1. Diagnosticul de laborator n infeciile produse de bacilii Gram-negativi - Fam. EnterobacteriaceaeCuprinde organismele patogene pentru om cum ar fi: Salmonella, Shigella, Yersinia i condiionat patogene Esherichia colii (E. coli), Proteus, Klebsiella.Enterobacteriile sunt definite ca o grupare de bacili G (-), mobile sau imobili (Klebsiella, Shigella, Yersinia la 370C), aerobe i facultativ anaerobe, nesporulate, necapsulate (exceptie Klebsiella in vivo)Metabolismul este de tip respirator (aerob) i fermentative (facultative anaerob) producnd acid din glucoz sau alte zaharuri, cu producere sau nu de gaz. Majoritatea sunt catalazo (+), oxidazo (+), reduce nitraii la nitriti.Mobilitatea datorat cililor peritrihi.Invazivitatea este o caracteristic a tupinilor de Proteus i Klebsiella. Este inhibat de anumite substane tensioactive (acizii biliari, detergenti) i colorani (verde brilliant, cristal violet).

8.1. Diagnosticul de laborator n infeciile cu E.coliE. coli cuprinde tulpini condiionat patogene (saprofite) i patogene (E.coli enteropatogena, E. coli enterohemoragica, E. coli enterotoxigena, E. coli enteroinvaziv, etc.)Recoltarea i transportul produselor patogene:-Materiile fecale (n coprocultoare cu mediu de transport ex. Blair) se recolteaz din mai multe zone i poriuni edificatoare;- Lichid de vrstur (n plcii Petrii sterile);- Urina n urocultoare dimineaa dup toaletarea zonei, se recolteaz jetul mijlociu.Transportul se face n maxim 2 ore de la recoltare, la temperature camerei.Examenul direct de laborator:Macroscopic: - materiile fecale pot avea urme de mucus, uneori sanghinolente, cu lambouri de mucoas epitelial, - urina estetulbureopalescent cu sediment i cu miros de varzacr, uneori pot fi prezenteiurmesanghinolente.Microscopic: Pe frotiul colorat Gram se observ prezena bacililor subiri cu capete rotunjite G (-), leucocite PMN, celule EK de diferite tipuri, mucus, resturi obinute din digestie. Pe frotiul din sedimentul urinar se observ bacilii, cellule inflamatorii PMN-urile.n practica curent se fac i frotiuri native lama/lamel pentruaobservahematiilei PMN-le.nsmnarea:Se face pemedii slab selective MacConkey (coninesruribiliareicristal violet) i ADCL (agar, dezoxicolat, citrate, lactoza) ipeGelozsnge.ncazulurinii se face o uroculturcantitativ (nr. de bacteria /ml de urin). Se nsmnteazastfel 0,1 ml urindiluat (diluie de 1/1000), incubmdupapariiacoloniilor se numr, se nmulesc cu 10 i cu 1000 pentru a aflanumrul de bacterii /ml. Astfeldacnumrul de bacterii /ml estemai mare de 100.000 uroculturaestepozitiv. Dacnumrul de coloniiestemai mic de 10.000 sau absent rezultatulestenegativ. Dacrezultatulestepozitiv se trece la etapa de identificareirespectivantibiogram.Identificarea:Macroscopic: coloniile nepatogene sunt mari, de culoare roz pemediul MacConkey i galbenepe ADCL.Tulpinilepatogenesuntmariiincolore, iarpegelozasngesuntmari de culoaregrinchisidauhemoliza de tip .Microscopic: bacilisubiricapeterotunjitedispuialeatorpetoatsuprafata (Fig. 8.1.)

Fig. 8.1. Frotiucolorat Gram, bacili G (-) dispuialeator(fotoC.Defta)

Biochimic: se facpemediile de identificare TSI, MILF, MIU, saungaleriile de identificare a testului ID (Bio Meriux) - fermenteazglucoza cu producere de gaz; nmediulichidvizualizatprindeplasareatuburilor Durham.- tulpinilenepatogenesuntlatozo (+), celepatogenesuntlactozo (-);- nuproduchidrogensulfurat, pot produce indol, ureazo (+) isunt mobile.Teste de identificareantigenicaprinreacii de aglutinaresau latex aglutinare (vezireacia Ag-Ac).Antibiogramaobligatorie.

