DescriereaCIPaBiblioteciiNaionaleaRomnieiMUNTEANU,CONSTANTINProiectulPelovital/ConstantinMunteanu.Bucureti:EdituraBalnear,2013Bibliogr.IndexISBN9786069355039612.67

Published by

Editura Balnear - http://bioclima.ro

E-mail: secretar@bioclima.ro

B-dul Ion Mihalache, 11A, Sector 1, Bucharest, Romania

1

PROIECTUL PELOVITAL

CERCETARE APLICATIV N DEZVOLTAREA UNOR PRODUSE HEALTHY-AGING INOVATOARE

2

REZUMAT Procesul de mbtrnire cu toate consecinele subsecvente socio-demografice i

biomedicale reprezint un domeniu prioritar, att n cadrul actualului program FP7, ct i al viitorului program cadru de finanare a cercetrii tiinifice la nivel European - Orizont 2020. Caracterul prioritar este subliniat i prin datele cu privire la proiectele finanate pe aceast tematic, disponibile n raportul public HEALTHY AND ACTIVE AGING elaborat de EuroHealthNet, Brussels, 2012 [6].

n concordan cu preocuprile la nivel european dar i cu experiena i expertiza acumulat de Romnia n domeniul geriatriei prin valorificarea pozitiv a Gerovitalului produs sub brandul Ana Aslan, proiectul propune un sistem integrat de cercetare aplicativ pentru dezvoltarea biotehnologic a unor produse inovative cu aciune n prevenie i geroprotecie, avnd la baz combinarea original a unui extract de nmol sapropelic de Techirghiol cu resveratrolul, rapamicina i procaina, ultima fiind substana activ utilizat n producerea Gerovitalului, i alegerea n baza rezultatelor de farmacodinamie a celui mai bun produs pentru a fi testat clinic i ulterior introdus pe pia.

Caracterul aplicativ al cercetrilor urmrete maximizarea exploatrii economice a cunotinelor teoretice i practice ale echipei de cercetare, cunotine acumulate n domeniul medical, al factorilor naturali terapeutici, al geriatriei, al fiziologiei, biochimiei, biologiei celulare i moleculare.

Structural, proiectul are 112 pagini i cuprinde 3 etape conexate ntr-o abordare unitar, integrat, centrat pe demonstrarea calitilor terapeutice i preventive ale unor noi produse healthy-aging (geroprotectoare), prin studii farmacocinetice, farmacotoxicologice i studii farmacodinamice pe animale de laborator, pe culturi celulare primare i o linie celular de fibroblaste umane, culminnd cu studii clinice. Aceste studii la nivel de animale de laborator, celulare i moleculare i clinice vor fi realizate de echipe mixte interdisciplinare de cercettori i personal medical cu mare experien n aria lor de expertiz, pe lng care vor activa cercettori tineri, la nceput de carier, pentru care mentoratul reprezint cheia reuitelor tiinifice viitoare.

Caracterizarea microbiologic, fizic, fizico-chimic, chimic i biochimic a extractului de nmol sapropelic i a produselor geroprotectoare subsecvente, dezvoltate n cadrul proiectului, reprezint un element nodal al schemei de implementare i va sta la baza dezvoltrii gamei PELOVITAL.

obolani Wistar din Biobaza Institutului Naional de Recuperare, Medicin Fizic i Balneoclimatologie (P1) vor constitui suportul cercetrilor de farmacodinamie necesare implementrii subsecvente a studiilor clinice ce vor fi realizate cu noul produs.

Echipa medical i-a exprimat punctul de vedere c nu exist riscuri medicale majore pentru realizarea studiilor clinice, fiind descrise atat n practica medical ct i n literatura de specialitate att utilizarea peloidextractelor ct i a preparatelor farmaceutice sau a suplimentelor nutritive pe baz de resveratrol, rapamicin sau procain.

La nivel fiziologic, definirea unui indice original al vrstei biologice, cu fundamentare pe un model matematic de calcul, compus din peste 30 de parametrii selecionai n baza relevanei i a informaiilor cutate n bazele de date internaionale, reprezint un punct de reper pentru corelarea tiinific integrativ a rezultatelor clinice i experimentale ce vor fi obinute.

Din punct de vedere celular i molecular, abordarea complex a proiectului vizeaz utilizarea culturilor primare de fibroblaste musculare, cardiomiocite, celule gliale i celule osoase obinute din esuturi prelevate de la obolani Wistar i a liniei standard de fibroblaste umane MRC5.

Cercetrile la nivel molecular vor urmri caracterizarea prin electroforez, RT-PCR, ELISA i Western blotting a unor markeri moleculari descrii n literatura de specialitate [2], printre care se numar p53, Akt, caspaza-3, sirtuinele, elemente ale balanei stresului oxidativ, nivelul proteinelor de oc termic (HSP), nivelul FRAP1 (mTOR).

Analiza matematic a datelor vine s susin i s argumenteze ipotezele experimentale.

3/87

1. DESCRIEREA TEHNIC I TIINIFIC A PROPUNERII DE PROIECT

1.1 Aria tematic a propunerii de proiect i relevana Proiectul se ncadreaz n aria tematic 6. Biotehnologii, subdomeniul 6.1.2. Elaborarea

unor protocoale de diagnostic i tratamente medicale cu impact asupra strii de sntate i creterii speranei de via.

Proiectul propus de un consoriu format din opt parteneri, cu o echipa format din peste 50 de cercettori, vizeaz obinerea, caracterizarea i cercetarea efectelor terapeutice pentru patentarea i autorizarea punerii pe pia a unui nou produs healthy-aging din viitoarea gam PELOVITAL, dezvoltat prin combinaia inovatoare dintre un extract original obinut din peloidul din lacul Techirghiol i una din principalele 3 molecule geroprotectoare, intens studiate la nivel mondial n acest moment: resveratrol, rapamicin sau procain.

Dezvoltarea acestor noi produse rspunde nevoilor de pozitivare a rolului n societate a persoanelor vrstnice, ce devin capabile prin meninerea strii de sntate s duc o via activ, n sprijinul generaiei tinere din familie, s nu fie o povar social i economic prin costuri medicale foarte mari i prin necesitatea ngrijirii lor n stadiul unor boli dizabilitante.

Dezechilibrul piramidelor demografice i creterea accentuat a populaiei cu vrsta de peste 65 de ani reprezint o provocare serioas pentru specia uman [1,2,5,9], iar comunitatea tiinific este chemat s rspund acestei provocri prin meninerea strii de sntate a populaiei n vrst pentru a putea beneficia de rolul pozitiv i experiena pe care aceste persoane le pot avea, fapt subliniat i de programul Healthy People 2020 [4].

n acest context, elaborarea unor programe socio-bio-medicale destinate persoanelor n vrst trebuie s constitue o prioritate a sectorului guvernamental. n termeni tiinifici este impetuos necesar s se identifice biomarkerii relevani ai mbtrnirii, s se descopere inte biologice asupra crora actul medical s fie posibil, avnd ca rezultat reglarea favorabil a acestor mecanisme, mpiedicnd apariia proceselor patologice, accelerarea mbtrnirii, apariia complicaiilor i conferind indivizilor un rol social pozitiv [2].

n mod curent, sntatea este neleas ca fiind nlturarea bolilor, ntr-o manier defensiv fa de procesul patologic i cu costuri sociale i medicale mult mai mari. Ar fi mai eficient meninerea strii de sntate prin mecanisme de prevenie identificate de tiina modern [2,6]. Studiul mecanismelor prin care diveri factori naturali sau medicali pot influena, favorabil sau negativ, procesele de mbtrnire deschide calea conceperii i obinerii de noi produse de care populaia n vrst ar putea beneficia pentru a-i menine starea de sntate un timp mai ndelungat i astfel de a avea un rol social activ i pozitiv pentru cei din jur. Biotehnologii moderne permit astzi obinerea unor geroprotectoare eficiente prin a cror utilizare medical putem obine efectul healthy-aging cutat [2,12].

mbinarea balneoterapiei cu utilizarea produselor cu efect healthy-aging aduc un avantaj semnificativ i reprezint argumentul sustenabilitii proiectului, n contextul n care staiunea balnear reprezint locul ideal pentru aplicarea noilor tratamente.

Peloizii, utilizai n peloidoterapie [8], n tratamentul a numeroase afeciuni reumatismale, endocrine, dermatologice sau ginecologice, datorit numeroaselor aciuni biologice, biochimice, fizice, chimice i fizico-chimice pe care le au n organism, aa cum sunt descrise n literatura de specialitate au reprezentat suportul conceperii unor noi produse geroprotectoare prin combinaie cu procaina, rapamicina sau resveratrolul, utiliznd n acest scop o schem biotehnologic original de obinere a unui extract de nmol sapropelic.

Studii farmacologice preclinice i clinice desfurate de echipa de cercetare a proiectului sunt orientate aplicativ n direcia verificrii caracterului terapeutic al noilor produse dezvoltate, cu efect geroprotector, avnd o relevan practic semnificativ din punct de vedere medical, n cmpul gerontologiei i social, pentru calitatea vieii persoanelor n vrst, dar i a celor ce pot beneficia de experiena lor de via i de ajutorul lor.

Relevana economic a balneologiei i healthy-aging-ului este uor de subliniat n contextul transformrilor socio-economice la nivel naional i mondial, i din acest punct de vedere, expunerea proiectului ine locul argumentelor.

4/87

1.2 Contribuia proiectului raportat la stadiul actual Analiza numeroaselor teorii ale mbtrnirii [2,3] subliniaz mai multe schimbri de

paradigm ale cercettorilor preocupai de acest domeniu, ca o consecin a progresului tiinific i al dezvoltrilor tehnologice aparute treptat [2]. Cercetarea tiinific propus pentru evaluarea terapeutic a noilor produse va avea un caracter aplicativ n domeniul geriatriei i gerontologiei, domenii n care Romnia a jucat un rol important prin descoperirea Gerovitalului de ctre Prof. Ana Aslan.

Daca teoriile timpurii ale mbtrnirii erau centrate pe disfuncii la nivel de organ sau la nivelul sistemic, al organismului, teoriile actuale vizeaz disfuncii la nivelul mecanismelor celulare i moleculare [10]. Astfel de abordri moderne reduc diferenele dintre teoriile existente privind mecanismul mbtrnirii, punctnd elementele lor de complementaritate, lipsind ns la acest moment o teorie integrativ pentru dezvoltarea ontogenetic post-reproductiv care s explice toate procesele sistemice implicate n multitudinea aspectelor legate de mbtrnire [10].

Conceptul ontogenetic post-reproductiv, bazat pe interacii sinergistice i antagonice ale proceselor genetice i filogenetice implicate n reproducere i dezvoltare, presupune o reorganizare a proceselor reglatorii dezvoltate evolutiv i care asigur adaptarea organismului la factori interni i externi, dup consumarea funciei reproductive. Astfel, corectarea i reprogramarea anumitor funcii vine ca o compensaie la pierderea sau alterarea altor procese, cu impact asupra mecanismului de mbtrnire [2,3].

mbtrnirea este un proces degenerativ [11], intens studiat pentru care au fost formulate numeroase teorii [10] ce vizeaz caracterul programat sau non-programat [2,3, 10,13, 44].

Teoriile mbtrnirii programate sunt subdivizate n trei subcategorii conceptuale [2,13,14]: teoria longevitii programate genetic care presupune c mbtrnirea este consecina pornirii sau opririi anumitor gene, fiind inclus aici rolul instabilitii genetice (scurtarea telomerelor) n dinamica proceselor de mbtrnire [14,17]; teoria endocrin conform creia mbtrnirea este guvernat de un ceas biologic a crui funcionare este reglat prin mecanisme endocrine, printre care hormonul de cretere insulin-like IGF-1 joac un rol important [2,3,14]; i teoria imunitii care afirm c sistemul imunitar poate fi programat ctre o descretere a funcionalitii sale imunosenescen, ce va duce la creterea susceptibilitii la boli infecioase, respectiv mbtrnire [15,16,25,26].

