MICROORGANISMELE SANITARO-INDICANTE. ANALIZA SANITARO-BACTERIOLOGICA A APEI SI AERULUI

Microbiologia sanitar este tiinta care se ocup cu studiul florei microbiene a mediului ambiant (inclusiv a celei patogene) i a proceselor cauzate de activitatea lor vital, care in mod direct sau indirect pot influena sntatea omului.

Sarcinile microbiologiei sanitare:Elaborarea, perfecionarea i evaluarea metodelor microbiologice de examinare a obiectelor mediului ambiant (ap, aer, sol, produse alimentare, obiecte de uz habitual, etc)Studiul i evaluarea influenei omului i animalelor asupra obiectelor mediuluiElaborarea actelor normative - standardelor de stat (STAS), a recomandrilor i indicaiilor metodice cu privire la recoltarea probelor, condiiile de pstrare i expediere a materialului de examinat, precum i metodica analizei de laboratorElaborarea recomandrilor i msurilor orientate spre asanarea obiectelor mediului i controlul asupra realizrii lorStudiul legitilor relaiilor omului cu mediul ambiant i elaborarea recomandrilor orientate spre protecia sntii.

Microorganismele sanitaro-indicanteInofensivitatea microbiologic a obiectelor mediului ambiant nu se apreciaz direct, prin depistarea microflorei patogene (ea nu este permanent, este sensibil la actiunea multor factori, cantitatea ei este comparativ mic), ci indirect, prin determinarea gradului de contaminare cu reprezentani ai microflorei normale, care se elimina n mediu cu excretele omului i animalelor (ex.: m/f intestinal concluzie despre poluare fecala cu posibil prezen a microbilor patogeni).

Izolarea reprezentanilor microflorei normale servete drept indice a strii sanitare a obiectului, ceea ce permite aprecierea pericolului potenial al acestor obiecte pentru sntatea populaiei. Aceste mi/o au fost numite microorganisme sanitaro-indicante (MSI).

Cerinele fa de MSI:S fie prezente permanent n excretele omului i animalelor i s fie eliminate n mediul extern n cantiti mariS nu existe alt rezervor natural dect organismul omului i animalelorS supravieuiasca pe obiectele mediului o perioad mai ndelungat dect flora patogenLipsa multiplicrii sau multiplicare redus n mediu S fie mai rezistente la aciunea factorilor mediuluiS nu sufere modificri, astfel ca s fie identificate fr dificultateS poat fi depistate prin metode simple i accesibile

Actualmente din categoria MSN,n funcie de obiectul examinat, fac parte E.coli, bacterii din grupul coli (coliforme), enterococi, stafilococi, Pseudomonas, Bacillus cereus, etc. Aprecierea strii sanitare a obiectelor mediului se efectueaza de asemenea prin determinarea numarului total de germeni/microorganisme (NTG/NTM) la o unitate de volum sau suprafa.

Analiza sanitaro-bacteriologic se efectueaza n conformitate cu diferite acte normative: Standarde de Stat (STAS), indicaii i recomandri metodice, care sunt obligatorii pentru toate laboratoarele. Aceste acte reglementeaz:Metodele de recoltare a probelorCantitatea de produs recoltatCondiiile de expediere n laboratorMetodele de examinareCriteriile de apreciere a rezultatelor

Probele sunt nsotite de o fi n care se indic: denumirea probei, locul i data recoltrii, cantitatea, scopul analizei, instituia care va efectua analiza, numele persoanei care a recoltat proba.

EXAMENUL SANITARO-BACTERIOLOGIC AL APEIMicroflora apelor depinde de originea lor: ape superficiale (ruri, lacuri, iazuri, rezervoare, etc), ape subterane (izvoare, fntani, etc), ape atmosferice (zpad, ploi), apa de mare.Din punct de vedere al utilizarii distingem:apa potabil i menajer din sistemul centralizat i necentralizat de aprovizionare apa bazinelor de not gheaa medicinal i menajerape reziduale

Analiza sanitaro-bacteriologic a apei se efectueaz cu scopul unui control curent al calitii apei potabile furnizat de instalaii centrale sau din surse locale la toate etapele aprovizionrii (captare, instalaii de epurare, reea de distribuie, robinete).

