7/23/2019 Reactiile Ag-Ac

http://slidepdf.com/reader/full/reactiile-ag-ac 1/25

  eacţii antigen –

eacţii antigen –

anticorp

nticorp

DEFINITIE DEFINITIE 

Reacţia antigen – anticorp esteReacţia antigen – anticorp este specifică,specifică,

antigenul poate fi legat numai de anticorpulantigenul poate fi legat numai de anticorpul

cece  s-a produs ca răspuns la stimulul antigenics-a produs ca răspuns la stimulul antigenicrespectiv.respectiv.

ag + ac ag-acag + ac ag-ac

7/23/2019 Reactiile Ag-Ac

http://slidepdf.com/reader/full/reactiile-ag-ac 2/25

Aceste reacţii pot fi folosite

ceste reacţii pot fi folosite

pentru:

entru:

detectarea unui antigen necunoscut cu ajutoruldetectarea unui antigen necunoscut cu ajutorulunui anticorp cunoscut (metode de diagnosticunui anticorp cunoscut (metode de diagnosticdirecte)directe)

detectarea anticorpilor din serul bolnavilor cudetectarea anticorpilor din serul bolnavilor cuantigene cunoscute (serodiagnostic, metodeantigene cunoscute (serodiagnostic, metode

de diagnostic indirecte)de diagnostic indirecte)

ag? + ac ag-acag? + ac ag-ac ag + ac? ag-acag + ac? ag-ac În cazul în care antigenul corespunde anticorpului,În cazul în care antigenul corespunde anticorpului,

se formează complexul imun antigense formează complexul imun antigen - - anticorpanticorp

7/23/2019 Reactiile Ag-Ac

http://slidepdf.com/reader/full/reactiile-ag-ac 3/25

Aviditatea-Aviditatea- unui Ac pentru un Ag speciicunui Ac pentru un Ag speciicrepre!inta rapiditatea aparitiei reactiei Ag-repre!inta rapiditatea aparitiei reactiei Ag-

 Ac(precipitare,aglutinare etc.) Ac(precipitare,aglutinare etc.)Factorii aparitiei aviditatii:Factorii aparitiei aviditatii: 

valenta Acvalenta Ac

  nr. de epitopinr. de epitopi  temperaturatemperatura

  p"p"

  orta ionica a mediuluiorta ionica a mediului

#aca este cunoscut unul din elementele#aca este cunoscut unul din elementele

reactiei Ag sau A$ poate i identiicat celalaltreactiei Ag sau A$ poate i identiicat celalalt

7/23/2019 Reactiile Ag-Ac

http://slidepdf.com/reader/full/reactiile-ag-ac 4/25

Afinitatea

finitatea

 unui Ac pentru un Ag

unui Ac pentru un Ag

specific caracterizeaza intensitatea

pecific caracterizeaza intensitatea

fortelor de legatura a complexului

ortelor de legatura a complexului

Ag-Ac

g-Ac

7/23/2019 Reactiile Ag-Ac

http://slidepdf.com/reader/full/reactiile-ag-ac 5/25

  eactiile Ag-Ac au doua directii de

eactiile Ag-Ac au doua directii de

aplicare practica:

plicare practica:

I.Seroidentificare:I.Seroidentificare: #etectarea si do!area Ag(necunoscut) cu ajutorul Ac speciici

cunoscuti.Utilizate % surse de Ac& Ac monoclonali  omogeni

dar recunosc doar un singur tip de epitop si Ac

 policlonali,ce se contin in serurileimune(antiseruri) care dau legaturi de aviditateinalta cu Ag.

7/23/2019 Reactiile Ag-Ac

http://slidepdf.com/reader/full/reactiile-ag-ac 6/25

  Serurile imune- injectarea la un animal de

laborator a Ag cunoscute.#upa o perioadaserul va contine Ac contra Ag injectate-naturae'acta acestor Ac nu o cunoastem ( Ac

 policlonali )

I.Serodiagnostic:I.Serodiagnostic: #etectarea si titrarea Ac din

serul bolnavilor (necunoscut) ata de un Agspeciic cunoscut Unele reactii Ag-Ac se maniesta direct si pot i

observate direct &precipitarea,aglutinarea etc.

