15/10/2014

1

Imunoasai

I. Dasar pemeriksaan ImunoasaiII. Aplikasi imunoasai pada penyakit

infeksi

9 & 16 Oktober 2014Prof Dr Aryati, dr, MS, SpPK(K)

1

PENDAHULUANImunologi : ilmu yang mempelajari reaksi tubuh terhadap masuknya antigen (Ag) dan efek dari antibodi (Ab) yang terbentuk terhadap Ag tersebut.

Perkembangan Imunologi cara untuk mengukur derajat imunitas/ kadar Ab dalam tubuh serologi.

Serologi : ilmu yang mempelajari reaksi Ag & Ab in vitro → deteksi Ab atau Ag --imunoasai 2

15/10/2014

2

Immunoassay: Antibodies, Antigens and Analytes Defined

• An antibody is a protein that is produced by the body in response to an “invading” (foreign) substance.

• Antibodies are produced as part of the body’s immune response to protect itself.

An antigen

• An antigen is the substance that the body is trying to “fight off” (eliminate or reduce) by mounting an immune response.

• Some immunoassays test for antigens directly, rather than looking for the antibodies.

15/10/2014

3

An analyte

• An analyte is anything measured by a laboratory test. In immunoassay testing, the analyte may be either an antibody, or an antigen.

Immunoassays

• Immunoassays utilize one or more select antibodies to detect analytes of interest. The analytes being measured may be those

that are naturally present in the body (such as a thyroid hormone), those that the body

produces but are not typically present (such as a cancer antigen), or those that

do not naturally occur in the body (such as an abused drug).

15/10/2014

4

Antibodies

• Antibodies possess higha) specificity

and b) affinity

for a specific antigen. It is the specific binding of an antibody to an antigen that allows the detection of analytes by a variety of immunoassay methods.

Structure of Antibodies

• Antibodies (Ab) are a type of protein called immunoglobulins.

• The most common one is immunoglobulin G (IgG).

• IgG is a protein composed of two main structural and functional regions

15/10/2014

5

Preparation of Polyclonal and Monoclonal Antibodies

• Antibody reagents are developed from either polyclonal or monoclonal antibodies.

• Polyclonal antiserum (serum from blood containing the desired antibodies) is generated in animals, most commonly sheep, rabbits, or goats.

15/10/2014

6

Cont’ed

• The animals produce the antiserum - just as a human would - as a defense mechanism when exposed to an antigen.

• Antiserum contains a mixture of antibodies, each of which may bind to different antigenbinding sites, or epitopes.

Producing antiserum

• The process of making an antiserum begins by injecting a solution that contains the antigen of interest into ananimal. This antigen of interest is sometimes called an immunogen, because it can stimulate an immuneresponse. Over time, and in some cases with multiple injections, the immune system of the animal produces antibodies to the antigen that was injected. Blood is collected from the animal, and serum is isolated from the blood. This serum is usually rich in antibodiesthat recognize the antigen, and is called the antiserum.

15/10/2014

7

Polyclonal antibodies

• Antiserum usually contains a mixture of antibodies that recognize and bind to the same antigen, but they may attach to different epitopes(see Figure 1-2). An antigen that has multiple sites for antibodies to bind is called a multivalent antigen. These types of antibodies, present as a diverse mixture, are called polyclonal antibodies.

15/10/2014

8

Monoclonal antibodies

• Monoclonal antibodies differ from polyclonal antibodies in that they are highly specific for a single epitope on a multivalent antigen (see Figure 1-3). They are produced from a single cell line using hybridoma technology and mouse myeloma cell lines.

• Hybridomas are antibody-producing tumor cells that produce many copies of the same antibody and grow easily in laboratory cell culture.

15/10/2014

9

1. Konsep Dasar SerologiReaksi Ag dan Ab terdiri dari beberapa tahap :

a. Tahap awal : Ag + Ab Ag - Abb. Tahap disosiasi : Ag - Ab Ag + Abc. Tahap keseimbangan (equilibrium) : Ag +

Ab Ag-Ab

Afinitas Ab terhadap Ag ukuran kekuatan ikatan Ag-Ab.Makin besar afinitas, makin banyak ikatan Ag-Ab pada saat equilibrium.

