors in metabolic syndrome) Revista Romană de

Medicină de Laborator(RRLM-D-14-00034R1- adeverinţa ataşată

Page 21: REZUMAT TEZĂ DE DOCTORAT - umfiasi.ro Doctorat/rezumat... · universitatea de medicinĂ Şi farmacie “grigore t. popa” iaŞi facultatea de medicinĂ rezumat tezĂ de doctorat

Cu ajutorul curbei ROC am evaluat posibilitatea utilizării MFI a Ac anti - PPARα icircn

Eo ca marker pentru diagnosticul SM Valoarea MFI a Ac anti - PPARα icircn Eo care prezice cu

cea mai mare acurateţe prezenţa SM a fost de 1533 (punctul de ldquocut-offrdquo) pentru care am

calculat o sensibilitate de 5652 şi o specificitate de 7778 Calculul ariei AUC a furnizat

valoarea de 0663 şi deci determinarea parametrului MFI anti- PPARα icircn Eo are valoarea

unui test cu acurateţe redusatilde icircn diagnosticul SM Studiind expresia PPARα icircn Eo la subiecţii

care au prezentat AHC de HTA am observat o scădere semnificativă statistic (P = 00023) a

expresiei PPARα la subiecţii cu istoric familial de HTA comparativ cu subiecţii fatilderatilde AHC de

HTA (figura 537)

AHC HTA

Număr 22

Mediana 148800

Percentila 25 116425

Percentila 75 170750

AHC HTA absente

Număr 35

Mediana 170850

Percentila 25 143700

Percentila 75 195000

Figura 537 Comparaţie icircntre expresia PPARα icircn Eo funcţie de AHC de HTA

Studiind subiecţii cu AHC declarate de dislipidemie nu am identificat diferenţe icircntre

nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Eo subiecţilor cu AHC de dislipidemie

comparativ cu cei care nu au declarat prezenţa AHC de dislipidemie (t - Test P = 067)

Analiza nivelului de expresie relativă a receptorilor CD36

Am studiat expresia receptorilor CD36 icircn Mo subiecţilor incluşi icircn studiu

Lot Non - SM

BLot SM

Figura 539 Analiza flowcitometrica pentru receptorii CD36 icircn Mo

Pentru toţi participanţii la studiu valorile MFI au variat icircn intervalul [817 6933] iar

valoarea medie a MFI a Ac anti-CD36 a fost de 397133 plusmn 120902 Tabel XXXVII Statistică descriptivă pentru a CD36 icircn Mo

Lot SM Lot Non-SM

Media 429034 370377

Deviatia Standard 109051 125514

Mediana 411000 362800

Minimum 266400 81700

Maximum 693300 616800

Percentila 25 346200 273750

Percentila 75 469000 453300

Distribuţia frecvenţelor relative a MFI au fost prezentate sub formă histogramelor

Figura 541 Distribuţia frecvenţelor relative a valorilor MFI anti - CD36 icircn Mo

MFI

ant

i-PPA

R a Eo

1000

1100

1200

1300

1400

1500

1600

1700

1800

1900

DA NU

AHC HTA

P=00023

1000 2000 3000 4000 5000 6000 7000 8000

0

5

10

15

20

25

MFI anti-CD36

Frecve

nta rela

tiva (

)

Lot SM

0 1778 3556 5333 7111

0

5

10

15

20

25

30

35

MFI anti-CD36

Frecve

nta rel

ativa (

)

Lot Non - SM

Referitor la lotul SM 92 din valorile MFI a Ac anti- CD36 s-au icircncadrat icircn

intervalul Media plusmn 2 DS (figura 542) iar pentru lotul martor peste 90 dintre acestea icircn

Media plusmn 2 DS (figura 543)

Figura 542 Lot SM

Variaţia MFI anti-CD36 icircn Mo

Număr pacienţi 26

Minimum 2664

Maximum 6933

Media 429034

Deviaţia Standard 109051

Figura 543 Lot Non -SM

Variaţia MFI anti- CD36 icircn Mo

Număr 31

Minimum 81700

Maximum 616800

Media 370377

Deviaţia Standard 125514

Comparacircnd subiecţii cu SM cu cei din lotul normal am constatat o tendinţă de creştere

a expresiei CD36 icircn lotul cu SM((t - Test P= 0067)

MFI anti - CD36 Lot Non-SM

Număr 31

Mediana 3628

Percentila 25 2737

Percentila 75 4533

MFI anti - CD36 Lot SM

Număr 26

Mediana 4110

Percentila 25 3462

Percentila 75 4690

Figura 544 Comparaţie icircntre cel două loturi privind MFI anti - CD36 icircn Mo

Referindu-ne la subiecţii cu AHC de HTA am observat o tendinţă de creştere a

valorilor MFI anti-CD36 comparativ cu cei care nu au avut AHC de HTA (t - Test P = 0 08)

AHC HTA

Număr 22

Mediana 442800

Percentila 25 355275

Percentila 75 519475

AHC HTA absenţe

Număr 35

Mediana 377400

Percentila 25 316900

Percentila 75 443400

Figura 545 Comparaţie icircntre expresia CD36 icircn Mo funcţie de AHC de HTA

Nu s-au calculat diferenţe semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor

PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de dislipidemie atunci cacircnd aceştia au fost comparaţi cu

subiecţii fără AHC de dislipidemie (t - Test P=031)

Corelaţii icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα si CD36

Studiind valorile intensităţii medii de fluorescenţă a Ac anti-PPARα icircn Mo Ly şi

PMN am observat că nivelul de expresie celularatilde a PPARα icircn Mo Ly şi PMN sunt corelate

puternic pozitiv atacirct icircn lotul SM cacirct şi icircn lotul martor(fig547 548)

1 6 11 16 21 26 31

0

1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

8000

Pacienti

MFI a

nti-CD

36

42903

21093

64714

10188

75619

LCI

Media

LCS1 6 11 16 21 26 31 36

-1000

0

1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

8000

MFI a

nti- C

D36

37038

11935

62141

-616

74692Media + 2 DS

Media

Media - 2 DS

3200

3400

3600

3800

4000

4200

4400

4600

4800

Lot SM Lot Non-SM

P = 00676

MFI

anti-

CD36

3400

3600

3800

4000

4200

4400

4600

4800

5000

DA NU

AHC HTA

P = 008

Figura 547 Studiul relatiilor dintre

receptorii PPARα icircn SM A Mo vs PMN B Mo vs Ly

C PMN vs Ly Graficul ilustrează coeficienţii r P dreapta de

regresie (linia centrala) intervalul de icircncredere

95 şi intervalul de predicţie 95

Figura 548 Corelaţii icircntre receptorii PPARα icircn lotul

martor

A Mo vs PMN

B Mo vs Ly

C PMN vs Ly

Tot pentru lotul SM cacircnd am evaluat relaţia dintre nivelul de expresie relativă a

receptorilor PPARα icircn Eo şi nivelul de expresie relativa a receptorilor CD 36 am obţinut o

corelaţie negativă (r = - 05 P = 001) (fig 549 A)

50 100 150 200 250 300 350 50

100

150

200

250

300

350

400

450

500

PPARα Ly

PPARα PMN

y = 56641 + 1159 x r = 086 P lt 0001

C

50 100 150 200 250 300 350 400 0

50

100

150

200

250

300

350

PPARα Mo

PPARα Ly

y = 36665 + 0607 x r = 090 P lt 0001

B

150 200 250 300 350 400 450 0

50 100 150 200 250 300 350 400 450 500

PPARα PMN

PPARα Mo

y = 2505 + 0879 x r = 081 P lt 0001

A

50 100 150 200 250 300 350

50 100 150 200 250 300 350 400 450 500

PPARα Ly

PPARα PMN

y = 95668 + 0919 x r = 081 P lt 0001

C

100 150 200 250 300 350 400

0

50

100

150

200

250

300

350

400

PPARα Mo

PPARα Ly

y = -7503 + 0829 x r = 079 P lt 0001

B

100 150 200 250 300 350 400

50

100

150

200

250

300

350

400

450

500

PPARα Mo

PPARα PMN

y = 61384 + 0882 r = 074 P lt 0001

A

Figura 549 Corelaţii icircntre expresia PPARα icircn Eo şi alte tipuri de receptori investigaţi A PPARα Eo şi CD 36 (Lot SM) B PPARα Eo şi PPARα Mo( Lot Non-SM)

Icircn lotul martor am identificat o asociere moderată pozitivă (r = 038 P = 0033) icircntre

nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Eo şi Mo (figura 549B) corelaţie absentă icircn

lotul pacienţilor cu SM

Corelaţii dintre receptorii studiaţi şi componentele sindromului metabolic

Icircn lotul de control analiza statistică a relevat faptul că icircntre circumferinţa

abdominală (CA ) şi nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Mo Ly şi PMN există o

corelaţie inversă adică scăderea expresiei PPARα la nivelul acestor populatii celulare ar fi

icircnsoţită de creşterea CA (figura 550

Figura 550Corelaţii dintre receptorii

PPARα si CA A Mo B Ly C PMN

La pacienţii cu SM am notat o corelatie moderată negativă statistic semnificativă

icircntre TG şi valorile MFI a Ac anti- PPARα icircn Mo şi Ly( fig 551)

150 200 250 300 350 400 450 50

60

70

80

90

100

110

PPARα PMN

CA r = - 040 P = 0024

C

50 100 150 200 250 300 350 50

60

70

80

90

100

110

PPARα Ly

CA r = - 046 P = 0009

B

50 100 150 200 250 300 350 400 50

60

70

80

90

100

110

PPARα Mo

CA r = - 042 P = 0017

A

50 100 150 200 250 300 350 400 500

1000

1500

2000

2500

3000

PPARα Mo

PPARα Eo

r = 038 P = 0033

B

0 500 1000 1500 2000 2500 1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

8000

PPARα Eo

CD36

r = 050 P = 0010

A

Figura 551 Lot SM Corelaţie icircntre expresia PPARα şi TG (A Mo B Ly)

Analizand corelatia dintre receptorii CD36 si valorile TA la pacientii cu SM am observat

o asociere pozitivă asteptată intre TAD si nivelul de expresie al receptorilor CD36 (fig 552)

Figura 552 Lot SM Corelaţii icircntre expresia

receptorilor CD36 şi valorile tensiunii arteriale

diastolice

Studiind corelaţiile dintre receptorii PPARα şi HDL-col la subiecţii din lotul martor am

notat o asociere pozitivă icircntre expresia PPARα icircn Mo şi Ly cu HDL-col (fig 553)

Figura 553 Lot martor Corelaţii icircntre HDL-col şi expresia PPARα icircn Mo(A) Ly(B)

Icircn lotul normal am evidenţiat corelaţii pozitive moderate dar semnificative statistic icircntre

CA şi valorile TAS (r = 062 P lt 0001) respectiv TAD (r = 050 P=0004) precum şi icircntre

CA şi glicemia subiecţilor normali (r = 052 P = 0003) Aceste date icircmpreună cu relaţia

invers proporţională identificată icircntre HDL-col şi CA (r = 050 P = 001) susţin validitatea

acestui studiu Icircn lotul subiecţilor cu SM am observat o corelaţie moderat pozitivă icircntre

expresia PPARα icircn populaţiiile de Mo şi Eo şi concentraţia a HDL-col (fig 554)

B

100 150 200 250 300 350 20

30

40

50

60

70

80

90

100

PPARα Ly

HDL-col-(mgdl)

r = 036 P = 0046

A

150 200 250 300 350 400 20

30

40

50

60

70

80

90

100

PPARα Mo

HDL-col-(mgd)l

r = 035 P = 005

70 75 80 85 90 95 100 1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

8000

TAD (mmHg)

CD36

r = 048 P = 0013

B

50 100 150 200 250 300 350 -100

0

100

200

300

400

500

PPARα Ly

TG(mgdl)

r = - 042 P = 003

A

50 100 150 200 250 300 350 400 -100

0

100

200

300

400

500

PPARα Mo

TG ( mgdl) r =- 0 43 P = 0027

Figura 554 Corelaţii icircn SM icircntre HDL-col şi expresia PPARα icircn Mo (A) şi Eo(B)

Corelaţii icircntre nivelul de expresie relativă a PPARα şi markeri ai disfuncţiei

endoteliale şi inflamaţiei cronice

Deşi nu a icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică am reţinut corelaţia invers

proporţională (r = - 0331 P = 006) dintre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα

icircn PMN şi concentraţia serică a Non-HDL-colesterolului

Studiind relaţiile dintre parametri icircn lotul de pacienţi cu SM am observat o corelaţie

moderată invers proporţională icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Eo şi

acidul uric seric (figura 555 A) corelaţie absentă la subiecţii fără SM

Figura 555 Lot SM corelaţia dintre expresia PPARα icircn Eo şi acidul uric (A) respectiv

PPARα şi fibrinogen (B)

Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P=008) am notat pentru

pacienţii cu SM corelaţia invers proporţională dintre expresia PPARα icircn Eo şi concentraţia

serică a fibrinogenului ( figura 555B)

V5 Discuţii

Icircn cadrul lucrării de doctorat am studiat nivelul de expresie relativă a PPARα icircn

leucocitele pacienţilor cu SM comparativ cu cea a subiecţilor normali Expresia PPARα a fost

studiată icircn paralel cu cea a CD36 glicoproteină exprimată pe suprafaţa a numeroase celule

din organismul uman inclusiv pe cea a Mo şi macrofagelor Prin funcţia sa de receptor pentru

particulele oxidate de LDL CD36 cunoscut ca bdquoscavenger receptorrdquo de clasa B sau

bdquotrombospodin receptorrdquo contribuie la dezvoltarea inflamaţiei de la nivel endotelial şi

formarea plăcii de ateroscleroză Referitor la studiul PPARα icircn Eo icircn sindromul metabolic

menţionăm că studiul nostru este primul care arată că nivelul de expresie a proteinei PPARα

icircn Eo măsurat prin citometrie icircn flux este semnificativ mai redus la pacienţii care sunt

diagnosticaţi cu acest sindrom De asemenea icircn lotul cu SM cercetat icircn cadrul studiului

receptorilor PPARα numărul Eo circulante a fost semnificativ mai crescut la pacienţii cu SM

B

0 500 1000 1500 2000 2500 200

250

300

350

400

450

PPARα Eo o

Fibrinogen mgdl

r =- 036 P = 008

0 500 1000 1500 2000 2500 1 2 3 4 5 6 7 8 9

10 11

PPARα Eo_

Acid uric(mgdl) r = 048 P = 0014 A

0 500 1000 1500 2000 2500 10

20

30

40

50

60

70

80

PPARα Eo

HDL(mgdl)

r = 044 P = 0024

B

100 150 200 250 300 350 400 10

20

30

40

50

60

70

80

PPARα Mo

HDL( mgdl)

r = 046 P = 0019

A

(P = 003) Aceste constatări conduc la ipoteza că Eo joacă un rol special icircn mecanismele

patogenice declanşate icircn sindromul metabolic şi că receptorii PPARα sunt importanţi icircn

implicarea Eo icircn obezitate şi insulinorezistenţă Creşterea numărului de Eo circulante este

urmată de eliberarea mediatorilor proinflamatori iar reducerea expresiei PPARα icircn Eo

determină perturbarea mecanismelor de control al inflamaţiei cu exacerbarea cascadei

proinflamatorii Consecutiv se agravează disfuncţia endotelială şi se accelerează progresia

leziunilor de ateroscleroză Extrapolacircnd aceste ipoteze putem spune că asocierea raportată

dintre boala ischemică coronariană şi Eo poate fi şi consecinţa exacerbării cascadei

proinflamatorii de la nivel vascular produsă datorită scăderii expresiei PPARα icircn Eo iar

creşterea numărului de Eo circulante poate reprezenta o adaptare a organismului uman care

icircncearcă să suplinească deficitul de receptori PPARα Analizacircnd curba ROC pentru

intensităţile medii de fluorescenţă determinate pentru anticorpii anti- PPARα icircn Eo am

obţinut pentru acest biomarker o sensibilitate a testului de 565 şi o specificitate de 778

pentru un punct de cut-off de 1533 ( figura 536 ) Deşi aria AUC (Aria under the curve) egală

cu 0663 icircncadrează acest test ca avacircnd o acurateţe redusă observăm că că această valoare

este apropiată de determinările AUC pentru alţi factori (fibrinogen raport de aterogenitate

acid uric non- HDL-colesterol) cunoscuţi ca fiind implicaţi icircn aterogeneză şi inflamaţia

cronică (figura 431) Aceste remarci alături de faptul că icircn studiul receptorilor PPARα icircn

leucocite am inclus subiecţi la primul diagnostic de SM creează premisa integrării

determinării expresiei relative a receptorilor PPARα icircn diagnosticul complex al sindromului

metabolic Putem spune că icircn final studiul expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofilele

circulante se dovedește a fi util icircn diagnosticul precoce la nivel molecular al SM permiţacircnd

identificarea timpurie a unor indivizi cu risc cardiometabolic crescut Astfel intervenţia

precoce asupra subiecţilor cu deficit de PPARα icircn Eo contribuie la managementul eficient al

afecţiunilor degenerative icircn care inflamaţia cronică icircndeplineşte un rol primordial Referitor

la populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările efectuate prin citometrie de flux nu au

arătat existenţa unor diferenţe statistice icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα

la subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali Rezultatele noastre pot fi

consecinţa caracteristicilor loturilor studiate (icircn studiul nostru au fost incluşi subiecţi recrutaţi

la primul diagnostic de SM şi icircn absenţa stimulării receptorilor PPARα cu droguri agoniste

PPARα) dar icircn acelaşi timp pot apare diferenţe datorită metodei utilizate (231 232 233)

Făcacircnd o paralelă cu un studiu publicat icircn 2013 icircn Europa (231) care a arătat creşterea

nivelului de expresie al PPARα icircn Ly şi Mo observăm că deşi numărul de subiecţi a fost

aproximativ egal (57 participanţi icircn studiul nostru 60 icircn studiul DAmore) subiecţii icircn studiul

amintit au fost recrutaţi dintr-o clinică cu profil medical la primul diagnostic de SM icircn timp

ce metoda utilizată a fost PCR (Polymerase Chain Reaction) mult mai fidelă decacirct citometria

icircn flux icircn studiul receptorilor nucleari De asemenea DAmore nu investighează expresia

PPARα icircn Eo şi PMN icircn cercetare fiind incluse doar celulele CD14+ (predominant Mo) şi

CD14- (predominant Ly) Deşi nu am obţinut diferenţe statistic semnificative icircntre cele două

loturi referitoare la nivelul de expresie relativă a PPARα icircn Mo Ly şi PMN am observat

corelaţii puternice semnificative statistic icircntre expresia receptorilor PPARα icircn aceste tipuri

celulare Rezultatele obţinute sugerează existenţa unui mecanism diferit molecular de control

icircn eozinofile care reglează cantitatea de proteină PPARα icircn eozinofile versus alte tipuri de

leucocite (la pacienţii cu SM) şi acest lucru este icircn concordanţă cu cercetările care descriu

expresia PPARα mRNA icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale

bronşice keratinocite) Studiind prin citometrie de flux nivelul de expresie relativă a

receptorului CD36 la nivelul Mo am arătat prezenţa acestuia icircn Mo tuturor subiecţilor

investigaţi Analizacircnd valorile intensităţii medii de fluorescenţă a CD36 icircn loturile studiate

am observat o tendinţă de creştere la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali

confirmacircnd implicarea receptorului CD36 icircn patogeneza acestuia Referitor la expresia

receptorului CD36 rezultatele obţinute sunt icircn consens cu studii anterioare care au arătat

creşterea expresiei CD36 la pacienţii cu SM şi diabet zaharat Astfel pe lacircngă diferenţa icircn

expresia CD36 s-au raportat şi corelaţii inverse icircntre expresia proteinei CD36 şi nivelul

adiponectinei Acelaşi studiu a evidenţiat o corelaţie pozitivă intre expresia CD36 cu expresia

receptorilor PPAR gamma relaţia cu PPARα nefiind investigată

Analiza de subgrup a relaţiilor dintre componentele SM și elementele moleculare

proinflamatorii studiate a relevat prezenţa unor asocieri semnificativ statistice icircntre acestea

Se argumentează astfel că veridicitatea studiului este susţinută de interdependenţele statistice

ale componentelor SM Determinarea coeficientului de corelaţie Icircn studiul nostru nivelul de

expresie relativă a PPARα s-a corelat moderat negativ (figura 550) cu CA a subiecţilor din

lotul normal pentru populaţiile celulare de Mo (r = - 0420 P = 001) Ly (r = - 046 P =

0009) şi PMN (r = - 040 P = 0024) date care sunt icircn concordanţă cu studiile care arată

rolul PPARα icircn furnizarea energiei prin beta-oxidarea acizilor graşi Icircn acelaşi timp icircn lotul

pacienţilor cu SM nu am identificat prezenţa unei asocieri icircntre nivelul de expresie relativă a

PPARα şi valoarea măsurată a CA Asocierea dintre expresia relativă a PPARα cu obezitatea

de tip central completează datele existente referitoare la reglarea homeostaziei energetice

conturacircnd un mecanism de control deficitar al aportului caloric al SM Icircn condiţiile icircn care

rezultatele obţinute prin metoda citometriei icircn flux nu au arătat existenţa unei corelaţii intre

expresia PPARα şi CA la pacienţii cu SM considerăm că ar fi necesar studiul

polimorfismului genei PPARA care ar putea aduce informaţii importante cu privire la

implicarea acestor receptori icircn apariţia obezităţii de tip central Subliniem acest lucru deoarece

obezitatea este o boală plurifactorială icircn care pe lacircngă factorii ereditari sunt implicaţi factori

de mediu psihologici şi sociali (245) Existenţa unei componente genetice a aterosclerozei

este legată şi de prezenţa unor variante ale genei PPARA asociate cu creşterea incidenţei bolii

cardiovasculare (82) şi a SM (249) Icircn studiul nostru am constatat o scădere statistic

semnificativă a nivelului expresiei relative a receptorilor PPARα icircn Eo la subiecţii cu

antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială comparativ cu subiecţii fără istoric

familial de hipertensiune (figura 537) Deşi diferenţele calculate icircntre loturile studiate nu au

icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică la subiecţii care au declarat prezenţa

antecedentelor familiale de hipertensiune arterială remarcăm o tendinţă de scădere a

intensităţii medii de fluorescenţă pentru Ac anti-PPARα la nivelul Mo (figura 515 P = 006

) icircn timp ce expresia relativă a CD36 icircnregistrează o creştere la acesti subiecţi (figura 545 P

= 008) Icircn contextul riscului cardiovascular foarte icircnalt al pacienţilor cu SM amintim şi

existenţa corelaţiei pozitive dintre valorile tensiunii arteriale diastolice şi expresia relativă a

receptorului CD36 (r = 0483 P = 0013) Această constatare este icircn consens cu studiile care

au arătat că forma solubilă circulantă a CD36 este asociată cu factorii de risc cardiovasculari

fiind propusă ca un marker precoce al aterosclerozei Activarea PPARα este asociată cu

modularea metabolismului lipidic iar agoniştii PPARα sunt utilizaţi icircn mod curent pentru

tratamentul dislipidemiei Sub acţiunea agoniştilor PPARα se obţine o icircmbunătăţire a funcţiei

endoteliale şi a parametrilor reologici funcţiile pleiotropice ale agoniştilor PPARα fiind

dovedite icircn trialuri clinice controlate Icircn populaţiile de Mo şi Ly la pacienţii cu SM

cercetarea noastră a evidenţiat o asociere negativă icircntre nivelul de expresie relativă a

receptorilor PPARα şi concentraţia TG serice (figura 551) Astfel scăderea expresiei

receptorilor PPARα este asociată cu creşterea nivelului TG serice contribuind la profilul

lipidic aterogen din SM Icircn conformitate cu literatura de specialitate icircn studiul efectuat prin

metoda citometriei icircn flux am găsit prezenţa asocierii icircntre nivelul de expresie al PPARα şi

HDL-colesterol Corelaţia pozitivă dintre nivelul de expresie relativă PPARα şi concentraţia

HDL-colesterolului a fost observată icircn lotul martor icircn populaţiile de Mo (r = 035 P = 005)

şi Ly ( r = 036 P = 004) (figura 553) susţinacircnd faptul că stimularea receptorilor PPARα

este legată de creşterea nivelului seric al lipoproteinelor cu densitate crescută La pacienţii cu

SM corelaţia dintre expresia PPARα şi HDL-colesterol a fost evidenţiată icircn populaţiile de Mo

(r = 046 P = 0019) şi eozinofile (r = 044 P = 0024) Se desprinde concluzia că icircn

sindromul metabolic scăderea concentraţiei HDL-colesterol este legată de diminuarea

nivelului de expresie relativă a receptorilor nucleari PPARα icircntărind afirmaţiile legate de

rolul acestor receptori icircn progresia bolilor cardiovasculare Studiind reactanţii de fază acută

analiza statistică a relevat o diferenţă semnificativă din punct de vedere statistic icircntre valorile

fibrinogenului la pacienţii cu SM atunci cacircnd au fost comparaţi cu subiecţii fără SM

(Capitolul IV4 P lt0 001 figura 427A) De asemenea icircn Capitolul V dedicat studiul

expresiei relative a receptorilor PPARα studiul valorilor fibrinogenului a arătat creşterea

acestui reactant de faza acută icircn lotul cu SM comparativ cu lotul martor (P lt0 0001) Icircn

studiul nostru am calculat o corelaţie invers proporţionala (r = - -036 fig 555B) icircntre

nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile şi concentraţia serică a

fibrinogenului Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P = 008) am reţinut

această asociere deoarece am demonstrat că nivelul de expresie relativă al receptorilor

PPARα icircn eozinofile este mai scăzut icircn sindromul metabolic iar sindromul metabolic este

caracterizat printr-un status inflamator cronic status caracterizat şi de creşterea concentraţiei

serice a fibrinogenului De asemenea notam ca această corelaţie negativă se află icircn

concordanţă cu studiile care arata că tratamentul cu agonişti PPARα (fibraţi) determina

scăderea nivelului seric al fibrinogenului contribuind la diminuarea inflamaţiei cronice din

sindromul metabolic şi icircn consecinţă amelioracircnd insulinorezistenţa

LIMITE ȘI DIFICULTĂȚI IcircN CERCETARE

Icircn cadrul Tezei de Doctorat am desfăşurat o cercetare care şi-a propus studierea

expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Recrutarea anamneza şi examinarea

clinică a subiecţilor au fost realizate icircn cadrul Cabinetului de Medicină de Familie CMI Popa

Elena din Iaşi iar determinările hematologice şi biochimice s-au efectuat icircn cadrul

Laboratorului Ambulatorului de Specialitate al Spitalului Universitar ldquoSfacircntul Spiridon din

Iaşi Icircn studiul epidemiologic şi al markerilor inflamatori al sindromului metabolic desfăşurat

au fost incluşi un număr de 1530 de participanţi pe baza liberului consimţămacircnt examinaţi icircn

perioada 01012013 - 31122013 Icircn continuare icircn perioada 1012014 - 28022014 pe baza

criteriilor de includere şi excludere icircn cele două loturi de studiu am investigat un număr de 57

de subiecţi prezentaţi la consultaţie icircn această perioadă şi care au icircndeplinit criteriile de

includere icircn cele două loturi (Lot SM şi Lot Control) constituite pentru evaluarea nivelului de

expresie a receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Explorarea nivelului de expresie

relativă a receptorilor PPARα s-a desfăşurat icircn cadrul Laboratorului de Biologie Moleculară

de pe platforma Institutului Regional de Oncologie Datorită resurselor proprii financiare

limitate trebuie să subliniez că aceasta cercetare nu ar fi fost posibilă fără contribuţia unor

cercetători din domeniul medical care m-au sprijinit necondiţionat atacirct icircn elaborarea

protocolului de lucru cacirct şi icircn efectuarea propriu-zisă a studiului Icircn acest sens menţionăm şi

faptul că pentru studiul receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic am utilizat aparatura

Laboratorului de Biologie Moleculară (care deserveşte icircntreaga Regiune a Moldovei) Pe

această cale mulţumesc personalului Laboratorului de Biologie Moleculară pentru ajutorul

acordat icircn desfăşurarea cercetării doctorale icircn condiţiile icircn care se observa creşterea

numărului de pacienţi care se adresează acestei platforme de cercetare Mulţumesc de

asemenea şi Doamnei Doctor Elena Butoi din cadrul Institutului de Biologie şi Patologie

Moleculară ldquoNicolae Simionescurdquo Bucureşti) pentru donaţia anticorpului secundar anti-

FITC Icircn consecinţă pentru recrutarea unui număr mai mare de participanţi ar fi fost necesară

icircn primul racircnd obţinerea unor resurse financiare suplimentare pentru achiziţia de aparatură şi

reactivi Totuşi numărul subiecţilor recrutaţi este apropiat de numărul subiecţilor raportaţi icircn

cadrul unor granturi de cercetare care aveau ca ţinta studiul expresiei receptorilor PPARα

(212 227 228 231) Rezultatele obţinute continua seria lucrărilor care arata importanta

studiului mecanismelor etiopatogenice ale sindromului metabolic patologie care se afla icircntr-o

continuă creştere La pacienţii cu SM pe lacircngă diminuarea nivelului de expresie a receptorilor

PPARα icircn eozinofile ne aşteptam şi la evidenţierea unor modificări icircn expresia PPARα şi icircn

populaţiile de Ly Mo şi PMN Acest fapt poate fi explicat de utilizarea unor celule provenite

de la pacienţi fără afectare cardiovasculară fără diabet zaharat şi necesită continuarea

studiului pe culturi celulare icircn condiţii de stimulare cu agonişti PPARα deziderat care

impune continuarea investigării expresiei PPARα printr-un grant de cercetare

ORIGINALITATEA ȘI CONTRIBUȚIILE INOVATIVE ALE TEZEI DE

DOCTORAT PERSPECTIVE DE CERCETARE

Evaluarea nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn leucocitele circulante

aduce noi perspective icircn studiul obezităţii şi sindromului metabolic Importanta studiului

expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic derivă din prevalenta crescută a

sindromului metabolic icircn populaţia cercetată la care se adaugă riscul cardiovascular foarte

icircnalt al acestor pacienţi cu implicaţii majore icircn sănătatea publică Rolul receptorilor PPARα

icircn inflamaţie şi aterogeneza este binecunoscut dar studiul nostru este primul care a arătat că

nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα este semnificativ mai scăzut in populatiile

de eozinofile la pacienţii cu SM Această concluzie coroborata cu existenţa unei stracircnse

asocieri intre expresia receptorilor PPARα la nivelul Mo limfocitelor şi PMNlor creeaza

ipoteza existenţei unui mecanism de control diferit al expresiei PPARα la nivelul

eozinofilelor Această cercetare aduce informaţii importante referitoare la mecanismele

proinflamatorii care stau la baza insulinorezistenţei şi riscului cardiometabolic şi impune

continuarea studiului acestor receptori nucleari prin citometrie icircn flux metodă care poate fi

aplicată şi la scara mai largă dacă sunt asigurate resursele materiale necesare cercetării

Cercetarea prin citometrie icircn flux poate fi completată de studiul polimorfismului genei

PPARA şi astfel se pot identifica timpuriu indivizii cu potenţial risc cardiometabolic crescut

Studiul receptorilor PPARα a stabilit conexiuni cu factori proinflamatori şi aterogenetici iar

continuarea cercetării poate aduce şi elemente noi de diagnostic precoce icircn sindromul

metabolic contribuind la icircmbunătăţirea prognosticului acestor pacienţi

CONCLUZII FINALE

1 Aplicarea scorului de SM alături de implementarea algoritmului electronic de diagnostic

contribuie la o prelucrare rapidă eficientă și standardizată a informaţiilor la nivelul

medicinei primare

2 Prevalenţa SM calculată astfel icircn cadrul studiului este crescută (2732) icircn concordanţă

cu datele raportate

3 Controlul factorilor de risc cardiometabolici incluşi icircn SM se poate realiza prin

managementul stilului de viaţă (scăderea greutăţii corporale prin combaterea

sedentarismului şi adoptarea unei diete antiaterogene şi hipocalorice) şi administrarea

terapiei medicamentoase

4 Este necesară adoptarea unei politici de sănătate publică pentru prevenirea creşterii icircn

populaţie a prevalenţei obezităţii şi a diabetului zaharat

5 Noi metode de cercetare icircn domeniul SM axate pe diagnosticarea precoce şi cuantificarea

eficientă a acestuia duce la diminuarea incidenței evenimentelor cardiovasculare majore

6 Sindromul metabolic se caracterizează printr-un status inflamator cronic

7 Valorile Non-HDL-colesterolului şi a raportului de aterogenitate sunt semnificativ mai

mari la pacienţii cu SM

8 Dintre reactanţii de faza acută am observat că valoarea medie a fibrinogenului este mai

crescută icircn lotul cu SM

9 Valorile eozinofilelor sunt crescute icircn sindromul metabolic iar explorarea relaţiei dintre

eozinofile şi obezitate constituie una din direcţiile de studiu actuale ale sindromului

metabolic

10 Evaluarea markerilor inflamatori icircn contextul sindromului metabolic este utilă icircn

evaluarea complexă a a factorilor de risc cardiometabolici

11 Prin metoda citometriei icircn flux am demonstrat prezenta Receptorilor Activaţi de

Inductorii Proliferării Peroxizomilor ndash Alpha (PPARα) icircn toate populaţiile de leucocite

studiate (Mo limfocite PMN eozinofile) atacirct icircn lotul pacienţilor cu SM cacirct şi icircn lotul

martor

12 Utilizacircnd intensitatea medie de fluorescenţă a anticorpilor anti- PPARα am arătat că

nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile este semnificativ mai redus

la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali

13 Acest studiu este primul care a demonstrat existenţa unei scăderi statistic semnificative a

nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofilele pacienţilor cu SM

confirmacircnd cercetările recente care au evidenţiat rolul eozinofilelor şi al receptorilor

PPARα icircn obezitate reglarea inflamaţiei cronice şi aterogeneza

14 Contrar aşteptărilor noastre icircn populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările

efectuate icircn cele două loturi de studiu (cu şi fără sindom metabolic) nu am evidenţiat

diferenţe statistic seminificative icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα la

subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali

15 Icircn populaţiile de Mo limfocite şi polimorfonucleare am observat corelaţii puternice

semnificativ statistic icircntre expresia PPARα icircn aceste tipuri celulare sugeracircnd existenţa

unui mecanism unic de control al inflamaţiei cronice la nivelul acestor celule probabil

diferit de cel din eozinofile

16 La subiecţii cu SM expresia relativă a PPARα icircn Eo este invers asociată cu expresia

receptorului CD36 (receptor al particulelor de ox - LDL şi propus ca un marker precoce al

aterosclerozei) dovedind rolul antiinflamator al receptorilor PPARα la nivel endotelial

17 La pacienţii cu antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială nivelul de

expresie al receptorilor PPARα icircn eozinofile şi Mo este diminuat comparativ cu subiecţii

fără antecedente familiale de hipertensiune arterială Putem spune că studiul efectuat de

noi aduce informaţii importante legate de geneză aterosclerozei şi hipertensiunii arteriale

18 Prin studiul asocierilor dintre receptorii PPARα şi componentele clinice ale sindromului

metabolic am arătat rolul acestor receptori icircn determinismul obezităţii de tip central

nivelul expresiei relative a receptorilor PPARα fiind invers proporţional cu circumferinţa

abdominală

19 Icircn acelaşi timp nivelul de expresie a PPARα icircn sindromul metabolic este asociat pozitiv

cu concentraţia serică a HDL-colesterolului şi invers asociat cu nivelul trigliceridelor

serice dovedind rolul acestor receptori icircn diminuarea procesului inflamator cronic de la

nivel vascular

20 La pacienţii cu SM scăderea expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofile este corelată cu

creşterea unor markeri ai sindromului inflamator cronic cardiometabolic (acid uric

fibrinogen) ilustracircnd importanta receptorilor icircn reglarea status-ului inflamator cronic din

sindromul metabolic

21 Utilizarea metodei flowcitometrice pentru studiul expresiei relative a receptorilor PPARα

icircn leucocite a adus informaţii importante cu privire la mecanismele moleculare de control

implicate icircn patogenia bolilor cardiometabolice icircn concordanţă cu cercetările care descriu

expresia PPAR icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale bronşice

keratinocite)

BIBLIOGRAFIE SELECTIVA

1 Kahn R Metabolic syndrome- what is the clinical usefulness Lancet 2008371(9628)1892-3

2 Reaven GM The metabolic syndrome is this diagnosis necessary Am J Clin Nutr 2006 83(6)1237-7

3 Grundy SM Pre-Diabetes Metabolic Syndrome and Cardiovascular Risk J Am Coll Cardiol 201259(7)

635-43

4 International Diabetes Federation IDF Diabetes Atlas 6th edn International Diabetes Federation Belgium

Brussels 20131-155

5 World Health Organization Global Status Report on Noncommunicable Diseases 2010 World Health

Organization Geneva Switzerland 20111-176

6 Coman AE Petrovanu R Sindromul metabolic in practica de ambulator Editura Pim Iaşi 2009 1-103

7 Grundy SM Becker D Clark LT et alThird Report of the National Cholesterol Education Program (NCEP)

Expert Panel on Detection Evaluation and Treatment of High Blood Cholesterol in Adults (Adult

Treatment Panel III) Final Report Circulation 2002106(25)3143-90

8 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J Metabolic syndrome- a new worldwide definition A Consensus Statement

from the International Diabetes Federation Diabet Med 2006 23(5)469-80

9 KG Alberti KG Eckel RH Grundy SM etal International Diabetes Federation task force on epidemiology

and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart Association World Heart

Federation International Atherosclerosis Society International Association for the study of obesity

Harmonizing the metabolic syndrome a joint interim statement of the International Diabetes Federation task

force on epidemiology and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart

Association World Heart Federation International Atherosclerosis society and International Association

for the study of obesity Circulation 2009120(16)1640-5

10 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J IDF Epidemiology Task Force The metabolic syndrome new

worldwide definition Lancet 2005 366 1059 - 62

11 Oleszczyk M Svab I Seifert B et al Primary healthcare in the developing part of Europe changes and

development in the former Eastern Bloc countries that joined the European Union following 2004 Med Sci

Monit 2009(15)78ndash84

12 Jung U J Choi M S Obesity and Its Metabolic Complications The Role of Adipokines and the

Relationship between Obesity Inflammation Insulin Resistance Dyslipidemia and Nonalcoholic Fatty

Liver Disease Int J Mol Sci 2014rsquo15(4) 6184-223

13 Vanden Heuvel JP Peters JM Peroxisome Proliferators In Ramos K (ed) Cellular and Molecular

Toxicology (Second Edition) Volume 2 New York Elsevier Science Inc 2010 145 - 67

14 Yessoufou A Wahli W Multifaceted roles of peroxisome proliferator-activated receptors (PPARs) at the

cellular and whole organism levels Swiss Med Wkl 2010140w13071 doi104414smw201013071

15 Azhar S Peroxisome proliferator-activated receptors metabolic syndrome and cardiovascular disease

Future Cardiology 20106(5)657-91

16 Andries G Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity

Diabetes and Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(Suppl)24-32

17 Zandbergen F Plutzky J PPARalpha in atherosclerosis and inflammation Biochim Biophys Acta

20071771(8)972-82

18 Straus DS Glass CK Anti-inflammatory actions of PPAR ligands new insights on cellular and molecular

mechanisms Trends Immunol 200728(12)551-8

19 Zlei M Zugun- Eloae F Carasevici E Citometrie icircn flux - Bază şi clinică Icircn Hinescu ME (ed) Citometrie icircn

flux - principii şi aplicaţii clinice Bucureşti Editura Viaţa Medicală Romacircnească 20111-128

20 Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity Diabetes and

Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(9)24-32

21 Woerly G Honda K Loyens M et al Peroxisome proliferator-activated receptors alpha and gamma down-

regulate allergic inflammation and eosinophil activation J Exp Med 2003198(3)411-21

22 Salle-Saumont D Brenuchon C Kanda A et al Peroxisome proliferator-activated receptor alpha regulates

skin inflammation and humoral response in atopic dermatitis J Clin Allergy Immunology 2008 21(4)962-8

23 Schote A Turner J Schiltz J et al Nuclear receptors in human immune cells expression and correlations

Mol Immunolog 200744(6)1436-45

24 DAmore S Vacca M Graziano G et al Nuclear receptors expression chart icircn peripheral blood

mononuclear cells identifies patients with Metabolic Syndrome Biochim Biophys Acta

20131832(12)2289-301

25 Uthurralt J Gordish-Dressman H Bradbury M T et al PPARalpha L162V underlies variation in serum

triglycerides and subcutaneous fat volume in young males BMC Med Genet 2007855

26 Hiukka A Leinonen ES Jauhiainen M et al Long-term effects of fenofibrate on VLDL and HDL

subspecies icircn participants with type 2 diabetes mellitus Diabetologia 2007 50(10)2067-75

27 Robins SJ Rubins HB Faas FH et alInsulin resistance and cardiovascular events with low HDL

cholesterol The Veterans Affairs HDL Intervention Trial (VA-HIT) Diabetes Care 2003 26(5)1513-7

28 Devaraj S Siegel D Jialal I Statin Therapy in Metabolic Syndrome and Hypertension Post-JUPITER

What is the Value of CRP Curr Atheroscler Rep 2011 13(1) 31ndash42

29 Imperatore G Riccardi G Iovino C et al Plasma Fibrinogen A New Factor of the Metabolic Syndrome A

population-based study Diabetes Care 19982 1(4)649-54

30 Krysiak R Gdula-Dymek A Bachowski R Okopien B Pleiotropic effects of atorvastatin and fenofibrate

in metabolic syndrome and different types of pre-diabete Diabetes Care 201033(10)2266-70

