7/27/2019 Algoritm virusologic

1/44

VIRUSOLOGIE

Lucrari practice

Prepar. Univ Dr. Aura Temereanca

Asist. Univ dr. Cornel Popescu

Sef Lucrari Univ. dr. Camelia Sultana

7/27/2019 Algoritm virusologic

2/44

ALGORITMUL

DIAGNOSTICULUI

IN VIROZE

7/27/2019 Algoritm virusologic

3/44

Etapele diagnosticului

virusologic

Orientarea diagnosticului (suspiciunea

de viroz)

Recoltarea produsului patologic

Transportul produselor patologice Direciile diagnosticului virusologic

7/27/2019 Algoritm virusologic

4/44

Etapele diagnosticului

virusologic

Orientarea diagnosticului Recoltarea produsului patologic

Transportul produselor patologice

Direciile diagnosticului virusologic

7/27/2019 Algoritm virusologic

5/44

Formular de trimitere pentru diagnostic

virusologicAdresa spitalului/policlinicii/

cabinetului ce trimite produsul

patologic

Medicul caruia i se va

comunica rezultatul (tel, fax, e-

mail)

Nume, prenume pacient Sex, Varsta

Date clinice, suspiciunediagnostic

Data debutuluisimptomatolgiei

Tipul produs patologic Data, ora recoltarii

Tipul tratamentului administrat

in prealabil

Date epidemiologice (contact

cu boli infectioase

transmisibile, vectori, calatoriiin zone endemice pt o anumita

boala, vaccinari)

Analiza solicitata

Semnatura, parafa medicului

7/27/2019 Algoritm virusologic

6/44

V. Varicela - Zoster

http://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/d/dc/Herpes_zoster_neck.pnghttp://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/0/03/Child_with_chickenpox.jpghttp://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/d/dc/Herpes_zoster_neck.png

7/27/2019 Algoritm virusologic

7/44

Etapele diagnosticului

virusologic

Suspiciunea de viroz

Recoltarea produsuluipatologic

Transportul produselor patologice Direciile diagnosticului virusologic

7/27/2019 Algoritm virusologic

8/44

RECOLTAREA PRODUSELOR PATOLOGICE

S T E R I L !!!

7/27/2019 Algoritm virusologic

9/44

Conteinere sterile pentru recoltarea si transportul

produselor patologice

7/27/2019 Algoritm virusologic

10/44

RECOLTAREA PRODUSELOR PATOLOGICE

S T E R I L ! ! !

7/27/2019 Algoritm virusologic

11/44

Recoltarea probelor- locul & timpul potrivit

POLIO (enterovirusuri)

http://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/7/77/Polio_EM_PHIL_1875_lores.PNGhttp://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/5/57/Polio_lores134.jpg

7/27/2019 Algoritm virusologic

12/44

Recoltarea produselor patologice

7/27/2019 Algoritm virusologic

13/44

PRODUSE PATOLOGICE Snge - 3-5 ml prin punctia venoasa aseptica, pe anticoagulant.

Virusur i frecvent izolate: virusuri care disemineaza viremic si agentii etiologici aifebrelor hemoragice.

Materiile fecale - 4-8 g in solutie de Mg SO4 (stabilizeaza infectivitateaenterovirusurilor).

Virusur i frecvent izolate: enterovirusuri, rotavirusuri, calicivirusuri, mai raradenovirusuri enterice.

Secretii nazo faringiene

a)spalatura nazo faringiana se obtine cu ajutorul unor tampoane cu

coada (sterile) introduse in cornetul nazal inferior.b) aspiratul nazofaringian se obtinefolosind un speculum nazal prin

administrarea a 3 ml ser fiziologic in nari cu o seringa atasata la un tub deplastic.

c) lavaj traheobronsic se obtine prin bronhoscopie in conditii specialede catre personal calificat

Virusur i frecvent izolate: virusurile gripale A si B, virusurile paragripale,adenovirusuri, rhinovirusuri, coronavirusuri, virusul respirator sincitial,v.rujeolos, v. rubeolos, v. urlian.