17

Berbagai faktor yang mempengaruhi ikatan Ag-Ab

a. Ikatan hidrogenb. Daya elektrostatikc. Ikatan van de Waalsd. Ikatan hidrofobik

II. Komponen terpenting dalam serologi : Antibodi

18

15/10/2014

10

a. Spesifisitas AbIkatan Ag-Ab adalah spesifik seperti kunci-anak kunci.Reaksi silang dapat terjadi dengan struktur molekul Ag lain yang mirip dengan Ag pasangannya, tergantung :1. profil spesifisitas Ab-nya 2. kemurnian Ag-nya.

Ab yang amat spesifik yaitu Ab dengan binding sites yang hanya dapat mengikat Ag dengan struktur molekul yang unik saja.

19

Gambar 2. Kompleks Ag yang memiliki satu simple antigenic determinant yang sama dan macam-macam Ab yang mungkin

terbentuk.

15/10/2014

11

b. Ukuran kuantitas AbAda beberapa cara tentukan konsentrasi Ab ([Ab]) dalam serum :- Kualitatif : positif/negatif menunjukkan

ada/ tidaknya bahan- Semi kuantitatif : ditentukan dengan

pengenceran serum secara progresif titer- Kuantitatif : ditentukan dengan

menggunakan beberapa sera baku untuk membuat kurva baku.

Akurasi dicek dengan menggunakan serum kontrol.Hasil pemeriksaan (sampel) diinterpolasi ke dalam kurva baku. 21

Hasil ELISA kuantitatif kurva baku Perlu serum baku larutan standard konsentrasi sudah

diketahuihasilnya diplot pada kertas semilog, dapat diplot sebagai unit atau kesatuan berat.

mismis :: C1 = 10 mg/dlC1 = 10 mg/dl C4 = 40 mg/dlC4 = 40 mg/dlC2 = 20 mg/dlC2 = 20 mg/dl C5 = 50 mg/dlC5 = 50 mg/dlC3 = 30 mg/dlC3 = 30 mg/dl C6 = 60 mg/dlC6 = 60 mg/dl

LarutanLarutan x = …. mg/dlx = …. mg/dl

AbsAbs= OD= OD

ConcConcmg/dlmg/dl

A6A6

A5A5

A4A4

A3A3

A2A2

00C1C1 C2C2 C3C3 C4C4 C5C5 C6C6

xx

xx

Gambar 3 : Kurva baku uji ELISAGambar 3 : Kurva baku uji ELISA

15/10/2014

12

Berbagai faktor dasar yg mempengaruhi tes serologi :

1. Sifat AbAb diberi nama yang sesuai dengan cara penentuan yang paling sensitif, misal : aglutinin, presipitin, dll.

2. Elektrolit dan pH3. Waktu dan suhu

Reaksi Ag-Ab terjadi dalam 2 tingkat :a. ikatan spesifik Ab dengan Ag/hapten

yang sesuaib. terjadi reaksi yang dapat dilihat

(presipitasi, aglutinasi, dll)4. Mekanisme daya tahan non-spesifik.

23

Berbagai bahan yang normal/abnormal terdapat dalam sekret/cairan tubuh :

a. produk samping flora normal yang masuk cairan tubuh

b. bahan mikrobisidal normal dalam cairan tubuh/sekret

c. bahan mikrobisidal abnormal yang dihasilkan jaringan rusak karena infeksi (lysozim, fagositin, dll)

d. Interferon : merupakan produk dari limfosit T pada infeksi virus.

5. Rasio Ag-Ab24

15/10/2014

13

Karakteristik Uji Serologi

Faktor yang mempengaruhi aseptabilitas tes :a. validitas tes, meliputi unsur :

validitas interna (laboratoris) validitas eksterna (klinis)

b. kepraktisan tesc. biaya pemeriksaan

25

VALIDITAS INTERNA (laboratoris):1. detektabilitas/sensitivitas analitik :

kemampuan tes untuk mendeteksi suatu bahan.