31 Hermans MP Impact of Fenofibrate on Type 2 Diabetes Patients with Features of the Metabolic Syndrome

Subgroup Analysis From FIELD Curr Cardiol Rev 20106(2)112-8

32 Silverstein R Inflammation atherosclerosis and arterial thrombosis Role of the scavenger receptor CD36

Cleveland Clinic Journal of Medicine 200976(Suppl 2)S27-S30

33 Hăncu N Obezitatea In Vereşiu IA (ed) Diabetul zaharat nutritia si bolile metabolice Volume 2 Editura

Echinox Cluj- Napoca 2010 1-15

Lista lucrări publicate

1 Elena Popa Maria Maidaniuc Agnes Bacusca Alamir Diaa Rodica Petrovanu Adorata Elena

Coman Disfuncţia endotelială ndash de la mecanisme moleculare la cuantifi care şi tratament icircn practica

medicală Practica Medicală 20149(3) 109-14

2 Elena Popa Agnes Bacusca Alamir Diaa Maria Maidaniuc Rodica Petrovanu Adorata Elena Coman

The function of insulin receptor (IRF) in evolution of obesity correlation with adipocytes diameters

Archives of the Balkan Medical Union 201449(3) 275-9

3 Elena Popa Florin Zugun-Eloae Mihaela Zlei Daniela Jitaru Oana Maria Pintilie Adorata Elena

Coman Maria Traian Didona Anca Ungureanu Eugen Carasevici - acceptata pentru numarul 42014

Flow cytometry analysis of PPAR-alpha receptors in metabolic syndrome) Revista Romană de

Medicină de Laborator(RRLM-D-14-00034R1- adeverinţa ataşată

Page 22: REZUMAT TEZĂ DE DOCTORAT - umfiasi.ro Doctorat/rezumat... · universitatea de medicinĂ Şi farmacie “grigore t. popa” iaŞi facultatea de medicinĂ rezumat tezĂ de doctorat

Referitor la lotul SM 92 din valorile MFI a Ac anti- CD36 s-au icircncadrat icircn

intervalul Media plusmn 2 DS (figura 542) iar pentru lotul martor peste 90 dintre acestea icircn

Media plusmn 2 DS (figura 543)

Figura 542 Lot SM

Variaţia MFI anti-CD36 icircn Mo

Număr pacienţi 26

Minimum 2664

Maximum 6933

Media 429034

Deviaţia Standard 109051

Figura 543 Lot Non -SM

Variaţia MFI anti- CD36 icircn Mo

Număr 31

Minimum 81700

Maximum 616800

Media 370377

Deviaţia Standard 125514

Comparacircnd subiecţii cu SM cu cei din lotul normal am constatat o tendinţă de creştere

a expresiei CD36 icircn lotul cu SM((t - Test P= 0067)

MFI anti - CD36 Lot Non-SM

Număr 31

Mediana 3628

Percentila 25 2737

Percentila 75 4533

MFI anti - CD36 Lot SM

Număr 26

Mediana 4110

Percentila 25 3462

Percentila 75 4690

Figura 544 Comparaţie icircntre cel două loturi privind MFI anti - CD36 icircn Mo

Referindu-ne la subiecţii cu AHC de HTA am observat o tendinţă de creştere a

valorilor MFI anti-CD36 comparativ cu cei care nu au avut AHC de HTA (t - Test P = 0 08)

AHC HTA

Număr 22

Mediana 442800

Percentila 25 355275

Percentila 75 519475

AHC HTA absenţe

Număr 35

Mediana 377400

Percentila 25 316900

Percentila 75 443400

Figura 545 Comparaţie icircntre expresia CD36 icircn Mo funcţie de AHC de HTA

Nu s-au calculat diferenţe semnificative icircntre nivelul de expresie al receptorilor

PPARα icircn Mo subiecţilor cu AHC de dislipidemie atunci cacircnd aceştia au fost comparaţi cu

subiecţii fără AHC de dislipidemie (t - Test P=031)

Corelaţii icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα si CD36

Studiind valorile intensităţii medii de fluorescenţă a Ac anti-PPARα icircn Mo Ly şi

PMN am observat că nivelul de expresie celularatilde a PPARα icircn Mo Ly şi PMN sunt corelate

puternic pozitiv atacirct icircn lotul SM cacirct şi icircn lotul martor(fig547 548)

1 6 11 16 21 26 31

0

1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

8000

Pacienti

MFI a

nti-CD

36

42903

21093

64714

10188

75619

LCI

Media

LCS1 6 11 16 21 26 31 36

-1000

0

1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

8000

MFI a

nti- C

D36

37038

11935

62141

-616

74692Media + 2 DS

Media

Media - 2 DS

3200

3400

3600

3800

4000

4200

4400

4600

4800

Lot SM Lot Non-SM

P = 00676

MFI

anti-

CD36

3400

3600

3800

4000

4200

4400

4600

4800

5000

DA NU

AHC HTA

P = 008

Figura 547 Studiul relatiilor dintre

receptorii PPARα icircn SM A Mo vs PMN B Mo vs Ly

C PMN vs Ly Graficul ilustrează coeficienţii r P dreapta de

regresie (linia centrala) intervalul de icircncredere

95 şi intervalul de predicţie 95

Figura 548 Corelaţii icircntre receptorii PPARα icircn lotul

martor

A Mo vs PMN

B Mo vs Ly

C PMN vs Ly

Tot pentru lotul SM cacircnd am evaluat relaţia dintre nivelul de expresie relativă a

receptorilor PPARα icircn Eo şi nivelul de expresie relativa a receptorilor CD 36 am obţinut o

corelaţie negativă (r = - 05 P = 001) (fig 549 A)

50 100 150 200 250 300 350 50

100

150

200

250

300

350

400

450

500

PPARα Ly

PPARα PMN

y = 56641 + 1159 x r = 086 P lt 0001

C

50 100 150 200 250 300 350 400 0

50

100

150

200

250

300

350

PPARα Mo

PPARα Ly

y = 36665 + 0607 x r = 090 P lt 0001

B

150 200 250 300 350 400 450 0

50 100 150 200 250 300 350 400 450 500

PPARα PMN

PPARα Mo

y = 2505 + 0879 x r = 081 P lt 0001

A

50 100 150 200 250 300 350

50 100 150 200 250 300 350 400 450 500

PPARα Ly

PPARα PMN

y = 95668 + 0919 x r = 081 P lt 0001

C

100 150 200 250 300 350 400

0

50

100

150

200

250

300

350

400

PPARα Mo

PPARα Ly

y = -7503 + 0829 x r = 079 P lt 0001

B

100 150 200 250 300 350 400

50

100

150

200

250

300

350

400

450

500

PPARα Mo

PPARα PMN

y = 61384 + 0882 r = 074 P lt 0001

A

Figura 549 Corelaţii icircntre expresia PPARα icircn Eo şi alte tipuri de receptori investigaţi A PPARα Eo şi CD 36 (Lot SM) B PPARα Eo şi PPARα Mo( Lot Non-SM)

Icircn lotul martor am identificat o asociere moderată pozitivă (r = 038 P = 0033) icircntre

nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Eo şi Mo (figura 549B) corelaţie absentă icircn

lotul pacienţilor cu SM

Corelaţii dintre receptorii studiaţi şi componentele sindromului metabolic

Icircn lotul de control analiza statistică a relevat faptul că icircntre circumferinţa

abdominală (CA ) şi nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Mo Ly şi PMN există o

corelaţie inversă adică scăderea expresiei PPARα la nivelul acestor populatii celulare ar fi

icircnsoţită de creşterea CA (figura 550

Figura 550Corelaţii dintre receptorii

PPARα si CA A Mo B Ly C PMN

La pacienţii cu SM am notat o corelatie moderată negativă statistic semnificativă

icircntre TG şi valorile MFI a Ac anti- PPARα icircn Mo şi Ly( fig 551)

150 200 250 300 350 400 450 50

60

70

80

90

100

110

PPARα PMN

CA r = - 040 P = 0024

C

50 100 150 200 250 300 350 50

60

70

80

90

100

110

PPARα Ly

CA r = - 046 P = 0009

B

50 100 150 200 250 300 350 400 50

60

70

80

90

100

110

PPARα Mo

CA r = - 042 P = 0017

A

50 100 150 200 250 300 350 400 500

1000

1500

2000

2500

3000

PPARα Mo

PPARα Eo

r = 038 P = 0033

B

0 500 1000 1500 2000 2500 1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

8000

PPARα Eo

CD36

r = 050 P = 0010

A

Figura 551 Lot SM Corelaţie icircntre expresia PPARα şi TG (A Mo B Ly)

Analizand corelatia dintre receptorii CD36 si valorile TA la pacientii cu SM am observat

o asociere pozitivă asteptată intre TAD si nivelul de expresie al receptorilor CD36 (fig 552)

Figura 552 Lot SM Corelaţii icircntre expresia

receptorilor CD36 şi valorile tensiunii arteriale

diastolice

Studiind corelaţiile dintre receptorii PPARα şi HDL-col la subiecţii din lotul martor am

notat o asociere pozitivă icircntre expresia PPARα icircn Mo şi Ly cu HDL-col (fig 553)

Figura 553 Lot martor Corelaţii icircntre HDL-col şi expresia PPARα icircn Mo(A) Ly(B)

Icircn lotul normal am evidenţiat corelaţii pozitive moderate dar semnificative statistic icircntre

CA şi valorile TAS (r = 062 P lt 0001) respectiv TAD (r = 050 P=0004) precum şi icircntre

CA şi glicemia subiecţilor normali (r = 052 P = 0003) Aceste date icircmpreună cu relaţia

invers proporţională identificată icircntre HDL-col şi CA (r = 050 P = 001) susţin validitatea

acestui studiu Icircn lotul subiecţilor cu SM am observat o corelaţie moderat pozitivă icircntre

expresia PPARα icircn populaţiiile de Mo şi Eo şi concentraţia a HDL-col (fig 554)

B

100 150 200 250 300 350 20

30

40

50

60

70

80

90

100

PPARα Ly

HDL-col-(mgdl)

r = 036 P = 0046

A

150 200 250 300 350 400 20

30

40

50

60

70

80

90

100

PPARα Mo

HDL-col-(mgd)l

r = 035 P = 005

70 75 80 85 90 95 100 1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

8000

TAD (mmHg)

CD36

r = 048 P = 0013

B

50 100 150 200 250 300 350 -100

0

100

200

300

400

500

PPARα Ly

TG(mgdl)

r = - 042 P = 003

A

50 100 150 200 250 300 350 400 -100

0

100

200

300

400

500

PPARα Mo

TG ( mgdl) r =- 0 43 P = 0027

Figura 554 Corelaţii icircn SM icircntre HDL-col şi expresia PPARα icircn Mo (A) şi Eo(B)

Corelaţii icircntre nivelul de expresie relativă a PPARα şi markeri ai disfuncţiei

endoteliale şi inflamaţiei cronice

Deşi nu a icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică am reţinut corelaţia invers

proporţională (r = - 0331 P = 006) dintre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα

icircn PMN şi concentraţia serică a Non-HDL-colesterolului

Studiind relaţiile dintre parametri icircn lotul de pacienţi cu SM am observat o corelaţie

moderată invers proporţională icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Eo şi

acidul uric seric (figura 555 A) corelaţie absentă la subiecţii fără SM

Figura 555 Lot SM corelaţia dintre expresia PPARα icircn Eo şi acidul uric (A) respectiv

PPARα şi fibrinogen (B)

Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P=008) am notat pentru

pacienţii cu SM corelaţia invers proporţională dintre expresia PPARα icircn Eo şi concentraţia

serică a fibrinogenului ( figura 555B)

V5 Discuţii

Icircn cadrul lucrării de doctorat am studiat nivelul de expresie relativă a PPARα icircn

leucocitele pacienţilor cu SM comparativ cu cea a subiecţilor normali Expresia PPARα a fost

studiată icircn paralel cu cea a CD36 glicoproteină exprimată pe suprafaţa a numeroase celule

din organismul uman inclusiv pe cea a Mo şi macrofagelor Prin funcţia sa de receptor pentru

particulele oxidate de LDL CD36 cunoscut ca bdquoscavenger receptorrdquo de clasa B sau

bdquotrombospodin receptorrdquo contribuie la dezvoltarea inflamaţiei de la nivel endotelial şi

formarea plăcii de ateroscleroză Referitor la studiul PPARα icircn Eo icircn sindromul metabolic

menţionăm că studiul nostru este primul care arată că nivelul de expresie a proteinei PPARα

icircn Eo măsurat prin citometrie icircn flux este semnificativ mai redus la pacienţii care sunt

diagnosticaţi cu acest sindrom De asemenea icircn lotul cu SM cercetat icircn cadrul studiului

receptorilor PPARα numărul Eo circulante a fost semnificativ mai crescut la pacienţii cu SM

B

0 500 1000 1500 2000 2500 200

250

300

350

400

450

PPARα Eo o

Fibrinogen mgdl

r =- 036 P = 008

0 500 1000 1500 2000 2500 1 2 3 4 5 6 7 8 9

10 11

PPARα Eo_

Acid uric(mgdl) r = 048 P = 0014 A

0 500 1000 1500 2000 2500 10

20

30

40

50

60

70

80

PPARα Eo

HDL(mgdl)

r = 044 P = 0024

B

100 150 200 250 300 350 400 10

20

30

40

50

60

70

80

PPARα Mo

HDL( mgdl)

r = 046 P = 0019

A

(P = 003) Aceste constatări conduc la ipoteza că Eo joacă un rol special icircn mecanismele

patogenice declanşate icircn sindromul metabolic şi că receptorii PPARα sunt importanţi icircn

implicarea Eo icircn obezitate şi insulinorezistenţă Creşterea numărului de Eo circulante este

urmată de eliberarea mediatorilor proinflamatori iar reducerea expresiei PPARα icircn Eo

determină perturbarea mecanismelor de control al inflamaţiei cu exacerbarea cascadei

proinflamatorii Consecutiv se agravează disfuncţia endotelială şi se accelerează progresia

leziunilor de ateroscleroză Extrapolacircnd aceste ipoteze putem spune că asocierea raportată

dintre boala ischemică coronariană şi Eo poate fi şi consecinţa exacerbării cascadei

proinflamatorii de la nivel vascular produsă datorită scăderii expresiei PPARα icircn Eo iar

creşterea numărului de Eo circulante poate reprezenta o adaptare a organismului uman care

icircncearcă să suplinească deficitul de receptori PPARα Analizacircnd curba ROC pentru

intensităţile medii de fluorescenţă determinate pentru anticorpii anti- PPARα icircn Eo am

obţinut pentru acest biomarker o sensibilitate a testului de 565 şi o specificitate de 778

pentru un punct de cut-off de 1533 ( figura 536 ) Deşi aria AUC (Aria under the curve) egală

cu 0663 icircncadrează acest test ca avacircnd o acurateţe redusă observăm că că această valoare

este apropiată de determinările AUC pentru alţi factori (fibrinogen raport de aterogenitate

acid uric non- HDL-colesterol) cunoscuţi ca fiind implicaţi icircn aterogeneză şi inflamaţia

cronică (figura 431) Aceste remarci alături de faptul că icircn studiul receptorilor PPARα icircn

leucocite am inclus subiecţi la primul diagnostic de SM creează premisa integrării

determinării expresiei relative a receptorilor PPARα icircn diagnosticul complex al sindromului

metabolic Putem spune că icircn final studiul expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofilele

circulante se dovedește a fi util icircn diagnosticul precoce la nivel molecular al SM permiţacircnd

identificarea timpurie a unor indivizi cu risc cardiometabolic crescut Astfel intervenţia

precoce asupra subiecţilor cu deficit de PPARα icircn Eo contribuie la managementul eficient al

afecţiunilor degenerative icircn care inflamaţia cronică icircndeplineşte un rol primordial Referitor

la populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările efectuate prin citometrie de flux nu au

arătat existenţa unor diferenţe statistice icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα

la subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali Rezultatele noastre pot fi

consecinţa caracteristicilor loturilor studiate (icircn studiul nostru au fost incluşi subiecţi recrutaţi

la primul diagnostic de SM şi icircn absenţa stimulării receptorilor PPARα cu droguri agoniste

PPARα) dar icircn acelaşi timp pot apare diferenţe datorită metodei utilizate (231 232 233)

Făcacircnd o paralelă cu un studiu publicat icircn 2013 icircn Europa (231) care a arătat creşterea

nivelului de expresie al PPARα icircn Ly şi Mo observăm că deşi numărul de subiecţi a fost

aproximativ egal (57 participanţi icircn studiul nostru 60 icircn studiul DAmore) subiecţii icircn studiul

amintit au fost recrutaţi dintr-o clinică cu profil medical la primul diagnostic de SM icircn timp

ce metoda utilizată a fost PCR (Polymerase Chain Reaction) mult mai fidelă decacirct citometria

icircn flux icircn studiul receptorilor nucleari De asemenea DAmore nu investighează expresia

PPARα icircn Eo şi PMN icircn cercetare fiind incluse doar celulele CD14+ (predominant Mo) şi

CD14- (predominant Ly) Deşi nu am obţinut diferenţe statistic semnificative icircntre cele două

loturi referitoare la nivelul de expresie relativă a PPARα icircn Mo Ly şi PMN am observat

corelaţii puternice semnificative statistic icircntre expresia receptorilor PPARα icircn aceste tipuri

celulare Rezultatele obţinute sugerează existenţa unui mecanism diferit molecular de control

icircn eozinofile care reglează cantitatea de proteină PPARα icircn eozinofile versus alte tipuri de

leucocite (la pacienţii cu SM) şi acest lucru este icircn concordanţă cu cercetările care descriu

expresia PPARα mRNA icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale

bronşice keratinocite) Studiind prin citometrie de flux nivelul de expresie relativă a

receptorului CD36 la nivelul Mo am arătat prezenţa acestuia icircn Mo tuturor subiecţilor

investigaţi Analizacircnd valorile intensităţii medii de fluorescenţă a CD36 icircn loturile studiate

am observat o tendinţă de creştere la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali

confirmacircnd implicarea receptorului CD36 icircn patogeneza acestuia Referitor la expresia

receptorului CD36 rezultatele obţinute sunt icircn consens cu studii anterioare care au arătat

creşterea expresiei CD36 la pacienţii cu SM şi diabet zaharat Astfel pe lacircngă diferenţa icircn

expresia CD36 s-au raportat şi corelaţii inverse icircntre expresia proteinei CD36 şi nivelul

adiponectinei Acelaşi studiu a evidenţiat o corelaţie pozitivă intre expresia CD36 cu expresia

receptorilor PPAR gamma relaţia cu PPARα nefiind investigată

Analiza de subgrup a relaţiilor dintre componentele SM și elementele moleculare

proinflamatorii studiate a relevat prezenţa unor asocieri semnificativ statistice icircntre acestea

Se argumentează astfel că veridicitatea studiului este susţinută de interdependenţele statistice

ale componentelor SM Determinarea coeficientului de corelaţie Icircn studiul nostru nivelul de

expresie relativă a PPARα s-a corelat moderat negativ (figura 550) cu CA a subiecţilor din

lotul normal pentru populaţiile celulare de Mo (r = - 0420 P = 001) Ly (r = - 046 P =

0009) şi PMN (r = - 040 P = 0024) date care sunt icircn concordanţă cu studiile care arată

rolul PPARα icircn furnizarea energiei prin beta-oxidarea acizilor graşi Icircn acelaşi timp icircn lotul

pacienţilor cu SM nu am identificat prezenţa unei asocieri icircntre nivelul de expresie relativă a

PPARα şi valoarea măsurată a CA Asocierea dintre expresia relativă a PPARα cu obezitatea

de tip central completează datele existente referitoare la reglarea homeostaziei energetice

conturacircnd un mecanism de control deficitar al aportului caloric al SM Icircn condiţiile icircn care

rezultatele obţinute prin metoda citometriei icircn flux nu au arătat existenţa unei corelaţii intre

expresia PPARα şi CA la pacienţii cu SM considerăm că ar fi necesar studiul

polimorfismului genei PPARA care ar putea aduce informaţii importante cu privire la

implicarea acestor receptori icircn apariţia obezităţii de tip central Subliniem acest lucru deoarece

obezitatea este o boală plurifactorială icircn care pe lacircngă factorii ereditari sunt implicaţi factori

de mediu psihologici şi sociali (245) Existenţa unei componente genetice a aterosclerozei

este legată şi de prezenţa unor variante ale genei PPARA asociate cu creşterea incidenţei bolii

cardiovasculare (82) şi a SM (249) Icircn studiul nostru am constatat o scădere statistic

semnificativă a nivelului expresiei relative a receptorilor PPARα icircn Eo la subiecţii cu

antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială comparativ cu subiecţii fără istoric

familial de hipertensiune (figura 537) Deşi diferenţele calculate icircntre loturile studiate nu au

icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică la subiecţii care au declarat prezenţa

antecedentelor familiale de hipertensiune arterială remarcăm o tendinţă de scădere a

intensităţii medii de fluorescenţă pentru Ac anti-PPARα la nivelul Mo (figura 515 P = 006

) icircn timp ce expresia relativă a CD36 icircnregistrează o creştere la acesti subiecţi (figura 545 P

= 008) Icircn contextul riscului cardiovascular foarte icircnalt al pacienţilor cu SM amintim şi

existenţa corelaţiei pozitive dintre valorile tensiunii arteriale diastolice şi expresia relativă a

receptorului CD36 (r = 0483 P = 0013) Această constatare este icircn consens cu studiile care

au arătat că forma solubilă circulantă a CD36 este asociată cu factorii de risc cardiovasculari

fiind propusă ca un marker precoce al aterosclerozei Activarea PPARα este asociată cu

modularea metabolismului lipidic iar agoniştii PPARα sunt utilizaţi icircn mod curent pentru

tratamentul dislipidemiei Sub acţiunea agoniştilor PPARα se obţine o icircmbunătăţire a funcţiei

endoteliale şi a parametrilor reologici funcţiile pleiotropice ale agoniştilor PPARα fiind

dovedite icircn trialuri clinice controlate Icircn populaţiile de Mo şi Ly la pacienţii cu SM

cercetarea noastră a evidenţiat o asociere negativă icircntre nivelul de expresie relativă a

receptorilor PPARα şi concentraţia TG serice (figura 551) Astfel scăderea expresiei

receptorilor PPARα este asociată cu creşterea nivelului TG serice contribuind la profilul

lipidic aterogen din SM Icircn conformitate cu literatura de specialitate icircn studiul efectuat prin

metoda citometriei icircn flux am găsit prezenţa asocierii icircntre nivelul de expresie al PPARα şi

HDL-colesterol Corelaţia pozitivă dintre nivelul de expresie relativă PPARα şi concentraţia

HDL-colesterolului a fost observată icircn lotul martor icircn populaţiile de Mo (r = 035 P = 005)

şi Ly ( r = 036 P = 004) (figura 553) susţinacircnd faptul că stimularea receptorilor PPARα

este legată de creşterea nivelului seric al lipoproteinelor cu densitate crescută La pacienţii cu

SM corelaţia dintre expresia PPARα şi HDL-colesterol a fost evidenţiată icircn populaţiile de Mo

(r = 046 P = 0019) şi eozinofile (r = 044 P = 0024) Se desprinde concluzia că icircn

sindromul metabolic scăderea concentraţiei HDL-colesterol este legată de diminuarea

nivelului de expresie relativă a receptorilor nucleari PPARα icircntărind afirmaţiile legate de

rolul acestor receptori icircn progresia bolilor cardiovasculare Studiind reactanţii de fază acută

analiza statistică a relevat o diferenţă semnificativă din punct de vedere statistic icircntre valorile

fibrinogenului la pacienţii cu SM atunci cacircnd au fost comparaţi cu subiecţii fără SM

(Capitolul IV4 P lt0 001 figura 427A) De asemenea icircn Capitolul V dedicat studiul

expresiei relative a receptorilor PPARα studiul valorilor fibrinogenului a arătat creşterea

acestui reactant de faza acută icircn lotul cu SM comparativ cu lotul martor (P lt0 0001) Icircn

studiul nostru am calculat o corelaţie invers proporţionala (r = - -036 fig 555B) icircntre

nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile şi concentraţia serică a

fibrinogenului Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P = 008) am reţinut

această asociere deoarece am demonstrat că nivelul de expresie relativă al receptorilor

PPARα icircn eozinofile este mai scăzut icircn sindromul metabolic iar sindromul metabolic este

caracterizat printr-un status inflamator cronic status caracterizat şi de creşterea concentraţiei

serice a fibrinogenului De asemenea notam ca această corelaţie negativă se află icircn

concordanţă cu studiile care arata că tratamentul cu agonişti PPARα (fibraţi) determina

scăderea nivelului seric al fibrinogenului contribuind la diminuarea inflamaţiei cronice din

sindromul metabolic şi icircn consecinţă amelioracircnd insulinorezistenţa

LIMITE ȘI DIFICULTĂȚI IcircN CERCETARE

Icircn cadrul Tezei de Doctorat am desfăşurat o cercetare care şi-a propus studierea

expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Recrutarea anamneza şi examinarea

clinică a subiecţilor au fost realizate icircn cadrul Cabinetului de Medicină de Familie CMI Popa

Elena din Iaşi iar determinările hematologice şi biochimice s-au efectuat icircn cadrul

Laboratorului Ambulatorului de Specialitate al Spitalului Universitar ldquoSfacircntul Spiridon din

Iaşi Icircn studiul epidemiologic şi al markerilor inflamatori al sindromului metabolic desfăşurat

au fost incluşi un număr de 1530 de participanţi pe baza liberului consimţămacircnt examinaţi icircn

perioada 01012013 - 31122013 Icircn continuare icircn perioada 1012014 - 28022014 pe baza

criteriilor de includere şi excludere icircn cele două loturi de studiu am investigat un număr de 57

de subiecţi prezentaţi la consultaţie icircn această perioadă şi care au icircndeplinit criteriile de

includere icircn cele două loturi (Lot SM şi Lot Control) constituite pentru evaluarea nivelului de

expresie a receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Explorarea nivelului de expresie

relativă a receptorilor PPARα s-a desfăşurat icircn cadrul Laboratorului de Biologie Moleculară

de pe platforma Institutului Regional de Oncologie Datorită resurselor proprii financiare

limitate trebuie să subliniez că aceasta cercetare nu ar fi fost posibilă fără contribuţia unor

cercetători din domeniul medical care m-au sprijinit necondiţionat atacirct icircn elaborarea

protocolului de lucru cacirct şi icircn efectuarea propriu-zisă a studiului Icircn acest sens menţionăm şi

faptul că pentru studiul receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic am utilizat aparatura

Laboratorului de Biologie Moleculară (care deserveşte icircntreaga Regiune a Moldovei) Pe

această cale mulţumesc personalului Laboratorului de Biologie Moleculară pentru ajutorul

acordat icircn desfăşurarea cercetării doctorale icircn condiţiile icircn care se observa creşterea

numărului de pacienţi care se adresează acestei platforme de cercetare Mulţumesc de

asemenea şi Doamnei Doctor Elena Butoi din cadrul Institutului de Biologie şi Patologie

Moleculară ldquoNicolae Simionescurdquo Bucureşti) pentru donaţia anticorpului secundar anti-

FITC Icircn consecinţă pentru recrutarea unui număr mai mare de participanţi ar fi fost necesară

icircn primul racircnd obţinerea unor resurse financiare suplimentare pentru achiziţia de aparatură şi

reactivi Totuşi numărul subiecţilor recrutaţi este apropiat de numărul subiecţilor raportaţi icircn

cadrul unor granturi de cercetare care aveau ca ţinta studiul expresiei receptorilor PPARα

(212 227 228 231) Rezultatele obţinute continua seria lucrărilor care arata importanta

studiului mecanismelor etiopatogenice ale sindromului metabolic patologie care se afla icircntr-o

continuă creştere La pacienţii cu SM pe lacircngă diminuarea nivelului de expresie a receptorilor

PPARα icircn eozinofile ne aşteptam şi la evidenţierea unor modificări icircn expresia PPARα şi icircn

populaţiile de Ly Mo şi PMN Acest fapt poate fi explicat de utilizarea unor celule provenite

de la pacienţi fără afectare cardiovasculară fără diabet zaharat şi necesită continuarea

studiului pe culturi celulare icircn condiţii de stimulare cu agonişti PPARα deziderat care

impune continuarea investigării expresiei PPARα printr-un grant de cercetare

ORIGINALITATEA ȘI CONTRIBUȚIILE INOVATIVE ALE TEZEI DE

DOCTORAT PERSPECTIVE DE CERCETARE

Evaluarea nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn leucocitele circulante

aduce noi perspective icircn studiul obezităţii şi sindromului metabolic Importanta studiului

expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic derivă din prevalenta crescută a

sindromului metabolic icircn populaţia cercetată la care se adaugă riscul cardiovascular foarte

icircnalt al acestor pacienţi cu implicaţii majore icircn sănătatea publică Rolul receptorilor PPARα

icircn inflamaţie şi aterogeneza este binecunoscut dar studiul nostru este primul care a arătat că

nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα este semnificativ mai scăzut in populatiile

de eozinofile la pacienţii cu SM Această concluzie coroborata cu existenţa unei stracircnse

asocieri intre expresia receptorilor PPARα la nivelul Mo limfocitelor şi PMNlor creeaza

ipoteza existenţei unui mecanism de control diferit al expresiei PPARα la nivelul

eozinofilelor Această cercetare aduce informaţii importante referitoare la mecanismele

proinflamatorii care stau la baza insulinorezistenţei şi riscului cardiometabolic şi impune

continuarea studiului acestor receptori nucleari prin citometrie icircn flux metodă care poate fi

aplicată şi la scara mai largă dacă sunt asigurate resursele materiale necesare cercetării

Cercetarea prin citometrie icircn flux poate fi completată de studiul polimorfismului genei

PPARA şi astfel se pot identifica timpuriu indivizii cu potenţial risc cardiometabolic crescut

Studiul receptorilor PPARα a stabilit conexiuni cu factori proinflamatori şi aterogenetici iar

continuarea cercetării poate aduce şi elemente noi de diagnostic precoce icircn sindromul

metabolic contribuind la icircmbunătăţirea prognosticului acestor pacienţi

CONCLUZII FINALE

1 Aplicarea scorului de SM alături de implementarea algoritmului electronic de diagnostic

contribuie la o prelucrare rapidă eficientă și standardizată a informaţiilor la nivelul

medicinei primare

2 Prevalenţa SM calculată astfel icircn cadrul studiului este crescută (2732) icircn concordanţă

cu datele raportate

3 Controlul factorilor de risc cardiometabolici incluşi icircn SM se poate realiza prin

managementul stilului de viaţă (scăderea greutăţii corporale prin combaterea

sedentarismului şi adoptarea unei diete antiaterogene şi hipocalorice) şi administrarea

terapiei medicamentoase

4 Este necesară adoptarea unei politici de sănătate publică pentru prevenirea creşterii icircn

populaţie a prevalenţei obezităţii şi a diabetului zaharat

5 Noi metode de cercetare icircn domeniul SM axate pe diagnosticarea precoce şi cuantificarea

eficientă a acestuia duce la diminuarea incidenței evenimentelor cardiovasculare majore

6 Sindromul metabolic se caracterizează printr-un status inflamator cronic

7 Valorile Non-HDL-colesterolului şi a raportului de aterogenitate sunt semnificativ mai

mari la pacienţii cu SM

8 Dintre reactanţii de faza acută am observat că valoarea medie a fibrinogenului este mai

crescută icircn lotul cu SM

9 Valorile eozinofilelor sunt crescute icircn sindromul metabolic iar explorarea relaţiei dintre

eozinofile şi obezitate constituie una din direcţiile de studiu actuale ale sindromului

metabolic

10 Evaluarea markerilor inflamatori icircn contextul sindromului metabolic este utilă icircn

evaluarea complexă a a factorilor de risc cardiometabolici

11 Prin metoda citometriei icircn flux am demonstrat prezenta Receptorilor Activaţi de

Inductorii Proliferării Peroxizomilor ndash Alpha (PPARα) icircn toate populaţiile de leucocite

studiate (Mo limfocite PMN eozinofile) atacirct icircn lotul pacienţilor cu SM cacirct şi icircn lotul

martor

12 Utilizacircnd intensitatea medie de fluorescenţă a anticorpilor anti- PPARα am arătat că

nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile este semnificativ mai redus

la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali

13 Acest studiu este primul care a demonstrat existenţa unei scăderi statistic semnificative a

nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofilele pacienţilor cu SM

confirmacircnd cercetările recente care au evidenţiat rolul eozinofilelor şi al receptorilor

PPARα icircn obezitate reglarea inflamaţiei cronice şi aterogeneza

14 Contrar aşteptărilor noastre icircn populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările

efectuate icircn cele două loturi de studiu (cu şi fără sindom metabolic) nu am evidenţiat

diferenţe statistic seminificative icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα la

subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali

15 Icircn populaţiile de Mo limfocite şi polimorfonucleare am observat corelaţii puternice

semnificativ statistic icircntre expresia PPARα icircn aceste tipuri celulare sugeracircnd existenţa

unui mecanism unic de control al inflamaţiei cronice la nivelul acestor celule probabil

diferit de cel din eozinofile

16 La subiecţii cu SM expresia relativă a PPARα icircn Eo este invers asociată cu expresia

receptorului CD36 (receptor al particulelor de ox - LDL şi propus ca un marker precoce al

aterosclerozei) dovedind rolul antiinflamator al receptorilor PPARα la nivel endotelial

17 La pacienţii cu antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială nivelul de

expresie al receptorilor PPARα icircn eozinofile şi Mo este diminuat comparativ cu subiecţii

fără antecedente familiale de hipertensiune arterială Putem spune că studiul efectuat de

noi aduce informaţii importante legate de geneză aterosclerozei şi hipertensiunii arteriale

18 Prin studiul asocierilor dintre receptorii PPARα şi componentele clinice ale sindromului

metabolic am arătat rolul acestor receptori icircn determinismul obezităţii de tip central

nivelul expresiei relative a receptorilor PPARα fiind invers proporţional cu circumferinţa

abdominală

19 Icircn acelaşi timp nivelul de expresie a PPARα icircn sindromul metabolic este asociat pozitiv

cu concentraţia serică a HDL-colesterolului şi invers asociat cu nivelul trigliceridelor

serice dovedind rolul acestor receptori icircn diminuarea procesului inflamator cronic de la

nivel vascular

20 La pacienţii cu SM scăderea expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofile este corelată cu

creşterea unor markeri ai sindromului inflamator cronic cardiometabolic (acid uric

fibrinogen) ilustracircnd importanta receptorilor icircn reglarea status-ului inflamator cronic din

sindromul metabolic

21 Utilizarea metodei flowcitometrice pentru studiul expresiei relative a receptorilor PPARα

icircn leucocite a adus informaţii importante cu privire la mecanismele moleculare de control

implicate icircn patogenia bolilor cardiometabolice icircn concordanţă cu cercetările care descriu

expresia PPAR icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale bronşice

keratinocite)

BIBLIOGRAFIE SELECTIVA

1 Kahn R Metabolic syndrome- what is the clinical usefulness Lancet 2008371(9628)1892-3

2 Reaven GM The metabolic syndrome is this diagnosis necessary Am J Clin Nutr 2006 83(6)1237-7

3 Grundy SM Pre-Diabetes Metabolic Syndrome and Cardiovascular Risk J Am Coll Cardiol 201259(7)

635-43

4 International Diabetes Federation IDF Diabetes Atlas 6th edn International Diabetes Federation Belgium

Brussels 20131-155

5 World Health Organization Global Status Report on Noncommunicable Diseases 2010 World Health

Organization Geneva Switzerland 20111-176

6 Coman AE Petrovanu R Sindromul metabolic in practica de ambulator Editura Pim Iaşi 2009 1-103

7 Grundy SM Becker D Clark LT et alThird Report of the National Cholesterol Education Program (NCEP)

Expert Panel on Detection Evaluation and Treatment of High Blood Cholesterol in Adults (Adult

Treatment Panel III) Final Report Circulation 2002106(25)3143-90

8 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J Metabolic syndrome- a new worldwide definition A Consensus Statement

from the International Diabetes Federation Diabet Med 2006 23(5)469-80

9 KG Alberti KG Eckel RH Grundy SM etal International Diabetes Federation task force on epidemiology

and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart Association World Heart

Federation International Atherosclerosis Society International Association for the study of obesity

Harmonizing the metabolic syndrome a joint interim statement of the International Diabetes Federation task

force on epidemiology and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart

Association World Heart Federation International Atherosclerosis society and International Association

for the study of obesity Circulation 2009120(16)1640-5

10 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J IDF Epidemiology Task Force The metabolic syndrome new

worldwide definition Lancet 2005 366 1059 - 62

11 Oleszczyk M Svab I Seifert B et al Primary healthcare in the developing part of Europe changes and

development in the former Eastern Bloc countries that joined the European Union following 2004 Med Sci

Monit 2009(15)78ndash84

12 Jung U J Choi M S Obesity and Its Metabolic Complications The Role of Adipokines and the

Relationship between Obesity Inflammation Insulin Resistance Dyslipidemia and Nonalcoholic Fatty

Liver Disease Int J Mol Sci 2014rsquo15(4) 6184-223

13 Vanden Heuvel JP Peters JM Peroxisome Proliferators In Ramos K (ed) Cellular and Molecular

Toxicology (Second Edition) Volume 2 New York Elsevier Science Inc 2010 145 - 67

14 Yessoufou A Wahli W Multifaceted roles of peroxisome proliferator-activated receptors (PPARs) at the

cellular and whole organism levels Swiss Med Wkl 2010140w13071 doi104414smw201013071

15 Azhar S Peroxisome proliferator-activated receptors metabolic syndrome and cardiovascular disease

Future Cardiology 20106(5)657-91

16 Andries G Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity

Diabetes and Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(Suppl)24-32

17 Zandbergen F Plutzky J PPARalpha in atherosclerosis and inflammation Biochim Biophys Acta

20071771(8)972-82

18 Straus DS Glass CK Anti-inflammatory actions of PPAR ligands new insights on cellular and molecular

mechanisms Trends Immunol 200728(12)551-8

19 Zlei M Zugun- Eloae F Carasevici E Citometrie icircn flux - Bază şi clinică Icircn Hinescu ME (ed) Citometrie icircn

flux - principii şi aplicaţii clinice Bucureşti Editura Viaţa Medicală Romacircnească 20111-128

20 Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity Diabetes and

Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(9)24-32

21 Woerly G Honda K Loyens M et al Peroxisome proliferator-activated receptors alpha and gamma down-

regulate allergic inflammation and eosinophil activation J Exp Med 2003198(3)411-21

22 Salle-Saumont D Brenuchon C Kanda A et al Peroxisome proliferator-activated receptor alpha regulates

skin inflammation and humoral response in atopic dermatitis J Clin Allergy Immunology 2008 21(4)962-8

23 Schote A Turner J Schiltz J et al Nuclear receptors in human immune cells expression and correlations

Mol Immunolog 200744(6)1436-45

24 DAmore S Vacca M Graziano G et al Nuclear receptors expression chart icircn peripheral blood

mononuclear cells identifies patients with Metabolic Syndrome Biochim Biophys Acta

20131832(12)2289-301

25 Uthurralt J Gordish-Dressman H Bradbury M T et al PPARalpha L162V underlies variation in serum

triglycerides and subcutaneous fat volume in young males BMC Med Genet 2007855

26 Hiukka A Leinonen ES Jauhiainen M et al Long-term effects of fenofibrate on VLDL and HDL

subspecies icircn participants with type 2 diabetes mellitus Diabetologia 2007 50(10)2067-75

27 Robins SJ Rubins HB Faas FH et alInsulin resistance and cardiovascular events with low HDL

cholesterol The Veterans Affairs HDL Intervention Trial (VA-HIT) Diabetes Care 2003 26(5)1513-7

28 Devaraj S Siegel D Jialal I Statin Therapy in Metabolic Syndrome and Hypertension Post-JUPITER

What is the Value of CRP Curr Atheroscler Rep 2011 13(1) 31ndash42

29 Imperatore G Riccardi G Iovino C et al Plasma Fibrinogen A New Factor of the Metabolic Syndrome A

population-based study Diabetes Care 19982 1(4)649-54

30 Krysiak R Gdula-Dymek A Bachowski R Okopien B Pleiotropic effects of atorvastatin and fenofibrate

in metabolic syndrome and different types of pre-diabete Diabetes Care 201033(10)2266-70

31 Hermans MP Impact of Fenofibrate on Type 2 Diabetes Patients with Features of the Metabolic Syndrome

Subgroup Analysis From FIELD Curr Cardiol Rev 20106(2)112-8

32 Silverstein R Inflammation atherosclerosis and arterial thrombosis Role of the scavenger receptor CD36

Cleveland Clinic Journal of Medicine 200976(Suppl 2)S27-S30

33 Hăncu N Obezitatea In Vereşiu IA (ed) Diabetul zaharat nutritia si bolile metabolice Volume 2 Editura

Echinox Cluj- Napoca 2010 1-15

Lista lucrări publicate

1 Elena Popa Maria Maidaniuc Agnes Bacusca Alamir Diaa Rodica Petrovanu Adorata Elena

Coman Disfuncţia endotelială ndash de la mecanisme moleculare la cuantifi care şi tratament icircn practica

medicală Practica Medicală 20149(3) 109-14

2 Elena Popa Agnes Bacusca Alamir Diaa Maria Maidaniuc Rodica Petrovanu Adorata Elena Coman

The function of insulin receptor (IRF) in evolution of obesity correlation with adipocytes diameters