Teoriile care pun procesul mbtrnirii pe seama influenei factorilor de mediu [10] interni i externi sunt: teoria uzurii i distrugerii conform creia celulele i esuturile devin uzate n timp [2,14]; teoria nivelului vital al activitii care afirm c un nivel ridicat al metabolismului bazal conduce spre o scurtare a vieii organismului [2,14]; teoria cross-linking conform creia interschimbul chimic cumulat al macromoleculelor importante, printre care i colagenul, determin mbtrnirea [2,14]; teoria distrugerii ADN-ului somatic [47] prin care se consider c mbtrnirea rezult din degradarea integritii genetice a celulelor somatice ca rezultat al mutaiilor, nregistrate att la nivelul nucleului ct i la nivelul mitocondriei [2,13,14,44]; i teoria radicalilor liberi care stipuleaz c superoxidul i ali radicali liberi distrug componente moleculare ale celulelor i altereaz astfel funcionarea normal a acestora [11].

Speciile reactive ale oxigenului (ROS) sunt probabil cei mai importani radicali liberi cu implicaii majore n distrugerea, mbtrnirea celulelor i a organismului [19,20]. Teoria radicalilor liberi este la momentul actual cea mai acceptat explicaie a mbtrnirii [19], dei, un set de date recente obinute pe oareci mutani transgenici Sod2+/- sau Mclk1+/- infirm dogma central a teoriei [11]. n 1957 Harman a avansat ipoteza c un proces general de acumulare a radicalilor liberi de oxigen afecteaz negativ factori ai mediului intern i modific factori genetici, mecanism fcut responsabil pentru mbtrnirea i moartea tuturor vieuitoarelor. Teorie a fost revizuit n 1972 cnd s-a artat c mitocondria este principalul sediu al unor reacii chimice care genereaz radicali liberi.

Considernd mbtrnirea ca fiind o scdere gradual a reglajului funcional al unor procese biologice multifactoriale complexe, genotipul individului are sigur un impact asupra ratei de mbtrnire. Cu toate acestea, nu sunt identificai markeri genetici ai procesului de mbtrnire, dei n ultimii 20 de ani au fost fcute eforturi susinute [11,12,18].

5/87

Caracterizarea ratei de mbtrnire a organismului implic existena conceptului de biomarker al mbtrnirii [21,24,27], definit ca parametru biologic cantitativ sau calitativ care permite predicia statusului funcional al organismului la un anumit moment al existenei sale [22,24]. n acest context, specialitii din domeniu propun parametrii care vizeaz vrsta sistemului nervos, a celui cardiovascular, respirator sau excretor, i chiar avanseaz propuneri pentru estimarea vrstei biologice a celulei. La om, palierul vrstei biologice este surclasat de cel al vrstei psihologice, al vrstei intelectuale i al vrstei sociale.

Combinarea specific a unor parametrii considerai biomarkeri ai procesului de mbtrnire i utilizarea indicelui de refracie ca parametru optic pentru evaluarea statusului biologic al organismului, interpretarea matematic a datelor prin utilizarea unei metode de analiz a datelor bioclinice, dezvoltat de membrii ai echipei de cercetare, ne determin s considerm c eforturile noastre n identificarea setului optim de biomarkeri va reprezenta un reper pentru cercetare tiinific n domeniul gerontologiei.

Mai muli autori au discutat despre criteriile necesare pentru alegerea unor biomarkeri ai mbtrnirii, fiind subliniate urmtoarele puncte critice pe care s le ndeplineasc [23]: predicia ratei de mbtrnire i a longevitii, monitorizarea cantitativ a calitii biologice a organismului prin parametrii a cror determinare s nu lezeze integritatea acestuia, datele obinute trebuind s fie reproductibile i comparabile pentru diferite specii de animale de laborator i cu relevan pentru organismul uman [23,25,27,28].

Printre principalii markeri utilizai n predicia vrstei biologice i a longevitii, Federaia American de Cercetare n mbtrnire propune ca set de biomarkeri ai mbtrnirii [27]: presiunea sistolic i diastolic, nivelul pulsului n repaus, nivelul colesterolului total, HDL i LDL colesterolului, nivelul lipidelor, glicemia, indicele de mas corporal [26], indicele obezitii abdominale, nivelul limfocitelor T, nivelul cortizolului i electrocardiograma.

Indicele suprasolicitrii alostatice [23] propus de McEwan i Stellar n 1993 denot rspunsul disfuncional al organismului la stresul cronic i relev nivelul hormonal crescut al adrenalinei, noradrenalinei i dopaminei [2]. Acest indice a fost utilizat de Karlamangla i colaboratorii si ntr-un studiu recent asupra ratei de mortalitate la persoanele cu vrsta de peste 70 de ani, urmrite pe o durat de 4,5 ani. Pacienii cu un indice de suprasolicitare alostatic crescut prezint un risc de mortalitate mult mai mare. Astfel, studiul concluzioneaz c o cretere unitar a indicelui de suprasolicitare alostatic (situat normal ntre 1,7 i +1,4) duce la o cretere a mortalitii msurate pe intervalul de 4,5 ani de 3,3 ori.

Aa numitul protocol matriceal [2] al biomarkerilor mbtrnirii utilizat de Institutul Internaional al Longevitii Montclair (New Jersy) determin rata de mbtrnire pe 4 nivele:

I) funcionalitatea general a organismului msurat prin raportul dintre greutate i nivelul de grsime, flexibilitate, andurana aerobic, densitatea osoas, latena reaciei tactile, volumul expiraiei forate, vedere i auz [27];

II) funcionarea la nivel celular monitorizat la nivelul pielii prin determinarea modificrilor citoarhitecturale ale membranei bazale, turn-overul epidermal, arhitectura glandelor sebacee, schimbri microvasculare, raportul colagenului, elasticitatea fibrelor [28];

III) nivelul molecular ia n considerare nivelul hormonului de cretere i al celui tiroidian, al coenzimei Q10, sensibilitatea la insulin, nivelul proteinelor de oc termic, nivelul oncogenelor din snge, nivelul seric al antioxidanilor [25];

IV) la nivel ADN sunt studiate poziia i dimensiunea telomerelor (stabilite la nivelul leucocitelor) i nivelul de acumulare al mutaiilor la nivelul materialului genetic.

Cercettorii de la Institutul Internaional al Longevitii lucreaz n prezent la un nou test biochimic de laborator care s reflecte nivelul de deteriorare al ADN i care s aduc predicii fundamentate tiinific privind valoarea terapeutic a interveniilor anti-aging prin prisma modificrilor mutaionale survenite la nivelul materialului genetic somatic [2, 28, 29].

Deteriorarea telomerelor poate fi evaluat indirect prin msurarea unor biomarkeri ce se coreleaz cu scurtarea acestora [28]. Astfel, Jiang i Rudolph au analizat mecanismul scurtrii telomerelor i rata mbtrnirii la mai multe organe i esuturi, identificnd 4 proteine a cror expresie crete n relaie cu scurtarea telomerelor, fiind vorba de: Cathelcidine din lizozomii macrofagelor i leucocitelor polimorfonucleare, activate de infecia bacterian; Chitinaza 3-like3 (Chi 3L3) care particip la iniierea rspunsului imun; Factorul de elongaie 1 (EF-1 )

6/87

care controleaz sinteza proteinelor la fibroblastele umane i Stathminele care dirijeaz stabilitatea microtubulilor intracelulari, motilitatea celular i mitozele [2].

Conceptul stresului oxidativ cauzat de radicalii liberi sau de sistemele generatoare de astfel de radicali n concentraii ce exced capacitatea antioxidant de aprare, reprezint fundamentul lurii n considerare ca biomarkeri ai mbtrnirii, indicatorii fiziologici i moleculari ai stresului oxidativ. Proteinele carbonilate reprezint, n acest context, un exemplu de utilizare a indicatorilor stresului oxidativ ca biomarkeri ai mbtrnirii [2, 25].

Mai muli oameni de tiin consider acumularea proteinelor carbonilate n membrana eritrocitar ca un marker indirect al mbtrnirii, iar potenialul antioxidant fero-reductor (FRAP) din plasma sangvin ca un indicator al capacitii de protecie antioxidant a organismului [2]. Nivelul activitii oxidative i reductoare a enzimelor ce acioneaz asupra glutationului, thioredoxinei i a altor substrane de interes n oxido-reducere, reflect nu numai nivelul proteciei antioxidative ci probabil sunt biomarkeri relevani pentru rata de mbtrnire.

S-a sugerat c microheteroplasmia ar putea explica unele dintre mecanismele patologice legate de mbtrnire: diabetul, bolile cardiovasculare, Parkinson, Alzheimer, cancer [2,23].

Elementele genetice mobile au fost propuse ca i componente ale instabilitii genetice i pe aceste considerente ca factori ai senescenei celulare pentru numeroase specii, cu efecte ce includ dereglarea expresiei genetice i a dereglrilor corelate cu vrsta n fiziologia celular, blocarea creterii celulare i eventual moartea celular sau transformarea blastic. Conform acestor ipoteze, mbtrnirea este corelat la nivel celular cu activitatea traspozonic, prin care copia unei secvene ADN rmne la locul su prestabilit n nucleu, n vreme ce a doua copie, numit transpozon, se poate muta n diferite locaii n genom [2].

Coenzimele NADH i FADH componente critice ale transportului energetic la nivel mitocondrial pot reprezenta, prin nivelul exprimrii lor, biomarkeri ai activitii mitocondriale i indirect ai senescenei i vrstei organismului [2].

Proteinele de oc termic (HSP) sunt ali biomarkeri ai proceselor de mbtrnire, existnd studii care arat c modificarea exprimrii acestor proteine se coreleaz cu modificri ale longevitii, descrise experimental la Caenorhabditis elegans [2].

Apolipoproteinele sintetizate la nivelul ficatului i intestinului sunt implicate n transportul colesterolului i al trigliceridelor n snge, fiind considerate predictori mult mai elocveni ai decesului cauzat de boli cardiace coronariene [23]. n particular, apolipoproteina A1 ce transporta HDL- colesterolul prezint o corelaie invers cu riscul decesului prin boala cardiac coronarian, un nivel crescut fiind asociat cu un risc sczut, n vreme ce apolipoproteina B, responsabil pentru transportul LDL- colesterolului are o corelaie direct, nivelul crescut indicnd un risc ridicat de deces. Raportul celor dou apolipoproteine este prin urmare un indicator relevant i pentru rata de mbtrnire [23].

Interleukina 6 IL6 este o citokin multifuncional ce joac un rol important n faza acut a inflamaiei. Dei n mod normal, n absena unei inflamaii nu poate fi detectat n probele de snge, cu trecerea timpului prin pierderea reglajului exprimrii sale nivelul exprimrii crete n corelaie cu vrsta [22,23].

Hormonul de cretere, secretat de glanda pituitar are un nivel n scdere n raport cu vrsta organismului, fiind nregistrat o scdere de 14% la fiecare decad dup vrsta de 20-25 de ani i ajungnd la jumtate n jurul vrstei de 60 de ani [2,21,22,26].

Msurarea indicelui de refracie al unei probe biologice [96] reprezint un parametru optic relevant, utilizat n diagnostic i tratament [95], fiind un indicator al variaiei nivelului de hidratare, al vrstei biologice a probei sau a nivelului disfunciilor intracelulare [93]. Indicele de refracie msurat la nivelul serului obolanilor Wistar prezint o dependen de timp, fiind msurat o cretere de la 1,34136, la natere, la 1,35175 la maturitate (250g) [94]. Indicele de refracie efectiv al unei singure celule [101] este determinat de indicele de refracie al constituenilor celulari i determinarea acestuia ne furnizeaz date privind dimensiunea i volumul celular, volumul nucleului, instalarea anumitor disfuncii la nivel celular [97,99,100].

