IZOLAREA VIRUSURILOR IN CULTURI CELULARE

EFECTE CITOPATICE

DIRECŢIILE DIAGNOSTICULUI VIRUSOLOGIC

1. Izolarea virală

2. Demonstrarea prezenţei

virusului / componentelor sale

3. Diagnosticul serologic

Izolarea virusurilor

3 sisteme de izolare

• Culturi de celule

• Ou de găină embrionat

• Animalul de laborator

AVANTAJE / DEZAVANTAJE ALE SISTEMELOR DE IZOLARE VIRALA

AVANTAJE DEZAVANTAJE

ANIMAL DE LAB Infectie naturala Cost / etica

O.G.E. Cost Susceptibilitate limitata

CULTURI DE CELULE

Sensibilitate buna / disponibilitate

Susceptibilitate variabila

Mediu nutritiv • solutie salina tamponata - Earle, Hanks• substanţe nutritive ( SFV, lizate proteice)• vitamine • antibiotice şi antifungice

Condiţii necesare pentru păstrarea în viaţă a celulelor din cultura celulară

• Condiţii aseptice • pH adecvat• Temperatură constantă• atmosferă cu 10% CO2

Componentele culturilor de celule: Celule dispersate+ mediu nutritiv

CLASIFICAREA

CULTURILOR

DE CELULE

• Culturi de celule dispersate» Culturi primare» Tulpini celulare» Linii celulare- CELULE TRANSFORMATE

CELULE TRANSFORMATE1. conţin gene implicate în imortalizarea în vitro (cultivare nr. infinit pasaje) modificari cromozomiale => cariotip aneuploid; 2. se multiplică haotic, cerinţe nutritive foarte scăzute (se multiplică la concentraţii foarte scăzute de SFV), glicoliza anaerobă = sursa principala de energie. 3. membrană celulară modificată în compoziţie (absenţa fibronectinei => scaderea adeziunii intercelulare 4. nu au inhibitie de contact, se dispun dezordonat diferit de ţesutul din care derivă 5. inoculare la animale => TUMORI 6. modificarea morfologiei (rotunde, refrigente)7. au antigene de suprafaţă diferite de N codif. de virus /celule gazda=> neoantigene 8. aglutinează uşor cu lectinele (antigene vegetale)9. modificarea mesageri secunzi (AMPc)

Echipament de laborator

Hote cu flux laminar pentru obtinerea, si propagarea culturilor de celule si izolarea

virala                                                               

TIPURI DE EFECTE CITOPATICE

• SINCITIAL: HIV, v rujeolos, VRS

• PICNOTIC – LITIC • enterovirusuri – v. poliomielitice; v. Coxsackie; ECHO

• INCLUZIONAR

EFECT CITOPATIC SINCITIAL

EFECT CITOPATIC INCLUZIONAR

• Intracitoplasmatic acidofil: v rabic, v vaccinal

• Intranuclear -acidofil: papovavirusuri- bazofil:

adenovirusuri

• Mixt: v herpetice, v rujeolos

ECP picnotic litic

INCLUZII CITOPLASMATICE

(RABIE)patognomonic in SNC - CORPII BABES NEGRI in cornul lui Ammon si neuronii piramidali din cerebel

INCLUZII INTRANUCLEARE (BOALA CU INCLUZII CMV)

INCLUZII INTRANUCLEARE