Archives of the Balkan Medical Union 201449(3) 275-9

3 Elena Popa Florin Zugun-Eloae Mihaela Zlei Daniela Jitaru Oana Maria Pintilie Adorata Elena

Coman Maria Traian Didona Anca Ungureanu Eugen Carasevici - acceptata pentru numarul 42014

Flow cytometry analysis of PPAR-alpha receptors in metabolic syndrome) Revista Romană de

Medicină de Laborator(RRLM-D-14-00034R1- adeverinţa ataşată

Page 23: REZUMAT TEZĂ DE DOCTORAT - umfiasi.ro Doctorat/rezumat... · universitatea de medicinĂ Şi farmacie “grigore t. popa” iaŞi facultatea de medicinĂ rezumat tezĂ de doctorat

Figura 547 Studiul relatiilor dintre

receptorii PPARα icircn SM A Mo vs PMN B Mo vs Ly

C PMN vs Ly Graficul ilustrează coeficienţii r P dreapta de

regresie (linia centrala) intervalul de icircncredere

95 şi intervalul de predicţie 95

Figura 548 Corelaţii icircntre receptorii PPARα icircn lotul

martor

A Mo vs PMN

B Mo vs Ly

C PMN vs Ly

Tot pentru lotul SM cacircnd am evaluat relaţia dintre nivelul de expresie relativă a

receptorilor PPARα icircn Eo şi nivelul de expresie relativa a receptorilor CD 36 am obţinut o

corelaţie negativă (r = - 05 P = 001) (fig 549 A)

50 100 150 200 250 300 350 50

100

150

200

250

300

350

400

450

500

PPARα Ly

PPARα PMN

y = 56641 + 1159 x r = 086 P lt 0001

C

50 100 150 200 250 300 350 400 0

50

100

150

200

250

300

350

PPARα Mo

PPARα Ly

y = 36665 + 0607 x r = 090 P lt 0001

B

150 200 250 300 350 400 450 0

50 100 150 200 250 300 350 400 450 500

PPARα PMN

PPARα Mo

y = 2505 + 0879 x r = 081 P lt 0001

A

50 100 150 200 250 300 350

50 100 150 200 250 300 350 400 450 500

PPARα Ly

PPARα PMN

y = 95668 + 0919 x r = 081 P lt 0001

C

100 150 200 250 300 350 400

0

50

100

150

200

250

300

350

400

PPARα Mo

PPARα Ly

y = -7503 + 0829 x r = 079 P lt 0001

B

100 150 200 250 300 350 400

50

100

150

200

250

300

350

400

450

500

PPARα Mo

PPARα PMN

y = 61384 + 0882 r = 074 P lt 0001

A

Figura 549 Corelaţii icircntre expresia PPARα icircn Eo şi alte tipuri de receptori investigaţi A PPARα Eo şi CD 36 (Lot SM) B PPARα Eo şi PPARα Mo( Lot Non-SM)

Icircn lotul martor am identificat o asociere moderată pozitivă (r = 038 P = 0033) icircntre

nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Eo şi Mo (figura 549B) corelaţie absentă icircn

lotul pacienţilor cu SM

Corelaţii dintre receptorii studiaţi şi componentele sindromului metabolic

Icircn lotul de control analiza statistică a relevat faptul că icircntre circumferinţa

abdominală (CA ) şi nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Mo Ly şi PMN există o

corelaţie inversă adică scăderea expresiei PPARα la nivelul acestor populatii celulare ar fi

icircnsoţită de creşterea CA (figura 550

Figura 550Corelaţii dintre receptorii

PPARα si CA A Mo B Ly C PMN

La pacienţii cu SM am notat o corelatie moderată negativă statistic semnificativă

icircntre TG şi valorile MFI a Ac anti- PPARα icircn Mo şi Ly( fig 551)

150 200 250 300 350 400 450 50

60

70

80

90

100

110

PPARα PMN

CA r = - 040 P = 0024

C

50 100 150 200 250 300 350 50

60

70

80

90

100

110

PPARα Ly

CA r = - 046 P = 0009

B

50 100 150 200 250 300 350 400 50

60

70

80

90

100

110

PPARα Mo

CA r = - 042 P = 0017

A

50 100 150 200 250 300 350 400 500

1000

1500

2000

2500

3000

PPARα Mo

PPARα Eo

r = 038 P = 0033

B

0 500 1000 1500 2000 2500 1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

8000

PPARα Eo

CD36

r = 050 P = 0010

A

Figura 551 Lot SM Corelaţie icircntre expresia PPARα şi TG (A Mo B Ly)

Analizand corelatia dintre receptorii CD36 si valorile TA la pacientii cu SM am observat

o asociere pozitivă asteptată intre TAD si nivelul de expresie al receptorilor CD36 (fig 552)

Figura 552 Lot SM Corelaţii icircntre expresia

receptorilor CD36 şi valorile tensiunii arteriale

diastolice

Studiind corelaţiile dintre receptorii PPARα şi HDL-col la subiecţii din lotul martor am

notat o asociere pozitivă icircntre expresia PPARα icircn Mo şi Ly cu HDL-col (fig 553)

Figura 553 Lot martor Corelaţii icircntre HDL-col şi expresia PPARα icircn Mo(A) Ly(B)

Icircn lotul normal am evidenţiat corelaţii pozitive moderate dar semnificative statistic icircntre

CA şi valorile TAS (r = 062 P lt 0001) respectiv TAD (r = 050 P=0004) precum şi icircntre

CA şi glicemia subiecţilor normali (r = 052 P = 0003) Aceste date icircmpreună cu relaţia

invers proporţională identificată icircntre HDL-col şi CA (r = 050 P = 001) susţin validitatea

acestui studiu Icircn lotul subiecţilor cu SM am observat o corelaţie moderat pozitivă icircntre

expresia PPARα icircn populaţiiile de Mo şi Eo şi concentraţia a HDL-col (fig 554)

B

100 150 200 250 300 350 20

30

40

50

60

70

80

90

100

PPARα Ly

HDL-col-(mgdl)

r = 036 P = 0046

A

150 200 250 300 350 400 20

30

40

50

60

70

80

90

100

PPARα Mo

HDL-col-(mgd)l

r = 035 P = 005

70 75 80 85 90 95 100 1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

8000

TAD (mmHg)

CD36

r = 048 P = 0013

B

50 100 150 200 250 300 350 -100

0

100

200

300

400

500

PPARα Ly

TG(mgdl)

r = - 042 P = 003

A

50 100 150 200 250 300 350 400 -100

0

100

200

300

400

500

PPARα Mo

TG ( mgdl) r =- 0 43 P = 0027

Figura 554 Corelaţii icircn SM icircntre HDL-col şi expresia PPARα icircn Mo (A) şi Eo(B)

Corelaţii icircntre nivelul de expresie relativă a PPARα şi markeri ai disfuncţiei

endoteliale şi inflamaţiei cronice

Deşi nu a icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică am reţinut corelaţia invers

proporţională (r = - 0331 P = 006) dintre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα

icircn PMN şi concentraţia serică a Non-HDL-colesterolului

Studiind relaţiile dintre parametri icircn lotul de pacienţi cu SM am observat o corelaţie

moderată invers proporţională icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Eo şi

acidul uric seric (figura 555 A) corelaţie absentă la subiecţii fără SM

Figura 555 Lot SM corelaţia dintre expresia PPARα icircn Eo şi acidul uric (A) respectiv

PPARα şi fibrinogen (B)

Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P=008) am notat pentru

pacienţii cu SM corelaţia invers proporţională dintre expresia PPARα icircn Eo şi concentraţia

serică a fibrinogenului ( figura 555B)

V5 Discuţii

Icircn cadrul lucrării de doctorat am studiat nivelul de expresie relativă a PPARα icircn

leucocitele pacienţilor cu SM comparativ cu cea a subiecţilor normali Expresia PPARα a fost

studiată icircn paralel cu cea a CD36 glicoproteină exprimată pe suprafaţa a numeroase celule

din organismul uman inclusiv pe cea a Mo şi macrofagelor Prin funcţia sa de receptor pentru

particulele oxidate de LDL CD36 cunoscut ca bdquoscavenger receptorrdquo de clasa B sau

bdquotrombospodin receptorrdquo contribuie la dezvoltarea inflamaţiei de la nivel endotelial şi

formarea plăcii de ateroscleroză Referitor la studiul PPARα icircn Eo icircn sindromul metabolic

menţionăm că studiul nostru este primul care arată că nivelul de expresie a proteinei PPARα

icircn Eo măsurat prin citometrie icircn flux este semnificativ mai redus la pacienţii care sunt

diagnosticaţi cu acest sindrom De asemenea icircn lotul cu SM cercetat icircn cadrul studiului

receptorilor PPARα numărul Eo circulante a fost semnificativ mai crescut la pacienţii cu SM

B

0 500 1000 1500 2000 2500 200

250

300

350

400

450

PPARα Eo o

Fibrinogen mgdl

r =- 036 P = 008

0 500 1000 1500 2000 2500 1 2 3 4 5 6 7 8 9

10 11

PPARα Eo_

Acid uric(mgdl) r = 048 P = 0014 A

0 500 1000 1500 2000 2500 10

20

30

40

50

60

70

80

PPARα Eo

HDL(mgdl)

r = 044 P = 0024

B

100 150 200 250 300 350 400 10

20

30

40

50

60

70

80

PPARα Mo

HDL( mgdl)

r = 046 P = 0019

A

(P = 003) Aceste constatări conduc la ipoteza că Eo joacă un rol special icircn mecanismele

patogenice declanşate icircn sindromul metabolic şi că receptorii PPARα sunt importanţi icircn

implicarea Eo icircn obezitate şi insulinorezistenţă Creşterea numărului de Eo circulante este

urmată de eliberarea mediatorilor proinflamatori iar reducerea expresiei PPARα icircn Eo

determină perturbarea mecanismelor de control al inflamaţiei cu exacerbarea cascadei

proinflamatorii Consecutiv se agravează disfuncţia endotelială şi se accelerează progresia

leziunilor de ateroscleroză Extrapolacircnd aceste ipoteze putem spune că asocierea raportată

dintre boala ischemică coronariană şi Eo poate fi şi consecinţa exacerbării cascadei

proinflamatorii de la nivel vascular produsă datorită scăderii expresiei PPARα icircn Eo iar

creşterea numărului de Eo circulante poate reprezenta o adaptare a organismului uman care

icircncearcă să suplinească deficitul de receptori PPARα Analizacircnd curba ROC pentru

intensităţile medii de fluorescenţă determinate pentru anticorpii anti- PPARα icircn Eo am

obţinut pentru acest biomarker o sensibilitate a testului de 565 şi o specificitate de 778

pentru un punct de cut-off de 1533 ( figura 536 ) Deşi aria AUC (Aria under the curve) egală

cu 0663 icircncadrează acest test ca avacircnd o acurateţe redusă observăm că că această valoare

este apropiată de determinările AUC pentru alţi factori (fibrinogen raport de aterogenitate

acid uric non- HDL-colesterol) cunoscuţi ca fiind implicaţi icircn aterogeneză şi inflamaţia

cronică (figura 431) Aceste remarci alături de faptul că icircn studiul receptorilor PPARα icircn

leucocite am inclus subiecţi la primul diagnostic de SM creează premisa integrării

determinării expresiei relative a receptorilor PPARα icircn diagnosticul complex al sindromului

metabolic Putem spune că icircn final studiul expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofilele

circulante se dovedește a fi util icircn diagnosticul precoce la nivel molecular al SM permiţacircnd

identificarea timpurie a unor indivizi cu risc cardiometabolic crescut Astfel intervenţia

precoce asupra subiecţilor cu deficit de PPARα icircn Eo contribuie la managementul eficient al

afecţiunilor degenerative icircn care inflamaţia cronică icircndeplineşte un rol primordial Referitor

la populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările efectuate prin citometrie de flux nu au

arătat existenţa unor diferenţe statistice icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα

la subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali Rezultatele noastre pot fi

consecinţa caracteristicilor loturilor studiate (icircn studiul nostru au fost incluşi subiecţi recrutaţi

la primul diagnostic de SM şi icircn absenţa stimulării receptorilor PPARα cu droguri agoniste

PPARα) dar icircn acelaşi timp pot apare diferenţe datorită metodei utilizate (231 232 233)

Făcacircnd o paralelă cu un studiu publicat icircn 2013 icircn Europa (231) care a arătat creşterea

nivelului de expresie al PPARα icircn Ly şi Mo observăm că deşi numărul de subiecţi a fost

aproximativ egal (57 participanţi icircn studiul nostru 60 icircn studiul DAmore) subiecţii icircn studiul

amintit au fost recrutaţi dintr-o clinică cu profil medical la primul diagnostic de SM icircn timp

ce metoda utilizată a fost PCR (Polymerase Chain Reaction) mult mai fidelă decacirct citometria

icircn flux icircn studiul receptorilor nucleari De asemenea DAmore nu investighează expresia

PPARα icircn Eo şi PMN icircn cercetare fiind incluse doar celulele CD14+ (predominant Mo) şi

CD14- (predominant Ly) Deşi nu am obţinut diferenţe statistic semnificative icircntre cele două

loturi referitoare la nivelul de expresie relativă a PPARα icircn Mo Ly şi PMN am observat

corelaţii puternice semnificative statistic icircntre expresia receptorilor PPARα icircn aceste tipuri

celulare Rezultatele obţinute sugerează existenţa unui mecanism diferit molecular de control

icircn eozinofile care reglează cantitatea de proteină PPARα icircn eozinofile versus alte tipuri de

leucocite (la pacienţii cu SM) şi acest lucru este icircn concordanţă cu cercetările care descriu

expresia PPARα mRNA icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale

bronşice keratinocite) Studiind prin citometrie de flux nivelul de expresie relativă a

receptorului CD36 la nivelul Mo am arătat prezenţa acestuia icircn Mo tuturor subiecţilor

investigaţi Analizacircnd valorile intensităţii medii de fluorescenţă a CD36 icircn loturile studiate

am observat o tendinţă de creştere la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali

confirmacircnd implicarea receptorului CD36 icircn patogeneza acestuia Referitor la expresia

receptorului CD36 rezultatele obţinute sunt icircn consens cu studii anterioare care au arătat

creşterea expresiei CD36 la pacienţii cu SM şi diabet zaharat Astfel pe lacircngă diferenţa icircn

expresia CD36 s-au raportat şi corelaţii inverse icircntre expresia proteinei CD36 şi nivelul

adiponectinei Acelaşi studiu a evidenţiat o corelaţie pozitivă intre expresia CD36 cu expresia

receptorilor PPAR gamma relaţia cu PPARα nefiind investigată

Analiza de subgrup a relaţiilor dintre componentele SM și elementele moleculare

proinflamatorii studiate a relevat prezenţa unor asocieri semnificativ statistice icircntre acestea

Se argumentează astfel că veridicitatea studiului este susţinută de interdependenţele statistice

ale componentelor SM Determinarea coeficientului de corelaţie Icircn studiul nostru nivelul de

expresie relativă a PPARα s-a corelat moderat negativ (figura 550) cu CA a subiecţilor din

lotul normal pentru populaţiile celulare de Mo (r = - 0420 P = 001) Ly (r = - 046 P =

0009) şi PMN (r = - 040 P = 0024) date care sunt icircn concordanţă cu studiile care arată

rolul PPARα icircn furnizarea energiei prin beta-oxidarea acizilor graşi Icircn acelaşi timp icircn lotul

pacienţilor cu SM nu am identificat prezenţa unei asocieri icircntre nivelul de expresie relativă a

PPARα şi valoarea măsurată a CA Asocierea dintre expresia relativă a PPARα cu obezitatea

de tip central completează datele existente referitoare la reglarea homeostaziei energetice

conturacircnd un mecanism de control deficitar al aportului caloric al SM Icircn condiţiile icircn care

rezultatele obţinute prin metoda citometriei icircn flux nu au arătat existenţa unei corelaţii intre

expresia PPARα şi CA la pacienţii cu SM considerăm că ar fi necesar studiul

polimorfismului genei PPARA care ar putea aduce informaţii importante cu privire la

implicarea acestor receptori icircn apariţia obezităţii de tip central Subliniem acest lucru deoarece

obezitatea este o boală plurifactorială icircn care pe lacircngă factorii ereditari sunt implicaţi factori

de mediu psihologici şi sociali (245) Existenţa unei componente genetice a aterosclerozei

este legată şi de prezenţa unor variante ale genei PPARA asociate cu creşterea incidenţei bolii

cardiovasculare (82) şi a SM (249) Icircn studiul nostru am constatat o scădere statistic

semnificativă a nivelului expresiei relative a receptorilor PPARα icircn Eo la subiecţii cu

antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială comparativ cu subiecţii fără istoric

familial de hipertensiune (figura 537) Deşi diferenţele calculate icircntre loturile studiate nu au

icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică la subiecţii care au declarat prezenţa

antecedentelor familiale de hipertensiune arterială remarcăm o tendinţă de scădere a

intensităţii medii de fluorescenţă pentru Ac anti-PPARα la nivelul Mo (figura 515 P = 006

) icircn timp ce expresia relativă a CD36 icircnregistrează o creştere la acesti subiecţi (figura 545 P

= 008) Icircn contextul riscului cardiovascular foarte icircnalt al pacienţilor cu SM amintim şi

existenţa corelaţiei pozitive dintre valorile tensiunii arteriale diastolice şi expresia relativă a

receptorului CD36 (r = 0483 P = 0013) Această constatare este icircn consens cu studiile care

au arătat că forma solubilă circulantă a CD36 este asociată cu factorii de risc cardiovasculari

fiind propusă ca un marker precoce al aterosclerozei Activarea PPARα este asociată cu

modularea metabolismului lipidic iar agoniştii PPARα sunt utilizaţi icircn mod curent pentru

tratamentul dislipidemiei Sub acţiunea agoniştilor PPARα se obţine o icircmbunătăţire a funcţiei

endoteliale şi a parametrilor reologici funcţiile pleiotropice ale agoniştilor PPARα fiind

dovedite icircn trialuri clinice controlate Icircn populaţiile de Mo şi Ly la pacienţii cu SM

cercetarea noastră a evidenţiat o asociere negativă icircntre nivelul de expresie relativă a

receptorilor PPARα şi concentraţia TG serice (figura 551) Astfel scăderea expresiei

receptorilor PPARα este asociată cu creşterea nivelului TG serice contribuind la profilul

lipidic aterogen din SM Icircn conformitate cu literatura de specialitate icircn studiul efectuat prin

metoda citometriei icircn flux am găsit prezenţa asocierii icircntre nivelul de expresie al PPARα şi

HDL-colesterol Corelaţia pozitivă dintre nivelul de expresie relativă PPARα şi concentraţia

HDL-colesterolului a fost observată icircn lotul martor icircn populaţiile de Mo (r = 035 P = 005)

şi Ly ( r = 036 P = 004) (figura 553) susţinacircnd faptul că stimularea receptorilor PPARα

este legată de creşterea nivelului seric al lipoproteinelor cu densitate crescută La pacienţii cu

SM corelaţia dintre expresia PPARα şi HDL-colesterol a fost evidenţiată icircn populaţiile de Mo

(r = 046 P = 0019) şi eozinofile (r = 044 P = 0024) Se desprinde concluzia că icircn

sindromul metabolic scăderea concentraţiei HDL-colesterol este legată de diminuarea

nivelului de expresie relativă a receptorilor nucleari PPARα icircntărind afirmaţiile legate de

rolul acestor receptori icircn progresia bolilor cardiovasculare Studiind reactanţii de fază acută

analiza statistică a relevat o diferenţă semnificativă din punct de vedere statistic icircntre valorile

fibrinogenului la pacienţii cu SM atunci cacircnd au fost comparaţi cu subiecţii fără SM

(Capitolul IV4 P lt0 001 figura 427A) De asemenea icircn Capitolul V dedicat studiul

expresiei relative a receptorilor PPARα studiul valorilor fibrinogenului a arătat creşterea

acestui reactant de faza acută icircn lotul cu SM comparativ cu lotul martor (P lt0 0001) Icircn

studiul nostru am calculat o corelaţie invers proporţionala (r = - -036 fig 555B) icircntre

nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile şi concentraţia serică a

fibrinogenului Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P = 008) am reţinut

această asociere deoarece am demonstrat că nivelul de expresie relativă al receptorilor

PPARα icircn eozinofile este mai scăzut icircn sindromul metabolic iar sindromul metabolic este

caracterizat printr-un status inflamator cronic status caracterizat şi de creşterea concentraţiei

serice a fibrinogenului De asemenea notam ca această corelaţie negativă se află icircn

concordanţă cu studiile care arata că tratamentul cu agonişti PPARα (fibraţi) determina

scăderea nivelului seric al fibrinogenului contribuind la diminuarea inflamaţiei cronice din

sindromul metabolic şi icircn consecinţă amelioracircnd insulinorezistenţa

LIMITE ȘI DIFICULTĂȚI IcircN CERCETARE

Icircn cadrul Tezei de Doctorat am desfăşurat o cercetare care şi-a propus studierea

expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Recrutarea anamneza şi examinarea

clinică a subiecţilor au fost realizate icircn cadrul Cabinetului de Medicină de Familie CMI Popa

Elena din Iaşi iar determinările hematologice şi biochimice s-au efectuat icircn cadrul

Laboratorului Ambulatorului de Specialitate al Spitalului Universitar ldquoSfacircntul Spiridon din

Iaşi Icircn studiul epidemiologic şi al markerilor inflamatori al sindromului metabolic desfăşurat

au fost incluşi un număr de 1530 de participanţi pe baza liberului consimţămacircnt examinaţi icircn

perioada 01012013 - 31122013 Icircn continuare icircn perioada 1012014 - 28022014 pe baza

criteriilor de includere şi excludere icircn cele două loturi de studiu am investigat un număr de 57

de subiecţi prezentaţi la consultaţie icircn această perioadă şi care au icircndeplinit criteriile de

includere icircn cele două loturi (Lot SM şi Lot Control) constituite pentru evaluarea nivelului de

expresie a receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Explorarea nivelului de expresie

relativă a receptorilor PPARα s-a desfăşurat icircn cadrul Laboratorului de Biologie Moleculară

de pe platforma Institutului Regional de Oncologie Datorită resurselor proprii financiare

limitate trebuie să subliniez că aceasta cercetare nu ar fi fost posibilă fără contribuţia unor

cercetători din domeniul medical care m-au sprijinit necondiţionat atacirct icircn elaborarea

protocolului de lucru cacirct şi icircn efectuarea propriu-zisă a studiului Icircn acest sens menţionăm şi

faptul că pentru studiul receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic am utilizat aparatura

Laboratorului de Biologie Moleculară (care deserveşte icircntreaga Regiune a Moldovei) Pe

această cale mulţumesc personalului Laboratorului de Biologie Moleculară pentru ajutorul

acordat icircn desfăşurarea cercetării doctorale icircn condiţiile icircn care se observa creşterea

numărului de pacienţi care se adresează acestei platforme de cercetare Mulţumesc de

asemenea şi Doamnei Doctor Elena Butoi din cadrul Institutului de Biologie şi Patologie

Moleculară ldquoNicolae Simionescurdquo Bucureşti) pentru donaţia anticorpului secundar anti-

FITC Icircn consecinţă pentru recrutarea unui număr mai mare de participanţi ar fi fost necesară

icircn primul racircnd obţinerea unor resurse financiare suplimentare pentru achiziţia de aparatură şi

reactivi Totuşi numărul subiecţilor recrutaţi este apropiat de numărul subiecţilor raportaţi icircn

cadrul unor granturi de cercetare care aveau ca ţinta studiul expresiei receptorilor PPARα

(212 227 228 231) Rezultatele obţinute continua seria lucrărilor care arata importanta

studiului mecanismelor etiopatogenice ale sindromului metabolic patologie care se afla icircntr-o

continuă creştere La pacienţii cu SM pe lacircngă diminuarea nivelului de expresie a receptorilor

PPARα icircn eozinofile ne aşteptam şi la evidenţierea unor modificări icircn expresia PPARα şi icircn

populaţiile de Ly Mo şi PMN Acest fapt poate fi explicat de utilizarea unor celule provenite

de la pacienţi fără afectare cardiovasculară fără diabet zaharat şi necesită continuarea

studiului pe culturi celulare icircn condiţii de stimulare cu agonişti PPARα deziderat care

impune continuarea investigării expresiei PPARα printr-un grant de cercetare

ORIGINALITATEA ȘI CONTRIBUȚIILE INOVATIVE ALE TEZEI DE

DOCTORAT PERSPECTIVE DE CERCETARE

Evaluarea nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn leucocitele circulante

aduce noi perspective icircn studiul obezităţii şi sindromului metabolic Importanta studiului

expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic derivă din prevalenta crescută a

sindromului metabolic icircn populaţia cercetată la care se adaugă riscul cardiovascular foarte

icircnalt al acestor pacienţi cu implicaţii majore icircn sănătatea publică Rolul receptorilor PPARα

icircn inflamaţie şi aterogeneza este binecunoscut dar studiul nostru este primul care a arătat că

nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα este semnificativ mai scăzut in populatiile

de eozinofile la pacienţii cu SM Această concluzie coroborata cu existenţa unei stracircnse

asocieri intre expresia receptorilor PPARα la nivelul Mo limfocitelor şi PMNlor creeaza

ipoteza existenţei unui mecanism de control diferit al expresiei PPARα la nivelul

eozinofilelor Această cercetare aduce informaţii importante referitoare la mecanismele

proinflamatorii care stau la baza insulinorezistenţei şi riscului cardiometabolic şi impune

continuarea studiului acestor receptori nucleari prin citometrie icircn flux metodă care poate fi

aplicată şi la scara mai largă dacă sunt asigurate resursele materiale necesare cercetării

Cercetarea prin citometrie icircn flux poate fi completată de studiul polimorfismului genei

PPARA şi astfel se pot identifica timpuriu indivizii cu potenţial risc cardiometabolic crescut

Studiul receptorilor PPARα a stabilit conexiuni cu factori proinflamatori şi aterogenetici iar

continuarea cercetării poate aduce şi elemente noi de diagnostic precoce icircn sindromul

metabolic contribuind la icircmbunătăţirea prognosticului acestor pacienţi

CONCLUZII FINALE

1 Aplicarea scorului de SM alături de implementarea algoritmului electronic de diagnostic

contribuie la o prelucrare rapidă eficientă și standardizată a informaţiilor la nivelul

medicinei primare

2 Prevalenţa SM calculată astfel icircn cadrul studiului este crescută (2732) icircn concordanţă

cu datele raportate

3 Controlul factorilor de risc cardiometabolici incluşi icircn SM se poate realiza prin

managementul stilului de viaţă (scăderea greutăţii corporale prin combaterea

sedentarismului şi adoptarea unei diete antiaterogene şi hipocalorice) şi administrarea

terapiei medicamentoase

4 Este necesară adoptarea unei politici de sănătate publică pentru prevenirea creşterii icircn

populaţie a prevalenţei obezităţii şi a diabetului zaharat

5 Noi metode de cercetare icircn domeniul SM axate pe diagnosticarea precoce şi cuantificarea

eficientă a acestuia duce la diminuarea incidenței evenimentelor cardiovasculare majore

6 Sindromul metabolic se caracterizează printr-un status inflamator cronic

7 Valorile Non-HDL-colesterolului şi a raportului de aterogenitate sunt semnificativ mai

mari la pacienţii cu SM

8 Dintre reactanţii de faza acută am observat că valoarea medie a fibrinogenului este mai

crescută icircn lotul cu SM

9 Valorile eozinofilelor sunt crescute icircn sindromul metabolic iar explorarea relaţiei dintre

eozinofile şi obezitate constituie una din direcţiile de studiu actuale ale sindromului

metabolic

10 Evaluarea markerilor inflamatori icircn contextul sindromului metabolic este utilă icircn

evaluarea complexă a a factorilor de risc cardiometabolici

11 Prin metoda citometriei icircn flux am demonstrat prezenta Receptorilor Activaţi de

Inductorii Proliferării Peroxizomilor ndash Alpha (PPARα) icircn toate populaţiile de leucocite

studiate (Mo limfocite PMN eozinofile) atacirct icircn lotul pacienţilor cu SM cacirct şi icircn lotul

martor

12 Utilizacircnd intensitatea medie de fluorescenţă a anticorpilor anti- PPARα am arătat că

nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile este semnificativ mai redus

la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali

13 Acest studiu este primul care a demonstrat existenţa unei scăderi statistic semnificative a

nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofilele pacienţilor cu SM

confirmacircnd cercetările recente care au evidenţiat rolul eozinofilelor şi al receptorilor

PPARα icircn obezitate reglarea inflamaţiei cronice şi aterogeneza

14 Contrar aşteptărilor noastre icircn populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările

efectuate icircn cele două loturi de studiu (cu şi fără sindom metabolic) nu am evidenţiat

diferenţe statistic seminificative icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα la

subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali

15 Icircn populaţiile de Mo limfocite şi polimorfonucleare am observat corelaţii puternice

semnificativ statistic icircntre expresia PPARα icircn aceste tipuri celulare sugeracircnd existenţa

unui mecanism unic de control al inflamaţiei cronice la nivelul acestor celule probabil

diferit de cel din eozinofile

16 La subiecţii cu SM expresia relativă a PPARα icircn Eo este invers asociată cu expresia

receptorului CD36 (receptor al particulelor de ox - LDL şi propus ca un marker precoce al

aterosclerozei) dovedind rolul antiinflamator al receptorilor PPARα la nivel endotelial

17 La pacienţii cu antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială nivelul de

expresie al receptorilor PPARα icircn eozinofile şi Mo este diminuat comparativ cu subiecţii

fără antecedente familiale de hipertensiune arterială Putem spune că studiul efectuat de

noi aduce informaţii importante legate de geneză aterosclerozei şi hipertensiunii arteriale

18 Prin studiul asocierilor dintre receptorii PPARα şi componentele clinice ale sindromului

metabolic am arătat rolul acestor receptori icircn determinismul obezităţii de tip central

nivelul expresiei relative a receptorilor PPARα fiind invers proporţional cu circumferinţa

abdominală

19 Icircn acelaşi timp nivelul de expresie a PPARα icircn sindromul metabolic este asociat pozitiv

cu concentraţia serică a HDL-colesterolului şi invers asociat cu nivelul trigliceridelor

serice dovedind rolul acestor receptori icircn diminuarea procesului inflamator cronic de la

nivel vascular

20 La pacienţii cu SM scăderea expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofile este corelată cu

creşterea unor markeri ai sindromului inflamator cronic cardiometabolic (acid uric

fibrinogen) ilustracircnd importanta receptorilor icircn reglarea status-ului inflamator cronic din

sindromul metabolic

21 Utilizarea metodei flowcitometrice pentru studiul expresiei relative a receptorilor PPARα

icircn leucocite a adus informaţii importante cu privire la mecanismele moleculare de control

implicate icircn patogenia bolilor cardiometabolice icircn concordanţă cu cercetările care descriu

expresia PPAR icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale bronşice

keratinocite)

BIBLIOGRAFIE SELECTIVA

1 Kahn R Metabolic syndrome- what is the clinical usefulness Lancet 2008371(9628)1892-3

2 Reaven GM The metabolic syndrome is this diagnosis necessary Am J Clin Nutr 2006 83(6)1237-7

3 Grundy SM Pre-Diabetes Metabolic Syndrome and Cardiovascular Risk J Am Coll Cardiol 201259(7)

635-43

4 International Diabetes Federation IDF Diabetes Atlas 6th edn International Diabetes Federation Belgium

Brussels 20131-155

5 World Health Organization Global Status Report on Noncommunicable Diseases 2010 World Health

Organization Geneva Switzerland 20111-176

6 Coman AE Petrovanu R Sindromul metabolic in practica de ambulator Editura Pim Iaşi 2009 1-103

7 Grundy SM Becker D Clark LT et alThird Report of the National Cholesterol Education Program (NCEP)

Expert Panel on Detection Evaluation and Treatment of High Blood Cholesterol in Adults (Adult

Treatment Panel III) Final Report Circulation 2002106(25)3143-90

8 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J Metabolic syndrome- a new worldwide definition A Consensus Statement

from the International Diabetes Federation Diabet Med 2006 23(5)469-80

9 KG Alberti KG Eckel RH Grundy SM etal International Diabetes Federation task force on epidemiology

and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart Association World Heart

Federation International Atherosclerosis Society International Association for the study of obesity

Harmonizing the metabolic syndrome a joint interim statement of the International Diabetes Federation task

force on epidemiology and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart

Association World Heart Federation International Atherosclerosis society and International Association

for the study of obesity Circulation 2009120(16)1640-5

10 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J IDF Epidemiology Task Force The metabolic syndrome new

worldwide definition Lancet 2005 366 1059 - 62

11 Oleszczyk M Svab I Seifert B et al Primary healthcare in the developing part of Europe changes and

development in the former Eastern Bloc countries that joined the European Union following 2004 Med Sci

Monit 2009(15)78ndash84

12 Jung U J Choi M S Obesity and Its Metabolic Complications The Role of Adipokines and the

Relationship between Obesity Inflammation Insulin Resistance Dyslipidemia and Nonalcoholic Fatty

Liver Disease Int J Mol Sci 2014rsquo15(4) 6184-223

13 Vanden Heuvel JP Peters JM Peroxisome Proliferators In Ramos K (ed) Cellular and Molecular

Toxicology (Second Edition) Volume 2 New York Elsevier Science Inc 2010 145 - 67

14 Yessoufou A Wahli W Multifaceted roles of peroxisome proliferator-activated receptors (PPARs) at the

cellular and whole organism levels Swiss Med Wkl 2010140w13071 doi104414smw201013071

15 Azhar S Peroxisome proliferator-activated receptors metabolic syndrome and cardiovascular disease

Future Cardiology 20106(5)657-91

16 Andries G Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity

Diabetes and Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(Suppl)24-32

17 Zandbergen F Plutzky J PPARalpha in atherosclerosis and inflammation Biochim Biophys Acta

20071771(8)972-82

18 Straus DS Glass CK Anti-inflammatory actions of PPAR ligands new insights on cellular and molecular

mechanisms Trends Immunol 200728(12)551-8

19 Zlei M Zugun- Eloae F Carasevici E Citometrie icircn flux - Bază şi clinică Icircn Hinescu ME (ed) Citometrie icircn

flux - principii şi aplicaţii clinice Bucureşti Editura Viaţa Medicală Romacircnească 20111-128

20 Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity Diabetes and

Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(9)24-32

21 Woerly G Honda K Loyens M et al Peroxisome proliferator-activated receptors alpha and gamma down-

regulate allergic inflammation and eosinophil activation J Exp Med 2003198(3)411-21

22 Salle-Saumont D Brenuchon C Kanda A et al Peroxisome proliferator-activated receptor alpha regulates

skin inflammation and humoral response in atopic dermatitis J Clin Allergy Immunology 2008 21(4)962-8

23 Schote A Turner J Schiltz J et al Nuclear receptors in human immune cells expression and correlations

Mol Immunolog 200744(6)1436-45

24 DAmore S Vacca M Graziano G et al Nuclear receptors expression chart icircn peripheral blood

mononuclear cells identifies patients with Metabolic Syndrome Biochim Biophys Acta

20131832(12)2289-301

25 Uthurralt J Gordish-Dressman H Bradbury M T et al PPARalpha L162V underlies variation in serum

triglycerides and subcutaneous fat volume in young males BMC Med Genet 2007855

26 Hiukka A Leinonen ES Jauhiainen M et al Long-term effects of fenofibrate on VLDL and HDL

subspecies icircn participants with type 2 diabetes mellitus Diabetologia 2007 50(10)2067-75

27 Robins SJ Rubins HB Faas FH et alInsulin resistance and cardiovascular events with low HDL

cholesterol The Veterans Affairs HDL Intervention Trial (VA-HIT) Diabetes Care 2003 26(5)1513-7

28 Devaraj S Siegel D Jialal I Statin Therapy in Metabolic Syndrome and Hypertension Post-JUPITER

What is the Value of CRP Curr Atheroscler Rep 2011 13(1) 31ndash42

29 Imperatore G Riccardi G Iovino C et al Plasma Fibrinogen A New Factor of the Metabolic Syndrome A

population-based study Diabetes Care 19982 1(4)649-54

30 Krysiak R Gdula-Dymek A Bachowski R Okopien B Pleiotropic effects of atorvastatin and fenofibrate

in metabolic syndrome and different types of pre-diabete Diabetes Care 201033(10)2266-70

31 Hermans MP Impact of Fenofibrate on Type 2 Diabetes Patients with Features of the Metabolic Syndrome

Subgroup Analysis From FIELD Curr Cardiol Rev 20106(2)112-8

32 Silverstein R Inflammation atherosclerosis and arterial thrombosis Role of the scavenger receptor CD36

Cleveland Clinic Journal of Medicine 200976(Suppl 2)S27-S30

33 Hăncu N Obezitatea In Vereşiu IA (ed) Diabetul zaharat nutritia si bolile metabolice Volume 2 Editura

Echinox Cluj- Napoca 2010 1-15

Lista lucrări publicate

1 Elena Popa Maria Maidaniuc Agnes Bacusca Alamir Diaa Rodica Petrovanu Adorata Elena

Coman Disfuncţia endotelială ndash de la mecanisme moleculare la cuantifi care şi tratament icircn practica

medicală Practica Medicală 20149(3) 109-14

2 Elena Popa Agnes Bacusca Alamir Diaa Maria Maidaniuc Rodica Petrovanu Adorata Elena Coman

The function of insulin receptor (IRF) in evolution of obesity correlation with adipocytes diameters

Archives of the Balkan Medical Union 201449(3) 275-9

3 Elena Popa Florin Zugun-Eloae Mihaela Zlei Daniela Jitaru Oana Maria Pintilie Adorata Elena

Coman Maria Traian Didona Anca Ungureanu Eugen Carasevici - acceptata pentru numarul 42014

Flow cytometry analysis of PPAR-alpha receptors in metabolic syndrome) Revista Romană de

Medicină de Laborator(RRLM-D-14-00034R1- adeverinţa ataşată

Page 24: REZUMAT TEZĂ DE DOCTORAT - umfiasi.ro Doctorat/rezumat... · universitatea de medicinĂ Şi farmacie “grigore t. popa” iaŞi facultatea de medicinĂ rezumat tezĂ de doctorat

Figura 549 Corelaţii icircntre expresia PPARα icircn Eo şi alte tipuri de receptori investigaţi A PPARα Eo şi CD 36 (Lot SM) B PPARα Eo şi PPARα Mo( Lot Non-SM)

Icircn lotul martor am identificat o asociere moderată pozitivă (r = 038 P = 0033) icircntre

nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Eo şi Mo (figura 549B) corelaţie absentă icircn

lotul pacienţilor cu SM

Corelaţii dintre receptorii studiaţi şi componentele sindromului metabolic

Icircn lotul de control analiza statistică a relevat faptul că icircntre circumferinţa

abdominală (CA ) şi nivelul de expresie al receptorilor PPARα icircn Mo Ly şi PMN există o

corelaţie inversă adică scăderea expresiei PPARα la nivelul acestor populatii celulare ar fi

icircnsoţită de creşterea CA (figura 550

Figura 550Corelaţii dintre receptorii

PPARα si CA A Mo B Ly C PMN

La pacienţii cu SM am notat o corelatie moderată negativă statistic semnificativă

icircntre TG şi valorile MFI a Ac anti- PPARα icircn Mo şi Ly( fig 551)

150 200 250 300 350 400 450 50

60

70

80

90

100

110

PPARα PMN

CA r = - 040 P = 0024

C

50 100 150 200 250 300 350 50

60

70

80

90

100

110

PPARα Ly

CA r = - 046 P = 0009

B

50 100 150 200 250 300 350 400 50

60

70

80

90

100

110

PPARα Mo

CA r = - 042 P = 0017

A

50 100 150 200 250 300 350 400 500

1000

1500

2000

2500

3000

PPARα Mo

PPARα Eo

r = 038 P = 0033

B

0 500 1000 1500 2000 2500 1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

8000

PPARα Eo

CD36

r = 050 P = 0010

A

Figura 551 Lot SM Corelaţie icircntre expresia PPARα şi TG (A Mo B Ly)

Analizand corelatia dintre receptorii CD36 si valorile TA la pacientii cu SM am observat

o asociere pozitivă asteptată intre TAD si nivelul de expresie al receptorilor CD36 (fig 552)

Figura 552 Lot SM Corelaţii icircntre expresia

receptorilor CD36 şi valorile tensiunii arteriale

diastolice

Studiind corelaţiile dintre receptorii PPARα şi HDL-col la subiecţii din lotul martor am

notat o asociere pozitivă icircntre expresia PPARα icircn Mo şi Ly cu HDL-col (fig 553)

Figura 553 Lot martor Corelaţii icircntre HDL-col şi expresia PPARα icircn Mo(A) Ly(B)

Icircn lotul normal am evidenţiat corelaţii pozitive moderate dar semnificative statistic icircntre

CA şi valorile TAS (r = 062 P lt 0001) respectiv TAD (r = 050 P=0004) precum şi icircntre