Utilizarea relaiilor Kramers-Kronig permit cuantificarea schimbrilor n dependen de timp a indicelui de refracie pornind de la msurarea reflectanei probelor ce poate fi realizat att la nivelul probelor biologice de tip ser sau mediu de cultur [99] ct i la nivelul tegumentului [98]. Prin urmare vom putea considera un biomarker al mbtrnirii indicele de refracie al serului

7/87

sangvin i la nivelul tegumentului i vom corela aplicarea tratamentelor dezvoltate n cadrul proiectului cu modificarea acestui indice.

Posibilitatea extensiei duratei de via a fost demonstrat experimental pentru numeroase substane geroprotectoare, printre care: antioxidani [75], latirogene, ageni chelatori (carnosina [53]), adaptogene, neurotrope, inhibitori monoamino-oxidazici, dehidroepiandrosteron, hormoni sexuali, hormonul de cretere, melatonin [50], preparate din glanda pineal, inhibitori proteazici, ageni antidiabetici, hormoni timici, imunomodulatori, mimetice pentru superoxid dismutaz i catalaz, enterosorbeni etc. [47]. Potrivit mai multor autori, nu exist ns geroprotectoare cu efect anti-aging cu eficien indiscutabil, dovedit tiinific, existnd nu puine cazuri de substane presupus geroprotectoare al cror efecte pe termen lung s-au dovedit greu de prevzut iniial [2].

n ultimii ani, un nou domeniu din cadrul gerontologiei capt importan, cel al studierii mecanismelor denumite HORMESIS, prin care substane considerate toxice sau foarte nocive, n doze subliminale pot avea efecte geroprotectoare, fiind numeroase investigaii tiinifice iniiate n acest sens n prezent [2,35].

Reducerea aportului caloric s-a dovedit experimental a fi un comportament anti-aging cert [31,58]. Cercetnd mecanismele prin care reducerea aportului caloric influneaz rata de senescen i longevitatea pe animale experimentale [82], cercettorii au corelat acest comportament impus cu reducerea nivelului plasmatic al insulinei [81], creterea sensibilitii receptorilor insulinici, scderea temperaturii corpului, a nivelului colesterolului, trigliceridelor, alfa-lipoproteinelor, presiunii sangvine i o cretere a HDL - colesterolului. Reglarea tuturor acestor procese este corelat experimental cu expresia unor gene numite sirtuine existente filogenetic de la drojdii i pn la om [39]. Sirtuinele sunt enzime de tipul deacetilazei i ADP-riboziltransferazei, al cror nume deriv de la Saccharomyces cerevisiae, unde au fost descoperite. La mamifere familia sirtuinelor este compus din 7 asemenea gene, denumite Sirt1 pn la Sirt7. Cercetri recente caut s identifice rolul acestora n fiziologia celular i mecanisme sau ageni moleculari prin care se poate influena activitatea lor [31,32].

n anul 2011 au fost descrise la nivel global 30 de substane cu proprieti geroprotectoare, printre care merit menionate, alturi de Gerovital produsul geroprotector romnesc preparat de Prof. Ana Aslan n 1951, avnd la baz anestezicul Procain, Resveratrolul i ali polifenoli de origine vegetal [30], Rapamicina, Antioxidani (Vitaminele A, C i E, carotenoidele, acidul lipoic, coenzima Q, seleniu etc.), hormoni (GH, hormoni tiroidieni, hormoni adrenalinici i sexuali, melatonina [50]), peptide bioregulatoare (timalin, epithalmin), biguanide (metformin, fenformin) [77], adaptogene (ginseng [48]).

Sirolimus sau Rapamicina, descris ca imunodepresiv i medicament antitumoral s-a dovedit a fi i un medicament anti-aging [41] al crui int este la drojdii gena TOR [43], iar la mamifere, corespondentul su, gena mTOR, cunoscut i ca factorul FK506 sau FRAP1, o serin/treonin kinaz ce regleaz creterea celular, viabilitatea, mobilitatea, sinteza proteic i transcripia genic [31,45, 78]. Rapamicina, conform unor studii recente, poate aciona preventiv n ateroscleroz, hipertonie i hipercoagulare, prevenind astfel infarctul miocardic, accidentele cardiovasculare, osteoporoza, cancerul, bolile autoimune, artrita, diabetul adipos, Alzheimer i Parkinson [31,42,45].

Datele din literatura de specialitate arat c biguanidele, n special metformina [56,77], utilizate n terapia diabetului de tip 2, datorit capacitii lor de a inhiba gluconeogeneza i de a determina creterea sensibilitii la insulin, pot avea i efecte geroprotectoare [56].

2 Deoxiglucoza [78] este un analog pentru glucoz care absorbit de celule determin inhibarea glucozei, rezultnd scderea metabolismului energetic celular, situaie ce mimez restricia caloric. Datele privind geroprotectecia acestei substane nu sunt ns relevante.

Antioxidanii precum: -tocoferol, acidul ascorbic, retinolul, ubiquinona, seleniu, ca i compui endogenici sau numeroasele molecule sintetice intervin n balana oxidativ [87].

Resveratrolul este cel mai cunoscut geroprotector actual, descoperit din 2003, prezent n concentraii ridicate n epicarpul seminelor i tulpina strugurilor i subsecvent n vinul rou [30,33], pentru care, printre altele i Romnia este renumit i specificat n colecii, sau n rdcinile de Polygonum cuspidatum [2]. Este o fitoalexin natural utilizat de anumite plante n mecanismul de aprare mpotriva unor patogeni de tipul bacteriilor i ciupercilor, intens

8/87

studiat n prezent i care poate influena nivelul exprimrii sirtuinelor [35,37]. De la descoperire, n 2003, i pn azi au fost nregistrate peste 2000 de studii experimentale n lume asupra resveratrolului, existnd laboratoare focalizate pe studiul acestei substane [2].

Studii preclinice asupra resveratrolului au demonstrat o cretere a longevitii la S. cerevisiae de 70% prin cultivarea pe un mediu ce conine 10 mM resveratrol, de 20% la C. elegans, de 29% la Drosophila melanogaster prin tratament cu 100 mM resveratrol [39,40].

n studii pe oareci de laborator, resveratrolul n doze n jur de 20 mg/kg a determinat o scdere statistic semnificativ a unor parametrii corelai cu vrsta: albuminuria, nivelul inflamator, apoptoza endoteliului vascular, descreterea elasticitii aortei, incidena cataractei, etc, fiind nregistrate inclusiv date privind scderea instabilitii genetice [2].

Pe culturi de fibroblaste umane MRC5, resveratrolul n concentraie de 5 m a indus o protecie semnificativ a deteriorrii oxidative a ADN, mpiedicnd creterea volumului nuclear, reducerea generrii formelor acetilate ale histonelor H3 i H4 i al proteinei p53. ntr-un alt studiu pe fibroblaste umane, utilizarea unei concentraii de 10 m i 25 m au fost obinute date care susin ntrzierea apariiei modificrilor morfologice la nivel celular corelate cu vrsta [2].

Se presupune c polifenolii de tipul resveratrolului inhib senescena la nivel celular prin activarea unor gene de tipul p53 i AKT [39], sirtuinelor sau inhibarea altora, precum mTOR [46]. Acestea influneaz diferite ci de semnalizare intracelular prin care sunt controlate expresia unor gene implicate n creterea celular, proliferare i viabilitatea celular [34].

Studii clinice privind aciunea resveratrolului n oncologie ce au utilizat o form comercial a resveratrolului denumit SRT501, au artat o cretere cu 39% a apoptozei celulelor maligne la pacieni cu cancer colorectal metastatic [2].

Efectele neuroprotective ale resveratrolului [30,35] au fost descrise experimental n studii pe oareci de laborator i au fost explicate de cercettori prin efectul resveratrolului de cretere a nivelului cisteinei care poate proteja celulele de stresul oxidativ prin controlul precursorilor proteici ai plcii amilazice [38]. Resveratrolul acioneaz i asupra mangan-superoxid dismutazei (MnSOD), un grup de enzime ce degradeaz moleculele de superoxid generate metabolic, avnd prin urmare efect antioxidant [80].

Efectul cardioprotectiv al resveratrolului [30,36], ca de altfel i al altor antioxidani polifenolici precum quercetina sau catechinele, a fost observat prin studii in vitro care au artat o reducere a apoptozei cardiomiocitelor prin scderea nivelului caspazei-3 i a altor citokine, printre care: NF-kB2, E selectine, troponina sau TNF- [2].

Resveratrolul are de asemenea efect antiinflamator [30,33], determinnd scderea activitii ciclo-oxigenazei, cu rol cheie n sinteza altor citokine precum IL17.

Ipoteza utilizrii antidiabetice a resveratrolului [30] se explic prin activarea SIRT1 i creterea subsecvent a sensibilitii la insulin [32], mbuntirea microcirculaiei i a funcionrii nervilor periferici [2].

Resveratrolul acioneaz i asupra mecanismelor celulare implicate n foto-mbtrnirea corelat cu aciunea razelor UV, ce includ MAP-kinazele, factorul nuclear NF-kB i metaloproteinele matriceale. Aplicaii externe ale resveratrolului la modelul de oarece fr pr SKH-1 anterior expunerii la ultraviolete, au determinat o reducere semnificativ a proliferrii celulare, protecia mARN i a fosforilrii [30].

Farmacologia resveratrolului [34] este ns marcat de o serie de limitri, avnd o solubilitate sczut n ap i consecvent o biodisponibilitate i o stabilitate sczute, fiind oxidat cu uurin n prezena luminii sau cldurii. Exist chiar i date care contrazic faptul c resveratrolul ar determina extensia longevitii, obinute pe Drosophila melanogaster i C. elegans diseminate de unii autori [36].

Printre multitudinea de hormoni care au efecte geroprotectoare [49] amintite anterior, relevan mai mare pentru acest proiect au substanele cu aciune similar hormonilor sexuali. Substane de tipul estrogen-like, testosteron-like, care stimuleaz sau care inhib diverse mecanisme neuroendocrine [49] sunt depistate n componena organic a nmolurilor terapeutice, iar activitatea lor geroprotectiv este intens studiat n prezent.

Nivelul seric al testosteronului scade gradual odat cu naintarea n vrst ceea ce detemin o atrofie muscular treptat, oboseal, osteoporoz, reducerea funciei sexuale i

9/87

creterea nivelului grsimilor, toate aceste putnd fi combtute prin administrarea de testosteron [22], ceea ce are ca efect, pe lng o restabilire a nivelului lipidic i o scdere a concentraiei glucozei plasmatice n corelaie cu creterea sensibilitii la insulin.

Ultima jumtate de secol a permis ca urmare a numeroase rezultate tiinifice, utilizarea estrogenului la femeile aflate la menopauz pentru a preveni semnele mbtrnirii, printre care osteoporoza, bolile cardiovasculare, scderea funciilor sexuale i cognitive [52].

Cu toate acestea, entuziasmul a fost estompat de publicarea recent a rezultatelor unor studii care arat i riscurile utilizrii estrogenului, printre care cancerul de sn, embolismul pulmonar, accidentul vascular cerebral i boala cardiac coronarian. n acest context putem discuta de importana fitoestrogenilor i al substanelor estrogen-like din componena peloizilor, a cror efecte nu ating valoarea riscurilor menionate [2, 55].

Investigarea efectelor fiziologice ale procainei, un anestezic [79,83,54] din compoziia gerovitalului, pe culturi de neuroni de albin, a artat c aceasta acioneaz asupra unor canale de Na+ voltaj-dependente sau ligand-dependente [51].

Procaina are cunoscute proprieti neuroprotective, mpiedicnd formarea plcilor amiloide i prezervnd depleia ATP, cel mai probabil prin inhibiia efectului neurotoxic al glutamatului, aa cum a fost artat pe culturi de celule PC12 de obolan [76].