7/23/2019 Reactiile Ag-Ac

http://slidepdf.com/reader/full/reactiile-ag-ac 7/25

Clasificarea reactiilor Ag-

lasificarea reactiilor Ag-

Ac

c

Reactii deReactii de precipitare precipitare&&  in gelin gel (R.ancini,dubla diu!ie uc*terlon)(R.ancini,dubla diu!ie uc*terlon)  in mediul lichidin mediul lichid (R.Ramon,precipitarea in inel(R.Ramon,precipitarea in inel

 Ascoli) Ascoli) Reactia deReactia de aglutinareaglutinare&-in diagnosticul&-in diagnosticul

bacteriologic(R."uddleson)bacteriologic(R."uddleson)

  -in diagnosticul serologic(R.rig*t)-in diagnosticul serologic(R.rig*t)  Reactia deReactia de fixare a complementului(F! fixare a complementului(F!  ) )&&

  -in diagnosticul sifilisului,leptospirozei etc -in diagnosticul sifilisului,leptospirozei etc 

7/23/2019 Reactiile Ag-Ac

http://slidepdf.com/reader/full/reactiile-ag-ac 8/25

  -in diagnosticul serologic al inectiilor virale-in diagnosticul serologic al inectiilor virale

Reactii deReactii de seroneutralizareseroneutralizare &&  -reactia A in diagnosticul inectiilor-reactia A in diagnosticul inectiilor

streptococicestreptococice

  -testul placilor semineutrali!ate-testul placilor semineutrali!ate  - dierite intradermoreactii cu mecanism- dierite intradermoreactii cu mecanism

imun umoralimun umoral

Reactii in care componentele sunt marcateReactii in care componentele sunt marcate

  -i!otopic (radioimunoassa,R/A)-i!otopic (radioimunoassa,R/A)

7/23/2019 Reactiile Ag-Ac

http://slidepdf.com/reader/full/reactiile-ag-ac 9/25

 -en!imatic(en!me-lin0ed imunoassa-en!imatic(en!me-lin0ed imunoassa1/A )1/A )

-luorescent (luorescent imunoassa-luorescent (luorescent imunoassa2/A)2/A) -c*emiluminescent(c*emiluminescent-c*emiluminescent(c*emiluminescent

assa,$A)assa,$A)

  -

7/23/2019 Reactiile Ag-Ac

http://slidepdf.com/reader/full/reactiile-ag-ac 10/25

  eactiile Ag-Ac

eactiile Ag-Ac

Reactia de precipitare repre!intaReactia de precipitare repre!intapunerea in contact a antigenului solubilpunerea in contact a antigenului solubil

cu anticorpul corespun!ator ormandcu anticorpul corespun!ator ormandcomple'ul Ag-Ac.comple'ul Ag-Ac.  Ag si Ac pot precipita cand se gasesc Ag si Ac pot precipita cand se gasesc

intr-o anumita proportie respectandintr-o anumita proportie respectandprincipiile de ba!a ale reactiei Ag-Acprincipiile de ba!a ale reactiei Ag-Ac

7/23/2019 Reactiile Ag-Ac

http://slidepdf.com/reader/full/reactiile-ag-ac 11/25

Condiţiile de formare a

ondiţiile de formare a

reţelei

eţelei

de precipitare

e precipitare

:

 Ac sa ie cel putin bivalent (Ac completi) Ac sa ie cel putin bivalent (Ac completi)  Ag sa ie multivalent (*aptenele nu pot i Ag sa ie multivalent (*aptenele nu pot i

precipitate)precipitate) 3recipitarea ma'ima corespunde cu !ona de3recipitarea ma'ima corespunde cu !ona de

ec*ivalenţă, unde Ac si Ag sunt in raportec*ivalenţă, unde Ac si Ag sunt in raportoptimal de concentraţie, ce permite precipitareaoptimal de concentraţie, ce permite precipitareatuturor moleculelor de Ac cu Agtuturor moleculelor de Ac cu Agcorespun!ator.4n e'ces de Ag sau de Accorespun!ator.4n e'ces de Ag sau de Acprecipitatul nu se ormea!ă.precipitatul nu se ormea!ă.

