Exudatul oro-faringian

Recomandari de realizare a examenului bacteriologic al exudatului oro- faringian

Principalele obiective

Angina acuta Medii de cultura: Geloza sange sau geloza sange cu inhibitori incubata in atmosfera cu

10% CO2 sau anaerobioza. Anaerobioza este recomandata pentru o mai buna evidentiere a β-hemolizei.

Evidentierea de Arcanobacterium haemolyticum (bacil Gram pozitiv coryneform) se poate realiza pe geloza sange, inse trebuie prelungita incubarea cu 24-48 ore pentru a se putea evidentia zona de β-hemoliza care se formeaza in jurul coloniilor cu un aspect asemanator streptococului.

Pentru H.influenzae: geloza cu sange tratat termic sau geloza chocolat imbogatita cu polivitamine, incubata in atmosfera cu 10% CO2 cu sau fara bacitracina),

Izolare de Streptococcus pyogenes (grup A) si de streptococci β-hemolitici din grupele C si G.Daca angina este insotita de o iritatie cutanata: Streptococcus pyogenes si Arcanobacterium

haemolyticum (mai ales la adultul tanar).In cazul anginei recidivante se analizeaza suplimentar: H. nfluenzae (S. aureus, Moraxella

(Branhamella) catarrhalis (pe medii uzuale, insa creste mai repede pe geloza chocolat)

Angina ulcero-necrotica Este esentiala realizarea frotiuluiSe evidentiaza asociatia de fusospirochete caracteristica anginei Vincent

Angina cu membrane falseMediu de cultura: Mediul Loffler sau TinsdaleSunt prelevate si membranele false

Izolare Corynebacterium diphtheriae

Candidoza orofaringianaRecoltarea se efectueaza de la nivelul limbii, palatului si fetei interne a obrajilor.Mediu de cultura: Sabouraud cu cloramfenicol sau gentamicina incubat la 30 grade C.

Izolare Candida albicans

Bilantul initial al unei boli cu transmitere sexualaPentru N. gonorrhoeae daca nu se poate realiza imediat insamantarea este indispensabila

folosirea unui mediu de transport tip Stuart sau AmiesMediu de cultura: Geloza chocolat imbogatita cu polivitamine si un inhibitor (tip VCAT)

si incubata in atmosfera cu 10% CO2

Izolare de N. gonorrhoeae

Pneumonie interstitiala Izolare de Chlamydia pneumoniae

Flegmon amigdalian Examen citobacteriologic al produsului obtinut prin punctie Izolare de : S. pyrogenes, H. influenzae, S. aureus, anaerobi (Fusobacterium spp., B. fragilis,

Peptostreptococcus spp.)

1 Prelevare si transportinaintea tratamentului local sau general cu antibioticprelevarea cu tamponul de pe amigdale (sau amigdala in cazul amigdalitei unilaterale), de pe valul palatin si partea posterioara a faringelui.2 tampoane:

etalarea pe lama insamantare

Daca insamantarea nu se realizeaza in maxim 2 ore se foloseste un mediu de transport tip Stuart sau Amies.

2 Examen direct• Examenul microscopic al frotiului dupa coloratia Gram :

– Semnalizarea prezentei sau absentei leucocitelor, indicatori ai inflamatiei– Evidentierea asociatiei fuso-spirochete caracteristica anginei Vincent– Eventualul sumar al florei (calitativ si cantitativ) al microbiotei

A. haemolyticum

M. catarrhalisExudatul oro-faringian

M. catarrhalis

Asocierea fuso-spirochetiana in angina Vincent

Interpretare Angina acuta: singurul patogen recunoscut este Streptococcus pyogenes (grup A).La comunicarea analizei microoganismelor potential patogene se fac evaluari semicantitative. Nu se mentioneaza prezenta bacteriilor din microbiota comensala.

