MEDII DE CULTURA

• suporturi materiale si nutritive care servesc la cultivarea bacteriilor

• amestecuri de substante care asigura cultivarea microorganismelor

Scopuri

• Izolarea in cultura pura

• Identificare

• Diagnostic, tratament

• Producerea industriala a unor substante (prepararea vaccinurilor)

• Controlul sterilitatii sau incarcarcaturii microbiene a unor elemente de mediu (apa, alimente)

Conditii

1. Surse de C, N, apa, substante minerale, energie, substante nutritive, factori de crestere

2. pH optim, temperatura optima

3. Aero/anaerobioza

4. Sterile

Ingrediente

• Peptona

• Extracte sau infuzii de carne

• Agenti de solidificare: agar

• Indicatori de pH: turnesol, rosu fenol

• Agenti selectivi

• Zaharuri

Prepararea mediilor de cultura

• Amestecul ingredientilor: proportie, ordinea indicata

• Determinarea si ajustarea pH-ului

• Repartizarea in recipiente adecvate

• Sterilizarea

• Controlul sterilizarii si al calitatii mediului

Clasificarea mediilor de cultura

Dupa consistenta: lichide solide

semisolide

Dupa provenienta: naturale

sintetice

Dupa compozitie si scop: simple

complexe

speciale

Clasificarea mediilor de cultura

• Medii complexe– de utilitate generala: - uzuale

- cu proteine native

– Medii speciale• selective

• de imbogatire

• anaerobi

• teste biochimice

Medii simple: Apa peptonata

Bulion simplu

Geloza simpla

Medii complexe: bulion sange

geloza sange

geloza chocolatie

Medii lichide- bulion simplu

• Categoria: Mediu de bază

• Componente: macerat de carne + peptonă + NaCl 0,5%

• Utilizare: pentru germeni nepretenţioşi

Geloza simpla

• Categoria: Mediu de bază

• Componente: bulion simplu + agar-agar

Geloza simpla

• Categoria: Mediu de bază

• Componente: bulion simplu + agar-agar

Geloza lactozata

• Categoria: Mediu diferenţial Componente: geloză simplă + lactoză + albastru bromtimol

• Utilizare: studierea fermentării lactozei

Geloza sange

• Categoria: Mediu compus

• Componente: geloză simplă răcită la 45°C + sânge defibrinat 10-20%

Geloza socolatie

• Categoria: Mediu special

• Componente: geloză simplă răcită la 60-80°C + sânge

• Utilizare: cultivarea neisseriilor, hemofililor

Mediul Chapman

Categoria: Mediu selectiv şi diferenţial

(evidentiaza o proprietate

biochimica a tulpinii) Componente: geloză simplă + NaCl 7,5% + manitol + roşu fenol

Utilizare: selectiv pentru stafilococ

Medii folosite pentru enterobacterii

(agar, lactoza, indicatori de pH) Drigalski Istrate McConkey Levine

Bacteriile care degradeaza lactoza din mediu = lactozo pozitive

Bacteriile care nu degradeaza lactoza din mediu = lactozo negative

Mediul Levine

• Categoria: Mediu selectiv şi diferenţial

• Componente: geloză simplă + eozină + lactoză + albastru de metilen

• Utilizare: cultivarea enterobacteriilor (E.coli)

ADCL (Leifson)

• Categoria: Mediu selectiv şi diferenţial

• Componente: geloză simplă + săruri biliare + lactoză + roşu neutru

• Utilizare: cultivarea shigelelor şi salmonelelor

• Mediul BSA: vibrionul holeric

• Mediul Chapman : stafilococi

• Mediul Lowenstein-Jensen: bacilul TBC

• Mediul OCST: bacilul difteric

• Mediul Sabouraud: fungi

Mediul Muller - Hinton

• Categoria: Mediu special

• Utilizare: Efectuarea antibiogramelor

Mediul OCST

• Categoria: Mediu de îmbogăţire (favorizeaza X bacteriilor, mai ales cand acestea sunt in concantratie mica)

• Componente: ou + cisteină + ser + telurit de potasiu

• Utilizare: cultivarea bacililor difterici

Mediul Sabouraud

• Categoria: Mediu special

• Componente: geloză simplă + maltoză/glucoză + antibiotice

• Utilizare: cultivarea

fungilor

Mediul Lowenstein-Jensen

Metode de insamantare

• Insamantare = punerea in contact a unei culturi bacteriene sau a unui produs patologic cu mediile de cultura.

• Izolare = repicarea unei singure colonii pe alte medii de cultura cu scopul de a obtine cultura pura

• Cultura bacteriana = totalitatea bacteriilor crescute in/pe suprafata unui mediu de cultura

Tehnici de insamantare

• Tehnica insamantarii prin epuizare:– Scop: obtinerea coloniilor izolate

• Insamantarea prin intepare (pe medii solide aflate in tuburi)

• Insamantarea in panza

Caracterele culturii microbiene pe medii solide

• Colonia= ansamblu localizat, alcatuit din populatie pura de bacterii provenite dintr-un singur parental.

Pe mediu solid se descrie:- forma coloniei - producerea de

pigment- marimea coloniei - consistenta coloniei- suprafata coloniei - emulsificabilitatea- marginile coloniei - mirosul culturii

Pigment

Caracterele culturii microbiene pe medii solide

• Colonia= ansamblu localizat, alcatuit din populatie pura de bacterii provenite dintr-un singur parental.

Colonii S (smooth)

• Colonii R (rough): B.anthracis, C.diphteriae, M.tuberculosis

MYCOBACTERIUM MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS PE TUBERCULOSIS PE MEDIUL MEDIUL LOWENSTEINLOWENSTEIN

HEMOLIZA

ααββ

STAFILOCOCSTAFILOCOC- αα COMPLETA COMPLETA

- - ββ CALD-RECE CALD-RECE (se clarifica la 4°C)(se clarifica la 4°C)

STREPTOCOCSTREPTOCOC

- αα INCOMPLETA INCOMPLETA

VERZUIEVERZUIE

- ββ COMPLETA COMPLETA

Clasificare – hemoliza pe geloza sange

• hemoliza β:= streptococi β -

hemolitici

• hemoliza - incompleta, verzuie

• streptococi γ - nehemolitici,