2. akurasi : kemampuan tes untuk memberikan hasil yang tepat. Akurasi menyangkut faktor spesifisitas dan presisi. Akurasi yang tinggi menunjukkan hasil yang tepat tanpa bias.

3. reprodusibilitas / presisi : pengulangan tes dlm satu seri pemeriksaan (within-run), antar seri pemeriksaan (between-run), antar analis.

26

15/10/2014

14

VALIDITAS EKSTERNA :1. Sensitivitas diagnostik 2. Spesifitas diagnostik3. Nilai ramal positif 4. Nilai ramal negatif5. Efisiensi diagnostik6. Likelihood ratio

27

Contoh : pemeriksaan ICT Malaria untuk diagnosis penyakit Malaria

Dari 100 penderita dengan diagnosis pasti Malaria ---- Positif 80 ( TP )Negatif 20 ( FN )

Dari 100 orang yang pasti bukan Malaria ------------ Positif 5 orang ( FP ) (dengue,salmonella dll) Negatif 95 orang ( TN )

TP 80Sensitivitas Diagnostik = ------------ X 100% = ----------- X 100% = 80%

TP + FN 80 + 20TN 95

Spesifisitas Diagnostik = ----------- X 100% = ------------- X 100% = 95%TN + FP 95 + 5

TP 80Nilai Ramal Positif = ------------ X 100% = ------------ X 100% = 94%

TP + FP 80 + 5TN 95

Nilai Ramal Negatif = ------------ X 100% = ------------ X 100% = 82,6% TN + FN 95 + 20

TP + TN 80 + 95Efisiensi = --------------------------- 100% = ----------------- X 100% = 87,5%

TP + FP + TN + FN 80+5+95+20

Keterangan :TP = True positiveFP = False positiveTN = True negativeFN = False negative

15/10/2014

15

Bahan Pemeriksaan untuk Tes SerologiMacam Bahan : serum, LCS, plasma, urine, cairan tubuh lain.Pengambilan bahan darah : vena tes makroUjung jari tes mikroPerhatian : - jangan terjadi hemolisis, bila perlu inaktivasi komplemen 56oC, 30 menit.

Ag untuk tes serologi sebaiknya dibuat sendiri dari strain lokal, lebih baik menggunakan multistrain.

29

Prosedur serodiagnostik banyak dipakai untuk pemeriksaan melibatkan Ag-Ab, a.l:

1. Syphilis : Serological tests for syphilis (STS) : tes skrining ( non-treponemal mis: VDRL) dan tes konfirmasi (treponemal mis: TPHA)

2. C-Reactive protein (CRP)3. Rheumatoid arthritis test (RA)5. Pregnancy test6. Tes narkoba7. Berbagai penyakit infeksi lain: Tifoid - uji

Widal, DBD, penyakit tuberkulosis, malaria dll.

30

15/10/2014

16

Kadar Bahan

Tinggi(mg/ml, g/ml)

Hasil reaksi

Ag-ab tampak

Presipitasi(sRID, IEP, CIEP, Rocket EP)

Aglutinasi Fiksasi komplemen

31

RendahRendah((ngng/ml, p/ml, pg/ml)g/ml)

HasilHasil reaksireaksi

AgAg--abab taktak tampaktampak

PerluPerlu faktorfaktor penguatpenguat (label)(label)

1941: IFA 1941: IFA -- fluoresensfluoresens1960: RIA 1960: RIA --radioisotopradioisotop19711971 : ELISA : ELISA –– enzimenzim1980:ICT(1980:ICT(imkromatografiimkromatografi),),PCR PCR →→ amplifikasiamplifikasi DNADNA

Uji Presipitasi

• Digunakan antigen larut• Aplikasi klinis :1. pemeriksaan VDRL - deteksi antibodi

non-treponemal pada Syphilis2. penentuan CRP3. Pemeriksaan RID(Radial

Immunodiffusion) untuk penentuan IgM,IgG, IgA dsb.

32

15/10/2014

17

33

15/10/2014

18

Uji Aglutinasi Uji aglutinasi menggunakan antigen tidak

larut. Antigen yang tidak larut, harus diikatkan

terlebih dahulu dengan partikel, dapatdigunakan partikel lateks atau sel darahmerah.