Procaina este utilizat n cardioplegie i n stabilizarea ritmului cardiac postischemic dup decompensarea aortic n chirurgia cardiac [84]. Efectele anti-aterogenice ale gerovitalului i aslavitalului au fost confirmate prin studii recente privind oxidarea LDL i inhibarea generrii radicalilor superoxid, avnd prin urmare proprieti antioxidante prin care interfer cu mecanismele celulare i moleculare ale mbtrnirii [85,86].

Cantitatea de clorhidrat de procain din Gerovital H3 drajeuri / fiole (i Aslavital H3 drajeuri / fiole) este de 100 mg, la care se adaug 6 mg acid benzoic, 5 mg metabisulfit de potasiu i 0,5 mg fosfat de sodiu bifazic. Tratamentul de prevenie presupune administrarea de 2 drajeuri / zi la 2-3 ore dup mese, timp de 12 zile. Tratamentul se reia dup o pauz de o lun. Parenteral de 3 ori pe sptmn timp de 4 sptmni. Tratamentul se reia dup o pauz de 1-2 luni. Se recomand tratamentul asociat 4 sptmni injecii (12 fiole), pauz 30 zile dup care urmeaz un tratament de 12 zile cu drajeuri. Dup 24 de zile se poate ncepe o nou serie de tratament.

tiut fiind c faza lichid a nmolului este o soluie hiperton de substane minerale, substane organice humice, bituminoase, hidrai de carbon, peptone, aminoacizi i enzime, V.D. Narti propunea, nc din 1957 folosirea soluiilor naturale din aceste nmoluri terapeutice, pe lng procedurile clasice cu nmol. Soluia preconizat de Narti PELOIDEXTRACT era extras prin filtrarea sub presiunea de 6-12 atmosfere din gaz inert (CO2). Soluia astfel obinut din nmolul de Techirghiol este un lichid clar, limpede, stabil, cu densitatea de 1062 la 210C, cu un pH alcalin de 7,6-8, coninnd substane minerale ntr-un raport cantitativ al ionilor minerali foarte apropiat de cel al serului sangvin, cu excepia SO42- i Mg2+, care sunt n exces; soluia natural ar fi o soluie hiperton de 10 ori mai concentrat dect serul sanguin.

Prin hipertonia lui, prin pH-ul alcalin, prin aminoacizii i enzimele coninute, peloidextractul favorizeaz schimburile de membran locale, reduce procesele congestive, acidozice, uureaz resorbia exudatelor, iar prin enzime i hormoni grbete procesul eutrofic local, de desensibilizare general, de imunizare i de echilibrare neuro-endocrino-metabolic [8].

Brevetul de invenie nr. 116867 B din 03.06.1996 solicitat de S.C. BIOTEHNOS S.A. Bucureti descrie un peloidextract ce are la baz nmolul sapropelic din lacul Techirghiol, caracterizat sub forma unui lichid de culoare uor glbuie, slab opalescent, fr miros, cu sruri totale: 116,4- 118,3 g/l, reziduu mineral 75-80 g/l, Na+ 24,3-25,0 g/l, K+ 0,7-0,9 g/l, Ca2+ 0,08 0,19 g/l, Mg2+ 2,9-3,4 g/l, HCO3- 0,2-0,65 g/l, Cl- 39,4-41,4 g/l, SO42- 7,1-10,9g/l, glucide, lipide i proteine la limita de detecie i o activitate antihialuronidazic de minimum 30UI/ml.

Brevetul de invenie nr. 118630 B1 din 19.08.1996 solicitat de S.C. BIOTEHNOS S.A. Bucureti descrie un unguent antireumatic care conine 40-46,3 pri soluie peloidextract ce are la baz nmolul sapropelic din lacul Techirghiol, de concentraie 10% substan uscat, 1-2 pri camfor, 0,5-1 pri metanol, 15-20 pri alcool cetilic, 10-15 pri vaselin, 10-15 pri glicerin, 5-7 pri tween 80, 0,1-0,15 pri conservant reprezentat de amestec 3:1 nipagin-nipasol i ap distilat pn la 100 pri, prile fiind exprimate n greutate.

10/87

Brevetul de invenie nr. RO126911A0 din 11.07.2011 solicitat de Stan Viorel Adrian descrie compoziia de masc facial cu nmol de Techirghiol. Compoziia, conform inveniei cuprinde 3% nmol sapropelic extras din lacul Techirghiol, 1% gum din Ceratonia siliqua, 0,5 % suc din frunze de Aloe barbadensis, mpreun cu ingredientele i excipienii uzuali. Aceast compoziie, o emulsie de culoare gri antracit poate fi utilizat pentru un tratament periodic de rennoire, ntinerire i luminozitate a pielii feei pe baza de nmol sapropelic extras din Lacul Techirghiol i de extracte vegetale.

Brevetul de invenie nr. RO126913A0 din 11.07.2011 solicitat de Stan Viorel Adrian descrie compoziia unei creme pentru masaj corporal cu ap i nmol de Techirghiol. Compoziia, conform inveniei cuprinde 32 % nmol sapropelic extras din lacul Techirghiol, 0,5 % extract glicolic din ghimbir, 0,5 % extract glicolic din frunze de rozmarin i 0,5 % complex organic pe baza de iod, mpreun cu ingredientele i excipienii uzuali. Avantajele asocierii nmolului extras din lacul Techirghiol cu extractele vegetale obinute din ghimbir i rozmarin, conform inveniei au un caracter att farmaceutic ct i cosmetic prin urmtoarele efecte: antireumatice, antiastenice, cu proprieti sinergice n afeciunile inflamatorii i artromusculare, combaterea depunerilor inestetice de grsime i relaxarea esutului.

Peloidextractul se prezint sub form de pulbere alb, amorf, cu proprieti antiinflamatoare, antiseptice i anticongestive, avnd un pH cuprins ntre 7,6 i 7,8, un rH de 8,2 i o densitate de 2,011, avnd n compoziie 53,178% substane minerale insolubile n ap care cuprind 0,2172 % silicat de magneziu, 0,54% silicat de calciu, 0,03% silicat de fier i 1,74% silicat de aluminiu. Extractul natural de nmol sapropelic este un complex mineral-organic i enzimatic cu proprietai biotrofice, regeneratoare, antiinflamatoare, analgetice, sedative i vasodilatatoare demonstrate att experimental ct i n cercetri clinice.

Produsele farmaceutice se bazeaz pe un extract total al nmolului, rareori acesta fiind fracionat. Astfel, exist preparate de uz cosmetic pentru care compuii activi din nmol sunt extrai utiliznd amestecuri de parafin/etanol/dimeticon sau un amestec de ap/etanol ori unul coninnd ap/etanol/glicerin/propilen glicol [119].

Pentru tratamentul celulitei extractul de nmol este amestecat sub form de crem cu extracte vegetale i substane bioactive [120]. n cazul psoriazisului, dermatitei seboreice i atopice, eczemelor i arsurilor de gradul I se utilizeaz o crem coninnd 1-6% suspensie de nmol ca i ingredient activ [121]. De asemenea, suspensia de nmol se poate folosi i pentru crearea unor bandaje cu aplicare cutanat [122, 123].

Nmolul este compus din substane humice, pectine, celuloz i lignine, ceruri, rini i material anorganic [124], alturi de acestea fiind identificai i alcani, acid 4 fenil valeric, acid 5 isopentil picolinic, acid 3 hidroxilauric, (5, 3) 3-hidroxi-11-androstanon, 5-2-en-11 androstenon, scualen, terpineol, derivai ai mentolului, acid palmitic, oleic i eicosanoic, precum i izoprenoid fitan [125].

Compuii humici joac rol n reaciile de oxido-reducere, absorbie, complexare i transport al substanelor, susinnd structura i formarea nmolului i controlul biogeochimiei carbonului in ecosisteme [126]. Compuii humici pot fi clasificai n 3 fraciuni n funcie de solubilitatea n ap la diferite valori de pH. Acizii humici sunt fracia solubil n soluii alcaline, acizii fulvici reprezint fracia solubil n ap indiferent de pH, iar humina este fracia insolubil n ap [127,128].

Acizii humici sunt compui cu masa molecular ntre 10.000 i 100.000, coninnd structuri aromatice, atomi de azot n structuri ciclice, resturi alifatice i peptidice. Acizii humici conin 56% C, 5.5% H, 4% N i 33% O, principalele grupri funcionale prezente fiind COOH, OH fenolic i alcoolic, i grupri cetonice [129]. Acizii humici au efect astringent, agonist asupra receptorilor adrenalinici i dopaminici, antialergic, antibacterial, anticoagulant, antiinflamator, antiviral, estrogenic, hemostatic, hiperemic, UVB-protector [123] i sunt ageni chelatori ai metalelor grele [129,130,131]. La obolanii tratai cu nmol natural sau cu acizi humici extrai din nmol s-a observat scderea colesterolului total, lipidelor totale i a glicemiei i o cretere a LDH, imunoglobulinelor, eritrocitelor, hemoglobinei i hematocritului [132]. Acizii humici pot fi extrai i purificai utiliznd metoda pe baz de pirofosfat-NaOH [128,133,134,137] sau lichide ionice cum ar fi dimetil amoniu dimetilcarbamatul i clorura de 1-butil-3-metilimidazol [136].

11/87

Acizii fulvici sunt substane oxidate caracterizate prin structuri aromatice cu lanuri alifatice laterale extinse avnd un coninut de azot mai sczut n comparaie cu acizii humici [127]. Acizii fulvici au efect antialergic [137,138], antioxidant [139], antimicrobian [140], reduce rspunsul imun cutanat [141], antitumoral [142], antiseptic [143] acionnd n mediu acid prin inhibarea respiraiei mitocondriale la Candida utilis [144], fiind utilizai i n tratamentul eczemelor [145], au proprieti antiulcerogenice [146] i procognitive putnd fi utilizai n tratamentul bolii Alzheimer [147], n doze mici neaprnd efecte adverse asupra organismului [148]. Conform metodei Societii Internaionale a Substanelor Humice [149], acizii fulvici sunt separai din supernatantul acidifiat al extrasului alcalin de nmol folosind rinile pe baz de polimetil metacrilat DAX-8 [150] sau XAD-8 [151] pe baza interaciilor hidrofobe dintre acizii fulvici i aceste rini. Ali schimbtori de ioni utilizai la separarea acizilor fulvici sunt polivinilpyrolidona i dietilaminoetil celuloza [152]. De asemenea, acizii fulvici pot fi separai prin formarea de perechi ionice cu ageni tensioactivi de suprafa cationici precum bromura de cetiltrimetilamoniu, de dodeciletildimetilamoniu sau clorura de benzildimetilhexadecilamoniu [153].

Fracia lipidic din nmol este definit ca fiind materia organic insolubil n ap i care poate fi solubilizat i extras folosind solveni organici nepolari precum hexan, benzen, cloroform, eter [154]. Aceasta este n proporie de 0,2-5% din nmol i include acizi grai, steroli, terpene, hidrocarburi, clorofil, grsimi, ceruri i rini [155].

Lipidele din nmol pot fi extrase prin metoda Soxhlet utiliznd un amestec de benzen/metanol [156] sau de diclorometan/metanol [157] ori prin metoda Bligh-Dyer cu un amestec de cloroform/metanol [158].

O alt fracie din nmol de interes terapeutic o constituie proteinele hidrolizabile, aminoacizii, enzimele (amilaza (EC 3.2.1), arilsulfataza (EC 3.1.6.1), b-glucozidaza, celulaza (EC 3.2.1.4), chitinaza, dehidrogenaze, fosfataze (EC 3.1.3), proteaza, ureaza) i carbohidraii [159], acestea fiind eliberate din complexul cu substanele humice prin hidroliz acid [160] i concentrate prin osmoz invers [161,162].

