Absolventul: IMAD EL YAAGOUBI
Indrumatori:Sef Lucrari: Conf. Univ. Dr MIHAELA MIRELA BRATUCercetator Stiintific principal: Dr MIRCEA CRISMARU
STUDIUL UNOR PREPARATE CU EFECT IMUNOMODULATOR EXTRASE
DIN ALGE MARINE
INTRODUCERE
Algele marine prezinta o complexitate chimica deosebita , putand fi considerate ca surse de mare viitor in industria farmaceutica.
Cercetarile efectuate asupra fitoplanctonului Marii
Negre se inscriu in linia generala de pe plan mondial , in multe privinte.
Lucrarea de fata si-a propus studierea efectului unor extracte de alge marine provenite din Marea Neagra asupra diviziunii leucocitelor .
Acest studiu , reprezinta o etapa necesara de evidentiere a efectelor biologice in vitro pe care aceste extracte , prelucrate dupa o metoda originala, le poseda.
ALGELE MARINE
Algele (incr. Phycophyta) sunt organi-sme vechi, procariote si eucariote , unicelulare si pluricelulare, care au mare raspandire in mari si oceane.
Algele marine sunt : aproape toate algele brune ( Cl. Phaeophyceae) , Majoritatea algelor rosii (Cl. Rhodo-phyceae) si unele algi verzi (Cl.Chlorophyceae).
SPALARE CU APA
DE MARE
SPALARE CU APA DULCE
SPALARE CU APA DULCE
COLECTAREA MATERIEI
PRIME
SUCURGERE PRIN SITE CU
OCHIURI DE 1 CM2
SUCURGERE PRIN SITE CU
OCHIURI DE 1 CM2
Apa de spalare in amestec cu
Nisip si alte materiale
Apa de spalare in amestec cu
Nisip si alte materiale
FRACTIUNECU GRANULATIE
MARE
FRACTIUNECU GRANULATIE
MARE
La 40-50 °C inetuva
La 40-50 °C inetuva
Moara cu ciocaneMoara cu ciocane
Dispozitiv cu site vibratorii
Dispozitiv cu site vibratorii
PULBERE FINACU GRANULATIE 0,15-0,20
PULBERE FINACU GRANULATIE 0,15-0,20
PROCEDEU DE OBTINERE A CONCENTRATULUI DIN ALGE MARINE
CARACTERIZAREA PULBERI DIN ALGELE MARINE(1/3)
Analiza organoleptica
Aspect Pulbere fina, semifina, cu granulatie intre 0,15-0,20 mm
Culoare
Bruna-cenusie
Miros Specific de organisme marine
Gust Specific de iarba uscata
Substanta uscata, % fata de pulbere 96,70,3 Incalzire la 105 °C (FR X)
Cenusa % 15,00,1 Calcinare la 550°C
Componente minerale, % fata de pulbere :
-alcaline Na,K
25,00,1
Alcalino-pamantoase Ca, Mg 40,00,1
Metale grele :
I.
II. Flamfotometrie
III. Fe 1205,0
Cv 2,00,4
Mn 450,5
NI 7,10,2
Cu 12,00,1
Zn 98,40,4
Pb 8,70,3
CARACTERIZAREA PULBERI DIN ALGE MARINE(2/3)
Analiza fizico-chimica si biochimica a extractului de algeParametru Rezultate Metode
Analiza fizico-chimica (Continuare)
CARACTERIZAREA PULBERI DIN ALGELE MARINE(3/3)
Substanta organica totala,% fata de pulbere
81,00,3
Componente organice , % fata de total s.o.:
Proteine 4,03,0 Azotat total Kjeldahl
Glucide totale 35,03,0 Fenol-acid sulfuric Dumas
Lipide totale 10,02,0 Extractie cloroform-metanol Kates
Ne-identificate 15,0
Solubilitate in apa , % 6,5-8,0 La 20 °C in raport 1 :10 g/ml
Componente hidrosolubile :
Proteine, mg/g pulbere 1,50,1 Folin-Ciocalteau
Hexoze libere mg/g pulbere 2,07
Activitate enzimatica:
Catalaza µmoli H2O2/min/mg
proteina
26,500,1 Sinha cu K2Cr207
Superoxid dismutaza SOD U/mg Proteina
0,1500,005 Winterbourn
Amilazica m UI/mg proteina 5,00,5 Wohlgemuth
Determinarea β-carotenului s-a facut prin metoda colorimetrica a lui Willstater si Stoll, modificata, folosind ca substanta de referinta β-caroten: sol. 2,5 mg % in benzen.
