DIAGNOSTICUL CITOGENETICPRIN CARIOTIPARE

Surse de celule pentru cariotip TEORETIC: Orice celul cu nucleu (PRACTIC: cele rezistente la culturi in vitro)

pentru aduli: celulele albe din snge, celule canceroase (din mduva osoas / leucemii cromozomul Philadephia / LMC )celule fetale

Solicitarea cariotipuluiAnomalii cromozomiale n istoricul familiein caz de infertilitateLa vrste naintate ale prinilorPentru nou-nscui cu dismorfismePentru membrii unei populaii expuse la factori de mediu cu potenial mutagen (radiaii, factori chimici)

Informaii oferite de cariotipAberaii numerice - care afecteaz ntregul set haploid POLIPLOIDII ( exemplu: 3n = triploidie) - care afecteaz perechea de cromozomi omologi ANEUPLOIDII trisomii (cromozom n plus) monosomii (cromozom n minus)Aberaii de structur care implic secvene mari de nucleotide(deleii, duplicaii, inversii, translocaii, circularizri, situsuri fragile)

Cariotipul fetal

METODE INVAZIVE 1. Amniocentez 2. Biopsie de viloziti coriale 3. Snge fetal

MET. NEINVAZIV Sortarea celulor fetale din sngele matern

PRINCIPIUL DIAGNOSTICULUI PRENATALCARIOTIPUL ESTE DETERMINAT N MOMENTUL CONCEPIEI,

MITOZA COPIAZ FIDEL ACEST GENOM N TOATE ESUTURILE,

ATT N ESUTUL FETAL

CT I N ESUTURILE EXTRAEMBRIONARE (CORION, AMNION,ETC)

AMNIOCENTEZA1956 identificarea sexului fetal1967 diagnosticul bolilor genetice n trimestrul al II-lea de sarcin (hemoglobinopatii: anemia falciform i thalasemia)Perfecionarea ulterioar a tehnicilor a permis diagnosticul prenatal al cromozomopatiilor, prin stabilirea cariotipului fetal.Const n puncionarea cavitii amniotice pe cale abdominal,sub ghidaj ecografic,cu prelevarea lichidului amniotic de analizat

AMNIOCENTEZA- INDICAIIVrsta mamei peste 35 de aniAntecedent personal de natere a unui copil cu aneuploidieAnomalie genetic n antecedentele familialeAnomalie cromozomial la unul din priniSemne de apel ecograficScreening seric n zona de risc crescutLa dorina progenitorilorLa sarcini obinute dup tehnici de procreere asistat medical: fecundaie in vitro (FIV), injecie intracitoplasmatic cu sperma partenerului (ICSI)

Vizualizarea, pe traiectul acului de puncie, a unei mase digestive, a vezicii urinare sau a unui fibromVizualizarea dificil a cavitii amniotice (exemplu: obezitate)Paciente infectate cu virusul HIV, hepatit B sau C (risc de contaminare fetal)Infecii de diferite etiologii (dificulti n efectuarea culturilor, creterea riscului de avort spontan)AMNIOCENTEZA- CONTRAINDICAII

ntre 15 18 sptmni de amenoreenainte de 13 sptmni (amniocenteza precoce) EXPUNERE LA AVORTURI I DEFORMRI ALE MEMBRELOR INFERIOAREn orice moment al sarcinii, cu riscul de a nu obine celule n diviziune (dup 26 de sptmni celulele fetale cresc foarte greu n culturi)AMNIOCENTEZA- MOMENT OPTIM DE PRELEVARE A LICHIDULUI AMNIOTIC

DIMENSIUNEA PROBEI - la 15 sptmni: 20 ml de lichid, n 2 probe egale - la 12 14 sptmni: pn n 10 ml, n 2 probe egaleTRANSPORT - n tuburi de centrifug sterile, conice - la distan: NU SE AMBALEAZ N GHEA!AMNIOCENTEZA

Eecul punciei rar uter fibromatos, paciente obeze, operator neexperimentat (20 % din cazuri, anii 80)Risc de avort spontan i pierdere fetal, consecutive manevrei moarte fetal in utero sau avort spontan n primele 2 sptmni postpuncie (pn n 1.7 %); riscul crete la gravidele peste 35 de ani, n cazul punciei transplacentare, al sngerrilor din primul trimestru de sarcin i al sarcinilor gemelare)Risc de metroragii post-puncie, cu continuarea sarciniiRnirea ftului Zgrieturi, hematoame, leziuni oculare sau cerebralePierdere de lichid amniotic risc de pierdere fetal 40%!Infecii materno-fetaleTraume materne lezarea arterei epigastrice, hematom de perete, plag de vezic urinar sau digestiv