Combinarea n varianta optim a fraciilor de nmol obinute va duce la obinerea extractului de nmol ce va fi utilizat pentru obinerea noilor produse healthy-aging prin adugarea resveratrolului, procainei sau rapamicinei.

Rezultatele experimentale ce vor fi obinute vor stabili direcia viitoare de punere pe pia a produselor dezvoltate n cadrul priectului i vor demonstra practic utilitatea lor ca geroprotectoare, a cror eficien terapeutic urmeaz s fie testat prin studii pe animale de laborator, prin studii experimentale la nivel celular i molecular i prin studii clinice derulate cu suportul principalilor actori instituionali din domeniul tiinific i medical din Bucureti, Iai, Constana i Cluj, acoperind astfel o problematic relevant i avnd o susinere naional.

1.3 Obiectivele i rezultatele proiectului Proiectul vizeaz obinerea, caracterizarea i cercetarea efectelor terapeutice pentru

patentarea i autorizarea punerii pe pia a unui nou produs geroprotector, inclus n viitoarea gama PELOVITAL, dezvoltat prin combinaia inovatoare dintre extractul peloidului din lacul Techirghiol i una din principalele 3 molecule geroprotectoare, intens studiate la nivel mondial: resveratrol, rapamicin sau procain.

Obiectivele proiectului vor fi: Obinerea i caracterizarea unui peloidextract din nmolul de Techirghiol utilizat n

prezent n activitatea balneoterapeutic; Combinarea noului extract de nmol cu procain, rapamicin i resveratrol pentru

obinerea unor noi geroprotectoare cu eficien terapeutic superioar; Analiza farmacodinamic, elaborarea i optimizarea metodelor terapeutice de

utilizare a noilor produse healthy-aging; Elucidarea mecanismelor terapeutice prin care noile produse influeneaz starea de

sntate i procesul de mbtrnire; Stabilirea eficienei clinice a noilor produse i a metodelor terapeutice dezvoltate n

cadrul proiectului.

12/87

Conceptul proiectului este cel de a obine i testa clinic un nou produs inclus n viitoarea gama PELOVITAL, cu aciune geroprotectoare care utilizeaz ca substan activ resveratrolul, rapamicina sau procaina, a cror biodisponibilitate i eficien terapeutic poate fi crescut prin sinergismul cu fracia lipidic, a acizilor humici, a acizilor fulvici, a aminoacizilor sau a carbohidrailor din compoziia inovatoare a peloidextractului.

Din punct de vedere experimental vom urmri farmacocinetic i farmacodinamic, pe animale de laborator i pe culturi celulare, efectele biologice a mai multor combinaii posibile ale peloidextractului obinut din nmolul de Techirghiol cu resveratrolul, rapamicina i procaina, urmnd ca dup acest etap, produsul cel mai eficient s treac n faza de testare clinic.

1.4 Originalitatea i contribuia inovativ a proiectului Originalitatea i contribuia inovativ a proiectului are n vedere mai multe componente: obinerea unui extract de nmol sapropelic printr-o metod original, pur din punct de

vedere microbiologic, diferit de cele brevetate pn n prezent de ali autori i descrise n referina: Nmolul terapeutic a directorului de proiect;

combinarea n produse inovatoare noi, dezvoltate n cadrul proiectului, a extractului de nmol cu substane cunoscute pentru efectul lor geroprotector (resveratrol, rapamicin i procain), a cror eficien poate fi crescut substanial datorit componentelor minerale i organice ale peloidului, utilizat n domeniul balnear pentru tratamentul mai multor afeciuni reumatismale, neurologice, endocrine i dermatologice;

conceperea i dezvoltarea unui model matematic pentru evaluarea statusului biologic al organismului, al ratei de mbtrnire i stabilirea prognosticului de longevitate prin intermediul unui indice biologic dezvoltat n cadrul proiectului i exprimat ca rezultat al unei funcii matematice cu elemente de ponderaie aplicate datelor biologice obinute experimental;

stabilirea unor criterii de selectare a biomarkerilor procesului de mbtrnire n baza analizei datelor din literatura de specialitate;

includerea indicelui de refracie a serului sangvin ca parametru clinic alturi de biomarkeri biologici ai procesului de mbtrnire;

obinerea unor date originale cu privire la efectul celular i molecular al tratamentelor cu noile produse geroprotectoare dezvoltate n cadrul proiectului.

1.5 Caracterul inter-, multi-, sau trans- disciplinar al proiectului Derularea proiectului implic n afara abilitilor manageriale, a cunotinelor necesare de

marketing sau de implementare a proiectelor de cercetare, cunotine multidisciplinare avansate de fizic, matematic, chimie, biologie i medicin care vor trebui privite obligatoriu prin prisma relaiilor inter, multi i transdisciplinare i pentru care, n cadrul echipei de implementare a proiectului exist cercettori care acoper fiecare dintre aceste discipline ntr-un mod convingtor i eficient. Astfel, echipa de implementare a proiectului cuprinde fizicieni, chimiti, biochimiti, biologi, matematicieni i medici de diferite specialiti: recuperare medical, gerontologie, neurologie, boli interne, endocrinologi i cardiologi.

Carcterizarea fizic i chimic a componentelor nmolului sapropelic de Techirghiol, a cror proprieti biomedicale sunt generate prin combinarea diverselor elemente chimice cu componente biologice din structur, constitue un argument solid pentru interdisciplinaritate.

Realizarea unor studii pe animale de laborator implic interaciunea inter i transdisciplinar a biochimitilor i biologilor care trebuie s interacioneze cu matematicieni i statisticieni pentru prelucrarea, analiza i interpretarea datelor i stabilirea concluziilor.

Studiul la nivel celular i molecular vizeaz interaciunea interdisciplinar a biochimitilor i biologilor cu matematicieni n analiza i interpretarea datelor obinute experimental.

Studiul clinic implic interaciunea interdisciplinar i transdisciplinar a medicilor, biologilor din laboratoare clinice i a matematicienilor ce vor trebui s prelucreze datele obinute i mpreun cu restul echipei s le interpreteze medical i biologic astfel nct s aduc argumente tiinifice valide pentru ipoteza terapeutic util a noilor produse healthy-aging, dezvoltate n cadrul proiectului.

13/87

2. IMPACTUL I DISEMINAREA REZULTATELOR PROIECTULUI 2.1 Diseminarea i exploatarea rezultatelor proiectului Teze de doctorat i lucrri de licen Ca urmare a rezultatelor obinute n cadrul

acestui proiect se vor crea premisele elaborrii i susinerii unor teze de doctorat care vor avea ca subiect aciunea diferitelor produse cu efect geroprotector asupra ratei de mbtrnire. De asemenea, se vor putea susine lucrri de licen pe aceeai tem, de ctre studeni Facultii de Biologie din cadrul Universitii din Bucureti, din Universitatea Politehnic i UMF Cluj, crora le vor fi prezentate datele tiinifice ale proiectului.

Publicarea crii: Healthy-Aging - Participanii la acest proiect i-au propus publicarea unei cri avnd titlul Healthy-Aging, carte care va detalia diversele aspecte ale tratamentului geriatric la nivel mondial i cu acent pe oportunitile din ara noastr.

Broura PELOVITAL pentru cabinete medicale Pentru a aduce n atenia medicilor aceast modalitate de tratament se va publica o brour care se va distribui gratuit n cabinete medicale, sanatorii balneare, centre de recuperare, Centre Spa i care va contura efectele, indicaiile i contraindicaiile terapiei cu produse PELOVITAL.

Articole de specialitate n reviste cotate ISI pentru a aduce n atenia lumii tiinifice aceast alternativ terapeutic, se vor publica articole n reviste de specialitate n care vor fi tratate diverse aspecte ale cercetrii desfurate n cadrul proiectului. Ne propunem cel puin 3 articole tiinifice anual n urmatoarele reviste cotate ISI: The Journal of Nutrition, Health and Aging, Journal of Aging Studies, The International Journal of Aging and Human Development, Journal of Aging Research, Nutrition and Aging, Neurobiology of Aging, Healthy Aging & Clinical Care in the Elderly, Advances in Aging Research, Aging and Disease, Clinical Medicine Insights: Geriatrics, Geriatric Medicine, Geriatrics, etc.

Work-shopuri de etap pentru prezentarea rezultatelor La sfritul fiecarei etape cu activitate de cercetare se vor organiza work-shopuri n care se vor prezenta detaliat rezultatele de etap ale proiectului. Vor fi organizate 3 astfel de evenimente de diseminare la care vor participa pe lang ntreaga echip de implementare i diferii invitai, inclusiv din partea Autoritii contractante, ce vor putea evalua rezultatele obinute.

Participri la conferine interne i internaionale unde vor fi prezentate rezultatele cercetrii desfurate n cadrul proiectului, ce vor fi justificate de directorul de proiect i care vor urmri un impact relevant al diseminrii.

Prezentare media a rezultatelor tiinifice n cadrul conferinelor cu participare internaional, la care vor fi invitai reprezentani ai mass-mediei pentru promovarea rezultatelor cercetrilor asupra efectelor pe care noile produse anti-aging dezvoltate n cadrul proiectului.

Pagina web dedicat proiectului n care vor fi prezentate toate activitile desfurate i rezultatele obinute n cadrul proiectului precum i elementele de diseminare i informare adresate publicului larg.

Forum online de dezbatere a rezultatelor proiectului prin care vor fi dezvoltate mecanisme de interaciune cu clienii finali pentru dezvoltarea nivelului de ncredere n produsele din gama PELOVITAL.

Reclame de promovare online, n presa scris i mediul audiovizual pentru promovarea rezultatelor obinute n cadrul proiectului.

2.2 Aplicaii posibile cu potenial de pia Dup demonstrarea tiinific a aciunii terapeutice favorabile a produselor gamei

PELOVITAL asupra ratei mbtrnirii i calitii vieii persoanelor n vrst, tratamentul healthy-aging va putea fi aplicat cu succes, fundamentat tiinific, respectndu-se indicaiile i contraindicaiile specifice. Persoanele n vrst vor putea beneficia, astfel, de o modalitate terapeutic nou, argumentat pe baze tiinifice.

Turismul balnear i cel de sntate ar putea beneficia prin rezultatele acestui proiect de o reactualizarea a potenialului geriatric naional, completat cu un nou tip de tratament i influennd n mod pozitiv turismul Romniei pentru care potenialul balnear este uria dar nevalorificat. Cum, n general, factorii naturali de cur reprezint terapii adjuvante importante n multe categorii de suferine, turismul balnear ar putea fi una din direciile de dezvoltare ale acestui domeniu.

14/87

Profit financiar Dezvoltarea subsecvent a acestui tip de produse ar putea aduce sustenana financiar a businissului n domeniul healthy-aging prin care societatea n ansamblu devine un beneficiar prin plata taxelor i impozitelor aferente.

n afara persoanelor n vrst, o alt categorie de beneficiari ai rezultatelor vor fi staiunile balneare, n beneficiul crora vor fi aduse argumentele tiinifice pentru promovarea i valorificarea resursei balneare i a noilor produse healthy-aging. innd cont de respectarea unor principii de dezvoltare durabil i eficient a resurselor naturale, avnd n vedere c de respectarea acestor principii depinde i viitorul comunitii, dezvoltarea turistic prezint un avantaj subliniat prin venituri, locuri de munc i coeziune social.

Statul Romn ar fi un alt beneficiar al rezultatelor acestui proiect att ca urmare a creterii valorii cercetrii-dezvoltrii ntr-un domeniu neglijat cum este gerontologia i balneoclimatologia ct i prin vizibilitatea internaional a unui factor terapeutic natural important nmolul terapeutic i produsele subsecvente.

