IMUNOHEMATOLOGIE
SEROLOGIA GRUPELOR
SANGUINE
DR.BÂRSAN TAMARA Centrul Regional de Transfuzie Galați
GRUPEGRUPE SANGUINESANGUINE
ABOABO
RhRheesus standard (RH1)sus standard (RH1)
NOȚIUNI GENERALE
Sângele este unic și salvator de vieți Transfuzia de sânge reprezintă o componentă esențială a serviciilor
de sănătate moderne Securitatea transfuzională implică un ansamblu de măsuri necesare
atât pentru protejarea integrității donatorului de sânge , cât și pentru prevenirea complicațiilor imunologice și infecțioase la primitor
Asigurarea securității , calității și eficienței sângelui total și componentelor sanguine reprezintă o prioritate majoră la nivel internațional
Politica națională în domeniul calității și contextul legislativ existent constituie un cadru adecvat pentru aplicarea în practica transfuzională a Directivelor europene care reglementează normele de calitate și securitate privind colecta , controlul , procesarea , stocarea și distribuția sângelui total și componentelor sanguine
SÂNGE TOTAL:COMPOZIȚIE Și FUNCȚII
Sângele este un fluid complex format din celule sanguine aflate în suspensie în plasmă:
Globule roșii ( eritrocite , hematii ) Globule albe (leucocite) Plachete ( trombocite)
G
Globuleroșii
PlasmăGlobule albe șiplachete
PLASMA SANGUINĂ
Reprezintă 5% din greutatea corporală Conține proteine , substanțe chimice, factori de
coagulare , substanțe metabolice Volumul sanguin total = volumul ocupat de
celule și plasmă în sistemul vascular și reprezintă 7% din greutatea totală(70ml/greutate corporală) la adult și 8% din greutatea corporală la copil
GLOBULE ROȘII. CARACTERISTICI
Sunt produse în măduva osoasă sub controlul hormonului renal numit eritropoietină
Au o durată de viață de aproximativ 120 zile în torentul sanguin înainte de a fi distruse în sistemul reticulo-endotelial
Număr : aprox. 5 milioane /mm cub sânge Conțin hemoglobină , a cărei funcție principală este de a
fixa și transporta oxigenul în țesuturi Reprezintă 45% din volumul total al sângelui Hemoglobina=moleculă constituită din fier(hem) și lanțuri
polipeptidice ( globină)
GLOBULE ALBE. CARACTERISTICI
Reprezintă o familie de celule nucleate formate din: granulocite
limfocite monocite Sunt produse în măduva osoasă și țesutul
limfatic Ocupă sub 1% din volumul sanguin total Au rol în apărarea organismului împotriva
infecțiilor și de a produce anticorpi dirijați împotriva antigenelor străine
PLACHETELE
Sunt mici fragmente de megacariocite produse de măduva osoasă
Conțin enzime și alte substanțe biologic active(mediatori)
Au rol major în inițierea mecanismelor de coagulare
GRUPELE SANGUINE
Au fost descoperite la începutul secolului xx și reprezintă cea mai mare descoperire pentru transfuzia sanguină
În anii 1901-1902 Karl Landsteiner a descris 3 grupe sanguine : O, A și B
În anul 1902 , elevii lui Landsteiner, Decastello și Sturli au descris și grupa AB
În anul 1911 au fost descoperite supgrupele A1 și A2
IMUNOLOGIA GRUPELOR SANGUINE
Clasificarea grupelor sanguine din sistemul OAB se bazează pe prezența sau absența în eritrocite a unuia sau ambelor antigene (aglutinogene) A și B