7/23/2019 Reactiile Ag-Ac

http://slidepdf.com/reader/full/reactiile-ag-ac 12/25

556tili!are&6tili!are& 7n medicina legala 7n medicina legala(determinarea apartenenţei de specie a(determinarea apartenenţei de specie a

dieritor proteine& s8nge, spermă,dieritor proteine& s8nge, spermă,etc),7nigiena alimentară(depistareaetc),7nigiena alimentară(depistareaalsiicăriialimentelor), 7n diagnosticulalsiicăriialimentelor), 7n diagnosticul

maladiilor inectioase, etcmaladiilor inectioase, etc

7/23/2019 Reactiile Ag-Ac

http://slidepdf.com/reader/full/reactiile-ag-ac 13/25

Exista diferite variante

xista diferite variante

ale reactiei dele reactiei de

precipitare

recipitare

 Acestea sunt in unctie de mediul in care Acestea sunt in unctie de mediul in carese produce reactia &se produce reactia &lic"id sau gelifiat lic"id sau gelifiat 

 Acestea au o larga aplicabilitate practica Acestea au o larga aplicabilitate practicain domeniul imunologiei pentru studiereain domeniul imunologiei pentru studiereaunor Ag de provenientaunor Ag de provenientabacteriana(to'ine),virale(Ag "9) cat sibacteriana(to'ine),virale(Ag "9) cat si Ag pre!ente in serul bolnavilor cu Ag pre!ente in serul bolnavilor cuprocese inlamatorii,necrotice(prot $procese inlamatorii,necrotice(prot $reactiva),neopla!ice(ala eto proteina)reactiva),neopla!ice(ala eto proteina)

7/23/2019 Reactiile Ag-Ac

http://slidepdf.com/reader/full/reactiile-ag-ac 14/25

  eactii de precipitare in

eactii de precipitare in

mediul lichidediul lichid

Reactia de precipitare in amestecReactia de precipitare in amestec &&

  - etoda Ramon&in care se pun in contact- etoda Ramon&in care se pun in contact

in amestec cantitati egale de Ag cu cantitatiin amestec cantitati egale de Ag cu cantitativariabile de Ac(eectuate prin dilutii succesive),variabile de Ac(eectuate prin dilutii succesive),

 Reactie pozitivaReactie pozitiva apare precipitatul initial subapare precipitatul initial suborma de depo!it la undul eprubetei,orma de depo!it la undul eprubetei,

  UtilizareUtilizare& det. cantitatii de to'ina sau anato'ina.& det. cantitatii de to'ina sau anato'ina.

7/23/2019 Reactiile Ag-Ac

http://slidepdf.com/reader/full/reactiile-ag-ac 15/25

  eactia de precipitare

eactia de precipitare

in inel (Ascoli)n inel (Ascoli)/ntr-un tub se introduce serul/ntr-un tub se introduce serulimun ,pipeta se inclina si peimun ,pipeta se inclina si peperetii tubului se lasa sa seperetii tubului se lasa sa seprelinga incet solutia de Ag,ca saprelinga incet solutia de Ag,ca sanu se amestece cu serul . #acanu se amestece cu serul . #aca

 Ac din ser corespund cu Ag laAc din ser corespund cu Ag la!ona de separare a celor doua!ona de separare a celor doua

lic*ide se ormea!a un inel alblic*ide se ormea!a un inel albceea ce semniica precipitareaceea ce semniica precipitareacomple'ului Ag-Accomple'ului Ag-Ac

 Avantajul metodei rapiditatea siAvantajul metodei rapiditatea si

simplicitateasimplicitatea

7/23/2019 Reactiile Ag-Ac

http://slidepdf.com/reader/full/reactiile-ag-ac 16/25

6tili!area practica a reactiei Ascoli &6tili!area practica a reactiei Ascoli &  - depistarea petelor de sange- depistarea petelor de sange

- identiicarea alsiicarilor produselor- identiicarea alsiicarilor produselor

alimentarealimentare- depistarea Ag poli!a*aridic al- depistarea Ag poli!a*aridic alagentului antra'ului in omogenat deagentului antra'ului in omogenat de

organeorgane

7/23/2019 Reactiile Ag-Ac

http://slidepdf.com/reader/full/reactiile-ag-ac 17/25

recipitarea in mediu

recipitarea in mediu

solid(gel)olid(gel)

/n aceste reactii Ag si Ac diu!ea!a unul/n aceste reactii Ag si Ac diu!ea!a unul

spre celalalt prin gelo!a iar la !ona despre celalalt prin gelo!a iar la !ona deconcentratie optima se produceconcentratie optima se produceprecipitarea sub orma de linii albeprecipitarea sub orma de linii albe-cenusii-cenusii