Acidul ascorbic s-a derminat print-o metoda titrimetrica .
Principiul metodei: Acidul acorbic ese oxidat cu ajutorul dicromatului de potasiu in prezenta KI.
Excesul de ion dicromat reactioneaza cu ionii iodura , eliberand iod.
Cr2O72+ + 9 I- + 14 H+ 3 [I3]
- + 2 Cr3+ 7H2O
Iodul eliberat coloreaza mediul de reactie cu amidon in albastru
METODE
TESTUL DE STIMULARE A BLASTIZARII LIMFOCITARE
Principiul metodei:Limfocitele din sangele periferic sunt cultivate pe perna de hematii,in prezentaunor molecule cu efect mitogen (fitohemaglutinina,) timp de 72 ore.Sub actiunea mitogenilor (lectine) celulele sufera procesul de transformare si evolutia raspunsului mitotic dende de mitogenul folosit dar si de statusul fiziologic si de tipul celulelor (T sau B) .Fitohemaglutinina stimuleaza blastizarea limfocitelor de tip T.Intensitatea transformarii limfocitelor este determinata prin numararea mitozelor observate dupa blocarea diviziunii celulare cu colchincina si colorarea materialului nuclear cu solutie Giemsa.
Mediu RPMI
1640 (mL)
Ser fetal de
vitel(mL)
Penicilina(UI/mL)
Streptomicina(UI/mL)
PHA (µg/mL)
Alge(µg/mL)
Sange (mL)
Proba 1 5 0.5 1000 0.25 30 - 0.5
Proba 2 5 0.5 1000 0.25 30 40 0.5
Proba 3 5 0.5 1000 0.25 30 80 0.5
Proba 4 5 0.5 1000 0.25 - 40 0.5
Proba 5 5 0.5 1000 0.25 - 80 0.5
Proba 6 5 0.5 1000 0.25 - - 0.5
REZULTATE
Componente biochimice
Pigmenti -carotenoidici µg/g substanta uscata
060-0,80
Vitamine
Acidul ascorbic mg/g substanta uscata
400-430
Curba etalon -caroten
Rezultatul determinarilor chimice si biochimice efectuate:
REZULTATE Rezultatele asupra mitogenezei limfocitelor animale si umane in vitro:
SubiectulNr.
PHA 30µg/mlI. S.(%)
PHA + EXTRACTUL ALGE I.S.(%)
40µg/ml
PHA + EXTRACTUL ALGE I.S.(%)
80µg/ml
1 100 57 ,1 57 ,1
2 100 - 41 ,2
3 100 39,0 146,7
4 100 57,1 57,1
5 100 112,5 200,0
6 100 28,45 25,0
7 100 20,0 71,2
8 100 17,6 33,52
9 100 37,7 71,4
10 100 128,6 142 ,8
Medie 55,33 84,6
Deviatie standard
156,49 253,8
Indice de variabilitate
282,83 300
CONCLUZII
Extractul de alge marine a evidentiat o compozitie chimica complexa , cumprinzind o gamă larga de clase de compuşi chimici ,cantităţi moderate de β caroten şi cantităţi mari de acid ascorbic. Pentru toate dilutiile luate in lucru , extractul de alge marine a manifestat o activitate clara de inhibitie a mitogenezei limfocitare in prezenta fitohemaglutinina.
Rezultatele obtinute constituie premisa pentru evaluarea aplicabilitatii produsului testat ca agent inhibitor al proliferării celulare in terapia antitumorala.
Va Multumesc pentru Atentie