Antigen= orice substanță recunoscută ca străină de către organism , care determină un răspuns imun Anticorp= produsul unui răspuns imun la un stimul antigenic Anticorpi naturali= anticorpii prezenți în sânge în absența unui
stimul antigenic cunoscut Printr-o excepție biologică , antigenele A și B nu sunt imonogene ,iar
sângele uman nu conține anticorpi împotriva antigenelor proprii Anticorpii anti-A și anti-B pot fi : naturali= Ac de tip IgM prezenți la toți indivizii la care
aglutinogenul omolog este absent imuni = Ac de tip IgG prezenți în urma unui stimul antigenic Aglutinogenul și aglutinina omologă nu pot coexista în sângele unui
individ Absența unuia din cele 2 aglutinogene implică prezența aglutininei
corespunzătoare
AntigeneAntigene(Ag) de natur(Ag) de naturăă glucidiglucidicăcă locali localizatezate pe fațape fața externexternăă aa membrane membraneii c ciitoplasmtoplasmaticeatice
Caracteristici ale celorCaracteristici ale celor 4 grupe sanguin 4 grupe sanguinee : :
GrupGrupaa AA BB ABAB OO
AglutinogAglutinogeeneneAg AAg A Ag BAg B Ag A și Ag BAg A și Ag B Fără AgFără Ag
AglutinineAglutinineAc anti BAc anti B Ac anti AAc anti A Fără AcFără Ac Ac anti B și Ac anti B și
Ac anti AAc anti A
(ser , plasmă)
(hematii)
AnticorpAnticorpii (Ac) de natur (Ac) de naturăă IgM pr IgM prezezenențiți în sângeîn sânge
SISTEMUL SISTEMUL ABO ABO
NOȚIUNI DE GENETICĂ A GRUPELOR SANGUINE
Grupele sanguine se transmit ereditar Genele responsabile de specificitatea de grupă
sanguină sunt situate pe cromozomii materni și paterni autozomali
Genotip=ansamblu de gene prezente pe cromozomi deținute de fiecare părinte
Fenotip= efectul observabil al genelor moștenite, de exemplu grupa sanguină
SISTEMUL ABO _ Relația genotip –fenotip
Genotip Fenotip
Grupa sanguină
AA
AO
A
BB
BO
B
AB AB
OO O
REGULILE CARE GUVERNEAZĂ TRANSMITEREA EREDITARĂ A GRUPELOR
SANGUINE Aglutinogenele A sau B nu pot fi prezente în
sângele unui copil dacă nu există în sângele unuia sau ambilor părinți
Un persoană cu grupa AB nu poate fi părintele unui copil cu grupa O
O persoană cu grupa O nu poate fi părintele unui copil cu grupa AB
Aglutinogenele A1 sau A2 pot fi prezente la un copil , numai dacă există în sângele unuia dintre părinți
TRANSMITEREA EREDITARĂ ÎN SISTEMUL ABO
Fenotipul
părinților
Fenotipul posibil al copiilor
Fenotipul imposibil al copiilor
O + O
O + A
O + B
A + A
A + B
B + B
O + AB
A + AB
B + AB
AB + AB
O
A , O
B , O
A , O
AB , O , A ,B
B , O
A , B
A , B , AB
A , B , AB
A , B , AB
A , B , AB
B , AB
A , AB
B , AB
Nici unul
A , AB
O , AB
O
O
AB
SISTEMUL RHESUS (RH) În perioada 1937- 1940 , Landsteiner și Wiener
au efectuat cercetări și au descoperit factorul Rh al cărui importanță clinică a fost demonstrată de Levine și Stetson în anul 1939
Din punct de vedere genetic , sistemul Rh prezintă: - 6 gene: Cc , Dd , Ee
- 5 antigene : Cc , D , Ee Gena d nu produce antigen Genele Rh se transmit în grupe de 3 gene ,
fiecare grupă provenind de la un părinte ,diverse combinații:CDe
Cde , cde ,cDe , etc.