Streptococcus pyogenes indiferent de cantitatea in care se regaseste, se analizeaza cel putin pentru penicilina G, eritromicina, lincomicina, tetraciclina.Se efectueaza antibiograma pentru; streptococii din grupurile C si G, cand sunt izolati in cantitati semnificativeA. haemolyticumN. gonorrhoeaeIn celelalte cazuri realizarea antibiogramei depinde de cantitatea de microorganisme izolata. In cazul anginei recidivante - la H. influenzae si M. catarrhalis este necesara antibiograma pentru detectarea tulpinilor porducatoare de betalactamze

Neisseria gonnorhoeae

Corynebacterium diphteriae Streptococcus pyogenes

EXAMENUL CITOBACTERIOLOGIC AL URINII (ECBU)Prelevare si transport•caz general- Prelevare din jetul mijlociu*

*Urina din primul jet (dupa un eventual masaj prostatic) , in caz de suspiciune de infectie uretrala sau prostatica cu Mycoplasma sau Chlamydia trachomatis: punctie suprapubiana dupa dezinfectia tegumentului ; cateterism uretral permite obtinerea de urina separat din rinichiul drept sau stang , ureterostomie, recoltarea intregului volum al mictiunii dupa 3 zile de restrictie hidrica (Mycobacterium)

Enterobacterii (mai ales E. coli, Proteus mirabilis), mai rar Enterococcus faecalis, Staphylococcus aureus, S. saprophyticus (la tinere).+La imunodeprimati: Pseudomonas aeruginosa, Acinetobacter baumannii, Burkholderia cepacia, Stenotrophomonas maltophilia, Staphylococcus “coagulazo-negativ”, Corynebacterium urealyticum (vechiul grup D2), Candida spp (albicans si glabrata), mai rar: Oligella urethralis, Aerococcus urinae, Lactobacillus spp

PROBA DE URINA- REPARTIZARE STERILA IN 2 RECIPIENTE

1. CENTRIFUGARE – 5 MIN, 1800RPM

SEDIMENT

2. INSAMANTARE CANTITATIVA PE MEDII DE CULTURA

EXAMENUL BACTERIOLOGIC = UROCULTURA

Dilutii zecimale al probei de urina / Tehnica ansei calibrate/ Metoda lamei imersate

Medii de cultura: geloza singe si mediu lactozat (CLED/MacConkey fara inhibitor) sau mediu cromogen

Incubare 24 ore, 37oC

EXAMENUL CITOLOGIC• calitativ

– Examinarea frotiurilor colorate Gram realizate permite observarea eventualelor microorganisme prezente si orientarea catre alegerea mediilor de cultura in functie de morfologia si afinitatea lor tinctoriala.

• cantitativ– Camera de numarare – stare fiziologica, urina contine sub 10 000 leucocite si

5 000 hematii per ml.• Infectiei urinara =proces inflamator:

– >50 000 leucocite/ml– >10 000 hematii/ml – Celule urotepiteliale frecvente– Cristale

3. Interpretarea rezultatelor ECU

Bacteurie Piurie SimptomeTratame

nt

Colonizare + - - -

Infectie asimptomatica + + - +*

Infectie simptomatica + + + +

Inflamatie fara infectie - + - ±

Simptome fara infectie - - + ±

*in unele circumstante

4. Interpretarea “bacterio-clinica”

Categorii Criterii microbiologice

Infectie urinara acuta fara complicatii la femeie

≥10 000 L/ml≥103 UFC/ml uropatogeni recunoscuti

Pielonefrita acuta simpla ≥10 000 L/ml≥104 UFC/ml uropatogeni recunoscuti

ITU cu risc sau complicate ≥10 000 L/ml≥105 UFC/ml uropatogeni recunoscuti

Bacteriurie asimptomatica (controlata prin 2 ECU)

≥10 000 L/ml≥105 UFC/ml

2. INTERPRETAREA REZULTATELOR UROCULTURIIBacteriurie <103 UFC/ml – absenta infectiei

Bacteriurie >105 UFC/ml – posibila infectie / identificare/ antibiograma Bacteriurie 103 si 104 UFC/ml – incertitudine (se repeta)

EXAMENUL CITOBACTERIOLOGIC AL URINII (ECBU)1. Interpretarea calitativa a cresterii pe medii de cultura:

Crestere pe geloza singe

Crestere pe mediu lactozat Rezultat

1 singur tip de colonii + + BGN, levuri

1 singur tip de colonii + - CGP, corineformi

1 singur tip de colonii - - Bacterii fastidioase, intracelulare, urocultura sterila

2 sau mai multe tipuri de colonii

+ +Contaminare : Nu se lucreaza !!!