Lichid cefalorahidian (LCR) - 5-6 ml prin punctie rahidiana, inainte deinceperea tratamentului.

Virusur i frecvent izolate: virusul rabic, unele arbovirusuri.

7/27/2019 Algoritm virusologic

14/44

PRODUSE PATOLOGICE Saliva. Se recolteaza saliva de langa ductul Stenon cu tampon steril.

Frecventeste limitata la diagnosticul infectiei rabice.

Lichid vezicular- Colectarea lichidului din vezicule, bule, pustule se facedupa dezinfectia prealabila a regiunii cutanate sau mucoase. Se perforeazavezicula cu un ac atasat la o seringa de tuberculina sau cu ajutorul uneipipete.

Virusur i frecvent izolate: HSV I, HSV II si VZV.

Urina -100 ml - orice specimen urinar obtinut prin abstinenta de la mictiune

timp de 2 ore este adecvat pentru diagnosticul virusologic.Virusur i frecvent izolate. V. citomegalic, v. rujeolos.

Tampoane vaginale, lavaj cervico-vaginal, tampon uretral de la nivelulcolului uterin si uretrei (atat la femeie cat si la barbat); cu tampoane sterile,respectiv periuta citologica (pentru uretra masculina), fara toaleta prealabilaa regiunii.

Virusur i frecvent izolate: virusuri herpetice si papilomavirusuri; diagnostic

BTS, uretritelor, leziunilor veziculare si hiperplazice genitale. Biopsia tisulara. Fragmente de organ recoltate n ctiva ml de solutie

salina + ser de vitel 10% + antibiotice n concentratiile folosite n culturile decelule.

7/27/2019 Algoritm virusologic

15/44

Etapele diagnosticului

virusologic

Suspiciunea de viroz

Recoltarea produsului patologic

Transportul produselor

patologice Direciile diagnosticului virusologic

7/27/2019 Algoritm virusologic

16/44

Transportul probelor recoltate

Rapid

La rece

Sigur ambalare riguros corecta

etichetarea cu semn biorisc

documentatie in legatura cuagentul biologic transportat

7/27/2019 Algoritm virusologic

17/44

Etapele diagnosticului

virusologic

Suspiciunea de viroz

Recoltarea produsului patologic

Transportul produselor patologice

Direciile diagnosticuluivirusologic

7/27/2019 Algoritm virusologic

18/44

DIRECIILE DIAGNOSTICULUI

VIRUSOLOGIC1. Izolarea viral

2. Demonstrarea prezenei

virusului / componentelor sale

3. Diagnosticul serologic

7/27/2019 Algoritm virusologic

19/44

Izolarea

virusurilor

7/27/2019 Algoritm virusologic

20/44

Izolarea virusurilor

3 sisteme de izo larefolosite n virusologie

Culturi de celule

Ou de gin embrionat

Animalul de laborator

7/27/2019 Algoritm virusologic

21/44

Izolarea virusurilor

in culturi de celule

7/27/2019 Algoritm virusologic

22/44

HEK 293 HeLa BSC-40

Infectate cu v. variolic

Neinfectate

Izolarea pe culturi de celule

= EFECTE CITOPATICE

7/27/2019 Algoritm virusologic

23/44

RABIE

Sus- neuron fara

incluzii NegriJos neuron cu incluzii

Negri (col HE)

7/27/2019 Algoritm virusologic

24/44

Izolarea virala

prininoculare la

animalul delaborator

7/27/2019 Algoritm virusologic

25/44

RABIEmodificari

patognomonice in SNC

Infiltrat mononuclear perivascular-sus

Focare de infiltratie limfocitare in

celulele gliale -jos

7/27/2019 Algoritm virusologic

26/44

Pocks-uri pe Membrana Chorio-alantoindiana OGE - v. variolic

Izolarea virala prin inoculare pe OGE

7/27/2019 Algoritm virusologic

27/44

DIRECIILE DIAGNOSTICULUI

VIRUSOLOGIC1. Izolarea viral

2. Demonstrarea prezeneivirusului / componentelor sale

3. Diagnosticul serologic

7/27/2019 Algoritm virusologic

28/44

Detectia directa

a particulei

virale

7/27/2019 Algoritm virusologic

29/44

Microscopia electronica

Coloratia negativa

acetat de uranil

acid fosfotungstic

Metode care cresc sensibilitatea

(106-108 particule/ml)