Aplikasi klinis :1. pemeriksaan golongan darah direk (slide)

→ deteksi antigen di permukaan sel darahmerah

2. uji Widal – pada demam tifoid3. Plano test ( tes kehamilan )

35

Contoh uji aglutinasi : pemeriksaangolongan darah direk ( cell grouping )

• Anti A, anti B, anti AB (telah diketahui ) diteteskan pada gelas obyek.

• Sel darah merah (konsentrasi 30-40%) → dideteksi Ag

36

15/10/2014

19

37

Pemantapan mutu – harus ada kontrol :A. Kontrol negatif :

Mengandung Ag & pelarut saja.Bila aglutinasi positif, kemungkinan :a. Pelarut/tabung terkontaminasib. Ag mengalami kerusakan

B. Kontrol positif :Mengandung Ag + pelarut + antisera positifBila aglutinasi negatif, kemungkinan :a. Serum kontrol rusakb. Ag rusakc. Kontaminasi dengan penghambat 38

15/10/2014

20

Pemeriksaan imunoasai dg label

• 1. IFA (Immuno Fluoresense Assay) menggunakan bahan fluoresen (yang dapat berfluoresensi ), antara lain FITC (fluorescein isothiocyanate) – warna hijau, Rhodamin isothiocyanate – warna jingga, acridin orange – warna jingga.

• 2. RIA (Radio Immuno Assay) menggunakan radioisotop.

• 3. ELISA (Enzyme link Immunosorbent Assay) menggunakan enzim.

• 4. ICT (Immunochromatografi Test) –gabungan Imunoasai dengan kromatografi.

39

Uji ELISA

• Prinsip : reaksi Ag dan Ab, dimana setelah ditambah konjugat (Ag atau Ab yang dilabel enzim) dan substrat, akan terbentuk warna yang dapat diukur.

40

15/10/2014

21

3 tahap uji Elisa• 1. Pelapisan dengan Ag atau Ab• 2. penambahan bahan yang akan

ditentukan mis serum, plasma, liquor cerebrospinalis (lcs), saliva atau cairan tubuh yang lain

• 3. penambahan detektor untuk deteksi ikatan Ag-Ab yang terjadia. penambahan konjugat (Ag atau Ab

yg berlabel enzim)b. penambahan substrat

41

Berbagai macam uji Elisa

1. Elisa Kompetitif2. Double antibody sandwich3. Indirect Elisa4. Ab captured Elisa (IgM captured Elisa

atau IgG captured Elisa)

42

15/10/2014

22

43

44

15/10/2014

23

45

46

15/10/2014

24

Indirect ELISA

47

48

15/10/2014

25

49

50

15/10/2014

26

51

52

15/10/2014

27

Hasil ELISA kuantitatif kurva baku Perlu serum baku larutan standard konsentrasi sudah

diketahuihasilnya diplot pada kertas semilog, dapat diplot sebagai unit atau kesatuan berat.

mismis :: C1 = 10 mg/dlC1 = 10 mg/dl C4 = 40 mg/dlC4 = 40 mg/dlC2 = 20 mg/dlC2 = 20 mg/dl C5 = 50 mg/dlC5 = 50 mg/dlC3 = 30 mg/dlC3 = 30 mg/dl C6 = 60 mg/dlC6 = 60 mg/dl

LarutanLarutan x = …. mg/dlx = …. mg/dl

AbsAbs= OD= OD

ConcConcmg/dlmg/dl

A6A6

A5A5

A4A4

A3A3

A2A2

00C1C1 C2C2 C3C3 C4C4 C5C5 C6C6

xx

xx

Gambar 3 : Kurva baku uji ELISAGambar 3 : Kurva baku uji ELISA

Uji Imunokromatografi (ICT)/RDT Dengue

• Serum tunggal• Dapat deteksi IgM & IgG anti-dengue

sekaligus dalam 1 strip• Waktu singkat : 15-30 menit• Prinsip : uji Captured ELISA• Fase padat : kertas nitroselulose• ICT untuk IgG anti-dengue infeksi

sekunder sesuai HI ≥ 1/2560• Merk lain ada yang IgG anti-dengue infeksi

sekunder sesuai HI ≥ 1/128054

15/10/2014

28

55

Prinsip Reaksi Metode Captured Immunochromatographic Dengue Rapid Test

56

ICT DENGUE

15/10/2014

29

Dengue Cassette

2 Well designSerum separation device (allowing

whole blood to be used also)2 step processColloidal gold visual detection15 minute assayDetects IgM & high levels of IgG