Exceptie: pacienti cateterizati

Examenul secretiilor vaginale

Microorganisme ale cailor genitale feminine

Microorganisme intotdeauna patogene Microorganism comensale eventual patogene

Microorganism fara patogenitate cunoscuta

Neisseria gonorrhoeae Candida albicans Lactobacillus

Chlamydia trachomatis Gardnerella vaginalis Corynebacterium

Trichomonas vaginalis Mobiluncus spp Neisseria alte decat gonorrhoeae

Herpes virus Mycoplasma, Ureaplasma Staphylococcus non aureus

Staphylococcus aureus

Streptococcus spp

Bacterii strict anaerobe

Enterobacterii

Papillomavirus

1. Prelevarea si transportul produselor patologice:uretrite:

Prelevat endo-uretral cu tamponul sau raclaj uretral (Chlamydia)ulceratii ano-genitale:

Recoltarea serozitatilor se va efectua de la nivelul bazei sau marginii ulceratiei cu un vaccinostil, o chiureta sau un tamponBiopsiile sau punctia ganglionului satelit se poate realiza de preferinta la cabinetul medicului sau spital

Pustule:colectarea continutului cu seringa sau tamponul

Recoltarea primului jet de urina –uretrite cu ChlamydiaVulvo-vaginite -recoltarea cu tamponul a secretiilor din orificiul vaginal si vestibul vaginal posteriorBartolinitele - aspirarea cu seringa din canal sau prelevarea cu tamponul.Cervicite - recoltare cu tamponul din endocol si se analizeaza intotdeuna la acest nivel gonococul si Chlamydia.Endometrite - prelevat din endocol si eventual aspirarea transcervicala prin cateter .Anexite -lichidul abcesului este prelevat cu seringa si celulele tubo-peritoneale prin periere in cadrul unei interventii chirurgicale.material intra-uterin

Transportul prelevatelorDaca prelevarile nu sunt efectuate in laborator, probele trebuiesc transportate rapid prin medii de transport adecvate( gonococ, Chlamydia, Mycoplasma, virus).

Examenul citobacteriologic direct • Ulceratii:

– Examen extemporaneu la microscop cu fond negru al serozitatii sancrului - Treponema pallidum (alternativ imunofluorescenta directa, impregnarea cu argint sau coloratia Vago).

– Coloratia May-Grundwald-Giemsa a frotiurilor realizate din serozitatile sancrului- Haemophilus ducreyi

• Uretrite, cervicite si vaginite:– Preparat proaspat lama-lamela - Trichomonas vaginalis sau Candida albicans – Coloratia Gram -diagnosticul gonoreei, al candidozei determinate de Candida albicans, si mai ales studiul microbiotei

bacteriene vaginale si echilibrul sau– scor de la 0 la IV (scor 0, I –microbiota echilibrata, scor II, III- dezechilibru de microbiota cu lactobacili prezenti, scor IV –

microbiota normala complet substituita, lactobacili absenti)– In vaginoza bacteriana se observa dezechilibrul florei comensale in favoarea anaerobilor sau Gardnerella vaginalis, scor 3

sau 4– Chlamydia trachomatis -imunofluorescenta.

Haemophilus ducreyiGardnerella vaginalis

Mobiluncus

Insamantarea:Geloza cu sange tratat termic cu si fara inhibitori pentru izolarea de Neisseria gonorrhoeae incubat in atmosfera de 10% CO2 Geloza sange pentru bacterii Gram pozitive: Streptococcus agalactiae, Staphylococcus aureus.Izolarea de Gardnerella vaginalis pe geloza cu sange uman nu are semnificatie decat daca este insotita de o apreciere semicantitativa. Geloza lactozata : izolarea diferitelor bacteria Gram negative, in particular enterobacteriile care nu sunt luate in consideratie in cazul uretritelor si vaginitelor.

