Salmonella

Diagnostic de laborator

In toxiinfectiile alimentare salmonelozice diagnosticul e laborator se incadreaza inmetodologia generala de izolare a agentului etiologic de la pacient si alimentul incriminat.

Cateva particularitati trebuie insa avute in vedere in cazul acestei etiologii:

• diagnosticul este exclusiv bacteriologic. Nu exista anticorpi formati chiar in toxiinfectii repetate. Incubatia de 1-3 zile, mecanismul patologic si evolutia scurta nu permit aparitia anticorpilor decelabili. Febra tifoida este entitate clinica aparte si nu intra in acest sistem de diagnostic;

• izolarea necesita intotdeauna imbogatire dat fiind numarul redus de salmonele atat in aliment cat, uneori , si in scaunul pacientului;

• identificarea , cel putin orientativa , trebuie sa fie rapida pentru a se putea llua decizii clinice si epidemiologice eficiente;

• pentru investigarea epidemiologica, tipizarea prin diverse mijloace ( antigenice, bacteriofage, moleculare, etc.) este obligatorie (numarul mare de entitati taxonomice ubiquitarismul unor serotipuri dominante, suprapunerea de susse in focar, etc. )

• Schema metodologica de izolaresi identifcare larg practicata si in tara noastra este prezentata in diagrama 1 si 2.

• Hemocultura de la pacientii febrili se practica dupa metodologia bine definita a acestui examen.

• Coprocultura ,lichidele de voma si alimentul incriminat se prelucreaza initial pentru emulsionare/ omogenizare in solutie salina fiziologica sterila , respectand proportia maxima de 1/10.

• Controlul curent al alimentelor pentru prezenta salmonelelor se efectueaza confrom standardelor nationale pentru fiecare tip de aliment. Pentru rapiditate in cazult prelevatoarelor patologice se recomanda insamantarea concomitenta atat a mediilor de imbogatire cat si a celor selective. E bine a se folosi minimum un mediu de imbogatire si acesta sa fie selenitul acid de sodiu ( insa e preferabil a se utiliza doua medii) si minimum doua medii selective cu potential selectiv diferit ; preferabil agar Mc Conkey cu ADCL, agar SS ori agar XLD. E recomandabil sa se foloseasca mai multe medii de izolare concomitent deoarece , astfel creste sansa de izolare.

• Metode neconventinale de detectare a prezentei salmonelelor direct in prelevat• Metodele :• 1. Metabolice : a) masurarea conductantei• b) metabolizarea unor substante speciale marcate • radioactiv • 2. Imunologice : a) Imunofluorescenta• b) Imunoabsorbtie• c) Testare imunoenzimatica• d) Imunosensori

Mai jos sunt prezentate unele dintre aceste metode comercializate in buna parte si care tintesc esential detectarea prezentei in alimente. Principiile metodelor sunt din cele mai

diferite, iar avantajele si dezavantajele deconcerteaza deseori pe practicieni. Oricare ar fi metoda alesasa , examenul trebuie confirmat intotdeauna prin metedologia conventionala

de izolare si identificare bacteriologica.

METODE METABOLICE

• Masurarea conductantei•  Principiul:

– In medii de imbogatire speciale ( substante si inhibitori specifici) multiplicarea salmonelelor determina cresterea conductantei

• Avantaj /Dezavantaj:– Screening rapid automatizat– Necesita medii si echipamente speciale

• Sisteme comerciale:– BACTOMETER , MALTHUS ,RABIT ,BACTRACE

• Metabolizarea unor substante speciale marcate radioactiv •  Principiul

– Metabolizarea substratului CO2= detectarea prin masurari continui/ritmice• Avantaj / Dezavantaj:

– Screening prompt automatizat. – Necesita medii si echipamente speciale– Lucru cu radioizotopi

• Sisteme comerciale– BACTEC

METODE IMUNOLOGICE

• Imunofluorescenta

•  Principiul:– Anticorpi fluorescenti.– Detectare prin imunofluorescenta directa / indirecta

• Avantaje / dezavantaje:– Reactivi conjugati relativ scumpi– Sensibilitate redusa– Sensibilitate discutabila

• Sisteme comercile ----------• Imunoadsorbtie

•  Principiul:– Latex aglutinare/Coaglutinare

• Avantaje/ dezavantaje:– Sensibilitate redusa ( convenabila de pe mediile selective )– Specificitate buna– Pret de cost redus

• Sisteme comerciale:– WELCOLEX SALM

• Testare imunoenzimatica•  Principiul:- ELISA• Avantaje / dezavantaje:

– Sensibilitate redusa ( convenabila de pe mediile selective )– Specificitate buna– Pret de cost redus – Reactivi relativi instabili

• Sisteme comerciale --• Imunosensori • Principiul:

– Reactia antigen anticorp este detectata prin sensori piezoelectrici– Anticorpii sunt fixati pe sensori

• Avantaje / dezavantaje:– Specificitate mediocra ( buna de pe mediile de izolare )– Pret cost relativ ridicat ( reactivi scumpi + echipamente)– Sensibilitate foarte buna 1-5 u.f.c./ g

• Sisteme comerciale– QTROL SALM. ELISA KIT , BIO ENZABED SCREEN KIT ,SALMONELLA

TEK. BACTRACE TECRA SALM. VIZUAL , VIDAS ELISA AUTOMATIC

De pe mediile selective se recomanda repicarea a minimun 5 colonii lactoza negative care sa fei investigate exoenzimatic si apoi serologic in cazul culturilor biochimice

suspecte ca salmonele. Confirmarea apartenentei la genul Salmonella se efectueaza pe seturi extinse de teste biochimice, preferabil pe kit-uri comerciale calitativ certificate.

• Atat culturile identificate numai biochimic cat si cele identificate serologic se trimit pentru tipizare centrelor nationale de referinta.

• Pentru tipizarea culturiloe de Salmonella s-au produs mai multe metode:• tipizarea serologica bazata pe schema Kauffmann-White permite incadrarea intr-un

serotip sau serovar. Se practica la toate izolatele.• tipizarea bacteriofagica se adreseaza numai unor serotipuri epidemiologic importante.

La noi in tara se utilizeaza scheme de fagotipare pentru serotipurile: Typhi ,Typhimurium, Eteritidis, Gallinarum.

• Tipizarea prin metode molecuare relativ recent introduse in practica, au o folosire limitata datorita accesibilitatii lor. Ribotipia a fost cel mai mult avansata , insa ca si celelalte metode, necesita inca verificare pentru a fi agreata de practicieni;

• Tipizarea prin antibiotice , cea mai accesibila , poate furniza elemente utile mai ales in stabilirea arealului epidemic.

• Confirmarea si tipizarea se inscriu ca etape obligatorii in identificarea de certitudine. Nu se pot fundamenta decizii corecte epidemiologic fara a avea informatii asupra tipului epidermic.

• Diagrama 1. Diagnosticul bacteriologic in salmoneloze• Diagrama 2. Metoda de lucru pentru detectarea salmonelelor din alimente coform SR/

ISO/ 6579/ 1995

• Va multumesc !!!