Valorificarea social a rezultatelor proiectului vizeaz impactul demografic al creterii longevitii active i creterea rolului social al persoanei n vrst. Implicarea echipelor de cercetare n diseminarea pe scar larg a rezultatelor tiinifice ale acestui proiect vor avea rolul de a informa persoanele n vrst asupra posibilitilor terapeutice pe care le au ca rezultat al proiectului.

Valorificarea tiinific rezult i din creterea experienei echipei n vederea extinderii cercetrilor asupra geriatriei prin proiecte internaionale. Ponderea specialitilor tineri n cadrul proiectului prin echipele desemnate de fiecare partener pentru a participa la acest proiect sunt formate n mare parte din tineri, dupa cum se vede i din CV-urile anexate. Tinerii cercettori au ansa de a acumula experien alturi de cercettori experimentai. Participarea unor instituii de nvmnt superior de prestigiu: Universitatea de Medicin i Farmacie din Cluj i Universitatea din Bucureti Facultatea de Biologie, Universitatea Politehnic - asigur antrenarea tinerilor spre activitatea de cercetare, fiind ndrumai s-i aleag drept tem a lucrrii de licen elemente tiinifice din proiect. Vom considera drept un extraordinar consumator de tiin publicul format din studeni ai celor trei instituii participante. Tinerii specialiti care au participat la elaborarea proiectului au identificat ca fiind foarte atrgtoare tematica proiectului pentru abordarea ei n cadrul unor doctorate tiinifice.

Efectele economice pot fi vzute la scar microeconomic, prin activitatea economic desfurat de beneficiarul proiectului, dar i la scar macroeconomic prin relansarea turismului n Romnia i prin ameliorarea indicilor demografici, cu impact economic cert.

2.3 Estimarea mbuntirii calitii vieii, raportat la performaa actual a

produselor, tehnologiilor i/sau serviciilor Demografic Romnia se afl de 19 ani n declin demografic. Acest declin demografic nu

i-a artat nc rezultatele la nivel economic deoarece aceste generaii reduse numeric nu au ajuns nc la vrsta fertil, moment n care derapajul va fi de necontrolat. Dac se menine actuala rat de fertilitate total (1,3 copii/femeie), n anul 2050 populaia activ economic (20-64 ani) va ajunge la 9 milioane adica cu 4 milioane mai puin dect astzi, iar populaia de peste 65 de ani va ajunge la 5 milioane fa de 3,2 milioane ct este astzi. Asta nseamn c la 100 de persoane adulte (active economic) vor reveni 54 de vrstnici. Dac la aceasta mai adugm i numrul tinerilor, se va ajunge la 82 persoane de ntreinut la 100 de persoane adulte.

Prevenirea bolilor i prelungirea vieii sntoase nu este o sarcin tocmai dificil, cel puin teoretic, dac reguli simple ar fi riguros urmate [52]: exerciii fizice, consumul suficient de ap, meninerea unei balane nutriionale echilibrate, pstrarea unui mediu sanogen, diagnosticul timpuriu, pstrarea unei atitudini emoionale pozitive prin socializare adecvat cu prietenii i rudele [7]. n practic, din pcate, lucrurile nu sunt att de simple.

Pentru multe probleme medicale pe care oamenii le pot avea, cum ar fi alergiile, probleme pulmonare, dermatologice, reumatismale, ginecologice i multe altele, dar mai ales pentru prevenirea bolilor, reducerea stresului, profilaxie i reconfortare, utilizarea factorilor terapeutici naturali prin turismul balnear reprezint o soluie vizat de comunitatea tiinific internaional prin diferii experi, programe medicale, sociale i de mediu [48].

15/87

Generarea i exploatarea de cunoatere au devenit surse vitale ale creterii bunstrii pe plan global. Cunoaterea reprezint totodat elementul central ce determin competitivitatea i ca atare statele lumii, n special cele dezvoltate, s-au angajat n generarea sistematic a acesteia, dezvoltnd sisteme naionale i interaciuni internaionale tot mai sofisticate.

La nivel internaional, datele tiinifice privind nmolurile i apele minerale utilizate terapeutic n diferite afeciuni medicale sunt relativ puine i cu un caracter general. Cutrile noastre prin literatura de specialitate au demonstrat c i n alte ri din Europa situaia este asemntoare n ceea ce privete argumentarea tiinific a utilizrii factorilor naturali terapeutici n curele balneare. Acest aspect ne determin s credem c acumularea unei experiene convingtoare n acest domeniu tiinific deschide noi perspective de colaboare la nivel internaional. Parteneriatul propus pentru acest proiect maximizeaz efortul colectiv, interdisciplinar i transdisciplinar, de a rspunde unei provocri din lumea tiinific.

Expertiza medical-balnear, geriatric i endocrinologic este completat eficient de o expertiz fizico-chimic, microbiologic, histologic, fiziologic, bio-celular i biochimic a echipelor de cercetare din cele opt instituii implicate n consoriu.

Proiectul propus contribuie la creterea competitivitii n cercetare-dezvoltare prin parteneriatul dintre uniti de cercetare dezvoltare i IMM-uri cu profil diferit: balneoclimatologie, biologie i medicin. Fiecare partener i propune s abordeze specific problematica actual a mbtrnirii i s identifice noi soluii terapeutice argumentate tiinific prin studii moderne de biologie celular i molecular, de genomic i proteomic.

Scopul final este obinerea unui exctract sapropelic cu proprieti terapeutice n geroprotecie. Proprietile terapeutice ale factorilor naturali de cur din Lacul Techirghiol, respectiv apa mineral i namolul sapropelic, recunoscute de mult vreme, vor fi fundamentate tiinific n cadrul acestui proiect ceea ce ne va determina s promovm conservarea i consolidarea diversitii biologice i ecologice a acestui areal. Se creeaz astfel premisele pentru susinerea de msuri speciale de protecie adresate valorificrii durabile a acestor factori naturali.

Eficientizarea sistemului de sntate public vis a vis de problema mbtrnirii va fi susinut n cadrul proiectului prin stabilirea unor criterii clare de selecie a pacienilor care vor primi indicaie de tratament. Cercetrile efectuate n cadrul proiectului vor permite dezvoltarea cunoaterii mecanismului prin care factorii naturali pot aciona asupra sistemului biologic integrativ al procesului de mbtrnire. Dezvoltarea cunoaterii sistemelor biologice integrative ale fiinei umane se concretizeaz n cadrul acestui proiect prin elucidarea unor mecanisme complexe prin care factori de mediu i geroprotectoarele intervin asupra reglrii unor funcii ale organismului uman: funcii de reglaj endocrin, funcia de rspuns la stres.

Mecanismele de adaptare ale organismului uman la dinamica factorilor de mediu biologic i psiho-social reprezint pentru echipele de cercettori implicate n acest proiect, cadrul conceptual de referin ce permite nelegerea fenomenului biologic n toat complexitatea sa. Metodele de investigaie utilizate pentru elucidarea mecanismelor prin care peloidextractul obinut i produsele geroprotectoare subsecvente acioneaz n meninerea strii de sntate a persoanelor vrstnice vor fi bazate pe biologia i medicina molecular i celular, pe studii de genomic i proteomic.

Medicina anti-aging este un domeniu medical relativ nou care se dezvolt ntr-un ritm foarte accelerat. Acest domeniu este unul al aplicrii tehnologiilor tiinifice i medicale avansate n prevenirea, detecia timpurie, tratatamentul i cura disfunciilor legate de vrst.

Scopul medicinei anti-aging nu este ns numai acela al prelungirii duratei de via ci mai ales acela de susinere a unei vieii sntoase o perioad mai lung de timp. De aceea termenul mai des utilizat azi de specialitii este cel de healthy-aging n loc de anti-aging.

Healthy-agingul este un domeniu clinic ce cuprinde peste 30.000 de specialiti la nivelul a 80 de state la nivel global (conform datelor statistice din 2009). Medicina anti-aging combin tehnologii biomedicale de diagnostic i tratament cu intenia de a depista precoce diferite boli i al prescripiei unui tratament ct mai eficient. Tomografia computerizat, ultrasonografia, tomografia de emisie pozitronic, tratamentul cu celule stem, ingineria genetic i nanotehnologia medical sunt prin urmare componente ale medicinei anti-aging a cror importan medical este azi pe deplin neleas.

16/87

Actul medical n staiunea balnear poate fi orientat spre profilaxie, tratament sau recuperare i are o legatur direct cu medicina anti-aging. Staiunile balneare europene ofer o gam divers de servicii. n prezent, utilizarea factorului natural terapeutic n cadrul serviciilor desfurate sub supraveghere medical, este nsoit de o serie de tehnici pentru a ajuta pacienii s-i amelioreze starea de sntate (fizioterapie, kinetoterapie etc.). n fiecare an, staiunile balneare europene genereaz o cifr de afaceri de peste 20 miliarde de Euro.

Angajarea direct a peste 500.000 de persoane i sprijinirea unui numr suplimentar de 1.2 milioane de locuri de munc n domenii conexe face ca sectorul s fie unul dintre cei mai mari angajatori din UE att n domeniul asistenei medicale ct i a turismului - n special n regiunile n care industria este mai puin dezvoltat.

Concepiile i orientrile noi din medicina modern, ce abordeaz sntatea ca un drept fundamental al omului, introducerea ntre criteriile de evaluare a sntii a noiunilor de calitate a vieii, stil de via, bunstare, a determinat o reevaluare a asistenei medicale din staiunile balneo-climatice ca i a balneologiei n general. ntre balneologia tradiional i turismul tradiional a aprut turismul de reconfortare, turismul de sntate sau curele de sntate profilactice, care au la baz calitatea vieii, strns mpletit cu aprarea sntii i un raport psiho-fizic valid, avute n vedere i de medicina healthy-aging.

Noile criterii de evaluare arat saltul uria nregistrat n terapia cu factori naturali de cur, de la perioadele de criz cnd i se reproa lipsa unei fundamentri tiinifice solide, metodologia utilizat fiind bazat n cea mai mare parte pe empirism, la multiplele studii i cercetri tiinifice care au dovedit eficiena curelor terapeutice i de recuperare n diferite grupe de afeciuni, pe baza unei metodologii complexe.

Evaluarea modern a sntii, a bunstrii, a calitii vieii, impune continuarea i dezvoltarea activitii de cercetare tiinific, pentru stabilirea mecanismelor de aciune i a efectelor curative ale factorilor terapeutici naturali. Sunt considerate prioritare cercetrile asupra metodologiei i efectelor curelor de sntate, care reprezint cel mai important domeniu al profilaxiei primare a bolilor majore din patologia legat de modul de via n civilizaia noului mileniu. Gradul de contientizare a potenialului de dezvoltare a turismului balnear n conjunctur cu utilizarea avantajelor strategice oferite de cercetare tiinific a factorilor naturali este, din pcate, foarte redus.

Aplicarea celor mai multe dintre msurile anti-aging se bazeaz pe ideea simpl dar logic prin care se consider c mbtrnirea este determinat numai de procesele biologice care influeneaz negativ funcionarea organismului. Consecina terapeutic a acestei idei este faptul c intervenia corectiv asupra proceselor biologice legate de mecanismul mbtrnirii vor avea rezultate favorabile i vor avea efecte pozitive asupra longevitii active.

n practic lucrurile nu sunt numai n aceast variant. Stresul oxidativ corelat cu fenomenul de mbtrnire combtut prin utilizarea excesiv a antioxidanilor reprezint un exemplu care arat c intervenia n biologia organismului trebuie s vizeze balana i nu doar un singur taler.

Etica utilizrii subiecilor umani se va supune aprobrii Consiliului tiinific i Medical de Etic. Activitatea acestuia se va concretiza, din acest punct de vedere, prin respectarea normelor de protecie, obinerea consimmntului informat, protecia datelor personale i manipularea n siguran a probelor biologice.

Etica utilizrii animalelor n experimentele tiinifice are la baz urmtorul cadru legislativ: Legea 205/2004 privind protecia animalelor, OG 37/2002 i Legea 471/2002 privind protecia animalelor folosite n scopuri tiinifice sau n alte scopuri experimentale.