In cazul unei recomandari explicite:Culturi celulare pentru a se izola Chlamydia trachomatis.medii artificiale imbogatite cu ser de vita si extract de levuri pentru Mycoplasma hominis, Ureaplasma urealyticum.Geloza sange cultivata in anaerobioza pentru endometritele postpartum sau dezvoltate pe dispozitive intrauterine pentru a determina Prevotella.Medii speciale pentru micobacterii in cazul endometritelor (rare), epididimitelor cu Mycobacterium tuberculosis.

Antibiograma:Se realizeaza in mod sistematic in infectiile endocervicale ale aparatului genital superior pe germenii patogeni izolati, pe tulpinile de gonococ cu determinarea

producatorilor de betalactamaze. Nu se realizeaza pe bacteriile care colonizeaza in mod normal aparatul genital in special la femeie exceptie facand streptococul de grup B in cursul celui de-al treilea

semestru de sarcina pentru a se preveni posibilitatea unei infectii neonatale.

Examenul secretiilor vaginale

Mobiluncus Candida albicans Trichomonas

Neisseria gonnorrhoeae

Examenul coproparazitologic si coproculturaPrincipalele microorganisme care determina diaree

Bacterii Salmonella, Shigella, Campylobacter, Yersinia, EPEC, ETEC, EHEC, EIEC, Vibrio, Aeromonas, Staphylococcus, Bacillus, Clostridium

Virusuri Rotavirus, Adenovirus, Astrovirus, Calicivirus, Coronavirus, virusul Norwalk

Protozoare Entamoeba, Giardia, Isospora, Cryptosporidium, Balantidium

Helminti Schistosoma, Strongyloides, Ancylostoma, Necator, Trichuris, Trichinella

2. Frotiuri colorate Gram: Aprecierea procentajului celor doua tipuri

tinctoriale. Microbiota echilibrata este formata in

majoritate de bacilli gram negativi insa sunt prezenti intotdeauna si bacilli Gram pozitivi. Orice perturbare notabila a acestui elichibru trebuie semnalata.

1. Preparate lama/lamela Sol. Lugol- protozoare Verde malachit- helminti Orientarea diagnosticului bacteriologic:

- germeni invazivi - prezenta leucocitelor (Salmonella spp., Shigella spp.,

Campylobacter spp.)- germeni enterotoxigeni – leucocite absente (V. cholerae,

Aeromonas spp., C. Difficile)

Examenul microscopic direct

Adult sau copil peste 2 ani:Salmonella si Shigella.

mediu selectiv de izolare (geloza SS, XLD, DCL, Hektoen) mediu de imbogatire (3-6h) pentru Salmonella (bullion

Mueller-Kauffmann, Selenit) Campylobacter spp. - mediu specific (Karmali, Skirrow sau

Buztler). Culturile sunt incubate minim 48 ore in mediu microaerofil.

Yersinia enterolitica mediu de imbogatire (mediu Rapapport), incubare 24-48

ore la +40C si repicare pe medii specific pentru Yersenia mediu Wauters (geloza SS imbogatita cu dezoxicolat) mediu Irgasan-cefsulodin si novobiocin incubate pana la 48 ore la 300C.

Copil sub 2 ani EPEC- medii tip EMB sau Drigalski.

.

Insamantarea

Contexte epidemico-clinice particulare:V. cholerae - imbogatire in apa peptonata alcalina si repicare la fiecare 3 ore

pe mediu gelozat specific (de ex. TCBS)Aeromonas spp pe geloza sange cu adaos de ampicilinaBolnavi aflati sub tratament cu antibioticClostridium difficile - punerea in evidenta a toxinei B in filtratele de scaun

prin determinarea ECP pe culture celulare (fibroblaste, cellule Vero, MRC-5, Mac Coy). Citirea se face dupa 24-48 de ore.

metode rapide imunoenzimatice pentru detectia rapida de toxina A sau de toxina A si B cand rezultatele se citesc in maxim 3 ore.