SISTEMUL RHESUS (RH)
0 persoană cu RhD pozitiv moștenește o genăD,
dar nu se poate preciza dacă persoana respectivă este heterozigotă pentru această genă(D/d) sau homozigotă(D/D)
O persoană cu Rh negativ are fenotipul d/d Arbore genealogic: Genotip: D/d D/d
Genotip: D/D D/d d/d Fenotip: Dpoz Dpoz Dneg
AntigAntigeene (Ag) de naturne (Ag) de naturăă protproteeiicăcă locali localizate pe fațazate pe fața
externexternăă a membrane a membraneii c ciitoplastoplasmaticematice
Caracteristici aleCaracteristici ale sistemuluisistemului Rhésus Rhésus (Rh) (Rh) standard : standard :
GrupGrupaa Rhésus +Rhésus +
(RH : 1)(RH : 1)
Rhésus –Rhésus –
(RH : -1)(RH : -1)
AglutinogAglutinogeenene(hematii)
Ag D Fără Ag D
Nu există Nu există anticorpanticorpii (Ac) natur (Ac) naturaallii p prezenți în sângerezenți în sânge
Anticorpii imuni (IgG) apar la persoane Rh negativ ca urmare Anticorpii imuni (IgG) apar la persoane Rh negativ ca urmare a imunizării anti- D (transfuzii de sânge Rh + , a imunizării anti- D (transfuzii de sânge Rh + , incompatibilitate feto-maternă)incompatibilitate feto-maternă)
SISTEMUL SISTEMUL RRhehesussus(RH)(RH) standard standard
PrincipPrincipiuiu
AgAg : natur : naturaliali
AcAc : aglutinan : aglutinanțiți
AglutinaAglutinarere activ activăă direct directăă
IMPORTANȚA CLINICĂA SISTEMULUI ABO ȘI RH
Efectuarea testărilor imunohematologice are rolul de a asigura o securitate transfuzională optimă prin prevenirea complicațiilor imunologice la pacienții care beneficiază de o transfuzie sanguină
Nu poate fi tolerată nici o eroare în determinarea grupelor sanguine. Efectuarea grupei sanguine trebuie realizată pentru
fiecare unitate de sânge de către 2 tehnicieni diferiți , cu 2 seruri diferite , prin 2 tehnici:
proba globulară(metoda Beth-Vincent):detectează Ag AB prezenți pe eritrocite
proba serică (metoda Simonin):detectează Ac specifici prezenți în ser
CONDIȚII ESENȚIALE PENTRUDETERMINAREA CORECTĂ A TESTELOR
IMUNOHEMATOLOGICE
Personal calificat Materiale și echipamente adaptate la condițiile
operatorii Reactivi validați(control de calitate, instrucțiuni
producător) Manipularea eșantioanelor de sânge respectând
măsurile de igienă și securitate Respectarea bunelor practici de laborator Proceduri operatorii scrise (SOP)
ERORI ÎN DETERMINAREA GRUPELOR SANGUINE-REACȚII FALS POZITIVE SAU
NEGATIVE
Reactivi nestandardizați și incorect depozitați Formarea de rulouri(pseudo-aglutinare) Probe contaminate Prezența gelatinei Warton Autoanticorpi și anticorpi la rece Tehnică de lucru incorectă
PREPARAREA COMPONENTELOR SANGUINE PENTRU A FI TESTATE
Centrifugare
10 minute 500g
Separarea supernatantului (plasmă conținând anticorpi)
Diluție 3 % în apă distilată a hematiilor purtătoare de antigen
Sânge total recoltatcu anticoagulant
Reactivi
Eritrocite test et controlSeruri test
PREPARAREA MATERIALELOR ȘI REACTIVILOR
REF
Martor auto Anti A Anti B Anti A + Anti B
GR A GR B Martor Allo Anti D CQ +
Martor reactivi
Placă
Anti A +
Anti B
Anti D GRA GRB GRO+Anti BAnti AMartor GRO-
CC + CC -
Diluant
REF
Martor auto Anti A Anti B Anti A + Anti B
GR A GR B Martor Allo Anti D CC+
Martor reactivi
CC-
REACTIVI Și ERITROCITE TEST
Anti A +
Anti B
Anti BAnti AAnti D GRA GRB GRO+ GRO-Martor
REF
Témoin auto Anti A Anti B Anti A + Anti B
GR A GR B Témoin Allo Anti D CQ -
Témoin réactif
CQ +
REF
Martor auto Anti A Anti B Anti A + Anti B
GR A GR B Martor Allo Anti D CC -
Martor réactivi
CC +
ADĂUGAREA COMPONENTELOR SANGUINE DE TESTAT
Plasmă sau serHematii test 3%
REF