(same as strip test)

57

58

ICT MALARIA

15/10/2014

30

59

60

15/10/2014

31

61

PCR ( POLYMERASE CHAIN REACTION)Tujuan : amplifikasi (memperbanyak) DNAPrinsip terdapat 3 tahap di bawah ini :1. Denaturasi –DNA dinaturasi menjadi untai

tunggal (single strand) pada suhu tinggi (94ºC).2. Annealing dari primers – hibrididasi dari

oligonukleotida ( primer) terhadap targetnya, pada temperatur rendah . Efisiensi uji PCR tergantung kadar Mg++ dan komposisi bufer.

3. Extension – primer diperpanjang pada suhu 72ºC oleh enzim thermo-stable DNA polymerase dari T. aquaticus (Taq polymerase)

PCR menggunakan alat Thermal cycler.

62

15/10/2014

32

63

Denaturasi

Annealprimers

Extendprimers

95ºC

50-60ºC

72ºC

3 tahap dalam PCR

Dibutuhkan :Primers , dNTP, Taq polymerase, Mg++

64

3 tahap PCR

Siklus 1denaturasi

Anneal primers

Extend primers

15/10/2014

33

65

Siklus 2

66

Siklus 2

Siklus 3

Kekuatan amplifikasi PCR :1 pg to 1 mg

Log210000000=20

Pd umumnya sekitar 30 siklus

15/10/2014

34

67

Shelhamer, J. H. et. al. Ann Intern Med 1996;124:585-599

Skema Polymerase Chain Reaction (PCR)

68

Gambar 5.9 Hasil PCR Dengue dari berbagai sampel pasien DBD

Lane 1 : Marker . Lane 2 : Kontrol positif DEN-1 (482 bp), DEN-2 (119 bp),

DEN-3 (290bp), DEN-4 (392bp)Lane 3 : Kontrol negarifLane 4-17 sampel yaitu DEN-2 untuk lane 4,9,10,11,14,17,DEN-3

untuk lane 13, 16, DEN-1 untuk lane 6

D1D4D3D2

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17

Aryati, 2006

15/10/2014

35

Serologic Test for Syphilis(STS)

STS penting oleh karena :1. perjalanan penyakit lama2. belum berhasil membenihkan

Treponema pallida3. pemeriksaan mikroskopis (cara

langsung) memberi kesulitan antara lain bahan harus diambil dari lesi yang manifes dalam waktu singkat (ulcus durum, condyloma lata, roseola) negatif semu.

69

ImunopatogenesisInfeksi dengan T.pallida 2 jenis Ab :1. Ab non-Treponemal / reagin

baru terbentuk setelah menyebar ke kelenjar limfe regional & sebabkan kerusakan jaringan.Dapat menyebabkan reaksi silang dengan Ag lipoid dari otot jantung. Setelah terapi Ab non-treponemal sehingga dapat untuk evaluasi pengobatan & melihat aktivitas penyakit.

70

15/10/2014

36

2. Ab Treponemal Digunakan untuk memastikan

penyakit (sedang, pernah) Tidak dapat dipakai untuk mengikuti

hasil pengobatan oleh karena tetap positif setelah pengobatan yang berhasil.

71

Berbagai macam Uji STS :1. VDRL uji presipitasi

(Venerial Disease Research Lab)2. RPR Uji flokulasi

(Rapid Plasma Reagin)3. CWR Uji fiksasi komplemen

(Cardiolipin Wassermann)

1, 2, 3 termasuk uji untuk deteksi Ab non-Treponemal.