Sindrom hemolitic uremic - Izolarea de E. coli O157 se realizeaza pe geloza MacConkey cu sorbitol, coloniile sorbitol (-) sunt agglutinate pe latex.

In toate cazurile este necesara realizarea antibiogramei mai ales pentru Salmonella, Shigella, E. coli, V. cholerae

Examenul bacteriologic al sputei

1. Recoltarea – dimineata, dupa clatirea bucodentara cu apa distilata sterila, dupa un efort de tuse

2. Examenul microscopic- frotiu colorat Gram (clasificarea Bartlett, adaptata de Murray si Washington)

Clasa 1 Celule Epiteliale/cimp Leucocite/cimp

1 >25 <10 - contaminare puternica cu saliva

2 >25 10-25 - contaminare puternica cu saliva

3 >25 >25 - comtaminare redusa cu saliva

4 10-25 >25 - comtaminare redusa cu saliva

5 <10 >25 - corespunzator pentru cultivare

3. Diluarea probei cu SF si insaminatarea pe: -Geloza chocolat imbogatita

-Geloza singe

-Geloza selectiva pentru bacili Gram-

5. Antibiograma pentru speciile care depasesc cantitativ pragul de >=107UFC/ml

4. Principalele specii implicate in etiologia pneumoniilor nosocomiale, comunitare si a suprainfectiilor bronsice:

S. pneumoniae, H. influenzae, S. aureus, M. cattarrhalis, K. pneumoniae, Alti BGN, P. aeruginosa. Burkholderia caepacia

Pneumonii Suprainfectii bronsice

Mucoviscidoza

comunitare nosocomiale

S. pneumoniae

H. influenzae

S. aureus

M. catharallis

K. pneumoniae

Alti BGN

P. aeruginosa

Burkholderia caepacia

Micobacterii

Chalamydia pneumoniae

Mycoplasma

Legionella

Coxiella

Anaerobi

Candida

Aspergillus

Testarea sensibilitatii la antibioticeMetoda disc difuzimetricaCLSI, 2009

Determinarea valorii CMI

Prepararea inocululuiSer fiziologic steril0.5 MacFarland

Insamintarea inocululuiMediu Muller Hinton (4mm)Mediu MH cu singe (streptococi)MH singe chocolat (Haemophylus)

Tehnica insamintarii in pinza cu tamponul

Depunerea discurilor PensaDispencer3 cm intre centrul discurilor, 1.5 cm de marginea placii

Preincubare- 20 min, temp. camereiIncubare- 18-24 h, 37oC

Citirea si interpretarea rezultatelor:-Masurarea diametrului zonei de inhibitie-Consultare tabele CLSI, convertire in R, I, SInterpretarea fenotipica amecanismelor de rezistenta:-Antagonism IMP, AMC si peniciline sau cefalosporine- betalactamaza inductibila-Sinergism AMC si peniciline, cefalosporine gen. I, II– betalactamaza sensibila la inhibitori-Sinergism AMC si cefalosporine gen. III, IV- betalactamaza de spectru larg (ESBL)-Antagonism Ery si Cli (fenotip MLSb inductibil)

E-test – confirmarea unui mecanism de rezistenta-E-TEST ESBL (CGIII/CgIII+ Inhib.)--E-TEST Metalobetalactamaze (IMP/IMP+EDTA)-E-test vancomicina

Metoda microdilutiilor-sol. stoc de antibiotic cf. CLSI-Suspensie batceriana 0.5 McFarland-Placi cu 96 de godeuri-MH lichid (200 ul)- dilutii binare de antibiotic- Martor +, Martor -

Incubare- 18-24 h, 37oC

Citire si interpretare-Martor- = mediu clarMartor _= mediu tulburePrimele godeuri- mediu clar, absenta cresterii microbieneUltimele godeuri- mediu tulbure, crestere microbianaCMI- ultimul godeu la care se observa inhibarea cresterii microbiene