Examenul sanitaro-bacteriologic al apei se efectueaz pentru:Selectarea surselor de alimentare central cu ap potabil i menajerControlul periodic al eficienei dezinfeciei apei potabile furnizat de instalaii centraleDeterminarea calitii apei utilizate din surse locale (fntni, izvoare, arteziene)Controlul strii sanitaro-epidemiologice a apelor bazinelor deschise (lacuri, iazuri, fluvii)Controlul eficienei dezinfeciei apei din bazinele de notControlul eficienei epurrii apelor rezidualeExaminarea erupiilor hidrice de boli infecioase

Realizarea acestor obiective este reglementat i monitorizat de urmtoarele acte normative:STAS 2761-84 Sursele de alimentare central cu ap potabil i menajer;STAS 2874-82 Apa potabil. Cerinele igienice i controlul calitiiSTAS 18963-73 Apa potabil. Metodele analizei sanitaro-bacteriologiceIndicaii metodice 2285-81 Cu privire la analiza sanitaro-microbiologic a bazinelor deschise

Aprecierea corespunderii probelor de ap examinate cerinelor standardelor de stat se efectueaz dup o serie de indicatori microbiologici:Numrul total de germeni / microorganisme (NTG / NTM)Titrul coli (coli-titrul)Indicele coli (coli-indicele)Determinarea bacteriilor din grupul coli (coliforme), a bacteriilor coli-fecale, enterococilor, stafilococilorPrezena mi/o patogene (se determin la indicaii epidemiologice).

Recoltarea, pstrarea i transportarea probelor de apProbele de ap se recolteaz n flacoane sterile cu dop. Apa de robinet se recolteaz n volum de 500 ml. n prealabil orificiul robinetului se flambeaz cu un tampon de vat mbibat cu alcool, apoi se deschide complet i se las s curg apa timp de 10 min. Se deschide flaconul, se fixeaz sub jetul de ap i se umple pn la aproximativ 1 cm sub dop. Flaconul se astup cu dopul, peste care se pune un capac de hrtie. n fia de nsoire se indic locul recoltrii, data (ora, ziua, luna, anul), scopul analizei i numele persoanei care a prelevat proba

Din izvoare, fntni, arteziene proba de ap se recolteaz direct din curentul de ap sau de la adncimea de 10-15 cm.Din bazinele deschise se recolteaz o serie de probe la diferite distane de la mal, diferite adncimi.Transportarea apei se efectueaz n frigidere portative la temperatura de 1-2 grade C. Analiza probelor trebuie efectuat n cel mult 2 ore de la prelevare (sau 6 ore cu pstrarea probei n frigider).

Determinarea NTGNTG reprezint numrul de mi/o care se conin ntr-un ml de ap (germenii mezofili anaerobi facultativi saprofii care populeaz rezervorul de ap i sunt capabili s formeze pe medii de cultur colonii vizibile cu ochiul liber sau cu lupa).Pentru determinarea NTG cte 1 ml de ap se introduce cu pipeta n 2 cutii Petri sterile, n care se toarn cte 5-7 ml de geloz topit i rcit la 45 C. Coninutul cutiilor se repartizeaz uniform, iar dup solidificarea gelozei cutiile se introduc n termostat la 37 C pentru 24 ore.Lectura i aprecierea: se numr toate coloniile crescute att la suprafaa mediului, ct i n profunzimea gelozei i se calculeaz media aritmetic.

Determinarea bacteriilor din grupul coli (bacteriilor coliforme)Acest grup include reprezentani ai familiei Enterobacteriaceae din genurile Escherichia, Klebsiella, Citrobacter, Enterobacter, etc.Reprezint bastonae G-, asporogene, care fermenteaz glucoza i lactoza pn la acid i gaz (la 37 C timp de 24 ore). Aceste mi/o ptrund n mediul ambiant, inclusiv n ap, cu masele fecale ale omului i animalelor, de aceea depistarea lor indic o poluare fecal a mediului i pericolul unor infecii intestinale.Determinarea bacteriilor coliforme se realizeaz prin 2 metode:

Metoda membranelor filtranteMetoda titrrii (fermentrii)

Metoda membranelor filtranteSe bazeaz pe capacitatea membranelor filtrante de a reine bacteriile din apa de examinat cu izolarea lor pe medii de cultur i identificarea lor.Se utilizeaz membrane filtrante din nitroceluloz nr 2 i 3. Ele se fierb n prealabil timp de 10 min n ap distilat. Filtrarea se efectueaz n filtrul Seitz cu utilizarea a 2-3 membrane. Apa din apeduct se filtreaz n volum de 333 ml, iar din fntni, izvoare 100 ml. Membranele se scot cu pensa steril i se aplic pe mediul Endo cu suprafaa pe care se afl bacteriile n sus. Cutiile se ncubeaz la 37 C timp de 24 ore.

Bacteriile din grupul coli vor forma colonii tipice roii cu luciu metallic. Pentru confirmare se pregtesc frotiuri, colorate Gram i se monteaz testul oxidazei (Gram-, oxidaza-)Aceast metod permite determinarea indicelui coli cantitatea de bacterii din grupul coli care se conine n 1 l de ap. Pentru determinarea indicelui coli numrul de colonii tipice se nmulete cu 1000 i se mparte la volumul de ap filtrat (ex.: 6x1000:333 =18). Titrul coli reprezint volumul minim de ap n care se conine o singur bacterie coliform.

