Compui organici neazotai: glucidele i lipideGlucoza Lipide Corpi cetonici

1. CarbohidraiDefiniie, clasificare, analiz Glucoza Hemoglobina glicat Corpi cetonici

1

Carbohidrai- polihidroxialdehide sau cetone sau substane ce produc astfel de compui prin hidroliz - reprezint o surs important de energie pentru organism i modalitatea prin care energia chimic poate fi stocat; Clasificare: Monozaharide zaharuri simple C4-C8, care conin doar o funcie aldehidic sau cetonic, sau sunt derivai ai acestor molecule., Ex. Glucoza: 4 atomi de carbon asimetrici , 24 = 16 izomeri optici; structurile liniare D i L se refer la poziia gruprii OH care poate fi situat la dreapta (izomer D) sau la stnga (izomer L) fa de C-5. Structura ciclic introduce un carbon asimetric suplimentar la C-1, cu izomerii i pentru gruparea OH la dreapta i respectiv la stnga. Monozaharidele au proprieti reductoare conferite de gruparea aldehidic sau cetonic.

Oligozaharide zaharuri care n urma hidrolizei furnizeaz 2 6 molecule de zaharid.maltoza (2 molecule de glucoz) lactoza (glucoz + galactoz) sucroza (glucoz + fructoz)

Polizaharide Cei mai muli carbohidrai din natur sunt polizaharide. n urma hidrolizei furnizeaz un numr mare de monozaharide (Ex. glicogen, amidon).

Structuri ale glucozei

2

Glucoza Cea mai investigat dintre glucidele serice Valoare de referin: 70 110 mg/100 ml Proba analizat: ser, plasmEnzimele glicolitice din celulele sngelui pot determina scderea nivelului de glucoz (cu 7 %/h) Procedee de ncetinire a glicolizei:Adaos de inhibitori (NaF) Rcirea probei Separarea serului de fraciunea celular imediat dup recoltarea probei

Metode de analiz a glucozei Metoda nespecific bazat pe proprietile reductoare ale glucozei (reacie de culoare). Eroarea metodei: 5 - 15 mg/dl. Metode enzimatice specifice pentru glucoz Glucozoxidaza Hexokinaza Glucozdehidrogenaza

3

Dozarea glucozei prin metoda colorimetrica cu o-toluidinPrincipiu: Conjugarea aldo- i cetohexozele cu amine aromatice conduce la compui colorai, fotometrabili. Pentru dozarea glucozei, amina cea mai potrivit este o-toluidina care formeaz cu aldohexozele un compus intens colorat n verde, conform reaciei:

Determinarea Glucozei Metoda GOD-PODPrincipiu:Glucoza este oxidat n prezena glucozoxidazei (GOD) la acid gluconic cu formare de H2O2. n reacia cromogen auxiliar cu fenol i 4-amino-antipirina, n prezen de peroxidaz, se formeaz chinonimina, un compus rou, fotometrabil.

Glucoza + O 2 + H 2 O GOD acid gluconic + H 2O 2 2H 2 O 2 + Fenol + 4 - Aminoantipirin POD Chinona rosie + H 2 O

Fotometrare: A 505 nm ; 37o C

4

Determinarea Glucozei Metoda cu HexokinazaPrincipiu:Glucoza n prezen de ATP i hexokinaz este fosforilat la glucozo-6-fosfat. n reacia cromogen auxiliar glucozo-6-fosfatul n prezen de NADP+ i sub aciunea enzimatic a glucozo-6-fosfat dehidrogenazei (G-6-PDH) se transform n 6-fosfogluconat (6PG) Cantitatea de NADPH rezultat este echivalent cu cantitatea de glucoz intrat n reacie Absorbaa se msoar la 340 nm.

Glucoza + ATP Hexokinaza G 6 P + ADP

G 6 P + NADP + G 6 6 PG + NADPH + H + PDH

Nicotinamid adenin dinucleotid fosfat NADP+

A b s o r b a n t a X 10-3

NADP+ NADPH

Lungime de und, nm

5

ATP

Adenozin-5'-trifosfat (ATP) este o nucleotid multifuncional, important n transferul de energie intracelular. Transport energia chimic necesar metabolismului n cadrul celulelor Este generat ca surs de energie n timpul proceselor de fotosintez i respiraie celular Este consumat de ctre multe enzime i o multitudine de procese celulare.

ADPAdenozin fosfat (ADP) (esterul acidului pirofosforic cu nucleozida adenozinei - alctuit din gruparea pirofosfat, pentoza riboz i adenin - ADP este produsul de defosforilare al ATP sub aciunea ATPazei - ADP este transformat napoi la ATP sub aciunea ATPsintetazei.

6

Determinarea glucozei pe filme multistrat

Prob 10 mStrat de difuzie i reflexie

Film multistrat

100m

Strat cu reactivi GOD POD Tampon pH=5 Indicator redox Gelatin

Filtru

Suport transparent

Surs

Detector

Seciune transversal prin filmul multistrat pentru determinarea glucozei

Schema unui fotometru de reflectan

Stratul de dispersie (acetat de celuloz +TiO2 ca reflectant) are trei roluri:

reflect radiaia de la sursa luminoas din spatele reactivului i a suportului spre detectorul unui fotometru; foreaz proba s difuzeze ntr-un strat uniform; reine celule, cristale i particule precum molecule mari, cum sunt proteinele.

Proba (10 l) este aplicat pe film, incubat la 37.000.05o C timp de 7 min. Reflectana este msurat la 495 nm.

2. LipideDefiniie Clasificare Analiza lipidelor

7

LIPIDELipidede constituie de depozit circulante

Compui cu structur eterogen, cu unele caracteristici comunegreu solubile n ap solubile n solveni nepolari rspndii n lumea vie, principala form de depozitare a resurselor de natur energetic

Principalele lipide circulante :Trigliceride Colesterol Fosfolipide (intr n alctuirea membranei celulare)

Lipidele circul n organism sub form de:

LIPOPROTEINEparticule sferice

miez hidrofob ce conine trigliceride (T) i colesterol liber (C) sau esterificat (CE) nveli format din molecule amfotere, situate cu captul hidrofob ctre interiorul lipoproteinei i cu cel hidrofil ctre exterior, n contact cu mediul apos (plasma); conine fosfolipide (PL) i unele proteine numite apolipoproteine (P).

8

Clasificarea lipoproteinelorn funcie de densitate: chilomicroni transport trigliceride lipoproteine cu densitate foarte joas (very low density lipoproteins VLDL) - transport trigliceride nou sintetizate lipoproteine cu densitate joas (low density lipoproteins LDL) transport colesterol ru lipoproteine cu densitate nalt (high density lipoproteins HDL) transport colesterol bun Fraciunile se pot separa cromatografic.

Lipoproteine predictori ai afeciunilor coronarieneInvestigarea metabolismului lipidelor se bazeaz pe realizarea tabloului lipidic n snge. Concentraiile de colesterol n HDL, LDL i VLDL sunt predictori importani pentru afeciuni coronariene. HDL funcional (colesterolul bun) ofer protecie prin ndeprtarea colesterolului din celule i ateroame. Concentraii mai mari de LDL i mai mici de HDL funcional sunt strns corelate cu boli cardiovasculare i risc de ateroscleroz. Lipide analizate pentru tabloul lipidic i valorile optime (mg/dL)

Colesterol total LDL colesterol HDL colesterol Trigliceride

Valori optime