Metode de concentrare: ultracentrifugare

difuzia in agar

centrifugare directa pe grila de ME

http://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/6/6e/Elektronenmikroskop.jpg

7/27/2019 Algoritm virusologic

30/44

Microscopie electronica

Coloratie negativa

vaccinia

7/27/2019 Algoritm virusologic

31/44

Microscopie electronica

Coloratie negativa

variola

7/27/2019 Algoritm virusologic

32/44

Electron micrographs of hepatitis C virus purified from cell culture.

Scale bar is 50 nanometers.

7/27/2019 Algoritm virusologic

33/44

Detectia directa acomponentelor

viraleAcid nucleic

Antigene virale

7/27/2019 Algoritm virusologic

34/44

Detectia directa a acidului

nucleic viral - PCR

7/27/2019 Algoritm virusologic

35/44

Thermocycler

7/27/2019 Algoritm virusologic

36/44

Detectia directa a antigenelor

viraleELISA (test imuno-enzimatic)

7/27/2019 Algoritm virusologic

37/44

sandwich ELISA. (1) Plate is coated with a capture antibody; (2) sample is added,

and any antigen present binds to capture antibody; (3) detecting antibody is added,

and binds to antigen; (4) enzyme-linked secondary antibody is added, and binds to

detecting antibody; (5) substrate is added, and is converted by enzyme to

detectable form.

http://en.wikipedia.org/wiki/ELISAhttp://en.wikipedia.org/wiki/ELISA

7/27/2019 Algoritm virusologic

38/44

Detectia directa a antigenelor virale

reactia de imunofluorescenta (IF)(test rapid de detectie a Ag)

7/27/2019 Algoritm virusologic

39/44

Identificarea virusurilor prin neutralizarea

efectului citopatogen

Reactia de Seroneutralizare

- Identificarea Enterovirusurilor

RSN

7/27/2019 Algoritm virusologic

40/44

Identificarea virusurilor prin inhibarea efectului viral

Matrice

Nucleocapsida helicoidala

ARNss

HA - hemaglutinina

transcriptaza

anvelopa

NA - neuraminidaza

Reactia de Hemaglutinoinhibare

-Identificarea virusurilor gripale

RHAI

7/27/2019 Algoritm virusologic

41/44

DIRECIILE DIAGNOSTICULUI

VIRUSOLOGIC1. Izolarea viral

2. Demonstrarea prezenei

virusului / componentelor sale

3. Diagnosticul serologic

7/27/2019 Algoritm virusologic

42/44

Raspuns

imun

primar

Raspuns

imun

secundar

Diagnosticul serologic in infectiile virale

7/27/2019 Algoritm virusologic

43/44

Diagnosticul serologic pe prob unic de ser- anticorpi antivirali de

tip IgM (rspunsul imun primar) - ELISA decaptur

pe probe pereche de ser- proba I - la debut- proba II - la 2-3 sptmni

ELISA tehnica indirect sau de competiie

seroconversia In proba I nu exist anticorpi In proba II apar anticorpi specifici virusului de detectat

creterea semnificativ a titrului de anticorpi ntrecele 2 probe (de minim 4 ori)

7/27/2019 Algoritm virusologic

44/44

Etapele diagnosticului virusologic

Suspiciunea de viroz

Recoltarea produsului patologic

Transportul produselor patologice

Direciile diagnosticului virusologic

Izolarea viral

Dem. virusului/

componente

Diagnosticul

serologic