AMNIOCENTEZA- RISCURI I COMPLICAII

Const n prelevarea, pe cale transabdominal sau transcervical, a vilozitilor coriale cu aspect caracteristic de anemone de mare la examenul cu lupa binocularAlegerea cii de abord estefuncie de poziia placentei (transcervical pt. placent josinserat sau uter retrovers)BIOPSIA DE VILOZITI CORIALE (VILI CORIONICI, TROFOBLATI) CVS (Chorionic Villus Sampling)

Implantarea

Vilii corionici(funcie de formare a placentei)

BIOPSIA DE VILOZITI CORIALE- CONTRAINDICAII

Pentru calea abdominal, contraindicaiile amniocentezei (obezitate, infecii virale sau bacteriene, cu efect asupra embrionului sau asupra dezvoltrii celulare n cultur) Pentru calea transcervical: - infecii cervico-vaginale - sarcina la o pacient purttoare de sterilet - malformaii uterine - fibrom uterin - canal cervical inaccesibil

MOMENT OPTIM DE PRELEVARE - ntre sptmnile 10 12 DIMENSIUNEA PROBEI - cel puin 10 g vili (5 30 mg trofoblast)TRANSPORT - n mediu heparinat (contaminare cu snge matern), cu antibiotice (prevenirea infeciei cu flora vaginal)CARIOTIPUL SE EXECUT DIRECT DIN CELULE (rezultatul n 2-3 zile)

BIOPSIA DE VILOZITI CORIALE

Metroragii 30 % pentru calea transvaginalCorioamniotita profilaxie cu antibiotice, preoperatorRuptura precoce a membranelor (consecina traumatismului mecanic al corionului)Avort spontan postmanevr 1 2 % din cazuri, 6% pentru operator debutant; riscul crete cu vrsta mamei (peste 37 ani) i n sarcinile multipleRnirea ftuluiInfecii materno-fetaleTraume materneMOZAICISMUL CROMOZOMIAL ( diferene ntre cariotipul vilar i cel embrionic) BIOPSIA DE VILOZITI CORIALE- RISCURI I LIMITRI

Se obine prin: - puncionarea venei ombilicale la nivelul cordonului ombilical (cordocenteza) - puncionarea venei intrahepatice - puncie intracardiac sub ghidaj ecografic.DIMENSIUNEA PROBEI: 1 3 ml MOMENT OPTIM DE PRELEVARE - dup sptmna a 18 - a

SNGE FETAL

SNGE FETAL CONTRAINDICAII - obezitate matern - vizualizare dificil a cordonului ombilical - uter polifibromatos

RISCURI - moarte fetal in utero, avort sau natere prematur (1 5 %) - eecul manevrei - bradicardie fetal cu retracia cordonului ( 9 % din cazuri, se injecteaz atropin) - complicaii la locul punciei (hemoragie, tromboz) - corioamniotit

SORTAREA CELULELOR FETALE DIN SNGELE MATERN

1957: o femeie insrcinat moare ca urmare a obstruciei unui vas pulmonar cu celule aparinnd ftuluiLa 70% din femeile insrcinate, celulele fetale trec de bariera materno-fetal i intr n circulaia matern. Prin tehnici citogenetice (cariotip, colorare cu quinacrin) a fost evideniat cromozomul Y n celulele din sngele matern.METOD NEINVAZIV - anularea riscului de pierdere a sarcinii

SORTAREA CELULELOR FETALE DIN SNGELE MATERNPRINCIPIUL METODEI : separarea celulelor n funcie de antigenii de suprafa

FACS = Fluorescence-activated cell sortingCelulele sunt marcate cu anticorpi de suprafa fluoresceni i apoi separate n baza diferenelor date de - intensitatea semnalului fluorescent - dimensiunea celulelor - viabilitatea celularFACS

SORTAREA CELULELOR FETALE DIN SNGELE MATERNMACS = Magnetic-activated cell sorting Amestecul de celule se pune n contact cu sfere magnetice cu anticorpi ataai pe suprafa. n baza reaciei antigen-anticorp, celulele care au antigenii specifici sunt reinute pe o coloan magnetic, celelalte trecnd liber prin coloan.PRINCIPIUL METODEI : separarea celulelor n funcie de antigenii de suprafa

***********************