72

15/10/2014

37

4. TPI(Treponema Pallidum Immobilization)

5. TPHA Uji hemaglutinasi pasif(Treponema Pallidum Hemaglutination)

6. FTA-Abs Uji imunofluoresen tak langsung(Fluorescence Treponemal Antibody-Ab sorption)

7. Uji ELISA uji Indirect ELISA

4, 5, 6, 7 termasuk uji untuk deteksi Ab Treponemal

(untuk diagnostik) Yang baik adalah kombinasi tes Non-Treponemal

+ Treponemal73

StadiumPenyakit

TesNon-

Treponemal

TesTreponemal

VDRL

CWR TPI FTA-Abs

ELISA

Lues I 76% 65% 53% 86% 100%

Lues II 100%

100% 98% 100% 100%

Laten dini 95% 95% 94% 99% 100%

Laten lanjut

72% 65% 89% 96% 100%

Lanjut/Late 70% 60% 93% 92% 98-100%74

15/10/2014

38

C-REACTIVE PROTEIN ( = CRP ) Merupakan salah satu protein fase akut yang

terdapat dalam serum normal walaupun dalam jumlah yang amat kecil.Bila terjadi reaksi radang atau kerusakan jaringan (nekrosis), baik oleh karena infeksimaupun non-infeksi, kadar CRP serum dapat meningkat sampai 1000 kali.

Indikasi pemeriksaan CRP1. Membantu diagnosis proses keradangan dan

nekrosis jaringan2. Mengikuti hasil pengobatan dari proses radang

akut 75

Sintesis CRP terutama oleh hepatosit di hati. Setelah terjadinya reaksi radang akut/ kerusakan jaringan, sintesis dan sekresi CRP meningkat dengan tajam dan hanya dalam waktu 12-48 jam telah mencapai nilai puncaknya.Kadar CRP akan menurun tajam bila proses keradangan/ kerusakan jaringan telah mereda, dimana 24-48 jam kemudian telah dicapai nilai normalnya kembali.

76

15/10/2014

39

PrePre--OPOP

1,01,0

GambarGambar : : PerubahanPerubahan kadarkadar CRP serum CRP serum setelahsetelah operasioperasi tanpatanpa penyulitpenyulit

3,03,0

5,05,0

00 2424 4848 7272 9696

CRP (mg%)CRP (mg%)

CRP mempunyai kelebihan dibandingkan LED, kenaikan suhu tubuh atau protein fase akut yang lain (1-anti-trypsin, 1-acid glukoprotein, haptoglobin). CRP meningkat dalam waktu 6 jam setelah proses dimulai, mencapai puncak setelah 48-72 jam, dipertahankan selama masih ada proses radang atau nekrosis jaringan dan menurun dengan curam segera setelah proses radang atau nekrosis menghilang.Keuntungan penentuan CRP, tidak dipengaruhi oleh obat-obatan kortikosteroid atau obat anti radang lain.

78

15/10/2014

40

Cara Pemeriksaan :1. Cara Presipitasi Tabung Kapiler2. Cara Aglutinasi Lateks3. Uji Imunodifusi Radial (RID)

Ad 1. digoyang-goyang secara ringan untuk mencampur serum-anti serum+ serum

penderita3 cm

Botol berisisera anti-CRPtabung

kapiler

Interpretasi Hasil : (kualitatif) 1 mm = +2 mm = + +

Letakkan tegak pada blok plastisin

Inkubasi 37oC 2 jam dibiarkan semalam suhu ruangan ukur

tinggi presipitat dalam mm

Ad 2. Cara Aglutinasi Lateks

1.1. Serum Serum penderitapenderita2.2. KontrolKontrol positifpositif3.3. KontrolKontrol negatifnegatif1 2 3

1 1 tetestetes serumaseruma + 1 + 1 tetestetes reagensiareagensia LatexLatex--CRPCRP((partikelpartikel Latex yang Latex yang disalutdisalut antibodiantibodi anti CRP)anti CRP)

didi atasatas gelasgelas obyekobyek, , dengandengan batangbatang pengadukpengaduk, , diadukdiaduk gelasgelasobyekobyek digoyangdigoyang dengandengan rotator/ rotator/ tangantangan hasilnyahasilnya dibacadibacasetelahsetelah 33--5 5 menitmenit..