Martor auto Anti A Anti B Anti A + Anti B
GR A GR B GRO/Martor Allo Anti D CC+
Martor reactivi
CC -
AGITAREA BLÂNDĂ A PLĂCII PENTRU FAVORIZAREA AGLUTINĂRII SPONTANE
CITIREA AGLUTINĂRII
REF
Absența aglutinării
Nu se constată formarea de rețele aglutinante
Prezența aglutinării
Formarea de rețele aglutinante de complexe imune
Cuantificarea aglutinării poate fi efectuată în funcție de numărul și mărimea conglomeratelor de hematii
+ ++ +++
28
INTERPRETAREA MARTORILOR
CompoCompozițieziție
Aspect Aspect așteptatașteptat
Aspect non Aspect non conformconform
Martor Martor AutoAuto Martor Martor RReeactiactivivi Martor Martor AlloAllo
serul subiectului +
hematiile subiectului
hematiilesubiectului +
seruri test
serul subiectului +
hematii fără Ag ABO/Rh
Prezența Ac reci în serul subiectului
Aglutinează propriile sale hematii
Imagine de aglutinare dată de hematiile subiectului diluate în reactiv în condiții normale
Prezența de anticorpi în serul subiectului, indică existența altor structuri pe hematii decât Ag ABO/ Rh
Martor auto Anti A Anti B Anti A + Anti B
GR A GR B Martor Allo Anti D CQ +
Martor reactiv
CQ -
EXEMPLEMartori non aglutinați
Hematiile subiectului sunt aglutinate de toate serurile = Prezența Ag eritrocitare A și B
Serul subiectului nu aglutinează hematiile test = Fără anticorpi în ser
Controale de calitate : aglutinare CC+ și non aglutinare CC-
Hematiile subiectului sunt aglutinate de serul antiD = Prezența Ag eritrocitare D
Martorii și controalele de calitate sunt conforme : validarea reactivilor și a tehnicilor Proba globulară (Beth Vincent) și serică (Simonin) sunt concordante : nu există anticorpi dirijați
contra propriilor antigene și prezența anticorpilor contra altor antigene prezența aglutinogenelor A și B et absența aglutininelor : Grupa AB
Punerea în evidență a antigenului D : Rh pozitiv
Martor auto Anti A Anti B Anti A + Anti B
GR A GR B Martor Allo Anti D CQ +
Martor reactiv
CQ -
Martori non aglutinați Hematiile subiectului sunt aglutinate de serul anti A (și antiA+B) = Prezența Ag eritrocitare A
Serul subiectului aglutinează hematiile test B = Prezența anticorpilor anti B Hematiile subiectului sunt aglutinate de serul
antiD = Prezența Ag eritrocitare D
Controale de calitate : aglutinare CC+ et non aglutinare CC-
EXEMPLE
Martorii și controalele de calitate sunt conforme : validarea reactivilor și tehnicii Proba globulară (Beth Vincent) și serică (Simonin) sunt concordante : nu există anticorpi dirijați
contra propriilor antigene și prezența anticorpilor contra altor antigene prezența aglutinogenelor A și prezența aglutininelor anti B : Grupe A
Punerea în evidență a antigenului D : Rh pozitiv
6985
Martor auto Anti A Anti B Anti A + Anti B
GR A GR B Martor Allo Anti D CQ +
Martor reactiv
CQ -
Martori non aglutinați Hematiile subiectului nu sunt aglutinate de nici un ser = Absența Ag eritrocitare A sau B
Serul subiectului aglutinează hematiile test A et B = Prezența anticorps anti A et anti B
Hematiile subiectului nu sunt aglutinate de serul antiD = Absența Ag eritrocitare D
Controale de calitate : aglutinare CC+ și non aglutinare CC-
EXEMPLE
Martorii și controalele de calitate sunt conforme : validarea reactivilor și tehnicii Proba globulară (Beth Vincent) et serică (Simonin) sunt concordante : prezența anticorpilor anti A et
anti B la un subiect care nu posedă antigenele A sau BAbsența aglutinogenelor A și B et prezența aglutininelor anti A et anti B : Grupa O
Absența antigenului D : Rh negativConcluzie : Subiectul are grupa O-