UploadBrowseTop of Form

Bottom of FormSIGN INJOINUploadDOWNLOADSTANDARD VIEWFULL VIEWOF36FRACTIONAREA CELULARARatings:(0)|Views:297|Likes:6Published byTeofilSee moreFRACIONAREA CELULARDefiniieEste o tehnic bazat pe caracteristicile structurilor subcelulare (form, dimensiune, densitate) carereuete s le diferenieze astfel permind separarea lor. Celulele pot fi dezmembrate prin:-ocosmotic-ultrasonicare-filtrare prinsitemiciDac celula este dezmembrat ntr-o manier delicat, fiecare din organitele sale poate fi izolat.Procesul de dezmembrare celular se numeteomogenizareiar procesul ulterior de izolare aorganitelor se numetefracionare. Izolarea organitelor necesit tehnici de chimie fizic mergndde la strecurare prin site simple, la sedimentarea gravitaional sau precipitare diferenial sau laultracentrifugare sau marcare fluorescent a fragmentelor n gradiente de densitate generate pecomputer.ScopIzolarea componentelor celulare sau subcelulare, a complexelor macromoleculare acizilor nucleicisau enzimelor n scopul definiriirolului lor individual n celule.Individualizarea componentelor celulare permite meninerea lor ntr-o stare de funcionare, ncondiii prestabilite, fr a necesita prezena unei celule sau a unui grup de celule. Aceste sistemedestudiu,acelulare,suntutilizatentoatesistemeleexperimentaledeinvestigarearoluluiorganitelor celulare.OmogenizareaPrimul pas n vederea fracionrii este izolarea celulelor i obinerea unui eantion pur. Celuleleizolate (cele din snge sau din culturi de celule) pot fi separate pe baza formei sau a unor markeride suprafa (ncrcare electric, antigene sau enzime de suprafa). Celulele din context tisulartrebuie separate de celulele vecine, eliberate din jonciuni prin activitate mecanic sau enzimatic.Dezagregarea jonciunilor de tip desmosomal sau jonciunilor strnse se poate realiza cu chelatori(eliminatori) de Ca, Mg alturi de fore mecanice. Tehnicile de omogenizare cuprind:-tehnici bazate pe alterarea osmotic a mediului n care sunt celulele-tehnicibazatepeforemecanicemojarare,blender,compresiune/expansiune,ultrasonicareAceste tehnici determin ruperea majoritii membranelor celulare cu formarea ulterioar demicroveziculenchise.Dactehnicaestebine executat,organitecamitocondriile,nucleul,complexul Golgi sau lizozomii rmn intacte. Disrupia reticolului endoplasmatic rugos determinformarea unor microvezicule cu coninut variabil, numite microsomi. Suspensia celular esteredus la un omogenat (sau extract) care conine diferite compartimente veziculare cu coninutvariabil, ncrcare i densitate diferite.FracionareaReprezint tehnica de separare aelementelor dintr-un omogenat.Dup omogenizarea celulelor, diferitele componente pot fi separate. Pentru unele materiale (sngeintegral, celule n suspensie) aceasta se poate realiza prin sedimentare gravitaional. n aceasttehnic, separarea are loc prin diferenele naturale de form i dimensiune (densitate) dintre celule.Hematiile sunt mai dense dect leucocitele, astfel nct separarea determin depunerea unui strat dehematii la fundul eprubetei de sedimentare, urmatsuperior de un strat deleucociteYou're reading a free preview.Pages2to3are not shown in this preview.