8.2. Diagnosticul de laboratorninfecia cu KlebsiellaRecoltareaitransporulproduselorpatologice- Alimenteleresponsabile de toxinfeciilealimentare (TIA) de tip infecios, produsulpatologic se recolteazntr-un recipient steril cu capac.-ninfeciileurinare se recolteazurin (nurocultoareincondiiileprezentate anterior).-ninfeciiletractului respirator se recolteaz sputa (nplci Petri)Examenul direct de laboratorMacroscopic: Urinaestetulbureopalescent, sputa estemucoid de culoarerounchis njeleu de coacze.Microscopic: pefrotiul gram se observbacilul G (-) sub form de picot cu capsul, prezenacelulelorinflamatorii PMN, macrofage, celule EK.nsmntareaPeMacConkey, pemediiobinuite, pegelozasnge, incubarea se face la 370C timp de 28 de ore.IdentificareMacroscopic: coloniimari 2-3 mm la 24 de ore peste 4 mm la 48 de ore, de tip M, bombate, lucioase, vscoase, cu aspect de curgerepemediu, extreme de aderente, cremoase de culoaregripemediugelozsnge.Microscopic: bacilisubiriasemntoriunuipicot cu capeterotunjite G (-).Biochimic: - degradeazglucoza cu producere de gaz, lactozo (+), nu produce H2S, ureazo (+), indol (-), citrat (+), citratulesteunicasurs de carbon. - Teste de identificareantigenice: aglutinareapelam, latex aglutinarea - Testareasensibilitatii la bacteriofagi.Antibiogramaobligatorie

8.3. Diagnosticul de laboratorninfecia cu ProteusRecoltareaitransporulproduselorpatologice:- ninfeciileurinareprodusulpatologicesteurina (recoltatnurocultoreincondiiilediscutate anterior), transportul se face n maxim 30 de la recoltare; - n TIA produsulpatologicsuntalimenteleimateriilefecale.- ninfeciilenosocomialeprodusulpatologicesterecoltatnfuncie de sediulinfecieincondiiilecorespunztoare.Examenul direct de laboratorMacroscopic: urinaestetulbure, purulent cu miros fetid.Microscopic: edificatorestefrotiullam - lameln care se observmicrile active ale bacteriei. Pefrotiul gram prezintfenomenul de polimorfism de la bacili, cocobacili la formefilamentoase, PMN-re, celule EK.nsmntareaSe face pemedii simple de cultur.IdentificareMacroscopic: Colonia prezintfenomenul de invazienvaluriconcentrice, succesivecuprinzndntreagasuprafan 24 - 48 de ore, prezintifenomenul de crare. ncazul a doutulpinidiferitensmnatepeaceiaiplacelecreeazlinia de demarcaie.Microscopic: bacilisubiripoliformi G (-) cu capeterotunjiteaezaioarecumhaotic (Fig. 8.2).Biochimic: lactozo (-), glucozo (+), produc H2S, mobile, ureazo (+), citrate (+) se pot dezvoltavndcitratul ca unicsurs de C.Antibiogramaobligatorie

Fig. 8.2. Frotiu din cultur, colorat Gram prezentandbaciliG(-) de dimensiunidiferite. (fotoC.Defta)

