FIZIOLOGIA

Date post:26-Dec-2015
Category:
View:200 times
Download:17 times
Share this document with a friend
Transcript:
  • FIZIOLOGIA SANGELUI

  • Tipuri celulare de evoluieCaracteristici generale Aspecte morfo-funcionale1. CSP (celula stem pluripotent)- au receptori pt. eritropoietin- au capacitate de proliferare i diferenierecelule nucleate2. BFU-E(Burst Forming Unit-E; celule formatoare de colonii eritroide "de tip exploziv")3. CFU-E(Colony Forming Unit-E; celula formatoare de colonii eritroide)

  • Tipuri celulare de evoluieCaracteristici generale Aspecte morfo-funcionale Reticulocit- nu are capacitate de proliferare- trece n snge = eritrodiabaz dup 1-2 zile- n snge (5-15) se matureaz n splin, care extrage resturile de mitocondrii i ribozomi- sintetizeaz Hb i enzime pn la pierderea ribozomilor i mitocondriilorcelul anucleat cu resturi de ribozomi i mitocondrii Eritrocit matur- nu are capacitate de proliferare- nu sintetizeaz Hb, enzime- durat de via = 100-120 zilecelul anucleat, fr ribozomi, fr mitocondrii

  • Pentru studiul morfologiei elementelor figurate se foloseste curent examenul frotiului de sange periferic.

  • Pentru explorarea elementelor figurate ale sangelui, se folosesc in practica o serie de determinari reunite sub numele de hemoleucograma si anume :- numaratoarea erirocitelor- dozarea hemoglobinei- determinarea hematocritului- indicii eritrocitari- numaratoarea de leucocite si - formula leucocitara. Numaratoarea trombocitelor apare si ea pe acelasi buletin de analiza. Aceste masuratori se pot face atat din sangele venos recoltat pe anticoagulant cat si din sangele capilar.Determinarea VSH ( vitezei de sedimentare a hematiilor ) completeaza investigatiile .

  • Hematiile ( de la grecescul haima=sange ) sunt elemente figurate anucleate in forma de disc biconcav . Pe frotiu au diametrul mediu de 7,5 si culoarea rosie-caramizie, sunt mai intens colorate la periferie si mai palide la centru . Modificarile de forma, dimensiune si culoare se intalnesc in diverse stari patologice. Durata de viata a hematiilor este de circa 120 de zile. 1. NUMARATOAREA HEMATIILOR

  • Materiale necesare pt. numaratoarea hematiilor:1.ace de seringa, alcool, tampoane de vata 2. pipeta Potain. Este compusa dintr-un tub capilar gradat, cu diviziunile 0,5 si 101 inscrise si o bula de dilutie cu o bila rosie marcand eritrocitele. In partea superioara, pipeta este atasata la un tub de cauciuc care permite o aspiratie uniforma

  • 3. lichid de dilutie : solutie Hayem ( clorura de sodiu, sublimat, sulfat de sodiu, apa distilata ) sau ser fiziologic. Lichidul trebuie sa fie izoton pentru a impiedica hemoliza. 4.camera de numarat (hemocitometru) cea mai folosita este camera Burker Turk cu o retea formata din 9 patrate de 1 mm2 delimitate prin linii triple. Patratul din mijloc este impartit la randul lui in 400 de patratele mici : 1/400 dintr-un mm si se foloseste la numararea eritrocitelor. Inaltimea camerei este de 0,1 mm.

    5. lame, lamele

    6. microscop

  • Tehnica numararii eritrocitelor : Dupa dezinfectarea cu alcool, se inteapa lateral pulpa degetului cu un ac de seringa. Prima picatura se sterge cu un tampon de vata iar urmatoarea se aspira cu pipeta Potain pana la diviziunea 0,5 si in continuare se aspira lichidul de dilutie ( solutia Hayem sau serul fiziologic ) pana la diviziunea 101. Daca din greseala se aspira mai mult sange, se sterge varful pipetei cu o hartie de filtru pana ce coloana ajunge la diviziunea dorita. Se realizeaza in acest mod o dilutie a sangelui 1/200. Apoi pipeta se astupa la cele doua capete cu degetul mare si cel mijlociu si se omogenizeaza prin agitare timp de 1 3 minute pentru liza celorlalte elemente figurate. Se acopera reteaua de numarat a camerei cu o lamela care se fixeaza cu ajutorul cavalerilor sau prin simpla adeziune. Aderenta se verifica prin aparitia inelelor de refractie a luminii ( inelele Newton ). Din pipeta Potain se arunca primele 2 3 picaturi si se lasa sa cada la marginea camerei o picatura de sange care va patrunde prin capilaritate in spatiul de 0,1mm dintre lama si lamela. Se asteapta 1 2 minute pentru sedimentarea eritrocitelor pe grila si apoi se examineaza la microscop cu obiectiv uscat mare 40x, ocular 10x sau 7x, la lumina slaba.

