Listeria

Listeria monocytogenes

Controlul microbiologic al alimentelor

  SR EN ISO 11290-1/2005

ISTORIC

Denumiri: 

Bacterium monocytogens Agent patogen descris în 1926 – Murray şi Webb; Monocitoză – inoculare i.v. - animale de laborator

(iepuri şi porci de Guineea);

Listerella hepatolytica Pirie (1927) – rozătoare – necroză hepatică – Africa

de sud;

Listerioza – primul caz de îmbolnăvire umană – raportat de

Nyfeldt (1929), Danemarca

ISTORIC

Listeria monocytogens Denumire introdusă de Pirie (1940) în

onoarea lordului John Lister (părintele antisepsiei);

Focar de listerioză Canada (1981) – salată fertilizată cu

îngrăşăminte naturale; Prima argumentare ştiinţifică a implicării

alimentelor

ROMÂNIA Volintin (1951)

izolează primele tulpini de Listeria monocytogenes la capre şi porci

Roşca şi colab. (1960) a descris primul caz de listerioză umană

2008 Listeria monocytogenes – a fost introdusă în controlul curent al

alimentelor (Regulament CEE/EU 2074/2005): Carne şi preparate din carne; Produse de peşte; Lapte şi produse lactate, Produse baby-food (Programe Naţionale – Ministerul

Sănătăţii); Suplimente alimentare cu destinaţie specială (Programe

Naţionale – Ministerul Sănătăţii);

CONSIDERAŢII TAXONOMICE

Genul Listeria – cuprinde 7 specii:

Listeria monocytogenes – agent patogen uman; Listeria ivanovii:

subspecia ivanovii; subspecia londosiensis;

Listeria innocua; Listeria seeligeri; Listeria welshimeri; Listeria grayi; Listeria murrayi;

L. denitrificans – reclasificată Jonesia denitrificans L. ivanovii şi L. seeligeri – excepţional listerioză umana

(McLauchlin, 1996)

HABITAT Listeria spp. – microorganisme ubicvitare:

Sol argilos (65-67 zile), nămoluri (295 zile); Materii vegetale descompuse; Apă de suprafaţă:

295 zile la la 37˚C 750 zile la 2-5 ˚C

Apă clorinată: 113 zile la 37 ˚C; 578 zile la 2-5 ˚C

Efluenţi reziduali; Alimente crude şi/sau procesate:

pH : 4,5 - 9,2; aw ≥ 0,92; 2-5 ˚C – temperatură de multiplicare; Inactivată – temperaturi ≥ 60 ˚C; Excepţional - rezistă la temperatura de pasteurizare, 72,5 ˚C, 15

sec (bacterie facultativ intracelulară); conc. ≥ 10-20 % g/l NaCl; conservanţi (nitriţi).

INCIDENŢA ÎN ALIMENTE

Lapte crud: 4,9 – 28 %;

Îngheţată: 2,8 – 3,5 %;

Brânzeturi cu pastă moale;

0,8 – 46 %; Brânză Gorgonzola

/Roquefort: 4,8 – 28,5 %;

reţeaua FOODNET

Carne roşie crudă: 5 – 36,4 %;

Carne de pui: 9,7 – 61 %;

Semipreparate din carne (carne tocată, pastă de mici) :

3,6 – 23,6 %; Produse de

pescărie: 4 – 78 %

SURSA DE AGENT PATOGEN

complexă şi diversă

Listerioza - zooantroponoză:

boală tipică/atipică;

purtători asimptomatici

Animală Mamifere sălbatice - 15

specii: vulpi, lupi, iepuri, rozătoare,

porci mistreţi etc păsări – 16 specii; peşti, crustacee; insecte; reptile; animale domestice

ovine, caprine, porcine, bovine etc.