7/23/2019 Reactiile Ag-Ac

http://slidepdf.com/reader/full/reactiile-ag-ac 18/25

!munodifuzia simpla

munodifuzia simpla

radiala(tehnica "ancini)

adiala(tehnica "ancini)

e eectuea!a pe o placa acoperita cue eectuea!a pe o placa acoperita cugelo!a,in care sunt incorporati Ac speciici.Aggelo!a,in care sunt incorporati Ac speciici.Ag

este depus in godeurile din stratul de gelo!a.Ageste depus in godeurile din stratul de gelo!a.Agdiu!ea!a radial in gelo!a in :; ore.diu!ea!a radial in gelo!a in :; ore. #aca Ag corespunde Ac ,atunci are loc#aca Ag corespunde Ac ,atunci are loc

ormarea de discuri de precipitare ,cu supraataormarea de discuri de precipitare ,cu supraataproportionala concentratiei Ag din godeuproportionala concentratiei Ag din godeu 6tili!are&depistarea /g,*ormonilor,en!imelor 6tili!are&depistarea /g,*ormonilor,en!imelor 

7/23/2019 Reactiile Ag-Ac

http://slidepdf.com/reader/full/reactiile-ag-ac 19/25

7/23/2019 Reactiile Ag-Ac

http://slidepdf.com/reader/full/reactiile-ag-ac 20/25

!munodifuzia du#la

munodifuzia du#la

tehnicile $uchterlon% siehnicile $uchterlon% si

Ele&

le&

e toarna gelo!a in cutia 3etri&e toarna gelo!a in cutia 3etri&

In tehn. OuchterlonyIn tehn. Ouchterlony Ag si Ac diu!ea!a din Ag si Ac diu!ea!a dingodeurile situate la distanta de <= mm unulgodeurile situate la distanta de <= mm unulde altulde altul

In tehn. ElekIn tehn. Elek cele doua reactive diu!ea!a dincele doua reactive diu!ea!a dinben!ile de *artie plasate pe supraata gelo!eiben!ile de *artie plasate pe supraata gelo!ei 6tili!area& determinarea to'inelor,6tili!area& determinarea to'inelor,

antito'inelor, Ag proteiceantito'inelor, Ag proteice

7/23/2019 Reactiile Ag-Ac

http://slidepdf.com/reader/full/reactiile-ag-ac 21/25

'ehnica $uchterlon%

ehnica $uchterlon%

7/23/2019 Reactiile Ag-Ac

http://slidepdf.com/reader/full/reactiile-ag-ac 22/25

'estul Ele&

estul Ele&

7/23/2019 Reactiile Ag-Ac

http://slidepdf.com/reader/full/reactiile-ag-ac 23/25

Contraimunoelectroforeza

ontraimunoelectroforeza

(C!E)

C!E)

1ste utilă la e'aminarea amestecurilor1ste utilă la e'aminarea amestecurilor

antigenice comple'e. ectura este posibilaantigenice comple'e. ectura este posibilapeste > minute.peste > minute.

@elo!a este turnată pe o placă de sticlă, Ag i@elo!a este turnată pe o placă de sticlă, Ag i

 Ac sunt dispui 7n re!ervoare circulare de % mm Ac sunt dispui 7n re!ervoare circulare de % mmdiametru, la o distanţă de < mm. 4n timpuldiametru, la o distanţă de < mm. 4n timpulelectroore!eiAg, 7ncărcat negativ, migrea!ăelectroore!eiAg, 7ncărcat negativ, migrea!ă

spre polul po!itiv, 7nt8lnind Ac care migrea!ăspre polul po!itiv, 7nt8lnind Ac care migrea!ăspre catod. a interacţiunea Ag i Ac omologispre catod. a interacţiunea Ag i Ac omologiare loc ormarea liniei de precipitare.are loc ormarea liniei de precipitare.

7/23/2019 Reactiile Ag-Ac

http://slidepdf.com/reader/full/reactiile-ag-ac 24/25

7/23/2019 Reactiile Ag-Ac

http://slidepdf.com/reader/full/reactiile-ag-ac 25/25

$/12 servete la e'aminarea$/12 servete la e'aminareacomponentelor Ag din lic*ide biologice&componentelor Ag din lic*ide biologice&$R, urină, lic*id pleural, ascită, etc.$R, urină, lic*id pleural, ascită, etc.