Metoda titrriiPrin aceast metod are loc iniial mbogirea coliformilor m medii cu glucoz, izolarea lor pe mediul Endo i identificarea culturilor pure izolate. Apa potabil se nsmneaz n volum de 333 ml: 3 volume cte 100 ml, 3 cte 10 ml i 3 cte 1 ml. Se incubeaz la 37 C timp de 24 ore. Din tuburile cu cretere (turbiditate, acid i gaz) se repic pe cutii cu mediul Endo. La etapa urmtoare creterea coloniilor lactoza+, constituite din bastonae G-, oxidaza-, permite formularea unui rspuns pozitiv. Pentru determinarea coli-indicelui i coli-titrului se consult tabele speciale.

Din grupul coliformilor se difereniaz coliformii fecali (bacterii coli-fecale), capabili s fermenteze lactoza cu producere de acid i gaz la temperatura de 44,5 C n 24 ore. Prezena lor indic o poluare fecal recent.

Aprecierea calitii apei conform indicilor bacteriologicin conformitate cu cerinele STAS, apa de robinet trebuie s conin nu mai mult de 100 microorganisme la 1ml (NTG), coli-indicele nu mai mare de 3 i coli-titrul mai mare de 333 ml. Apa bazinelor de not trebuie s corespund cerinelor pentru apa de robinet.Pentru apa din fntni i izvoare este stabilit coli-indicele pn la 10 i coli-titrul nu mai mic de 100 ml.Sursele de ap nu trebuie s conin flor patogen.

ANALIZA SANITARO-BACTERIOLOGIC A AERULUIAerul este un mediu n care mi/o nu se multiplic. El se impurific cu mi/o din sol i din excretele omului i animalelor.Analiza sanitaro-bacteriologic a aerului urmrete scopul de a da o apreciere igienic i epidemiologic a mediului aerian i de a elabora msuri orientate spre profilaxia infeciilor aerogene.O deosebit atenie se acord studierii microflorei aerului din instituiile pentru copii i medicale.Aprecierea strii sanitare a aerului din ncperile nchise se efectueaz dup cantitatea microorganismelor sanitaro-indicante (stafilococi, alfa- i beta-streptococi), precum i numrul total de microorganisme (NTM, NTG) la 1 m3 de aer.n clinici chirurgicale, materniti i n alte instituii medicale se determin i flora potenial patogen, care poate cauza infecii nozocomiale.

Recoltarea probelorProbele de aer pentru investigaie din ncperi nchise se recolteaz din 5 puncte (n coluri i n centru), la o distan de 0,5 m de la perei i la o nlime de 1,6-1,8 m (n ncperi de locuit) sau la nivelul patului (n saloane de spital).Recoltarea se efectueaz prin metoda de sedimentare sau de aspiraie.

Metoda de sedimentare simpl, accesibil, dar mai puin exact. Cutii deschise cu medii de cultur se instaleaz pe suprafee orizontale n punctele de recoltare. Bacteriile din aer se vor sedimenta pe suprafaa mediului.Metoda de aspiraie este mai avantajoas. n acest caz are loc sedimentarea forat a mi/o din aer pe suprafaa mediului de cultur sau n lichidul de captare. Pentru aceasta n practica bacteriologic se utilizeaz aparatul Krotov, captatorul Recimenski .a. Probele de aer se recolteaz cu o vitez de 20-25 l/min. Pentru determinarea indicatorilor microbiologici se recolteaz pn la 250 l de aer.

Numrul total de microorganisme (NTM)NTM se determin la 1m3 de aer. Cu ajutorul aparatului Krotov se aspir 2 probe de aer a cte 100 l pe 2 cutii Petri cu geloz. Se incubeaz la 37C 24 ore. Se numr coloniile crescute i se calculeaz media aritmetic. Pentru determinarea NTM se efectueaz recalcularea la 1 m3 de aer.

Determinarea stafilococilor i streptococcilorn acest scop se folosesc probe de aer n volum de 200-250 l cu utilizarea mediilor elective corespunztoare. Se numr coloniile crescute, care ulterior vor fi identificate. Tulpinile de S.aureus vor fi supuse fagotipizrii (pentru depistarea sursei infeciei i cilor de transmitere).Determinarea microorganismelor patogene (C.diphtheriae, M. tuberculosis, salmonele).

Astfel de investigaii se efectueaz la indicaii epidemiologice. Se examineaz probe de aer n volum de 1000 l