Umană purtători asimptomatici

umani (faringieni, intestinali): populaţia generală: 2-6 %

(Roucourt, 1996); personal manipulator– ind.

alimentară 0-46,2%

MOD DE TRANSMITERE

Direct (contact strâns om –

animal);

Indirect: Apă; Aer; Sol; Alimente; Obiecte/mâini contaminate

Contaminare: Cale digestivă:

ingerare apă/alimente

contaminate; Cale respiratorie:

inhalare praf; Cale

transplacentară;

RECEPTIVITATE

generală:

Frecvenţă şi gravitate crescută – grupe populaţionale cu risc – mortalitate crescută (20-30 %):

Nou-născuţi (prematuri, distrofici); Gravide; Persoane imunosupresate (cancer, transplant,

hemodializaţi, SIDA etc); Vârstnici;

Persoane cu rezistenţa normală

Infecţia – evoluţie inaparentă; Manifestări locale nespecifice;

LISTERIOZA Incubaţie: 1-90 zile; Tropism marcat pentru sistem

nervos şi placentă;

Forme clinice severe (grupe populaţionale cu risc):

Meningită/meningo-encefalită;

Septicemie; Granulomatoză

septică; Avort spontan/naştere

prematură;

Forme clinice localizate – persoane aparent sănătoase (20-30 %):

Endocardite; Pleuro-pneumopatii; Gastroenterite; Colecistite, abcese

hepatice; Faringite; Adenite etc

FORME DE MANIFESTARE A PROCESULUI EPIDEMIC

Frecvent - Cazuri sporadice:

2-3 cazuri/ 1 000 000 locuitori – SUA (2004); 4 cazuri/ 1 000 000 locuitori – Canada (2004); 3,3 cazuri/ 1 000 000 locuitori – Europa (2007):

4,8 cazuri/ 1 000 000 locuitori – Franţa; 7,5 cazuri/ 1 000 000 locuitori – Suedia; 0,3 cazuri/ 1 000 000 locuitori – Grecia

Izbucniri epidemice – rare: 1983, SUA: lapte contaminat postpasteurizare; 1985, SUA: brânză mexicană; 1987, Elveţia: brânză cu pastă moale; 1987-1989, Marea Britanie: pate de ficat; 1991, Franţa: limbă de porc în aspic; 1992, Franţa: carne tocată prăjită; 2001, Finlanda: margarină

CARACTERE BACTERIOLOGICE

Morfologie Bacili scurţi, drepţi, extremităţi rotunjite (culturi tinere,

frotiu din produs patologic): Dimensiuni: 0,5-2 μm lungime/0,4-0,8 μm grosime

Culturi vechi: aspect pleomorf: cocobacili; forme filamentoase (6-20 μm)

Dispuşi : izolat, perechi (litera V sau Y), palisadă;

Gram pozitiv (culturi tinere)/Gram-variabil (culturi vechi); Mobili (22-25˚C):

2-4 flageli dispuşi peritrich: preparat proaspăt: mişcare “în piruetă “; Imobili (4˚C, 37˚C);

Nesporulaţi;

Necapsulaţi.

CARACTERE DE CULTIVARE

Listeria spp.

Microorganisme aerobe/facultativ anaerobe; Temperatură: 0-45˚C, optim 20-35˚C;

4˚C – temperatură de multiplicare (metodă de îmbogăţire); Inactivate la 55˚C, 30 minute;

pH: 5,6 – 9,6; optim: 7,2-7,6; rezistă la: > 10 g % NaCl, 40 g % bilă, 0,5 g % telurit

de potasiu Cresc pe medii uzuale (Tryptone Soy Yeast Extract

Agar): colonii 1 -1,5 mm (24-48 ore, 35-37˚C); rotunde, netede, bombate; uşor transparente – picături de rouă; aspect iridiscent – lumină oblică (testul Henry);

CARACTERE DE CULTIVARE

L. monocytogenes: β- hemoliză – zonă îngustă (agar cu 5 %

sânge berbec, cal sau iepure): L. seeligeri :

slab hemolitic; L. ivanovii :

zonă largă de β- hemoliză):

DeteDetectarea ctarea Listeriei Listeriei monocytogenesmonocytogenes alimente alimente ISO ISO 11290 – 1 / 20011290 – 1 / 2005 5

Ziua 1Ziua 1

Ziua 1Ziua 1

Ziua 2, 3Ziua 2, 3

Ziua 4, 5Ziua 4, 5

Ziua 6Ziua 6

Ziua 7Ziua 7

Ziua 2, 3Ziua 2, 3

Ziua 4, 5Ziua 4, 5

Ziua 6Ziua 6

Ziua 7Ziua 7

DeteDetectarea ctarea Listeriei monocytogenesListeriei monocytogenes alimentealimente ISO 11290 – 1 / 200ISO 11290 – 1 / 20055