CA şi glicemia subiecţilor normali (r = 052 P = 0003) Aceste date icircmpreună cu relaţia

invers proporţională identificată icircntre HDL-col şi CA (r = 050 P = 001) susţin validitatea

acestui studiu Icircn lotul subiecţilor cu SM am observat o corelaţie moderat pozitivă icircntre

expresia PPARα icircn populaţiiile de Mo şi Eo şi concentraţia a HDL-col (fig 554)

B

100 150 200 250 300 350 20

30

40

50

60

70

80

90

100

PPARα Ly

HDL-col-(mgdl)

r = 036 P = 0046

A

150 200 250 300 350 400 20

30

40

50

60

70

80

90

100

PPARα Mo

HDL-col-(mgd)l

r = 035 P = 005

70 75 80 85 90 95 100 1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

8000

TAD (mmHg)

CD36

r = 048 P = 0013

B

50 100 150 200 250 300 350 -100

0

100

200

300

400

500

PPARα Ly

TG(mgdl)

r = - 042 P = 003

A

50 100 150 200 250 300 350 400 -100

0

100

200

300

400

500

PPARα Mo

TG ( mgdl) r =- 0 43 P = 0027

Figura 554 Corelaţii icircn SM icircntre HDL-col şi expresia PPARα icircn Mo (A) şi Eo(B)

Corelaţii icircntre nivelul de expresie relativă a PPARα şi markeri ai disfuncţiei

endoteliale şi inflamaţiei cronice

Deşi nu a icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică am reţinut corelaţia invers

proporţională (r = - 0331 P = 006) dintre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα

icircn PMN şi concentraţia serică a Non-HDL-colesterolului

Studiind relaţiile dintre parametri icircn lotul de pacienţi cu SM am observat o corelaţie

moderată invers proporţională icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Eo şi

acidul uric seric (figura 555 A) corelaţie absentă la subiecţii fără SM

Figura 555 Lot SM corelaţia dintre expresia PPARα icircn Eo şi acidul uric (A) respectiv

PPARα şi fibrinogen (B)

Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P=008) am notat pentru

pacienţii cu SM corelaţia invers proporţională dintre expresia PPARα icircn Eo şi concentraţia

serică a fibrinogenului ( figura 555B)

V5 Discuţii

Icircn cadrul lucrării de doctorat am studiat nivelul de expresie relativă a PPARα icircn

leucocitele pacienţilor cu SM comparativ cu cea a subiecţilor normali Expresia PPARα a fost

studiată icircn paralel cu cea a CD36 glicoproteină exprimată pe suprafaţa a numeroase celule

din organismul uman inclusiv pe cea a Mo şi macrofagelor Prin funcţia sa de receptor pentru

particulele oxidate de LDL CD36 cunoscut ca bdquoscavenger receptorrdquo de clasa B sau

bdquotrombospodin receptorrdquo contribuie la dezvoltarea inflamaţiei de la nivel endotelial şi

formarea plăcii de ateroscleroză Referitor la studiul PPARα icircn Eo icircn sindromul metabolic

menţionăm că studiul nostru este primul care arată că nivelul de expresie a proteinei PPARα

icircn Eo măsurat prin citometrie icircn flux este semnificativ mai redus la pacienţii care sunt

diagnosticaţi cu acest sindrom De asemenea icircn lotul cu SM cercetat icircn cadrul studiului

receptorilor PPARα numărul Eo circulante a fost semnificativ mai crescut la pacienţii cu SM

B

0 500 1000 1500 2000 2500 200

250

300

350

400

450

PPARα Eo o

Fibrinogen mgdl

r =- 036 P = 008

0 500 1000 1500 2000 2500 1 2 3 4 5 6 7 8 9

10 11

PPARα Eo_

Acid uric(mgdl) r = 048 P = 0014 A

0 500 1000 1500 2000 2500 10

20

30

40

50

60

70

80

PPARα Eo

HDL(mgdl)

r = 044 P = 0024

B

100 150 200 250 300 350 400 10

20

30

40

50

60

70

80

PPARα Mo

HDL( mgdl)

r = 046 P = 0019

A

(P = 003) Aceste constatări conduc la ipoteza că Eo joacă un rol special icircn mecanismele

patogenice declanşate icircn sindromul metabolic şi că receptorii PPARα sunt importanţi icircn

implicarea Eo icircn obezitate şi insulinorezistenţă Creşterea numărului de Eo circulante este

urmată de eliberarea mediatorilor proinflamatori iar reducerea expresiei PPARα icircn Eo

determină perturbarea mecanismelor de control al inflamaţiei cu exacerbarea cascadei

proinflamatorii Consecutiv se agravează disfuncţia endotelială şi se accelerează progresia

leziunilor de ateroscleroză Extrapolacircnd aceste ipoteze putem spune că asocierea raportată

dintre boala ischemică coronariană şi Eo poate fi şi consecinţa exacerbării cascadei

proinflamatorii de la nivel vascular produsă datorită scăderii expresiei PPARα icircn Eo iar

creşterea numărului de Eo circulante poate reprezenta o adaptare a organismului uman care

icircncearcă să suplinească deficitul de receptori PPARα Analizacircnd curba ROC pentru

intensităţile medii de fluorescenţă determinate pentru anticorpii anti- PPARα icircn Eo am

obţinut pentru acest biomarker o sensibilitate a testului de 565 şi o specificitate de 778

pentru un punct de cut-off de 1533 ( figura 536 ) Deşi aria AUC (Aria under the curve) egală

cu 0663 icircncadrează acest test ca avacircnd o acurateţe redusă observăm că că această valoare

este apropiată de determinările AUC pentru alţi factori (fibrinogen raport de aterogenitate

acid uric non- HDL-colesterol) cunoscuţi ca fiind implicaţi icircn aterogeneză şi inflamaţia

cronică (figura 431) Aceste remarci alături de faptul că icircn studiul receptorilor PPARα icircn

leucocite am inclus subiecţi la primul diagnostic de SM creează premisa integrării

determinării expresiei relative a receptorilor PPARα icircn diagnosticul complex al sindromului

metabolic Putem spune că icircn final studiul expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofilele

circulante se dovedește a fi util icircn diagnosticul precoce la nivel molecular al SM permiţacircnd

identificarea timpurie a unor indivizi cu risc cardiometabolic crescut Astfel intervenţia

precoce asupra subiecţilor cu deficit de PPARα icircn Eo contribuie la managementul eficient al

afecţiunilor degenerative icircn care inflamaţia cronică icircndeplineşte un rol primordial Referitor

la populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările efectuate prin citometrie de flux nu au

arătat existenţa unor diferenţe statistice icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα

la subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali Rezultatele noastre pot fi

consecinţa caracteristicilor loturilor studiate (icircn studiul nostru au fost incluşi subiecţi recrutaţi

la primul diagnostic de SM şi icircn absenţa stimulării receptorilor PPARα cu droguri agoniste

PPARα) dar icircn acelaşi timp pot apare diferenţe datorită metodei utilizate (231 232 233)

Făcacircnd o paralelă cu un studiu publicat icircn 2013 icircn Europa (231) care a arătat creşterea

nivelului de expresie al PPARα icircn Ly şi Mo observăm că deşi numărul de subiecţi a fost

aproximativ egal (57 participanţi icircn studiul nostru 60 icircn studiul DAmore) subiecţii icircn studiul

amintit au fost recrutaţi dintr-o clinică cu profil medical la primul diagnostic de SM icircn timp

ce metoda utilizată a fost PCR (Polymerase Chain Reaction) mult mai fidelă decacirct citometria

icircn flux icircn studiul receptorilor nucleari De asemenea DAmore nu investighează expresia

PPARα icircn Eo şi PMN icircn cercetare fiind incluse doar celulele CD14+ (predominant Mo) şi

CD14- (predominant Ly) Deşi nu am obţinut diferenţe statistic semnificative icircntre cele două

loturi referitoare la nivelul de expresie relativă a PPARα icircn Mo Ly şi PMN am observat

corelaţii puternice semnificative statistic icircntre expresia receptorilor PPARα icircn aceste tipuri

celulare Rezultatele obţinute sugerează existenţa unui mecanism diferit molecular de control

icircn eozinofile care reglează cantitatea de proteină PPARα icircn eozinofile versus alte tipuri de

leucocite (la pacienţii cu SM) şi acest lucru este icircn concordanţă cu cercetările care descriu

expresia PPARα mRNA icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale

bronşice keratinocite) Studiind prin citometrie de flux nivelul de expresie relativă a

receptorului CD36 la nivelul Mo am arătat prezenţa acestuia icircn Mo tuturor subiecţilor

investigaţi Analizacircnd valorile intensităţii medii de fluorescenţă a CD36 icircn loturile studiate

am observat o tendinţă de creştere la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali

confirmacircnd implicarea receptorului CD36 icircn patogeneza acestuia Referitor la expresia

receptorului CD36 rezultatele obţinute sunt icircn consens cu studii anterioare care au arătat

creşterea expresiei CD36 la pacienţii cu SM şi diabet zaharat Astfel pe lacircngă diferenţa icircn

expresia CD36 s-au raportat şi corelaţii inverse icircntre expresia proteinei CD36 şi nivelul

adiponectinei Acelaşi studiu a evidenţiat o corelaţie pozitivă intre expresia CD36 cu expresia

receptorilor PPAR gamma relaţia cu PPARα nefiind investigată

Analiza de subgrup a relaţiilor dintre componentele SM și elementele moleculare

proinflamatorii studiate a relevat prezenţa unor asocieri semnificativ statistice icircntre acestea

Se argumentează astfel că veridicitatea studiului este susţinută de interdependenţele statistice

ale componentelor SM Determinarea coeficientului de corelaţie Icircn studiul nostru nivelul de

expresie relativă a PPARα s-a corelat moderat negativ (figura 550) cu CA a subiecţilor din

lotul normal pentru populaţiile celulare de Mo (r = - 0420 P = 001) Ly (r = - 046 P =

0009) şi PMN (r = - 040 P = 0024) date care sunt icircn concordanţă cu studiile care arată

rolul PPARα icircn furnizarea energiei prin beta-oxidarea acizilor graşi Icircn acelaşi timp icircn lotul

pacienţilor cu SM nu am identificat prezenţa unei asocieri icircntre nivelul de expresie relativă a

PPARα şi valoarea măsurată a CA Asocierea dintre expresia relativă a PPARα cu obezitatea

de tip central completează datele existente referitoare la reglarea homeostaziei energetice

conturacircnd un mecanism de control deficitar al aportului caloric al SM Icircn condiţiile icircn care

rezultatele obţinute prin metoda citometriei icircn flux nu au arătat existenţa unei corelaţii intre

expresia PPARα şi CA la pacienţii cu SM considerăm că ar fi necesar studiul

polimorfismului genei PPARA care ar putea aduce informaţii importante cu privire la

implicarea acestor receptori icircn apariţia obezităţii de tip central Subliniem acest lucru deoarece

obezitatea este o boală plurifactorială icircn care pe lacircngă factorii ereditari sunt implicaţi factori

de mediu psihologici şi sociali (245) Existenţa unei componente genetice a aterosclerozei

este legată şi de prezenţa unor variante ale genei PPARA asociate cu creşterea incidenţei bolii

cardiovasculare (82) şi a SM (249) Icircn studiul nostru am constatat o scădere statistic

semnificativă a nivelului expresiei relative a receptorilor PPARα icircn Eo la subiecţii cu

antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială comparativ cu subiecţii fără istoric

familial de hipertensiune (figura 537) Deşi diferenţele calculate icircntre loturile studiate nu au

icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică la subiecţii care au declarat prezenţa

antecedentelor familiale de hipertensiune arterială remarcăm o tendinţă de scădere a

intensităţii medii de fluorescenţă pentru Ac anti-PPARα la nivelul Mo (figura 515 P = 006

) icircn timp ce expresia relativă a CD36 icircnregistrează o creştere la acesti subiecţi (figura 545 P

= 008) Icircn contextul riscului cardiovascular foarte icircnalt al pacienţilor cu SM amintim şi

existenţa corelaţiei pozitive dintre valorile tensiunii arteriale diastolice şi expresia relativă a

receptorului CD36 (r = 0483 P = 0013) Această constatare este icircn consens cu studiile care

au arătat că forma solubilă circulantă a CD36 este asociată cu factorii de risc cardiovasculari

fiind propusă ca un marker precoce al aterosclerozei Activarea PPARα este asociată cu

modularea metabolismului lipidic iar agoniştii PPARα sunt utilizaţi icircn mod curent pentru

tratamentul dislipidemiei Sub acţiunea agoniştilor PPARα se obţine o icircmbunătăţire a funcţiei

endoteliale şi a parametrilor reologici funcţiile pleiotropice ale agoniştilor PPARα fiind

dovedite icircn trialuri clinice controlate Icircn populaţiile de Mo şi Ly la pacienţii cu SM

cercetarea noastră a evidenţiat o asociere negativă icircntre nivelul de expresie relativă a

receptorilor PPARα şi concentraţia TG serice (figura 551) Astfel scăderea expresiei

receptorilor PPARα este asociată cu creşterea nivelului TG serice contribuind la profilul

lipidic aterogen din SM Icircn conformitate cu literatura de specialitate icircn studiul efectuat prin

metoda citometriei icircn flux am găsit prezenţa asocierii icircntre nivelul de expresie al PPARα şi

HDL-colesterol Corelaţia pozitivă dintre nivelul de expresie relativă PPARα şi concentraţia

HDL-colesterolului a fost observată icircn lotul martor icircn populaţiile de Mo (r = 035 P = 005)

şi Ly ( r = 036 P = 004) (figura 553) susţinacircnd faptul că stimularea receptorilor PPARα

este legată de creşterea nivelului seric al lipoproteinelor cu densitate crescută La pacienţii cu

SM corelaţia dintre expresia PPARα şi HDL-colesterol a fost evidenţiată icircn populaţiile de Mo

(r = 046 P = 0019) şi eozinofile (r = 044 P = 0024) Se desprinde concluzia că icircn

sindromul metabolic scăderea concentraţiei HDL-colesterol este legată de diminuarea

nivelului de expresie relativă a receptorilor nucleari PPARα icircntărind afirmaţiile legate de

rolul acestor receptori icircn progresia bolilor cardiovasculare Studiind reactanţii de fază acută

analiza statistică a relevat o diferenţă semnificativă din punct de vedere statistic icircntre valorile

fibrinogenului la pacienţii cu SM atunci cacircnd au fost comparaţi cu subiecţii fără SM

(Capitolul IV4 P lt0 001 figura 427A) De asemenea icircn Capitolul V dedicat studiul

expresiei relative a receptorilor PPARα studiul valorilor fibrinogenului a arătat creşterea

acestui reactant de faza acută icircn lotul cu SM comparativ cu lotul martor (P lt0 0001) Icircn

studiul nostru am calculat o corelaţie invers proporţionala (r = - -036 fig 555B) icircntre

nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile şi concentraţia serică a

fibrinogenului Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P = 008) am reţinut

această asociere deoarece am demonstrat că nivelul de expresie relativă al receptorilor

PPARα icircn eozinofile este mai scăzut icircn sindromul metabolic iar sindromul metabolic este

caracterizat printr-un status inflamator cronic status caracterizat şi de creşterea concentraţiei

serice a fibrinogenului De asemenea notam ca această corelaţie negativă se află icircn

concordanţă cu studiile care arata că tratamentul cu agonişti PPARα (fibraţi) determina

scăderea nivelului seric al fibrinogenului contribuind la diminuarea inflamaţiei cronice din

sindromul metabolic şi icircn consecinţă amelioracircnd insulinorezistenţa

LIMITE ȘI DIFICULTĂȚI IcircN CERCETARE

Icircn cadrul Tezei de Doctorat am desfăşurat o cercetare care şi-a propus studierea

expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Recrutarea anamneza şi examinarea

clinică a subiecţilor au fost realizate icircn cadrul Cabinetului de Medicină de Familie CMI Popa

Elena din Iaşi iar determinările hematologice şi biochimice s-au efectuat icircn cadrul

Laboratorului Ambulatorului de Specialitate al Spitalului Universitar ldquoSfacircntul Spiridon din

Iaşi Icircn studiul epidemiologic şi al markerilor inflamatori al sindromului metabolic desfăşurat

au fost incluşi un număr de 1530 de participanţi pe baza liberului consimţămacircnt examinaţi icircn

perioada 01012013 - 31122013 Icircn continuare icircn perioada 1012014 - 28022014 pe baza

criteriilor de includere şi excludere icircn cele două loturi de studiu am investigat un număr de 57

de subiecţi prezentaţi la consultaţie icircn această perioadă şi care au icircndeplinit criteriile de

includere icircn cele două loturi (Lot SM şi Lot Control) constituite pentru evaluarea nivelului de

expresie a receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Explorarea nivelului de expresie

relativă a receptorilor PPARα s-a desfăşurat icircn cadrul Laboratorului de Biologie Moleculară

de pe platforma Institutului Regional de Oncologie Datorită resurselor proprii financiare

limitate trebuie să subliniez că aceasta cercetare nu ar fi fost posibilă fără contribuţia unor

cercetători din domeniul medical care m-au sprijinit necondiţionat atacirct icircn elaborarea

protocolului de lucru cacirct şi icircn efectuarea propriu-zisă a studiului Icircn acest sens menţionăm şi

faptul că pentru studiul receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic am utilizat aparatura

Laboratorului de Biologie Moleculară (care deserveşte icircntreaga Regiune a Moldovei) Pe

această cale mulţumesc personalului Laboratorului de Biologie Moleculară pentru ajutorul

acordat icircn desfăşurarea cercetării doctorale icircn condiţiile icircn care se observa creşterea

numărului de pacienţi care se adresează acestei platforme de cercetare Mulţumesc de

asemenea şi Doamnei Doctor Elena Butoi din cadrul Institutului de Biologie şi Patologie

Moleculară ldquoNicolae Simionescurdquo Bucureşti) pentru donaţia anticorpului secundar anti-

FITC Icircn consecinţă pentru recrutarea unui număr mai mare de participanţi ar fi fost necesară

icircn primul racircnd obţinerea unor resurse financiare suplimentare pentru achiziţia de aparatură şi

reactivi Totuşi numărul subiecţilor recrutaţi este apropiat de numărul subiecţilor raportaţi icircn

cadrul unor granturi de cercetare care aveau ca ţinta studiul expresiei receptorilor PPARα

(212 227 228 231) Rezultatele obţinute continua seria lucrărilor care arata importanta

studiului mecanismelor etiopatogenice ale sindromului metabolic patologie care se afla icircntr-o

continuă creştere La pacienţii cu SM pe lacircngă diminuarea nivelului de expresie a receptorilor

PPARα icircn eozinofile ne aşteptam şi la evidenţierea unor modificări icircn expresia PPARα şi icircn

populaţiile de Ly Mo şi PMN Acest fapt poate fi explicat de utilizarea unor celule provenite

de la pacienţi fără afectare cardiovasculară fără diabet zaharat şi necesită continuarea

studiului pe culturi celulare icircn condiţii de stimulare cu agonişti PPARα deziderat care

impune continuarea investigării expresiei PPARα printr-un grant de cercetare

ORIGINALITATEA ȘI CONTRIBUȚIILE INOVATIVE ALE TEZEI DE

DOCTORAT PERSPECTIVE DE CERCETARE

Evaluarea nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn leucocitele circulante

aduce noi perspective icircn studiul obezităţii şi sindromului metabolic Importanta studiului

expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic derivă din prevalenta crescută a

sindromului metabolic icircn populaţia cercetată la care se adaugă riscul cardiovascular foarte

icircnalt al acestor pacienţi cu implicaţii majore icircn sănătatea publică Rolul receptorilor PPARα

icircn inflamaţie şi aterogeneza este binecunoscut dar studiul nostru este primul care a arătat că

nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα este semnificativ mai scăzut in populatiile

de eozinofile la pacienţii cu SM Această concluzie coroborata cu existenţa unei stracircnse

asocieri intre expresia receptorilor PPARα la nivelul Mo limfocitelor şi PMNlor creeaza

ipoteza existenţei unui mecanism de control diferit al expresiei PPARα la nivelul

eozinofilelor Această cercetare aduce informaţii importante referitoare la mecanismele

proinflamatorii care stau la baza insulinorezistenţei şi riscului cardiometabolic şi impune

continuarea studiului acestor receptori nucleari prin citometrie icircn flux metodă care poate fi

aplicată şi la scara mai largă dacă sunt asigurate resursele materiale necesare cercetării

Cercetarea prin citometrie icircn flux poate fi completată de studiul polimorfismului genei

PPARA şi astfel se pot identifica timpuriu indivizii cu potenţial risc cardiometabolic crescut

Studiul receptorilor PPARα a stabilit conexiuni cu factori proinflamatori şi aterogenetici iar

continuarea cercetării poate aduce şi elemente noi de diagnostic precoce icircn sindromul

metabolic contribuind la icircmbunătăţirea prognosticului acestor pacienţi

CONCLUZII FINALE

1 Aplicarea scorului de SM alături de implementarea algoritmului electronic de diagnostic

contribuie la o prelucrare rapidă eficientă și standardizată a informaţiilor la nivelul

medicinei primare

2 Prevalenţa SM calculată astfel icircn cadrul studiului este crescută (2732) icircn concordanţă

cu datele raportate

3 Controlul factorilor de risc cardiometabolici incluşi icircn SM se poate realiza prin

managementul stilului de viaţă (scăderea greutăţii corporale prin combaterea

sedentarismului şi adoptarea unei diete antiaterogene şi hipocalorice) şi administrarea

terapiei medicamentoase

4 Este necesară adoptarea unei politici de sănătate publică pentru prevenirea creşterii icircn

populaţie a prevalenţei obezităţii şi a diabetului zaharat

5 Noi metode de cercetare icircn domeniul SM axate pe diagnosticarea precoce şi cuantificarea

eficientă a acestuia duce la diminuarea incidenței evenimentelor cardiovasculare majore

6 Sindromul metabolic se caracterizează printr-un status inflamator cronic

7 Valorile Non-HDL-colesterolului şi a raportului de aterogenitate sunt semnificativ mai

mari la pacienţii cu SM

8 Dintre reactanţii de faza acută am observat că valoarea medie a fibrinogenului este mai

crescută icircn lotul cu SM

9 Valorile eozinofilelor sunt crescute icircn sindromul metabolic iar explorarea relaţiei dintre

eozinofile şi obezitate constituie una din direcţiile de studiu actuale ale sindromului

metabolic

10 Evaluarea markerilor inflamatori icircn contextul sindromului metabolic este utilă icircn

evaluarea complexă a a factorilor de risc cardiometabolici

11 Prin metoda citometriei icircn flux am demonstrat prezenta Receptorilor Activaţi de

Inductorii Proliferării Peroxizomilor ndash Alpha (PPARα) icircn toate populaţiile de leucocite

studiate (Mo limfocite PMN eozinofile) atacirct icircn lotul pacienţilor cu SM cacirct şi icircn lotul

martor

12 Utilizacircnd intensitatea medie de fluorescenţă a anticorpilor anti- PPARα am arătat că

nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile este semnificativ mai redus

la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali

13 Acest studiu este primul care a demonstrat existenţa unei scăderi statistic semnificative a

nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofilele pacienţilor cu SM

confirmacircnd cercetările recente care au evidenţiat rolul eozinofilelor şi al receptorilor

PPARα icircn obezitate reglarea inflamaţiei cronice şi aterogeneza

14 Contrar aşteptărilor noastre icircn populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările

efectuate icircn cele două loturi de studiu (cu şi fără sindom metabolic) nu am evidenţiat

diferenţe statistic seminificative icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα la

subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali

15 Icircn populaţiile de Mo limfocite şi polimorfonucleare am observat corelaţii puternice

semnificativ statistic icircntre expresia PPARα icircn aceste tipuri celulare sugeracircnd existenţa

unui mecanism unic de control al inflamaţiei cronice la nivelul acestor celule probabil

diferit de cel din eozinofile

16 La subiecţii cu SM expresia relativă a PPARα icircn Eo este invers asociată cu expresia

receptorului CD36 (receptor al particulelor de ox - LDL şi propus ca un marker precoce al

aterosclerozei) dovedind rolul antiinflamator al receptorilor PPARα la nivel endotelial

17 La pacienţii cu antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială nivelul de

expresie al receptorilor PPARα icircn eozinofile şi Mo este diminuat comparativ cu subiecţii

fără antecedente familiale de hipertensiune arterială Putem spune că studiul efectuat de

noi aduce informaţii importante legate de geneză aterosclerozei şi hipertensiunii arteriale

18 Prin studiul asocierilor dintre receptorii PPARα şi componentele clinice ale sindromului

metabolic am arătat rolul acestor receptori icircn determinismul obezităţii de tip central

nivelul expresiei relative a receptorilor PPARα fiind invers proporţional cu circumferinţa

abdominală

19 Icircn acelaşi timp nivelul de expresie a PPARα icircn sindromul metabolic este asociat pozitiv

cu concentraţia serică a HDL-colesterolului şi invers asociat cu nivelul trigliceridelor

serice dovedind rolul acestor receptori icircn diminuarea procesului inflamator cronic de la

nivel vascular

20 La pacienţii cu SM scăderea expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofile este corelată cu

creşterea unor markeri ai sindromului inflamator cronic cardiometabolic (acid uric

fibrinogen) ilustracircnd importanta receptorilor icircn reglarea status-ului inflamator cronic din

sindromul metabolic

21 Utilizarea metodei flowcitometrice pentru studiul expresiei relative a receptorilor PPARα

icircn leucocite a adus informaţii importante cu privire la mecanismele moleculare de control

implicate icircn patogenia bolilor cardiometabolice icircn concordanţă cu cercetările care descriu

expresia PPAR icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale bronşice

keratinocite)

BIBLIOGRAFIE SELECTIVA

1 Kahn R Metabolic syndrome- what is the clinical usefulness Lancet 2008371(9628)1892-3

2 Reaven GM The metabolic syndrome is this diagnosis necessary Am J Clin Nutr 2006 83(6)1237-7

3 Grundy SM Pre-Diabetes Metabolic Syndrome and Cardiovascular Risk J Am Coll Cardiol 201259(7)

635-43

4 International Diabetes Federation IDF Diabetes Atlas 6th edn International Diabetes Federation Belgium

Brussels 20131-155

5 World Health Organization Global Status Report on Noncommunicable Diseases 2010 World Health

Organization Geneva Switzerland 20111-176

6 Coman AE Petrovanu R Sindromul metabolic in practica de ambulator Editura Pim Iaşi 2009 1-103

7 Grundy SM Becker D Clark LT et alThird Report of the National Cholesterol Education Program (NCEP)

Expert Panel on Detection Evaluation and Treatment of High Blood Cholesterol in Adults (Adult

Treatment Panel III) Final Report Circulation 2002106(25)3143-90

8 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J Metabolic syndrome- a new worldwide definition A Consensus Statement

from the International Diabetes Federation Diabet Med 2006 23(5)469-80

9 KG Alberti KG Eckel RH Grundy SM etal International Diabetes Federation task force on epidemiology

and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart Association World Heart

Federation International Atherosclerosis Society International Association for the study of obesity

Harmonizing the metabolic syndrome a joint interim statement of the International Diabetes Federation task

force on epidemiology and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart

Association World Heart Federation International Atherosclerosis society and International Association

for the study of obesity Circulation 2009120(16)1640-5

10 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J IDF Epidemiology Task Force The metabolic syndrome new

worldwide definition Lancet 2005 366 1059 - 62

11 Oleszczyk M Svab I Seifert B et al Primary healthcare in the developing part of Europe changes and

development in the former Eastern Bloc countries that joined the European Union following 2004 Med Sci

Monit 2009(15)78ndash84

12 Jung U J Choi M S Obesity and Its Metabolic Complications The Role of Adipokines and the

Relationship between Obesity Inflammation Insulin Resistance Dyslipidemia and Nonalcoholic Fatty

Liver Disease Int J Mol Sci 2014rsquo15(4) 6184-223

13 Vanden Heuvel JP Peters JM Peroxisome Proliferators In Ramos K (ed) Cellular and Molecular

Toxicology (Second Edition) Volume 2 New York Elsevier Science Inc 2010 145 - 67

14 Yessoufou A Wahli W Multifaceted roles of peroxisome proliferator-activated receptors (PPARs) at the

cellular and whole organism levels Swiss Med Wkl 2010140w13071 doi104414smw201013071

15 Azhar S Peroxisome proliferator-activated receptors metabolic syndrome and cardiovascular disease

Future Cardiology 20106(5)657-91

16 Andries G Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity

Diabetes and Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(Suppl)24-32

17 Zandbergen F Plutzky J PPARalpha in atherosclerosis and inflammation Biochim Biophys Acta

20071771(8)972-82

18 Straus DS Glass CK Anti-inflammatory actions of PPAR ligands new insights on cellular and molecular

mechanisms Trends Immunol 200728(12)551-8

19 Zlei M Zugun- Eloae F Carasevici E Citometrie icircn flux - Bază şi clinică Icircn Hinescu ME (ed) Citometrie icircn

flux - principii şi aplicaţii clinice Bucureşti Editura Viaţa Medicală Romacircnească 20111-128

20 Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity Diabetes and

Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(9)24-32

21 Woerly G Honda K Loyens M et al Peroxisome proliferator-activated receptors alpha and gamma down-

regulate allergic inflammation and eosinophil activation J Exp Med 2003198(3)411-21

22 Salle-Saumont D Brenuchon C Kanda A et al Peroxisome proliferator-activated receptor alpha regulates

skin inflammation and humoral response in atopic dermatitis J Clin Allergy Immunology 2008 21(4)962-8

23 Schote A Turner J Schiltz J et al Nuclear receptors in human immune cells expression and correlations

Mol Immunolog 200744(6)1436-45

24 DAmore S Vacca M Graziano G et al Nuclear receptors expression chart icircn peripheral blood

mononuclear cells identifies patients with Metabolic Syndrome Biochim Biophys Acta

20131832(12)2289-301

25 Uthurralt J Gordish-Dressman H Bradbury M T et al PPARalpha L162V underlies variation in serum

triglycerides and subcutaneous fat volume in young males BMC Med Genet 2007855

26 Hiukka A Leinonen ES Jauhiainen M et al Long-term effects of fenofibrate on VLDL and HDL

subspecies icircn participants with type 2 diabetes mellitus Diabetologia 2007 50(10)2067-75

27 Robins SJ Rubins HB Faas FH et alInsulin resistance and cardiovascular events with low HDL

cholesterol The Veterans Affairs HDL Intervention Trial (VA-HIT) Diabetes Care 2003 26(5)1513-7

28 Devaraj S Siegel D Jialal I Statin Therapy in Metabolic Syndrome and Hypertension Post-JUPITER

What is the Value of CRP Curr Atheroscler Rep 2011 13(1) 31ndash42

29 Imperatore G Riccardi G Iovino C et al Plasma Fibrinogen A New Factor of the Metabolic Syndrome A

population-based study Diabetes Care 19982 1(4)649-54

30 Krysiak R Gdula-Dymek A Bachowski R Okopien B Pleiotropic effects of atorvastatin and fenofibrate

in metabolic syndrome and different types of pre-diabete Diabetes Care 201033(10)2266-70

31 Hermans MP Impact of Fenofibrate on Type 2 Diabetes Patients with Features of the Metabolic Syndrome

Subgroup Analysis From FIELD Curr Cardiol Rev 20106(2)112-8

32 Silverstein R Inflammation atherosclerosis and arterial thrombosis Role of the scavenger receptor CD36

Cleveland Clinic Journal of Medicine 200976(Suppl 2)S27-S30

33 Hăncu N Obezitatea In Vereşiu IA (ed) Diabetul zaharat nutritia si bolile metabolice Volume 2 Editura

Echinox Cluj- Napoca 2010 1-15

Lista lucrări publicate

1 Elena Popa Maria Maidaniuc Agnes Bacusca Alamir Diaa Rodica Petrovanu Adorata Elena

Coman Disfuncţia endotelială ndash de la mecanisme moleculare la cuantifi care şi tratament icircn practica

medicală Practica Medicală 20149(3) 109-14

2 Elena Popa Agnes Bacusca Alamir Diaa Maria Maidaniuc Rodica Petrovanu Adorata Elena Coman

The function of insulin receptor (IRF) in evolution of obesity correlation with adipocytes diameters

Archives of the Balkan Medical Union 201449(3) 275-9

3 Elena Popa Florin Zugun-Eloae Mihaela Zlei Daniela Jitaru Oana Maria Pintilie Adorata Elena

Coman Maria Traian Didona Anca Ungureanu Eugen Carasevici - acceptata pentru numarul 42014

Flow cytometry analysis of PPAR-alpha receptors in metabolic syndrome) Revista Romană de

Medicină de Laborator(RRLM-D-14-00034R1- adeverinţa ataşată

Page 25: REZUMAT TEZĂ DE DOCTORAT - umfiasi.ro Doctorat/rezumat... · universitatea de medicinĂ Şi farmacie “grigore t. popa” iaŞi facultatea de medicinĂ rezumat tezĂ de doctorat

Figura 551 Lot SM Corelaţie icircntre expresia PPARα şi TG (A Mo B Ly)

Analizand corelatia dintre receptorii CD36 si valorile TA la pacientii cu SM am observat

o asociere pozitivă asteptată intre TAD si nivelul de expresie al receptorilor CD36 (fig 552)

Figura 552 Lot SM Corelaţii icircntre expresia

receptorilor CD36 şi valorile tensiunii arteriale

diastolice

Studiind corelaţiile dintre receptorii PPARα şi HDL-col la subiecţii din lotul martor am

notat o asociere pozitivă icircntre expresia PPARα icircn Mo şi Ly cu HDL-col (fig 553)

Figura 553 Lot martor Corelaţii icircntre HDL-col şi expresia PPARα icircn Mo(A) Ly(B)

Icircn lotul normal am evidenţiat corelaţii pozitive moderate dar semnificative statistic icircntre

CA şi valorile TAS (r = 062 P lt 0001) respectiv TAD (r = 050 P=0004) precum şi icircntre

CA şi glicemia subiecţilor normali (r = 052 P = 0003) Aceste date icircmpreună cu relaţia

invers proporţională identificată icircntre HDL-col şi CA (r = 050 P = 001) susţin validitatea

acestui studiu Icircn lotul subiecţilor cu SM am observat o corelaţie moderat pozitivă icircntre

expresia PPARα icircn populaţiiile de Mo şi Eo şi concentraţia a HDL-col (fig 554)

B

100 150 200 250 300 350 20

30

40

50

60

70

80

90

100

PPARα Ly

HDL-col-(mgdl)

r = 036 P = 0046

A

150 200 250 300 350 400 20

30

40

50

60

70

80

90

100

PPARα Mo

HDL-col-(mgd)l

r = 035 P = 005

70 75 80 85 90 95 100 1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

8000

TAD (mmHg)

CD36

r = 048 P = 0013

B

50 100 150 200 250 300 350 -100

0

100

200

300

400

500

PPARα Ly

TG(mgdl)

r = - 042 P = 003

A

50 100 150 200 250 300 350 400 -100

0

100

200

300

400

500

PPARα Mo

TG ( mgdl) r =- 0 43 P = 0027

Figura 554 Corelaţii icircn SM icircntre HDL-col şi expresia PPARα icircn Mo (A) şi Eo(B)

Corelaţii icircntre nivelul de expresie relativă a PPARα şi markeri ai disfuncţiei

endoteliale şi inflamaţiei cronice

Deşi nu a icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică am reţinut corelaţia invers

proporţională (r = - 0331 P = 006) dintre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα

icircn PMN şi concentraţia serică a Non-HDL-colesterolului

Studiind relaţiile dintre parametri icircn lotul de pacienţi cu SM am observat o corelaţie

moderată invers proporţională icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Eo şi

acidul uric seric (figura 555 A) corelaţie absentă la subiecţii fără SM

Figura 555 Lot SM corelaţia dintre expresia PPARα icircn Eo şi acidul uric (A) respectiv

PPARα şi fibrinogen (B)

Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P=008) am notat pentru

pacienţii cu SM corelaţia invers proporţională dintre expresia PPARα icircn Eo şi concentraţia

serică a fibrinogenului ( figura 555B)

V5 Discuţii

Icircn cadrul lucrării de doctorat am studiat nivelul de expresie relativă a PPARα icircn

leucocitele pacienţilor cu SM comparativ cu cea a subiecţilor normali Expresia PPARα a fost

studiată icircn paralel cu cea a CD36 glicoproteină exprimată pe suprafaţa a numeroase celule

din organismul uman inclusiv pe cea a Mo şi macrofagelor Prin funcţia sa de receptor pentru

particulele oxidate de LDL CD36 cunoscut ca bdquoscavenger receptorrdquo de clasa B sau

bdquotrombospodin receptorrdquo contribuie la dezvoltarea inflamaţiei de la nivel endotelial şi

formarea plăcii de ateroscleroză Referitor la studiul PPARα icircn Eo icircn sindromul metabolic

menţionăm că studiul nostru este primul care arată că nivelul de expresie a proteinei PPARα

icircn Eo măsurat prin citometrie icircn flux este semnificativ mai redus la pacienţii care sunt

diagnosticaţi cu acest sindrom De asemenea icircn lotul cu SM cercetat icircn cadrul studiului

receptorilor PPARα numărul Eo circulante a fost semnificativ mai crescut la pacienţii cu SM

B

0 500 1000 1500 2000 2500 200

250

300

350

400

450

PPARα Eo o

Fibrinogen mgdl

r =- 036 P = 008

0 500 1000 1500 2000 2500 1 2 3 4 5 6 7 8 9

10 11

PPARα Eo_

Acid uric(mgdl) r = 048 P = 0014 A

0 500 1000 1500 2000 2500 10

20

30

40

50

60

70

80

PPARα Eo

HDL(mgdl)

r = 044 P = 0024

B

100 150 200 250 300 350 400 10

20

30

40

50

60

70

80

PPARα Mo

HDL( mgdl)

r = 046 P = 0019

A

(P = 003) Aceste constatări conduc la ipoteza că Eo joacă un rol special icircn mecanismele

patogenice declanşate icircn sindromul metabolic şi că receptorii PPARα sunt importanţi icircn

implicarea Eo icircn obezitate şi insulinorezistenţă Creşterea numărului de Eo circulante este

urmată de eliberarea mediatorilor proinflamatori iar reducerea expresiei PPARα icircn Eo

determină perturbarea mecanismelor de control al inflamaţiei cu exacerbarea cascadei

proinflamatorii Consecutiv se agravează disfuncţia endotelială şi se accelerează progresia

leziunilor de ateroscleroză Extrapolacircnd aceste ipoteze putem spune că asocierea raportată

dintre boala ischemică coronariană şi Eo poate fi şi consecinţa exacerbării cascadei

proinflamatorii de la nivel vascular produsă datorită scăderii expresiei PPARα icircn Eo iar

creşterea numărului de Eo circulante poate reprezenta o adaptare a organismului uman care

icircncearcă să suplinească deficitul de receptori PPARα Analizacircnd curba ROC pentru

intensităţile medii de fluorescenţă determinate pentru anticorpii anti- PPARα icircn Eo am

obţinut pentru acest biomarker o sensibilitate a testului de 565 şi o specificitate de 778

pentru un punct de cut-off de 1533 ( figura 536 ) Deşi aria AUC (Aria under the curve) egală

cu 0663 icircncadrează acest test ca avacircnd o acurateţe redusă observăm că că această valoare

este apropiată de determinările AUC pentru alţi factori (fibrinogen raport de aterogenitate

acid uric non- HDL-colesterol) cunoscuţi ca fiind implicaţi icircn aterogeneză şi inflamaţia

cronică (figura 431) Aceste remarci alături de faptul că icircn studiul receptorilor PPARα icircn

leucocite am inclus subiecţi la primul diagnostic de SM creează premisa integrării

determinării expresiei relative a receptorilor PPARα icircn diagnosticul complex al sindromului

metabolic Putem spune că icircn final studiul expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofilele

circulante se dovedește a fi util icircn diagnosticul precoce la nivel molecular al SM permiţacircnd

identificarea timpurie a unor indivizi cu risc cardiometabolic crescut Astfel intervenţia

precoce asupra subiecţilor cu deficit de PPARα icircn Eo contribuie la managementul eficient al

afecţiunilor degenerative icircn care inflamaţia cronică icircndeplineşte un rol primordial Referitor

la populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările efectuate prin citometrie de flux nu au

arătat existenţa unor diferenţe statistice icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα

la subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali Rezultatele noastre pot fi

consecinţa caracteristicilor loturilor studiate (icircn studiul nostru au fost incluşi subiecţi recrutaţi

la primul diagnostic de SM şi icircn absenţa stimulării receptorilor PPARα cu droguri agoniste

PPARα) dar icircn acelaşi timp pot apare diferenţe datorită metodei utilizate (231 232 233)

Făcacircnd o paralelă cu un studiu publicat icircn 2013 icircn Europa (231) care a arătat creşterea

nivelului de expresie al PPARα icircn Ly şi Mo observăm că deşi numărul de subiecţi a fost

aproximativ egal (57 participanţi icircn studiul nostru 60 icircn studiul DAmore) subiecţii icircn studiul

amintit au fost recrutaţi dintr-o clinică cu profil medical la primul diagnostic de SM icircn timp

ce metoda utilizată a fost PCR (Polymerase Chain Reaction) mult mai fidelă decacirct citometria

icircn flux icircn studiul receptorilor nucleari De asemenea DAmore nu investighează expresia

PPARα icircn Eo şi PMN icircn cercetare fiind incluse doar celulele CD14+ (predominant Mo) şi