  • Camera se fixeaza in asa fel incat in campul microscopului sa apara patratelele mici de 1/400. Se face numaratoarea pe 5 patrate de 1/25 ( 4 pe diagonala retelei si al cincilea ales la orice nivel ). Patratul de 1/25 are 16 patratele mici de 1/400 deci in total pe 80 de patratele mici de 1/400 mm2. X ----- va fi media hematiilor dintr-un patrat cu o suprafata egala cu a 400 80parte dintr-un milimetru. Pentru calcularea numarului de hematii dintr-un mm3 de sange se foloseste urmatoarea formula : X Nr. hematii/ mm3 de sange = ----- x 400 x 10 x 200 80 X----- = media pe un patrat ( pe a 400-a parte dintr-un mm ) 80

    400 = corectia pentru aducerea la mm2 10 = corectia pentru aducerea la mm3 ( adancimea retelei pe care s-a facut numaratoarea fiind de 0,1 mm ) 200 = dilutia sangelui in pipeta de recoltare

  • Numarul eritrocitelor pe mm3 de sange variaza in raport cu sexul, varsta si in diferite conditii fiziologice si patologice. - la copil : 5 6 milioane / mm3 - la barbat : 4,5 5 milioane / mm3 - la femeie : 4 4,5 milioane / mm3. Numarul de eritrocite prezinta variatii in functie de presiunea partiala a oxigenului : creste la altitudine ( poliglobulia de altitudine ) si scade la mineri si in mediul subacvatic. Poliglobulia se mai intalneste la nou-nascut ( se corecteaza printr-o hemoliza intensa la cateva zile dupa nastere = icterul nou-nascutului )si in conditii de hipovolemie sau hipoxie.Scaderea numarului de eritrocite asociata cu scaderea hemoglobinei se intalneste in boala numita anemie. Apare in conditii fiziologice prin hemodilutie in cazul ingestiei unei cantitati mari de apa si in conditii patologice prin deficit de producere a hematiilor, pierdere sau hemoliza eritrocitara.

  • 2. Dozarea hemoglobinei in sange :Determinarea hemoglobinei din sange se poate realiza practic prin metode colorimetrice, spectroscopie, metode chimice sau cristalografie. Metoda colorimetrica Sahli : Principiu : compararea vizuala a clorhidratului de hematina obtinut din sange amestecat cu HCl cu solutia de clorhemina existenta in aparat.Materiale necesare : hemoglobinometru Sahli . Acesta este alcatuit dintr-un recipient cu trei eprubete in interior . Eprubeta din mijloc are doua scale gradate, una este numerotata de la 10 la 140 unitati Sahli si cealalta de la 2 la 25 va servi pentru masurarea in procente a Hb. Diviziunii 100 ii corespunde o valoare a hemoglobinei de 16 g %. Eprubetele laterale sunt umplute cu substanta etalon ( clorhemina in glicerina ). pipeta capilara Sahli pentru recoltarea sangelui, pipeta pentru apa distilatabagheta de sticla pentru omogenizaresolutie HCl n/10apa distilata.

  • Tehnica de lucru : in eprubeta centrala gradata a hemoglobinometrului Sahli, se pune solutie HCl n/10 pana la diviziunea 10. Se recolteaza 0,02 ml de sange, dupa inteparea pulpei degetului, cu ajutorul pipetei speciale Sahli si se adauga peste HCl. Se asteapta cateva minute ( 5 7 minute ), timpul necesar formarii clorhidratului de hematina cand culoarea amestecului se inchide ( devine bruna ).Se dilueaza apoi incet cu apa distilata omogenizand cu bagheta din sticla pana cand culoarea amestecului din eprubeta centrala ajunge la aceeasi nuanta cu etalonul. In acest moment, se citeste direct pe eprubeta, pe scara gradata, diviziunea corespunzatoare meniscului inferior al lichidului. Este valoarea Hb din sangele respectiv exprimata procentual ( g % ). Valori normale : - barbati : 14 18 g / 100 ml sange - femei : 12 16 g / 100 ml sange - nou-nascuti : 16 25 g / 100 ml sange - sugari : 12 16 g / 100 ml sange - copii : 12 14 g / 100 ml sange.

  • 3.DETERMINAREA HEMATOCRITULUIHematocritul ( Ht ) reprezinta procentul eritrocitelor dintr-un volum de 100 ml de sange. Este de aproximativ 45 %. Deci, din 100 ml de sange, 45 de ml sunt reprezentati de eritrocite si 55 de ml de plasma. Masurarea Ht -ului reprezinta in prezent un criteriu mai fidel de apreciere a normalitatii continutului in hematii din sange, mai sigur decat numaratoarea hematiilor pe lama. Principiul metodei : sangele venos recoltat pe anticoagulant se separa prin centrifugare in eritrocite si plasma si si apoi se calculeaza raportul volumelor lor.Materiale necesare : seringa, ace de seringa, tampoane de vata, alcool, substante anticoagulante - amestec de oxalati Wintrobe: oxalat de amoniu, oxalat de potasiu, apa distilata sau heparina- tuburi gradate Winthrope ( tuburi de hematocrit ) = doua tuburi de sticla , cu pereti grosi ca sa reziste la centrifugare, gradate, impartite in 100 de diviziuni si montate intr-o rama metalica care se poate adapta axului centrifugei.pipete Pasteur pentru aspiratia sangelui, centrifuga ( normala sau speciala ).

  • Tehnica de lucru : Sangele venos, recoltat pe anticoagulant, se aspira cu ajutorul unei pipete Pasteur si cu el se incarca pana la diviziunea 100 tuburile de hematocrit Winthrobe care se monteaza apoi la axul centrifugei. Dupa centrifugare, 30 de minute la 3000 de turatii/minut, repetata pana cand nivelul sedimentului nu se mai modifica, se citeste, la limita inferioara a stratului cenusiu de leucocite, nivelul rosu care indica valoarea procentuala a volumului de hematii sedimentate. Aceasta valoare consideram ca reprezinta hematocri