8.4. Diagnosticul de laboratorninfecia cu SalmonellaProduce TIA (salmonelozeleminore) cnddiagnosticuleste bacteriologic iarnfebratifoid (salmonelozelemajore) diagnosticulesteatt bacteriologic cti serologic.Recoltareaitransporulproduselorpatologice- Materiilefecalen TIA, nfebratifoid, ncazulpurttorilorsntoi se pot recoltamateriilefecale a douazidupadministrareantimpulserii a unuipurgativ (sare Epson).-Sngelenfebratifoidn prima sptmna de boal. -Secreiabiliarnfebratifoiddup prima sptmn de boalincazulpurttorilorsntoiobinutprintubaj duodenal. -Transportul cu medii de transport maxim 2 ore la temperature camerei. Sngele se transportntuburi sterile, n maxim 30 .Examenul direct de laboratorMicroscopic: bacilisubiri cu capeterotunjite G (-), cu ciliperitrichi, necapsulai, PMN, celule EK.

nsmntareaPemediilichide de mbogire (bulionselenit), pemediisolide selective MacConkeyi ADCL.Incubare la 18-24 de ore la 35-370C.IdentificareMacroscopic: colonii de tip S necoloratepeMacConkey, pe ADCL suntnecolorate cu saufrmijloculnegru.Microscopic: bacilisubiri cu capeterotunjite G (-).Biochimic: lactozo (-), produce H2S, utilizezcitratul ca unicsurs de C, glucozo (+) cu producere de gaz.AntibiogramaobligatorieDiagnosticul serologic. VeziReaciaWidal de la reacia Ag-Ac.

8.5. Diagnosticul de laboratorninfecia cu ShigellangenulShigellaexist 4 subgrupe: A are 13 serotipuri, B are 6 serotipuri, C cu 18 serotipuri, D unserotip. Diagnosticuleste direct itrebuie pus rapid.

Recoltareaitransporulproduselorpatologice- Produselealimentare se recolteazn TIA de tip infecios;- Materiilefecaledupapariiadizenteriei ca urmareaingestiei a unuinumr de 10-100 bacterii. Transportul se face de urgenpemediu Cary-BlairExamenul direct de laboratorMacroscopic: materiilefecaleprezint mucus, snge, puroi.Microscopic: bacili G (-) subiri cu capeterotunjite, numeroase PMN-uriiardac PMN suntnprocent de 70% alturi de hematiiacestaconstituieaspectulsugestivpentrudizenteriabacterian.nsmntareaSe face pemediimoderat selective ADCL iMacConkey, incubare 24 de ore la 370C.IdentificareMacroscopic: colonii de tip S micitransparenterourate cu miroscaracteristic.Microscopic: bacili G (-) (Fig. 8.3.)

Fig 8.3. Frotiu din culturacolorat gram, cu bacilimicisubiri G (-) (fotoC.Defta) .

Biochimic: lactozo (-), aerobii facultative anaerobi, glucozo (+) fr producer de gaz. Subgrupul A estemanito (-), restulsubgrupelorsuntmanito (+), nu produc H2S, ureazo (-), indol (-).Teste de identificare antigenic se utilizeazareacia de aglutinarepelam, cu seruripolivalente anti-subgrupAntibiogramaesteobligatorie

8.6. Diagnosticul de laboratorninfecia cu YersiniaPrezintmaimultespeciidarpatogenepentruomsunt: Y.enterocolitica, Y. pestis (agentul etiologic al ciumei), Y. pseudotuberculosisRecoltareaitransporulproduselorpatologiceMateriilefecale se folosetemediul de transport Cary-BlairExamenul direct de laboratorMicroscopic: bacilisaucocobacili G (-) coloraibipolari, prezintpleomorfism, prezint PMN icelule EKnsmntareaSe efectuazpemedii selective MacConkey, ADCL i CIN. Incubnd la temperaturacamerei (22-290C)IdentificareMacroscopic: colonii de tip S, 1- 1,5 mm sau 2-3 mm la 48 de ore, transparenteMicroscopic: bacilisaucocobacili G (-), pleomorfi.Biochimic: lactozo (-), glucozo (+) frproducere de gaz, nu produce H2S, imobili la 370C i mobile la 220C, indol(-), ureazo (+).Testeul de identificare antigenic utilizezserurile specific anti-YersiniaAntibiogramaobligatorie.