CD14- (predominant Ly) Deşi nu am obţinut diferenţe statistic semnificative icircntre cele două

loturi referitoare la nivelul de expresie relativă a PPARα icircn Mo Ly şi PMN am observat

corelaţii puternice semnificative statistic icircntre expresia receptorilor PPARα icircn aceste tipuri

celulare Rezultatele obţinute sugerează existenţa unui mecanism diferit molecular de control

icircn eozinofile care reglează cantitatea de proteină PPARα icircn eozinofile versus alte tipuri de

leucocite (la pacienţii cu SM) şi acest lucru este icircn concordanţă cu cercetările care descriu

expresia PPARα mRNA icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale

bronşice keratinocite) Studiind prin citometrie de flux nivelul de expresie relativă a

receptorului CD36 la nivelul Mo am arătat prezenţa acestuia icircn Mo tuturor subiecţilor

investigaţi Analizacircnd valorile intensităţii medii de fluorescenţă a CD36 icircn loturile studiate

am observat o tendinţă de creştere la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali

confirmacircnd implicarea receptorului CD36 icircn patogeneza acestuia Referitor la expresia

receptorului CD36 rezultatele obţinute sunt icircn consens cu studii anterioare care au arătat

creşterea expresiei CD36 la pacienţii cu SM şi diabet zaharat Astfel pe lacircngă diferenţa icircn

expresia CD36 s-au raportat şi corelaţii inverse icircntre expresia proteinei CD36 şi nivelul

adiponectinei Acelaşi studiu a evidenţiat o corelaţie pozitivă intre expresia CD36 cu expresia

receptorilor PPAR gamma relaţia cu PPARα nefiind investigată

Analiza de subgrup a relaţiilor dintre componentele SM și elementele moleculare

proinflamatorii studiate a relevat prezenţa unor asocieri semnificativ statistice icircntre acestea

Se argumentează astfel că veridicitatea studiului este susţinută de interdependenţele statistice

ale componentelor SM Determinarea coeficientului de corelaţie Icircn studiul nostru nivelul de

expresie relativă a PPARα s-a corelat moderat negativ (figura 550) cu CA a subiecţilor din

lotul normal pentru populaţiile celulare de Mo (r = - 0420 P = 001) Ly (r = - 046 P =

0009) şi PMN (r = - 040 P = 0024) date care sunt icircn concordanţă cu studiile care arată

rolul PPARα icircn furnizarea energiei prin beta-oxidarea acizilor graşi Icircn acelaşi timp icircn lotul

pacienţilor cu SM nu am identificat prezenţa unei asocieri icircntre nivelul de expresie relativă a

PPARα şi valoarea măsurată a CA Asocierea dintre expresia relativă a PPARα cu obezitatea

de tip central completează datele existente referitoare la reglarea homeostaziei energetice

conturacircnd un mecanism de control deficitar al aportului caloric al SM Icircn condiţiile icircn care

rezultatele obţinute prin metoda citometriei icircn flux nu au arătat existenţa unei corelaţii intre

expresia PPARα şi CA la pacienţii cu SM considerăm că ar fi necesar studiul

polimorfismului genei PPARA care ar putea aduce informaţii importante cu privire la

implicarea acestor receptori icircn apariţia obezităţii de tip central Subliniem acest lucru deoarece

obezitatea este o boală plurifactorială icircn care pe lacircngă factorii ereditari sunt implicaţi factori

de mediu psihologici şi sociali (245) Existenţa unei componente genetice a aterosclerozei

este legată şi de prezenţa unor variante ale genei PPARA asociate cu creşterea incidenţei bolii

cardiovasculare (82) şi a SM (249) Icircn studiul nostru am constatat o scădere statistic

semnificativă a nivelului expresiei relative a receptorilor PPARα icircn Eo la subiecţii cu

antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială comparativ cu subiecţii fără istoric

familial de hipertensiune (figura 537) Deşi diferenţele calculate icircntre loturile studiate nu au

icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică la subiecţii care au declarat prezenţa

antecedentelor familiale de hipertensiune arterială remarcăm o tendinţă de scădere a

intensităţii medii de fluorescenţă pentru Ac anti-PPARα la nivelul Mo (figura 515 P = 006

) icircn timp ce expresia relativă a CD36 icircnregistrează o creştere la acesti subiecţi (figura 545 P

= 008) Icircn contextul riscului cardiovascular foarte icircnalt al pacienţilor cu SM amintim şi

existenţa corelaţiei pozitive dintre valorile tensiunii arteriale diastolice şi expresia relativă a

receptorului CD36 (r = 0483 P = 0013) Această constatare este icircn consens cu studiile care

au arătat că forma solubilă circulantă a CD36 este asociată cu factorii de risc cardiovasculari

fiind propusă ca un marker precoce al aterosclerozei Activarea PPARα este asociată cu

modularea metabolismului lipidic iar agoniştii PPARα sunt utilizaţi icircn mod curent pentru

tratamentul dislipidemiei Sub acţiunea agoniştilor PPARα se obţine o icircmbunătăţire a funcţiei

endoteliale şi a parametrilor reologici funcţiile pleiotropice ale agoniştilor PPARα fiind

dovedite icircn trialuri clinice controlate Icircn populaţiile de Mo şi Ly la pacienţii cu SM

cercetarea noastră a evidenţiat o asociere negativă icircntre nivelul de expresie relativă a

receptorilor PPARα şi concentraţia TG serice (figura 551) Astfel scăderea expresiei

receptorilor PPARα este asociată cu creşterea nivelului TG serice contribuind la profilul

lipidic aterogen din SM Icircn conformitate cu literatura de specialitate icircn studiul efectuat prin

metoda citometriei icircn flux am găsit prezenţa asocierii icircntre nivelul de expresie al PPARα şi

HDL-colesterol Corelaţia pozitivă dintre nivelul de expresie relativă PPARα şi concentraţia

HDL-colesterolului a fost observată icircn lotul martor icircn populaţiile de Mo (r = 035 P = 005)

şi Ly ( r = 036 P = 004) (figura 553) susţinacircnd faptul că stimularea receptorilor PPARα

este legată de creşterea nivelului seric al lipoproteinelor cu densitate crescută La pacienţii cu

SM corelaţia dintre expresia PPARα şi HDL-colesterol a fost evidenţiată icircn populaţiile de Mo

(r = 046 P = 0019) şi eozinofile (r = 044 P = 0024) Se desprinde concluzia că icircn

sindromul metabolic scăderea concentraţiei HDL-colesterol este legată de diminuarea

nivelului de expresie relativă a receptorilor nucleari PPARα icircntărind afirmaţiile legate de

rolul acestor receptori icircn progresia bolilor cardiovasculare Studiind reactanţii de fază acută

analiza statistică a relevat o diferenţă semnificativă din punct de vedere statistic icircntre valorile

fibrinogenului la pacienţii cu SM atunci cacircnd au fost comparaţi cu subiecţii fără SM

(Capitolul IV4 P lt0 001 figura 427A) De asemenea icircn Capitolul V dedicat studiul

expresiei relative a receptorilor PPARα studiul valorilor fibrinogenului a arătat creşterea

acestui reactant de faza acută icircn lotul cu SM comparativ cu lotul martor (P lt0 0001) Icircn

studiul nostru am calculat o corelaţie invers proporţionala (r = - -036 fig 555B) icircntre

nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile şi concentraţia serică a

fibrinogenului Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P = 008) am reţinut

această asociere deoarece am demonstrat că nivelul de expresie relativă al receptorilor

PPARα icircn eozinofile este mai scăzut icircn sindromul metabolic iar sindromul metabolic este

caracterizat printr-un status inflamator cronic status caracterizat şi de creşterea concentraţiei

serice a fibrinogenului De asemenea notam ca această corelaţie negativă se află icircn

concordanţă cu studiile care arata că tratamentul cu agonişti PPARα (fibraţi) determina

scăderea nivelului seric al fibrinogenului contribuind la diminuarea inflamaţiei cronice din

sindromul metabolic şi icircn consecinţă amelioracircnd insulinorezistenţa

LIMITE ȘI DIFICULTĂȚI IcircN CERCETARE

Icircn cadrul Tezei de Doctorat am desfăşurat o cercetare care şi-a propus studierea

expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Recrutarea anamneza şi examinarea

clinică a subiecţilor au fost realizate icircn cadrul Cabinetului de Medicină de Familie CMI Popa

Elena din Iaşi iar determinările hematologice şi biochimice s-au efectuat icircn cadrul

Laboratorului Ambulatorului de Specialitate al Spitalului Universitar ldquoSfacircntul Spiridon din

Iaşi Icircn studiul epidemiologic şi al markerilor inflamatori al sindromului metabolic desfăşurat

au fost incluşi un număr de 1530 de participanţi pe baza liberului consimţămacircnt examinaţi icircn

perioada 01012013 - 31122013 Icircn continuare icircn perioada 1012014 - 28022014 pe baza

criteriilor de includere şi excludere icircn cele două loturi de studiu am investigat un număr de 57

de subiecţi prezentaţi la consultaţie icircn această perioadă şi care au icircndeplinit criteriile de

includere icircn cele două loturi (Lot SM şi Lot Control) constituite pentru evaluarea nivelului de

expresie a receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Explorarea nivelului de expresie

relativă a receptorilor PPARα s-a desfăşurat icircn cadrul Laboratorului de Biologie Moleculară

de pe platforma Institutului Regional de Oncologie Datorită resurselor proprii financiare

limitate trebuie să subliniez că aceasta cercetare nu ar fi fost posibilă fără contribuţia unor

cercetători din domeniul medical care m-au sprijinit necondiţionat atacirct icircn elaborarea

protocolului de lucru cacirct şi icircn efectuarea propriu-zisă a studiului Icircn acest sens menţionăm şi

faptul că pentru studiul receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic am utilizat aparatura

Laboratorului de Biologie Moleculară (care deserveşte icircntreaga Regiune a Moldovei) Pe

această cale mulţumesc personalului Laboratorului de Biologie Moleculară pentru ajutorul

acordat icircn desfăşurarea cercetării doctorale icircn condiţiile icircn care se observa creşterea

numărului de pacienţi care se adresează acestei platforme de cercetare Mulţumesc de

asemenea şi Doamnei Doctor Elena Butoi din cadrul Institutului de Biologie şi Patologie

Moleculară ldquoNicolae Simionescurdquo Bucureşti) pentru donaţia anticorpului secundar anti-

FITC Icircn consecinţă pentru recrutarea unui număr mai mare de participanţi ar fi fost necesară

icircn primul racircnd obţinerea unor resurse financiare suplimentare pentru achiziţia de aparatură şi

reactivi Totuşi numărul subiecţilor recrutaţi este apropiat de numărul subiecţilor raportaţi icircn

cadrul unor granturi de cercetare care aveau ca ţinta studiul expresiei receptorilor PPARα

(212 227 228 231) Rezultatele obţinute continua seria lucrărilor care arata importanta

studiului mecanismelor etiopatogenice ale sindromului metabolic patologie care se afla icircntr-o

continuă creştere La pacienţii cu SM pe lacircngă diminuarea nivelului de expresie a receptorilor

PPARα icircn eozinofile ne aşteptam şi la evidenţierea unor modificări icircn expresia PPARα şi icircn

populaţiile de Ly Mo şi PMN Acest fapt poate fi explicat de utilizarea unor celule provenite

de la pacienţi fără afectare cardiovasculară fără diabet zaharat şi necesită continuarea

studiului pe culturi celulare icircn condiţii de stimulare cu agonişti PPARα deziderat care

impune continuarea investigării expresiei PPARα printr-un grant de cercetare

ORIGINALITATEA ȘI CONTRIBUȚIILE INOVATIVE ALE TEZEI DE

DOCTORAT PERSPECTIVE DE CERCETARE

Evaluarea nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn leucocitele circulante

aduce noi perspective icircn studiul obezităţii şi sindromului metabolic Importanta studiului

expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic derivă din prevalenta crescută a

sindromului metabolic icircn populaţia cercetată la care se adaugă riscul cardiovascular foarte

icircnalt al acestor pacienţi cu implicaţii majore icircn sănătatea publică Rolul receptorilor PPARα

icircn inflamaţie şi aterogeneza este binecunoscut dar studiul nostru este primul care a arătat că

nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα este semnificativ mai scăzut in populatiile

de eozinofile la pacienţii cu SM Această concluzie coroborata cu existenţa unei stracircnse

asocieri intre expresia receptorilor PPARα la nivelul Mo limfocitelor şi PMNlor creeaza

ipoteza existenţei unui mecanism de control diferit al expresiei PPARα la nivelul

eozinofilelor Această cercetare aduce informaţii importante referitoare la mecanismele

proinflamatorii care stau la baza insulinorezistenţei şi riscului cardiometabolic şi impune

continuarea studiului acestor receptori nucleari prin citometrie icircn flux metodă care poate fi

aplicată şi la scara mai largă dacă sunt asigurate resursele materiale necesare cercetării

Cercetarea prin citometrie icircn flux poate fi completată de studiul polimorfismului genei

PPARA şi astfel se pot identifica timpuriu indivizii cu potenţial risc cardiometabolic crescut

Studiul receptorilor PPARα a stabilit conexiuni cu factori proinflamatori şi aterogenetici iar

continuarea cercetării poate aduce şi elemente noi de diagnostic precoce icircn sindromul

metabolic contribuind la icircmbunătăţirea prognosticului acestor pacienţi

CONCLUZII FINALE

1 Aplicarea scorului de SM alături de implementarea algoritmului electronic de diagnostic

contribuie la o prelucrare rapidă eficientă și standardizată a informaţiilor la nivelul

medicinei primare

2 Prevalenţa SM calculată astfel icircn cadrul studiului este crescută (2732) icircn concordanţă

cu datele raportate

3 Controlul factorilor de risc cardiometabolici incluşi icircn SM se poate realiza prin

managementul stilului de viaţă (scăderea greutăţii corporale prin combaterea

sedentarismului şi adoptarea unei diete antiaterogene şi hipocalorice) şi administrarea

terapiei medicamentoase

4 Este necesară adoptarea unei politici de sănătate publică pentru prevenirea creşterii icircn

populaţie a prevalenţei obezităţii şi a diabetului zaharat

5 Noi metode de cercetare icircn domeniul SM axate pe diagnosticarea precoce şi cuantificarea

eficientă a acestuia duce la diminuarea incidenței evenimentelor cardiovasculare majore

6 Sindromul metabolic se caracterizează printr-un status inflamator cronic

7 Valorile Non-HDL-colesterolului şi a raportului de aterogenitate sunt semnificativ mai

mari la pacienţii cu SM

8 Dintre reactanţii de faza acută am observat că valoarea medie a fibrinogenului este mai

crescută icircn lotul cu SM

9 Valorile eozinofilelor sunt crescute icircn sindromul metabolic iar explorarea relaţiei dintre

eozinofile şi obezitate constituie una din direcţiile de studiu actuale ale sindromului

metabolic

10 Evaluarea markerilor inflamatori icircn contextul sindromului metabolic este utilă icircn

evaluarea complexă a a factorilor de risc cardiometabolici

11 Prin metoda citometriei icircn flux am demonstrat prezenta Receptorilor Activaţi de

Inductorii Proliferării Peroxizomilor ndash Alpha (PPARα) icircn toate populaţiile de leucocite

studiate (Mo limfocite PMN eozinofile) atacirct icircn lotul pacienţilor cu SM cacirct şi icircn lotul

martor

12 Utilizacircnd intensitatea medie de fluorescenţă a anticorpilor anti- PPARα am arătat că

nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile este semnificativ mai redus

la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali

13 Acest studiu este primul care a demonstrat existenţa unei scăderi statistic semnificative a

nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofilele pacienţilor cu SM

confirmacircnd cercetările recente care au evidenţiat rolul eozinofilelor şi al receptorilor

PPARα icircn obezitate reglarea inflamaţiei cronice şi aterogeneza

14 Contrar aşteptărilor noastre icircn populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările

efectuate icircn cele două loturi de studiu (cu şi fără sindom metabolic) nu am evidenţiat

diferenţe statistic seminificative icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα la

subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali

15 Icircn populaţiile de Mo limfocite şi polimorfonucleare am observat corelaţii puternice

semnificativ statistic icircntre expresia PPARα icircn aceste tipuri celulare sugeracircnd existenţa

unui mecanism unic de control al inflamaţiei cronice la nivelul acestor celule probabil

diferit de cel din eozinofile

16 La subiecţii cu SM expresia relativă a PPARα icircn Eo este invers asociată cu expresia

receptorului CD36 (receptor al particulelor de ox - LDL şi propus ca un marker precoce al

aterosclerozei) dovedind rolul antiinflamator al receptorilor PPARα la nivel endotelial

17 La pacienţii cu antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială nivelul de

expresie al receptorilor PPARα icircn eozinofile şi Mo este diminuat comparativ cu subiecţii

fără antecedente familiale de hipertensiune arterială Putem spune că studiul efectuat de

noi aduce informaţii importante legate de geneză aterosclerozei şi hipertensiunii arteriale

18 Prin studiul asocierilor dintre receptorii PPARα şi componentele clinice ale sindromului

metabolic am arătat rolul acestor receptori icircn determinismul obezităţii de tip central

nivelul expresiei relative a receptorilor PPARα fiind invers proporţional cu circumferinţa

abdominală

19 Icircn acelaşi timp nivelul de expresie a PPARα icircn sindromul metabolic este asociat pozitiv

cu concentraţia serică a HDL-colesterolului şi invers asociat cu nivelul trigliceridelor

serice dovedind rolul acestor receptori icircn diminuarea procesului inflamator cronic de la

nivel vascular

20 La pacienţii cu SM scăderea expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofile este corelată cu

creşterea unor markeri ai sindromului inflamator cronic cardiometabolic (acid uric

fibrinogen) ilustracircnd importanta receptorilor icircn reglarea status-ului inflamator cronic din

sindromul metabolic

21 Utilizarea metodei flowcitometrice pentru studiul expresiei relative a receptorilor PPARα

icircn leucocite a adus informaţii importante cu privire la mecanismele moleculare de control

implicate icircn patogenia bolilor cardiometabolice icircn concordanţă cu cercetările care descriu

expresia PPAR icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale bronşice

keratinocite)

BIBLIOGRAFIE SELECTIVA

1 Kahn R Metabolic syndrome- what is the clinical usefulness Lancet 2008371(9628)1892-3

2 Reaven GM The metabolic syndrome is this diagnosis necessary Am J Clin Nutr 2006 83(6)1237-7

3 Grundy SM Pre-Diabetes Metabolic Syndrome and Cardiovascular Risk J Am Coll Cardiol 201259(7)

635-43

4 International Diabetes Federation IDF Diabetes Atlas 6th edn International Diabetes Federation Belgium

Brussels 20131-155

5 World Health Organization Global Status Report on Noncommunicable Diseases 2010 World Health

Organization Geneva Switzerland 20111-176

6 Coman AE Petrovanu R Sindromul metabolic in practica de ambulator Editura Pim Iaşi 2009 1-103

7 Grundy SM Becker D Clark LT et alThird Report of the National Cholesterol Education Program (NCEP)

Expert Panel on Detection Evaluation and Treatment of High Blood Cholesterol in Adults (Adult

Treatment Panel III) Final Report Circulation 2002106(25)3143-90

8 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J Metabolic syndrome- a new worldwide definition A Consensus Statement

from the International Diabetes Federation Diabet Med 2006 23(5)469-80

9 KG Alberti KG Eckel RH Grundy SM etal International Diabetes Federation task force on epidemiology

and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart Association World Heart

Federation International Atherosclerosis Society International Association for the study of obesity

Harmonizing the metabolic syndrome a joint interim statement of the International Diabetes Federation task

force on epidemiology and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart

Association World Heart Federation International Atherosclerosis society and International Association

for the study of obesity Circulation 2009120(16)1640-5

10 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J IDF Epidemiology Task Force The metabolic syndrome new

worldwide definition Lancet 2005 366 1059 - 62

11 Oleszczyk M Svab I Seifert B et al Primary healthcare in the developing part of Europe changes and

development in the former Eastern Bloc countries that joined the European Union following 2004 Med Sci

Monit 2009(15)78ndash84

12 Jung U J Choi M S Obesity and Its Metabolic Complications The Role of Adipokines and the

Relationship between Obesity Inflammation Insulin Resistance Dyslipidemia and Nonalcoholic Fatty

Liver Disease Int J Mol Sci 2014rsquo15(4) 6184-223

13 Vanden Heuvel JP Peters JM Peroxisome Proliferators In Ramos K (ed) Cellular and Molecular

Toxicology (Second Edition) Volume 2 New York Elsevier Science Inc 2010 145 - 67

14 Yessoufou A Wahli W Multifaceted roles of peroxisome proliferator-activated receptors (PPARs) at the

cellular and whole organism levels Swiss Med Wkl 2010140w13071 doi104414smw201013071

15 Azhar S Peroxisome proliferator-activated receptors metabolic syndrome and cardiovascular disease

Future Cardiology 20106(5)657-91

16 Andries G Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity

Diabetes and Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(Suppl)24-32

17 Zandbergen F Plutzky J PPARalpha in atherosclerosis and inflammation Biochim Biophys Acta

20071771(8)972-82

18 Straus DS Glass CK Anti-inflammatory actions of PPAR ligands new insights on cellular and molecular

mechanisms Trends Immunol 200728(12)551-8

19 Zlei M Zugun- Eloae F Carasevici E Citometrie icircn flux - Bază şi clinică Icircn Hinescu ME (ed) Citometrie icircn

flux - principii şi aplicaţii clinice Bucureşti Editura Viaţa Medicală Romacircnească 20111-128

20 Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity Diabetes and

Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(9)24-32

21 Woerly G Honda K Loyens M et al Peroxisome proliferator-activated receptors alpha and gamma down-

regulate allergic inflammation and eosinophil activation J Exp Med 2003198(3)411-21

22 Salle-Saumont D Brenuchon C Kanda A et al Peroxisome proliferator-activated receptor alpha regulates

skin inflammation and humoral response in atopic dermatitis J Clin Allergy Immunology 2008 21(4)962-8

23 Schote A Turner J Schiltz J et al Nuclear receptors in human immune cells expression and correlations

Mol Immunolog 200744(6)1436-45

24 DAmore S Vacca M Graziano G et al Nuclear receptors expression chart icircn peripheral blood

mononuclear cells identifies patients with Metabolic Syndrome Biochim Biophys Acta

20131832(12)2289-301

25 Uthurralt J Gordish-Dressman H Bradbury M T et al PPARalpha L162V underlies variation in serum

triglycerides and subcutaneous fat volume in young males BMC Med Genet 2007855

26 Hiukka A Leinonen ES Jauhiainen M et al Long-term effects of fenofibrate on VLDL and HDL

subspecies icircn participants with type 2 diabetes mellitus Diabetologia 2007 50(10)2067-75

27 Robins SJ Rubins HB Faas FH et alInsulin resistance and cardiovascular events with low HDL

cholesterol The Veterans Affairs HDL Intervention Trial (VA-HIT) Diabetes Care 2003 26(5)1513-7

28 Devaraj S Siegel D Jialal I Statin Therapy in Metabolic Syndrome and Hypertension Post-JUPITER

What is the Value of CRP Curr Atheroscler Rep 2011 13(1) 31ndash42

29 Imperatore G Riccardi G Iovino C et al Plasma Fibrinogen A New Factor of the Metabolic Syndrome A

population-based study Diabetes Care 19982 1(4)649-54

30 Krysiak R Gdula-Dymek A Bachowski R Okopien B Pleiotropic effects of atorvastatin and fenofibrate

in metabolic syndrome and different types of pre-diabete Diabetes Care 201033(10)2266-70

31 Hermans MP Impact of Fenofibrate on Type 2 Diabetes Patients with Features of the Metabolic Syndrome

Subgroup Analysis From FIELD Curr Cardiol Rev 20106(2)112-8

32 Silverstein R Inflammation atherosclerosis and arterial thrombosis Role of the scavenger receptor CD36

Cleveland Clinic Journal of Medicine 200976(Suppl 2)S27-S30

33 Hăncu N Obezitatea In Vereşiu IA (ed) Diabetul zaharat nutritia si bolile metabolice Volume 2 Editura

Echinox Cluj- Napoca 2010 1-15

Lista lucrări publicate

1 Elena Popa Maria Maidaniuc Agnes Bacusca Alamir Diaa Rodica Petrovanu Adorata Elena

Coman Disfuncţia endotelială ndash de la mecanisme moleculare la cuantifi care şi tratament icircn practica

medicală Practica Medicală 20149(3) 109-14

2 Elena Popa Agnes Bacusca Alamir Diaa Maria Maidaniuc Rodica Petrovanu Adorata Elena Coman

The function of insulin receptor (IRF) in evolution of obesity correlation with adipocytes diameters

Archives of the Balkan Medical Union 201449(3) 275-9

3 Elena Popa Florin Zugun-Eloae Mihaela Zlei Daniela Jitaru Oana Maria Pintilie Adorata Elena

Coman Maria Traian Didona Anca Ungureanu Eugen Carasevici - acceptata pentru numarul 42014

Flow cytometry analysis of PPAR-alpha receptors in metabolic syndrome) Revista Romană de

Medicină de Laborator(RRLM-D-14-00034R1- adeverinţa ataşată

Page 26: REZUMAT TEZĂ DE DOCTORAT - umfiasi.ro Doctorat/rezumat... · universitatea de medicinĂ Şi farmacie “grigore t. popa” iaŞi facultatea de medicinĂ rezumat tezĂ de doctorat

Figura 554 Corelaţii icircn SM icircntre HDL-col şi expresia PPARα icircn Mo (A) şi Eo(B)

Corelaţii icircntre nivelul de expresie relativă a PPARα şi markeri ai disfuncţiei

endoteliale şi inflamaţiei cronice

Deşi nu a icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică am reţinut corelaţia invers

proporţională (r = - 0331 P = 006) dintre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα

icircn PMN şi concentraţia serică a Non-HDL-colesterolului

Studiind relaţiile dintre parametri icircn lotul de pacienţi cu SM am observat o corelaţie

moderată invers proporţională icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn Eo şi

acidul uric seric (figura 555 A) corelaţie absentă la subiecţii fără SM

Figura 555 Lot SM corelaţia dintre expresia PPARα icircn Eo şi acidul uric (A) respectiv

PPARα şi fibrinogen (B)

Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P=008) am notat pentru

pacienţii cu SM corelaţia invers proporţională dintre expresia PPARα icircn Eo şi concentraţia

serică a fibrinogenului ( figura 555B)

V5 Discuţii

Icircn cadrul lucrării de doctorat am studiat nivelul de expresie relativă a PPARα icircn

leucocitele pacienţilor cu SM comparativ cu cea a subiecţilor normali Expresia PPARα a fost

studiată icircn paralel cu cea a CD36 glicoproteină exprimată pe suprafaţa a numeroase celule

din organismul uman inclusiv pe cea a Mo şi macrofagelor Prin funcţia sa de receptor pentru

particulele oxidate de LDL CD36 cunoscut ca bdquoscavenger receptorrdquo de clasa B sau

bdquotrombospodin receptorrdquo contribuie la dezvoltarea inflamaţiei de la nivel endotelial şi

formarea plăcii de ateroscleroză Referitor la studiul PPARα icircn Eo icircn sindromul metabolic

menţionăm că studiul nostru este primul care arată că nivelul de expresie a proteinei PPARα

icircn Eo măsurat prin citometrie icircn flux este semnificativ mai redus la pacienţii care sunt

diagnosticaţi cu acest sindrom De asemenea icircn lotul cu SM cercetat icircn cadrul studiului

receptorilor PPARα numărul Eo circulante a fost semnificativ mai crescut la pacienţii cu SM

B

0 500 1000 1500 2000 2500 200

250

300

350

400

450

PPARα Eo o

Fibrinogen mgdl

r =- 036 P = 008

0 500 1000 1500 2000 2500 1 2 3 4 5 6 7 8 9

10 11

PPARα Eo_

Acid uric(mgdl) r = 048 P = 0014 A

0 500 1000 1500 2000 2500 10

20

30

40

50

60

70

80

PPARα Eo

HDL(mgdl)

r = 044 P = 0024

B

100 150 200 250 300 350 400 10

20

30

40

50

60

70

80

PPARα Mo

HDL( mgdl)

r = 046 P = 0019

A

(P = 003) Aceste constatări conduc la ipoteza că Eo joacă un rol special icircn mecanismele

patogenice declanşate icircn sindromul metabolic şi că receptorii PPARα sunt importanţi icircn

implicarea Eo icircn obezitate şi insulinorezistenţă Creşterea numărului de Eo circulante este

urmată de eliberarea mediatorilor proinflamatori iar reducerea expresiei PPARα icircn Eo

determină perturbarea mecanismelor de control al inflamaţiei cu exacerbarea cascadei

proinflamatorii Consecutiv se agravează disfuncţia endotelială şi se accelerează progresia

leziunilor de ateroscleroză Extrapolacircnd aceste ipoteze putem spune că asocierea raportată

dintre boala ischemică coronariană şi Eo poate fi şi consecinţa exacerbării cascadei

proinflamatorii de la nivel vascular produsă datorită scăderii expresiei PPARα icircn Eo iar

creşterea numărului de Eo circulante poate reprezenta o adaptare a organismului uman care

icircncearcă să suplinească deficitul de receptori PPARα Analizacircnd curba ROC pentru

intensităţile medii de fluorescenţă determinate pentru anticorpii anti- PPARα icircn Eo am

obţinut pentru acest biomarker o sensibilitate a testului de 565 şi o specificitate de 778

pentru un punct de cut-off de 1533 ( figura 536 ) Deşi aria AUC (Aria under the curve) egală

cu 0663 icircncadrează acest test ca avacircnd o acurateţe redusă observăm că că această valoare

este apropiată de determinările AUC pentru alţi factori (fibrinogen raport de aterogenitate

acid uric non- HDL-colesterol) cunoscuţi ca fiind implicaţi icircn aterogeneză şi inflamaţia

cronică (figura 431) Aceste remarci alături de faptul că icircn studiul receptorilor PPARα icircn

leucocite am inclus subiecţi la primul diagnostic de SM creează premisa integrării

determinării expresiei relative a receptorilor PPARα icircn diagnosticul complex al sindromului

metabolic Putem spune că icircn final studiul expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofilele

circulante se dovedește a fi util icircn diagnosticul precoce la nivel molecular al SM permiţacircnd

identificarea timpurie a unor indivizi cu risc cardiometabolic crescut Astfel intervenţia

precoce asupra subiecţilor cu deficit de PPARα icircn Eo contribuie la managementul eficient al

afecţiunilor degenerative icircn care inflamaţia cronică icircndeplineşte un rol primordial Referitor

la populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările efectuate prin citometrie de flux nu au

arătat existenţa unor diferenţe statistice icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα

la subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali Rezultatele noastre pot fi

consecinţa caracteristicilor loturilor studiate (icircn studiul nostru au fost incluşi subiecţi recrutaţi

la primul diagnostic de SM şi icircn absenţa stimulării receptorilor PPARα cu droguri agoniste

PPARα) dar icircn acelaşi timp pot apare diferenţe datorită metodei utilizate (231 232 233)

Făcacircnd o paralelă cu un studiu publicat icircn 2013 icircn Europa (231) care a arătat creşterea

nivelului de expresie al PPARα icircn Ly şi Mo observăm că deşi numărul de subiecţi a fost

aproximativ egal (57 participanţi icircn studiul nostru 60 icircn studiul DAmore) subiecţii icircn studiul

amintit au fost recrutaţi dintr-o clinică cu profil medical la primul diagnostic de SM icircn timp

ce metoda utilizată a fost PCR (Polymerase Chain Reaction) mult mai fidelă decacirct citometria

icircn flux icircn studiul receptorilor nucleari De asemenea DAmore nu investighează expresia

PPARα icircn Eo şi PMN icircn cercetare fiind incluse doar celulele CD14+ (predominant Mo) şi

CD14- (predominant Ly) Deşi nu am obţinut diferenţe statistic semnificative icircntre cele două

loturi referitoare la nivelul de expresie relativă a PPARα icircn Mo Ly şi PMN am observat

corelaţii puternice semnificative statistic icircntre expresia receptorilor PPARα icircn aceste tipuri

celulare Rezultatele obţinute sugerează existenţa unui mecanism diferit molecular de control

icircn eozinofile care reglează cantitatea de proteină PPARα icircn eozinofile versus alte tipuri de

leucocite (la pacienţii cu SM) şi acest lucru este icircn concordanţă cu cercetările care descriu

expresia PPARα mRNA icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale

bronşice keratinocite) Studiind prin citometrie de flux nivelul de expresie relativă a

receptorului CD36 la nivelul Mo am arătat prezenţa acestuia icircn Mo tuturor subiecţilor

investigaţi Analizacircnd valorile intensităţii medii de fluorescenţă a CD36 icircn loturile studiate

am observat o tendinţă de creştere la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali

confirmacircnd implicarea receptorului CD36 icircn patogeneza acestuia Referitor la expresia

receptorului CD36 rezultatele obţinute sunt icircn consens cu studii anterioare care au arătat

creşterea expresiei CD36 la pacienţii cu SM şi diabet zaharat Astfel pe lacircngă diferenţa icircn

expresia CD36 s-au raportat şi corelaţii inverse icircntre expresia proteinei CD36 şi nivelul

adiponectinei Acelaşi studiu a evidenţiat o corelaţie pozitivă intre expresia CD36 cu expresia

receptorilor PPAR gamma relaţia cu PPARα nefiind investigată

Analiza de subgrup a relaţiilor dintre componentele SM și elementele moleculare

proinflamatorii studiate a relevat prezenţa unor asocieri semnificativ statistice icircntre acestea

Se argumentează astfel că veridicitatea studiului este susţinută de interdependenţele statistice

ale componentelor SM Determinarea coeficientului de corelaţie Icircn studiul nostru nivelul de

expresie relativă a PPARα s-a corelat moderat negativ (figura 550) cu CA a subiecţilor din

lotul normal pentru populaţiile celulare de Mo (r = - 0420 P = 001) Ly (r = - 046 P =

0009) şi PMN (r = - 040 P = 0024) date care sunt icircn concordanţă cu studiile care arată

rolul PPARα icircn furnizarea energiei prin beta-oxidarea acizilor graşi Icircn acelaşi timp icircn lotul

pacienţilor cu SM nu am identificat prezenţa unei asocieri icircntre nivelul de expresie relativă a

PPARα şi valoarea măsurată a CA Asocierea dintre expresia relativă a PPARα cu obezitatea

de tip central completează datele existente referitoare la reglarea homeostaziei energetice

conturacircnd un mecanism de control deficitar al aportului caloric al SM Icircn condiţiile icircn care

rezultatele obţinute prin metoda citometriei icircn flux nu au arătat existenţa unei corelaţii intre

expresia PPARα şi CA la pacienţii cu SM considerăm că ar fi necesar studiul

polimorfismului genei PPARA care ar putea aduce informaţii importante cu privire la

implicarea acestor receptori icircn apariţia obezităţii de tip central Subliniem acest lucru deoarece

obezitatea este o boală plurifactorială icircn care pe lacircngă factorii ereditari sunt implicaţi factori

de mediu psihologici şi sociali (245) Existenţa unei componente genetice a aterosclerozei

este legată şi de prezenţa unor variante ale genei PPARA asociate cu creşterea incidenţei bolii

cardiovasculare (82) şi a SM (249) Icircn studiul nostru am constatat o scădere statistic

semnificativă a nivelului expresiei relative a receptorilor PPARα icircn Eo la subiecţii cu

antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială comparativ cu subiecţii fără istoric

familial de hipertensiune (figura 537) Deşi diferenţele calculate icircntre loturile studiate nu au

icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică la subiecţii care au declarat prezenţa

antecedentelor familiale de hipertensiune arterială remarcăm o tendinţă de scădere a

intensităţii medii de fluorescenţă pentru Ac anti-PPARα la nivelul Mo (figura 515 P = 006

) icircn timp ce expresia relativă a CD36 icircnregistrează o creştere la acesti subiecţi (figura 545 P

= 008) Icircn contextul riscului cardiovascular foarte icircnalt al pacienţilor cu SM amintim şi

existenţa corelaţiei pozitive dintre valorile tensiunii arteriale diastolice şi expresia relativă a

receptorului CD36 (r = 0483 P = 0013) Această constatare este icircn consens cu studiile care

au arătat că forma solubilă circulantă a CD36 este asociată cu factorii de risc cardiovasculari

fiind propusă ca un marker precoce al aterosclerozei Activarea PPARα este asociată cu

modularea metabolismului lipidic iar agoniştii PPARα sunt utilizaţi icircn mod curent pentru

tratamentul dislipidemiei Sub acţiunea agoniştilor PPARα se obţine o icircmbunătăţire a funcţiei

endoteliale şi a parametrilor reologici funcţiile pleiotropice ale agoniştilor PPARα fiind

dovedite icircn trialuri clinice controlate Icircn populaţiile de Mo şi Ly la pacienţii cu SM

cercetarea noastră a evidenţiat o asociere negativă icircntre nivelul de expresie relativă a

receptorilor PPARα şi concentraţia TG serice (figura 551) Astfel scăderea expresiei

receptorilor PPARα este asociată cu creşterea nivelului TG serice contribuind la profilul

lipidic aterogen din SM Icircn conformitate cu literatura de specialitate icircn studiul efectuat prin

metoda citometriei icircn flux am găsit prezenţa asocierii icircntre nivelul de expresie al PPARα şi

HDL-colesterol Corelaţia pozitivă dintre nivelul de expresie relativă PPARα şi concentraţia

HDL-colesterolului a fost observată icircn lotul martor icircn populaţiile de Mo (r = 035 P = 005)

şi Ly ( r = 036 P = 004) (figura 553) susţinacircnd faptul că stimularea receptorilor PPARα

este legată de creşterea nivelului seric al lipoproteinelor cu densitate crescută La pacienţii cu

SM corelaţia dintre expresia PPARα şi HDL-colesterol a fost evidenţiată icircn populaţiile de Mo

(r = 046 P = 0019) şi eozinofile (r = 044 P = 0024) Se desprinde concluzia că icircn

sindromul metabolic scăderea concentraţiei HDL-colesterol este legată de diminuarea

nivelului de expresie relativă a receptorilor nucleari PPARα icircntărind afirmaţiile legate de

rolul acestor receptori icircn progresia bolilor cardiovasculare Studiind reactanţii de fază acută

analiza statistică a relevat o diferenţă semnificativă din punct de vedere statistic icircntre valorile

fibrinogenului la pacienţii cu SM atunci cacircnd au fost comparaţi cu subiecţii fără SM

(Capitolul IV4 P lt0 001 figura 427A) De asemenea icircn Capitolul V dedicat studiul

expresiei relative a receptorilor PPARα studiul valorilor fibrinogenului a arătat creşterea

acestui reactant de faza acută icircn lotul cu SM comparativ cu lotul martor (P lt0 0001) Icircn

studiul nostru am calculat o corelaţie invers proporţionala (r = - -036 fig 555B) icircntre

nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile şi concentraţia serică a

fibrinogenului Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P = 008) am reţinut

această asociere deoarece am demonstrat că nivelul de expresie relativă al receptorilor

PPARα icircn eozinofile este mai scăzut icircn sindromul metabolic iar sindromul metabolic este

caracterizat printr-un status inflamator cronic status caracterizat şi de creşterea concentraţiei

serice a fibrinogenului De asemenea notam ca această corelaţie negativă se află icircn

concordanţă cu studiile care arata că tratamentul cu agonişti PPARα (fibraţi) determina

scăderea nivelului seric al fibrinogenului contribuind la diminuarea inflamaţiei cronice din

sindromul metabolic şi icircn consecinţă amelioracircnd insulinorezistenţa

LIMITE ȘI DIFICULTĂȚI IcircN CERCETARE

Icircn cadrul Tezei de Doctorat am desfăşurat o cercetare care şi-a propus studierea

expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Recrutarea anamneza şi examinarea

clinică a subiecţilor au fost realizate icircn cadrul Cabinetului de Medicină de Familie CMI Popa

Elena din Iaşi iar determinările hematologice şi biochimice s-au efectuat icircn cadrul

Laboratorului Ambulatorului de Specialitate al Spitalului Universitar ldquoSfacircntul Spiridon din

Iaşi Icircn studiul epidemiologic şi al markerilor inflamatori al sindromului metabolic desfăşurat

au fost incluşi un număr de 1530 de participanţi pe baza liberului consimţămacircnt examinaţi icircn

perioada 01012013 - 31122013 Icircn continuare icircn perioada 1012014 - 28022014 pe baza

criteriilor de includere şi excludere icircn cele două loturi de studiu am investigat un număr de 57

de subiecţi prezentaţi la consultaţie icircn această perioadă şi care au icircndeplinit criteriile de

includere icircn cele două loturi (Lot SM şi Lot Control) constituite pentru evaluarea nivelului de

expresie a receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Explorarea nivelului de expresie

relativă a receptorilor PPARα s-a desfăşurat icircn cadrul Laboratorului de Biologie Moleculară

de pe platforma Institutului Regional de Oncologie Datorită resurselor proprii financiare

limitate trebuie să subliniez că aceasta cercetare nu ar fi fost posibilă fără contribuţia unor

cercetători din domeniul medical care m-au sprijinit necondiţionat atacirct icircn elaborarea

protocolului de lucru cacirct şi icircn efectuarea propriu-zisă a studiului Icircn acest sens menţionăm şi

faptul că pentru studiul receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic am utilizat aparatura