Etica proteciei mediului ne oblig la respectarea normelor privind gestionarea deeurilor rezultate n urma activitii de cercetare, conform OUG 195/2005, Legea 265/2006, OUG 57/2007, OUG 114/2007, n raport cu OMS nr. 1226/2012 privind protecia mediului.

17/87

2.4 Integrarea proiectului cu strategia de dezvoltare a ntreprinderilor partenere Viziunea firmei SC Biosafety SRL-D este de a dezvolta un laborator modern de cercetri

i analize medicale i biologice prin care s ofere servicii specializate, att pacienilor, prin analize de laborator cu rol diagnostic, ct i firmelor din industria farmaceutic, alimentar sau cosmetic, prin analize fizico-chimice, microbiologice i biologice cu rol n testarea calitii i siguranei produselor alimentare, cosmetice sau medicamentelor. De asemenea, SC Biosafety SRL-D i propune s dezvolte biotehnologii inovatoare pentru obinerea de noi produse cu rol terapeutic, aa cum prevede statutul su. Din punct de vedere strategic, SC Biosafety SRL-D este localizat n Bucureti, ora cu dezvoltare economic important, cu 10 procente din populaia Romaniei i cu un numr semnificativ de societi comerciale care vor reprezenta posibili clieni ai firmei.

Sanatoriul Balnear Techirghiol are propria strategie de a dezvolta sectorul balnear i de a mbunati calitatea serviciilor pe care le ofer, noua gama PELOVITAL putnd reprezenta un plus de valoare pentru serviciile medico-balneare i profilactice oferite n sectorul balnear.

Subdezvoltarea sistemului medical, continua subfinanare, trecerea spitalelor n subordinea consiliilor locale au creat oportuniti pentru dezvoltarea sectorului medical privat care a ajuns n 2010 la nivel naional la 420 milioane de euro. Pn n 2015 se estimeaz o piaa a serviciilor medicale de un miliard de euro. Investiiile sunt masive, marile firme se concentreaz pe construcia de spitale private: Arcadia Hospital din Iai realizat cu o investitie de 20 milioane de euro, Memorial Hospital din Bucuresti cu 112 paturi n rezerve de lux de una i dou paturi, cu laborator propriu de analize, tomografie, radiologie, mamografie, endoscopie i ecografie de nalt rezolutie, inclusiv asistent medical ambulatorie pentru toate specialitile medicale, Athena din Timioara - investiie de 12 miloane de euro, Euroclinic Hospital din Bucureti, primul spital privat din capital, inaugurat in 2005. Sanador va investi 40 de milioane de euro n construcia unui spital privat tot n Bucureti, MedLife a anunat c va demara construcia unui spital de mari dimensiuni care va include o unitate de primiri urgene, cinci sli de operaie i 140 de paturi, iar Medicover va construi un nou spital privat de 50 de milioane de euro.

Pro Life Clinics - policlinic privat nfiinat n februarie 2009, avnd ca obiect de activitate prestarea de servicii medicale de specialitate, n Iai, este n acest moment cel mai mare furnizor privat de servicii medicale din aceast regiune. Clinica cuprinde peste 25 de specialiti, printre care, de interes pentru actualul proiect sunt: Geriatrie, Genetic medical, Ortopedie, Reumatologie, Medicin Fizic i Recuperare medical, Neurologie, Medicin Intern, Cardiologie, Endocrinologie, Dermatologie, Imagistic medical, etc. Pro Life Clinics devine un posibil furnizor al tratamentelor cu noile produse healthy-aging, strategia de dezvoltare ulterioar nglobnd promovarea gamei PELOVITAL pentru creterea calitii i cantitii de servicii medicale i profilactice n regiunea Moldovei.

2.5 Proprietate intelectual Biosafety ca iniiator al proiectului i generator al ideii acestuia, are dreptul de utilizare

nelimitat a metodei terapeutice cu ajutorul extractului sapropelic obinut din nmolul prelevat din Lacul Techirghiol i a comercializrii produselor geroprotectoare ale gamei PELOVITAL.

Cercetarea asupra efectelor terapeutice ale noilor geroprotectoare, genernd drepturi de proprietate intelectual, acestea vor fi proporional stabilite cu nivelul de activitate tiinific depus de partener.

Normele deontologice ale cercetrii universitare se asigur prin practicile tradiionale privind citarea rezultatelor tiinifice, recunoaterea paternitiilor, asigurarea dreptului de proprietate intelectual al autorilor de publicaii tiinifice, inclusiv cele electronice, critica public a rezultatelor tiinifice i delimitarea ei de persoan, asigurarea i ncurajarea dreptului la replic, msuri specifice asiguratorii de prioritate i protejare a secretului de lucru, neacceptarea plagiatului, a reproducerii pariale a unor lucrri anterioare, preluarea unor date tiinifice fr precizarea sursei, precum i prevederile Legii nr.8/1996 privind dreptul de autor i drepturile conexe.

Proprietatea intelectual asupra rezultatelor publicate i brevetate n cadrul proiectului aparine cercetorilor implicai n implementarea proiectului, ntr-o proporie egal cu aportul fiecruia, agreeat de toi membrii echipei cooptate n implementarea proiectului.

18/87

3. Descrierea consoriului 3.1 DIRECTORUL DE PROIECT

Constantin Munteanu, 35 ani, Doctor n biologie din 2010 Din iulie 2008 - Cercettor tiinific, III Biolog sp. la Institutul Naional de Recuperare, Medicin Fizic i Balneoclimatologie, Bucureti, implicat n cercetarea tiinific n domeniul fiziologiei, coordonare proiecte, coordonare laborator. Din 17.03.2011 - Administrator la S.C. BIOSAFETY SRL, mpreun cu Hric Marian Secretar General Asociaia Romn de Balneologie; Din noiembrie 2010 - Director al Editurii Balneare

Perfecionare: 2002 Bursa ERASMUS, Max Planck Institute, Andechs, Germania, Human Ethology 2003 Curs - Institutul de Biologie i Patologie Celular N. Simionescu, curs de perfecionare: De la

biologia celular la medicina secolului XXI 2004 Neuroscience Course, International Brian Research Organization, Facultatea de Biologie,

Universitatea din Bucureti, 2011 FORMATOR Certificat de absolvire Seria G, Nr. 00218009 Proiecte de cercetare i contracte de cercetare relevante pentru acest proiect

Corelaie ntre impactul sistemic al apelor minerale bogate n litiu i modificrile moleculare induse celulelor gliale in vitro Programul VIASAN, Director de proiect; Proiect n valoare de 30.000 EURO finanat de Academia de tiine Medicale, 2003-2005

Studiul la nivel celular i molecular al efectelor radiaiei laser asupra celulelor normale i patologice Programul VIASAN, Executant, proiect coordonat de Dr. Gabriela Zamfirescu, 2003-2004

Mecanisme de protecie hormonal a cardiomiocitelor supuse stressului oxidativ Programul VIASAN, Executant, proiect coordonat de Dr. Gabriela Zamfirescu, 2004-2006

Studii in vitro privind mecanismul fibrogenezei induse de citotoxicitatea metalelor - Programul CERES, Executant, proiect coordonat de Prof. Dr. Dana Iordchescu, 2004-2006;

PARTENERIATE: Studiu complex medico-biologic n vederea utilizrii inovative a factorilor potenial terapeutici din salin i peter n sntate i turism balneoclimatic; soluii de modelare a acestora, Executant, proiect coordonat de CP II, Dr. Iuri Gh. Simionca, 2008-2011

PROIECTE DEPUSE LA PROGRAMUL EUROPEAN FP7 pentru evaluare (nefinanat): Lithium, mineral waters and human health LITHIUM, Proposal ref. number: 201685

Contract nr. 5/21.06.2011 ncheiat ntre SC Biosafety SRL i SC Orvell SRL privind desfaurarea unor servicii bio-medicale de analiz i cercetare a calitilor terapeutice a APEI MINERALE MARIA de la Malna-Bi n vederea etichetrii, promovrii i comercializrii ulterioare a produsului, verificnd ndeplinirea normelor calitative de biosiguran pentru consum uman. Coordonator al contractului;

Contract 6477 /21.06.2011 ncheiat ntre SC ROMAQUA GROUP SA i INRMFB, privind analiza fizicochimica si microbiologica cu buletin tip INRMFB a probelor de apa mineral natural de la sursele Borsec i Borsec Faget, Borsec, judeul Harghita i Studiul clinic privitor la efectele apei minerale naturale de la sursele Borsec i Borsec Faget asupra pacienilor cu sindrom metabolic. Responsabil de contract;

Contract nr. 600/2011 ncheiat ntre SC TURDA SALINA DURGAU SA i INRMFB, avnd ca obiect: Studiul complex clinic i experimental asupra unor pacieni cu astm/ bronit cronic obstructiv i al parametrilor mediului subteran din Salina Turda cu relevan speleoterapeutic, coordonat de Dr. Simionca Iuri

Publicaii relevante: 1. Ape minerale litinifere / Constantin Munteanu, Diana Munteanu. - Bucureti : Editura Balnear,

2011, ISBN 978-606-92826-0-1, DOI: http://dx.doi.org/10.12680/978-606-92826-0-1; 2. Nmolul terapeutic / Constantin Munteanu. - Bucureti : Editura Balnear, 2012, ISBN 978-606-

93159-1-0; 3. Cercetarea tiinific a factorilor naturali terapeutici / Constantin Munteanu, Delia Cintez. -

Bucureti : Editura Balnear, 2011, ISBN 978-606-92826-8-7; 4. Constantin Munteanu, Diana Munteanu, Delia Cintez - GSK-3 expression after treatment of

glial cells with lithium and Maria lithium mineral water from Malna-Bi, MAEDICA- Journal of Clinical Medicine, Vol.4, nr.2, 2009, p. 106-113, ISSN: 1841- 9038;

5. Munteanu Constantin;Therapeutic mineral waters, Balneo Research Journal, Vol.2, No.2, pp.52 (2011), pISSN: 2069-7597, DOI: http://dx.doi.org/10.12680/balneo.2011.1011v

19/87

3.2 STRUCTURA CONSORIULUI CO SC Biosafety SRL-D este un concept ce a aprut n Romnia din nevoia de

protecie a factorului uman implicat n procesul de munc, n corelaie cu protejarea mediului, iar implementarea acestuia n practic se realizeaz prin trei direcii de dezvoltare:

Cercetare, dezvoltare, certificare biosiguran i biotehnologie Laborator de ncercri i analize medicale Formare profesional n domeniul sntii Aceste direcii sunt n conformitate cu principiile de dezvoltare a Uniunii Europene i au ca

scop sigurana n munc, protejarea mediului nconjurtor i mbuntirea calitii vieii. Biosafety promoveaz valorile cercetrii multidisciplinare n tiinele vieii i promovarea

implementrii n practic a rezultatelor acestor cerecetri. Biosafety are misiunea de a accelera cercetarea i educaia n domeniul biotehnologiei,

biosiguranei i biosecuritii n munc cu potenial pentru translarea cunotinelor fundamentale biomedicale n noi strategii de cercetare i prevenie a riscurilor n munc.

Societatea Biosafety i asum ca obiective fundamentale: Dezvoltarea domeniilor de cercetare multidisciplinar cu aplicabilitate pe termen

scurt i mediu n domeniul biotehnologiei i sntii; Integrarea la nivel de strategie i infrastructur a activitii de cercetare; Formare profesional, inclusiv programe de formare i susinerea carierei n

cercetare pentru noi cercettori n domeniu; Promovarea/ facilitarea parteneriatelor ntre cercetare i industrie; Investigaii ale statusului populaional de sntate. Societatea Biosafety este constituit din fonduri private, iar personalul are studii

superioare: doctor n biologie, doctor n tiina mediului, inginer specializat n securitate alimentar, medic rezident specialitate Medicin de recuperare i balneologie.