Ziua 1Ziua 1

Ziua 2, Ziua 2, 33

Ziua 4, Ziua 4, 55

Ziua 6Ziua 6

Ziua 7Ziua 7

25 g sau ml aliment în 225 ml 25 g sau ml aliment în 225 ml bulion demi-Fraserbulion demi-Fraser

30°C, 24 h 30°C, 24 h 2 2

0,1 ml în 10 ml bulion 0,1 ml în 10 ml bulion FraserFraser

35°C, 48 h 35°C, 48 h 2 2

Agar Agar OxfordOxford

35°C, 24-35°C, 24-48 h48 h

Agar Agar PalcamPalcam

35°C, 24-35°C, 24-48 h 48 h

5 colonii caracteristice5 colonii caracteristice

Agar TSYE 35°C, 24 hAgar TSYE 35°C, 24 h

Confirmare biochimicăConfirmare biochimică

CARACTERE DE CULTIVARE

Listeria spp. Medii selective:

Agar Oxford (supliment: Cicloheximidă, Colistin, Cefotetan, Fosfomicină, Acriflavină):

Incubare aerobă, 350 C, 24-48 ore; Colonii 1-2 mm, culoare gri-verzui; Halou negru (hidroliza esculinei). Centru concav (amprentă în mediu).

Agar Palcam (supliment: Ceftazidimă, Polimixină B, Acriflavină): Incubare microaerofilă, 350C, 24 -48 ore; Colonii 1,5-2 mm, culoare gri-verzui; Halou negru (hidroliza esculinei.

Agar Ottaviani-Agosti;

Agar McBride; MOX;

AGAR PALCAM

AGAR OXFORD

PROTOCOLPROTOCOL Confirmare biochimicăConfirmare biochimică

Gen Gen Listeria Listeria ListeriaListeria spp.spp.Specii Specii --

hemolizhemolizăă

TestTest CAMP CAMP D-xilozăD-xiloză L-L-rhamnozărhamnoză

Manitol Manitol

S.aureuS.aureuss

R.equiR.equi

L.monocytogenL.monocytogeneses

++ ++ -- -- ++ --

L. i vanoviiL. i vanovii ++++ -- ++ ++ -- --L. innocuaL. innocua -- -- -- -- ++ --L. welshimeriL. welshimeri -- -- -- ++ ++ --L. seeligeriL. seeligeri -- ++ -- ++ -- --L. grayiL. grayi -- -- -- -- -- ++

Gram +Catalază +Mobilă 22°CAerob-anaerob

facultativRM +RVP +Uree –Indol –

Caractere diferenţiale ale Listeriei spp. comparativ cu alte genuri bacteriene

Caracteristică Caracteristică Listeria spp.Listeria spp. ErysipelotrixErysipelotrix Corynebacterium Corynebacterium spp.spp.

Enterococcus Enterococcus spp.spp.

Mobilitate Mobilitate 25°C25°C

++ -- -- --

CatalazăCatalază ++ -- ++ --EsculinăEsculină ++ -- -- VVHH22SS -- ++ -- --Incluzii Incluzii metacromaticmetacromaticee

-- -- ++ --

CONFIRMARE BIOCHIMICĂ/BIOLOGIE MOLECULARA

Galerii API - Listeria;

Medii cromogene: COMPASS L.mono Agar:

dublă detecţie enzimatică:

X-glucoside (substrat cromogen) - β-glucozidase – colonii bleu-vert (Listeria spp.);

Fosfatidilinositol – fosfolipaza C fosfatidilinositol specifică – halou (Listeria monocytogens)

RT-PCR

TEST CAMP

STRUCTURA ANTIGENICĂ

Serovar Antigen O Antigen H 1/2a I, II, (III) AB

1/2b I, II, (III) ABC

1/2c I, II, (III) BD

3a II, (III), IV AB

3b II, (III), IV, (XII), (XIII) ABC

3c II, (III), IV, (XII), (XIII) BD

4a (III), (V), VII, IX ABC

4ab (III), V, VI, VII, IX, X ABC

4b (III), V, VI ABC

4c (III), V, VII ABC

4d (III), (V), VI, VIII ABC

4e (III), V, VI, (VIII), (IX) ABC

7 (III), XII, XIII ABC

Listeria monocytogenes

13 serotipuri.antigen somatic Oantigen flagelar H

1/2b – frecvent – în America1/2a şi 4b – frecvent în Europa;