Laboratorului de Biologie Moleculară (care deserveşte icircntreaga Regiune a Moldovei) Pe

această cale mulţumesc personalului Laboratorului de Biologie Moleculară pentru ajutorul

acordat icircn desfăşurarea cercetării doctorale icircn condiţiile icircn care se observa creşterea

numărului de pacienţi care se adresează acestei platforme de cercetare Mulţumesc de

asemenea şi Doamnei Doctor Elena Butoi din cadrul Institutului de Biologie şi Patologie

Moleculară ldquoNicolae Simionescurdquo Bucureşti) pentru donaţia anticorpului secundar anti-

FITC Icircn consecinţă pentru recrutarea unui număr mai mare de participanţi ar fi fost necesară

icircn primul racircnd obţinerea unor resurse financiare suplimentare pentru achiziţia de aparatură şi

reactivi Totuşi numărul subiecţilor recrutaţi este apropiat de numărul subiecţilor raportaţi icircn

cadrul unor granturi de cercetare care aveau ca ţinta studiul expresiei receptorilor PPARα

(212 227 228 231) Rezultatele obţinute continua seria lucrărilor care arata importanta

studiului mecanismelor etiopatogenice ale sindromului metabolic patologie care se afla icircntr-o

continuă creştere La pacienţii cu SM pe lacircngă diminuarea nivelului de expresie a receptorilor

PPARα icircn eozinofile ne aşteptam şi la evidenţierea unor modificări icircn expresia PPARα şi icircn

populaţiile de Ly Mo şi PMN Acest fapt poate fi explicat de utilizarea unor celule provenite

de la pacienţi fără afectare cardiovasculară fără diabet zaharat şi necesită continuarea

studiului pe culturi celulare icircn condiţii de stimulare cu agonişti PPARα deziderat care

impune continuarea investigării expresiei PPARα printr-un grant de cercetare

ORIGINALITATEA ȘI CONTRIBUȚIILE INOVATIVE ALE TEZEI DE

DOCTORAT PERSPECTIVE DE CERCETARE

Evaluarea nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn leucocitele circulante

aduce noi perspective icircn studiul obezităţii şi sindromului metabolic Importanta studiului

expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic derivă din prevalenta crescută a

sindromului metabolic icircn populaţia cercetată la care se adaugă riscul cardiovascular foarte

icircnalt al acestor pacienţi cu implicaţii majore icircn sănătatea publică Rolul receptorilor PPARα

icircn inflamaţie şi aterogeneza este binecunoscut dar studiul nostru este primul care a arătat că

nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα este semnificativ mai scăzut in populatiile

de eozinofile la pacienţii cu SM Această concluzie coroborata cu existenţa unei stracircnse

asocieri intre expresia receptorilor PPARα la nivelul Mo limfocitelor şi PMNlor creeaza

ipoteza existenţei unui mecanism de control diferit al expresiei PPARα la nivelul

eozinofilelor Această cercetare aduce informaţii importante referitoare la mecanismele

proinflamatorii care stau la baza insulinorezistenţei şi riscului cardiometabolic şi impune

continuarea studiului acestor receptori nucleari prin citometrie icircn flux metodă care poate fi

aplicată şi la scara mai largă dacă sunt asigurate resursele materiale necesare cercetării

Cercetarea prin citometrie icircn flux poate fi completată de studiul polimorfismului genei

PPARA şi astfel se pot identifica timpuriu indivizii cu potenţial risc cardiometabolic crescut

Studiul receptorilor PPARα a stabilit conexiuni cu factori proinflamatori şi aterogenetici iar

continuarea cercetării poate aduce şi elemente noi de diagnostic precoce icircn sindromul

metabolic contribuind la icircmbunătăţirea prognosticului acestor pacienţi

CONCLUZII FINALE

1 Aplicarea scorului de SM alături de implementarea algoritmului electronic de diagnostic

contribuie la o prelucrare rapidă eficientă și standardizată a informaţiilor la nivelul

medicinei primare

2 Prevalenţa SM calculată astfel icircn cadrul studiului este crescută (2732) icircn concordanţă

cu datele raportate

3 Controlul factorilor de risc cardiometabolici incluşi icircn SM se poate realiza prin

managementul stilului de viaţă (scăderea greutăţii corporale prin combaterea

sedentarismului şi adoptarea unei diete antiaterogene şi hipocalorice) şi administrarea

terapiei medicamentoase

4 Este necesară adoptarea unei politici de sănătate publică pentru prevenirea creşterii icircn

populaţie a prevalenţei obezităţii şi a diabetului zaharat

5 Noi metode de cercetare icircn domeniul SM axate pe diagnosticarea precoce şi cuantificarea

eficientă a acestuia duce la diminuarea incidenței evenimentelor cardiovasculare majore

6 Sindromul metabolic se caracterizează printr-un status inflamator cronic

7 Valorile Non-HDL-colesterolului şi a raportului de aterogenitate sunt semnificativ mai

mari la pacienţii cu SM

8 Dintre reactanţii de faza acută am observat că valoarea medie a fibrinogenului este mai

crescută icircn lotul cu SM

9 Valorile eozinofilelor sunt crescute icircn sindromul metabolic iar explorarea relaţiei dintre

eozinofile şi obezitate constituie una din direcţiile de studiu actuale ale sindromului

metabolic

10 Evaluarea markerilor inflamatori icircn contextul sindromului metabolic este utilă icircn

evaluarea complexă a a factorilor de risc cardiometabolici

11 Prin metoda citometriei icircn flux am demonstrat prezenta Receptorilor Activaţi de

Inductorii Proliferării Peroxizomilor ndash Alpha (PPARα) icircn toate populaţiile de leucocite

studiate (Mo limfocite PMN eozinofile) atacirct icircn lotul pacienţilor cu SM cacirct şi icircn lotul

martor

12 Utilizacircnd intensitatea medie de fluorescenţă a anticorpilor anti- PPARα am arătat că

nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile este semnificativ mai redus

la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali

13 Acest studiu este primul care a demonstrat existenţa unei scăderi statistic semnificative a

nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofilele pacienţilor cu SM

confirmacircnd cercetările recente care au evidenţiat rolul eozinofilelor şi al receptorilor

PPARα icircn obezitate reglarea inflamaţiei cronice şi aterogeneza

14 Contrar aşteptărilor noastre icircn populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările

efectuate icircn cele două loturi de studiu (cu şi fără sindom metabolic) nu am evidenţiat

diferenţe statistic seminificative icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα la

subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali

15 Icircn populaţiile de Mo limfocite şi polimorfonucleare am observat corelaţii puternice

semnificativ statistic icircntre expresia PPARα icircn aceste tipuri celulare sugeracircnd existenţa

unui mecanism unic de control al inflamaţiei cronice la nivelul acestor celule probabil

diferit de cel din eozinofile

16 La subiecţii cu SM expresia relativă a PPARα icircn Eo este invers asociată cu expresia

receptorului CD36 (receptor al particulelor de ox - LDL şi propus ca un marker precoce al

aterosclerozei) dovedind rolul antiinflamator al receptorilor PPARα la nivel endotelial

17 La pacienţii cu antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială nivelul de

expresie al receptorilor PPARα icircn eozinofile şi Mo este diminuat comparativ cu subiecţii

fără antecedente familiale de hipertensiune arterială Putem spune că studiul efectuat de

noi aduce informaţii importante legate de geneză aterosclerozei şi hipertensiunii arteriale

18 Prin studiul asocierilor dintre receptorii PPARα şi componentele clinice ale sindromului

metabolic am arătat rolul acestor receptori icircn determinismul obezităţii de tip central

nivelul expresiei relative a receptorilor PPARα fiind invers proporţional cu circumferinţa

abdominală

19 Icircn acelaşi timp nivelul de expresie a PPARα icircn sindromul metabolic este asociat pozitiv

cu concentraţia serică a HDL-colesterolului şi invers asociat cu nivelul trigliceridelor

serice dovedind rolul acestor receptori icircn diminuarea procesului inflamator cronic de la

nivel vascular

20 La pacienţii cu SM scăderea expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofile este corelată cu

creşterea unor markeri ai sindromului inflamator cronic cardiometabolic (acid uric

fibrinogen) ilustracircnd importanta receptorilor icircn reglarea status-ului inflamator cronic din

sindromul metabolic

21 Utilizarea metodei flowcitometrice pentru studiul expresiei relative a receptorilor PPARα

icircn leucocite a adus informaţii importante cu privire la mecanismele moleculare de control

implicate icircn patogenia bolilor cardiometabolice icircn concordanţă cu cercetările care descriu

expresia PPAR icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale bronşice

keratinocite)

BIBLIOGRAFIE SELECTIVA

1 Kahn R Metabolic syndrome- what is the clinical usefulness Lancet 2008371(9628)1892-3

2 Reaven GM The metabolic syndrome is this diagnosis necessary Am J Clin Nutr 2006 83(6)1237-7

3 Grundy SM Pre-Diabetes Metabolic Syndrome and Cardiovascular Risk J Am Coll Cardiol 201259(7)

635-43

4 International Diabetes Federation IDF Diabetes Atlas 6th edn International Diabetes Federation Belgium

Brussels 20131-155

5 World Health Organization Global Status Report on Noncommunicable Diseases 2010 World Health

Organization Geneva Switzerland 20111-176

6 Coman AE Petrovanu R Sindromul metabolic in practica de ambulator Editura Pim Iaşi 2009 1-103

7 Grundy SM Becker D Clark LT et alThird Report of the National Cholesterol Education Program (NCEP)

Expert Panel on Detection Evaluation and Treatment of High Blood Cholesterol in Adults (Adult

Treatment Panel III) Final Report Circulation 2002106(25)3143-90

8 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J Metabolic syndrome- a new worldwide definition A Consensus Statement

from the International Diabetes Federation Diabet Med 2006 23(5)469-80

9 KG Alberti KG Eckel RH Grundy SM etal International Diabetes Federation task force on epidemiology

and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart Association World Heart

Federation International Atherosclerosis Society International Association for the study of obesity

Harmonizing the metabolic syndrome a joint interim statement of the International Diabetes Federation task

force on epidemiology and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart

Association World Heart Federation International Atherosclerosis society and International Association

for the study of obesity Circulation 2009120(16)1640-5

10 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J IDF Epidemiology Task Force The metabolic syndrome new

worldwide definition Lancet 2005 366 1059 - 62

11 Oleszczyk M Svab I Seifert B et al Primary healthcare in the developing part of Europe changes and

development in the former Eastern Bloc countries that joined the European Union following 2004 Med Sci

Monit 2009(15)78ndash84

12 Jung U J Choi M S Obesity and Its Metabolic Complications The Role of Adipokines and the

Relationship between Obesity Inflammation Insulin Resistance Dyslipidemia and Nonalcoholic Fatty

Liver Disease Int J Mol Sci 2014rsquo15(4) 6184-223

13 Vanden Heuvel JP Peters JM Peroxisome Proliferators In Ramos K (ed) Cellular and Molecular

Toxicology (Second Edition) Volume 2 New York Elsevier Science Inc 2010 145 - 67

14 Yessoufou A Wahli W Multifaceted roles of peroxisome proliferator-activated receptors (PPARs) at the

cellular and whole organism levels Swiss Med Wkl 2010140w13071 doi104414smw201013071

15 Azhar S Peroxisome proliferator-activated receptors metabolic syndrome and cardiovascular disease

Future Cardiology 20106(5)657-91

16 Andries G Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity

Diabetes and Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(Suppl)24-32

17 Zandbergen F Plutzky J PPARalpha in atherosclerosis and inflammation Biochim Biophys Acta

20071771(8)972-82

18 Straus DS Glass CK Anti-inflammatory actions of PPAR ligands new insights on cellular and molecular

mechanisms Trends Immunol 200728(12)551-8

19 Zlei M Zugun- Eloae F Carasevici E Citometrie icircn flux - Bază şi clinică Icircn Hinescu ME (ed) Citometrie icircn

flux - principii şi aplicaţii clinice Bucureşti Editura Viaţa Medicală Romacircnească 20111-128

20 Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity Diabetes and

Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(9)24-32

21 Woerly G Honda K Loyens M et al Peroxisome proliferator-activated receptors alpha and gamma down-

regulate allergic inflammation and eosinophil activation J Exp Med 2003198(3)411-21

22 Salle-Saumont D Brenuchon C Kanda A et al Peroxisome proliferator-activated receptor alpha regulates

skin inflammation and humoral response in atopic dermatitis J Clin Allergy Immunology 2008 21(4)962-8

23 Schote A Turner J Schiltz J et al Nuclear receptors in human immune cells expression and correlations

Mol Immunolog 200744(6)1436-45

24 DAmore S Vacca M Graziano G et al Nuclear receptors expression chart icircn peripheral blood

mononuclear cells identifies patients with Metabolic Syndrome Biochim Biophys Acta

20131832(12)2289-301

25 Uthurralt J Gordish-Dressman H Bradbury M T et al PPARalpha L162V underlies variation in serum

triglycerides and subcutaneous fat volume in young males BMC Med Genet 2007855

26 Hiukka A Leinonen ES Jauhiainen M et al Long-term effects of fenofibrate on VLDL and HDL

subspecies icircn participants with type 2 diabetes mellitus Diabetologia 2007 50(10)2067-75

27 Robins SJ Rubins HB Faas FH et alInsulin resistance and cardiovascular events with low HDL

cholesterol The Veterans Affairs HDL Intervention Trial (VA-HIT) Diabetes Care 2003 26(5)1513-7

28 Devaraj S Siegel D Jialal I Statin Therapy in Metabolic Syndrome and Hypertension Post-JUPITER

What is the Value of CRP Curr Atheroscler Rep 2011 13(1) 31ndash42

29 Imperatore G Riccardi G Iovino C et al Plasma Fibrinogen A New Factor of the Metabolic Syndrome A

population-based study Diabetes Care 19982 1(4)649-54

30 Krysiak R Gdula-Dymek A Bachowski R Okopien B Pleiotropic effects of atorvastatin and fenofibrate

in metabolic syndrome and different types of pre-diabete Diabetes Care 201033(10)2266-70

31 Hermans MP Impact of Fenofibrate on Type 2 Diabetes Patients with Features of the Metabolic Syndrome

Subgroup Analysis From FIELD Curr Cardiol Rev 20106(2)112-8

32 Silverstein R Inflammation atherosclerosis and arterial thrombosis Role of the scavenger receptor CD36

Cleveland Clinic Journal of Medicine 200976(Suppl 2)S27-S30

33 Hăncu N Obezitatea In Vereşiu IA (ed) Diabetul zaharat nutritia si bolile metabolice Volume 2 Editura

Echinox Cluj- Napoca 2010 1-15

Lista lucrări publicate

1 Elena Popa Maria Maidaniuc Agnes Bacusca Alamir Diaa Rodica Petrovanu Adorata Elena

Coman Disfuncţia endotelială ndash de la mecanisme moleculare la cuantifi care şi tratament icircn practica

medicală Practica Medicală 20149(3) 109-14

2 Elena Popa Agnes Bacusca Alamir Diaa Maria Maidaniuc Rodica Petrovanu Adorata Elena Coman

The function of insulin receptor (IRF) in evolution of obesity correlation with adipocytes diameters

Archives of the Balkan Medical Union 201449(3) 275-9

3 Elena Popa Florin Zugun-Eloae Mihaela Zlei Daniela Jitaru Oana Maria Pintilie Adorata Elena

Coman Maria Traian Didona Anca Ungureanu Eugen Carasevici - acceptata pentru numarul 42014

Flow cytometry analysis of PPAR-alpha receptors in metabolic syndrome) Revista Romană de

Medicină de Laborator(RRLM-D-14-00034R1- adeverinţa ataşată

Page 27: REZUMAT TEZĂ DE DOCTORAT - umfiasi.ro Doctorat/rezumat... · universitatea de medicinĂ Şi farmacie “grigore t. popa” iaŞi facultatea de medicinĂ rezumat tezĂ de doctorat

(P = 003) Aceste constatări conduc la ipoteza că Eo joacă un rol special icircn mecanismele

patogenice declanşate icircn sindromul metabolic şi că receptorii PPARα sunt importanţi icircn

implicarea Eo icircn obezitate şi insulinorezistenţă Creşterea numărului de Eo circulante este

urmată de eliberarea mediatorilor proinflamatori iar reducerea expresiei PPARα icircn Eo

determină perturbarea mecanismelor de control al inflamaţiei cu exacerbarea cascadei

proinflamatorii Consecutiv se agravează disfuncţia endotelială şi se accelerează progresia

leziunilor de ateroscleroză Extrapolacircnd aceste ipoteze putem spune că asocierea raportată

dintre boala ischemică coronariană şi Eo poate fi şi consecinţa exacerbării cascadei

proinflamatorii de la nivel vascular produsă datorită scăderii expresiei PPARα icircn Eo iar

creşterea numărului de Eo circulante poate reprezenta o adaptare a organismului uman care

icircncearcă să suplinească deficitul de receptori PPARα Analizacircnd curba ROC pentru

intensităţile medii de fluorescenţă determinate pentru anticorpii anti- PPARα icircn Eo am

obţinut pentru acest biomarker o sensibilitate a testului de 565 şi o specificitate de 778

pentru un punct de cut-off de 1533 ( figura 536 ) Deşi aria AUC (Aria under the curve) egală

cu 0663 icircncadrează acest test ca avacircnd o acurateţe redusă observăm că că această valoare

este apropiată de determinările AUC pentru alţi factori (fibrinogen raport de aterogenitate

acid uric non- HDL-colesterol) cunoscuţi ca fiind implicaţi icircn aterogeneză şi inflamaţia

cronică (figura 431) Aceste remarci alături de faptul că icircn studiul receptorilor PPARα icircn

leucocite am inclus subiecţi la primul diagnostic de SM creează premisa integrării

determinării expresiei relative a receptorilor PPARα icircn diagnosticul complex al sindromului

metabolic Putem spune că icircn final studiul expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofilele

circulante se dovedește a fi util icircn diagnosticul precoce la nivel molecular al SM permiţacircnd

identificarea timpurie a unor indivizi cu risc cardiometabolic crescut Astfel intervenţia

precoce asupra subiecţilor cu deficit de PPARα icircn Eo contribuie la managementul eficient al

afecţiunilor degenerative icircn care inflamaţia cronică icircndeplineşte un rol primordial Referitor

la populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările efectuate prin citometrie de flux nu au

arătat existenţa unor diferenţe statistice icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα

la subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali Rezultatele noastre pot fi

consecinţa caracteristicilor loturilor studiate (icircn studiul nostru au fost incluşi subiecţi recrutaţi

la primul diagnostic de SM şi icircn absenţa stimulării receptorilor PPARα cu droguri agoniste

PPARα) dar icircn acelaşi timp pot apare diferenţe datorită metodei utilizate (231 232 233)

Făcacircnd o paralelă cu un studiu publicat icircn 2013 icircn Europa (231) care a arătat creşterea

nivelului de expresie al PPARα icircn Ly şi Mo observăm că deşi numărul de subiecţi a fost

aproximativ egal (57 participanţi icircn studiul nostru 60 icircn studiul DAmore) subiecţii icircn studiul

amintit au fost recrutaţi dintr-o clinică cu profil medical la primul diagnostic de SM icircn timp

ce metoda utilizată a fost PCR (Polymerase Chain Reaction) mult mai fidelă decacirct citometria

icircn flux icircn studiul receptorilor nucleari De asemenea DAmore nu investighează expresia

PPARα icircn Eo şi PMN icircn cercetare fiind incluse doar celulele CD14+ (predominant Mo) şi

CD14- (predominant Ly) Deşi nu am obţinut diferenţe statistic semnificative icircntre cele două

loturi referitoare la nivelul de expresie relativă a PPARα icircn Mo Ly şi PMN am observat

corelaţii puternice semnificative statistic icircntre expresia receptorilor PPARα icircn aceste tipuri

celulare Rezultatele obţinute sugerează existenţa unui mecanism diferit molecular de control

icircn eozinofile care reglează cantitatea de proteină PPARα icircn eozinofile versus alte tipuri de

leucocite (la pacienţii cu SM) şi acest lucru este icircn concordanţă cu cercetările care descriu

expresia PPARα mRNA icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale

bronşice keratinocite) Studiind prin citometrie de flux nivelul de expresie relativă a

receptorului CD36 la nivelul Mo am arătat prezenţa acestuia icircn Mo tuturor subiecţilor

investigaţi Analizacircnd valorile intensităţii medii de fluorescenţă a CD36 icircn loturile studiate

am observat o tendinţă de creştere la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali

confirmacircnd implicarea receptorului CD36 icircn patogeneza acestuia Referitor la expresia

receptorului CD36 rezultatele obţinute sunt icircn consens cu studii anterioare care au arătat

creşterea expresiei CD36 la pacienţii cu SM şi diabet zaharat Astfel pe lacircngă diferenţa icircn

expresia CD36 s-au raportat şi corelaţii inverse icircntre expresia proteinei CD36 şi nivelul

adiponectinei Acelaşi studiu a evidenţiat o corelaţie pozitivă intre expresia CD36 cu expresia

receptorilor PPAR gamma relaţia cu PPARα nefiind investigată

Analiza de subgrup a relaţiilor dintre componentele SM și elementele moleculare

proinflamatorii studiate a relevat prezenţa unor asocieri semnificativ statistice icircntre acestea

Se argumentează astfel că veridicitatea studiului este susţinută de interdependenţele statistice

ale componentelor SM Determinarea coeficientului de corelaţie Icircn studiul nostru nivelul de

expresie relativă a PPARα s-a corelat moderat negativ (figura 550) cu CA a subiecţilor din

lotul normal pentru populaţiile celulare de Mo (r = - 0420 P = 001) Ly (r = - 046 P =

0009) şi PMN (r = - 040 P = 0024) date care sunt icircn concordanţă cu studiile care arată

rolul PPARα icircn furnizarea energiei prin beta-oxidarea acizilor graşi Icircn acelaşi timp icircn lotul

pacienţilor cu SM nu am identificat prezenţa unei asocieri icircntre nivelul de expresie relativă a

PPARα şi valoarea măsurată a CA Asocierea dintre expresia relativă a PPARα cu obezitatea

de tip central completează datele existente referitoare la reglarea homeostaziei energetice

conturacircnd un mecanism de control deficitar al aportului caloric al SM Icircn condiţiile icircn care

rezultatele obţinute prin metoda citometriei icircn flux nu au arătat existenţa unei corelaţii intre

expresia PPARα şi CA la pacienţii cu SM considerăm că ar fi necesar studiul

polimorfismului genei PPARA care ar putea aduce informaţii importante cu privire la

implicarea acestor receptori icircn apariţia obezităţii de tip central Subliniem acest lucru deoarece

obezitatea este o boală plurifactorială icircn care pe lacircngă factorii ereditari sunt implicaţi factori

de mediu psihologici şi sociali (245) Existenţa unei componente genetice a aterosclerozei

este legată şi de prezenţa unor variante ale genei PPARA asociate cu creşterea incidenţei bolii

cardiovasculare (82) şi a SM (249) Icircn studiul nostru am constatat o scădere statistic

semnificativă a nivelului expresiei relative a receptorilor PPARα icircn Eo la subiecţii cu

antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială comparativ cu subiecţii fără istoric

familial de hipertensiune (figura 537) Deşi diferenţele calculate icircntre loturile studiate nu au

icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică la subiecţii care au declarat prezenţa

antecedentelor familiale de hipertensiune arterială remarcăm o tendinţă de scădere a

intensităţii medii de fluorescenţă pentru Ac anti-PPARα la nivelul Mo (figura 515 P = 006

) icircn timp ce expresia relativă a CD36 icircnregistrează o creştere la acesti subiecţi (figura 545 P

= 008) Icircn contextul riscului cardiovascular foarte icircnalt al pacienţilor cu SM amintim şi

existenţa corelaţiei pozitive dintre valorile tensiunii arteriale diastolice şi expresia relativă a

receptorului CD36 (r = 0483 P = 0013) Această constatare este icircn consens cu studiile care

au arătat că forma solubilă circulantă a CD36 este asociată cu factorii de risc cardiovasculari

fiind propusă ca un marker precoce al aterosclerozei Activarea PPARα este asociată cu

modularea metabolismului lipidic iar agoniştii PPARα sunt utilizaţi icircn mod curent pentru

tratamentul dislipidemiei Sub acţiunea agoniştilor PPARα se obţine o icircmbunătăţire a funcţiei

endoteliale şi a parametrilor reologici funcţiile pleiotropice ale agoniştilor PPARα fiind

dovedite icircn trialuri clinice controlate Icircn populaţiile de Mo şi Ly la pacienţii cu SM

cercetarea noastră a evidenţiat o asociere negativă icircntre nivelul de expresie relativă a

receptorilor PPARα şi concentraţia TG serice (figura 551) Astfel scăderea expresiei

receptorilor PPARα este asociată cu creşterea nivelului TG serice contribuind la profilul

lipidic aterogen din SM Icircn conformitate cu literatura de specialitate icircn studiul efectuat prin

metoda citometriei icircn flux am găsit prezenţa asocierii icircntre nivelul de expresie al PPARα şi

HDL-colesterol Corelaţia pozitivă dintre nivelul de expresie relativă PPARα şi concentraţia

HDL-colesterolului a fost observată icircn lotul martor icircn populaţiile de Mo (r = 035 P = 005)

şi Ly ( r = 036 P = 004) (figura 553) susţinacircnd faptul că stimularea receptorilor PPARα

este legată de creşterea nivelului seric al lipoproteinelor cu densitate crescută La pacienţii cu

SM corelaţia dintre expresia PPARα şi HDL-colesterol a fost evidenţiată icircn populaţiile de Mo

(r = 046 P = 0019) şi eozinofile (r = 044 P = 0024) Se desprinde concluzia că icircn

sindromul metabolic scăderea concentraţiei HDL-colesterol este legată de diminuarea

nivelului de expresie relativă a receptorilor nucleari PPARα icircntărind afirmaţiile legate de

rolul acestor receptori icircn progresia bolilor cardiovasculare Studiind reactanţii de fază acută

analiza statistică a relevat o diferenţă semnificativă din punct de vedere statistic icircntre valorile

fibrinogenului la pacienţii cu SM atunci cacircnd au fost comparaţi cu subiecţii fără SM

(Capitolul IV4 P lt0 001 figura 427A) De asemenea icircn Capitolul V dedicat studiul

expresiei relative a receptorilor PPARα studiul valorilor fibrinogenului a arătat creşterea

acestui reactant de faza acută icircn lotul cu SM comparativ cu lotul martor (P lt0 0001) Icircn

studiul nostru am calculat o corelaţie invers proporţionala (r = - -036 fig 555B) icircntre

nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile şi concentraţia serică a

fibrinogenului Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P = 008) am reţinut

această asociere deoarece am demonstrat că nivelul de expresie relativă al receptorilor

PPARα icircn eozinofile este mai scăzut icircn sindromul metabolic iar sindromul metabolic este

caracterizat printr-un status inflamator cronic status caracterizat şi de creşterea concentraţiei

serice a fibrinogenului De asemenea notam ca această corelaţie negativă se află icircn

concordanţă cu studiile care arata că tratamentul cu agonişti PPARα (fibraţi) determina

scăderea nivelului seric al fibrinogenului contribuind la diminuarea inflamaţiei cronice din

sindromul metabolic şi icircn consecinţă amelioracircnd insulinorezistenţa

LIMITE ȘI DIFICULTĂȚI IcircN CERCETARE

Icircn cadrul Tezei de Doctorat am desfăşurat o cercetare care şi-a propus studierea

expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Recrutarea anamneza şi examinarea

clinică a subiecţilor au fost realizate icircn cadrul Cabinetului de Medicină de Familie CMI Popa

Elena din Iaşi iar determinările hematologice şi biochimice s-au efectuat icircn cadrul

Laboratorului Ambulatorului de Specialitate al Spitalului Universitar ldquoSfacircntul Spiridon din

Iaşi Icircn studiul epidemiologic şi al markerilor inflamatori al sindromului metabolic desfăşurat

au fost incluşi un număr de 1530 de participanţi pe baza liberului consimţămacircnt examinaţi icircn

perioada 01012013 - 31122013 Icircn continuare icircn perioada 1012014 - 28022014 pe baza

criteriilor de includere şi excludere icircn cele două loturi de studiu am investigat un număr de 57

de subiecţi prezentaţi la consultaţie icircn această perioadă şi care au icircndeplinit criteriile de

includere icircn cele două loturi (Lot SM şi Lot Control) constituite pentru evaluarea nivelului de

expresie a receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Explorarea nivelului de expresie

relativă a receptorilor PPARα s-a desfăşurat icircn cadrul Laboratorului de Biologie Moleculară

de pe platforma Institutului Regional de Oncologie Datorită resurselor proprii financiare

limitate trebuie să subliniez că aceasta cercetare nu ar fi fost posibilă fără contribuţia unor

cercetători din domeniul medical care m-au sprijinit necondiţionat atacirct icircn elaborarea

protocolului de lucru cacirct şi icircn efectuarea propriu-zisă a studiului Icircn acest sens menţionăm şi

faptul că pentru studiul receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic am utilizat aparatura

Laboratorului de Biologie Moleculară (care deserveşte icircntreaga Regiune a Moldovei) Pe

această cale mulţumesc personalului Laboratorului de Biologie Moleculară pentru ajutorul

acordat icircn desfăşurarea cercetării doctorale icircn condiţiile icircn care se observa creşterea

numărului de pacienţi care se adresează acestei platforme de cercetare Mulţumesc de

asemenea şi Doamnei Doctor Elena Butoi din cadrul Institutului de Biologie şi Patologie

Moleculară ldquoNicolae Simionescurdquo Bucureşti) pentru donaţia anticorpului secundar anti-

FITC Icircn consecinţă pentru recrutarea unui număr mai mare de participanţi ar fi fost necesară

icircn primul racircnd obţinerea unor resurse financiare suplimentare pentru achiziţia de aparatură şi

reactivi Totuşi numărul subiecţilor recrutaţi este apropiat de numărul subiecţilor raportaţi icircn

cadrul unor granturi de cercetare care aveau ca ţinta studiul expresiei receptorilor PPARα

(212 227 228 231) Rezultatele obţinute continua seria lucrărilor care arata importanta

studiului mecanismelor etiopatogenice ale sindromului metabolic patologie care se afla icircntr-o

continuă creştere La pacienţii cu SM pe lacircngă diminuarea nivelului de expresie a receptorilor

PPARα icircn eozinofile ne aşteptam şi la evidenţierea unor modificări icircn expresia PPARα şi icircn

populaţiile de Ly Mo şi PMN Acest fapt poate fi explicat de utilizarea unor celule provenite

de la pacienţi fără afectare cardiovasculară fără diabet zaharat şi necesită continuarea

studiului pe culturi celulare icircn condiţii de stimulare cu agonişti PPARα deziderat care

impune continuarea investigării expresiei PPARα printr-un grant de cercetare

ORIGINALITATEA ȘI CONTRIBUȚIILE INOVATIVE ALE TEZEI DE

DOCTORAT PERSPECTIVE DE CERCETARE

Evaluarea nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn leucocitele circulante

aduce noi perspective icircn studiul obezităţii şi sindromului metabolic Importanta studiului

expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic derivă din prevalenta crescută a

sindromului metabolic icircn populaţia cercetată la care se adaugă riscul cardiovascular foarte

icircnalt al acestor pacienţi cu implicaţii majore icircn sănătatea publică Rolul receptorilor PPARα

icircn inflamaţie şi aterogeneza este binecunoscut dar studiul nostru este primul care a arătat că

nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα este semnificativ mai scăzut in populatiile

de eozinofile la pacienţii cu SM Această concluzie coroborata cu existenţa unei stracircnse

asocieri intre expresia receptorilor PPARα la nivelul Mo limfocitelor şi PMNlor creeaza

ipoteza existenţei unui mecanism de control diferit al expresiei PPARα la nivelul

eozinofilelor Această cercetare aduce informaţii importante referitoare la mecanismele

proinflamatorii care stau la baza insulinorezistenţei şi riscului cardiometabolic şi impune

continuarea studiului acestor receptori nucleari prin citometrie icircn flux metodă care poate fi

aplicată şi la scara mai largă dacă sunt asigurate resursele materiale necesare cercetării

Cercetarea prin citometrie icircn flux poate fi completată de studiul polimorfismului genei

PPARA şi astfel se pot identifica timpuriu indivizii cu potenţial risc cardiometabolic crescut

Studiul receptorilor PPARα a stabilit conexiuni cu factori proinflamatori şi aterogenetici iar

continuarea cercetării poate aduce şi elemente noi de diagnostic precoce icircn sindromul

metabolic contribuind la icircmbunătăţirea prognosticului acestor pacienţi

CONCLUZII FINALE

1 Aplicarea scorului de SM alături de implementarea algoritmului electronic de diagnostic

contribuie la o prelucrare rapidă eficientă și standardizată a informaţiilor la nivelul

medicinei primare

2 Prevalenţa SM calculată astfel icircn cadrul studiului este crescută (2732) icircn concordanţă

cu datele raportate

3 Controlul factorilor de risc cardiometabolici incluşi icircn SM se poate realiza prin

managementul stilului de viaţă (scăderea greutăţii corporale prin combaterea

sedentarismului şi adoptarea unei diete antiaterogene şi hipocalorice) şi administrarea

terapiei medicamentoase

4 Este necesară adoptarea unei politici de sănătate publică pentru prevenirea creşterii icircn

populaţie a prevalenţei obezităţii şi a diabetului zaharat

5 Noi metode de cercetare icircn domeniul SM axate pe diagnosticarea precoce şi cuantificarea

eficientă a acestuia duce la diminuarea incidenței evenimentelor cardiovasculare majore

6 Sindromul metabolic se caracterizează printr-un status inflamator cronic

7 Valorile Non-HDL-colesterolului şi a raportului de aterogenitate sunt semnificativ mai

mari la pacienţii cu SM

8 Dintre reactanţii de faza acută am observat că valoarea medie a fibrinogenului este mai

crescută icircn lotul cu SM

9 Valorile eozinofilelor sunt crescute icircn sindromul metabolic iar explorarea relaţiei dintre

eozinofile şi obezitate constituie una din direcţiile de studiu actuale ale sindromului

metabolic

10 Evaluarea markerilor inflamatori icircn contextul sindromului metabolic este utilă icircn

evaluarea complexă a a factorilor de risc cardiometabolici

11 Prin metoda citometriei icircn flux am demonstrat prezenta Receptorilor Activaţi de

Inductorii Proliferării Peroxizomilor ndash Alpha (PPARα) icircn toate populaţiile de leucocite

studiate (Mo limfocite PMN eozinofile) atacirct icircn lotul pacienţilor cu SM cacirct şi icircn lotul

martor

12 Utilizacircnd intensitatea medie de fluorescenţă a anticorpilor anti- PPARα am arătat că

nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile este semnificativ mai redus

la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali

13 Acest studiu este primul care a demonstrat existenţa unei scăderi statistic semnificative a

nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofilele pacienţilor cu SM

confirmacircnd cercetările recente care au evidenţiat rolul eozinofilelor şi al receptorilor

PPARα icircn obezitate reglarea inflamaţiei cronice şi aterogeneza

14 Contrar aşteptărilor noastre icircn populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările

efectuate icircn cele două loturi de studiu (cu şi fără sindom metabolic) nu am evidenţiat

diferenţe statistic seminificative icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα la

subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali

15 Icircn populaţiile de Mo limfocite şi polimorfonucleare am observat corelaţii puternice

semnificativ statistic icircntre expresia PPARα icircn aceste tipuri celulare sugeracircnd existenţa

unui mecanism unic de control al inflamaţiei cronice la nivelul acestor celule probabil

diferit de cel din eozinofile

16 La subiecţii cu SM expresia relativă a PPARα icircn Eo este invers asociată cu expresia

receptorului CD36 (receptor al particulelor de ox - LDL şi propus ca un marker precoce al

aterosclerozei) dovedind rolul antiinflamator al receptorilor PPARα la nivel endotelial

17 La pacienţii cu antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială nivelul de

expresie al receptorilor PPARα icircn eozinofile şi Mo este diminuat comparativ cu subiecţii

fără antecedente familiale de hipertensiune arterială Putem spune că studiul efectuat de

noi aduce informaţii importante legate de geneză aterosclerozei şi hipertensiunii arteriale

18 Prin studiul asocierilor dintre receptorii PPARα şi componentele clinice ale sindromului

metabolic am arătat rolul acestor receptori icircn determinismul obezităţii de tip central

nivelul expresiei relative a receptorilor PPARα fiind invers proporţional cu circumferinţa

abdominală

19 Icircn acelaşi timp nivelul de expresie a PPARα icircn sindromul metabolic este asociat pozitiv

cu concentraţia serică a HDL-colesterolului şi invers asociat cu nivelul trigliceridelor

serice dovedind rolul acestor receptori icircn diminuarea procesului inflamator cronic de la

nivel vascular

20 La pacienţii cu SM scăderea expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofile este corelată cu

creşterea unor markeri ai sindromului inflamator cronic cardiometabolic (acid uric

fibrinogen) ilustracircnd importanta receptorilor icircn reglarea status-ului inflamator cronic din

sindromul metabolic

21 Utilizarea metodei flowcitometrice pentru studiul expresiei relative a receptorilor PPARα

icircn leucocite a adus informaţii importante cu privire la mecanismele moleculare de control

implicate icircn patogenia bolilor cardiometabolice icircn concordanţă cu cercetările care descriu

expresia PPAR icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale bronşice

keratinocite)

BIBLIOGRAFIE SELECTIVA

1 Kahn R Metabolic syndrome- what is the clinical usefulness Lancet 2008371(9628)1892-3

2 Reaven GM The metabolic syndrome is this diagnosis necessary Am J Clin Nutr 2006 83(6)1237-7

3 Grundy SM Pre-Diabetes Metabolic Syndrome and Cardiovascular Risk J Am Coll Cardiol 201259(7)

635-43

4 International Diabetes Federation IDF Diabetes Atlas 6th edn International Diabetes Federation Belgium

Brussels 20131-155

5 World Health Organization Global Status Report on Noncommunicable Diseases 2010 World Health

Organization Geneva Switzerland 20111-176

6 Coman AE Petrovanu R Sindromul metabolic in practica de ambulator Editura Pim Iaşi 2009 1-103

7 Grundy SM Becker D Clark LT et alThird Report of the National Cholesterol Education Program (NCEP)

Expert Panel on Detection Evaluation and Treatment of High Blood Cholesterol in Adults (Adult

Treatment Panel III) Final Report Circulation 2002106(25)3143-90

8 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J Metabolic syndrome- a new worldwide definition A Consensus Statement

from the International Diabetes Federation Diabet Med 2006 23(5)469-80

9 KG Alberti KG Eckel RH Grundy SM etal International Diabetes Federation task force on epidemiology

and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart Association World Heart

Federation International Atherosclerosis Society International Association for the study of obesity

Harmonizing the metabolic syndrome a joint interim statement of the International Diabetes Federation task

force on epidemiology and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart

Association World Heart Federation International Atherosclerosis society and International Association

for the study of obesity Circulation 2009120(16)1640-5

10 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J IDF Epidemiology Task Force The metabolic syndrome new

worldwide definition Lancet 2005 366 1059 - 62

11 Oleszczyk M Svab I Seifert B et al Primary healthcare in the developing part of Europe changes and

development in the former Eastern Bloc countries that joined the European Union following 2004 Med Sci

Monit 2009(15)78ndash84

12 Jung U J Choi M S Obesity and Its Metabolic Complications The Role of Adipokines and the

Relationship between Obesity Inflammation Insulin Resistance Dyslipidemia and Nonalcoholic Fatty

Liver Disease Int J Mol Sci 2014rsquo15(4) 6184-223

13 Vanden Heuvel JP Peters JM Peroxisome Proliferators In Ramos K (ed) Cellular and Molecular

Toxicology (Second Edition) Volume 2 New York Elsevier Science Inc 2010 145 - 67

14 Yessoufou A Wahli W Multifaceted roles of peroxisome proliferator-activated receptors (PPARs) at the

cellular and whole organism levels Swiss Med Wkl 2010140w13071 doi104414smw201013071

15 Azhar S Peroxisome proliferator-activated receptors metabolic syndrome and cardiovascular disease

Future Cardiology 20106(5)657-91

16 Andries G Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity

Diabetes and Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(Suppl)24-32

17 Zandbergen F Plutzky J PPARalpha in atherosclerosis and inflammation Biochim Biophys Acta

20071771(8)972-82

18 Straus DS Glass CK Anti-inflammatory actions of PPAR ligands new insights on cellular and molecular

mechanisms Trends Immunol 200728(12)551-8

19 Zlei M Zugun- Eloae F Carasevici E Citometrie icircn flux - Bază şi clinică Icircn Hinescu ME (ed) Citometrie icircn

flux - principii şi aplicaţii clinice Bucureşti Editura Viaţa Medicală Romacircnească 20111-128

20 Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity Diabetes and

Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(9)24-32

21 Woerly G Honda K Loyens M et al Peroxisome proliferator-activated receptors alpha and gamma down-

regulate allergic inflammation and eosinophil activation J Exp Med 2003198(3)411-21

22 Salle-Saumont D Brenuchon C Kanda A et al Peroxisome proliferator-activated receptor alpha regulates

skin inflammation and humoral response in atopic dermatitis J Clin Allergy Immunology 2008 21(4)962-8

23 Schote A Turner J Schiltz J et al Nuclear receptors in human immune cells expression and correlations

Mol Immunolog 200744(6)1436-45

24 DAmore S Vacca M Graziano G et al Nuclear receptors expression chart icircn peripheral blood

mononuclear cells identifies patients with Metabolic Syndrome Biochim Biophys Acta