READ THE FULL VERSION

Centrifugareareprezintcea mai folosit tehnic de fracionare a componentelor celulare utilizndfora centrifug. Tehnicile care folosesc recipiente de centrifugare de volum mai mare i incintefrigorifice sunt tehnici preparative; tehnicile care folosesc viteze de centrifugare mari n recipientemici sunt tehnici analitice. O centrifug de peste 20.000RPM este o ultracentrifug. Organitele potfi separate ntr-o centrifug prin variate metode. Particulele se comport diferit sub aciunea foreicentrifuge:particulelensuspensiepotfiseparatefieprinsedimentaredevitezfieprinsedimentare de echilibru. Sedimentarea de vitez se mai numete i centrifugare zonal i areavantajul unei centrifugri la vitez redus pentru o perioad scurt de timp dar confer separriincomplete. Sedimentarea de echilibru se mai numete izopicnic sau de echilibru la densitate inecesit viteze mari de centrifugare pentru perioade mai lungi de timp, avnd avantajul uneiseparri complete.Sedimentarea gravitaionalReprezint o metod de separare grosier a componentelor unui omogenat. Separarea are loc nfuncie de criteriiledimensiuneidensitate. Componentele mai mari se mic cel mai repede subaciunea forei centrifuge i se vor depune primele la nivelul fundului eprubetei de centrifugare. Laviteze relativ mici, componentele mari ca nucleii sau fragmentele celulare formeaz un depozit(pelet).Ovitezsuperioardecentrifugaredeterminformareaunuipeletdinmitocondrii.Ultimelecomponentecaresedimenteazlavitezefoartemarisuntelementelereticululuiendoplasmatic i ribozomii. Peletul poate fi extras dup fiecare treapt de centrifugare. Deoarecesepararea nu este de mare finee, peletul extras poate fi resuspendat i recentrifugat de cteva oripentru a obine un eantion purSedimentarea de vitezEste o metod de rafinare a sedimentrii gravitaionale. Se bazeaz pe criteriile dimensiune iform a particulelor de separat. Particulele din soluia centrifugat sunt accelerate i ating o vitezfinal; aceast vitez final este determinat n parte de dimensiuni, greutate, densitate i formaparticulelor ca i de viscozitatea mediului n care se desfoar procedura i de fora centrifuggenerat. Viteza final este denumit viteza de sedimentare a particulei i poate fi utilizat pentrumsurarea dimensiunii, greutii sau densitii particulei.Practic, separarea are loc prin centrifugarea unui omogenat dispus ca un strat la suprafaa uneisoluii saline din tubul de centrifugare. Deoarece un preparat mai dens (omogenatul) are tendinade a se amesteca n soluia de sedimentare, aceast soluie este amplasat ntr-o soluie de sucrozcare este astfel preparat nct concentraia acesteia descrete de la fundul spre gtul tubului decentrifugare. Se creeaz un gradient de densitate care rafineaz sedimentarea de vitez i permitesepararea diferitelor componente ale omogenatului sub form de benzi. Aceste benzi se menindatorit gradientului de densitate. Din aceste benzi de sedimentare se pot extrage individualcomponentele celulare. Rata desedimentare (poziia final afiecrui component) depinde de formai dimensiunile particulelor i este caracterizat de uncoeficient de sedimentare (s). Centrifugelemoderne care ating viteze de rotaie de 80.000 rpm (rotaii pe minut) dezvolt fore de 500.000G,fore care pot determina separarea unor molecule minuscule, cum ar fi ARNt sau enzimele.You're Reading a Free PreviewPage 2 is not shown in this preview.DOWNLOADAddendaCoeficientul de difuziuneCnd o particul atinge viteza final, este afectat de difuziune, de obicei n direcia opusdeplasrii sale determinat de fora centrifug. Este o micare de tip brownian i poate fi statutatmatematic ca o constant coeficientul de difuziune reprezentnd gradul de mprtiere amoleculei n timp. Este exprimat n uniti Fick. 1 Fick = 10-7cm2/sec. Exist o relaie direct ntrecoeficientul de difuziune a unei particule i diametrul su. Ambele sunt raportate la coeficientul desedimentare al particulei.Coeficientul de sedimentareeste determinat de formulaS = 1/2r x dr/dt unde-este viteza angular a rotorului exprimat n radiani/sec i este egal cu 0,10472 x RPM- r = distana dintre particul i centru de rotaie (mm)- dr/dt = rata deplasrii particulelor (cm/sec)Valoarea coeficientului de sedimentare pentru o particul poate fi determinat prin msurareatimpului de deplasare (vitez i distan) a unei particule ntr-un mediu de viscozitate cunoscut.Cel mai simplu este s calculm distana de deplasare a particulelor pentru o centrifug cu o forcunoscut.Sedimentarea la echilibruEste o tehnic de separare a componentelor dintr-un omogenat pe baza densitii de flotare. nacest caz, nu mai conteaz parametrii dimensiune i form.Dac o prob conine mai multe particule diferite, cu diferite densiti i dimensiuni, ele vor fiseparate pe baza acestor parametri. Particulele mai mari vor ajunge la baza tubului de centrifugaremai repede dect cele mai mici. Dac fora centrifug este crescut progresiv, timpul de separarepoate scdea.Gradientul de concentraie din tubul de centrifugare (gradient de sucroz sau clorur de cesiu) estemult mai accentuat dect pentru sedimentarea de vitez. Prin centrifugare, componentele celularese deplaseaz spre fundul tubului de centrifugare i se opresc i floteaz n momentul n care ajungntr-un strat unde densitatea este echivalent cu densitatea proprie. La finalul centrifugrii seformeaz benzi din care cea mai apropiat de fundul centrifugii este compus din elemente cudensitatea de flotare cea mai mare.Metoda este util pentru separarea unor componente asemntoare care incorporeaz sau nu(experimental) izotopi grei.You're Reading a Free PreviewPage 3 is not shown in this preview.DOWNLOADActivity(6)FILTERSAdd to collectionReviewAdd NoteLike1 hundred reads

Spatariu Stefanaliked this

Teodora Bnicliked this

Nicoleta Prjuliked this

Pasalau Daria Vasilicaliked this

Anca Samoilaliked thisMore From This UserBibliografie_chirurgieTEOFIL

CURS_SEMIOLOGIE-resp.pptTEOFIL

Ulcerul Gastric-diploma de licenta asistente medicaleTEOFIL

Farmacie RaspunsuriTEOFIL

Grile Licenta Mg 2013TEOFIL

TestTEOFIL

58280488-viruso-grileTEOFIL

Elemente de NeuroanatomieTEOFIL

Fiziologie Umana - I. HaulicaTEOFIL

Celule StemTEOFIL

1. Dezvoltarea Sistemului RespiratorTEOFIL

fisa garda 2011TEOFIL

Pre Zen Tare 1TEOFIL

Regiunea Palmara a DegetelorTEOFIL

Download and print this document Read and print without ads Download to keep your version Edit, email or read offlineChoose a format:Top of Form.DOC.PDFBottom of FormDOWNLOADRecommended

This Is the Story of a Happy MarriageHarperCollinsThe New York Times bestselling author of State of Wonder, Run, and Bel Canto ...

Hyperbole and a Half: Unfortunate Sit...Simon & SchusterFROM THE PUBLISHER:Every time Allie Brosh posts something new on her hugely p...

A Curious Invitation: The Forty Great...HarperCollinsForty of the greatest fictional festivities as seen through the eyes of the w...

Quiet Dell: A NovelSimon & SchusterA spectacularly riveting novel based on a real life crime by a con man who pr...Previous|NextPage1of 8ABOUT Browse books Browse documents About Scribd Team Blog Join our team! Contact UsMEMBERSHIPS Join today Your membership GiftsADVERTISE WITH US AdChoicesSUPPORT Help FAQ Press Purchase helpPARTNERS Publishers Developers / APILEGAL Terms Privacy Copyright

Copyright 2015 Scribd Inc.Mobile SiteLanguage:English