Biosafety promoveaz servicii moderne de cercetare i de analize medicale i biologice adresate att pacienilor, prin analize de laborator cu rol n diagnostic, ct i firmelor din industria farmaceutic, alimentar sau cosmetic, prin analize fizico-chimice, microbiologice i biologice cu rol n testarea calitii i siguranei produselor alimentare, cosmetice sau medicamentelor.

Misiunea asumat de asociaii fondatori este aceea de a dezvolta servicii specializate pentru diagnostic de laborator, de a organiza o structur de certificare a biosecuritii produselor, persoanelor, a spaiilor i a sistemelor biotehnologice utilizate industrial, oferind o consultan specializat n domeniul biotehnologic, transpus n strategii de biosecuritate i elaborarea programelor de formare profesional n domeniul biosiguranei i biosecuritii n munc. Din punct de vedere strategic, SC Biosafety SRL-D este localizat n Bucureti, ora cu dezvoltare economic important, iar componena de cercetare i de formare profesional se desfoar la sediul societii, n laboratoarele INRMFB i n spaiile partenerilor.

Viziunea asociailor este bazat pe dezvoltarea unui brand al calitii i siguranei produselor, persoanelor, spaiilor i sistemelor de management n conformitate cu principiile Uniunii Europene.

P1 - Institutul Naional de Recuperare, Medicin Fizic i Balneoclimatologie, din subordinea Ministerului Sntii este la acest moment singura instituie abilitat legal n cercetarea i certificarea calitii terapeutice a factorilor naturali i a bazelor balneare de tratament, avnd competen legal privind studiul complex al factorilor naturali terapeutici, stabilit prin Ordonana Guvernului nr. 109 / 2000, aprobat prin Legea. 343 / 2002. La nivelul su, exist peste 15 proiecte la numai 20 de cercettori.

Unicitatea profilului de cercetare al Institutului Naional de Recuperare, Medicin Fizic i Balneoclimatologie determin o abordare strategic special asupra potenialului pe care aceast instituie l are n descoperirea unor noi factori cu potenial terapeutic, n certificarea valorii terapeutice a factorilor utilizai n prezent n staiunile balneare, avndu-se n vedere dinamica lor i faptul c n timp proprietile lor fizico-chimice i terapeutice se modific. Este de asemenea imperios necesar corelarea cu datele tiinifice medicale actuale a utilizrii factorilor n afeciunile corespunztoare, asupra crora au un real efect terapeutic.

20/87

P2 - Sanatoriul Balnear i de Recuperare Techirghiol este o instituie sanitar public nfiinat prin decizia 129/1972, n a crui structur funcioneaz nucleul de cercetare privind eficiena tratamentelor naturiste cu nmol i ap din lacul Techirghiol nfiinat prin OMS 605/29.05.2006. De asemenea, Sanatoriul Balnear i de Recuperare Techirghiol este nscris n Registrul Potenialilor Contractori, cu numr de nregistrare sbrt002, iar domeniul de activitate conform clasificrii UNESCO este: domeniul 32 tiine medicale (3201 tiine clinice; 3204.04 reabilitare; 3205.09 reumatologie; 3289 altele-balneologie; 3201.07 geriatrie), avnd i cod CAEN 8610 asisten medical, 7219 cercetare tiinific.

Sanatoriul Balnear i de Recuperare Techirghiol este implicat n activitatea de cercetare-dezvoltare avnd ca misiune principal i ca direcii de cercetare realizarea de tehnologii, produse i servicii inovative adresate unor probleme complexe de sntate i crearea mecanismelor de implementare n bazele de tratament i SPA din staiunile balneare din ar pentru eficientizarea sistemului de sntate public precum i dezvoltarea de terapii medicale cu ap din lac i nmol sapropelic.

n ultimii ani Sanatoriul Balnear i de Recuperare Techirghiol a obinut multiple premii internaionale, dintre care: medalia de aur Eureka 2002, obinut la Salonul de Inventic i Noi Tehnologii de la Bruxelles; medalia de aur i premiul Vladislav Fadeev din Rusia obinut la al 35-lea Salon de Inventic i Noi Tehnologii de la Geneva 2007; medalia de bronz i premiul de elit al Academiei Iraniene obinut la Bucureti 2007, n cadrul Salonului Internaional de Inventic, Cercetare tiinific i Noi Tehnologii; medalia de aur pentru succesul activitilor SPA, din partea Asociaiei SPA din Rusia, acordat la Conferina Naional de Neurochirurgie i Neuroreabilitare cu participare internaional, obinut la Mamaia, Romnia n Septembrie 2009; certificatul de merit pentru cel mai bun cercettor n medicin termal, obinut la al 62-lea Congres tiinific Internaional al Federaiei Mondiale de Hidroterapie i Climatoterapie din Yokohama, Japonia, Noiembrie 2009; premiul Federaiei Mondiale de Hidroterapie i Climatoterapie pentru cel mai bun SPA obinut n Tunisia n Noiembrie 2010; premiul Federaiei Mondiale de Hidroterapie i Climatoterapie pentru o abordare corect a tratamentelor naturale obinut n Slovenia n Octombrie 2011, etc.

Sanatoriul Balnear i de Recuperare Techirghiol a fost implicat n 11 proiecte de cercetare tiinific, dintre care enumerm: Cercetri multidisciplinare pentru realizarea de echipamente mecatronice inteligente de maso-chinetoterapie vectorial, proiect nr. 1494, programul 5 inovare 2008, modul 1: Dezvoltare produs-sisteme; Thermal Bath for Ageing Peoples, parteneriat Leonardo da Vinci, nr. LLP-LdV/PAR/2011/RO/125.

P3 Pro Life Clinics, Iai, Policlinica privat Pro Life Clinics s-a nfiinat n februarie 2009, avnd ca obiect de activitate prestarea de servicii medicale de specialitate, n Iai, fiind n acest moment cel mai mare furnizor privat de servicii medicale din aceast regiune. Clinica cuprinde peste 25 de specialiti, printre care, de interes pentru actualul proiect sunt: Geriatrie, Genetic medical, Ortopedie, Reumatologie, Medicin Fizic i Recuperare medical, Neurologie, Medicin Intern, Cardiologie, Endocrinologie, Dermatologie, Imagistic medical, etc. Pro Life Clinics desfoar pe lng servicii medicale n Ambulator i servicii de Spitalizare de zi pentru Recuperare, Medicin Fizic i Balneologie, Diabet zaharat, Boli de nutriie i de metabolism, Cardiologie. Desfaurarea studiilor clinice este autorizat de Ministerul Sntii. Din 2013 i dezvolt un sistem propriu de cercetare tiinific n domeniul biotehnologiei i farmacologiei ce va fi condus de responsabilul de proiect din partea P3.

P4 - Universitatea de Medicin i Farmacie Iuliu Haieganu din Cluj-Napoca este una din cele mai importante i mai apreciate Universiti din Romnia. Cercetarea stiinific reprezint una dintre misiunile asumate prin Carta Universitii, urmrindu-se promovarea interesului i performanei n cercetarea tiinific bio-medical, necesitatea creterii rolului i implicrii socio-economice a universitii. Activitatea de cercetare se desfaoar n toate catedrele, departamentele i centrele de excelen. Au fost ctigate la nivel de universitate foarte multe granturi respectiv proiecte CEEX, IDEI, Parteneriate, Proiecte europene PC7, POS-CCE, postdoctorale PNII.

P5 - Universitatea din Bucureti Facultatea de Biologie, unitate de nvmnt superior integrat n reele tiinifice internaionale, cum ar fi SOCRATES, TEMPUS, COPERNICUS, CEEPUS, TEMPRA, PHARE sau TACIS.

21/87

Departamentul de Biochimie i Biologie Molecular a fost fondat n Decembrie 2007 prin unirea resurselor umane i infrastructurii a departamentului de nvamnt de Biochimie i Biologie Molecular, a centrului de cercetare (multi user) n Biologie Molecular cu (MURC-MB) i a centrului de cercetare n Biochimie i Bilogie Molecular (RCBBMB). Centrul de cercetatre multi user n Biologie molecular (BCUM-BM) a fost fondat n anul 2002. Acesta reprezint rezultatul de succes a proiectului CNCSIS de tipul B, finanat de Banca Mondial i Banca Eurpean pentru Reconstrucie-Dezvoltare. Cel de al doilea centru, centrul de cercetare n Biochimie i Biologie Molecular (CCBBM) a fost fondat n anul 2001 ca unitate funcional a Facultii de Biologie. n acest centru activitile n domeniile abordate sunt efectuate la cel mai nalt nivel tiinific i profesional. n cadrul departamentului s-au desfurat numeroase proiecte de nalt importan, cu rezultate tiinifice deosebite. Rezulatele au fost valorificate att prin publicaii tiinifice internaionale cu impact, numeroase conferine internaionale, brevete, cri. Direciile de cercetare ale departamentului DBBM sunt: biodiversitate genetic, filogenie molecular, genotipare uman i animal folosind microsatelii i mADN, caracterizarea molecular a diferitelor patologii umane, toxicologie molecular, biomateriale, inginerie tisular, biocompatibilitate, biotehnologii moleculare. Printre cele mai reprezentative proiecte pot fi amintite UEFISCDI 2012, CNCSIS 2010, Grantul Naionale II - 2008, CEEX, proiect Bilateral Romnia - Cipru, 2004-2006 Programul Viasan / grant 427/2004 intitulat "Studii asupra unor proteine de stres n hipertrofia ventricular experimental indus de isoproterenol i evaluarea efectului curativ-profilactic al unor produse naturale cu proprieti antioxidante" (HIP); 2005-2007 Programul CEEX / CALIST /grant 6109/2005 intitulat "Dezvoltarea unor produse naturale standardizate pe baz de polifenoli prin studii de biodisponibilitate" (HYPCUM), 2008-2010 Programul PN II / grant 62-068, "Fitopreparate, prebiotice i producia de biocombustibili prin procesarea complex a sorgului zaharat" (ZYSOPROD), 2003-2005 "O nou abordare n investigarea originii maladiilor mitocondriale utiliznd sisteme ale complexului I respirator bacterian drept model" (grant internaional Programul CoopBil Romnia-Grecia). Rezultatele au fost valorificate prin articole tiinifice publicate n reviste internaionale i dou brevete acceptate: Procedeu de activare a proliferrii celulare, cu efect asupra regenerrii esutului ars i rnit, i a metaloproteinazelor tisulare, sub aciunea levanului produs de ctre bacteria Zymomonas mobilis crescut pe extracte de sorg zaharat (Sorghum bicolor var saccharum), Nr A/01357/08.12.2011 i Metoda imagistic pentru caracterizarea morfologic a celulelor sanguine prin utilizarea unui nou marker fluorescent-Hipericina, 116187 AO, A61K49/00,G01N33/49, A61B5/0275, 17.11.2010. Dintre articolele tiinifice publicate n direcia propus pot fii amintite urmtoarele: STUDII PRIVIND FERMENTAREA ALCOOLICA A GLUCIDELOR DIN EXTRACTUL DE SORG ZAHARAT UTILIZAND TULPINI DE ZYMOMONAS MOBILIS, Lucrri tiinifice USAMVB, seria B, vol. LIII, pag. 768-774 (2009); Zymomonas mobilis levan production in the presence of antimetabolic agents, Simpozion dedicat Anului international al Biodiversitatii, Iasi, Analele tiinifice ale Universitii Alexandru Ioan Cuza din Iai, Seciunea Genetic i Biologie Molecular, TOM XI, 2010, pag.7-13, Editura Universitii Alexandru Ioan Cuza, Iai (2010); Studies regarding chaotropic effects of sodiun perclorate on Zymomonas mobilis bacterial membrane, Simpozion dedicat Anului internaional