20131832(12)2289-301

25 Uthurralt J Gordish-Dressman H Bradbury M T et al PPARalpha L162V underlies variation in serum

triglycerides and subcutaneous fat volume in young males BMC Med Genet 2007855

26 Hiukka A Leinonen ES Jauhiainen M et al Long-term effects of fenofibrate on VLDL and HDL

subspecies icircn participants with type 2 diabetes mellitus Diabetologia 2007 50(10)2067-75

27 Robins SJ Rubins HB Faas FH et alInsulin resistance and cardiovascular events with low HDL

cholesterol The Veterans Affairs HDL Intervention Trial (VA-HIT) Diabetes Care 2003 26(5)1513-7

28 Devaraj S Siegel D Jialal I Statin Therapy in Metabolic Syndrome and Hypertension Post-JUPITER

What is the Value of CRP Curr Atheroscler Rep 2011 13(1) 31ndash42

29 Imperatore G Riccardi G Iovino C et al Plasma Fibrinogen A New Factor of the Metabolic Syndrome A

population-based study Diabetes Care 19982 1(4)649-54

30 Krysiak R Gdula-Dymek A Bachowski R Okopien B Pleiotropic effects of atorvastatin and fenofibrate

in metabolic syndrome and different types of pre-diabete Diabetes Care 201033(10)2266-70

31 Hermans MP Impact of Fenofibrate on Type 2 Diabetes Patients with Features of the Metabolic Syndrome

Subgroup Analysis From FIELD Curr Cardiol Rev 20106(2)112-8

32 Silverstein R Inflammation atherosclerosis and arterial thrombosis Role of the scavenger receptor CD36

Cleveland Clinic Journal of Medicine 200976(Suppl 2)S27-S30

33 Hăncu N Obezitatea In Vereşiu IA (ed) Diabetul zaharat nutritia si bolile metabolice Volume 2 Editura

Echinox Cluj- Napoca 2010 1-15

Lista lucrări publicate

1 Elena Popa Maria Maidaniuc Agnes Bacusca Alamir Diaa Rodica Petrovanu Adorata Elena

Coman Disfuncţia endotelială ndash de la mecanisme moleculare la cuantifi care şi tratament icircn practica

medicală Practica Medicală 20149(3) 109-14

2 Elena Popa Agnes Bacusca Alamir Diaa Maria Maidaniuc Rodica Petrovanu Adorata Elena Coman

The function of insulin receptor (IRF) in evolution of obesity correlation with adipocytes diameters

Archives of the Balkan Medical Union 201449(3) 275-9

3 Elena Popa Florin Zugun-Eloae Mihaela Zlei Daniela Jitaru Oana Maria Pintilie Adorata Elena

Coman Maria Traian Didona Anca Ungureanu Eugen Carasevici - acceptata pentru numarul 42014

Flow cytometry analysis of PPAR-alpha receptors in metabolic syndrome) Revista Romană de

Medicină de Laborator(RRLM-D-14-00034R1- adeverinţa ataşată

Page 28: REZUMAT TEZĂ DE DOCTORAT - umfiasi.ro Doctorat/rezumat... · universitatea de medicinĂ Şi farmacie “grigore t. popa” iaŞi facultatea de medicinĂ rezumat tezĂ de doctorat

receptorului CD36 rezultatele obţinute sunt icircn consens cu studii anterioare care au arătat

creşterea expresiei CD36 la pacienţii cu SM şi diabet zaharat Astfel pe lacircngă diferenţa icircn

expresia CD36 s-au raportat şi corelaţii inverse icircntre expresia proteinei CD36 şi nivelul

adiponectinei Acelaşi studiu a evidenţiat o corelaţie pozitivă intre expresia CD36 cu expresia

receptorilor PPAR gamma relaţia cu PPARα nefiind investigată

Analiza de subgrup a relaţiilor dintre componentele SM și elementele moleculare

proinflamatorii studiate a relevat prezenţa unor asocieri semnificativ statistice icircntre acestea

Se argumentează astfel că veridicitatea studiului este susţinută de interdependenţele statistice

ale componentelor SM Determinarea coeficientului de corelaţie Icircn studiul nostru nivelul de

expresie relativă a PPARα s-a corelat moderat negativ (figura 550) cu CA a subiecţilor din

lotul normal pentru populaţiile celulare de Mo (r = - 0420 P = 001) Ly (r = - 046 P =

0009) şi PMN (r = - 040 P = 0024) date care sunt icircn concordanţă cu studiile care arată

rolul PPARα icircn furnizarea energiei prin beta-oxidarea acizilor graşi Icircn acelaşi timp icircn lotul

pacienţilor cu SM nu am identificat prezenţa unei asocieri icircntre nivelul de expresie relativă a

PPARα şi valoarea măsurată a CA Asocierea dintre expresia relativă a PPARα cu obezitatea

de tip central completează datele existente referitoare la reglarea homeostaziei energetice

conturacircnd un mecanism de control deficitar al aportului caloric al SM Icircn condiţiile icircn care

rezultatele obţinute prin metoda citometriei icircn flux nu au arătat existenţa unei corelaţii intre

expresia PPARα şi CA la pacienţii cu SM considerăm că ar fi necesar studiul

polimorfismului genei PPARA care ar putea aduce informaţii importante cu privire la

implicarea acestor receptori icircn apariţia obezităţii de tip central Subliniem acest lucru deoarece

obezitatea este o boală plurifactorială icircn care pe lacircngă factorii ereditari sunt implicaţi factori

de mediu psihologici şi sociali (245) Existenţa unei componente genetice a aterosclerozei

este legată şi de prezenţa unor variante ale genei PPARA asociate cu creşterea incidenţei bolii

cardiovasculare (82) şi a SM (249) Icircn studiul nostru am constatat o scădere statistic

semnificativă a nivelului expresiei relative a receptorilor PPARα icircn Eo la subiecţii cu

antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială comparativ cu subiecţii fără istoric

familial de hipertensiune (figura 537) Deşi diferenţele calculate icircntre loturile studiate nu au

icircndeplinit pragul de semnificaţie statistică la subiecţii care au declarat prezenţa

antecedentelor familiale de hipertensiune arterială remarcăm o tendinţă de scădere a

intensităţii medii de fluorescenţă pentru Ac anti-PPARα la nivelul Mo (figura 515 P = 006

) icircn timp ce expresia relativă a CD36 icircnregistrează o creştere la acesti subiecţi (figura 545 P

= 008) Icircn contextul riscului cardiovascular foarte icircnalt al pacienţilor cu SM amintim şi

existenţa corelaţiei pozitive dintre valorile tensiunii arteriale diastolice şi expresia relativă a

receptorului CD36 (r = 0483 P = 0013) Această constatare este icircn consens cu studiile care

au arătat că forma solubilă circulantă a CD36 este asociată cu factorii de risc cardiovasculari

fiind propusă ca un marker precoce al aterosclerozei Activarea PPARα este asociată cu

modularea metabolismului lipidic iar agoniştii PPARα sunt utilizaţi icircn mod curent pentru

tratamentul dislipidemiei Sub acţiunea agoniştilor PPARα se obţine o icircmbunătăţire a funcţiei

endoteliale şi a parametrilor reologici funcţiile pleiotropice ale agoniştilor PPARα fiind

dovedite icircn trialuri clinice controlate Icircn populaţiile de Mo şi Ly la pacienţii cu SM

cercetarea noastră a evidenţiat o asociere negativă icircntre nivelul de expresie relativă a

receptorilor PPARα şi concentraţia TG serice (figura 551) Astfel scăderea expresiei

receptorilor PPARα este asociată cu creşterea nivelului TG serice contribuind la profilul

lipidic aterogen din SM Icircn conformitate cu literatura de specialitate icircn studiul efectuat prin

metoda citometriei icircn flux am găsit prezenţa asocierii icircntre nivelul de expresie al PPARα şi

HDL-colesterol Corelaţia pozitivă dintre nivelul de expresie relativă PPARα şi concentraţia

HDL-colesterolului a fost observată icircn lotul martor icircn populaţiile de Mo (r = 035 P = 005)

şi Ly ( r = 036 P = 004) (figura 553) susţinacircnd faptul că stimularea receptorilor PPARα

este legată de creşterea nivelului seric al lipoproteinelor cu densitate crescută La pacienţii cu

SM corelaţia dintre expresia PPARα şi HDL-colesterol a fost evidenţiată icircn populaţiile de Mo

(r = 046 P = 0019) şi eozinofile (r = 044 P = 0024) Se desprinde concluzia că icircn

sindromul metabolic scăderea concentraţiei HDL-colesterol este legată de diminuarea

nivelului de expresie relativă a receptorilor nucleari PPARα icircntărind afirmaţiile legate de

rolul acestor receptori icircn progresia bolilor cardiovasculare Studiind reactanţii de fază acută

analiza statistică a relevat o diferenţă semnificativă din punct de vedere statistic icircntre valorile

fibrinogenului la pacienţii cu SM atunci cacircnd au fost comparaţi cu subiecţii fără SM

(Capitolul IV4 P lt0 001 figura 427A) De asemenea icircn Capitolul V dedicat studiul

expresiei relative a receptorilor PPARα studiul valorilor fibrinogenului a arătat creşterea

acestui reactant de faza acută icircn lotul cu SM comparativ cu lotul martor (P lt0 0001) Icircn

studiul nostru am calculat o corelaţie invers proporţionala (r = - -036 fig 555B) icircntre

nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile şi concentraţia serică a

fibrinogenului Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P = 008) am reţinut

această asociere deoarece am demonstrat că nivelul de expresie relativă al receptorilor

PPARα icircn eozinofile este mai scăzut icircn sindromul metabolic iar sindromul metabolic este

caracterizat printr-un status inflamator cronic status caracterizat şi de creşterea concentraţiei

serice a fibrinogenului De asemenea notam ca această corelaţie negativă se află icircn

concordanţă cu studiile care arata că tratamentul cu agonişti PPARα (fibraţi) determina

scăderea nivelului seric al fibrinogenului contribuind la diminuarea inflamaţiei cronice din

sindromul metabolic şi icircn consecinţă amelioracircnd insulinorezistenţa

LIMITE ȘI DIFICULTĂȚI IcircN CERCETARE

Icircn cadrul Tezei de Doctorat am desfăşurat o cercetare care şi-a propus studierea

expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Recrutarea anamneza şi examinarea

clinică a subiecţilor au fost realizate icircn cadrul Cabinetului de Medicină de Familie CMI Popa

Elena din Iaşi iar determinările hematologice şi biochimice s-au efectuat icircn cadrul

Laboratorului Ambulatorului de Specialitate al Spitalului Universitar ldquoSfacircntul Spiridon din

Iaşi Icircn studiul epidemiologic şi al markerilor inflamatori al sindromului metabolic desfăşurat

au fost incluşi un număr de 1530 de participanţi pe baza liberului consimţămacircnt examinaţi icircn

perioada 01012013 - 31122013 Icircn continuare icircn perioada 1012014 - 28022014 pe baza

criteriilor de includere şi excludere icircn cele două loturi de studiu am investigat un număr de 57

de subiecţi prezentaţi la consultaţie icircn această perioadă şi care au icircndeplinit criteriile de

includere icircn cele două loturi (Lot SM şi Lot Control) constituite pentru evaluarea nivelului de

expresie a receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Explorarea nivelului de expresie

relativă a receptorilor PPARα s-a desfăşurat icircn cadrul Laboratorului de Biologie Moleculară

de pe platforma Institutului Regional de Oncologie Datorită resurselor proprii financiare

limitate trebuie să subliniez că aceasta cercetare nu ar fi fost posibilă fără contribuţia unor

cercetători din domeniul medical care m-au sprijinit necondiţionat atacirct icircn elaborarea

protocolului de lucru cacirct şi icircn efectuarea propriu-zisă a studiului Icircn acest sens menţionăm şi

faptul că pentru studiul receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic am utilizat aparatura

Laboratorului de Biologie Moleculară (care deserveşte icircntreaga Regiune a Moldovei) Pe

această cale mulţumesc personalului Laboratorului de Biologie Moleculară pentru ajutorul

acordat icircn desfăşurarea cercetării doctorale icircn condiţiile icircn care se observa creşterea

numărului de pacienţi care se adresează acestei platforme de cercetare Mulţumesc de

asemenea şi Doamnei Doctor Elena Butoi din cadrul Institutului de Biologie şi Patologie

Moleculară ldquoNicolae Simionescurdquo Bucureşti) pentru donaţia anticorpului secundar anti-

FITC Icircn consecinţă pentru recrutarea unui număr mai mare de participanţi ar fi fost necesară

icircn primul racircnd obţinerea unor resurse financiare suplimentare pentru achiziţia de aparatură şi

reactivi Totuşi numărul subiecţilor recrutaţi este apropiat de numărul subiecţilor raportaţi icircn

cadrul unor granturi de cercetare care aveau ca ţinta studiul expresiei receptorilor PPARα

(212 227 228 231) Rezultatele obţinute continua seria lucrărilor care arata importanta

studiului mecanismelor etiopatogenice ale sindromului metabolic patologie care se afla icircntr-o

continuă creştere La pacienţii cu SM pe lacircngă diminuarea nivelului de expresie a receptorilor

PPARα icircn eozinofile ne aşteptam şi la evidenţierea unor modificări icircn expresia PPARα şi icircn

populaţiile de Ly Mo şi PMN Acest fapt poate fi explicat de utilizarea unor celule provenite

de la pacienţi fără afectare cardiovasculară fără diabet zaharat şi necesită continuarea

studiului pe culturi celulare icircn condiţii de stimulare cu agonişti PPARα deziderat care

impune continuarea investigării expresiei PPARα printr-un grant de cercetare

ORIGINALITATEA ȘI CONTRIBUȚIILE INOVATIVE ALE TEZEI DE

DOCTORAT PERSPECTIVE DE CERCETARE

Evaluarea nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn leucocitele circulante

aduce noi perspective icircn studiul obezităţii şi sindromului metabolic Importanta studiului

expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic derivă din prevalenta crescută a

sindromului metabolic icircn populaţia cercetată la care se adaugă riscul cardiovascular foarte

icircnalt al acestor pacienţi cu implicaţii majore icircn sănătatea publică Rolul receptorilor PPARα

icircn inflamaţie şi aterogeneza este binecunoscut dar studiul nostru este primul care a arătat că

nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα este semnificativ mai scăzut in populatiile

de eozinofile la pacienţii cu SM Această concluzie coroborata cu existenţa unei stracircnse

asocieri intre expresia receptorilor PPARα la nivelul Mo limfocitelor şi PMNlor creeaza

ipoteza existenţei unui mecanism de control diferit al expresiei PPARα la nivelul

eozinofilelor Această cercetare aduce informaţii importante referitoare la mecanismele

proinflamatorii care stau la baza insulinorezistenţei şi riscului cardiometabolic şi impune

continuarea studiului acestor receptori nucleari prin citometrie icircn flux metodă care poate fi

aplicată şi la scara mai largă dacă sunt asigurate resursele materiale necesare cercetării

Cercetarea prin citometrie icircn flux poate fi completată de studiul polimorfismului genei

PPARA şi astfel se pot identifica timpuriu indivizii cu potenţial risc cardiometabolic crescut

Studiul receptorilor PPARα a stabilit conexiuni cu factori proinflamatori şi aterogenetici iar

continuarea cercetării poate aduce şi elemente noi de diagnostic precoce icircn sindromul

metabolic contribuind la icircmbunătăţirea prognosticului acestor pacienţi

CONCLUZII FINALE

1 Aplicarea scorului de SM alături de implementarea algoritmului electronic de diagnostic

contribuie la o prelucrare rapidă eficientă și standardizată a informaţiilor la nivelul

medicinei primare

2 Prevalenţa SM calculată astfel icircn cadrul studiului este crescută (2732) icircn concordanţă

cu datele raportate

3 Controlul factorilor de risc cardiometabolici incluşi icircn SM se poate realiza prin

managementul stilului de viaţă (scăderea greutăţii corporale prin combaterea

sedentarismului şi adoptarea unei diete antiaterogene şi hipocalorice) şi administrarea

terapiei medicamentoase

4 Este necesară adoptarea unei politici de sănătate publică pentru prevenirea creşterii icircn

populaţie a prevalenţei obezităţii şi a diabetului zaharat

5 Noi metode de cercetare icircn domeniul SM axate pe diagnosticarea precoce şi cuantificarea

eficientă a acestuia duce la diminuarea incidenței evenimentelor cardiovasculare majore

6 Sindromul metabolic se caracterizează printr-un status inflamator cronic

7 Valorile Non-HDL-colesterolului şi a raportului de aterogenitate sunt semnificativ mai

mari la pacienţii cu SM

8 Dintre reactanţii de faza acută am observat că valoarea medie a fibrinogenului este mai

crescută icircn lotul cu SM

9 Valorile eozinofilelor sunt crescute icircn sindromul metabolic iar explorarea relaţiei dintre

eozinofile şi obezitate constituie una din direcţiile de studiu actuale ale sindromului

metabolic

10 Evaluarea markerilor inflamatori icircn contextul sindromului metabolic este utilă icircn

evaluarea complexă a a factorilor de risc cardiometabolici

11 Prin metoda citometriei icircn flux am demonstrat prezenta Receptorilor Activaţi de

Inductorii Proliferării Peroxizomilor ndash Alpha (PPARα) icircn toate populaţiile de leucocite

studiate (Mo limfocite PMN eozinofile) atacirct icircn lotul pacienţilor cu SM cacirct şi icircn lotul

martor

12 Utilizacircnd intensitatea medie de fluorescenţă a anticorpilor anti- PPARα am arătat că

nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile este semnificativ mai redus

la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali

13 Acest studiu este primul care a demonstrat existenţa unei scăderi statistic semnificative a

nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofilele pacienţilor cu SM

confirmacircnd cercetările recente care au evidenţiat rolul eozinofilelor şi al receptorilor

PPARα icircn obezitate reglarea inflamaţiei cronice şi aterogeneza

14 Contrar aşteptărilor noastre icircn populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările

efectuate icircn cele două loturi de studiu (cu şi fără sindom metabolic) nu am evidenţiat

diferenţe statistic seminificative icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα la

subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali

15 Icircn populaţiile de Mo limfocite şi polimorfonucleare am observat corelaţii puternice

semnificativ statistic icircntre expresia PPARα icircn aceste tipuri celulare sugeracircnd existenţa

unui mecanism unic de control al inflamaţiei cronice la nivelul acestor celule probabil

diferit de cel din eozinofile

16 La subiecţii cu SM expresia relativă a PPARα icircn Eo este invers asociată cu expresia

receptorului CD36 (receptor al particulelor de ox - LDL şi propus ca un marker precoce al

aterosclerozei) dovedind rolul antiinflamator al receptorilor PPARα la nivel endotelial

17 La pacienţii cu antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială nivelul de

expresie al receptorilor PPARα icircn eozinofile şi Mo este diminuat comparativ cu subiecţii

fără antecedente familiale de hipertensiune arterială Putem spune că studiul efectuat de

noi aduce informaţii importante legate de geneză aterosclerozei şi hipertensiunii arteriale

18 Prin studiul asocierilor dintre receptorii PPARα şi componentele clinice ale sindromului

metabolic am arătat rolul acestor receptori icircn determinismul obezităţii de tip central

nivelul expresiei relative a receptorilor PPARα fiind invers proporţional cu circumferinţa

abdominală

19 Icircn acelaşi timp nivelul de expresie a PPARα icircn sindromul metabolic este asociat pozitiv

cu concentraţia serică a HDL-colesterolului şi invers asociat cu nivelul trigliceridelor

serice dovedind rolul acestor receptori icircn diminuarea procesului inflamator cronic de la

nivel vascular

20 La pacienţii cu SM scăderea expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofile este corelată cu

creşterea unor markeri ai sindromului inflamator cronic cardiometabolic (acid uric

fibrinogen) ilustracircnd importanta receptorilor icircn reglarea status-ului inflamator cronic din

sindromul metabolic

21 Utilizarea metodei flowcitometrice pentru studiul expresiei relative a receptorilor PPARα

icircn leucocite a adus informaţii importante cu privire la mecanismele moleculare de control

implicate icircn patogenia bolilor cardiometabolice icircn concordanţă cu cercetările care descriu

expresia PPAR icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale bronşice

keratinocite)

BIBLIOGRAFIE SELECTIVA

1 Kahn R Metabolic syndrome- what is the clinical usefulness Lancet 2008371(9628)1892-3

2 Reaven GM The metabolic syndrome is this diagnosis necessary Am J Clin Nutr 2006 83(6)1237-7

3 Grundy SM Pre-Diabetes Metabolic Syndrome and Cardiovascular Risk J Am Coll Cardiol 201259(7)

635-43

4 International Diabetes Federation IDF Diabetes Atlas 6th edn International Diabetes Federation Belgium

Brussels 20131-155

5 World Health Organization Global Status Report on Noncommunicable Diseases 2010 World Health

Organization Geneva Switzerland 20111-176

6 Coman AE Petrovanu R Sindromul metabolic in practica de ambulator Editura Pim Iaşi 2009 1-103

7 Grundy SM Becker D Clark LT et alThird Report of the National Cholesterol Education Program (NCEP)

Expert Panel on Detection Evaluation and Treatment of High Blood Cholesterol in Adults (Adult

Treatment Panel III) Final Report Circulation 2002106(25)3143-90

8 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J Metabolic syndrome- a new worldwide definition A Consensus Statement

from the International Diabetes Federation Diabet Med 2006 23(5)469-80

9 KG Alberti KG Eckel RH Grundy SM etal International Diabetes Federation task force on epidemiology

and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart Association World Heart

Federation International Atherosclerosis Society International Association for the study of obesity

Harmonizing the metabolic syndrome a joint interim statement of the International Diabetes Federation task

force on epidemiology and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart

Association World Heart Federation International Atherosclerosis society and International Association

for the study of obesity Circulation 2009120(16)1640-5

10 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J IDF Epidemiology Task Force The metabolic syndrome new

worldwide definition Lancet 2005 366 1059 - 62

11 Oleszczyk M Svab I Seifert B et al Primary healthcare in the developing part of Europe changes and

development in the former Eastern Bloc countries that joined the European Union following 2004 Med Sci

Monit 2009(15)78ndash84

12 Jung U J Choi M S Obesity and Its Metabolic Complications The Role of Adipokines and the

Relationship between Obesity Inflammation Insulin Resistance Dyslipidemia and Nonalcoholic Fatty

Liver Disease Int J Mol Sci 2014rsquo15(4) 6184-223

13 Vanden Heuvel JP Peters JM Peroxisome Proliferators In Ramos K (ed) Cellular and Molecular

Toxicology (Second Edition) Volume 2 New York Elsevier Science Inc 2010 145 - 67

14 Yessoufou A Wahli W Multifaceted roles of peroxisome proliferator-activated receptors (PPARs) at the

cellular and whole organism levels Swiss Med Wkl 2010140w13071 doi104414smw201013071

15 Azhar S Peroxisome proliferator-activated receptors metabolic syndrome and cardiovascular disease

Future Cardiology 20106(5)657-91

16 Andries G Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity

Diabetes and Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(Suppl)24-32

17 Zandbergen F Plutzky J PPARalpha in atherosclerosis and inflammation Biochim Biophys Acta

20071771(8)972-82

18 Straus DS Glass CK Anti-inflammatory actions of PPAR ligands new insights on cellular and molecular

mechanisms Trends Immunol 200728(12)551-8

19 Zlei M Zugun- Eloae F Carasevici E Citometrie icircn flux - Bază şi clinică Icircn Hinescu ME (ed) Citometrie icircn

flux - principii şi aplicaţii clinice Bucureşti Editura Viaţa Medicală Romacircnească 20111-128

20 Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity Diabetes and

Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(9)24-32

21 Woerly G Honda K Loyens M et al Peroxisome proliferator-activated receptors alpha and gamma down-

regulate allergic inflammation and eosinophil activation J Exp Med 2003198(3)411-21

22 Salle-Saumont D Brenuchon C Kanda A et al Peroxisome proliferator-activated receptor alpha regulates

skin inflammation and humoral response in atopic dermatitis J Clin Allergy Immunology 2008 21(4)962-8

23 Schote A Turner J Schiltz J et al Nuclear receptors in human immune cells expression and correlations

Mol Immunolog 200744(6)1436-45

24 DAmore S Vacca M Graziano G et al Nuclear receptors expression chart icircn peripheral blood

mononuclear cells identifies patients with Metabolic Syndrome Biochim Biophys Acta

20131832(12)2289-301

25 Uthurralt J Gordish-Dressman H Bradbury M T et al PPARalpha L162V underlies variation in serum

triglycerides and subcutaneous fat volume in young males BMC Med Genet 2007855

26 Hiukka A Leinonen ES Jauhiainen M et al Long-term effects of fenofibrate on VLDL and HDL

subspecies icircn participants with type 2 diabetes mellitus Diabetologia 2007 50(10)2067-75

27 Robins SJ Rubins HB Faas FH et alInsulin resistance and cardiovascular events with low HDL

cholesterol The Veterans Affairs HDL Intervention Trial (VA-HIT) Diabetes Care 2003 26(5)1513-7

28 Devaraj S Siegel D Jialal I Statin Therapy in Metabolic Syndrome and Hypertension Post-JUPITER

What is the Value of CRP Curr Atheroscler Rep 2011 13(1) 31ndash42

29 Imperatore G Riccardi G Iovino C et al Plasma Fibrinogen A New Factor of the Metabolic Syndrome A

population-based study Diabetes Care 19982 1(4)649-54

30 Krysiak R Gdula-Dymek A Bachowski R Okopien B Pleiotropic effects of atorvastatin and fenofibrate

in metabolic syndrome and different types of pre-diabete Diabetes Care 201033(10)2266-70

31 Hermans MP Impact of Fenofibrate on Type 2 Diabetes Patients with Features of the Metabolic Syndrome

Subgroup Analysis From FIELD Curr Cardiol Rev 20106(2)112-8

32 Silverstein R Inflammation atherosclerosis and arterial thrombosis Role of the scavenger receptor CD36

Cleveland Clinic Journal of Medicine 200976(Suppl 2)S27-S30

33 Hăncu N Obezitatea In Vereşiu IA (ed) Diabetul zaharat nutritia si bolile metabolice Volume 2 Editura

Echinox Cluj- Napoca 2010 1-15

Lista lucrări publicate

1 Elena Popa Maria Maidaniuc Agnes Bacusca Alamir Diaa Rodica Petrovanu Adorata Elena

Coman Disfuncţia endotelială ndash de la mecanisme moleculare la cuantifi care şi tratament icircn practica

medicală Practica Medicală 20149(3) 109-14

2 Elena Popa Agnes Bacusca Alamir Diaa Maria Maidaniuc Rodica Petrovanu Adorata Elena Coman

The function of insulin receptor (IRF) in evolution of obesity correlation with adipocytes diameters

Archives of the Balkan Medical Union 201449(3) 275-9

3 Elena Popa Florin Zugun-Eloae Mihaela Zlei Daniela Jitaru Oana Maria Pintilie Adorata Elena

Coman Maria Traian Didona Anca Ungureanu Eugen Carasevici - acceptata pentru numarul 42014

Flow cytometry analysis of PPAR-alpha receptors in metabolic syndrome) Revista Romană de

Medicină de Laborator(RRLM-D-14-00034R1- adeverinţa ataşată

Page 29: REZUMAT TEZĂ DE DOCTORAT - umfiasi.ro Doctorat/rezumat... · universitatea de medicinĂ Şi farmacie “grigore t. popa” iaŞi facultatea de medicinĂ rezumat tezĂ de doctorat

SM corelaţia dintre expresia PPARα şi HDL-colesterol a fost evidenţiată icircn populaţiile de Mo

(r = 046 P = 0019) şi eozinofile (r = 044 P = 0024) Se desprinde concluzia că icircn

sindromul metabolic scăderea concentraţiei HDL-colesterol este legată de diminuarea

nivelului de expresie relativă a receptorilor nucleari PPARα icircntărind afirmaţiile legate de

rolul acestor receptori icircn progresia bolilor cardiovasculare Studiind reactanţii de fază acută

analiza statistică a relevat o diferenţă semnificativă din punct de vedere statistic icircntre valorile

fibrinogenului la pacienţii cu SM atunci cacircnd au fost comparaţi cu subiecţii fără SM

(Capitolul IV4 P lt0 001 figura 427A) De asemenea icircn Capitolul V dedicat studiul

expresiei relative a receptorilor PPARα studiul valorilor fibrinogenului a arătat creşterea

acestui reactant de faza acută icircn lotul cu SM comparativ cu lotul martor (P lt0 0001) Icircn

studiul nostru am calculat o corelaţie invers proporţionala (r = - -036 fig 555B) icircntre

nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile şi concentraţia serică a

fibrinogenului Deşi nu icircndeplineşte criteriul de semnificaţie statistică (P = 008) am reţinut

această asociere deoarece am demonstrat că nivelul de expresie relativă al receptorilor

PPARα icircn eozinofile este mai scăzut icircn sindromul metabolic iar sindromul metabolic este

caracterizat printr-un status inflamator cronic status caracterizat şi de creşterea concentraţiei

serice a fibrinogenului De asemenea notam ca această corelaţie negativă se află icircn

concordanţă cu studiile care arata că tratamentul cu agonişti PPARα (fibraţi) determina

scăderea nivelului seric al fibrinogenului contribuind la diminuarea inflamaţiei cronice din

sindromul metabolic şi icircn consecinţă amelioracircnd insulinorezistenţa

LIMITE ȘI DIFICULTĂȚI IcircN CERCETARE

Icircn cadrul Tezei de Doctorat am desfăşurat o cercetare care şi-a propus studierea

expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Recrutarea anamneza şi examinarea

clinică a subiecţilor au fost realizate icircn cadrul Cabinetului de Medicină de Familie CMI Popa

Elena din Iaşi iar determinările hematologice şi biochimice s-au efectuat icircn cadrul

Laboratorului Ambulatorului de Specialitate al Spitalului Universitar ldquoSfacircntul Spiridon din

Iaşi Icircn studiul epidemiologic şi al markerilor inflamatori al sindromului metabolic desfăşurat

au fost incluşi un număr de 1530 de participanţi pe baza liberului consimţămacircnt examinaţi icircn

perioada 01012013 - 31122013 Icircn continuare icircn perioada 1012014 - 28022014 pe baza

criteriilor de includere şi excludere icircn cele două loturi de studiu am investigat un număr de 57

de subiecţi prezentaţi la consultaţie icircn această perioadă şi care au icircndeplinit criteriile de

includere icircn cele două loturi (Lot SM şi Lot Control) constituite pentru evaluarea nivelului de

expresie a receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic Explorarea nivelului de expresie

relativă a receptorilor PPARα s-a desfăşurat icircn cadrul Laboratorului de Biologie Moleculară

de pe platforma Institutului Regional de Oncologie Datorită resurselor proprii financiare

limitate trebuie să subliniez că aceasta cercetare nu ar fi fost posibilă fără contribuţia unor

cercetători din domeniul medical care m-au sprijinit necondiţionat atacirct icircn elaborarea

protocolului de lucru cacirct şi icircn efectuarea propriu-zisă a studiului Icircn acest sens menţionăm şi

faptul că pentru studiul receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic am utilizat aparatura

Laboratorului de Biologie Moleculară (care deserveşte icircntreaga Regiune a Moldovei) Pe

această cale mulţumesc personalului Laboratorului de Biologie Moleculară pentru ajutorul

acordat icircn desfăşurarea cercetării doctorale icircn condiţiile icircn care se observa creşterea

numărului de pacienţi care se adresează acestei platforme de cercetare Mulţumesc de

asemenea şi Doamnei Doctor Elena Butoi din cadrul Institutului de Biologie şi Patologie

Moleculară ldquoNicolae Simionescurdquo Bucureşti) pentru donaţia anticorpului secundar anti-

FITC Icircn consecinţă pentru recrutarea unui număr mai mare de participanţi ar fi fost necesară

icircn primul racircnd obţinerea unor resurse financiare suplimentare pentru achiziţia de aparatură şi

reactivi Totuşi numărul subiecţilor recrutaţi este apropiat de numărul subiecţilor raportaţi icircn

cadrul unor granturi de cercetare care aveau ca ţinta studiul expresiei receptorilor PPARα

(212 227 228 231) Rezultatele obţinute continua seria lucrărilor care arata importanta

studiului mecanismelor etiopatogenice ale sindromului metabolic patologie care se afla icircntr-o

continuă creştere La pacienţii cu SM pe lacircngă diminuarea nivelului de expresie a receptorilor

PPARα icircn eozinofile ne aşteptam şi la evidenţierea unor modificări icircn expresia PPARα şi icircn

populaţiile de Ly Mo şi PMN Acest fapt poate fi explicat de utilizarea unor celule provenite

de la pacienţi fără afectare cardiovasculară fără diabet zaharat şi necesită continuarea

studiului pe culturi celulare icircn condiţii de stimulare cu agonişti PPARα deziderat care

impune continuarea investigării expresiei PPARα printr-un grant de cercetare

ORIGINALITATEA ȘI CONTRIBUȚIILE INOVATIVE ALE TEZEI DE

DOCTORAT PERSPECTIVE DE CERCETARE

Evaluarea nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn leucocitele circulante

aduce noi perspective icircn studiul obezităţii şi sindromului metabolic Importanta studiului

expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic derivă din prevalenta crescută a

sindromului metabolic icircn populaţia cercetată la care se adaugă riscul cardiovascular foarte

icircnalt al acestor pacienţi cu implicaţii majore icircn sănătatea publică Rolul receptorilor PPARα

icircn inflamaţie şi aterogeneza este binecunoscut dar studiul nostru este primul care a arătat că

nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα este semnificativ mai scăzut in populatiile

de eozinofile la pacienţii cu SM Această concluzie coroborata cu existenţa unei stracircnse

asocieri intre expresia receptorilor PPARα la nivelul Mo limfocitelor şi PMNlor creeaza

ipoteza existenţei unui mecanism de control diferit al expresiei PPARα la nivelul

eozinofilelor Această cercetare aduce informaţii importante referitoare la mecanismele

proinflamatorii care stau la baza insulinorezistenţei şi riscului cardiometabolic şi impune

continuarea studiului acestor receptori nucleari prin citometrie icircn flux metodă care poate fi

aplicată şi la scara mai largă dacă sunt asigurate resursele materiale necesare cercetării

Cercetarea prin citometrie icircn flux poate fi completată de studiul polimorfismului genei

PPARA şi astfel se pot identifica timpuriu indivizii cu potenţial risc cardiometabolic crescut

Studiul receptorilor PPARα a stabilit conexiuni cu factori proinflamatori şi aterogenetici iar

continuarea cercetării poate aduce şi elemente noi de diagnostic precoce icircn sindromul

metabolic contribuind la icircmbunătăţirea prognosticului acestor pacienţi

CONCLUZII FINALE

1 Aplicarea scorului de SM alături de implementarea algoritmului electronic de diagnostic

contribuie la o prelucrare rapidă eficientă și standardizată a informaţiilor la nivelul

medicinei primare

2 Prevalenţa SM calculată astfel icircn cadrul studiului este crescută (2732) icircn concordanţă

cu datele raportate

3 Controlul factorilor de risc cardiometabolici incluşi icircn SM se poate realiza prin

managementul stilului de viaţă (scăderea greutăţii corporale prin combaterea

sedentarismului şi adoptarea unei diete antiaterogene şi hipocalorice) şi administrarea

terapiei medicamentoase

4 Este necesară adoptarea unei politici de sănătate publică pentru prevenirea creşterii icircn

populaţie a prevalenţei obezităţii şi a diabetului zaharat

5 Noi metode de cercetare icircn domeniul SM axate pe diagnosticarea precoce şi cuantificarea

eficientă a acestuia duce la diminuarea incidenței evenimentelor cardiovasculare majore

6 Sindromul metabolic se caracterizează printr-un status inflamator cronic

7 Valorile Non-HDL-colesterolului şi a raportului de aterogenitate sunt semnificativ mai

mari la pacienţii cu SM

8 Dintre reactanţii de faza acută am observat că valoarea medie a fibrinogenului este mai

crescută icircn lotul cu SM

9 Valorile eozinofilelor sunt crescute icircn sindromul metabolic iar explorarea relaţiei dintre

eozinofile şi obezitate constituie una din direcţiile de studiu actuale ale sindromului

metabolic

10 Evaluarea markerilor inflamatori icircn contextul sindromului metabolic este utilă icircn

evaluarea complexă a a factorilor de risc cardiometabolici

11 Prin metoda citometriei icircn flux am demonstrat prezenta Receptorilor Activaţi de

Inductorii Proliferării Peroxizomilor ndash Alpha (PPARα) icircn toate populaţiile de leucocite

studiate (Mo limfocite PMN eozinofile) atacirct icircn lotul pacienţilor cu SM cacirct şi icircn lotul

martor

12 Utilizacircnd intensitatea medie de fluorescenţă a anticorpilor anti- PPARα am arătat că

nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile este semnificativ mai redus

la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali

13 Acest studiu este primul care a demonstrat existenţa unei scăderi statistic semnificative a

nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofilele pacienţilor cu SM

confirmacircnd cercetările recente care au evidenţiat rolul eozinofilelor şi al receptorilor

PPARα icircn obezitate reglarea inflamaţiei cronice şi aterogeneza

14 Contrar aşteptărilor noastre icircn populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările

efectuate icircn cele două loturi de studiu (cu şi fără sindom metabolic) nu am evidenţiat

diferenţe statistic seminificative icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα la

subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali

15 Icircn populaţiile de Mo limfocite şi polimorfonucleare am observat corelaţii puternice

semnificativ statistic icircntre expresia PPARα icircn aceste tipuri celulare sugeracircnd existenţa

unui mecanism unic de control al inflamaţiei cronice la nivelul acestor celule probabil

diferit de cel din eozinofile

16 La subiecţii cu SM expresia relativă a PPARα icircn Eo este invers asociată cu expresia

receptorului CD36 (receptor al particulelor de ox - LDL şi propus ca un marker precoce al

aterosclerozei) dovedind rolul antiinflamator al receptorilor PPARα la nivel endotelial

17 La pacienţii cu antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială nivelul de

expresie al receptorilor PPARα icircn eozinofile şi Mo este diminuat comparativ cu subiecţii

fără antecedente familiale de hipertensiune arterială Putem spune că studiul efectuat de

noi aduce informaţii importante legate de geneză aterosclerozei şi hipertensiunii arteriale

18 Prin studiul asocierilor dintre receptorii PPARα şi componentele clinice ale sindromului

metabolic am arătat rolul acestor receptori icircn determinismul obezităţii de tip central

nivelul expresiei relative a receptorilor PPARα fiind invers proporţional cu circumferinţa

abdominală

19 Icircn acelaşi timp nivelul de expresie a PPARα icircn sindromul metabolic este asociat pozitiv

cu concentraţia serică a HDL-colesterolului şi invers asociat cu nivelul trigliceridelor

serice dovedind rolul acestor receptori icircn diminuarea procesului inflamator cronic de la

nivel vascular

20 La pacienţii cu SM scăderea expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofile este corelată cu

creşterea unor markeri ai sindromului inflamator cronic cardiometabolic (acid uric

fibrinogen) ilustracircnd importanta receptorilor icircn reglarea status-ului inflamator cronic din

sindromul metabolic

21 Utilizarea metodei flowcitometrice pentru studiul expresiei relative a receptorilor PPARα

icircn leucocite a adus informaţii importante cu privire la mecanismele moleculare de control

implicate icircn patogenia bolilor cardiometabolice icircn concordanţă cu cercetările care descriu

expresia PPAR icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale bronşice

keratinocite)

BIBLIOGRAFIE SELECTIVA

1 Kahn R Metabolic syndrome- what is the clinical usefulness Lancet 2008371(9628)1892-3

2 Reaven GM The metabolic syndrome is this diagnosis necessary Am J Clin Nutr 2006 83(6)1237-7

3 Grundy SM Pre-Diabetes Metabolic Syndrome and Cardiovascular Risk J Am Coll Cardiol 201259(7)

635-43

4 International Diabetes Federation IDF Diabetes Atlas 6th edn International Diabetes Federation Belgium

Brussels 20131-155

5 World Health Organization Global Status Report on Noncommunicable Diseases 2010 World Health

Organization Geneva Switzerland 20111-176

6 Coman AE Petrovanu R Sindromul metabolic in practica de ambulator Editura Pim Iaşi 2009 1-103

7 Grundy SM Becker D Clark LT et alThird Report of the National Cholesterol Education Program (NCEP)

Expert Panel on Detection Evaluation and Treatment of High Blood Cholesterol in Adults (Adult

Treatment Panel III) Final Report Circulation 2002106(25)3143-90

8 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J Metabolic syndrome- a new worldwide definition A Consensus Statement

from the International Diabetes Federation Diabet Med 2006 23(5)469-80

9 KG Alberti KG Eckel RH Grundy SM etal International Diabetes Federation task force on epidemiology

and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart Association World Heart

Federation International Atherosclerosis Society International Association for the study of obesity

Harmonizing the metabolic syndrome a joint interim statement of the International Diabetes Federation task

force on epidemiology and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart

Association World Heart Federation International Atherosclerosis society and International Association

for the study of obesity Circulation 2009120(16)1640-5

10 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J IDF Epidemiology Task Force The metabolic syndrome new

worldwide definition Lancet 2005 366 1059 - 62

11 Oleszczyk M Svab I Seifert B et al Primary healthcare in the developing part of Europe changes and

development in the former Eastern Bloc countries that joined the European Union following 2004 Med Sci