InterpretasiInterpretasi HasilHasil ::+ = + = aglutinasiaglutinasi kadarkadar CRP > 0,5 mg/100 ml ( = 5 mg/L )CRP > 0,5 mg/100 ml ( = 5 mg/L )BilaBila negatifnegatif ulangiulangi dengandengan pengenceranpengenceran 1 : 10 1 : 10 -- = normal= normal

15/10/2014

41

Ad 3. Uji Imunodifusi Radial (RID) (tes presipitasi)• Serum baku dan serum penderita dimasukkan ke

dalam berbagai sumur dari lempengan (plate) RID-CRP, setelah waktu inkubasi (48 jam), diukurdiameter dari cincin presipitasi.Kemudian buat kurva baku, dan tentukan kadar CRP serum penderita dengan kurva baku tersebut.

Agar/gel mengandung anti CRP

Ad.4. Imunoasai berlabel

82

15/10/2014

42

15 October 2014 Axis-Shield PoC AS 83

Cross section of the test device

Test membrane Top part

Bottom partNitrocellulose pad

15 October 2014 Axis-Shield PoC AS 84

The NycoCard® CRP Single Test System

• CRP Single Test Kit• READER II

• Test Tube Rack• Mini-Pet Stand

15/10/2014

43

15 October 2014 Axis-Shield PoC AS 85

CRP in healthy subjects

• All ages: < 6 mg/L (mean below 1 mg/L)

Newborns: < 3.2 mg/L (mean 0.32 mg/L)

Children: < 2.2 mg/L (mean 0.16 mg/L)

Men: < 5.2 mg/L (mean 0.55 mg/L)

Women: < 4.6 mg/L (mean 0.42 mg/L)

• Smokers: median 11.5 mg/L

• Pregnancy: < 20 mg/L

How to evaluate the CRP result< 10 mg/L • Normal concentration

10 - 25 mg/L

• Increased but diagnostically of less importance• During antibiotic treatment CRP should be reduced below this level• Does not exclude bacterial infection if the disease has lasted short• Take a new sample some hours later

25 - 50 mg/L

• There is “something”. Bacterial or viral?

50 - 100 mg/L

• Common in bacterial infections• Seldom seen with viral infections

> 100 mg/L

• Fairly common in bacterial infections

86

15/10/2014

44

Penentuan Faktor Rematoid/FR(Tes Rose Waaler)

FR = auto Ab (IgM, IgG, IgA) terhadap IgG yang terbentuk pada stadia agak lanjut penyakit Rhematoid Arthritis (RA)

IgM-antiIgG, IgG-antiIgG, IgA antiIgG

Tes Rose Waaler( cara aglutinasi lateks ) hanya menentukan : IgM anti IgG

87

Proses lokal :FR hanya bereaksi dengan IgG abnormal di sendi(yang di sirkulasi IgG normal) kalau IgG abnormal >> baru masuk sirkulasi

Nilai klinis : tidak terlalu baik• Positif pada 70-80% penderita RA (6-12 bulan)• Positif pada penyakit lain : SLE (30-50%), scleroderma

(30%), Sjorgen syndrome (75%), endocarditis lenta, beberapa penyakit virus (hepatitis, Herpes Zoster dll)

• Orang normal 4-6% positif.88

15/10/2014

45

+ +Ag Larut

Partikel

Partikel disalut AgAb dalam serum

AglutinasiGambar Aglutinasi pasif89

UJI ROSE-WAALER

SERUM * Waterbath 50°C, ½jam

Encerkan secara serial ( 1/32 – 1/1792 )

Tambahkan susp SDM ( 5 % ) yg sensitized

INKUBASI 4°C 18 jam

Baca adanya aglutinasi (HN 1:32)

* Untuk hilangkan aglutinin nonspesifik (Ab heterofil), serum & SDM domba yang dipadatkan (4 : 1), inkubasi 40 menit, 2 kali.

90

15/10/2014

46

Uji RoseUji Rose--Waaler. Untuk memastikan hasil positif atau Waaler. Untuk memastikan hasil positif atau negatifnegatif 91

92

15/10/2014

47

93

94

15/10/2014

48

95

96