Monit 2009(15)78ndash84

12 Jung U J Choi M S Obesity and Its Metabolic Complications The Role of Adipokines and the

Relationship between Obesity Inflammation Insulin Resistance Dyslipidemia and Nonalcoholic Fatty

Liver Disease Int J Mol Sci 2014rsquo15(4) 6184-223

13 Vanden Heuvel JP Peters JM Peroxisome Proliferators In Ramos K (ed) Cellular and Molecular

Toxicology (Second Edition) Volume 2 New York Elsevier Science Inc 2010 145 - 67

14 Yessoufou A Wahli W Multifaceted roles of peroxisome proliferator-activated receptors (PPARs) at the

cellular and whole organism levels Swiss Med Wkl 2010140w13071 doi104414smw201013071

15 Azhar S Peroxisome proliferator-activated receptors metabolic syndrome and cardiovascular disease

Future Cardiology 20106(5)657-91

16 Andries G Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity

Diabetes and Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(Suppl)24-32

17 Zandbergen F Plutzky J PPARalpha in atherosclerosis and inflammation Biochim Biophys Acta

20071771(8)972-82

18 Straus DS Glass CK Anti-inflammatory actions of PPAR ligands new insights on cellular and molecular

mechanisms Trends Immunol 200728(12)551-8

19 Zlei M Zugun- Eloae F Carasevici E Citometrie icircn flux - Bază şi clinică Icircn Hinescu ME (ed) Citometrie icircn

flux - principii şi aplicaţii clinice Bucureşti Editura Viaţa Medicală Romacircnească 20111-128

20 Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity Diabetes and

Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(9)24-32

21 Woerly G Honda K Loyens M et al Peroxisome proliferator-activated receptors alpha and gamma down-

regulate allergic inflammation and eosinophil activation J Exp Med 2003198(3)411-21

22 Salle-Saumont D Brenuchon C Kanda A et al Peroxisome proliferator-activated receptor alpha regulates

skin inflammation and humoral response in atopic dermatitis J Clin Allergy Immunology 2008 21(4)962-8

23 Schote A Turner J Schiltz J et al Nuclear receptors in human immune cells expression and correlations

Mol Immunolog 200744(6)1436-45

24 DAmore S Vacca M Graziano G et al Nuclear receptors expression chart icircn peripheral blood

mononuclear cells identifies patients with Metabolic Syndrome Biochim Biophys Acta

20131832(12)2289-301

25 Uthurralt J Gordish-Dressman H Bradbury M T et al PPARalpha L162V underlies variation in serum

triglycerides and subcutaneous fat volume in young males BMC Med Genet 2007855

26 Hiukka A Leinonen ES Jauhiainen M et al Long-term effects of fenofibrate on VLDL and HDL

subspecies icircn participants with type 2 diabetes mellitus Diabetologia 2007 50(10)2067-75

27 Robins SJ Rubins HB Faas FH et alInsulin resistance and cardiovascular events with low HDL

cholesterol The Veterans Affairs HDL Intervention Trial (VA-HIT) Diabetes Care 2003 26(5)1513-7

28 Devaraj S Siegel D Jialal I Statin Therapy in Metabolic Syndrome and Hypertension Post-JUPITER

What is the Value of CRP Curr Atheroscler Rep 2011 13(1) 31ndash42

29 Imperatore G Riccardi G Iovino C et al Plasma Fibrinogen A New Factor of the Metabolic Syndrome A

population-based study Diabetes Care 19982 1(4)649-54

30 Krysiak R Gdula-Dymek A Bachowski R Okopien B Pleiotropic effects of atorvastatin and fenofibrate

in metabolic syndrome and different types of pre-diabete Diabetes Care 201033(10)2266-70

31 Hermans MP Impact of Fenofibrate on Type 2 Diabetes Patients with Features of the Metabolic Syndrome

Subgroup Analysis From FIELD Curr Cardiol Rev 20106(2)112-8

32 Silverstein R Inflammation atherosclerosis and arterial thrombosis Role of the scavenger receptor CD36

Cleveland Clinic Journal of Medicine 200976(Suppl 2)S27-S30

33 Hăncu N Obezitatea In Vereşiu IA (ed) Diabetul zaharat nutritia si bolile metabolice Volume 2 Editura

Echinox Cluj- Napoca 2010 1-15

Lista lucrări publicate

1 Elena Popa Maria Maidaniuc Agnes Bacusca Alamir Diaa Rodica Petrovanu Adorata Elena

Coman Disfuncţia endotelială ndash de la mecanisme moleculare la cuantifi care şi tratament icircn practica

medicală Practica Medicală 20149(3) 109-14

2 Elena Popa Agnes Bacusca Alamir Diaa Maria Maidaniuc Rodica Petrovanu Adorata Elena Coman

The function of insulin receptor (IRF) in evolution of obesity correlation with adipocytes diameters

Archives of the Balkan Medical Union 201449(3) 275-9

3 Elena Popa Florin Zugun-Eloae Mihaela Zlei Daniela Jitaru Oana Maria Pintilie Adorata Elena

Coman Maria Traian Didona Anca Ungureanu Eugen Carasevici - acceptata pentru numarul 42014

Flow cytometry analysis of PPAR-alpha receptors in metabolic syndrome) Revista Romană de

Medicină de Laborator(RRLM-D-14-00034R1- adeverinţa ataşată

Page 30: REZUMAT TEZĂ DE DOCTORAT - umfiasi.ro Doctorat/rezumat... · universitatea de medicinĂ Şi farmacie “grigore t. popa” iaŞi facultatea de medicinĂ rezumat tezĂ de doctorat

(212 227 228 231) Rezultatele obţinute continua seria lucrărilor care arata importanta

studiului mecanismelor etiopatogenice ale sindromului metabolic patologie care se afla icircntr-o

continuă creştere La pacienţii cu SM pe lacircngă diminuarea nivelului de expresie a receptorilor

PPARα icircn eozinofile ne aşteptam şi la evidenţierea unor modificări icircn expresia PPARα şi icircn

populaţiile de Ly Mo şi PMN Acest fapt poate fi explicat de utilizarea unor celule provenite

de la pacienţi fără afectare cardiovasculară fără diabet zaharat şi necesită continuarea

studiului pe culturi celulare icircn condiţii de stimulare cu agonişti PPARα deziderat care

impune continuarea investigării expresiei PPARα printr-un grant de cercetare

ORIGINALITATEA ȘI CONTRIBUȚIILE INOVATIVE ALE TEZEI DE

DOCTORAT PERSPECTIVE DE CERCETARE

Evaluarea nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn leucocitele circulante

aduce noi perspective icircn studiul obezităţii şi sindromului metabolic Importanta studiului

expresiei receptorilor PPARα icircn sindromul metabolic derivă din prevalenta crescută a

sindromului metabolic icircn populaţia cercetată la care se adaugă riscul cardiovascular foarte

icircnalt al acestor pacienţi cu implicaţii majore icircn sănătatea publică Rolul receptorilor PPARα

icircn inflamaţie şi aterogeneza este binecunoscut dar studiul nostru este primul care a arătat că

nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα este semnificativ mai scăzut in populatiile

de eozinofile la pacienţii cu SM Această concluzie coroborata cu existenţa unei stracircnse

asocieri intre expresia receptorilor PPARα la nivelul Mo limfocitelor şi PMNlor creeaza

ipoteza existenţei unui mecanism de control diferit al expresiei PPARα la nivelul

eozinofilelor Această cercetare aduce informaţii importante referitoare la mecanismele

proinflamatorii care stau la baza insulinorezistenţei şi riscului cardiometabolic şi impune

continuarea studiului acestor receptori nucleari prin citometrie icircn flux metodă care poate fi

aplicată şi la scara mai largă dacă sunt asigurate resursele materiale necesare cercetării

Cercetarea prin citometrie icircn flux poate fi completată de studiul polimorfismului genei

PPARA şi astfel se pot identifica timpuriu indivizii cu potenţial risc cardiometabolic crescut

Studiul receptorilor PPARα a stabilit conexiuni cu factori proinflamatori şi aterogenetici iar

continuarea cercetării poate aduce şi elemente noi de diagnostic precoce icircn sindromul

metabolic contribuind la icircmbunătăţirea prognosticului acestor pacienţi

CONCLUZII FINALE

1 Aplicarea scorului de SM alături de implementarea algoritmului electronic de diagnostic

contribuie la o prelucrare rapidă eficientă și standardizată a informaţiilor la nivelul

medicinei primare

2 Prevalenţa SM calculată astfel icircn cadrul studiului este crescută (2732) icircn concordanţă

cu datele raportate

3 Controlul factorilor de risc cardiometabolici incluşi icircn SM se poate realiza prin

managementul stilului de viaţă (scăderea greutăţii corporale prin combaterea

sedentarismului şi adoptarea unei diete antiaterogene şi hipocalorice) şi administrarea

terapiei medicamentoase

4 Este necesară adoptarea unei politici de sănătate publică pentru prevenirea creşterii icircn

populaţie a prevalenţei obezităţii şi a diabetului zaharat

5 Noi metode de cercetare icircn domeniul SM axate pe diagnosticarea precoce şi cuantificarea

eficientă a acestuia duce la diminuarea incidenței evenimentelor cardiovasculare majore

6 Sindromul metabolic se caracterizează printr-un status inflamator cronic

7 Valorile Non-HDL-colesterolului şi a raportului de aterogenitate sunt semnificativ mai

mari la pacienţii cu SM

8 Dintre reactanţii de faza acută am observat că valoarea medie a fibrinogenului este mai

crescută icircn lotul cu SM

9 Valorile eozinofilelor sunt crescute icircn sindromul metabolic iar explorarea relaţiei dintre

eozinofile şi obezitate constituie una din direcţiile de studiu actuale ale sindromului

metabolic

10 Evaluarea markerilor inflamatori icircn contextul sindromului metabolic este utilă icircn

evaluarea complexă a a factorilor de risc cardiometabolici

11 Prin metoda citometriei icircn flux am demonstrat prezenta Receptorilor Activaţi de

Inductorii Proliferării Peroxizomilor ndash Alpha (PPARα) icircn toate populaţiile de leucocite

studiate (Mo limfocite PMN eozinofile) atacirct icircn lotul pacienţilor cu SM cacirct şi icircn lotul

martor

12 Utilizacircnd intensitatea medie de fluorescenţă a anticorpilor anti- PPARα am arătat că

nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile este semnificativ mai redus

la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali

13 Acest studiu este primul care a demonstrat existenţa unei scăderi statistic semnificative a

nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofilele pacienţilor cu SM

confirmacircnd cercetările recente care au evidenţiat rolul eozinofilelor şi al receptorilor

PPARα icircn obezitate reglarea inflamaţiei cronice şi aterogeneza

14 Contrar aşteptărilor noastre icircn populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările

efectuate icircn cele două loturi de studiu (cu şi fără sindom metabolic) nu am evidenţiat

diferenţe statistic seminificative icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα la

subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali

15 Icircn populaţiile de Mo limfocite şi polimorfonucleare am observat corelaţii puternice

semnificativ statistic icircntre expresia PPARα icircn aceste tipuri celulare sugeracircnd existenţa

unui mecanism unic de control al inflamaţiei cronice la nivelul acestor celule probabil

diferit de cel din eozinofile

16 La subiecţii cu SM expresia relativă a PPARα icircn Eo este invers asociată cu expresia

receptorului CD36 (receptor al particulelor de ox - LDL şi propus ca un marker precoce al

aterosclerozei) dovedind rolul antiinflamator al receptorilor PPARα la nivel endotelial

17 La pacienţii cu antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială nivelul de

expresie al receptorilor PPARα icircn eozinofile şi Mo este diminuat comparativ cu subiecţii

fără antecedente familiale de hipertensiune arterială Putem spune că studiul efectuat de

noi aduce informaţii importante legate de geneză aterosclerozei şi hipertensiunii arteriale

18 Prin studiul asocierilor dintre receptorii PPARα şi componentele clinice ale sindromului

metabolic am arătat rolul acestor receptori icircn determinismul obezităţii de tip central

nivelul expresiei relative a receptorilor PPARα fiind invers proporţional cu circumferinţa

abdominală

19 Icircn acelaşi timp nivelul de expresie a PPARα icircn sindromul metabolic este asociat pozitiv

cu concentraţia serică a HDL-colesterolului şi invers asociat cu nivelul trigliceridelor

serice dovedind rolul acestor receptori icircn diminuarea procesului inflamator cronic de la

nivel vascular

20 La pacienţii cu SM scăderea expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofile este corelată cu

creşterea unor markeri ai sindromului inflamator cronic cardiometabolic (acid uric

fibrinogen) ilustracircnd importanta receptorilor icircn reglarea status-ului inflamator cronic din

sindromul metabolic

21 Utilizarea metodei flowcitometrice pentru studiul expresiei relative a receptorilor PPARα

icircn leucocite a adus informaţii importante cu privire la mecanismele moleculare de control

implicate icircn patogenia bolilor cardiometabolice icircn concordanţă cu cercetările care descriu

expresia PPAR icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale bronşice

keratinocite)

BIBLIOGRAFIE SELECTIVA

1 Kahn R Metabolic syndrome- what is the clinical usefulness Lancet 2008371(9628)1892-3

2 Reaven GM The metabolic syndrome is this diagnosis necessary Am J Clin Nutr 2006 83(6)1237-7

3 Grundy SM Pre-Diabetes Metabolic Syndrome and Cardiovascular Risk J Am Coll Cardiol 201259(7)

635-43

4 International Diabetes Federation IDF Diabetes Atlas 6th edn International Diabetes Federation Belgium

Brussels 20131-155

5 World Health Organization Global Status Report on Noncommunicable Diseases 2010 World Health

Organization Geneva Switzerland 20111-176

6 Coman AE Petrovanu R Sindromul metabolic in practica de ambulator Editura Pim Iaşi 2009 1-103

7 Grundy SM Becker D Clark LT et alThird Report of the National Cholesterol Education Program (NCEP)

Expert Panel on Detection Evaluation and Treatment of High Blood Cholesterol in Adults (Adult

Treatment Panel III) Final Report Circulation 2002106(25)3143-90

8 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J Metabolic syndrome- a new worldwide definition A Consensus Statement

from the International Diabetes Federation Diabet Med 2006 23(5)469-80

9 KG Alberti KG Eckel RH Grundy SM etal International Diabetes Federation task force on epidemiology

and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart Association World Heart

Federation International Atherosclerosis Society International Association for the study of obesity

Harmonizing the metabolic syndrome a joint interim statement of the International Diabetes Federation task

force on epidemiology and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart

Association World Heart Federation International Atherosclerosis society and International Association

for the study of obesity Circulation 2009120(16)1640-5

10 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J IDF Epidemiology Task Force The metabolic syndrome new

worldwide definition Lancet 2005 366 1059 - 62

11 Oleszczyk M Svab I Seifert B et al Primary healthcare in the developing part of Europe changes and

development in the former Eastern Bloc countries that joined the European Union following 2004 Med Sci

Monit 2009(15)78ndash84

12 Jung U J Choi M S Obesity and Its Metabolic Complications The Role of Adipokines and the

Relationship between Obesity Inflammation Insulin Resistance Dyslipidemia and Nonalcoholic Fatty

Liver Disease Int J Mol Sci 2014rsquo15(4) 6184-223

13 Vanden Heuvel JP Peters JM Peroxisome Proliferators In Ramos K (ed) Cellular and Molecular

Toxicology (Second Edition) Volume 2 New York Elsevier Science Inc 2010 145 - 67

14 Yessoufou A Wahli W Multifaceted roles of peroxisome proliferator-activated receptors (PPARs) at the

cellular and whole organism levels Swiss Med Wkl 2010140w13071 doi104414smw201013071

15 Azhar S Peroxisome proliferator-activated receptors metabolic syndrome and cardiovascular disease

Future Cardiology 20106(5)657-91

16 Andries G Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity

Diabetes and Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(Suppl)24-32

17 Zandbergen F Plutzky J PPARalpha in atherosclerosis and inflammation Biochim Biophys Acta

20071771(8)972-82

18 Straus DS Glass CK Anti-inflammatory actions of PPAR ligands new insights on cellular and molecular

mechanisms Trends Immunol 200728(12)551-8

19 Zlei M Zugun- Eloae F Carasevici E Citometrie icircn flux - Bază şi clinică Icircn Hinescu ME (ed) Citometrie icircn

flux - principii şi aplicaţii clinice Bucureşti Editura Viaţa Medicală Romacircnească 20111-128

20 Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity Diabetes and

Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(9)24-32

21 Woerly G Honda K Loyens M et al Peroxisome proliferator-activated receptors alpha and gamma down-

regulate allergic inflammation and eosinophil activation J Exp Med 2003198(3)411-21

22 Salle-Saumont D Brenuchon C Kanda A et al Peroxisome proliferator-activated receptor alpha regulates

skin inflammation and humoral response in atopic dermatitis J Clin Allergy Immunology 2008 21(4)962-8

23 Schote A Turner J Schiltz J et al Nuclear receptors in human immune cells expression and correlations

Mol Immunolog 200744(6)1436-45

24 DAmore S Vacca M Graziano G et al Nuclear receptors expression chart icircn peripheral blood

mononuclear cells identifies patients with Metabolic Syndrome Biochim Biophys Acta

20131832(12)2289-301

25 Uthurralt J Gordish-Dressman H Bradbury M T et al PPARalpha L162V underlies variation in serum

triglycerides and subcutaneous fat volume in young males BMC Med Genet 2007855

26 Hiukka A Leinonen ES Jauhiainen M et al Long-term effects of fenofibrate on VLDL and HDL

subspecies icircn participants with type 2 diabetes mellitus Diabetologia 2007 50(10)2067-75

27 Robins SJ Rubins HB Faas FH et alInsulin resistance and cardiovascular events with low HDL

cholesterol The Veterans Affairs HDL Intervention Trial (VA-HIT) Diabetes Care 2003 26(5)1513-7

28 Devaraj S Siegel D Jialal I Statin Therapy in Metabolic Syndrome and Hypertension Post-JUPITER

What is the Value of CRP Curr Atheroscler Rep 2011 13(1) 31ndash42

29 Imperatore G Riccardi G Iovino C et al Plasma Fibrinogen A New Factor of the Metabolic Syndrome A

population-based study Diabetes Care 19982 1(4)649-54

30 Krysiak R Gdula-Dymek A Bachowski R Okopien B Pleiotropic effects of atorvastatin and fenofibrate

in metabolic syndrome and different types of pre-diabete Diabetes Care 201033(10)2266-70

31 Hermans MP Impact of Fenofibrate on Type 2 Diabetes Patients with Features of the Metabolic Syndrome

Subgroup Analysis From FIELD Curr Cardiol Rev 20106(2)112-8

32 Silverstein R Inflammation atherosclerosis and arterial thrombosis Role of the scavenger receptor CD36

Cleveland Clinic Journal of Medicine 200976(Suppl 2)S27-S30

33 Hăncu N Obezitatea In Vereşiu IA (ed) Diabetul zaharat nutritia si bolile metabolice Volume 2 Editura

Echinox Cluj- Napoca 2010 1-15

Lista lucrări publicate

1 Elena Popa Maria Maidaniuc Agnes Bacusca Alamir Diaa Rodica Petrovanu Adorata Elena

Coman Disfuncţia endotelială ndash de la mecanisme moleculare la cuantifi care şi tratament icircn practica

medicală Practica Medicală 20149(3) 109-14

2 Elena Popa Agnes Bacusca Alamir Diaa Maria Maidaniuc Rodica Petrovanu Adorata Elena Coman

The function of insulin receptor (IRF) in evolution of obesity correlation with adipocytes diameters

Archives of the Balkan Medical Union 201449(3) 275-9

3 Elena Popa Florin Zugun-Eloae Mihaela Zlei Daniela Jitaru Oana Maria Pintilie Adorata Elena

Coman Maria Traian Didona Anca Ungureanu Eugen Carasevici - acceptata pentru numarul 42014

Flow cytometry analysis of PPAR-alpha receptors in metabolic syndrome) Revista Romană de

Medicină de Laborator(RRLM-D-14-00034R1- adeverinţa ataşată

Page 31: REZUMAT TEZĂ DE DOCTORAT - umfiasi.ro Doctorat/rezumat... · universitatea de medicinĂ Şi farmacie “grigore t. popa” iaŞi facultatea de medicinĂ rezumat tezĂ de doctorat

9 Valorile eozinofilelor sunt crescute icircn sindromul metabolic iar explorarea relaţiei dintre

eozinofile şi obezitate constituie una din direcţiile de studiu actuale ale sindromului

metabolic

10 Evaluarea markerilor inflamatori icircn contextul sindromului metabolic este utilă icircn

evaluarea complexă a a factorilor de risc cardiometabolici

11 Prin metoda citometriei icircn flux am demonstrat prezenta Receptorilor Activaţi de

Inductorii Proliferării Peroxizomilor ndash Alpha (PPARα) icircn toate populaţiile de leucocite

studiate (Mo limfocite PMN eozinofile) atacirct icircn lotul pacienţilor cu SM cacirct şi icircn lotul

martor

12 Utilizacircnd intensitatea medie de fluorescenţă a anticorpilor anti- PPARα am arătat că

nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofile este semnificativ mai redus

la pacienţii cu SM comparativ cu subiecţii normali

13 Acest studiu este primul care a demonstrat existenţa unei scăderi statistic semnificative a

nivelului de expresie relativă a receptorilor PPARα icircn eozinofilele pacienţilor cu SM

confirmacircnd cercetările recente care au evidenţiat rolul eozinofilelor şi al receptorilor

PPARα icircn obezitate reglarea inflamaţiei cronice şi aterogeneza

14 Contrar aşteptărilor noastre icircn populaţiile de Mo Ly şi PMN studiate determinările

efectuate icircn cele două loturi de studiu (cu şi fără sindom metabolic) nu am evidenţiat

diferenţe statistic seminificative icircntre nivelul de expresie relativă a receptorilor PPARα la

subiecţii diagnosticaţi cu SM comparativ cu subiecţii normali

15 Icircn populaţiile de Mo limfocite şi polimorfonucleare am observat corelaţii puternice

semnificativ statistic icircntre expresia PPARα icircn aceste tipuri celulare sugeracircnd existenţa

unui mecanism unic de control al inflamaţiei cronice la nivelul acestor celule probabil

diferit de cel din eozinofile

16 La subiecţii cu SM expresia relativă a PPARα icircn Eo este invers asociată cu expresia

receptorului CD36 (receptor al particulelor de ox - LDL şi propus ca un marker precoce al

aterosclerozei) dovedind rolul antiinflamator al receptorilor PPARα la nivel endotelial

17 La pacienţii cu antecedente heredo-colaterale de hipertensiune arterială nivelul de

expresie al receptorilor PPARα icircn eozinofile şi Mo este diminuat comparativ cu subiecţii

fără antecedente familiale de hipertensiune arterială Putem spune că studiul efectuat de

noi aduce informaţii importante legate de geneză aterosclerozei şi hipertensiunii arteriale

18 Prin studiul asocierilor dintre receptorii PPARα şi componentele clinice ale sindromului

metabolic am arătat rolul acestor receptori icircn determinismul obezităţii de tip central

nivelul expresiei relative a receptorilor PPARα fiind invers proporţional cu circumferinţa

abdominală

19 Icircn acelaşi timp nivelul de expresie a PPARα icircn sindromul metabolic este asociat pozitiv

cu concentraţia serică a HDL-colesterolului şi invers asociat cu nivelul trigliceridelor

serice dovedind rolul acestor receptori icircn diminuarea procesului inflamator cronic de la

nivel vascular

20 La pacienţii cu SM scăderea expresiei receptorilor PPARα icircn eozinofile este corelată cu

creşterea unor markeri ai sindromului inflamator cronic cardiometabolic (acid uric

fibrinogen) ilustracircnd importanta receptorilor icircn reglarea status-ului inflamator cronic din

sindromul metabolic

21 Utilizarea metodei flowcitometrice pentru studiul expresiei relative a receptorilor PPARα

icircn leucocite a adus informaţii importante cu privire la mecanismele moleculare de control

implicate icircn patogenia bolilor cardiometabolice icircn concordanţă cu cercetările care descriu

expresia PPAR icircn leucocite sau alte tipuri celulare (hepatocite celule epiteliale bronşice

keratinocite)

BIBLIOGRAFIE SELECTIVA

1 Kahn R Metabolic syndrome- what is the clinical usefulness Lancet 2008371(9628)1892-3

2 Reaven GM The metabolic syndrome is this diagnosis necessary Am J Clin Nutr 2006 83(6)1237-7

3 Grundy SM Pre-Diabetes Metabolic Syndrome and Cardiovascular Risk J Am Coll Cardiol 201259(7)

635-43

4 International Diabetes Federation IDF Diabetes Atlas 6th edn International Diabetes Federation Belgium

Brussels 20131-155

5 World Health Organization Global Status Report on Noncommunicable Diseases 2010 World Health

Organization Geneva Switzerland 20111-176

6 Coman AE Petrovanu R Sindromul metabolic in practica de ambulator Editura Pim Iaşi 2009 1-103

7 Grundy SM Becker D Clark LT et alThird Report of the National Cholesterol Education Program (NCEP)

Expert Panel on Detection Evaluation and Treatment of High Blood Cholesterol in Adults (Adult

Treatment Panel III) Final Report Circulation 2002106(25)3143-90

8 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J Metabolic syndrome- a new worldwide definition A Consensus Statement

from the International Diabetes Federation Diabet Med 2006 23(5)469-80

9 KG Alberti KG Eckel RH Grundy SM etal International Diabetes Federation task force on epidemiology

and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart Association World Heart

Federation International Atherosclerosis Society International Association for the study of obesity

Harmonizing the metabolic syndrome a joint interim statement of the International Diabetes Federation task

force on epidemiology and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart

Association World Heart Federation International Atherosclerosis society and International Association

for the study of obesity Circulation 2009120(16)1640-5

10 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J IDF Epidemiology Task Force The metabolic syndrome new

worldwide definition Lancet 2005 366 1059 - 62

11 Oleszczyk M Svab I Seifert B et al Primary healthcare in the developing part of Europe changes and

development in the former Eastern Bloc countries that joined the European Union following 2004 Med Sci

Monit 2009(15)78ndash84

12 Jung U J Choi M S Obesity and Its Metabolic Complications The Role of Adipokines and the

Relationship between Obesity Inflammation Insulin Resistance Dyslipidemia and Nonalcoholic Fatty

Liver Disease Int J Mol Sci 2014rsquo15(4) 6184-223

13 Vanden Heuvel JP Peters JM Peroxisome Proliferators In Ramos K (ed) Cellular and Molecular

Toxicology (Second Edition) Volume 2 New York Elsevier Science Inc 2010 145 - 67

14 Yessoufou A Wahli W Multifaceted roles of peroxisome proliferator-activated receptors (PPARs) at the

cellular and whole organism levels Swiss Med Wkl 2010140w13071 doi104414smw201013071

15 Azhar S Peroxisome proliferator-activated receptors metabolic syndrome and cardiovascular disease

Future Cardiology 20106(5)657-91

16 Andries G Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity

Diabetes and Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(Suppl)24-32

17 Zandbergen F Plutzky J PPARalpha in atherosclerosis and inflammation Biochim Biophys Acta

20071771(8)972-82

18 Straus DS Glass CK Anti-inflammatory actions of PPAR ligands new insights on cellular and molecular

mechanisms Trends Immunol 200728(12)551-8

19 Zlei M Zugun- Eloae F Carasevici E Citometrie icircn flux - Bază şi clinică Icircn Hinescu ME (ed) Citometrie icircn

flux - principii şi aplicaţii clinice Bucureşti Editura Viaţa Medicală Romacircnească 20111-128

20 Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity Diabetes and

Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(9)24-32

21 Woerly G Honda K Loyens M et al Peroxisome proliferator-activated receptors alpha and gamma down-

regulate allergic inflammation and eosinophil activation J Exp Med 2003198(3)411-21

22 Salle-Saumont D Brenuchon C Kanda A et al Peroxisome proliferator-activated receptor alpha regulates

skin inflammation and humoral response in atopic dermatitis J Clin Allergy Immunology 2008 21(4)962-8

23 Schote A Turner J Schiltz J et al Nuclear receptors in human immune cells expression and correlations

Mol Immunolog 200744(6)1436-45

24 DAmore S Vacca M Graziano G et al Nuclear receptors expression chart icircn peripheral blood

mononuclear cells identifies patients with Metabolic Syndrome Biochim Biophys Acta

20131832(12)2289-301

25 Uthurralt J Gordish-Dressman H Bradbury M T et al PPARalpha L162V underlies variation in serum

triglycerides and subcutaneous fat volume in young males BMC Med Genet 2007855

26 Hiukka A Leinonen ES Jauhiainen M et al Long-term effects of fenofibrate on VLDL and HDL

subspecies icircn participants with type 2 diabetes mellitus Diabetologia 2007 50(10)2067-75

27 Robins SJ Rubins HB Faas FH et alInsulin resistance and cardiovascular events with low HDL

cholesterol The Veterans Affairs HDL Intervention Trial (VA-HIT) Diabetes Care 2003 26(5)1513-7

28 Devaraj S Siegel D Jialal I Statin Therapy in Metabolic Syndrome and Hypertension Post-JUPITER

What is the Value of CRP Curr Atheroscler Rep 2011 13(1) 31ndash42

29 Imperatore G Riccardi G Iovino C et al Plasma Fibrinogen A New Factor of the Metabolic Syndrome A

population-based study Diabetes Care 19982 1(4)649-54

30 Krysiak R Gdula-Dymek A Bachowski R Okopien B Pleiotropic effects of atorvastatin and fenofibrate

in metabolic syndrome and different types of pre-diabete Diabetes Care 201033(10)2266-70

31 Hermans MP Impact of Fenofibrate on Type 2 Diabetes Patients with Features of the Metabolic Syndrome

Subgroup Analysis From FIELD Curr Cardiol Rev 20106(2)112-8

32 Silverstein R Inflammation atherosclerosis and arterial thrombosis Role of the scavenger receptor CD36

Cleveland Clinic Journal of Medicine 200976(Suppl 2)S27-S30

33 Hăncu N Obezitatea In Vereşiu IA (ed) Diabetul zaharat nutritia si bolile metabolice Volume 2 Editura

Echinox Cluj- Napoca 2010 1-15

Lista lucrări publicate

1 Elena Popa Maria Maidaniuc Agnes Bacusca Alamir Diaa Rodica Petrovanu Adorata Elena

Coman Disfuncţia endotelială ndash de la mecanisme moleculare la cuantifi care şi tratament icircn practica

medicală Practica Medicală 20149(3) 109-14

2 Elena Popa Agnes Bacusca Alamir Diaa Maria Maidaniuc Rodica Petrovanu Adorata Elena Coman

The function of insulin receptor (IRF) in evolution of obesity correlation with adipocytes diameters

Archives of the Balkan Medical Union 201449(3) 275-9

3 Elena Popa Florin Zugun-Eloae Mihaela Zlei Daniela Jitaru Oana Maria Pintilie Adorata Elena

Coman Maria Traian Didona Anca Ungureanu Eugen Carasevici - acceptata pentru numarul 42014

Flow cytometry analysis of PPAR-alpha receptors in metabolic syndrome) Revista Romană de

Medicină de Laborator(RRLM-D-14-00034R1- adeverinţa ataşată

Page 32: REZUMAT TEZĂ DE DOCTORAT - umfiasi.ro Doctorat/rezumat... · universitatea de medicinĂ Şi farmacie “grigore t. popa” iaŞi facultatea de medicinĂ rezumat tezĂ de doctorat

BIBLIOGRAFIE SELECTIVA

1 Kahn R Metabolic syndrome- what is the clinical usefulness Lancet 2008371(9628)1892-3

2 Reaven GM The metabolic syndrome is this diagnosis necessary Am J Clin Nutr 2006 83(6)1237-7

3 Grundy SM Pre-Diabetes Metabolic Syndrome and Cardiovascular Risk J Am Coll Cardiol 201259(7)

635-43

4 International Diabetes Federation IDF Diabetes Atlas 6th edn International Diabetes Federation Belgium

Brussels 20131-155

5 World Health Organization Global Status Report on Noncommunicable Diseases 2010 World Health

Organization Geneva Switzerland 20111-176

6 Coman AE Petrovanu R Sindromul metabolic in practica de ambulator Editura Pim Iaşi 2009 1-103

7 Grundy SM Becker D Clark LT et alThird Report of the National Cholesterol Education Program (NCEP)

Expert Panel on Detection Evaluation and Treatment of High Blood Cholesterol in Adults (Adult

Treatment Panel III) Final Report Circulation 2002106(25)3143-90

8 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J Metabolic syndrome- a new worldwide definition A Consensus Statement

from the International Diabetes Federation Diabet Med 2006 23(5)469-80

9 KG Alberti KG Eckel RH Grundy SM etal International Diabetes Federation task force on epidemiology

and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart Association World Heart

Federation International Atherosclerosis Society International Association for the study of obesity

Harmonizing the metabolic syndrome a joint interim statement of the International Diabetes Federation task

force on epidemiology and prevention National Heart Lung and Blood Institute American Heart

Association World Heart Federation International Atherosclerosis society and International Association

for the study of obesity Circulation 2009120(16)1640-5

10 Alberti KG Zimmet PZ Shaw J IDF Epidemiology Task Force The metabolic syndrome new

worldwide definition Lancet 2005 366 1059 - 62

11 Oleszczyk M Svab I Seifert B et al Primary healthcare in the developing part of Europe changes and

development in the former Eastern Bloc countries that joined the European Union following 2004 Med Sci

Monit 2009(15)78ndash84

12 Jung U J Choi M S Obesity and Its Metabolic Complications The Role of Adipokines and the

Relationship between Obesity Inflammation Insulin Resistance Dyslipidemia and Nonalcoholic Fatty

Liver Disease Int J Mol Sci 2014rsquo15(4) 6184-223

13 Vanden Heuvel JP Peters JM Peroxisome Proliferators In Ramos K (ed) Cellular and Molecular

Toxicology (Second Edition) Volume 2 New York Elsevier Science Inc 2010 145 - 67

14 Yessoufou A Wahli W Multifaceted roles of peroxisome proliferator-activated receptors (PPARs) at the

cellular and whole organism levels Swiss Med Wkl 2010140w13071 doi104414smw201013071

15 Azhar S Peroxisome proliferator-activated receptors metabolic syndrome and cardiovascular disease

Future Cardiology 20106(5)657-91

16 Andries G Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity

Diabetes and Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(Suppl)24-32

17 Zandbergen F Plutzky J PPARalpha in atherosclerosis and inflammation Biochim Biophys Acta

20071771(8)972-82

18 Straus DS Glass CK Anti-inflammatory actions of PPAR ligands new insights on cellular and molecular

mechanisms Trends Immunol 200728(12)551-8

19 Zlei M Zugun- Eloae F Carasevici E Citometrie icircn flux - Bază şi clinică Icircn Hinescu ME (ed) Citometrie icircn

flux - principii şi aplicaţii clinice Bucureşti Editura Viaţa Medicală Romacircnească 20111-128

20 Fruchart JCh Peroxisome Proliferator-Activated Receptors at the Crossroads of Obesity Diabetes and

Cardiovascular Disease J Am Coll Cardiol 200648(9)24-32

21 Woerly G Honda K Loyens M et al Peroxisome proliferator-activated receptors alpha and gamma down-

regulate allergic inflammation and eosinophil activation J Exp Med 2003198(3)411-21

22 Salle-Saumont D Brenuchon C Kanda A et al Peroxisome proliferator-activated receptor alpha regulates

skin inflammation and humoral response in atopic dermatitis J Clin Allergy Immunology 2008 21(4)962-8

23 Schote A Turner J Schiltz J et al Nuclear receptors in human immune cells expression and correlations

Mol Immunolog 200744(6)1436-45

24 DAmore S Vacca M Graziano G et al Nuclear receptors expression chart icircn peripheral blood

mononuclear cells identifies patients with Metabolic Syndrome Biochim Biophys Acta

20131832(12)2289-301

25 Uthurralt J Gordish-Dressman H Bradbury M T et al PPARalpha L162V underlies variation in serum

triglycerides and subcutaneous fat volume in young males BMC Med Genet 2007855

26 Hiukka A Leinonen ES Jauhiainen M et al Long-term effects of fenofibrate on VLDL and HDL

subspecies icircn participants with type 2 diabetes mellitus Diabetologia 2007 50(10)2067-75

27 Robins SJ Rubins HB Faas FH et alInsulin resistance and cardiovascular events with low HDL

cholesterol The Veterans Affairs HDL Intervention Trial (VA-HIT) Diabetes Care 2003 26(5)1513-7

28 Devaraj S Siegel D Jialal I Statin Therapy in Metabolic Syndrome and Hypertension Post-JUPITER

What is the Value of CRP Curr Atheroscler Rep 2011 13(1) 31ndash42

29 Imperatore G Riccardi G Iovino C et al Plasma Fibrinogen A New Factor of the Metabolic Syndrome A

population-based study Diabetes Care 19982 1(4)649-54

30 Krysiak R Gdula-Dymek A Bachowski R Okopien B Pleiotropic effects of atorvastatin and fenofibrate

in metabolic syndrome and different types of pre-diabete Diabetes Care 201033(10)2266-70

31 Hermans MP Impact of Fenofibrate on Type 2 Diabetes Patients with Features of the Metabolic Syndrome

Subgroup Analysis From FIELD Curr Cardiol Rev 20106(2)112-8

32 Silverstein R Inflammation atherosclerosis and arterial thrombosis Role of the scavenger receptor CD36

Cleveland Clinic Journal of Medicine 200976(Suppl 2)S27-S30

33 Hăncu N Obezitatea In Vereşiu IA (ed) Diabetul zaharat nutritia si bolile metabolice Volume 2 Editura

Echinox Cluj- Napoca 2010 1-15

Lista lucrări publicate

1 Elena Popa Maria Maidaniuc Agnes Bacusca Alamir Diaa Rodica Petrovanu Adorata Elena

Coman Disfuncţia endotelială ndash de la mecanisme moleculare la cuantifi care şi tratament icircn practica

medicală Practica Medicală 20149(3) 109-14

2 Elena Popa Agnes Bacusca Alamir Diaa Maria Maidaniuc Rodica Petrovanu Adorata Elena Coman

The function of insulin receptor (IRF) in evolution of obesity correlation with adipocytes diameters

Archives of the Balkan Medical Union 201449(3) 275-9

3 Elena Popa Florin Zugun-Eloae Mihaela Zlei Daniela Jitaru Oana Maria Pintilie Adorata Elena

Coman Maria Traian Didona Anca Ungureanu Eugen Carasevici - acceptata pentru numarul 42014

Flow cytometry analysis of PPAR-alpha receptors in metabolic syndrome) Revista Romană de

Medicină de Laborator(RRLM-D-14-00034R1- adeverinţa ataşată

Page 33: REZUMAT TEZĂ DE DOCTORAT - umfiasi.ro Doctorat/rezumat... · universitatea de medicinĂ Şi farmacie “grigore t. popa” iaŞi facultatea de medicinĂ rezumat tezĂ de doctorat

cholesterol The Veterans Affairs HDL Intervention Trial (VA-HIT) Diabetes Care 2003 26(5)1513-7

28 Devaraj S Siegel D Jialal I Statin Therapy in Metabolic Syndrome and Hypertension Post-JUPITER

What is the Value of CRP Curr Atheroscler Rep 2011 13(1) 31ndash42

29 Imperatore G Riccardi G Iovino C et al Plasma Fibrinogen A New Factor of the Metabolic Syndrome A

population-based study Diabetes Care 19982 1(4)649-54

30 Krysiak R Gdula-Dymek A Bachowski R Okopien B Pleiotropic effects of atorvastatin and fenofibrate

in metabolic syndrome and different types of pre-diabete Diabetes Care 201033(10)2266-70

31 Hermans MP Impact of Fenofibrate on Type 2 Diabetes Patients with Features of the Metabolic Syndrome

Subgroup Analysis From FIELD Curr Cardiol Rev 20106(2)112-8

32 Silverstein R Inflammation atherosclerosis and arterial thrombosis Role of the scavenger receptor CD36

Cleveland Clinic Journal of Medicine 200976(Suppl 2)S27-S30

33 Hăncu N Obezitatea In Vereşiu IA (ed) Diabetul zaharat nutritia si bolile metabolice Volume 2 Editura

Echinox Cluj- Napoca 2010 1-15

Lista lucrări publicate

1 Elena Popa Maria Maidaniuc Agnes Bacusca Alamir Diaa Rodica Petrovanu Adorata Elena

Coman Disfuncţia endotelială ndash de la mecanisme moleculare la cuantifi care şi tratament icircn practica

medicală Practica Medicală 20149(3) 109-14

2 Elena Popa Agnes Bacusca Alamir Diaa Maria Maidaniuc Rodica Petrovanu Adorata Elena Coman

The function of insulin receptor (IRF) in evolution of obesity correlation with adipocytes diameters

Archives of the Balkan Medical Union 201449(3) 275-9

3 Elena Popa Florin Zugun-Eloae Mihaela Zlei Daniela Jitaru Oana Maria Pintilie Adorata Elena

Coman Maria Traian Didona Anca Ungureanu Eugen Carasevici - acceptata pentru numarul 42014

Flow cytometry analysis of PPAR-alpha receptors in metabolic syndrome) Revista Romană de

Medicină de Laborator(RRLM-D-14-00034R1- adeverinţa ataşată


Recommended